CN117024504A - 一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷及其在制备镇痛药物中的用途。本发明的葡萄糖醛酸类三萜皂苷可为天然存在的有机化合物或合成的有机化合物，具有较强的镇痛活性，用其作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物组合物。

Description

一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷及其应用

技术领域

本发明涉及一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷，尤其涉及在制备镇痛药物中的用途。

背景技术

疼痛是一种由体外或体内的伤害性或潜在伤害性刺激所产生的一种不愉快的主观感觉和情感体验，已被当今医学列为继呼吸、脉搏、血压、体温之后的第五大生命体征。在临床医学实践中，疼痛是患者就医的最常见的主诉症状，有超过80％的患者由于疼痛而就诊。疼痛给个体带来很大的危害和负面影响，也是降低人们劳动能力和减少工作日的最普通、最直接的因素，因而如何缓解疼痛已成为临床医学最大的目标之一。

目前在用于治疗疼痛的众多药物中，非甾体抗炎药(NSAIDs)和麻醉性镇痛药是治疗或缓解多种疼痛的首选药物，如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸等抗炎药以及吗啡、曲马多、杜冷丁等中枢镇痛药。相较于麻醉性镇痛药，非甾体抗炎药的应用则更为普遍和广泛，自从阿司匹林问世以来，在随后的近一个世纪里，非甾体抗炎药已开发出百余品种，包括乙酰水杨酸类、吡唑酮类、乙酸类、双氯芬酸类、昔康类、乙酰苯胺类等，广泛用于治疗包括神经痛、头痛、牙痛、骨关节痛、跌打损伤引起的疼痛、胃疼、胆绞痛等以疼痛为主要症状的疾病，疗效显著，是全球使用频率最高的药物之一。然而，该类药物在发挥抗炎镇痛作用的同时，存在较严重的不良反应，多次或长期应用时对机体产生危害。其不良反应主要为胃肠道损伤、上腹疼痛、恶心、消化不良、食管炎以及结肠炎、血液系统损害以及肝、肾损伤。阿片类药物是目前发现的镇痛效果最强的一类药物，可用于各种中、重度疼痛，但该类药也有较严重的不良反应，如呼吸抑制、咳嗽抑制、剂量依赖、成瘾性、恶心、呕吐、缩瞳、便秘等。因此，从天然药物中探索及寻找疗效好且不良反应小的新型镇痛药是非常有意义的。

目前国内外学者对大麻药、草乌、马钱子、青风藤、鼠妇、延胡索等植物药的镇痛活性成分进行了研究，获得了一批活性优良的化合物，包括木脂素、生物碱、二萜、三萜、甾体、黄酮等类型的化合物。虽然发现的有镇痛作用的化合物较多，但活性较强的不多，大部分与解热镇痛药作用强度相当。目前也有以多种药用植物为原料制作的镇痛药物或药物组合物，但其镇痛效果并不理想。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明要解决的技术问题是解决现有技术中的化合物对于镇痛治疗效果不好的问题。

(二)技术方案

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷、葡萄糖醛酸类三萜皂苷的制备方法及其在镇痛中的用途。

本发明的目的在于提供一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷，具有以下的结构式(I)：

式(I)化合物命名为：3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸(3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[α-L-arabinopyranosyl-(1→3)]-β-D-6-O-ethyl glucuronopyranosyl quillaic acid)。

本发明还提供一种式(I)化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将金铁锁植物晾干粉碎后用溶剂提取，合并提取液；

(2)减压浓缩步骤(1)得到的提取液得到浸膏；

(3)将步骤(2)得到的浸膏混悬于水中，用石油醚萃取，除去小极性部分，保留水部分；

(4)将步骤(3)得到的水部分依次经D-101大孔树脂柱，正向硅胶柱，葡聚糖凝胶柱(Sephedex LH-20)及半制备高效液相色谱(HPLC)分离，得到结构式(I)化合物。

根据上述所述式(I)化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)取金铁锁属植物6-10倍重量的溶剂提取1～3小时，提取1～3次，合并滤液即得到金铁锁属药材提取物溶液。

根据上述所述式(I)化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述金铁锁属植物为金铁锁。

根据上述所述式(I)化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶剂为50～95体积％的乙醇/水、50～95体积％的甲醇/水、或50-90体积％的丙酮/水。

式(I)的化合物在制备镇痛药物中的用途，所述式(I)化合物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物组合物。

