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CN114158267A - 包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法 - Google Patents

包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法 Download PDF

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CN114158267A
CN114158267A CN202080047610.0A CN202080047610A CN114158267A CN 114158267 A CN114158267 A CN 114158267A CN 202080047610 A CN202080047610 A CN 202080047610A CN 114158267 A CN114158267 A CN 114158267A
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CN
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reagent
protease
ferrocyanide
stabilizer
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CN202080047610.0A
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本庄晓子
植田祐生
今野翔太
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Nagase Diagnostics Co ltd
Original Assignee
Asahi Kasei Pharma Corp
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Publication date
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Abstract

本发明提供一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4‑氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4‑氨基安替比林包含在含有4‑氨基安替比林的部分组合物中，蛋白酶的稳定剂是使亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。

Description

包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的 糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测 定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法
技术领域
本发明涉及临床检查药，涉及糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法。
背景技术
为了进行糖尿病的诊断和管理，糖化蛋白质的测定是重要的，对于反映过去约1～2个月的平均血糖值的糖化血红蛋白(HbA1c等)、反映过去约2周的平均血糖值的糖化白蛋白(GA)以及作为血清中的糖化蛋白质的总称的果糖胺(FRA)等进行日常测定。
作为高精度、低成本、简便地测定糖化蛋白质的方法，可以举出酶法。例如专利文献1、2、3中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化蛋白质，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶而生成过氧化氢，进一步使用过氧化酶、Trinder’s试剂、4-氨基安替比林进行比色定量，由此可以测定血清中的糖化蛋白质。专利文献4中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化蛋白质，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶，利用显色反应或氧电极测定此时的氧消耗量，由此可以测定血清中的糖化蛋白质。专利文献5、6中记载了以下内容：使蛋白酶作用于糖化血红蛋白或糖化白蛋白，使用作用于所生成的糖化氨基酸或糖化肽的酮胺氧化酶而生成过氧化氢，进一步使用过氧化酶、Trinder’s试剂以及4-氨基安替比林进行比色定量，由此可以测定糖化血红蛋白、糖化白蛋白。
为了改善试剂的稳定性，这些糖化蛋白质测定试剂中包含蛋白酶稳定剂。例如，专利文献6中公开了将二甲基亚砜、醇、水溶性钙盐、食盐、季铵盐、或者季铵盐型阳离子表面活性剂作为蛋白酶稳定剂。另外，尽管未提及测定试剂，但专利文献7中记载了通过含有硼酸、有机硼酸、苯基硼酸作为蛋白酶抑制剂，能够改善液体洗剂中的蛋白酶的储藏稳定性。专利文献8中记载了，为了使油包水乳液中的作为酶的蛋白酶稳定，多元醇是有效的。专利文献9、10中记载了液体洗剂组合物中的肽醛、钙离子、硼组合物、多元醇以及盐酸苯并脒可以作为蛋白酶的稳定剂使用。
另一方面，在使用Trinder’s试剂以及4-氨基安替比林等色素对过氧化氢进行比色定量的试剂中，根据试剂中或被测物中的测定成分以外的成分，Trinder’s试剂和4-氨基安替比林可能发生非特异性的缩合显色，该显色被称为试剂空白。若该试剂空白大，则试剂空白(噪声)相对于被测物中的测定成分(信号)的比例增大，成为测定误差的原因，因此优选试剂空白低。例如专利文献11中记载了下述方法：在糖化蛋白质测定试剂中，使蛋白酶含有试剂中共存有过氧化氢酶而消除试剂中的过氧化物，由此抑制试剂空白。专利文献12中记载了，可以通过在包含亚铁氰化物以及Trinder’s试剂等供氢体的试剂中混配两性表面活性剂来抑制试剂空白。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开平6-46846号公报
专利文献2：日本特开平5-192193号公报
专利文献3：国际公开第96/34977号
专利文献4：日本特开平2-195900号公报
专利文献5：国际公开第1997/13872号
专利文献6：国际公开第2002/061119号
专利文献7：国际公开第1996/041859号
专利文献8：国际公开第1995/028092号
专利文献9：国际公开第98/13462号
专利文献10：国际公开第98/13459号
专利文献11：日本特开2004-49063号公报
专利文献12：日本特开2006-10711号公报
发明内容
发明所要解决的课题
如上所述，提出了各种试剂空白抑制方法的提案，但尚未公开在包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物的糖化蛋白质测定试剂中充分抑制试剂空白的方法。因此，本发明的课题的一部分在于提供抑制了试剂空白的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法。
用于解决课题的手段
根据本发明人的认知，在为了防止由胆红素等还原性物质所带来的测定误差而在糖化蛋白质测定试剂中包含亚铁氰化物时，试剂中的亚铁氰化物在保存中会被氧化成铁氰化物，可能成为试剂空白的原因。本发明人针对此进行了深入研究，结果发现，在包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物的试剂中，通过使用将蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后使亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂，能够显著抑制试剂空白，从而完成了本发明。
[1]一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，
至少上述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少上述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[2]如[1]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少一者进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[3]如[2]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[4]如[1]至[3]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
[5]如[1]至[4]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少一者包含上述亚铁氰化物。
[6]如[2]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[7]如[1]至[3]和[6]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
[8]如[6]或[7]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少一者包含上述亚铁氰化物。
[9]如[1]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物。
[10]如[1]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[11]如[1]至[10]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[12]如[1]至[5]和[9]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[13]如[1]、[2]、[6]至[10]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[14]如[1]至[13]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含螯合剂。
[15]如[14]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[16]如[14]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[17]如[14]至[16]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[18]如[17]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[19]如[17]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[20]如[17]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[21]如[17]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[22]一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，
至少上述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少上述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
至少上述亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中，
上述蛋白酶的稳定剂是使上述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[23]如[22]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[24]如[23]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[25]如[22]至[24]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
[26]如[23]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[27]如[22]至[24]以及[26]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
[28]如[23]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[29]如[22]至[28]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[30]如[22]、[23]和[26]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[31]如[22]至[25]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[32]如[22]、[23]和[28]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[33]如[22]至[32]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或上述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含螯合剂。
[34]如[33]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[35]如[33]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[36]如[33]至[35]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[37]如[36]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[38]如[36]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[39]如[36]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[40]如[36]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[41]如[1]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系进一步包含N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸以及氯化钠。
[42]如[1]至[41]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位是使用银/氯化银电极作为参比电极而测定出的氧化还原电位。
[43]如[1]至[42]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。
[44]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.070V以上。
[45]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.084V以上。
[46]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.112V以上。
[47]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.300V以下。
[48]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.250V以下。
[49]如[43]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述氧化还原电位为0.235V以下。
[50]如[1]至[49]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述蛋白酶的稳定剂选自由1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。
[51]如[1]至[49]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇。
[52]如[50]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述羧基苯基硼酸为2-羧基苯基硼酸。
[53]如[1]至[51]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[54]如[53]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[55]如[53]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[56]如[53]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[57]如[53]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[58]如[22]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[59]如[58]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[60]如[58]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[61]如[58]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[62]如[58]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[63]如[1]至[50]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[64]如[63]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[65]如[63]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[66]如[63]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[67]如[63]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[68]如[22]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[69]如[68]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[70]如[68]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[71]如[68]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[72]如[68]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[73]如[1]至[50]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[74]如[73]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[75]如[73]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[76]如[73]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[77]如[73]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[78]如[22]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[79]如[78]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[80]如[78]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[81]如[78]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[82]如[78]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[83]如[1]至[50]和[52]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[84]如[83]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[85]如[83]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[86]如[83]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[87]如[83]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[88]如[22]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[89]如[88]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[90]如[88]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[91]如[88]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[92]如[88]中所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[93]如[1]至[92]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物为液态。
[94]如[22]至[40]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物为液态。
[95]如[1]至[94]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述亚铁氰化物为亚铁氰化钾。
[96]如[1]至[95]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述Trinder’s试剂为N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺。
[97]如[1]至[96]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述糖化蛋白质为糖化白蛋白。
[98]如[1]至[97]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其在2℃以上10℃以下进行保存。
[99]如[1]至[98]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述蛋白酶的稳定剂不包括二甲基亚砜。
[100]如[1]至[99]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含过氧化酶。
[101]
一种糖化蛋白质的测定方法，其包括：
使Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物与被测物接触的步骤；以及
对依赖于被测物中所存在的糖化蛋白质的显色进行检测的步骤，
