CN106543272A - 多功能标签融合蛋白及其表达方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多标签融合蛋白及其编码基因，以及其表达、纯化方法。所述多标签融合蛋白从N端到C端包括：His，Trx，3×FLAG，GST，strep(II)，HA，GFP，cMyc，His中的两种以上的蛋白标签。本发明选用的多功能标签的编码基因序列兼顾了各标签的功能、大小和插入的位点对目的蛋白的影响，多标签融合蛋白的排列顺序及插入位点的选择有利于多功能标签蛋白的高效表达；多标签串联的方式，有利于采用两种以上的纯化标签中进行两步或多步法纯化，以产生高纯蛋白。由此可见，本发明的融合蛋白不仅表达量较高，纯度高，并且融合蛋白中所串联的各个蛋白标签都具有生物学活性，可作为含有多标签融合蛋白中一种或多种其他融合蛋白定性或定量检测时的阳性对照，测试检测系统的适用性。

Description

多功能标签融合蛋白及其表达方法和应用

技术领域

本发明属于生物工程基因领域，涉及一种多标签融合蛋白及其编码基因，以及其表达、纯化方法。

背景技术

蛋白标签(proteintag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。目前，这些蛋白标签已在基础研究和商业化产品生产等方面得到了广泛的应用。

目的蛋白与蛋白标签以融合形式表达，因此根据蛋白标签开发出来的特异性抗体可以用来进行目的蛋白的示踪、检测。在研究中通过蛋白标签特异性抗体检测融合有相应蛋白标签的目的蛋白一般采用western-blot、ELISA、点杂交、免疫荧光等方法，而在上述检测方法中加入标准的蛋白标签抗原作为阳性对照确定了检测系统的适用性及可用性，提高了检测结果的可信度。目前，市场上已有多种针对不同蛋白标签的抗体可供选择，而相应的标准蛋白标签产品则很少，并且如果研究范围包括多种不同蛋白标签的融合蛋白即需要购买多种标签蛋白作为阳性对照。因此如果提供一种融合有多种常见蛋白标签的通用型蛋白标签对照抗原，一方面可以为相关研究提供真实有效地对照，另一方面可以减少购买多个蛋白标签抗原对照品的成本。

在构建多标签融合蛋白中，关键问题在于多标签融合蛋白在表达载体中的插入位点、各标签的排列顺序以及各标签的链接肽等因素均会影响各标签蛋白的折叠、稳定性以及多标签融合蛋白的成功表达。同时，上述因素的选择对多标签融合蛋白中各标签的高级结构的形成以及整体多标签融合蛋白的表达量也至关重要，并且随多标签蛋白中标签蛋白数目的增加，融合蛋白的分子量也越大，在大肠杆菌表达系统中越难以表达出稳定的有活性的多标签融合蛋白。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种同时串联多种标签蛋白的融合蛋白，并通过密码子优化的方法，适合该融合蛋白在大肠杆菌中的表达、复性和纯化的方法。

本发明第一个目的是提供一种串联了多种蛋白标签的融合蛋白，所述融合蛋白从N端到C端包括：His、Trx、3×FLAG、GST、Strep、HA、GFP、cMyc中的两种以上的蛋白标签。优选的，所述融合蛋白从N端到C端由His、Trx、3×FLAG、GST、Strep、HA、GFP、cMyc、His蛋白标签直接串联组成。

更优选的，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID：1所示。

本发明采用的英文缩写、中文释义，蛋白序列或Genebank登录号分如下：

His：本发明采用的组氨酸标签的氨基酸序列为:HHHHHH；

cMyc：本发明采用的c-Myc标签的的氨基酸序列为:EQKLISEEDL；

3×Flag：本发明采用的Flag标签的氨基酸序列为DYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK；

HA：本发明采用的HA标签的氨基酸序列为YPYDVPDYA；

Strep:本发明采用的Strep标签的氨基酸序列为WSHPQFEK；

Trx:硫氧还蛋白标签,本发明采用的Trx标签的Genebank登录号为AAN83133.1；

GST：谷胱甘肽S-转移酶标签，本发明采用的GST标签的Genebank登录号为：WP_008430144.1；

GFP：绿色荧光蛋白标签，本发明采用的GFP标签的Genebank登录号为：AAB51347.1。

本发明还提供了编码上述多标签融合蛋白(记为ZHB-tag)的DNA序列，如SEQ ID：2所示，该序列针对大肠杆菌表达系统进行了密码子优化，更适于大肠杆菌系统表达。

本发明还提供了包含上述DNA序列的表达载体，所述载体优选为pET21b。

本发明还提供了一种含有上述表达载体的大肠杆菌菌株，优选的大肠杆菌菌株为BL21(DE3)。

本发明还提供了一种用于上述融合蛋白包涵体复性和纯化的方法，其步骤如下：

步骤1、将经预冷的PBS清洗沉淀得到的含有诱导ZHB-tag的大肠杆菌沉淀，用预冷的PBS重悬，于4℃以12000rpm，离心15min；

步骤2、吸去上清，称菌体沉淀重量，每克(菌体湿重)加入裂解缓冲液Buffer A 5mL，用磨光玻璃棒搅动，使菌体悬起；

步骤3、每克(菌体湿重)菌体加入5μL 100mmol/L PMSF，5μL 100mg/mL溶菌酶，冰上搅动20min；

步骤4、用探针型超声波仪破碎菌体，样品置于冰上，超声120次，每次5s间隔5s，循环三次，每次循环至冷却样品之间等待2min，等待样品冷却。4℃，12000rpm，离心15min；

步骤5、沉淀用洗涤缓冲液Buffer B洗涤，4℃，12000rpm，离心15min，沉淀包涵体，重复一次；

步骤6、包涵体沉淀用变性缓冲液Buffer C溶解，室温下搅拌30min；

步骤7、充分混匀后室温12000rpm，离心15min，弃沉淀，取上清，即得到ZHB-tag变性溶液；

步骤8、采用Buffer D进行稀释复性法对步骤7中的ZHB-tag的变性溶液复性；

步骤9、主要采用IMAC亲和层析分离纯化ZHB-tag复性液，柱子选择为HisTrap FF crude；

步骤10、将所述融合蛋白纯化后样品使用截留分子量为50KDa的透析袋在PBS缓冲液中透析，每6h换液一次，共换液3-4次，收集透析液，真空冷冻干燥得到最终的所述融合蛋白纯品。

本发明提供了编码上述融合蛋白的基因，该序列是专为大肠杆菌表达系统进行密码子优化得到的序列，相比之下能显著提高异源基因在宿主菌中的表达效率。

此外，本发明选用的多功能标签的编码基因序列兼顾了各标签的功能、大小和插入的位点对目的蛋白的影响，多标签融合蛋白的排列顺序及插入位点的选择有利于多功能标签蛋白的高效表达；此外，多标签串联的方式，有利于采用两种以上的纯化标签中进行两步或多步法纯化，以产生高纯蛋白。因此，本发明提供的多标签融合蛋白不仅实现了在大肠杆菌表达系统中大分量融合蛋白的成功表达，并且所表达的多标签融合蛋白中各标签蛋白依然具备其原本的生物学活性。

另一方面，本发明提供了一种多标签融合蛋白在蛋白质的表达、示踪、纯化、和检测中的应用。

本发明提供的一种多标签融合蛋白及其构建方法和应用具有如下有益效果：

(1)所述通用型重组表达载体携带多个常用蛋白质标签(HIS，Trx，3×FLAG，GST，Strep，HA，GFP和cMyc中的至少一种)的编码基因，可用于对目的蛋白进行可溶性表达、并便于纯化和检测；

(2)所述通用型重组表达载体携带多个常用蛋白质标签(HIS，Trx，3×FLAG，GST，Strep，HA，GFP、cMyc、HIS)的编码基因表达出的融合蛋白，可用于研发工作中含有HIS，Trx，3×FLAG，GST，Strep，HA，GFP和cMyc至少一种的其他融合蛋白蛋白检测的阳性对照。

附图说明

图1表示ZHB-tag密码子优化前后核苷酸序列比较

其中，奇数行(即“原始序列”对应的行)为ZHB-tag核苷酸序列，即密码子优化前的序列；偶数行(即“优化序列”对应的行)为本发明的ZHB-tag核苷酸序列，即密码子优化后的序列。

图2-a、图2-b为ZHB-tag密码子优化前后在大肠杆菌表达宿主中CAI指数。

其中，图2-a表示ZHB-tag核苷酸序列在大肠杆菌表达宿主中CAI指数经过程序计算为0.62；图2-b表示优化后的本发明的ZHB-tag密码子在大肠杆菌表达宿主中CAI指数经过程序计算为0.90。

图3-a、图3-b为ZHB-tag优化前后在大肠杆菌表达宿主中最优密码子频率分布区域图。

其中，图3-a表示ZHB-tag核苷酸序列在大肠杆菌表达宿主中最优密码子频率分布区域图，从图中可以看出：ZHB-tag核苷酸序列的低利用率密码子出现百分比为17％；图3-b表示优化后的本发明的ZHB-tag密码子在大肠杆菌表达宿主中最优密码子频率分布区域图，优化后的本发明的ZHB-tag密码子序列的低利用率密码子出现百分比为0。

图4-a、图4-b为ZHB-tag密码子优化前后在大肠杆菌表达宿主中平均GC碱基含量分布区域图。

其中，图4-a表示ZHB-tag核苷酸序列在大肠杆菌表达宿主中平均GC碱基含量为：45.68％；图4-b表示优化后的本发明的ZHB-tag密码子在大肠杆菌表达宿主中平均GC碱基含量为：48.89％。

图5-a和图5-b为pET21b载体和pUC57-ZHB-tag载体双酶切琼脂糖凝胶电泳图。

其中，图5-a为pUC57-ZHB-tag载体双酶切琼脂糖凝胶电泳图，泳道1为500bp DNA Ladder，泳道2为Nde I和Xho I酶切pUC57-ZHB-tag载体，箭头所指即为ZHB-tag基因；

图5-b为pET21b载体双酶切琼脂糖凝胶电泳图，泳道1为500bp DNA Ladder，泳道2为NdeI和Xho I酶切pET21b载体。

图6为ZHB-tag表达质粒构建过程图。

图7为ZHB-tag多标签诱导表达前和诱导表达后SDS-PAGE鉴定电泳图。

其中，泳道1为(10-230kDa)宽范围的预染的蛋白上样Marker；泳道2为未加入IPTG诱导的ZHB-tag大肠杆菌裂解液；泳道3为加入IPTG诱导的ZHB-tag大肠杆菌裂解液。箭头所指即为ZHB-tag蛋白。

图8为ZHB-tag多标签蛋白复性液经过IMAC亲和柱纯化后的SDS-PAGE电泳图；

其中，泳道1为(10-230kDa)宽范围的预染的蛋白上样Marker；泳道2-7为ZHB-tag多标签蛋白复性液经过IMAC亲和柱纯化收集样品，箭头所指即为ZHB-tag蛋白。

图9为ZHB-tag多标签蛋白与不同的标签抗体免疫印迹杂交图。

其中图9-a、图9-b、图9-c、图9-d、图9-e、图9-f、图9-g、图9-h分别与抗His、3×FLAG、GFP、GST、HA、cMyc，Strep，Trx的免疫印迹杂交图，箭头所指即为ZHB-tag蛋白。实验结果表明ZHB-tag与不同的一抗进行免疫印迹杂交均有明显的响应信号，且条带单一。

图10为ZHB-tag多标签蛋白与不同的标签抗体ELISA检测结果。

其中图10-a、图10-b、图10-c、图10-d、图10-e、图10-f、图10-g、图10-h分别与抗His、3×FLAG、GFP、GST、HA、cMyc，Strep，Trx的ELISA检测结果。实验结果表明实验结果表明ZHB-tag与不同的一抗进行酶联免疫吸附，均有明显的响应信号，且呈浓度梯度作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，引用实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1.融合蛋白分子构建

发明人根据GenBank已公开Trx，GST，GFP、HIS，3×FLAG，Strep，HA，cMyc序列，将其串联形成本发明的多标签融合蛋白(命名为ZHB-tag)，融合蛋白从N端到C端由His，Trx，3×FLAG，GST，Strep，HA，GFP，cMyc，His直接串联组成，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，并对其编码基因进行密码子优化后得到本发明的ZHB-tag基因，碱基序列如SEQ ID No：2所示。密码子优化前后核苷酸序列比较见图1。

下面是对ZHB-tag进行密码子优化，优化前后各参数对比如下：

1.密码子适应指数(Codon Adaptation Index，CAI)

由图2-a可知，密码子没有优化前，ZHB-tag基因在大肠杆菌中密码子适应指数(CAI)为0.62。由图2-b可知，通过密码子优化后，使得本发明的ZHB-tag基因在大肠杆菌中CAI指数为0.90。通常CAI＝1时被认为该基因在该表达系统中是最理想的高效表达状态，CAI指数越低表明该基因在该宿主中表达水平越差，因此可以看出经过了密码子优化后得到的基因序列可以提高ZHB-tag基因在大肠杆菌中的表达水平。

2.最优密码子使用频率(Frequency of Optimal Codons，FOP)

由图3-a可知，基于大肠杆菌表达载体，密码子没有优化前，ZHB-tag基因序列的低利用率密码子出现百分比为17％。这条未进行优化的基因含有串联稀有密码子，这些密码子可能降低翻译效率，甚至能够解散翻译装配物。由图3-b可知，通过密码子优化后，本发明的ZHB-tag基因在大肠杆菌系统中出现低利用率密码子的频率为0。

3.GC碱基含量(GC curve)

GC含量理想分布区域为30％-70％，在这个区域外的出现任何峰都会不同程度地影响转录和翻译效率。由图4-a、图4-b的ZHB-tag基因的GC碱基平均含量分布区域图对比可知，由图4-a中显示ZHB-tag基因中在优化前GC碱基平均含量为45.68％，由图4-b中显示出优化后的序列消除了GC含量在30％-70％区域外所有碱基，最终得到优化后ZHB-tag的GC碱基平均含量为48.89％。

实施例2.ZHB-tag基因的表达质粒构建

分别将优化后的ZHB-tag全基因上下游引入Nde I和Xho I双酶切位点，并将合成的片段，构建到pUC57质粒(购自南京金斯瑞科技有限公司)中，得到一种长期保存质粒，记为pUC57-ZHB-tag质粒质粒。

将上述质粒和pET21b载体(购自Merck公司)用NdeI和XhoI双酶切，1％琼脂糖电泳回收酶切产物(如图5-a，图5-b所示)。用T4连接酶(购自New England Biolabs公司)连接到pET21b载体骨架中，转化到DH5α感受态细胞(购自北京天根生化科技有限公司)中，在含有100μg/mL的氨苄青霉素(购自Amresco公司)的LB平板中37℃培养过夜。第二天筛选阳性克隆菌测序，比对，与预期序列完全一致，即得到ZHB-tag一种形式的表达质粒，记为pET21b-ZHB-tag(载体构建过程如图6所示)。

实施例3 ZHB-tag在大肠杆菌中的表达和鉴定

具体步骤如下：

1.将实施例2中测序比对正确的pET21b-ZHB-tag质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞(购自北京天根生化科技有限公司)中，37℃氨苄青霉素平板中过夜培养。

2.第二天挑1-4个含有pET21b-ZHB-tag质粒的重组菌落，接入含有100μg/mL氨苄青霉素的LB培养液，37℃培养过夜。

3.取50μL过夜培养物接入5mL含100μg/mL氨苄青霉素的LB诱导培养液，37℃振荡培养。

4.接种后每隔1h测菌液OD600值，待OD600＝1.0时，用1mmol/L的IPTG(购自Amresco公司)进行诱导表达。同时以未加入IPTG的大肠杆菌培养液做阴性对照。

5.4h后收集菌液，高速离心(转速：12000rpm)3min，用预冷的PBS清洗沉淀，加入5×SDS凝胶加样缓冲液，100℃加热10min，室温高速离心(转速：12000rpm)1min，取上清。未加入IPTG的大肠杆菌培养液也按此步骤处理。

