CN101690738A - 牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。牛筋果通过乙醇提取，用石油醚进行萃取，剩下的水液用醋酸乙酯提取，经浓缩得到醋酸乙酯浸膏。经实验证明，提取所得到的醋酸乙酯部位具有抗肿瘤细胞的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药用植物新的医疗用途，尤其是牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，属于中药、天然药物领域。
背景技术
牛筋果[Harrisonia perforata(Blanco)Merrill)]为苦木科(Simaroubaceae)牛筋果属(Harrisonias)植物。别名：弓刺、连江簕。牛筋果属植物全世界共有4个种，分布于东南亚、中国。我国产牛筋果1种，分布于广东南部、海南等地，生长于低海拔的山坡、丘陵地的疏林中或灌木丛中。牛筋果根、茎、叶、果各部都具有抗肿瘤、肺结核、抗疟功效。牛筋果入药可用作除痰剂、驱虫剂，民间已用根、茎煎剂治疗疟疾和疮痈，亦用于外感风热、咳嗽、咯痰及咽喉肿痛。
目前，已从牛筋果植物中分离出10余种化合物，其中色原酮、异戊烯基聚酮、过氧化氢聚酮类化合物为主要的化学成分。至今文献报道多为牛筋果异戊烯基聚酮和过氧化氢聚酮类化合物在抗肿瘤等方面的研究和应用(《Tetrahedron》，65(2009)1147-1152)。
癌症是一组可影响身体任何部位的100多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和肿瘤。癌症是全世界一个主要死亡原因。在2005年全世界5800万死亡总数中，癌症占所有死亡的760万(或13％)。导致癌症总死亡率的主要癌症种类为：肺(130万死亡/年)，胃(约100万死亡/年)，肝(662000死亡/年)，结肠(655000死亡/年)，乳腺(502000死亡/年)。目前的治疗手段为临床用药从单一药物治疗过渡到多药联合化疗，但是，绝大多数的治疗仅能延长生命而不能根除病症，伴随治疗产生的许多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得患者的免疫系统受到损害。目前从天然药物中寻找抗肿瘤药物是研究的热门课题。一些中草药的提取物如延命素(《云南植物研究》，2006，28：95)、牡荆苷(《热带亚热带植物学报》，2008，16：51)、亚油酸(《上海医学》，1994，17：635)等具有抗肿瘤的活性，其化学结构包括二萜、黄酮苷、有机酸等。大蒜、蘑菇、灵芝和人参等已被许多国家用于癌症治疗。
本发明所述的牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途，至今尚未见文献报道和专利公开。
发明内容
本发明的目的是提供牛筋果新的医疗用途，即牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明的内容是牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，所述用途特征在于：1、牛筋果提取物可通过下述步骤获得：牛筋果干燥枝条，适当粉碎后用8-11倍量95％乙醇室温浸泡提取3次，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液用醋酸乙酯提取，经浓缩得到醋酸乙酯浸膏B。浸膏A、B干燥即得牛筋果提取物A、牛筋果提取物B；2、牛筋果提取物B和/或牛筋果果实95％乙醇提取物，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。
牛筋果提取物B经薄层层析，用显色剂显色，显示牛筋果提取物B含有色原酮、柠檬苦素、异戊烯基聚酮类化合物。
本发明的牛筋果提取物B，经体外活性筛选，统计处理结果显示有较好的抗肿瘤活性。为了进一步验证牛筋果及其提取物在治疗肿瘤方面的功效，对牛筋果提取物B进行了100例病人初步的临床疗效观察，结果表明牛筋果提取物B是有效的。由牛筋果提取物B的体外活性筛选和病人初步临床疗效观察结果，可以合理推导牛筋果及其提取物可用于制备抗肿瘤药物，即牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途。
本发明的有益效果是提供了牛筋果在民间通常用于制备治疗疟疾、肺结核等药物以外的新的医疗用途，即牛筋果及其提取物在制备抗肿瘤药物方面的用途，并采用不同的溶媒萃取得到牛筋果提取物B，牛筋果提取物B添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成口服和注射药物制剂。
下面是牛筋果提取物B的体外活性筛选和病人初步临床疗效观察试验及其结果。
一、体外活性筛选
试验方法：
采用MTT法测试了牛筋果提取物B对人体的白血病细胞P-388、肺腺癌细胞A-549等细胞株的体外抑瘤活性(结果见附表1)。活性测试方法如下：实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂霉素C)和8个不同浓度(0.8，1.6，3.2，6.3，12.5，25，50，100)的待测样品，每个浓度设2个平行。收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5％CO2、湿度90％以上、37℃培养箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS)50μL，37℃反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100μL DMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。
以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC50)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。
实验结果：
附表1样品对P-388、A-549等肿瘤细胞株的毒性作用
注：毒性值IC50，即药物对细胞杀灭50％时的浓度值。IC50值越大则毒性越小。
二、初步临床疗效观察
研究对象：肿瘤患者，其中男58例，女42例，年龄最小者32岁，最大者75岁。
诊断标准：1、无其他任何不良症状；2、没有服用过任何其他抗肿瘤药物。
研究方法：该试验以100名肿瘤患者为研究对象，受试物为本发明成药(约含0.15g牛筋果提取物B的0号胶囊)服用，一日三次，每次二粒，开水冲服。每40天为一个疗程，连续两个疗程后停药休息一周，详细观察病情变化进行检查。然后进行第三个疗程治疗，在服药期间停服其它药品。
临床治愈：症状及客观检查阳性征象消失，连续半年无复发者。
临床显著：症状基本消失，癌灶缩小一半以上，其它客观检查有明显好转，观察半年以上不再发展者。
临床有效：症状有所改善，病灶基本稳定，观察在一个月以上者。
临床无效：症状及客观检查无改善，或仅有短期改善，而又迅速恶化者。
疗效结果：
本发明的优点是：
1、本发明选用的天然药物为原料，低毒，副作用小。
2、本发明无须煎煮，治疗方便，有效率达94％。
3、本发明能够控制癌细胞增生，防止癌细胞扩散，使癌细胞枯萎脱落消失。
4、本发明提供低剂量(0.5～2mg/kg)即可产生抗肿瘤活性，因此长期低剂量(如0.6～1.25mg/kg)比高剂量(5～10mg/kg)的抗肿瘤作用更强。
具体实施方式
实施例1
取牛筋果干燥品2.0kg，用10倍量95％乙醇分3次(5、3、3天)浸提，减压回收乙醇，浓缩干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉适量，混均、制粒、干燥、整粒，装入胶囊，制成1000粒即可。
实施例2
取牛筋果干燥品10.0kg，用9倍量90％乙醇渗漉，减压浓缩渗漉液至无醇味得浓缩液，浓缩液分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液用醋酸乙酯提取，经浓缩得到醋酸乙酯浸膏B，浸膏B干燥即得牛筋果提取物B。取牛筋果提取物B 100.0g，加入淀粉等适量辅料，混均、制粒、干燥，压制成1000片即可。
实施例3
取牛筋果干燥品5.0kg，用8倍量80％乙醇渗漉，减压浓缩渗漉液至无醇味得浓缩液，浓缩液分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏，剩下的水液用醋酸乙酯提取，经浓缩得到醋酸乙酯浸膏，醋酸乙酯浸膏干燥即得牛筋果提取物B；取牛筋果提取物B 25.0g，加适量注射用水溶解，按常规的水针剂工艺，调PH值、过滤、灌封、灭菌制成1000ml即可；或者添加适量附加剂如甘露醇，溶解搅匀，过滤、冻干、分装制成500瓶即可。
Claims (4)
1.牛筋果在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于所述牛筋果为苦木科(Simaroubaceae)牛筋果属(Harrisonias)植物牛筋果(Harrisonia perforata)，药用全株。
2.牛筋果提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于牛筋果提取物可通过下述步骤获得：
牛筋果干燥枝条，适当粉碎后用8-11倍量95％乙醇室温浸泡提取3次，也可渗漉提取，将提取液减压回收乙醇，减压回收乙醇至无醇味。将乙醇提取物分散于水中成悬浊液，经石油醚萃取得到石油醚浸膏A，剩下的水液用醋酸乙酯提取，经浓缩得到醋酸乙酯浸膏B。浸膏A、B干燥即得牛筋果提取物A、牛筋果提取物B。
3.根据权利要求2所述牛筋果提取物，其特征在于所述牛筋果提取物B含有色原酮、异戊烯基聚酮、过氧化氢聚酮和柠檬苦素类化合物。
4.根据权利要求1、2所述用途，其特征在于：将牛筋果提取物B和/或牛筋果95％乙醇提取物，添加适当的药用辅料，按常规的制剂工艺，即可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液等口服药物制剂和冻干粉针、水针等注射药物制剂。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN112592351A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-04-02 | 中国科学院昆明植物研究所 | 牛筋果三内酯a、治疗抗阿尔兹海默症的药物及制备方法和应用 |
| CN118717818A (zh) * | 2024-07-12 | 2024-10-01 | 中山大学 | 牛筋果或其提取物在制备抗衰老药物中的应用 |
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- 2009-07-15 CN CN200910151418A patent/CN101690738A/zh active Pending
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