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BE882541A - Nouvelles formes pharmaceutiques leur preparation et les compositions qui les contiennent - Google Patents

Nouvelles formes pharmaceutiques leur preparation et les compositions qui les contiennent Download PDF

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BE882541A
BE882541A BE0/200041A BE200041A BE882541A BE 882541 A BE882541 A BE 882541A BE 0/200041 A BE0/200041 A BE 0/200041A BE 200041 A BE200041 A BE 200041A BE 882541 A BE882541 A BE 882541A
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Description


  Nouvelles formes pharmaceutiques, leur préparation et les compositions qui les contiennent. 

  
La présente invention concerne de nouvelles formes pharmaceutiques d'un principe actif, leur préparation et les compositions qui les contiennent.

  
Un médicament ou une drogue, pour exercer son effet, doit pouvoir pénétrer dans la cellule appropriée appelée cellule cible. Généralement cette pénétration s'effectue par diffusion du médicament ou de la drogue à travers la paroi cellulaire. Dans ces conditions, il s'établit un équilibre entre la concentration du principe actif dans la cellule et la concentration dans le milieu extérieur. Par ailleurs, le médicament ne pénètre pas toujours sélectivement dans les cellules cibles sur lesquelles il doit agir et,

  
par son action sur les cellules saines, le médicament peut exercer des effets secondaires néfastes qui peuvent nuire

  
à son utilité.

  
Un autre mode de pénétration intracellulaire est basé sur un mécanisme endocytaire au cours duquel les macromolécules sont incluses dans des vacuoles formées par l'invagination de la membrane cellulaire avant de fusionner avec les lysosomes.

  
Ce mécanisme endocytaire dont la prépondérance dépend du type cellulaire peut être utilisé en thérapeutique pour augmenter la sélectivité des agents thérapeutiques vis-à-vis des cellules susceptibles de ce mécanisme.

  
Pour que l'agent thérapeutique ait une taille suffisante pour participer à ce mécanisme endocytaire, il est possible de lier le principe actif à une macromolécule, telle qu'une protéine, qui sera désignée sous le nom de vecteur. Pour que le médicament puisse exercer en totalité ou en partie ses effets, il est nécessaire qu'il soit libéré à l'intérieur ou au voisinage immédiat de la cellule cible. En d'autres termes, la combinaison principe actif-vecteur ou drogue-vecteur doit répondre aux trois critères suivants :

  
1) être stable dans la circulation sanguine avant d'atteindre

  
les cellules cibles,

  
2) être dissociée ou scindée dans les cellules cibles ou dans

  
leur voisinage immédiat,

  
3) être capable de régénérer la drogue sous sa forme active.

  
Pour que le premier de ces critères soit satisfait, il est nécessaire que le lien entre la drogue et le vecteur soit de nature covalente, et que ce lien covalent résiste aux hydrolases présentes dans le sérum.

  
La combinaison drogue-vecteur pénétrant dans les cellules cibles par un mécanisme essentiellement endocytaire, il est nécessaire de tenir compte des propriétés des lysosomes pour satisfaire au second critère. En effet, le lien entre

  
la drogue et le vecteur peut être coupé soit chimiquement en milieu acide soit enzymatiquement au moyen des hydrolases acides des lysosomes. Mais encore faut-il, compte tenu du troisième critère, que la drogue soit libérée sous sa forme active. Il a été constaté qu'un tel résultat ne peut pas

  
être obtenu si le principe actif est lié directement à la macromolécule. 

  
Il a été trouvé, et c'est ce qui fait l'objet de la présente invention, qu'on peut obtenir un médicament qui possède les caractéristiques désirées, si on intercale un lien temporaire désigné par le terme "bras",entre la drogue et le vecteur.

  
La présente invention concerne les nouvelles formes pharmaceutiques d'un principe actif qui peuvent être schématiquement représentées par :

  

 <EMI ID=1.1> 


  
leur procédé de préparation et les compositions qui les contiennent.

  
Selon l'invention, la "drogue" est constituée par un principe actif qui agit intracellulairement et qui contient dans sa molécule une fonction amine libre. A titre d'exemples de drogues à fonction amine libre peuvent être citées des anthracyclines ayant une activité antitumorale, telles que

  
la daunorubicine ou la doxorubicine, ou des quinoléines ayant des propriétés antimalariques, telles que la primaquine.

