CN119925408A - miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 - Google Patents
miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN119925408A CN119925408A CN202410138539.7A CN202410138539A CN119925408A CN 119925408 A CN119925408 A CN 119925408A CN 202410138539 A CN202410138539 A CN 202410138539A CN 119925408 A CN119925408 A CN 119925408A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mir
- pulmonary fibrosis
- preventing
- preparation
- treating pulmonary
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于生物医药技术领域，涉及miR‑143‑3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用。本申请中，研究发现miR‑143‑3p能够显著抑制肺成纤维细胞的激活，有效缓解肺部炎症和肺纤维化疾病的发生，对肺纤维化疾病的治疗提供新的参考。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药与分子生物学领域，具体涉及一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化相关药物中的应用。
背景技术
目前，临床上用于治疗肺纤维化的方案主要包括药物治疗、物理性训练和肺移植等。其中，吡非尼酮和尼达尼布是目前被公认的两种用于肺纤维化疾病治疗的临床药物，虽然这两种药物在一定程度上具有减缓疾病进展的作用，但这两种药物的作用仅限于延缓疾病的发展，达不到治愈的效果，且二者均具有一定的副作用。肺移植是晚期肺纤维化患者唯一的希望，然而由于器官的缺乏和手术的复杂性，极大的限制了肺移植在肺纤维化疾病治疗中的应用。因此，寻找一种能够有效预防和治疗肺纤维化的药物是目前需要解决的问题。
发明内容
1.本申请研究发现，miR-143-3p可以抑制肺成纤维细胞的活化，降低肺纤维化组织中胶原沉积和炎症反应，有效预防和治疗肺纤维化疾病的发生。
2.为了实现上述发明目的，本发明提供了一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用。
3.优选地，miR-143-3p的序列SEQ ID NO：1所示，为5’-
UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’
4.优选地，miR-143-3p能抑制肺成纤维细胞的活化，降低纤维化肺组织中胶原沉积和炎症反应。
5.本发明提供的技术方案包括：促进miR-143-3p表达或增强miR-143-3p功能的试剂在制备预防或治疗肺纤维化疾病药物中的应用，
6.优选地，应用中所述药物活性成分包括miR-143-3p的化学修饰形式AgomiR-143-3p、miR-143-3p的模拟物或者携带miR-143-3p的载体。
7.优选地，miR-143-3p在制备促进受损肺泡干细胞再生产品中的应用，其特征在于，所述递送miR-143-3p和/或miR-143-3p模拟物的载体包括外泌体、脂质体、纳米酶、多聚体纳米颗粒等其中的一种或多种。
8.优选地，miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化疾病产品中的应用，其特征在于，所述产品剂型为缓释制剂、注射剂、滴注剂或喷剂等。
9.本发明可以获得以下技术效果：miR-143-3p显著抑制肺成纤维细胞的活化，抑制纤维化肺组织中炎症反应和胶原的沉积；因此，miR-143-3p可以用来制备预防或治疗肺纤维化药物。
附图说明
图1为实施例中不同浓度TGF-β1对肺成纤维细胞中蛋白表达的影响；
图2为miR-143-3p转染肺成纤维细胞后细胞中miR-143-3p的表达情况；
图3为实施例中miR-143-3p对TGF-β1活化的肺成纤维细胞中蛋白表达的影响；
图4为实施例中AgomiR-143-3p对肺纤维化小鼠病理和胶原沉积的影响。
具体实施方式
为了更加清楚的说明标本发明专利实施的具体方案，下面将结合具体实施例对本发明进行全面描述。
以下实施例中，所用miR-143-3p的序列为SEQ ID NO：1所示，为：5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’。所用miR-143-3p模拟物的序列如SEQ ID NO：2所示，Sense5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’；Anti-Sense 5’-GCUACAGUGCUUCAUCUCAUU-3’。
实施例1：不同浓度TGF-β1对肺成纤维细胞活化的影响
目前研究认为，纤维化肺组织中大多数肌成纤维细胞主要来自内源性肺成纤维细胞的活化。肺成纤维细胞活化的诱因主要包括：局部转化生长因子-β(transforminggrowth factor-β,TGF-β)的升高、基质蛋白的修饰与变化以及局部机械应力的增加，其中TGF-β被认为是活化肺成纤维细胞的主要因素。本申请研究中，将0.5×105个MRC-5(人胚肺成纤维细胞)接种于6孔板中，待细胞汇合度达70％时，添加终浓度为2.5、5、10ng/mL的TGF-β1处理细胞，不同浓度的TGF-β1处理细胞不同时间(0、12、24、36、48h)后，用遇冷的PBS清洗细胞2次，然后每孔中加入500μL的RIPA裂解液，冰上裂解30min，随后用细胞刮刮取蛋白，12,000g低温离心20min，取上清收集蛋白，将蛋白浓度统一定量为1μg/μL。取10μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，10V电压下半干转印2h，使用Fibronectin-1、Collagen-1等抗体检测细胞中与纤维化相关蛋白的表达。结果如图1所示，不同浓度TGF-β1处理肺成纤维细胞后，随着处理时间的延长，Fibronectin和Collagen I蛋白表达逐渐增加；其中，5ng/mL的TGF-β1处理细胞36h后，细胞中Fibronectin和Collagen I蛋白已开始明显增加。这表明，5ng/mL TGF-β1处理肺成纤维细胞36h后，已明显转化为具有分泌胶原蛋白的肌成纤维细胞。因此，本申请的以下研究中将采用5ng/mL的TGF-β1处理肺成纤维细胞36之后，体外分析miR-143-3p对肌成纤维细胞的抑制效果。
