CN115777538B - 一种棉花短周期培育方法 - Google Patents
一种棉花短周期培育方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115777538B CN115777538B CN202211560008.4A CN202211560008A CN115777538B CN 115777538 B CN115777538 B CN 115777538B CN 202211560008 A CN202211560008 A CN 202211560008A CN 115777538 B CN115777538 B CN 115777538B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- culturing
- malformed
- seedlings
- embryoid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 title claims abstract description 47
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 44
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 33
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 21
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 7
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- GFHNAMRJFCEERV-UHFFFAOYSA-L cobalt chloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Co+2] GFHNAMRJFCEERV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 7
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 7
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 7
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 7
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 claims description 7
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 7
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims description 7
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims description 7
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 5
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 37
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 34
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008117 seed development Effects 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及棉花培育技术领域，提出了一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：步骤A、取样：将畸形苗挑选作为样品；步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1‑2个月直至40‑60％的畸形苗长出胚性愈伤组织；步骤C、培育胚状体：将胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1～2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至都发育成胚状体；步骤D、培育正常植株：对胚状体继续培养2‑3个月，直至25‑35％的胚状体长成正常植株；步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D，其余畸形苗淘汰。通过上述技术方案，解决了相关技术中愈伤组织成苗率低问题。
Description
技术领域
本发明涉及棉花培育技术领域，具体的，涉及一种棉花短周期培育方法。
背景技术
棉花是世界上最重要的天然纤维作物，在人类的衣食活动中具有无可替代的地位，随着纺纱技术的不断改进和人们生活水平的提高，对棉花纤维品质尤其是纤维强度提出了更高的要求。棉花是我国的第一大经济作物，在国民经济中占有很重要的地位，棉纤维是一种重要的纺织原料，棉籽油和棉籽蛋白是重要的植物油料和蛋白质资源。随着我国经济的迅速发展和人民生活水平的提高，对棉花的需求日益增加。
植物组织培养技术是在无菌条件下，将外植体培养在培养基中，提供培养条件，使其成为完成植株的过程。因此，这项技术可为植物遗传转化提供丰富的受体材料。组织培养广泛应用于快繁、人工种子、新物种培养等领域，作为植物基础基因工程研究的基本途径和重要手段，在植物基因工程改良领域发挥着不可替代的作用。
棉花组织培养植株再生主要是以诱导胚状体出现为主，棉花的胚状体发生是从无菌苗的胚根、子叶、下胚轴或原生质体经过诱导愈伤组织、愈伤组织分化、体细胞胚胎发育而生成再生植株的过程。胚体愈伤的生理状态相对比较一致，所以能为研究提供稳定的材料来源。但是，在愈伤组织的培育中不可避免的会出现畸形苗，由于畸形苗个体发育不良，很难生长为健壮幼苗，因此通常会在观察到有畸形苗产生的时候，就会将畸形苗挑拣出来扔掉。由于畸形苗的产生，导致了愈伤组织存在成苗率低的问题，并且在论文《棉花体细胞胚胎发生机制研究及p53基因的遗传转化》中通过培养畸形苗获得了再生苗，但未写明具体的技术方案和培养条件及时间。