  
Selon l'invention, le "bras" est de nature peptidique et il contient, de préférence, 4 aminoacides. Il est particulièrement important que l'aminoacide, lié à la fonction amine libre de la "drogue" par sa fonction carboxylique, comporte un carbone asymétrique et possède la configuration L car les peptidases ou les hydrolases lysosomiales ne coupent que les liaisons peptidiques en a d'un carbone asymétrique. 

  
D'un intérêt tout particulier pour remplir cette fonction

  
est la L-leucine. Par exemple, parmi les dérivés de la fonction amine des anthracyclines antitumorales, telles que

  
la daunorubicine il a été montré que la N-L leucyldaunorubicine est le produit qui, dans les conditions de la digestion lysosomiale libère la quantité la plus importante

  
de daunorubicine. Ainsi après 2 heures d'hydrolyse à pH 6,0,

  
la N-L leucyl-daunorubicine fournit 40 % de daunorubicine libre.

  
Si le bras entre la daunorubicine et le vecteur est une L-leucine, après 24 heures d'hydrolyse à pH 6,0 du produit vecteur-bras-drogue par des enzymes lysosomiaux purifiés,

  
15 % de la drogue va être libérée sous forme de daunorubicine libre. De plus, un taux de libération de la "drogue" libre beaucoup plus important est obtenu lorsque le nombre des aminoacides constituant le "bras" peptidique augmente et il peut atteindre 78 lorsque le peptide intermédiaire est constitué par l'enchaînement de 4 aminoacides. Ainsi selon l'invention, le "bras" intermédiaire est de préférence représenté par l'enchaînement : 

  

 <EMI ID=2.1> 


  
dans lequel L-Leu est lié par sa fonction carboxylique à la fonction amine de la drogue et X représente 1, 2 ou 3 aminoacides, identiques ou différents, choisis parmi la L-alanine, la

  
glycine et la L-leucine. 

  
D'un intérêt tout particulier sont les "bras" peptidiques L-ala-L-leu, L-ala-L-leu-L-ala-L-leu, (L-ala)3-L-leu, L-ala-L-leu-gly-L-leu, gly-L-leu-gly-L-leu; parmi ceux-ci l'enchaînement (L-ala-L-leu) dans lequel n est égal à 1 ou 2 convient particulièrement bien.

  
Selon l'invention, le "vecteur" est une macromolécule qui peut être endocytée sélectivement par les cellules cibles. De préférence la macromolécule est une protéine dont la nature est liée à l'action recherchée de la "drogue". Par exemple, dans le cas des dérivés des anthracyclines antitumorales, la sérum albumine bovine (BSA), la fétuine ou l'immunoglobuline peuvent être avantageusement utilisées. Dans le cas des quinoléines antimalariques, il est particulièrement intéressant d'utiliser l'asialofétuine qui est un vecteur allant spécifiquement dans les hépatocytes où se trouvent les parasites.

  
Selon l'invention, les nouvelles formes pharmaceutiques peuvent être obtenues par action d'un produit de formule générale :

  

 <EMI ID=3.1> 


  
dans laquelle le terme "Drogue" et le symbole X sont définis comme précédemment sur une protéine dans les conditions habituellement utilisées pour créer une liaison peptidique entre la fonction amine libre de l'aminoacide terminal du produit de formule générale (II) et les fonctions acides libres de la protéine.

  
Le "bras" peut également être accroché aux fonctions amines libres de la protéine après succinylation de la fonction amine libre de l'aminoacide terminal du produit de formule générale (II).

  
Généralement, la réaction s'effectue dans un milieu tamponné convenable tel qu'un milieu au tampon phosphate
(Phosphate Buffer Saline ou PBS) en présence d'un agent de condensation tel qu'un carbodiimide comme l'éthyl -1 (diméthyl-

  
 <EMI ID=4.1> 

  
entre 0 et 30[deg.]C. Il est particulièrement avantageux d'opérer en l'absence de lumière.

  
La nouvelle forme pharmaceutique selon l'invention est séparée du mélange réactionnel selon les méthodes physiques ou physicochimiques telles que la chromatographie sur un support approprié.

  
Le produit de formule générale (II) peut être obtenu par condensation d'un aminoacide convenable ou d'un peptide sous forme acide dont les fonctions amines sont protégées avec une drogue portant une fonction amine libre ou un dérivé de cette drogue portant une fonction amine libre en présence d'un agent de condensation selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique. 

  
De préférence, on réalise d'abord la condensation de la L leucine dont la fonction aminé est protégée sur la "drogue" puis la condensation successive des aminoacides destinés à constituer le bras sur la N-L-leucyl-"Drogue".

