CN103889983B

CN103889983B - 酶抑制剂化合物

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Publication number: CN103889983B
Application number: CN201180073402.9A
Authority: CN
Inventors: 大卫·埃文斯; 艾莉森·卡利; 艾莉森·斯图沃特; 迈克尔·希金伯特姆; 爱德华·萨沃里; 艾恩·辛普森; 玛丽安·尼尔森; 马丁·哈拉尔德松; 艾瑞克·诺丁; 托比亚斯·库奥梅斯特
Original assignee: Proximagen Ltd
Current assignee: BenevolentAI Cambridge Ltd
Priority date: 2011-09-14
Filing date: 2011-09-14
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2031-09-14
Also published as: JP2015502913A; IN2014DN01883A; EA201490451A1; IL231353A0; WO2013037411A1; CA2847193A1; JP5796130B2; AU2011376717A1; BR112014005793A2; US20140357623A1; EP2755974A1; US9150574B2; SG11201400277VA; CN103889983A

Abstract

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}乙-1-胺；4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸3-氨基丙酯；1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}-4-(二甲氨基)丁-1-酮；5-氨基-1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}戊-1-酮；N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺；N-(3-氨基丙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺；4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]-N-[3-(二甲氨基)丙基]哌啶-1-甲酰胺；1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)哌嗪；4-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)吗啉；1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)-1,4-二氮杂环庚烷；1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；1-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸；N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酰胺；4-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4yl}羰基)吗啉；1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-基}羰基)哌嗪；{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}甲醇；{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-2-基}甲醇；[(3R)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基]甲醇；4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸甲酯；N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酰胺；2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}乙-1-醇；1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酸甲酯；N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酰胺；1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-基}羰基)哌嗪；4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]吗啉；1-(4-氯苯基)-3-(哌啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-醇；N-丁基-1-(4-氯苯基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺；1-[4-(氟甲基)苯基]-3-(噁烷-4-基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶；和3-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}甲基)吡啶用于抑制SSAO活性。

Description

酶抑制剂化合物

技术领域

本发明涉及作为SSAO活性的抑制剂的化合物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及这些化合物在受益于SSAO活性抑制的疾病状态的治疗或预防中的应用，所述疾病状态例如炎性疾病、免疫疾病和肿瘤生长的抑制。

背景技术

氨基脲敏感性胺氧化酶（SSAO）活性是由血管粘附蛋白-1（VAP-1）或含铜的胺氧化酶3（AOC3）表达的酶活性，AOC3属于酶的含铜胺氧化酶家族（EC.1.4.3.6）。因此，SSAO酶的抑制剂也可以调节VAP-1蛋白的生物学功能。该酶家族的成员通过氨基脲对抑制作用敏感，并且利用铜离子和蛋白-衍生多巴醌（TPQ）辅助因子根据以下反应将伯胺氧化脱氨成为醛、过氧化氢和氨：

R–CH₂–NH₂+O₂→R-CHO+H₂O₂+NH₃

人类SSAO的已知物质包括内源性甲胺和氨基丙酮以及一些异生素胺，诸如苄胺[Lyles,Int.J.Biochem.CellBiol.1996,28,259-274;Klinman,Biochim.Biophys.Acta2003,1647(1-2),131-137;Mátyus等人,Curr.Med.Chem.2004,11(10),1285-1298;O'Sullivan等人,Neurotoxicology2004,25(1-2),303-315]。类比于其他含铜胺氧化酶，DNA序列分析和结构测定表明，与组织结合的人类SSAO是一种由通过单一N-末端跨膜结构域锚定于质膜的两个90-100kDa亚基组成的同源二聚体糖蛋白[Morris等人,J.Biol.Chem.1997,272,9388-9392;Smith等人,J.Exp.Med.1998,188,17-27;Airenne等人,ProteinScience2005,14,1964-1974;Jakobsson等人,ActaCrystallogr.DBiol.Crystallogr.2005,61(Pt11),1550-1562]。

已经在多种组织（包括血管和非血管平滑肌组织、内皮细胞和脂肪组织）中发现了SSAO活性[Lewinsohn,Braz.J.Med.Biol.Res.1984,17,223-256;Nakos&Gossrau,FoliaHistochem.Cytobiol.1994,32,3-10;Yu等人,Biochem.Pharmacol.1994,47,1055-1059;Castillo等人,Neurochem.Int.1998,33,415-423;Lyles&Pino,J.Neural.Transm.Suppl.1998,52,239-250;Jaakkola等人,Am.J.Pathol.1999,155,1953-1965;Morin等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.2001,297,563-572;Salmi&Jalkanen,TrendsImmunol.2001,22,211-216]。另外，在血浆中发现了SSAO蛋白，并且这种可溶形式呈现出与组织结合形式具有相似的性质[Yu等人,Biochem.Pharmacol.1994,47,1055-1059;等人,J.Immunol.1998,161,1549-1557]。最近的研究表明，循环的人和啮齿动物SSAO起源于该组织结合形式[等人,Am.J.Pathol.2003,163(5),1921-1928;Abella等人,Diabetologia2004,47(3),429-438;Stolen等人,Circ.Res.2004,95(1),50-57]，而在其他哺乳动物中，血浆/血清SSAO也是由被称为AOC4的单独基因编码的[Schwelberger,J.Neural.Transm.2007,114(6),757-762]。

尚未完全确定这种含量丰富的酶的准确生理学作用，但SSAO及其反应产物呈现出在细胞信号传导和调控中具有若干功能。例如，最近的发现表明了SSAO在GLUT4-介导的葡萄糖摄取[Enrique-Tarancon等人,J.Biol.Chem.1998,273,8025-8032;Morin等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.2001,297,563-572]和脂肪细胞分化[Fontana等人,Biochem.J.2001,356,769-777;Mercier等人,Biochem.J.2001,358,335-342]中起作用。另外，SSAO已经显示出与炎症过程有关，其中其作为白细胞的粘附蛋白起作用[Salmi&Jalkanen,TrendsImmunol.2001,22,211-216;Salmi&Jalkanen,in“AdhesionMolecules:FunctionsandInhibition”K.Ley(Ed.),2007,pp.237-251]，并且还在结缔组织基质发育和保持中起作用[Langford等人,Cardiovasc.Toxicol.2002,2(2),141-150;等人,Am.J.Pathol.2003,163(5),1921-1928]。而且，最近发现了SSAO和血管发生之间的联系[Noda等人,FASEBJ.2008,22(8),2928-2935]，并且基于这种联系预期SSAO的抑制剂具有抗血管发生效果。

在人类中进行的若干研究已证明在诸如充血性心力衰竭、糖尿病、阿尔茨海默病和炎症的条件下，血浆中的SSAO活性提高[Lewinsohn,Braz.J.Med.Biol.Res.1984,17,223–256;Boomsma等人,Cardiovasc.Res.1997,33,387–391;Ekblom,Pharmacol.Res.1998,37,87–92;等人,J.Immunol.1998,161,1549–1557;Boomsma等人,Diabetologia1999,42,233–237;Meszaros等人,Eur.J.DrugMetab.Pharmacokinet.1999,24,299–302;Yu等人,Biochim.Biophys.Acta2003,1647(1–2),193–199;Mátyus等人,Curr.Med.Chem.2004,11(10),1285-1298;O'Sullivan等人,Neurotoxicology2004,25(1-2),303-315;delMarHernandez等人,Neurosci.Lett.2005,384(1-2),183-187]。还不清楚酶活性的这些变化的潜在机制。研究表明由内源性胺氧化酶类产生的反应性醛类和过氧化氢有助于心血管疾病、糖尿病并发症和阿尔茨海默病的发展[Callingham等人,Prog.BrainRes.1995,106,305-321;Ekblom,Pharmacol.Res.1998,37,87-92;Yu等人,Biochim.Biophys.Acta2003,1647(1-2),193-199;Jiang等人,NeuropatholApplNeurobiol.2008,34(2),194-204]。此外，SSAO的酶活性与炎症部位的白细胞游出过程有关，其中SSAO已经显示出在血管内皮上的强表达[Salmi等人,Immunity2001,14(3),265-276;Salmi&Jalkanen,在“AdhesionMolecules:FunctionsandInhibition”K.Ley(Ed.),2007,pp.237-251中]。因此，说明SSAO的抑制在预防糖尿病并发症和炎性疾病中具有治疗价值[Ekblom,Pharmacol.Res.1998,37,87-92;Salmi等人,Immunity2001,14(3),265-276;Salter-Cid等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,315(2),553-562]。