根据上述式(I)的化合物所述的用途，所述镇痛为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

根据上述式(I)的化合物所述的用途，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、丸剂、注射剂、温泉浴剂，所述的药物组合物选自缓释制剂或控释制剂。

根据上述式(I)的化合物所述的用途，其中所述的药学上可接受的载体或辅料包括口服制剂辅料、胃肠外途径给药或外用给药的辅料，给药途径可以是口服、注射、外用局部给药、温泉泡浴给药等；给药剂型可以是液体剂型、固体剂型，液体剂型形式可以是糖浆剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳剂，固体剂型形式可以是片剂、锭剂、胶囊、滴丸、丸剂、粒剂、粉剂、霜剂、溶液剂、栓剂、可分散粉剂如冻干粉针剂、气雾剂等；所用辅料包括：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠、淀粉、环糊精、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素钠、硫酸钙、水、乙醇、丙醇、甘油、丙二醇、异丙醇、糖浆、蜂蜜、葡萄糖、明胶浆、羧甲基纤维素钠、磷酸钾、干燥淀粉、琼脂粉、碳酸钙、碳酸氢钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油、季铵盐、滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

(三)有益效果

本发明的上述技术方案具有如下优点：

(1)本发明的式(I)化合物对小鼠醋酸扭体反应展现出较好的抑制作用，提示其具有良好的镇痛活性，可以作为镇痛活性成分或先导化合物，有着很好的应用前景。

(2)本发明的式(I)化合物的制备方法中可采用的金铁锁属植物，特别是金铁锁在国内已有种植，资源丰富，原料来源简单；而且本发明中的式I化合物在金铁锁属植物，尤其是金铁锁中含量高，容易得到。

(3)本发明的式(I)化合物的制备方法中可采用常规柱层析制备方法，化合物制备操作流程简单，所获得的化合物纯度高，随后的工业化生产很容易实现。

附图说明

图1为本发明中所述的式(I)化合物的活性追踪分离流程图；

图2为本发明中所述的式(I)化合物的结构式；

图3是本发明式(I)化合物高分辨质谱(HRESI-MS)；

图4是本发明式(I)化合物的核磁共振氢谱(¹H NMR)；

图5是本发明式(I)化合物的核磁共振碳谱(¹³C NMR)和DEPT谱；

图6是本发明式(I)化合物的COSY相关谱；

图7是本发明式(I)化合物的HSQC相关谱；

图8是本发明式(I)化合物的HMBC相关谱；

图9是本发明式(I)化合物对小鼠扭体反应抑制作用的图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的式(I)化合物可以是天然存在的化合物，也可以是人工合成的化合物。

本发明所述的一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷，是以石竹科金铁锁属植物金铁锁的根为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、D-101大孔树脂柱层析，硅胶柱层析、Sephedex LH-20柱层析及HPLC分离得到的，该化合物分子式为C₄₉H₇₆O₂₀，命名为3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸(3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[α-L-arabinopyranosyl-(1→3)]-β-D-6-O-ethylglucuronopyranosyl quillaic acid)，具有下述结构式：

金铁锁(Psammosilene tunicoides)为石竹科(Caryophyllaceae)金铁锁属植物，是我国西南地区特有的单属种植物，主要分布于云南、贵州、四川等中国西南地区，具有散瘀定痛、止血、消痈排脓之功，主要用于铁打损伤、风湿痛、胃痛、痈疽疮疖、创伤出血等的治疗。金铁锁作为药用植物，历史悠久，始载于《滇南本草》。据该典籍记载:“金铁锁，味辛、辣，性大温，有小毒，吃之令人多吐。专治面寒痛，胃气心气痛，攻疮痈排脓。”该药物是传统经典云南白药的重要组方药材之一，并收载于2010版《中国药典》。金铁锁的化学成分主要包括三萜类、三萜皂苷类、环肽类、咔伯啉生物碱类、麦芽酚苷类、木脂素类等(Tan JM,Shen YH,Yang XW.Antifungal cyclic peptides from Psammosilene tunicoides[J].J.Nat.Prod.2010,73(12):1987-1992；毛泽玲,沈云亨,周李刚.金铁锁的化学成分与生物活性的研究进展.中华中医药学刊.2016,34(12):2883-2886；浦湘渝,周俊.金铁锁皂甙的研究[J].云南植物研究.1989,11(2):198-202.)，药理研究表明该植物具有增强免疫功能、抗氧化、抑菌、抗炎镇痛等多方面的活性。而研究最多的是该属植物中的环肽类和三萜皂苷类化合物及其药理作用。尽管文献报道金铁锁中的三萜皂苷具有镇痛作用，但尚未见有关单体成分的镇痛活性报道，作用机制也尚未明确。本发明试图对金铁锁属植物中具有镇痛作用的化合物做深入研究，以期发现其中的镇痛活性天然产物，为筛选高效、低毒的镇痛药物提供依据。

本发明发现金铁锁属植物金铁锁的溶剂(如乙醇溶液)提取物具有较好的镇痛活性，并在生物活性测试指导下对提取物进行化学成分研究，从中获得了一种具有式(I)结构的活性成分，所述的式(I)化合物对小鼠扭体反应有较好的抑制作用。所述的式(I)化合物在制备镇痛药物中的应用，其特征在于，所述镇痛药物或药物组合物为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

本发明采用目前国内外公认的小鼠醋酸扭体法，对本发明所述的式(I)化合物进行镇痛活性测试，并计算了式(I)化合物对小鼠扭体反应抑制的半数有效剂量。计算结果表明3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸对小鼠扭体反应抑制的半数有效剂量(IC₅₀)测定结果为11.60mg/kg。上述结果表明3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸显示有较好的镇痛作用，其镇痛作用是阳性对照阿司匹林(IC₅₀为74.33mg/kg)的6.4倍。

本发明还提供上述式(I)化合物的制备方法，该方法包括从金铁锁属植物(如金铁锁)中制备所述化合物。优选的是，从金铁锁属植物金铁锁的根、茎、叶、果实中制备3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸。优选的是，所述方法具有下述步骤：

(1)将金铁锁晾干粉碎后用溶剂提取，合并提取液；

(2)减压浓缩步骤(1)得到的提取液得浸膏；

(3)将步骤(2)得到的浸膏混悬于水中，用石油醚萃取，除去小极性部分，保留水部分；

(4)将步骤(3)得到的水部分经D-101大孔树脂柱分离，用甲醇-水(体积比0:1、8:2、1:0)梯度洗脱得到3个组分(Fr.1-Fr.3)。

(5)将步骤(4)得到的取Fr.2经硅胶柱色谱，以二氯甲烷–甲醇(体积比1:0～0:1)洗脱，得到6个组分(Fr.A～Fr.F)。取Fr.D经硅胶柱色谱，以二氯甲烷–甲醇(体积比35:1～5:1)洗脱，得到5个组分(Fr.D1-Fr.D5)。取Fr.D4经硅胶柱色谱，以二氯甲烷–甲醇(体积比15:1～0:1)洗脱，得到5个组分(Fr.D4a～Fr.D4e)。取Fr.D4e经Sephadex LH-20柱色谱(100％甲醇)纯化后，经半制备型高效液相色谱，用体积比70:30的甲醇-水作为流动相，以3mL/min的流速洗脱得到3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸。

在步骤(1)中，所述的溶剂可用体积百分比为50％～95％的乙醇/水、或50％～95％的甲醇/水、或50％～90％的丙酮/水，溶剂用量为金铁锁6-10倍重量，回流提取时间为每次2小时，回流提取重复3次，合并滤液即得到金铁锁属药材提取物溶液。

本发明还提供所述的式(I)化合物在制备镇痛药物中的用途，所述的式(I)化合物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物或药物组合物。

本发明所述的镇痛药物或药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可以为肠道、或非肠道，如口服、肌肉、鼻腔、口腔黏膜、皮肤、透皮、皮下、皮内、腹膜、直肠、静脉内、肌内、硬膜外、眼内、颅内、阴道给药、温泉泡浴给药等；

本发明所述的镇痛药物或药物组合物的给药途径可以为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、穴位注射、鞘内注射和腹膜注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型的溶液性质可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。液体剂型形式可以是糖浆剂、注射溶液、非水溶液、悬浮液或乳剂；固体剂型例如片剂、锭剂、胶囊、滴丸、丸剂、粒剂、粉剂、霜剂、溶液剂、栓剂、可分散粉剂如冻干粉针剂、气雾剂等。

本发明所述的镇痛药物或药物组合物可以制成普通制剂，也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

本发明所述的药学上可接受的载体或辅料包括口服制剂辅料、胃肠外途径给药或外用给药的辅料。所用辅料包括，赋形剂如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸钠；稀释剂与吸收剂如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素钠、硫酸钙等；湿润剂与粘合剂如水、乙醇、丙醇、甘油、丙二醇、异丙醇、糖浆、蜂蜜、葡萄糖、明胶浆、羧甲基纤维素钠、磷酸钾等；崩解剂如干燥淀粉、琼脂粉、碳酸钙、碳酸氢钠、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素等；崩解抑制剂如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂如滑石粉、三乙胺硬脂酸镁、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡等。还可以将片剂进一步制备成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片，以延迟其在胃肠道中的崩解和吸收，并由此提供在较长时间内的持续作用。

具体实施例

为了更好的理解本发明，以下通过具体实施例进一步解释或说明本发明内容，但这些例子不应被理解为对本发明保护范围的限制。

实施例1

金铁锁提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制活性

材料来源：所属金铁锁属植物金铁锁采于云南昆明，经云南民族大学民族医药学院杨青松教授鉴定为Psammosilene tunicoides W.C.Wu&C.Y.Wu。标本保存于云南民族大学民族医药学院标本馆。

金铁锁提取物的制备：将干燥的金铁锁的根粉碎，得金铁锁的根碎块；然后将金铁锁的碎块用95体积％乙醇/水回流提取3次，每次2小时得提取液；将金铁锁提取液分别过滤并用旋转蒸发仪减压浓缩成浸膏备用。

采用小鼠醋酸扭体反应抑制的实验模型(参见科技文献：Hayashi G.,TakemoriA.E.The type of analgesic-receptor interaction involved in certain analgesicassays.Eur.J.Pharmacol.1971,16:63-66.)测试了金铁锁提取物抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。取雌性健康小鼠50只，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。各组依次为：阴性对照组(0.9％氯化钠溶液)，阳性对照组(阿司匹林，200mg/kg)，金铁锁高、中、低剂量组(800mg/kg，400mg/kg，200mg/kg)，给药后30min，各鼠注射0.6％醋酸溶液0.2ml。观察并记录注射醋酸溶液后15min内的扭体次数。比较不同组别受试小鼠的扭体次数的差异，并计算药物对扭体反应的抑制率。

抑制率＝(对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100％)。

结果表明上述浓度下，金铁锁提取物有显著抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。结果见表1。

表1金铁锁提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制作用

n＝3

实施例2

用金铁锁进一步试验，分别用体积百分比为95％的甲醇/水、70％的乙醇/水和70％的丙酮/水作提取溶剂，重复实施例1。实验结果表明用95％的甲醇/水、70％的乙醇/水和70％的丙酮/水作提取溶剂分别所获得的金铁锁95％甲醇提取物、金铁锁70％乙醇提取物以及70％丙酮/水的提取物同样对小鼠醋酸扭体反应具有显著的抑制活性，因此用不同浓度的乙醇/水、甲醇/水或丙酮/水作提取溶剂同样可以获得金铁锁中的对小鼠醋酸扭体反应有抑制作用的成分。结果见表2。

表2金铁锁不同溶剂提取物对小鼠醋酸扭体反应的抑制作用

n＝3

实施例3

从金铁锁根中分离鉴定镇痛活性化合物

(1)将5kg金铁锁根晾干粉碎成粒径0.1cm大小的颗粒，得金铁锁粉，将金铁锁粉在70～74℃的温度下每次用60kg 95％浓度的乙醇回流提取4次，每次2小时，合并乙醇提取液，备用；

(2)将步骤(1)制得的乙醇提取液经80-120微米滤纸过滤并在50℃的温度下用旋转蒸发仪进行减压浓缩，至比重为1.2时，得浸膏204.8g，备用；

(3)将步骤(2)得到的204g浸膏混悬于4500ml水中，用4500ml石油醚萃取，除去弱极性部分，剩余水部分经D-101大孔树脂柱色谱，用体积比0:1、8:2、1:0的甲醇-水洗脱得到Fr.1-Fr.3共3个组分，Fr.1为43.3g，Fr.2为79.5g，Fr.3为72.5g。取Fr.2(60g)经硅胶柱色谱，用体积比1:0、8:1、7:2、2:1、0:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到Fr.A～Fr.F共6个组分，Fr.A为2.7g，Fr.B为5.3g，Fr.C为9.3g，Fr.D为19.8g，Fr.E为5.8g，Fr.F为10.5g。取Fr.D(19.8g)经硅胶柱色谱，用体积比35:1、25:1、15:1、10:1、5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到Fr.D1-Fr.D5共5个组分，Fr.D1为1.3g，Fr.D2为1.2g，Fr.D3为3.5g，Fr.D4为8.5g，Fr.D5为2.4g。取Fr.D4(8.5g)经硅胶柱色谱，用体积比15:1、10:1、5:1、2:1、0:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到Fr.D4a～Fr.D4e共5个组分，Fr.D4a为0.7g，Fr.D4b为1.4g，Fr.D4c为1.1g，Fr.D4d为2.0g，Fr.D4e为2.5g。取Fr.D4e(2.5g)经Sephadex LH-20柱色谱(100％甲醇)纯化后，再经半制备型高效液相色谱，用体积比70:30的甲醇-水作为流动相，以3mL/min的流速洗脱得到3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸(11.5mg)(1)。金铁锁根中镇痛活性成分的分离鉴定流程见图1。

实施例4

实施例3所得到的化合物1的结构鉴定

所述化合物1为白色无定型粉末(溶剂为甲醇)，高分辨质谱显示其分子离子峰为m/z 1002.5270[M+NH₄]⁺(计算值1002.5268)，表明该化合物的分子式为C₄₉H₇₆O₂₀。从¹H-NMR谱中读出6个甲基的单峰质子信号(δ_H 1.15,1.00,0.80,1.39,0.88,0.97)、1个乙基的氢信号[δ_H 4.22(2H,q,J＝7.1Hz)和1.28(3H,t,J＝7.1Hz)]、3个糖基的端基质子信号[δ_H4.49(d,J＝7.4Hz)、4.81(d,J＝7.4Hz)、4.55(d,J＝7.5Hz)]及处于低场的1个单峰质子(δ_H9.44)。在¹³C-NMR和DEPT谱中读出对应的6个甲基信号(δ_C 10.8,16.3,17.8,27.3,33.5,25.1)、1个乙氧基信号(δ_C 62.69和δ_C 14.4)、3个糖基的端基碳信号(δ_C 104.6,103.8,104.9)、1个醛基信号(δ_C 210.7)，以及1个酯化的碳基(δ_C 170.3)和1个双键(δ_C 145.3,123.0)。上述的数据表明该化合物为含有3个糖基的三萜苷类结构。有趣的是，核磁谱图仅显示了48个碳信号，而高分辨质谱数据表明该化合物有49个碳，说明有一个碳信号在核磁谱图中未显示。根据文献报道，有些三萜皂苷的C-28羰基信号在核磁中的表现比较弱，可能显现不出来(Guo S.,Kenne L.,Lundgren L.N.,B.,SundquistB.G.Triterpenoid saponins from Quillaja saponaria.Phytochemistry,1998,48,175-180)。因此，进一步推测丢失的这个碳信号为28位的羰基信号。从糖基的HMBC谱中获得H-5′(δ_H 3.86)与C-1′(δ_C 104.6)、C-3′(δ_C 86.2)的相关，H-4′(δ_H 3.58)与C-6′(δ_C 170.3)的相关，H-3′(δ_H 3.71)与C-2′(δ_C78.1)的相关，H-7′(δ_H 4.22)与C-6′(δ_C 170.3)的相关，H-5″(δ_H 3.50)与C-1″(δ_C 103.8)、C-3″(δ_C 74.6)、C-6″(δ_C 62.3)的相关，H-4″(δ_H 3.79)与C-5″(δ_C 76.8)的相关，以及COSY谱中的H-1′(δ_H 4.49)与H-2′(δ_H3.66)的相关，H-1″(δ_H 4.81)与H-2″(δ_H 3.43)的相关，H-7′(δ_H 4.22)与H-8′(δ_C 1.28)的相关，表明该化合物含有1个吡喃葡萄糖醛酸乙酯和1个吡喃半乳糖基。这与文献报道的已知化合物(3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸)(钟惠民,华燕,倪伟,等.金铁锁的两个新三萜皂苷[J].云南植物研究,2003(03):361-365.)的核磁数据非常相似。唯一区别在于化合物1的剩余糖信号(δ_C 104.9,72.9,75.4,70.0,67.8)与上述已知化合物中木糖基的碳信号(δ_C 104.9,75.3,78.6,70.9,67.3)差异较大，而与另一个已知化合物的阿拉伯糖基的碳信号(δ_C 106.2,72.9,75.5,70.2,67.7)相近(Tava A.,Biazzi E.,Ronga D.,Mella M.,Doria F.,Accoglic R.,Argentierid M.P.,AvatoP.Triterpenic saponins from Medicago marina L.Phytochemistry,2020,174,112333)，表明化合物1的结构中除了1个吡喃葡萄糖醛酸乙酯和1个吡喃半乳糖基外，还有1个吡喃阿拉伯糖基。从HMBC谱上H-5″′(δ_H 3.89)与C-1″′(δ_C 104.9)、C-4″′(δ_C 70.0)的相关，H-4″′(δ_H3.81)与C-2″′(δ_C 72.9)、C-3″′(δ_C 75.4)的相关，以及COSY谱中的H-1″′(δ_H4.55)与H-2″′(δ_H 3.59)的相关，也说明阿拉伯糖基的存在。通过端基质子的耦合常数[δ_H4.49(d,J＝7.4Hz)、4.81(d,J＝7.4Hz)、4.55(d,J＝7.5Hz)]及水解后的衍生化糖的GC-MS分析，确定3个糖单元分别为β-D-葡萄糖醛酸甲酯、β-D-半乳糖及α-L-阿拉伯糖。通过H-1″(δ_H 4.81)与C-2′(δ_C 78.1)、H-1″′(δ_H 4.55)与C-3′(δ_C 86.2)、H-1′(δ_H 4.49)与C-3(δ_C86.4)的HMBC相关确定糖的连接顺序为半乳糖基连在葡萄糖醛酸基的C-2′位，阿拉伯糖连在葡萄糖醛酸基的C-3′位，而整个糖基侧链连在苷元的C-3位。最终，将化合物1确定为3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸(3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[α-L-arabinopyranosyl-(1→3)]-β-D-6-O-ethylglucuronopyranosyl quillaic acid)(见式I)。

化合物1的理化数据：化合物(3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸)为白色无定型粉末(甲醇)，HR-ESI-MS m/z:1002.5270[M+NH₄]⁺，分子式C₄₉H₇₆O₂₀。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ_H:1.70(1H,m,H-1a),1.11(1H,m,H-1b),1.76(2H,m,H-2),3.87(1H,m,H-3),1.33(1H,m,H-5),1.52(1H,m,H-6a),0.91(1H,m,H-6b),1.53(1H,m,H-7a),1.24(1H,m,H-7b),1.75(1H,m,H-9),1.91(1H,m,H-11),5.30(1H,brs,H-12),1.32(1H,m,H-15a),1.84(1H,m,H-15b),4.45(1H,brs,H-16),3.03(1H,dd,J＝14.0,3.7Hz,H-18),2.27(1H,t,J＝13.6Hz,H-19a),1.02(1H,m,H-19b),1.91(1H,m,H-21a),1.14(1H,m,H-21b),1.87(1H,m,H-22a),1.75(1H,m,H-22b),9.44(1H,s,H-23),1.15(3H,s,H-24),1.00(3H,s,H-25),0.80(3H,s,H-26),1.39(3H,s,H-27),0.88(3H,s,H-29),0.97(3H,s,H-30),4.49(1H,d,J＝7.4Hz,H-1′),3.66(1H,d,J＝7.4Hz,H-2′),3.71(1H,m,H-3′),3.58(1H,m,H-4′),3.86(1H,m,H-5′),4.22(1H,q,J＝7.1Hz,H-7′),1.28(1H,t,J＝7.1Hz,H-8′),4.81(1H,d,J＝7.4Hz,H-1″),3.43(1H,m,H-2″),3.51(1H,m,H-3″),3.79(1H,m,H-4″),3.50(1H,m,H-5″),3.77(1H,m,H-6″a),3.72(1H,m,H-6″b),4.55(1H,d,J＝7.5Hz,H-1″′),3.59(1H,m,H-2″′),3.43(1H,m,H-3″′),3.81(1H,m,H-4″′),3.89(1H,m,H-5″′a),3.61(1H,m,H-5″′b)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ_C:39.2(C-1),25.7(C-2),86.4(C-3),56.2(C-4),49.1(C-5),21.2(C-6),33.5(C-7),40.9(C-8),48.0(C-9),37.1(C-10),24.4(C-11),123.0(C-12),145.3(C-13),42.7(C-14),36.1(C-15),75.4(C-16),49.8(C-17),42.2(C-18),47.8(C-19),31.4(C-20),36.6(C-21),32.5(C-22),210.7(C-23),10.8(C-24),16.3(C-25),17.9(C-26),27.3(C-27),33.5(C-29),25.1(C-30),104.6(C-1′),78.1(C-2′),86.2(C-3′),71.4(C-4′),76.4(C-5′),170.3(C-6′),62.6(C-7′),14.4(C-8′),103.8(C-1″),73.5(C-2″),74.6(C-3″),70.8(C-4″),76.8(C-5″),62.3(C-6″),104.9(C-1″′),72.9(C-2″′),75.4(C-3″′),70.0(C-4″′),67.8(C-5″′).

