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CN104982920A - 包含细胞和具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(lc-pufa)的组合物 - Google Patents

包含细胞和具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(lc-pufa)的组合物 Download PDF

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CN104982920A
CN104982920A CN201510252839.9A CN201510252839A CN104982920A CN 104982920 A CN104982920 A CN 104982920A CN 201510252839 A CN201510252839 A CN 201510252839A CN 104982920 A CN104982920 A CN 104982920A
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亨德里克·路易斯·比杰尔
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Abstract

本发明涉及一种包含具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)和细胞的组合物，该组合物在40℃下的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。本发明还涉及一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，该方法包括在低于40℃的温度下干燥组合物。

Description

包含细胞和具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的组合物
本发明申请是基于申请日为2010年11月02日，申请号为“201080049979.1”(国际申请号为PCT/EP2010/066598)，名称为“包含细胞和具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的组合物”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种包含细胞和具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的组合物，涉及一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，涉及一种从包含细胞和LC-PUFA的组合物中得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法。
背景技术
LC-PUFA可以由微生物通过发酵法生产。LC-PUFA也可以在植物中产生。随后，含有LC-PUFA的微生物或植物部分可以被预处理，之后可以分离出LC-PUFA或含LC-PUFA的油。
例如，WO 2006/085672描述了一种方法，其中LC-PUFA是从微生物生物质中分离的。湿细胞在两级干燥工艺中干燥。可以使用120℃或更高的干燥温度，得到含湿量为1-2wt.％的干燥细胞。
可以在生产含有LC-PUFA的组合物之后，立即从中分离LC-PUFA和/或含LC-PUFA的油。然而，实际中含有LC-PUFA的组合物在进一步使用(例如分离LC-PUFA和/或含LC-PUFA的油)之前通常被储存和/或运输。
业已发现，含有LC-PUFA的组合物易感于自动加热。即，在储存期间，温度可能自发地增大，最终导致不期望的爆炸和火灾。还发现，此易感性随LC-PUFA含量的增加而增大，随LC-PUFA的双键数量的增加而增大。
本发明的目标是提供一种包含(i)LC-PUFA和(ii)细胞的组合物，该组合物要更安全。
发明内容
本发明现在提供了一种组合物，其包含：(i)具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)和(ii)细胞，该组合物在40℃下的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。
根据本发明的组合物的优点在于，其安全性得以改善，即，其自燃温度增大，减少了不期望的爆炸和火灾。本发明的组合物的另一个优点在于，组合物的储存不会消极地影响LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的品质，或至少是对品质影响的程度较小。
