CN102731643A - 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 - Google Patents
一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102731643A CN102731643A CN2012102130443A CN201210213044A CN102731643A CN 102731643 A CN102731643 A CN 102731643A CN 2012102130443 A CN2012102130443 A CN 2012102130443A CN 201210213044 A CN201210213044 A CN 201210213044A CN 102731643 A CN102731643 A CN 102731643A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- side chain
- teriparatide
- chain protected
- fragment
- resin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 202
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 25
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title abstract description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title abstract description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 237
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 237
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 claims abstract description 169
- 229960005460 teriparatide Drugs 0.000 claims abstract description 167
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 claims abstract description 167
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 62
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 59
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 54
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 52
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 52
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 204
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 204
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 91
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 59
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 14
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 2
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 62
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 19
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 18
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 17
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 15
- 238000003746 solid phase reaction Methods 0.000 description 15
- 238000010671 solid-state reaction Methods 0.000 description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Substances CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 10
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 6
- BUUKFBVDKSFMHN-LKMAISLMSA-N parathar acetate Chemical class CC(O)=O.C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 BUUKFBVDKSFMHN-LKMAISLMSA-N 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 5
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 4
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamate Chemical compound C([C@@H](C=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 AAAFQLPJNOITCL-SFHVURJKSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1-tritylimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(N=C1)=CN1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 3
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 3
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 3
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 3
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 3
- JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-2-[chloro(diphenyl)methyl]benzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 JFLSOKIMYBSASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 2
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxo-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 WDGICUODAOGOMO-DHUJRADRSA-N 0.000 description 2
- -1 9-fluorenylmethyloxycarbonyl Boc Tertbutyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229960000338 teriparatide acetate Drugs 0.000 description 2