至少在上述接触之前使上述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少在上述接触之前使上述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含上述亚铁氰化物，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[102]如[101]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[103]如[101]或[102]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[104]如[101]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[105]如[101]、[102]和[104]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[106]如[101]中所述的糖化蛋白质测定试剂的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[107]如[101]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[108]如[101]至[107]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[109]如[101]至[103]和[106]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[110]如[101]、[104]、[106]和[107]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[111]如[101]至[110]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含螯合剂。
[112]如[111]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[113]如[111]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[114]如[111]至[113]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[115]如[114]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[116]如[114]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[117]如[114]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[118]如[114]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[119]
一种糖化蛋白质的测定方法，其包括：
使Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物与被测物接触的步骤；以及
对依赖于被测物中所存在的糖化蛋白质的显色进行检测的步骤，
至少在上述接触之前使上述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少在上述接触之前使上述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
至少在上述接触之前使上述亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[120]如[119]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[121]如[119]或[120]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[122]如[119]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[123]如[119]、[120]和[122]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[124]如[119]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[125]如[119]至[124]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[126]如[119]或[122]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[127]如[119]至[121]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[128]如[119]或[124]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[129]如[119]至[128]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或上述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含螯合剂。
[130]如[129]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[131]如[129]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[132]如[129]至[131]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[133]如[132]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[134]如[132]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[135]如[132]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[136]如[132]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[137]如[101]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系进一步包含N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸以及氯化钠。
[138]如[101]至[137]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位是使用银/氯化银电极作为参比电极而测定出的氧化还原电位。
[139]如[101]至[138]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。
[140]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.070V以上。
[141]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.084V以上。
[142]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.112V以上。
[143]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.300V以下。
[144]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.250V以下。
[145]如[139]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述氧化还原电位为0.235V以下。
[146]如[101]至[145]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂选自由1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。
[147]如[101]至[145]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇。
[148]如[146]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述羧基苯基硼酸为2-羧基苯基硼酸。
[149]如[101]至[147]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[150]如[149]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[151]如[149]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[152]如[149]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[153]如[149]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[154]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[155]如[154]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[156]如[154]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[157]如[154]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[158]如[154]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[159]如[101]至[146]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[160]如[159]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[161]如[159]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[162]如[159]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[163]如[159]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[164]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[165]如[164]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[166]如[164]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[167]如[164]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[168]如[164]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[169]如[101]至[146]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[170]如[169]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[171]如[169]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[172]如[169]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[173]如[169]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[174]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[175]如[174]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[176]如[174]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[177]如[174]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[178]如[174]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[179]如[101]至[146]和[148]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[180]如[179]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[181]如[179]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[182]如[179]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[183]如[179]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[184]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[185]如[184]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[186]如[184]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[187]如[184]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[188]如[184]中所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[189]如[101]至[188]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物为液态。
[190]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物为液态。
[191]如[101]至[190]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述亚铁氰化物为亚铁氰化钾。
[192]如[101]至[191]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述Trinder’s试剂为N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺。
[193]如[101]至[192]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述糖化蛋白质为糖化白蛋白。
[194]如[101]至[193]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[195]如[101]至[194]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[196]如[119]至[136]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[197]如[101]至[196]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂不包括二甲基亚砜。
[198]如[101]至[197]中任一项所述的糖化蛋白质的测定方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含过氧化酶。
[199]
一种糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
保存上述含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；以及
保存上述含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含亚铁氰化物，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[200]如[199]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[201]如[199]或[200]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[202]如[199]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[203]如[199]、[200]以及[202]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[204]如[199]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[205]如[199]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[206]如[199]至[205]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[207]如[199]至[201]和[204]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[208]如[199]、[202]、[204]和[205]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[209]如[199]至[208]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含螯合剂。
[210]如[209]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[211]如[209]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[212]如[209]至[211]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[213]如[212]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[214]如[212]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[215]如[212]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[216]如[212]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[217]
一种糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
保存上述含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；
保存上述含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；
制备至少包含亚铁氰化物的含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤；以及
欧存上述含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[218]如[217]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[219]如[217]或[218]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[220]如[217]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[221]如[217]、[218]以及[220]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含糖化氨基酸氧化酶。
[222]如[217]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[223]如[217]至[222]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[224]如[217]至[219]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[225]如[217]或[220]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[226]如[217]或[222]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[227]如[217]至[226]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或上述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含螯合剂。
[228]如[227]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[229]如[227]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[230]如[227]至[229]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[231]如[230]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[232]如[230]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[233]如[230]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[234]如[230]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[235]如[199]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系进一步包含N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸以及氯化钠。
[236]如[199]至[235]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位是使用银/氯化银电极作为参比电极而测定出的氧化还原电位。
[237]如[199]至[236]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。
[238]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.070V以上。
[239]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.084V以上。
[240]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.112V以上。
[241]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.300V以下。
[242]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.250V以下。
[243]如[237]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述氧化还原电位为0.235V以下。
