CN103570840B - 酵母多糖的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酵母多糖的分离纯化方法，以啤酒厂废酵母为原料，包括下列步骤：1）、酵母细胞壁破壁；2）、葡聚糖和甘露聚糖粗步分离；3）、酵母甘露聚糖的进一步纯化；和4）、酵母葡聚糖的进一步纯化。本发明采用纯天然酵母提取加工，产品为酵母甘露聚糖，分离纯化过程中无药物残留、无污染物，是纯天然绿色产品。
Description
技术领域
本发明涉及一种酵母多糖的分离纯化方法。
背景技术
酵母多糖，英文名称yeastpolysaccharide，是从酵母细胞壁提取的大分子多糖复合物，具有多种生物学活性，如促生长、抗病毒及免疫增强作用。
酵母多糖具有贮藏生物能〔如：淀粉、糖原、菊粉（inulin）〕和支持结构〔如：纤维素、几丁质（chitin）、粘多糖〕的作用。但是，细胞膜和细胞壁的多糖成份不仅是支持物质，而且还直接参与细胞的分裂过程，在许多情况下成为细胞和细胞、细胞和病毒、细胞和抗体等相互识别结构的活性部位。
多糖无甜味，在水中不能形成真溶液，只能形成胶体，无还原性，无变旋性，但有旋光性。
食品工业中常见的酵母菌在一定条件下可发酵产生具有生物活性的胞壁多糖，这些多糖物质在食品中具有相当的应用价值。
现有的酵母多糖是在生产酵母抽提物后衍生的产品，以新鲜啤酒酵母乳液为原料制造而成。
发明内容
本发明需要解决的技术问题就在于克服现有技术的缺陷，提供一种酵母多糖的分离纯化方法，它采用啤酒厂废酵母为原料，是纯天然酵母提取加工，产品为酵母甘露聚糖，分离纯化过程中无药物残留、无污染物，是纯天然绿色产品。
为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种酵母多糖的分离纯化方法，包括下列步骤：
1）、酵母细胞壁破壁；2）、葡聚糖和甘露聚糖粗步分离；3）、酵母甘露聚糖的进一步纯化；和4）、酵母葡聚糖的进一步纯化。
具体的，所述酵母细胞壁破壁为：以啤酒厂废酵母为原料，采用超声波破碎法，选择超声频率50kHz、超声3次、每次10分钟；接着在-20℃下冷冻2h，再置于100℃水中骤然升温使其融化，作用15分钟，冷却至室温后再放入-20℃下冷冻2h，如此反复3次。
所述葡聚糖和甘露聚糖粗步分离为：采用重量浓度为1%的KOH溶液将处理后的破壁酵母细胞壁在4℃下搅拌萃取20h，离心取上清液，沉淀物用KOH溶液重复萃取2次，碱提取物用玻璃纤维滤纸过滤，加入饱和硫酸铵于4℃条件下过夜，离心后将上清液冷冻干燥即得甘露聚糖粗品，含有部分蛋白质；剩下的沉淀物为酵母葡聚糖粗品。
所述酵母甘露聚糖的进一步纯化为：采用蛋白酶E和F对甘露聚糖粗品在50℃、pH值为8.0的条件下处理6小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母甘露聚糖产品。
所述酵母葡聚糖的进一步纯化为：采用蛋白酶C和D对酵母葡聚糖粗品在50℃、pH值为7.6的条件下处理4小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母甘露聚糖产品。
本发明中，蛋白酶E为链霉蛋白酶，蛋白酶F是组织蛋白酶；蛋白酶C为胃蛋白酶，蛋白酶D为组织蛋白酶。
本发明方法采用纯天然酵母提取加工，无药物残留，无污染物，是纯天然绿色产品，产品富含免疫多糖和功能性寡糖，本发明分离纯化的酵母甘露聚糖产品，主要成份：β葡聚糖酶≥20%，甘露寡糖≥20%，蛋白质＜35%。主要作用有：1、对动物有促生长作用。2、抗病毒作用。3、增强免疫功能4、对肠道微生态环境的调控作用。5、促进免疫器官的发育。
具体实施方式
酵母细胞壁破壁：以啤酒厂废酵母为原料，采用超声波破碎法，选择超声频率50kHz、超声3次、每次10分钟；接着在-20℃下冷冻2h，再置于100℃水中骤然升温使其融化，作用15分钟，冷却至室温后再放入-20℃下冷冻2h，如此反复3次。
葡聚糖和甘露聚糖粗步分离：采用重量浓度为1%的KOH溶液将处理后的破壁酵母细胞壁在4℃下搅拌萃取20h，离心取上清液，沉淀物用KOH溶液重复萃取2次，碱提取物用玻璃纤维滤纸过滤，加入饱和硫酸铵于4℃条件下过夜，离心后将上清液冷冻干燥即得甘露聚糖粗品，含有部分蛋白质；剩下的沉淀物为酵母葡聚糖粗品。
酵母甘露聚糖的进一步纯化：采用蛋白酶E和F对甘露聚糖粗品在50℃、pH值为8.0的条件下处理6小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母甘露聚糖产品。
酵母葡聚糖的进一步纯化：采用蛋白酶C和D对酵母葡聚糖粗品在50℃、pH值为7.6的条件下处理4小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母甘露聚糖产品。
本发明方法是一个解决啤酒工业污染、变废为宝、改善环境的有效措施。本发明分离纯化得到的酵母甘露聚糖是酵母细胞壁多糖中的一种，是糖蛋白。分子量约在9万道尔顿左右，白色粉状固体，溶于水，溶液有粘性。
酵母甘露聚糖的应用：a)作为食品强化剂；b)具有抗辐射作用，作为癌患病人体质增强剂，作为处于辐射环境中工作人员健康增补剂，作为防晒化妆品；c)作为生物导弹载体和抗肿瘤药物。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (2)
1.一种酵母多糖的分离纯化方法，其特征在于，包括下列步骤：
1）、酵母细胞壁破壁；2）、葡聚糖和甘露聚糖粗步分离；3）、酵母甘露聚糖的进一步纯化；和4）、酵母葡聚糖的进一步纯化；
所述酵母细胞壁破壁为：以啤酒厂废酵母为原料，采用超声波破碎法，选择超声频率50kHz、超声3次、每次10分钟；接着在-20℃下冷冻2h，再置于100℃水中骤然升温使其融化，作用15分钟，冷却至室温后再放入-20℃下冷冻2h，如此反复3次；
所述葡聚糖和甘露聚糖粗步分离为：采用重量浓度为1%的KOH溶液将处理后的破壁酵母细胞壁在4℃下搅拌萃取20h，离心取上清液，沉淀物用KOH溶液重复萃取2次，碱提取物用玻璃纤维滤纸过滤，加入饱和硫酸铵于4℃条件下过夜，离心后将上清液冷冻干燥即得甘露聚糖粗品，含有部分蛋白质；剩下的沉淀物为酵母葡聚糖粗品；
所述酵母甘露聚糖的进一步纯化为：采用蛋白酶E和F对甘露聚糖粗品在50℃、pH值为8.0的条件下处理6小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母甘露聚糖产品。
2.如权利要求1所述的酵母多糖的分离纯化方法，其特征在于，所述酵母葡聚糖的进一步纯化为：采用蛋白酶C和D对酵母葡聚糖粗品在50℃、pH值为7.6的条件下处理4小时，处理后的溶液中加入重量浓度为50%的乙醇，离心后取沉淀，加水复溶后使用重量浓度为70%的乙醇进行二次醇沉，离心获得的沉淀即为酵母葡聚糖产品。
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