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 102100036893 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001135767 Rattus norvegicus Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- VWBWQOUWDOULQN-UHFFFAOYSA-N nmp n-methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O.CN1CCCC1=O VWBWQOUWDOULQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000011519 second-line treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 108010004034 stable plasma protein solution Proteins 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明属于药物化学技术领域，公开了一种治疗骨质疏松多肽的制备方法，具体说是一种特立帕肽的制备方法。所述制备方法为制备组成特立帕肽的各肽树脂片段，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。与现有技术相比，本发明所述制备方法操作简单、合成周期短、成本低、环境污染小、特立帕肽收率高，总收率大于30%，适合于特立帕肽大规模产业化生产，并且制得的特立帕肽纯度高、副产物少，具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，涉及一种治疗骨质疏松多肽的制备方法。尤其涉及一种特立帕肽的制备方法。
背景技术
特立帕肽，英文名为Teriparatide，是含有84个氨基酸的内源性甲状旁腺素PTH具有生物活性的N-末端区域的1-34氨基酸片段，分子式为C181H291N55O51S2，分子量为4177.77，其肽序为：
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH。
特立帕肽由美国礼来公司开发，美国食品药品监督管理局于2002年11月26日批准了特立帕肽用于治疗男人和绝经期妇女的具有高度骨折风险的骨质疏松症，也用于治疗男人的原发和或由于性机能减退造成的具有高骨折风险的骨质疏松。特立帕肽是第一种获得美国食品及药物管理局FDA批准的骨形成剂类新药。目前的常规骨质疏松药物一般只是作用于破骨细胞而减缓或阻断骨质流失，而特立帕肽这种甲状旁腺激素的衍生物有增加成骨细胞数目、增强其活性及阻止成骨细胞凋亡的作用。因其可增加成骨细胞的活性及数量，从而可以促进骨生长，用于严重骨质疏松的二线治疗。此外特立帕肽副作用很小，通常只是恶心、眩晕和腿痛性痉挛。因此特立帕肽具有很高的药用价值和广阔的市场前景。
礼来公司是采用基因表达得到特立帕肽。此外也有多篇基因表达得到特立帕肽的专利如US6590081，然而基因表达有着工作量大、三废严重、无法大规模生产等缺点。
目前，还有一种比较流行的方法是固相逐步合成（SPPS）方法，该方法具有操作简单、设备要求低等特点。但是由于特立帕肽由34个氨基酸组成，固相逐步合成方法产品收率低，而且产品纯化困难，不易得到高纯度的特立帕肽。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种收率高的特立帕肽的制备方法，所述方法制得的特立帕肽纯度高，适合于特立帕肽的大规模生产。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种特立帕肽的制备方法，制备组成特立帕肽的各肽树脂片段，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联得到特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。
本发明所述特立帕肽的制备方法采用不同片段偶联策略，通过固相合成组成特立帕肽的各肽树脂片段，然后以合适的树脂为载体，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联得到特立帕肽树脂，最后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。本发明所述组成特立帕肽的各肽树脂片段的合成可以同时进行，使合成周期减少了2/3，中间体易纯化，成本低，最终制备得到特立帕肽产品纯度高，副产物少，产品收率高，利于特立帕肽的大规模生产。
特立帕肽由34个氨基酸残基组成，因此存在海量的可能片段和偶联顺序。在一个具体实施方式中，将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为5个片段，即特立帕肽序列1-6位氨基酸、序列7-12位氨基酸、序列13-20位氨基酸、序列21-25位氨基酸、序列26-34位氨基酸。所述制备方法具体包括以下步骤：
A）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段1、侧链保护肽片段2，侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5，其中所述肽树脂片段1为特立帕肽序列34-26位氨基酸，所述侧链保护肽片段2为特立帕肽序列25-21位氨基酸，所述侧链保护肽片段3为特立帕肽序列20-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段4为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段5为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
B）将侧链保护肽片段2和肽树脂片段1偶联得到肽树脂Ⅰ；
C)将侧链保护肽片段3和肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；
D)将侧链保护肽片段4和肽树脂Ⅱ偶联得到肽树脂Ⅲ；
E)将侧链保护肽片段5和肽树脂Ⅲ偶联得到肽树脂Ⅳ；
F)肽树脂Ⅳ裂解得到特立帕肽粗品
G）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
其中所述肽树脂片段1为H-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Val-His(Trt)-Asn(Trt)-Phe-树脂。
所述侧链保护肽片段2为Fmoc-Val-Glu(otbu)-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)-OH。
所述侧链保护肽片段3为Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Leu-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Met-Glu(otbu)-Arg(pbf)-OH。
所述侧链保护肽片段4为Fmoc-Leu-Met-His(Trt)-Asn(Trt)-Leu-Gly-OH。
所述侧链保护肽片段5为Fmoc-Ser(tbu)-Val-Ser(tbu)-Glu(otbu)-IIe-Gln(Trt)-OH。
所述侧链保护肽片段2与肽树脂片段1偶联得到的肽树脂片段Ⅰ为H-Val-Glu(otbu)-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)--Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Val-His(Trt)-Asn(Trt)-Phe-树脂。
所述侧链保护肽片段3与肽树脂片段Ⅰ偶联得到的肽树脂片段Ⅱ为H-Lys(Boc)-His(Trt)-Leu-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Met-Glu(otbu)-Arg(pbf)--Val-Glu(otbu)-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)--Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Val-His(Trt)-Asn(Trt)-Phe-树脂。