[244]如[199]至[243]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂选自由1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。
[245]如[199]至[243]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇。
[246]如[244]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述羧基苯基硼酸为2-羧基苯基硼酸。
[247]如[199]至[245]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[248]如[247]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[249]如[247]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[250]如[247]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[251]如[247]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[252]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[253]如[252]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[254]如[252]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[255]如[252]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[256]如[252]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[257]如[199]至[244]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[258]如[257]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[259]如[257]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[260]如[257]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[261]如[257]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[262]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[263]如[262]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[264]如[262]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[265]如[262]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[266]如[262]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[267]如[199]至[244]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[268]如[267]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[269]如[267]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[270]如[267]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[271]如[267]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[272]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[273]如[272]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[274]如[272]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[275]如[272]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[276]如[272]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[277]如[199]至[244]和[246]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[278]如[277]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[279]如[277]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[280]如[277]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[281]如[277]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[282]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[283]如[282]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[284]如[282]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[285]如[282]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[286]如[282]中所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[287]如[199]至[286]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物为液态。
[288]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物为液态。
[289]如[199]至[288]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述亚铁氰化物为亚铁氰化钾。
[290]如[199]至[289]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述Trinder’s试剂为N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺。
[291]如[199]至[290]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述糖化蛋白质为糖化白蛋白。
[292]如[199]至[291]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[293]如[199]至[292]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[294]如[217]至[234]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[295]如[199]至[294]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂不包括二甲基亚砜。
[296]如[199]至[295]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含过氧化酶。
[297]
一种糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；以及
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含亚铁氰化物，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[298]如[297]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[299]如[297]或[298]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含糖化氨基酸氧化酶。
[300]如[297]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[301]如[297]、[298]以及[300]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含糖化氨基酸氧化酶。
[302]如[297]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者中包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[303]如[297]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含上述蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及上述亚铁氰化物。
[304]如[297]至[303]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[305]如[297]至[299]和[302]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[306]如[297]、[300]、[302]和[303]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[307]如[297]至[306]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中进一步包含螯合剂。
[308]如[307]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[309]如[307]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[310]如[307]至[309]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[311]如[310]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[312]如[310]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[313]如[310]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[314]如[310]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[315]
一种糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；以及
制备至少包含亚铁氰化物的含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤，
上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂，
上述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
上述氧化还原电位是包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
[316]如[315]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[317]如[315]或[316]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含糖化氨基酸氧化酶。
[318]如[315]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[319]如[315]、[316]以及[318]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含糖化氨基酸氧化酶。
[320]如[315]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中包含上述蛋白酶和上述蛋白酶的稳定剂。
[321]如[315]至[320]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述蛋白酶的稳定剂与上述亚铁氰化物混合后的上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[322]如[315]至[317]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[323]如[315]和[318]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物与上述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[324]如[315]和[320]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述蛋白酶的稳定剂的浓度为使上述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
[325]如[315]至[324]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或上述含有亚铁氰化物的部分组合物中进一步包含螯合剂。
[326]如[325]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂选自由乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸及其盐组成的组。
[327]如[325]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂为柠檬酸或其盐。
[328]如[325]至[327]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为5μmol/L以上1000mmol/L以下。
[329]如[328]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为10μmol/L以上。
[330]如[328]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为50μmol/L以上。
[331]如[328]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为100mmol/L以下。
[332]如[328]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述螯合剂的浓度为25mmol/L以下。
[333]如[297]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，包含上述蛋白酶的稳定剂和上述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系进一步包含N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸以及氯化钠。
[334]如[297]至[333]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位是使用银/氯化银电极作为参比电极而测定出的氧化还原电位。
[335]如[297]至[334]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。
[336]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.070V以上。
[337]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.084V以上。
[338]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.112V以上。
[339]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.300V以下。
[340]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.250V以下。
[341]如[335]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述氧化还原电位为0.235V以下。
[342]如[297]至[341]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂选自由1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。
[343]如[297]至[341]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇。
[344]如[342]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述羧基苯基硼酸为2-羧基苯基硼酸。
[345]如[297]至[343]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[346]如[345]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[347]如[345]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[348]如[345]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[349]如[345]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[350]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[351]如[350]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为20wt/vоl％以上。
[352]如[350]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为25wt/vоl％以上。
[353]如[350]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为62.5wt/vоl％以下。
[354]如[350]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述1,2-丙二醇的浓度为60wt/vоl％以下。
[355]如[297]至[342]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[356]如[355]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[357]如[355]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[358]如[355]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[359]如[355]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[360]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[361]如[360]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[362]如[360]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[363]如[360]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[364]如[360]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述三亚甲基二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[365]如[297]至[342]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[366]如[365]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[367]如[365]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[368]如[365]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[369]如[365]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[370]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
[371]如[370]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为42.5wt/vоl％以上。
[372]如[370]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为45wt/vоl％以上。
[373]如[370]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为75wt/vоl％以下。
[374]如[370]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述乙二醇的浓度为70wt/vоl％以下。
[375]如[297]至[342]和[344]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[376]如[375]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[377]如[375]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[378]如[375]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[379]如[375]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物或上述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[380]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物包含上述蛋白酶的稳定剂，上述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
[381]如[380]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.45wt/vоl％以上。
[382]如[380]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.5wt/vоl％以上。
[383]如[380]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为7.5wt/vоl％以下。
