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CN107320716B - 碱性成纤维细胞生长因子囊泡及其制备方法 - Google Patents

碱性成纤维细胞生长因子囊泡及其制备方法 Download PDF

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CN107320716B CN201710501474.8A CN201710501474A CN107320716B CN 107320716 B CN107320716 B CN 107320716B CN 201710501474 A CN201710501474 A CN 201710501474A CN 107320716 B CN107320716 B CN 107320716B
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Abstract

本发明属于药物制剂领域，主要涉及一种成纤维细胞生长因子囊泡及其凝胶剂，以及相应制剂的制备方法。本发明所述的囊泡采用非离子表面活性剂、附加剂以及成纤维细胞生长因子进行反应制备而得。采用非离子表面活性剂具有毒性较小，生物相容性和可降解性好，不解离，不发生氧化水解，易大量生产等技术优势。本发明还公开了由所述囊泡制备凝胶剂的方法。所述制剂具有增加药效，减少毒副作用，提高药品缓释效果的能力。

Description

碱性成纤维细胞生长因子囊泡及其制备方法
技术领域
本发明涉及碱性成纤维细胞生长因子囊泡及其制备方法、含有碱性成纤维细胞生长因子囊泡的制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。
背景技术
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一类具有多种生理功能的生长因子，主要存在于表皮基底的角质形成细胞内,是重要的促细胞有丝分裂因子和血管生成因子,对来源于外胚层和中胚层的细胞，如上皮细胞、成纤维细胞、软骨细胞、成骨细胞、真皮细胞、血管内皮细胞等具有促进修复和再生作用，能促进细胞增殖、生长、分化，改善细胞生活微环境,促进受损神经再生及血管、肌肉、皮肤等修复，减少紫外线辐射对皮肤造成的损害。同时bFGF也是神经细胞营养和再生因子,能增加皮肤自身的免疫功能,改善循环, 促进皮肤新陈代谢,修复受损皮肤。
例如，由我公司研发的重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovinebasic fibroblast growth factor,rb-bFGF)，其使用基因工程重组的大肠杆菌作为表达载体，经过发酵并高度纯化后得到了高活性bFGF产品。其相关产品贝复舒，贝复济，贝复新系列已通过国家食品药品监督管理局批准上市。
非离子表面活性剂囊泡(Non-ionic surfactant based vesicles，niosomes)。它是以各种非离子表面活性剂为载体材料，通过自身闭合形成的双分子层微型或多室囊泡状载体。利用非离子表面活性剂囊泡包裹药物可以减少药物在达到有效部位前被破坏，延长药物的半衰期，进而达到延长药物的作用时间，降低毒副作用，改变药物在体内的分布，被动靶向作用等，以及主动靶向(在加入适当特殊辅料后)等作用。囊泡具有双层膜结构，成为理想的体内药物载体，它既可以将水溶性药物(如氨基酸、多肽、蛋白类药物)包封在微水相内，作为水溶性药物载体；也可以将脂溶性药物增溶在双层膜中，作为脂溶性药物载体。与脂质体相比，非离子表面活性剂囊泡的载体材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解，生产和贮存皆不需特殊条件，可使工艺简化、成本降低，是一种极有希望的新型药物载体。由于非离子表面活性剂毒性较小，具有生物相容性和可降解性，不解离，不发生氧化水解，易大量生产，且可根据用途设计其结构，近年来对其研究的人越来越多，囊泡技术已经成为化学、药学和生命科学研究领域中的热点之一。