所述侧链保护肽片段4与肽树脂片段Ⅱ偶联得到的肽树脂片段Ⅲ为H-Leu-Met-His(Trt)-Asn(Trt)-Leu-Gly--Lys(Boc)-His(Trt)-Leu-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Met-Glu(otbu)-Arg(pbf)--Val-Glu(otbu)-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)--Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Val-His(Trt)-Asn(Trt)-Phe-树脂。
所述侧链保护肽片段5与肽树脂片段Ⅲ偶联得到的肽树脂片段Ⅳ为H-Ser(tbu)-Val-Ser(tbu)-Glu(otbu)-IIe-Gln(Trt)--Leu-Met-His(Trt)-Asn(Trt)-Leu-Gly--Lys(Boc)-His(Trt)-Leu-Asn(Trt)-Ser(tbu)-Met-Glu(otbu)-Arg(pbf)--Val-Glu(otbu)-Trp(Boc)-Leu-Arg(pbf)--Lys(Boc)-Lys(Boc)-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Val-His(Trt)-Asn(Trt)-Phe-树脂。
作为优选，所述步骤A）中肽树脂片段1所用的固相载体为王树脂。
作为优选，所述步骤A）中侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5所用的固相载体为2-氯三苯甲基氯树脂。
作为优选，所述步骤A）中肽树脂片段1、侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。
侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5是将氨基酸偶联在树脂上后裂解获得的。作为优选，所述步骤A）中侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4、侧链保护肽片段5的裂解剂为TFE。
侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5从树脂中裂解下来后用乙醚沉淀得到粗品，粗品无需纯化直接冻干，控制水分在2%以下。冻干后的全保护片段纯度都大于90%，可直接用于下一步反应。
作为优选，所述步骤B）-步骤E)中侧链保护肽与肽树脂偶联的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。
作为优选，所述步骤B）-步骤E)中侧链保护肽片段与肽树脂偶联的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。
也就是说，作为本发明所述步骤B）中，冻干后的侧链保护肽片段2与肽树脂1反应得到肽树脂Ⅰ，采用的偶联剂优选为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。更优选为TBTU/HOBt/DIPEA。进一步的，所述TBTU、HOBt与DIPEA的摩尔比为1:1:2。
也就是说，作为本发明所述步骤B）中，冻干后的侧链保护肽片段2与肽树脂1反应得到肽树脂Ⅰ，采用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。更有优选为DMF与DMSO体积比为1:1的混合液。
也就是说，作为本发明所述步骤C）中，冻干后的侧链保护肽片段3和肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ，采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。更优选为PyBOP/HOBt/DIPEA。进一步的，所述PyBOP、HOBt与DIPEA的摩尔比为1:1:2。
也就是说，作为本发明所述步骤C）中，冻干后的侧链保护肽片段2与肽树脂片段1反应得到肽树脂Ⅰ，采用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。更有优选为DMF与NMP体积比为1:1的混合液。
也就是说，作为本发明所述步骤D）中，冻干后的侧链保护肽片段4和肽树脂Ⅱ偶联得到肽树脂Ⅲ，采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。更优选为PyBOP/HOBt/DIPEA。进一步的，所述PyBOP、HOBt与DIPEA的摩尔比为1:1:2。
也就是说，作为本发明所述步骤D）中，冻干后的侧链保护肽片段4和肽树脂Ⅱ偶联得到肽树脂Ⅲ，采用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。更有优选为DMF与DMSO体积比为1:1的混合液。
也就是说，作为本发明所述步骤E）中，冻干后的侧链保护肽片段5和肽树脂Ⅲ偶联得到肽树脂Ⅳ，采用的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。更优选为PyBOP/HOBt/DIPEA。进一步的，所述PyBOP、HOBt与DIPEA的摩尔比为1:1:2。
也就是说，作为本发明所述步骤E）中，冻干后的侧链保护肽片段5和肽树脂Ⅲ偶联得到肽树脂Ⅳ，采用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。更有优选为DMF与NMP体积比为1:1的混合液。
作为优选，所述步骤F)中，肽树脂Ⅳ裂解的裂解液为TFA与水体积比为95:5的混合溶液、TFA、DET、PHOH与水体积比为90:5:3:2的混合溶液或TFA、DET、TIS、PHOH与水体积比为80:5:5:5:5的混合溶液。进一步优选为TFA、DET、TIS、PHOH与水体积比为80:5:5:5:5的混合溶液。
作为优选，所述制备方法步骤G)中纯化为反相高效液相色谱纯化。
反相高效液相色谱，英文名reversed phase high performance liquidchromatography，简称，RP-HPLC，是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的液相色谱体系（正相色谱）相反。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离纯化。本发明所述步骤G)采用反相高效液相色谱纯化、冻干得到特立帕肽，纯度大于99%。
进一步的，在某一具体实施方式中，所述反相高效液相色谱纯化的色谱条件为：采用Waters 2695RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA(A)-乙腈(B)为流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%精肽。将精肽溶液采用Waters 2695RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到特立帕肽醋酸盐盐精肽。
在一些具体实施例中，本发明将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为3个片段，即特立帕肽序列1-10位氨基酸、序列11-25位氨基酸和序列26-34位氨基酸。所述制备方法具体包括以下步骤：
1）制备组成特立帕肽的3个肽片段：肽树脂片段a、侧链保护肽片段b和侧链保护肽片段c，其中所述肽树脂片段a为特立帕肽序列34-26位氨基酸，所述侧链保护肽片段b为特立帕肽序列25-11位氨基酸，所述侧链保护肽片段c为特立帕肽序列10-1位氨基酸；
2）将侧链保护肽片段b和肽树脂片段a偶联得到肽树脂A；
3)将侧链保护肽片段3和肽树脂A偶联得到肽树脂B；
4)肽树脂B裂解得到特立帕肽粗品
5）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