根据本发明的组合物在40℃下的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。组合物的T.I.T.是通过使用如Recommendations on the Transport of DangerousGoods,Manual of Tests and Criteria,Section 28.4.4,Test H.4,United Nations,New York,1999中所述的热量累积储存测试法来测定，其中调整和规定如下所示：使用内径为57mm、高度为210mm的0.5L的玻璃杜瓦瓶(Dewar vessel)。杜瓦瓶的热损失为16mW/K。样品尺寸占杜瓦瓶体积的75％。用高度约为50mm的橡胶塞盖上杜瓦瓶，松散地塞紧以允许呼吸。通过塞子中心的孔将热电偶插入杜瓦瓶中。将含有初始温度为20℃的样品的杜瓦瓶放入控制为40℃的腔室中，使用热电偶来监测样品的温度。热诱导时间被定义为：在样品的温度达到比腔室的温度低2℃(即38℃)的时刻与样品的温度达到比腔室的温度高2℃(即42℃)的时刻之间经过的时间。图1说明了T.I.T.的测定。
具体地，本发明涉及如下各项：
1.一种组合物，其包含：(i)具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)，和(ii)细胞，该组合物在40℃下的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。
2.如项1所述的组合物，其含湿量为1-20wt.％，优选为2-15wt.％，优选为3-12wt.％，优选为3.5-10wt.％，优选为4-9wt.％。
3.如项1或2所述的组合物，其含油量为至少10wt.％，例如至少20wt.％，例如至少30wt.％，例如至少40wt.％，例如低于70wt.％，例如低于60wt.％。
4.如前面任一项所述的组合物，其中所述组合物包含这样的油，其中基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有至少10wt.％、例如至少20wt.％、例如至少30wt.％、例如至少40wt.％的具有至少3个双键的PUFA；基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有例如低于80wt.％、例如低于70wt.％、例如低于60wt.％的具有至少3个双键的PUFA。
5.如前面任一项所述的组合物，其中所述LC-PUFA具有至少3个双键。
6.如前面任一项所述的组合物，其中所述LC-PUFA为ω-3或ω-6PUFA。
7.如前面任一项所述的组合物，其中所述LC-PUFA选自由二高-γ-亚麻酸(DGLA，20:3ω-6)、花生四烯酸(ARA，20:4ω-6)、二十碳五烯酸(EPA，20:5ω-3)、二十二碳六烯酸(DHA:22:6ω-3)、二十二碳五烯酸(DPA,22:5ω-3,或DPA 22:5,ω-6)组成的组。
8.如前面任一项所述的组合物，其中所述LC-PUFA是ARA或DHA。
9.如前面任一项所述的组合物，其中所述细胞是微生物细胞。
10.如项9所述的组合物，其中所述微生物细胞是酵母细胞、细菌细胞、真菌细胞或藻类细胞。
11.如前面任一项所述的组合物，其中所述组合物包含Mortierella属的微生物，优选包含Mortierella alpina种的微生物，其中优选地，所述LC-PUFA是ARA。
12.如项1-10中任一项所述组合物，其中所述组合物包含Thraustochytriales目的微生物，例如Thraustochytrium属或Schizochytrium属的微生物，其中优选地，所述LC-PUFA是DHA或EPA。
13.如项1-10中任一项所述组合物，其中所述组合物包含Crypthecodinium属的微生物，优选包含Crypthecodinium cohnii种的微生物，其中优选地，所述LC-PUFA是DHA。
14.如项1-8中任一项所述组合物，其中所述细胞是植物细胞。
15.如项14所述的组合物，其中所述细胞是转基因植物的植物细胞。
16.如项14或15所述的组合物，其中所述细胞是十字花科植物的植物细胞，优选是Brassica属的植物的植物细胞
17.一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，所述方法包括，在低于40℃、优选低于35℃、优选低于33℃、优选低于30℃、优选低于25℃的温度下干燥所述组合物。
18.如项17所述的用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，所述方法包括，使所述组合物与优选具有露点<15℃、优选<10℃、优选<5℃的经调节的空气接触。
19.如项17或18所述的方法，其包括使用流化床干燥器来干燥所述组合物。
20.通过项17-19中任意一项所述的方法可得到的组合物。
21.如项20所述的组合物，其具有如项2所定义的含湿量。