重组蛋白、多肽、单抗类药物由于本身化学结果特点，一般无法采用口服方式给药。而注射给药存在注射操作不便且存在安全性问题等缺陷。相比之下，采取经皮给药的外用制剂剂型具有安全、方便等优势。但传统的外用制剂无法透过完整的皮肤。应用新型囊泡给药系统，可以达到蛋白药物的透皮吸收，为重组蛋白、多肽、单抗类药物给药提供了一条新的安全、方便、有效的途径，将具有广阔的应用前景，会产生良好的社会效益和可观的经济效益。
发明内容
本发明目的是提供重组碱性成纤维细胞生长因子囊泡制剂及其制备方法。
本发明所解决的技术问题，本发明的优点和技术优势为：
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一类具有多种生理功能的多肽生长因子，有利于创伤愈合和组织再生，目前国内上市的相关产品的剂型主要包括：外用溶液，外用冻干制剂，滴眼液和凝胶剂，这些传统剂型在临床上存在一些不便，限制了bFGF相关产品的进一步应用。靶向制剂是继一代普通制剂、二代缓释制剂和前体制剂、三代控释制剂之后的第四代制剂。目前，脂质体是研究的最多靶向药物载体，但脂质体存在如下缺点：(1) 其化学结构不稳定性，制备及贮藏要求高，一般需要惰性气体保护；(2)药物包裹率不高且易发生渗漏从而失去靶向性；(3)所用原料磷脂难以纯化，且易氧化变质从而降低膜流动性导致被包裹药物的渗漏；(4)所用原料磷脂价格昂贵。
随着脂膜模拟化学的发展，人们在研究中发现，表面活性剂在水溶液可自组装成和脂质体结构类似双层封闭结构囊泡，其壳层内外均是亲水基团，空的中心可容纳水性介质，夹在两层亲水基团中间的是疏水基团。许多表面活性剂都具有自我组装形成囊泡结构的能力，但由于非离子型表面活性剂毒性较小，具有生物相容性和可降解性，不解离，不发生氧化水解，易大量生产，且可根据用途设计其结构，因此对其研究较为深入。
非离子型表面活性剂囊泡(niosomes)也可称为非离子型表面活性剂脂质体 (因为磷脂也是一种表面活性剂，且一直将liposomes译为脂质体)，它是由非离子表面活性剂自身闭合形成的双分子层微型或多室囊泡载体，与脂质体相比，非离子型表面活性剂囊泡的载体材料不含磷脂，不存在磷脂氧化降解的问题，生产和贮存皆不需特殊条件，可使工艺简化、成本降低，是一种极有希望的新型药物载体。
囊泡所具有的双层膜结构使其成为潜在的理想的体内药物载体,既可以携带水溶性药物(如氨基酸、多肽、蛋白类药物),将药物包封在微水相内,也可以携带油溶性药物,将药物增溶在双层膜中，与胶束、微乳液相比,囊泡体系作为药物载体有如下特点：(1)比表面大，更大的增溶量；(2)双层膜具有更强的牢固性和稳定性；(3)可通过组成、pH、盐来调节粒径的大小和药物分子的渗透率。由于组成囊泡的表面活性剂的高度化学稳定性，囊泡比脂质体的稳定性要高很多，且表面活性剂又具有很好的促渗透作用，因此在经皮给药系统中具有特殊的优势。
目前，提高药物透过皮肤角质层的方法包括微粒载体(泡囊、类脂毫微囊等)，化学促进剂(氮酮、挥发油等)，物理促渗技术(离子导入、电穿孔、超声波等)。脂质体经皮给药研究已较多，但传统脂质体透皮效率并不理想，它们倾向于在皮肤角质层表层，与皮肤发生融合而产生蓄积作用，无法穿透进入皮肤深层，而泡囊载体以其毒性小、刺激性小、不对皮肤造成伤害，促进各种性质药物(脂溶性、水溶性、大分子)穿透皮肤角质层、可达到循环系统等优势而备受注目。
囊泡比脂质体更稳定，具有增加药效，减少毒副作用的优点，提供了一种可与脂质体选择使用的新型药物载体。采用制剂新技术手段，将不稳定的生长因子包裹于囊泡的亲水内核中，再将生长因子囊泡分散与水凝胶中，这样不仅提高了生长因子的稳定性，而且能够使药物在水凝胶中形成储存库，从而达到缓释的目的。
本发明是通过如下技术方案完成的：
本发明所提出的碱性成纤维细胞生长因子囊泡，包括下列重量份组分：
生长因子 0.5-40份
非离子表面活性剂 2-700份
附加剂 0.3-600份。
进一步优选为：
生长因子 1-20份
非离子表面活性剂 5-400份
附加剂 0.3-300份。
更进一步优选为：
生长因子 5-10份
非离子表面活性剂 20-200份
附加剂 0.5-200份。