在一些具体实施例中，本发明将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为4个片段，即特立帕肽序列1-6位氨基酸、序列7-15位氨基酸、序列16-28位氨基酸和序列29-34位氨基酸。所述制备方法具体包括以下步骤：
a）制备组成特立帕肽的4个肽片段：肽树脂片段A、侧链保护肽片段B，侧链保护肽片段C和侧链保护肽片段D，其中所述肽树脂片段A为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段B为特立帕肽序列28-16位氨基酸，所述侧链保护肽片段C为特立帕肽序列15-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段D为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
b）将侧链保护肽片段B和肽树脂片段A偶联得到肽树脂i；
c)将侧链保护肽片段C和肽树脂i偶联得到肽树脂ii；
d)将侧链保护肽片段D和肽树脂ii偶联得到肽树脂iii；
e)肽树脂iii裂解得到特立帕肽粗品
f)特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
在一些具体实施例中，本发明将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为5个片段，即特立帕肽序列1-6位氨基酸、序列7-12位氨基酸、序列13-19位氨基酸、序列20-28位氨基酸、序列29-34位氨基酸。制备方法具体包括以下步骤：
Ⅰ）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段①、侧链保护肽片段②，侧链保护肽片段③、侧链保护肽片段④和侧链保护肽片段⑤，其中所述肽树脂片段①为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段②为特立帕肽序列28-20位氨基酸，所述侧链保护肽片段③为特立帕肽序列19-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段④为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段⑤为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
Ⅱ）将侧链保护肽片段2和肽树脂片段1偶联得到肽树脂a；
Ⅲ）将侧链保护肽片段3和肽树脂a偶联得到肽树脂b；
Ⅳ）将侧链保护肽片段4和肽树脂b偶联得到肽树脂c；
V）将侧链保护肽片段5和肽树脂c偶联得到肽树脂d；
VI）肽树脂d裂解得到特立帕肽粗品；
VII）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
在另一些具体实施例中，本发明将组成特立帕肽的34个氨基酸残基分为5个片段，即特立帕肽序列1-6位氨基酸、序列7-12位氨基酸、序列13-20位氨基酸、序列21-28位氨基酸、序列29-34位氨基酸。所述制备方法具体包括以下步骤：
i）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段Ⅰ、侧链保护肽片段Ⅱ，侧链保护肽片段Ⅲ、侧链保护肽片段Ⅳ和侧链保护肽片段V，其中所述肽树脂片段Ⅰ为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅱ为特立帕肽序列28-21位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅲ为特立帕肽序列20-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅳ为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段V为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
ii）将侧链保护肽片段Ⅱ和肽树脂片段Ⅰ偶联得到肽树脂①；
iii)将侧链保护肽片段Ⅲ和肽树脂①偶联得到肽树脂②；
iv)将侧链保护肽片段Ⅳ和肽树脂②偶联得到肽树脂③；
v)将侧链保护肽片段V和肽树脂③偶联得到肽树脂④；
vi)肽树脂④裂解得到特立帕肽粗品
vii）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
与现有技术相比，本发明所述制备方法操作简单、合成周期短、成本低、环境污染小、特立帕肽收率高，总收率大于30%，适合于特立帕肽大规模产业化生产，并且制得的特立帕肽醋酸盐精肽纯度大于99%，纯度高、副产物少，具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种特立帕肽的制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中：
| Fmoc | 9-芴甲氧羰基 |
| Boc | 叔丁氧羰基 |
| tBu | 叔丁基 |
| Trt | 三苯甲基 |
| NMP | N-甲基吡咯烷酮 |
| DMSO | 二甲基亚砜 |
| DMF | N,N-二甲基甲酰胺 |
| DCM | 二氯甲烷 |
| DBLK | 20%六氢吡啶/DMF溶液 |
| DIC | N,N-二异丙基碳二亚胺 |
| DIPEA | N,N-二异丙基乙胺 |
| DMAP | 4-二甲胺基吡啶 |
| PYBOP | 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基 |
| TBTU | O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸 |
| HOBT | 1-羟基苯并三唑 |
| TFE | 三氟乙醇 |
| TFA | 三氟乙酸 |
| EDT | 1,2-乙二硫醇 |
| PHOH | 苯酚 |
| TIS | 三异丙基硅烷 |
实施例1：按照策略1制备特立帕肽
一、肽树脂片段1（特立帕肽序列34-26位氨基酸）
1.Fmoc-Phe-Wang Resin制备
称取替代度为0.8mmol/g的Wang Resin 1.2g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，称取0.51g Fmoc-Phe-OH、0.13gHOBT和0.01gDMAP用DMF溶解，冰水浴下加入0.16mL DIC活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入5mL吡啶和5.5ml乙酸酐封闭12小时。用DMF洗涤6次，得到Fmoc-Phe–Wang Resin，检测替代度为0.20mmol/g。
2．肽树脂片段的制备
称取替代度为0.20mmol/g的Fmoc-Phe-Wang Resin 1.5g，加入固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀Fmoc-Phe-Wang Resin 30分钟后，用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次。将0.90g Fmoc-Asn(Trt)-OH，0.25g HOBt，0.29ml DIC溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照肽树脂片段1（序列（34-26））的顺序，依次完成Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH，最后用DBLK脱除Fmoc保护，得到肽树脂片段1。
二、侧链保护肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）的制备
1.肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）肽树脂的制备
称取替代度为0.47mmol/g的2-CTC树脂5.26g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取3.24g Fmoc-Arg(pbf)-OH用DMF溶解，冰水浴下加入1.7mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入10mL无水甲醇封闭1小时,用DMF洗涤6次。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次。
将1.77g Fmoc-Leu-OH，0.74g HOBt，0.86ml DIC溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照肽片段2（序列（25-21））的顺序，依次完成Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH，其中最后一个氨基酸Val偶联结束后不用脱除Fmoc。反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，称重得到肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）肽树脂8.12g。
2.裂解肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）肽树脂，侧链保护肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）
称取肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）肽树脂8.12g，加入至250ml烧瓶中。配置裂解试剂82ml（体积比，THE：DCM=1:4），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液体积旋蒸至﹤25vol%后，滴加至200ml沉淀试剂中（体积比，正己烷：乙醚=1:4），离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到侧链保护肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸），将粗品溶于水后冻干，得0.7g侧链保护肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸），纯度95%。
按上述方法制备侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4、侧链保护肽片段5。
三、肽树脂Ⅰ的制备
称取0.7g侧链保护肽片段2（特立帕肽序列25-21位氨基酸）、1.9g TBTU、0.74g HOBt，用DMF和DMSO为1:1的混合液溶解后加入1.7mlDIPEA，混合液加入步骤一固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂Ⅰ。
四、肽树脂Ⅱ的制备
称取0.9g侧链保护肽片段3、2.6gPyBOP、0.74gHOBt，用DMF和NMP为1:1的混合液溶解后加入1.7mlDIPEA，混合液加入步骤三中肽树脂固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂Ⅱ。
五、肽树脂Ⅲ的制备
称取0.55g侧链保护肽片段4、2.6gPyBOP、0.74gHOBt，用DMF和DMSO为1:1的混合液溶解后加入1.7mlDIPEA，混合液加入步骤四中肽树脂固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂Ⅲ。
六、肽树脂Ⅳ的制备
称取0.82g侧链保护肽片段5、2.6gPyBOP、0.74gHOBt，用DMF和DMSO为1:1的混合液溶解后加入1.7ml DIPEA，混合液加入步骤五中肽树脂固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，称重得到3.1g肽树脂Ⅳ。
七、肽树脂Ⅳ裂解得到粗品特立帕肽
将步骤六中的3.1g肽树脂Ⅳ加入到100ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:DET:TIS:PHOH:H2O=80:5:5:5:5），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应3小时。反应结束，过滤树脂，收集滤液。滴加至300ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到1.2g.特立帕肽粗品，纯度75.4%。
八、特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽
称取1.2g特立帕肽粗肽用50mL水溶解后，采用Waters 2695RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%精肽。将精肽溶液采用Waters 2695RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到特立帕肽醋酸盐盐精肽0.4g，HPLC纯度99.3%，总收率32.2%。
实施例2：按照策略2制备特立帕肽
一、侧链保护肽片段b（特立帕肽序列25-11位氨基酸）的制备
1.侧链保护肽片段b肽树脂的制备
称取替代度为0.47mmol/g的2-CTC树脂5.35g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取3.24g Fmoc-Arg(pbf)-OH用DMF溶解，冰水浴下加入1.7mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入10mL无水甲醇封闭1小时,用DMF洗涤6次。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次。
将1.77g Fmoc-Leu-OH，0.74g HOBt，0.86ml DIC溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照肽片段b（特立帕肽序列25-11位氨基酸）的顺序，依次完成Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Val-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Met-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-His(Trt)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-OH Fmoc-Gly-OH,Fmoc-Leu-OH。其中最后一个氨基酸Leu偶联结束后不用脱除Fmoc。反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，称重得到侧链保护肽片段b肽树脂15.4g。
2.裂解侧链保护肽片段b肽树脂，侧链保护肽片段b
侧链保护肽片段b肽树脂15.4g，加入至250ml烧瓶中。配置裂解试剂150ml（体积比，THE：DCM=1:4），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液体积旋蒸至﹤25vol%后，滴加至200ml沉淀试剂中（体积比，正己烷：乙醚=1:4），离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到侧链保护肽片段b，将粗品溶于水后冻干，得1.4g侧链保护肽片段序列（25-11），纯度85％。
二、侧链保护肽片段c的制备
1.侧链保护肽片段c肽树脂的制备
称取替代度为0.47mmol/g的2-CTC树脂5.33g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，取3.11g Fmoc-Asn(Trt)-OH用DMF溶解，冰水浴下加入1.7mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时后，加入10mL无水甲醇封闭1小时，用DMF洗涤6次。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次。
将3.25g Fmoc-His(Trt)-OH，0.74g HOBt，0.86ml DIC溶于体积比为1:1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应柱中，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照侧链保护肽片段c的顺序，依次完成Fmoc-Met-OH,Fmoc-Leu-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-IIe-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Val-OH Fmoc-Ser(tBu)-OH。其中最后一个氨基酸Ser偶联结束后不用脱除Fmoc。反应结束后用甲醇收缩，树脂真空干燥过夜，称重得到肽片段序列（10-1）肽树脂14.6g。
2.裂解侧链保护肽片段c肽树脂，侧链保护肽片段c
侧链保护肽片段c肽树脂14.6g，加入至250ml烧瓶中。配置裂解试剂150ml（体积比，THE：DCM=1:4），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2h。反应结束，过滤树脂，收集滤液。将滤液体积旋蒸至﹤25vol%后，滴加至200ml沉淀试剂中（体积比，正己烷：乙醚=1:4），离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到侧链保护肽片段c，将粗品溶于水后冻干，得1.3g侧链保护肽片段序列（10-1），纯度80.5％。
三、侧链保护肽片段b与实施例1肽树脂片段1（特立帕肽序列34-26位氨基酸）缩合反应得肽树脂A
称取1.4g侧链保护肽片段b、1.9g TBTU、0.74g HOBt，用DMF和DMSO为1∶1的混合液溶解后加入1.7mlDIPEA，混合液加入实施例1中得到的肽树脂片段1固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到肽树脂A。
四、侧链保护肽片段c与肽树脂A的缩合反应得肽树脂B
取1.3g侧链保护肽片段c、1.9g TBTU、0.74g HOBt，用DMF和DMSO为1:1的混合液溶解后加入1.7mlDIPEA，混合液加入步骤三固相反应柱中，室温反应3h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h。用DBLK脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤6次，得到2.8g肽树脂B。
五、肽树脂B裂解得到粗品特立帕肽
将步骤四中的2.8g肽树脂B加入到100ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:DET:TIS:PHOH:H2O=80:5:5:5:5），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应3小时。反应结束，过滤树脂，收集滤液。滴加至300ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤，并且真空干燥，得到1.0g.特立帕肽粗品，纯度80.5%。
六、特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽
称取1.0g特立帕肽粗肽用50mL水溶解后，采用Waters 2695RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%精肽。将精肽溶液采用Waters 2695RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到特立帕肽醋酸盐盐精肽0.25g，HPLC纯度99.1%，总收率20.5%。
实施例3：
分别按照策略3、4和5制备特立帕肽。统计各方法制得的特立帕肽粗肽和特立帕肽醋酸盐精肽的纯度及总收率，结果见表1。
表1实施例1~3中各方法制得的特立帕肽结果
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (15)
1.一种特立帕肽的制备方法，其特征在于，制备组成特立帕肽的各肽树脂片段，将各肽树脂片段在固相上逐步偶联得到特立帕肽树脂，然后裂解得到特立帕肽粗品，纯化得到产品特立帕肽。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
A）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段1、侧链保护肽片段2，侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5，其中所述肽树脂片段1为特立帕肽序列34-26位氨基酸，所述侧链保护肽片段2为特立帕肽序列25-21位氨基酸，所述侧链保护肽片段3为特立帕肽序列20-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段4为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段5为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
B）将侧链保护肽片段2和肽树脂片段1偶联得到肽树脂Ⅰ；
C)将侧链保护肽片段3和肽树脂Ⅰ偶联得到肽树脂Ⅱ；
D)将侧链保护肽片段4和肽树脂Ⅱ偶联得到肽树脂Ⅲ；
E)将侧链保护肽片段5和肽树脂Ⅲ偶联得到肽树脂Ⅳ；
F)肽树脂Ⅳ裂解得到特立帕肽粗品
G）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤A）中肽树脂片段1所用的固相载体为王树脂。
4.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤A）中侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5分别由各片段的氨基酸偶联在树脂获得各片段的肽树脂，然后裂解制得。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述步骤A）中侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5所用的固相载体为2-氯三苯甲基氯树脂。
6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述步骤A）中肽树脂片段1、侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4和侧链保护肽片段5的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。
7.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述步骤A）中侧链保护肽片段2、侧链保护肽片段3、侧链保护肽片段4、侧链保护肽片段5的裂解剂为TFE。
8.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤B）-步骤E)中侧链保护肽与肽树脂偶联的偶联剂为HOBT/DIC、PyBOP/HOBt/DIPEA或TBTU/HOBt/DIPEA。
9.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤B）-步骤E)中侧链保护肽片段与肽树脂偶联的反应溶剂为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种或几种。
10.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤F)中肽树脂Ⅳ裂解的裂解液为TFA与水体积比为95:5的混合溶液、TFA、DET、PHOH与水体积比为90:5:3:2的混合溶液或TFA、DET、TIS、PHOH与水体积比为80:5:5:5:5的混合溶液。
11.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述步骤G)中纯化为反相高效液相色谱纯化。
12.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
1）制备组成特立帕肽的3个肽片段：肽树脂片段a、侧链保护肽片段b和侧链保护肽片段c，其中所述肽树脂片段a为特立帕肽序列34-26位氨基酸，所述侧链保护肽片段b为特立帕肽序列25-11位氨基酸，所述侧链保护肽片段c为特立帕肽序列10-1位氨基酸；
2）将侧链保护肽片段b和肽树脂片段a偶联得到肽树脂A；
3)将侧链保护肽片段3和肽树脂A偶联得到肽树脂B；
4)肽树脂B裂解得到特立帕肽粗品；