22.一种用于得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法，所述方法包括，从根据前面任一项所述的组合物中或从通过项17或21中任意一项所述的方法得到或可得到的干燥的组合物中分离LC-PUFA或含有LC-PUFA的油。
23.一种用于得到食品、特别是婴幼儿配方奶粉的方法，所述方法包括，根据项22所述的方法得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油，然后将所述LC-PUFA或含有所述LC-PUFA的油掺入所述食品中。
附图说明
图1示出了测定热诱导时间(T.I.T.)的示意图。
发明详述
优选地，在40℃下测量时，根据本发明的组合物的T.I.T.为至少2天(48小时)，优选至少3天(72小时)，优选至少4天(96小时)，优选至少5天。在40℃下测量时，T.I.T可以为至少8天，例如至少10天。T.I.T.没有特定的上限。在40℃下测量时，T.I.T.可以小于25天，例如小于20天。
根据本发明的具有增大T.I.T.的组合物可以基于本发明所提供的教导而得到。
组合物可以是干燥的组合物。已发现，如果干燥温度降低，则T.I.T.增大。还发现，如果组合物中的LC-PUFA的含量或LC-PUFA的双键数量较高，有利于降低干燥温度。
例如，干燥温度可以低于40℃，优选低于35℃，更优选低于33℃，更优选低于30℃，更优选低于25℃。在本文中使用时，干燥温度指的是干燥器中产品的温度。例如，如果干燥器是流化床干燥器，干燥温度指的是床的温度。
因此，本发明还提供了一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，该方法包括在低于40℃(优选低于35℃，优选低于33℃，优选低于30℃，优选低于25℃)的温度下干燥组合物。
干燥可以通过任何合适的方法。干燥可以在任何适当的干燥器中进行。优选地，使用能防止热点的形成或使热点的形成最小化的干燥器。在一个优选的实施方式中，使用流化床干燥器来进行干燥。
已发现，T.I.T.随干燥时间的减少而增大。
在一个优选的实施方式中，使用经调节的空气来进行干燥。优选地，所用空气的露点<15℃，优选<10℃，优选<5℃。降低露点的好处是，在优选的(低)干燥温度下，可以有效地实现优选的含湿量。
因此，本发明还提供了一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，该方法包括使组合物与经调节的空气接触，所述经调节的空气的露点优选<15℃，优选<10℃，优选<5℃。优选地，在上述优选的干燥温度下进行干燥。
还发现，T.I.T.随组合物的含湿量的增加而增大。优选地，(例如经干燥的)组合物的含湿量为至少1wt.％，优选至少2wt.％，优选至少3wt.％，优选至少4wt.％。含湿量没有特定的上限。组合物的含湿量可以低于20wt.％，例如低于15wt.％，例如低于12wt.％，例如低于10wt.％，例如低于9wt.％。已发现，使含湿量降低至低于优选的值能增大组合物的微生物稳定性。
在本文中使用时，含湿量是在湿重的基础上计算，即，在组合物(包括干物质、油和水分)的总重量的基础上计算。其可以由本领域技术人员测定，例如通过使水在105℃的温度下蒸发，然后测定蒸发的水分的重量。
在本发明一个优选的实施方式中，如本文所公开的对组合物的干燥获得了如本文所公开的优选的含湿量。
还发现，在组合物的处理过程中避免自由基的形成可以导致T.I.T.值增大。基于这一见解，本领域技术人员可以避免导致形成自由基的步骤。因此，通常优选使细胞在可能促进自由基形成的环境中的暴露(例如暴露在高温下和/或氧气中)最小化。
如果细胞是微生物细胞(有利的是含这些细胞的发酵液)，细胞要加热以充分地杀死发酵液中可能存在的酶。优选的加热方案是WO 97/037032和WO 2004/001021所述的那些，其通过引用结合于此。优选地，要加热的发酵液的溶解氧含量很低，例如<10ppm，例如<5ppm，例如<2ppm，例如<1ppm。杀死酶(特别是使用上面所述的方案)可能导致T.I.T.值增大。
在一个优选的实施方式中，根据本发明的组合物的含油量为至少10wt.％，例如至少20wt.％，例如至少30wt.％，例如至少40wt.％。含油量可以低于70wt.％，例如低于60wt.％。含油量可以通过本领域技术人员已知的方法测定。用于测定本文所用的组合物的含油量的适当方法是通过使用正己烷作溶剂的索氏萃取(Soxhlet extraction)，其中进行萃取的组合物的含湿量<15wt.％，并且其中组合物和细胞被粉碎(以确保所有油都从细胞中释放并可以溶于溶剂中)。在本文中使用时，含油量在干重的基础上计算，即，在组合物的总的干燥重量(包括干物质和油，但不包括水分)的基础上计算。
在一个优选的实施方式中，根据本发明的组合物的含油量如上面所定义，其中油的组成如下面优选的实施方式所述。
在一个优选的实施方式中，组合物包含这样的油，其中相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少10wt.％、例如至少20wt.％、例如至少30wt.％、例如至少40wt.％的具有至少3个双键的PUFA；相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含例如低于80wt.％、例如低于70wt.％、例如低于60wt.％的具有至少3个双键的PUFA。在本文中使用时，具有至少3个双键的PUFA的wt.％指的是具有至少3个双键的所有PUFA的总量。
在一个优选的实施方式中，组合物包含这样的油，其中相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少10wt.％、例如至少20wt.％、例如至少30wt.％、例如至少40wt.％的花生四烯酸(ARA)；相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含例如低于80wt.％、例如低于70wt.％、例如低于60wt.％的ARA。
在一个优选的实施方式中，组合物包含这样的油，其中相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含至少10wt.％、例如至少20wt.％、例如至少30wt.％、例如至少40wt.％的二十二碳六烯酸(DHA)；相对于所述油中所有脂肪酸的量，所述油包含例如低于80wt.％、例如低于70wt.％、例如低于60wt.％的DHA。
用于测定本文中所用的油的组成的适当方法是通过如上所述的使用正己烷作溶剂的索氏萃取(Soxhlet extraction)从组合物中萃取油，并测定所萃取的油的脂肪酸组成。
如果含油量和/或双键数量相对较高，优选选择较低的干燥温度和在干燥器中的较短的停留时间。
基于本文的教导，可以得到较高的T.I.T.值，甚至对于含油量高的组合物和/或含有高浓度的具有至少3个双键的PUFA的油的组合物来说也如此。
在本文中使用时，下列缩写用在整个申请中：
PUFA指的是多不饱和脂肪酸；
LC-PUFA(长链多不饱和脂肪酸)指的是具有至少20个碳原子的PUFA；
HUFA(高度不饱和脂肪酸)指的是具有至少3个双键的PUFA；
LC-HUFA(长链高度不饱和脂肪酸)指的是具有至少20个碳原子和至少3个双键的多不饱和脂肪酸。
本发明不限于特定的LC-PUFA。在本发明的一个实施方式中，LC-PUFA具有至少3个双键。在本发明的另一个实施方式中，LC-PUFA具有至少4个双键。本发明的益处对双键数量增大的LC-PUFA来说甚至更加显著，因为自动加热的易感性随着双键数量的增加而增大。
LC-PUFA可以是ω-3LC-PUFA或ω-6LC-PUFA。
LC-PUFA包括例如：
二高-γ-亚麻酸(dihomo-γ-linolenic acid，DGLA，20:3ω-6)；
花生四烯酸(ARA，20:4ω-6)；
二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA，20:5ω-3)；
二十二碳五烯酸(DPA,22:5ω-3,或DPA 22:5,ω-6),
二十二碳六烯酸(DHA:22:6ω-3)。
优选的LC-PUFA包括花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)。特别地，ARA是优选的。
根据本发明的组合物包含细胞。该细胞可以是任何含有LC-PUFA和/或生产了LC-PUFA的细胞。
在本发明的一个实施方式中，细胞是微生物细胞(微生物)。
微生物细胞的例子为酵母细胞、细菌细胞、真菌细胞和藻类细胞。优选真菌，优选Mucorales目的真菌。所述真菌的例子为Mortierella、Phycomyces、Blakeslea、Aspergillus、Thraustochytrium、Pythium或Entomophthora。优选的花生四烯酸(ARA)来源来自Mortierella alpina。藻类可以是甲藻(dinoflagellate)和/或包括Porphyridium、Nitschia或Crypthecodinium(例如Crypthecodinium cohnii)。酵母包括Pichia属或Saccharomyces属，例如Pichia ciferrii。细菌可以是Propionibacterium属的。
在本发明的一个实施方式中，组合物包含Mortierella属的真菌，优选包含Mortierella alpina种的真菌，其中优选LC-PUFA是ARA或DGLA。
在本发明的一个实施方式中，组合物包含Thraustochytriales目的真菌，例如Thraustochytrium属或Schizochytrium属，其中优选LC-PUFA是DHA和/或EPA。
在本发明的一个实施方式中，组合物包含Crypthecodinium属的藻类，优选包含Crypthecodinium cohnii种的藻类，其中优选LC-PUFA是DHA。
在本发明的另一个实施方式中，细胞是植物细胞。细胞可以是转基因植物的植物细胞。
合适的植物和种子在例如WO 2005/083093、WO 2008/009600和WO2009/130291中有所描述，这些文献的内容通过引用结合于此。本发明中可以使用的其他植物和种子在例如WO 2008/100545、WO 2008/124806、WO2008/124048、WO 2008/128240、WO 2004/071467、WO 2005/059130中公开，这些文献的内容通过引用结合于此。种子可以是(转基因)大豆种子或(转基因)油菜种子。植物可以是(转基因)大豆植物或(转基因)油菜植物。
在一个优选的实施方式中，植物是十字花(Brassicaceae)科的(转基因)植物，例如Brassica属、Camelina属、Melanosinapis属、Sinapis属、Arabidopsis属，例如如下的属和种：Brassica alba、Brassica carinata、Brassica hirta、Brassica napus、Brassicaa rapa ssp.、Sinapis arvensis、Brassica juncea、Brassica juncea var.juncea、Brassica juncea var.crispifolla、Brassica juncea var.foliosa、Brassica nigra、Brassicasinapioides、Camelina sativa、Melanosinapis communis、Brassica oleracea或Arabidopsis thaliana。
组合物可以是包含LC-PUFA的任何生物质。优选地，组合物是通过本文所公开的干燥方法得到或可得到的(干燥的)组合物。
组合物可以是包含微生物和LC-PUFA的微生物生物质。优选的微生物和LC-PUFA是上面所提到的那些。
在本发明一个可能的实施方式中，包含根据本发明的微生物(微生物细胞)的组合物是通过下列方法得到的，该方法包括加热含有微生物细胞的发酵液(也被称为巴氏消毒或灭菌)，使微生物细胞脱水(例如通过过滤)，然后在上述方法中干燥微生物细胞。在一个优选的实施方式中，经脱水的微生物细胞在干燥之前进行造粒(优选通过挤出造粒)。优选的造粒(例如挤出造粒)在低于25℃的温度下进行。一种优选的工艺在WO97/037032中有所描述，其通过引用结合于此。
在本发明的一个实施方式中，组合物包含含有LC-PUFA的种子和/或组合物可以是种子的形式，所述种子在40℃下的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。优选地，种子是上面所提到的植物的种子。
已发现，保持低的损伤种子的百分比，将使得T.I.T.增大。
优选地，小于12％的种子是完全损伤的种子，优选小于8％、优选小于5％、优选小于3％的种子是完全损伤的种子。
优选地，小于6％的种子是显著生的种子(distinctly green seed)，优选小于4％、优选小于2％、优选小于1％的种子是显著生的种子。
优选地，小于0.5％的种子是经加热的种子，优选小于0.3％、优选小于0.1％、优选小于0.05％的种子是经加热的种子。
在一个优选的实施方式中，小于8％的种子是完全损伤的种子，小于4％的种子是显著生的种子，小于0.3％的种子是经加热的种子。在另一个优选的实施方式中，小于5％的种子是完全损伤的种子，小于2％的种子是显著生的种子，小于0.1％的种子是经加热的种子。在另一个优选的实施方式中，小于3％的种子是完全损伤的种子，小于1％的种子是显著生的种子，小于0.05％的种子是经加热的种子。
在本文中使用时，完全损伤的种子、显著生的种子和经加热的种子的百分比是根据the Official Grain Grading Guide.2001of the Canadian GrainCommission(用于油菜和油菜籽)来测定。
具有优选百分比的完全损伤的种子、显著生的种子和经加热的种子的种子可以在收获之后通过种子的适当选择而得到。
在本发明的另一方面，本发明提供了包含LC-PUFA的种子，其中完全损伤的种子、显著生的种子和/或经加热的种子的百分比如上面所公开的。
优选地，相对于种子中脂肪酸的总量，该种子包含至少5wt.％、优选至少10wt.％、优选至少15wt.％、优选至少20wt.％的LC-PUFA(例如如本文所述的LC-PUFA)。
优选地，相对于种子中脂肪酸的总量，该种子包含至少5wt.％、优选至少10wt.％、优选至少15wt.％、优选至少20wt.％的ω-6LC-PUFA。
优选地，相对于种子中脂肪酸的总量，该种子包含至少5wt.％、优选至少10wt.％、优选至少15wt.％、优选至少20wt.％的ARA。
优选地，相对于种子中脂肪酸的总量，该种子包含至少5wt.％、优选至少10wt.％、优选至少15wt.％、优选至少20wt.％的ω-3LC-PUFA。
优选地，相对于种子中脂肪酸的总量，该种子包含至少5wt.％、优选至少10wt.％、优选至少15wt.％、优选至少20wt.％的DHA。
优选地，基于种子中脂肪酸的总量，该种子包含小于2wt.％的芥酸，优选小于1wt.％，优选小于0.5wt.％。
根据本发明的组合物在进一步使用和/或加工之前，可以适当地储存。
有利的是，组合物在低于10℃、优选低于5℃、优选低于0℃、优选低于零下5℃、优选低于零下10℃的温度下储存。储存温度没有特定的下限。通常，组合物在高于零下30℃的温度下储存。
如果组合物包含种子或者组合物是种子的形式，优选地，该种子的含湿量小于15wt.％，例如小于12wt.％，例如小于10wt.％，例如小于9.5wt.％，例如高于6wt.％，例如高于7wt.％，例如高于8wt.％。含湿量可以例如介于6-15wt.％之间，例如介于7-12wt.％之间，例如介于8-10wt.％之间。优选的含湿量可以通过如上所述的使种子干燥而得到。
组合物可以储存任意合适的时间段。组合物可以例如储存至少一天，例如至少1周，例如至少2周，例如至少1个月，例如至少3个月。储存时间没有特定的上限。该组合物可以例如储存少于12个月，例如少于6个月。
本发明还涉及用于得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法，该方法包括从根据本发明的组合物中或从根据本发明的方法得到或可得到的组合物中分离所述LC-PU FA或含有LC-PUFA的油。
脂质LC-PUFA或含有LC-PUFA的油可以通过从组合物中萃取LC-PUFA或含有LC-PUFA的油而得到，优选地通过溶剂萃取。可以使用任何合适的溶剂，例如C1-10烷基酯(例如乙酸乙酯或乙酸丁酯)、甲苯、C1-3醇(例如甲醇、丙醇)、C3-6烷烃(例如己烷)或超临界流体(例如液态CO2或超临界丙烷)。优选地，该溶剂是非极性溶剂，例如C3-C8烷(优选己烷)或超临界流体(优选超临界CO2或超临界丙烷)。优选的萃取过程在WO 97/037032中有所描述。
如果组合物包含种子或组合物是种子的形式，那么LC-PUFA和/或含有LC-PUFA的油可以按下列方法分离。
种子和/包含种子的组合物可以被压碎或压成薄片。这有助于回收LC-PUFA或含有LC-PUFA的油。随后，压碎和/或压成薄片的种子和/或包含该种子的组合物可以被加热，例如在高于60℃的温度下。加热可以在相对低的温度下进行。种子和/或包含该种子的组合物可以例如在介于50-90℃之间的温度下加热，例如介于60-80℃之间，优选地加热2-60分钟的时间，优选5-30分钟。如果选择升高的温度，那么优选减少加热的持续时间。
种子和/包含种子的组合物可以以高速率加热。该方法可以例如包括以下列方式加热种子或包含种子的组合物，其中温度在小于1分钟、优选小于30秒、优选小于20秒的时间内从40℃升至70℃。该方法可以例如包括以下列方式加热种子或包含种子的组合物，其中温度在小于1分钟、优选小于30秒，优选小于20秒的时间内从40℃升至100℃。
根据本发明的方法可以包括，通过使用过热蒸汽来加热种子和/包含种子的组合物。根据本发明的方法可以例如包括，使种子和/包含种子的组合物与过热蒸汽接触。
优选地，根据本发明的方法包括在相对较高的温度(例如介于120-160℃之间)下和相对较短的时间内加热种子和/包含种子的组合物。该方法可以例如包括，使种子和/包含种子的组合物保持在高于120℃(例如低于160℃)的温度下小于8分钟、例如小于5分钟、例如小于3分钟、例如小于2分钟的时间段。使种子和/包含种子的组合物保持在介于120℃和例如(低于)160℃之间的温度下至少5秒、例如至少10秒的时间段。
优选地，以相对较高的速率来冷却种子和/包含种子的组合物。优选地，使种子和/包含种子的组合物的温度在小于60分钟、优选小于30分钟、优选小于15分钟的时间段内从最高温度降低至40℃的温度。
这些方案可以单独使用或组合使用。例如，高速率加热可以与将种子和/包含种子的组合物保持在优选的温度下相对短的时间组合和/或与快速冷却组合。
加热并不限于方法的某一特定阶段。加热可以在粉碎种子(例如压碎或压成薄片)之前或之后进行。另一方面，本发明提供了用于加热含有LC-PUFA的种子的方法，其中按上面所公开的来加热该种子。
油的级分可以通过压榨种子或包含种子的组合物得到。为排出油的级分而压榨种子可以通过使用本领域已知的方法来进行。可以使用螺杆压榨机。在一个优选的实施方式中，本发明包括使用冷却的压榨机(例如螺杆压榨机)来压榨种子或包含种子的组合物以排出油。
油的还有的级分可以通过从上面所述的压榨得到的压滤饼中溶剂萃取而得到。
油的提纯可以包括脱胶、精炼、脱色(bleaching)和/或脱臭。这些是已知的步骤，可以由本领域技术人员来实施。在一个优选的实施方式中，除臭是在低于200℃的温度下进行，优选低于190℃，优选低于185℃。使脱臭温度降低至低于优选的值将改善油的品质。
本发明还提供了一种用于得到食品(特别是婴幼儿配方奶粉)的方法，其包括从根据本发明的组合物中得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油，并将所述LC-PUFA或含有所述LC-PUFA的油掺入所述食品中。
权利要求书中公开了其他优选的方面、实施方式和特征。
本发明的一个实施方式和/或方面的优选特征和特性在进行必要的修正后同样适用于另一个实施方式。在本文中使用时，LC-PUFA的优选的特征和特性适用于本发明的所有方面和实施方式中的所有LC-PUFA。
通过参考下列非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例
实施例1
Mortierella alpina的发酵液(发酵8天后得到的)在70℃下巴氏消毒1小时。过滤经巴氏消毒的发酵液，得到含湿量为50wt.％的滤饼。在低于15℃的温度下将滤饼压碎并挤出。挤出物(直径为3mm)在具有三个区的连续流化床干燥器中干燥至含湿量为7％。在第一区中，床温度为32℃，空气温度为50℃(T露点＝15℃)。
第一区：床温度32℃，空气温度50℃(T露点＝15℃):45分钟
第二区：床温度32℃，空气温度35℃(T露点＝1℃):45分钟
第三区：床温度15℃，空气温度15℃(T露点＝1℃)：30分钟
干燥的生物质的含油量为39％。相对于油中所有脂肪酸的量，ARA的含量为46％。
在40℃下所测的热诱导时间(T.I.T.)：9天。
对比实验A
重复上述的发酵和巴氏消毒。使用连续式脱水机回收湿细胞并使其碎裂，随后通过热风干燥(热风温度为120℃)进行干燥，用振动流化床使其干燥至含湿量为1wt.％。通过在流化床中提供室温的空气使干燥的细胞冷却。ARA和油的含量与实施例一样。
在40℃下所测的热诱导时间(T.I.T.)：<12小时。
实施例2
从转基因的Brassica植物中得到含有19％的花生四烯酸(相对于脂肪酸的总量)的种子，所述转基因的Brassica植物是通过使用WO2008009600中所述的方法转变的。
种子的规格(根据the Official Grain Grading Guide,2001of the CanadianGrain Commission测定)如下所示：显著生<2％，完全损伤<5％。
使用流化床干燥器来干燥含湿量为17wt.％的种子。床温度为28℃。使用露点为10℃的经调节的空气。经干燥的种子的含湿量为8.5wt.％。含油量为35wt.％。
在40℃下所测的热诱导时间(T.I.T.)：14天。

Claims (10)

1.一种组合物，其包含：(i)具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)，和(ii)细胞，该组合物在40℃的热诱导时间(T.I.T.)大于24小时。
2.如权利要求1所述的组合物，其含湿量为1-20wt.％，优选为2-15wt.％，优选为3-12wt.％，优选为3.5-10wt.％，优选为4-9wt.％。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其含油量为至少10wt.％，例如至少20wt.％，例如至少30wt.％，例如至少40wt.％，例如低于70wt.％，例如低于60wt.％。
4.如前面任意一项权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含这样的油，其中基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有至少10wt.％、例如至少20wt.％、例如至少30wt.％、例如至少40wt.％的具有至少3个双键的PUFA；基于所述油中所有脂肪酸的量，所述油含有例如低于80wt.％、例如低于70wt.％、例如低于60wt.％的具有至少3个双键的PUFA。
5.如前面任意一项权利要求所述的组合物，其中所述LC-PUFA具有至少3个双键。
6.如前面任意一项权利要求所述的组合物，其中所述LC-PUFA为ω-3或ω-6PUFA。
7.如前面任意一项权利要求所述的组合物，其中所述LC-PUFA选自由二高-γ-亚麻酸(DGLA，20:3 ω-6)、花生四烯酸(ARA，20:4 ω-6)、二十碳五烯酸(EPA，20:5 ω-3)、二十二碳六烯酸(DHA:22:6 ω-3)、二十二碳五烯酸(DPA,22:5 ω-3,或DPA 22:5,ω-6)组成的组。
8.一种用于干燥包含细胞和LC-PUFA的组合物的方法，所述方法包括，在低于40℃、优选低于35℃、优选低于33℃、优选低于30℃、优选低于25℃的温度下干燥所述组合物。
9.一种用于得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油的方法，所述方法包括，从根据前面任一项权利要求所述的组合物中或从通过权利要求8所述的方法得到或可得到的干燥的组合物中分离LC-PUFA或含有LC-PUFA的油。
10.一种用于得到食品、特别是婴幼儿配方奶粉的方法，所述方法包括，根据权利要求9所述的方法得到LC-PUFA或含有LC-PUFA的油，然后将所述LC-PUFA或含有所述LC-PUFA的油掺入所述食品中。
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