CN108495633A - 使用阿吡莫德治疗癌症的生物标记 - Google Patents

Abstract

本公开内容涉及使用阿吡莫德在具有过度表达小眼(MiT)转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的组合物和方法，以及相关的组合物和方法。

Description

使用阿吡莫德治疗癌症的生物标记

相关申请

本申请要求2016年1月21日提交的美国临时专利申请系列号62/281,341的优先权，其内容特此通过引用全部并入。

本公开内容的领域

本公开内容涉及使用阿吡莫德(apilimod)治疗癌症的组合物和方法。

本公开内容的背景

阿吡莫德，也称为STA-5326，以下称为“阿吡莫德”，被认为是IL-12与IL-23的强效的转录抑制剂。参见例如Wada等人Blood 109 (2007): 1156-1164。IL-12和IL-23是通常由免疫细胞如B细胞和巨噬细胞响应抗原刺激而产生的炎性细胞因子。自身免疫性病症和以慢性炎症为特征的其它病症部分地由这些细胞因子的不适当产生来表征。在免疫细胞中，通过阿吡莫德选择性抑制IL-12/IL-23转录近来显示受到阿吡莫德与磷脂酰肌醇-3-磷酸5-激酶(PIKfyve)的直接结合的介导。参见例如Cai等人Chemistry and Biol. 20 (2013):912-921。PIKfyve在Toll样受体信号转导中起作用，所述信号转导在先天免疫中是重要的。

基于其作为免疫调节剂和IL-12/IL-23的特异性抑制剂的活性，已经提出阿吡莫德可用于治疗自身免疫性和炎性疾病和病症。参见例如US 6,858,606和6,660,733(描述了一类嘧啶化合物，包括阿吡莫德，据称可用于治疗以IL-12或IL-23过度产生为特征的疾病和病症，如类风湿性关节炎、脓毒症、克罗恩病、多发性硬化症、银屑病或胰岛素依赖型糖尿病)。类似地，基于其抑制c-Rel或IL-12/23的活性，阿吡莫德被建议可用于治疗某些癌症，特别是在其中这些细胞因子据信在促进异常的细胞增殖作用方面起作用的癌症中。参见例如WO2006/128129和Baird等人, Frontiers in Oncology 3:1 (分别为2013年)。

三个阿吡莫德临床试验各自专注于其在自身免疫性和炎性疾病中的潜在功效。在患有银屑病、类风湿性关节炎和克罗恩病的患者中进行所述试验。在患有银屑病的患者中的开放标签临床研究的结论是，口服施用阿吡莫德显示免疫调节活性，其支持抑制IL-12/IL-23合成用于治疗TH1-和TH17-介导的炎性疾病。Wada等人, PLosOne 7:e35069 (2012年4月)。但是在类风湿性关节炎和克罗恩病中的对照试验的结果不支持阿吡莫德对IL-12/IL-23的抑制转化为任一这些适应症的临床改善的观点。在患有类风湿性关节炎的患者中的随机双盲安慰剂对照的阿吡莫德II期临床试验中，阿吡莫德未能改变滑液的IL-12与IL-23表达。Krauz等人, Arthritis & Rheumatism 64:1750-1755 (2012)。作者得出结论“结果不支持阿吡莫德对IL-12/IL-23的抑制能够在RA中诱导强有力的临床改善的观点”。类似地，用于治疗活动性(active)克罗恩病的阿吡莫德的随机双盲安慰剂对照试验得出以下结论：尽管耐受性良好，但阿吡莫德未表现出超越安慰剂的功效。Sands等人Inflamm Bowel Dis. 2010 Jul; 16(7):1209-18。

雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)途径是重要的细胞信号转导途径，其参与多种生理功能，包括细胞生长、细胞增殖、代谢、蛋白质合成和自体吞噬(La Plante等人Cell 2012, (149 (2), 第274-293页)。mTOR是整合显示氨基酸、应激、氧、能量和生长因子水平的胞内与胞外信号并调节对这些环境信号的细胞响应的激酶。mTOR失调已经牵涉了多种病症和疾病，包括癌症、肥胖、糖尿病和神经变性。已经探索了mTOR途径的某些组分作为用于治疗某些这些疾病的药物靶标。但是，疗效是有限的，例如在一些癌症的治疗中，并且一些mTOR抑制剂已经显示对代谢具有不利影响。结节性硬化症复合物肿瘤抑制基因TSC1与TSC2，是mTOR的负调节物。

本公开内容的概述

发明人先前已表明阿吡莫德在TSC裸细胞中是一种高度细胞毒性剂，在这些细胞中mTOR途径是组成型活性的。参见WO 2015/112888，其全部内容通过引用并入本文。发明人扩展其研究结果表明，许多癌细胞系对阿吡莫德-诱导的细胞毒性是敏感的。虽然B-细胞淋巴瘤对阿吡莫德是最为敏感的，但是出人意料地是，所述敏感性与c-Rel表达、IL-12表达或IL-23表达不相关。这是预料不到的，因为较早期的工作已提出阿吡莫德将可用于对抗其中c-Rel和/或IL-12/23表达在促进异常细胞增殖方面是至关重要的癌症。在进一步的研究中，相反，发明人证明阿吡莫德的细胞毒性源自其对胞内运输的抑制作用，这导致细胞凋亡增加。根据阿吡莫德的免疫调节活性(经由其对IL-12/23产生的抑制)，可能无法预测这种活性。

本公开内容部分基于令人惊讶的发现：转录因子TFEB提高对阿吡莫德的敏感性。TFEB是小眼(MiT)转录因子家族的成员，因此得出结论，鉴定为具有高水平的一种或多种MiT转录因子的癌症是用阿吡莫德治疗的很好的候选者。因此，本公开内容提供鉴定对阿吡莫德敏感的癌症的方法，所述方法包括测定得自癌症的癌细胞样品中一种或多种MiT转录因子的过度表达。在实施方案中，MiT转录因子选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF。在实施方案中，MiT转录因子选自TFEB和TFE3，或二者。

一方面，本公开内容还提供一种在具有过度表达一种或多种MiT转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的组合物，所述组合物包含治疗有效量的阿吡莫德，或其药学上可接受的盐。在实施方案中，阿吡莫德是二甲磺酸阿吡莫德。在实施方案中，组合物呈现为适合于口服或静脉内施用的形式。在实施方案中，组合物还包含至少一种另外的活性剂，其可选自治疗剂或非-治疗剂，或治疗剂和非-治疗剂的组合。在实施方案中，至少一种另外的活性剂是选自蛋白激酶抑制剂、基于铂的抗肿瘤剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷代谢抑制剂、烷化剂、嵌入剂、微管蛋白结合剂及其组合的治疗剂。在实施方案中，治疗剂是蛋白激酶抑制剂。在实施方案中，蛋白激酶抑制剂是帕唑帕尼或索拉非尼，或其组合。组合物还可包含经选择以改善阿吡莫德的一种或多种副作用的非-治疗剂。在实施方案中，非-治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。在实施方案中，非-治疗剂选自吲哚洛尔和利培酮。

在实施方案中，要治疗的癌症对标准治疗是顽固的，或是转移的。

在实施方案中，癌症选自非-霍奇金B细胞淋巴瘤、肾细胞癌、黑素瘤、透明细胞肉瘤、泡状软组织肉瘤或血管周上皮样细胞瘤。在实施方案中，癌症是肾癌。在实施方案中，肾癌选自透明细胞肾癌、移行细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤、和良性(非-癌性)肾肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。在实施方案中，肾细胞癌选自乳头状I型或II型、不染色细胞型、杂合型、嗜酸细胞瘤、易位型、血管肌脂瘤、嗜酸瘤细胞型、髓型和收集管癌。在实施方案中，肾癌含有TFEB易位。在实施方案中，TFEB易位是t(6;11) (p21; q12)易位。在实施方案中，肾癌具有希佩尔-林道(VHL)基因的突变。

一方面，本公开内容提供一种在具有过度表达一种或多种MiT转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效量的阿吡莫德，或包含阿吡莫德的组合物，其中阿吡莫德是阿吡莫德本身(即，阿吡莫德游离碱)，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、包合物、水合物、多晶型物、前药、类似物或衍生物。在一个实施方案中，阿吡莫德是阿吡莫德游离碱或二甲磺酸阿吡莫德。在实施方案中，所述方法还包括测定一种或多种MiT转录因子在得自受试者的生物样品(生物样品含有癌细胞)中表达的预处理步骤。MiT转录因子可选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF。在实施方案中，MiT转录因子选自TFEB和TFE3，或二者。

在实施方案中，所述方法还包括向受试者施用至少一种另外的活性剂。所述至少一种另外的活性剂可以是治疗剂或非治疗剂。所述至少一种另外的活性剂可以与阿吡莫德一起在单一剂型中施用，或与阿吡莫德在分开的剂型中施用。在实施方案中，所述至少一种另外的活性剂是选自蛋白激酶抑制剂、基于铂的抗肿瘤剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷代谢抑制剂、烷化剂、嵌入剂、微管蛋白结合剂、PD-1/PDL-1途径抑制剂及其组合的治疗剂。在实施方案中，治疗剂是蛋白激酶抑制剂。在实施方案中，蛋白激酶抑制剂是帕唑帕尼或索拉非尼，或其组合。在实施方案中，至少一种另外的活性剂是选自索拉非尼(Nexavar®)、舒尼替尼(Sutent®)、坦罗莫司(Torisel®)、依维莫司(Afinitor®)、贝伐单抗(Avastin®)、帕唑帕尼(Votrient®)、阿昔替尼(Inlya ®)及其组合的治疗剂。在实施方案中，治疗剂是PD-1/PDL-1途径抑制剂。在实施方案中，PD-1/PDL-1途径抑制剂选自派姆单抗(pembrolizumab) (Keytruda)、阿维鲁单抗(avelumab)、阿特朱单抗(atezolizumab)(MPDL3280A)、纳武单抗(nivolumab) (BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

在实施方案中，至少一种活性剂是经选择以改善阿吡莫德的一或多种副作用的非-治疗剂。在实施方案中，非-治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。在一个实施方案中，非-治疗剂选自吲哚洛尔和利培酮。在一个实施方案中，阿吡莫德组合物的剂型是口服剂型。在另一实施方案中，阿吡莫德组合物的剂型适于静脉内施用，施用通过单次注射或通过滴灌袋(drip bag)进行。

在一个实施方案中，所述受试者是人类癌症患者。在一个实施方案中，需要用阿吡莫德治疗的人类癌症患者是其癌症对标准化疗方案顽固的患者。在一个实施方案中，需要用阿吡莫德治疗的人类癌症患者是其癌症在用标准化疗方案治疗后复发的患者。在一个实施方案中，所述癌症是肾癌。在一个实施方案中，肾癌是移行细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤、和良性(非-癌性)肾肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。在一个实施方案中，肾癌是透明细胞肾细胞癌。

在一个实施方案中，标准化疗方案包括一种或多种选自依鲁替尼、利妥昔单抗、多柔比星、泼尼松龙、长春新碱、万珂(velcade)、环磷酰胺、地塞米松和依维莫司的治疗剂。

