CN109069478B - Z-亚丁基苯酞于活化自体免疫系统的应用 - Google Patents

Abstract

一种使用Z‑亚丁基苯酞(Z‑butylidenephthalide)于制造一药剂的用途，其中该药剂与单核球细胞合并使用于活化自体免疫系统及治疗癌症的至少一种。

Description

Z-亚丁基苯酞于活化自体免疫系统的应用

技术领域

本发明关于使用Z-亚丁基苯酞(Z-butylidenephthalide，Z-BP)的应用，尤其是关于使用Z-亚丁基苯酞以活化自体免疫系统的应用。其中，通过将Z-亚丁基苯酞与单核球细胞并用于一个个体，相较于单独投予单核球细胞，可提供更加优异的癌症治疗效果。

背景技术

关于癌症的治疗，除了常见的外科手术治疗、化学疗法、放射线疗法、基因标靶治疗等治疗方式，免疫疗法在近年被认为是最具突破性的抗癌策略。所谓免疫疗法是指通过人为方式促进自体免疫系统活化，使其辨认并攻击癌细胞，以使肿瘤缩小或消失、延长患者寿命。

临床研究显示，免疫疗法的治疗效果虽然相当好，但部分患者对免疫疗法并不敏感，例如，在黑色素瘤的临床研究即发现，免疫细胞会聚集于肿瘤周围而无法进入肿瘤区域。关于此，日本本庶佑博士(Tasuku Honjo)与美国詹姆斯·艾利森(James P.Allison)博士发现，某些癌细胞通过其表面抗原(例如PDL-1、CTLA-4)结合并诱导免疫细胞启动“抑制免疫反应”，使自体性与外源性的免疫细胞皆无法活化。前述程序性死亡受体-配体1(Programmed death-ligand 1，PD-L1)、细胞毒性T细胞相关蛋白-4(cytotoxic Tlymphocyte associated protein 4，CTLA-4)等癌细胞的表面抗原又称为“免疫检查点(immune checkpoint)抗原”。

为解决上述问题，本庶佑博士与詹姆斯·艾利森博士共同开发出一种针对T细胞上的程序性死亡受体-1(Programmed death 1，PD-1)的中和抗体，使癌细胞表面的PD-L1无法与免疫细胞结合、无法造成免疫细胞死亡，以进行治疗。然而，测试后发现，阻断T细胞表现PD-1容易引起患者本身的免疫细胞调控机制失衡，进而造成病患死亡。因此，有些学者反向思考开发能够抑制癌细胞表面的免疫检查点抗原表现的抗体，以进行治疗。

举例言之，Ipilimumab即一种免疫检查点抑制剂，第三期的临床试验结果显示，单独使用Ipilimumab进行治疗可延长黑色素瘤第三期及第四期患者整体寿命达10.1个月。这也说明免疫检查点对癌症免疫疗法的重要性。然而，由于开发抑制免疫检查点抗原表现的抗体的成本居高不下且步骤繁复，故目前临床上有效的免疫检查点抑制剂仍非常有限。因此，持续开发有效抑制免疫检查点抗原的药物或方法有相当的必需性及迫切性。

本申请发明人研究发现，Z-亚丁基苯酞具有抑制癌细胞表现免疫检查点抗原、促进癌细胞分泌活化免疫系统的化学趋性物质、增加免疫细胞的数量、及促进免疫细胞进入肿瘤区域的效果，故可用于活化自体免疫系统。发明人进一步发现，相较于单独投予单核球细胞，将Z-亚丁基苯酞与单核球细胞投予至一癌症个体，可意外地提供更加优异的治疗效果。

发明内容

本发明的一个目的，在于提供一种使用Z-亚丁基苯酞于制造一药剂的用途，其中该药剂与单核球细胞合并使用于活化自体免疫系统及治疗癌症的至少一种。

其中，该单核球细胞是自体性单核球细胞、外源性单核球细胞、或前述的组合。

其中，该单核球细胞是以下的至少一种：淋巴系细胞、髓系细胞、吞噬细胞、及抗原呈现细胞。

其中，该单核球细胞是以下的至少一种：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性球、巨噬细胞、及树状细胞。