发明内容
本发明提出一种棉花短周期培育方法，解决了相关技术中愈伤组织成苗率低问题。
本发明的技术方案如下：一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品，如图2-A所示；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60％的畸形苗长出胚性愈伤组织，如图2-B所示，室内温度控制在25-28℃，室内湿度控制在45-60％，室内光照时间为12-14h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80％左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体，如图2-C所示；
步骤D、培育正常植株：在步骤C上对胚状体继续培养2-3个月，直至25-35％的胚状体长成正常植株，如图2-D所示；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D。
作为进一步的技术方案，所述棉花幼胚培养基包括以下重量份组分：825份硝酸铵、950份硝酸钾、95份硫酸镁、85份磷酸二氢钾、165份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、20份脯氨酸、500份谷氨酰胺、20000份蔗糖、2500份Phytagel、0.1份IBA、0.1份KT、0.1份6-BA。
作为进一步的技术方案，所述胚成熟培养基包括以下重量份组分：3800份硝酸钾、190份硫酸镁、170份磷酸二氢钾、330份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、500份谷氨酰胺、500份天冬酰胺、30000份葡萄糖、2600份Phytagel、0.3～0.5份IBA、0.1～0.15份KT。
本发明的有益效果为：
1、将棉花培育过程中产生的畸形苗应用于本发明提供的培育方法中，由于能将一部分畸形苗培育成正常苗，因此，降低了实验室在棉花幼苗方面的成本；
2、畸形苗经过本发明中的方法发育成愈伤组织，然后再经过培育发育成正常植株，大大缩短了棉花整个培育周期，避开了棉花从种子发育到愈伤组织的阶段，进而缩短了本发明的培育方法中提到的正常植株的生长周期，能为实验室在短期内提供大量的正常植株；
3、本发明提供的培育方法可以将自身方法中产生的畸形苗进行重复利用，也进一步降低了常规培育方法中的畸形苗用量，能对畸形苗进行一轮筛选，确保每个畸形苗都可以得到充足的发育成正常植株。
本发明还由此方法为借鉴，在通过农杆菌侵染下胚轴进行遗传转化获得转基因过表达再生植株的过程中，利用此方法可成倍增加转基因再生植株的数量。由此方法为借鉴，在通过农杆菌侵染下胚轴进行遗传转化获得基因编辑或RNAi再生植株的过程中，利用此方法可成倍增加基因编辑或RNAi植株的数量。对于棉花转化周期长的特点，获得过表达和基因编辑再生植株数量的增加尤为重要。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明提供的棉花常规培育方法中各个阶段的结构示意图；
图2为本发明提供一种棉花短周期培训方法中各个阶段的结构示意图；
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提出了一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品，如图2-A所示；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60％的畸形苗长出胚性愈伤组织，如图2-B所示，室内温度控制在25-28℃，室内湿度控制在45-60％，室内光照时间为12-14h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80％左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体，如图2-C所示；
步骤D、培育正常植株：在步骤C上对胚状体继续培养2-3个月，直至25-35％的胚状体长成正常植株，如图2-D所示；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D。
对比例1
本对比例提出了一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60％的畸形苗长出胚性愈伤组织，室内温度控制在25-28℃，室内湿度控制在45-60％，室内光照时间为3-4h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80％左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体；
步骤D、培育正常植株：在步骤C上对胚状体继续培养2-3个月，直至25-35％的胚状体长成正常植株；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D。
对比例2
本对比例提出了一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60％的畸形苗长出胚性愈伤组织，室内温度控制在25-28℃，室内湿度控制在70-80％，室内光照时间为12-14h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80％左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体；
步骤D、培育正常植株：在步骤C上对胚状体继续培养2-3个月，直至25-35％的胚状体长成正常植株；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D。
对比例3
本对比例提出了一种棉花短周期培育方法，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60％的畸形苗长出胚性愈伤组织，室内温度控制在20-22℃，室内湿度控制在45-60％，室内光照时间为12-14h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80％左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体；
步骤D、培育正常植株：在步骤C上对胚状体继续培养2-3个月，直至25-35％的胚状体长成正常植株；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D。
在实施例1、对比例1、对比例2和对比例3中随机选择10株步骤D中的正常植株，并依次标号为1-1、1-2直至4-10，然后测量植株的茎长和真叶的叶面积并记录，最终形成表一和表二：
表一：
| 序号 | 茎长(cm) | 序号 | 茎长(cm) | 序号 | 茎长(cm) | 序号 | 茎长(cm) |
| 1-1 | 7.5 | 2-1 | 4.3 | 3-1 | 4.9 | 4-1 | 4.2 |
| 1-2 | 8.2 | 2-2 | 4.2 | 3-2 | 4.7 | 4-2 | 4.1 |
| 1-3 | 8.1 | 2-3 | 3.9 | 3-3 | 5.1 | 4-3 | 3.3 |
| 1-4 | 7.9 | 2-4 | 4.1 | 3-4 | 4.7 | 4-4 | 3.4 |
| 1-5 | 8.3 | 2-5 | 3.7 | 3-5 | 5.2 | 4-5 | 3.5 |
| 1-6 | 8.2 | 2-6 | 3.8 | 3-6 | 5.1 | 4-6 | 3.9 |
| 1-7 | 7.6 | 2-7 | 3.9 | 3-7 | 5.3 | 4-7 | 4.3 |
| 1-8 | 7.9 | 2-8 | 4.0 | 3-8 | 5.1 | 4-8 | 3.4 |
| 1-9 | 7.7 | 2-9 | 4.1 | 3-9 | 4.8 | 4-9 | 4.0 |
| 1-10 | 7.8 | 2-10 | 3.8 | 3-10 | 4.6 | 4-10 | 4.1 |
从表一可以看出，实施例1培养出的正常植株的茎长要大于对比例1、对比例2和对比例3的茎长，这就表明实施例1提供的方法能提高畸形苗发育成正常植株的成功率。
表二：
从表二可以看出，实施例1培养出的正常植株的的真叶叶面积要大于对比例1、对比例2和对比例3的真叶叶面积，这也就表明实施例1提供的方法能使畸形苗发育成的正常植株更具有活力，也相对更容易生存下来，更符合对棉花的短周期的培育构思。
图2是畸形苗使用本发明提供的方法从畸形苗发育成正常植株的过程。其中，(A)表示褐色的畸形苗在胚成熟培养基中的状态，(B)表示畸形苗长出黄绿色、颗粒状的胚性愈伤组织的状态，(C)表示胚性愈伤组织发育成类似胚胎的胚状体的状态，(D)表示胚状体发育成正常植株的状态。
图1是棉花在常规培育方法中的各个阶段。其中，棉花的常规培育方法为：种植无菌苗(A)生长5-6天，将下胚轴切段置于愈伤诱导培养基一上(B)，1个月后转到愈伤诱导培养基二上，4-5个月20％左右的下胚轴长出胚性愈伤组织(C)，将胚性愈伤组织置于胚成熟培养基上，2-3个月80％左右的胚性愈伤组织长出胚状体(D)，2-3个月30％左右的胚状体能够长成正常植株(E)。
进一步，所述愈伤诱导培养基一包括以下重量份组分：1650份硝酸铵、1900份硝酸钾、190份硫酸镁、170份磷酸二氢钾、330份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、500份谷氨酰胺、500份天冬酰胺、30000份葡萄糖、2600份Phytagel、0.1份2,4-D、0.1份KT。
进一步，所述愈伤诱导培养基二包括以下重量份组分：1650份硝酸铵、1900份硝酸钾、190份硫酸镁、170份磷酸二氢钾、330份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、500份谷氨酰胺、500份天冬酰胺、30000份葡萄糖、2600份Phytagel、0.5份IBA、0.1份KT。
进一步，所述胚成熟培养基包括以下重量份组分：3800份硝酸钾、190份硫酸镁、170份磷酸二氢钾、330份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、500份谷氨酰胺、500份天冬酰胺、30000份葡萄糖、2600份Phytagel、0.1～0.5份IBA、0.1～0.15份KT。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种棉花短周期培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A、取样：将棉花培育过程中产生的畸形苗挑选出来作为样品；
步骤B、诱导胚性愈伤组织：将畸形苗放入到胚成熟培养基进行诱导培养生长，培养1-2个月直至40-60%的畸形苗长出胚性愈伤组织，室内温度控制在25-28℃，室内湿度控制在45-60%，室内光照时间为12-14h；
步骤C、培育胚状体：将挑选出的胚性愈伤组织放入棉花幼胚培养基上培养1-2个月，然后转入胚成熟培养基进行培养生长，直至80%左右的胚性愈伤组织都发育成胚状体；
步骤D、培育正常植株：对步骤C的胚状体继续培养2-3个月，直至25-35%的胚状体长成正常植株；
步骤E、将步骤D中带有绿芽的畸形苗挑选出来与常规培育的畸形苗混合并重复步骤A、步骤B、步骤C和步骤D；
所述棉花幼胚培养基包括以下重量份组分：825份硝酸铵、950份硝酸钾、95份硫酸镁、85 份磷酸二氢钾、165份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、20份脯氨酸、500份谷氨酰胺、20000份蔗糖、2500份Phytagel、0.1份IBA、0.1份KT、0.1份6-BA；
所述胚成熟培养基包括以下重量份组分：3800份硝酸钾、190份硫酸镁、170份磷酸二氢钾、330份氯化钙、6.2份硼酸、16.9份一水合硫酸锰、8.6份七水合硫酸锌、0.025份六水合氯化钴、0.025份五水合硫酸铜、0.83份碘化钾、0.25份二水合钼酸钠、13.9份七水合硫酸亚铁、37.26份Na2EDTA、10份硫胺素、1份盐酸吡哆醇、1份烟酸、1份甘氨酸、50份肌醇、500份谷氨酰胺、500份天冬酰胺、30000份葡萄糖、2600份Phytagel、0.3~0.5份IBA、0.1~0.15份KT。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211560008.4A CN115777538B (zh) | 2022-12-07 | 2022-12-07 | 一种棉花短周期培育方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211560008.4A CN115777538B (zh) | 2022-12-07 | 2022-12-07 | 一种棉花短周期培育方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115777538A CN115777538A (zh) | 2023-03-14 |
| CN115777538B true CN115777538B (zh) | 2023-08-29 |
Family
ID=85417517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211560008.4A Active CN115777538B (zh) | 2022-12-07 | 2022-12-07 | 一种棉花短周期培育方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115777538B (zh) |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994001999A1 (en) * | 1992-07-23 | 1994-02-03 | Carlsberg Forskningscenter | Plant tissue culture method of regeneration and procedures for isolating protoplasts |
| KR20000056500A (ko) * | 1999-02-22 | 2000-09-15 | 윤의수 | 가시오갈피의 세포현탁배양에 의한 체세포배 형성과 식물체의 대량 생산 방법 |
| WO2005063002A1 (en) * | 2003-12-31 | 2005-07-14 | Council Of Scientific And Industrial Research | A tissue culture process for producing cotton plants |
| CN100998317A (zh) * | 2006-11-13 | 2007-07-18 | 新疆农业科学院微生物应用研究所 | 一种棉花上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的技术及崭首的上胚轴外植体 |
| CN101779598A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-07-21 | 河北省农林科学院谷子研究所 | 一种建立优良玉米自交系农系531高效再生体系的方法 |
| CN102405835A (zh) * | 2011-08-23 | 2012-04-11 | 中国农业大学 | 一种高效诱导棉花体胚发生与植株再生的方法及其培养基 |
| CN104726489A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 陕西师范大学 | 农杆菌介导的活体幼胚转化获得转基因棉花的方法 |
| CN105802901A (zh) * | 2014-12-29 | 2016-07-27 | 新疆农业大学 | 用于制备棉花胚性愈伤组织的培养基、试剂盒及其用途 |
| CN108575751A (zh) * | 2018-05-02 | 2018-09-28 | 中国农业科学院棉花研究所 | 棉花胚性愈伤组织与胚状体的培养方法 |
| CN110521590A (zh) * | 2018-05-25 | 2019-12-03 | 中国农业科学院棉花研究所 | 棉花遗传转化中产生正常苗的培养基及方法 |
| CN112273234A (zh) * | 2020-11-10 | 2021-01-29 | 上海市农业科学院 | 一种桃胚挽救过程中畸形苗转化成正常植株的方法 |
| WO2021057206A1 (zh) * | 2019-09-23 | 2021-04-01 | 江苏农林职业技术学院 | 一种通过种子组培快繁空气凤梨的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0006247D0 (en) * | 2000-03-15 | 2000-05-03 | Zeneca Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US20040009601A1 (en) * | 2002-07-15 | 2004-01-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for the regeneration and transformation of cotton |
| BR122017020958B1 (pt) * | 2007-05-08 | 2022-05-10 | Monsanto Technology Llc | Métodos para melhorar a eficiência da regeneração de planta de algodão |
-
2022
- 2022-12-07 CN CN202211560008.4A patent/CN115777538B/zh active Active
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994001999A1 (en) * | 1992-07-23 | 1994-02-03 | Carlsberg Forskningscenter | Plant tissue culture method of regeneration and procedures for isolating protoplasts |
| KR20000056500A (ko) * | 1999-02-22 | 2000-09-15 | 윤의수 | 가시오갈피의 세포현탁배양에 의한 체세포배 형성과 식물체의 대량 생산 방법 |
| WO2005063002A1 (en) * | 2003-12-31 | 2005-07-14 | Council Of Scientific And Industrial Research | A tissue culture process for producing cotton plants |
| CN100998317A (zh) * | 2006-11-13 | 2007-07-18 | 新疆农业科学院微生物应用研究所 | 一种棉花上胚轴离体培养直接多芽发生再生植株的技术及崭首的上胚轴外植体 |
| CN101779598A (zh) * | 2010-01-19 | 2010-07-21 | 河北省农林科学院谷子研究所 | 一种建立优良玉米自交系农系531高效再生体系的方法 |
| CN102405835A (zh) * | 2011-08-23 | 2012-04-11 | 中国农业大学 | 一种高效诱导棉花体胚发生与植株再生的方法及其培养基 |
| CN105802901A (zh) * | 2014-12-29 | 2016-07-27 | 新疆农业大学 | 用于制备棉花胚性愈伤组织的培养基、试剂盒及其用途 |
| CN104726489A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 陕西师范大学 | 农杆菌介导的活体幼胚转化获得转基因棉花的方法 |
| CN108575751A (zh) * | 2018-05-02 | 2018-09-28 | 中国农业科学院棉花研究所 | 棉花胚性愈伤组织与胚状体的培养方法 |
| CN110521590A (zh) * | 2018-05-25 | 2019-12-03 | 中国农业科学院棉花研究所 | 棉花遗传转化中产生正常苗的培养基及方法 |
| WO2021057206A1 (zh) * | 2019-09-23 | 2021-04-01 | 江苏农林职业技术学院 | 一种通过种子组培快繁空气凤梨的方法 |
| CN112273234A (zh) * | 2020-11-10 | 2021-01-29 | 上海市农业科学院 | 一种桃胚挽救过程中畸形苗转化成正常植株的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 陆地棉体细胞植株再生过程中的体胚苗变异新类型;迟吉娜等;《中国农学通报》;第21卷(第04期);第59-61页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115777538A (zh) | 2023-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4665030A (en) | Process for regenerating corn | |
| CN101779598B (zh) | 一种建立优良玉米自交系农系531再生体系的方法 | |
| CN102124954A (zh) | 红叶石楠离体叶片体细胞胚诱导快繁培养基 | |
| CN108243960B (zh) | 无种质基因型限制的高频体胚再生培养基及其应用 | |
| CN118202948A (zh) | 一种长筒石蒜再生的基础培养基、组培培养基和再生组培方法 | |
| CN101926285B (zh) | 克服苜蓿品种基因型限制高频体胚再生培养方法 | |
| CN113068615A (zh) | 荔枝离体再生的方法、产品及其应用 | |
| CN112616668A (zh) | 荔枝“岭南15号”品种离体再生的方法 | |
| CN102106258B (zh) | 一种改良麦类作物耐低氮性状的方法 | |
| CN105519442B (zh) | 一种欧李愈伤组织再生体系的培植方法 | |
| CN104381133A (zh) | 针叶天蓝绣球的组织培养繁育方法 | |
| CN115777538B (zh) | 一种棉花短周期培育方法 | |
| CN102119661A (zh) | 一种杨梅组织培养的方法 | |
| CN102577972A (zh) | 心叶球兰组织培养方法 | |
| US4687743A (en) | Sunflower regeneration media, method of use and plants regenerated thereon | |
| CN101703002B (zh) | 克服苜蓿品种基因型限制高频体胚再生培养基 | |
| US12010963B2 (en) | Medium and culture method for blueberry tissue culture | |
| RU2027757C1 (ru) | Способ получения растений - регенерантов in vitro | |
| CN109618699A (zh) | 一种拟南芥与本生烟草的远缘嫁接方法 | |
| CN113303227B (zh) | 利用未成熟杂交种子培育山茶花新品种幼苗的方法 | |
| CN108056023B (zh) | 无种质基因型限制高频体胚再生培养方法 | |
| CN113615576A (zh) | 一种以杜鹃兰假鳞茎增节拔节提高增殖系数的方法 | |
| HU183433B (en) | Process for producing multiplying material of digitalis lanata ehrh in tissue culture | |
| KR102309624B1 (ko) | 백합 구근 체세포 생장점 배양체 급속 증식 방법 | |
| CN111543321B (zh) | 一种通过腐胺和固液交替培养提高棉花胚状体发生效率的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |