CN107513019A - 从中药红景天中提取的化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从中药红景天中提取的化合物、其制备方法及应用，中药红景天中提取的化合物为6‑阿魏酰基己酸，英文名称为6‑feruloyloxyhexanoic acid。化合物的制备方法包括以下步骤：步骤1，红景天药材加水提取2次，滤过，合并两次滤液，浓缩后用95％乙醇调至醇浓度60％，静置过夜；步骤2，取上清液浓缩后用反相柱色谱分离，以5％～80％乙腈‑水溶液进行梯度洗脱，收集40％乙腈洗脱流份，依次进行凝胶色谱、制备液相HPLC分离，得到本发明化合物。本发明化合物具有抗氧化和抗血小板聚集的作用,能够在制备抗氧化药物或抗血小板聚集药物中应用。

Description

从中药红景天中提取的化合物、其制备方法及应用

技术领域

本发明属于制药技术领域，特别是涉及一种从中药红景天中提取的化合物，该化合物的制备方法以及该化合物的应用。

背景技术

红景天(学名：Rhodiola rosea L.)，别名：蔷薇红景天，扫罗玛布尔等；为多年生草本植物，高10-20厘米。根粗壮，圆锥形，肉质，褐黄色，根颈部具多数须根，根茎短，粗状，圆柱形，被多数覆瓦状排列的鳞片状的叶。生长在海拔1800—2500米高寒无污染地带，其生长环境恶劣，因而具有很强的生命力和特殊的适应性。

已确认的红景天超过二百个品种，当中大约二十多种为亚洲传统医学的常用药，例如小花红景天、大花红景天、蔷薇红景天、圣地红景天等。尤其是蔷薇红景天，已被广泛研究。红景天大多分布在北半球的高寒地带，大多数都生长在海拔3500—5000米左右的高山流石或灌木器丛林下。我国有73种，其中西藏占有32种，2个变种，但至今仍未有很好的开发利用。红景天主要以根和根茎入药，全株也可入药。

红景天具有抗缺氧、抗疲劳、增强耐力效用。能迅速提高血红蛋白与氧的结合能力，提高血氧饱和度，降低机体的耗氧量，增加运动耐力，恢复运动后疲劳。红景天一直为体育专门用品，可提升或保持运动员于比赛或训练期间的耐力。红景天具有抗菌作用。红景天内含有多量东莨菪碱、山萘酚等具有抗菌消炎成份；鞣质含量也最多，具收敛性，在粘膜表面起保护作用，制止过多的分泌、停止过量的出血，对肺部炎症引起的咳嗽、咳痰有疗效。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种从中药红景天中提取的化合物。

本发明的第二目的是提供一种从中药红景天中提取的式I化合物的制备方法。

本发明的第三目的是提供一种从中药红景天中提取的式I化合物在制药中的应用。

为了实现上述第一目的，本发明提供一种从中药红景天中提取的化合物，所述化合物的结构式如式I所示，

为了实现上述第二目的，本发明提供一种从中药红景天中提取的式I化合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，红景天药材加水提取2次，滤过，合并两次滤液，浓缩后用95％乙醇调至醇浓度60％，静置过夜；

步骤2，取上清液浓缩后用反相柱色谱分离，以5％～80％乙腈-水溶液进行梯度洗脱，收集40％乙腈洗脱流份，依次进行凝胶色谱、制备液相HPLC分离，得到本发明化合物。

为了实现上述第三目的，本发明提供一种从中药红景天中提取的式I化合物在制药中的应用。

优选地，式I化合物在制备抗氧化药物或抗血小板聚集药物中的应用。

优选地，所述药物按照药剂学上记载的方法制成制剂。

优选地，所述药物的制剂形式为液体制剂或固体制剂。

优选地，所述药物的制剂形式为注射剂、喷雾剂、气雾剂、霜剂、涂膜剂、贴剂或膏剂。

本发明还提供一种抗氧化药物或抗血小板聚集药物组合物，其含有治疗有效量的式I化合物和药学上可接受的载体。

本发明化合物具有抗氧化和抗血小板聚集的作用,能够在制备抗氧化药物或抗血小板聚集药物中应用。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的化合物的ESI-MS图；

图2为本发明实施例1制备的化合物的¹H NMR图；

图3为本发明实施例1制备的化合物的¹³C NMR图；

图4为本发明实施例1制备的化合物的HSQC图；

图5为本发明实施例1制备的化合物的HMBC图；

图6为本发明实施例1制备的化合物的ROESY图；

图7为本发明实施例1制备的化合物的¹H-¹H COSY图；

图8为本发明实施例1制备的化合物的结构式。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1化合物的制备方法

红景天药材加水提取2次，滤过，合并两次滤液，浓缩后用95％乙醇调至醇浓度60％，静置过夜，离心，取上清液浓缩后用反相C₁₈柱色谱(80×600mm，70μm)分离，以5％～80％乙腈-水溶液梯度洗脱，流速60mL/min，收集40％乙腈洗脱流份B，流份B经减压浓缩后，上Sephadex LH-20凝胶柱色谱(30×1500mm)纯化，用甲醇洗脱，每8mL收集一个流份，收集流份B-1经减压浓缩后，经制备液相HPLC(21.2×250mm，5μm)分离，采用C₁₈柱，以10％～40％乙腈-水溶液洗脱，流速20mL/min，检测波长为230、280和350nm，得到本发明化合物。

实施例2化合物结构鉴定

化合物为白色粉末，如图1所示，HR-ESI-MS(negative)给出m/z为307.1193[M-H]^-(理论计算值为307.1187)，进而确定化合物分子式为C₁₆H₂₀O₆。

根据图2的¹H NMR(400MHz，CD₃OD)谱数据显示，低场区有三个相互耦合的芳香质子信号：δ6.80(1H,d,J＝8.1Hz)，7.07(1H,d,J＝7.7Hz)和7.19(1H，s)组成一个ABX系统；有两个烯氢信号：δ7.59(1H,d,J＝15.9Hz)，6.35(1H,d,J＝15.9Hz)组成一个反式双键系统，提示该化合物可能含有反式咖啡酰基；高场区δ3.89(3H，s)处显示一个甲氧基信号。结合图3的¹³C NMR(100MHz，CD₃OD)有9个SP²杂化的碳信号：δ127.8，111.7，149.4，150.6，116.5，124.1，146.7，115.6，169.4，在图5的HMBC谱上可以看到烯氢质子信号δ7.59(1H,d,J＝15.9Hz)与δ169.4、111.7、124.1相关，δ6.35(1H,d,J＝15.9Hz)与δ127.8、169.4远程相关，甲氧基质子δ3.89(3H，s)与δ149.4相关，提示分子中含有一个阿魏酰基的结构单元，且在图6的ROESY谱中，明显的看到甲氧基质子信号δ3.89(3H，s)与苯环上质子δ7.19(1H，s)远程相关，进一步确证了甲氧基与苯环上δ149.4的季碳直接相连。除去1个C₆-C₃的阿魏酰基片段外，结构中还剩6个碳信号，其中5个亚甲基(δ65.4，29.6，26.8，25.9，35.2)和1个季碳(δ177.9)信号，该季碳信号(δ177.9)在¹³C NMR谱中没显示出来，但在HMBC谱中，可以看到δ2.31(2H,m)、δ1.65(2H,m)与δ177.9明显的相关信号，结合质谱对分子量的分析进一步确定了季碳δ177.9的存在。通过图4的HSQC、图5的HMBC和图7的¹H-¹HCOSY谱图，确定了该化合物的结构片段：-OCH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH。HMBC谱中，亚甲基质子δ4.18(2H,m)与δ169.4相关，表明上述片段与阿魏酰基以酯键相连。

综合以上分析，将该化合物鉴定为6-阿魏酰基己酸，英文名称为6-feruloyloxyhexanoic acid。

表1为本发明提供的式(I)所示化合物的核磁数据。其结构如下：

表1本发明提供的式(I)所示化合物的核磁数据

注：测试条件为氘代甲醇，¹H NMR 400MHz，¹³C NMR 100MHz。

实施例3清除DPPH自由基实验

1、试剂及仪器

DPPH(C₁₈H₁₂N₅O₆，批号S90790-379，美国Sigma-Aldrich公司)，无水乙醇(AR，北京化学试剂厂，批号：20130408)，VC(北京双鹤药业股份有限公司，批号：140530)。美国Molecular Devices公司Floxtstation 3钙流工作站。

2、化合物溶液的制备

精密称取受试药物45μg溶于无水乙醇1mL中，加入无水乙醇9mL，得4.5μg/mL的药物溶液。使用前将其稀释成1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5μg/mL的溶液。

3、方法步骤

于96孔酶标板中加入1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5μg/mL不同浓度药物溶液100μL和0.5mmol·L^-1的DPPH无水乙醇溶液100μL，振荡30s，室温反应30min，测定A492nm下的OD值。空白组为100μL的无水乙醇和100μL DPPH溶液，药物对照组为100μL的无水乙醇代替样品溶液，空白对照组以等体积的无水乙醇代替DPPH溶液和样品溶液。VC为阳性对照。清除率按下式计算：

清除率/％＝[1-(A_药物-A_药物对照)]/(A_空白-A_空白对照)×100％

4、结果

化合物表现出明显清除DPPH自由基作用，y＝9.8002x+1.5326，R²＝0.9827，IC50分别为4.95μg/mL，且浓度在1.5～4.5mg·L^-1时清除能力随着浓度的增大而增大，作用与VC相当，结果见表2。

表2化合物对对DPPH自由基的清除能力(n＝4)

实施例4家兔体外血小板聚集率测定

1、方法

家兔采用普鲁卡因局部麻醉，颈动脉插管放血，3.8％的枸橼酸钠溶液抗凝，以1000r/min离心10min，取富血小板血浆(PRP)，剩余部分以3000r/min离心，即取贫血小板血浆(PPP)，聚集诱导剂分别采用ADP(终浓度5.4μg/mL)和PAF(终浓度0.37μg/mL)。每管250μLPRP中加入不同浓度的药液10μL，对照组PRP中加入生理盐水10μL，温育5min，然后依次加入146μg/mL的ADP10μL和10μg/mL的PAF10μL，分别检测两种诱导剂诱导的1min、5min时的血小板聚集率和最大聚集率，并按下述公式计算血小板聚集抑制率。

聚集抑制率(％)＝(空白对照组最大聚集率-给药组最大聚集率)/空白对照组最大聚集率×100％

2、结果

2.1体外给药对PAF诱导家兔血小板聚集率的影响

结果表明，化合物体外给药终浓度为20、10、5、2.5μg/mL的各剂量对PAF诱导的家兔血小板最大聚集率均有明显的抑制作用，终浓度为20、10、5μg/mL的三个剂量还能显著抑制血小板1min和5min的聚集率，与空白对照组比较，差异有显著性(p＜0.01)，结果见表3。

表3化合物对PAF诱导家兔血小板聚集率的影响

**p＜0.01，vs Control

2.2体外给药对ADP诱导家兔血小板聚集率的影响

结果表明，化合物体外给药在终浓度为20、10μg/mL对ADP诱导的家兔血小板5min聚集率有一定的抑制作用，与空白对照组比较，差异有显著性(p＜0.05，0.01)。结果见表4。

表4化合物对ADP诱导家兔血小板聚集率的影响

*p＜0.05，**p＜0.01，vs Control

以上实施例仅为本发明的示例性实施例，不用于限制本发明，本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内，对本发明做出各种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.从中药红景天中提取的化合物，所述化合物的结构式如式I所示，

2.从中药红景天中提取的式I化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，红景天药材加水提取2次，滤过，合并两次滤液，浓缩后用95％乙醇调至醇浓度60％，静置过夜；

步骤2，取上清液浓缩后用反相柱色谱分离，以5％～80％乙腈-水溶液进行梯度洗脱，收集40％乙腈洗脱流份，依次进行凝胶色谱、制备液相HPLC分离，得到本发明化合物。

3.从中药红景天中提取的式I化合物在制药中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，式I化合物在制备抗氧化药物或抗血小板聚集药物中的应用。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述药物按照药剂学上记载的方法制成制剂。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为液体制剂或固体制剂。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为注射剂、喷雾剂、气雾剂、霜剂、涂膜剂、贴剂或膏剂。

8.抗氧化药物或抗血小板聚集药物组合物，其含有治疗有效量的式I化合物和药学上可接受的载体。