CN114252548B - 一种同时检测大七厘制剂中多成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药质量检测领域，具体涉及一种同时检测大七厘制剂中多成分的方法，该方法采用HPLC法分别对混合对照品溶液和供试品溶液进行含量测定和结果判断，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，理论板数按土大黄苷峰计算不低于4000；所述对照品溶液中含有松香酸、土大黄苷、龙血素B及11‑羰基‑β‑乙酰乳香酸。本发明建立了能同时检测大七厘制剂中多成分的方法，该方法分离效果好，重复性好、检出限低，快速准确、简便高效、成本低，可作为控制大七厘制剂掺伪掺假不规范投料的技术手段。
Description
技术领域
本发明属于中药质量检测领域，具体涉及一种同时检测大七厘制剂中多成分的方法。
背景技术
大七厘制剂包括大七厘散、大七厘片、大七厘胶囊及大七厘丸四种剂型，处方含有大黄、血竭、乳香、没药、土鳖虫、自然铜、骨碎补、当归尾、硼砂、三七、冰片十一味药，并全为原粉入药。近年来，由于商业利益的驱使，市场上出现了许多中药伪品，其中作为使用量大、使用范围广的大黄以及历史上一致依赖进口、用药紧缺的乳香、没药及血竭。蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎为中国药典规定的正品大黄，而同属波叶组植物华北大黄、天山大黄等则为伪品大黄，由于伪品大黄价格低廉，市场上常用来冒充正品大黄。研究显示，正品大黄不含土大黄苷，而伪品大黄含土大黄苷，在中国药典2020年版中对正品大黄的薄层色谱检查中，要求土大黄苷不得检出，是作为与正品大黄区别的特征性成分。血竭为重要南药，历史上一直依赖进口，是我国紧缺的药材之一，由于血竭和龙血竭在颜色、质地等外观性状特征极为相似，市场上以龙血竭冒充血竭或掺杂的情况时有发生，给药品的正确使用、日常检验和监管带来了一定的困难。研究表明，血竭和龙血竭在化学成分上有一定的差异，其中龙血素A、龙血素B主要存在龙血竭中，龙血素B为龙血竭的有效成分，而血竭主要含有血竭素等成分，不含龙血素B，因此，龙血素B可以作为龙血竭与血竭区别的特征性成分。乳香、没药、血竭均为树脂类药材，我国主要依靠进口来满足国内用药需求，由于用药量的增加，来源有限，价格较贵，市场上常有伪劣品出现，经市场调查，发现有以松香为主要原料加工成不同规格的伪品或掺伪品，以牟取暴利。松香为松树树脂蒸馏后的透明固形物，用作工业原料，主要成分为有机酸，其中松香酸含量很高，约为35%～60%，松香酸属萜类化合物，有小毒，对人体健康存在较大的危害，由于价格差异较大，乳香、没药、血竭中存在松香掺伪的现象，松香酸可以作为鉴别是否掺杂松香的检测指标。乳香中的乳香酸是抗炎、镇痛、抗免疫的主要有效成分，特别是11-羰基-β-乙酰乳香酸是乳香发挥活血止痛功能的主要成分，由于乳香药材市场价格高，为节约成本，生产中常出现乳香不按要求投料的情况，以11-羰基-β-乙酰乳香酸作为检测指标可以有效监控乳香投料情况。
大七厘制剂具有化瘀消肿，止痛止血的功效，多用于跌打损伤，瘀血疼痛，外伤止血等病症。虽然大七厘散、大七厘片、大七厘胶囊及大七厘丸四种剂型的现行标准各不相同，但均未对乳香进行质量控制，现行标准检测项目存在缺陷。大七厘制剂质量研究相关的报道很少，尤其是对大七厘制剂掺伪掺假不规范投料的研究，尚未见文献报道。目前，对于掺伪掺假的样品，仅按大七厘制剂现行标准的检验项目，还不能完全控制其质量，也不能辨别不规范投料情况。因此有必要研究建立采用HPLC法同时检测土大黄苷、龙血素B、松香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸的方法，作为控制大七厘制剂掺伪掺假不规范投料的技术手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种全新的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，本发明成功建立了能同时检测大七厘制剂中松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸的HPLC方法，该方法通过同时检测掺伪品和样品中的有效成分，可从正向和反向相结合的方式辨别样品不规范投料情况，检查样品中是否掺有松香、伪品大黄和龙血竭以及乳香投料问题，该方法可节约时间、成本低，体现了一法多检的高效性和实用性。通过建立该检测方法可有效弥补大七厘制剂现行标准检测项目的缺陷，解决质量控制盲点问题，防止掺伪掺假不规范投料行为，为打击掺伪掺假不规范投料行为提供新的检测手段。
本发明提供一种全新的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，采用HPLC法分别对混合对照品溶液和供试品溶液进行含量测定和结果判断，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，理论板数按土大黄苷峰计算不低于4000；所述对照品溶液中含有松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸。
本技术方案中通过优化HPLC色谱条件，成功建立了同时检测大七厘制剂中松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸的方法，该方法的色谱峰分离良好，峰型对称，通过正向和反向相结合的方式对大七厘制剂的原料投料进行严格控制，准确、高效，该方法可以有效防止掺伪掺假不规范投料行为，弥补了大七厘制剂现行标准检测项目的缺陷。
进一步地，上述技术方案中，所述梯度洗脱中，各时间段及流动相体积比分别为：
0-10min时，流动相A所占体积比从15%上升到35%，流动相B所占的体积比从85%下降到65%；
10-30min时，流动相A所占体积比从35%上升到50%，流动相B所占的体积比从65%下降到50%；
30-55min时，流动相A所占体积比从50%上升到90%，流动相B所占的体积比从50%下降到10%；
55-70min时，流动相A所占体积比为90%，流动相B所占的体积比为10%。
进一步地，上述技术方案中，所述HPLC的检测波长为分段波长，所述分段波长的转换方式为：0-25min时，波长为328nm；25-45min时，波长为280nm；45-70min时，波长为241nm。
本技术方案中，由于松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸紫外吸收波长不同，为使各峰的响应值都达到较大值，本发明采用检测波长转换方式进行检测。
优选地，HPLC法中柱温为30℃，流速为1.0 mL/min。
进一步地，上述技术方案中，所述结果判断的方法包括：（1）供试品溶液色谱中，在与松香酸、土大黄苷、龙血素B对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置不得出现相同的色谱峰，当出现保留时间相同的色谱峰时，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同；当吸收光谱相同时，则视为阳性检出；（2）供试品溶液中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量不得少于2.0mg/g，当检测结果少于2.0mg/g时，则视为乳香未按处方量投料。
进一步地，上述技术方案中，所述混合对照品溶液的制备方法为精密称取对照品松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，至于容量瓶中，加入甲醇制成含松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸的混合溶液，即为混合对照品溶液。
进一步地，上述技术方案中，所述供试品溶液的制备方法为精密称取经研细、混匀的大七厘制剂样品适量，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再次称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，得续滤液，即为供试品溶液。
进一步地，上述技术方案中，所述超声处理的功率为500W，频率为40kHz。
进一步地，上述技术方案中，所述松香酸、土大黄苷和龙血素B来源于不规范投料物，所述11-羰基-β-乙酰乳香酸为所述大七厘制剂的处方成分。本技术方案中，松香酸可能来源于松香；土大黄苷可能来源于华北大黄、天山大黄等伪品大黄；龙血素B可能来源于龙血竭，而上述物质均不是大七厘制剂的处方成分，加入后不仅减少处方成分的投入量，影响药效，还可能带来副作用。11-羰基-β-乙酰乳香酸是大七厘制剂的处方成分，即乳香的有效成分，乳香如不按处方量投料，必然会影响药效。因此，本发明通过同时检测上述四种成分，可用于监控样品中是否掺有松香、伪品大黄和龙血竭以及乳香投料情况，有效防止掺伪掺假不规范投料的现象。
进一步地，上述技术方案中，所述大七厘制剂为大七厘片、大七厘丸、大七厘胶囊、大七厘散中的任一种。
本发明还提供一种同时检测大七厘制剂中多成分的方法在大七厘制剂质量检测中的应用。
相对于现有技术的有益效果：
1.本发明通过优化HPLC色谱条件，成功建立了同时检测大七厘制剂中松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸的方法，所采用的色谱条件分离效果好，峰型对称，干扰小，检测结果重复性好、检出限低。
2.本发明检测方法能够通过正向和反向相结合的方式对大七厘制剂的原料投料进行严格控制，可以有效防止掺伪、掺假、少投料等不规范投料的现象。
3.本发明检测方法快速准确、简便高效、成本低，实现了一法多检，将该检测方法应用于大七厘制剂的质量检测中，可有效弥补大七厘制剂现行标准检测项目的缺陷，解决大七厘制剂质量控制盲点的问题，为打击掺伪掺假不规范投料行为提供新的检测手段。
附图说明
图1为本发明土大黄苷吸收光谱图；
图2为本发明龙血素B吸收光谱图；
图3为本发明松香酸吸收光谱图；
图4为本发明11-羰基-β-乙酰乳香酸吸收光谱图；
图5为本发明混合对照品HPLC色谱图；
图6为本发明土大黄苷对照品HPLC色谱图；
图7为本发明龙血素B对照品HPLC色谱图；
图8为本发明松香酸对照试剂HPLC色谱图；
图9为本发明11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品HPLC色谱图；
图10为本发明大七厘片样品（批号：200602）HPLC色谱图；
图11为本发明大七厘丸样品（批号：20190601）HPLC色谱图；
图12为本发明大七厘散样品（批号：191101）HPLC色谱图；
图13为本发明大七厘胶囊样品（批号：01-200302）HPLC色谱图。
具体实施方式
本发明的上述各项技术特征和在下文（如实施案例）中具体描述的各项技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案，但本发明不仅仅局限于这些实施例，同样这些实施例也不以任何方式限制本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例涉及的制剂若无特别说明，均为普通市售品，皆可通过市场购买获得。
下面结合图示和实施例对本发明作进一步详细描述：
实验仪器和材料：
1.仪器
安捷伦1260型高效液相色谱仪（配DAD检测器），Agilent ChemStation for LCSystems色谱工作站；CAPCELL PAK C18（250mm×4.60mm,5μm）色谱柱。
BT25S型赛多利斯电子天平、ML204型梅特勒托利多电子天平、KQ-500E型超声波清洗器。
2.材料
松香酸对照试剂（批号：111938-201902）、土大黄苷对照品（批号：110794-201909）、龙血素B对照品（批号：111558-200303）、11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品（批号：111760-201502）均购于中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
实施例1：色谱条件和检测波长的确定
1.溶液的制备
1.1 混合对照品溶液的制备
精密称取对照品松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，至于容量瓶中，加入甲醇制成含松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸分别为3.8μg/mL、10.06μg/mL、10.0μg/mL和3.972μg/mL的混合溶液，即为混合对照品溶液。
1.2 供试品溶液的制备
精密称取经研细、混匀的大七厘制剂样品适量，置于具塞锥形瓶中，精密加入25mL的甲醇溶液，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再次称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，得续滤液，即为供试品溶液。其中，取大七厘片20片，研细，取约0.6g；或取大七厘丸适量，研细，取约0.7g；或取大七厘胶囊内容物，研细，取约0.5g，或取大七厘散内容物，混匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶25mL，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1.3 单标对照品溶液的制备
精密称取对照品松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，分别至于不同容量瓶中，加入甲醇制成含松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸分别为3.8μg/mL、18.95μg/mL、68.9μg/mL和8.04μg/mL的单标对照品溶液，即得。
2.色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为CAPCELL PAK C18（250mm×4.60mm,5μm）；以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B；进行梯度洗脱；检测波长分段进行波长转换；柱温为30℃，理论板数按土大黄苷峰计算应不低于4000。
梯度洗脱程序为：0-10min时，流动相A所占体积比从15%上升到35%，流动相B所占的体积比从85%下降到65%；
10-30min时，流动相A所占体积比从35%上升到50%，流动相B所占的体积比从65%下降到50%；
30-55min时，流动相A所占体积比从50%上升到90%，流动相B所占的体积比从50%下降到10%；
55-70min时，流动相A所占体积比为90%，流动相B所占的体积比为10%。
检测波长为波长转换，转换方式为：0-25min时，波长为328nm；25-45min时，波长为280nm；45-70min时，波长为241nm。
进样量为10μL；流速为1.0 mL/min。
3.条件优化
3.1检测波长的选择
由于中药成分的复杂性和多样性，不同化学成分的紫外吸收波长不同。在可见-紫外分光光度计上于200-400 nm扫描4种成分对照品的紫外吸收图谱，土大黄苷最大吸收波长为328nm、龙血素B最大吸收波长为280nm、松香酸及11-羰基-β-乙酰乳香酸最大吸收波长为241nm，各吸收光谱图分别如图1-4所示，这与《中国药典》等标准中收载的相应对照品的最大吸收波长基本一致。在高效液相色谱仪上当采用某一固定波长进行检测时，其它3种成分均不位于最大吸收波长处，无法予以准确定量。本发明在前期研究基础上，结合各组分出峰先后在不同时间段运用波长切换法设置参数，分别选定0-25min测定波长为328nm、25-45min测定波长为280nm、45-70min测定波长为241nm的波长转换方式进行检测，可使4个成分均在其最大吸收波长处检测，提高了同时测定的准确性。
3.2流动相的选择
在考察流动相时，比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液系统的分离效果，在恒定比例条件下四种流动相均不能有效分离待测成分。当采用上述“2.色谱条件”中洗脱程序梯度洗脱时，以甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸溶液做流动相的系统，4个成分分离效果均较差，且杂质峰多；以乙腈-水做流动相的系统，虽然松香酸和11-羰基β-乙酰乳香酸分离效果相对较好，但是土大黄苷和龙血素B分离效果相对较差；而以乙腈-0.1%甲酸溶液做流动相的系统能较好的将土大黄苷、龙血素B、松香酸及11-羰基-β-乙酰乳香酸与相邻的杂质峰分离，分离效果明显优于前述三种流动相。因此，最终确定以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱，在该色谱条件下，各色谱峰分离良好，峰形较好，其色谱图如图5-9所示。
3.3提取条件的优化
对供试品含量测定方法中提取溶剂的种类、提取时间和溶剂用量进行了优化。
取大七厘片（批号：200905）20片，研细，取约0.6g；精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入乙醇、甲醇、50%甲醇各25mL，其它按“1.2”所述方法制备，按照“2.色谱条件”进行测定，考察了提取溶剂对测定的影响，结果显示甲醇的提取效率优于乙醇和50%甲醇，且杂质峰较少，故最终选择甲醇为提取溶剂。
取大七厘片（批号：200905）粉末，各约0.6g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入甲醇10mL、25mL、50mL，其它按“1.2”所述方法制备，按照“2.色谱条件”进行测定，进一步考察了提取时间和溶剂用量对测定的影响，结果显示当提取时间超过30min，溶剂体积大于25mL时，被测成分含量不再增加。因此，最终确定了供试品含量测定的提取条件为甲醇25mL，超声提取30min。
实施例2：方法验证
1.标准曲线的制备
1.1 土大黄苷标准曲线
精密称取土大黄苷对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含土大黄苷4.02、8.05、10.06、20.12、33.53μg的系列溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按照实施例1“2.色谱条件”进行分析，分别测定各自峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）；计算回归方程，Y=3775.5X+14.371，r2=0.9993，测定结果如表1所示。
表1 土大黄苷线性关系测定结果
结果表明，土大黄苷在0.04024～0.3353μg之间呈良好的线性关系。
1.2 龙血素B标准曲线
精密称取龙血素B对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含龙血素B 4、8、10、20、33.33μg的系列溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按照实施例1中“2.色谱条件”进行分析，分别测定各自峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）；计算回归方程，Y=2571.1X+6.2706，r2=0.9993，测定结果如表2所示。
表2 龙血素B线性关系测定结果
结果表明，龙血素B在0.04～0.3333μg之间呈良好的线性关系。
1.3 松香酸标准曲线
精密称取松香酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含松香酸1.52、3.04、3.8、7.6、12.67μg的系列溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按照实施例1“2.色谱条件”进行分析，分别测定各自峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）；计算回归方程，Y=5053.6X+3.8340，r2=0.9993，测定结果如表3所示。
表3 松香酸线性关系测定结果
结果表明，松香酸在0.0152～0.1267μg之间呈良好的线性关系。
1.4 11-羰基-β-乙酰乳香酸标准曲线
精密称取11-羰基-β-乙酰乳香酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含11-羰基-β-乙酰乳香酸1.589、3.178、3.972、7.944、13.24μg的系列溶液，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按照实施例1“2.色谱条件”进行分析，分别测定各自峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）；计算回归方程，Y=1160.1X+0.1136，r2=0.9995，测定结果如表4所示。
表4 11-羰基-β-乙酰乳香酸线性关系测定结果
结果表明，11-羰基-β-乙酰乳香酸在0.01589～0.1324μg之间呈良好的线性关系。
2.精密度试验
取每1mL含土大黄苷10.06μg、龙血素B 10.0μg、松香酸3.8μg、11-羰基-β-乙酰乳香酸3.972μg的混合对照品溶液，按照实施例1中测定方法进行分析，重复进样6次，结果如表5所示。
表5 精密度试验结果
结果表明，该方法测定对照品中各成分精密度良好。
3.重复性试验
取大七厘片（批号：200905）5份, 按照实施例1中测定方法进行分析，将样品重复测定5次，结果如表6所示。
表6 重复性试验结果
结果表明，该方法测定样品各成分重复性良好。
4.稳定性试验
取每1mL含土大黄苷10.06μg、龙血素B 10.0μg、松香酸3.8μg、11-羰基-β-乙酰乳香酸3.972μg的混合对照品溶液，按照实施例1测定方法进行分析，分别每隔一定时间进样一次，结果如表7所示。
表7 稳定性试验结果
结果表明，上述四种组分在49h内峰面积无明显变化，表明该测定方法稳定性良好。
5.回收率试验
采用加样回收试验，精密量取已知含量的大七厘片（批号：200905，土大黄苷含量：0.05613mg/g、龙血素B含量：0mg/g、松香酸含量：0.1473mg/g、11-羰基-β-乙酰乳香酸含量：2.3141mg/g）,研细，取6份，每份约0.3g，分别精密加入每1ml含土大黄苷0.944μg、龙血素B4.52μg、松香酸1.804μg、11-羰基-β-乙酰乳香酸3.388μg的混合对照品溶液25mL，按照实施例1的测定方法进行试验，并计算回收率，结果如表8-11所示。
表8 土大黄苷回收率试验结果
表9 龙血素B回收率试验结果
表10 松香酸回收率试验结果
表11 11-羰基-β-乙酰乳香酸回收率试验结果
结果表明，各成分所得回收率在98.83-101.69%之间，说明该方法准确度良好。
6.方法检出限
取实施例1所制备的混合对照品溶液稀释至不同浓度，进行测定，以信噪比3:1为检出限。土大黄苷、龙血素B、松香酸、11-羰基-β-乙酰乳香酸方法检出限分别为0.034mg/g、0.042mg/g、0.026mg/g、0.028mg/g。可见，该方法可检测出低含量的上述各成分，检出限低，效果好。
实施例4：样品测定
1.色谱条件及供试品溶液制备
与实施例1色谱条件及供试品溶液制备方法相同。
2.样品含量测定
取22批大七厘制剂供试品溶液，进行HPLC测定，记录峰面积，计算各待测成分的含量，含量检测结果如表12所示。其中，批号为200602样品HPLC色谱图如图10所示，批号为20190601样品HPLC色谱图如图11所示，批号为191101样品HPLC色谱图如图12所示，批号为01-200302样品HPLC色谱图如图13所示。
3.结果判断
（1）供试品色谱中，在与松香酸、土大黄苷、龙血素B对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置不得出现相同的色谱峰。若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同；若吸收光谱相同，则视为阳性检出。
（2）供试品中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量不得少于2.0mg/g，若少于2.0mg/g，则视为乳香未按处方量投料，其中判断结果如表12所示。
表12 22批样品含量测定结果及判断（mg/g)
从样品检测结果可以看出，批号为20190601的大七厘丸，批号为191101、191102、191104的大七厘散检出土大黄苷，说明上述样品掺有伪品大黄；批号为20190601、20181005、20190307的大七厘丸检出龙血素B，说明上述样品掺有龙血竭；批号为20181003的大七厘丸、批号为200602、200905的大七厘片检出松香酸，说明上述样品掺有松香；批号为01-200302、01-200303、01-191001、01-191002、01-191102、01-191201的大七厘胶囊均未检出11-羰基-β-乙酰乳香酸，说明处方中乳香未投料；批号为200602的大七厘片中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量偏低，说明乳香未按处方量投料，存在少投料情况。同样，从图10-13也可以看出，批号为200602的大七厘片中含有松香酸，但11-羰基-β-乙酰乳香酸峰面积明显偏小；批号为20190601的大七厘丸中含有土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸；批号为191101的大七厘散中含有土大黄苷和11-羰基-β-乙酰乳香酸；批号为01-20032的大七厘胶囊中不含有土大黄苷、龙血素B、松香酸和11-羰基-β-乙酰乳香酸。
由于对于掺伪掺假的样品，仅按大七厘制剂现行标准的检验项目，还不能完全控制其质量，因此，通过建立本发明能同时检测大七厘制剂中松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸的HPLC方法，可有效弥补大七厘制剂现行标准检测项目的缺陷，解决大七厘制剂质量控制盲点的问题，为有力打击掺伪掺假不规范投料行为提供新的检测手段；该检测方法分离效果好，检测结果重复性好、检出限低，快速准确、简便高效、成本低，可作为控制大七厘制剂掺伪掺假不规范投料的技术手段。
最后需要强调的是，以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种变化和更改，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，采用HPLC法分别对混合对照品溶液和供试品溶液进行含量测定和结果判断，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱和分段波长转换方式进行检测，其中理论板数按土大黄苷峰计算不低于4000；所述对照品溶液中含有松香酸、土大黄苷、龙血素B及11-羰基-β-乙酰乳香酸；
所述梯度洗脱中，各时间段及流动相体积比分别为：
0-10min时，流动相A所占体积比从15%上升到35%，流动相B所占的体积比从85%下降到65%；
10-30min时，流动相A所占体积比从35%上升到50%，流动相B所占的体积比从65%下降到50%；
30-55min时，流动相A所占体积比从50%上升到90%，流动相B所占的体积比从50%下降到10%；
55-70min时，流动相A所占体积比为90%，流动相B所占的体积比为10%；
所述HPLC的检测波长为分段波长，所述分段波长的转换方式为：0-25min时，波长为328nm；25-45min时，波长为280nm；45-70min时，波长为241nm；
所述大七厘制剂为大七厘片、大七厘丸、大七厘胶囊、大七厘散中的任一种。
2.根据权利要求1所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，所述结果判断的方法包括：（1）供试品溶液色谱中，在与松香酸、土大黄苷、龙血素B对照品溶液色谱峰保留时间相应的位置不得出现相同的色谱峰，当出现保留时间相同的色谱峰时，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同；当吸收光谱相同时，则视为阳性检出；（2）供试品溶液中11-羰基-β-乙酰乳香酸含量不得少于2.0mg/g，当检测结果少于2.0mg/g时，则视为乳香未按处方量投料。
3.根据权利要求1所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，所述混合对照品溶液的制备方法为精密称取对照品松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸适量，置于容量瓶中，加入甲醇制成含松香酸、土大黄苷、龙血素B和11-羰基-β-乙酰乳香酸的混合溶液，即为混合对照品溶液。
4.根据权利要求1所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为精密称取经研细、混匀的大七厘制剂样品适量，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶液，密塞，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再次称定重量，用甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，得续滤液，即为供试品溶液。
5.根据权利要求4所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，所述超声处理的功率为500W，频率为40kHz。
6.根据权利要求1所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法，其特征在于，所述松香酸、土大黄苷和龙血素B来源于不规范投料物，所述11-羰基-β-乙酰乳香酸为所述大七厘制剂中的处方成分。
7.根据权利要求1-6任一项所述的同时检测大七厘制剂中多成分的方法在大七厘制剂质量检测中的应用。
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