  
Comme agent de condensation, on utilise plus particulièrement un carbodiimide dans un solvant organique tel que le diméthyl-formamide, le chlorure de méthylène ou l'acétonitrile. La fonction acide de l'aminoacide peut aussi être activée sous forme d'ester avec le N-hydroxysuccinimide ou sous forme d'anhydride mixte.

  
Les groupements protecteurs des fonctions amines sont des groupements de type acyle (formyle) ou uréthane

  
 <EMI ID=5.1> 

  
(trityle). Ces groupements peuvent ensuite être éliminés dans des conditions qui ne doivent pas détruire la liaison peptidique formée. Par exemple, lorsque la fonction amine est protégée par un radical trityle, ce groupement protecteur peut être éliminé par hydrolyse en milieu acide.

  
Les nouvelles formes pharmaceutiques selon l'invention sont particulièrement utiles pour permettre une action sélective dans le domaine d'activité de la drogue de base. L'action des nouveaux médicaments étant plus spécifique, le même effet sera obtenu avec quantité plus faible de drogue;

  
par ailleurs, les effets secondaires néfastes pourront être fortement atténués sinon supprimés grâce à la moindre dissémination de la drogue en dehors des cellules cibles. 

  
Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, montrent comment l'invention peut être mise en pratique.

  
Les nouveaux produits selon l'invention présentent des propriétés particulièrement intéressantes.

  
Ainsi les produits pour lesquels la drogue est la daunorubicine inhibent, in vitro, la croissance des cellules cancéreuses, telles que les cellules de la leucémie L1210 dans un milieu approprié. Par exemple, après 72 heures de culture,

  
la BSA-succinyl-L-ala-L-leu-L-ala-L-leu-daunorubicine, à une concentration voisine de 10 pg/cm provoque 90 % d'inhibition

  
de la croissance des cellules de leucémie L1210.

  
Les produits selon l'invention pour lesquels la

  
drogue est la primaquine provoquent, lorsqu'ils sont administrés par voie intraveineuse à des doses comprises entre 10 et 30 mg/kg, à des souris infestées par Plasmodium berghei, une augmentation du temps de survie supérieure à 400 % par rapport aux témoins non traités.

  
EXEMPLE 1.

  
a) Préparation de la L alanyl-L leucyl - L alanyl - L leucyl daunorubicine.

  
A une solution glacée de 1 g de daunorubicine

  
 <EMI ID=6.1>  

  
Après 5 minutes d'agitation, le pH est amené à 3,5 par addition d'acide sulfurique 6 N puis, après 15 minutes, le mélange réactionnel est neutralisé par addition de soude 1 N. La solution est extraite par 150 cm de chlorure de méthylène.

  
La phase organique est séchée sur sulfate de sodium. Après filtration et concentration à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à une température inférieure 50[deg.]C, le produit est purifié par chromatographie sur 60 g de silice en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol (95-5 en volumes). On obtient ainsi, après évaporation du solvant, 690 mg de N-L leucyldaunorubicine qui, par addition de la quantité théorique d'acide chlorhydrique, fournit 715 mg de chlorhydrate de L leucyldaunorubicine fondant à 201[deg.]C avec décomposition.

  
A une solution agitée de 677 mg de L leucyl-daunorubicine (1 mmole) dans 16 cm de diméthylformamide, on ajoute
498 mg de N-trityl-L alaninate de N-hydroxysuccinimide (2,12 mmoles) et 0,140 cm de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à une température voisine de 20[deg.]C.

  
 <EMI ID=7.1> 

  
d'un mélange chloroforme-méthanol (99-1 en volumes), puis filtré sur une colonne de 45 g de gel silice. On obtient, après évaporation du solvant, 450 mg de N-trityl L alanyl-L leucyldaunorubicine. Ce produit est traité à froid par une solution

  
 <EMI ID=8.1> 

  
addition d'ammoniaque 12 N. Après extraction par le chloroforme, séchage sur sulfate de sodium, filtration et évaporation du solvant, formation du chlorhydrate et filtration du triphénylcarbinol, on obtient 470 mg de chlorhydrate de L alanyl - L leucyl-daunorubicine fondant à 205[deg.]C avec décomposition.

  
On dissout 250 mg de chlorhydrate de L alanyl-L

  
 <EMI ID=9.1> 

  
L leucinate de N-hydroxysuccinimide. En opérant comme précédemment pour la préparation de la L alanyl - L leucyldaunorubicine, on obtient 130 mg de chlorhydrate de L leucylL alanyl-L leucyl-daunorubicine fondant à 170[deg.]C avec décomposition.