非离子表面活性剂为司盘、吐温、聚氧乙烯脂肪酸酯、泊洛沙姆、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚甘油烷基醚、冠醚、葡萄糖烷基醚、聚氧乙烯烷基醚、蔗糖酯、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯聚养丙烯共聚物中的一种或多种。
其中，司盘包括：司盘20、司盘40、司盘60、司盘65、司盘80、司盘85 等；吐温包括吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85等；聚氧乙烯脂肪酸酯，别名卖泽(Myrij)，包括聚氧乙烯(40)脂肪酸酯、聚氧乙烯(8)脂肪酸酯、聚氧乙烯(50)脂肪酸酯。非离子表面活性剂优选为：聚氧乙烯(40) 脂肪酸酯、吐温40、吐温60、司盘40、司盘60中的一种或一种以上。
所述的附加剂为胆固醇、胆固醇聚乙二醇聚合物、硬脂酸钠、硬脂酰胺、二鲸蜡磷酸酯、十八胺、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇、泊洛沙姆188、羟丙基倍它环糊精、壳聚糖、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、N- 十六酰-L-高半胱胺酸中的一种或一种以上；其中聚乙二醇种类包括4000、6000、 2000、400、300。
附加剂优选为：胆固醇或者胆固醇与十二烷基硫酸钠、硬脂酸钠中的一种或一种以上的混合物。
本发明所述囊泡可采取乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、水化法、挤出法、机械法、pH梯度法等方法，优选以下制备方法：
取非离子表面活性剂、附加剂、溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；在15-80℃恒温搅拌下，取上述溶液匀速注入含生长因子的水溶液中，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，过滤，灌装或冷冻干燥，即得。
本发明所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法也可以为：取非离子表面活性剂、附加剂、溶于适量有机溶剂，减压蒸发至干燥薄膜，真空干燥去残余溶媒，然后加入含生长因子的水溶液，25-90℃恒温水合，水合时间10-60分钟，水合后超声处理，即得。
本发明所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法还可以为：将非离子表面活性剂、附加剂加入适量有机溶剂溶解，溶液加入1/2有机溶剂量以下的水溶液，超声2-20分钟，25-65℃旋转至胶态，再加入含生长因子的水溶液，40-80℃旋转至干，加入水溶液，旋转10-30分钟，放置1-12小时，充分水合，即得。
本发明所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法还可以为：取非离子表面活性剂、附加剂溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；在15-80℃恒温搅拌下，取上述溶液匀速加入加有含生长因子的磷酸盐缓冲液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，加入适量的碱调节pH至7，继续搅拌1h，灌装或冷冻干燥，即得；
其中，碱是指氢氧化钠、氨水、三乙醇胺、三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或一种以上。
本发明所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法还可以为：取非离子表面活性剂、附加剂溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；在15-80℃恒温搅拌下，取上述溶液匀速注入加有铵盐的溶液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，通过透析或过柱除去囊泡其中的酸根离子，加入含生长因子的溶液，继续搅拌0.5h，过滤，灌装或冷冻干燥，即得；
其中，铵盐是指硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、醋酸铵、磷酸二氢铵中的一种或一种以上。
本发明所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法中附加剂根据其溶解性的不同，可溶于有机溶剂中，也可溶于水或不同类型的缓冲液中。碱性成纤维细胞生长因子可溶于水中或缓冲液中。
本发明碱性成纤维细胞生长因子囊泡制备方法中磷酸盐缓冲液也可以为硫酸铵缓冲液、三羟甲基氨基缓冲液、柠檬酸缓冲液、酒石酸缓冲液、水；有机溶剂包括无水乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙醚、异戊醇、乙酸乙酯的一种或任意比例的混合物。
实验所涉及的冻干工艺其特征在于经过下列工艺步骤：a.预处理待冻干囊泡液；b.开启冷冻干燥机，调节冷冻干燥室内温度至-30～-40℃以下，将经过预处理的囊泡液放入冷冻干燥机内快速冷冻；c.调节冷冻干燥室内温度至-40℃，保持冷冻干燥室温度-40±2℃，产品预冻1～3小时；d.调节冷凝器温度至-45℃以下，开启真空系统，待冷冻干燥室内真空度降至10.0Pa～20.0Pa时，开始升温干燥，调节冷冻干燥室温度逐渐至0±2℃，每小时回温不超过2℃，维持冷冻干燥室内真空度为5～20Pa，然后在冷冻干燥室内温度为0±2℃、真空度为10～20Pa 条件下，保持1～3小时；e.继续调节冷冻干燥室温度至15℃，每小时回温不超过5℃，并维持冷冻干燥室内真空度为10～20Pa，然后在冷冻干燥室温度15℃左右，真空条件下，保持1～4小时；f.关闭冷冻干燥机，调节冷冻干燥室内环境至常压、常温后，取出囊泡冻干品。
本发明所述的碱性成纤维细胞生长因子囊泡可以制备为注射剂、口服液、液体胶囊等口服剂型或者外用制剂等，优选外用制剂，进一步优选凝胶剂、软膏剂、贴剂等，进一步优选为凝胶剂。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶由以下重量份组分组成：生长因子0.5-40、非离子表面活性剂2-700、附加剂0.3-600、增稠剂0.1-150、保湿剂1-1500、pH调节剂0-60、透皮剂0-60、防腐剂0-300。
可优选为：生长因子1-20、非离子表面活性剂5-400、附加剂0.3-300、增稠剂0.5-120、保湿剂1-1100、pH调节剂0-50、透皮剂0-50、防腐剂0.5-200。
增稠剂可为交联聚丙烯树脂类，包括卡波姆941，974，934P，980，981， 934、940、1342及交联聚丙烯树脂不同盐及衍生物，还可为羟丙甲基纤维素、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、海藻酸纳等一种或一种以上混合物。
保湿剂可为甘油、丙二醇、异丙醇、透明质酸中的一种或一种以上。
pH调节剂可为有机胺类如三乙醇胺、三乙胺、二乙胺，也可为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠。
透皮剂可为氮酮、薄荷醇、精油、二甲基亚砜、丙二醇、肉豆蔻异丙基酸酯、N-甲基吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯、油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或一种以上。
防腐剂可为山梨酸钾、山梨酸、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯甲酯、苯酚中的一种或一种以上。
所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶的制备方法为：
取增稠剂、抗氧化剂、抑菌剂、保湿剂，pH调节剂，加入水，制成凝胶基质，和所制得的生长因子囊泡液混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
更具体地，所述碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶的制备方法为：
增稠剂加水溶胀，抑菌剂用保湿剂分散，抗氧化剂加水溶解后，均加入到增稠剂中，共同溶胀过夜，加适量的pH调节剂，调节pH至6.5-7.5，得凝胶基质；将所制得的碱性成纤维细胞生长因子囊泡液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶。
以下通过实施例来进一步阐述本发明所述组合物的有益效果。
一、工艺研究
制备囊泡的成功与否主要取决于形成的双层膜封闭体系是否能够将药物包载在其中，所以其包封率是重要的评价指标。只有将药物包载在囊泡的双分子层结构中才能借助囊泡的优势发挥药物的作用，如果包封率过低则囊泡的意义不大，这种情况下与游离药物的水介质溶液在透皮、缓释等各方面性能基本相同。本发明从囊泡处方组成及工艺条件进行了实验研究，具体如下：
1、囊材处方
(1)采用不同非离子表面活性剂与胆固醇作为囊材制备空白囊泡，观察成囊泡后性状及静置后的性状，初步筛选囊材种类，结果见表1：
表1不同囊材制备的囊泡的性状比较
由表1可知，不同的非离子表面活性剂作为囊材制备囊泡时的性状不同，其中司盘、吐温、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、蔗糖酯能够制备出效果较好的囊材。
(2)对囊材进一步筛选
对空白囊泡成囊较好的囊材，进一步考察其包载药物的能力及载药囊泡的稳定性，本实验中，保持囊材浓度一致，结果见表2：
表2不同囊材制备的囊泡的包封率比较
由表2可知，选用吐温40、吐温60、司盘40、司盘60、聚氧乙烯(40) 脂肪酸酯、Brij72、Brij721能够制备出包封率相对较高的囊泡。
(3)附加剂筛选
采用不同附加剂与司盘40作为囊材制备囊泡，观察囊泡的性状，结果见表 3：
表3不同囊材制备的囊泡的性状比较
由表3可知，不同的附加剂作为囊材制备囊泡时的性状不同，附加剂优选胆固醇，或者胆固醇与二鲸蜡磷酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸钠、月桂酰甲基牛磺酸钠中的一种或一种以上的混合物。
2、囊泡制备方法
囊泡的制备方法很多，主要有注入法、薄膜分散片、冷冻干燥法、熔融法、硫酸铵梯度法、pH梯度法等，以司盘40和胆固醇作为囊材，分别考察以上方法制备的碱性成纤维细胞生长因子囊泡，以囊泡溶液的性状和包封率作为考察指标，考察其制备方法。结果见表4：
表4不同的制备方法制备的囊泡比较
由表4可知，采用不同的制备方法均可以制备得到形状良好的囊泡。但综合考虑包封率及制备工艺工业化程度，优选注入法。
二、透皮实验
1鼠皮的制备
SD雄性大鼠，240-260g，脱颈椎处死，将腹部及周边的毛用剃毛刀脱干净，用解剖剪将褪毛部分的大鼠皮整块剥离，置于生理盐水中舒展开(需要2-3min)，用在滤纸上将鼠皮自然铺展开，将透皮杯上盖置于剥离的皮肤上，将鼠皮连同滤纸(以保证鼠皮的自然形态)剪成与透皮杯外层稍大的小圆片，将小圆片放入准备好的生理盐水中，用眼科弯剪将鼠皮内层的脂肪组织及粘膜组织剪去(也可用刀片刮)，处理好的鼠皮用生理盐水洗净，存放于垫放了生理盐水润湿的滤纸的表面皿内，用保鲜膜包封，置于4℃冷藏保存，24h内使用。
2.试验方法
将离体的大鼠皮肤自然固定在改良的Franz扩散池上,有效扩散面积为 2.8cm2，使皮肤表面面向供药室，皮肤里层与接收液刚好接触(接收液用量大约为6.5ml)，共12个样，供给室中分别加入下文实施例1的碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶(0.267g)和上市凝胶(商品名贝复新，珠海亿胜生物制药有限公司生产)(用量为0.2g左右)，接收液为37℃预热的生理盐水溶液。接收室水浴温度为37℃，磁力搅拌转速为500rpm。供给室加入药液后用封口膜封闭，按设定取样时间取样，取样方式可为将接收液全部取出，再加满，也可定量取样，并补加等量新鲜接收液。
3.试验结果
表5生长因子囊泡凝胶与贝复新透皮试验累积透过量(n＝6)
由表5和图1可知，与贝复新的透皮吸收进行比较，实施例1所制得成纤维细胞生长因子囊泡凝胶透皮效果明显强于上市凝胶。
本发明实施例7均按照上述方法进行了相似的试验，结果与上述结果相同。
本发明所述的碱性成纤维细胞生长因子，根据实际需要，可以为天然产物或人工重组产物，同时也可以从人源及牛源等不同生物来源获取。