[384]如[380]中所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物中的上述2-羧基苯基硼酸的浓度为5wt/vоl％以下。
[385]如[297]至[384]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物为液态。
[386]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物、上述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及上述含有亚铁氰化物的部分组合物为液态。
[387]如[297]至[386]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述亚铁氰化物为亚铁氰化钾。
[388]如[297]至[387]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述Trinder’s试剂为N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺。
[389]如[297]至[388]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述糖化蛋白质为糖化白蛋白。
[390]如[297]至[389]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[391]如[297]至[390]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有4-氨基安替比林的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[392]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有亚铁氰化物的部分组合物在2℃以上10℃以下进行保存。
[393]如[297]至[392]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述蛋白酶的稳定剂不包括二甲基亚砜。
[394]如[297]至[393]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，上述含有Trinder’s试剂的部分组合物和上述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含过氧化酶。
[395]如[297]至[394]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，将含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物在5℃保存1年后的测定灵敏度相对于将含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物在5℃保存28天后的测定灵敏度的比例为80％以上110％以下。
[396]如[315]至[332]中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其中，将含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物在5℃保存1年后的测定灵敏度相对于将含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物在5℃保存28天后的测定灵敏度的比例为80％以上110％以下。
发明的效果
根据本发明，能够提供抑制了试剂空白升高的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法。
附图说明
图1是示出将实施例2的部分组合物保存14天后的试剂空白与亚铁氰化物的氧化还原电位的关系的图。
图2是示出实施例4的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的pH以及添加到含有亚铁氰化物的液态部分组合物中的螯合剂与试剂空白的关系的图。
图3是示出将实施例7的部分组合物保存1年后的试剂空白与亚铁氰化物的氧化还原电位的关系的图。
图4是示出实施例9的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的pH以及添加到含有亚铁氰化物的液态部分组合物中的螯合剂与试剂空白的关系的图。
具体实施方式
以下对本发明的适当的实施方式(下文中称为“实施方式”)进行详细说明。另外，以下所示的实施方式例示出了用于具体实现本发明的技术思想的装置和方法，本发明的技术思想并非将构成部件的组合等限定于下述方式。本发明的技术思想可以对权利要求施加各种变更。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂至少包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、上述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，至少Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，至少4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，稳定剂是使亚铁氰化物与该稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，氧化还原电位是包含稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
本公开中，试剂是对测定对象进行测定的试剂，例如是部分组合物的集合体。关于试剂，仅利用该试剂即能够对测定对象进行检测。部分组合物是构成试剂的一部分的组合物。关于部分组合物，仅利用该部分组合物无法对测定对象进行测定。
亚铁氰化物可以包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少任一者中。或者，亚铁氰化物也可以包含在与含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物不同的含有亚铁氰化物的部分组合物中。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂可以以试剂盒的形态进行保存、流通和使用。作为试剂盒的形态，例如可以举出双试剂型试剂盒、三试剂型试剂盒等。例如在双试剂型试剂盒的情况下，亚铁氰化物包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少任一者中。例如在三试剂型试剂盒的情况下，亚铁氰化物包含在与含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物不同的含有亚铁氰化物的部分组合物中。将Trinder’s试剂、4-氨基安替比林以及亚铁氰化物分别保存的形态的三试剂型试剂盒比双试剂型试剂盒更能抑制灵敏度降低，因此具有被测物灵敏度残留率高的倾向。但是，实施方式的糖化蛋白质测定试剂也为双试剂型也无妨。
糖化蛋白质例如为糖化白蛋白(GA)、糖化血红蛋白(HbA1c等)。
含有Trinder’s试剂的部分组合物可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶、亚铁氰化物、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及过氧化酶中的至少任一者。或者含有Trinder’s试剂的部分组合物可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶、亚铁氰化物以及过氧化酶中的至少任一者。这种情况下，含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者可以进一步包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂。含有4-氨基安替比林的部分组合物可以进一步包含亚铁氰化物。另外，含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶或过氧化酶。
含有4-氨基安替比林的部分组合物可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶、亚铁氰化物、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及过氧化酶中的至少任一者。或者含有4-氨基安替比林的部分组合物可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶、亚铁氰化物以及过氧化酶中的至少任一者。这种情况下，含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者可以进一步包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂。含有Trinder’s试剂的部分组合物可以进一步包含亚铁氰化物。另外，含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者可以进一步包含糖化氨基酸氧化酶或过氧化酶。
使实施方式的糖化蛋白质测定试剂与测定对象的被测物(样品被测物)中包含的结合有葡萄糖的蛋白质(糖化蛋白质)接触时，糖化蛋白质通过蛋白酶而被分解成糖化氨基酸或糖化肽。糖化氨基酸或糖化肽通过糖化氨基酸氧化酶而被分解成氨基酸或肽、以及葡糖醛酮。另外，此时通过糖化氨基酸氧化酶使水和氧发生反应，生成过氧化氢。Trinder’s试剂和4-氨基安替比林在过氧化氢和过氧化酶的存在下发生氧化缩合反应而呈色。例如作为Trinder’s试剂使用N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺(TODB)的情况下，会发生呈色为蓝紫色的显色反应。蓝紫色的呈色通过波长546nm处的吸光度的测定进行检测。基于波长546nm处的吸光度对被测物中包含的糖化蛋白质的浓度进行定量。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少任一者中的情况下，实施方式的糖化蛋白质测定试剂的通常的使用方法中，首先向样品被测物中添加含有Trinder’s试剂的部分组合物，将样品被测物与含有Trinder’s试剂的部分组合物的混合物放置数分钟、例如5分钟至10分钟左右，其后向该混合物中添加含有4-氨基安替比林的部分组合物，对显色的程度进行测定，由此可以测定糖化蛋白质。其中，根据情况，在添加到样品被测物中时，可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物同时进行添加混合，也可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物预先混合并立即进行使用，还可以先将含有4-氨基安替比林的部分组合物添加到样品被测物中，其后添加含有Trinder’s试剂的部分组合物。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，在亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中的情况下，例如预先将含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有亚铁氰化物的部分组合物混合，准备出含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物。这种情况下，首先向样品被测物中添加含有Trinder’s试剂的部分组合物，将样品被测物与含有Trinder’s试剂的部分组合物的混合物放置数分钟、例如5分钟至10分钟左右，其后向该混合物中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物，对显色的程度进行测定，由此可以对糖化蛋白质进行测定。其中，根据情况，在添加到样品被测物中时，可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物同时进行添加混合，也可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物预先混合并立即进行使用，还可以先将含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物添加到样品被测物中，其后添加含有Trinder’s试剂的部分组合物。或者，可以预先将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有亚铁氰化物的部分组合物混合，准备含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的部分组合物。这种情况下，首先向样品被测物中添加含有4-氨基安替比林的部分组合物，将样品被测物与含有4-氨基安替比林的部分组合物的混合物放置数分钟、例如5分钟至10分钟左右，其后向该混合物中添加含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的部分组合物，对显色的程度进行测定，由此可以对糖化蛋白质进行测定。其中，根据情况，在添加到样品被测物中时，可以将含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的部分组合物同时进行添加混合，也可以将含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的部分组合物预先混合并立即进行使用，还可以先将含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的部分组合物添加到样品被测物中，其后添加含有4-氨基安替比林的部分组合物。或者，可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物预先进行混合，制成含有Trinder’s试剂和4-氨基安替比林的部分组合物。这种情况下，首先将含有亚铁氰化物的部分组合物与样品被测物混合，将样品被测物与含有亚铁氰化物的部分组合物的混合物放置数分钟、例如5分钟至10分钟左右，其后混合含有Trinder’s试剂和4-氨基安替比林的部分组合物。另外，根据情况，在添加到样品被测物中时，可以将含有亚铁氰化物的部分组合物与含有Trinder’s试剂和4-氨基安替比林的部分组合物同时进行添加混合，也可以将含有亚铁氰化物的部分组合物与含有Trinder’s试剂和4-氨基安替比林的部分组合物预先混合来进行添加，还可以先将含有Trinder’s试剂和4-氨基安替比林的部分组合物与样品被测物进行混合，之后添加含有亚铁氰化物的部分组合物。或者，可以将样品被测物、含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物同时进行添加混合，也可以将含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物预先进行混合后添加到样品被测物中。
为了对糖化蛋白质进行定量，多数情况下通常对糖化蛋白质浓度已知的1种以上的校准用物质(校准物)进行测定来进行校准。作为校准物的制作方法、校准方法，本领域技术人员可以基于公知信息来实施，例如可以参考国际公开第2001/094618号、日本特开2005-261383号公报等的记载适宜地实施。另外，为了对于因测定试剂保存中的灵敏度降低所致的测定值的变动进行校正，例如通常进行1个月1次等的定期校准。另一方面，已知若是灵敏度降低得到了抑制的试剂，则只要在仅第一次进行校准，即使在其后的测定不进行校准，也能够长期得到稳定的测定值，能够进行非校准测定。
蛋白酶可以包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物的至少任一者中。蛋白酶只要可分解糖化蛋白质、有效地生成糖化氨基酸或糖化肽即可。蛋白酶例如为内肽酶。作为内肽酶的示例，可以举出丝氨酸内肽酶。蛋白酶可以举出来自芽孢杆菌(Bacillus)属、链霉菌(Streptomyces)属、麦轴梗霉(Tritirachium)属以及曲霉菌(Aspergillus)属等微生物的蛋白酶及其基因重组型蛋白酶。作为芽孢杆菌属来源的蛋白酶的示例，可以举出Alcalase、Neutrase、Esperase、Savinase(以上由Novozymes公司制造)、Bioprase OP、Bioprase SP-20FG、Bioprase 30L、Bioprase 30G、Bioprase AL-15FG、Bioprase APL-30、Protease CL-15(以上由Nagase chemteX公司制造)、Protin SD PC-10CF、Thermoase PC-10F、Protin SD-AY10、Protin SD-NY10(以上由天野Enzyme公司制造)、Multifect PR6L、Optimase PR40L、Optimase PR40X、Optimase PR40E(以上由Danisco Japan公司制造)、Orientase 22BF、Nucleicin、Orientase 10NL、Orientase 90N(以上由HBI公司制造)、Aroase AP-10、AroaseNP-10、Aroase XA-10(以上由Yakult药品工业公司制造)、枯草杆菌蛋白酶、细菌蛋白酶XXIV型、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源蛋白酶VIII型、多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)来源蛋白酶IX型、嗜热脂肪芽孢杆菌(GeobacillusStearothermophilus)来源嗜热蛋白酶X型、多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)来源蛋白酶XV型、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)来源蛋白酶XXVII型、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)来源蛋白酶XXXI型(以上由Sigma公司制造)、嗜热蛋白酶(富士胶片和光纯药公司制造)、Dispase(分散酶)I、Dispase II(以上由合同酒精公司制造)、NeutralProteinase(TOYOBO USA公司制造)等。作为链霉菌属来源蛋白酶的示例，可以举出链霉蛋白酶、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)来源蛋白酶XIV型(以上由Sigma公司制造)、嗜碱蛋白酶(Alkalophilic proteinase)(TOYOBO USA公司制造)、Denateam PMC SOFTER(Nagase chemteX公司制造)等。作为麦轴梗霉属来源蛋白酶的示例，可以举出蛋白酶K(Sigma公司制造)等。作为曲霉菌属来源蛋白酶的示例，可以举出蛋白酶P“Amano”3SD、蛋白酶A“Amano”SD、蛋白酶M“Amano”SD(以上由天野Enzyme公司制造)、Sumizyme MP、SumizymeLPL-G、Sumizyme LP50D、Sumizyme AP(以上由新日本化学工业公司制造)、Orientase OP、Orientase AY(以上由HBI公司制造)、佐氏曲霉(Aspergillus saitoi)来源蛋白酶XIII型、酱油曲霉(Aspergillus sojae)来源蛋白酶XIX型、蜂蜜曲霉(Aspergillus melleus)来源蛋白酶XXIII型、米曲霉(Aspergillus oryzae)来源蛋白酶(以上由Sigma公司制造)、Denateam AP、Denapsin 2P(以上由Nagase chemteX公司制造)、Pancidase NP-2、Pancidase MP以及Pancidase P(以上由Yakult药品工业公司制造)等。这些之中，优选Alcalase、Bioprase SP-20FG、Protin SD-AY10、Multifect PR6L、Optimase PR40L、AroaseXA-10、枯草杆菌蛋白酶、链霉蛋白酶、蛋白酶K、PR“Amano”K。
另外，从其他方面出发，作为蛋白酶，例如可以举出酶编号为EC:3.4或EC:3.4.21的蛋白酶作为优选的示例。另外还可以举出EC:3.4.21.62的蛋白酶作为更优选的示例。
本实施方式的蛋白酶的稳定剂可以包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者中。本实施方式的蛋白酶的稳定剂使该蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V。需要说明的是，该氧化还原电位是在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中测定的氧化还原电位。该反应体系可以进一步包含N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸以及氯化钠。氧化还原电位可以使用银/氯化银电极作为参比电极进行测定。关于对氧化还原电位进行测定的反应体系，更具体的内容将在实施例1中叙述。
氧化还原电位的下限例如大于0.058V，可以为0.070V以上、0.084V以上、或者0.112V以上。氧化还原电位的上限例如可以为0.400V以下、0.300V以下、0.250V以下、或者0.235V以下。
作为蛋白酶的稳定剂的示例，例如可以举出1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇及羧基苯基硼酸以及它们的组合。作为羧基苯基硼酸的示例，可以举出2-羧基苯基硼酸。从有效浓度、溶解度以及成本等方面出发，稳定剂优选为1,2-丙二醇。需要说明的是，本实施方式中，蛋白酶的稳定剂不包含二甲基亚砜。不使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂不包含在本实施方式的蛋白酶的稳定剂中。
亚铁氰化物可以包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者中。对于被测物中包含的胆红素对糖化蛋白质的测定所带来的影响，亚铁氰化物具有抑制作用。作为亚铁氰化物的示例，可以为含有氰亚铁酸根离子的任一种化合物，例如可以举出亚铁氰化钾(Fe(CN)6K4)和铁氰化钠(Fe(CN)6Na4)。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少任一者中的情况下，蛋白酶和蛋白酶的稳定剂例如包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者中。或者，蛋白酶、蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物例如包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者中。优选蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中的情况下，蛋白酶和蛋白酶的稳定剂例如包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物的任一者中。例如蛋白酶和蛋白酶的稳定剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中。或者，蛋白酶和蛋白酶的稳定剂包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中。再或者，蛋白酶和蛋白酶的稳定剂包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中。
作为包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少任一者中的糖化氨基酸氧化酶，只要为可有效地作用于人蛋白质来源的糖化氨基酸或糖化肽的糖化氨基酸氧化酶即可，作为其示例，可以举出赤霉(Gibberella)属、曲霉菌(Aspergillus)属、念珠菌(Candida)属、青霉菌(Penicillium)属、镰孢菌(Fusarium)属、支顶孢属菌(Acremonium)属、德巴利酵母菌(Debaryomyces)属以及棒状杆菌(Corynebacterium)属来源的糖化氨基酸氧化酶以及其基因重组型糖化氨基酸氧化酶变异体等。更具体地说，可以举出酮胺氧化酶(KAOD、旭化成制药公司制造、记载于Clinica Chimica Acta,2002年,324,p.61-71)、变异型KAOD(KAOD-V、旭化成制药公司制造、记载于专利文献1中)以及FAOD-E(龟甲万公司制造)等。
作为含有Trinder’s试剂的部分组合物中包含的Trinder’s试剂的示例，具体地说，可以举出N-(3-磺基丙基)苯胺(HALPS)、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3,5-二甲基苯胺(MAOS)、N-(3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAPS)、N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(DAPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺基丙基)苯胺(ALPS)、N-乙基-N-(3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺(ADPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3-甲氧基苯胺(ADOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺(TODB)及3-羟基-2,4,6-三碘苯甲酸(HTIB)以及它们的盐等。这些之中，优选TOPS、ALPS、TOOS以及TODB。
使用TOPS时的显色波长为550nm。使用ALPS时的显色波长为561nm。使用TOOS时的显色波长为555nm。使用TODB时的显色波长为550nm。其中，测定吸光度的装置所测定的波长不必与显色波长严格一致。例如，利用对波长546nm处的吸光度进行测定的装置能够对分别使用TOPS、ALPS、TOOS以及TODB时的显色反应进行测定。
需要说明的是，若Trinder’s试剂与4-氨基安替比林包含在同一试剂中，则它们会自然地发生氧化缩合反应而在保存中发生呈色，因此使Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中、使4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中。
现有技术中，由于来自测定试剂、被测物等的过氧化物而发生非特异性的显色反应，该吸光度可能使测定精度降低。将这些非特异性的显色称为试剂空白。与之相对，含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物、或者含有亚铁氰化物的部分组合物的任一者中包含的过氧化酶会在促进Trinder’s试剂与4-氨基安替比林的氧化缩合反应的同时消除过氧化氢，具有降低试剂空白的功能。任一来源的过氧化酶均可使用，作为其示例，可以举出山葵来源等植物来源的过氧化酶以及细菌来源、霉菌来源等微生物来源的过氧化酶等。具体地说，可以举出山葵来源的过氧化物酶(Peroxidase fromhorseradish)(Sigma公司制造)、过氧化物酶、山葵来源(富士胶片和光纯药公司制造)、PO“AMANO”3(天野Enzyme公司制造)等。
含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物中的至少一者可以进一步包含螯合剂。在使用螯合剂的盐时，可抑制pH变动，因而优选。
作为螯合剂的示例，可以举出乙二胺四乙酸、乙二醇醚二胺四乙酸、N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸、次氮基三(甲基膦酸)、次氮基三乙酸、反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸、亚氨基二乙酸、二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸、1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸、葡萄糖酸、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸以及它们的盐。优选的螯合剂例如为柠檬酸及其盐。
作为螯合剂的盐，只要可形成盐即可，对其种类没有特别限定，可以为酸加成盐或碱加成盐中的任一者，也可以为双性离子的形态。作为碱加成盐，例如包括与钠、钾、镁、钙、铝等无机碱的碱加成盐、或者与甲基胺、2-氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸或鸟氨酸等有机碱的碱加成盐等。这些之中，优选与无机碱的碱加成盐。需要说明的是，作为代表性的碱加成盐，可例示出钠盐。
含有4-氨基安替比林的部分组合物、含有Trinder’s试剂的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物分别可以进一步包含水和有机溶剂等作为溶剂。作为有机溶剂的示例，可以举出醇系溶剂(可以举出碳原子数1～18的醇，具体地说为甲醇、丁醇、乙二醇以及甘油等)、酮系溶剂(丙酮以及甲基乙基酮等)以及醚系溶剂等(二乙醚、乙二醇单烷基醚以及以四氢呋喃为代表的环状醚等)。
另外，含有4-氨基安替比林的部分组合物、含有Trinder’s试剂的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物分别可以包含缓冲剂。作为缓冲剂的示例，可以举出使用N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)、3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸(EPPS)、2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)、2-羟基-3-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]丙烷磺酸(HEPPSO)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙磺酸(ACES)、N-(2-乙酰胺)亚氨基二乙酸(ADA)、N,N-双(2-羟基乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(Bicine)、双(2-羟基乙基)亚氨基三(羟基甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-环己基-3-氨基丙烷磺酸(CAPS)、N-环己基-2-羟基-3-氨基丙烷磺酸(CAPSO)、N-环己基-2-氨基乙磺酸(CHES)、3-[N,N-双(2-羟基乙基)氨基]-2-羟基丙烷磺酸(DIPSO)、2-吗啉基乙磺酸(MES)、3-吗啉基丙烷磺酸(MOPS)、2-羟基-3-吗啉基丙烷磺酸(MOPSO)、哌嗪-1,4-双(2-乙磺酸)(PIPES)、哌嗪-1,4-双(2-羟基-3-丙烷磺酸)(POPSO)、N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、2-羟基-N-三(羟基甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPSO)、N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)以及三(羟基甲基)氨基甲烷(Tris)等的缓冲剂或者硼酸、氨水、甘氨酸、碳酸、乙酸、磷酸、二乙醇胺、对苯酚磺酸、2-氨基-2-甲基丙烷-1,3-二醇、二甲胂酸、马来酸、佛罗拿和3,3-二甲基戊二酸等。
另外，含有4-氨基安替比林的部分组合物、含有Trinder’s试剂的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者可以进一步包含作为其他添加物的防腐剂、酶的稳定剂、表面活性剂以及其他酶等。作为防腐剂的示例，可以举出叠氮化钠以及ProClin等。作为酶的稳定剂，只要是在保存中可使酶稳定的稳定剂，任一种均可使用，例如可以举出环糊精、蔗糖、甘露糖、果糖、乳糖、半乳糖和海藻糖等糖、山梨糖醇、甘露醇等糖醇。作为表面活性剂，可以使用阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、两性表面活性剂以及非离子型表面活性剂中的任一种，例如作为非离子型表面活性剂的示例，可以举出聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚、山梨聚糖脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯以及聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物等。另外，作为两性表面活性剂的示例，可以举出烷基甜菜碱、乙酸甜菜碱、磺基甜菜碱以及烷基氧化胺等。作为其他酶，例如可以举出抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶等，其用于抑制被测物中包含的抗坏血酸、胆红素或内源性的过氧化物对测定值所带来的影响。
含有4-氨基安替比林的部分组合物中的4-氨基安替比林的浓度只要为足以与所产生的过氧化氢发生反应的浓度即可，作为下限可例示为0.01mmol/L以上、优选为0.1mmol/L以上、进一步优选为0.5mmol/L以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为100mmol/L以下、优选为50mmol/L以下、进一步优选为30mmol/L以下。
关于含有4-氨基安替比林的部分组合物、含有Trinder’s试剂的部分组合物、或者含有亚铁氰化物的部分组合物中的蛋白酶的浓度，只要能够在适当的时间内分解糖化蛋白质的浓度即可，作为下限可例示为100U/mL以上、优选为1kU/mL以上、更优选为10kU/mL以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为1000kU/mL以下、优选为200kU/mL以下、更优选为100kU/mL以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，蛋白酶的稳定剂的浓度为在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
例如，在实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，在含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物的情况下，对含有Trinder’s试剂的部分组合物中的蛋白酶的稳定剂的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
例如，在含有4-氨基安替比林的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物的情况下，对含有4-氨基安替比林的部分组合物中的蛋白酶的稳定剂的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
例如，在含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、含有4-氨基安替比林的部分组合物包含亚铁氰化物的情况下，对含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物混合后的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
例如，在含有4-氨基安替比林的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、含有Trinder’s试剂的部分组合物包含亚铁氰化物的情况下，对含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有Trinder’s试剂的部分组合物混合后的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
例如，在含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中的情况下，对含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物中的包含蛋白酶稳定剂的任一者与含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的蛋白酶的稳定剂的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
例如，在含有亚铁氰化物的部分组合物包含亚铁氰化物和蛋白酶的稳定剂的情况下，对含有亚铁氰化物的部分组合物中的蛋白酶的稳定剂的浓度进行调整，以使其与在包含蛋白酶的稳定剂和亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系中能够使蛋白酶的稳定剂与亚铁氰化物混合后的亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂的浓度相同。
含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇的情况下，含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的1,2-丙二醇的浓度的下限例如为7.5wt/vоl％以上、10wt/vоl％以上、15wt/vоl％以上、20wt/vоl％以上、22.5wt/vоl％以上、25wt/vоl％以上、27.5wt/vоl％以上、30wt/vоl％以上、35wt/vоl％以上、或者37.5wt/vоl％以上。另外，含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的1,2-丙二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、62.5wt/vоl％以下、60wt/vоl％以下、57.5wt/vоl％以下、55wt/vоl％以下、52.5wt/vоl％以下、或者50wt/vоl％以下。
含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇的情况下，含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的三亚甲基二醇的浓度的下限例如为40wt/vоl％以上、42.5wt/vоl％以上、45wt/vоl％以上、47.5wt/vоl％以上、50wt/vоl％以上、52.5wt/vоl％以上、55wt/vоl％以上、57.5wt/vоl％以上、60wt/vоl％以上、或者62.5wt/vоl％以上。含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的三亚甲基二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、75wt/vоl％以下、或者70wt/vоl％以下。
含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为乙二醇的情况下，含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的乙二醇的浓度的下限例如为40wt/vоl％以上、42.5wt/vоl％以上、45wt/vоl％以上、47.5wt/vоl％以上、50wt/vоl％以上、52.5wt/vоl％以上、55wt/vоl％以上、57.5wt/vоl％以上、60wt/vоl％以上、或者62.5wt/vоl％以上。含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的乙二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、75wt/vоl％以下、或者70wt/vоl％以下。
含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸的情况下，含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的2-羧基苯基硼酸的浓度的下限例如为0.2wt/vоl％以上、0.45wt/vоl％以上、0.5wt/vоl％以上、0.55wt/vоl％以上、0.6wt/vоl％以上、0.75wt/vоl％以上。含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物中的2-羧基苯基硼酸的浓度的上限例如为10wt/vol％以下、7.5wt/vоl％以下、5wt/vоl％以下。
含有亚铁氰化物的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇的情况下，含有亚铁氰化物的部分组合物中的1,2-丙二醇的浓度的下限例如为7.5wt/vоl％以上、10wt/vоl％以上、15wt/vоl％以上、20wt/vоl％以上、22.5wt/vоl％以上、25wt/vоl％以上、27.5wt/vоl％以上、30wt/vоl％以上、35wt/vоl％以上、或者37.5wt/vоl％以上。另外，含有亚铁氰化物的部分组合物中的1,2-丙二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、62.5wt/vоl％以下、60wt/vоl％以下、57.5wt/vоl％以下、55wt/vоl％以下、52.5wt/vоl％以下、或者50wt/vоl％以下。
含有亚铁氰化物的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇的情况下，含有亚铁氰化物的部分组合物中的三亚甲基二醇的浓度的下限例如为40wt/vоl％以上、42.5wt/vоl％以上、45wt/vоl％以上、47.5wt/vоl％以上、50wt/vоl％以上、52.5wt/vоl％以上、55wt/vоl％以上、57.5wt/vоl％以上、60wt/vоl％以上、或者62.5wt/vоl％以上。含有亚铁氰化物的部分组合物中的三亚甲基二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、75wt/vоl％以下、或者70wt/vоl％以下。
含有亚铁氰化物的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为乙二醇的情况下，含有亚铁氰化物的部分组合物中的乙二醇的浓度的下限例如为40wt/vоl％以上、42.5wt/vol％以上、45wt/vol％以上、47.5wt/vol％以上、50wt/vоl％以上、52.5wt/vоl％以上、55wt/vоl％以上、57.5wt/vоl％以上、60wt/vоl％以上、或者62.5wt/vоl％以上。含有亚铁氰化物的部分组合物中的乙二醇的浓度的上限例如为80wt/vol％以下、75wt/vоl％以下、或者70wt/vоl％以下。
含有亚铁氰化物的部分组合物包含蛋白酶的稳定剂、蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸的情况下，含有亚铁氰化物的部分组合物中的2-羧基苯基硼酸的浓度的下限例如为0.2wt/vоl％以上、0.45wt/vоl％以上、0.5wt/vоl％以上、0.55wt/vоl％以上、0.6wt/vоl％以上、或者0.75wt/vоl％以上。含有亚铁氰化物的部分组合物中的2-羧基苯基硼酸的浓度的上限例如为10wt/vol％以下、7.5wt/vоl％以下、或者5wt/vоl％以下。
含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有亚铁氰化物的部分组合物中的亚铁氰化物的浓度只要为足以抑制被测物中包含的胆红素对糖化蛋白质的测定带来的影响的浓度即可，作为下限可例示为0.001mmol/L以上、优选为0.01mmol/L以上、更优选为0.02mmol/L以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为10mmol/L以下、优选为1mmol/L以下、0.9mmol/L以下、0.8mmol/L以下、0.7mmol/L以下、0.6mmol/L以下、更优选为0.5mmol/L以下。
含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物、或者含有亚铁氰化物的部分组合物中的糖化氨基酸氧化酶的浓度只要为足以与所生成的糖化氨基酸反应的浓度即可，作为下限可例示为0.1U/mL以上、优选为1U/mL以上、进一步优选为10U/mL以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为1000U/mL以下、优选为200U/mL以下、进一步优选为100U/mL以下。
含有Trinder’s试剂的部分组合物中的Trinder’s试剂的浓度只要为足以与所生成的过氧化氢反应的浓度即可，作为下限可例示为0.01mmol/L以上、优选为0.1mmol/L以上、进一步优选为0.5mmol/L以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为100mmol/L以下、优选为10mmol/L以下、进一步优选为5mmol/L以下。
含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物、或者含有亚铁氰化物的部分组合物中的过氧化酶的浓度只要为足以与所生成的过氧化氢反应的浓度即可，作为下限可例示为0.01U/mL以上、优选为0.1U/mL以上、进一步优选为1U/mL以上。另外，从成本的方面出发，作为上限可例示为500U/mL以下、优选为100U/mL以下、进一步优选为50U/mL以下。
作为含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有亚铁氰化物的部分组合物中的螯合剂的浓度的下限，可例示为5μmol/L以上、优选为10μmol/L以上、50μmol/L以上、75μmol/L以上、1mmol/L以上、进一步优选为1.25mmol/L以上。另外，例如，作为含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有亚铁氰化物的部分组合物中的螯合剂的浓度的上限，可例示为1000mmol/L以下、优选为100mmol/L以下、25mmol/L以下、15mmol/l以下、10mmol/l以下、进一步优选为5mmol/L以下。
含有Trinder’s试剂的部分组合物可以为液态，可以保存至与含有4-氨基安替比林的部分组合物混合为止。含有Trinder’s试剂的部分组合物中，含有物将进行混合。含有4-氨基安替比林的部分组合物可以为液态，可以保存至与含有Trinder’s试剂的部分组合物混合为止。含有4-氨基安替比林的部分组合物中，含有物将进行混合。含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有Trinder’s试剂的部分组合物可以分别分开地包装。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂包含含有亚铁氰化物的部分组合物的情况下，含有亚铁氰化物的部分组合物可以为液态，可以保存至与含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物混合为止。含有亚铁氰化物的部分组合物中中，含有物将进行混合。含有亚铁氰化物的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有Trinder’s试剂的部分组合物可以分别分开地包装。
含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或含有亚铁氰化物的部分组合物的pH的下限例如为5以上、5.5以上、6以上、6.5以上、或者7以上。含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或含有亚铁氰化物的部分组合物的pH例如可以大于7。含有4-氨基安替比林的部分组合物和/或含有亚铁氰化物的部分组合物的pH的上限例如为10以下、9.5以下、或者9以下。
不包含蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂可能在保存稳定性方面产生问题。与之相对，实施方式的糖化蛋白质测定试剂包含蛋白酶的稳定剂，因此长期保存稳定性良好。因此，能够长期准确地测定糖化蛋白质。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂例如在流通所需要的实际使用期间中能够稳定地保存。例如，实施方式的糖化蛋白质测定试剂能够保存至少1个月。作为实施方式的糖化蛋白质测定试剂的保存期间的下限，可例示为1天以上、1个月以上、6个月或者1年以上。另外，作为实施方式的糖化蛋白质测定试剂的保存期间的上限，可例示为5年以下、2年以下、1年6个月以下、1年3个月以下、6个月以下、或者7天以下。
作为实施方式的糖化蛋白质测定试剂的保存温度的下限，可例示为2℃以上、4℃以上、或者5℃以上。另外，作为实施方式的糖化蛋白质测定试剂的保存温度的上限，可例示为10℃以下、8℃以下、或者5℃以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少任一者中的情况下，将(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了28天的含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了14天的含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了14天的含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为灵敏度残留率。作为灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中的情况下，将(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与在30℃保存了28天的含有4-氨基安替比林的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了14天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与在30℃保存了14天的含有4-氨基安替比林的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为灵敏度残留率。作为灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，在亚铁氰化物包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中的情况下，将(在5℃保存了28天的含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了14天的含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了14天的含有Trinder’s试剂的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为灵敏度残留率。作为灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中的情况下，将(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了28天的含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了14天的含有Trinder’s试剂的部分组合物或含有4-氨基安替比林的部分组合物与在30℃保存了14天的含有4-氨基安替比林的部分组合物或含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为灵敏度残留率。作为灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中的情况下，将(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与在30℃保存了28天的含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了14天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与在30℃保存了14天的含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为灵敏度残留率。作为灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施方式的糖化蛋白质测定试剂中，糖化蛋白质测定试剂具备含有Trinder’s试剂的部分组合物和含有4-氨基安替比林的部分组合物的情况下，将(在5℃保存了1年的含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为长期灵敏度残留率。或者，在糖化蛋白质测定试剂具备含有Trinder’s试剂的部分组合物、含有4-氨基安替比林的部分组合物和含有亚铁氰化物的部分组合物的情况下，将(在5℃保存了1年的含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)相对于(在5℃保存了28天的含有Trinder’s试剂的部分组合物与含有4-氨基安替比林的部分组合物与含有亚铁氰化物的部分组合物组合使用的情况下的糖化蛋白质的测定灵敏度)之比称为长期灵敏度残留率。作为长期灵敏度残留率的下限，可例示为80％以上、85％以上、88％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、或者95％以上。作为上限，可例示为120％以下、110％以下、或者105％以下。
实施例
接着说明本发明的实施例，但本发明当然不受以下实施例的任何限定。
在实施例中的吸光度的测定中，使用7170型日立自动分析装置(日立高新技术公司制造)。在装置中，将主波长设定为546nm、副波长设定为700nm。设波长546nm处的吸光度为Abs546、波长700nm处的吸光度为Abs700，使用下述(1)式计算出被测物的吸光度Abs。
Abs＝Abs546－Abs700 (1)
[参考例1：试剂空白的发生机理]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
(含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
后述浓度的稳定剂
后述浓度的亚铁氰化物或者亚铁氰化物与铁氰化物的混合物
(添加在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的稳定剂)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
30wt/vol％乙醇(关东化学公司制造)
30wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(添加在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的亚铁氰化物或者亚铁氰化物与铁氰化物的混合物)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
0.09mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)和0.01mmol/L铁氰化钾(富士胶片和光纯药公司制造)
0.07mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)和0.03mmol/L铁氰化钾(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品)
准备下述样品。
纯净水
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与纯净水的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(2)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (2)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
将使用纯净水作为样品时的吸光度变化作为试剂空白Acb，将结果示于表1。
[表1]
Figure BDA0003438477490000611
由表1可知，通过添加铁氰化物，试剂空白趋于上升。由此暗示出铁氰化物在试剂空白的产生中起到作用。另外，在稳定剂中添加二甲基亚砜的情况下，即使亚铁氰化物也产生了1mAbs以上的试剂空白，暗示出二甲基亚砜可能使亚铁氰化物变化成作为试剂空白的原因的铁氰化物。
[参考例2：变更试剂配置时的试剂空白]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
(含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
0.025mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
(含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
1.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
(含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
1.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.025mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
(含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
后述浓度的稳定剂
(添加在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
后述浓度的稳定剂
(添加在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
8mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
后述浓度的稳定剂
(添加在含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
8mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
后述浓度的稳定剂
(添加在含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品)
准备下述样品。
纯净水
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)与纯净水的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)5分钟后的吸光度。由下述(3)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (3)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的总液量。
向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)与纯净水的混合液中添加含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)5分钟后的吸光度。由下述(4)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (4)
此处的180是指含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的液量，225是指含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)与含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的总液量。
向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与纯净水的混合液中添加含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)5分钟后的吸光度。由下述(5)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (5)
此处的180是指含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的液量，225是指含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的总液量。
向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)中添加纯净水5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)与纯净水的混合液中添加含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)5分钟后的吸光度。由下述(6)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (6)
此处的180是指含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的液量，225是指含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)与含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(2)的总液量。
向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)与纯净水的混合液中添加含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)5分钟后的吸光度。由下述(7)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (7)
此处的180是指含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的液量，225是指含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)与含有Trinder’s试剂的液态部分组合物(1)的总液量。
向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)180μL中添加纯净水4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中添加纯净水5分钟后的吸光度；该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)与纯净水的混合液中添加含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)5分钟后的吸光度。由下述(8)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (8)
此处的180是指含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的液量，225是指含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)与含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的总液量。
将使用纯净水作为样品时的吸光度变化作为试剂空白Acb，将结果示于表2。
[表2]
Figure BDA0003438477490000661
如表2所示，在与样品第一次反应的液态部分组合物包含Trinder’s试剂的情况以及与样品第一次反应的液态部分组合物包含4-氨基安替比林的情况中的任一情况下，使用二甲基亚砜作为稳定剂时的试剂空白均大于使用1,2-丙二醇作为稳定剂时的试剂空白。另外可知，试剂空白的抑制效果未在很大程度上依赖于试剂的添加顺序、与亚铁氰化物的组合。
[实施例1：稳定剂存在下的亚铁氰化物的氧化还原电位测定]
(含有亚铁氰化物的液态组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有亚铁氰化物的液态组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
150mmol/L氯化钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(添加在含有亚铁氰化物的液态组合物中的稳定剂)
6wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
7.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
10wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
40wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
30wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
30wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％乙醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1-丙醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％甘油(富士胶片和光纯药公司制造)
0.6wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
1wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
1wt/vol％月桂基三甲基氯化铵(富士胶片和光纯药公司制造)
1wt/vol％苄基三乙基氯化铵(富士胶片和光纯药公司制造)
1wt/vol％苄基三丁基氯化铵(富士胶片和光纯药公司制造)
1wt/vol％氯化钙(富士胶片和光纯药公司制造)
1wt/vol％硼酸(富士胶片和光纯药公司制造)
150mmol/L氯化钠(富士胶片和光纯药公司制造)(与上述150mmol/L氯化钠合计300mmol/L氯化钠)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
50wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
62.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(测定步骤)
将含有亚铁氰化物的液态组合物10mL添加到伏安法用电池(BAS公司)中，使用下述电极和装置进行循环伏安法。
工作电极：GCE玻璃状碳电极外径6mm×内径3mm(BAS公司)
对电极：Pt反电极23cm(线圈状)长度23cm×电极部直径0.5mm(BAS公司)
参比电极：RE-1B水系参比电极(Ag/AgCl)(BAS公司)
装置：AUTOMATIC POLARIZATION SYSTEM HZ-7000(北斗电工公司)
在循环伏安法测定时，使施加至工作电极的电位相对于时间变化。将扫描速度设定为0.1V/秒。设初期电位为自然电位，使电位向正侧扫描直至第1设定电位。接着进行使电极电位从第1设定电位向负侧折返至第2设定电位的扫描。进一步进行使电极电位从第2设定电位向正侧折返至第1设定电位的扫描。第1设定电位和第2设定电位为0.5V和-0.5V。另外，循环伏安法测定在25℃实施。
计算出氧化电流显示出峰值时的电位值(Eox)与还原电流显示出峰值时的电位值(Ered)的平均值[(Ered+Eox)/2]，将其作为氧化还原电位(E’0)。将测定结果示于表3。
[表3-1]
Figure BDA0003438477490000691
[表3-2]
37.5wt/vol％1-丙醇 0.215 0.119 0.167
37.5wt/vol％甘油 0.214 0.143 0.178
0.6wt/vol％2-羧基苯基硼酸 0.261 0.150 0.206
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸 0.268 0.117 0.209
1wt/vol％2-羧基苯基硼酸 0.301 0.148 0.208
1wt/vol％月桂基三甲基氯化铵 0.148 0.087 0.118
1wt/vol％苄基三乙基氯化铵 0.239 0.157 0.198
1wt/vol％苄基三丁基氯化铵 0.246 0.154 0.200
1wt/vol％氯化钙 0.271 0.207 0.239
1wt/vol％硼酸 0.225 0.158 0.205
300mmol/L氯化钠 0.250 0.188 0.219
30wt/vol％二甲基亚砜 0.127 -0.012 0.058
37.5wt/vol％二甲基亚砜 0.062 -0.035 0.013
50wt/vol％二甲基亚砜 -0.022 -0.119 -0.071
62.5wt/vol％二甲基亚砜 -0.126 -0.397 -0.262
如表3所示，判明亚铁氰化物的氧化还原电位根据稳定剂的种类、浓度而变动，二甲基亚砜、1,2-丙二醇、三亚甲基二醇和乙二醇使氧化还原电位浓度依赖性地降低。另一方面，2-羧基苯基硼酸几乎不会改变氧化还原电位。特别判明与1,2-丙二醇、三亚甲基二醇和乙二醇相比，二甲基亚砜使氧化还原电位显著降低。通常若氧化还原电位降低则容易被氧化，因此暗示出通过将亚铁氰化物与特定稳定剂混合，容易生成铁氰化物。
[实施例2：基于蛋白酶稳定剂的种类的试剂空白的变化和被测物灵敏度稳定性]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(双试剂型：含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
500U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
40kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(双试剂型：包含在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.6wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物在5℃保存14天或28天。另外，将含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物以及含有亚铁氰化物的液态部分组合物在30℃保存14天或28天。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(9)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (9)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(10)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝ Acs－Acb (10)
设部分组合物保存14天后的灵敏度为ΔAbs14、部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28，如下述(11)式所示计算出ΔAbs14与ΔAbs28的比例，将其作为灵敏度残留率。将灵敏度残留率与部分组合物保存14天后的试剂空白Acb的结果一并示于表4。
灵敏度残留率(％)＝ΔAbs28÷ΔAbs14×100(11)
另外，将部分组合物保存14天后的试剂空白与亚铁氰化物的氧化还原电位的关系示于表5和图1。亚铁氰化物的氧化还原电位使用稳定剂与亚铁氰化物混合后的浓度下的氧化还原电位值。例如，在稳定剂与亚铁氰化物包含在相同的部分组合物中的情况下(双试剂型的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物、以及三试剂型的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2))，使用部分组合物中的稳定剂浓度下的氧化还原电位值。另外，稳定剂和亚铁氰化物包含在不同的部分组合物中的情况下(三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1))，使用含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)混合后的稳定剂浓度下的氧化还原电位值。
[表4-1]
Figure BDA0003438477490000741
[表4-2]
Figure BDA0003438477490000751
[表4-3]
Figure BDA0003438477490000752
[表4-4]
Figure BDA0003438477490000761
[表5-1]
Figure BDA0003438477490000762
[表5-2]
Figure BDA0003438477490000771
[表5-3]
Figure BDA0003438477490000772
由表4、表5以及图1可知，在双试剂型、三试剂型的任一类型中，均显示出在利用稳定剂(其在与亚铁氰化物混合后可赋予大于亚铁氰化物的氧化还原电位(0.058V)的氧化还原电位)时，抑制试剂空白的效果显著。另外，在任一稳定剂中均显示出，通过由双试剂型变成三试剂型，被测物灵敏度残留率提高。进而显示出，稳定剂浓度越高，被测物灵敏度稳定化效果也越高。
[实施例3：螯合剂添加的效果]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(双试剂型：含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
500U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
40kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(双试剂型：包含在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备作为含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备部分组合物，其包含含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物在5℃保存14天或28天。另外，将含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物以及含有亚铁氰化物的液态部分组合物在30℃保存14天或28天。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(12)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (12)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(13)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝ Acs－Acb (13)
设部分组合物保存14天后的灵敏度为ΔAbs14、部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28，如下述(14)式所示计算出ΔAbs14与ΔAbs28的比例，将其作为灵敏度残留率。将灵敏度残留率与部分组合物保存14天后的试剂空白Acb的结果一并示于表6。
灵敏度残留率(％)＝ΔAbs28÷ΔAbs14×100(14)
[表6-1]
Figure BDA0003438477490000821
[表6-2]
Figure BDA0003438477490000822
[表6-3]
Figure BDA0003438477490000831
[表6-4]
Figure BDA0003438477490000832
由表6可知，在使用与亚铁氰化物混合后可赋予比0.058V大的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，不添加螯合剂(柠檬酸三钠)的情况下的试剂空白与添加了螯合剂(柠檬酸三钠)的情况下的试剂空白大致相同。
[实施例4：pH和螯合剂种类的效果]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
50wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整pH，制备pH不同的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
调整为后述浓度的pH
(含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的pH)
pH6.5
pH7.0
pH7.5
pH8.0
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有螯合剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
后述浓度的螯合剂
(包含在含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的螯合剂)
5mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造、简称EDTA)
5mmol/L乙二醇醚二胺四乙酸(同仁化学公司制造、简称EGTA)
5mmol/L N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(同仁化学公司制造、简称HIDA)
5mmol/L次氮基三(甲基膦酸)三钠盐(同仁化学公司制造、简称NTPO)
5mmol/L次氮基三乙酸(同仁化学公司制造、简称NTA)
5mmol/L反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸一水合物(同仁化学公司制造、简称CyDTA)
5mmol/L亚氨基二乙酸(同仁化学公司制造、简称IDA)
5mmol/L二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸(同仁化学公司制造、简称DTPA)
5mmol/L 1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸(同仁化学公司制造、简称DPTA-OH)
5mmol/L葡萄糖酸钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L L(-)-苹果酸钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L琥珀酸(关东化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L水杨酸(Nacalai Tesque公司制造)
5mmol/L(+)-酒石酸钾(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(同仁化学公司制造、简称Tricine)
5mmol/L N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(同仁化学公司制造、简称Bicine)
(样品)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物在5℃保存14天或28天。另外，含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)和(2)在30℃保存14天或28天。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)或(2)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(15)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (15)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(16)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (16)
设部分组合物保存14天后的灵敏度为ΔAbs14、部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28，如下述(17)式所示计算出ΔAbs14与ΔAbs28的比例，将其作为灵敏度残留率。将灵敏度残留率与部分组合物保存14天后的试剂空白Acb的结果一并示于表7和图2中。
灵敏度残留率(％)＝ΔAbs28÷ΔAbs14×100 (17)
[表7-1]
Figure BDA0003438477490000871
[表7-2]
Figure BDA0003438477490000881
由表7和图2可知，即使改变含有亚铁氰化物的液态部分组合物的pH，试剂空白的变化也很小。另外，即使改变添加到含有亚铁氰化物的液态部分组合物中的螯合剂的种类，试剂空白的变化也很小。
[实施例5：pH的效果]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.0或pH8.0，制备含有亚铁氰化物的液态部分组合物。另外制备作为pH8.0的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0或pH8.0，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物。另外制备作为调整为pH8.0的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)(仅在调整为pH8.0时添加)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物在5℃保存14天或28天。另外，将含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与含有亚铁氰化物的液态部分组合物在30℃保存14天或28天。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(18)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (18)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(19)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (19)
将部分组合物保存14天后的灵敏度设为ΔAbs14、部分组合物保存28天后的灵敏度设为ΔAbs28，如下述(20)式所示计算出ΔAbs14与ΔAbs28的比例，将其作为灵敏度残留率。将灵敏度残留率与部分组合物保存14天后的试剂空白Acb的结果一并示于表8。
灵敏度残留率(％)＝ΔAbs28÷ΔAbs14×100 (20)
[表8-1]
Figure BDA0003438477490000921
[表8-2]
Figure BDA0003438477490000922
[表8-3]
Figure BDA0003438477490000931
[表8-4]
Figure BDA0003438477490000932
[表8-5]
Figure BDA0003438477490000941
由表8可知，在利用在与亚铁氰化物混合后可赋予大于0.058V的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，即使pH大于7，试剂空白的变化也很小。另外，在利用在与亚铁氰化物混合后可赋予大于0.058V的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，即使添加螯合剂，试剂空白的变化也很小。
[实施例6：试剂配置的变更]
(含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物。
50mmol/L三(羟基甲基)氨基甲烷(富士胶片和光纯药公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
8mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
10kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
10wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物。
50mmol/L三(羟基甲基)氨基甲烷(富士胶片和光纯药公司制造)
5wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
10mmol/L TOOS(同仁化学公司制造)
5U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
20U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
0.08mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物在30℃保存14天或28天，将含有4-氨基安替比林的液态部分组合物在5℃保存14天或28天。
(测定步骤)
向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物180μL中添加样品被测物6μL，在37℃反应5分钟后，添加含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物60μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(21)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/240 (21)
此处的180是指含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的液量，240是指含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与含有Trinder’s试剂和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(22)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (22)
将部分组合物保存14天后的灵敏度设为ΔAbs14、部分组合物保存28天后的灵敏度设为ΔAbs28，如下述(23)式所示计算出ΔAbs14与ΔAbs28的比例，将其作为灵敏度残留率。将灵敏度残留率与部分组合物保存14天后的试剂空白Acb的结果一并示于表9。
灵敏度残留率(％)＝ΔAbs28÷ΔAbs14×100 (23)
[表9]
Figure BDA0003438477490000961
由表9可知，在利用在与亚铁氰化物混合后可赋予大于0.058V的亚铁氰化物的氧化还原电位的浓度的稳定剂时，试剂空白低。
[实施例7：基于蛋白酶稳定剂的种类的试剂空白的变化和被测物灵敏度稳定性的长期稳定性的验证]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(双试剂型：含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
500U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
40kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(双试剂型：包含在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.6wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
30wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
50wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％二甲基亚砜(Nacalai Tesque公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物、含有亚铁氰化物的液态部分组合物在5℃保存28天或1年。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(24)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (24)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(25)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (25)
设部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28、部分组合物保存1年后的灵敏度为ΔAbs365，如下述(26)式所示计算出ΔAbs28与ΔAbs365的比例，将其作为长期灵敏度残留率。将长期灵敏度残留率与部分组合物保存1年后的试剂空白的结果一并示于表10。
长期灵敏度残留率(％)＝ΔAbs365÷ΔAbs28×100 (26)
另外，将部分组合物保存1年后的试剂空白与亚铁氰化物的氧化还原电位的关系示于表11和图3。亚铁氰化物的氧化还原电位使用稳定剂与亚铁氰化物混合后的浓度下的氧化还原电位值。例如，在稳定剂与亚铁氰化物包含在相同的部分组合物中的情况下(双试剂型的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物、以及三试剂型的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2))，使用部分组合物中的稳定剂浓度下的氧化还原电位值。另外，稳定剂和亚铁氰化物包含在不同的部分组合物中的情况下(三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1))，使用含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)混合后的稳定剂浓度下的氧化还原电位值。
[表10-1]
Figure BDA0003438477490001011
[表10-2]
Figure BDA0003438477490001012
[表10-3]
Figure BDA0003438477490001021
[表10-4]
Figure BDA0003438477490001022
[表10-5]
Figure BDA0003438477490001023
[表11-1]
Figure BDA0003438477490001031
[表11-2]
Figure BDA0003438477490001032
[表11-3]
Figure BDA0003438477490001041
对于进行了长期保存的试剂，也显示出了与实施例2同样的结果。即，由表10、表11以及图3可知，在双试剂型、三试剂型的任一类型中，均显示出在利用稳定剂(其在与亚铁氰化物混合后使亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V)时可表现出抑制试剂空白的效果。另外，在任一稳定剂中均显示出，通过由双试剂型变成三试剂型，被测物灵敏度残留率提高。作为稳定剂使用二甲基亚砜的双试剂型中，灵敏度残留率降低至80％以下。由此显示出，从灵敏度残留率的方面出发，也更优选使用二甲基亚砜以外的物质作为稳定剂。
[实施例8：螯合剂添加效果的长期稳定性的验证]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(双试剂型：含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
200mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
5mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
0.1mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
500U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
40kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(双试剂型：包含在含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物中的稳定剂)
30wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备作为含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备包含含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物、含有亚铁氰化物的液态部分组合物在5℃保存28天或1年。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(27)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (27)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(28)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝ Acs－Acb (28)
设部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28、部分组合物保存1年后的灵敏度为ΔAbs365，如下述(29)式所示计算出ΔAbs28与ΔAbs365的比例，将其作为长期灵敏度残留率。将长期灵敏度残留率与部分组合物保存1年后的试剂空白的结果一并示于表12。
长期灵敏度残留率(％)＝ΔAbs365÷ΔAbs28×100(29)
[表12-1]
Figure BDA0003438477490001081
[表12-2]
Figure BDA0003438477490001091
[表12-3]
Figure BDA0003438477490001092
[表12-4]
Figure BDA0003438477490001101
由表12可知，在使用与亚铁氰化物混合后可赋予比0.058V大的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，不添加螯合剂(柠檬酸三钠)的情况下的试剂空白与添加了螯合剂(柠檬酸三钠)的情况下的试剂空白大致相同。
[实施例9：pH和螯合剂种类的效果的长期稳定性的验证]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
50wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整pH，制备pH不同的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
调整为后述浓度的pH
(含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的pH)
pH6.5
pH7.0
pH7.5
pH8.0
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0，制备含有螯合剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
后述浓度的螯合剂
(包含在含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)中的螯合剂)
5mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造、简称EDTA)
5mmol/L乙二醇醚二胺四乙酸(同仁化学公司制造、简称EGTA)
5mmol/L N-(2-羟基乙基)亚氨基二乙酸(同仁化学公司制造、简称HIDA)
5mmol/L次氮基三(甲基膦酸)三钠盐(同仁化学公司制造、简称NTPO)
5mmol/L次氮基三乙酸(同仁化学公司制造、简称NTA)
5mmol/L反式-1,2-环己二胺-N,N,N,N-四乙酸一水合物(同仁化学公司制造、简称CyDTA)
5mmol/L亚氨基二乙酸(同仁化学公司制造、简称IDA)
