[go: up one dir, main page]

CN116240170A - 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用 - Google Patents

一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116240170A
CN116240170A CN202111472099.1A CN202111472099A CN116240170A CN 116240170 A CN116240170 A CN 116240170A CN 202111472099 A CN202111472099 A CN 202111472099A CN 116240170 A CN116240170 A CN 116240170A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cells
spinal cord
mixed glial
purification
culture method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111472099.1A
Other languages
English (en)
Inventor
戴建武
范彩霞
陈艳艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Original Assignee
Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS filed Critical Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Priority to CN202111472099.1A priority Critical patent/CN116240170A/zh
Publication of CN116240170A publication Critical patent/CN116240170A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0618—Cells of the nervous system
    • C12N5/0622—Glial cells, e.g. astrocytes, oligodendrocytes; Schwann cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用。所述培养方法包括：提供脊髓组织混合胶质细胞，采用机械破碎和细胞消化液对所述脊髓组织混合胶质细胞进行处理，获得混合胶质单细胞；对所述混合胶质单细胞进行培养，采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化和第二次纯化，得到高纯度的脊髓小胶质细胞。本发明建立了一种优化的脊髓小胶质细胞的培养方法，采取经过适当时间的扩增后手摇移走未贴壁细胞进行二次纯化，简单易操作，减少了对细胞的损伤，保证了细胞活性。最后得到了高纯度、高产量和可增殖的人脊髓小胶质细胞，为体外研究其功能、在脊髓损伤中的作用以及筛选治疗药物提供了条件。

Description

一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用
技术领域
本发明涉及一种细胞的培养方法，具体涉及一种脊髓小胶质细胞的培养方法及其应用，属于细胞培养技术领域。
背景技术
小胶质细胞是中枢神经系统中的巨噬细胞，它在神经系统正常发育以及病理情况下都起着最重要的作用，是中枢神经系统中的第一道也是最主要的一道免疫防线。同时作为神经胶质细胞中的一员，小胶质细胞具有支持、营养、保护和修复神经元等重要功能。小胶质细胞由于具有双重身份和发挥双重作用而得到越来越多的重视。随着现代生活节奏的不断加快，交通日益高速化，高处坠落和交通事故使当前脊髓损伤的发生率、致残率逐年增高。脊髓损伤治疗一直是临床研究的重点和难点。近期有报道指出小胶质细胞能够协调脊髓损伤的新生小鼠实现无疤痕伤口愈合和自发性轴突再生，但其在脊髓损伤的临床患者的损伤修复过程中所能起的作用及其机制尚不清楚。因此，体外分离和培养人脊髓的小胶质细胞是对其进行深入研究以充分发挥其有利作用的关键，并对体外评估药物疗效和毒性至关重要。迄今为止，仅有报道的人脑小胶质细胞的培养方法，但人脑小胶质细胞通常与体内自然发育形成的脊髓小胶质细胞有所区别，比如，人脑小胶质细胞可能不具有脊髓小胶质细胞的位置特征，而是具有大脑的位置特征。此外，人脑来源的小胶质细胞和脊髓小胶质细胞在发育、分化、增殖等潜能方面都有差异，可能难以较好地应用于脊髓损伤修复。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种脊髓小胶质细胞的培养方法及其应用，以克服现有技术中的不足。
为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明实施例提供了一种脊髓小胶质细胞的培养方法，其包括：
提供脊髓组织混合胶质细胞；
采用机械破碎和细胞消化液对所述脊髓组织混合胶质细胞进行处理，获得混合胶质单细胞；
对所述混合胶质单细胞进行培养；
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化和第二次纯化，得到高纯度的脊髓小胶质细胞。
在一些优选实施例中，所述细胞消化液包括蛋白水解酶和胶原溶解酶的混合液。
在一些优选实施例中，对所述混合胶质单细胞进行培养后，所述混合胶质细胞的接种密度为1.5～2×107个。
在一些优选实施例中，所述制备方法包括：
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化，将贴壁不牢的上层细胞与底层贴壁细胞分离并转入另一培养容器，并吹打避免细胞簇，补充新鲜完全培养基后继续培养3～5天，再进行第二次纯化，采用轻柔摇动法移走贴壁不牢的上层细胞，即得到高纯度的脊髓小胶质细胞。
本发明实施例提供了前述的脊髓小胶质细胞的培养方法于制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的优点包括：
本发明建立了一种优化的脊髓小胶质细胞的培养方法，采取经过适当时间的扩增后手摇移走未贴壁细胞进行二次纯化，简单易操作，减少了对细胞的损伤，保证了细胞活性。最后得到了高纯度、高产量和可增殖的人脊髓小胶质细胞，为体外研究其功能、在脊髓损伤中的作用以及筛选治疗药物提供了条件。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图进行简单的介绍，显而易见地，下面描述的附图仅仅作为本文发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。
图1为本发明一典型实施例中激光共聚焦显微镜下观察小胶质细胞的示意图。
图2a、图2b为本发明一典型实施例中流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞Iba-1的表达水平示意图。
图3a、图3b为本发明一典型实施例中流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞CD45的表达水平示意图。
图4a、图4b为本发明一典型实施例中流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞CD11b的表达水平示意图。
具体实施方式
基于以上分析，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，其建立了一种脊髓小胶质细胞的培养方法，简单易行。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。
本发明实施例的一个方面提供的一种脊髓小胶质细胞的培养方法包括：
提供脊髓组织混合胶质细胞；
采用机械破碎和细胞消化液对所述脊髓组织混合胶质细胞进行处理，获得混合胶质单细胞；
对所述混合胶质单细胞进行培养；
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化和第二次纯化，得到高纯度的脊髓小胶质细胞。
在一些优选实施例中，所述细胞消化液包括蛋白水解酶和胶原溶解酶的混合液。本发明采用机械剪碎后添加细胞消化液(蛋白水解酶和胶原溶解酶的混合液)代替单纯的机械剪碎，提高了混合胶质单细胞得率，且采用的细胞消化液非常温和，可完整保持细胞表面蛋白和抗原决定簇。
在一些优选实施例中，对所述混合胶质单细胞进行培养后，所述混合胶质细胞的接种密度为1.5～2x107个。
在一些优选实施例中，所述制备方法包括：
在温度为35～39℃、3～7％CO2(指在空气中的体积百分比)条件下对所述混合胶质单细胞进行培养5～7天，细胞出现分层现象。
在一些优选实施例中，所述制备方法具体包括：
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化，将贴壁不牢的上层细胞与底层贴壁细胞分离并转入另一培养容器，并吹打避免细胞簇，补充新鲜完全培养基后继续培养3～5天，再进行第二次纯化，采用轻柔摇动法移走贴壁不牢的上层细胞，即得到高纯度的脊髓小胶质细胞。本发明采取经过适当时间的扩增后手摇移走未贴壁细胞进行二次纯化，简单易操作，减少了对细胞的损伤，保证了细胞活性。
进一步地，所述制备方法还包括：使经第一次纯化和第二次纯化后的脊髓小胶质细胞消化、传代。
在一些优选实施例中，所述脊髓小胶质细胞包括Iba-1、CD45或CD11b等，但不限于此。
进一步地，所述脊髓组织混合胶质细胞来源于人脊髓组织，例如可以是人胚胎脊髓组织，但不限于此。
本发明实施例的另一个方面提供了前述的脊髓小胶质细胞的培养方法于制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用。
藉由上述技术方案，本案发明人通过优化后，建立了脊髓小胶质细胞的培养方法，简单易行。首先，对组织分离单细胞的方法进行了调整，采用机械剪碎后添加细胞消化液(蛋白水解酶和胶原溶解酶的混合液)代替单纯的机械剪碎，提高了混合胶质单细胞得率，且采用的细胞消化液非常温和，可完整保持细胞表面蛋白和抗原决定簇。其次，对两次纯化的方法进行了调整，首先将解离成的单细胞数量控制在1.5～2×107/T75培养瓶，因为混合胶质细胞的接种密度会影响小胶质细胞的贴壁。采取经过适当时间的扩增后手摇移走未贴壁细胞进行二次纯化，简单易操作，减少了对细胞的损伤，保证了细胞活性。最后，便得到了高纯度、高产量和可增殖的脊髓小胶质细胞，为体外研究其功能、在脊髓损伤中的作用以及筛选治疗药物提供了条件。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合若干优选实施例并结合附图对本发明的技术方案进行进一步具体描述，但本发明并不仅仅局限于下述实施例，该领域技术人员在本发明核心指导思想下做出的非本质改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。若非特别说明，则下列实施例中使用的各种试剂均是本领域技术人员熟知的，并可以通过市场购买等途径获取。而下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
1、人工药物流产胎儿脊髓组织来源
在知情同意的条件下，因医学指征进行人工药物引产的胎儿(18-22周)脊髓组织取自苏州大学第二附属医院，娩出后立即取材。
2、胎儿脊髓组织混合胶质细胞的分离与培养
无菌条件下取胎儿脊髓组织，置于含有100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM/F12的基础培养基中，小心剥除脊膜及其血管后，用手术剪刀轻轻剪碎，用5mL Accutase细胞消化液消化成单细胞，PBS稀释终止，然后用70μm筛网过滤，收集细胞悬液于50mL离心管中，4℃下，1000r/min，离心5min。弃上清，DMEM/F12完全培养基(含10％FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)重悬细胞，计算活细胞比例(可达95％左右)和细胞密度，按照1.5-2×107个细胞接种75cm2的培养瓶中，接种体积为10mL/瓶；在37℃、5％CO2条件下培养。
3、小胶质细胞的纯化与传代
在温度为35～39℃、3～7％CO2条件下对混合胶质细胞培养5-7天左右，在倒置显微镜下观察，细胞出现分层现象。此时，进行第一次纯化：采用轻柔摇动法将贴壁不牢的上层细胞与底层贴壁细胞分离并转入另一培养瓶，轻轻吹打避免细胞簇，补充5mL新鲜的完全培养基后继续培养；3-5天左右，进行第二次纯化，采用轻柔摇动法移走贴壁不牢的上层细胞，即得到高纯度的小胶质细胞。之后2-3天可用TryplE Express消化、传代1次。
4、小胶质细胞的免疫荧光染色鉴定
(1)激光共聚焦技术结合免疫荧光染色技术检测小胶质细胞Iba-1的表达
小胶质细胞消化传代时，将DMEM/F12完全培养基悬浮的细胞接种于共聚焦小皿中，2天左右，进行免疫荧光抗体染色，步骤如下：1、500μL PBS洗涤2次，每次30s；2、500μL4％多聚甲醛固定20min；3、500μL PBS洗涤2次，每次30s；4、加入500μL 0.5％Triton X-100通透液，作用5min；5、500μLPBS洗涤2次，每次30s；6、5％BSA封闭1h；7、吸掉封闭液后，加入250μL稀释的Iba-1抗体(Abcam，1∶500)，4℃条件下过夜；8、500μL PBS洗涤3次，每次1min；9、加入Alexa FluorTM647二抗(Invitrogen，1∶500)和Hoechst(Sigma，1∶1000)，室温避光孵育1h；10、500μL PBS洗涤3次，每次1min。激光共聚焦显微镜下观察拍照。结果显示，经过“二次纯化法”，分离的小胶质细胞的纯度可达95％以上，其中混有少数的星形胶质细胞(如图1所示)。
(2)流式细胞术结合免疫荧光染色技术检测小胶质细胞Iba-1、CD45和CD11b的表达
小胶质细胞消化传代时，取1×107个细胞，用PBSF(2.5％FBS)离心洗涤1次(1000r/min，5min)，1mL PBSF重悬；取6支流式管，依次编号，各加入细胞悬液100μL，1-2号流式管进行胞内分子染色：1、加入4％多聚甲醛1mL，室温固定15min；2、2mL通透液(每100mLPBSF含0.01g洋地黄皂苷)洗涤1次，离心，弃上清；3、加入500μL通透液，室温通透15min，离心，弃上清；4、300μL通透液重悬细胞，1号管加入Iba-1抗体(Abcam)3μL，2号管加入相应的同型对照，混匀，室温孵育30min；5、2mL通透液洗涤1次，离心，弃上清；6、加入AlexaFluorTM647二抗(Invitrogen)3μL，避光孵育30min；7、2mL PBSF离心洗涤1次，300μL PBSF重悬；3-6号流式管进行细胞表面分子染色：在3号流式管中加入mouse anti-human CD45-APC单克隆抗体(BD)20μL，在4号流式管中加入相应的同型对照，混匀，避光染色30min，2mLPBSF离心洗涤1次，300μL PBSF重悬；在5号流式管中加入CD11b-PE单克隆抗体(BD)20μL，在6号流式管中加入相应的同型对照，混匀，避光染色30min，2mL PBSF离心洗涤1次，300μLPBSF重悬。所有样品立即行流式细胞术检测和分析，图2为流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞Iba-1的表达水平示意图，图3为流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞CD45的表达水平示意图，图4为流式细胞术结合胞内染色技术分析小胶质细胞CD11b的表达水平示意图。免疫表型分析结果显示：Iba-1的阳性率为94.6％，CD45的阳性率为94.18％，CD11b的阳性率为80.9％，依次见图2、图3、图4。
综上所述，本发明建立了一种优化的脊髓小胶质细胞的培养方法，采取经过适当时间的扩增后手摇移走未贴壁细胞进行二次纯化，简单易操作，减少了对细胞的损伤，保证了细胞活性。最后得到了高纯度、高产量和可增殖的人脊髓小胶质细胞，为体外研究其功能、在脊髓损伤中的作用以及筛选治疗药物提供了条件。
应当理解，以上所述的仅是本发明的一些实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的创造构思的前提下，还可以做出其它变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种脊髓小胶质细胞的培养方法，其特征在于包括：
提供脊髓组织混合胶质细胞；
采用机械破碎和细胞消化液对所述脊髓组织混合胶质细胞进行处理，获得混合胶质单细胞；
对所述混合胶质单细胞进行培养；
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化和第二次纯化，得到高纯度的脊髓小胶质细胞。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述细胞消化液包括蛋白水解酶和胶原溶解酶的混合液。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：对所述混合胶质单细胞进行培养后，所述混合胶质细胞的接种密度为1.5～2×107个。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，包括：在温度为35～39℃、3～7％CO2条件下对所述混合胶质单细胞进行培养5～7天，细胞出现分层现象。
5.根据权利要求4所述的培养方法，其特征在于，具体包括：
采用轻柔摇动法对培养后的混合胶质单细胞进行第一次纯化，将贴壁不牢的上层细胞与底层贴壁细胞分离并转入另一培养容器，并吹打避免细胞簇，补充新鲜完全培养基后继续培养3～5天，再进行第二次纯化，采用轻柔摇动法移走贴壁不牢的上层细胞，即得到高纯度的脊髓小胶质细胞。
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，还包括：使经第一次纯化和第二次纯化后的脊髓小胶质细胞消化、传代。
7.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述脊髓小胶质细胞包括Iba-1、CD45或CD11b。
8.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于：所述脊髓组织混合胶质细胞来源于人脊髓组织。
9.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于：所述脊髓组织混合胶质细胞来源于人胚胎脊髓组织。
10.权利要求1-9中任一项所述的脊髓小胶质细胞的培养方法于制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用。
CN202111472099.1A 2021-12-08 2021-12-08 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用 Pending CN116240170A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111472099.1A CN116240170A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111472099.1A CN116240170A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116240170A true CN116240170A (zh) 2023-06-09