SSAO敲除动物的表现型是明显正常的，但显示出在响应于多种炎性刺激物时所诱发的炎性应答显著减少[Stolen等人,Immunity2005,22(1),105-115]。另外，在使用抗体和/或小分子的人类疾病（例如，角叉菜胶诱发的爪炎症、噁唑酮诱发的结肠炎、脂多糖诱发的肺炎、胶原诱发的关节炎、内毒素诱发的葡萄膜炎）的多种动物模型中的野生型动物中，已经显示出其功能的拮抗作用在减少白细胞浸润、降低疾病表现型的严重程度和降低炎性细胞因子和趋化因子的水平方面受到保护[Kirton等人,Eur.J.Immunol.2005,35(11),3119-3130;Salter-Cid等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,315(2),553-562;McDonald等人,AnnualReportsinMedicinalChemistry2007,42,229-243;Salmi&Jalkanen,in“AdhesionMolecules:FunctionsandInhibition”K.Ley(Ed.),2007,pp.237-251;Noda等人,FASEBJ.200822(4),1094-1103;Noda等人,FASEBJ.2008,22(8),2928-2935]。这种抗炎保护似乎提供了大范围的炎症模型，其均具有独立的动因机制，而不限于一种特定疾病或疾病模型。这表明了SSAO可能是炎性应答调控的关键节点，并因此SSAO抑制剂在大范围的人类疾病中有可能成为有效的抗炎药物。

SSAO（VAP-1）在胃癌中被上调并且已经在人黑素瘤、肝癌和头颈肿瘤的肿瘤脉管系统中得到确认（YoongKF,McNabG,HubscherSG,AdamsDH.(1998),JImmunol160,3978–88.;IrjalaH,SalmiM,AlanenK,Gre′nmanR,JalkanenS(2001),Immunol.166,6937–6943;Forster-HorvathC,DomeB,PakuS,等人(2004),MelanomaRes.14,135–40）。一份报告（Marttila-IchiharaF,CastermansK,AuvinenK,OudeEgbrinkMG,JalkanenS,GriffioenAW,SalmiM.(2010),JImmunol.184,3164-3173）示出了带有酶失活的VAP-1的小鼠的黑素瘤生长要慢得多，并且肿瘤血管数量减少且直径减小。骨髓抑制细胞的浸润减少（减少60%-70%）也反映了这些肿瘤的生长减少。令人鼓舞的是，VAP-1缺陷并不影响正常组织中血管和淋巴管的形成。

之前已经披露过作为SSAO抑制剂的不同结构类别的小分子，例如在WO02/38153（四氢咪唑并[4,5-c]吡啶衍生物）中、在WO03/006003（2-茚满基肼衍生物）中、在WO2005/014530（烯丙基肼和羟胺（氨基氧）化合物）中以及在WO2007/120528（烯丙基氨基化合物）中。PCT/EP2009/062011和PCT/EP2009/062018中描述了另外的SSAO抑制剂。

我们的共同未决国际专利申请第PCT/EP2011/053818号涉及式（I）的SSAO抑制剂或其可药用盐，或N-氧化物：

其中

R¹为苯基或6-元杂芳基，可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、氰基、C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、羟基-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)氨基-C_1-4-烷基、-NR^4AR^4B、-NR⁶C(O)OR⁵、-NR⁶C(O)R⁵、-NR⁶C(O)NR^4AR^4B、-C(O)NR^4AR^4B、-C(O)R⁵、-C(O)OR⁵、和-NR⁶S(O)₂R⁵；

A为键；

R²为-B-Q-[R³]_n或-B-R³；

其中n=1、2、3或4

B为键、O、NR⁴、-C(O)-或C_1-3-亚烷基；

Q为饱和的或部分不饱和的单环3-7元杂环或C_3-7-环烷基环；

当R²为-B-Q-[R³]_n时，R³选自氢、卤素、氰基、氨基、羟基、氧基、C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、羟基-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、di(C_1-4-烷基)氨基-C_1-4-烷基、-NR^4AR^4B、-NR⁶C(O)OR⁵、-NR⁶C(O)R⁵、-NR⁶C(O)NR^4AR^4B、-C(O)NR^4AR^4B、-C(O)R⁵、-C(O)OR⁵、-NR⁶S(O)₂R⁵、-S(O)₂R⁵、苯基-C_1-4-烷基和杂芳基-C_1-4-烷基，并且其中任一苯基或杂芳基残基为可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、氰基、C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、羟基-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)氨基-C_1-4-烷基、-NR^4AR^4B、-NR⁶C(O)OR⁵、-NR⁶C(O)R⁵、-NR⁶C(O)NR^4AR^4B、-C(O)NR^4AR^4B、-C(O)R⁵、-C(O)OR⁵、-NR⁶S(O)₂R⁵；

当R²为-B-R³时，R³选自氨基、C_1-4-烷氧基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、羟基-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)氨基-C_1-4-烷基、-NR^4AR^4B、-NR⁶C(O)OR⁵、-NR⁶C(O)R⁵、-NR⁶C(O)NR^4AR^4B、-C(O)NR^4A1R^4B、-C(O)R⁵、-NR⁶S(O)2R⁵、苯基-C_1-4-烷基和杂芳基-C_1-4-烷基，并且其中任一苯基或杂芳基残基为可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、氰基、C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、羟基-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)氨基-C_1-4-烷基、-NR^4AR^4B、-NR⁶C(O)OR⁵、-NR⁶C(O)R⁵、-NR⁶C(O)NR^4AR^4B、-C(O)NR^4AR^4B、-C(O)R⁵、-C(O)OR⁵、-NR⁶S(O)₂R⁵，条件是，当R²为-B-R³，B为键且R³为-C(O)R⁵时，R⁵不为氢；

R^4A、R^4B和R⁵各自独立地选自氢、C_1-4-烷基、羟基-C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)-氨基-C_1-4-烷基或C_1-4烷氧基-C_1-4烷基；或R^4A和R^4B与它们所连接的氮一起形成环状氨基（cyclicamino）基团，例如哌啶基、哌嗪基、N-取代的哌嗪基、吗啉基或高哌啶基（homopiperidyl）；

R^4A1选自C_1-4-烷基、羟基-C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基、氰基-C_1-4-烷基、氨基-C_1-4-烷基、C_1-4-烷基氨基-C_1-4-烷基、二(C_1-4-烷基)-氨基-C_1-4-烷基或C_1-4烷氧基-C_1-4烷基；或R^4A1和R^4B与它们所连接的氮一起形成环状氨基基团，例如哌啶基、哌嗪基、N-取代的哌嗪基、吗啉基或高哌啶基；

R⁶为氢或C_1-4-烷基；以及

X选自式（1-16）的基团，其中标记为*的键连接至R¹A-，而标记为**的键连接至-R²：

其中Y选自氢、羟基、氨基、-NHR⁶、-OCH₃；

Z选自氢、氟、羟基、C_1-4-烷氧基、卤代-C_1-4-烷基、CONH₂、氰基、SO₂NH₂、氨基、-NHR⁶；

W选自H、C_1-4-烷基、卤代-C_1-4-烷基。

发明内容

本发明涉及落入PCT/EP2011/053818的总体公开内容范围内的一组特定化合物，但并不是其中示例性示出的化合物。本发明的化合物具有本文中所披露的用途。

具体实施方式

根据本发明，提供了选自以下的化合物及其可药用盐：

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}乙-1-胺；

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸3-氨基丙酯；

1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}-4-(二甲氨基)丁-1-酮；

5-氨基-1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}戊-1-酮；

N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺；

N-(3-氨基丙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺；

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]-N-[3-(二甲氨基)丙基]哌啶-1-甲酰胺；

1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)哌嗪；

4-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)吗啉；

1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)-1,4-二氮杂环庚烷；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；

1-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸；

N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酰胺；

4-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-基}羰基)吗啉；

1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-基}羰基)哌嗪；

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}甲醇；

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-2-基}甲醇；

[(3R)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基]甲醇；

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸甲酯；

N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酰胺；

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}乙-1-醇；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酸甲酯；

N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酰胺；

1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-基}羰基)哌嗪；

4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]吗啉；

1-(4-氯苯基)-3-(哌啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-醇；

N-丁基-1-(4-氯苯基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺；

1-[4-(氟甲基)苯基]-3-(噁烷-4-基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶；

3-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}甲基)吡啶。

预期本发明的化合物可以水合物和溶剂化物的形式制备。本申请，包括其权利要求中提到的任何“本发明涉及的化合物”或“本发明的化合物”等均包括这样的化合物的盐、水合物和溶剂化物。本文中使用术语“溶剂化物”来描述包含本发明化合物和化学计量量的一种或多种可药用溶剂分子（例如，乙醇）的分子复合物。当所述溶剂为水时，使用术语“水合物”。

本发明的个别化合物可以无定形形式和/或若干多晶形式存在，并且可以不同的晶体惯态（crystalhabit）获得。本申请，包括其权利要求中提到的任何“本发明涉及的化合物”或“本发明的化合物”等均包括该化合物，而与无定形或多晶形式无关。

定义

除非另外说明或指明，以下的定义应适用于说明书和所附权利要求全文。

如本文中所使用的，术语“本发明的化合物”是指上文中所列出的30种化合物，并且包括其可药用盐、水合物和溶剂化物。

“可药用”意指在用于制备药物组合物时是安全、无毒的并且既没有生物学上不希望的性质也没有其他不希望的性质，并且包括用于兽医用途以及人类药物用途。

本文中所使用的“治疗”包括所述疾病或病症的预防，或者所述疾病发生后的改善或消除。

“有效量”是指对所治疗的受试者提供治疗效果的化合物的量。该治疗效果可以是客观的（即，通过一些测试或标记物）或主观的（即，受试者给出效果的指标或感觉）。

“前药”是指在生理学条件下或通过溶剂分解可转化为本发明的生物活性化合物的化合物。当向有需要的受试者给药时，前药可以是无活性的，但其在体内可转化为本发明的活性化合物。前药在体内通常迅速发生转化以产生本发明的母体化合物，例如，通过在血液中水解。前药化合物通常具有在哺乳动物生物体内的溶解性、组织相容性或延迟释放的优点（参见Silverman,R.B.,TheOrganicChemistryofDrugDesignandDrugAction,第2版,ElsevierAcademicPress(2004),pp.498-549）。本发明化合物的前药可通过修饰本发明化合物中存在的官能团（例如羟基、氨基或巯基）从而在常规操作中或在体内使得修饰被断裂为本发明的化合物来制备。前药的实例包括，但不限于，羟基官能团的乙酸酯、甲酸酯和琥珀酸酯衍生物或者氨基官能团的氨基甲酸苯酯衍生物。

在说明书和所附权利要求的全文中，给定的化学式或化学命名应该也涵盖其所有的盐、水合物、溶剂化物、N-氧化物和前药形式。而且，给定的化学式或化学命名应该涵盖其所有的互变异构和立体异构形式。对映体能够以其纯的形式存在，或者作为两种异构体的外消旋（等量）形式或非等量混合物形式存在。非对映体能够以其纯的形式存在，或者作为非对映体的混合物存在。非对映体还包括几何异构体，其能够以纯的顺式或反式的形式或作为它们的混合物存在。

本发明的化合物可以用作或以适当的形式用作其可药用盐（酸加成盐或碱加成盐）。下文中提到的可药用加成盐意在包含该混合物能够形成的治疗活性无毒酸加成盐和碱加成盐形式。具有碱性性质的混合物能够通过用适合的酸处理该碱性形式而转化为其可药用酸加成盐。示例性的酸包括无机酸，例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸，和有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、乙醇酸、马来酸、丙二酸、草酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、富马酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、水杨酸、对氨基水杨酸、帕莫酸、苯甲酸、抗坏血酸等。示例性的碱加成盐形式为钠、钾、钙盐或与可药用胺的盐，例如氨水、烷基胺、苯胺和氨基酸如精氨酸和赖氨酸。本文中所使用的术语加成盐还可包含该化合物及其盐能够形成的溶剂化物，例如水合物、醇化物等。

一方面，本发明涉及本发明的化合物用于治疗的应用。上文中定义的化合物可用作SSAO活性的抑制剂。因而，其可用于治疗或预防一些疾病和病症，其中抑制SSAO活性有利于这些疾病和病症。更具体地，其可用于治疗或预防炎症、炎性疾病、免疫或主动免疫病症、或抑制肿瘤生长。

尤其是，据信本发明的化合物可用于治疗或预防关节炎（例如类风湿性关节炎、幼年类风湿性关节炎、骨关节炎和牛皮癣性关节炎）、滑膜炎、脉管炎、与肠的炎症有关的病症（例如克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病和肠易激综合征）、动脉粥样硬化、多发性硬化症、阿尔茨海默病、血管性痴呆、炎症性肺部病症（例如哮喘、慢性阻塞性肺病和急性呼吸窘迫综合征）、纤维化疾病（包括特发性肺纤维化、心肌纤维化和系统性硬化症（硬皮病））、皮肤炎性疾病（例如接触性皮炎、特应性皮炎和牛皮癣）、全身炎症反应综合征、败血症、肝脏的炎性和/或自身免疫病症（例如自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、酒精性肝病、硬化性胆管炎和自身免疫性胆管炎）、糖尿病（I型或II型）和/或其并发症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、缺血性疾病（例如中风和缺血性再灌注损伤）和心肌梗塞和/或其并发症。

据信本发明的化合物尤其可用于治疗或预防脉管炎，包括但不限于巨细胞动脉炎、大动脉炎（Takayasu’sarteritis）、结节性多动脉炎、川崎病（Kawasakidisease）、韦格纳肉芽肿（Wegener’sgranulomatosis）、Churg-Strauss综合征、显微镜下多血管炎、过敏性紫癜（Henoch-purpura）、冷球蛋白血症、皮肤白细胞破碎性血管炎和原发性中枢神经系统血管炎。

还据信本发明的化合物尤其可用于治疗类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺病或特应性皮炎。

根据以上介绍中所述的证据，在若干种癌症（包括胃癌、黑素瘤、肝癌和头颈肿瘤）中VAP-1被上调并且带有酶促失活VAP-1的小鼠的黑素瘤生长要慢得多，并且根据VAP-1和血管发生之间的联系，也能够预期本发明的化合物是抗血管发生的，并因此可通过抑制肿瘤生长而被用于治疗癌症。

因此，本发明包括本发明化合物用于治疗或预防上述疾病或病症的用途。本发明还包括所述化合物在制备用于治疗或预防上述疾病或病症的药物中的用途。本发明进一步包括用于治疗或预防这样的疾病或病症的方法，其包括向需要这种治疗的哺乳动物（包括人）给予有效量的上述化合物。

本文中描述的方法包括那些其中受试者被鉴定为需要特定状态治疗的情形。鉴定受试者需要这种治疗可基于受试者或保健专业人员的评判或者可以是主观的（例如评价）或客观的（例如可通过测试或诊断方法进行测量）。

另一方面，本文中的方法还可包括监测受试者对治疗性给药的应答的步骤。这样的监测可以包括对受试者组织、体液、样本、细胞、蛋白、化学标志物、遗传材料等的周期性取样，以作为治疗方案的标志物或指标。在其他方法中，通过对这种治疗的适用性的相关标志物或指标的评价将受试者预先筛选或鉴定为对这种治疗有需要。

在一种实施方式中，本发明提供了一种监测治疗进行的方法，该方法包括在患有或疑似患有本文所述疾病或其综合征的受试者中确定诊断标志物（标志物，Marker）（例如，受到本文中的化合物调节的本文中所描述的任何靶标或细胞类型）或诊断性测量（例如，筛选、试验）的步骤，其中已向该受试者给予足以治疗其疾病或综合征的治疗性剂量的本发明化合物。可将在该方法中确定的标志物的水平与健康正常对照和其他患病患者中的已知标志物水平进行比较，以确定受试者的疾病状态。在优选的实施方式中，在晚于确定第一水平的时间点确定受试者中标志物的第二水平，并比较这些第二水平以监测疾病的进程和治疗的效力。在某些优选的实施方式中，在根据本发明开始进行治疗之前确定受试者中标志物的预处理水平；然后可将标志物的该预处理水平与治疗开始后受试者中的标志物水平进行比较，以确定治疗的效力。

在某些方法实施方式中，至少一次确定受试者中标志物水平和标志物活性。标志物水平与例如从同一患者、另一患者或正常受试者之前或之后获得的标志物水平的另一测量结果进行比较，可用于确定根据本发明的治疗是否具有所期望的效果，并由此能够适当地调整剂量水平。可利用本领域已知或本文中所述的任何适合的取样/表达试验方法来确定标志物的水平。优选地，首先从受试者获取组织或体液样品。适合的样品的实例包括血液、尿液、组织、口腔或颊细胞、以及带发根的毛发样品。其他适合的样品可以是本领域技术人员已知的。能够利用本领域已知的任何适合的技术来确定样品中的蛋白质水平和/或mRNA水平（例如标志物水平），包括但不限于酶免疫测定、ELISA、放射性标记/测定技术、印迹/化学发光法、实时PCR等。

组合物

目前优选的本发明实施方式为包含本发明化合物以及一种或多种可药用载体和/或赋形剂的药物组合物。

为了用于临床应用，将本发明的化合物配制为用于不同给药方式是药物组合物。本发明的化合物可被适当地与生理学可接受的载体、赋形剂或稀释剂一起给药。可通过适合的途径给药本发明的药物组合物，优选通过口服、直肠、鼻内、局部（包括经颊和舌下）、舌下、经皮、鞘内、透粘膜或肠胃外（包括皮下、经肌肉、静脉内和真皮内）给药。

可以单位剂型的形式存在其他制剂，例如片剂和缓释胶囊，或存在于脂质体中，并且可以通过制药领域公知的方法来制备。通常通过将活性物质或其可药用盐与常规的可药用载体、稀释剂或赋形剂混合来制备药物制剂。赋形剂的实例为水、明胶、阿拉伯胶、乳糖、微晶纤维素、淀粉、羧甲基淀粉钠、磷酸氢钙、硬脂酸镁、滑石粉、胶体二氧化硅等。这样的制剂还可以含有其他药理学有效的活性剂，以及常规添加剂，例如稳定剂、润湿剂、乳化剂、矫味剂、缓冲剂等。通常，对于肠胃外应用，活性化合物的量为制剂的0.1-95wt%，优选制剂的0.2-20wt%，并且对于口服给药更优选为制剂的1-50wt%。

还可通过已知方法来制备该制剂，例如造粒、压制、微囊化、喷雾涂覆等。可通过常规方法以片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、糖浆剂、混悬剂、栓剂或注射剂的形式制备该制剂。可通过将活性物质溶解于或悬浮于水或其他适合的媒介中来制备液体制剂。可以常规方式涂覆片剂和颗粒剂。为了在延长的时期内保持治疗有效的血浆浓度，可将本发明的化合物与缓慢释放制剂组合。

具体化合物的剂量水平和剂量频率根据不同的因素而有所变化，这些因素包括所采用的具体化合物的效力、该化合物的代谢稳定性和作用时长、患者的年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食状况、给药的方式和时间、排泄速率、药物联用、待治疗疾病的严重程度、以及患者正在接受的治疗。每日剂量范围可以是，例如，约0.001mg至约100mg/千克体重，单次或多次剂量给药，例如每次约0.01mg至约25mg。通常，这样的剂量通过口服给药，但也可以选择肠胃外给药。

本发明化合物的制备

本发明的化合物可通过常规方法或与常规方法类似的方法来制备。尤其可通过以下方案说明根据本发明的实施例的中间体和化合物的制备方法。本文的方案中的结构中变量的定义与本文中所述化学式中相应位置的定义相对应。

方案1.用于制备式（Ia）化合物的通用合成路线

其中W、Y、Z、R¹和R²如式（I）中所定义。

通过与酮反应以在R²处引入官能团接着引入R¹（例如通过Suzuki反应）以得到式（IIIa/IVa）的混合物，或者通过先引入R¹接着再在R²处引入官能团（其可被修饰以得到替代的R²，如在（Va）中），能够容易地由1H-吡咯并[2,3-c]吡啶（IIa）制备通式（Ia）的化合物。通过标准合成方法能够容易地使式（IIIa）、（Iva）和（Va）的化合物转化为通式（Ia）的化合物。可替代地，4-氯-3-氨基吡啶（VIa）可与适合的醛成环，以得到通式（VIIa）的化合物，之后再引入R¹（例如，通过芳基化反应）。后一种方法是本领域技术人员公知的，例如，Xu等人,Synthesis,24,3981-3987,2008。

方案2.用于制备式（Ic）化合物的通用合成路线

其中Y、Z、R¹、R²和R³如式（I）中所定义。

通式（Ic）的化合物可根据科技文献中已知的标准方法容易地制备，例如，通过使通式（IIc）的3-卤代-4-[(吡啶-4-基)羰基化合物与肼发生环化，或者通过通式（IIIc）的化合物的环化得到通式（IVc）的化合物并随后引入R¹（例如通过芳基化反应）来制备。这样的方法是本领域技术人员公知的，例如Verma等人,Tet.Lett.,50,383,2009和Zhu等人,BioOrg.Med.Chem.Lett.,15,2441-2452,2007。

可选地，也可在一个或多个合成步骤中，将式（I）的化合物转化为式（I）的另一化合物。

使用以下的缩写：

Ac乙酰基

Ac₂O乙酸酐

AcOH乙酸

aq水

Ar芳基

Boc叔丁氧基羰基

nBuLi正丁基锂

calcd计算的

cat催化的

CDI羰基二咪唑

conc浓缩

d天

DCE二氯乙烷

DCM二氯甲烷

DIBALH二异丁基氢化铝

DIPEA二异丙基乙胺

DMAP4-二甲氨基吡啶

DMF二甲基甲酰胺

EDC1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

ES+电喷雾离子化

EtOAc乙酸乙酯

EtOH乙醇

h小时

HBTUO-偶氮苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐

HOBt1-羟基苯并三唑一水物

HPLC高效液相色谱

HRMS高分辨质谱

IBX2-碘酰基苯甲酸

Int中间体

LCMS液相色谱-质谱联用

LDA二异丙基氨基锂

M摩尔

Me甲基

MeCN乙腈

MeOH甲醇

min分钟

MS质谱

NaBH(OAc)₃三乙酰氧基硼氢化钠

NBSN-溴代琥珀酰亚胺

NISN-碘代琥珀酰亚胺

NMPN-甲基吡咯烷酮

Ph苯基

PhMe甲苯

Rf保留时间

RT室温

sat饱和的

SCX强阳离子交换

SM起始材料

TFA三氟乙酸

THF四氢呋喃

实施例和中间体化合物

实验方法

除非另外说明，反应在室温下进行。用Biotage微波反应器利用装配有铝帽和隔片的处理瓶（processvials）进行微波反应。利用ThalesH-Cube进行氢化反应。在Merck硅胶60（230-400目）上或利用装备有StrataSI-1二氧化硅gigatubes的FlashMasterPersonal系统，或利用装备有RediSep硅胶柱的CombiFlashCompanion系统来进行快速色谱分析。在装备有MerckRP-18（40-63um）柱的Gilson系统（Gilson321泵和GilsonFC204组分收集器）上进行反相柱色谱。在装备有PhenomenexSynergiHydroRP150×10mm或YMCODS-A100/150×20mm柱的带有UV检测器的Gilson系统上进行反相HPLC。收集最纯的组分，并在真空下浓缩和干燥。在纯度分析之前，通常在40℃真空烘箱中干燥化合物。利用连接于具有PhenomenexSynergi,RP-Hydro柱（150×4.6mm,4μm,1.5mL/分钟,30℃梯度5-100%MeCN（+0.085%TFA）在水中（+0.1%TFA）持续7分钟，200-300nm）的Agilent1100HPLC系统的Agilent1100HPLC系统/WatersZQ质谱仪通过HPLC/LCMS进行化合物分析。利用装备有AdvioTriVersaNanoMate电喷雾离子源的ThermoScientificLTQOrbitrapXL测量准确质量（HRMS）（在分析期间，通过三个质量检查校准。以正离子电喷射方式获得谱图。所获得的质量范围为m/z100-2000。在分析前将样品溶解于DMSO得到10mM溶液，接着用MeOH或MeOH中的10mMNH₄OAc继续稀释，成为～0.1M溶液）。所报告的值对应于质子化分子离子（MH⁺）。利用ACD命名法6.0、7.0或10.0来命名所制备的化合物。

中间体1

4-{1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基}-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯

将6-氮杂吲哚（4.48g,37.9mmol）溶解于MeOH（70mL）和KOH（4.68g,83.4mmol）中，并加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯（8.31g,41.7mmol）。在70℃加热反应混合物18小时。将残余物在水（250mL）和DCM（250mL）之间分离，并用DCM（2×250mL）萃取水相。将合并的有机组分干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到标题化合物，其为黄色泡沫（11.3g,99%）。LCMS(ES+):300.1[MH]⁺。

中间体2

4-{1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体1（11.3g,37.7mmol）溶解于EtOH（200mL）并在H-cube中在90℃和90巴的条件下在10%Pd/C上氢化。真空浓缩反应混合物，得到标题化合物，其为黄色固体（11.1g,97%）。LCMS(ES⁺):302.1[MH]⁺。

中间体3

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

在氮气条件下，将中间体2（11.1g,36.7mmol）溶解于DMF（60mL），并加入1-氯-4-碘-苯（10.5g,44.0mmol）、N,N'-二甲基乙撑二胺（789μL,7.33mmol）、K₃PO₄（16.3g,77.0mmol）和CuI（698mg,3.67mmol）。在微波炉中于160℃将反应混合物加热20分钟并真空浓缩。将残余物在水（250mL）和DCM（250mL）之间分离，并用DCM（2×250mL）萃取水相。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为黄色固体（6.86g,45%）。LCMS(ES+):411.9[MH]⁺,HPLC:Rf5.91分钟,纯度76%。

中间体4

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶

将中间体3（6.86g,16.6mmol）溶解于DCM（200mL）和TFA（50mL）中，并搅拌2小时。在真空中除去溶剂并将残余物溶解于1MNa₂CO₃水溶液（200mL），并用DCM（3×200mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为红色胶状物（3.18g,61%）。LCMS(ES⁺):312.1[MH]⁺。HPLC:Rf3.61分钟,纯度96%。

中间体5

1-[(3-氨基吡啶-4-基)甲基]哌啶-4-甲酸乙酯

将3-氨基-吡啶-4-甲醛（5.00g,40.9mmol）溶解于DCM（60mL）中，并加入4-哌啶甲酸乙酯（7.57mL,49.1mmol）和NaBH(OAc)₃（10.4g,49.1mmol），在微波炉中于60℃将反应混合物加热5分钟。用DCM（100mL）稀释反应混合物并用Na₂CO₃饱和水溶液（50mL）终止反应。用NH₄Cl饱和水溶液（30mL）洗涤有机组分。用DCM（2×50mL）萃取合并的水相组分，并干燥（MgSO₄）合并的有机组分，真空浓缩，得到粗制标题化合物，其为黄色胶状物（11.3g）。LCMS(ES⁺):264.1[MH]⁺。