在一个实施方案中，该方法是使用包含阿吡莫德和用于治疗肾癌的化疗方案的联合疗法治疗肾癌的方法。在实施方案中，化疗方案包含PD-1/PDL-1途径抑制剂。在实施方案中，PD-1/PDL-1途径抑制剂选自派姆单抗(Keytruda, MK-3475)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MPDL3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

在另一个实施方案中，该方法是使用包含阿吡莫德和用于治疗肾癌的免疫疗法方案的联合疗法治疗肾癌的方法。在一个实施方案中，免疫疗法方案是白介素-2 (IL-2)方案或α-干扰素方案。在一个实施方案中，免疫疗法方案包含PD-1/PDL-1途径抑制剂。在实施方案中，PD-1/PDL-1途径抑制剂选自派姆单抗(Keytruda, MK-3475)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MPDL3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

在某些实施方案中，该方法是使用包含阿吡莫德和用于治疗肾癌的蛋白激酶抑制剂方案的联合疗法治疗肾癌的方法。在一个实施方案中，蛋白激酶抑制剂方案是索拉非尼、舒尼替尼、贝伐单抗、乐伐替尼(lenvatinib)、依维莫司。

附图简述

图1：在阿吡莫德处理后，SU-DHL-10和WSU-DLCL2 B-NHL系中的基因表达变化的热图表示。红色表示上调的基因，而蓝色表示下调的基因。

图2：对来自图1的通常上调的基因的基因本体分析揭示溶酶体相关基因富集。

图3：与DMSO处理的对照品(红色)比较，用200 nM (蓝色)阿吡莫德处理后在SU-DHL-6和SU-DHL-10中LysoTracker染色24和48小时。

图4：在用阿吡莫德(63 nM)处理2小时的SU-DHL-6细胞中通过免疫印迹测定的TFEB蛋白的核和细胞质水平。

图5：显示从CCLE (Barretina等人，2012)提取的跨肿瘤类型的相对TFEB mRNA水平的箱形图，具有基因中心的可靠多阵列分析-归一化的mRNA表达数据。

图6：过度表达GFP对照或TFEB的稳定的CA46 (TFEB-缺乏的B-NHL)库用10-点阿吡莫德剂量响应处理72小时。

图7A：在5天测定中，不同的癌细胞系对阿吡莫德的敏感度。

图7B：在5天测定中，肾细胞系RCC-ER和正常结肠细胞系CCD841CoN对阿吡莫德的实例剂量响应。

图8：在5天测定中，阿吡莫德对比护理标准药品在透明细胞RCC细胞系(n = 5)中的抗-增殖活性。*值表示几何平均数。

本公开内容的详细描述

本公开内容提供在需要此类治疗的受试者，优选人类受试者中与使用阿吡莫德治疗癌症相关的组合物和方法。本公开内容通常涉及使用阿吡莫德以治疗特征为一种或多种MiT转录因子，例如TFEB、TFE3、TFEC和MITF的过度表达的癌症，其在本文显示对阿吡莫德-诱导的细胞毒性是特别敏感的。特征可为过度表达MiT转录因子的癌症的非-限制性实例包括非-霍奇金B细胞淋巴瘤、肾细胞癌、黑素瘤、透明细胞肉瘤、泡状软组织肉瘤和血管周上皮样细胞瘤。本公开内容还提供鉴定对阿吡莫德敏感的癌症的方法，所述方法包括测定选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF的一种或多种MiT转录因子的表达。

此外，本公开内容提供基于使用阿吡莫德和至少一种另外的治疗剂的联合疗法治疗癌症的新治疗方法。此处描述的联合疗法利用当与其它抗癌剂联合时显示出提供协同作用的阿吡莫德的独特细胞毒活性。

如本文中所用的，术语“阿吡莫德”可指阿吡莫德本身(即，阿吡莫德游离碱)，或可涵盖如下所述的阿吡莫德的药学上可接受的盐、溶剂合物、包合物、水合物、多晶型物、代谢物、前药、类似物或衍生物。阿吡莫德的结构显示在式I中：

(I)

阿吡莫德的化学名称是2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N'-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶(IUPAC名称：(E)-4-(6-(2-(3-甲基亚苄基)肼基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)嘧啶-4-基)吗啉)，并且CAS编号为541550-19-0。

阿吡莫德可以例如根据美国专利号7,923,557和7,863,270以及WO 2006/128129中描述的方法来制备。

如本文中所用的，术语"药学上可接受的盐"是由例如酸和阿吡莫德的碱性基团形成的盐。示例性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、苯磺酸盐(besylate)、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(例如1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。

术语"药学上可接受的盐"还指的是由具有酸性官能团，如羧酸官能团的阿吡莫德组分与药学上可接受的无机或有机碱制备的盐。

术语"药学上可接受的盐"还指的是由具有碱性官能团，如氨基官能团的阿吡莫德与药学上可接受的无机或有机酸制备的盐。

本文所述的化合物的盐可以由母体化合物通过常规化学方法来合成，例如在Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Hemrich Stalil (编者), Camille G. Wermuth (编者), ISBN: 3-90639-026-8, 2002年8月中描述的方法。通常，此类盐可以通过使母体化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N'-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)与适当的酸在水中或在有机溶剂中或在二者的混合物中反应来制备。

本文所述的化合物的一种盐形式可以通过技术人员熟知的方法转化成游离碱和任选转化成另一种盐形式。例如，可以通过使盐溶液通过含有胺固定相的柱(例如Strata-NH₂柱)来形成该游离碱。或者，该盐的水溶液可以用碳酸氢钠处理以分解该盐并沉淀出该游离碱。该游离碱可以随后使用常规方法与另一种酸混合。

如本文中所用的，术语"多晶型物"指的是本公开内容的化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N’-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)或其络合物的固体结晶形式。相同化合物的不同多晶型物可以展现出不同的物理、化学和/或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于稳定性(例如，对热或光)、可压性和密度(在制剂和产品制造中是重要的)，以及溶解速率(这可以影响生物利用度)。稳定性方面的差异可能来自于化学反应性(例如不同的氧化，使得剂型在包含一种多晶型物时比包含另一种多晶型物时更快速地褪色)或机械特性(例如，由于动力学有利的多晶型物转化成热力学更稳定的多晶型物，片剂在储存时破裂)或二者(例如，一种多晶型物的片剂更容易在高湿度下破碎)的变化。多晶型物的不同物理性质可影响它们的加工。例如，一种多晶型物与另一种多晶型物相比可能更可能形成溶剂化物或可能更难以过滤或洗涤至不含杂质，归因于例如其颗粒的形状或尺寸分布。

如本文中所用的，术语"水合物"指的是本公开内容的化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N’-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)或其盐，其进一步包括化学计算量或非化学计算量的通过非共价分子间力结合的水。

如本文中所用的，术语"包合物"指的是呈晶格形式的本公开内容的化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N’-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)或其盐，其包含具有捕获在其中的客体分子(例如溶剂或水)的空间(例如，通道)。

如本文中所用的，术语"前药"指的是本文所述的化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N’-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)的衍生物，其可以在生物条件(体外或体内)下水解、氧化或以其它方式反应以提供本公开内容的化合物。前药可以仅在生物条件下在此类反应时变为活性的，或它们可以以其未反应形式具有活性。在本公开内容中关注的前药的实例包括但不限于本文所述的化合物(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N'-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)的类似物或衍生物，其包含可生物水解部分，如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。前药的其它实例包括包含-NO、-NO₂、-ONO或-ONO₂部分的本文公开的任一式的化合物的衍生物。通常可以使用熟知方法，如由Burger的Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995), 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff编著, 第5版)描述的那些方法制备前药。

如本文中所用的，术语“溶剂化物”或"药学上可接受的溶剂化物"是一个或多个溶剂分子与本文公开的化合物之一(例如，2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N’-(3-甲基-亚苄基)-肼基]-6-(吗啉-4-基)-嘧啶)缔合所形成的溶剂化物。术语溶剂化物包括水合物(例如，半水合物、一水合物、二水合物、三水合物、四水合物等等)。

如本文中所用的，术语“类似物”指的是结构上类似于另一种但是在组成上略微不同的化合物(如一个原子被不同元素的原子替代，或存在特定官能团，或一个官能团被另一个官能团替代)。由此，类似物是在功能和外观方面而非在结构或来源方面类似于参照化合物或可与之相比的化合物。本文所用的术语“衍生物”指的是具有共同的核心结构并被本文所述的各种基团取代的化合物。

治疗方法和诊断方法

本公开内容提供在具有过度表达小眼(MiT)转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的方法。在实施方案中，所述方法包括将治疗有效量的阿吡莫德，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、包合物、水合物、多晶型物、前药、类似物或衍生物施用于受试者。在实施方案中，所述癌症过度表达选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF的MiT转录因子。在实施方案中，MiT转录因子选自TFEB和TFE3，或二者。

在实施方案中，本公开内容还提供鉴定对阿吡莫德治疗敏感的癌症的诊断方法，该方法包括测定癌症的样品中一种或多种MiT转录因子的表达的步骤，其中一种或多种MiT转录因子的过度表达指示癌症是对阿吡莫德敏感的。

在实施方案中，所述癌症是脑癌、神经胶质瘤、肉瘤、乳腺癌、肺癌、非小细胞肺癌、间皮瘤、阑尾癌、泌尿生殖系统癌、肾细胞癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸癌、阴茎癌、宫颈癌、卵巢癌、希佩尔-林道病、头颈部癌、胃肠癌、肝细胞癌、胆囊癌、食道癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、神经内分泌肿瘤、甲状腺肿瘤、垂体肿瘤、肾上腺肿瘤、恶性血液肿瘤或白血病。

在实施方案中，所述癌症是具有TFE3易位的肾癌、泡状软组织肉瘤或血管周上皮样细胞瘤。

在实施方案中，癌症是具有FLCN失活性突变的肾癌、结直肠癌、子宫内膜癌或胃癌。

在一个实施方案中，肾癌是肾细胞癌(RCC)。在一个实施方案中，肾细胞癌选自透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌、不染色细胞肾细胞癌、其它罕见类型的肾细胞癌(例如，收集管RCC、多房性囊性RCC、髓样癌、粘液性管状和梭形细胞癌、神经母细胞瘤-相关RCC、未分类肾细胞癌)和转移性RCC。在一个实施方案中，肾癌选自移行细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤、和良性(非-癌性)肾肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。在实施方案中，RCC是选自乳头状I型或II型、不染色细胞型、杂合型、嗜酸细胞瘤、易位型、血管肌脂瘤、嗜酸瘤细胞型、髓型和收集管癌的亚型。

在一个实施方案中，癌症是淋巴瘤。在一个实施方案中，淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，B细胞淋巴瘤选自霍奇金B细胞淋巴瘤和非-霍奇金B细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，B细胞淋巴瘤是选自DLBCL、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤(MZL)或粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、小细胞淋巴细胞性淋巴瘤(与慢性淋巴细胞性白血病重叠)和套细胞淋巴瘤的非霍奇金B细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，B细胞淋巴瘤是选自伯基特淋巴瘤、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤(其可以表现为瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenström macroglobulinemia))、淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤(NMZL)、脾边缘区淋巴瘤(SMZL)、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、淋巴瘤样肉芽肿、T细胞/组织细胞富集的大B细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性皮肤弥漫性大B细胞淋巴瘤、腿型(原发性皮肤DLBCL，腿型)、老年人的EBV阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤、与炎症相关的弥漫性大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、ALK阳性大B细胞淋巴瘤和浆母细胞性淋巴瘤的非霍奇金B细胞淋巴瘤。

在一个实施方案中，所述癌症是黑素瘤。黑素瘤是从黑素细胞(皮肤中含有色素的细胞)形成的一种类型的皮肤癌，黑素细胞在皮肤的表皮中发现。表皮是组成皮肤的两层主要细胞的上层或外层并通过基底膜与皮肤的更深层分离。当皮肤癌例如黑素瘤越来越发展时，它通常渗透表皮并通过膜生长进入皮肤的更深层，以获得血液供应，这使得肿瘤能够转移。

有4种基本类型的黑素瘤。它们中的3种原位开始— 意味着它们仅占据皮肤的顶层，并且有时成为侵袭性的；第四种从一开始就是侵袭性的。侵袭性黑素瘤是更严重的，因为它们渗透深入到皮肤中并可扩散至身体的其它区域。

浅表扩散性黑素瘤是迄今为止最常见的类型，占全部病例的约70%。这在年青人中是最常见的一种类型。顾名思义，这种黑素瘤在更深地渗透之前沿着皮肤的表层生长相当长的一段时间。

恶性小痣类似于浅表扩散性类型，因为它也维持接近皮肤表面相当一段时间，并且通常表现为扁平或轻度升高的斑驳的褐色、棕色或深棕色变色。这种类型的原位黑素瘤最常见于老年人中，在面部、耳朵、手臂和上躯干上长期日光暴露、损伤的皮肤上产生。当这种癌症成为侵袭性时，其被称为恶性小痣黑素瘤。

肢端雀斑黑素瘤在更深入地渗透之前也在表面上扩散。其完全不同于其它的，即使因为它通常在指甲下或在脚底或手掌上显示为黑色或棕色变色。这种类型的黑素瘤有时在深色皮肤的人中发现，并可能往往比浅表扩散性黑素瘤和恶性小痣发展更快。在非裔美国人和亚洲人中，这是最常见的黑素瘤，但在白种人中最不常见。

结节性黑素瘤通常在第一次诊断时即为侵入性的。恶性肿瘤在变成了一个肿块时才被发现。它通常是黑色的，但有时是蓝色、灰色、白色、棕色、褐色、红色或皮肤色。

在一个实施方案中，癌症是结直肠癌。结直肠癌(也称为结肠癌、直肠癌，或肠癌)是在结肠或直肠中产生的癌症。结肠癌根据TNM分期系统分期。TNM系统是最广泛使用的癌症分期系统之一并被国际癌症控制联盟(UICC)和美国癌症联合委员会(AJCC)采纳。TNM系统基于原发性瘤(T)的尺寸和/或程度(延伸)，扩散到附近的淋巴结(N)的量，和通过癌细胞扩散到身体其它部分形成的转移(M)或继发性瘤的存在。一个数字被加入到每个字母以指示原发性瘤的尺寸和/或程度和癌症扩散程度。

本公开内容还提供包括治疗癌症的联合疗法的方法。如本文中所用的，“联合疗法”或“共-疗法”包括施用治疗有效量的阿吡莫德，作为意在由阿吡莫德与另外的活性剂的共同作用提供有益效果的特定治疗方案的一部分。至少一种另外的作用剂可以是治疗剂或非-治疗剂。联合的有益效果包括，但不限于，由治疗化合物的联合产生的药代动力学或药效学共同作用。联合的有益效果也可涉及减轻与联合中的另一种作用剂相关的毒性、副作用或不良事件。“联合疗法”并非意在涵盖作为单独的单一疗法方案的一部分施用两种或更多种的这些治疗化合物，所述单一疗法方案偶然和任意地导致并未设想或预测的有益效果。

至少一种另外的活性剂可以是治疗剂，例如抗癌剂或癌症化疗剂，或非-治疗剂，及其组合。对于治疗剂，联合的有益效果包括，但不限于，治疗活性化合物的联合所产生的药代动力学或药效学共同作用。对于非治疗剂，联合的有益效果可以涉及减轻与联合中的治疗活性剂相关的毒性、副作用或不良事件。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂是减轻阿吡莫德组合物的一种或多种副作用的非治疗剂，所述一种或多种副作用选自恶心、呕吐、头痛、头晕(dizziness)、眩晕(lightheadedness)、嗜睡和应激中的任一种。在该实施方案的一个方面，该非治疗剂是血清素受体(也称为5-羟色胺受体或5-HT受体)的拮抗剂。在一方面，所述非治疗剂是5-HT3或5-HT1a受体的拮抗剂。在一方面，所述非治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。在另一方面，所述非治疗剂选自吲哚洛尔和利培酮。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是治疗剂。在一个实施方案中，治疗剂是如下更详细描述的抗癌剂。

在联合疗法的情况下，施用阿吡莫德，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、包合物、水合物、多晶型物、代谢物、前药、类似物或衍生物，可以与一种或多种另外的活性剂的施用同时或相继进行。在另一实施方案中，联合疗法的不同组分的施用可以以不同的频率进行。所述一种或多种另外的作用剂可以在施用本公开内容的化合物之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用。

所述一种或多种另外的活性剂可以配制用于与阿吡莫德一起在单一剂型中共同施用，如本文中更详细地描述的。一种或多种另外的活性剂可以与包含阿吡莫德的剂型分开施用。当该另外的活性剂与阿吡莫德分开施用时，其可以通过与阿吡莫德相同或不同的施用途径进行。

优选地，施用包含阿吡莫德与一种或多种另外的活性剂的联合的组合物在受治疗的受试者中提供协同响应。在这方面，术语“协同”指的是该联合的功效比任一单独的单一疗法的累加效应更有效。与在该联合之外的其剂量和/或频率相比，根据本公开内容的联合疗法的协同效应可以允许使用该联合中至少一种药剂的更低剂量和/或更低频率地施用。联合的其它有益效果可表现为避免或减少与使用该联合中单独的任一疗法(也称为单一疗法)相关的不良或不想要的副作用。

“联合疗法”还包括与非药物疗法(例如手术或放射治疗)进一步组合施用本公开内容的化合物。当该联合疗法进一步包括非药物疗法时，所述非药物疗法可以在任何合适的时间进行，只要实现来自该治疗性化合物与非药物疗法的联合的共同作用的有益效果。例如，在适当的情况下，当从施用治疗性化合物中暂时(可能数天或甚至数周)移除非药物疗法时，仍实现该有益效果。

非药物疗法可以选自化疗、放射疗法、激素疗法、抗雌激素疗法、基因疗法、手术(例如根治性肾切除、部分肾切除、腹腔镜和机器人手术)、射频消融和冷冻消融。例如，非药物疗法是除去卵巢(例如，降低身体中雌激素的水平)、胸腔穿刺术(例如，从胸部移除流体)、穿刺术(例如，从腹腔移除流体)、手术切除或收缩血管肌脂瘤、肺移植(并任选采用抗生素以防止移植造成的感染)、或氧疗法(例如，通过包含放置在两个鼻孔中的两个小塑料管或叉管的鼻插管，通过贴合在鼻子与嘴上的面罩，或通过经颈部前部插入气管的小管，也称为经气管氧疗法)。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂是减轻阿吡莫德的一种或多种副作用的药剂，所述副作用选自恶心、呕吐、头痛、头晕、眩晕、嗜睡和应激中的任一种。在该实施方案的一个方面，所述另外的作用剂是血清素受体(也称为5-羟色胺受体或5-HT受体)的拮抗剂。在一方面，另外的作用剂是5-HT₃或5-HT_1a受体的拮抗剂。在一方面，所述作用剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。在另一方面，所述作用剂选自吲哚洛尔和利培酮。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是抗癌剂。在其中癌症是肾癌的实施方案中，抗癌剂可选自VEGF抑制剂例如舒尼替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗、索拉非尼、卡博替尼(cabozantinb)和阿昔替尼，或mTOR抑制剂例如依维莫司或坦罗莫司。

在一个实施方案中，抗癌剂选自紫杉酚、长春新碱、多柔比星、坦罗莫司、卡铂、奥法木单抗、利妥昔单抗及其组合。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂选自苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、多柔比星、美沙拉秦、沙利度胺、来那度胺、坦罗莫司、依维莫司、氟达拉滨、fostamatinib、紫杉醇、多西他赛、奥法木单抗、利妥昔单抗、地塞米松、泼尼松、CAL-101、替伊莫单抗、托西莫单抗、硼替佐米、喷司他丁、内皮抑素或其组合。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂选自Afinitor (依维莫司)、阿地白介素(Aldesleukin)、Avastin (贝伐单抗)、阿昔替尼、贝伐单抗、依维莫司、IL-2 (阿地白介素)、Inlyta (阿昔替尼)、白介素-2 (阿地白介素)、Nexavar (甲苯磺酸索拉非尼)、帕唑帕尼盐酸盐、Proleukin (阿地白介素)、甲苯磺酸索拉非尼、苹果酸舒尼替尼、Sutent (苹果酸舒尼替尼)、坦罗莫司、Torisel (坦罗莫司)、Votrient (帕唑帕尼盐酸盐)或其组合。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂涉及靶向疗法，其中治疗靶向促进癌症生长和存活的癌症的特异性基因、蛋白或组织环境。这种类型的治疗阻断癌细胞的生长和扩散，同时限制对健康细胞的损害。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂涉及抗-血管生成疗法，其中治疗专注于停止血管生成(其是制造新血管的方法)。由于肿瘤需要经血管递送的营养素以生长和扩散，抗-血管生成疗法的目的是“饿死”肿瘤。一种抗-血管生成药物，贝伐单抗(Avastin)，已显示出减慢患有转移性肾癌的人群的肿瘤生长。贝伐单抗与干扰素联合减慢肿瘤的生长和扩散。

在一个实施方案中，至少一种另外的作用剂涉及免疫疗法，也称为生物疗法，其经设计促进人体对抗癌症的自然防御。它使用通过身体或者在实验室中制造的材料以改善、靶向或恢复免疫系统功能。例如，白介素-2 (IL-2)是已用来治疗肾癌的药物，以及AM0010和白介素-15。它们是由白细胞产生的称为细胞因子的细胞激素并在免疫系统功能(包括肿瘤细胞的破坏)中是重要的。α-干扰素是用来治疗已扩散的肾癌的另一种类型的免疫疗法。干扰素似乎改变癌细胞表面上的蛋白并减慢它们的生长。对于晚期肾癌患者，IL-2和α-干扰素与化学疗法联合的许多联合疗法是比IL-2或干扰素单独更有效的。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是PD-1/PDL-1途径抑制剂。在实施方案中，PD-1/PDL-1途径抑制剂选自派姆单抗(Keytruda, MK-3475)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MPDL3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是检查点抑制剂。用这些化合物治疗通过靶向用作对免疫响应的检查和平衡的分子起作用。通过阻断这些抑制分子或者激活刺激分子，这些治疗被设计以释放或增强现已存在的抗-癌免疫响应。在实施方案中，检查点抑制剂可选自抗体例如PD-1、抗-CD27、B7-H3、KIR、LAG-3、4-1BB/CD137、GITR、派姆单抗(Keytruda，PD-1抗体)、MPDL3280A (PD-L1抗体)、varlilumab (CDX-1127，抗-CD27抗体)、MGA217 (靶向B7-H3的抗体)、lirilumab (KIR抗体)、BMS-986016 (LAG-3抗体)、urelumab(4-1BB/CD137抗体)、抗-TIM3 (TIM3抗体)、MEDI-0562 (OX40抗体)、SEA-CD40 (CD40抗体)、TRX518 (GITR抗体)和MK-4166 (GITR抗体)。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是经设计以引发针对瘤-特异性或瘤-相关抗原的免疫响应，促进免疫系统攻击携带这些抗原的癌细胞的癌症疫苗。在实施方案中，癌症疫苗可选自AGS-003、DCVax和NY-ESO-1。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是免疫刺激剂，例如用来激活免疫系统以攻击癌细胞的重组蛋白。在实施方案中，免疫刺激剂是denenicokin (重组IL-21)。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是调节免疫系统以促进癌细胞的消除的小分子。在实施方案中，小分子可选自epacadostat (IDO抑制剂)和PLX3397 (CSF-1R的抑制剂)。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂可以是已从患者移出的患者自身的免疫细胞，一般用化学品修饰或处理以增强它们的活性，然后为改善免疫系统的抗-癌响应的目的再次引入患者。

在本文描述的方法的情况下，施用于受试者的阿吡莫德的量是治疗有效量。术语“治疗有效量”指的是足以治疗所治疾病或病症、改善其症状、减轻其严重程度或减少其持续时间，或增强或改善另一疗法的治疗效果，或足以在受试者中表现出可检测的治疗效果的量。在一个实施方案中，阿吡莫德组合物的治疗有效量是有效抑制PIKfyve激酶活性的量。

阿吡莫德的有效量可以为大约0.001 mg/kg至大约1000 mg/kg、大约0.01 mg/kg至大约100 mg/kg、大约10 mg/kg至大约250 mg/kg、大约0.1 mg/kg至大约15 mg/kg的范围；或其中该范围的下限为0.001 mg/kg至900 mg/kg之间的任意量且该范围的上限为0.1mg/kg至1000 mg/kg之间的任意量的任何范围(例如，0.005 mg/kg至200 mg/kg、0.5mg/kg至20 mg/kg)。如本领域技术人员所公认的，有效剂量还将根据治疗的疾病、施用途径、赋形剂使用以及与其它治疗性治疗(如使用其它药剂)共同使用的可能性而变化。参见例如美国专利号7,863,270，其通过引用并入本文。

在更具体的方面，以30-1000 mg/天(例如30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、275或300 mg/天)的剂量方案施用阿吡莫德至少1周(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、36、48或更多周)。优选地，阿吡莫德以100-1000mg/天的剂量方案施用4或16周。替代地或随后地，阿吡莫德以每天两次100 mg-300mg的剂量方案施用8周，或任选52周。替代地或随后地，阿吡莫德组合物以每天两次50 mg-1000 mg的剂量方案施用8周，或任选52周。

有效量的阿吡莫德组合物可以每天一次、或每天两次至五次、每天最多两次或最多三次，或每天最多八次施用。在一个实施方案中，所述阿吡莫德组合物每天三次、每天两次、每天一次施用，在3周周期中施用十四天(每天四次、每天三次或每天两次、或每天一次)和停药7天，在3周周期中最多施用五天或七天(每天四次、每天三次或每天两次、或每天一次)和停药14-16天，或每两天一次，或一周一次，或每两周一次，或每三周一次施用。

根据本文描述的方法，“有需要的受试者”是患有肾癌的受试者，或相对于大多数人具有提高的发展肾癌的风险的受试者。有需要的受试者可以是对癌症的现有可利用的疗法“无响应”或“顽固”的受试者。在这方面，术语“无响应”和“顽固”指的是受试者对治疗的响应在临床上不足以缓解与该疾病或病症相关的一种或多种症状。在此处描述的方法的一个方面，有需要的受试者是患有癌症的受试者，其癌症对于标准疗法是顽固的，或者其癌症在标准治疗后复发。

“受试者”包括哺乳动物。哺乳动物可以是例如任何哺乳动物，例如人、灵长类动物、脊椎动物、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，该哺乳动物是人。术语“患者”指的是人类受试者。

本公开内容还提供了用于治疗本文所述的肾癌的单一疗法。本文所用的“单一疗法”指的是向有需要的受试者施用单一的活性或治疗性化合物。

如本文所用的，“治疗”、“处理”或“医治”描述了为了抗击疾病、病况或病症的目的对患者进行的管理和护理，并包括施用阿吡莫德以缓解疾病、病况或病症的症状或并发症，或消除该疾病、病况或病症。

如本文所用的，“预防”、“防止”或“阻止”描述了减少或消除疾病、病况或病症的症状或并发症的发作，并包括施用阿吡莫德以减少疾病、病况或病症的症状的发作、发展或复发。

在一个实施方案中，施用阿吡莫德导致消除了所治疗的癌症的症状或并发症，但是，消除癌症并不是必须的。在一个实施方案中，降低了所述症状的严重程度。在癌症的情况下，此类症状可以包括严重程度或进展的临床指标，包括肿瘤分泌生长因子、降解细胞外基质、变得血管化、丧失对毗邻组织的粘附或转移的程度，以及转移灶的数量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致肿瘤尺寸的减小。肿瘤尺寸的减小也可被称为“肿瘤消退”。优选地，在治疗后，肿瘤尺寸相对于其治疗前的尺寸减小5%或更多；更优选地，肿瘤尺寸减小10%或更多；更优选地，减小20%或更多；更优选地，减小30%或更多；更优选地，减小40%或更多；甚至更优选地，减小50%或更多；且最优选地，减小超过75%或更多。肿瘤的尺寸可以通过任何可再现的测量手段来测量。可以以肿瘤直径来测量肿瘤的尺寸。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致肿瘤体积的减小。优选地，在治疗后，肿瘤体积相对于其治疗前的尺寸减小5%或更多；更优选地，肿瘤体积减小10%或更多；更优选地，减小20%或更多；更优选地，减小30%或更多；更优选地，减小40%或更多；甚至更优选地，减小50%或更多；且最优选地，减小超过75%或更多。肿瘤体积可以通过任何可再现的测量手段来测量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致肿瘤数量的降低。优选地，在治疗后，肿瘤数量相对于治疗前的数量减少5%或更多；更优选地，肿瘤数量减少10%或更多；更优选地，减少20%或更多；更优选地，减少30%或更多；更优选地，减少40%或更多；甚至更优选地，减少50%或更多；且最优选地，减少超过75%。肿瘤数量可以通过任何可再现的测量手段来测量。肿瘤的数量可以通过计数肉眼可见或在规定放大倍数下可见的肿瘤来测量。所述规定放大倍数优选为2x、3x、4x、5x、10x或50x。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致在远离肿瘤原发部位的其它组织或器官中转移病灶数量的降低。优选地，在治疗后，转移病灶的数量相对于治疗前的数量减少5%或更多；更优选地，转移病灶的数量减少10%或更多；更优选地，减少20%或更多；更优选地，减少30%或更多；更优选地，减少40%或更多；甚至更优选地，减少50%或更多；且最优选地，减少超过75%。转移病灶的数量可以通过任何可再现的测量手段来测量。转移病灶的数量可以通过计数肉眼可见或在规定放大倍数下可见的转移病灶来测量。所述规定放大倍数优选为2x、3x、4x、5x、10x或50x。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致所治疗受试者群体的平均存活时间比接受单独载体的群体增加。优选地，平均存活时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；和最优选地，超过120天。群体的平均存活时间的增加可以通过任何可再现的手段来测量。群体的平均存活时间的增加可例如通过计算在用活性化合物开始治疗后群体存活的平均时间长度测量。群体的平均存活时间的增加也可例如，通过计算在用活性化合物完成第一轮治疗后群体存活的平均时间长度测量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致治疗受试者的群体的平均存活时间比未治疗受试者的群体增加。优选地，平均存活时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；和最优选地，超过120天。群体的平均存活时间的增加可以通过任何可再现的手段来测量。群体的平均存活时间的增加可，例如，通过计算在用活性化合物开始治疗后群体存活的平均时间长度测量。群体的平均存活时间的增加也可，例如，通过计算在用活性化合物完成第一轮治疗后群体存活的平均时间长度测量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致治疗受试者群体的平均存活时间比接受不是阿吡莫德的药物的单一疗法的群体增加。优选地，平均存活时间增加超过30天；更优选地，超过60天；更优选地，超过90天；和最优选地，超过120天。群体的平均存活时间的增加可以通过任何可再现的手段来测量。群体的平均存活时间的增加可例如，通过计算在用活性化合物开始治疗后群体存活的平均时间长度测量。群体的平均存活时间的增加也可例如，通过计算在用活性化合物完成第一轮治疗后群体存活的平均时间长度测量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致治疗受试者群体的死亡率比接受单独载体的群体降低。根据本文所述的方法治疗病症、疾病或病况可导致治疗受试者的群体的死亡率比未治疗的群体降低。根据本文所述的方法治疗病症、疾病或病况可导致治疗受试者群体的死亡率比接受不是阿吡莫德的药物的单一疗法的群体降低。优选地，死亡率降低超过2%；更优选地，超过5%；更优选地，超过10%；和最优选地，超过25%。治疗受试者群体的死亡率的降低可以通过任何可再现的手段来测量。群体死亡率的降低可例如，通过计算在用活性化合物开始治疗后每单位时间群体疾病-相关死亡的平均数测量。群体死亡率的降低也可例如，通过计算在用活性化合物完成第一轮治疗后每单位时间群体疾病-相关死亡的平均数测量。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致肿瘤生长率降低。优选地，在治疗后，肿瘤生长率相对于治疗前的数目减少至少5%；更优选地，肿瘤生长率减少至少10%；更优选地，减少至少20%；更优选地，减少至少30%；更优选地，减少至少40%；更优选地，减少至少50%；甚至更优选地，减少至少50%；和最优选地，减少至少75%。肿瘤生长率可以通过任何可再现的测量手段来测量。肿瘤生长率可根据每单位时间瘤直径的变化测量。在一个实施方案中，在治疗后，瘤生长率可以是约零且被测定以维持相同的尺寸，例如，瘤停止生长。

根据本文所述的方法治疗癌症可以导致肿瘤再生长的减少。优选地，在治疗后，肿瘤再生长是少于5%；更优选地，肿瘤再生长是少于10%；更优选地，少于20%；更优选地，少于30%；更优选地，少于40%；更优选地，少于50%；甚至更优选地，少于50%；和最优选地，少于75%。肿瘤再生长可以通过任何可再现的测量手段来测量。肿瘤再生长例如通过测量之前经治疗的肿瘤收缩后的肿瘤直径增加来测量。肿瘤再生长的减少通过肿瘤在治疗停止后未能再发生来指示。

根据本文所述的方法治疗或预防细胞增殖病症可导致细胞增殖速率的减少。优选地，治疗后，细胞增殖速率减少至少5%；更优选地，至少10%；更优选地，至少20%；更优选地，至少30%；更优选地，至少40%；更优选地，至少50%；甚至更优选地，至少50%；和最优选地，至少75%。细胞增殖速率可以通过任何可再现的测量手段来测量。细胞增殖速率例如通过测量组织样品中每单位时间分裂细胞的数目测量。

根据本文所述的方法治疗或预防细胞增殖病症可导致增殖细胞的比例减少。优选地，在治疗后，增殖细胞的比例减少至少5%；更优选地，至少10%；更优选地，至少20%；更优选地，至少30%；更优选地，至少40%；更优选地，至少50%；甚至更优选地，至少50%；和最优选地，至少75%。增殖细胞的比例可以通过任何可再现的测量手段来测量。优选地，增殖细胞的比例，例如，通过量化相对于组织样品中未分裂细胞的数目的分裂细胞的数目测量。增殖细胞的比例可以等同于有丝分裂指数。

根据本文所述的方法治疗或预防细胞增殖病症可导致细胞增殖的面积或区域大小的减少。优选地，在治疗后，细胞增殖的面积或区域大小相对于其治疗前的大小减少至少5%；更优选地，减少至少10%；更优选地，减少至少20%；更优选地，减少至少30%；更优选地，减少至少40%；更优选地，减少至少50%；甚至更优选地，减少至少50%；和最优选地，减少至少75%。细胞增殖的面积或区域大小可以通过任何可再现的测量手段来测量。细胞增殖的面积或区域大小可作为细胞增殖的面积或区域的直径或宽度测量。

根据本文所述的方法治疗或预防细胞增殖病症可导致具有异常外观或形态学的细胞的数量或比例减少。优选地，在治疗后，具有异常形态学的细胞的数量相对于其治疗前的大小减少至少5%；更优选地，减少至少10%；更优选地，减少至少20%；更优选地，减少至少30%；更优选地，减少至少40%；更优选地，减少至少50%；甚至更优选地，减少至少50%；和最优选地，减少至少75%。异常细胞外观或形态学可以通过任何可再现的测量手段来测量。异常细胞形态学可通过显微镜检查，例如，使用倒置组织培养显微镜测量。异常细胞形态学可采取核多形性的形式。

如本文所用的，术语“选择性”意味着在一个群体中比在另一个群体中倾向于以更高的频率发生。比较的群体可以是细胞群体。优选地，与正常细胞相比，阿吡莫德选择性作用于过度增殖细胞或不正常增殖细胞。本文中所用的“正常细胞”是不能被归类为“细胞增殖性病症”的部分的细胞。正常细胞缺乏失调或不正常的生长，或两者，其可导致不希望的病况或疾病的发展。优选地，正常细胞具有功能正常的细胞周期检查点控制机制。优选地，阿吡莫德选择性作用以调节一种分子靶(例如，靶激酶)，但是不显著调节另一分子靶(例如，非靶激酶)。本公开内容还提供了选择性抑制酶(如激酶)的活性的方法。优选地，如果一事件在群体A中与群体B相比以大于两倍的更高频率发生，该事件在群体A中相对于群体B选择性发生。如果一事件在群体A中以大于五倍的更高频率发生，该事件选择性发生。如果与群体B相比，一事件在群体A中以大于十倍的更高频率发生；更优选地，大于五十倍；甚至更优选地，大于100倍；且最优选地，大于1000倍的更高频率在群体A中发生，该事件选择性发生。例如，如果细胞死亡在病变或过度增殖细胞中与正常细胞相比以大于两倍的频率发生，细胞死亡将被称作在病变或过度增殖细胞中选择性发生。

药物组合物和制剂

本公开内容提供包含与至少一种药学上可接受的赋形剂或载体组合的一定量的阿吡莫德，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、包合物、水合物、多晶型物、代谢物、前药、类似物或衍生物的药物组合物，其中所述量对于治疗本文描述的癌症有效，和/或在患有癌症的受试者的癌细胞中有效抑制PIKfyve。

在一个实施方案中，阿吡莫德是阿吡莫德游离碱。在一个实施方案中，阿吡莫德是二甲磺酸阿吡莫德。

在一个实施方案中，阿吡莫德与至少一种另外的活性剂在单一剂型中组合。在一个实施方案中，所述组合物进一步包含抗氧化剂。

在实施方案中，至少一种另外的活性剂选自烷化剂、嵌入剂、微管蛋白结合剂、皮质类固醇，及其组合。在一个实施方案中，至少一种另外的活性剂是选自依鲁替尼、利妥昔单抗、多柔比星、泼尼松龙、长春新碱、万珂和依维莫司及其组合的治疗剂。在一个实施方案中，所述至少一种另外的活性剂是选自环磷酰胺、羟基柔红霉素(也称为多柔比星或Adriamycin™)、长春新碱(也称为Oncovin™)、泼尼松、泼尼松龙及其组合的治疗剂。

在实施方案中，至少一种另外的活性剂是经选择以改善阿吡莫德组合物的一种或多种副作用的非治疗剂。在一个实施方案中，所述非治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。在一个实施方案中，所述非治疗剂选自吲哚洛尔和利培酮。

在实施方案中，至少一种另外的作用剂是PD-1/PDL-1途径抑制剂。在实施方案中，PD-1/PDL-1途径抑制剂选自派姆单抗(Keytruda)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MPDL3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

在实施方案中，至少一种另外的活性剂选自mTOR途径抑制剂、TKI抑制剂、PI3K抑制剂、双重PI3K/mTOR抑制剂、SRC抑制剂、VEGF抑制剂、Janus激酶(JAK)抑制剂、Raf抑制剂、Erk抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、c-MET抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、抗-有丝分裂剂、多重耐药外排抑制剂、抗生素和细胞因子。在一个实施方案中，第二治疗剂是治疗性细胞因子。在一个实施方案中，第二治疗剂是白介素-2。在另一个实施方案中，第二治疗剂选自酪氨酸激酶抑制剂(例如，依维莫司、贝伐单抗)。

在实施方案中，mTOR抑制剂选自雷帕霉素(也称为西罗莫司)、依维莫司、坦罗莫司、ridaforolimus、umirolimus、佐他莫司(zotarolimus)、AZD8055、INK128、WYE-132、Torin-1、吡唑并嘧啶类似物PP242、PP30、PP487、PP121、KU0063794、KU-BMCL-200908069-1、Wyeth-BMCL-200910075-9b、INK-128、XL388、AZD8055、P2281和P529。见例如，Liu等人Drug Disc. Today Ther. Strateg.，6(2): 47-55 (2009)。

在实施方案中，mTOR抑制剂是反式-4-[4-氨基-5-(7-甲氧基-1H-吲哚-2-基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]环己烷甲酸(也称为OSI-027)，及其任何盐、溶剂合物、水合物和其它物理形式、结晶或非结晶。见US 2007/0112005。OSI-027可根据US 2007/0112005制备，通过引用并入本文。在一个实施方案中，mTOR抑制剂是OXA-01。见例如，WO2013152342 A1。

在实施方案中，PI3K抑制剂选自GS-1101 (Idelalisib)、GDC0941 (Pictilisib)、LY294002、BKM120 (Buparlisib)、PI-103、TGX-221、IC-87114、XL 147、ZSTK474、BYL719、AS-605240、PIK-75、3-甲基腺嘌呤、A66、PIK-93、PIK-90、AZD6482、IPI-145 (Duvelisib)、TG100-115、AS-252424、PIK294、AS-604850、GSK2636771、BAY 80-6946 (Copanlisib)、CH5132799、CAY10505、PIK-293、TG100713、CZC24832和HS-173。

在实施方案中，双重PI3K/mTOR抑制剂选自GDC-094、WAY-001、WYE-354、WAY-600、WYE-687、Wyeth-BMCL-200910075-16b、Wyeth-BMCL-200910096-27、KU0063794和KUBMCL-200908069-5、NVP-BEZ235、XL-765、PF-04691502、GDC-0980 (Apitolisib)、GSK1059615、PF-05212384、BGT226、PKI-402、VS-558和GSK2126458。见例如，Liu等人Drug Disc. TodayTher. Strateg., 6(2): 47-55 (2009)，通过引用并入本文。

在实施方案中，mTOR途径抑制剂是结合mTOR途径中的蛋白(或编码蛋白的核酸)和抑制其表达水平或活性的多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、锁核酸或适体)。例如，多肽或核酸抑制mTOR复合物1 (mTORC1)、mTOR的调节-相关蛋白(Raptor)、哺乳动物致死性SEC13蛋白8 (MLST8)、40 kDa的富含脯氨酸的Akt底物(PRAS40)、含有DEP域的mTOR-相互作用蛋白(DEPTOR)、mTOR复合物2(mTORC2)、mTOR的雷帕霉素-不敏感性伴侣蛋白(RICTOR)、G蛋白β亚单位-样(GβL)、哺乳动物应激-激活的蛋白激酶相互作用蛋白1 (mSIN1)、桩蛋白(paxillin)、RhoA、Ras-相关C3肉毒杆菌毒素底物1 (Rac1)、细胞分裂控制蛋白42同系物(Cdc42)、蛋白激酶Cα (PKCα)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、p70S6K、Ras和/或真核翻译起始因子4E(eIF4E)-结合蛋白(4EBPs)，或编码这些蛋白之一的核酸。

在实施方案中，SRC抑制剂选自波舒替尼、塞卡替尼(saracatinib)、达沙替尼、普纳替尼(ponatinib)、KX2-391、XL-228、TG100435/TG100855和DCC2036。见例如，Puls等人Oncologist. 2011 May; 16(5): 566–578。在一个实施方案中，SRC抑制剂是结合SRC蛋白或编码SRC蛋白的核酸并抑制其表达水平或活性的多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、锁核酸或适体)。

在实施方案中，VEGF抑制剂选自贝伐单抗、舒尼替尼、帕唑帕尼、阿昔替尼、索拉非尼、瑞格菲尼(regorafenib)、乐伐替尼(lenvatinib)和莫替沙尼(motesanib)。在一个实施方案中，VEGF抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合VEGF蛋白、VEGF受体蛋白或编码这些蛋白之一的核酸，并抑制其表达水平或活性。例如，VEGF抑制剂是可溶性VEGF受体(如，可溶性VEGF-C/D受体(sVEGFR-3))。

在实施方案中，JAK抑制剂选自facitinib、鲁索利替尼、baricitinib、CYT387(CAS号1056634-68-4)、来妥替尼、帕克替尼(pacritinib)和TG101348 (CAS号936091-26-8)。在一个实施方案中，JAK抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合JAK (例如，JAK1、JAK2、JAK3或TYK2)或编码JAK蛋白的核酸，并抑制其表达水平或活性。

在实施方案中，Raf抑制剂选自PLX4032 (维罗非尼)、索拉非尼、PLX-4720、GSK2118436 (达拉非尼)、GDC-0879、RAF265、AZ 628、NVP-BHG712、SB90885、ZM 336372、GW5074、TAK-632、CEP-32496和LGX818 (Encorafenib)。在一个实施方案中，Raf抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合Raf (例如，A-Raf、B-Raf、C-Raf)或编码Raf蛋白的核酸，并抑制其表达水平或活性。在一个实施方案中，MEK抑制剂选自AZD6244 (Selumetinib)、PD0325901、GSK1120212 (曲美替尼)、U0126-EtOH、PD184352、RDEA119 (Rafametinib)、PD98059、BIX 02189、MEK162 (Binimetinib)、AS-703026 (Pimasertib)、SL-327、BIX02188、AZD8330、TAK-733和PD318088。在一个实施方案中，MEK抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合MEK (例如，MEK-1、MEK-2)或编码MEK蛋白的核酸，并抑制其表达水平或活性。

在实施方案中，Akt抑制剂选自MK-2206、KRX-0401 (哌立福辛)、GSK690693、GDC-0068 (Ipatasertib)、AZD5363、CCT128930、A-674563、PHT-427。在一个实施方案中，Akt抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合Akt (例如，Akt-1、Akt-2、Akt-3)或编码Akt蛋白的核酸，并抑制其表达水平或活性。

在实施方案中，法尼基转移酶抑制剂选自LB42708或替吡法尼。在一个实施方案中，法尼基转移酶抑制剂是多肽(如，抗体或其片段)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合法尼基转移酶或编码法尼基转移酶蛋白的核酸，并抑制其表达水平或活性。

在一个实施方案中，c-MET抑制剂选自克唑替尼(crizotinib)、tivantinib、卡博替尼(cabozantinib)、foretinib。在一个实施方案中，c-MET抑制剂是多肽(如，抗体或其片段，由onartuzumab示例说明)或核酸(如，双链小干扰RNA、短发夹RNA、微小-RNA、反义寡核苷酸、吗啉代、锁核酸或适体)，其结合c-MET或编码c-MET蛋白或HGF配体的核酸，并抑制其表达水平或活性，例如ficlatuzumab或rilotumumab。

在一个实施方案中，组蛋白调节抑制剂选自漆树酸(anacardic acid)、C646、MG149 (组蛋白乙酰转移酶)、GSK J4 Hcl (组蛋白去甲基化酶)、GSK343 (有效对抗EZH2)、BIX 01294 (组蛋白甲基转移酶)、MK0683 (Vorinostat)、MS275 (Entinostat)、LBH589(Panobinostat)、曲古抑菌素A、MGCD0103 (Mocetinostat)、Tasquinimod、TMP269、Nexturastat A、RG2833、PDX101 (Belinostat)。

在实施方案中，抗-有丝分裂剂选自灰黄霉素、酒石酸长春瑞滨、紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、埃博霉素A、埃博霉素B、ABT-751、CYT997 (Lexibulin)、酒石酸长春氟宁、Fosbretabulin、GSK461364、ON-01910 (Rigosertib)、Ro3280、BI2536、NMS-P937、BI6727 (Volasertib)、HMN-214和MLN0905。

在实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂选自Votrient、阿昔替尼、硼替佐米(Bortezomib)、波舒替尼、卡非佐米(Carfilzomib)、克唑替尼、达拉非尼、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、依鲁替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、培加他尼、普纳替尼、瑞格菲尼、鲁索利替尼、索拉非尼、舒尼替尼、曲美替尼、凡德他尼、维罗非尼和Vismodegib。

在一个实施方案中，聚醚抗生素选自莫能菌素钠、尼日利亚菌素、缬氨霉素、盐霉素。

“药物组合物”是适合施用于受试者的含有药学上可接受形式的本文所述的化合物的制剂。本文中所用的短语“药学上可接受的”指的是在合理的医学判断范围内适于与人类和动物的组织接触使用而不具有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的收益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。

“药学上可接受的赋形剂”指的是可用于制备药物组合物的赋形剂，其通常是安全、无毒且既非生物学上也非在其它方面不合意的，并包括兽医用途以及人类药物用途可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于无菌液体、水、缓冲盐水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等等)、油、洗涤剂、悬浮剂、碳水化合物(例如葡萄糖、乳糖、蔗糖或葡聚糖)、抗氧化剂(例如抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白或其合适的混合物。

药物组合物可以以散装或以剂量单位形式提供。为了便于施用和剂量的均匀性，尤其有利的是以剂量单位形式配制药物组合物。本文中所用的术语“剂量单位形式”指的是适于作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理离散单位；各单位含有经计算以与所需药物载体结合产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本公开内容的剂量单位形式的规格由活性化合物的独特特性和要实现的特定治疗效果决定并直接取决于此。剂量单位形式可以是安瓿、小瓶、栓剂、糖衣丸、片剂、胶囊、IV袋、或在气雾剂吸入器上的单一泵。

在治疗应用中，该剂量根据药剂、受体患者的年龄、重量和临床状况、以及施用该疗法的临床医生或从业者的经验与判断，以及影响所选剂量的其它因素而不同。通常，该剂量应当为治疗有效量。剂量可以以mg/kg/天的测量单位来提供(该剂量可以针对患者的重量(以kg计)、体表面积(以m²计)和年龄(以岁计)来进行调节)。药物组合物的有效量是提供由临床医生或其他合格的观察者所注意到的客观上可鉴定的改善的量。例如，缓解病症、疾病或病况的症状。本文中所用的术语“剂量有效方式”指的是在受试者或细胞中产生所需生物效应的药物组合物的量。

例如，剂量单位形式可以包含1 ng至2 mg、或0.1 mg至2 g；或10 mg至1 g，或50mg至500 mg，或1μg至20 mg；或1μg至10 mg；或0.1 mg至2 mg。

药物组合物可以采取任何合适的形式(例如液体、气雾剂、溶液、吸入剂、雾、喷雾剂；或固体、粉末、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、贴剂等等)用于通过任何所需途径(例如经肺、吸入、鼻内、口服、含服、舌下、胃肠外、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、胸膜内、鞘内、透皮、透粘膜、直肠等等)施用。例如，本公开内容的药物组合物可以是用于通过吸入或吹入(经口或鼻)的气雾剂施用的水溶液或粉末形式、用于口服施用的片剂或胶囊形式、适于通过直接注射或通过添加到无菌输注液中用于静脉内输注来施用的无菌水溶液或分散体形式；或用于透皮或透粘膜施用的洗剂、乳膏、泡沫、贴剂、混悬剂、溶液或栓剂的形式。

药物组合物可以是口服可接受的剂型的形式，包括但不限于胶囊、片剂、含服形式、糖锭(troche)、锭剂(lozenge)和呈乳液、水性混悬剂、分散体或溶液形式的口服液。胶囊可以含有本公开内容的化合物与惰性填料和/或稀释剂如药学上可接受的淀粉(例如，玉米、马铃薯或木薯淀粉)、糖、人造甜味剂、粉末状纤维素如结晶纤维素和微晶纤维素、面粉、明胶、树胶等等的混合物。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也可以加入润滑剂如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服施用，可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服施用水性混悬剂和/或乳剂时，本公开内容的化合物可以悬浮或溶解在油相中，其与乳化剂和/或悬浮剂组合。如果需要的话，可以加入某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。

药物组合物可以为片剂形式。片剂可以包含单位剂量的本公开内容的化合物以及惰性稀释剂或载体如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露糖醇。片剂可以进一步包含非糖衍生的稀释剂如碳酸钠、磷酸钙、碳酸钙或纤维素或其衍生物如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素，以及淀粉如玉米淀粉。片剂可以进一步包含粘合剂和造粒剂如聚乙烯吡咯烷酮、崩解剂(例如可溶胀的交联聚合物，如交联的羧甲基纤维素)、润滑剂(例如硬脂酸盐)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂(例如BHT)、缓冲剂(例如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)和泡腾剂如柠檬酸盐/碳酸氢盐混合物。

片剂可以是包衣片剂。包衣可以是保护膜包衣(例如蜡或清漆)或设计为控制活性剂释放的包衣，例如延迟释放(在摄取后预定滞后时间后释放活性物)或在胃肠道中的特定位置处释放。后者可以例如使用肠溶膜包衣(如以商品名Eudragit®出售的那些)来实现。

片剂制剂可以通过常规压制、湿法造粒或干法造粒方法，并使用药学上可接受的稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)、悬浮剂或稳定剂来制造，所述试剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、月桂基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯树胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露糖醇、氯化钠、滑石、干淀粉和糖粉。优选的表面改性剂包括非离子和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性实例包括但不限于泊洛沙姆188、苯扎氯铵、硬脂酸钙、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸镁铝和三乙醇胺。

药物组合物可以为硬或软明胶胶囊形式。按照该制剂，本公开内容的化合物可以为固体、半固体或液体形式。

药物组合物可以为适于胃肠外施用的无菌水溶液或分散体形式。本文中所用的术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。

药物组合物可以为适于通过直接注射或通过添加到无菌输注液用于静脉内输注来施用的无菌水溶液或分散体的形式，并包含溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质包含水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，其合适的混合物，或一种或多种植物油。游离碱或药理学上可接受的盐形式的本公开内容的化合物的溶液或混悬剂可以在适当地混有表面活性剂的水中制备。下面给出合适的表面活性剂的实例。还可以例如在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。

除了存在于该制剂中的任何载体或稀释剂(如乳糖或甘露糖醇)之外，用于本公开内容的方法的药物组合物可以进一步包含一种或多种添加剂。所述一种或多种添加剂可以包含一种或多种表面活性剂或由一种或多种表面活性剂组成。表面活性剂通常具有一个或多个长脂族链如脂肪酸，这使其能够直接插入细胞的脂质结构以增强药物渗透和吸收。通常用于表征表面活性剂的相对亲水性和疏水性的经验参数是亲水亲油平衡值(“HLB”值)。具有较低HLB值的表面活性剂更疏水，且在油中具有更大的溶解度，而具有较高HLB值的表面活性剂更亲水，且在水溶液中具有更大的溶解度。由此，亲水性表面活性剂通常被认为是具有大于大约10的HLB值的那些化合物，且疏水性表面活性剂通常是具有小于大约10的HLB值的那些。但是，这些HLB值仅仅是指导，因为对于许多表面活性剂来说，根据选择用于测定HLB值的经验方法，该HLB值可以相差多达大约8个HLB单位。

在用于本公开内容的组合物的表面活性剂中有聚乙二醇(PEG)-脂肪酸和PEG-脂肪酸单酯和二酯、PEG甘油酯、醇-油酯交换产物、聚甘油脂肪酸、丙二醇脂肪酸酯、甾醇和甾醇衍生物、聚乙二醇脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙二醇烷基醚、糖及其衍生物、聚乙二醇烷基酚、聚氧乙烯-聚氧丙烯(POE-POP)嵌段共聚物、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、离子表面活性剂、脂溶性维生素及其盐、水溶性维生素及其两亲性衍生物、氨基酸及其盐、以及有机酸及其酯和酐。

本公开内容还提供包含用于本公开内容的方法的药物组合物的包装和试剂盒。该试剂盒可以包含一个或多个选自瓶、小瓶、安瓿、泡罩包装和注射器的容器。该试剂盒可以进一步包括用于治疗和/或预防本公开内容的疾病、病况或病症的一个或多个使用说明书、一个或多个注射器、一个或多个涂敷器、或适于重构本公开内容的药物组合物的无菌溶液。

本文中使用的所有百分比和比率除非另行说明均按重量计。本公开内容的其它特征和优点由不同实施例显而易见。提供的实施例说明了可用于实践本公开内容的不同组分和方法。所述实施例不限制要求保护的发明。基于本公开内容，技术人员可以确定和采用可用于实践本公开内容的其它组分和方法。

实施例

实施例1：TFEB赋予对阿吡莫德的敏感性

发明人先前已表明阿吡莫德在TSC裸细胞中是一种高度细胞毒性剂。在这些细胞中，mTOR途径是组成型活性的，因为它存在于许多癌症中。筛选超过100种癌细胞系显示阿吡莫德在不同类型的癌症中是细胞毒性的。发明人的结果进一步表明阿吡莫德的细胞毒活性是由于细胞内运输的抑制以及细胞凋亡和/或自我吞噬的相应增加。

为进一步了解阿吡莫德的细胞作用机理，发明人执行在阿吡莫德处理两种非-霍奇金B细胞淋巴瘤(B-NHL)瘤细胞系(SU-DHL-10和WSU-DLCL2)后发生的变化的全基因表达分析。图1显示基因表达变化的热图表示。上调的基因由红色表示并且向热图的顶部簇集，而下调的基因由蓝色表示并且向底部簇集。发明人接着执行基因本体分析。如在图2中所示，存在由阿吡莫德诱导的溶酶体基因的明显的富集。发明人接着使用LysoTracker染色以检查细胞的酸化隔室。图3显示有酸化隔室的膨胀，提示溶酶体生物形成由阿吡莫德上调，与基因表达结果一致。

TFEB是溶酶体基因表达的主要调节剂且被去磷酸化激活，接着经核易位(Roczniak-Ferguson等人, 2012; Settembre等人, 2012)。因此，发明人接着观察在阿吡莫德处理后的TFEB磷酸化状态和亚细胞定位。图4显示在处理2小时内，TFEB经去磷酸化(由电泳迁移率增加表示)并易位进入核，如在其它细胞类型中观察到的(Wang等人, 2015)。总之，这些结果表明阿吡莫德诱导TFEB去磷酸化和核易位，接着增加溶酶体基因表达。

为进一步探索TFEB在对阿吡莫德的细胞响应中的作用，来自癌细胞系百科全书(CCLE)数据库的不同癌细胞系的TFEB的表达水平(Barretina等人, 2012)被提取和检查，以确定在TFEB表达和细胞系对阿吡莫德的敏感性之间是否存在相关性。图5显示TFEB在许多细胞系中的表达水平。如图5中所示，TFEB在B-NHL中比在所有其它肿瘤类型中更高地表达。为测试TFEB表达增加是否有助于在B-NHL中观察到阿吡莫德敏感性，发明人在TFEB-缺乏的B-NHL细胞系CA46中过度表达TFEB。如在图6中所示，TFEB过度-表达增强阿吡莫德敏感性大于50-倍。

总之，本文提出的数据证明高水平的TFEB表达赋予对阿吡莫德的敏感性。

实施例2：癌症中的小眼(MiT)转录因子

TFEB是基本螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链转录因子的MiT家族的成员，该家族还包括高度同源性基因MITF、TFE3和TFEC (Fisher等人1991)。MITF是该家族中最充分鉴定的成员且是黑素细胞生物形成的主要调节剂以及黑素瘤和透明细胞肉瘤的确立的驱动剂(Steingrimsson等人2004; Garraway等人2005; Davis等人2006)。TFEB和TFE3通过染色体易位的过度表达涉及肾细胞致癌作用，而TFE3过度表达进一步涉及泡状软组织肉瘤和血管周上皮样细胞瘤(综述于Haq等人2011；Kauffman等人2014)。TFEC表达受限于巨噬细胞，并且是最少研究的MiT家族成员，关于其功能知道甚少(Rehli等人1999)。已知MiT家族的成员调节内吞溶酶体和自噬小体生物形成以及自噬，特别是称为溶酶体的主要调节剂的TFEB(Sardiello等人2009; Settembre等人2012; Martina等人2014; Ploper等人2015)。考虑到高水平的TFEB在B-NHL中赋予对阿吡莫德的敏感性，发明人提出，以MiT家族转录因子的一种或多种表达和/或活性增加为特征的其它癌症对阿吡莫德也将是敏感的。这些可包括，但不限于，肾细胞癌、黑素瘤、透明细胞肉瘤、泡状软组织肉瘤和血管周上皮样细胞瘤。

实施例3：肾细胞癌

TFEB、TFE3和MITF各自通过与肾细胞癌(RCC)经常突变的其它基因，例如VHL、MET、FLCN、延胡索酸水化酶、琥珀酸脱氢酶、TSC1和TSC2一起改变肾细胞代谢而牵涉到肾致癌作用(Linehan 2012)。导致功能性转录因子的过度表达和核定位的TFEB和TFE3易位发生在易位癌中，一种占散发RCC的1-5%的罕见RCC亚型(Shuch等人2015)。此外，一种新的致癌MITF融合基因，ACTG1-MITF是鉴定的RCC (Durinck等人, 2015)。最后，导致转录活性增加的MITF的种系错义突变已在黑素瘤和RCC中均有报道(Bertolotto等人2011)。

RCC是成人中最常见类型的肾癌，占成人恶性肿瘤的2-3%和源自肾的肿瘤的90-95% (Cancer Facts and Figures 2015)。美国每年有大约65,000个RCC新病例且每年约13,500例死于RCC，该病发病的中位数年龄为65岁(Siegel等人2012)。晚期RCC用肾切除术联合包括VEGF抑制剂(舒尼替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗、索拉非尼、卡博替尼和阿昔替尼)和mTOR抑制剂(依维莫司和坦罗莫司)的靶向疗法治疗(Cancer Facts and Figures 2015)。

透明细胞RCC是RCC的主要组织学亚型，占所有RCC的大约75% (Shuch等人2015)。这些瘤以它们由于脂质和糖原沉积导致的丰富透明细胞质命名(Shuch等人2015)。透明细胞RCC倾向于以较高级的转移性疾病存在，具有差的预后(Shuch等人2015)。在希佩尔-林道基因VHL中的突变据报道在高达90%的透明细胞RCC中发生(Nickerson等人2008)。作为泛素连接酶的VHL功能的畸变导致转录因子HIF-α的积聚和缺氧-反应性基因，包括VEGF和PDGF的上调，以及信号转导途径例如RAF-MEK-ERK和PI3K-Akt-mTOR的随后诱导(Clarke 2009)。

发明人接着证实大量透明细胞RCC细胞系在体外呈现出对阿吡莫德的敏感性，敏感性被定义为在5天测定中EC50少于200nM (图7和下文表1)。发明人还显示在5天测定中，相对于护理标准治疗，阿昔替尼、索拉非尼、帕唑帕尼、舒尼替尼和雷帕霉素，阿吡莫德具有对抗透明细胞RCC的优越活性(图8)。

表1：在5天测定中，用阿吡莫德测试的10种透明细胞RCC系的平均EC50值。

发明人的数据还提示阿吡莫德在具有VHL突变的RCC中是优先具有细胞毒性的，如在表2中所示。

表2：在5天测定中，用阿吡莫德测试的12种透明细胞RCC系的平均EC50值和VHL状态。

考虑到透明细胞RCC显示出对阿吡莫德的敏感性，发明人提出，其它RCC亚型也是对阿吡莫德敏感的，包括但不限于乳头状I型和II型、不染色细胞型、杂合型、嗜酸细胞瘤、易位型、血管肌脂瘤、嗜酸瘤细胞型、髓型和收集管癌。

实施例4：TFEB易位肾细胞癌

TFEB易位RCC是罕见的，到目前为止报道了大约50个病例(Argani 2015)。由于缺乏确立的临床特点导致的误诊，这个数值可能未被充分代表。在50个病例中，4个牵涉到转移，导致这些病例中的3例死亡(Argani, 2015)。TFEB易位RCC发病的中位数年龄是31岁，其中在一个病例子集中童年期细胞毒性化疗被牵涉作为原因(Argani, 2015)。

TFEB易位RCC带有特异性t(6;11) (p21; q12)易位，其融合TFEB基因座至α(MALAT1)，一种未知功能的非编码RNA，导致全长TFEB的过度表达(Davis等人2003; Kuiper等人2003；综述于Kauffman等人2014)。α-TFEB融合基因可通过RT-PCR、DNA PCR或FISH检测(Argani等人2005; Argani等人2012)。此外，CLCTC-TFEB融合基因最近在易位RCC瘤中被鉴定，其预测发挥类似α-TFEB融合基因的功能。(Durinck等人, 2015)。TFEB易位RCC经qRT-PCR显示出TFEB转录物的30-60倍上调，这导致TFEB蛋白相对于正常肾组织的高表达，如通过蛋白质印迹法评价的(Kuiper等人2003)，和由IHC检测的强烈的核TFEB染色(Argani等人2005)。

临床上，TFEB易位RCC不具有独特的外观且可给出高级未分类RCC的广泛差别诊断(Argani, 2015)。然而，这些肿瘤经IHC证实核TFEB免疫反应性，并且也对黑素瘤标记MelanA和HMB45以及半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶K染色阳性(Argani等人2005; Martignoni等人2009)。由于TFEB分裂FISH测定较少受可变固定的影响，对于TFEB易位RCC在福尔马林-固定和石蜡-包埋的材料中是优选的诊断试验(Argani等人2012)。

虽然TFEB易位RCC的临床牵连已经确立，但对于晚期易位RCC目前没有有效的治疗剂。鉴于发明人已经证明在B-NHL中高水平的TFEB赋予对阿吡莫德的敏感性，推测是TFEB易位RCC也将表现出对阿吡莫德的极度敏感性。

实施例5：TFE3易位肾细胞癌

在美国TFE3易位RCC每年占儿科RCC的40%和成人RCC的少于5%，导致大约10例新的儿科病例和1,260例新的成人病例(Magers等人2015)。如同在TFEB易位RCC中，儿童期细胞毒性化疗被牵涉作为TFE3易位RCC的原因，这倾向于在暴露后2-14年发生。TFE3 RCC的儿科病例倾向于是惰性的，然而成人病例经常涉及到早期的节点参与、侵袭性转移和类似于透明细胞RCC的预后(Magers等人2015, Geller等人2008)。此外，这些瘤可在肿瘤完全切除后几十年作为不易处理的转移性瘤再现(Dal Cin P等, 1998; Rais-Bhahrami S等, 2007)。

临床上，TFE3易位RCC类似于透明细胞RCC，具有乳头状结构和上皮样透明细胞。形态学可变化以类似于其它RCC亚型，使得分类困难(Argani, 2015)。有关的是，这些肿瘤经IHC表现出强烈的核TFE3免疫反应性，并且也对CD10和RCC抗原染色阳性，且对组织蛋白酶K经常染色阳性(Argani等人2003; Argani等人2005; Martignoni等人2009)。

涉及在Xp11上的TFE3基因座的5种类型的易位到目前为止已在文献中有记载：PRCC-TFE3、ASPSCR1-TFE3、SFPQ-TFE3、NONO-TFE3和CLTC-TFE3 (Kauffman等人2014)。PRCC-TFE3、ASPSCR1-TFE3和SFPQ-TFE3易位已经被证实为在多个患者中鉴定的复发性突变，而NONO-TFE3和CLTC-TFE3融合基因到目前为止已在单个患者中鉴定(Kauffman等人2014)。值得注意的是，ASPSCR1-TFE3融合基因还在泡状软组织肉瘤(一种罕见的肺癌类型)中被鉴定为复发性突变，和SFPQ-TFE3融合基因已在血管周上皮样细胞肿瘤中被鉴定(Landanyi等人2001; Tanaka等人2009)。这些融合基因的断点位点变化，但导致各个融合伴侣的N末端部分连接于一系列C-末端TFE3外显子的融合产物。所有融合伴侣具有组成型活性启动子，导致功能性TFE3蛋白的过度表达(Kauffman等人2014)。TFE3易位可通过用针对TFE3 C-末端的抗体的强烈核染色或通过分裂FISH测定来检测(Argani 2015)。

几种细胞系已从TFE3易位RCC衍生；PRCC-TFE3融合基因存在于细胞系UOK120、UOK124和UOK146中；SFPQ-TFE3融合基因存在于UOK145细胞系中；ASPSCR1-TFE3融合基因存在于FU-UR1细胞系中；和NONO-TFE3融合基因存在于UOK109细胞系中(Kauffman等人2014)。

发明人相信很可能TFE3易位细胞系也将表现出对阿吡莫德的敏感性，包括但不限于TFE3易位RCC、泡状软组织肉瘤和血管周上皮样细胞肿瘤。

泡状软组织肉瘤

泡状软组织肉瘤(ASPS)是具有未知细胞来源的罕见的缓慢生长的肿瘤。在美国，ASPS代表每年诊断的12,000个软组织肉瘤新病例的少于1% (Jaber和Kirby 2014; NationalCancer Institute 2014)且往往涉及到成人的大腿或臀部和儿童的头颈部的软组织(Jaber和Kirby 2014)。转移至肺、骨、脑和/或肝发生于多达79%的患者中(Lieberman等人1989; Portera等人2001)。转移性ASPS通常抵抗常规放射和化学疗法(Jaber和Kirby2014)。

ASPS的特征是特异性易位der(17)t(X;17)(p11;25)，其将TFE3融合于ASPSCR1，导致功能性TFE3的过度表达和核定位(Jaber和Kirby 2014)。肿瘤内的细胞具有独特的器官状、胞状生长模式，其中细胞含有过碘酸-Schiff、疾病抗性的胞浆内晶体(Jaber和Kirby2014)。所述肿瘤对于经IHC的强烈核TFE3染色，以及对于组织蛋白酶K始终是阳性的。到目前为止，只有一种细胞系源自ASPS肿瘤，细胞系ASPS-1 (Kenney等人2011)。

鉴于TFEB过度表达赋予对阿吡莫德的敏感性，发明人相信含有其它MITF家族成员例如TFE3过度表达的癌症和细胞系也是对阿吡莫德敏感的，包括但不限于ASPS和细胞系ASPS-1。

Birt-Hogg-Dubé综合征

Birt-Hogg-Dubé (BHD)综合征是一种源自卵巢滤泡激素(FLCN)基因(对于BHD的唯一已知的易感性基因)中的染色体17 (17p11.2)上的突变(Schmidt等, 2005)的常染色体显性遗传疾病(Birt等, 1977)。FCLN BHD突变是多样化的，具有53个鉴定的独特种系突变(综述于Wei等人2009)。BHD患者易于患多种增殖疾病，包括滤泡性错构瘤、肺囊肿和肾肿瘤(BHDsyndrome.org)。

在机制上，FLCN与卵巢滤泡激素-相互作用蛋白-1 (FNIP1)和-2 (FNIP2)和5’-AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)复合，使其与mTOR的调节关联，由此调节细胞增殖(Baba等2010)。此外，通过调节UOK257细胞，一种得自其中FLCN被突变的BHD患者(Yang等)的透明细胞肾肿瘤细胞系中的FLCN表达，FLCN显示负面调节TFE3核定位(Hong等2010)。与该结果一致，缺失FLCN的ARPE-19细胞显示TFE3核积聚(Martina等人2014)。UOK257异种移植物的分析显示所述肿瘤对核TFE3染色阳性，而正常邻近的肾组织表现出弱的细胞质染色。进一步确定这些结果，Flcn-缺失的MEFs显示TFE3定位于核内。最后，得自BHD患者的肿瘤样品中的IHC染色揭示核或核/细胞质染色。为证实FLCN灭活导致TFE3转录活性增加，TFE3靶标GPNMB被用作替代标志并经由蛋白质印迹分析显示相对于正常肾组织，在来自BHD患者的肿瘤中增加。IHC进一步验证在来自BHD患者和Flcn +/-杂合子小鼠肾肿瘤的切片中，GPNMB在肿瘤中而不在正常组织中表达(Hong等2010)。总之，这些结果将如在患有BHD的患者中观察到的FLCN的功能性灭活与核TFE3定位和转录活性增加相关联。

鉴于阿吡莫德在具有高水平的核TFE3的肿瘤中将是有效的假设，还期望具有Flcn的突变的肿瘤(其包括，但不限于肾癌(Paulovich等2002)、结直肠癌(Kahnoski等2003)、子宫内膜癌(Fujii等2006)、胃癌(Jiang等2007))是对阿吡莫德敏感的。

Claims (41)

1.一种用于在具有过度表达小眼(MiT)转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的组合物，所述组合物包含治疗有效量的阿吡莫德，或其药学上可接受的盐。

2.权利要求1的组合物，其中阿吡莫德是二甲磺酸阿吡莫德。

3.权利要求1或2的组合物，其中MiT转录因子选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF。

4.权利要求3的组合物，其中MiT转录因子是TFEB或TFE3。

5.权利要求3或4的组合物，其中所述癌症是非-霍奇金B细胞淋巴瘤、肾细胞癌、黑素瘤、甲状腺癌、透明细胞肉瘤、泡状软组织肉瘤或血管周上皮样细胞瘤。

6.权利要求5的组合物，其中癌症是肾细胞癌。

7.权利要求6的组合物，其中肾细胞癌含有TFEB易位。

8. 权利要求7的组合物，其中TFEB易位是t(6;11) (p21; q12)易位。

9.权利要求6、7或8的组合物，其中肾细胞癌选自乳头状I型或II型、不染色细胞型、杂合型、嗜酸细胞瘤、易位型、血管肌脂瘤、嗜酸瘤细胞型、髓型和收集管癌。

10.权利要求6、7或8的组合物，其中肾细胞癌选自透明细胞肾癌、移行细胞癌、维尔姆斯瘤(肾母细胞瘤)、肾肉瘤、和良性(非-癌性)肾肿瘤、肾腺瘤、嗜酸细胞瘤和血管肌脂瘤。

11.权利要求6的组合物，其中肾癌具有希佩尔-林道(VHL)基因的突变。

12.权利要求1-11的任一项的组合物，其还包含至少一种另外的活性剂。

13.权利要求12的组合物，其中所述至少一种另外的活性剂是治疗剂或非-治疗剂，或治疗剂和非-治疗剂的组合。

14.权利要求13的组合物，其中所述至少一种另外的活性剂是选自蛋白激酶抑制剂、PD-1/PDL-1途径抑制剂、检查点抑制剂、基于铂的抗肿瘤剂、拓扑异构酶抑制剂、核苷代谢抑制剂、烷化剂、嵌入剂、微管蛋白结合剂及其组合的治疗剂。

15.权利要求14的组合物，其中治疗剂是血管内皮细胞生长因子(VEGF)抑制剂。

16.权利要求15的组合物，其中VEGF抑制剂选自舒尼替尼、帕唑帕尼、贝伐单抗、索拉非尼、卡博替尼和阿昔替尼。

17.权利要求14的组合物，其中治疗剂是mTOR抑制剂。

18.权利要求17的组合物，其中mTOR抑制剂是依维莫司或坦罗莫司。

19.权利要求14的组合物，其中治疗剂是蛋白激酶抑制剂。

20.权利要求19的组合物，其中蛋白激酶抑制剂是帕唑帕尼或索拉非尼，或其组合。

21.权利要求14的组合物，其中治疗剂是PD-1/PDL-1途径抑制剂。

22. 权利要求14的组合物，其中治疗剂选自派姆单抗(Keytruda)、阿维鲁单抗、阿特朱单抗(MPDL3280A)、纳武单抗(BMS-936558)、pidilizumab (CT-011)、MSB0010718C和MEDI4736。

23.权利要求1-22的任一项的组合物，其还包含经选择以改善阿吡莫德的一种或多种副作用的非-治疗剂。

24.权利要求13的组合物，其中所述至少一种另外的活性剂是非-治疗剂。

25.权利要求23或24的组合物，其中非-治疗剂选自昂丹司琼、格拉司琼、多拉司琼和帕洛诺司琼。

26.权利要求23或24的组合物，其中非-治疗剂选自吲哚洛尔和利培酮。

27.权利要求1-26的任一项的组合物，其中组合物包含在受试者的癌细胞中有效抑制PIKfyve激酶活性的量的二甲磺酸阿吡莫德。

28.权利要求1-27的任一项的组合物，其中癌症对标准治疗是顽固的，或是转移的。

29.权利要求1-17的任一项的组合物，其中组合物呈现为适合于口服或静脉内施用的形式。

30.一种在具有过度表达一种或多种小眼(MiT)转录因子的癌细胞的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括将包含阿吡莫德或其药学上可接受的盐的治疗有效量的组合物施用于受试者。

31.权利要求30的方法，其还包括测定癌细胞的样品中一种或多种MiT转录因子的过度表达的预处理步骤。

32.权利要求31的方法，其中所述测定包括TFEB、TFE3、TFEC和MITF的一种或多种的检测。

33.权利要求32的方法，其中所述测定包括TFEB或TFE3的检测。

34.权利要求32的方法，其中所述测定使用免疫组织化学执行。

35.权利要求30-34的任一项的方法，其中阿吡莫德是二甲磺酸阿吡莫德。

36.权利要求35的方法，其中阿吡莫德的治疗有效量是有效抑制受试者的癌细胞中PIKfyve激酶活性的量。

37.一种抑制癌细胞增殖的方法，该方法包括使癌细胞接触有效抑制细胞增殖的量的阿吡莫德或其药学上可接受的盐。

38.一种抑制癌细胞的存活的方法，该方法包括使癌细胞接触有效抑制癌细胞中PIKfyve激酶活性的量的阿吡莫德或其药学上可接受的盐。

39.权利要求37或38的任一项的方法，其中癌细胞过度表达MiT转录因子。

40.权利要求39的方法，其中MiT转录因子选自TFEB、TFE3、TFEC和MITF。

41.权利要求40方法，其中MiT转录因子是TFEB或TFE3。