5mmol/L二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸(同仁化学公司制造、简称DTPA)
5mmol/L 1,3-二氨基-2-丙醇-N,N,N’,N’-四乙酸(同仁化学公司制造、简称DPTA-OH)
5mmol/L葡萄糖酸钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L L(-)-苹果酸钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L琥珀酸(关东化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L水杨酸(Nacalai Tesque公司制造)
5mmol/L(+)-酒石酸钾(富士胶片和光纯药公司制造)
5mmol/L N-[三(羟基甲基)甲基]甘氨酸(同仁化学公司制造、简称Tricine)
5mmol/L N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(同仁化学公司制造、简称Bicine)
(样品)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物、含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)和(2)在5℃保存28天或1年。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)或(2)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(30)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (30)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(31)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (31)
设部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28、部分组合物保存1年后的灵敏度为ΔAbs365，如下述(32)式所示计算出ΔAbs28与ΔAbs365的比例，将其作为长期灵敏度残留率。将长期灵敏度残留率与部分组合物保存1年后的试剂空白的结果一并示于表13和图4。
长期灵敏度残留率(％)＝ΔAbs365÷ΔAbs28×100 (32)
[表13-1]
Figure BDA0003438477490001141
[表13-2]
Figure BDA0003438477490001151
由表13和图4可知，即使改变含有亚铁氰化物的液态部分组合物的pH，试剂空白的变化也很小。另外，即使改变添加到含有亚铁氰化物的液态部分组合物中的螯合剂的种类，试剂空白的变化也很小。
[实施例10：pH的效果的长期稳定性的验证]
(含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.6，制备含有Trinder’s试剂的液态部分组合物。
100mmol/L N-三(羟基甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(同仁化学公司制造)
0.05wt/vol％叠氮化钠(默克公司制造)
1mmol/L乙二胺四乙酸钠(国产化学公司制造)
6wt/vol％D(-)-山梨糖醇(富士胶片和光纯药公司制造)
2mmol/L N,N-双(4-磺基丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(同仁化学公司制造)
10U/mL过氧化酶(天野Enzyme公司制造)
30U/mL酮胺氧化酶(旭化成制药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有稳定剂的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
6.25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
后述浓度的稳定剂
(三试剂型：包含在含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)中的稳定剂)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％三亚甲基二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
62.5wt/vol％乙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
0.75wt/vol％2-羧基苯基硼酸(东京化成公司制造)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，调整为pH7.0或pH8.0，制备含有亚铁氰化物的液态部分组合物。另外制备作为pH8.0的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.5mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
5mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
(三试剂型：含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.0或pH8.0，制备含有4-氨基安替比林的液态部分组合物。另外制备作为调整为pH8.0的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
100mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
25mmol/L 4-氨基安替比林(Actec公司制造)
25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)(仅在调整为pH8.0时添加)
(三试剂型：含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)的制造)
将下述试剂成分按照所记载的浓度溶解在纯净水中，用氢氧化钠调整为pH7.5，制备作为含有1,2-丙二醇作为稳定剂的含有亚铁氰化物的液态部分组合物的含有柠檬酸三钠的部分组合物、以及不含有柠檬酸三钠的部分组合物。
250mmol/L 3,3-二甲基戊二酸(东京化成公司制造)
0.05wt/vol％ProClin300(Sigma-Aldrich公司制造)
0.125mmol/L亚铁氰化钾(国产化学公司制造)
625U/mL过氧化氢酶(Nagase chemteX公司制造)
50kU/mL糖化白蛋白用蛋白酶(旭化成制药公司制造、依据日本专利第4565807号中记载的方法得到。)
1.25mmol/L柠檬酸三钠(富士胶片和光纯药公司制造)
37.5wt/vol％1,2-丙二醇(富士胶片和光纯药公司制造)
(样品被测物)
准备以下的样品被测物。
管理血清L(旭化成制药公司制造)
管理血清H(旭化成制药公司制造)
(试剂保存)
将所制备的含有Trinder’s试剂的液态部分组合物、含有4-氨基安替比林的液态部分组合物、含有亚铁氰化物的液态部分组合物在5℃保存28天或1年。
(测定准备)
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(1)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(1)以4:1的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(1)。
将三试剂型的含有4-氨基安替比林的液态部分组合物(2)与含有亚铁氰化物的液态部分组合物(2)以1:4的容量比进行混合，制备用于测定的含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物(2)。
(测定步骤)
向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物180μL中添加样品被测物4.5μL，在37℃反应5分钟后，添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物45μL，进一步在37℃反应5分钟。测定从吸光度Abs1起到吸光度Abs2为止的吸光度变化，该吸光度Abs1是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物中添加样品被测物5分钟后的吸光度，该吸光度Abs2是向含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与样品被测物的混合液中添加含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物5分钟后的吸光度。由下述(33)式得到吸光度变化AC。
AC＝(Abs2)－(Abs1)×180/225 (33)
此处的180是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物的液量，225是指含有Trinder’s试剂的液态部分组合物与含有4-氨基安替比林和亚铁氰化物的液态部分组合物的总液量。
使用样品被测物测定出吸光度变化Acs，并将使用纯净水来代替样品被测物而测定出的吸光度变化作为试剂空白Acb，如下述(34)式所示，计算出由使用样品被测物测定出的吸光度变化Acs减去试剂空白的吸光度变化Acb而得到的值，将其作为灵敏度ΔAbs。
ΔAbs＝Acs－Acb (34)
设部分组合物保存28天后的灵敏度为ΔAbs28、部分组合物保存1年后的灵敏度为ΔAbs365，如下述(35)式所示计算出ΔAbs28与ΔAbs365的比例，将其作为长期灵敏度残留率。将长期灵敏度残留率与部分组合物保存1年后的试剂空白的结果一并示于表14。
长期灵敏度残留率(％)＝ΔAbs365÷ΔAbs28×100 (35)
[表14-1]
Figure BDA0003438477490001191
[表14-2]
Figure BDA0003438477490001192
[表14-3]
Figure BDA0003438477490001201
[表14-4]
Figure BDA0003438477490001202
[表14-5]
Figure BDA0003438477490001211
由表14可知，在使用在与亚铁氰化物混合后可赋予大于0.058V的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，即使pH大于7，试剂空白的变化也很小。另外，在使用在与亚铁氰化物混合后可赋予大于0.058V的亚铁氰化物的氧化还原电位的稳定剂时，即使添加螯合剂，试剂空白的变化也很小。

Claims (41)

1.一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，
至少所述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少所述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
2.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
3.如权利要求2所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
4.如权利要求1～3中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
5.如权利要求2所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
6.如权利要求1～3和5中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
7.如权利要求1～6中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的至少一者包含所述亚铁氰化物。
8.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物。
9.如权利要求1所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及所述亚铁氰化物。
10.如权利要求1～9中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述蛋白酶的稳定剂与所述亚铁氰化物混合后的所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
11.一种糖化蛋白质测定试剂，其至少包含Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、所述蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物，其中，
至少所述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少所述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
至少所述亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的蛋白酶的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
12.如权利要求11所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物、所述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
13.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
14.如权利要求11至13中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
15.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
16.如权利要求11至13和15中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物进一步包含糖化氨基酸氧化酶。
17.如权利要求12所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物进一步包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂。
18.如权利要求11至17中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述蛋白酶的稳定剂与所述亚铁氰化物混合后的所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
19.如权利要求11、12以及15中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物与所述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
20.如权利要求11至14中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物与所述含有亚铁氰化物的部分组合物混合后的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
21.如权利要求11、12以及17中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述蛋白酶的稳定剂的浓度为使所述亚铁氰化物的氧化还原电位大于0.058V的浓度。
22.如权利要求1～21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述氧化还原电位大于0.058V且为0.400V以下。
23.如权利要求1～22中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂选自由1,2-丙二醇、三亚甲基二醇、乙二醇和羧基苯基硼酸组成的组。
24.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的所述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
25.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为1,2-丙二醇，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述1,2-丙二醇的浓度为7.5wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
26.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的所述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
27.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为三亚甲基二醇，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述三亚甲基二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
28.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的所述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
29.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为乙二醇，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述乙二醇的浓度为40wt/vоl％以上80wt/vol％以下。
30.如权利要求1～16、19和20中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，所述含有4-氨基安替比林的部分组合物或所述含有Trinder’s试剂的部分组合物中的所述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
31.如权利要求11、12、17和21中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有亚铁氰化物的部分组合物包含所述蛋白酶的稳定剂，所述蛋白酶的稳定剂为2-羧基苯基硼酸，所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的所述2-羧基苯基硼酸的浓度为0.2wt/vоl％以上10wt/vol％以下。
32.如权利要求1～31中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述糖化蛋白质为糖化白蛋白。
33.如权利要求1～32中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其在2℃以上10℃以下进行保存。
34.如权利要求1～33中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述蛋白酶的稳定剂不包括二甲基亚砜。
35.如权利要求1～34中任一项所述的糖化蛋白质测定试剂，其中，所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含过氧化酶。
36.一种糖化蛋白质的测定方法，其包括：
使Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物与被测物接触的步骤；以及
对依赖于被测物中所存在的糖化蛋白质的显色进行检测的步骤，
至少在所述接触之前使所述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少在所述接触之前使所述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含所述亚铁氰化物，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
37.一种糖化蛋白质的测定方法，其包括：
使Trinder’s试剂、4-氨基安替比林、蛋白酶、蛋白酶的稳定剂以及亚铁氰化物与被测物接触的步骤；以及
对依赖于被测物中所存在的糖化蛋白质的显色进行检测的步骤，
至少在所述接触之前使所述Trinder’s试剂包含在含有Trinder’s试剂的部分组合物中，
至少在所述接触之前使所述4-氨基安替比林包含在含有4-氨基安替比林的部分组合物中，
至少在所述接触之前使所述亚铁氰化物包含在含有亚铁氰化物的部分组合物中，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物、所述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含所述蛋白酶和所述蛋白酶的稳定剂，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
38.一种糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
保存所述含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；以及
保存所述含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者进一步包含亚铁氰化物，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
39.一种糖化蛋白质测定试剂的保存方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
保存所述含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；
保存所述含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；
制备至少包含亚铁氰化物的含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤；以及
保存所述含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物、所述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
40.一种糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；以及
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物和所述含有4-氨基安替比林的部分组合物中的任一者包含亚铁氰化物，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
41.一种糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法，其包括：
制备至少包含Trinder’s试剂的含有Trinder’s试剂的部分组合物的步骤；
制备至少包含4-氨基安替比林的含有4-氨基安替比林的部分组合物的步骤；以及
制备至少包含亚铁氰化物的含有亚铁氰化物的部分组合物的步骤，
所述含有Trinder’s试剂的部分组合物、所述含有4-氨基安替比林的部分组合物以及所述含有亚铁氰化物的部分组合物中的任一者包含蛋白酶和蛋白酶的稳定剂，
所述蛋白酶的稳定剂是使所述亚铁氰化物与该蛋白酶的稳定剂混合后的氧化还原电位大于0.058V的稳定剂，
所述氧化还原电位是包含所述蛋白酶的稳定剂和所述亚铁氰化物、不包含糖化蛋白质的反应体系的氧化还原电位。
CN202080047610.0A 2019-07-01 2020-06-30 包含使亚铁氰化物的氧化还原电位增大的蛋白酶的稳定剂的糖化蛋白质测定试剂、糖化蛋白质的测定方法、糖化蛋白质测定试剂的保存方法以及糖化蛋白质测定试剂的稳定化方法 Pending CN114158267A (zh)

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