本发明所述囊泡中所包裹的药学活性成份为碱性成纤维细胞生长因子，根据实际需要，也可用于包裹其他细胞因子类物质，如结缔组织生长因子或表皮生长因子等。
附图说明
图1为囊泡凝胶与上市凝胶累积透皮释放曲线(n＝6)；
图2为实施例1的生长因子囊泡的粒径分布图；
图3为实施例1的生长因子囊泡的zeta电位图；
图4为实施例1的生长因子囊泡的透射电镜图。
具体实施方式
实施例1
取碱性成纤维细胞生长因子2×106IU，司盘60 45mg，聚乙二醇单硬脂酸酯225mg，硬脂酸钠37.5mg，胆固醇131.25mg，加入到适量95％乙醇中，至85℃水浴热溶，全部溶解后，注入到适量的水中，在37℃恒温搅拌30min，挥尽乙醇，加水至处方量，摇匀，即得囊泡混悬液。
卡波姆980 100mg加水溶胀，尼泊金乙酯10mg用1000mg的10％甘油分散，无水亚硫酸钠50mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶胀过夜，加适量氢氧化钠溶液调pH至7.3，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例2
取碱性成纤维细胞生长因子2.5×106IU，司盘60 80mg，聚乙二醇单硬脂酸酯220mg，硬脂酸钠50mg，胆固醇200mg，加入到适量95％乙醇中，至85℃水浴热溶，全部溶解后，注入到适量的水中，在85℃恒温搅拌30min，将温度降至55℃继续搅拌水合，挥尽乙醇，加水至处方量，摇匀，即得囊泡混悬液。
卡波姆980 200mg加水溶胀，尼泊金乙酯40mg用2000mg的5％甘油分散，无水亚硫酸钠60mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶胀过夜，加适量氢氧化钠溶液调pH至7.5，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例3
取碱性成纤维细胞生长因子1×106IU，司盘60 40mg，聚乙二醇单硬脂酸酯160mg，硬脂酸钠25mg，胆固醇75mg，加入到适量的95％乙醇中，至75℃水浴热溶，全部溶解后，注入到适量的1％丙二醇中，在75℃恒温搅拌40min，将温度降至40℃继续搅拌水合，挥尽乙醇，加水至处方量，摇匀，即得囊泡混悬液。
卡波姆980 60mg加水溶胀，尼泊金甲酯30mg用800mg的3％甘油分散，无水亚硫酸钠10mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶胀过夜，加适量氢氧化钠溶液调pH至6.5，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例4
取碱性成纤维细胞生长因子1.2×106IU，司盘60 100mg，吐温20 100㎎，聚乙二醇单硬脂酸酯200mg，硬脂酸钠60mg，胆固醇140mg，加入到适量无水乙醇中，至100℃水浴热溶，全部溶解后，注入到适量的3％丙二醇中，在100℃恒温搅拌10min，将温度降至80℃继续搅拌水合，挥尽乙醇，加水至处方量，摇匀，即得囊泡混悬液。
卡波姆974 300mg加水溶胀，尼泊金乙酯10mg用1500mg的丙二醇分散，焦亚硫酸钠120mg加水溶解后，均加入到卡波姆974中，共同溶胀过夜，加适量三乙醇胺溶液调pH至7.0，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例5
取碱性成纤维细胞生长因子4×106IU，司盘20 250mg，吐温80 350㎎，胆固醇聚乙二醇聚合物450mg，加入到适量的甲醇中，至30℃水浴热溶，全部溶解后，注入到适量的5％丙二醇中，在30℃恒温搅拌60min，将温度降至25℃继续搅拌水合，挥尽甲醇，加水至处方量，摇匀，即得囊泡混悬液。
卡波姆941 350mg加水溶胀，加入甘油3000mg，再加入加水溶解后的硫代硫酸钠100㎎，共同溶胀过夜，加适量碳酸氢钠溶液调pH至6.8，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例6