5）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
13.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
a）制备组成特立帕肽的4个肽片段：肽树脂片段A、侧链保护肽片段B，侧链保护肽片段C和侧链保护肽片段D，其中所述肽树脂片段A为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段B为特立帕肽序列28-16位氨基酸，所述侧链保护肽片段C为特立帕肽序列15-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段D为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
b）将侧链保护肽片段B和肽树脂片段A偶联得到肽树脂i；
c)将侧链保护肽片段C和肽树脂i偶联得到肽树脂ii；
d)将侧链保护肽片段D和肽树脂ii偶联得到肽树脂iii；
e)肽树脂iii裂解得到特立帕肽粗品；
f)特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
14.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
Ⅰ）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段①、侧链保护肽片段②，侧链保护肽片段③、侧链保护肽片段④和侧链保护肽片段⑤，其中所述肽树脂片段①为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段②为特立帕肽序列28-20位氨基酸，所述侧链保护肽片段③为特立帕肽序列19-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段④为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段⑤为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
Ⅱ）将侧链保护肽片段2和肽树脂片段1偶联得到肽树脂a；
Ⅲ）将侧链保护肽片段3和肽树脂a偶联得到肽树脂b；
Ⅳ）将侧链保护肽片段4和肽树脂b偶联得到肽树脂c；
V）将侧链保护肽片段5和肽树脂c偶联得到肽树脂d；
VI）肽树脂d裂解得到特立帕肽粗品；
VII）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
15.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
i）制备组成特立帕肽的5个肽片段：肽树脂片段Ⅰ、侧链保护肽片段Ⅱ，侧链保护肽片段Ⅲ、侧链保护肽片段Ⅳ和侧链保护肽片段V，其中所述肽树脂片段Ⅰ为特立帕肽序列34-29位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅱ为特立帕肽序列28-21位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅲ为特立帕肽序列20-13位氨基酸，所述侧链保护肽片段Ⅳ为特立帕肽序列12-7位氨基酸，所述侧链保护肽片段V为特立帕肽序列6-1位氨基酸；
ii）将侧链保护肽片段Ⅱ和肽树脂片段Ⅰ偶联得到肽树脂①；
iii)将侧链保护肽片段Ⅲ和肽树脂①偶联得到肽树脂②；
iv)将侧链保护肽片段Ⅳ和肽树脂②偶联得到肽树脂③；
v)将侧链保护肽片段V和肽树脂③偶联得到肽树脂④；
vi)肽树脂④裂解得到特立帕肽粗品；
vii）特立帕肽粗品经纯化得到特立帕肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102130443A CN102731643A (zh) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012102130443A CN102731643A (zh) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102731643A true CN102731643A (zh) | 2012-10-17 |
Family
ID=46988014
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012102130443A Pending CN102731643A (zh) | 2012-06-26 | 2012-06-26 | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102731643A (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102993293A (zh) * | 2012-12-05 | 2013-03-27 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 |
| CN103467595A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN104277098A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-14 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2600的方法 |
| CN104277097A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-14 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2700的方法 |
| CN104311673A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-28 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2800的方法 |
| CN109096388A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-12-28 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| WO2020000555A1 (zh) * | 2018-06-26 | 2020-01-02 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN111057139A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN111848778A (zh) * | 2019-04-30 | 2020-10-30 | 上海医药工业研究院 | 特立帕肽类似物 |
| CN112625117A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-09 | 无锡和邦生物科技有限公司 | 一种可溶性重组特立帕肽的非变性纯化方法及应用 |
| CN114137114A (zh) * | 2020-11-26 | 2022-03-04 | 信立泰(苏州)药业有限公司 | 特立帕肽同位素内标及其制备方法与应用 |
| CN115656391A (zh) * | 2022-12-12 | 2023-01-31 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽含有的杂质的检测方法 |
| WO2024032457A1 (zh) * | 2022-08-10 | 2024-02-15 | 成都奥达生物科技有限公司 | 一种长效特立帕肽化合物 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1174845A (zh) * | 1996-07-30 | 1998-03-04 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 合成甲状旁腺素类似物和甲状旁腺素相关肽的方法 |
| CN1281370A (zh) * | 1997-12-09 | 2001-01-24 | 伊莱利利公司 | 稳定的特立帕肽溶液 |
| CN1281467A (zh) * | 1997-12-18 | 2001-01-24 | 伊莱利利公司 | 结晶特立帕肽 |
-
2012
- 2012-06-26 CN CN2012102130443A patent/CN102731643A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1174845A (zh) * | 1996-07-30 | 1998-03-04 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 合成甲状旁腺素类似物和甲状旁腺素相关肽的方法 |
| CN1281370A (zh) * | 1997-12-09 | 2001-01-24 | 伊莱利利公司 | 稳定的特立帕肽溶液 |
| CN1281467A (zh) * | 1997-12-18 | 2001-01-24 | 伊莱利利公司 | 结晶特立帕肽 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 宋庆明等: "特立帕肽治疗骨质疏松症的应用进展", 《国际药学研究杂志》 * |
| 王梅等: "人脑利钠肽的Fmoc固相合成", 《现代生物医学进展》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102993293A (zh) * | 2012-12-05 | 2013-03-27 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 |
| CN103467595A (zh) * | 2013-09-06 | 2013-12-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| CN104017064A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-03 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN104017064B (zh) * | 2014-06-13 | 2016-08-24 | 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN104277098A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-14 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2600的方法 |
| CN104277097A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-14 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2700的方法 |
| CN104311673A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-28 | 申联生物医药（上海）有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2800的方法 |
| CN104311673B (zh) * | 2014-10-22 | 2017-04-12 | 申联生物医药（上海）股份有限公司 | 固相片段法制备猪o型口蹄疫合成肽抗原2800的方法 |
| CN109096388A (zh) * | 2017-07-24 | 2018-12-28 | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 | 一种特立帕肽的制备方法 |
| WO2020000555A1 (zh) * | 2018-06-26 | 2020-01-02 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备特立帕肽的方法 |
| CN111057139A (zh) * | 2018-10-17 | 2020-04-24 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN111057139B (zh) * | 2018-10-17 | 2023-12-22 | 南京华威医药科技集团有限公司 | 一种制备特立帕肽的新工艺 |
| CN111848778A (zh) * | 2019-04-30 | 2020-10-30 | 上海医药工业研究院 | 特立帕肽类似物 |
| CN111848778B (zh) * | 2019-04-30 | 2024-03-19 | 上海医药工业研究院 | 特立帕肽类似物 |
| CN114137114A (zh) * | 2020-11-26 | 2022-03-04 | 信立泰(苏州)药业有限公司 | 特立帕肽同位素内标及其制备方法与应用 |
| CN112625117A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-09 | 无锡和邦生物科技有限公司 | 一种可溶性重组特立帕肽的非变性纯化方法及应用 |
| WO2024032457A1 (zh) * | 2022-08-10 | 2024-02-15 | 成都奥达生物科技有限公司 | 一种长效特立帕肽化合物 |
| CN115656391A (zh) * | 2022-12-12 | 2023-01-31 | 哈尔滨吉象隆生物技术有限公司 | 一种特立帕肽含有的杂质的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102731643A (zh) | 一种治疗骨质疏松多肽的制备方法 | |
| CN103864918B (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成方法 | |
| CN102875665B (zh) | 一种合成利拉鲁肽的方法 | |
| CN102286092B (zh) | 利拉鲁肽的固相合成方法 | |
| CN103497245A (zh) | 一种合成胸腺法新的方法 | |
| CN104017064B (zh) | 一种制备特立帕肽的方法 | |
| CN106699871A (zh) | 一种利拉鲁肽的制备方法 | |
| CN101357938B (zh) | 固相多肽合成Exenatide的制备方法 | |
| CN106146648A (zh) | 一种甲状旁腺激素类似物的合成方法 | |
| CN103467595A (zh) | 一种特立帕肽的制备方法 | |
| CN113880936B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
| CN101747426A (zh) | 一种合成普兰林肽的方法 | |
| CN104788546A (zh) | 一种含有24个氨基酸残基的线性直链肽的制备方法 | |
| CN107022021A (zh) | 一种利拉鲁肽的固相合成法 | |
| CN110878119B (zh) | 一种阿巴帕肽的固相合成方法 | |
| CN101519444B (zh) | 一种制备奈西利肽的方法 | |
| CN102532302A (zh) | 自然偶联法制备艾塞那肽的方法 | |
| CN108070030B (zh) | 洛塞那肽及其类似物的制备方法 | |
| CN102304167B (zh) | 一种合成含有天冬氨酸-精氨酸及衍生物单元的多肽的新方法 | |
| CN103159850B (zh) | 替可克肽的制备方法 | |
| CN1865283B (zh) | 固相多肽合成鲑鱼降钙素的制备方法 | |
| CN106554407B (zh) | 一种乌拉立肽的合成方法 | |
| CN111808169B (zh) | 一种美拉诺坦i的固相合成法 | |
| CN105153286A (zh) | 一种利用微波固相合成法合成药物多肽那法瑞林的方法 | |
| CN103204923B (zh) | 固相片段法制备卡培立肽 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20121017 |