实施例2：miR-143-3p-mimic转染肺成纤维细胞后细胞中miR-143-3p的表达
本申请中，我们将采用qRT-PCR检测肺成纤维细胞中miR-143-3p的表达，检测过程如下：
①提取总RNA：MRC-5细胞接种于6孔板中，待细胞汇合度达到50％时，更换培养基为含5ng/mL的完全培养基，36h后更换新鲜培养基，使用RNAiMAX转染试剂每孔转染30nM的mimic-NC或miR-143-3p-mimic继续培养48h。加入1mL的Trizol Regent，充分混匀，冰上静置5min，将裂解液转移到1.5mL离心管中；加入200μL氯仿，剧烈振荡15s，冰上静置5min；12,000g低温离心15min，将上清转移到一新的1.5mL离心管中；加入等体积的异丙醇，颠倒混匀直至无絮状，冰上静置15min；12,000g低温离心10min，弃上清；加入1mL75％乙醇洗涤RNA沉淀；7,000g低温离心7min，弃上清；晾干加入100μL的DEPC水，-80℃保存备用。
②加尾法合成miRNA的第一链cDNA(加尾和逆转录一步完成)：使用南京诺唯赞公司的miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(by tailing A)货号MR201,对步骤①提取的总RNA进行miRNA的加A尾逆转录。具体操作详见诺唯赞公司官方说明书(https://www.vazyme.com/product/621.html)。
(1)在RNase-free离心管中配制如下缓和液：
(反应中使用的总RNA必须含有miRNA)
移液器轻轻吹打混匀，瞬时离心，按照37℃60min，85℃5min的程序进行即可获得miRNA第一链cDNA。
③qRT-PCR检测细胞中miR-451a的表达水平
其中，95℃10s；60℃30s循环40次。选择U6作为miRNA的内部对照。
④qPCR中所用引物信息：
| miR-143-3p-F | TGAGATGAAGCACTGTAGCTC |
| miR-143-3p-R | GCTACAGTGCTTCATCTCATT |
| U6-F | CGCTTCGGCAGCACATATAC |
| U6-R | TTCACGAATTTGCGTGTCAT |
实施例3：miR-143-3p模拟物抑制肺成纤维细胞的活化
本申请中，首先我们在体外水平研究miR-143-3p对肺成纤维细胞活化的影响。6孔板中，接种0.5×105个MRC-5细胞，待细胞汇合度达到70％左右时，加入2.5ng/mL的TGF-β1刺激细胞24h使肺成纤维细胞活化；然后，使用miR-143-3p-mimic或mimic-NC处理细胞，48h后收集细胞。采用Western Blot检测Fibronectin-1、Collagen-1、N-cad等蛋白的表达。结果如实施图2显示，与mimic-NC组相比，miR-143-3p-mimic能显著抑制活化肺成纤维细胞中胶原蛋白和肌成纤维蛋白的表达。
实施例4：AgomiR-143-3p降低肺纤维化组织中炎症反应和胶原沉积
将8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组：对照组、BLM组、BLM+AgomiR-NC、BLM+AgomiR-143-3p组。本申请中，我们使用Micro-Sprayer雾化器将50μL的BLM(1.5U/kg)或生理盐水雾化于C57BL/6小鼠肺组织中，BLM处理小鼠一周后，BLM+AgomiR-NC、BLM+AgomiR-143-3p组小鼠通过尾静脉注射给予5mg/kg(100μL)的Agomir-NC或Agomir-143-3p；两周后采用苏木精-伊红染色(H&E staining)检测小鼠肺组织病理变化情况。结果图3所示，BLM处理组小鼠肺组织展示出严重的肺泡坍塌、炎性细胞浸润和间质性增厚，出现明显的间质性增厚和胶原纤维沉积；同时小鼠肺组织内羟脯氨酸含量和炎症因子明显增加。然而，Agomir-143-3p能够显著降低受损肺组织中的胶原沉积和纤维化面积，降低肺纤维化组织中炎症反应、恢复正常肺组织结构。
以上所述的实施例仅表明本发明中的几种实施方式，以便于更加详细和具体的理解本发明的技术方案，仅为本发明较佳实施例而已，并不能因此而理解对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域技术人员可以理解为实现上述实施的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的同等改进，均属于发明所涵盖的范围。
Claims (10)
1.一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述miR-143-3p来源于脐带间充质干细胞外泌体。
3.根据权利要求1所述的一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，miR-143-3p的序列如SEQ ID NO：1所示，为5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’。
4.根据权利要求2所述的一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，miR-143-3p的序列如SEQ ID NO：1所示，为5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的一种miR-143-3p在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述miR-143-3p的递送载体包括外泌体、脂质体、纳米酶、多聚体纳米颗粒等其中的一种或多种。
6.一种miR-143-3p模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的一种miR-143-3p模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述miR-143-3p来源于脐带间充质干细胞外泌体。
8.根据权利要求6所述的一种miR-143-3p模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，miR-143-3p模拟物的序列如SEQ ID NO：2所示，Sense 5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’；Anti-Sense 5’-GCUACAGUGCUUCAUCUCAUU-3’。