取适量磷酸盐缓冲液(pH6.8)，加入到已熔融的400mg聚乙二醇单硬脂酸酯、280mg胆固醇，高速剪切，混匀后，加入碱性成纤维细胞生长因子4×105IU，水浴搅拌50分钟，即得囊泡混悬液。
卡波姆934P 400mg加水溶胀，山梨酸钾：三氯叔丁醇(1:1)混合物100mg 用500mg的5％异丙醇分散，亚硫酸氢钠200mg加水溶解后，均加入到卡波姆 934P中，共同溶胀过夜，加适量碳酸氢钠溶液调pH至6.8，得凝胶基质。
将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
实施例7
取适量硫酸铵缓冲液(pH 7.0)，加入到已熔融的司盘40 400mg、蔗糖硬脂酸酯S-3400mg、600mg硬脂酰胺、取碱性成纤维细胞生长因子4×104IU，高速剪切，混匀后，倒入25℃的硫酸铵缓冲液(pH7.0)，水浴搅拌75分钟，即得囊泡混悬液。
实施例8
取适量三羟甲基氨基缓冲液(pH 7.0)，加入到已熔融的200mg吐温80、300 mgBrij30、250mg二鲸蜡磷酸酯、碱性成纤维细胞生长因子4×104IU，高速剪切，混匀后，倒入55℃的三羟甲基氨基缓冲液(pH7.0)，水浴搅拌100分钟，即得囊泡混悬液。取囊泡混悬液，按常规方法制备成各种口服固体制剂。
实施例9
取聚氧乙烯(8)脂肪酸酯750mg，胆固醇800mg，聚乙二醇500mg超声或加热溶于二氯甲烷中，在40℃恒温搅拌下，将上述溶液匀速注入pH6.0的醋酸铵溶液中，继续搅拌至有机溶剂挥尽，通过透析或过柱除去囊泡中的醋酸根，加入含碱性成纤维细胞生长因子8×105IU的水溶液，继续搅拌0.5h，过滤即得碱性成纤维细胞生长因子囊泡。
取卡波姆1342 500mg，甘油700mg，丙二醇150mg，山梨酸钾100mg，加入纯化水500ml，过夜充分溶胀，加入碳酸钠调节pH至6.8即得空白凝胶。把空白凝胶基质和囊泡混悬液混匀，即得囊泡凝胶。
实施例10
取碱性成纤维细胞生长因子2×104IU，葡萄糖烷基醚500mg，聚甘油烷基醚200mg，羟丙基倍它环糊精400mg溶于适量乙醇中，匀速注入酒石酸缓冲液中， 30℃搅拌除去溶剂后，即得碱性成纤维细胞生长因子囊泡。
实施例11
取碱性成纤维细胞生长因子9×105IU，聚氧乙烯(40)脂肪酸酯300mg，吐温20900mg，硬脂酸钠100mg，胆固醇800mg溶于适量异戊醇中，匀速注入pH6.8 的柠檬酸缓冲液中，50℃搅拌至异戊醇挥尽，超声或用高压均质机处理，即得碱性成纤维细胞生长因子囊泡混悬液。
实施例12
取吐温20 100mg，司盘60 500mg，二鲸蜡磷酸酯20mg，十八胺50mg，胆固醇400mg溶于适量甲醇：氯仿(3:1)，60℃旋转蒸发除去溶剂，真空干燥过夜，加入含碱性成纤维细胞生长因子6×106IU的水溶液，水合温度60℃，水合时间 55min，超声45min，即得囊泡混悬液。
取卡波姆981 600mg，海藻酸钠400mg，甘油800mg，氮酮100mg，三乙胺 500mg，山梨酸180mg，加入纯化水800ml制得空白凝胶基质。将囊泡混悬液和空白凝胶基质混合均匀，即得碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶。
实施例13
取囊泡混悬液，按常规方法制备成软膏剂、贴剂、喷雾剂。
以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (1)

1.一种碱性成纤维细胞生长因子囊泡凝胶的制备方法，其特征在于：取碱性成纤维细胞生长因子2×106IU，司盘60 45mg，聚乙二醇单硬脂酸酯 225mg，硬脂酸钠37.5mg，胆固醇131.25mg，加入到95％乙醇中，至85℃水浴热溶，全部溶解后，注入到水中，在37℃恒温搅拌30min，挥尽乙醇，加水摇匀，即得囊泡混悬液；卡波姆980 100mg加水溶胀，尼泊金乙酯10mg用1000mg的10％甘油分散，无水亚硫酸钠50mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶胀过夜，加氢氧化钠溶液调pH至 7.3，得凝胶基质；将囊泡混悬液与凝胶基质混合，搅拌均匀，即得囊泡凝胶。
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