  
On dissout 98 mg de chlorhydrate de L leucyl-L alanyl-L leucyl-daunorubicine dans 5 cm<3> de diméthylformamide.

  
 <EMI ID=10.1> 

  
L alaninate de N-hydroxysuccinimide. En opérant comme précédemment pour la préparation de la L alanyl-L leucyldaunorubicine, on obtient 65,5 mg de chlorhydrate de L alanylL leucyl - L alanyl- L leucyl-daunorubicine fondant à 217[deg.]C avec décomposition.

  
b) Couplage avec la sérum albumine bovine.

  
A 8 mg de chlorhydrate de L alanyl-L leucyl-L alanyl-L leucyl-daunorubicine en solution dans 2 cm d'eau distillée, on ajoute 100 mg de sérum albumine bovine en solution dans 3 cm de tampon phosphate (Phosphate Buffer Saline, PBS) . 

  
Le mélange est conservé pendant 15 heures à l'obscurité, à une température voisine de 20[deg.]C, puis la solution est filtrée sur une colonne de 150 cm<3> de Biogel P-100 en éluant avec du tampon phosphate (Phosphate Buffer Saline, PBS).

  
La première fraction (14 cm<3>) qui correspond au produit couplé, est filtrée sur une colonne contenant l.g de Parapak Q (Waters) afin d'éliminer les traces éventuelles

  
de drogue fixée de façon non covalente. La solution est

  
 <EMI ID=11.1> 

  
drogue par cm et 3 mg de sérum albumine bovine par cm .

  
EXEMPLE 2.

  
a) Succinylation de la N-L-alanyl-L-leucyl-L-alanyl-L-leucyldaunorubicine.

  
On dissout 130 mg de chlorhydrate de N-L-alanyl-Lleucyl-L-alanyl-L-leucyl-daunorubicine (0,139 mmoles) dans

  
15 cm<3> d'eau bidistillée.

  
On ajoute 2 fois 14 mg d'anhydride succinique

  
(2 fois 0,14 mmoles) par petites fractions, tout en maintenant le pH à 7,5 par addition de soude 1 N. 

  
A la fin de la réaction, le pH du mélange réactionnel est ajusté à 5,5 puis on extrait le produit formé par 3 fois

  
 <EMI ID=12.1> 

  
sement 3 fois à l'eau bidistillée, puis séchée sur sulfate de sodium.

  
Après évaporation de la phase organique, on obtient
100 mg de poudre rouge (rendement 72 %) qui est mise en

  
 <EMI ID=13.1> 

  
L-leu-L-ala-L-leu-daunorubicine.

  
b) Couplage avec la sérum albumine bovine

  
On dissout 8,7 mg de succinyl-alanyl-leucyl-alanylleucyl-daunorubicine dans 2 ml d'eau bidistillée et on ajoute
100 mg de sérum albumine bovine dissoute dans 2 ml de PBS et
10 mg de carbodiimide soluble [1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)-carbodiimide, Pierce Chem., USA] dissous dans 1 ml

  
de PBS. Le mélange est agité lentement à 4[deg.]C pendant 16 h

  
à l'abri de la lumière puis la drogue couplée est séparée de la drogue libre par tamisage moléculaire sur une colonne de Biogel P-100 (Biorad Laboratories, USA). Le premier pic

  
 <EMI ID=14.1> 

  
volume de 46 ml. Ce qui donne un rendement de couplage de
16,9 &#65533; et un rapport molaire drogue/protéine de 1,4 ml. La solution est filtrée sur Millipore 0,2 p et conservée à 4[deg.]C. 

  
EXEMPLE 3.

  
1. Préparation de la L leucyl-primaquine.

  
a) On agite pendant 24 heures un mélange de 600 mg de primaquine
(2,321 mmoles) et de 1,5 g de fluorénylméthoxycarbonyl L leucinate de N-hydroxysuccinimide (3,36 mmoles) dans 15 cm de diméthylformamide. L'évolution de la réaction est suivie par chromatographie en couche mince. Lorsque la réaction est terminée le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur silicagel en éluant par des mélanges chloroforme-méthanol contenant progressivement de 1 à 10 % de méthanol et enfin par un mélange chloroforme-méthanol-ammoniaque concentrée (900-100-8 en volumes). L'éluat est récupéré en une série de fractions qui sont examinées en chromatographie de couche mince, par rapport à des étalons après détection dans l'ultraviolet.