9.根据权利要求7所述的一种miR-143-3p模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，miR-143-3p模拟物的序列如SEQ ID NO：2所示，为Sense 5’-UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC-3’；Anti-Sense 5’-GCUACAGUGCUUCAUCUCAUU-3’。
10.根据权利要求6-9任意一项所述的一种miR-143-3p模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述miR-143-3p模拟物的递送载体包括外泌体、脂质体、纳米酶、多聚体纳米颗粒等其中的一种或多种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410138539.7A CN119925408A (zh) | 2024-01-31 | 2024-01-31 | miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410138539.7A CN119925408A (zh) | 2024-01-31 | 2024-01-31 | miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN119925408A true CN119925408A (zh) | 2025-05-06 |
Family
ID=95547508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410138539.7A Pending CN119925408A (zh) | 2024-01-31 | 2024-01-31 | miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN119925408A (zh) |
-
2024
- 2024-01-31 CN CN202410138539.7A patent/CN119925408A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhu et al. | Molecular mechanism of myofibroblast formation and strategies for clinical drugs treatments in hypertrophic scars | |
| JP7514349B2 (ja) | ラニフィブラノールを含む、幹細胞由来エクソソーム生成促進及び幹細胞能増強用組成物 | |
| Xia et al. | Biomaterials delivery strategies to repair spinal cord injury by modulating macrophage phenotypes | |
| CN110903348A (zh) | 一种促进伤口愈合的小肽及其应用 | |
| US12006501B2 (en) | Composition of drug targets and method of using thereof | |
| WO2018176330A1 (zh) | 小rna及其用于预防和/或治疗纤维增生性病症和/或综合征 | |
| CN116617211B (zh) | 一种组合物在制备外科伤口治疗药物中的应用 | |
| CN119925408A (zh) | miR-143-3p及其模拟物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 | |
| CN116036280A (zh) | Myo9b抑制剂在用于制备预防和/或治疗个体纤维化疾病药物中的应用 | |
| Wang et al. | Study on the mechanism of BMSCs in regulating NF-κB signal pathway by targeting miR-449a to improve the inflammatory response to peripheral nerve injury | |
| Zheng et al. | Study on the efficacy of nanoantibiotics in rats with sepsis based on MicroRNA-195 and TGF-β1/smads signaling pathway | |
| Wen et al. | Functional nucleic acids for the treatment of diabetic complications | |
| CN107951918B (zh) | 金银花石油醚部位提取物在制备治疗肺纤维化药物中的应用 | |
| He et al. | Pericarpium Trichosanthis Inhibits TGF‐β1‐Smad3 Pathway‐Induced Cardiac Fibrosis in Heart Failure Rats via Upregulation of microRNA‐29b | |
| Gao et al. | Sulfated chitosan directs the recovery of ischemic stroke by attenuating the inflammatory cascade | |
| CN118291471B (zh) | 一种用于治疗糖尿病伤口的小分子rna及其应用 | |
| CN115581769B (zh) | 一种用于治疗或者预防个体纤维化疾病的抑制剂、药物组合物及其应用 | |
| CN119157867A (zh) | Danthron在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应用 | |
| CN114796466B (zh) | 一种星型胶质细胞特异性mettl3过表达的重组腺相关病毒的应用 | |
| CN106727916B (zh) | 罗勒多糖提取物在制备治疗肺纤维化药物中的应用 | |
| CN110917335B (zh) | Erdr1在预防和治疗纤维化疾病中的用途 | |
| CN112294961B (zh) | Acp5抑制剂及其在预防和治疗纤维化疾病中的用途 | |
| CN116509887B (zh) | 尖叶假龙胆来源的Gen-miR-5在制备防治心肌肥大的药物中的应用 | |
| CN117838868A (zh) | miR-103-3p在ADSCs移植中的应用 | |
| CN113244376A (zh) | 一种提高免疫促进伤口愈合的药物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |