CN102282160A - 多配体构成物 - Google Patents
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Abstract
本发明描述了多配体构成物和在其制备中使用的中间多价构成物。所述多配体构成物在诊断和治疗应用中有用。
Description
技术领域
本发明涉及在诊断或治疗应用中使用的多配体构成物，以及在制备所述多配体构成物中使用的中间多价构成物。
特别地，本发明涉及在抑制配体-受体介导的事件中使用的三配体或四配体构成物，例如细胞的病毒感染和免疫应答的开始。
背景技术
许多生物学上的相互作用是通过多价受体和其靶点之间的结合介导的。这些多价结合发生在病毒受体和感染前的靶细胞表面上表达的配体之间。
抗体(IgG、IgM)在补体级联开始前经由多结合位点而结合抗原(Alzari等人(1988)；Merritt和Hol(1995)；Ascenzi等人(2000)；Reni(1995))。
最初的多价结合事件之后发生的事件(例如，细胞的病毒感染、输液/组织注射)通常对于宿主是有害的。
多价结合事件的特征是低的解离常数(Kd)。预期施予宿主作为结合事件的竞争性抑制剂的化合物必须对所述受体具有显著更高的亲和力以提供治疗效果。
一个提供多价结合的竞争性抑制剂的途径是设计含有受体的多个配体的化合物。
树枝状分子是包含设计参与与受体多价结合的多个配体的化合物的一个实例(Tomalia等人(1990)；Tsvetkov等人(2002)；Jayaraman等人(1997))。
这些树枝状分子的局限是它们的分子量高并且分子内配体间隔很难确定。
这些树枝状分子的进一步的局限是所述分子的许多配体不参与与所述受体的有效相互作用。
触角分子是包含设计参与与受体多价结合的多个配体的化合物的另一实例(Fon等人(2000))。
触角分子的优点是它们包含比它们的树枝状相应物更少(通常是3～5个)的配体。
使用刚性载体分子或模板是设计包含受体的多个配体的化合物的又一个实例。
候选的载体分子包括环糊精、杯芳烃和卟啉(porphirines)(Kiessling和Pohl(1996)；Matsuura等人(2004)；Mellet等人(2002)；Lundquist和Toone(2002)；Fon等人(2000))。
这些刚性载体分子的局限是它们的尺寸约束在偶联配体的可能的分子内间隔(大约10
)。
载体分子的尺寸与多价受体的结合位点的间隔不符，例如病毒(如流感病毒血凝素(HA)＞50
)和抗体(＞100
)。
本发明的目的是提供能够抑制多价结合事件的分子。
本发明的目的是提供一种制备多价受体和它的靶点之间相互作用的抑制剂的方法，其中所述配体的分子内间隔是预先确定的。
这些目的将被分别解释，具有至少提供有用选择的目的。
发明内容
在第一方面，本发明提供以下结构的多配体构成物(construct)：
{F-S1-S2-S3-}nCA
其中：
F是受体的配体：
S1-S2-S3是连接F和C的间隔基；以及
当A为CH3时，n为3；或者当A不存在时，n为4。
优选地，所述受体选自：流感病毒血凝素(HA)和抗-A或抗-B免疫球蛋白。
优选地，F是选自Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O-(6`SLN)、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O-(Atri)和Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O-(Btri)的配体。
优选地，所述间隔基是刚性间隔基。
优选地，S1选自1-氨基-C2-4烷基。更优选地，S1选自1-氨基丙基。
优选地，S2选自-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-和-CO(CH2)5CO-。更优选地，S2选自-CO(CH2)4CO-。
优选地，S3为下述的结构：
其中：
R为CH3或H；
m是1～5的整数；以及
*不为H。
在第一方面的第一个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第一方面的第二个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第一方面的第三个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第一方面的第四个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第一方面的第五个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第一方面的第六个实施方式中，本发明提供以下结构的多配体构成物：
命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第二方面，本发明提供在制备本发明第一方面的多配体构成物中使用的以下结构的构成物：
{H-S3-}nCA
其中：
S3为连接H和C的间隔基；以及
当A为CH3时，n为3；或者当A不存在时，n为4。
优选地，所述间隔基是刚性间隔基。
优选地，S3为下述的结构：
其中：
R为CH3或H；
m是1～5的整数；以及
*不为H。
在第二方面的第一个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3。
在第二方面的第二个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3。
在第二方面的第三个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3。
在第二方面的第四个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3。
在第二方面的第五个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3。
在第二方面的第六个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C。
在第二方面的第七个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C。
在第二方面的第八个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C。
在第二方面的第九个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C。
在第二方面的第十个实施方式中，本发明提供以下结构的构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C。
在第三方面，本发明提供一种经由本发明第二方面的中间多价构成物制备本发明第一方面的多配体构成物的方法。
优选地，所述制备本发明第一方面的多配体构成物的方法包括下述步骤：
●使结构F-S1-S2-A的活化的配体衍生物与本发明第二方面的中间多价构成物反应；
其中：
F是所述配体；
S1选自1-氨基-C2-4烷基；
S2选自-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-和-CO(CH2)5CO-；以及
A为活化剂。
优选地，A选自4-硝基苯基(Nph)或N-氧琥珀酰亚胺(Nos)。
在第四方面，本发明提供一种通过施予主体(subject)有效量的本发明第一方面的多配体构成物抑制主体病毒感染的方法。
优选地，所述病毒选自流感病毒。
优选地，所述施予主体是通过吸入。
优选地，所述多配体构成物是选自下述的结构：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)；以及
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在第五方面，本发明提供一种含有本发明第一方面的多配体构成物和可药用配料(formulant)的药物制剂。
优选地，所述药物制剂是适合通过吸入施予主体的剂型的制剂。
优选地，所述多配体构成物为选自下述的结构：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)；以及
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
在本申请的说明书和权利要求书中，下面的术语和词组具有给出的含义：
“Glycotope”意指与受体的结合位点结合的配体的碳水化物结构的一部分。
“配体”意指结合一个或多个大分子(例如，表面表达的抗原)的任何分子或者分子的一部分。
“多配体”意指具有多个配体。
“可药用配料”意指药物组合物的制剂中包含的成分。
“受体”意指结合一个或多个配体的大分子或大分子(例如，表面表达的抗原)的一部分。
“脉管系统”意指运送流体(例如，血液或淋巴)或者维持该流体循环的脉管的系统。
现在将参照附图页中的图详细地描述本发明的示例性实施方式。
附图说明
图1.命名为{6’SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]nGly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)的多配体构成物的一般结构。
图2.命名为{6’SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]nGly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)的多配体构成物的一般结构。
图3.命名为{6’SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]nGly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)的多配体构成物的一般结构。
图4.命名为{6’SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]nGly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)的多配体构成物的一般结构。
图5.命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(53A)的多配体构成物的结构。
图6.命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(54A)的多配体构成物的结构。
图7.命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(53B)的多配体构成物的结构。
图8.命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(54B)的多配体构成物的结构。
图9.Atri-PAA、多配体构成物(53A)和多配体构成物(54A)抑制mAbs A3与包被Atri-PAA的平板结合的比较。50％抑制浓度为20μM。
图10.Atri-PAA、多配体构成物(53A)和多配体构成物(54A)抑制抗A抗体(人血清，血型III)与包被Atri-PAA的平板结合的比较。Atri-PAA和(53A)的50％抑制浓度为40μM，(54A)为10μM。
图11.Btri-PAA、多配体构成物(53B)和多配体构成物(54B)抑制mAbs B8与包被Btri-PAA的平板结合的比较。所有化合物的浓度相当于0.3mM的三糖(Btri)。
具体实施方式
本发明的多配体构成物可以分别由三胺(1)或四胺(2)碱试剂，并经由下述的中间多价构成物制备成三价或四价形式。
推定的配体的许多衍生物(F-S1-H，其中F是配体)可以用于经由所述中间多价构成物制备所述多配体构成物。这些衍生物的实例提供在表1中。
其它推定的配体包括：Galβ1-4GlcNAc；Galβ1-3GlcNAc；SAα2-6Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3GlcNAc；Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；Galβ1-3(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；Galβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc；Galβ1-3GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-4GlcNAc；Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-4GlcNAc；Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-4GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-4Gal；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-4Gal；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4(GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAβ2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-3GlcNAcβ1-4Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)Glc；SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)Glc；SAα2-3Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；SAα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc；和SAα2-6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ1-3Galβ1-4(Fucα1-3)Glc，其中SA为唾液酸。
本发明提供预先确定的构成物内部的配体间隔。因此，除了由为提供所述配体而选择的部分的特征所确定的结合的特异性之外，所述构成物与受体表达靶点之间结合的亲合力可以是最佳的。
所述碱试剂与Boc保护的甘氨酰甘氨酸的N-氧琥珀酰亚胺酯(Boc-GlyGlyNos)(3)的反应以及随后的甘氨酰甘氨酸取代的碱(4或5)的脱保护反应提供三胺嵌段(6)或四胺嵌段(7)(方案IA或IB)。
表1.中间体(F-S1-H)的结构和命名。6’SLN(Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ)；Atri(GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ).)；Btri(Galα1-3(Fucα1-2)Galβ)。
亚氨二醋酸二甲基酯(8)与Boc保护的甘氨酰甘氨酸的N-氧琥珀酰亚胺酯(Boc-GlyGlyNos)(3)反应，然后所述二甲基酯(9)部分水解，随后酸(10)与N-氧琥珀酰亚胺酯化，提供Boc保护的二甘氨酰基(甲氧基羰基甲基)甘氨酸的酯(11)(方案II)。
通过使方案IA的方法制备的三胺嵌段(6)与方案II的方法制备的Boc保护的二甘氨酰基(甲氧基羰基甲基)甘氨酸N-氧琥珀酰亚胺酯(11)反应，制备三价形式的多配体构成物的中间体。
方案IA
方案IB
方案II
方案IIIA
方案IIIB
通过使方案IB的方法制备的四胺嵌段(7)与方案II的方法制备的Boc保护的二甘氨酰基(甲氧基羰基甲基)甘氨酸N-氧琥珀酰亚胺酯(11)反应，制备四价形式的多配体构成物的中间体。
所述三价或四价形式的多配体构成物经由它们各自的三氟乙酸(CF3COOH)盐，通过所述中间体的连续延长而制备。
所述延长步骤以高收率提供通式I的延长产物：
通式I
其中：
m是整数1、2、3、4或5；以及
n为3且A为CH3；或者n为4且A不存在。
通式I的产物的末端Boc保护的氨基官能团的脱保护反应提供通式II的产物：
其中：
m是整数1、2、3、4或5；以及
n为3且A为CH3；或者n为4且A不存在。
虽然在实施例中制备的通式II的产物是CF3COOH盐，但是可以理解：可以制备通式II的产物的其它盐。为了方便，在通式II的产物结构的表示中，省略了所述盐的酸。
因此，可以制备具有预定配体间隔范围的多配体构成物。所述构成物的配体间隔是所述嵌段(6、7)的原子价与用于提供通式I和通式II的产物的延长步骤(方案IIIA和IIIB)的数目的函数。
根据提供所述构成物和所述受体表达靶点之间的最佳亲合力或结合所需的构成物内配体间隔，可以选择由表2和3中确定的构成物制备的多配体构成物。
表2.
表3.
将通式II的产物偶联到配体(F)上以提供多配体构成物。所述偶联可以使用衍生自例如己二酰对硝基苯基二酯(18)的试剂的间隔基(S2)部分介导。
例如，通式II的产物与6’SLN的氨基丙基糖苷(19)的偶联可以经由根据方案IVα制备的中间体6’SLN-S1-S2-Nph(20)而实现。或者，通式II的产物与Atri的氨基丙基糖苷(39A)的偶联可以经由根据方案IVβ制备的中间体Atri-S1-S2-Nph(40A)而实现。通式II的产物与Btri的氨基丙基糖苷(39B)的偶联可以经由根据方案IVγ制备的中间体Btri-S1-S2-Nph(40B)而实现。
然后，分别根据方案VAα或VBα，将所述中间体F-S1-S2-Nph(例如，6’SLN-S1-S2-Nph(20)、Atri-S1-S2-Nph(40A)或Btri-S1-S2-Nph(40B))偶联到通式II的三价(例如，21)或四价(例如，22)产物得到三配体构成物(例如，23)或四配体构成物(例如，24)。
除了由为提供配体而选择的部分的特征所确定的多配体构成物的结合的特异性，以及由构成物内配体间隔最佳化的构成物与受体表达靶点之间的结合的亲合力之外，所述多配体构成物的性质可以进一步通过可选择地将中间体F-S1-S2-A(20)偶联到已被脱甲基化的通式II的产物上而优化。
方案IVα
方案IVβ
方案IVγ
例如，分别根据方案VIAα或VIBα，可以将中间体6’SLN-S1-S2-Nph(20)偶联到通式II的三价(例如，21)或四价(例如，22)产物上，包括脱甲基步骤，以产生三配体构成物(例如，25)或四配体构成物(例如，26)。
根据提供多配体构成物和受体表达靶点之间的最佳亲合力或结合所需的构成物内配体间隔，可以选择由表4和5中确定的结构制备的多配体构成物。
当将所述多配体构成物以药物制剂施予主体时，预期所述甲基化和脱甲基化多配体构成物的不同性质将进一步提供所述构成物和受体表达靶点之间的生物利用度、药代动力学和亲合力方面的优点。
表4.
表5.
实施例
材料和方法
丙酮、苯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、甲苯和邻二甲苯来自Chimmed(俄罗斯联邦)。乙腈来自Cryochrom(俄罗斯联邦)。DMSO、DMF、CF3COOH、Et3N、N，N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺来自Merck(德国)。亚氨二醋酸二甲基酯盐酸盐来自Reakhim(俄罗斯联邦)。
Dowex 50X4-400和Sephadex LH-20来自Amersham BiosciencesAB(瑞典)。硅胶60来自Merck(德国)。
如Fleischer等人(1971)描述的合成三胺(H2N-CH2)3CCH3。
如Litherland等人(1938)描述的合成四胺(H2N-CH2)4C x 2H2SO4。
如Pazynina等人(2002)描述的合成糖苷Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH2。
如Korchagina和Bovin(1992)描述的合成三糖GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH2和Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH2。
使用硅胶60F254铝板(Merck，1.05554)进行薄层色谱，通过7％H3PO4浸泡后炭化进行检测。
在30℃用Bruker WM 500MHz仪器记录1H NMR谱，使用所述溶剂的残留质子的信号作为参考([D6]DMSO，2.500ppm；[D2]H2O，4.750ppm)。
如Shilova等人(2005)所述进行ELISA对血型糖抗原的抗体进行定量。
(CF3COOH·H-Gly2-HNCH2)3CCH3(6)的制备(方案1A)
向搅拌的三胺(H2N-CH2)3CCH3(1)(600mg，5.128mmol)的乙醇(50ml)溶液中添加Boc-GlyGlyNos(3)(5800mg，17.62mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后在室温下保藏过夜。
将所述反应混合物过滤，将滤液减压蒸发。残留物真空干燥并溶解在乙酸乙酯(125ml)中。
将所述溶液用饱和NaCl水溶液(15×15ml)、水(3×5ml)洗涤，并用Na2SO4干燥。将得到的溶液减压蒸发，并将残留物真空干燥。
将干燥物(泡沫)与二乙醚(40ml)一起保藏3小时，然后粉碎(pulverize)。将沉淀过滤，用二乙醚(3×10ml)洗涤并真空干燥。(Boc-Gly2-HNCH2)3CH3(4)的收率为3815mg(98％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)δppm：8.212(t，J＝5.8Hz，3H；C-CH2-NH)，7.850(t，J＝5.7Hz，3H；CH2-NH)，6.910(t，J＝5.7Hz，3H；CH2-NH-Boc)，3.697(d，J＝5.7Hz，6H；CH 2-NH)，3.631(d，J＝5.7Hz，6H；CH 2-NH)，2.835(d，6H；CCH2)，1.382(s，27H；OC(CH 3)3)，0.657(s，3H，CH3)ppm.
将(Boc-Gly2-HNCH2)3CH3(4)(1500mg，1.976mmol)溶解在CF3COOH(5ml)中，并将所述溶液在室温下保持2小时。真空下除去三氟乙酸，将残留物用Et2O萃取三次(用30ml的Et2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH。
将固体残留物溶解在5ml的水中并冷冻干燥。(CF3COOH·H-Gly2-HNCH2)3CCH3(6)的收率为97％，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：3.934(s，6H，C(O)CH2N)，3.870(s，6H，C(O)CH2N)，2.972(s，6H，CCH2)，0.739(s，3H，CH3).
(CF3COOH·H-Gly2-NHCH2)4C(7)的制备(方案IB)
向搅拌的四胺(H2N-CH2)4C x 2H2SO4(2)(500mg，1.52mmol)在1MNaHCO3水溶液(18.2ml)和i-PrOH(9ml)的混合物中的溶液中添加Boc-GlyGlyNos(3)(4012mg，12.18mmol)(放出CO2，起泡)。将所述反应混合物搅拌30分钟，然后添加6ml的1M NaHCO3水溶液，将混合物搅拌过夜。
将(Boc-Gly2-HNCH2)4C(5)的沉淀过滤，用甲醇/水混合物(1∶1，20ml)充分洗涤，真空干燥。收率1470mg(98％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)δ，ppm：8.491(t，J＝5.6Hz，1H；NHCO)，7.784(t，J＝6.6Hz，1H；C-CH2-NHCO)，6.858(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，3.696(d，J＝5.6Hz，2H；COCH 2NH)，3.675(d，J＝6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.685(d，J＝6.6Hz，2H；C-CH 2NH)，1.375(s，9H；C(CH3)3.
将(Boc-Gly2-HNCH2)4C(5)(1450mg，1.466mmol)溶解在CF3COOH(5ml)中，将所述溶液在室温下保持2小时。真空下除去三氟乙酸，将残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(用30ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH。
将固体残留物真空干燥，溶解在最小体积的水中，过SephadexLH-20柱并用水洗脱。将含有纯的(7)的级分合并，蒸发到约5ml并冷冻干燥。收率1424mg(93％)，白色固体。TLC：Rf＝0.5(乙醇/浓缩NH3；2∶1(v/v))。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.028(s，2H；COCH 2NH)，3.972(s，2H；COCH 2NH)，2.960(s，2H；C-CH 2NH).
{[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-乙酰基]-甲氧基羰基甲基-氨基}-乙酸甲酯(9)的制备(方案II)
向搅拌的(甲氧基羰基甲基-氨基)-乙酸甲酯盐酸盐(8)(988mg，5mmol)的DMF(15ml)溶液中添加Boc-GlyGlyNos(3)(3293mg，10mmol)，并添加(CH3CH2)3N(3475μL，25mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用邻二甲苯(70ml)稀释并蒸发。
硅胶快速柱色谱法(甲苯装柱，乙酸乙酯洗脱)得到粗产物。将所述粗产物溶解在氯仿中并依次用水、0.5M NaHCO3和饱和KCl洗涤。
将氯仿萃取液蒸发，产物在硅胶柱上纯化(氯仿装柱，15∶1(v/v)氯仿/甲醇洗脱)。将级分蒸发，残留物真空干燥，得到无色粘稠浆体(9)。收率1785mg，(95％)。TLC：Rf＝0.49(7∶1(v/v)氯仿/甲醇)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)δ，ppm：7.826(t，J＝5.1Hz，1H；NHCO)，6.979(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.348和4.095(s，2H；NCH 2COO)，3.969(d，J＝5.1Hz，2H；COCH 2NH)，3.689和3.621(s，3H；OCH 3)，3.559(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
{[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-乙酰基]-甲氧基羰基甲基-氨基}-乙酸(10)的制备(方案II)
向搅拌的(9)(1760mg，4.69mmol)的甲醇(25ml)溶液中添加0.2MNaOH水溶液(23.5ml)，将所述溶液在室温下保持5分钟。然后将所述溶液用乙酸(0.6ml)酸化并蒸发至干。
将残留物在硅胶上进行柱色谱法(乙酸乙酯装柱，2∶3∶1(v/v/v)i-PrOH/乙酸乙酯/水洗脱)得到回收的(9)(63mg，3.4％)和目标化合物(10)(1320mg)。然后将所述中间产物溶解在甲醇/水/吡啶混合物(20∶10∶1，30ml)中并过离子交换柱(Dowex 50X4-400，吡啶形式，5ml)以移除残留的钠阳离子。
然后将该柱用相同的溶剂混合物冲洗，将洗脱液蒸发，残留物溶解在氯仿/苯混合物(1∶1，50ml)中，然后蒸发并真空干燥。10的收率为1250mg(74％)，白色固体。TLC：Rf＝0.47(4∶3∶1(v/v/v)i-PrOH/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，N-羧基甲基甘氨酸单元的顺式和反式构象异构体的混合物，约3∶1。.主要构象异构体；δ，ppm：7.717(t，J＝5Hz，1H；NHCO)，7.024(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.051(s，2H；NCH 2COOCH3)，3.928(d，J＝5Hz，2H；COCH 2NH)，3.786(s，2H；NCH 2COOH)，3.616(s，3H；OCH 3)，3.563(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，1.381(s，9H；C(CH3)3)ppm；次要构象异构体，δ＝7.766(t，J＝5Hz，1H；NHCO)，7.015(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.288(s，2H；NCH 2COOCH3)，3.928(d，J＝5Hz，2H；COCH 2NH)，3.858(s，2H；NCH 2COOH)，3.676(s，3H；OCH 3)，3.563(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，1.381(s，9H；C(CH3)3).
{[2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙酰基氨基)-乙酰基]-甲氧基羰基甲基-氨基}-乙酸N-氧琥珀酰亚胺酯(Boc-Gly2(MCMGly)Nos)(11)的制备(方案II)
向冰冷的搅拌的(10)(1200mg，3.32mmol)和N-羟基琥珀酰亚胺(420mg，3.65mmol)的DMF(10ml)溶液中添加N，N`-二环己基碳二亚胺(754mg，3.65mmol)。将所述混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温下搅拌2小时。
将N，N`-二环己基脲的沉淀滤出，用DMF(5ml)洗涤，将滤液蒸发至最小体积。然后将残留物在(CH3CH2)2O(50ml)中搅拌1小时，并通过倾析移除乙醚萃取物。残留物真空干燥得到活性酯(11)(1400mg，92％)，为白色泡沫。TLC：Rf＝0.71(40∶1(v/v)丙酮/乙酸)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，N-羧基甲基甘氨酸单元的顺式和反式构象异构体的混合物，约3∶2。
主要构象异构体；δ，ppm：7.896(t，J＝5.1Hz，1H；NHCO)，6.972(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.533(s，2H；NCH 2COON)，4.399(s，2H；NCH 2COOCH3)，3.997(d，J＝5.1Hz，2H；COCH 2NH)，3.695(s，3H；OCH 3)，3.566(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
次要构象异构体；δ，ppm：7.882(t，J＝5.1Hz，1H；NHCO)，6.963(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.924(s，2H；NCH 2COON)，4.133(s，2H；NCH 2COOCH3)，4.034(d，J＝5.1Hz，2H；COCH 2NH)，3.632(s，3H；OCH 3)，3.572(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
将所述活性酯(11)(1380mg)溶解在DMSO中得到6ml的体积并用作0.5M溶液(保藏在-18℃)。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3(13)的制备(方案IIIA)
向搅拌的(CF3COOH·H-Gly2-NHCH2)3CCH3(6)(401mg，0.5mmol)的DMSO(4ml)溶液中添加活性酯(11)(1.8mmol，3ml的0.6M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(417μL，3mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌3小时，用300μL AcOH酸化，溶液过Sephadex LH-20凝胶柱(2.4×40cm)，用添加0.5％AcOH的2∶1(v/v)甲醇/水洗脱。
将含有12的级分合并，蒸发并干燥。将残留物溶解在2∶3∶1(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水的混合物中，并在硅胶柱(2.6×25cm)上分级分离(用添加0.5％AcOH的2∶3∶1(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水洗脱)。
将含有纯的12的级分合并、蒸发并干燥。将残留物溶解在1∶1(v/v)丙酮/2-丙醇混合物(10mL)中，过滤，将滤液蒸发并在真空下充分干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3(12)的收率为682mg(91.5％)，白色固体。TLC：Rf＝0.31(2∶3∶1(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)(每一条链的氢的数目)构象异构体的混合物；δ，ppm：8.725-7.790(三重峰，4H；NHCO)，6.997(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.527-3.570(15H；5COCH 2N，COCH 2(COOCH3)N，COCH2(COOCH 3)N)，2.846(宽.d，J＝6.1Hz，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3)，0.615(s，每个完整分子一个CH 3)。
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3(12)(560mg，0.376mmol)溶解在CF3COOH(2ml)中，将该溶液在室温下保持60分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与20ml(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后干燥，溶解在水(约3mL)中并冷冻干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3(13)的收率为564mg(98％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，(每一条链的氢的数目)构象异构体的混合物；δ，ppm：4.437-3.781(15H；5COCH 2N，COCH 2(COOCH3)N，COCH2(COOCH 3)N)，3.019(s，2H；C-CH 2NH)，0.786(s，每个完整分子一个CH 3)。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3(21)的制备
向搅拌的{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3(13)(459mg，0.3mmol)的DMSO(2ml)溶液中添加活性酯(11)(1.125mmol，1.875ml的0.6M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(250μL，1.8mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌4小时，用200μL AcOH酸化，溶液过Sephadex LH-20凝胶柱(2.4×40cm)，用添加0.5％AcOH的2∶1(v/v)甲醇/水洗脱。
将含有产物的级分合并，蒸发并从2ml的水冷冻干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3的收率为(14)627mg(94％)，白色固体。TLC：Rf＝0.29(4∶3∶2(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：8.524-7.772(三重峰，6H；NHCO)，6.991(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.379-3.565(26H；8COCH 2N，2COCH 2(COOCH3)N，2COCH2(COOCH 3)N)，2.837(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3)，0.650(s，每个完整分子一个CH 3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3(14)(617mg，0.278μmol)溶解在CF3COOH(2ml)中，将该溶液在室温下保持60分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与15ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后干燥，溶解在水(约3mL)中并冷冻干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3(21)的收率为607mg(97％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：4.443-3.781(26H；8COCH 2N，2COCH 2(COOCH3)N，2COCH2(COOCH 3)N)，3.018(s，2H；C-CH 2NH)，0.787(s，每个完整分子一个CH 3).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(27)的制备
向搅拌的{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3(21)(594mg，0.2627mmol)的DMSO(3ml)溶液中添加活性酯(11)(1.051mmol，1.752ml的0.6M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(219μL，1.576mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌4小时，用180μL AcOH酸化，溶液过Sephadex LH-20凝胶柱(2.4×40cm)，用添加0.5％AcOH的2∶1(v/v)甲醇/水洗脱。
将含有产物的级分合并，蒸发并从2ml的水冷冻干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3的收率为756mg(97.5％)。TLC：Rf＝0.48(4∶3∶2(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：8.519-7.773(三重峰，8H；NHCO)，6.990(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.381-3.565(37H；11COCH 2N，3COCH 2(COOCH3)N，3COCH2(COOCH 3)N)，2.837(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3)，0.651(s，每个完整分子一个CH 3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(739mg，0.2506mmol)溶解在CF3COOH(2.5ml)中，将该溶液在室温下保持60分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与10ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后干燥，溶解在水(约3mL)中并冷冻干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(27)的收率为719mg(96％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：4.444-3.777(37H；11COCH 2N，3COCH 2(COOCH3)N，3COCH2(COOCH 3)N)，3.014(s，2H；C-CH 2NH)，0.784(s，每个完整分子一个CH 3).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(28)的制备
向搅拌的{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(27)(507mg，0.1695mmol)的DMSO(3ml)溶液中添加活性酯(11)(0.7629mmol，1.272ml的0.6M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(141μL，1.017mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌4小时，用200μL AcOH酸化，溶液过Sephadex LH-20凝胶柱(2.4×40cm)，用添加0.5％AcOH的2∶1(v/v)甲醇/水洗脱。
将含有产物的级分合并，蒸发至约3ml体积并冷冻干燥。{Boc-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3的收率为605mg(97％).TLC：Rf＝0.33(4∶3∶2(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：8.519-7.773(三重峰，10H；NHCO)，6.990(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.381-3.565(48H；14COCH 2N，4COCH 2(COOCH3)N，4COCH2(COOCH 3)N)，2.838(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3)，0.651(s，每个完整分子一个CH 3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(600mg，0.1631mmol)溶解在CF3COOH(2ml)中，将该溶液在室温下保持60分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与10ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后干燥，溶解在水(约3mL)中并冷冻干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(28)的收率为589mg(97％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：4.445-3.781(48H；14COCH 2N，4COCH 2(COOCH3)N，4COCH2(COOCH 3)N)，3.017(s，2H；C-CH 2NH)，0.787(s，每个完整分子一个CH 3).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(29)的制备
向搅拌的{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(28)(208mg，56μmol)的DMSO(2ml)溶液中添加活性酯(11)(251.6μmol，420μL的0.6M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(47μl，336μmol)。
将所述混合物在室温下搅拌小时，用150μL AcOH酸化，溶液过Sephadex LH-20凝胶柱(2.4×40cm)，用添加0.5％AcOH的2∶1(v/v)甲醇/水洗脱。
将含有产物的级分合并，蒸发至约2ml体积并冷冻干燥。{Boc-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3的收率为242mg(98％)，白色固体。TLC：Rf＝0.25(4∶3∶2(v/v/v)2-丙醇/乙酸乙酯/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：8.383-7.772(三重峰，12H；NHCO)，6.990(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.304-3.564(59H；17COCH 2N，5COCH 2(COOCH3)N，5COCH2(COOCH 3)N)，2.837(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3)，0.651(s，每个完整分子一个CH 3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(80.5mg，183μmol)溶解在CF3COOH(1ml)中，将该溶液在室温下保持60分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与5ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后干燥，溶解在水(约3mL)中并冷冻干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(29)的收率为76.4mg(94％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，(每一条链显示的氢的数目)构象异构体的混合物，δ，ppm：4.445-3.780(59H；17COCH 2N，5COCH 2(COOCH3)N，5COCH2(COOCH 3)N)，3.016(s，2H；C-CH 2NH)，0.787(s，每个完整分子一个CH 3).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C(16)的制备(方案IIIB)
向搅拌的(CF3COOH·H-Gly2-HNCH2)4C(7)(277mg，0.265mmol)的DMSO(2ml)溶液中添加活性酯(11)(1.591mmol，3.18ml的0.5MDMSO溶液)和(CH3CH2)3N(295μL，2.121mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌过夜，用150μL AcOH酸化，真空下(冷冻干燥)移除溶剂。残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与20ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)。
将固体残留物溶解在最小体积的丙酮中，在硅胶柱上分级分离(丙酮装柱，用丙酮、20∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水和15∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水洗脱)。
将选择的级分蒸发，残留物真空干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C(15)的收率为351mg(68％)，白色固体。TLC：Rf＝0.38(15∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，链中N-羧基甲基甘氨酸单元的顺式和反式构象异构体的混合物，约3∶2。
主要构象异构体；δ，ppm：8.593(t，J＝5Hz，1H；NHCO)，8.335(t，J＝5.4Hz，1H；NHCO)，7.821(t，J＝6.4Hz，1H；C-CH2-NHCO)，7.786(t，J＝5.1Hz，1H；NHCO)，6.993(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.139(s，2H；NCH 2CO)，4.074(s，2H；NCH 2COO(CH3))，3.985(d，J＝5Hz，2H；COCH 2NH)，3.887(d，J＝5.4Hz，2H；COCH 2NH)，3.726(d，J＝5.1Hz，2H；COCH 2NH)，3.634(s，3H；OCH 3)，3.567(d，J＝6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.686(宽.d，J＝6.4Hz，2H；C-CH 2NH)，1.379(s，9H；C(CH3)3).
次要构象异构体；δ，ppm：8.511(t，J＝5Hz，1H；NHCO)，8.158(t，J＝5.4Hz，1H；NHCO)，7.821(t，J＝6.4Hz，1H；C-CH2-NHCO)，7.786(t，J＝5.1Hz，1H；NHCO)，6.993(t，J＝6Hz，1H；NHCOO)，4.292(s，2H；NCH 2CO)，3.998(s，2H；NCH 2COOCH3)，3.954(d，J＝5Hz，2H；COCH 2NH)，3.826(d，J＝5.4Hz，2H；COCH 2NH)，3.715(d，J＝5.1Hz，2H；COCH 2NH)，3.692(s，3H；OCH 3)，3.567(d，J＝6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.686(宽.d，J＝6.4Hz，2H；C-CH 2NH)，1.379(s，9H；C(CH3)3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C(15)(330mg，0.168mmol)溶解在CF3COOH(2ml)中，将该溶液在室温下保持40分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与20ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后真空干燥。
{CF3COO H·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C(16)的收率为337mg(99％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，链中N-羧基甲基甘氨酸单元的顺式和反式构象异构体的混合物，约11∶10.
主要构象异构体；δ，ppm：4.370(s，2H；NCH 2CO)，4.265(s，2H；NCH 2COOCH3)，4.215(s，2H；COCH 2NH)，4.138(s，2H；COCH 2NH)，3.968(s，2H；COCH 2NH)，3.919(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.775(s，3H；OCH 3)，2.914(s，2H；C-CH 2NH).
次要构象异构体；δ，ppm：4.431(s，2H；NCH 2CO)，4.241(s，2H；NCH 2COOCH3)，4.239(s，2H；COCH 2NH)，4.074(s，2H；COCH 2NH)，3.960(s，2H；COCH 2NH)，3.919(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.829(s，3H；OCH 3)，2.914(s，2H；C-CH 2NH).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(22)的制备
向搅拌的(CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-HNCH2)4C(16)(272mg，0.135mmol)的DMSO(2ml)溶液中添加活性酯(11)(0.809mmol，1.62ml的0.5M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(112μL，0.809mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌过夜，用70μL AcOH酸化，真空下(冷冻干燥)移除溶剂。残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与15ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)。
将固体残留物溶解在最小体积的7∶1(v/v)丙酮/甲醇混合物中，在硅胶柱上分级分离(丙酮装柱，用7∶1(v/v)丙酮/甲醇，10∶2∶1(v/v/v)、9∶2∶1(v/v/v)、8∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水洗脱)。
将选择的级分蒸发，残留物真空干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(17)的收率为279mg(71％)，白色固体。TLC：Rf＝0.42(8∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，每条链中两个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：8.604，8.519，8.397，8.388，8.346，8.211，8.200，8.167，8.034，8.024，7.925，7.912，7.819和7.773(t，6H；6NHCO)，6.992(t，J＝5.9Hz，1H；NHCOO)，4.302-3.723(18H；2NCH 2CO，2NCH 2COOCH3，5COCH 2NH)，3.692，3.689和3.632(s，6H；2OCH 3)，3.566(d，J＝5.9Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.686(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(17)(269mg，91.65μmol)溶解在CF3COOH(2ml)中，将该溶液在室温下保持40分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与15ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后真空干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(22)的收率为270mg(98％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，每条链中两个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：4.441-3.963(单峰，18H；2NCH 2CO，2NCH 2COOCH3，5COCH 2NH)，3.920(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.833，3.824，3.780和3.773(s，6H；2OCH 3)，2.918(s，2H；C-CH 2NH).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(30)的制备
向搅拌的(CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-HNCH2)4C(21)(175mg，58.5μmol)的DMSO(2ml)溶液中添加活性酯(11)(0.351mmol，0.702ml的0.5M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(49μL，0.351mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌过夜，用30μL AcOH酸化，真空下(冷冻干燥)移除溶剂。将残留物溶解在最小体积的1∶1(v/v)乙腈/水的混合物中，在Sephadex LH-20柱上分级分离(用1∶1(v/v)乙腈/水洗脱)。
将选择的级分蒸发，残留物真空干燥。纯的{Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C的收率为279mg(71％)，白色固体。TLC：Rf＝0.42(8∶2∶1(v/v/v)丙酮/甲醇/水)。
将含有{Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C的级分合并，蒸发至约2ml体积并冷冻干燥。初始收率为215mg(94％)。在硅胶柱(乙腈装柱，用4∶5∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水洗脱)上进一步纯化得到169mg的Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(收率74％，白色固体)。TLC：Rf＝0.45(4∶5∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，每条链中三个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：8.594-7.772(三重峰，总共(together)8H；8NHCO)，6.989(t，J＝5.6Hz，1H；NHCOO)，4.303-3.722(26H；3NCH 2CO，3NCH 2COOCH3，7COCH 2NH)，3.692和3.632(s，9H；3OCH 3)，3.565(d，J＝5.6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.687(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(146mg，37.36μmol)溶解在CF3COOH(1ml)中，将该溶液在室温下保持40分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与10ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后真空干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(30)的收率为147mg(99％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，每条链中三个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：4.446-3.964(单峰，26H；3NCH 2CO，3NCH 2COOCH3，7COCH 2NH)，3.924(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.836，3.828，3.824，3.783，3.778和3.773(s，9H；3OCH 3)，2.919(s，2H；C-CH 2NH).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C(31)的制备
向搅拌的(CF3COOH·H-Gly2(MCMGly)]3-HNCH2)4C(30)(68mg，17.16μmol)的DMSO(1ml)溶液中添加活性酯(11)(0.137mmol，0.275ml的0.5M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(14.3μL，0.103mmol)。
将所述混合物在室温下搅拌过夜，用100μL AcOH酸化，真空下(冷冻干燥)移除溶剂。将残留物溶解在最小体积的1∶1(v/v)乙腈/水(0.25％AcOH)的混合物中，在Sephadex LH-20柱上分级分离(用1∶1(v/v)乙腈/水(0.25％AcOH)洗脱)。
将含有{Boc-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C的级分合并，蒸发至约2ml体积并冷冻干燥。收率为81mg(96％)，白色固体。TLC：Rf＝0.24(4∶5∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，每条链中四个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：8.590-7.773(三重峰，10H；10NHCO)，6.989(t，J＝5.6Hz，1H；NHCOO)，4.303-3.722(34H；4NCH 2CO，4NCH 2COOCH3，9COCH 2NH)，3.691和3.631(s，12H；4OCH 3)，3.565(d，J＝5.6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.684(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.379(s，9H；C(CH3)3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C(74mg，15.16μmol)溶解在CF3COOH(1ml)中，将该溶液在室温下保持40分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与10ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后真空干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C(31)的收率为72mg(96％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，每条链中四个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：4.446-3.964(单峰，34H；4NCH 2CO，4NCH 2COOCH3，9COCH 2NH)，3.925(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.836，3.829，3.827，3.822，3.783，3.779，3.777和3.772(s，12H；4OCH 3)，2.919(s，2H；C-CH 2NH).
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(32)的制备
向搅拌的(CF3COOH·H-Gly2(MCMGly)]4-HNCH2)4C(31)(16.8mg，3.403μmol)的DMSO(1ml)溶液中添加活性酯(11)(27.2μmol，63μl的0.5M DMSO溶液)和(CH3CH2)3N(3μl，21.6μmol)。
将所述混合物在室温下搅拌过夜，用100μL AcOH酸化，真空下(冷冻干燥)移除溶剂。将残留物溶解在最小体积的1∶1(v/v)乙腈/水(0.25％AcOH)的混合物中，在Sephadex LH-20柱上分级分离(用1∶1(v/v)乙腈/水(0.25％AcOH)洗脱)。
将含有{Boc-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。收率为19mg(95％)，白色固体。TLC：Rf＝0.15(4∶3∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D6]DMSO，30℃)，每条链中五个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：8.595-7.772(三重峰，12H；12NHCO)，6.989(t，J＝5.6Hz，1H；NHCOO)，4.303-3.723(42H；5NCH 2CO，5NCH 2COOCH3，11COCH 2NH)，3.692和3.631(s，15H；5OCH 3)，3.565(d，J＝5.6Hz，2H；COCH 2NHCOO)，2.686(宽.d，2H；C-CH 2NH)，1.380(s，9H；C(CH3)3).
将{Boc-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(19mg，3.25μmol)溶解在CF3COOH(0.5ml)中，将该溶液在室温下保持40分钟。将三氟乙酸真空蒸发，残留物用(CH3CH2)2O萃取三次(与5ml的(CH3CH2)2O轻轻搅动30分钟，然后倾析)以除去残留的CF3COOH，然后真空干燥。
{CF3COOH·H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(32)的收率为20mg(99％)，白色固体。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)，每条链中五个N-羧基甲基-甘氨酸单元的构象异构体的混合物，δ，ppm：4.446-3.965(单峰，42H；5NCH 2CO，5NCH 2COOCH3，11COCH 2NH)，3.924(s，2H；COCH 2NH2 +)，3.835，3.829，3.827，3.825，3.823，3.783，3.779，3.777和3.773(s，15H；5OCH 3)，2.919(s，2H；C-CH 2NH).
Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-O(p-C6H4)NO2(6`SLN-S1-S2-Nph)(20)的制备(方案IVα)
向搅拌的Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH2(19)(100mg，0.1367mmol)的DMSO(1ml)溶液中添加己二酸对硝基苯基二酯(18)(372mg，0.957mmol，2ml DMF中)的溶液和(CH3CH2)3N(19μL，0.1367mmol)。将所述溶液在室温下保持15小时，用100μL的AcOH酸化，并用30ml的0.5％AcOH水溶液稀释。
滤出过量的(18)的沉淀并用0.5％AcOH水溶液冲洗。将滤液蒸发至最小体积并过Sephadex LH-20柱(用1∶1(v/v)乙腈/水、0.5％AcOH洗脱)。将含有纯的(20)的级分合并，蒸发至约2ml体积并冷冻干燥。(20)的收率为116mg(87％)，白色固体。TLC：Rf＝0.67(4∶3∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：8.350和7.391(m，Jorto＝9.2Hz，2H；对C6 H 4)，4.528(d，J＝7.9Hz，1H；H1 Galβ)，4.435(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.028-3.549(总共21H；H4，5，6，7，8，9，9`Neu5Acα，H2，3，4，5，6，6`Galβ，H2，3，4，5，6，6`GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N)，3.293和3.197(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.744(t，J＝6.8Hz，2H；CH2CH 2COO)，2.667(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eqNeu5Acα)，2.320(t，J＝6.7Hz，2H；CH2CH 2CONH)，2.062和2.039(s，3H；NHCOCH 3)，1.756(m，7H；H3ax Neu5Acα，OCH2CH 2CH2N，CH 2CH 2CH2CO).
GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-O(对C6H4)NO2(Atri-S1-S2-Nph)(40A)的制备(方案IVβ)
向搅拌的GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH2(39A)(31mg，0.05285mmol)的DMSO(0.5ml)溶液中添加己二酸对硝基苯基二酯(18)(102.6mg，0.2642mmol，1ml DMF中)的溶液。将所述溶液在室温下保持20小时，用70μL的AcOH酸化，并用17ml的0.5％AcOH水溶液稀释。
滤出过量的(18)的沉淀并用0.5％AcOH水溶液冲洗。将滤液蒸发至最小体积并过Sephadex LH-20柱(用1∶1(v/v)乙腈/水、0.5％AcOH洗脱)。将含有纯的(40A)的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。(40A)的收率为40.4mg(91％)，白色固体。TLC：Rf＝0.69(4∶3∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：8.359和7.398(m，Jorto＝9.2Hz，2H；对C6 H 4)，5.303(d，J＝3.5Hz，1H；H1 Fucα)，5.179(d，J＝3.7Hz，1H；H1 GalNAcα)，4.516(d，J＝7.9Hz，1H；H1 Galβ)，4.409(ddd，J6`＝6.8Hz，1H；H5 Fucα)，4.235(m，3H；H2 GalNAcα，H5 GalNAcα，H4Galβ)，4.004(d，J～3Hz，1H；H4 GalNAcα)，3.971-3.699(总共12H；H3，6，6`GalNAcα，H2，3，4 Fucα，H2，3，6，6`Galβ，OCH 2CH2CH2N)，3.617(dd，J＝7.8Hz，J＝4.4Hz，1H；H5 Galβ)，3.280(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.746(t，J＝7Hz，2H；CH2CH 2COO)，2.324(t，J＝6.8Hz，2H；CH 2CH2CONH)，2.051(s，3H；NHCOCH 3)，1.843(q，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.744(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.210(d，J＝6.6Hz，3H；CH3Fucα).
Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-O(对C6H4)NO2(Btri-S1-S2-Nph)(40B)的制备(方案IVγ)
向搅拌的Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH2(39B)(34mg，0.0623mmol)的DMSO(0.5ml)溶液中添加己二酸对硝基苯基二酯(18)(121mg，0.312mmol，在1.2ml DMF中)的溶液。将所述溶液在室温下保持20小时，用80μL的AcOH酸化，并用20ml的0.5％AcOH水溶液稀释。
滤出未反应的(18)的沉淀并用0.5％AcOH水溶液冲洗。将滤液蒸发至最小体积并过Sephadex LH-20柱(用1∶1(v/v)乙腈/水、0.5％AcOH洗脱)。将含有纯的(40B)的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。(40B)的收率为46.2mg(93％)，白色固体。TLC：Rf＝0.71(4∶3∶2(v/v/v)i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：8.335和7.373(m，Jorto＝9.3Hz，2H；对C6 H 4)，5.257(d，J＝3.4Hz，1H；H1 Galα)，5.219(d，J＝3.2Hz，1H；H1 Fucα)，4.503(d，J＝7.9Hz，1H；H1 Galβ)，4.380(ddd，J6＝6.8Hz，1H；H5 Fucα)，4.234(s，1H；H4 Galβ)，4.197(m，J6～J6`～6.2Hz，1H；H5 Galα)，3.960-3.677(总共14H；H2，3，4，6，6`Galα，H2，3，6，6`Galβ，H2，3，4Fucα，OCH 2CH2CH2N)，3.626(dd，J＝7.8Hz，J＝4.4Hz，1H；H5Galβ)，3.257(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.721(t，J＝6.9Hz，2H；CH2CH 2COO)，2.299(t，J＝6.8Hz，2H；CH2CH 2CONH)，1.820(quin.，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.720(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.173(d，J＝6.8Hz，3H；CH3Fucα).
制备{Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOCH3)CH2CO]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}3CCH3，铵盐的一般过程：
其中，m为整数3、4或5(41、42或43)(参照方案VAα)
向搅拌的通式II的产物(表2；27、28或29)(2μmol)的DMSO(0.7mL)溶液中添加6`SLN-S1-S2-Nph(20)(7.4mg，7.5μmol)和(CH3CH2)3N(1.4μL，10μmol)。将所述混合物在室温下保持24小时，然后(根据TLC数据酰化完成)用20μL的AcOH酸化。
将反应混合物在Sephadex LH-20柱上分级分离(洗脱液-MeCN/水(1∶1)，含有0.02M AcOH·Py)。将含有纯的糖肽(分别为41、42或43)的级分合并，蒸发并真空干燥。将残留物溶解在约1mL的水中，添加80μL的0.1M氨水，将所述溶液冷冻干燥。
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(m为3)(41)的收率为8.7mg(83％)，白色固体。TLC：Rf＝0.65(甲醇/乙腈/水3∶3∶2)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)：δ＝4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.439-3.535(58H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，3OCH3，OCH2CH2CH2N，28H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH2N)，3.008(s，2H；C-CH2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH3)，1.784(m，2H；OCH2CH2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH2CH2CH2CO)，0.780(s，3H/分子；H3C-C-CH2NH)ppm.
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(m为4)(42)的收率为10.2mg(86％)，白色固体。TLC：Rf＝0.62(甲醇/乙腈/水3∶3∶2)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)：δ＝4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.435-3.532(69H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，4OCH3，OCH2CH2CH2N，36H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH2N)，3.003(s，2H；C-CH2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH3)，1.784(m，2H；OCH2CH2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH2CH2CH2CO)，0.775(s，3H/分子；H3C-C-CH2NH)ppm.
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(m为5)(43)的收率为12.1mg(91％)，白色固体。TLC：Rf＝0.60(甲醇/乙腈/水3∶3∶2)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)：δ＝4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.439-3.536(80H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，5OCH3，OCH2CH2CH2N，44H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH2N)，3.007(s，2H；C-CH2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH3)，1.784(m，2H；OCH2CH2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH2CH2CH2CO)，0.779(s，3H/分子；H3C-C-CH2NH)ppm.
制备{Neu5Acα2-6Gαlβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOCH3)CH2CC]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}4C，铵盐的一般过程：
其中，m为整数3、4或5(44、45或46)(参照方案VBα)
向搅拌的通式II的产物(表3；30、31或32)(2μmol)的DMSO(1mL)溶液中添加6`SLN-S1-S2-Nph(20)(9.8mg，10mmol)和(CH3CH2)3N(2μL，14.4μmol)。将所述混合物在室温下保持36小时，酰化完成后(通过TLC监测)用20μL的乙酸酸化。
将反应混合物在Sephadex LH-20柱上分级分离(用含有0.02MAcOH·Py的1∶1(v/v)乙腈/水洗脱)。将含有纯的四配体构成物(44、45或46)的级分合并，蒸发并真空干燥。将残留物溶解在约1mL的水中，添加80μL的0.1M氨水，将所述溶液冷冻干燥。
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(m为3)(44)的收率为13.2mg(95％)，白色固体。TLC：Rf＝0.32(3∶4∶6∶4(v/v/v/v)甲醇/i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.510(d，J＝7.9Hz，1H；H1 Galβ)，4.415(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.390-3.489(58H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，3OCH 3，OCH 2CH2CH2N，28H肽链)，3.227和3.143(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.865(s，2H；C-CH 2NH)，2.641(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.317和2.223(m，2H；CH2CH 2CO)，2.025和1.997(s，3H；NHCOCH 3)，1.736(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.681(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.577(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C(m为4)(45)的收率为15mg(95％)，白色固体。TLC：Rf＝0.25(3∶4∶6∶4(v/v/v/v)甲醇/i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.509(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.414(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.389-3.488(69H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，4OCH 3，OCH 2CH2CH2N，36H肽链)，3.226和3.143(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.864(s，2H；C-CH 2NH)，2.640(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.315和2.222(m，2H；CH2CH 2CO)，2.025和1.996(s，3H；NHCOCH 3)，1.735(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.679(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.575(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(m为5)(46)的收率为16.4mg(92％)，白色固体。TLC：Rf＝0.22(3∶4∶6∶4(v/v/v/v)甲醇/i-PrOH/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.509(d，J＝7.9Hz，1H；H1 Galβ)，4.415(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.389-3.488(80H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，5OCH 3，OCH 2CH2CH2N，44H肽链)，3.226和3.143(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.863(s，2H；C-CH 2NH)，2.640(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.315和2.222(m，2H；CH2CH 2CO)，2.024和1.996(s，3H；NHCOCH 3)，1.735(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.679(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.575(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
制备{Neu5Acα2-6Gαlβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOH)CH2CO]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}3CCH3，铵盐的一般过程：
其中，m为整数2、3、4或5(25、47、48或49)(参照方案VIAα)
向搅拌的产物21或通式II的产物(表2；27、28或29)(2μmol)的DMSO(0.7mL)溶液中添加6`SLN-S1-S2-Nph(20)(7.4mg，7.5μmol)和(CH3CH2)3N(1.4μl，10μmol)。将所述混合物在室温下保持24小时，添加7μL的(CH3CH2)3N，然后将混合物在室温下保持3小时。
将反应混合物用水(1.5ml)稀释，添加(CH3CH2)3N(70μL)，然后将混合物在室温下保持24小时。
然后将反应混合物蒸发到最小体积，将残留物在Sephadex LH-20柱上分级分离(用1∶1(v/v)乙腈-水中的0.2M NH3水溶液洗脱)。将含有纯的多配体构成物的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3(m为2)(25)的收率为8.0mg(89％)，白色固体。TLC：Rf＝0.41(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.555(d，J＝7.5Hz，1H；H1Galβ)，4.460(d，J＝7.8Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.297-3.535(41H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，20H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，3.031(s，2H；C-CH 2NH)，2.687(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.272(m，2H；CH2CH 2CO)，2.072和2.043(s，3H；NHCOCH 3)，1.784(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.726(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，0.790(s，3H/分子；H 3C-C-CH2NH).
{6`SLN-接头-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3(m为3)(47)的收率为9.7mg(92％)，白色固体。TLC：Rf＝0.36(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.295-3.535(49H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，28H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，3.032(s，2H；C-CH 2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH 2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH 3)，1.784(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，0.790(s，3H/分子；H 3C-C-CH2NH).
{6`SLN-接头-[Gly2(CMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3(m为4)(48)的收率为11mg(91％)，白色固体。TLC：Rf＝0.34(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.295-3.535(57H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，36H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，3.034(s，2H；C-CH 2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH 2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH 3)，1.784(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，0.792(s，3H/分子；H 3C-C-CH2NH).
{6`SLN-接头-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(m为5)(49)的收率为12.4mg(92％，白色固体。TLC：Rf＝0.33(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.555(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.459(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.295-3.535(65H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，44H肽链)，3.269和3.191(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，3.035(s，2H；C-CH 2NH)，2.686(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.364和2.271(m，2H；CH2CH 2CO)，2.071和2.043(s，3H；NHCOCH 3)，1.784(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.725(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.623(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，0.792(s，3H/分子；H 3C-C-CH2NH).
制备{Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOH)CH2CO]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}4C，铵盐的一般过程：
其中，m为整数3、4或5(50、51或52)(参考方案VIBα)
向搅拌的通式II的产物(表3；30、31或32)(5.1μmol)的DMSO(1mL)溶液中添加6`SLN-S1-S2-Nph(20)(25mg，25.5μmol)和(CH3CH2)3N(5μL，35.7μmol)。将所述混合物在室温下保持24小时，添加10μL的(CH3CH2)3N，然后将混合物在室温下保持3小时。
将反应混合物用水(2ml)稀释，添加(CH3CH2)3N(90μL)，然后将混合物在室温下保持24小时。
然后将反应混合物蒸发到最小体积，将残留物在Sephadex LH-20柱上分级分离(用0.2M NH3水溶液洗脱)。将含有纯的多配体构成物的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(m为3)(50)的收率为31.1mg(87％)，白色固体。TLC：Rf＝0.54(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.509(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.414(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.254-3.488(49H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，28H肽链)，3.226和3.146(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.904(s，2H；C-CH 2NH)，2.640(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.320和2.227(m，2H；CH2CH 2CO)，2.027和1.998(s，3H；NHCOCH 3)，1.740(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.684(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.578(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]4Gly2-NHCH2}4C(m为4)(51)的收率为32.7mg(81％)，白色固体。TLC：Rf＝0.52(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.508(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.414(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.254-3.489(57H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，36H肽链)，3.226和3.146(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.903(s，2H；C-CH 2NH)，2.640(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.320和2.227(m，2H；CH2CH 2CO)，2.027和1.997(s，3H；NHCOCH 3)，1.739(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.683(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.578(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(m为5)(52)的收率为26.4mg(91％)，白色固体。TLC：Rf＝0.37(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：4.508(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.414(d，J＝7.9Hz，1H；H1 GlcNAcβ)，4.252-3.488(65H；7HNeu5Acα，6H Galβ，6H GlcNAcβ，OCH 2CH2CH2N，44H肽链)，3.226和3.146(m，1H；OCH2CH2CH 2N)，2.903(s，2H；C-CH 2NH)，2.640(dd，J3ax＝12.5Hz，J4＝4.6Hz，1H；H3eq Neu5Acα)，2.320和2.227(m，2H；CH2CH 2CO)，2.026和1.997(s，3H；NHCOCH 3)，1.738(m，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.681(t，J3eq＝J4＝12.5Hz，1H；H3ax Neu5Acα)，1.577(m，4H；CH 2CH 2CH2CO).
制备{GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOH)CH2CO]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}4C，铵盐的一般过程：
其中，m为整数3或5(53A或544)(参照方案VIIA)
向搅拌的通式II的产物(表3；30或32)(2μmol)的DMSO(0.5mL)溶液中添加(Atri-S1-S2-Nph)(40A)(10mg，12μmol)的DMSO(200μl)和(CH3CH2)3N(3μL，21.6μmol)的溶液。将所述混合物在室温下保持15小时，添加5μL的(CH3CH2)3N，然后将混合物在室温下保持5小时。
将反应混合物用水(1.4ml)稀释，添加(CH3CH2)3N(65μL)，然后将混合物在室温下保持18小时。
然后将反应混合物蒸发到最小体积，将残留物在Sephadex LH-20柱上分级分离(用0.2M NH3水溶液洗脱)。将含有纯的多配体构成物的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。
{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(m为3)(53A)的收率为10.9mg(86％)，白色固体。TLC：Rf＝0.64(1∶1∶1(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：5.333(d，J＝3.7Hz，1H；H1Fucα)，5.208(d，J＝3.5Hz，1H；H1 GalNAcα)，4.563(d，J＝7.8Hz，1H；H1 Galβ)，4.439(ddd，J6`＝6.7Hz，1H；H5 Fucα)，4.320-3.676(总共45H；6H GalNAcα，3H Fucα，6H Galβ，OCH 2CH2CH2N，28H肽链)，3.285(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.971(宽s，2H；中心βC-CH 2-NH)，2.382和2.291(m，2H；CH2CH 2CONH)，2.075(s，3H；NHCOCH 3)，1.862(q，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.642(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.242(d，J＝6.6Hz，3H；CH3Fucα).
{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(m为5)(54A)的收率为14.2mg(85％)，白色固体。TLC：Rf＝0.60(1∶1∶1(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：5.334(d，J＝3.7Hz，1H；H1Fucα)，5.209(d，J＝3.5Hz，1H；H1 GalNAcα)，4.563(d，J＝7.8Hz，1H；H1 Galβ)，4.440(ddd，J6`＝6.7Hz，1H；H5 Fucα)，4.325-3.676(总共61H；6H GalNAcα，3H Fucα，6H Galβ，OCH 2CH2CH2N，44H肽链)，3.285(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.971(宽s，2H；中心C-CH 2-NH)，2.382和2.292(m，2H；CH2CH 2CONH)，2.076(s，3H；NHCOCH 3)，1.863(q，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.643(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.243(d，J＝6.6Hz，3H；CH3Fucα).
制备{Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O(CH2)3NH-CO(CH2)4CO-[NHCH2CO-NHCH2CO-N(CH2COOH)CH2CO]m-NHCH2CO-NHCH2CO-NHCH2}4C，铵盐的一般过程：
其中，m为整数3或5(53B或54B)(参照方案VIIB)
向搅拌的通式II的产物(表3；30或31)(2μmol)的DMSO(0.5mL)溶液中添加Btri-S1-S2-Nph(40B)(9.5mg，12μmol)的DMSO(200μl)和(CH3CH2)3N(3μL，21.6μmol)的溶液。将所述混合物在室温下保持20小时。
将反应混合物用水(1.4ml)稀释，添加(CH3CH2)3N(65μL)，然后将混合物在室温下保持20小时。
然后将反应混合物蒸发到最小体积，将残留物在Sephadex LH-20柱上分级分离(用MeOH/水1∶1混合物中的0.2M NH3洗脱)。将含有纯的多配体构成物的级分合并，蒸发至约1ml体积并冷冻干燥。
{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]3Gly2-NHCH2}4C(m为3)(53B)的收率为10.6mg(86％)，白色固体。TLC：Rf＝0.37(3∶3∶2(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：5.271(d，J＝3.6Hz，1H；H1Galα)，5.233(d，J＝3.4Hz，1H；H1 Fucα)，4.533(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.394(ddd，J6`＝6.6Hz，1H；H5 Fucα)，4.274-3.669(总共45H；6HGalα，3H Fucα，6H Galβ，OCH 2CH2CH2N，28H肽链)，3.246(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.927(宽s，2H；中心C-CH 2-NH)，2.341和2.250(m，2H；CH2CH 2CONH)，1.822(q，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.600(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.187(d，J＝6.6Hz，3H；CH3Fucα).
{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(m为5)(54B)的收率为12.7mg(92％)，白色固体。TLC：Rf＝0.62(1∶1∶1(v/v/v)甲醇/乙腈/水)。
1H NMR(500MHz，[D2]H2O，30℃)δ，ppm：5.270(d，J＝3.6Hz，1H；H1Galα)，5.232(d，J＝3.4Hz，1H；H1 Fucα)，4.533(d，J＝7.9Hz，1H；H1Galβ)，4.394(ddd，J6`＝6.6Hz，1H；H5 Fucα)，4.275-3.668(总共61H；6HGalα，3H Fucα，6H Galβ，OCH 2CH2CH2N，44H肽链)，3.246(m，2H；OCH2CH2CH 2N)，2.925(宽s，2H；中心C-CH 2-NH)，2.341和2.249(m，2H；CH2CH 2CONH)，1.821(q，2H；OCH2CH 2CH2N)，1.600(m，4H；CH 2CH 2CH2CO)，1.187(d，J＝6.6Hz，3H；CH3Fucα).
命名为6`SLN的配体的多配体构成物的抗病毒活性
使用Gambaryan和Matrosovich(1992)描述的固相胎球蛋白结合抑制(FBI)试验测试三配体构成物作为流感病毒的抑制剂。
简言之，在4℃过夜将病毒吸附到包被有胎球蛋白的聚苯乙烯小平板(Costar)的孔上，将未结合的病毒冲掉。
将一定体积(0.05ml)的含有固定量的过氧化物酶标记的胎球蛋白和可变量的多配体构成物的溶液添加到该平板上。
用补充有0.02％牛血清白蛋白、02％Tween 80和10μmol的唾液酸酶抑制剂4-氨基-4-脱氧-Neu5Ac2en的磷酸盐缓冲盐水制备该溶液。
将平板在2～4℃孵育1小时，冲洗，并使用显色底物邻苯二胺测定结合的过氧化物酶标记的胎球蛋白的量。
在唾液酸残基的浓度的基础上计算与所述多配体构成物复合的病毒的解离常数(KD)，并将结果进行平均(表6)。
如测试三配体构成物那样测试四配体构成物，并将结果进行平均(表7)。
命名为Atri的配体的四配体构成物的抗体中和活性
使用抑制ELISA，测试四配体构成物53A和54A作为针对三糖抗原Atri(IgM单克隆A3)的抗体和来自人血清的抗A抗体的阻滞剂。
将抑制活性与包被有三糖抗原Atri(Shilova等人(2005)的聚丙烯酰胺偶联物的ELISA平板进行比较。
发现四配体构成物53A和54A的中和活性比具有侧悬的三糖抗原Atri的多价30kDa聚合物(Atri-PAA)的中和活性更高。
命名为Btri的配体的四配体构成物的抗体中和活性
使用抑制ELISA，测试四配体构成物53B和54B作为针对三糖抗原Btri(IgM单克隆B8)的抗体的阻滞剂。
发现四配体构成物53B和54B的中和活性比具有侧悬的三糖抗原Btri的多价30kDa聚合物(Btri-PAA)的中和活性更高。
虽然已经通过示例性的实施方式描述了本发明，但是应当理解，在不脱离本发明范围的情况下可以进行变化和修改。此外，如果对于具体的特征存在已知的等效物，那么这些等效物就如同在本说明书中具体提到一样引入。
参考文献
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工业实用性
本发明提供了在诊断和治疗应用中使用的多配体构成物，以及在所述多配体构成物的制备中使用的中间多价构成物。
特别地，本发明提供了在抑制配体-受体介导的事件(例如细胞的病毒感染和免疫应答的开始)中使用的三或四配体构成物。
Claims (38)
1.一种以下结构的多配体构成物：
{F-S1-S2-S3-}nCA
其中：
F是受体的配体；
S1-S2-S3是连接F和C的间隔基；以及
当A为CH3时，n为3；或者当A不存在时，n为4。
2.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，所述受体选自流感病毒血凝素(HA)、抗-A和抗-B免疫球蛋白。
3.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，F是选自Neu5Acα2-6Galβ1-4GlcNAcβ-O-(6`SLN)、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ-O-(Atri)和Galα1-3(Fucα1-2)Galβ-O-(Btri)的配体。
4.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，所述间隔基是刚性间隔基。
5.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，S1选自1-氨基-C2-4烷基。
6.根据权利要求5所述的多配体构成物，其中，S1选自1-氨基丙基。
7.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，S2选自-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-和-CO(CH2)5CO-。
8.根据权利要求7所述的多配体构成物，其中，S2选自-CO(CH2)4CO-。
9.根据权利要求1所述的多配体构成物，其中，S3为下述结构：
其中：
R为CH3或H；
m是1～5的整数；以及
*不为H。
10.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
11.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
12.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
13.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{Atri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
14.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]2Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
15.一种以下结构的多配体构成物：
命名为{Btri-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
16.一种以下结构的多价构成物：
{H-S3-}nCA
其中：
S3为连接H和C的间隔基；以及
当A为CH3时，n为3；或者当A不存在时，n为4。
17.根据权利要求16所述的多价构成物，其中，所述间隔基是刚性间隔基。
18.根据权利要求16所述的多价构成物，其中，S3为下述结构：
其中：
R为CH3或H；
m为1～5的整数；以及
*不为H。
19.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}3CCH3。
20.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}3CCH3。
21.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}3CCH3。
22.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}3CCH3。
23.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3。
24.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]Gly2-NHCH2}4C。
25.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]2Gly2-NHCH2}4C。
26.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]3Gly2-NHCH2}4C。
27.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]4Gly2-NHCH2}4C。
28.一种以下结构的多价构成物：
命名为{H-[Gly2(MCMGly)]5Gly2-NHCH2}4C。
29.一种经由权利要求16所述的多价构成物制备权利要求1所述的多配体构成物的方法。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，制备权利要求1所述的多配体构成物包括步骤：
●使结构F-S1-S2-A的活化配体衍生物与权利要求16所述的中间多价构成物反应；
其中：
F是所述配体；
S1选自1-氨基-C2-4烷基；
S2选自-CO(CH2)3CO-、-CO(CH2)4CO-和-CO(CH2)5CO-；以及
A为活化剂。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，A是选自4-硝基苯基(Nph)或N-氧琥珀酰亚胺(Nos)的活化剂。
32.一种通过施予主体有效量的权利要求1的多配体构成物抑制主体病毒感染的方法。
33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述病毒选自流感病毒。
34.根据权利要求32所述的方法，其中，所述施予主体是通过吸入。
35.根据权利要求32所述的方法，其中，所述多配体构成物为选自下面的结构的构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)；以及
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
36.一种含有权利要求1的多配体构成物和可药用配料的药物制剂。
37.根据权利要求36所述的药物制剂，其中，所述药物制剂是适合通过吸入施予主体的制剂。
38.根据权利要求36所述的药物制剂，其中，所述多配体构成物为选自下面的结构的构成物：
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}3CCH3(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)；以及
命名为{6`SLN-S1-S2-[Gly2(CMGly)]5Gly2-NHCH2}4C(其中，S1为1-氨基丙基，S2为-CO(CH2)4CO-)。
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