  
L'élimination du groupement protecteur de la fonction amine de la L leucine..est effectuée au moyen de pipéridine. Le précipité obtenu est séparé par filtration et le filtrat est neutralisé à pH 7 par une solution d'acide chlorhydrique N. La

  
 <EMI ID=15.1> 

  
La phase organique est séchée sur sulfate de sodium. Après filtration et concentration sous pression réduite (20 mm de mercure), on obtient 647 mg de L leucyl-primaquine. A 647 mg

  
 <EMI ID=16.1> 

  
chlorhydrique 1.N. On obtient ainsi une solution de dichlorhydrate de L leucyl-primaquine. 

  
b) A une solution de 7,68 g de primaquine (0,030 mole) dans
125 cm de chloroforme sec refroidie à 0[deg.]C on ajoute, goutte à goutte, 4,65 g de N-carboxyanhydride de L leucine (0,030 mole) <EMI ID=17.1> 

  
Après évaporation du solvant, le produit est purifié par chromatographie. On obtient ainsi 6,7 g de L leucyl-primaquine.

  
2. Préparation de la L alanyl-L leucyl-primaquine.

  
On agite un mélange de 4 g de L leucyl-primaquine
(10,75 mmoles) et de 4,65 g de trityl L alaninate de N-hydroxysuccinimide dans 30 cm de diméthylformamide. L'évolution de la réaction est suivie par chromatographie en couche mince. Après évaporation du solvant sous pression réduite (20 mm de mercure), le produit est purifié par chromatographie sur silice en éluant par des mélanges chloroforme-méthanol contenant progressivement de 1 à 10 de méthanol.

  
On obtient ainsi 5,21 g de N-trityl L alanyl-L leucyl-primaquine que l'on traite par 50 cm d'acide acétique

  
 <EMI ID=18.1> 

  
filtration, puis le filtrat est neutralisé à froid par addition

  
 <EMI ID=19.1> 

  
du mélange réactionnel par le chloroforme, la phase organique est séchée sur sulfate de sodium. Après filtration et évaporation du solvant sous pression réduite (20 mm de mercure), on obtient 3,45 g de L alanyl-L leucyl-primaquine. 

  
A 3,45 g de L alanyl- L leucyl-primaquine (7,78 mmoles), on ajoute 15,58 cm<3> d'une solution d'acide chlorhydrique normal. On obtient ainsi une solution de dichlorhydrate de L alanyl-L leucyl-primaquine qui est lyophilisée.

  
3. Préparation d'asialofétuine- L alanyl-L leucyl-primaquine.

  
 <EMI ID=20.1> 

  
2,5 cm<3> de tampon phosphate (Phosphate Buffer Saline) et on ajoute
50 mg de dichlorhydrate de L alanyl-L leucyl-primaquine et 50 mg de éthyl-1 (diméthylamino-3 propyl)-3 carbodiimide. On laisse

  
en contact pendant 15 heures à l'abri de la lumière et à une température voisine de 20[deg.]C. Le mélange réactionnel est filtré sur une colonne de 125 cm<3> de Biogel P-100. On recueille des fractions de 150 gouttes.

  
L'asialofétuine-L alanyl-L leucyl-primaquine est recueillie dans les fractions 6 à 12.

  
L'asialofétuine peut être préparée de la manière suivante :

  
Une solution de 1 g de fétuine (Sigma Chem., EtatsUnis) dans 10 cm<3> de tampon acétate 0,2 M à pH 5,5 est passée,

  
en circuit fermé, à travers une colonne de neuraminidase insolubilisée (Sigma Chem., Etats-Unis) maintenue à 45[deg.]C. 

  
Après 48 heures, la solution d'asialofétuine est récupérée; le gel est lavé par du chlorure de sodium 2 M et l'acide sialique est éliminé par dialyse de la solution pendant

  
12 heures contre de l'eau distillée. L'asialofétuine est purifiée

  
 <EMI ID=21.1> 

  
éluée par du tampon Tris 0,01 M à pH 8. Des fractions de

  
150 gouttes sont recueillies à l'aide d'un collecteur de fraction Gilson. Les tubes contenant l'asialofétuine sont réunis et la solution est dialysée contre de l'eau puis lyophilisée.

  
La présente invention concerne également les compositions médicinales contenant les nouvelles formes pharmaceutiques selon l'invention seules ou en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles. Ces compositions pourront être administrées par voie parentérale.

  
Les compositions selon l'invention pour administration parentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuses, des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylène-glycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive,

  
ou des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également comprendre des agents mouillants, émulsifiants et dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants ou par irradiation. Elles peuvent être également préparées sous forme

  
de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.

  
L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention.

EXEMPLE.

  
On prépare selon la technique habituelle 100 cm<3> d'une solution stérile contenant une quantité de BSA-succinyl-L-alaL-leu-L-ala-L-leu-daunorubicine correspondant à 100 mg de daunorubicine libre. Cette solution est administrée en perfusion lente.

Claims (12)

REVENDICATIONS
1, 2 ou 3 caractérisée en ce que le vecteur est choisi parmi la sérum albumine bovine, la fétuine, l'immunoglobuline ou l'asialofétuine.
1 ou 2 caractérisée en ce que le bras contient l'enchaînement <EMI ID=23.1>
leu-gly-L-leu, L-ala-L-leu-gly-L-leu.
1. Une nouvelle forme pharmaceutique d'un médicament caractérisée
en ce qu'elle est représentée schématiquement par :
Vecteur-bras-Drogue
dans lequel
-"drogue" représente un principe actif qui contient une fonction amine libre -"bras" est une chaîne de nature peptidique représentée par l'enchaînement <EMI ID=22.1> dans lequel L Leu représente un reste-L leucyl lié par sa fonction carboxylique à la fonction amine de la drogue et X représente 1, 2 ou 3 aminoacides, identiques ou différents, choisis parmi la L-alanine, la glycine ou la L leucine, dont une fonction amine terminale est éventuellement succinylée,
et "vecteur" est une macromolécule de nature protéinique dont la nature est liée à l'action recherchée de la drogue.
2. Une nouvelle forme pharmaceutique selon la revendication 1
caractérisée en ce que la drogue est choisie parmi des anthracyclines antitumorales et des quinoléines antimalariques.
3. Nouvelle forme pharmaceutique selon la revendication 2
caractérisée en ce que la drogue est choisie parmi la daunorubicine et la primaquine.
4. Nouvelle forme pharmaceutique selon l'une des revendications
5. Nouvelle forme pharmaceutique selon l'une des revendications
6. Un procédé de préparation d'une nouvelle forme pharmaceutique
selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir un produit de formule générale :
<EMI ID=24.1>
dans laquelle "Drogue" et L Leu-X sont définis comme dans la revendication 1, sur une protéine dans les conditions appropriées pour créer une liaison peptidique entre la fonction amine libre de l'aminoacide terminal du produit de formule générale X - L - leu - Drogue et les fonctions acides libres de la protéine, et isole le produit ainsi obtenu.
7. Un procédé de préparation d'une nouvelle forme pharmaceutique.
selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir le produit de formule générale :
<EMI ID=25.1>
dans laquelle "drogue" et X-L-leu sont définis comme dans la revendication 1, obtenu par succinylation du produit de formule générale
<EMI ID=26.1>
sur une protéine dans les conditions appropriées pour créer une liaison peptidique entre la fonction carboxyle libre du succinyl terminal du produit de formule générale
<EMI ID=27.1>
et les fonctions amines libres de la protéine, et isole le produit ainsi obtenu.
8. Procédé de préparation d'une nouvelle forme pharmaceutique
selon l'une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisé en ce que la réaction s'effectue dans un milieu tamponné convenable tel qu'un milieu au tampon phosphate (Phosphate Buffer Saline) en présence d'un agent de condensation tel qu'un carbodiimide comme l'éthyl-1 (diméthylamino-3 propyl)-3 carbodiimide à une température comprise entre 0 et 30[deg.]C.
9. Procédé suivant la revendication 8, caractérisé en ce
qu'on opère en l'absence de lumière.
10. A titre de moyen pour la mise en oeuvre du procédé selon la
revendication 6, le produit de formule générale :
<EMI ID=28.1>
dans laquelle Drogue - L leu et X sont définis comme dans la revendication 1.
11. Produit suivant la revendication 10, caractérisé en ce
qu'il est obtenu par condensation d'un aminoacide convenable ou d'un peptide sous forme acide dont les fonctions amines sont protégées avec une drogue portant une fonction amine libre ou un dérivé de cette drogue portant une fonction amine libre en présence d'un agent de condensation selon les méthodes habituelles utilisées en chimie peptidique
12. Composition médicinale caractérisée en ce qu'elle est
constituée par la nouvelle forme pharmaceutique selon la revendication 1, éventuellement en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles.
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