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CN106458821B - Bh4拮抗剂及其相关方法 - Google Patents

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CN106458821B CN201580023527.9A CN201580023527A CN106458821B CN 106458821 B CN106458821 B CN 106458821B CN 201580023527 A CN201580023527 A CN 201580023527A CN 106458821 B CN106458821 B CN 106458821B
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Abstract

本披露涉及BH4抑制剂及其相关治疗用途。在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防如肺癌的癌症的方法，这些方法包括将治疗有效量的、包括在此披露的化合物或药学上可接受的盐的药用组合物给予至对其有需要的受试者。

Description

BH4拮抗剂及其相关方法
声明
本发明是由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)资助的在批准号R01CA136534和DA028821下由政府支持进行的。政府在本发明中具有一定权利。
相关申请的交叉引用
本申请要求于2014年5月5日提交的美国临时申请号61/988,332的优先权，将该申请的全部内容通过引用特此结合。
背景
对于非小细胞肺癌(NSCLS)来说总存活率约为16％，然而对于SCLC来说总存活率是6％。杰马勒(Jemal)等人，临床肿瘤杂志(CA Cancer J.Clin.)，(2007)，57，43-66。克服肺癌对化放疗或表皮生长因子受体(EGFR)靶向治疗的耐药性将证实是显著的成就。B-细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)是凋亡调节蛋白的Bcl-2家族的成员。Bcl-2在多种癌症中广泛表达，包括肺癌、白血病、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、头/颈癌等。涉及癌症对化疗的耐药性的一个主要因素是Bcl-2和Bcl-2样蛋白的过度表达。已经证实Bcl-2的BH4结构域是Bcl-2的抗凋亡功能所需的结构域，该抗凋亡功能和增加的癌症化疗耐药性相关。Bcl-2在SCLC和NSCLC两种细胞中都广泛地表达。
因为超过60％的NSCLC患者表达EGFR，已经鉴定EGFR是NSCLC治疗的重要治疗性靶标。通过EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(即厄洛替尼或吉非替尼)的EGFR抑制代表肺癌疗法的有前景的方法。不幸的是，起初从厄洛替尼疗法中受益的患者在6-12个月之后发展出对厄洛替尼的获得性耐药性。该机制尚未完全了解但可以与EGFR非依赖性途径的激活、另外的EGFR基因突变的发生或靶标的缺失相关。
除作为抗凋亡蛋白起作用，Bcl-2还可以促进肿瘤血管生成。在低氧情况下，Bcl-2在黑色素瘤和乳腺癌中促进低氧诱导因子-1(HIF-1)介导的血管内皮生长因子(VEGF)表达。参见特里肖利奥(Trisciuoglio)等人，细胞死亡与分化(Cell Death andDifferentiation)(2011)，1-12。在低氧情况下，在BH4结构域处的突变在人黑色素瘤细胞中和如结肠癌、卵巢癌和肺癌的其他人类肿瘤组织型中消除了Bcl-2诱导VEGF蛋白表达和转录活性的能力。BH4肽足以通过损害HIF-1α蛋白泛素化而增加HIF-1α蛋白半衰期并且增强VEGF在暴露于低氧下的黑色素瘤细胞中的分泌。
HIF-1α在包括以下项的许多肿瘤类型中过度表达：结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、和肾癌。参见钟(Zhong)等人的摘要，癌症研究(CancerRes.)，1999，59(22)：5830，标题为“在常见人类癌症及其转移中低氧诱导因子1α的过度表达(Overexpression of hypoxia-inducible factor 1alpha in common human cancersand their metastases)”。还参见西门扎(Semenza)，国际医学(Intern Med.),2002，41(2)：79-83，标题为“低氧诱导因子1在人类癌症中的参与(Involvement of hypoxia-inducible factor 1 in human cancer)”；钟(Zhong)等人，生物化学和生物物理研究通讯(Biochem Biophys Res Commun)，2001，284(2)：352-6，标题为“低氧诱导因子1α和1β蛋白在人前列腺癌细胞中共享通用信号传导通路(Hypoxia-inducible factor 1alpha and1beta proteins share common signaling pathways in human prostate cancercells)”；皮(Pugh)等人，乳腺癌研究(Breast Cancer Res)，2001，3(5)：313-7，标题为“在乳腺癌中的低氧和氧化应激(Hypoxia and oxidative stress in breast cancer)。低氧信号通路(Hypoxia signalling pathways)”；以及嘉初马娜拉基(Giatromanolaki)等人，英国癌症杂志(Br J Cancer.)，2001，85(6)：881-90，标题为“低氧诱导因子-1α和2α在可操作的非小细胞肺癌中与肿瘤的血管生成/分子特性及存活的相关(Relation of hypoxiainducible factor 1 alpha and 2 alpha in operable non-small cell lung cancerto angiogenic/molecular profile of tumours and survival)。”
某些二氨基蒽醌衍生物是血管生成抑制剂并且已被提议作为潜在的抗癌药物。参见塔卡诺(Takano)等人，药理学与实验治疗学杂志(Journal of Pharmacology andExperimental Therapeutics)，(1994)，271(2)，1027-33。还参见美国专利6,465,522、5,733,880、5,436,243、以及5,344,841。
概述
本披露涉及BH4抑制剂及其相关治疗用途。在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防如肺癌的癌症的方法，这些方法包括将治疗有效量的、包括在此披露的化合物或药学上可接受的盐的药用组合物给予至对其有需要的受试者。在某些实施例中，本披露涉及在此披露的任选地被一个或多个取代基取代的化合物或衍生物。
在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，
或其盐，其中X是-(CR8R9)n-；Y是卤素、NH、CH2、O、或S；Z是-(CR10R11)m-或桥联芳基；n是1、2、3、或4；m是1、2、3、或4；
R1是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R2是氢或烷基；或R1和R2形成任选地被一个或多个R12取代的杂环基；
R3是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R8、R9、R10、和R11各自单独且独立地是氢、卤素、或羟基；
R12是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；
R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
在某些实施例中，本披露涉及包括在此披露的化合物或药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂的药用组合物。在某些实施例中，这些药用组合物进一步包括第二治疗剂。
在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防癌症的方法，这些方法包括向被诊断患有癌症、展现癌症症状、或处于癌症风险的受试者给予在此披露的药用组合物。在某些实施例中，该癌症选自下组，该组由以下各项组成：由白血病、黑色素瘤、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、头癌、颈癌、和肾癌。在某些实施例中，将药用组合物与第二治疗剂组合给药，该第二治疗剂例如但不限于吉非替尼、厄洛替尼、多西他赛、顺铂、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、替加氟、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷、羟基脲、阿霉素、博莱霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、放线菌素D和光辉霉素、长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨紫杉醇、泰索帝、依托泊苷、替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康、喜树碱、硼替佐米、阿那格雷、他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、吲哚昔芬氟维司群、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、环丙孕酮、戈舍瑞林、亮丙瑞林、布舍瑞林、甲地孕酮、阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑、依西美坦、非那雄胺、马立马司他、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、达沙替尼、伊马替尼、贝伐单抗、考布他汀、沙利度胺、和/或来那度胺，或其组合。
在某些实施例中，本披露涉及在此披露的治疗方法，其中药用组合物是在放射疗法之前、之后或期间给药。
在某些实施例中，本披露涉及治疗肺癌的方法，这些方法包括将EGFR抑制剂和BH4抑制剂(如在此披露的那些)组合给药。
在某些实施例中，该BH4抑制剂是1-((3-(二乙氨基)-2-羟丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1,4-双((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮、1-((2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮，其盐或衍生物，该BH4抑制剂任选地每天以0.01mg每kg和0.1mg每kg之间、每天以0.1mg每kg和1.0mg每kg之间、每天以1mg每kg和5mg每kg之间、或受试者每天以5mg每kg之间和30mg每kg之间给药。
在某些实施例中，本披露涉及治疗癌症的方法，这些方法包括将有效量的mTOR抑制剂和BH4抑制剂(如在此披露的那些)组合给药。在某些实施例中，mTOR抑制剂是西罗莫司、依维莫司、地磷莫司、替西罗莫司、或其衍生物。
在某些实施例中，本披露涉及在此披露的化合物在生产治疗或预防癌症的药物中的应用。
在某些实施例中，本披露涉及制备在此披露的化合物的方法，这些方法包括在形成化合物的条件下混合在此披露的起始材料和试剂。
附图简要说明
图1展示了某些实施例的化学结构。
图2展示了某些实施例的化学结构。
图3展示了某些实施例的化学结构。
图4示出指示BDA-2(改名为BDA-366)在体内抑制肺癌的数据。将带有H460肺癌异种移植物的Nu/Nu小鼠用递增剂量的BDA-366(0mg/kg/d、10mg/kg/d、20mg/kg/d和30mg/kg/d)处理14天。每组包括8只小鼠。每2天测量一次肿瘤体积。在14天后，将小鼠处死并且将肿瘤移除并进行分析。
图5示出指示BDA-366在衍生自SCLC患者的异种移植物中抑制肿瘤生长的数据。将携带衍生自难治性SCLC患者的异种移植物的小鼠用BDA-366(20mg/kg/d)通过腹腔注射处理两周。
图6示出本披露的某些实施例的肿瘤体积数据。将NSCLC H460异种移植物小鼠用20mg/kg的Bcl2 BH4拮抗剂BDA-366或其类似物(CYD-2-81、CYD-2-84和CYD-2-88)通过腹腔注射处理两周。
图7示出了指示用RAD001处理肺癌细胞或患者下调Bcl2的数据。将A549或H460细胞用递增浓度的RAD001处理24小时。将Bcl-2和p-P70S6K用Western印迹分析。
图8示出指示BDA-366协同RAD001在抑制人类肺癌细胞生长中的数据。将H460细胞用RAD001(1nM)或BDA-366(100nM)单独或组合处理72小时。细胞生长用磺酰罗丹明B比色测定进行分析。用以评估RAD001和BAD-366的协同作用的联合指数(CI)值用CompuSyn软件计算。
图9示出BAD-366和RAD001的组合在体内协同地抑制肺癌。将带有H460肺癌异种移植物的Nu/Nu小鼠用BDA-366、RAD001或其组合通过腹腔注射处理14天。
图10示出当人多发性骨髓瘤细胞系8226和U266(106个细胞/ml)用BDA2在不同浓度下(0、0.1、0.25、0.5μM)处理48小时时的数据。然后将细胞用Annexin V染色以用于FACS分析。凋亡细胞死亡作为Annexin V阳性细胞的百分比而呈现。将在处理中的活细胞数量在显微镜下用台盼蓝染色进行计数。
详细说明
在更详细地描述本披露之前，应理解的是本披露不限于所描述的具体实施例，因此这些当然可以改变。还应当理解，在此使用的术语仅是为了描述特定实施例的目的，而并不意图是限制性的，因为本披露的范围仅由所附权利要求限定。
除非另外定义，在此所用的全部技术术语和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。虽然与在此所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料也可以用于实施或测试本披露中，然而现在描述优选的方法和材料。
在本说明书中引用的所有公开物和专利通过引用结合于此，就好像每个单独的公开物或专利被确切地并单独地指示为通过引用结合，并且通过引用结合于此从而结合引用的公开物披露和描述这些方法和/或材料。任何公开物的引用内容是针对在提交日之前的披露，并且不能理解为承认因为先前披露而本披露不能获得比这些公开物更早的申请日。此外，所提供的公开日期可能与实际的公开日期不同，实际的公开日期可能需要单独地确认。
如将对于本领域技术人员清楚的是，在阅读本披露时，在此描述和展示的单独实施例的每一个具有离散的组成部分和特征，这些组成部分和特征可以在不偏离本披露的范围或精神的情况下易于与任何其他一些实施例的特征分离或组合。可以按照所叙述的事件的顺序或按照逻辑上可行的任何其他顺序来进行任何叙述的方法。
除非另外说明，本披露的实施例将采用免疫学、医学、有机化学、生物化学、分子生物学、药理学、生理学等的技术，这些技术是在本领域的技术之内。此类技术在文献中得到充分解释。
必须指出，如在说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该(the)”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地规定。在本说明书和以下权利要求书中，将参考应定义为具有下列含义的大量术语，除非明显是相反的意图。
在描述各种实施例之前，提供以下定义并且应使用这些定义，除非另外指明。
如在此使用的，“烷基”意指非环直链或分支的、不饱和的或饱和的烃，如包括从1到10个碳原子的那些，然而术语“低级烷基”或“C1-4烷基”具有和烷基相同的意义但包括从1到4个碳原子。术语“高级烷基”具有和烷基相同的意义但包括从7-20个碳原子。代表性饱和直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基等；然而饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基等。不饱和烷基类包含在相邻碳原子之间的至少一个双键或者三键(分别是指如“烯基”或者“炔基”)。代表性直链和支链烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等。而代表性直链和支链炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。
非芳香族单环或多环烷基在此被称为“碳环”或“碳环基”基团。代表性的饱和碳环包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；而不饱和碳环化合物包括环戊烯基和环己烯基等。
“杂碳环”或“杂碳环基”基团是可能饱和或不饱和(但不为芳香族)、单环或多环的包含从1个到4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的碳环，并且其中这些氮和硫杂原子可任选地被氧化，并且该氮杂原子可任选地被季铵化。杂碳环包括吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢苯硫基、四氢硫代吡喃基、四氢嘧啶基、四氢苯硫基、四氢硫代吡喃基等。
“芳基”意指芳香族碳环单环或者多环环，诸如苯基或萘基。多环环系统可以(但不是必需)包含一个或多个非芳香族环，只要一个环是芳香族即可。
如在此所用，“杂芳基”是指具有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子并且包含至少1个碳原子的一个芳香族杂碳环，包括单环与多环环系统两者。多环环系统可以(但不是必需)包含一个或多个非芳香族环，只要一个环是芳香族即可。代表性的杂芳基是呋喃基、苯并呋喃基、苯硫基、苯并苯硫基、吡咯基、吲哚基、异吲哚基、氮杂吲哚基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、苯并噁唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基、以及喹唑啉基。所考虑的是，术语“杂芳基”的使用包括N-烷基化衍生物，诸如1-甲基咪唑-5-基取代基。
如在此所用，“杂环”或“杂环基”是指具有1至4个选自氮、氧以及硫的杂原子并且包含至少1个碳原子的单环和多环环系统。这些单环和多环环系统可以是芳香族、非芳香族或芳香族与非芳香族环的混合物。杂环包括杂碳环、杂芳基等。
“烷硫基”是指通过硫桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基。烷硫基的一个实例是甲硫基(即-S-CH3)。
“烷氧基”是指通过氧桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基。烷氧基的实例包括，但并不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基以及仲戊氧基。优选的烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基以及叔丁氧基。
“烷氨基”是指通过氨基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基。烷氨基的一个实例是甲氨基(即-NH-CH3)。
“烷酰基”是指通过羰基桥连接的具有指定数目的碳原子的如上文所定义的烷基(即-(C＝O)烷基)。
“烷基磺酰基”是指通过磺酰基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基(即-S(＝O)2烷基)，诸如甲磺酰基等，并且“芳基磺酰基”是指通过磺酰基桥附接的芳基(即-S(＝O)2芳基)。
“烷基磺酰胺”是指通过氨磺酰基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基(即-NHS(＝O)2烷基)，并且“芳基磺酰胺”是指通过氨磺酰基桥附接的芳基(即-NHS(＝O)2芳基)。
“烷基亚磺酰基”是指通过亚磺酰基桥连接的具有指定数目的碳原子的如上文所定义的烷基(即-S(＝O)烷基)。
“氧膦基”是指具有羟基、硫醇基、烷基、烷氧基、烷硫基或组合中的两个另外取代的磷酰基(-P＝O)或磷酸硫醇基(-P＝S)(即-P(＝O)(烷基)2、-P(＝S)(OH)2、-P(＝O)(烷基)(烷氧基))。
术语“被取代”是指其中至少一个氢原子被取代基置换的一个分子。当被取代时，一个或多个基团是“取代基”。该分子可被多重取代。在氧代取代基(“＝O”)的情况下，两个氢原子被置换。这种情形中的示例取代基可包括卤素、羟基、烷基、烷氧基、硝基、氰基、氧代、碳环基、碳环烷基、杂碳环基、杂碳环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaNRb、-NRaC(＝O)ORb、-NRaSO2Rb、-C(＝O)Ra、-C(＝O)ORa、-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)NRaRb、-ORa、-SRa、-SORa、-S(＝O)2Ra、-OS(＝O)2Ra以及-S(＝O)2ORa。这种情形中的Ra和Rb可以相同或不同并且独立地为氢、卤素、羟基、烷基、烷氧基、烷基、氨基、烷氨基、二烷氨基、碳环基、碳环烷基、杂碳环基、杂碳环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基以及杂芳基烷基。
如在此所用的术语“任选地被取代”意指取代是任选的并且因此指定原子有可能未被取代。
如在此所用的“盐”指披露的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸或碱的盐来修饰。盐的例子包括但不限于碱性残基(如胺、烷基胺、或二烷基胺)的矿盐或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属盐或有机盐；等等。在优选的实施例中，这些盐是常规的非毒性的药学上可接受的盐，其包括所形成的母体化合物和非毒性无机酸或有机酸的季铵盐。优选的盐包括衍生自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些；以及制备自有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸等的盐。
“受试者”是指任何动物，优选人类患者、牲畜、或家养宠物。
术语“前药”是指在体内被转化为生物活性形式的药物。前药经常是有用的，因为在一些情况下，它们可以比母体化合物更容易给予。例如，它们可以通过口服给药而成为生物可利用的，而母体化合物却不行。前药还可以在药用组合物中具有改进的超过母体药物的溶解性。前药可以通过包括酶促过程和代谢水解的各种机制转化为母体药物。
如在此所用的术语“预防”和“防止”包括复发、扩散或发作的预防。并不旨在将本披露限制为完全预防。在一些实施例中，该发作被延缓，或该疾病的严重性被降低。
如在此所用的术语“治疗(treat)”和“治疗(treating)”并不限于受试者(如患者)被治愈并且疾病被根除的情况。相反，本披露的实施例还考虑了仅减轻症状和/或延缓疾病发展的治疗。
如在此所用，当用于描述与一种另外的治疗一起给予时，术语“与组合”意指该药剂可以在该另外的治疗之前、与其一起、或之后、或其组合被给予。
如在此所用，术语“衍生物”是指保留所鉴别类似物的足够功能特征的结构上类似的化合物。该衍生物可能是结构上类似的，因为缺乏一个或多个原子、被取代、呈盐形式、呈不同的水合/氧化状态，或因为分子内的一个或多个原子被转换，如(但不限于)氧原子被硫原子置换或氨基被羟基置换。该衍生物可以是前药。衍生物可通过在合成或有机化学教科书中所呈现的任何种类的合成方法或适当改动来制备，诸如马奇的高等有机化学：反应、机理以及结构(March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure)，威利出版社(Wiley)，第6版(2007)；迈克尔(Michael B.)史密斯(Smith)或有机合成中的多米诺反应(Domino Reactions in Organic Synthesis)，威利出版社(Wiley)(2006)卢茨F.蒂策(Lutz F.Tietze)中所提供的那些，这些化学教科书通过引用结合在此。
“癌症”指任何具有表征为细胞增殖的恶性肿瘤的各种细胞疾病。并不意图病变细胞必须实际入侵周围组织并转移到新的身体部位。癌症可以涉及身体的任何组织并且在每个身体部位有许多不同的形式。在某些实施例的背景中，是否“癌症被减弱”可以通过本领域技术人员已知的许多诊断方式鉴定，这些方式包括但不限于观察到肿瘤块的大小或数量的降低或是否观察到癌细胞的凋亡增加，如与没有该化合物的对照相比对于样品化合物是否观察到在癌细胞凋亡中具有超过5％的增加。它还可以通过相关的生物标志物或基因表达谱的改变来鉴定，如针对前列腺癌的PSA、针对乳腺癌的HER2、或其他。
化合物
在某些实施例中，本披露考虑了根据下文化学式I的化合物。
或其盐，其中
X是-(CR8R9)n-；
Y是卤素、NH、CH2、O、或S；
Z是-(CR10R11)m-或桥联芳基；
n是1、2、3、或4；
m是1、2、3、或4；
R1是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R2是氢或烷基；或R1和R2形成任选地被一个或多个R12取代的杂环基；
R3是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R8、R9、R10、和R11各自单独且独立地是氢、卤素、或羟基；
R12是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；
R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
在某些实施例中，R1是碳环基或杂环基。
在某些实施例中，R1是环丙基。
在某些实施例中，Y是NH或CH2。
在某些实施例中，Y是卤素。
在某些实施例中，Z是-(CR10R11)m-。
在某些实施例中，R10和R11中的至少一个是羟基。
在某些实施例中，m是3。
在某些实施例中，R3是任选地被一个或多个R12取代的碳环基或杂环基如杂碳环环氧乙烷基、吡咯烷、吗啉基、吡咯烷酮、和哌嗪基。
在某些实施例中，R3是被烷基取代的杂环基，其中该烷基被一个或多个卤素或羟基取代。
在某些实施例中，R3是任选地被一个或多个R12取代的烷基磺酰胺或芳基磺酰胺。
在某些实施例中，R3是二烷氨基。
在某些实施例中，R3是任选地被一个或多个R12取代的氨基。
在某些实施例中，R1是杂环基。
在某些实施例中，n是1或3。
在某些实施例中，Z是桥联苯基。
在某些实施例中，具有化学式I的化合物具有化学式IA，
或其盐，其中
A是任选地被一个或多个R12取代的杂环；
X是-(CR8R9)n-；
Y是NH或CH2；
Z是-(CR10R11)m-；
n是1、2、3、或4；
m是1、2、3、或4；
R1是羟基、碳环基或杂环基，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R7是氢、卤素或羟基；
R8、R9、R10、和R11各自单独且独立地是氢、卤素、或羟基；
R12是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；
R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
在某些实施例中，具有化学式I的化合物具有化学式IB，
或其盐，其中
A是任选地被一个或多个R12取代的杂环；
U是CH2或O；
X是-(CR8R9)n-；
Y是NH或CH2；
Z是-(CR10R11)m-；
n是1、2、3、或4；
m是1、2、3、或4；
R7是氢、卤素或羟基；
R12是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；
R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
在某些实施例中，具有化学式I的化合物具有化学式IC，
或其盐，其中
B是任选地用一个或多个R12取代的杂环；
X是-(CR8R9)n-；
Y是NH或CH2；
Z是-(CR10R11)m-或桥联芳基；
n是1、2、3、或4；
m是1、2、3、或4；
R3是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R12取代；
R8、R9、R10、和R11各自单独且独立地是氢、卤素、或羟基；
R12是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；
R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
在某些实施例中，该化合物选自下组：
1-((环丙基甲基)氨基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((3-吗啉代丙基)氨基)-4-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2,3-二羟丙基)氨基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基)氨基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((3-吗啉代丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2-((2-羟乙基)氨基)乙基)氨基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1,4-双((2-羟基-3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2-羟基-3-吗啉代丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((2-(二甲氨基)乙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((环丙基甲基)氨基)-4-((2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟丙基)氨基)-4-((3-吗啉代丙基)氨基)蒽-9,10-二酮；
1-((环丙基甲基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮；以及
1-((环丙基甲基)氨基)-4-((3-(二乙氨基)-2-羟丙基)氨基)蒽-9,10-二酮，或其中该化合物任选地被一个或多个取代基取代。
用于肺癌治疗的小分子Bcl2 BH4拮抗剂
Bcl-2是Bcl-2家族的创始成员，其抑制在各种应激后的凋亡。涉及到抑制Bcl-2存活功能的机制将促使癌细胞经历凋亡。Bcl-2家族成员具有集群在四个保守的Bcl-2同源性(BH)结构域内的同源性：BH1、BH2、BH3和BH4，其中抗凋亡蛋白，如Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-w和A1，具有NH2-末端BH4结构域。鉴于BH4结构域通过和不同蛋白的相互作用涉及到许多细胞功能，这指示BH4结构域代表潜在的治疗靶标。BH4结构域靶向剂(BDA)抑制Bcl-2和其他具有BH4结构域的Bcl-2样蛋白。我们的发现指示大多数人类肺癌细胞系对BDA2比对ABT-737更敏感，ABT-737是一种高度亲和地与Bcl-2和Bcl-xL结合的拟BH3小分子抑制剂。在某些实施例中，本披露涉及在此披露的化合物治疗癌症和其他表达包含BH4的Bcl-2家族蛋白的恶性肿瘤的用途。
对于Bcl-2的存活活性来说，需要BH4结构域，并且该结构域的移除可以将Bcl-2从存活分子转变为杀害分子，表明BH4结构域构成了用于破坏Bcl-2的存活功能或将Bcl-2转化为死亡分子的有前景的基于结构的靶标。已经鉴定了靶向BH4结构域并且与之前的BH3模拟物不同的一类Bcl2拮抗剂(如BDA-2，改名为BAD-366)。BDA-366直接与纯化的Bcl-2蛋白选择性地于BH4结构域上以高亲和性并以在纳摩尔水平上的抑制常数(Ki)值结合。BDA-366不能和其他Bcl-2家族成员(即Bcl-XL、Mcl-1和Bfl-1/A1)结合，证实Bcl2/BDA-366结合的特异性。BDA-366和BH4结构域的结合导致了在体外和在体内Bcl-2构象改变以及BH3结构域的暴露。
BAD-366证实了在衍生自肺癌细胞系或源自患者的SCLC肿瘤的肺癌异种移植物中有力的抗肿瘤活性。剂量反应实验揭示在10mg/kg/d和30mg/kg/d剂量之间的BDA-366有力地抑制肺癌在体内的生长，而没有血小板降低或其他显著的正常组织毒性，表明该剂量在鼠类肺癌模型中应该是有效和安全的。
因为BDA-366有效地抑制来源于难治性SCLC患者的PDX的生长，BDA-366可以在患者中提供临床应用是一个好的可能。过表达Bcl2的癌细胞对mTOR抑制剂具有耐药性，而Bcl2的下调恢复了对mTOR抑制的敏感性。由RAD001对mTOR的抑制导致Bcl2在用RAD001处理的肺癌细胞系和在来自NSCLC患者的肿瘤组织中上调。由mTOR抑制剂疗法诱导的Bcl-2表达可以负面地影响mTOR抑制剂在肺癌疗法中的效力是可能的。这可以帮助解释为什么RAD001在肺癌患者中仅具有有限效力。Bcl2和mTOR抑制的组合的应该具有超过单独每个药剂的优越的治疗益处。和RAD001组合的BDA-366在体外和体内展现出对抗肺癌的强的协同活性，没有显著的正常组织毒性。共靶向Bcl2和mTOR提供了用于肺癌治疗的更有效策略。
BDA-366是选择性地靶向Bcl-2的BH4结构域的Bcl-2拮抗剂。BDA-2和BH4结构域的结合通过暴露BH3死亡结构域的构象改变而导致了Bcl2从抗凋亡分子转化为死亡蛋白。BH4拮抗剂BDA-366在体内展现出对抗人类肺癌的有力的效力，没有血小板下降。BH4拮抗剂作为抗癌药剂的开发指示了一种用于癌症治疗的组合mTOR策略。
在某些实施例中，mTOR抑制剂是西罗莫司、依维莫司、地磷莫司、替西罗莫司、或其衍生物。在某些实施例中，考虑具有下列化学式的衍生物，
或其盐，其中，
虚线各自单独地代表单键或双键；
Y是桥联基团＝CH-CH＝CH-CH＝CH-；
X是-(CHR8)n-；
n是1或2
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14各自在每次存在时单独和独立地是相同或不同的，是氢、烷基、烯基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中每个R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代。
R20是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R20任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
已经发现用厄洛替尼处理肺癌细胞导致Bcl-2/Bcl-XL的上调，这可以部分贡献于肺癌对厄洛替尼的耐药性。组合的EGFR和Bcl-2抑制可以克服厄洛替尼耐药性。用BDA-366和厄洛替尼的组合处理肺癌细胞协同性地诱导了凋亡并且增强了生长抑制。本披露考虑组合的EGFR和Bcl-2抑制是用于克服厄洛替尼耐药性并且改进肺癌预后的策略。
组合疗法
在此披露的癌症治疗可以作为单独的疗法应用或可以涉及常规的外科手术或放射疗法或化学疗法。这样的化学疗法可以包括以下类别的抗肿瘤剂中的一个或多个：
(i)如在内科肿瘤学中使用的抗增殖/抗肿瘤药物及其组合，如烷基化剂(例如顺铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢物(例如抗叶酸剂如氟嘧啶，像5-氟尿嘧啶和吉西他滨、替加氟、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷和羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环类，像阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D和光辉霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，像长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨以及紫杉烷(像紫杉醇和泰索帝))；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，像依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康和喜树碱)；以及蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米)；以及药剂阿那格雷以及药剂α-干扰素
(ii)细胞生长抑制剂，如抗雌激素药(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬及吲哚昔芬(iodoxyfene))，雌激素受体负调节物(例如氟维司群)，抗雄激素药(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特及醋酸环丙孕酮)，LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)，孕激素(例如醋酸甲地孕酮)，芳香酶抑制剂(例如，如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)及依西美坦)以及5α-还原剂的抑制剂(如非那雄胺)；
(iii)抑制癌细胞侵染的药剂(例如金属蛋白酶抑制剂(像马立马司他)和尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能的抑制剂)；
(iv)生长因子功能的抑制剂，例如此类抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-Her2抗体曲妥珠单抗和抗-表皮生长因子受体(EGFR)抗体西妥昔单抗)、法尼基转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂以及丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂，例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，如：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033)，例如血小板衍生的生长因子家族的抑制剂以及例如肝细胞生长因子家族的抑制剂，例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的抑制剂和例如促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK1/2)抑制剂以及例如蛋白激酶B(PKB/Akt)的抑制剂，例如Src酪氨酸激酶家族和/或阿贝尔森(Abelson)(AbI)酪氨酸激酶家族的抑制剂如达沙替尼(BMS-354825)和甲磺酸伊马替尼(GleevecTM)；以及修饰STAT信号传导的任何药剂；
(v)抗血管生成剂，如抑制血管内皮生长因子的作用的那些,(例如抗-血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[AvastinTM])以及通过其他机制起作用的化合物(例如利诺胺、整合素ocvβ3功能的抑制剂和血管抑素)；
(vi)血管损伤剂，如考布他汀A4；
(vii)反义疗法，例如针对上文列出的靶标的那些，如抗-RAS反义疗法；以及
(viii)免疫疗法途径，包括例如用于增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和体内途径，如用细胞因子(如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)进行转染，用于降低T细胞失能的途径，使用转染的免疫细胞(如细胞因子转染的树突细胞)的途径，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的途径和使用抗个体基因型抗体的途径，以及使用免疫调节药物沙利度胺和来那度胺的途径。
配制品
在此披露的药用组合物可以呈药学上可接受的盐类的形式，通常如以下所描述的。适合的药学上可接受的有机和/或无机酸的某些优选但不限定的实例是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、乙酸以及柠檬酸，连同其他本身已知的药学上可接受的酸(在以下提到的引用文件中进行引用)。
当本披露的这些化合物包含一个酸基和一个碱基的时候，本披露的这些化合物还可能形成一个内盐，并且这类化合物在本披露的范围内。当化合物包含一个给氢的杂原子(例如NH)的时候，考虑到盐涵盖通过将该氢原子在该分子内转移到一个碱基或原子上而形成的异构体。
这些化合物的药学上可接受的盐类包括该酸加成以及它的碱性盐类。适合的酸加成盐由形成无毒的盐的酸形成。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯碳酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己烷氨基磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸化物/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酚盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐以及xinofoate盐类。适合的碱盐从形成无毒盐的碱形成。实例包括铝、精氨酸、苄星青霉素G、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘胺酸、细胞溶素、镁、甲基葡胺、环匹罗司乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇以及锌盐。酸类和碱类的半盐也可能形成，例如半硫酸盐和半钙盐。作为适合的盐类的一个综述，参见斯特尔(Stahl)和韦穆特(Wermuth)所著的药用盐手册：特性、选择以及使用(威利-VCH，2002)，通过引用结合在此。
在此描述的这些化合物能以药物前体的形式给予。一种前药可以包括一个共价结合的载体，该载体当给予一个哺乳动物受试者时释放该活性母体药物。前药可以通过修饰存在于这些化合物中的功能基团制备，其方式是使得这些修饰在常规操作中或者在体内是可裂解的，以形成这些母体化合物。例如，前药包括羟基结合到任意基团的化合物，当给予到一个哺乳动物受试者中时，羟基裂解以形成一个自由的羟基。前药的实例包括，但不限于，在这些化合物中的醇功能基团的乙酸盐、甲酸盐以及苯甲酸盐衍生物类。将一种化合物构建为前药的示例可以在特斯塔(Testa)和卡纳(Caner)的书，药物的水解和前药新陈代谢(Drug and Prodrug Metabolism)，威利(2006)中找到，该书通过引用特此结合。典型的前药通过水解酶转化前药，酰胺、内酰胺、肽、羧酸酯、环氧化合物的水解，或者无机酸类酯的切割形成活性代谢产物。
典型地，药用组合物包括有效量的化合物和适合的药学上可接受的载体。这些制剂能以本身已知的方式制备，该方式通常涉及将根据本披露所述的至少一种化合物与一种或多种药学上可接受的载体混合，并且，如果是所希望的，与其他药用活性化合物组合，此时有必要在无菌条件下进行。参考美国专利号6,372,778，美国专利号6,369,086，美国专利号6,369,087，美国专利号6,372,733以及以上提及的进一步的参考，连同标准手册，例如最新版本的雷明顿制药科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)。众所周知，酯前药容易在体内降解释放相应的醇。参见例如今井(Imai)，药物代谢药代动力学(Drug MetabPharmacokinet)(2006)21(3):173-85，标题为“人类羧酸酯酶同工酶：催化特性和合理药物设计(Human carboxylesterase isozymes:catalytic properties and rational drugdesign)”。
通常来说，对于药物使用，这些化合物可以被配制为一种药物制剂，该药物制剂包括至少一种化合物以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂，以及任选地一种或多种另外的药用活性化合物。
被披露的这些药物制剂优选以一种单位剂型的形式，并且可以被适当地封装，例如在一个盒子、泡罩、小瓶、瓶子、小药囊、针剂或者任意其他适合的单剂量或者多剂量的保持器或者容器中(可以被适当地标记)；可任选地具有一个或多个包含产品信息和/或使用说明的宣传单。通常来说，这类单位剂量将包含1mg至1000mg，并且通常在5mg至500mg之间的本披露的至少一种化合物，例如每单元剂量约10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或者400mg。
这些化合物可以通过多种途径给予，包括口服、眼睛、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌内或者鼻内途径，主要取决于所使用的具体制剂。通常来说，该化合物将以“有效量”给予，由此意味着在适当的给药下，一种化合物的任意量足够在它给予的受试者中达到所希望的治疗或者预防效果。通常，取决于待预防或者治疗的情况以及给药的途径，这种有效量将通常为每天每千克患者体重0.01mg至1000mg之间，更经常在0.1mg至500mg之间，如1mg至250mg，例如每天每千克患者体重大约5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、150mg、200mg或250mg，该剂量可以作为被划分成一个或多个日常剂量的单一的日常剂量。给予的量、给药的途径以及进一步的治疗方案可能由治疗的临床医师决定，取决于多种因素，如年龄、性别、以及患者的一般情况以及待治疗的疾病/症状的性质和严重性。参考美国专利号6,372,778，美国专利号6,369,086，美国专利号6,369,087，美国专利号6,372,733以及以上提及的进一步的参考，连同标准手册，例如最新版本的雷明顿制药科学(Remington's PharmaceuticalSciences)。
包含一种或多种在此所描述的化合物的配制品可以使用由认为安全且有效的材料组成的药学上可接受的载体进行制备，并且可以在不导致不希望的生物学副作用或不想要的相互作用的情况下给予至个体。该载体是除了一种或多种活性成分外的存在于药物配制品中的所有组分。如在此通常所用的“载体”包括但不限于稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、pH修饰剂、防腐剂、抗氧化剂、溶解度增强剂、和包衣组合物。
载体还包括包衣组合物的所有组分，其可以包括增塑剂、颜料、着色剂、稳定剂、和助流剂。延迟释放、延长释放、和/或脉冲式释放配制品可以根据在标准参考中描述的那样制备，如“药物剂型片剂(Pharmaceutical dosage form tablets)，”利伯曼(Liberman)等人编(纽约，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)，1989)，“雷明顿-药学的科学和实践(Pharmaceutical dosage form tablets)，”第20版，利平科特威廉斯威尔金斯出版公司(Lippincott Williams&Wilkins)，巴尔的摩(Baltimore)，MD，2000，以及“药物剂型和药物递送系统(Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems)，”第6版，安森(Ansel)等人，(梅迪(Media)，PA：威廉斯威尔金斯出版公司(Williams and Wilkins)，1995)。这些参考文献提供了关于用于制备片剂和胶囊以及片剂、胶囊、和颗粒的延迟释放剂型的载体、材料、设备和方法。
合适的包衣材料的示例包括但不限于纤维素聚合物如邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯；聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯，丙烯酸聚合物和共聚物，和在商品名(罗斯制药公司(Roth Pharma)，威特斯塔(Westerstadt)，德国)下可商购的甲基丙烯酸树脂，玉米醇溶蛋白，虫胶，以及多糖。
另外，包衣材料可以包含常规的载体，诸如增塑剂、颜料、着色剂、助流剂、稳定剂、成孔剂以及表面活性剂。
存在于含药片剂、珠粒、颗粒或粒子中的任选的药学上可接受的赋形剂包括但不限于，稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂以及表面活性剂。
稀释剂(也被称为“填充剂”)是典型必需的以增加固体剂型的体积，这样使得提供一种实际大小用于压缩片剂或形成珠粒和颗粒剂。适合的稀释剂包括但不限于，二水磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、微晶纤维素、高岭土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预胶化淀粉、二氧化硅、氧化钛、硅酸铝镁以及糖粉。
使用粘合剂为固体剂量配制品赋予粘合品质，并且因此保证片剂或珠粒或颗粒剂在形成该剂型后保持完整。适合的粘合剂材料包括但不限于，淀粉、预胶化淀粉、明胶、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖及山梨醇)、聚乙二醇、蜡、天然和合成树胶(诸如阿拉伯树胶、黄芪胶、海藻酸钠)、纤维素(包括羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素及维格姆(veegum))、以及合成聚合物(诸如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸及聚乙烯吡咯烷酮)。
使用润滑剂有助于片剂生产。适合的润滑剂的示例包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、滑石、以及矿物油。
崩解剂用于在给药后帮助剂型崩解或“瓦解”，并且通常包括但不限于淀粉、淀粉乙醇酸钠、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、预胶化淀粉、粘土、纤维素、藻蛋白碱、胶或交联聚合物如交联PVP(来自GAF化学公司的Polyplasdone XL)。
稳定剂用于抑制或减缓药物分解反应，此类反应例如包括氧化反应。
表面活性剂可以是阴离子、阳离子、两性或非离子表面活性剂。适合的阴离子表面活性剂包括但不限于包含羧酸根、磺酸根和硫酸根离子的那些。阴离子表面活性剂的示例包括钠、钾、铵的长链烷基磺酸盐和烷基芳基磺酸盐，如十二烷基苯磺酸钠；二烷基琥珀酸磺酸钠，如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠，如双-(2-乙基亚硫酰)-磺基琥珀酸钠；以及烷基硫酸盐如十二烷基硫酸钠。阳离子表面活性剂包括但不限于季铵化合物，诸如苯扎氯铵、苄索氯铵、西曲溴铵、硬脂酰二甲基苄基氯化铵、聚氧乙烯以及椰油胺。非离子表面活性剂的示例包括乙二醇单硬脂酸酯、丙二醇豆蔻酸酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、山梨醇酐酰化物、蔗糖酰化物、PEG-150月桂酸盐、PEG-400单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、PEG-1000十六烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁醚、401、硬脂酰单异丙醇酰胺、和聚氧乙烯氢化牛脂酰胺。两性表面活性剂的示例包括N-十二烷基-.β.-丙氨酸钠、N-月桂基-.β.-亚胺二丙酸钠、豆蔻酰基两性乙酸盐、月桂基甜菜碱和月桂基硫代甜菜碱。
如果期望的话，片剂、珠粒、颗粒、或粒子还可以包括少量的无毒辅助物质如润湿剂或乳化剂、染料、pH缓冲剂、或防腐剂。
在此描述的组合物可以是用于进行改变的或控制的释放的配制品。控制释放剂型的实例包括延长释放剂型、延迟释放剂型、脉冲释放剂型及其组合。
延长释放配制品通常制备为扩散或渗透系统，例如，如描述于“雷明顿-药学科学与实践”(“Remington-The science and practice of pharmacy”)(第20版，利平科特·威廉斯(Lippincott Williams)和威尔金斯(Wilkins)，巴尔的摩，马里兰州，2000))中。典型地，扩散系统由两类型的装置，贮存室和基质组成，并且在本领域中众所周知并且被描述。通常地，基质装置通过将药物和缓慢溶解性聚合物载体压缩成片剂形式而制备。用在基质装置制备中的三种主要材料类型是不溶性塑料、亲水性聚合物、和脂类化合物。塑料基质包括但不限于，丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、和聚乙烯。亲水聚合物包括但不限于，纤维素聚合物(诸如甲基和乙基纤维素)、羟烷基纤维素(诸如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、羧甲基纤维素钠、以及卡波姆934、聚环氧乙烷及其混合物。脂类化合物包括但不限于各种蜡(加诺巴蜡和三硬脂酸甘油酯)以及蜡型物质(包括氢化蓖麻油或氢化植物油)、或其混合物。
在某些优选的实施例中，塑料材料是药学上可接受的丙烯酸聚合物，包括但不限于丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙氧基乙基甲基丙烯酸酯、氰乙基甲基丙烯酸酯、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸)(酐)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚(甲基丙烯酸酐)、和甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物。
在某些优选实施例中，该丙烯酸聚合物由一种或多种铵基甲基丙烯酸酯共聚物组成。铵基甲基丙烯酸酯共聚物在本领域中是熟知的，并且在NF XVII中被描述为丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量的季铵基的完全聚合的共聚物。
在一个优选的实施例中，丙烯酸聚合物是丙烯酸树脂漆，例如从罗姆制药公司在商标名下可商购的那个。在另外的优选实施例中，丙烯酸聚合物包括两种从罗姆制药公司分别在商标名RL30D和RS30D下可商购的丙烯酸树脂漆的混合物。RL30D和RS30D是丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量的季铵基的共聚物，铵基相对于剩余的中性(甲基)丙酸烯的摩尔比例在RL30D中是1:20并且在 RS30D中是1:40。平均分子量是约150,000。S-100和L-100也是优选的。代码名称RL(高渗透性)和RS(低渗透性)指这些物质的渗透特性。RL/RS的混合物在水中和消化液中是不可溶的。然而，所形成的、包括所述混合物的多颗粒系统在水溶液和消化液中是可膨胀且可渗透的。
为了最终获得具有期望的溶解特性的缓释配制品，上述的聚合物如 RL/RS可以按任何期望的比例混合到一起。期望的缓释多颗粒系统可以从例如100％RL、50％RL和50％RS、以及10％ RL和90％90％RS中获得。本领域普通技术人员将意识到还可以使用其他丙烯酸聚合物，诸如例如L。
可替代地，延长释放配制品可以通过使用渗透系统或通过将半透包衣应用到剂型上而制备。在后者的情况中，期望的药物释放特性可以通过将低渗透和高渗透包衣材料以合适的比例组合而实现。
具有以上描述的不同药物释放机制的装置可以被组合在包括单或多单元的最终剂型中。多单元的实例包括但不限于包含片剂、珠粒或颗粒剂的多层片剂和胶囊。可以通过以下手段将即刻释放部分添加到延长释放型系统中：使用包衣或压缩方法将即刻释放层应用到延长释放型芯顶上，或在例如包含延长释放型和即刻释放型珠粒的胶囊的多单元系统中。
包含亲水聚合物的延长释放片剂通过本领域的公知技术(诸如直接压片、湿法制粒或干法制粒)来制备。其配制品通常掺入聚合物、稀释剂、粘合剂和润滑剂以及活性药物成分。通常的稀释剂包括惰性粉状物质，例如淀粉、粉状纤维素(尤其是结晶和微晶纤维素)、糖(如果糖、甘露醇和蔗糖)、麦面粉和类似的食用粉。典型的稀释剂包括例如不同类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸盐、无机盐(诸如氯化钠)以及糖粉。粉状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂包括以下物质，诸如淀粉、明胶和糖(诸如乳糖、果糖和葡萄糖)。还可以使用天然和合成树胶，包括阿拉伯树胶、海藻酸盐、甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。聚乙二醇、亲水聚合物、乙基纤维素以及蜡也可以作为粘合剂。润滑剂在片剂配制品中是必须的以防止片剂和冲床在模具中粘连。润滑剂选自这样光滑的固体如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。
包含蜡材料的延长释放片剂通常使用本领域已知的方法(诸如直接共混法、凝结法和水分散法)来制备。在凝结法中，将药物和蜡材料混合并且进行喷射凝结或凝结、筛选和处理。
延迟释放配制品是通过将固体剂型用一种聚合物膜包衣来产生的，该聚合物膜在胃的酸性环境中是不可溶的，并且在小肠的中性环境中是可溶的。延迟释放剂型单元可以例如通过用选择的包衣材料对药物或包含药物的组合物进行包衣而制备。包含药物的组合物可以是例如并入胶囊的片剂、在“包芯”剂型中用作内核的片剂、或用于并入片剂或胶囊的多个包含药物的珠粒、粒子或颗粒。优选的包衣材料包括可生物溶蚀的、逐渐水解的、逐渐溶于水的、和/或可酶促降解的聚合物，并且可以是常规的“肠溶”聚合物。如将被本领域的普通技术人员所理解的，肠溶聚合物在胃肠道下部的较高pH环境中变得可溶或当该剂型穿过胃肠道时缓慢溶蚀，然而可酶促降解的聚合物通过存在于胃肠道下部(特别是结肠)中的细菌酶降解。用于影响延迟释放的适合的包衣材料包括但不限于纤维素聚合物，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸纤维素偏苯三酸酯和羧甲基纤维素钠；优选地从丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯形成的丙烯酸聚合物和共聚物，以及其他在商标名 (罗姆制药公司，威特斯塔，德国)下可商购的甲基丙烯酸树脂，包括L30D-55和L100-55(在pH 5.5及以上可溶)、L-100(在pH 6.0及以上可溶)、S(在pH 7.0及以上可溶，因为更高程度的酯化作用)、以及NE、RL和RS(具有不同程度渗透性和可扩展性的水不溶物性聚合物)；乙烯基聚合物和共聚物如聚乙烯吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸乙烯丁烯酸共聚物和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；可酶促降解的聚合物，诸如偶氮聚合物、果胶、壳聚糖、直链淀粉及瓜尔胶；玉米醇溶蛋白以及虫胶。还可以使用不同包衣材料的组合。还可以应用使用不同聚合物的多层包衣。
对于特殊的包衣材料，优选的包衣重量可以轻易地由本领域的技术人员通过评价用不同量的各种包衣材料制备的片剂、珠粒和颗粒的各自的释放特性而确定。本申请的材料、方法和形式的组合产生了仅能从临床研究中确定的期望的释放特征。
包衣组合物可以包括常规的添加剂，如增塑剂、颜料、着色剂、稳定剂、助流剂等。增塑剂通常存在以降低包衣的脆性，并且通常相对聚合物的干重占约10wt.％至50wt.％。典型的增塑剂的实例包括聚乙二醇、丙二醇、三乙酸甘油酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三乙酯、蓖麻油以及乙酰化的单甘油酯。优选使用一种稳定剂以稳定分散体中的粒子。典型的稳定剂是非离子乳化剂如脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯和聚乙烯吡咯烷酮。推荐助流剂以在膜形成和干燥期间降低粘连影响，并且通常在包衣溶液中代表约25wt.％至100wt.％的聚合物重量。一种有效的助流剂是滑石。还可以使用其他助流剂，诸如硬脂酸镁和单硬脂酸甘油酯。也可以使用颜料如二氧化钛。还可以在包衣组合物中添加少量的消泡剂，如硅酮(如西甲硅油)。
可替代地，该胶囊内的每个剂量单位都可以包括多个含药珠粒、颗粒或粒子。如在本领域已知的，含药“珠粒”是指用药物和一种或多种赋形剂或聚合物制备的珠粒。含药珠粒可以通过将药物应用到惰性载体(例如涂有药物的惰性糖珠粒)中而生产，或通过制造包括药物和一个或多个赋形剂这两者的“芯”而生产。还正如所已知的，包含药物的“颗粒”和“粒子”包含可以包括或不包括一种或多种另外的赋形剂或聚合物的药物粒子。与含药珠粒相对比，颗粒和粒子不包含惰性支持体。颗粒通常包括药物粒子并且需要进一步加工。通常，粒子比颗粒小，并且不被进一步加工。尽管可以配制珠粒、颗粒和粒子来提供即刻释放，但是通常利用珠粒和颗粒来提供延迟释放。
实验
使用竞争荧光偏振测定在体外对BH4结构域拮抗剂(BDA)对Bcl2蛋白的结合亲和性分析。
荧光偏振测定的原则是基于以下观察，当相对小的快速滚转的荧光素标记肽用平面偏振光激发时，发射光相对偏振平面是随机的，导致更低的毫偏振(mP)值。一旦肽结合至更大的分子(在这种情况中是Bcl2)，复合物滚转更慢并且发射光发生偏振，导致更高的mP值。这样，mP的改变反应了在荧光素标记肽和Bcl2蛋白之间的相互作用。可以将数据(即mP值)输入Prism 3.0以针对每个肽测定解离常数(Kd)和结合范围。Bcl2的BH4结构域直接与c-Myc在其MBII结构域处相互作用。
发现衍生自c-Myc的Bcl2结合结构域的FITC标记肽QDCMWSGFSA(SEQ ID NO：1)以高亲和力(Kd：19.32±2.86nM)结合至Bcl2蛋白。在Bcl2和肽之间的相互作用形成了荧光偏振测定的基础。为了测量BDA对Bcl2蛋白的结合亲和性，使用竞争荧光偏振测定，如在王(Wang)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)(2000)，97，7124-7129；张(Zhang)等人，分析生物化学(Anal.Biochem.)，(2002)，307，70-75；以及布龙克(Bruncko)等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，(2007)，50，641-662中描述的或合适地修饰的，将全部文献通过引用特此结合。
将FITC-QDCMWSGFSA肽(3nM)在递增浓度(即0.1nM-1μM)的BDA存在或不存在的情况下，在标准缓冲条件下，在96孔测定板中与纯的人类Bcl2蛋白(6nM)孵育。将板在振动器上混合1分钟，并且在室温下再孵育15分钟。将定义为mP单位的极化在室温下用荧光酶标仪(华莱士公司(Wallace)，CA)测量。用阴性对照(DMSO，3nM肽和测定缓冲液)和阳性对照(DMSO，3nM肽，6nM Bcl2和测定缓冲液)确定测定范围。抑制百分比用(1-[(良好阴性对照的mP值)/范围)]×100％来确定。抑制常数(Ki)值使用Microsoft Excel计算。结果示出BDA以高亲和力结合至Bcl2蛋白(BDA1：Ki＝0.89±0.07nM；BDA2：Ki＝0.93±0.08nM；BDA3：Ki＝1.22±0.12nM；BDA4：Ki＝1.31±0.10nM)。
合成方法。
方案1.化合物A18的合成
化合物A1-8(图1)可以如在方案1中概述的合成。可商购的1,4-二氨基-9,10-蒽二酮(1)和表氯醇在冰醋酸中的反应将产生双-氯乙醇2(姜(Jiang)等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，(1992)，35，4259-4263，通过引用特此结合)。将2用哌嗪中间体在Et3N的存在下处理将产生氯乙醇醌3。在碱的存在下，3的闭环将以与化合物BDA2的合成类似的方式产生A1-4。起始材料1的一个氨基的根据已报道方法(邦格(Bonger)等人，ChemMedChem，2009，4，2098-2102，通过引用特此结合)的单-Boc-保护将产生中间体4。接下来将4用(溴甲基)环丙烷的烷基化会产生5，接下来是基于用TFA处理的Boc-脱保护。产生化合物A5-8的剩余步骤和产生A1-4的那些步骤是类似的。
1,4-双(((S)-环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-84)。
将(S)-表氯醇(194.0mg，20.98mmol)立刻全加到70℃的1,4-二氨基蒽醌(500mg，2.09mmol)于冰醋酸(10mL)中的溶液中。将反应混合物在75℃下搅拌2小时，并且将挥发物在真空中去除。将产生的混合物进一步用开管柱色谱法纯化(CH2Cl2，具有直到2％的甲醇梯度)以提供所希望的化合物CYD-2-79(480mg，54％)的蓝色固体。1H NMR(300MHz,DMSO)δ10.95(t,J＝5.6Hz,2H),8.25(dd,J＝5.8,3.3Hz,2H),7.80(dd,J＝5.8,3.5Hz,2H),7.52(s,2H),5.71(d,J＝4.2Hz,3H),3.78–3.57(m,10H)。13C NMR(75MHz,DMSO)δ181.29,181.29,146.54,146.54,134.30,134.30,132.85,132.85,126.20,126.20,125.12,125.12,109.12,109.12,69.79,69.79,47.77,47.77,45.91,45.91。
将KOH于EtOH中的溶液(6mL，0.5M)添加至CYD-2-79(226mg，0.52mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消失。将反应混合物用二氯甲烷(40mL)稀释，用水(20mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝80:1的洗脱提供了呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-84(130mg，69％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ10.79(s,2H),8.36(dd,J＝5.9,3.4Hz,2H),7.73(dd,J＝5.8,3.3Hz,2H),7.36(s,2H),3.80(m,2H),3.60(m,2H),3.28(m,2H),2.88(m,2H),2.75(m,2H)。13C NMR(75MHz,CDCl3)δ183.19,183.19,146.21,146.21,134.38,134.38,132.38,132.38,126.18,126.18,123.63,123.63,110.51,110.51,51.27,51.27,45.04,45.04,44.02，44.02。
方案2.化合物B1-4和C1-4的合成。
化合物B1-4和C1-4的合成在方案2中描绘。关键中间体8将从可商购的1-氨基-4-溴-蒽醌(7)通过用(溴甲基)环丙烷或表氯醇在Et3N存在下烷基化而制备。7和1-(2-氨乙基)吡咯烷(其根据报道的程序制备(波尔(Pors)等人，医药化学(Med.Chem.)，2005，48，6690-6695和波尔(Pors)等人，WO 2008/062252，两者都通过引用特此结合))在吡啶存在下的反应将提供所期望的化合物B1和B3。B1和B3用三苯基膦四氯化碳(常用的用于醇到相应卤化物转化的复合试剂)的氯化将提供目标分子B2和B4。8与N-Boc-保护的丁炔胺进行菌头偶联(赫什(Hirsh)等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，2006，49，4098-4115)，随后进行三键的还原和用TFA的Boc-脱保护，提供将关键中间体10。随后10与合适的酰基氯或磺酰氯在Et3N存在下的处理将产生目标分子C1-4。
方案3.化合物D1-8的合成。
如在方案3中概述的，中间体4与4-(3-溴丙基)-吗啉(11)在吡啶存在下的烷基化将提供中间体12。12的Boc-脱保护和产生化合物D1-8的剩余步骤与产生A5-8的那些步骤是类似的。
方案4.化合物E1-7和F1-4的合成。
化合物E1-7和F1-4可以如在方案4中概述的来合成。7用4-(3-溴丙基)-吗啉(11)的烷基化将提供关键中间体14。14的菌头偶联和随后产生关键中间体16的步骤与产生10的那些步骤是类似的。16用合适的酰基氯或磺酰氯处理将产生目标分子E1-6。16和4-氯代丁酰氯化物(17)在Et3N存在下的反应(瓦特(Ward)等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，2010，53，5801-5812，通过引用特此结合)将产生E7。中间体18将根据蒂加登(Teegarden)等人，医药化学杂志(J.Med.Chem.)，2010，53，1923-1936(通过引用特此结合)而制备。14和18在碘化铜(I)和碳酸钾存在下的偶联(布拉德利(Bradley)等人，WO 2007/107539通过引用特此结合)将提供目标分子F1-4。
1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)-蒽醌。
将3-吗啉代丙胺(590mg，4.09mmol)在氮气气氛下添加到1，4-二氟代蒽醌(500mg，2.04mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌2小时。然后将该反应通过TLC用乙酸乙酯监测，指示起始材料消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出红色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用乙酸乙酯的洗脱提供呈红色固体的所希望的化合物(600mg，80％)。1H-NMR(600MHz，CDCl3)δ9.93(s，1H)，8.20(d，2H，J＝7.8Hz)，7.71(m，2H)，7.27(m，1H)，7.08(m，1H)，3.75(t，4H，J＝4.2Hz)，3.37(m，2H)，2.49(m，6H)，1.90(m，2H)。
1-(2-羟基-乙氨基)-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-39)。
将乙醇胺(43.0mg，0.72mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(132.0mg，0.35mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在110℃下加热1小时，并且反应混合物的颜色由红色转变为蓝色。然后通过TLC监测该反应，指示起始材料完全消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝40:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物(105mg，72％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.81(s,1H),10.65(s,1H),8.22(m,2H),7.62(m,2H),7.05(d,1H,J＝9.6Hz),6.96(d,1H,J＝9.6Hz),3.94(m,2H),3.74(m,4H),3.52(d,2H,J＝4.8Hz),3.34(m,2H),2.49(m,6H),1.89(t,2H,J＝7.2Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.2,181.9,146.3,146.2,134.5,134.4,131.9,131.8,126.0(2C),123.3(2C),110.1,109.6,67.0,61.9,56.3,53.9,45.2,40.9,26.7。
1-(环丙基甲基-氨基)-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-48)。
将C-环丙基-甲胺(62.0mg，0.87mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在110℃下加热3小时，并且反应混合物由红色转变为蓝色。然后通过TLC监测该反应，指示起始材料消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除，给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用EtOAc/MeOH＝60:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-48(110mg，60％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.7(m,2H),8.29(m,2H),7.64(dd,2H,J＝3.0Hz和6.0Hz),7.16(d,1H,J＝9.6Hz),7.09(d,1H,J＝10.2Hz),3.69(t,4H,J＝4.2Hz),3.39(m,2H),3.20(m,2H),2.44(m,6H),1.86(m,2H),1.20(m,1H),0.61(m,2H),0.30(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.1(2C),146.0,145.9,134.4(2C),131.8(2C),125.9(2C),123.4(2C),109.7,109.6,66.9,56.1,53.7(3C),47.6,40.7,26.6,10.8,3.7(2C)。
1-(3-吗啉-4-基-丙氨基)-4-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-丙氨基]-蒽醌(CYD-2-45)。
将N-(3-氨丙基)-2-吡咯烷酮(128.2mg，0.90mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌5小时后，通过TLC分析反应混合物示出起始材料消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除，产生蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝60:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-45(130mg，61％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.75(m,2H),8.31(m,2H),7.67(m,2H),7.22(d,1H,J＝10.2Hz),7.15(d,1H,J＝10.2Hz),3.73(t,4H,J＝4.2Hz),3.42(m,8H),2.49(m,6H),2.38(t,2H,J＝8.4Hz),2.0(m,4H),1.91(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.3,182.1,175.2,146.1,145.7,134.4,134.3,131.9(2C),125.9,123.5,123.2,109.8,109.7,66.9,56.1,53.7(3C),47.3,40.7,40.6(2C),30.9,27.6,26.6,17.9。
1-(2,3-二羟基-丙氨基)-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-49)。
将(±)-3-氨基-1,2-丙二醇(79.7mg，0.87mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(160.0mg，0.43mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌3.5小时后，通过TLC分析反应混合物证实起始材料消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以产生蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脱，产生呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-49(120mg，62％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ10.79(m,1H),10.69(m,1H),8.18(m,2H),7.59(m,2H),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),7.07(d,1H,J＝9.6Hz),3.93(m,1H),3.68(m,5H),3.62(m,1H),3.46(m,1H),3.35(m,3H),2.46(m,6H),1.85(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ178.2,177.9,142.3,142.1,130.3,130.2,128.1,128.0,121.9,121.8,119.7,105.8,105.4,66.7,62.9(3C),60.2,52.1,49.5,41.1,36.6,22.3。
1-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙氨基]-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-50)。
将2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)乙胺(119.3mg，0.93mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(170.0mg，0.46mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌5小时后，TLC分析示出起始材料消失。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除，给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝12:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-50(106mg，48％)。1H-NMR(600MHz,CD3OD)δ8.05(m,2H),7.58(m,2H),6.80(q,2H,J＝10.2Hz和20.4Hz),3.67(t,4H,J＝4.2Hz),3.14(m,4H),3.04(m,1H),2.41(m,6H),2.31(s,3H),2.21(m,2H),2.02(m,2H),1.75(m,4H),1.53(m,2H).13C-NMR(150MHz,CD3OD)δ181.0,180.9,145.6,145.4,134.1(2C),131.3,125.4(2C),123.1,122.9,108.8,108.7,66.3,64.3,56.4,56.0,53.4(2C),40.2,39.8,39.3(2C),32.8,30.3,25.9,21.2。
(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-(3-吗啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-77-1)和1-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(CYD-2-77-2)。
将Et3N(135.0mg，1.33mmol)添加至(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐(195.0mg，1.33mmol)于甲醇(8mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌半小时，并且然后将溶剂去除以给出油状残余物。将碱化(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(464.4mg，1.27mmol)于DMSO(10mL)中的溶液中。在110℃下搅拌3.5小时后，TLC分析证实反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取3次。将合并的有机相用盐水(15mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-77-1(180mg，32％)和CYD-2-77-2(70mg，13％)。CYD-2-77-1:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.74(t,1H,J＝6.0Hz),10.48(t,1H,J＝4.8Hz),8.10(dd,2H,J＝7.2Hz和19.8Hz),7.56(m,2H),6.79(d,1H,J＝9.6Hz),6.66(d,1H,J＝9.6Hz),4.16(br s,1H),4.15(s,1H),3.73(m,6H),3.50(m,1H),3.37(m,1H),3.16(m,2H),2.46(t,6H,J＝7.2Hz),1.84(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ181.7,181.1,145.8,145.6,134.1,133.9,131.7,131.5,125.7(2C),122.9,122.8,109.7,109.0,70.3,66.8(2C),56.1,53.6(2C),46.8,45.9,40.6,26.4。CYD-2-77-2:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.32(s,1H),8.22(d,1H,J＝7.8Hz),8.12(d,1H,J＝6.6Hz),7.64(m,2H),6.97(s,1H),6.83(m,1H),4.66(s,1H),4.21(t,2H,J＝7.8Hz),3.74(s,7H),3.32(s,2H),2.48(d,6H,J＝5,4Hz),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.2,181.0,146.8,144.5,134.6,134.2,132.1(2C),125.9,125.8,125.4,120.1,115.1,110.9,66.8(2C),63.2,61.6,56.2,53.6(3C),40.8,26.4。
(S)-1-(3-吗啉代丙氨基)-4-(环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-80)。
将KOH于EtOH中的溶液(3mL，0.5M)添加至CYD-2-77-1(118.0mg，0.25mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析证实起始材料消失。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用制备型TLC纯化；用CH2Cl2/MeOH＝35:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-80(100mg，92％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.75(s,1H),10.69(s,1H),8.29(d,2H,J＝1.8Hz),7.67(d,2H,J＝3.0Hz),7.18(d,2H,J＝13.8Hz),3.73(s,5H),3.50(m,1H),3.39(s,2H),3.22(s,1H),2.84(s,1H),2.71(s,1H),2.47(t,6H,J＝6.6Hz),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.7,182.1,146.2,145.7,134.4,134.2,132.0,131.9,126.0,125.9,123.4,123.2,110.2,109.6,66.9(2C),56.1,53.7(2C),51.2,44.9,43.9,40.7,26.5。
1-(2-(2-羟基乙氨基)乙氨基)-4-(3-吗啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-3-2)。
将2-(2-氨基乙氨基)乙醇(96.8mg，0.93mmol)添加至1-氟-4-(3-吗啉-4-基-丙氨基)蒽醌(170.0mg，0.46mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌5小时后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的化合物CYD-3-2(106mg，51％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.82(s,1H),10.68(s,1H),8.23(m,2H),7.62(m,2H),6.99(s,2H),3.73(s,6H),3.45(d,2H,J＝5.4Hz),3.35(d,2H,J＝6.0Hz),3.01(br s,4H),2.90(s,2H),2.48(m,6H),1.88(t,2H,J＝6.6Hz).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.0,181.8,146.0,145.8,134.3,134.2,131.8,125.9,125.8,123.3,123.1,109.8,109.5,66.9(2C),61.0,56.1,53.7(2C),51.2,48.3,42.4,40.7,26.6。
1,4-双(2-羟基-3-吗啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-46-1)和1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-(2-羟基-3-吗啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-46)。
将表氯醇(194.0mg，20.98mmol)立刻全加到70℃的1,4-二氨基蒽醌(500mg，2.09mmol)于冰醋酸(10mL)中的溶液中。将反应混合物在75℃下搅拌2小时，并且将挥发物在真空中去除。将产生的混合物进一步用开管柱色谱法纯化(CH2Cl2，具有直到2％的甲醇梯度)以提供所希望的化合物1,4-双-(3-氯-2-羟基-丙氨基)蒽醌(480mg，54％)的蓝色固体。
将吗啉(143.2mg，1.64mmol)添加至1,4-双-(3-氯-2-羟基-丙氨基)蒽醌(174.0mg，0.43mmol)于乙醇(15mL)中的溶液中。在80℃下搅拌72小时后，TLC分析示出大部分起始材料消失。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-46(80mg，41％)和呈蓝色泡沫的CYD-2-46-1(40mg，40％)。CYD-2-46:1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.19(m,2H),7.65(m,2H),7.07(m,2H),4.12(m,1H),4.07(m,1H),3.76(m,4H),3.70(m,2H),3.59(m,1H),3.46(m,2H),3.35(m,1H),2.65(m,2H),2.55(m,4H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ181.7,181.5,146.0,145.8,134.0,133.9,131.7(2C),125.6,125.5,123.5,123.2,109.4,109.2,69.7,66.5(3C),66.2,62.1,53.6,46.3,46.2,45.1。
1-(2-羟基-3-吗啉代丙氨基)-4-(环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-82)。
将KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-46(52.0mg，0.11mmol)于1,4-二噁烷(1mL)和甲醇(3mL)的混合物中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消失。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-82(48mg，100％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.84(s,1H),10.74(s,1H),8.30(d,1H,J＝1.8Hz),7.67(d,1H,J＝3.0Hz),7.20(m,1H),4.05(d,1H,J＝4.2Hz),3.72(s,5H),3.50(d,2H,J＝4.2Hz),3.41(m,1H),3.24(s,1H),2.85(s,1H),2.72(s,1H),2.67(s,2H),2.51(m,4H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.8,182.5,146.3,145.9,134.3,134.2,132.1,132.0,126.0(2C),123.4(2C),110.3,109.9,66.9(3C),65.6,62.0,53.6,51.2,46.3,44.9,43.9。
(S)-叔丁基环氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯。
将二-叔丁基碳酸氢盐(1.94g，8.90mmol)和三乙胺(1.36g，13.69mmol)溶解到二氯甲烷(20mL)中，并且将产生的溶液在冰浴中冷却。将(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐的固体(1.0g，6.84mmol)分部分加入。移除冰浴并且将反应混合物在室温下搅拌24小时。TLC分析证实反应完成。将白色浆液再在冰浴中冷却，并且添加KOH于甲醇中的溶液。冰浴再次被移除并且搅拌持续另外的一小时。将溶剂甲醇去除，并且将残余物溶解在乙酸乙酯(30mL)中，用水(15mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝60:1洗脱，提供呈无色油状物的所希望的产物(850mg，71％)。
(S)-叔丁基3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟丙基氨基甲酸酯。
将1-乙酰基哌嗪(555mg，4.33mmol)和(S)-叔丁基环氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(250.0mg，1.44mmol)的混合物在THF(5mL)中溶解。在55℃下搅拌24小时后，TLC分析显示出反应完成。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余油状物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈无色油状物的所希望的产物(S)-叔丁基3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟丙基氨基甲酸酯(400mg，92％)。
(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮。将(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐(448.4mg，3.09mmol)和Et3N(621.4mg，6.14mmol)在氮气气氛下添加至1,4-二氟代蒽醌(500mg，2.04mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌3小时，并且然后在90℃下加热另外的5小时。通过在乙酸乙酯中TLC分析来监测该反应，指示反应完成。然后将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出红色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用EtOAc/己烷＝1:2洗脱，提供呈红色固体的所希望的化合物(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(300mg，44％)。
1-((S)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟基丙氨基)-4-((S)-3-氯-2-羟基丙氨基)蒽-9,10-二酮。
将TFA(1mL)在0℃下添加至(S)-叔丁基3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟丙基氨基甲酸酯(260mg，0.86mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌3小时。TLC分析示出反应混合物完成。将反应溶剂在真空下去除以产生油状残余物，将该残余物溶解于甲醇(3mL)中并且用过量的饱和NaHCO3水溶液碱化。溶剂的去除产生油状残余物，将该残余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。将固体通过过滤去除，并且将滤液浓缩以产生作为油状残余物的所希望的化合物(S)-1-(4-(3-氨基-2-羟丙基)哌嗪-1基)乙酮，将该所希望的化合物不经进一步的纯化而直接用于下一步中。
将制备好的(S)-1-(4-(3-氨基-2-羟丙基)哌嗪-1-基)乙酮添加至(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(191.7mg，0.57mmol)于无水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌5小时后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用EtOAc/MeOH/Et3N＝3:1:1洗脱提供了呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-71-1(50mg，18％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.24(dd,2H,J＝4.8Hz和9.0Hz),7.68(dd,2H,J＝3.6Hz和6.0Hz),7.16(s,2H),4.11(m,2H),3.66(m,5H),3.52(m,4H),3.40(m,1H),2.59(m,6H),2.10(s,3H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.0,181.9,169.6,146.1,145.9,134.1,134.0,131.9(2C),125.7(2C),123.6,123.4,109.6,109.4,69.8,66.5,61.4,53.3,52.9,46.3,46.0(2C),45.3,41.3,20.7。
1-((S)-3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟基丙氨基)-4-((S)-环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-90)。
将KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-77-1(40.0mg，0.077mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消耗完。将反应混合物用CH2Cl2(20mL)稀释，用水洗涤(10mL)并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-90(36mg，77％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.83(s,1H),10.73(s,1H),8.29(s,2H),7.67(s,2H),7.21(s,2H),4.05(s,1H),3.73(m,1H),3.63(d,2H,J＝19.2Hz),3.45(m,5H),3.23(s,1H),2.84(s,1H),2.72(s,1H),2.60(m,3H),2.47(m,3H),2.08(s,3H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.9,182.6,168.9,146.3,145.9,134.4,134.3,132.2,132.1,126.1(2C),123.4(2C),110.4,110.2,65.2,61.5,53.4,52.9,51.2,46.4,46.3,45.0,44.0,41.4,21.2。
(S)-叔丁基2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯。
将溶解于THF(5mL)中的哌啶(442.4mg，5.19mmol)和(S)-叔-丁基环氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(300.0mg，1.73mmol)的混合物在55℃下搅拌24小时。之后，TLC分析示出反应完成。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余油状物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈无色油状物的所希望的产物(S)-叔丁基2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯(400mg，89％)。
(S)-1-氟-4-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮。
将TFA(1mL)在0℃下添加至(S)-叔丁基2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙基氨基甲酸酯(400mg，1.55mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌3小时。TLC分析示出反应混合物完成。将反应溶剂在真空下去除以产生油状残余物，将该残余物溶解于甲醇(3mL)中并且用过量的饱和NaHCO3水溶液碱化。将溶剂再次去除以给出油状残余物，将该残余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。将固体通过过滤去除，并且将滤液浓缩以产生作为油状残余物的所希望的化合物(S)-1-氨基-3-(哌啶-1-基)丙烷-2-醇，将该所希望的化合物不经进一步的纯化而直接用于下一步。
将制备好的(S)-1-氨基-3-(哌啶-1-基)丙烷-2-醇添加至1,4-二氟代蒽醌(378.0mg，1.55mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。在60℃下搅拌3小时后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出红色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝3:1洗脱，提供呈红色泡沫的所希望的化合物(290mg，49％)。
1-((S)-3-氯-2-羟基丙氨基)-4-((S)-2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-87-1)和(S)-1-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)-4-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-87-2)。
将(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐(221.4mg，1.51mmol)和Et3N(153.4mg，1.51mmol)添加至(S)-1-氟-4-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(290.0mg，0.75mmol)于无水DMSO(8mL)中的溶液中。在110℃下搅拌5小时后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝10:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-87-1(80mg，23％)和呈蓝色泡沫的CYD-2-87-2(90mg，27％)。CYD-2-87-1:1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.99(s,1H),10.98(s,1H),8.24(s,2H),7.78(s,2H),7.51(m,2H),5.67(s,1H),4.99(br s,1H),3.95(s,1H),3.87(s,1H),3.66(m,3H),3.57(m,1H),3.46(m,1H),3.38(m,1H),2.38(m,5H),1.51(s,4H),1.37(s,2H).13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ185.9,185.6,151.6,151.2,139.1,139.0,137.6,137.3,131.1,130.6,130.2,129.7,113.8,113.5,74.6,72.0,67.8,60.0(2C),52.5,52.0,50.7,30.8(2C),29.1。CYD-2-87-2:1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.4(s,1H),8.24(d,1H,J＝6.6Hz),8.13(d,1H,J＝6.0Hz),7.63(m,2H),7.05(d,1H,J＝8.4Hz),6.84(d,1H,J＝9.0Hz),4.65(s,1H),4.20(s,2H),4.01(s,1H),3.75(d,2H,J＝7.8Hz),3.34(m,4H),2.61(s,2H),2.42(m,4H),1.58(s,4H),1.45(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.6,181.2,147.0,144.6,134.7,134.3,132.2(2C),126.0(2C),125.3,120.3,115.4,111.4,65.7,63.3,63.2,62.2,61.9,54.7,46.7,26.0(2C),24.2。
1-((S)-2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)-4-((S)-环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-88)。
将KOH于EtOH中的溶液(2mL，0.5M)添加至CYD-2-87-1(65.0mg，0.13mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消耗完。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-88(50mg，83％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.85(s,1H),10.7(s,1H),8.31(m,2H),7.67(m,2H),7.25(m,2H),4.00(br s,2H),3.73(d,1H,J＝12.6Hz),3.48(m,3H),3.23(s,1H),2.84(s,1H),2.71(s,1H),2.60(s,2H),2.44(s,2H),2.35(s,2H),1.44(s,4H),1.25(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.0,182.5,146.5,145.9,134.5,134.3,132.2,132.0,126.1,126.0,123.6,123.4,110.4,110.1,65.8,62.1,54.7,51.2,46.6,45.0,44.0,26.1(2C),24.2。
(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-(2-(二甲氨基)乙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-75)。
将N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(72.8mg，0.82mmol)添加至(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(138.0mg，0.41mmol)于无水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌3.5小时后，TLC分析示出起始材料消耗完。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-75(72mg，43％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3/CD3OD)δ10.8(m,1H),10.6(m,1H),8.21(m,2H),7.65(m,2H),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),7.03(d,1H,J＝9.6Hz),4.12(t,1H,J＝5.4Hz),3.70(d,2H,J＝4.8Hz),3.61(dd,1H,J＝4.8Hz),3.45(m,3H),2.67(m,2H),2.37(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3/CD3OD)δ182.1,181.9,145.8,145.6,134.1,134.0,131.9,131.8,125.7(2C),123.4,123.2,109.8,109.4,69.9,58.2,46.5,46.4,45.5,45.2,40.3。
(S)-1-(2-(二甲氨基)乙氨基)-4-(环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-81)。
将KOH于EtOH中的溶液(1.8mL，0.5M)添加至CYD-2-75(50.0mg，0.12mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消失。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空中去除，并且将产生的残余物用制备型TLC纯化；用CH2Cl2/MeOH＝15:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的产物CYD-2-81(20mg，44％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.77(s,1H),10.69(s,1H),8.33(m,2H),7.68(m,2H),7.30(m,1H),7.22(m,1H),3.75(m,1H),3.57(m,1H),3.49(m,2H),3.25(m,1H),2.85(t,1H,J＝4.2Hz),2.73(m,1H),2.66(t,2H,J＝6.6Hz),2.34(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.1,182.5,146.0,145.8,134.4,134.2,132.1,132.0,126.1,126.0,123.5,123.3,110.5,109.9,58.5,51.2,45.6(2C),44.9,43.9,41.0。
(S)-1-(环丙基甲氨基)-4-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-89)。
将环丙基甲胺(38.0mg，0.53mmol)添加至(S)-1-氟-4-(2-羟基-3-(哌啶-1-基)丙氨基)蒽-9,10-二酮CYD-2-86(98.0mg，0.25mmol)于无水DMSO(8mL)中的溶液中。在110℃下搅拌3小时后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的化合物CYD-2-89(100mg，90％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.88(s,1H),10.74(s,1H),8.30(s,2H),7.64(s,2H),7.22(d,1H,J＝9.6Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),4.04(d,1H,J＝3.0Hz),3.93(br s,1H),3.42(m,2H),3.20(s,2H),2.63(s,2H),2.49(s,2H),2.42(s,2H),1.60(s,4H),1.45(s,2H),1.19(d,1H,J＝4.8Hz),0.64(d,2H,J＝5.4Hz),0.33(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.3,182.1,146.1,146.0,134.5,134.4,131.9,131.8,126.0,125.9,123.6,123.3,110.0,109.6,65.8,62.2,54.7,47.6,46.7,25.8(2C),24.0,10.8,3.77(2C)。
(S)-1-(3-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-羟基丙氨基)-4-(3-吗啉代丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-85)。
将溶解于THF(5mL)中的CYD-2-80(50mg，0.12mmol)和1-乙酰基哌嗪(45.6mg，0.35mmol)的混合物在55℃下搅拌24小时。之后，TLC分析示出反应完成。将溶剂在真空中去除，并且将产生的油状残余物用制备型TLC纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-85(25mg，38％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.84(s,1H),10.68(s,1H),8.25(s,2H),7.61(s,2H),7.18(d,1H,J＝10.2Hz),7.13(d,1H,J＝9.6Hz),3.99(s,1H),3.61(m,6H),3.42(m,6H),2.54(m,3H),2.44(m,8H),2.02(s,3H),1.85(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.5,182.2,168.9,146.2,146.0,134.4,134.3,132.0,131.9,126.0,125.9,123.5,123.3,110.2,109.7,66.9(2C),66.2,61.5,56.1,53.7(2C),53.4,52.9,46.4,46.2,41.4,40.8,26.6,21.2。
(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-(环丙基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-91)。
将环丙基甲胺(64.0mg，0.89mmol)添加至(S)-1-(3-氯-2-羟基丙氨基)-4-氟代蒽-9,10-二酮(120.0mg，0.36mmol)于无水DNSO(6mL)中的溶液中。在110℃下搅拌3小时后，TLC分析示出起始材料消耗完。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝40:1洗脱，提供呈蓝色泡沫的所希望的化合物CYD-2-91(110mg，79％)。
(S)-1-(环丙基甲氨基)-4-(环氧乙烷-2-基甲氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-93)。
将KOH于EtOH中的溶液(4.28mL，0.5M)添加至CYD-2-91(110.0mg，0.28mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的溶液中。在常温下搅拌15分钟后，TLC分析示出起始材料消耗完。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，用水(10mL)洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝120:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-93(85mg，85％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.79(s,1H),10.74(s,1H),8.33(s,2H),7.69(d,2H,J＝1.8Hz),7.28(m,1H),7.20(d,1H,J＝9.0Hz),3.73(m,1H),3.58(m,1H),3.26(m,3H),2.84(s,1H),2.72(s,1H),1.23(m,1H),0.66(m,2H),0.34(s,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ183.1,182.5,146.2,145.8,134.6,134.3,132.2,132.0,126.1,126.0,123.6,123.4,110.5,109.7,51.3,47.7,45.0,44.0,10.8,3.79(2C)。
(S)-1-(环丙基甲氨基)-4-(3-(二乙氨基)-2-羟基丙氨基)蒽-9,10-二酮(CYD-2-94)。
将溶解于THF(5mL)中的CYD-2-93(64.0mg，0.18mmol)和二乙胺(67.0mg，0.91mmol)的混合物在55℃下搅拌24小时。之后，TLC分析示出反应完成。将溶剂在真空中去除，并且将产生的油状残余物用制备型TLC纯化；用CH2Cl2/MeOH＝30:1洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的产物CYD-2-94(46mg，59％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.95(s,1H),10.80(s,1H),8.35(m,2H),7.68(m,2H),7.32(d,1H,J＝9.6Hz),7.20(d,1H,J＝9.6Hz),3.95(m,1H),3.48(m,2H),3.27(m,2H),2.68(m,2H),2.58(m,4H),1.21(s,1H),1.05(t,6H,J＝7.2Hz),0.65(m,2H),0.34(m,2H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ182.6,182.4,146.2,146.1,134.5(2C),132.0,131.9,126.1,125,9,123.7,123.4,110.1,109.7,66.2,57.0,47.7,47.1(2C),46.7,11.9(2C),10.8,3.79(2C)。
(S)-叔丁基3-(N-烯丙基甲基磺酰氨基)-2-羟丙基氨基甲酸酯(CYD-3-4)。
将溶解于i-PrOH(6mL)中的烯丙胺(346.1mg，6.06mmol)和(S)-叔丁基环氧乙烷-2-基甲基氨基甲酸酯(350.0mg，2.02mmol)的混合物在60℃下搅拌4小时。之后，TLC分析示出反应完成。将溶剂在真空下去除，并且将产生的油状残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝10:1洗脱，提供呈无色油状物的所希望的产物CYD-3-3(320mg，68％)。
将甲磺酰氯(172.1mg，1.50mmol)和Et3N(191.0mg，1.87mmol)在冰水浴中添加至CYD-3-3(288mg，1.25mmol)于二氯甲烷(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌2小时。之后，TLC分析示出反应完成。将反应混合物用饱和NaHCO3水性溶液洗涤，随后用盐水洗涤并且用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除，并且将产生的残余物用硅胶柱纯化；用CH2Cl2/MeOH＝20:1洗脱，提供呈无色油状物的所希望的产物CYD-3-4(385.0mg，100％)。
N-烯丙基-N-((R)-3-(4-((S)-3-(N-烯丙基甲基磺酰氨基)-2-羟丙基氨基)-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-1-基氨基)-2-羟丙基)甲烷磺酰氨(CYD-3-6)。
将TFA(1mL)在0℃下添加至CYD-3-4(386.0mg，1.25mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液中。将产生的混合物在室温下搅拌3小时。TLC分析示出反应混合物完成。将反应溶剂在真空下去除以产生油状残余物，将该残余物溶解于甲醇(3mL)中并且用过量的饱和NaHCO3水溶液碱化。溶剂的去除产生油状残余物，将该残余物溶解于二氯甲烷(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。将固体通过过滤去除，并且将滤液浓缩以产生呈油状残余物的所希望的化合物CYD-3-5，将该所希望的化合物不经进一步的纯化而直接用于下一步中。
将CYD-3-5(260mg，1.25mmol)和Et3N(127.3mg，1.25mmol)在氮气气氛下添加至1,4-二氟代蒽醌(157.7mg，0.64mmol)于无水DMSO(6mL)中的溶液中。将产生的混合物在110℃下搅拌10小时。之后，TLC分析示出起始材料完成，并且将反应混合物用水(10mL)淬灭并且用乙酸乙酯(20mL)萃取三次。将合并的有机相用盐水洗涤并用无水Na2SO4干燥。将溶剂在真空下去除以给出蓝色残余物，将该残余物用硅胶柱纯化；用乙酸乙酯洗脱，提供呈蓝色固体的所希望的化合物CYD-3-6(200mg，50％)。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ10.59(s,2H),7.93(d,2H,J＝2.4Hz),7.55(d,2H,J＝2.4Hz),6.35(s,2H),5.94(m,2H),5.39(d,2H,J＝17.4Hz),5.33(d,2H,J＝9.6Hz),4.49(br s,2H),4.09(m,6H),3.40(m,4H),3.26(d,2H,J＝10.8Hz),3.12(d,2H,J＝6.0Hz),3.02(s,6H).13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ176.0(2C),141.2(2C),129.0(2C),127.6(2C),127.0(2C),120.9(2C),118.0(2C),115.2(2C),104.1(2C),64.2(2C),46.7(2C),45.9(2C),41.6(2C),34.3(2C)。
靶向Bcl2的BH4结构域的小分子的筛选
使用包含大约300,000个来自国家癌症研究所(NCI)的小分子的文库对接BH4结构域的结构口袋。将小分子根据它们的能量分数排序。选择前200个小分子以用于通过磺酰罗丹明B(SRB)测定筛选在人类肺癌细胞中的细胞毒性。在这些小分子中，一种化合物对人类肺癌细胞具有最有力的活性。这个先导化合物是小分子Bcl2 BH4结构域拮抗剂(BDA-2或BDA-A2)。
BDA-2对细胞生长和凋亡的影响是在表达各种水平的内源Bcl2的小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中分别用SRB测定和膜联蛋白V/PI结合来测量。结果指示表达相对较高水平的Bcl2的NSCLC细胞系(即H157、Calu-1、H358、H460以及H1975)和SCLC细胞系(即DMS53、DMS153、H146和H69)对BAD-2更敏感。相比之下，表达相对较低或不可检测水平的内源Bcl2的肺癌细胞系(即NSCLC细胞系：A549和H1299；SCLC细胞系：DMS114和H128)对BAD-2不太敏感。显现出Mcl-1或Bcl-XL的表达水平并没有显著影响细胞对BDA-2的敏感性。BDA-2的凋亡响应可以依赖于Bcl2在肺癌细胞系中的表达水平。重要地，BDA-2示出对正常小气道上皮细胞系(SAEC)更少的敏感性，指示和正常细胞相比针对癌细胞的相对选择性。
BDA-2选择性地在BH4结构域处与Bcl2结合并且诱导细胞杀伤
纯化的重组WT和一组Bcl2 BH结构域缺失突变体蛋白(即ΔBH1、ΔBH2、ΔBH3和ΔBH4)可商购于蛋白质X实验室(ProteinX Lab)。为了直接测量BDA-2/Bcl2结合，利用荧光Bak肽(5'-FAMGQVGRQLAIIGDDINR)进行荧光偏振测定。BDA-2以高结合亲和力(Ki＝3.3±0.73nM)直接结合至Bcl2。从Bcl2蛋白中BH1、BH2和BH3的缺失并没有显著影响其BDA-2结合。然而，BH4结构域缺乏的Bcl2突变体蛋白(ΔBH4)不能结合BDA-2。这些发现指示BDA-2通过BH4结构域选择性地结合至Bcl2。重要地，BDA-2不结合至其他Bcl2家族成员(包括Bcl-XL、Mcl-1或Bfl-1/A1)，指示其结合Bcl2的特异性。
通过电脑程序的结构建模分析揭示BDA-2与在BH4结构域中的8个氨基酸(即ASP10、ASN11、ARG12、GLU13、MET16、LYS17、HIS20和ASP31)相关联。在BH4结构域内在通过初始对接模拟鉴定的特定残基处产生一组Bcl2突变体，包括D10A、N11A、R12A、E13A、M16A、K17A、H20A和D31A Bcl2突变体。创造化合物Bcl2突变体D10A/N11A/R12A/E13A(AAAA)。产生这些突变体的重组蛋白，以用于使用竞争荧光偏振法进行BDA-2/Bcl2结合分析。研究指示在每个单独的残基处的单一突变并没有显著降低Bcl2结合BDA-2的能力，但是AAAA Bcl2突变体蛋白明显降低了BDA-2结合。其次，将WT和所有Bcl22突变体在表达不可检测水平的内源Bcl2的H1299细胞中外源地过表达。结果指示在H1299细胞中外源WT或每个Bcl2突变体的过表达有力地抑制顺铂诱导的凋亡细胞死亡，指示这些Bcl2突变体保留标准的抗凋亡功能。然而，在细胞暴露于BDA-2时，在H1299细胞中外源WT和每个Bcl2单位点突变体的过表达不能延长细胞存活，并且展现出增强的对BDA-2的敏感性，指示BDA-2不仅克服了Bcl2的抗凋亡功能而且还可以将这些Bcl2蛋白转化为死亡分子。相比之下，在细胞暴露于BDA-2时，化合物Bcl2 AAAA突变体的过表达显著延长细胞存活，表明在BDA-2结合残基处的化合物突变(AAAA)导致了耐受BDA-2的表型。这表明BDA-2与在BH4结构域中的这四个氨基酸(D10、N11、R12和E13)的结合对于Bcl2的BDA-2调节和凋亡的诱导是重要的。
为了在细胞水平确定Bcl-2是否是相关靶标以及细胞杀伤是否真的依赖于这种特定机制，在五种肺癌细胞系中使用靶向Bcl2基因中的不同区域的三种不同Bcl2 shRNA来特异性地敲低Bcl2，这五种肺癌细胞系包括两种NSCLC细胞系(H460和H157)和三种SCLC细胞系(DMS53、DMS153和H146)。Bcl2 shRNA1、shRNA2或shRNA3在NSCLC和SCLC两种细胞系中均有效地耗尽了内源Bcl2。shRNA对Bcl2表达的影响是高度特异性的，因为对照shRNA没有影响。将表达Bcl2 shRNA1、shRNA2、shRNA3或对照shRNA的细胞用BDA-2(1μM)处理72小时。
凋亡的细胞死亡水平是通过FACS分析膜联蛋白-V/PI结合而确定。重要地，通过使用Bcl2 shRNA1、shRNA2或shRNA3从这些肺癌细胞系中耗尽内源Bcl2，导致了细胞对BDA-2显著降低的敏感性。
检查外源Bcl2的表达是否可以恢复Bcl2沉默的肺癌细胞对BDA-2的敏感性以及BDA-2/BH4结合对于这种影响是否是重要的。将在pCIneo中的WT和BDA-2结合缺陷型D10A/N11A/R12A/E13A(AAAA)Bcl2突变体cDNA或仅有载体的对照转染进表达Bcl2 shRNA的H460或DMS53细胞中。已经报道如果shRNA针对基因的3′UTR或5’UTR，shRNA1的影响可以通过使用野生型或突变体cDNA来异位表达蛋白而挽救。因为Bcl2 shRNA1靶向内源Bcl2的5’UTR，shRAN1对Bcl2表达的沉默影响可以通过外源WT或AAAA Bcl2突变体的转染而挽救。在转染后，将细胞用BDA-2或BH3模拟物ABT-199在指示的浓度下处理72小时。结果揭示外源WTBcl2的表达恢复了细胞对BDA-2和ABT-199两者的敏感性，指示BDA-2和ABT-199均是选择性Bcl2抑制剂。然而，AAAA的表达仅恢复了细胞对ABT-199的敏感性而没有恢复对BDA-2的敏感性，指示在BH4结构域中的复合突变导致了对BDA-2的选择性耐药性，然而维持了对BH3模拟物(ABT-199)的敏感性。这些数据表明BDA-2而不是ABT-199充当独特的BH4结构域抑制剂。BDA-2对肺癌细胞的凋亡影响需要它的BH4结合。
为了测试BDA-2是否作为交联剂和DNA反应，进行电泳迁移率变动测定(EMSA)。顺铂作为已知的DNA结合剂，被用作阳性对照。将质粒pUC19 DNA与BDA-2或顺铂孵育。有趣地，顺铂而不是BDA-2可以结合至pUC19 DNA以引起迁移率变动。这有助于排除BDA-2作为DNA结合剂的可能性。
BDA-2诱导Bcl2构象改变并且消除Bcl2存活功能
报道指示在核孤儿受体Nur77/TR3和Bcl2之间的相互作用或p53与Bcl2的结合引起了诱导Bcl2自身的BH3结构域“暴露”的Bcl2中的构象改变，这导致Bcl2的抗凋亡活性的损失。此外，通过半胱天冬酶3将BH4结构域从Bcl2中移除导致了Bcl-2从存活蛋白向Bax样死亡分子的转化。因为BDA-2是BH4结构域结合分子，它对BH4的结合可以导致在Bcl2中相似的构象改变以转变它的功能。
为了测试BDA-2是否直接诱导Bcl2的构象改变，使用体外无细胞测定。将纯化的重组Bcl2蛋白与递增浓度的BDA-2在裂解缓冲液中孵育，随后使用抗-Bcl2/BH3结构域抗体进行免疫沉淀(IP)。结果指示BDA-366的添加增强了Bcl2/BH3结构域-特异性抗体结合Bcl2的能力，并且是以剂量依赖性方式发生。这些发现显现，为BDA-366和BH4结构域的结合能够转变Bcl2的构象以导致Bcl2自身的BH3结构域的更大的暴露这一观点提供了证据。因为只有BDA-366而不是化学治疗剂(即VP-16或顺铂)可以直接在无细胞系统中诱导Bcl2构象改变，这示出BDA-366诱导这种构象改变的特异性。
BDA-366诱导的Bcl2构象改变还可以通过使用Bcl2/BH3-结构域特异性抗体的免疫荧光法而证实。Bcl2免疫荧光在无处理的H460细胞中是低的或不可检测的，而在用BDA-2处理的细胞中显著增强。然而，用BDA-366处理H460细胞并未显著影响Bcl2表达水平。这些发现表明由BDA-366负调节Bcl2活性是通过构象改变而不是通过Bcl2的表达改变而发生的。因为用BDA-366处理H460细胞导致了线粒体功能障碍(即降低的MitoSOXTM红色染色以及细胞色素C(Cyt c)释放)和凋亡(即PARP裂解)，BDA-366与BH4结构域的结合可以引起Bcl2 BH3结构域的暴露，这进而使Bcl2最终能够激活Bax，导致凋亡。为了测试这种可能性，使用仅识别Bax的构象改变的活性形式的6A7 Bax抗体。将纯化的Bcl2用BDA-366在裂解缓冲液中处理1小时。然后将Bcl2/BDA-2的混合物与纯化的重组Bax孵育另外2小时，随后使用6A7抗体进行IP。结果指示BDA-366处理的Bcl2而不是单独Bcl2增强了Bax结合6A7抗体的能力，指示BDA-366处理的Bcl2可以诱导Bax构象改变从而导致Bax激活。BAM7是Bax激活剂，其可以直接通过结合至Bax触发位点激活Bax。重要地，BAM7而不是BDA-366可以直接激活Bax。这些发现指示BDA-2不是直接的Bax激活剂，但可以诱导Bcl2依赖性Bax激活。
为了测试BDA-366诱导的Bcl2构象改变是否增加Bcl2和Bax在细胞中的相互作用，在用BDA-366处理H460细胞后进行共-IP实验。结果揭示BDA-2加强了和降低的Bcl2/Bim结合相关联的Bcl2/Bax相互作用，表明由BDA-366诱导的BH3暴露的Bcl2可以具有和Bim相比更大的和Bax相互作用的能力，通过在癌细胞中的6A7构象改变导致了Bax的细胞杀伤功能的激活。
为了进一步测试Bcl2的BH3结构域对于Bax的BDA-366激活是否是重要的，将纯化的重组WT和BH3缺失(ΔBH3)突变体Bcl2蛋白与纯化的Bax蛋白在BDA-366不存在或存在的情况下孵育，随后用6A7抗体进行IP。结果指示，在BDA-366的存在下，WT而不是ΔBH3突变体Bcl2可以在无细胞系统中通过6A7构象改变而激活Bax。为了在细胞水平或线粒体水平对此进行测试，将WT、ΔBH3 Bcl2突变体和空载体(pCIneo)转染进表达不可检测水平的内源Bcl2但表达高水平的内源Bax的H1299细胞中。将细胞或从这些细胞中分离的线粒体用BDA-2处理，随后分别用Bcl2 BH3或6A7抗体进行IP。
结果指示在包含Wt Bcl2的细胞或分离的线粒体中而不是在表达ΔBH3Bcl2突变体或仅载体对照的细胞或分离的线粒体中，BDA-366诱导与Bax激活相关联的Bcl2构象改变。这些结果表明由BAD-366诱导的Bcl2 BH3结构域的暴露对于Bax的在细胞或分离的线粒体中的BDA-2激活是需要的。为了进一步测试BDA-366是否诱导Cyt c从线粒体中以Bcl2依赖性方式释放，将线粒体从表达WT、ΔBH3突变体Bcl2或仅载体对照的H1299细胞中分离。将分离的线粒体用BDA-366(1μM)在30℃下处理30分钟。在离心后，将在上清液中的Cyt c(即Cyt c释放)通过Western印迹来分析。
结果揭示BDA-366诱导Cyt c从由Wt Bcl2中而不是由ΔBH3和仅载体对照细胞中分离的线粒体中的释放。这指示BDA-366诱导的Cyt c释放是以Bcl2依赖性方式发生，这也需要Bcl2中的BH3结构域。
BDA-2以Bax依赖性方式诱导凋亡的细胞死亡
BDA-366诱导的构象改变的Bcl2(即具有暴露的BH3结构域)可以激活Bax。为了进一步判定Bax对于凋亡的BDA-2诱导是否是重要的，在野生型(WT)和Bax敲除的(Bax-/-)MEF细胞中测试BDA-366的凋亡影响。Bax缺乏的MEF细胞和WT MEF细胞相比而言对BDA-366具有显著耐药性，指示由构象改变的Bcl2引起的Bax的激活对于由BDA-366进行的凋亡的最终诱导是重要的。BDA-366通过抑制Bcl2/IP3R相互作用而诱导钙离子(Ca2+)释放。已经报道Bcl2通过和肌醇1,4,5-三磷酸(IP3)受体经由BH4结构域的直接相互作用抑制了Ca2+驱动的凋亡。通过合成的BH4结合肽破坏BH4/IP3R关联，导致增加的Ca2+释放和凋亡。为了测试BDA-2/BH4结合是否影响IP3R/Bcl2相互作用和Ca2+释放，将H460细胞用递增浓度的BDA-366处理24小时。结果揭示BDA-366降低了和增加的Ca2+释放相关联的Bcl2/IP3R结合。这些发现可以揭示另外的机制，通过该机制BDA-366以BH4结合依赖性方式诱导凋亡。
BDA-2诱导人类肺癌细胞的自噬性细胞死亡
Bcl2直接和苄氯素-1相互作用并且抑制苄氯素-1依赖的自噬。由ABT-737进行的Bcl2的抑制不仅诱导凋亡也诱导自噬。重要地，报道指示从Bcl2蛋白中去除BH4结构域促进了损害肿瘤生长的自噬过程。为了测试由BDA-2造成的Bcl2 BH4的破坏是否刺激自噬，将H460细胞用BDA-366(1μM)处理24小时。在用BDA-366处理后，观察到增加的LC3-II水平。为了进一步定量自噬的水平，使用GFP-LC3构建体以指示自噬体。在用BDA-2处理后，GFP-LC3从在细胞质和细胞核中的弥漫型染色模式再分布为细胞质点状结构，该点状结构特异性地标记前-自噬体和自噬体膜(即GFP-LC3 vac细胞)。和用DMSO对照相比，用BDA-366处理细胞显著增加了GFP-LC3vac细胞的百分比。这些发现揭示了除了凋亡，BDA-366还可以通过在人类肺癌细胞中抑制Bcl2活性刺激自噬性细胞死亡。
在动物模型中BDA-366通过凋亡诱导来抑制肺癌生长
为了定义用于体内实验的合适剂量，对最大耐受剂量(MTD)进行确定。将Nu/Nu裸鼠以每剂量水平6组用递增剂量的BDA-366(10-50mg/kg/d)腹腔注射地(i.p.)处理，持续长达12天。在6只小鼠中，40mg/kg/d和50mg/kg/d的剂量在8天或12天内分别是统一致死的。对于长达12天的每天给药，在10mg/kg/d和30mg/kg/d之间的剂量是可耐受的，没有记录到死亡。在正常C57BL/6小鼠中，对标准单剂量MTD处理进行测量。用300mg/kg i.p.的单剂量处理小鼠没有引起体重减轻或其他毒性，包括血液的、肝和肾功能。然而，400mg/kg的单剂量在4天内导致了小鼠的死亡。ALT和AST均显著增强。所有器官的病理学分析指示在肝脏中的微脂肪变性和在脾中的白髓萎缩。基于这些发现，在400mg/kg单剂量下小鼠也许主要死于肝脏损害。因此，BDA-366的单剂量MTD的范围应在300mg/kg-400mg/kg之间。对于连续处理来说，10％的单剂量MTD通常可以被认为是最大处理剂量(30mg/kg-40mg/kg)。在某些实施例中，本披露考虑在10mg/kg/d和30mg/kg/d之间的给药是相对安全的。
为了测试BDA-366在体内的效力，将衍生自H460细胞的肺癌异种移植物用递增剂量的BDA-366(0mg/kg/d、10mg/kg/d、20mg/kg/d、30mg/kg/d)通过i.p.处理14天。结果示出用BDA-366处理小鼠导致了体内肺癌的剂量依赖性抑制(图4)。为了评价BDA-366是否在体内通过凋亡诱导了肿瘤生长的抑制，对来自收获的肿瘤组织的代表性样品通过免疫组化法(IHC)针对活性半胱天冬酶3进行分析或通过TUNEL法进行分析。在用BDA-366处理后，观察到剂量依赖性凋亡诱导。重要地，10mg/kg/d-30mg/kg/d的剂量不仅有力地抑制肿瘤生长而且还被很好地耐受，对小鼠没有显著的毒性。在用30mg/kg的剂量处理的小鼠中观察到了体重减轻，但是在中性粒细胞、淋巴细胞、红血细胞(RBC)和血小板(PLT)方面没有减少。肾(BUN)和肝(ALT和AST)功能测试在正常范围内。在用10mg/kg/d-30mg/kg/d剂量处理后，收获的正常组织(心脏、肝脏、肺、脑、脾、肾脏、肠等)的组织病理学没有揭示正常组织毒性的证据。
除NSCLC细胞系外，BDA-366也能有效地抑制SCLC细胞系的生长。为了评价BDA-2在体内针对SCLC的抗肿瘤活性，建立衍生自患者的异种移植物(PDX)(没有介入体外培养物)，以期望更好地概括SCLC肿瘤背景。将BDA-366(20mg/kg/d)的效力通过对从具有难治性SCLC的患者获得的PDX中给药两周而测定。BDA-366有力地抑制SCLC PDX的生长，这通过在肿瘤组织中的凋亡而发生(图5)。这些发现指示，在SCLC存在当前受限的治疗选择的情况下，BDA-2在患有SCLC的人类患者中可以是有效的。
BDA-366在肿瘤组织中诱导Bcl2构象改变
最近已经开发了基于量子点的免疫组织荧光(QD-IHF)技术作为有价值的工具，以用于在甲醛固定的石蜡包埋(FFPE)组织中对多种生物标记的同时且并行的免疫染色，由此允许对在相同组织切片上的若干生物标记进行同时定量。为了判定BDA-366是否通过在肿瘤组织中暴露Bcl2 BH3结构域而诱导Bcl2构象改变以及BH3结构域暴露的Bcl2是否激活Bax，将在Bcl2和Bax两者中的构象改变通过QD-IHF在相同的组织切片上同时进行分析。在和发生在凋亡细胞中的膜插入相关联的构象改变后，抗体6A7可以选择性地识别Bax。QD图像示出用BDA-366处理H460异种移植小鼠持续14天，导致在肿瘤组织中的Bcl2 BH3结构域的剂量依赖性暴露。有趣地，BDA-366诱导的Bcl2构象改变与增加的6A7和Bax结合的水平(即Bax活性形式的水平的增加)相关联，表明BH3暴露的Bcl2可以激活Bax导致在肿瘤组织中的凋亡。在BDA-366处理后，在肿瘤组织中在总的Bcl2和Bax水平中没有显著改变。
mTOR抑制上调了在来自患NSCLC患者的肺癌细胞系和肿瘤组织中的Bcl2
雷帕霉素和其衍生物RAD001(即依维莫司)是mTOP的有力变构抑制剂。RAD001是很好耐受的但是在肺癌患者中示出有限的抗肿瘤活性。之前的报告指示Bcl2的表达与癌细胞对mTOR抑制剂的耐药性相关联。为了进一步测试mTOR抑制是否调节Bcl2表达，将A549和H460细胞用递增浓度的RAD001处理24小时。由RAD001造成的mTOR抑制导致了Bcl2以剂量依赖性方式在A549和H460肺癌细胞两者中的上调(图7)。
为了测试RAD001对Bcl2表达的类似影响是否发生在患者中，将Bcl2表达通过IHC在基线和从10名用RAD001(5或10mg/天)处理28天的NSCLC患者中获得的处理后组织样品中进行分析，作为在患有可切除NSCLC的患者中依维莫司的新辅助疗法临床研究的一部分。与基线样品相比，在处理后肿瘤组织中具有增加的Bcl2表达。这些发现表明由mTOR抑制引起的Bcl2的上调可以负面影响肺癌对mTOR抑制剂的敏感性。因此，Bcl2的抑制可以增强mTOR抑制剂针对肺癌的效力。
在体外和体内的肺癌抑制中BDA-366与mTOR抑制剂协同作用
为了测试组合的Bcl2和mTOR抑制是否示出针对肺癌细胞的协同活性，将H460细胞用BDA-366(100nM)、RAD001(1nM)或其组合进行处理。SRB测定示出单独的RAD001或BDA-366部分地抑制肺癌细胞生长。有趣地，RAD001和BDA-366的组合显著导致了更多的生长抑制(图8)，指示组合的Bcl2和mTOR抑制比任何一个单独药剂在抑制肺癌细胞生长中具有更大的活性。为了更精确地分析RAD001和BDA-366之间的协同程度，计算复合指数(CI)值。CI值小于0.3(即0.278)，指示RAD001和BDA-366展现出强的协同的肺癌细胞生长抑制。
为了测试共靶向Bcl2和mTOR是否也在体内协同地抑制肺癌，将具有NSCLC(即H460)异种移植物的小鼠用RAD001(1mg/kg/d)、BDA-366(15mg/kg/d)或其组合处理14天。有趣地，BDA-366和RAD001的组合展现出比单独BDA-366或RAD001在体内抑制肺肿瘤生长中显著更大的效力(图9)，导致持续的肿瘤抑制。
序列表
<110> 爱默蕾大学（EMORY UNIVERSITY）
德克萨斯大学系统董事会（ THE BOARD OF REGENTS OF
THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM）
邓兴明（Deng, Xingming）
周嘉（Zhou, jia）
丁春勇（Ding, Chunyong）
<120> BH4拮抗剂及其相关方法
<130> 11078 PCT
<150> US 61/988,332
<151> 2014-05-05
<160> 1
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Phe Ser Ala
1 5 10

Claims (6)

1.mTOR抑制剂和1-((3-(二乙氨基)-2-羟丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮或其盐的组合在制备用于治疗或预防肺癌的药物组合物中的用途，当使用该药物组合物时，该药物组合物被给予至被诊断患有肺癌、展现肺癌症状、或处于肺癌风险的受试者。
2.如权利要求1所述的用途，其中该mTOR抑制剂是西罗莫司、依维莫司、地磷莫司、或替西罗莫司。
3.如权利要求1所述的用途，其中该mTOR抑制剂具有下列化学式：
或其盐，其中，
虚线各自单独地代表单键或双键；
Y是桥联基团＝CH-CH＝CH-CH＝CH-；
X是-(CHR8)n-；
n是1或2；
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14各自在每次存在时单独和独立地是相同或不同的，是氢、烷基、烯基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中每个R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R20是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R20任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
4.mTOR抑制剂和1-((3-(二乙氨基)-2-羟丙基)氨基)-4-((环氧乙烷-2-基甲基)氨基)蒽-9,10-二酮或其盐的组合在制备用于治疗肺癌的药盒中的用途，所述药盒包含有效量的该mTOR抑制剂，当使用该药盒时，该药盒被给予至被诊断患有肺癌的受试者。
5.如权利要求4所述的用途，其中该mTOR抑制剂是西罗莫司、依维莫司、地磷莫司、或替西罗莫司。
6.如权利要求4所述的用途，其中该mTOR抑制剂具有下列化学式：
或其盐，其中，
虚线各自单独地代表单键或双键；
Y是桥联基团＝CH-CH＝CH-CH＝CH-；
X是-(CHR8)n-；
n是1或2；
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14各自在每次存在时单独和独立地是相同或不同的，是氢、烷基、烯基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中每个R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、和R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R20是烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、烷酰基、氨甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氧膦基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R20任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲氨基、乙氨基、二甲氨基、二乙氨基、N-甲基-N-乙氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨甲酰基、N-乙基氨甲酰基、N,N-二甲基氨甲酰基、N,N-二乙基氨甲酰基、N-甲基-N-乙基氨甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
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