6.各取10μL步骤5所得的未加入IPTG和加入IPTG诱导的培养物样品，12％SDS-PAGE凝胶电泳分析。

7. 8-15V/cm电泳，至溴酚蓝迁移到分离胶底部。

8.考马斯亮蓝染色，观察表达产物条带，由图7可知：ZHB-tag具有较高的表达量。

实施例4 ZHB-tag包涵体复性

具体步骤如下：

1.将实施例3步骤5中经预冷的PBS清洗沉淀得到的含有诱导ZHB-tag的大肠杆菌沉淀，用预冷的PBS重悬，于4℃以12000rpm，离心15min；重复一次。

2.吸去上清，称菌体沉淀重量，每克(菌体湿重)加入裂解缓冲液Buffer A 5mL，用磨光玻璃棒搅动，使菌体悬起。

3.每克(菌体湿重)菌体加入5μL 100mmol/L PMSF，5μL 100mg/mL溶菌酶，冰上搅动20min。

4.用探针型超声波仪破碎菌体，样品置于冰上，超声120次，每次5s间隔5s，循环三次，每次循环至冷却样品之间等待2min，等待样品冷却。4℃，12000rpm，离心15min。

5.沉淀用洗涤缓冲液Buffer B洗涤，4℃，12000rpm，离心15min，沉淀包涵体，重复一次。

6.包涵体沉淀用变性缓冲液Buffer C溶解，室温下搅拌30min。

7.充分混匀后室温12000rpm，离心15min，弃沉淀，取上清，即得到ZHB-tag变性溶液。

8.采用Buffer D进行稀释复性法对步骤7中的ZHB-tag的变性溶液复性。

各缓冲液按下表配制：

表1各缓冲液配制

实施例5 ZHB-tag包涵体复性液纯化

由于ZHB-tag中含有多标签，本专利主要采用IMAC亲和层析分离纯化ZHB-tag复性液，柱子选择为His Trap FF crude(购自GE healcare，17-5286-01)，具体步骤如下：

将实施例4得到的ZHB-tag多标签蛋白复性液，加入20mM NaH₂PO₄，20mM咪唑和300mM NaCl，并调节pH＝7.5，0.45μm滤膜过滤。

运用全自动智能蛋白纯化系统(AKTA avant150，购自GE healcare)对预处理获得的ZHB-tag多标签蛋白复性液进行纯化，平衡和结合缓冲液为20mM NaH₂PO₄，20mM咪唑，300mM NaCl，pH7.5，洗脱缓冲液为20mM NaH₂PO₄，500mM咪唑，300mM NaCl，pH＝7.5。上样完毕后，运用平衡缓冲液洗脱20个柱体积，后洗脱缓冲液洗脱目的蛋白并收集洗脱峰，通过SDS-PAGE电泳确定纯度后合并符合要求的收集管，纯化电泳鉴定结果见图8，ZHb-tag纯化蛋白经超滤浓缩、过滤除菌后-80℃保存。

实施例6 ZHB-tag免疫印迹试验

对步骤实施例5中获得的ZHB-tag融合标签蛋白进行蛋白免疫印迹试验，SDS-PAGE电泳方法及Western Blot方法参照分子克隆实验指南进行。其中，SDS-PAGE电泳的浓缩胶浓度为5％，分离胶浓度为12％，浓缩胶80V恒压，分离胶120V恒压跑约2h；Western Blot鉴定：在转膜缓冲液体系下100V恒压，转膜60min，经封闭后分别与一抗或者HRP酶标记抗体反应、二抗、显色，其中，一抗分别为抗His(购自艾比玛特，Abmart M20001)、Flag(购自sigma，F9291-2MG)、GFP(购自艾比玛特，Abmart M20004)、GST(购自艾比玛特，Abmart M20007)、HA(购自艾比玛特，Abmart M20003)、cMyc(购自艾比玛特，Abmart M20002)，Strep(购自购自金斯瑞，A00626-40)，Trx(购自金斯瑞，A00129-40)的抗体，结果分别见图9-a、图9-b、图9-c、图9-d、图9-e、图9-f、图9-g，图9-h，ZHb-tag均能与上述抗体反应，且具有明显的响应信号，单一的条带。

实施例7 ZHB-tag酶联免疫吸附试验

对步骤实施例5中获得的ZHB-tag融合标签蛋白进行酶联免疫吸附试验，分别取ZHB-tag样品以200ng/孔包被，37℃孵育2h，PBST洗涤一次；2％BSA封闭2h；2％BSA以起始浓度1:1000分别稀释实施例6中的各一抗或者酶标抗体后，分别以5倍浓度梯度稀释各一抗及HRP酶标记抗体；再分别加入100uL/孔不同浓度稀释的一抗或者酶标抗体，37℃反应40min，PBST洗涤5次；最后分别加入100uL/孔用2％BSA 1:5000稀释对应的HRP酶标二抗于与各一抗反应的酶标孔中，37℃各反应30min，PBST洗涤5次；TMB显色，37℃，反应15min；2mol/L的浓H2SO4终止。结果分别见图10-a、图10-b、图10-c、图10-d、图10-e、图10-f、图10-g，图10-h，ZHb-tag均能与上述抗体进行间接或者直接ELISA反应，且具有明显的响应信号，且信号值随着一抗或者酶标抗体浓度的递减，均梯度递减。

综上所述，本发明提供的ZHB-tag融合标签蛋白成功串联表达了8种标签蛋白，表达量高，纯化方法简单，纯度较好，并且8种标签蛋白保持了天然状态下的生物学活性，均可以与其抗体发生特异性反应，不仅便于ZHB-tag融合标签蛋白的纯化，提高产品纯度，也可以作为含有多标签融合蛋白中一个或多个标签的其他融合蛋白表达、示踪、纯化、和检测等方便的阳性对照，确保检测系统的适用性。

Claims (10)

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端包括：His、Trx、3×FLAG、GST、Strep、HA、GFP、cMyc中的两种以上的蛋白标签。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端由His、Trx、3×FLAG、GST、Strep、HA、GFP、cMyc、His蛋白标签直接串联组成。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID：1所示。

4.一种权利要求2所述融合蛋白的编码基因，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID NO：2所示。

5.一种含有如权利要求4所述基因的载体。

6.根据权利要求5所述的载体，所述载体为pET21b。

7.一种含有权利要求5或6所述载体的大肠杆菌菌株。

8.根据权利要求7所述的大肠杆菌菌株，所述菌株为BL21(DE3)。

9.一种融合蛋白的包涵体复性和纯化方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤1、将IPTG诱导表达的权利要求8所述的大肠杆菌沉淀，用预冷的PBS重悬，于4℃以12000rpm，离心15min；

步骤2、吸去上清，称菌体沉淀重量，每克(菌体湿重)加入裂解缓冲液Buffer A 5mL，用磨光玻璃棒搅动，使菌体悬起；

步骤3、每克(菌体湿重)菌体加入5μL 100mmol/L PMSF，5μL 100mg/mL溶菌酶，冰上搅动20min；

步骤4、用探针型超声波仪破碎菌体，样品置于冰上，超声120次，每次5s间隔5s，循环三次，每次循环至冷却样品之间等待2min，等待样品冷却。4℃，12000rpm，离心15min；

步骤5、沉淀用洗涤缓冲液Buffer B洗涤，4℃，12000rpm，离心15min，沉淀包涵体，重复一次；

步骤6、包涵体沉淀用变性缓冲液Buffer C溶解，室温下搅拌30min；

步骤7、充分混匀后室温12000rpm，离心15min，弃沉淀，取上清，即得到ZHB-tag变性溶液；

步骤8、采用Buffer D进行稀释复性法对步骤7中的ZHB-tag的变性溶液复性；

步骤9、主要采用IMAC亲和层析分离纯化ZHB-tag复性液，柱子选择为HisTrap FF crude；

步骤10、将所述融合蛋白纯化后样品使用截留分子量为50KDa的透析袋在PBS缓冲液中透析，每6h换液一次，共换液3-4次，收集透析液，真空冷冻干燥得到最终的所述融合蛋白纯品。

10.权利要求1所述的融合蛋白在作为含有所述融合蛋白中一种或几种标签的其他融合蛋白定性或定量检测时的阳性对照的应用。