实施例5

所述式(I)化合物的镇痛活性检测

采用小鼠醋酸扭体反应抑制的实验模型(参见科技文献：Hayashi G.,TakemoriA.E.The type of analgesic-receptor interaction involved in certain analgesicassays.Eur.J.Pharmacol.1971,16:63-66)测试了3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。按实验需要数量取雌性健康昆明小鼠，体重18～22g，随机分组，每组10只。各组依次为：阴性对照组(0.9％氯化钠溶液)，阳性对照组(阿司匹林的剂量分别为400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg)，样品组的剂量分别为20.00mg/kg、10.00mg/kg、5.00mg/kg、2.50mg/kg、1.25mg/kg)，给药后30min，各鼠注射0.6％醋酸溶液0.2ml。观察并记录注射醋酸溶液后15min内的扭体次数。比较不同组别受试小鼠的扭体次数的差异，并计算药物对扭体反应的抑制率。

抑制率＝(对照组平均扭体次数－给药组平均扭体次数)/对照组平均扭体次数×100％)。

计算半数有效剂量IC₅₀，阿司匹林对小鼠醋酸扭体反应抑制的半数有效剂量测定结果为74.33mg/kg，3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸对小鼠醋酸扭体反应抑制的IC₅₀测定结果为11.60mg/kg，表明本发明的化合物具有显著抑制小鼠醋酸扭体反应的能力。

实施例6

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸，加入片剂常用辅料，按常规制备工艺制备成片剂。

实施例7

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸，加入注射剂常用辅料，按常规制备工艺制备成注射剂。

实施例8

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸，加入胶囊剂常用辅料，按常规制备工艺制备成胶囊剂。

实施例9

按实施例3所述方法，制备获得的3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸，加入巴布剂常用辅料，按常规制备工艺制备成巴布剂。

实施例10

按实施例1所述方法，制备获得的含有3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-6-O-乙基吡喃葡萄糖醛酸基皂树酸的提取物，加入碱性温泉水，按常规制备工艺制备温泉药浴浴液。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种葡萄糖醛酸类三萜皂苷，其特征在于，具有以下的结构式(I)：

2.权利要求1所述结构式(I)化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将金铁锁植物晾干粉碎后用溶剂提取，合并提取液；

(2)减压浓缩步骤(1)得到的提取液得到浸膏；

(3)将步骤(2)得到的浸膏混悬于水中，用石油醚萃取，除去小极性部分，保留水部分；

(4)将步骤(3)得到的水部分依次经D-101大孔树脂柱，正向硅胶柱，葡聚糖凝胶柱(Sephedex LH-20)及半制备高效液相色谱(HPLC)分离，得到结构式(I)化合物。

3.根据权利要求2所述结构式(I)化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)取金铁锁植物5-8倍重量的溶剂提取1～2小时，提取1～3次，合并滤液即得到金铁锁药材提取物溶液。

4.根据权利要求2所述结构式(I)化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶剂为50～95体积％的乙醇/水、50～95体积％的甲醇/水、或50-90体积％的丙酮/水。

5.权利要求1所述结构式(I)化合物在制备镇痛药物中的用途，所述式(I)化合物作为活性成分与药学上可接受的载体或辅料制备成镇痛药物组合物。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述镇痛为治疗神经痛、骨痛、肌肉疼痛、跌打损伤引起的疼痛、头痛、胃痛、肠绞痛、胆绞痛、肾绞痛及癌症疼痛。

7.根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、丸剂、注射剂、温泉浴剂。

8.根据权利要求5-7所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物选自缓释制剂或控释制剂。