其中，该药剂以如下一种或多种投药方式施用：口服、经皮肤投予、经鼻腔投予、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下植入、及组织间植入。

其中，该药剂以芯片(wafer)的剂型提供。

其中，该药剂用于以下的至少一种：抑制癌细胞表现免疫检查点抗原、促进癌细胞分泌活化免疫系统的化学趋性物质、增加免疫细胞的数量、及促进免疫细胞进入肿瘤区域。

其中，该癌细胞是恶性脑瘤细胞、神经胶母细胞瘤干细胞、胰脏癌细胞、肺癌细胞、及黑色素细胞瘤细胞。

其中，以Z-亚丁基苯酞计，该药剂的用量为每天30毫克/公斤体重至2,000毫克/公斤体重。

本发明的另一个目的，在于提供一种用于免疫细胞治疗的套组，其包含：

(1)一第一部分，包含Z-亚丁基苯酞；以及

(2)一第二部分，包含一单核球细胞。

其中，该第一部分及该第二部分供同时或分别投予至一个个体。

其中，该第一部分呈供口服、经皮肤投予、经鼻腔投予、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下植入、及/或组织间植入的形式；该第二部分呈供皮质脊髓注射、鞘内注射、脑内注射、静脉注射、腹腔注射、及/或皮下注射的形式。

其中，该第一部分呈芯片(wafer)的形式。

其中，该套组还包含一第三部分，该第三部分包含一溶液，且于使用时与该第二部分混合，以提供一注射液。

本发明的再一个目的，在于提供一种用于活化自体免疫系统及治疗癌症的至少一种的方法，其包含对一有需要的个体投予有效量的Z-亚丁基苯酞及有效量的单核球细胞。

本发明的有益效果是：

Z-亚丁基苯酞可有效活化自体免疫系统，使免疫细胞成功辨认并杀死癌细胞，故可与单核球细胞合并使用于癌症治疗，以提升癌症免疫细胞疗法的疗效。

本发明的详细技术内容及部分具体实施例，将描述于以下内容中，以供本发明所属领域普通技术人员了解本发明的特征。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是以西方墨点法(Western Blotting)分析经不同浓度的Z-亚丁基苯酞处理的RG2细胞株、1XM细胞株、Paca2细胞株、H1650细胞株、及B16细胞株的PDL-1蛋白及肌动蛋白的表现量的照片图；

图2是显示经不同处理的大鼠的存活率的曲线图，其中“空芯片”组大鼠是仅以不含活性成分的芯片进行处理的对照组，“空芯片+PBMC”组以不含活性成分的芯片以及单核球细胞进行治疗、“Cerebraca芯片”组仅以含Z-亚丁基苯酞的芯片进行治疗、及“Cerebraca芯片+PBMC”组合并使用含Z-亚丁基苯酞的芯片与单核球细胞进行治疗；

图3是以免疫组织化学染色分析上述“空芯片”组、“Cerebraca芯片”组、及“Cerebraca芯片+PBMC”组大鼠的脑部组织的照片图。

具体实施方式

以下将描述本发明的部分具体实施例；但是，在不背离本发明精神下，本发明尚可以多种不同形式的状态来实践，不应将本发明保护范围解释为限于说明书所陈述的内容。

除非文中有另外说明，于本说明书中(尤其是在权利要求书中)所使用的“一”、“该”及类似用语应理解为包含单数及复数形式；所谓“治疗”，不应被解释为治疗个体直至完全恢复，而应包括将个体的疾病进展或症状维持在一实质上静态的程度、增加个体的恢复速率、改善一具体病况的严重性、以及提高患者的生命质量；所谓“推迟”疾病的发病，是指预防一具体病况的发作、以及维持敏感个体的良好健康状态或建立该个体对疾病的耐受性；所谓“有效量”或“治疗有效量”，是指投予至个体时，可有效地至少部分改善怀疑个体的病情的化合物数量；所谓“个体”指哺乳动物，哺乳动物可为人类或非人动物；所谓“毫克/公斤体重”指每公斤体重的个体所须的投药量。

本说明书中所使用的数值范围(例如5至100)应理解为也包含在该范围中的所有有理数以及在该范围中的任何有理数所组成的范围，因此，本说明书中所使用的数值范围包含介于所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能组合。

如前述说明，癌细胞可通过其表面的免疫检查点抗原与免疫细胞结合、诱导免疫细胞启动“抑制免疫反应”，使自体性与外源性的免疫细胞皆无法活化，甚至造成免疫细胞死亡。因此，若能有效抑制癌细胞表现免疫检查点抗原，即可有效活化自体免疫系统，有利于免疫细胞疗法于癌症治疗的应用。

本申请发明人研究发现，Z-亚丁基苯酞具有抑制癌细胞表现免疫检查点抗原、促进癌细胞分泌活化免疫系统的化学趋性物质、增加免疫细胞的数量、及促进免疫细胞进入肿瘤区域的效果，故可用于活化自体免疫系统，而与单核球细胞合并使用于治疗癌症。同时也发现，相较于单独投予单核球细胞，将Z-亚丁基苯酞与单核球细胞同时投予至一癌症个体，可意外地提供更加优异的治疗效果。

如后附实施例所显示，本发明所使用的Z-亚丁基苯酞，对一经癌症免疫细胞疗法治疗的个体(即，经投予一单核球细胞的个体)、或一将进行癌症免疫细胞疗法治疗的个体(即，将投予一单核球细胞的个体)，可有效活化该个体的自体免疫系统，达到提升该免疫细胞疗法的疗效的效果。

因此，本发明提供一种使用Z-亚丁基苯酞于活化自体免疫系统的应用，包括使用Z-亚丁基苯酞于制备一药剂以与单核球细胞合并使用、提供一包含Z-亚丁基苯酞及单核球细胞的套组、以及对有需要的个体投予Z-亚丁基苯酞及单核球细胞以活化自体免疫系统并治疗癌症的方法。

于本发明的应用中，可使用自体性及/或外源性的单核球细胞(包括淋巴系细胞、髓系细胞、吞噬细胞、抗原呈现细胞等)。特定言之，该单核球细胞的例子包括，但不限于T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性球、巨噬细胞、及树状细胞。

于本发明的应用中，单核球细胞可以任何适宜的形式投予至需要的个体，并无特殊限制，端视所需要的用途而呈对应的适宜剂型。举例言之，但不以此为限，该单核球细胞可以皮质脊髓注射(corticospinal tract injection)、鞘内注射(intrathecalinjection)、脑内注射、静脉注射、腹腔注射、及/或皮下注射等方式施用至有需要的个体上。于本发明部分具体实施例中，该单核球细胞以可通过静脉注射的注射剂型投予。

根据本发明的应用所提供的药剂可施用于任何会表现免疫检查点抗原的癌细胞，其中，在不受理论限制下，相信该药剂是通过抑制癌细胞表面的免疫检查点抗原的表现，使癌症个体的免疫细胞数量增加，并促进免疫细胞进入肿瘤区域，达到清除癌细胞的效果。于本发明部分具体实施例中，使用根据本发明的应用所提供的药剂于抑制以下一种或多种癌细胞的免疫检查点抗原的表现：恶性脑瘤细胞、神经胶母细胞瘤干细胞、胰脏癌细胞、肺癌细胞、及黑色素细胞瘤细胞。

根据本发明的应用所提供的药剂可呈任何适宜的形式，并无特殊限制，端视所需要的用途而呈对应的适宜剂型。举例言之，但不以此为限，该药剂可以口服或非经口服(例如：经皮肤投予、经鼻腔投予、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下植入、或组织间植入)的投药方式施用至有需要的个体上，以具有活化自体免疫系统、提升癌症免疫细胞疗法的疗效。视使用形式及用途而定，可选用适宜的载剂以提供该药剂，只要该载剂对Z-亚丁基苯酞及/或单核球细胞的效益没有不利的影响即可。其中，该载剂可为例如：赋形剂、稀释剂、辅助剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、增溶剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、结合剂、增黏剂、分散剂、悬浮化剂、润滑剂、吸湿剂等。

以适于口服投药的剂型为例，该载剂的例子包括，但不限于，水、食盐水、葡萄糖(dextrose)、甘油、乙醇或其类似物、纤维素、淀粉、糖膨润土(sugar bentonite)、及前述的组合。可采用任何适宜的方法，以适于口服投药的剂型提供该药剂，例如固体形式的锭剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂等、或是液体形式的口服液、糖浆剂、醑剂(spirit)、酏剂(elixir)、酊剂等，但不以此为限。

有关适于皮下、静脉内、肌肉、或腹腔注射的针剂或点滴剂，则可于本发明所提供的药剂中含有一种或多种例如等张溶液、盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)、增溶剂、乳化剂、5％糖溶液、以及其他载剂等成分，以静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等剂型提供该药剂。或者，将该药剂制备成一注射前固体，以可溶于其他溶液或悬浮液中的剂型、或可乳化的剂型提供该注射前固体，并于投予至有需要的个体之前，将该注射前固体溶于其他溶液或悬浮液中或将其乳化，提供所需要的注射剂。此外，适于经鼻腔或经皮肤投予的外用剂型，则例如涂抹剂(例如乳液、乳霜、凝胶、分散膏、软膏)、喷剂、贴剂、或溶液(例如洗液、悬浮液)。

至于适于皮下植入、或组织间植入的剂型，则可于本发明所提供的药剂中另外含有一种或多种例如赋形剂、安定剂、缓冲剂、以及其他载剂等成分，以例如芯片(wafer)、锭剂、丸剂、胶囊等剂型提供，从而得以将该药剂植入一个体中，以缓慢且持续的释放所含活性成分至投药部位周围的组织，达到局部稳定高剂量的活化自体免疫系统的功效。举例言之，但不以此为限，可于本发明所提供的药剂中含有生物可兼容聚合物，使该药剂呈供皮下植入、或组织间植入的芯片剂型。前述生物可兼容聚合物可由商业上购得或通过本发明所属领域公知的合成方法制备而得。于本发明部分实施例中，以由双(对羧基苯氧基)丙烷与癸二酸所提供的聚酸酐(例如『p(CPP-SA)共聚物』)作为该生物可兼容聚合物。

在根据本发明应用所提供的药剂中，可视实际应用需求，调整药剂中的Z-亚丁基苯酞的含量比例。举例言之，以药剂的总重计，Z-亚丁基苯酞的重量百分比可例如为1％至40％，较佳为2％至30％。于本发明部分具体实施例中，该药剂以芯片的剂型(即，Cerebraca芯片)提供，且Z-亚丁基苯酞于该芯片中所占重量百分比为25％。

视需要地，可于本发明所提供的药剂中另外含有适宜用量的添加剂，例如可提高该药剂于服用时的口适感及视觉感受的调味剂、调色剂、着色剂等，以及可改善该药剂的稳定性及储存性的缓冲剂、保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等。此外，该药剂可视需要另外含一种或多种其他活性成分，或者与含该一种或多种其他活性成分的药物并用，以进一步加强该药剂的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度，只要该其他活性成分对Z-亚丁基苯酞及/或单核球细胞的效益没有不利的影响即可。

为使本发明所提供的药剂可于一个个体中发挥活化自体免疫系统的功效，可以于将单核球细胞施用至一个体之前、之后或同时，将该药剂投予至该个体中，以提升免疫细胞疗法的疗效。于前述免疫细胞疗法中，该单核球细胞的用量，较佳为每次投予1x10²至1x10¹⁰个细胞/施打部位，更佳每次投予1x10⁵至1x10⁷个细胞/施打部位。可以一日一次、一日多次、或数日一次等不同频率，分别施用本发明所提供的药剂与单核球细胞，端视投予个体的需求、年龄、体重、及健康况状而异。

举例言之，当以组织间植入的方式施用本发明所提供的药剂至经免疫细胞疗法治疗的个体、或将进行免疫细胞疗法治疗的个体以活化其自体免疫系统时，以Z-亚丁基苯酞计，该药剂的用量为每天30毫克/公斤体重至2,000毫克/公斤体重，较佳为每天100毫克/公斤体重至1,000毫克/公斤体重，更佳为每天200毫克/公斤体重至500毫克/公斤体重。但是，对于急性患者而言，该单核球细胞及根据本发明所提供的药剂的用量可视实际需要而酌增，例如增加至数倍或数十倍。

于本发明部分具体实施例中，将根据本发明所提供的药剂与单核球细胞合并使用于治疗脑癌。其中，该药剂以芯片的剂型并通过组织间植入的方式施用，单核球细胞则以注射的方式施用。

本发明也提供一套组，该套组可用于免疫细胞治疗且包含：(1)第一部分，包含Z-亚丁基苯酞；以及(2)第二部分，包含一单核球细胞。特定言之，该第一部分即上述根据本发明所提供的药剂。该第一部分以及第二部分的型式、施用频率、以及用量范围，均如上述的说明。

根据本发明的套组还可包含一第三部分，该第三部分包含一溶剂或一溶液，可于使用时与该第一部分及/或该第二部分混合，以提供注射液。

适用于第三部分的溶剂，包括但不限于极性溶剂，例如水、二甲基亚砜(DMSO)、及乙醇等；适用于第三部分的溶液，包括但不限于盐类缓冲液、以及任何用于提供注射剂型的适宜注射液。盐类缓冲液的例子，包括但不限于磷酸缓冲液(PBS)、柠檬酸盐缓冲液、及生理食盐水等。

于本发明套组的部分具体实施例中，该套组包含第一部分、第二部份以及第三部分。其中，该第一部分呈芯片的形式，且于将第二部分(包含单核球细胞)施用至个体之前与第三部分混合，以提供一注射液；较佳地，该第三部分为一磷酸缓冲液。

本发明套组的各部分通常分开包装且可各自储存，也可各自分开运送或销售，也可组合成套一起配送与销售。当本发明套组的各部分分开包装且各自储存，且各成分各自分开运送或销售时，第一部分较佳于4℃以下的环境下避光保存，第二部分较佳于-80℃的环境下保存。又例如，当本发明套组的各成分组合成套以配送与销售时，可分别以一内部低于4℃的容器、一内部呈-80℃的容器(例如液态氮桶)、以及一内部呈-20℃的容器(例如冰盒)来分别盛装第一部分、第二部分、以及第三部分。各容器的形状、大小并无特殊限制，只要各容器具有与外部的温度隔绝的功能，使各部分于一起配送与销售时不会互相影响保存温度即可。

可使用任何适宜冻存液于第二部分的保存，只要冻存液的组成可有效维持第二部分(包含单核球细胞)的存活率即可。通常视所对应的第二部分(包含单核球细胞)而调整冻存液的组成，一般而言，冻存液中的组成包括二甲基亚枫、葡萄糖等细胞营养成分、以及pH调节剂等。

根据本发明的套组可另外包含一使用说明书，以利使用者在使用时，可视需要调整各部分的施用方式、施用频率、以及施用剂量。

本发明还提供一种用于活化自体免疫系统及治疗癌症的至少一种的方法，其包含对有需要的个体投予一有效量的Z-亚丁基苯酞及一有效量的单核球细胞，其中该Z-亚丁基苯酞的投予可与该单核球细胞的投予同时或分别进行。较佳地，本发明方法是用于治疗癌症，其中该癌症是以下至少一种：恶性脑瘤、神经胶母细胞瘤、胰脏癌、肺癌、及黑色素细胞瘤。有关单核球细胞的施用方式、施用频率、以及用量范围，均如上述的说明。至于Z-亚丁基苯酞，则可以根据本发明应用所提供的药剂的形式使用，但不以此为限。

现以下列实施例进一步例示说明本发明。其中这些实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的保护范围。本发明保护范围如权利要求书所示。

实施例

实施例1：Z-亚丁基苯酞于抑制癌细胞表现免疫检查点抗原的效益

如前述说明，PDL-1是表现于癌细胞表面的免疫检查点抗原，可与免疫细胞结合、诱导免疫细胞启动“抑制免疫反应”，使自体性与外源性的免疫细胞皆无法活化，甚至造成免疫细胞死亡。

分别以不同浓度的Z-亚丁基苯酞(Z-BP)，对RG2细胞株(大鼠恶性脑胶质瘤细胞)、1XM细胞株(神经胶母细胞瘤干细胞)、Paca2细胞株(人类胰脏癌细胞)、H1650细胞株(人类非小细胞肺癌细胞)、或B16细胞株(小鼠黑色素细胞瘤细胞)，历时24小时。接着，萃取细胞的蛋白质，并以西方墨点法(Western Blotting)侦测经Z-亚丁基苯酞处理的癌细胞的PDL-1蛋白的表现。此外，侦测肌动蛋白的表现作为内部控制。结果示于图1。

由图1可知，RG2细胞株、1XM细胞株、Paca2细胞株、H1650细胞株、及B16细胞株的PDL-1蛋白的表现皆显著随Z-亚丁基苯酞(Z-BP)的浓度提高而下降。前述结果显示，Z-亚丁基苯酞(Z-BP)具有抑制癌细胞的免疫检查点抗原表现的效果，故可阻断癌细胞与免疫细胞的结合，而可用于提升癌症免疫细胞疗法的疗效。

实施例2：并用Z-亚丁基苯酞及单核球细胞以治疗癌症

(2-1)单核球细胞的制备

以心脏采血的方式，抽取实验用大鼠的全血(10毫升)注入采血管(购自BDVacutainer，型号：367988)中，以进行离心(1500-1800g、15分钟)。移除上清液后，将单核细胞球层移置离心管中。最后，以磷酸缓冲液(PBS)将单核球细胞(即，周边血单核球细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC))稀释至每100微升含有1x10⁶个细胞的浓度(1x10⁶cells/100μl)，供后续实验使用。

(2-2)动物模型的建立

通过吸入式麻醉法，以1.5-2％的异氟烷(isoflurane)气体将24只F344大鼠麻醉后，在大鼠脑部钻出2毫米的孔洞。接着，将RG2细胞液(1×10⁵个/10微升/每只大鼠)注射至纹状体区部位，再将钻孔封闭，以建立原位型的恶性脑胶母细胞瘤动物模型。三日后，以前次孔洞的位置为中心，向外延伸钻出10毫米的孔洞，再将大鼠随机分成四组(各组6只)，并分别以如下条件处理，以进行后续实验：

(1)“空芯片”组：于大鼠脑部置入一不含活性成分的芯片(由长弘生物科技有限公司提供)。

(2)“空芯片+PBMC”组：先于大鼠脑部置入一不含活性成分的芯片，然后以尾静脉注射的方式将1×10⁶个于(2-1)获得的PBMC注射至该大鼠。

(3)“Cerebraca芯片”组：于大鼠脑部置入一含有Z-BP的芯片(7.5毫克Z-BP/每片；由长弘生物科技有限公司提供)。

(4)“Cerebraca芯片+PBMC”组：于大鼠脑部置入一含有Z-BP的芯片(7.5毫克Z-BP/每片)，然后以尾静脉注射的方式将1×10⁶个于(2-1)获得的PBMC注射至该大鼠。

(2-3)存活情形的观察

每日观察上述各组大鼠的存活情形，并记录，结果示于图2及表1。

表1

组别	平均存活天数	中位存活期
			“空芯片”组	19.1±2.15	19
“空芯片+PBMC”组	23.2±2.95	25
			“Cerebraca芯片”组	34.1±3.8	34
“Cerebraca芯片+PBMC”组	44±6	43

由图2及表1可知，相较于“空芯片”组，“空芯片+PBMC”组、“Cerebraca芯片”组、及“Cerebraca芯片+PBMC”组的大鼠的寿命，分别延长6、15、及24天。前述结果显示，对恶性脑瘤个体投予单核球细胞可延长其寿命，且并用Z-亚丁基苯酞与单核球细胞可更有效延长恶性脑瘤个体的寿命。

(2-4)免疫细胞的观察

待(2-3)的大鼠死亡后，取其脑部制成病理组织切片，其后以CD4、CD8、CD11b、及CCL20抗体(购自Genetex公司)进行免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)，以显微镜观察肿瘤区域，结果示于图3。

由图3可知，相较于“空芯片”组，“Cerebraca芯片”组大鼠的肿瘤区域中的CCL20(由癌细胞所分泌的化学趋性物质，具有吸引免疫细胞的功能)有增加的趋势，且“Cerebraca芯片+PBMC”组大鼠的肿瘤区域中的CCL20增加趋势更为明显。

另一方面，相较于“空芯片”组，“Cerebraca芯片”组大鼠的肿瘤区域中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD11b+细胞(即，树突细胞)也有增加的趋势，且“Cerebraca芯片+PBMC”组大鼠肿瘤区域中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD11b+细胞增加趋势更为明显。

上述结果显示，Z-亚丁基苯酞具有促进癌细胞分泌活化免疫系统的化学趋性物质、增加免疫细胞的数量、及促进免疫细胞进入肿瘤区域的效果。此外，并用Z-亚丁基苯酞(Z-BP)与单核球细胞，可进一步提升前述效益。

由以上细胞实验以及动物实验的结果可知，Z-亚丁基苯酞可有效活化自体免疫系统，使免疫细胞成功辨认并杀死癌细胞，故可与单核球细胞合并使用于癌症治疗，以提升癌症免疫细胞疗法的疗效。

Claims (7)

1.一种用于活化自体免疫系统的套组，其特征在于，其包含：

（1）一第一部分，包含Z-亚丁基苯酞；以及

（2）一第二部分，包含一周边血单核球细胞，

其中，所述第一部分及所述第二部分供同时或分别投予至一个个体。

2.如权利要求1所述的套组，其特征在于，所述周边血单核球细胞是以下的至少一种：T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、及树状细胞。

3.如权利要求1或2所述的套组，其特征在于，所述第一部分呈供口服、经皮肤投予、经鼻腔投予、皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下植入、及／或组织间植入的形式；所述第二部分呈供皮质脊髓注射、鞘内注射、脑内注射、静脉注射、腹腔注射、及／或皮下注射的形式。

4.如权利要求3所述的套组，其特征在于，所述第一部分呈芯片（wafer）的形式。

5.如权利要求4所述的套组，其特征在于，还包含一第三部分，所述第三部分包含一溶液，且于使用时与所述第二部分混合，以提供一注射液。

6.如权利要求1所述的套组，其特征在于，所述套组用于以下的至少一种：抑制癌细胞表现免疫检查点抗原、促进癌细胞分泌活化免疫系统的化学趋性物质、增加免疫细胞的数量、及促进免疫细胞进入肿瘤区域。

7.如权利要求6所述的套组，其特征在于，所述癌细胞是恶性脑瘤细胞、神经胶母细胞瘤干细胞、胰脏癌细胞、肺癌细胞、及黑色素细胞瘤细胞。

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