中间体6至12

通过利用适合的胺将3-氨基-吡啶-4-甲醛还原胺化，以类似于中间体5的方法来制备中间体6-12；参见下表1。

表1:3-氨基-吡啶-4-甲醛的还原胺化

中间体13

1-{1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基}哌啶-4-甲酸乙酯

将中间体5（6.81g,25.9mmol）溶解于AcOH（334mL），冷却至0℃并加入NaNO₂（1.78g,25.9mmol）的水（2.72mL）溶液。于0℃搅拌反应混合物5分钟并真空浓缩。将残余物溶解于EtOAc（200mL），用饱和Na₂CO₃饱和水溶液（2×100mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到粗制标题化合物，其为棕色胶状物（12.2g）。LCMS(ES+):275.1[MH]⁺。

中间体14至20

通过使中间体6-12与NaNO₂环化，以类似于中间体13的方法来制备中间体14-20；参见下表2。

表2：3-氨基吡啶的环化

中间体21至22

通过1H-吡唑并[3,4-c]吡啶的N-乙酰化，以类似于中间体3的方法来制备中间体21-22；参见下表3。

表3：1H-吡唑并[3,4-c]吡啶的N-乙酰化

中间体23

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸甲酯

将中间体18（1.98g,7.53mmol）、4-氯苯基硼酸（2.36g,15.1mmol）、Cu(OAc)₂（2.74g,15.1mmol）和吡啶（3.03mL,37.7mmol）悬浮于DCE（52mL）中并搅拌过夜。通过柱色谱纯化反应混合物，得到标题化合物，其为深黄色固体（552mg,20%）。LCMS(ES⁺):373.2[MH]⁺。HPLC:Rf5.23分钟,纯度98.0%。

中间体24

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}乙酸甲酯

将中间体19（1.64g,5.94mmol）、4-氯苯基硼酸（1.86g,11.9mmol）、Cu(OAc)₂（2.16g,11.9mmol）和吡啶（2.39mL,29.7mmol）悬浮于DCE（41mL）中，并搅拌过夜。通过柱色谱纯化反应混合物，得到标题化合物，其为黄色胶状物（866mg,38%）。LCMS(ES⁺):387.3[MH]⁺。HPLC:Rf5.32分钟,纯度100%。

中间体25

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸盐酸盐

将中间体23（84.0mg,0.23mmol）溶解于1:1THF/水（2mL），加入LiOH/H₂O（20.8mg,0.50mmol）并搅拌反应混合物3小时。在真空中除去THF并用1MHCl水溶液（1mL）将含水残余物酸化至pH1，真空浓缩，得到粗制标题化合物，其为橙色胶状物（115mg）。LCMS(ES⁺):359.2[MH]⁺。HPLC:Rf4.59分钟,纯度97.1%。

中间体26

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酸盐酸盐

利用实施例23代替中间体23，类似于中间体25来制备中间体26，得到粗制标题化合物，其为棕色固体（332mg）。LCMS(ES⁺):357.0[MH]⁺。

中间体27

2-(3-硝基吡啶-4-基)乙酸甲酯

在0℃下将3-硝基吡啶（5.00g,40.3mmol）和氯代乙酸甲酯（7.30g,67.3mmol）溶解于THF（50mL）中并将其逐滴加到KOtBu（18.1g,161mmol）在THF（50mL）中的浆液中。在室温下搅拌反应混合物1小时，冷却至0℃并用NH₄Cl饱和水溶液（100mL）终止反应。真空除去THF并用DCM（75mL）稀释反应混合物。用DCM（3×40mL）萃取水相组分，将合并得到的有机组分用盐水（100mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为深棕色油状物（3.94g,50%）。LCMS(ES⁺):196.9[MH]⁺。

中间体28

2-溴-2-(3-硝基吡啶-4-基)乙酸甲酯

将中间体27（2.66g,13.6mmol）、NBS（2.65g,14.9mmol）和偶氮二异丁腈（66.8mg,0.41mmol）溶解于CCl₄（20mL）中，并将反应混合物在回流下加热5小时并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为橙色油状物（3.25g,87%）。LCMS(ES⁺):274.3,276.3[MH]⁺。

中间体29

2-(吗啉-4-基)-2-(3-硝基吡啶-4-基)乙酸甲酯

将中间体28（2.00g,7.27mmol）溶解于MeCN（30mL）中，加入吗啉（944μL,10.9mmol）并搅拌反应混合物过夜。通过过滤除去沉淀物并真空浓缩滤液。通过正相柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为黄色油状物（1.63g,80%）。LCMS(ES⁺):282.0[MH]⁺。

中间体30

2-(3-氨基吡啶-4-基)-2-(吗啉-4-基)乙酸甲酯

将中间体29（989mg,3.52mmol）溶解于EtOAc（33mL）和MeOH（37mL）中并利用ThalesH-cube（55℃,1巴）在10%Pd/C上氢化。真空浓缩反应混合物，得到粗制标题化合物，其为棕色油状物（916mg,100%）。LCMS(ES⁺):252.0[MH]⁺。

中间体31

4-{1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基}吗啉

将中间体30（916mg,3.65mmol）溶解于THF（10mL）中，冷却至-78℃并加入LiAlH₄（2.28mL,2.4M在THF中,5.47mmol）。在-78℃下搅拌反应混合物1小时，再次加入LiAlH₄（759μL,2.4M在THF中,1.82mmol）并在-78℃下搅拌反应混合物1小时。反应混合物用1MNaOH水溶液终止反应，通过硅藻土（celite）过滤并真空浓缩。通过正相柱色谱纯化残余物，得到标题化合物（517mg,70%），其为浅黄色胶状物。LCMS(ES⁺):204.0[MH]⁺。

中间体32

3-吲哚-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶

将4-甲氧基-6-氮杂吲哚（662mg,4.47mmol）溶解于CHCl₃（20mL）中，加入NIS（1.06g,4.69mmol），并搅拌反应混合物18小时。通过过滤收集沉淀物并真空浓缩滤液。将残余物溶解于EtOAc（50mL），用10%硫代硫酸钠水溶液（50mL）、NaHCO₃饱和水溶液（50mL）和水（50mL）洗涤，干燥（MgSO₄），真空浓缩并与沉淀物合并，得到标题化合物，其为红色固体（1.12g,91%）。LCMS(ES⁺):274.9[MH]⁺。HPLC:Rf3.98分钟,纯度96%。

中间体33

1-{3-吲哚-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-1-基}乙-1-酮

将中间体32（1.12g,4.09mmol）溶解于DCM（30mL）和DMAP（49.9mg,0.41mmol）中，并加入DIPEA（710μL,4.09mmol）和Ac₂O（424μL,4.50mmol）。将反应混合物搅拌18小时，用DCM（100mL）稀释，用1MNa₂CO₃水溶液（100ml）和水（100mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到标题化合物，其为橙色固体（1.25g,97%）。LCMS(ES⁺):316.9[MH]⁺。HPLC:Rf3.92分钟，纯度97%。

中间体34

4-{4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基}-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体33（1.14g,3.61mmol）、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二杂氧戊硼烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-1-甲酸叔丁酯（1.12g,3.61mmol）和Na₂CO₃（1.15g,10.8mmol）溶解于二噁烷（15mL）和水（3mL）中，并加入Pd(PPh₃)₄（624mg,0.54mmol）。在微波反应器中在100℃加热反应混合物2小时，用水（100mL）稀释，并用DCM（2×100mL）和EtOAc（2×100mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分，真空浓缩并通过柱色谱纯化，得到标题化合物，其为黄色固体（502mg,37%）。LCMS(ES⁺):330.0[MH]⁺。

中间体35

4-{4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯

利用中间体34代替中间体1，类似于中间体2来制备中间体35，得到标题化合物，其为黄色胶状物（260mg,51%）。LCMS(ES⁺):332.1[MH]⁺。

中间体36

4-[1-(4-氯苯基)-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

利用中间体35代替中间体2，类似于中间体3来制备中间体36，得到标题化合物，其为黄色固体（141mg,41%）。LCMS(ES⁺):442.0[MH]⁺。

中间体37

N-甲氧基-N-甲基噁烷-4-甲酰胺

将N,O-二甲基羟胺盐酸盐（1.23g,12.7mmol）和N-甲基吗啉（3.80mL,34.5mmol）溶解于DCM(20mL)中，并逐滴加入噁烷-4-甲酰氯（1.71g,11.5mmol）的DCM（20mL）溶液。将反应混合物搅拌2小时，然后用DCM稀释至200mL，用1MHCl水溶液（2×100mL）、1MNa₂CO₃水溶液（100mL）和水（100mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到粗制标题化合物，其为黄色油状物（1.87g,94%）。LCMS(ES+):174.1[MH]⁺。

中间体38

3-氟-4-[(噁烷-4-基)羰基]吡啶

在氮气气氛中将二异丙基胺（1.50ml,10.8mmol）溶解于THF（30mL）并冷却至-78℃。逐滴加入nBuLi（4.32mL,2.5M在己烷中,10.8mmol）并在-78℃搅拌所得溶液10分钟，在0℃搅拌30分钟，然后再冷却至-78℃。在5分钟内逐滴加入3-氟-吡啶（0.93mL,10.8mmol）并搅拌反应混合物2小时。加入中间体37（1.87g,10.8mmol）的THF（15mL）溶液并将反应混合物升温至室温并搅拌15分钟。反应混合物用NH₄OAc饱和水溶液（10mL）终止反应并用EtOAc（200mL）稀释。用水（2×50mL）洗涤有机组分，干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到粗制标题化合物，其为橙色油状物（1.45g,64%），LCMS(ES⁺):210.1[MH]⁺。

中间体39

3-(噁烷-4-基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶

将中间体38（255mg,1.22mmol）和水合肼（134mg,2.68mmol）溶解于NMP（3mL）中并在微波炉中在160℃加热反应混合物20分钟。通过SCX纯化该反应混合物，得到标题化合物，其为橙色油状物（245mg,99%）。LCMS(ES+):204.1[MH]⁺。

中间体40

4-[(3-氟吡啶-4-基)(羟基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

将二异丙基胺（0.66ml,4.69mmol）溶解于THF（30ml）中并冷却至-78℃。逐滴加入nBuLi（2.13ml,2.20M在环己烷中，4.69mmol），并将反应混合物在-78℃搅拌10分钟，在0℃搅拌30分钟，并再次冷却至-78℃。在5分钟内逐滴加入3-氟-吡啶（0.40ml,4.69mmol），并搅拌反应混合物45分钟。加入N-Boc-4-哌啶甲醛（1.00g,4.69mmol）的THF（10ml）溶液并将反应混合物升温至室温并搅拌15分钟。反应混合物用NH₄OAc（10mL）饱和水溶液终止反应，用EtOAc（100mL）稀释，用水（2×50mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩，得到标题化合物，其为橙色油状物（1.42g,98%）。LCMS(ES⁺):255.0[MH-t-Bu]⁺。

中间体41

4-[(3-氟吡啶-4-基)羰基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体40（1.42g,4.58mmol）和IBX（1.93g,6.88mmol）溶解于DCE（30mL）中并于65℃搅拌反应混合物16小时。冷却反应混合物并过滤，真空浓缩滤液，得到粗制标题化合物（1.96g），其为黄色液体。LCMS(ES⁺):209.1[MH-Boc]⁺。

中间体42

4-{1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基}哌啶-1-甲酸叔丁酯

将中间体41（1.42g,4.61mmol）和水合肼（407μl,8.31mmol）溶解于NMP（5mL）中并在微波反应器中在160℃加热反应混合物20分钟，并通过SCX和柱色谱纯化，得到标题化合物，其为橙色油状物（1.15g,83%）。LCMS(ES+):303.1[MH]⁺。

中间体43

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

利用中间体42代替中间体2，类似于中间体3来制备中间体43，得到标题化合物，其为棕色胶状物（1.02g,67%）。LCMS(ES⁺):413.0[MH]⁺。

中间体44

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶

将中间体43（1.02g,2.46mmol）溶解于DCM（50mL）中，并加入TFA（10mL）。搅拌反应混合物1小时，真空浓缩，并用SCX纯化，得到标题化合物，其为棕色油状物（696mg,90%）。LCMS(ES+):313.0[MH]⁺。

实施例1

2,2,2-三氟乙酸；2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}乙-1-胺

将中间体4（200mg,0.64mmol）溶解于DCM（5mL）中，并加入N-(2-氧基乙基)氨基甲酸叔丁酯（203μL,1.28mmol）。将反应混合物搅拌1小时，并加入NaBH(OAc)₃（340mg,1.60mmol）。将反应混合物搅拌18小时，并在1MNa₂CO₃水溶液（50mL)和DCM（50mL）之间分离。用DCM（2×50mL）萃取水相，干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，将其溶解于DCM（5mL）和TFA（1mL）中，并搅拌3小时。真空浓缩反应混合物，并将其溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过反相HPLC（TFA缓冲）纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（1.10mg,0.4%）。C₂₀H₂₃ClN₄的HRMS(ESI+)计算值355.1684,实测值355.1687。HPLC:Rf3.31分钟,纯度97%。

实施例2

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸3-氨基丙酯

将二(三氯甲基)碳酸酯（triphosgene）（119mg,0.40mmol）溶解于DCM（5mL）中并加入N-(3-羟基丙基)氨基甲酸叔丁酯（211mg,1.20mmol）和DIPEA（209μL,1.20mmol）在DCM（1mL）中的溶液中。将反应混合物搅拌3小时并加入中间体4（250mg,0.80mmol）和DIPEA（209μL,1.20mmol）在DCM（1mL）中的溶液。将反应混合物搅拌3天，用EtOAc（50mL）稀释，并用10%柠檬酸水溶液（50mL）和1MNa₂CO₃水溶液（50mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，将其溶解于DCM（20mL）和TFA（5mL）中，并搅拌2小时。真空浓缩反应混合物，将其溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。真空浓缩合并的有机组分并通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（52.0mg,16%）。C₂₂H₂₅ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值413.1739，实测值413.1739.HPLC:Rf3.96分钟,纯度98%。

实施例3

1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}-4-(二甲氨基)丁-1-酮；2,2,2-三氟乙酸

将中间体4（200mg,0.64mmol）、4-(二甲氨基)丁酸盐酸盐（140mg,0.83mmol）、HOBt（113mg,0.83mmol）和DIPEA（290μL,1.67mmol）溶解于DMF（5mL）中，并加入EDC（160mg,0.83mmol）。将反应混合物搅拌18小时并真空浓缩。将残余物溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱和反相HPLC（TFA缓冲）纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（37.0mg,11%）。C₂₄H₂₉ClN₄O的HRMS(ESI+)计算值425.2103,实测值425.2109.HPLC:Rf4.00分钟,纯度98%。

实施例4

5-氨基-1-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}戊-1-酮

将中间体4（200mg,0.64mmol）溶解于DMF（10mL）中，并加入5-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}戊酸（181mg,0.83mmol）、HOBt（113mg,0.83mmol）和EDC（160mg,0.83mmol）。将反应混合物搅拌3天并真空浓缩。将残余物溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物并溶解于DCM（10mL）和TFA（2mL）中，并搅拌2小时。真空浓缩反应混合物并将残余物溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（43.0mg,16%）。C₂₃H₂₇ClN₄O的HRMS(ESI⁺)计算值411.1946,实测值411.1947.HPLC:Rf3.84分钟,纯度99%。

实施例5

N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺

将CDI（125mg,0.77mmol）溶解于DCM（10mL）中，并加入N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁基酯（123mg,0.77mmol）和DIPEA（167μL,0.96mmol）的DCM（1mL）溶液。将反应混合物搅拌18小时，加入中间体4（200mg,0.64mmol）和DIPEA（167μL,0.96mmol）的DCM（1mL）溶液，并将反应混合物搅拌24小时。用EtOAc（50mL）稀释反应混合物，用10%柠檬酸水溶液（50mL）和1MNa₂CO₃（50mL）洗涤，干燥（MgSO₄）并真空浓缩。将残余物溶解于DCM（5mL）和TFA（1mL）中并搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩并通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（36.0mg,14%）。C₂₁H₂₄ClN₅O的HRMS(ESI+)计算值398.1742,实测值398.1745。HPLC:Rf3.71分钟,纯度99%。

实施例6

N-(3-氨基丙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酰胺

利用N-(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯代替N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯，类似于实施例5来制备实施例6（178mg,8%）。C₂₂H₂₆ClN₅O的HRMS(ESI+)计算值412.1899,实测值412.1902。HPLC:Rf3.82分钟，纯度100%。

实施例7

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]-N-[3-(二甲氨基)丙基]哌啶-1-甲酰胺

利用(3-氨基丙基)二甲基胺代替N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯（并且无脱保护步骤），类似于实施例5制备实施例7（99.0mg,23%）。C₂₄H₃₀ClN₅O的HRMS(ESI+)计算值440.2212，实测值440.2213。HPLC:Rf3.99分钟，纯度99.7%。

实施例8

1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)哌嗪

将二(三氯甲基)碳酸酯（triphosgene）（111mg,0.37mmol）溶解于DCM(10mL)中，并加入1-哌嗪甲酸叔丁酯（210mg,1.13mmol）和DIPEA（215μL,1.24mmol）的DCM（2mL）溶液。搅拌反应混合物18小时，并加入中间体4（351mg,1.13mmol）、DIPEA（215μL,1.24mmol）和DMAP（13.7mg,0.11mmol）的DCM（2mL）溶液。将反应混合物搅拌24小时，用1MNa₂CO₃水溶液稀释（50mL），并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过柱色谱纯化残余物，溶解于DCM（10mL）和TFA（2.5mL）中并搅拌1小时。真空除去溶剂并将残余物溶解于1MNa₂CO₃水溶液（50mL）中，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物，其为白色固体（54.0mg,11%）。C₂₃H₂₆ClN₅O的HRMS(ESI+)计算值424.1899,实测值424.19。HPLC:Rf3.93分钟,纯度100%。

实施例9

4-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)吗啉

将中间体4（300mg,0.96mmol）、DIPEA（184μL,1.06mmol）和DMAP（11.7mg,0.10mmol）溶解于DCM（10mL）中，并加入4-吗啉甲酰氯（158mg,1.06mmol）。将反应混合物搅拌18小时，用1MNa₂CO₃水溶液（50mL）稀释，并用DCM（3×50mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物，其为白色固体（252mg,62%）。C₂₃H₂₅ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值425.1739,实测值425.1742。HPLC:Rf4.79分钟,纯度96%。

实施例10

1-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}羰基)-1,4-二氮杂环庚烷

利用1,4-二氮杂环庚-1-甲酸叔丁酯代替1-哌嗪甲酸叔丁酯，类似于实施例8来制备实施例10（70.0mg,20%）。C₂₄H₂₈ClN₅O的HRMS(ESI+)计算值438.2055,实测值438.2056.HPLC:Rf3.94分钟，纯度100%。

实施例11

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯

将中间体13（3.49g,12.7mmol）、4-氯苯基硼酸（3.98g,25.5mmol）、Cu(OAc)₂（4.63g,25.5mmol）和吡啶（5.13mL,63.7mmol）悬浮于DCE（88mL）中并搅拌过夜。通过柱色谱纯化反应混合物，得到标题化合物，其为灰白色固体（619mg,13%）。C₂₀H₂₁ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值385.1426,实测值385.143.HPLC:Rf6.13分钟，纯度98.9%。

实施例12

1-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯

利用4-甲基甲基苯硼酸代替4-氯苯基硼酸，类似于实施例11来制备实施例12，得到标题化合物，其为白色固体（74.0mg,56%）。C₂₁H₂₄N₄O₂的HRMS(ESI+)计算值365.1972,实测值365.1975。HPLC:Rf5.87分钟,纯度99.1%。

实施例13

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸盐酸盐

将实施例11（834mg,2.17mmol）溶解于1:1THF/水（16mL）中，加入LiOH.H₂O（200mg,4.77mmol），并将反应混合物搅拌3小时。真空除去THF并用1MHCl水溶液（5mL）将反应混合物酸化至pH1。通过过滤收集沉淀物并用水洗涤，得到标题化合物，其为橙色固体（450mg,53%）。C₁₈H₁₇ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值357.1113,实测值357.1112。HPLC:Rf4.92分钟,纯度99.6%。

实施例14

N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酰胺二盐酸盐

将实施例13（200mg,0.51mmol）溶解于DMF（2mL）中，加入HBTU（231mg,0.61mmol）并将反应混合物搅拌30分钟。加入N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯（97.8mg,0.61mmol）和DIPEA（266mL,1.53mmol），并搅拌反应混合物过夜。真空浓缩反应混合物并从EtOAc（25mL）和MeOH（10mL）碾磨（triturate）两次。将残余物溶解于1.25MHCl的EtOH溶液（5mL）中，搅拌20小时并真空浓缩，得到标题化合物，其为橙色固体（50.1mg,95%）。C₂₀H₂₃ClN₆O的HRMS(ESI+)计算值399.1695,实测值399.1694。HPLC:Rf3.96分钟,纯度99.8%。

实施例15

4-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-基}羰基)吗啉

利用吗啉代替N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯（并且无脱保护步骤），类似于实施例14来制备实施例15，得到标题化合物，其为浅黄色固体（78.7mg,36%）。C₂₂H₂₄ClN₅O₂的HRMS(ESI+)计算值426.1691,实测值426.1691.HPLC:Rf4.96分钟,纯度100%。

实施例16

1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-基}羰基)哌嗪二盐酸盐

利用1-哌嗪甲酸叔丁酯代替N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯，类似于实施例14来制备实施例16，得到标题化合物，其为橙色固体（122mg,96%）。C₂₂H₂₅ClN₆O的HRMS(ESI+)计算值425.1851,实测值425.1846。HPLC:Rf3.98分钟,纯度98.8%。

实施例17

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}甲醇

将中间体21（50.0mg,0.14mmol）溶解于MeOH（1mL）中，并加入K₂CO₃（75.4mg,0.55mmol），并将反应混合物搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物并将残余物在DCM（10mL）和水（5mL）之间分离。用DCM（3×10mL）萃取水相组分，干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩，得到标题化合物，其为黄色胶状物（40.0mg,90%）。LCMS(ES⁺):325.1[MH]⁺。HPLC:Rf4.36分钟,纯度94.9%。

实施例18

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-2-基}甲醇

利用中间体22代替中间体21，类似于实施例17来制备实施例18，得到标题化合物，其为橙色胶状物（3.74mg,36%）。C₁₈H₂₀N₄O₂的HRMS(ESI+)计算值325.1659,实测值325.1663。HPLC:Rf4.29分钟,纯度98.8%。

实施例19

[(3R)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基]甲醇

利用中间体15代替中间体13，类似于实施例11来制备实施例19，得到标题化合物，其为深黄色胶状物（11.6mg）。HRMS(ESI⁺)计算值C₁₇H₁₇ClN₄O₂345.1113,实测值345.1117。HPLC:Rf4.58分钟,纯度100%。

实施例20

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸甲酯

利用中间体18代替中间体13，类似于实施例11来制备实施例20，得到标题化合物，其为深黄色固体（552mg,20%）。C₁₈H₁₇ClN₄O₃的HRMS(ESI+)计算值373.1062,实测值373.1065.HPLC:Rf5.23分钟,纯度98.0%。

实施例21

N-(2-氨基乙基)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酰胺

将中间体25（70.0mg,0.18mmol）溶解于DMF（1.1mL）中，冷却至0℃，并加入HBTU（67.2mg,0.18mmol）、N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯（34.1mg,0.21mmol）和DIPEA（30.9μL,0.18mmol）。于0℃搅拌反应混合物2.5小时，并通过柱色谱纯化。将残余物溶解于1.25MHCl的EtOH溶液（1.00mL）中，并搅拌2小时。真空浓缩反应混合物，并通过柱色谱纯化，得到标题化合物，其为浅黄色固体（3.09mg,4%）。C₁₉H₂₁ClN₆O₂的HRMS(ESI+)计算值401.1487,实测值401.149。HPLC:Rf3.83分钟,纯度100%。

实施例22

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}乙-1-醇

将中间体24（50.0mg,0.13mmol）溶解于DCM（1mL）中，冷却至0℃，并逐滴加入DIBALH（0.47mL,1.0M在庚烷中,0.47mmol）。将反应混合物搅拌48小时，冷却至0℃并用NaHCO₃饱和水溶液（1mL）终止反应。用DCM（5×20mL）萃取反应混合物，干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过反相色谱纯化残余物，得到标题化合物，其为浅黄色固体（13.9mg,30%）。C₁₈H₁₉ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值359.1269,实测值359.1274。HPLC:Rf4.72分钟，纯度99.5%。

实施例23

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酸甲酯

利用中间体20代替中间体13，类似于实施例11来制备实施例23，得到标题化合物，其为深黄色固体（260mg,28%）。C₁₉H₁₉ClN₄O₂的HRMS(ESI+)计算值371.1269,实测值371.1273。HPLC:Rf5.91分钟,纯度99.3%。

实施例24

N-(2-氨基乙基)-1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酰胺二盐酸盐

利用中间体26代替中间体25，类似于实施例21来制备实施例24，得到标题化合物，其为橙色固体（22.5mg,28%）。LCMS(ES+):399.0[MH]⁺。HPLC:Rf4.10分钟,纯度98.5%。

实施例25

1-({1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-基}羰基)哌嗪

利用1-哌嗪甲酸叔丁酯代替N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁基酯，类似于实施例24来制备实施例25，得到标题化合物，其为黄色固体（10.3mg,14%）。LCMS(ES+):424.9[MH]⁺。HPLC:Rf3.91分钟,纯度99.5%。

实施例26

4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]吗啉

中间体31（81.0mg,0.40mmol）、4-碘甲苯（104mg,0.48mmol）、N,N'-二甲基亚乙基二胺（8.58μL,0.08mmol）和K₃PO₄（178mg,0.84mmol）悬浮于DMF（1mL）中并加入CuI（7.60mg,0.04mmol）。在微波反应器中在170℃加热反应混合物1小时并真空浓缩。用MeOH（15mL）稀释残余物，过滤，真空浓缩，并通过反相HPLC和正相柱色谱纯化，得到标题化合物，其为深黄色胶状物（2.00mg,2%）。C₁₈H₁₉N₃O的HRMS(ESI+)计算值294.1601,实测值294.1604。HPLC:Rf4.43分钟，纯度100%。

实施例27

1-(4-氯苯基)-3-(哌啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-醇

将中间体36（130mg,0.29mmol）溶解于DCM（10mL）中，加入BBr₃（84μL,0.88mmol）并将反应混合物搅拌3小时，用1MNaOH水溶液（1mL）终止反应并搅拌1小时。NaHCO₃饱和水溶液（25mL）稀释反应混合物并用DCM（3×25mL）萃取。用AcOH将水相组分酸化至pH9，并用EtOAc（2×25mL）萃取。干燥（MgSO₄）合并的有机组分并真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物，其为无色胶状物（8.40mg,9%）。C₁₈H₁₈ClN₃O的HRMS(ESI+)计算值328.1211,实测值328.1216。HPLC:Rf3.70分钟,纯度89%。

实施例28

N-丁基-1-(4-氯苯基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺

利用中间体17代替中间体31，并利用1-氯-4-碘甲苯代替4-碘甲苯，类似于实施例26来制备实施例28，得到标题化合物，其为黄色胶状物（212mg,22%）。C₁₇H₁₉ClN₄的HRMS(ESI+)计算值315.1371,实测值315.1375.HPLC:Rf6.54分钟,纯度100%。

实施例29

1-[4-(氟甲基)苯基]-3-(噁烷-4-基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶

利用中间体39代替中间体31，并利用1-溴-4-氟甲基苯代替4-碘甲苯，类似于实施例26来制备实施例29，得到标题化合物，其为黄色胶状物（36.6mg,7%）。C₁₈H₁₈FN₃O的HRMS(ESI+)计算值312.1507,实测值312.151.HPLC:Rf4.84分钟,纯度99.2%。

实施例30

3-({4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}甲基)吡啶

将中间体44（232mg,0.74mmol）溶解于DCM（25mL），并加入3-吡啶甲醛（167μl,1.78mmol)、AcOH（44.6μL,0.78mmol）和NaBH(OAc)₃（472mg,2.23mmol）。将反应混合物搅拌18小时，用DCM（50mL）稀释，并用水（20mL）终止反应。用Na₂CO₃饱和水溶液（20mL）洗涤有机组分，干燥（MgSO₄）并真空浓缩。通过反相HPLC纯化残余物，得到标题化合物，其为棕色胶状物（63.7mg,21%）。C₂₃H₂₂ClN₅的HRMS(ESI+)计算值404.1636,实测值404.1639.HPLC:Rf4.63分钟,纯度98.3%。

生物学试验

SSAO酶抑制剂的生物学测定

所有的初步测定在室温下利用纯化的重组表达人SSAO进行。基本如等人（ProteinExpressionandPurification46(2006)321–331）所述来制备酶。另外，利用由多种组织制备的SSAO或纯化的大鼠重组SSAO进行次级测定和选择性测定。用苯胺作为底物，通过利用¹⁴C-标记的底物测量苯甲醛的产生，或者通过利用辣根过氧化物酶（IIRP）偶合反应中过氧化氢的产生来测定酶活性。简言之，将试验化合物溶解于二甲亚砜（DMSO）至浓度为10mM。通过用DMSO制备1:10系列稀释液以产生7个点的曲线或通过用DMSO制备1:3系列稀释液以产生11个点的曲线来测定剂量响应测量值。根据化合物及其在反应缓冲液中的稀释液的效力调整最高浓度以使得最终DMSO浓度≤2%。

过氧化氢检测：

在辣根过氧化物酶（HRP）偶合反应中，过氧化氢氧化10-乙酰基-3,7-二羟基吩噁嗪产生试卤灵（resorufin），其是一种高度荧光发光的化合物（ZhoutandPanchuk-Voloshina.AnalyticalBiochemistry253(1997)169-174;RedHydrogenPeroxide/peroxidaseAssaykit,InvitrogenA22188）。将pH7.4、于50mM磷酸钠中的酶和化合物放置在平底微量滴定板中预培养大约15分钟，之后通过加入HRP、苯甲胺和Amplex试剂的混合物引发反应。将苯甲胺浓度固定为对应于米氏常数的浓度，利用标准程序来确定该浓度。然后在1-2小时内的多个时间点测量荧光强度，在544nm处激发并在590nm处显示发射。对于人SSAO测定，测定孔中的试剂的最终浓度为：SSAO酶1μg/ml、苯胺100μM、Amplex试剂20μM、HRP0.1U/mL以及不同浓度的测试化合物。抑制被测量为与无抑制剂对照（仅稀释的DMSO）相比的信号下降%。所有数据点都扣除来自不含SSAO酶的样品的背景信号。将数据拟合为四参数逻辑模型并利用GraphPadPrism4或XLfit4程序计算IC₅₀值。

醛检测：

利用¹⁴C-标记的苯甲胺测定SSAO活性并通过测量放射性苯甲醛进行分析。在96孔白板optiplate（Packard）中在室温下边连续搅拌边将20μL稀释的测试化合物与20μLSSAO酶一起预培养大约15分钟。用PBS完成所有的稀释。通过加入含有[^7-14C]苯胺盐酸盐（CFA589,GEHealthcare）的苯胺底物溶液引发反应。如上所述培养板1小时，之后通过酸化（10μL1MHCl）停止反应。然后向每个孔中加入90μLMicroScint-E溶液（Perkin-Elmer）并将板连续混合15分钟。立即发生相分离并在Topcount闪烁计数器（Perkin-Elmer）上读取活性。在最终反应孔中，人重组SSAO浓度为10μg/ml。为了优化灵敏度，与HPR偶合测定相比降低了底物浓度，以获得较高比例的放射性产物。在人SSAO测定中，苯胺浓度为40μM（0.2μCi/mL）。如上所述分析数据。

在SSAO情形下，本发明的所有示例性化合物具有的IC₅₀值为1-2500nM（参见表4）。

表4:SSAO抑制活性

（A:<100nM,B:100-500nM,C:500-2500nM）

化合物	IC₅₀(nM)	化合物	IC₅₀(nM)	化合物	IC₅₀(nM)
						1	A	11	C	21	A
2	A	12	B	22	A
						3	A	13	B	23	C
4	A	14	B	24	A
						5	A	15	C	25	A
6	A	16	B	26	B
						7	A	17	A	27	A
8	A	18	A	28	C
						9	B	19	A	29	B
10	A	20	B	30	B

Claims

1.一种化合物，及其可药用盐，所述化合物选自：

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-基}乙-1-胺；

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]哌啶-1-甲酸-3-氨基丙酯；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；

1-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸乙酯；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-4-甲酸；

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}甲醇；

{4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-2-基}甲醇；

[(3R)-4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基]甲醇；

4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-甲酸甲酯；

2-{4-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]吗啉-3-基}乙-1-醇；

1-[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-基]哌啶-2-甲酸甲酯；

4-[1-(4-甲基苯基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基]吗啉；

1-(4-氯苯基)-3-(哌啶-4-基)-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-醇；

N-丁基-1-(4-氯苯基)-N-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺；

1-[4-(氟甲基)苯基]-3-(噁烷-4-基)-1H-吡唑并[3,4-c]吡啶；

2.一种药物组合物，包含如权利要求1所述的化合物，以及一种或多种可药用载体和/或赋形剂。

3.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗炎性疾病、免疫性疾病、或者抑制肿瘤生长的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述炎性疾病或免疫性疾病为关节炎、滑膜炎、脉管炎、与肠的炎症有关的病症、动脉粥样硬化、多发性硬化症、阿尔茨海默病、血管性痴呆、炎症性肺部疾病、纤维化疾病、皮肤炎性疾病、全身炎症反应综合征、败血症、肝脏的炎性病症、I型或II型糖尿病和/或其并发症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、缺血性疾病或心肌梗塞和/或其并发症。

5.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗炎症的药物中的应用。

6.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗自身免疫性疾病的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其中所述自身免疫病症是肝脏的自身免疫病症。

8.根据权利要求7所述的应用，其中所述肝脏的自身免疫病症是自身免疫性胆管炎或自身免疫性肝炎。

9.根据权利要求4所述的应用，其中，所述炎性疾病为类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺病或特应性皮炎。

10.根据权利要求4所述的应用，其中，所述关节炎是类风湿性关节炎、骨关节炎或牛皮癣性关节炎。

11.根据权利要求4所述的应用，其中，所述与肠的炎症有关的病症是克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病或肠易激综合征。

12.根据权利要求4所述的应用，其中，所述炎症性肺部疾病是哮喘、慢性阻塞性肺病或急性呼吸窘迫综合征。

13.根据权利要求4所述的应用，其中，所述纤维化疾病是特发性肺纤维化、心肌纤维化或还称为硬皮病的系统性硬化症。

14.根据权利要求4所述的应用，其中，所述皮肤炎性疾病是接触性皮炎、特应性皮炎或牛皮癣。

15.根据权利要求4所述的应用，其中，所述肝脏的炎性病症是原发性胆汁性肝硬化、酒精性肝病、或硬化性胆管炎。

16.根据权利要求4所述的应用，其中，所述缺血性疾病是中风或缺血性再灌注损伤。

17.根据权利要求3所述的应用，用于抑制肿瘤生长。

18.根据权利要求10所述的应用，其中，所述类风湿性关节炎是幼年类风湿性关节炎。