Family

ID=86633557

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111472099.1A Pending CN116240170A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116240170A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2198587A1 (en) * 1994-08-26 1996-03-07 Larry I. Benowitz Trophic factors for central nervous system regeneration
CN112011509A (zh) * 2020-09-25 2020-12-01 南京中医药大学 脊髓损伤大鼠原代小胶质细胞分离方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2198587A1 (en) * 1994-08-26 1996-03-07 Larry I. Benowitz Trophic factors for central nervous system regeneration
CN112011509A (zh) * 2020-09-25 2020-12-01 南京中医药大学 脊髓损伤大鼠原代小胶质细胞分离方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105154395B (zh) 一种增强MSCs免疫调节功能的临床级别细胞制备方法
WO2018103406A1 (zh) 一种治疗脑部损伤类疾病的神经干细胞注射液及其制备方法和使用方法
CN106367389A (zh) 一种人脐带间充质干细胞因子的制备方法及应用
CN108998411A (zh) 人子宫内膜组织来源间充质干细胞的分离培养方法
CN108251372A (zh) 原代小胶质细胞/损伤神经元共培养体系及其构建方法和应用
CN118453655A (zh) 一种间充质干细胞在治疗特发性肺纤维化的应用
Norte-Muñoz et al. Neuroprotection and axonal regeneration induced by bone marrow mesenchymal stromal cells depend on the type of transplant
CN111944748A (zh) 一种用于治疗心肌梗死的高表达il-10的人脂肪间充质干细胞外泌体及其用途
CN111534477A (zh) 小鼠肺组织原代上皮干细胞球培养方法
CN115011561A (zh) 一种嵌合抗原受体巨噬细胞及其制备方法和应用
CN107034182A (zh) 一种脂肪干细胞冻干粉的制备方法
CN107338219A (zh) 一种胎盘间充质干细胞的分离及培养方法
CN114209814A (zh) Tnfsf15蛋白在促进骨髓干细胞分化为巨噬细胞并扩增中的用途
CN116240170A (zh) 一种脊髓小胶质细胞的培养方法及应用
CN106701669A (zh) 临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途
CN109609453B (zh) 树鼩小胶质细胞培养基与其体外分离培养及纯化的方法
Kuntjoro et al. The effect of advanced glycation end products (AGEs) on human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUCMSCs) with regard to osteogenesis and calcification
CN111944747A (zh) 一种用于治疗心肌梗死的人脂肪间充质干细胞外泌体及其用途
CN111925983A (zh) 一种用于治疗心肌梗死的高表达il-10的人脂肪间充质干细胞外泌体的制备方法
CN117701498A (zh) 一种提高脐带间充质干细胞增殖活力的培养方法
CN103484427A (zh) 一种经卵磷脂处理的脂肪基质血管组分制备技术
CN110302398A (zh) 一种含有Atoh7和/或Pou4f的组合物、其制备方法及医药用途
WO2019119819A1 (zh) 一种胎盘多能干细胞制剂在制备治疗急性肺损伤药物中的应用
CN109852583A (zh) 一种人脂肪干细胞的分离培养方法和干细胞库的构建方法
CN115678841A (zh) 一种增强人脐带间充质干细胞免疫抑制功能的组合物及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination