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CN110291397A - 肺癌的检测和治疗方法 - Google Patents

肺癌的检测和治疗方法 Download PDF

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CN110291397A
CN110291397A CN201880010925.0A CN201880010925A CN110291397A CN 110291397 A CN110291397 A CN 110291397A CN 201880010925 A CN201880010925 A CN 201880010925A CN 110291397 A CN110291397 A CN 110291397A
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Abstract

提供了用于检测早期肺癌的方法和相关试剂盒，以及确定患肺癌的风险。

Description

肺癌的检测和治疗方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年2月9日提交的美国临时申请第62/456,731号的优先权，将其公开内容全部并入本文以供参照。
序列表的并入
包括在名为“MDA0025401PC_ST25”的文件中的序列表，其在Microsoft Windows操作系统中检测为140千字节并且在2018年1月4日创建，以电子方式提交，并且并入本文以供参照。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
本发明是在美国国防部(Department of Defense)颁发的基金号为W81XWH-1-1-632的政府资助下进行的。政府对本发明享有一定权利。
背景技术
肺癌是美国最普遍的癌症，五年存活率小于15％。对肺癌的治疗正在从使用由辐射、叶酸代谢、基于铂的药物和/或基于紫杉醇的药物组成的有限选择的疗法转变为需要对肿瘤和/或存在或缺乏关键生物标志物或治疗性靶蛋白进行组织学表征的更靶向的治疗。
肺癌是世界范围内的主要癌症杀手，并且占美国所有癌症死亡中的四分之一。来自全国肺筛查试验(NLST)的数据表明，每年对高风险现下吸烟者和戒烟者进行胸部LDCT筛查使肺癌死亡率降低20％，总死亡率降低7％。因此，美国预防服务工作组(USPSTF)已推荐在已吸烟30包年(pack-year)、戒烟后不超过15年的年龄为55-80岁的烟民(ever-smoker)中进行LDCT筛查肺癌。然而，NLST研究使得就与过度诊断相关联的发病率、良性结节治疗和经济成本而言与CT筛查相关的几个重要消极方面变得突出。重要的是，基于目前的筛查标准，通过筛查挽救的生命数量占肺癌死亡总人数的百分比估计相对较小。此外，从一般群体队列(英国Biobank和欧洲癌症与营养前瞻性调查(EPIC)研究)招募的一百多万受试者的数据表明，少于50％发生率(incident)的肺癌病例将有资格基于USPSTF标准接受筛查。
关于肺癌风险预测的大量文献对于在鉴定CT筛查受试者时用基于风险的模型替换二分类USPSTF筛查标准的益处提供了令人信服的论据。例如，最近估计通过使用基于个体风险评估的筛查标准可以避免20％的额外肺癌死亡。考虑到利用这种风险预测工具所需的信息可以由普通医师轻松确定-或者甚至使用在线风险计算器进行自我评估-未来的肺癌筛查项目似乎可能在评估筛查资格时实施这些工具。
USPSTF筛查标准的替代方案将是基于个体水平风险的筛查标准，其准确地估计每名个体在不久的将来(例如，1-3年)的肺癌风险。已经发布了几种依赖于人口统计数据(年龄和性别)和问卷调查(主要是吸烟)的风险因素数据的风险预测模型。然而，通过并入包括无法通过问卷调查获取的信息的生物标志物，可以获得实质性的改善。
目前正使用靶向核酸、蛋白质和代谢物以及循环肿瘤细胞和微粒的各种分析平台，努力开发用于肺癌早期检测的基于血液的生物标志物。例如，蛋白质组学研究已确定了几种候选循环标志物，包括表面活性蛋白B(SFTPB)及其前体形式(Pro-SFTPB)，当使用在LDCT(AUC改善：0.67-0.74)时收集的血液样品以及来自医师健康研究(Physicians HealthStudy)的诊断前血液样品进行测定时，已证明Pro-SFTPB结合吸烟信息可以显著改善肺癌风险预测。已发现其它循环蛋白在肺癌中表现出增加的水平，但具有有限的灵敏度和特异性而不足以用作肺癌筛查的单一标志物。
鉴于SFTPB及其前体形式Pro-SFTPB在肺癌诊断之前收集的样品中和在筛查环境中的表现，使用一组选定的肿瘤相关蛋白质对USPSTF标准进行改进的可能性进行了研究。该研究基于高风险肺癌前瞻性队列、用于建立小组的β-胡萝卜素和视黄醇功效试验(CARET)研究、以及选自两个大型一般群体队列的病例和对照、欧洲癌症与营养前瞻性调查(EPIC)研究以及瑞典北部健康与疾病研究(NSHDS)，涉及367,000名参与者进行验证。
发明内容
本公开提供用于肺癌早期检测的方法和试剂盒。该方法和试剂盒利用对从受试者获取的生物样品中包括的生物标志物的多个测定。对至少四种生物标志物：CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的联合分析，在针对具有已知肺癌状态(即肺癌阳性或肺癌阴性)的队列进行筛查时提供高准确性的肺癌诊断。任选地，也可以分析二乙酰精胺(DAS)的水平。
基于来自受试者的生物样品中发现的CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的水平，鉴定出可以预测受试者的肺癌状态的回归模型。
在一美国队列中开发基于四种单独的生物标志物的生物标志物得分，并且在两个欧洲队列中的外部验证证实，与仅基于吸烟信息的模型相比，将生物标志物得分与吸烟信息合并在综合风险预测模型中提供了在病例和对照之间总体区分的显著改善。与USPSTF筛查标准的42％相比，综合风险预测模型鉴定验证样品中76％的未来肺癌病例，而不增加假阳性数量。
因此，本文提供：
·检测受试者肺癌和肺癌风险的方法；
·确定和/或对受试者中肺癌存在的风险增加进行定量的方法；
·确定受试者患肺癌风险的方法；
各自包括测量来自受试者的样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的水平。
还提供治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的水平将受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌的风险。
还提供相应的试剂盒，用于确定来自受试者的样品中肺癌指标的存在，用于检测受试者中的肺癌和肺癌风险，以及用于确定和/或对受试者中肺癌存在的风险增加进行定量，该试剂盒包括用于测量样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB以及任选的二乙酰精胺(DAS)的材料。
在一些实施方式中，在从受试者抽取的血液样品中测量生物标志物。在一些实施方式中，可以确定生物样品中生物标志物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物样品中的生物标志物的水平进行定量。
在一些实施方式中，提供表面以分析生物样品。在一些实施方式中，目标生物标志物非特异性地吸附在该表面上。在一些实施方式中，将对目标生物标志物具有特异性的受体掺入该表面。在一些实施方式中，表面与颗粒结合，例如珠子。
在一些实施方式中，生物标志物结合特定受体分子，并且可以确定生物标志物-受体复合物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物标志物-受体复合物的量进行定量。在一些实施方式中，受体分子与酶连接以促进检测和定量。
在一些实施方式中，生物标志物结合特定的中继分子，并且生物标志物-中继分子复合物转而又结合受体分子。在一些实施方式中，能够确定生物标志物-中继-受体复合物的存在或缺乏。在一些实施方式中，可以对生物标志物-中继-受体复合物的量进行定量。在一些实施方式中，受体分子与酶连接以促进检测和定量。
在一些实施方式中，依次分析生物样品的各个生物标志物。在一些实施方式中，将生物样品分成单独的部分以允许同时分析多种生物标志物。在一些实施方式中，在针对多种生物标志物的单个过程中分析生物样品。
在一些实施方式中，能够通过视觉检查确定生物标志物的存在或缺乏。在一些实施方式中，生物标志物的量能够通过使用光谱技术来确定。在一些实施方式中，光谱技术是质谱法。在一些实施方式中，光谱技术是UV/Vis光谱法。在一些实施方式中，光谱技术是激发/发射技术，如荧光光谱法。
在一些实施方式中，生物标志物CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的分析能够与其它生物标志物的分析组合。在一些实施方式中，另外的生物标志物可以是蛋白质生物标志物。在一些实施方式中，另外的生物标志物可以是非蛋白质生物标志物。在一些实施方式中，非蛋白质生物标志物可以是循环肿瘤DNA(ctDNA)。在一些实施方式中，这种方法可进一步包括测量生物样品中代谢物例如二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在一些实施方式中，可根据需要引入另外的代谢物。
在一些实施方式中，提供用于分析生物样品的试剂盒。在一些实施方式中，试剂盒能够含有进行分析所需的化学品和试剂。在一些实施方式中，试剂盒包括用于对生物样品操作的手段，以便最小化所需的操作者干预。在一些实施方式中，试剂盒能够以数字方式记录分析的结果。在一些实施方式中，试剂盒能够对分析产生的数据进行任何所需的数学处理。
另一方面，本公开提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本公开提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括血浆衍生的生物标志物组和蛋白质标志物组，其中血浆衍生的生物标志物组包括二乙酰精胺(DAS)；其中蛋白质生物标志物组包括CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB；其中该方法包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中血浆衍生的生物标志物和蛋白质生物标志物的水平；其中，血浆衍生的生物标志物和蛋白质生物标志物的量将受试者分类为处于患癌症的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本公开提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括确定一种或多种蛋白质生物标志物和一种或多种代谢物标志物的水平，所述方法包括从受试者获取生物样品；使样品与结合CEA抗原的第一报告分子接触；使样品与结合CA125抗原的第二报告分子接触；使样品与结合CYFRA21-1抗原的第三报告分子接触；并使样品与结合pro-SFTPB抗原的第四报告分子接触；以及确定一种或多种生物标志物的水平，其中该一种或多种生物标志物选自二乙酰精胺(DAS)；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子、第四报告分子和一种或多种生物标志物的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本公开提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB抗原的水平；测量生物样品中选自二乙酰精胺(DAS)的一种或多种代谢物标志物的水平；如通过对生物样品中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原和二乙酰精胺(DAS)的水平进行统计分析所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本公开提供一种治疗疑似患有肺癌或处于患肺癌的风险的受试者的方法，其包括用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险；施用治疗有效量的对癌症的治疗。在一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，这种方法包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的抗原。在另一个实施方式中，CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，蛋白质或代谢物标志物中的至少一种产生能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过光谱法检测。在另一个实施方式中，光谱法是质谱法。在另一个实施方式中，这种方法可包括将患者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法可包括对指定为患有肺癌的患者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
另一方面，本发明提供一种用于本文所述方法的试剂盒，其包括试剂溶液，该试剂溶液包括用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
另一方面，本公开提供一种用于本文所述方法的试剂盒，其包括第一试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；第二试剂溶液，其包括用于检测CA125抗原的第二溶质；第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质；第五试剂溶液，其包括用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
在一个实施方式中，这种试剂盒包括用于使试剂溶液与生物样品接触的装置。在另一个实施方式中，这种试剂盒包括至少一个表面，其具有结合至少一种抗原的手段(means)。在另一个实施方式中，该至少一种抗原选自CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB。在另一个实施方式中，该至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。
另一方面，本公开提供一种治疗疑似有患肺癌风险的受试者的方法，其包括：用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险；施用治疗有效量的对肺癌的治疗。在一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，这种方法包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的抗原。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB或二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，蛋白质或代谢物标志物中的至少一种产生能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过光谱法检测。在另一个实施方式中，光谱法是质谱法。在另一个实施方式中，这种方法包括将患者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法包括对指定为患有肺癌的患者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
另一方面，本公开提供一种治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平将受试者分类为患有肺癌或者处于患肺癌的风险，该方法包括以下一项或多项：向肺癌受试者施用化疗药物；向肺癌受试者施用治疗性放射；和外科手术，用于部分或完全手术切除肺癌受试者中的癌组织。在一个实施方式中，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，AUC(95％CI)为至少0.83或至少0.80。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，AUC(95％CI)为至少0.830或至少0.800。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。在另一个实施方式中，肺癌在可切除阶段诊断。
另一方面，本公开提供一种治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原、二乙酰精胺(DAS)的水平将受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌风险，该方法包括以下一项或多项：向肺癌受试者施用化疗药物；向肺癌受试者施用治疗性放射；和外科手术，用于部分或完全手术切除肺癌受试者中的癌组织。在一个实施方式中，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，受试者处于肺癌的高风险中。
另一方面，本公开提供一种治疗疑似有患肺癌风险的受试者的方法，其包括用本文公开的方法分析受试者患肺癌的风险；施用治疗有效量的对肺癌的治疗。在一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
附图说明
图1描述CARET中所有5种生物标志物以及4种标志物组的ROC曲线。
图2描述CARET中所有5种生物标志物以及4种标志物组在诊断后0-6个月的ROC曲线。
图3描述CARET中所有5种生物标志物以及4种标志物组在诊断后≥6-12个月的ROC曲线。
图4描述对于所有分析的样品(左上图)、腺癌样品(右上图)、鳞状细胞肺癌(左下图)、以及不是鳞状细胞肺癌和腺癌的样品(右下图)，4-标志物组(深灰色线)、添加二乙酰精胺(DAS)的4-标志物组(虚线)和单独的DAS(浅灰色线)的ROC曲线。
具体实施方式
一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA的水平；测量生物样品中CA125的水平；测量生物样品中CYFRA21-1的水平；测量生物样品中Pro-SFTPB的水平；其中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；使样品与结合CEA的第一报告分子接触；使样品与结合CA125的第二报告分子接触；使样品与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使样品与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；提供结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的表面；将表面与生物样品一起孵育；使表面与结合CEA的第一报告分子接触；使表面与结合CA125的第二报告分子接触；使表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使表面与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；测量与表面相关联的第一报告分子的量；测量与表面相关联的第二报告分子的量；测量与表面相关联的第三报告分子的量；测量与表面相关联的第四报告分子的量；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；提供具有结合CEA的手段的第一表面；提供具有结合CA125的手段的第二表面；提供具有结合CYFRA21-1的手段的第三表面；提供具有结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；将第一表面与生物样品一起孵育；将第二表面与生物样品一起孵育；将第三表面与生物样品一起孵育；将第四表面与生物样品一起孵育；使第一表面与结合CEA的第一报告分子接触；使第二表面与结合CA125的第二报告分子接触；使第三表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使第四表面与结合pro-SFTPB的第三报告分子接触；测量与第一表面相关联的第一报告分子的量；测量与第二表面相关联的第二报告分子的量；测量与第三表面相关联的第三报告分子的量；测量与第四表面相关联的第三报告分子的量；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；提供具有结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的手段表面；将表面与生物样品一起孵育；使表面与结合CEA的第一中继分子接触；使表面与结合CA125的第二中继分子接触；使表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；使表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；使表面与结合第一中继分子的第一报告分子接触；使表面与结合第二中继分子的第二报告分子接触；使表面与结合第三中继分子的第三报告分子接触；使表面与结合第四中继分子的第四报告分子接触；测量与第一中继分子和CEA相关联的第一报告分子的量；测量与第二中继分子和CA125相关联的第二报告分子的量；测量与第三中继分子和CYFRA21-1相关联的第三报告分子的量；测量与第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的第四报告分子的量；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；提供具有结合CEA的手段的第一表面；提供具有结合CA125的手段的第二表面；提供具有结合CYFRA21-1的手段的第三表面；提供具有结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；将第一表面与生物样品一起孵育；将第二表面与生物样品一起孵育；将第三表面与生物样品一起孵育；将第四表面与生物样品一起孵育；使第一表面与结合CEA的第一中继分子接触；使第二表面与结合CA125的第二中继分子接触；使第三表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；使第四表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；使第一表面与结合第一中继分子的第一报告分子接触；使第二表面与结合第二中继分子的第二报告分子接触；使第三表面与结合第三中继分子的第三报告分子接触；使第四表面与结合第四中继分子的第四报告分子接触；测量与第一中继分子和CEA相关联的第一报告分子的量；测量与第二中继分子和CA125相关联的第二报告分子的量；测量与第三中继分子和CYFRA21-1相关联的第三报告分子的量；测量与第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的第四报告分子的量；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
在一个实施方式中，相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的量在受试者中升高。如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的量升高。在另一个实施方式中，至少一个表面还包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，这种方法还包括：测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在另一个实施方式中，样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。在另一个实施方式中，生物样品是血清。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。在另一个实施方式中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。在另一个实施方式中，基于测量的生物标志物浓度确定受试者是否患有肺癌。在另一个实施方式中，测量的浓度用于基于表10中列出的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。在另一个实施方式中，这种方法还包括以下步骤：将生物样品中所测量的每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。在另一个实施方式中，小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。在另一个实施方式中，至少一个表面是固体颗粒的表面。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，至少一种报告分子提供能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。在另一个实施方式中，光谱法是质谱术。在另一个实施方式中，小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，第一报告分子选择性结合CEA。在另一个实施方式中，第二报告分子选择性结合CA125。在另一个实施方式中，第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。在另一个实施方式中，第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。在另一个实施方式中，这种方法包括将受试者历史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
另一方面，本发明提供一种治疗疑似患肺癌的受试者的方法，其包括用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险，并施用治疗有效量的对癌症的治疗。在一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，这种方法还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。在另一个实施方式中，肺癌在可切除阶段诊断。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；通过使生物样品与CEA抗体接触并观察CEA与抗体之间的结合来测量生物样品中CEA的水平；通过使生物样品与CA125抗体接触并观察CA125与抗体之间的结合来测量生物样品中CA125的水平；通过使生物样品与CYFRA21-1抗体接触并观察CYFRA21-1与抗体之间的结合来测量生物样品中CYFRA21-1的水平；通过使生物样品与pro-SFTPB抗体接触并观察pro-SFTPB与抗体之间的结合来测量生物样品中pro-SFTPB的水平；如通过CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测量所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA的水平；测量生物样品中CA125的水平；测量生物样品中CYFRA21-1的水平；测量生物样品中pro-SFTPB的水平；确定CEA相对于第一标准值的水平，其中该比率可预测肺癌的存在；确定CA125相对于第二标准值的水平，其中该比率可预测肺癌的存在；确定CYFRA21-1相对于第三标准值的水平，其中该比率可预测肺癌的存在；确定pro-SFTPB相对于第四标准值的水平，其中该比率可预测肺癌的存在；并且如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的比率的统计分析所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种预测受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；并如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，计算预测因子。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；通过对生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种使用从疑似患有肺癌的受试者获取的生物样品来确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括使用至少一种对CEA具有特异性的抗体或抗体级分测定生物样品中存在的CEA的水平；使用至少一种对CA125具有特异性的抗体或抗体级分测定生物样品中存在的CA125的水平；使用至少一种对CYFRA21-1具有特异性的抗体或抗体级分测定生物样品中存在的CYFRA21-1的水平；使用至少一种对pro-SFTPB具有特异性的抗体或抗体级分测定生物样品中存在的pro-SFTPB的水平；并确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示受试者患有肺癌。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；用抗CEA抗体或其抗原结合片段对样品进行免疫测定；用抗CA125抗体或其抗原结合片段对样品进行免疫测定；用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段对样品进行免疫测定；用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段对样品进行免疫测定；其中抗体的结合指示受试者中的肺癌，并且免疫测定能够检测早期肺癌。
另一方面，本发明提供一种用于确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；用抗CEA抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗CA125抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示受试者患有肺癌。在一个实施方式中，相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平在受试者中升高。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，至少一个表面还包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原。在另一个实施方式中，至少一个表面是固体颗粒的表面。在另一个实施方式中，这种方法还包括测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在另一个实施方式中，样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。在另一个实施方式中，生物样品是血清。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，至少一种报告分子提供能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。在另一个实施方式中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。在另一个实施方式中，基于所测量的生物标志物浓度确定受试者是否患有肺癌。在另一个实施方式中，测量的浓度用于基于表10中列出的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。在另一个实施方式中，这种方法还包括以下步骤：将生物样品中所测量的每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。在另一个实施方式中，小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。在另一个实施方式中，小组包括已经通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，第一报告分子选择性结合CEA。在另一个实施方式中，第二报告分子选择性结合CA125。在另一个实施方式中，第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。在另一个实施方式中，第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。在另一个实施方式中，这种方法还包括将受试者历史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
另一方面，本发明提供一种治疗疑似患肺癌的受试者的方法，其包括用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险；并施用治疗有效量的对癌症的治疗。在另一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，这种方法还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。在另一个实施方式中，肺癌在可切除阶段诊断。
另一方面，本发明提供一种试剂盒，其用于如权利要求1-24中任一项所述的方法，该试剂盒包括试剂溶液，其包括用于检测CEA的第一溶质；用于检测CA125的第二溶质；用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和用于检测pro-SFTPB的第四溶质。
另一方面，本发明提供一种试剂盒，其用于权利要求1-24中任一项所述的方法，该试剂盒包括第一试剂溶液，其包括用于检测CEA的第一溶质；第二试剂溶液，其包括用于检测CA125的第二溶质；第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质。在另一个实施方式中，这种方法还包括：试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。在另一个实施方式中，这种方法还包括用于使试剂溶液与生物样品接触的装置。在另一个实施方式中，这种方法包括至少一个表面，其具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。在另一个实施方式中，该至少一种生物标志物选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。在另一个实施方式中，该至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。在另一个实施方式中，这种方法还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从患者获得生物样品；测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，包括血浆衍生的生物标志物组和蛋白质标志物组：其中血浆衍生的生物标志物组包括二乙酰精胺(DAS)；其中蛋白质生物标志物组包括CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB；其中该方法包括：从受试者获得生物样品；测量生物样品中血浆衍生的生物标志物和蛋白质生物标志物的水平；其中血浆衍生的生物标志物和蛋白质生物标志物的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括测定一种或多种蛋白质生物标志物和一种或多种代谢物标志物的水平，所述方法包括：从受试者中获取生物样品；使样品与结合CEA抗原的第一报告分子接触；使样品与结合CA125抗原的第二报告分子接触；使样品与结合CYFRA21-1抗原的第三报告分子接触；使样品与结合pro-SFTPB抗原的第四报告分子接触；以及确定一种或多种生物标志物的水平，其中一种或多种生物标志物选自二乙酰精胺(DAS)；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子、第四报告分子和一种或多种生物标志物的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括从受试者获得生物样品；测量生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB抗原的水平；测量生物样品中选自二乙酰精胺(DAS)的一种或多种代谢物标志物的水平；如通过对生物样品中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原和二乙酰精胺(DAS)的水平的统计分析所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在一个实施方式中，相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的水平在受试者中升高。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，这种方法包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的生物标志物或抗原。在另一个实施方式中，这种方法还包括：测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在另一个实施方式中，样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。在另一个实施方式中，生物样品是血清。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，至少一种报告分子提供能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。在另一个实施方式中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。在另一个实施方式中，基于所测量的生物标志物浓度确定受试者是否患有肺癌。在另一个实施方式中，测量的浓度用于基于表10中列出的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。在另一个实施方式中，这种方法还包括以下步骤：将生物样品中所测量的每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。在另一个实施方式中，小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。在另一个实施方式中，小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，第一报告分子选择性结合CEA。在另一个实施方式中，第二报告分子选择性结合CA125。在另一个实施方式中，第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。在另一个实施方式中，第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。在另一个实施方式中，这种方法还包括将受试者历史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
另一方面，本发明提供一种治疗疑似患肺癌的受试者的方法，其包括用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险；并施用治疗有效量的对癌症的治疗。在另一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，这种方法还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。在另一个实施方式中，肺癌在可切除阶段诊断。
在另一个实施方式中，本发明提供一种用于本文所述方法的试剂盒，其包括：试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
在另一个实施方式中，本发明提供一种用于本文所述方法的试剂盒，其包括：第一试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；第二试剂溶液，其包括用于检测CA125抗原的第二溶质；第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质；第五试剂溶液，其包括用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。在另一个实施方式中，这种试剂盒还包括：试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。在另一个实施方式中，试剂盒包括用于使试剂溶液与生物样品接触的装置。在另一个实施方式中，这种试剂盒包括至少一个表面，其具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。在另一个实施方式中，该至少一种生物标志物选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。在另一个实施方式中，该至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。在另一个实施方式中，这种试剂盒还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
另一方面，本发明提供一种治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平将受试者分类为患有肺癌或者处于患肺癌的风险，该方法包括以下一项或多项：向患有肺癌的受试者施用化学治疗药物；向患有肺癌的受试者施用治疗性放射；和外科手术，用于部分或完全手术切除患有肺癌受试者中的癌组织。
另一方面，本发明提供一种治疗或预防肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原、二乙酰精胺(DAS)的水平将受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌的风险，该方法包括以下一项或多项：向患有肺癌的受试者施用化学治疗药物；向患有肺癌的受试者施用治疗性放射；和外科手术，用于部分或完全手术切除患有肺癌受试者中的癌组织。
另一方面，本发明提供一种检测和治疗肺癌的方法，其包括：通过免疫测定法检测从人获取的生物样品中的CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB；对所述收集样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量；将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与截止值进行比较，以确定所述人患肺癌的风险是否增加；其中如果水平高于截止值，则所述人患有肺癌，并对患有肺癌的所述人施用对肺癌的治疗。
另一方面，本发明提供一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：在来自需要分析的受试者的生物样品中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的浓度；并且比较需要诊断的受试者的样品中的生物标志物的浓度和正常或非患病受试者中的浓度，其中对需要诊断的受试者进行患肺癌诊断，其中诊断基于表10中列出的灵敏度或特异性值的截止值。
另一方面，本发明提供一种确定生物样品中肺癌证据的方法，其包括测量来自受试者的生物样品中包括CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)、及其可识别部分的生物标志物组的浓度，其中基于表10中所示的截止值的灵敏度或特异性，各生物标志物的浓度变化是肺癌的特征。在另一个实施方式中，相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的水平在受试者中升高。在另一个实施方式中，与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，参照受试者或组是健康的。在另一个实施方式中，至少一个表面还包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原。在另一个实施方式中，至少一个表面是固体颗粒的表面。在另一个实施方式中，固体颗粒包括珠子。在另一个实施方式中，这种方法包括：测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。在另一个实施方式中，样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。在另一个实施方式中，生物样品是血清。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。在另一个实施方式中，固体颗粒是珠子。在另一个实施方式中，至少一种报告分子与酶连接。在另一个实施方式中，至少一种报告分子提供能够检测到的信号。在另一个实施方式中，能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。在另一个实施方式中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。在另一个实施方式中，基于测量的生物标志物浓度确定受试者患肺癌。在另一个实施方式中，测量的浓度用于基于表10中列出的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。在另一个实施方式中，这种方法还包括以下步骤：将生物样品中所测量的每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。在另一个实施方式中，小组选自：a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。在另一个实施方式中，小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。在另一个实施方式中，第一报告分子选择性结合CEA。在另一个实施方式中，第二报告分子选择性结合CA125。在另一个实施方式中，第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。在另一个实施方式中，第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。在另一个实施方式中，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。在另一个实施方式中，这种方法包括将受试者历史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。在另一个实施方式中，这种方法包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。在另一个实施方式中，该至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
在另一个实施方式中，治疗疑似患肺癌的受试者的方法，包括用本文所述的方法分析受试者患肺癌的风险；以及施用治疗有效量的对癌症的治疗。在另一个实施方式中，治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。在另一个实施方式中，这种方法还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。在另一个实施方式中，受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。在另一个实施方式中，肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。在另一个实施方式中，肺癌在可切除阶段诊断。在另一个实施方式中，这种方法还包括：提供结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的表面；将表面与生物样品一起孵育；使表面与结合CEA的第一报告分子接触；使表面与结合CA125的第二报告分子接触；使表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；使表面与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；测量与表面相关联的第一报告分子的量；测量与表面相关联的第二报告分子的量；测量与表面相关联的第三报告分子的量；测量与表面相关联的第四报告分子的量；其中第一报告分子、第二报告分子、第三报告分子和第四报告分子的量将受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
另一方面，本发明提供一种试剂盒，其用于确定来自受试者的样品中肺癌指标的存在，该试剂盒包括：(a)与选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的每种蛋白质生物标志物结合的抗原结合试剂，或包括所述抗原结合试剂的阵列；(b)用于进行确定个体中肺癌存在的方法的说明。在一个实施方式中，这种试剂盒还包括：试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；用于检测CA125抗原的第二溶质；用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。在另一个实施方式中，这种试剂盒包括用于使试剂溶液与生物样品接触的装置。在另一个实施方式中，这种试剂盒包括至少一个表面，其具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。在另一个实施方式中，至少一种生物标志物或抗原选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。在另一个实施方式中，该至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。在另一个实施方式中，这种试剂盒还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方式中，抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
另一方面，本发明提供一种方法，其包括：a)从对肺癌无症状的受试者中获取样品；b)测量样品中的一组标志物，其中标志物包括CEA、CA125、Cyfra 21-1和二乙酰精胺(DAS)；c)确定每种标志物的生物标志物得分；d)对每种标志物的生物标志物得分求和，以获得每名受试者的综合得分；将受试者存在肺癌的风险增加定量为风险得分，其中将综合得分与分层受试者群体的分组的风险类别相匹配，其中每个风险类别包括乘数，该乘数表示与使用单个阈值相比，与一系列综合得分相关联的患肺癌可能性增加，其中乘数是根据回顾性样品的阳性预测得分确定的；和e)对具有所定量的存在肺癌风险增加的受试者进行计算机断层扫描(CT)扫描或其它设想(imagine)方式。在另一个实施方式中，标志物由CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成。在另一个实施方式中，样品是血液、血清、血浆或其某些部分。在另一个实施方式中，分层的受试者群体的分组、指示患有癌症的可能性增加的乘数和综合得分的范围是从群体的回顾性临床样品中确定的。在另一个实施方式中，风险类别还包括风险标识符。在另一个实施方式中，风险标识符选自低风险、中低风险、中等风险、中高风险和最高风险。在另一个实施方式中，对每个风险类别计算表示患有癌症的可能性增加的乘数包括，基于回顾性生物标志物得分对受试者队列进行分层，并通过每个分层群体的阳性预测得分对队列中已知的癌症患病率进行加权。在另一个实施方式中，分层的受试者群体的分组包括至少三种风险类别，其中表示患有癌症的可能性增加的乘数为约2或更大。在另一个实施方式中，分层的受试者群体的分组包括至少两种风险类别，其中表示患有癌症的可能性增加的乘数为约5或更大。在另一个实施方式中，受试者年龄为50岁或更大并且具有吸烟史。在另一个实施方式中，这种方法还包括生成风险分类表，其中测量一组标志物，确定每种标志物的生物标志物得分，通过对生物标志物得分求和获得综合得分；确定用于将综合得分划分为风险组的阈值，并为每组指定乘数，其指示无症状受试者具有经定量的增加的癌症存在风险的可能性。在另一个实施方式中，该组的形式选自电子表格形式、软件应用程序、计算机程序和excel电子表格。在另一个实施方式中，标志物组包括在结合测定中测量的蛋白质、多肽或代谢物。在另一个实施方式中，标志物组包括使用流式细胞术测量的蛋白质或多肽。
提供用于鉴定受试者中的肺癌的方法，该方法通常包括：(a)将从受试者获取的血液样品应用于四种生物标志物：CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的分析；(b)对血液样品中存在的四种生物标志物的量进行定量；和(c)基于存在的生物标志物的量应用统计分析以确定相应肺癌的生物标志物得分，从而将受试者分类为肺癌阳性或癌症阴性。
本文提供的方法使得能够筛查高风险受试者，如具有肺癌家族史的受试者，或具有其它风险因素如肥胖、重度吸烟和可能的糖尿病的受试者。本文公开的逻辑回归模型能够将这些因素结合到其分类方法中。
如本文所用，“肺癌状态”是指将个体、受试者或患者分类为患有肺癌或不患有肺癌。在一些实施方式中，患有肺癌的个体可称为“肺癌阳性”。在其它实施方式中，不患有肺癌的个体可称为“肺癌阴性”。对于分类为肺癌阳性的受试者，能够提供进一步的方法来阐明肺癌状态。分类为肺癌阳性之后可以是包括但不限于计算机断层扫描(CT)的方法。
CEA的检测能够通过与具有SEQ ID NO.:1所示序列的生物分子接触来完成。
CA125的检测能够通过与具有SEQ ID NO.:2所示序列的生物分子接触来完成。
CYFRA21-1的检测能够通过与具有SEQ ID NO.:3所示序列的生物分子接触来完成。
Pro-SFTPB的检测能够通过与具有SEQ ID NO.:4所示序列的生物分子接触来完成。
至少四种生物标志物CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的组合能够提供先前未见过的、高度可靠的肺癌预测能力。综合风险预测模型的AUC为0.83(95％CI：0.77-0.89)，而仅包括吸烟信息的模型的AUC为0.72(95％CI：0.65-0.79)(AUC差异的p值：0.001)。在USPSTF特异性为0.78(95％CI：0.64-0.87)时，综合风险预测模型的灵敏度为0.76(95％CI：0.57-0.86)，而吸烟模型为0.41(95％CI：0.28-0.66)。相反，在USPSTF灵敏度为0.42(95％CI：0.26-0.54)时，综合风险预测模型的特异性为0.94(95％CI：0.88-0.98)，而吸烟模型为0.78(95％CI：0.70-0.90)。AUC、灵敏度和特异性估计值的这些改善在性别和吸烟状况限定的相关阶层中始终观察的到。
本公开不限于本文报道的用于检测生物标志物的特定生物分子。可选择其它分子用于其它实施方式，包括但不限于基于蛋白质、抗体、核酸、适体的生物分子和合成有机化合物。其它分子可在灵敏度、效率、测定速度、成本、安全性或易于制造或储存方面表现出优势。
在一些实施方式中，测量生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的水平。在一些实施方式中，使CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB与报告分子接触，并测量各个报告分子的水平。在一些实施方式中，提供四种报告分子，其分别特异性结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB。报告分子的使用能够为测定提供方便性和灵敏度的增益。
在一些实施方式中，CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB吸附到试剂盒中提供的表面上。在一些实施方式中，报告分子与表面吸附的CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB结合。生物标志物的吸附可以是非选择性的或选择性的。在一些实施方式中，表面包括受体官能性，用于增加对一种或多种生物标志物的吸附的选择性。
在一些实施方式中，CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB吸附到对一种或多种生物标志物具有选择性的四个表面上。然后报告分子或多个报告分子可以与表面吸附的生物标志物结合，并且与特定表面相关的报告分子的水平能够允许容易地对存在于该表面上的特定生物标志物进行定量。
在一些实施方式中，CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB吸附到试剂盒中提供的表面上；对这些生物标志物中的一种或多种具有特异性的中继分子与表面吸附的生物标志物结合；并且对一种或多种中继分子具有特异性的受体分子与中继分子结合。中继分子能够为某些生物标志物提供特异性，并且受体分子能够实现检测。
在一些实施方式中，提供四种中继分子，其分别特异性结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB。可以有意地设计中继分子以对生物标志物具有特异性，或者鉴于它们的结合特性可以从候选库中选择中继分子。
在一些实施方式中，CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB吸附到试剂盒中提供的四个离散表面上；对这些生物标志物中的一种或多种具有特异性的中继分子与表面吸附的生物标志物结合；并且受体分子与中继分子结合。表面的分析可以以逐步或同时的方式完成。
在一些实施方式中，报告分子与酶连接，促进报告分子的定量。在一些实施方式中，能够通过催化产生具有所需光谱性质的物质来实现定量。
在一些实施方式中，用光谱学测定生物标志物的量。在一些实施方式中，所使用的光谱学是UV-可见光谱学。在一些实施方式中，使用的光谱学是质谱术。在其它实施方式中，使用的光谱学是核磁共振(NMR)光谱学，例如包括但不限于质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术。
在特定测定中发现的生物标志物或多种生物标志物的量能够直接报告给操作者，或者能够以数字方式存储并且容易地用于数学处理。能够提供用于进行数学分析的系统，并且能够进一步向操作者报告分类为肺癌阳性或肺癌阴性。
在一些实施方式中，本领域普通技术人员已知的其它测定能够与本文的公开内容一起起作用。其它测定包括但不限于利用质谱术、免疫亲和LC-MS/MS、表面等离子共振、色谱、电化学、声波、免疫组织化学和阵列技术的测定。
在某些实施方式中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)。
本文讨论的各种系统组件可包括以下中的一个或多个：包括一个或多个处理器的计算机，用于处理数字数据；短期或长期数字存储器；输入模拟-数字转换器，用于提供数字化数据；处理器可用的应用程序，用于指导处理器处理数字数据；用于从受试者或操作者收集信息的输入设备，以及用于向受试者或操作者显示信息的输出设备。
本文还提供治疗分类为肺癌阳性的受试者的方法。肺癌阳性患者的治疗可包括但不限于外科手术、化学疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
关于本文详述的生物标志物的检测，本公开不限于本文报道的特定生物分子。在一些实施方式中，能够选择其它生物分子用于检测和分析所公开的生物标志物，包括但不限于基于蛋白质、抗体、核酸、适体的生物分子和合成有机化合物。其它分子可以在灵敏度、效率、测定速度、成本、安全性或易于制造或储存方面表现出优势。在这方面，本领域普通技术人员将理解，本文公开的生物标志物的预测和诊断能力可扩展到不仅分析这些生物标志物的蛋白质形式，而且还分析生物标志物的其它表示(例如，核酸)。此外，本领域普通技术人员将理解，本文公开的生物标志物的预测和诊断能力还能够与肺癌相关联的其它生物标志物的分析组合使用。在一些实施方式中，肺癌相关联的其它生物标志物能够是基于蛋白质的生物标志物。在一些实施方式中，肺癌相关联的其它生物标志物能够是基于非蛋白质的生物标志物，例如ctDNA。
前面已经相当广泛地概述了本公开的特征和技术益处，以便可以更好地理解详细描述。本领域技术人员应该理解，所公开的具体实施方式可容易地用作修改或设计用于实现本公开的相同目的的其它结构或过程的基础。应当理解，本公开不限于所描述的特定实施方式，因为可以对特定实施方式的做出变化并且仍然落入权利要求的范围内。
定义
如本文所用，术语“肺癌”是指肺部的恶性新生物，其特征在于细胞的异常增殖，其中细胞的生长超过其周围的正常组织的生长并且与之不协调。
如本文所用，术语“肺癌阳性”是指受试者分类为患有肺癌。
如本文所用，术语“肺癌阴性”是指受试者分类为不患有肺癌。
如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指哺乳动物，优选人，其需要分类为肺癌阳性或肺癌阴性，并且能够为其提供进一步治疗。
如本文所用，“参照患者”、“参照受试者”或“参照组”是指一组患者或受试者，其中来自疑似患有肺癌或处于患肺癌风险的患者或受试者的样品可以与之比较。在一些实施方式中，这种比较可用于确定受试者是否患有肺癌。参照患者或组可用作测试或诊断目的的对照。如本文所述，参照患者或组可以是从单个患者获得的样品，或者可代表一组样品，如合并的样品组。
如本文所用，“健康的”是指未发现肺癌迹象的个体，即个体不患有肺癌。这样的个体可以分类为“肺癌阴性”或具有健康的肺，或正常的、具有非受损的肺功能。健康的患者或受试者没有肺癌或其它肺部疾病的症状。在一些实施方式中，健康患者或受试者可用作参照患者，用于与患病或疑似患病样品进行比较，以确定患者或患者组中的肺癌。
如本文所用，术语“治疗(treatment/treating)”是指针对受试者的药物施用或医疗程序的执行，用于预防(防止)或治愈或减少在受试者或患者受到影响的情况下虚弱或疾病或病症或事件的发生或复发的程度或可能性。与本公开相关，该术语还可指药理学物质或制剂的施用，或非药理学方法的执行，包括但不限于放射疗法和外科手术。本文使用的药理学物质可包括但不限于本领域成熟的化学治疗剂，如厄洛替尼(TARCEVA等)、阿法替尼(GILOTRIF)、吉非替尼(IRESSA)、贝伐单抗(AVASTIN)、克唑替尼(XALKORI)、色瑞替尼(ZYKADIA)、顺铂(PLATINOL)、卡铂(PARAPLATIN)、多西紫杉醇(TAXOTERE)、吉西他滨(GEMZAR)、紫杉醇(TAXOL等)、长春瑞滨(NAVELBINE等)或培美曲塞(ALIMTA)。药理学物质可包括免疫疗法中使用的物质，如检查点抑制剂。治疗可包括多种药理学物质，或多种治疗方法，包括但不限于外科手术和化学疗法。
如本文所用，术语“CARET”是指β-胡萝卜素和视黄醇功效试验研究。
如本文所用，术语“NLST”是指国家肺筛查试验。
如本文所用，术语“USPSTF”指美国预防服务工作组。
如本文所用，术语“EPIC”是指欧洲癌症与营养前瞻性调查。
如本文所用，术语“NSHDS”是指瑞典北部健康和疾病研究。
如本文所用，术语“ICD-O-2”是指国际肿瘤疾病分类，第二版。
如本文所用，术语“ELISA”是指酶联免疫吸附测定。该测定通常涉及使荧光标记的蛋白质样品与对这些蛋白质具有特异性亲和力的抗体接触。这些蛋白质的检测能够用各种方法完成，包括但不限于激光荧光法。
如本文所用，术语“回归”是指统计方法，其可基于所述样品的可观察性状(或一组可观察性状)为样品的潜在特征指定预测值。在一些实施方式中，该特征不是可直接观察到的。例如，本文使用的回归方法能够将特定生物标志物测试或一组生物标志物测试的定性或定量结果与特定受试者是肺癌阳性的概率相关联。
如本文所用，术语“逻辑回归”指的是回归方法，其中来自模型的预测的指定能够具有若干允许的离散值中的一个。例如，本文使用的逻辑回归模型可以为某个受试者指定肺癌阳性或肺癌阴性的预测。
如本文所用，术语“生物标志物得分”是指通过将所述受试者的特定生物标志物水平输入统计方法而计算的特定受试者的数值分数。
如本文所用，术语“综合得分”是指在来自受试者的样品中测量的预定标志物的标准化值的总和。在一个实施方式中，将标准化值报告为生物标志物得分，然后对那些生物标志物得分值求和以提供测试的各受试者的综合得分。当在风险分类表的背景中使用并且基于风险分类表中的综合得分范围与分层分组相关联时，“综合得分”用于确定所测试的每个受试者的“风险得分”，其中对于分层分组表示增加的患癌症可能性的乘数变为“风险得分”。
如本文所用，术语“风险得分”是指单个数值，其表示与疾病队列中已知的癌症患病率相比，无症状人受试者患癌症的风险增加。在某些实施方式中，为人受试者计算的综合得分与表示患癌症的风险增加的乘数相关，其中综合得分基于风险分类表中每个分层分组的综合得分范围相关联。以这种方式，基于对于综合得分是最佳匹配的表示分组的患癌症可能性增加的乘数，综合得分转换为风险得分。
如本文所用，术语“截止”或“截止点“是指与特定统计学方法相关的数学值，该统计学方法可用于基于所述受试者的生物标志物得分而对受试者指定肺癌阳性或肺癌阴性的分类。
如本文所用，当高于或低于截止值的数值“是肺癌的特征”时，意指的是，对其样品分析产生该值的受试者患有肺癌或处于患肺癌的风险。
如本文所用，“处于患肺癌的风险”的受试者是可能尚未证实肺癌的明显症状的受试者，但是其正在产生水平的生物标志物，表明受试者患有肺癌，或者可能在近期患肺癌。患有肺癌或疑似患有肺癌的受试者可针对癌症或疑似癌症进行治疗。
如本文所用，术语“分类”是指基于所述受试者获得的生物标志物得分的结果，将受试者指定为肺癌阳性或肺癌阴性。
如本文所用，术语“肺癌阳性”是指基于本公开的方法的结果，预测受试者处于患肺癌的风险的指示。
如本文所用，术语“肺癌阴性”是指基于本公开的方法的结果，预测受试者不处于患肺癌的风险。
如本文所用，术语“Wilcoxon秩和检验”，也称为Mann-Whitney U检验，Mann-Whitney-Wilcoxon检验或Wilcoxon-Mann-Whitney检验，是指用于比较两个群体的特定统计方法。例如，该检验在本文可以用于将可观察的性状、特别是生物标志物水平与特定群体的受试者中肺癌的缺乏或存在联系起来。
如本文所用，术语“真阳性率”是指通过某种方法分类为阳性的给定受试者是真正阳性的概率。
如本文所用，术语“假阳性率”是指通过某种方法分类为阳性的给定受试者是真正阴性的概率。
如本文所用，术语“灵敏度”是指在各种生物化学测定的背景下，测定正确地识别患有疾病的那些的能力(即，真阳性率)。相比之下，如本文所用，术语“特异性”是指在各种生物化学测定的背景下，测定正确地识别没有疾病的那些的能力(即，真阴性率)。灵敏度和特异性是二元分类检验(即分类函数)表现的统计学度量。灵敏度对避免假阴性进行定量，特异性对于假阳性也是如此。
如本文所用，“样品”是指待测试本文所述的生物标志物的存在、和其水平或浓度的测试物质。样品可以是根据本公开适当的任何物质，包括但不限于血液、血清、血浆或其任何部分。
如本文所用，“抗原”是指抗体或抗原结合试剂或片段可结合从而用于检测本文所述的生物标志物的蛋白质、代谢物或其它分子。在一些实施方式中，生物标志物可充当抗原。在其它实施方式中，生物标志物的一部分可充当抗原。在一些实施方式中，抗体可用于检测本文所述的抗原。在其它实施方式中，核酸，如DNA、RNA、DNR/RNA杂合体，抗体，抗体片段或能够结合抗原的任何其它化合物或分子，可用于检测抗原，如本文所述的生物标志物。如本文所述的抗原可充当检测用于本文所述方法的蛋白质或代谢物标志物的水平、浓度或量的基础。
如本文所用，术语“CEA”是指癌胚抗原。
如本文所用，术语“CA125”是指癌抗原125。
如本文所用，术语“CYFRA21-1”，也称为Cyfra 21-1，是指细胞角蛋白片段19，也称为细胞角蛋白-19片段。
如本文所用，术语“SFTPB”是指表面活性蛋白B。
如本文所用，术语“Pro-SFTPB”是指Pro-表面活性蛋白B，其是SFTPB的前体形式。
如本文所用，术语“HE4”，也称为WFDC2，是指人附睾蛋白4。
如本文所用，术语“ctDNA”是指无细胞(cell-free)或循环的肿瘤DNA。ctDNA是经发现在癌症患者的血液中自由循环的肿瘤DNA。不受理论的限制，据信ctDNA源自垂死的肿瘤细胞，并且可以存在于许多种癌症中，但以不同的水平和突变等位基因部分存在。通常，ctDNA携带独特的体细胞突变，该突变在原发肿瘤细胞中形成，而在宿主的健康细胞中未发现。因此，ctDNA体细胞突变可以充当癌症特异性生物标志物。
如本文所用，“代谢物”是指作为细胞代谢的中间体和/或产物的小分子。代谢物可以在细胞中发挥多种功能，例如，结构、信号传导、对酶的刺激和/或抑制作用。在一些实施方式中，代谢物可以是非蛋白质、血浆衍生的代谢物标志物，比如，包括但不限于乙酰基亚精胺、二乙酰精胺、溶血磷脂酰胆碱(18:0)、溶血磷脂酰胆碱(20:3)和吲哚衍生物。
如本文所用，术语“ROC”是指接收者操作特性，其是本文中用于测量某种诊断方法在各个截止点处的表现的图表。ROC图可以从各个截止点处的真阳性和假阳性的分数来构建。
如本文所用，术语“AUC”是指ROC图的曲线下面积。AUC可以用于估计某种诊断测试的预测能力。通常，AUC较大对应于预测能力增加，预测误差的频率降低。AUC的可能值范围从0.5到1.0，后者值是无误差预测法的特征。
如本文所用，术语“p-值”或“p”是指在Wilcoxon秩和检验的背景下，肺癌阳性和肺癌阴性受试者的生物标志物得分的分布相同的概率。通常，p-值接近于零，表示特定统计方法在对受试者进行分类时将具有高预测能力。
如本文所用，术语“CI”是指置信区间，即，可以预测某个值具有一定置信水平的区间。如本文所用，术语“95％CI”是指可以预测某个值处于95％置信水平的区间。
术语“AIC”指Akaike信息准则，一种基于信息理论的方法，其可用于评估数据组的各种回归模型的相对优点。
实施例
包括以下实施例以说明本公开的实施方式。以下实施例仅以说明的方式呈现，并且有助于普通技术人员使用本公开。这些实施例无意以任何方式另外限制本公开的范围。根据本公开内容，本领域普通技术人员应理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下，可以对所公开的特定实施方式进行许多改变并且仍然获得相同或相似的结果。
实施例1：血液样品组
将来自所有研究参与者的血浆样品在干冰上送至美国德克萨斯州MD Anderson的实验室，在那里将它们保持在-80℃以下直至分析。
训练(train)队列：β-胡萝卜素和视黄醇功效试验(CARET)研究
来自CARET参与者(现时或以前的重度吸烟者)的诊断前血清样品用于训练潜在的基于蛋白质的风险预测标志物的生物标志物得分。CARET是一项随机、双盲、安慰剂对照的试验，评估了18,314名具有肺癌高风险人群每日补充30mgβ-胡萝卜素和25,000IU视黄醇棕榈酸酯的预防癌症效果和安全性。符合条件的参与者包括两个高风险群体：14,254名50至69岁的男性和女性，他们是现时或以前的吸烟者(在过去6年内戒烟)，他们暴露于至少20包-年(pack-year)的吸烟，以及4,060名45至69岁的男性，他们是现时或以前的吸烟者(在研究开始前停止不超过15年)并且具有大量的职业石棉暴露史。参与者在1985年至1994年期间入选在6个美国中心，随后跟踪癌症和死亡率结果，直到2005年。总计，从108名在提供血液样品后12个月内随后患上非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者和216名基于基线年龄(5年组)、性别、基线吸烟状况(现时相比于以前)和研究入组时间而匹配于每个病例的对照，测定了样品。
来自CARET参与者(当前或以前的重度吸烟者)的诊断前血清样品，由108名随后患上非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者和216名匹配的对照组成，用于测试一组潜在的基于蛋白质的风险预测标志物，包括Pro-SFTPB。这些样品中没有一个是待测试的候选标志物的任何先前测定的一部分，因此代表由108名NSCLC和216名匹配的对照组成的标志物测定的独立组。在诊断NSCLC之前一年内收集病例样品。
验证队列：EPIC和NSHDS研究
本研究中使用的验证队列获取自两项欧洲前瞻性研究：欧洲癌症与营养前瞻性调查(EPIC)研究和瑞典北部健康与疾病研究(NSHDS)。
欧洲癌症与营养前瞻性调查
EPIC研究是一个持续性多中心前瞻性队列，在1992年至1998年期间从欧洲十个国家的23个中心招募了521,330名参与者。目前的生物标志物研究涉及来自7个国家(希腊、荷兰、英国、法国、德国、西班牙和意大利)的EPIC参与者在里昂的国际癌症研究机构(I ARC)的研究招募中捐献血液样品，该样品是液氮保存的生物存储库的一部分。
瑞典北部健康与疾病研究
NSHDS是瑞典县一般群体的一个持续性前瞻性队列。1985年开始研究后，从此所有县居民都通过参加40、50和60岁的健康检查而受邀参与。截至2014年，该队列已招募99,404名研究参与者，他们捐献血液样品用于未来的研究。有关EPIC和NSHDS招募程序、问卷调查和人体测量数据的收集以及血液样品收集和储存的详细信息已在其它地方详细描述。EPIC和NSHDS验证队列的特征如下表1所示。
表1中示出CARET训练研究以及EPIC和NSHDS验证研究中病例和对照的基线特征。用于训练吸烟模型的EPIC和NSHDS研究样品的特征示于表2中。
表1.训练和验证队列中患者和对照的临床特征
缩写：NSCLC，非小细胞肺癌；SCC，鳞状细胞癌；ADC腺癌；SD，标准差
表2.用于训练吸烟模型的EPIC和NSHDS研究的基线特征
病例和对照的随访和选择
发生癌症病例的随访使用多种方法的组合进行，包括与区域或国家癌症登记处的记录联系，以及健康保险记录，癌症和病理学登记，以及通过研究受试者及其近亲的积极随访。根据国际肿瘤疾病分类，第二版(ICD-O-2)定义肺癌病例，并包括编码为C34的所有侵袭性癌症。排除具有另一种癌症病史(非黑色素瘤皮肤癌除外)和缺失血液样品或吸烟信息的病例后，在EPIC中抽血1年内诊断出的48名发生病例和在NSHDS中抽血2年内诊断出的35名发生病例，可用于当前的研究。在意大利、荷兰、西班牙、瑞典和英国，通过与地区或国家癌症登记处的记录联系确定发生癌症病例。在法国、德国和希腊，随访基于多种方法的组合，包括健康保险记录，癌症和病理登记，以及通过研究受试者及其近亲的积极随访。
对于每个首发病例，在诊断首发病例时，从由所有存活且没有癌症(非黑素瘤皮肤癌除外)的队列成员组成的风险组中随机选择两名对照。匹配标准是研究中心、性别、血液收集日期(±1个月，对于无可用对照组放宽至±12个月)、血液收集时间(±1小时，放宽至±12小时)和血液收集年龄(±3个月，放宽至±5年)。为了改善吸烟分层分析的统计效力，对照中的每一名还基于首发病例的吸烟状况从5个类别进行匹配：从不吸烟者、以前吸烟者中短期和长期戒烟者(戒烟后<10年，≥10年)、以及现时吸烟者中的轻度和重度吸烟者(<15年，每天≥15支烟)。
来自EPIC(抽血1年内诊断的病例)和NSHDS(抽血2年内诊断的病例)的最终联合验证研究包括83名发生肺癌病例和158名匹配对照。所有研究参与者都签署了参与研究的书面知情同意书，研究得到参与国当地伦理委员会以及IARC和MD Anderson伦理审查委员会的批准。
对于每名EPIC和NSHDS首发病例，在诊断首发病例时，从由所有存活且没有癌症(非黑素瘤皮肤癌除外)的队列成员组成的风险组中随机选择两名对照。对于每名病例，在诊断首发病例时，从所有存活且没有癌症(非黑素瘤皮肤癌除外)的队列成员组成的风险组中随机选择一名对照。匹配标准是研究中心、性别、血液收集日期(±1个月，对于无可用对照组的放宽至±3个月)和出生日期(±1年，放宽至±3年)。为了改善吸烟分层分析的统计效力，对照中的一名还对首发病例的吸烟状况从5个类别进行匹配；从不吸烟者、以前吸烟者中短期和长期戒烟者(戒烟后＜10年，≥10年)、以及现时吸烟者中的轻度和重度吸烟者(＜15年，每天≥15支烟)。
来自EPIC和NSHDS的全部组合验证队列在排除从不吸烟病例和对照后包括74名发生肺癌病例和109名匹配的对照。所有参与者都签署了参与研究的书面知情同意书，研究得到了参与国当地伦理委员会和IARC机构审查委员会的批准。
实施例2：生物标志物组候选物的选择
对一组五个候选物：CEA、CA125、CYFRA 21-1、Pro-SFTPB和HE4进行生物标志物的初始筛选。CEA和CA125是众所周知的肿瘤生物标志物，并且分别常规地用作结肠直肠癌和卵巢癌的预后和诊断标志物。自90年代以来，一直认为CYFRA 21-1是非小细胞肺癌的标志物。与匹配的对照相比，SFTPB和HE4在肺癌小鼠模型和临床诊断前至多一年收集的血液样品中与肺癌显著相关(Bach等，J Natl Cancer Inst 95：470-8，2003)。SFTPB的前体形式(Pro-SFTPB)可在前瞻性队列研究中预测肺癌风险，该研究包括泛加拿大肺癌早期检测研究、医师健康研究和CARET研究(Cassidy等，Br J Cancer 98：270-6，2008；Hoggart等，Cancer Prev Res(Phila)5：834-46，2012；Spitz等，Cancer Prev Res(Phila)1：250-4，2008)。最初发现Pro-SFTPB在患有肺癌的小鼠的血浆中升高。
从该组中，基于它们在训练队列中的表现选择四种生物标志物用于小组：CA-125、CYFRA 21-1、CEA和Pro-SFTPB。
对照群体观察到的生物标志物水平列于表3中。还提供健康受试者中这些值的典型范围。
表3.对照群体中观察到的生物标志物水平。
生物标志物 最小值<sup>＊</sup> 中值 最大值 典型范围
CEA 0.47 1.96 10 0-5
CA125 4.33 6.7 12.13 0-35
CYFRA 2.51 4.24 15.89 0.16-2.95
Pro-SFTPB 0 5.2 93.23 N/A
*CEA、CYFRA和Pro-SFTPB的单位为ng/mL；CA125的单位为U/mL。
癌症群体观察到的生物标志物水平列于表4中。还提供患有癌症的受试者中这些值的典型范围。
表4.癌症群体中观察到的生物标志物水平
生物标志物 最小值<sup>＊</sup> 中值 最大值 典型范围
CEA 0.62 9.26 120.6 0-20
CA125 4.24 7.29 20.51 ＞35
CYFRA 3.3 5.66 20.93 0.93-221.6
Pro-SFTPB 1.08 22.66 233.11 N/A
*CEA、CYFRA和Pro-SFTPB的单位为ng/mL；CA125的单位为U/mL。
实施例3：样品分析
使用来自训练队列的血清样品通过免疫测定法分析五种候选标志物。使用基于珠子的免疫测定法在MAGPIX(R)仪器(Luminex Corporation，Austin TX)上测定CA125、CEA、Pro-SFTPB、CYFRA 21-1和HE4的浓度。36个样品一批以一式两份进行样品分析，质量控制程序包括7个校准样品、2个质量控制样品和每批1个空白样品。CA125批次内和批次之间的变异系数(CV)分别为6.86％和15.54％，CEA为1.45％和9.32％，Pro-SFTPB为6.55％和17.26％，CYFRA 21-1为5.56％和28.71％。所有肺癌病例及其个体匹配的对照在相同批次中以随机顺序一起分析。实验室工作人员对血液样品的病例-对照状态不知情。
实施例4：回归模型
最初对每个评估的生物标志物进行对数转换并分别在每个研究样品内标准化。通过拟合逻辑回归模型将生物标志物CA125、CEA，Pro-SFTPB和CYFRA组合成基于生物标志物的风险得分(生物标志物得分)。CARET2中的CYFRA缺乏47.53％样品的数据。为了使用尽可能多的观察来进行模型构建，采用了两阶段方法：在第一阶段，基于Akaike信息准则，通过使用逻辑回归使用除CYFRA之外的所有生物标志物选择最佳生物标志物组；在第二阶段，将第一阶段的综合得分固定并与CYFRA结合以获得最终模型。这种两阶段方法允许观察也有助于模型训练。所有推论均基于引导程序(bootstrap)，该引导程序采用1000个样品，对于健康和患病分别替换。
为了评估生物标志物得分对于基于吸烟暴露史的风险预测模型能够改善的程度，我们使用来自EPIC和NSHDS的数据来拟合吸烟模型，所述数据未在验证研究中使用，由在研究招募后2至10年诊断的病例限定，对照以验证研究中的相同匹配标准单个匹配(1,008名病例和1,873名对照)。使用条件逻辑回归和对个体病例组的条件化，吸烟模型包括吸烟状况(以前vs.从不、现时vs.从不)、现时吸烟者每天的烟数(连续[以前的吸烟者不可用])、吸烟持续时间(以前吸烟者和现时吸烟者连续吸烟)以及以前吸烟者自从戒烟以来的时间[连续]。
我们使用组合的EPIC和NSHDS样品评估生物标志物改善基于单独的吸烟变量的风险预测模型的潜力的生物标志物得分，首先是通过使用无条件逻辑回归拟合包括吸烟变量的模型(吸烟模型)。该模型包括年龄(连续)、性别(二分法)、队列(二分法)、吸烟状况(以前/现时)、现时吸烟者每天的烟数(连续[以前的吸烟者不可用])、吸烟持续时间(连续)、以及以前吸烟者自从戒烟以来的时间[连续]。吸烟模型的参数估计值列于表5中。
生物标志物得分和吸烟模型可以区分发生肺癌病例和对照的程度随后通过为验证研究中的每个参与者指定相应的模型进行外部和非参数评估(抽血后0至2年诊断的病例)。此外，为了评估将生物标志物得分与吸烟模型相结合的潜力，通过在验证研究中使用基于吸烟模型的风险得分和生物标志物得分作为两个单独的协变量而拟合条件逻辑回归模型，开发综合风险预测模型。
表5.在EPIC和NSHDS中基于抽血2至10年之间诊断的病例而开发的吸烟模型的规格。
生物标志物浓度的对数的系数如下：CA-125，0.4730；CYFRA 21-1，0.2612；CEA，0.6531；和Pro-SFTPB，0.9238；常数，-8.4927。
logit(p)＝-8.4927+0.4730×logCA125+0.2612×logCYFRA211+0.6531×logCEA+0.9238×logProSFTPB
实施例5：回归模型的表现
每个候选生物标志物在CARET训练研究中区分病例和对照(p值<0.05)，AUC估计值范围从0.60(95％CI：0.53-0.67，CA125)到0.70(95％CI：0.64-0.76，Pro-SFTPB)(表6)。基于AIC，HE4排除在模型之外，最终的生物标志物得分由CA125、CEA、Pro-SFTBP和CYFRA21-1限定，并且在训练样品中产生0.80的总AUC(95％CI 0.72-0.87)(图1)。
表6.个体生物标志物表现
在训练研究中，生物标志物得分类似地区分两种最普遍的组织学类型的肺癌，肺腺癌的AUC为0.79(95％CI：0.67-0.92)，肺鳞状癌的AUC为0.79(95％CI：0.62-0.96)(表7)。与抽血后6个月至12个月诊断的病例(AUC：0.77，95％CI：0.66-0.88)相比，抽血6个月内诊断出的肺癌病例的AUC更高(AUC：0.86，95％CI：0.76-0.96)(表7)。
表7.CARET训练研究中生物标志物得分的表现
ADC：腺癌；SCC：鳞状细胞癌；NSCLC，非小细胞肺癌
在验证研究中生物标志物得分的辨别表现产生0.89的AUC(95％CI：0.84-0.93)。吸烟模型的AUC为0.79(95％CI：0.73-0.85)，两估值之间差异的P值为0.002，图1，表6。生物标志物得分的AUC在相关阶层始终高于吸烟模型，在以前吸烟者的0.83和轻度吸烟者(吸烟史不到30包年的受试者，表8)的0.93之间变化。与单独的生物标志物得分相比，在综合风险预测模型中将生物标志物得分与吸烟模型相结合并未显著改善AUC(综合风险预测模型的AUC：0.90，95％CI：0.86-0.94，图1)。
在验证研究中使用ROC分析评估吸烟模型、生物标志物得分和综合风险预测模型的辨别表现。为了估计将使用不同模型鉴定的未来肺癌病例的比例，我们估计每个模型在特异性水平的灵敏度，该特异性水平对应于在验证研究中将USPSTF筛查合格标准应用于每名受试者所提供的特异性水平。相反，我们还评估了使用USPSTF标准获得的灵敏度水平下的模型特异性，以便估计可以避免对未注定患肺癌的受试者进行筛查的程度。
将二分法USPSTF筛查标准应用于验证研究导致灵敏度为0.37(95％CI：0.23-0.48)，特异性为0.85(95％CI：0.72-0.91)(表8)。USPSTF筛查标准的特异性为0.85的生物标志物得分，产生的灵敏度为0.78(95％CI：0.65-0.87)，而吸烟模型产生的灵敏度为0.58(95％CI：0.31-0.71)。生物标志物得分的灵敏度在整个分层中在0.65和0.85之间变化(表8)。相比之下，相同特异性的吸烟模型的灵敏度在整个分层中在0.12和0.73之间变化。我们还评估了与USPTSF标准相比改善特异性的可能性，以避免筛查不太可能患肺癌的受试者。在基于USPSTF标准的总体灵敏度为0.37时，使用生物标志物得分的验证研究中的相应特异性为0.98(95％CI：0.96-1.00)，而吸烟模型为0.90(95％CI：0.84-0.94)。生物标志物得分的特异性在整个分层中在0.96和1.00之间变化，并且始终显著高于吸烟模型对现时吸烟者的值(表3和9)。
对于在抽血6个月内诊断患有肺癌的受试者，特异性为95％的小组的灵敏度为38％(图2)，对于抽血后超过6个月至多12个月患肺癌的受试者，灵敏度为21％(图3)(分别为AUC＝0.858，95％CI：0.76-0.96；AUC＝0.770，95％CI：0.66-0.88)。该小组对两种最常见的肺癌组织学类型提供了可比较的分类：肺腺癌的AUC为0.794(95％CI：0.67-0.92；SN＝21％，SP＝95％)，肺鳞状细胞癌的AUC为0.790(95％CI：0.62-0.96；SN＝15％，SP＝95％)。剩下的NSCLC分类为AUC 0.804(95％CI：0.68-0.93)，灵敏度为33％(SP＝95％)。女性的小组表现为(AUC＝0.829；95％CI：0.70-0.96)，男性为(AUC＝0.783；95％CI：0.69-0.88)。
通过组合EPIC和NSHDS样品并为每个参与者指定生物标志物得分，并使用接受者操作特征(ROC)曲线分析评估表现，从外部且非参数地评估生物标志物得分能够辨别发生肺癌病例和对照的程度。
使用组合的EPIC和NSHDS样品评估生物标志物得分改善基于单独的吸烟变量的风险预测模型的潜力，首先是通过使用无条件逻辑回归拟合包括吸烟变量的模型(吸烟模型)。该模型包括年龄(连续)、性别(二分法)、队列(二分法)、吸烟状况(以前/现时)、现时吸烟者每天的烟数(连续[以前的吸烟者不可用])、吸烟持续时间(连续)、以及以前吸烟者自从戒烟以来的时间[连续]。随后，通过拟合包括生物标志物得分和吸烟模型的新模型来确定综合风险预测模型。与吸烟模型相比，综合风险预测模型的辨别变现主要通过分析组合的EPIC和NSHDS样品来评估。
为了估计将使用不同模型鉴定的未来肺癌病例的分数，设定每种模型在对应于通过应用USPSTF筛查合格标准提供的特异性下的灵敏度。反过来，还在USPSTF灵敏度下检查模型特异性，以估计在不患肺癌的受试者中可以避免筛查的程度。
在ROC分析中，吸烟模型(仅基于人口统计学和问卷调查的吸烟变量)在辨别组合的EPIC和NSHDS验证样品中病例和对照的总体表现估计AUC为0.72(95％CI：0.65-0.79，图1)。单独的生物标志物得分的相应辨别表现估计AUC为0.80(95％CI：0.74-0.87，与吸烟模型比较AUC的p值：0.07)。在综合风险预测模型中将生物标志物得分与吸烟模型相结合，得到AUC为0.83(95％CI：0.77-0.89，与吸烟模型比较AUC的p值：0.001)。
综合风险预测模型提供的AUC估计值在按性别和吸烟状况分层时相似(范围：0.79至0.84)，但与吸烟超过30包年的研究参与者相比(AUC：0.67，95％CI：0.53-0.81，p值：0.0053)，在吸烟少于30包年的研究参与者中更高(AUC：0.90，95％CI：0.83-0.96)。
将二分法USPSTF筛查标准应用于验证样品导致总灵敏度为0.42(95％CI：0.26-0.54)和特异性为0.78(95％CI：0.64-0.87)。为了评估将未来肺癌病例转至筛查时改善灵敏度的可能性-与应用目前使用的USPSTF标准相反-评估了综合风险预测模型在USPSTF标准特异性下的灵敏度。因此，在0.78的特异性下，综合风险预测模型的灵敏度为0.76(95％CI：0.57-0.86)，并且在整个分层中在0.61和0.83之间变化，但始终高于USPSTF标准(表9)。相比之下，吸烟模型在相同特异性下的总体灵敏度为0.41(95％CI：0.28-0.66)，并且在整个分层中在0.21和0.57之间变化。相反，进行了研究以改善USPTSF标准的特异性，以避免将不会患肺癌的受试者引向筛查。在这里，USPSTF标准的总体灵敏度为0.42-使用综合风险预测模型的相应特异性为0.94(95％CI：0.88-0.98)，而吸烟模型为0.78(95％CI：0.70-0.90)。同样，综合风险预测模型的特异性始终显著高于吸烟模型的特异性，并且在整个分层在0.88和1.00之间变化。
实施例6：用另外的生物标志物扩展小组
在探索性分析中，还针对验证队列分析了另外16种有希望的生物标志物，以评估其在风险预测中的潜力。基于这16种生物标志物的数据，进一步改进了CARET中开发的生物标志物得分的辨别表现。基于惩罚逻辑回归(lasso)，除了生物标志物得分之外，从16种测定的生物标志物中选择2种另外的生物标志物，导致与单独的生物标志物得分的0.80相比(95％CI：0.74-0.87)(p值：0.11)，表面上总体AUC更高为0.83(95％CI：0.77-0.90)。引导程序-最优校正的AUC估计值为0.80，表明另外16种生物标志物进一步改善肺癌风险预测的潜力有限。
实施例7：回归模型诊断分数范围内的特异性和灵敏度
本领域普通技术人员将理解，可包括使用不同试剂的生物标志物检测、定量和分析的不同方法或测定将产生不同的结果，这可能需要修改回归模型。特别地，不同的测定能够产生例如以不同单位表达的结果。此外，在相同样品的一式两份测定中的重复反应也能够产生不同的原始结果。然而，它是至少四种生物标志物CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的组合检测、定量和分析，当将其并入本文公开的回归模型中时，产生肺癌的确定诊断。
用于检测、定量和分析四种生物标志物的每个特定测定所报告的结果的范围将具有所得肺癌预测得分的范围，其部分取决于灵敏度或特异性的程度(表10；基于Youden指数的优选截止值为-1.073，特异性为0.714，灵敏度为0.822。用于产生肺癌预测得分的回归模型可取决于用于测试标志物的特定测定。如本领域技术人员所理解的，不同的测定能够靶向四种生物标志物的不同表位或具有不同的亲和力和灵敏度。因此，可以修改用于生成肺癌预测得分的回归模型算法以考虑这些测定变量。
实施例8：测定样品和肺癌患者诊断
在一个实例中，基于本文公开的四-生物标志物组筛查肺癌的患者具有抽取的血液样品(或其它液体或组织活检)并通过ELISA(或其它测定)测定以定量患者中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的水平。所用特定测定考虑的至少这些生物标志物的标准化值可以是，例如，CEA＝3.2ng/mL；CA125＝3.5U/mL；CYFRA21-1＝2.1ng/mL；和Pro-SFTPB＝6ng/mL。然后对原始测定数据进行log2变换，计算每个队列中健康样品的平均值和标准偏差。然后对数据进行标准化，使得健康样品的平均值为0，标准偏差为1：其中(读数j-平均值健康)/(std健康)，其中j是第j个样品。
当使用以下回归模型分析时：
logit(p)＝-8.4927+0.4730×logCA125+0.2612×logCYFRA211+0.6531×logCEA
上述患者的综合得分为1.344。鉴于考虑特异性和灵敏度的优选截止值(表10)，具有这种综合得分的患者将具有接近确定性的肺癌，因此指导其进行肺癌的后续测试和治疗，其使用本文所讨论并且本领域技术人员已知的其它方式。使用本文所述的回归模型，综合肺癌预测得分越正，患者患肺癌的确定性越高。相反，综合肺癌预测得分越负，患者不患肺癌的确定性越高。
相反，在另一个实例中，所用特定测定考虑的生物标志物CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的标准化值可以是，例如，CEA＝0.1ng/mL；CA125＝2.0U/mL；CYFRA21-1＝-1.2ng/mL；和Pro-SFTPB＝4.0ng/mL。当使用与上述相同的回归模型进行分析时，这样的患者将具有-4.3347的综合得分。鉴于考虑特异性和灵敏度的优选截止值(表10)，具有这种综合得分的患者几乎肯定不会患有肺癌，因此，基于任何其它临床条件的强度将需要或不需要接着进行其它测试。
表10.组合验证组中基于生物标志物组(CEA、CA125、CYFRA21-l和Pro-SFTPB)的得分的不同截止值下的灵敏度和特异性
实施例9：代谢物和蛋白质标志物的附加效应
进行研究以评估向四-标志物肺癌组添加代谢物如二乙酰精胺(DAS)的贡献，二乙酰精胺(DAS)先前鉴定为非小细胞肺癌的标志物。数据表明一种附加表现，特别是在非腺癌病例中(图4)。
来自一组100名肺癌病例和两倍对照的诊断前血液样品中的代谢物和蛋白质标志物的组合显示出与单独的四-标志物组相比改善的表现，对于随后诊断患有鳞状肺癌或患有不同于鳞状或腺癌的受试者具有特别改善的表现。因此，与单独的蛋白质标志物相比，向一组蛋白质标志物中添加代谢物标志物如DAS允许改善肺癌的早期检测。
其它实施方式
提供以上阐述的详细描述是为了帮助本领域技术人员实施本公开。然而，本文描述和要求保护的公开内容在范围上不限于本文公开的具体实施方式，因为这些实施方式意在说明本公开的若干方面。任何等同的实施方式都意在处于本公开的范围内。实际上，除了本文所示和所述的那些之外，本公开的各种修改对于本领域技术人员而言将从前面的描述变得显而易见，其不脱离本发明的精神或范围。这些修改也意在落入权利要求的范围内。
序列表
<110> 得克萨斯大学体系董事会
<120> 肺癌的检测和治疗方法
<130> MDA0025-401-PC
<150> 62/456,729
<151> 2017-02-09
<150> 62/456,731
<151> 2017-02-09
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<170> PatentIn 版本 3.5
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Thr Val Pro Ile Thr Pro Leu Thr Thr Thr Trp Thr Ser Val Ile
1535 1540 1545
Glu His Ser Thr Gln Ala Gln Asp Thr Leu Ser Ala Thr Met Ser
1550 1555 1560
Pro Thr His Val Thr Gln Ser Leu Lys Asp Gln Thr Ser Ile Pro
1565 1570 1575
Ala Ser Ala Ser Pro Ser His Leu Thr Glu Val Tyr Pro Glu Leu
1580 1585 1590
Gly Thr Gln Gly Arg Ser Ser Ser Glu Ala Thr Thr Phe Trp Lys
1595 1600 1605
Pro Ser Thr Asp Thr Leu Ser Arg Glu Ile Glu Thr Gly Pro Thr
1610 1615 1620
Asn Ile Gln Ser Thr Pro Pro Met Asp Asn Thr Thr Thr Gly Ser
1625 1630 1635
Ser Ser Ser Gly Val Thr Leu Gly Ile Ala His Leu Pro Ile Gly
1640 1645 1650
Thr Ser Ser Pro Ala Glu Thr Ser Thr Asn Met Ala Leu Glu Arg
1655 1660 1665
Arg Ser Ser Thr Ala Thr Val Ser Met Ala Gly Thr Met Gly Leu
1670 1675 1680
Leu Val Thr Ser Ala Pro Gly Arg Ser Ile Ser Gln Ser Leu Gly
1685 1690 1695
Arg Val Ser Ser Val Leu Ser Glu Ser Thr Thr Glu Gly Val Thr
1700 1705 1710
Asp Ser Ser Lys Gly Ser Ser Pro Arg Leu Asn Thr Gln Gly Asn
1715 1720 1725
Thr Ala Leu Ser Ser Ser Leu Glu Pro Ser Tyr Ala Glu Gly Ser
1730 1735 1740
Gln Met Ser Thr Ser Ile Pro Leu Thr Ser Ser Pro Thr Thr Pro
1745 1750 1755
Asp Val Glu Phe Ile Gly Gly Ser Thr Phe Trp Thr Lys Glu Val
1760 1765 1770
Thr Thr Val Met Thr Ser Asp Ile Ser Lys Ser Ser Ala Arg Thr
1775 1780 1785
Glu Ser Ser Ser Ala Thr Leu Met Ser Thr Ala Leu Gly Ser Thr
1790 1795 1800
Glu Asn Thr Gly Lys Glu Lys Leu Arg Thr Ala Ser Met Asp Leu
1805 1810 1815
Pro Ser Pro Thr Pro Ser Met Glu Val Thr Pro Trp Ile Ser Leu
1820 1825 1830
Thr Leu Ser Asn Ala Pro Asn Thr Thr Asp Ser Leu Asp Leu Ser
1835 1840 1845
His Gly Val His Thr Ser Ser Ala Gly Thr Leu Ala Thr Asp Arg
1850 1855 1860
Ser Leu Asn Thr Gly Val Thr Arg Ala Ser Arg Leu Glu Asn Gly
1865 1870 1875
Ser Asp Thr Ser Ser Lys Ser Leu Ser Met Gly Asn Ser Thr His
1880 1885 1890
Thr Ser Met Thr Tyr Thr Glu Lys Ser Glu Val Ser Ser Ser Ile
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His Pro Arg Pro Glu Thr Ser Ala Pro Gly Ala Glu Thr Thr Leu
1910 1915 1920
Thr Ser Thr Pro Gly Asn Arg Ala Ile Ser Leu Thr Leu Pro Phe
1925 1930 1935
Ser Ser Ile Pro Val Glu Glu Val Ile Ser Thr Gly Ile Thr Ser
1940 1945 1950
Gly Pro Asp Ile Asn Ser Ala Pro Met Thr His Ser Pro Ile Thr
1955 1960 1965
Pro Pro Thr Ile Val Trp Thr Ser Thr Gly Thr Ile Glu Gln Ser
1970 1975 1980
Thr Gln Pro Leu His Ala Val Ser Ser Glu Lys Val Ser Val Gln
1985 1990 1995
Thr Gln Ser Thr Pro Tyr Val Asn Ser Val Ala Val Ser Ala Ser
2000 2005 2010
Pro Thr His Glu Asn Ser Val Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ser Ser
2015 2020 2025
Pro Tyr Ser Ser Ala Ser Leu Glu Ser Leu Asp Ser Thr Ile Ser
2030 2035 2040
Arg Arg Asn Ala Ile Thr Ser Trp Leu Trp Asp Leu Thr Thr Ser
2045 2050 2055
Leu Pro Thr Thr Thr Trp Pro Ser Thr Ser Leu Ser Glu Ala Leu
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Ser Ser Gly His Ser Gly Val Ser Asn Pro Ser Ser Thr Thr Thr
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Glu Phe Pro Leu Phe Ser Ala Ala Ser Thr Ser Ala Ala Lys Gln
2090 2095 2100
Arg Asn Pro Glu Thr Glu Thr His Gly Pro Gln Asn Thr Ala Ala
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Ser Thr Leu Asn Thr Asp Ala Ser Ser Val Thr Gly Leu Ser Glu
2120 2125 2130
Thr Pro Val Gly Ala Ser Ile Ser Ser Glu Val Pro Leu Pro Met
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Ala Ile Thr Ser Arg Ser Asp Val Ser Gly Leu Thr Ser Glu Ser
2150 2155 2160
Thr Ala Asn Pro Ser Leu Gly Thr Ala Ser Ser Ala Gly Thr Lys
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Leu Thr Arg Thr Ile Ser Leu Pro Thr Ser Glu Ser Leu Val Ser
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Phe Arg Met Asn Lys Asp Pro Trp Thr Val Ser Ile Pro Leu Gly
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Ser His Pro Thr Thr Asn Thr Glu Thr Ser Ile Pro Val Asn Ser
2210 2215 2220
Ala Gly Pro Pro Gly Leu Ser Thr Val Ala Ser Asp Val Ile Asp
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2240 2245 2250
Pro Ser Pro Asp Thr Glu Val Thr Thr Ile Ser His Phe Pro Glu
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Leu Thr Ser Arg Val Thr Pro Ile Pro Gly Asp Trp Met Ser Ser
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Ile Val Leu Thr Ala Ser Phe Thr Glu Thr Ser Thr Val Ser Leu
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Lys Thr Asn Glu Leu Pro Ser Asp Ser Ser Ser Ser Ser Asp Leu
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Ile Asn Thr Ser Ile Ala Ser Ser Thr Met Asp Val Thr Lys Thr
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Ala Ser Ile Ser Pro Thr Ser Ile Ser Gly Met Thr Ala Ser Ser
2390 2395 2400
Ser Pro Ser Leu Phe Ser Ser Asp Arg Pro Gln Val Pro Thr Ser
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Thr Thr Glu Thr Asn Thr Ala Thr Ser Pro Ser Val Ser Ser Asn
2420 2425 2430
Thr Tyr Ser Leu Asp Gly Gly Ser Asn Val Gly Gly Thr Pro Ser
2435 2440 2445
Thr Leu Pro Pro Phe Thr Ile Thr His Pro Val Glu Thr Ser Ser
2450 2455 2460
Ala Leu Leu Ala Trp Ser Arg Pro Val Arg Thr Phe Ser Thr Met
2465 2470 2475
Val Ser Thr Asp Thr Ala Ser Gly Glu Asn Pro Thr Ser Ser Asn
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Ser Val Val Thr Ser Val Pro Ala Pro Gly Thr Trp Thr Ser Val
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Gly Ser Thr Thr Asp Leu Pro Ala Met Gly Phe Leu Lys Thr Ser
2510 2515 2520
Pro Ala Gly Glu Ala His Ser Leu Leu Ala Ser Thr Ile Glu Pro
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Ala Thr Ala Phe Thr Pro His Leu Ser Ala Ala Val Val Thr Gly
2540 2545 2550
Ser Ser Ala Thr Ser Glu Ala Ser Leu Leu Thr Thr Ser Glu Ser
2555 2560 2565
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2570 2575 2580
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Val Thr Glu Thr Ser Asp Thr Thr Leu Thr Ser Lys Ile Leu Val
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2630 2635 2640
Leu Pro Asp Thr Pro Ala Ile Pro Leu Thr Ala Thr Glu Pro Thr
2645 2650 2655
Ser Ser Leu Ala Thr Ser Phe Asp Ser Thr Pro Leu Val Thr Ile
2660 2665 2670
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Ser Glu Thr Ser Asn Gly Asp Ala Leu Val Leu Lys Thr Val Ser
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Ser Thr Leu Pro Ala Gly Thr Thr Gly Ser Leu Val Phe Ser Gln
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Ser Ser Glu Asn Ser Glu Thr Thr Ala Leu Val Asp Ser Ser Ala
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Gly Met Ala Ser Ser Gly Gly Ile Arg Ser Gly Ser Thr His Ser
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Ser Thr Lys Ala Ile Ser Ala Ser Ser Phe Gln Ser Thr Gly Phe
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Ser Glu Ser Met Ser Tyr Pro Asp Pro Ser Lys Ala Ser Ser Ala
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3020 3025 3030
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3350 3355 3360
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Ser Thr Ala Gln Thr Thr Ser Leu Val Ser Leu Pro Ser Gly Asp
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Ser Ala Ser Ser Val Thr Ser Pro Ser Ile Gly Leu Glu Thr Leu
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Arg Ala Asn Val Ser Ala Val Lys Ser Asp Ile Ala Pro Thr Ala
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Gly His Leu Ser Gln Thr Ser Ser Pro Ala Glu Val Ser Ile Leu
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3590 3595 3600
Ala Arg Ser Pro Gly Thr Ile Ser Thr Met His Thr Thr Ser Phe
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3650 3655 3660
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3665 3670 3675
Arg Val Gln Arg Met Ser Ile Ser Val Pro Asp Ile Leu Ser Thr
3680 3685 3690
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3785 3790 3795
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3800 3805 3810
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Thr Ser Ser Pro Ser Trp Lys Ser Ser Pro Tyr Glu Arg Ile Ala
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Ser His Ser Thr Ile Pro Ala His Ser Ala Ser Ser Lys Leu Thr
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Ser Pro Val Val Thr Thr Ser Thr Arg Glu Gln Ala Ile Val Ser
3980 3985 3990
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4010 4015 4020
Met Asp Thr Ser Ser Thr Thr Gln Thr Ser Ile Ile Ser Ser Pro
4025 4030 4035
Gly Ser Thr Ala Ile Thr Lys Gly Pro Arg Thr Glu Ile Thr Ser
4040 4045 4050
Ser Lys Arg Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Gln Ser Met Arg Ser
4055 4060 4065
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4070 4075 4080
Ala Met Thr Glu Ser Gly Gly Met Ile Leu Ala Met Gln Thr Ser
4085 4090 4095
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Ala Thr Ala Ser Trp Thr Gly Thr Pro Leu Ala Thr Thr Gln Arg
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Asp Thr Ser Gln Pro Ser Pro Pro Ser Val Glu Glu Thr Ser Ser
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Ser Ser Ser Leu Val Pro Ile His Ala Thr Thr Ser Pro Ser Asn
4160 4165 4170
Ile Leu Leu Thr Ser Gln Gly His Ser Pro Ser Ser Thr Pro Pro
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Val Thr Ser Val Phe Leu Ser Glu Thr Ser Gly Leu Gly Lys Thr
4190 4195 4200
Thr Asp Met Ser Arg Ile Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ser Leu Pro
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Pro Asn Leu Ser Ser Thr Ala Gly Glu Ala Leu Ser Thr Tyr Glu
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Ala Ser Arg Asp Thr Lys Ala Ile His His Ser Ala Asp Thr Ala
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Gly His Thr Lys Pro Ser Lys Ala Thr Ser Pro Leu Val Thr Ser
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His Ile Met Gly Asp Ile Thr Ser Ser Thr Ser Val Phe Gly Ser
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4295 4300 4305
Leu Gln Glu Arg Ser Thr Ser Gln Val Ala Ser Ser Ala Thr Glu
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Ser Ser Pro His Gln Phe Ile Thr Ser Thr Asn Thr Phe Thr Asp
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Gly Val Thr Ile Thr Thr Gln Thr Gly Pro Thr Gly Ala Ala Thr
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4430 4435 4440
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4460 4465 4470
Gln His Thr Ser Ser Pro Val Ser Ala Thr Ser Val Leu Thr Ser
4475 4480 4485
Gly Leu Val Lys Thr Thr Asp Met Leu Asn Thr Ser Met Glu Pro
4490 4495 4500
Val Thr Asn Ser Pro Gln Asn Leu Asn Asn Pro Ser Asn Glu Ile
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Leu Ala Thr Leu Ala Ala Thr Thr Asp Ile Glu Thr Ile His Pro
4520 4525 4530
Ser Ile Asn Lys Ala Val Thr Asn Met Gly Thr Ala Ser Ser Ala
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His Val Leu His Ser Thr Leu Pro Val Ser Ser Glu Pro Ser Thr
4550 4555 4560
Ala Thr Ser Pro Met Val Pro Ala Ser Ser Met Gly Asp Ala Leu
4565 4570 4575
Ala Ser Ile Ser Ile Pro Gly Ser Glu Thr Thr Asp Ile Glu Gly
4580 4585 4590
Glu Pro Thr Ser Ser Leu Thr Ala Gly Arg Lys Glu Asn Ser Thr
4595 4600 4605
Leu Gln Glu Met Asn Ser Thr Thr Glu Ser Asn Ile Ile Leu Ser
4610 4615 4620
Asn Val Ser Val Gly Ala Ile Thr Glu Ala Thr Lys Met Glu Val
4625 4630 4635
Pro Ser Phe Asp Ala Thr Phe Ile Pro Thr Pro Ala Gln Ser Thr
4640 4645 4650
Lys Phe Pro Asp Ile Phe Ser Val Ala Ser Ser Arg Leu Ser Asn
4655 4660 4665
Ser Pro Pro Met Thr Ile Ser Thr His Met Thr Thr Thr Gln Thr
4670 4675 4680
Gly Ser Ser Gly Ala Thr Ser Lys Ile Pro Leu Ala Leu Asp Thr
4685 4690 4695
Ser Thr Leu Glu Thr Ser Ala Gly Thr Pro Ser Val Val Thr Glu
4700 4705 4710
Gly Phe Ala His Ser Lys Ile Thr Thr Ala Met Asn Asn Asp Val
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Lys Asp Val Ser Gln Thr Asn Pro Pro Phe Gln Asp Glu Ala Ser
4730 4735 4740
Ser Pro Ser Ser Gln Ala Pro Val Leu Val Thr Thr Leu Pro Ser
4745 4750 4755
Ser Val Ala Phe Thr Pro Gln Trp His Ser Thr Ser Ser Pro Val
4760 4765 4770
Ser Met Ser Ser Val Leu Thr Ser Ser Leu Val Lys Thr Ala Gly
4775 4780 4785
Lys Val Asp Thr Ser Leu Glu Thr Val Thr Ser Ser Pro Gln Ser
4790 4795 4800
Met Ser Asn Thr Leu Asp Asp Ile Ser Val Thr Ser Ala Ala Thr
4805 4810 4815
Thr Asp Ile Glu Thr Thr His Pro Ser Ile Asn Thr Val Val Thr
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5000 5005 5010
Asp Val Thr Thr Leu Met Ser Arg Ile Pro Gln Asp Val Ser Trp
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Thr Ser Pro Pro Ser Val Asp Lys Thr Ser Ser Pro Ser Ser Phe
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5105 5110 5115
Pro Ser Ile Asn Thr Glu Glu Thr Asn Val Lys Ala Asn Asn Ser
5120 5125 5130
Gly His Glu Ser His Ser Pro Ala Leu Ala Asp Ser Glu Thr Pro
5135 5140 5145
Lys Ala Thr Thr Gln Met Val Ile Thr Thr Thr Val Gly Asp Pro
5150 5155 5160
Ala Pro Ser Thr Ser Met Pro Val His Gly Ser Ser Glu Thr Thr
5165 5170 5175
Asn Ile Lys Arg Glu Pro Thr Tyr Phe Leu Thr Pro Arg Leu Arg
5180 5185 5190
Glu Thr Ser Thr Ser Gln Glu Ser Ser Phe Pro Thr Asp Thr Ser
5195 5200 5205
Phe Leu Leu Ser Lys Val Pro Thr Gly Thr Ile Thr Glu Val Ser
5210 5215 5220
Ser Thr Gly Val Asn Ser Ser Ser Lys Ile Ser Thr Pro Asp His
5225 5230 5235
Asp Lys Ser Thr Val Pro Pro Asp Thr Phe Thr Gly Glu Ile Pro
5240 5245 5250
Arg Val Phe Thr Ser Ser Ile Lys Thr Lys Ser Ala Glu Met Thr
5255 5260 5265
Ile Thr Thr Gln Ala Ser Pro Pro Glu Ser Ala Ser His Ser Thr
5270 5275 5280
Leu Pro Leu Asp Thr Ser Thr Thr Leu Ser Gln Gly Gly Thr His
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Ser Thr Val Thr Gln Gly Phe Pro Tyr Ser Glu Val Thr Thr Leu
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Met Gly Met Gly Pro Gly Asn Val Ser Trp Met Thr Thr Pro Pro
5315 5320 5325
Val Glu Glu Thr Ser Ser Val Ser Ser Leu Met Ser Ser Pro Ala
5330 5335 5340
Met Thr Ser Pro Ser Pro Val Ser Ser Thr Ser Pro Gln Ser Ile
5345 5350 5355
Pro Ser Ser Pro Leu Pro Val Thr Ala Leu Pro Thr Ser Val Leu
5360 5365 5370
Val Thr Thr Thr Asp Val Leu Gly Thr Thr Ser Pro Glu Ser Val
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Thr Ser Ser Pro Pro Asn Leu Ser Ser Ile Thr His Glu Arg Pro
5390 5395 5400
Ala Thr Tyr Lys Asp Thr Ala His Thr Glu Ala Ala Met His His
5405 5410 5415
Ser Thr Asn Thr Ala Val Thr Asn Val Gly Thr Ser Gly Ser Gly
5420 5425 5430
His Lys Ser Gln Ser Ser Val Leu Ala Asp Ser Glu Thr Ser Lys
5435 5440 5445
Ala Thr Pro Leu Met Ser Thr Thr Ser Thr Leu Gly Asp Thr Ser
5450 5455 5460
Val Ser Thr Ser Thr Pro Asn Ile Ser Gln Thr Asn Gln Ile Gln
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Thr Glu Pro Thr Ala Ser Leu Ser Pro Arg Leu Arg Glu Ser Ser
5480 5485 5490
Thr Ser Glu Lys Thr Ser Ser Thr Thr Glu Thr Asn Thr Ala Phe
5495 5500 5505
Ser Tyr Val Pro Thr Gly Ala Ile Thr Gln Ala Ser Arg Thr Glu
5510 5515 5520
Ile Ser Ser Ser Arg Thr Ser Ile Ser Asp Leu Asp Arg Pro Thr
5525 5530 5535
Ile Ala Pro Asp Ile Ser Thr Gly Met Ile Thr Arg Leu Phe Thr
5540 5545 5550
Ser Pro Ile Met Thr Lys Ser Ala Glu Met Thr Val Thr Thr Gln
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Thr Ser Thr Thr Leu Phe Gln Gly Gly Thr His Ser Thr Val Ser
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5600 5605 5610
Pro Gly Asp Val Ser Trp Met Thr Thr Pro Pro Val Glu Glu Thr
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Ser Ser Gly Phe Ser Leu Met Ser Pro Ser Met Thr Ser Pro Ser
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Pro Val Ser Ser Thr Ser Pro Glu Ser Ile Pro Ser Ser Pro Leu
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Pro Val Thr Ala Leu Leu Thr Ser Val Leu Val Thr Thr Thr Asn
5660 5665 5670
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Asn Leu Ser Ser Pro Thr Gln Glu Arg Leu Thr Thr Tyr Lys Asp
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Ala Val Ala Asn Val Gly Thr Ser Ile Ser Gly His Glu Ser Gln
5720 5725 5730
Ser Ser Val Pro Ala Asp Ser His Thr Ser Lys Ala Thr Ser Pro
5735 5740 5745
Met Gly Ile Thr Phe Ala Met Gly Asp Thr Ser Val Ser Thr Ser
5750 5755 5760
Thr Pro Ala Phe Phe Glu Thr Arg Ile Gln Thr Glu Ser Thr Ser
5765 5770 5775
Ser Leu Ile Pro Gly Leu Arg Asp Thr Arg Thr Ser Glu Glu Ile
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5810 5815 5820
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Thr Gly Ser Thr Glu Met Ala Ile Thr Asn Gln Thr Gly Pro Ile
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Ala Ser Trp Glu Gly Thr His Ser Pro Val Thr Gln Arg Phe Pro
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Ser Pro Val Pro Leu Pro Ala Ile Thr Ser His Ser Ser Leu Tyr
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Thr Ile His Phe Ser Glu Asn Thr Ala Glu Thr Asn Met Gly Thr
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Asn Thr Val Phe Ser Ser Val Ser Leu Asp Ala Ala Thr Glu Val
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Leu Asp Leu Ser Thr Leu Thr Ser Arg Val Pro Glu Tyr Ile Ser
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Leu Leu Ser Leu Pro Ala Ile Thr Ser Pro Ser Pro Val Pro Thr
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6650 6655 6660
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7430 7435 7440
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Leu Ala Thr Ser Glu Val Thr Thr Asp Thr Glu Lys Ile His Pro
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Phe Ser Asn Thr Ala Val Thr Lys Val Gly Thr Ser Ser Ser Gly
7475 7480 7485
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Ser Glu Pro Ala Ser Ser Leu Thr Thr Arg Leu Arg Glu Thr Ser
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Thr Ser Glu Glu Thr Ser Leu Ala Thr Glu Ala Asn Thr Val Leu
7550 7555 7560
Ser Lys Val Ser Thr Gly Ala Thr Thr Glu Val Ser Arg Thr Glu
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Thr Met Ser Gln Asp Ile Ser Ile Gly Thr Ile Pro Arg Ile Ser
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Ala Ser Ser Val Leu Thr Glu Ser Ala Lys Met Thr Ile Thr Thr
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Gly Pro Gly Gly Val Ser Trp Pro Ser Pro Pro Phe Val Lys Glu
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Thr Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Ser Leu Pro Ala Val Thr Ser
7685 7690 7695
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Ser Ser Leu Ser Thr Thr Ser His Glu Arg Leu Thr Thr Tyr Lys
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7760 7765 7770
Gly Thr Asn Val Ala Thr Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Ser Gln Ser
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Arg Glu Ser Ser Gly Ser Glu Gly Thr Ser Ser Gly Thr Lys Met
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8120 8125 8130
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8135 8140 8145
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Thr Ser Ile Ser Gly Phe Ala Gln Leu Thr Val Ser Pro Glu Thr
8165 8170 8175
Ser Thr Glu Thr Ile Thr Arg Leu Pro Thr Ser Ser Ile Met Thr
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8225 8230 8235
Ser Glu Met Thr Thr Leu Val Ser Arg Ser Pro Gly Asp Met Leu
8240 8245 8250
Trp Pro Ser Gln Ser Ser Val Glu Glu Thr Ser Ser Ala Ser Ser
8255 8260 8265
Leu Leu Ser Leu Pro Ala Thr Thr Ser Pro Ser Pro Val Ser Ser
8270 8275 8280
Thr Leu Val Glu Asp Phe Pro Ser Ala Ser Leu Pro Val Thr Ser
8285 8290 8295
Leu Leu Asn Pro Gly Leu Val Ile Thr Thr Asp Arg Met Gly Ile
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Ser Arg Glu Pro Gly Thr Ser Ser Thr Ser Asn Leu Ser Ser Thr
8315 8320 8325
Ser His Glu Arg Leu Thr Thr Leu Glu Asp Thr Val Asp Thr Glu
8330 8335 8340
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8345 8350 8355
Ser Ile Ser Gly His Glu Ser Gln Ser Ser Val Leu Ser Asp Ser
8360 8365 8370
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8375 8380 8385
Gly Glu Thr Ser Val Ser Ile Ser Thr Ser Asp Phe Phe Glu Thr
8390 8395 8400
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Thr Ser Ser Ala Thr Glu Arg Ser Ala Ser Leu Ser Gly Met Pro
8720 8725 8730
Thr Gly Ala Thr Thr Lys Val Ser Arg Thr Glu Ala Leu Ser Leu
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Gly Arg Thr Ser Thr Pro Gly Pro Ala Gln Ser Thr Ile Ser Pro
8750 8755 8760
Glu Ile Ser Thr Glu Thr Ile Thr Arg Ile Ser Thr Pro Leu Thr
8765 8770 8775
Thr Thr Gly Ser Ala Glu Met Thr Ile Thr Pro Lys Thr Gly His
8780 8785 8790
Ser Gly Ala Ser Ser Gln Gly Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Ser
8795 8800 8805
Arg Ala Ser Trp Pro Gly Thr His Ser Ala Ala Thr His Arg Ser
8810 8815 8820
Pro His Ser Gly Met Thr Thr Pro Met Ser Arg Gly Pro Glu Asp
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Val Ser Trp Pro Ser Arg Pro Ser Val Glu Lys Thr Ser Pro Pro
8840 8845 8850
Ser Ser Leu Val Ser Leu Ser Ala Val Thr Ser Pro Ser Pro Leu
8855 8860 8865
Tyr Ser Thr Pro Ser Glu Ser Ser His Ser Ser Pro Leu Arg Val
8870 8875 8880
Thr Ser Leu Phe Thr Pro Val Met Met Lys Thr Thr Asp Met Leu
8885 8890 8895
Asp Thr Ser Leu Glu Pro Val Thr Thr Ser Pro Pro Ser Met Asn
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Ile Thr Ser Asp Glu Ser Leu Ala Thr Ser Lys Ala Thr Met Glu
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Thr Glu Ala Ile Gln Leu Ser Glu Asn Thr Ala Val Thr Gln Met
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Gly Thr Ile Ser Ala Arg Gln Glu Phe Tyr Ser Ser Tyr Pro Gly
8945 8950 8955
Leu Pro Glu Pro Ser Lys Val Thr Ser Pro Val Val Thr Ser Ser
8960 8965 8970
Thr Ile Lys Asp Ile Val Ser Thr Thr Ile Pro Ala Ser Ser Glu
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Ile Thr Arg Ile Glu Met Glu Ser Thr Ser Thr Leu Thr Pro Thr
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Pro Arg Glu Thr Ser Thr Ser Gln Glu Ile His Ser Ala Thr Lys
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Pro Ser Thr Val Pro Tyr Lys Ala Leu Thr Ser Ala Thr Ile Glu
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Asp Ser Met Thr Gln Val Met Ser Ser Ser Arg Gly Pro Ser Pro
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Ile Thr Thr Gln Thr Gly Ser Pro Gly Ala Thr Ser Arg Gly Thr
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Leu Thr Leu Asp Thr Ser Thr Thr Phe Met Ser Gly Thr His Ser
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Thr Ala Ser Gln Gly Phe Ser His Ser Gln Met Thr Ala Leu Met
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Thr Ser Ser Ser Pro Val Ser Ser Thr Leu Pro Asp Ser Ile His
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Ser Ser Ser Leu Pro Val Thr Ser Leu Leu Thr Ser Gly Leu Val
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Pro Gly Pro Ala Gln Ser Thr Met Ser Ser Asp Thr Ser Met Glu
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Thr Ile Thr Arg Ile Ser Thr Pro Leu Thr Arg Lys Glu Ser Thr
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Asp Met Ala Ile Thr Pro Lys Thr Gly Pro Ser Gly Ala Thr Ser
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Ser Ser Ser Val Thr Ser Pro Ser Pro Leu Tyr Ser Thr Pro Ser
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Gly Ser Ser His Ser Ser Pro Val Pro Val Thr Ser Leu Phe Thr
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Ser Ile Met Met Lys Ala Thr Asp Met Leu Asp Ala Ser Leu Glu
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Ser Leu Ala Ala Ser Lys Ala Thr Thr Glu Thr Glu Ala Ile His
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Leu Tyr Lys Met Pro Ser Gly Ala Thr Pro Glu Val Ser Arg Thr
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Ser Thr Met Ser Leu Asp Ile Ser Asp Glu Val Val Thr Arg Leu
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Ser Thr Ser Pro Ile Met Thr Glu Ser Ala Glu Ile Thr Ile Thr
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Leu Gly Thr Ser Met Thr Phe Leu Ser Gly Thr His Ser Thr Met
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Ser Gln Gly Leu Ser His Ser Glu Met Thr Asn Leu Met Ser Arg
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Thr Leu Ile Leu Ser Pro Gly Glu Leu Glu Thr Thr Pro Ser Met
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Ala Thr Ser His Gly Ala Glu Ala Ser Ser Ala Val Pro Thr Pro
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Ser Ser Arg Ala Val Thr Ser Thr Thr Ile Pro Ile Leu Thr Leu
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Ser Ser Ser Glu Pro Glu Thr Thr Pro Ser Met Ala Thr Ser His
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Gly Val Glu Ala Ser Ser Ala Val Leu Thr Val Ser Pro Glu Val
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Pro Gly Met Val Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Arg Ala Val Thr
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Ser Thr Thr Ile Pro Thr Leu Thr Ile Ser Ser Asp Glu Pro Glu
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Thr Thr Thr Ser Leu Val Thr His Ser Glu Ala Lys Met Ile Ser
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Ala Ile Pro Thr Leu Ala Val Ser Pro Thr Val Gln Gly Leu Val
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Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Gly Ser Glu Thr Ser Ala Phe Ser
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Thr Val Ser Thr Gly Glu Pro Phe Thr Asn Ile Ser Leu Val Thr
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His Pro Ala Glu Ser Ser Ser Thr Leu Pro Arg Thr Thr Ser Arg
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Pro Glu Ala Glu Ser Ser Ser Ala Ile Ser Thr Thr Ile Ser Pro
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Gly Ile Pro Gly Val Leu Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Gly Arg
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Ser Asp Phe Pro Thr Ile Thr Val Ser Pro Asp Val Pro Asp Met
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Ser Pro Gly Pro Glu Ala Ser Ser Ala Val Ser Thr Thr Thr Ile
11525 11530 11535
Ser Pro Asp Met Ser Asp Leu Val Thr Ser Leu Val Pro Ser Ser
11540 11545 11550
Gly Thr Asp Thr Ser Thr Thr Phe Pro Thr Leu Ser Glu Thr Pro
11555 11560 11565
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11570 11575 11580
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11585 11590 11595
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Thr Arg Ser Gly Val Pro Thr Thr Thr Ile Pro Pro Ser Ile Pro
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Gly Val Val Thr Ser Gln Val Thr Ser Ser Ala Thr Asp Thr Ser
11630 11635 11640
Thr Ala Ile Pro Thr Leu Thr Pro Ser Pro Gly Glu Pro Glu Thr
11645 11650 11655
Thr Ala Ser Ser Ala Thr His Pro Gly Thr Gln Thr Gly Phe Thr
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Thr Thr Ser Ser Phe Ser His Ser Ser Pro Asp Ala Thr Pro Val
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Met Ala Thr Ser Pro Arg Thr Glu Ala Ser Ser Ala Val Leu Thr
11720 11725 11730
Thr Ile Ser Pro Gly Ala Pro Glu Met Val Thr Ser Gln Ile Thr
11735 11740 11745
Ser Ser Gly Ala Ala Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Leu Thr His
11750 11755 11760
Ser Pro Gly Met Pro Glu Thr Thr Ala Leu Leu Ser Thr His Pro
11765 11770 11775
Arg Thr Glu Thr Ser Lys Thr Phe Pro Ala Ser Thr Val Phe Pro
11780 11785 11790
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Thr Leu Leu Val Thr Gly Thr Ser Arg Val Asp Leu Ser Pro Thr
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Leu Leu Lys Pro Leu Phe Arg Asn Ser Ser Leu Glu Tyr Leu Tyr
12110 12115 12120
Ser Gly Cys Arg Leu Ala Ser Leu Arg Pro Glu Lys Asp Ser Ser
12125 12130 12135
Ala Thr Ala Val Asp Ala Ile Cys Thr His Arg Pro Asp Pro Glu
12140 12145 12150
Asp Leu Gly Leu Asp Arg Glu Arg Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Asn
12155 12160 12165
Leu Thr Asn Gly Ile Gln Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg
12170 12175 12180
Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Met Pro
12185 12190 12195
Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Val Gly Thr Ser
12200 12205 12210
Gly Thr Pro Ser Ser Ser Pro Ser Pro Thr Thr Ala Gly Pro Leu
12215 12220 12225
Leu Met Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr
12230 12235 12240
Glu Glu Asp Met Arg Arg Thr Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Met
12245 12250 12255
Glu Ser Val Leu Gln Gly Leu Leu Lys Pro Leu Phe Lys Asn Thr
12260 12265 12270
Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg
12275 12280 12285
Pro Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr
12290 12295 12300
His Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asn Arg Glu Gln Leu
12305 12310 12315
Tyr Trp Glu Leu Ser Lys Leu Thr Asn Asp Ile Glu Glu Leu Gly
12320 12325 12330
Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr
12335 12340 12345
His Gln Ser Ser Val Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr
12350 12355 12360
Val Asp Leu Arg Thr Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ser Pro
12365 12370 12375
Thr Ile Met Ala Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn
12380 12385 12390
Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Gly Glu Asp Met Gly His Pro
12395 12400 12405
Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu
12410 12415 12420
Leu Gly Pro Ile Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser
12425 12430 12435
Gly Cys Arg Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala
12440 12445 12450
Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Ile His His Leu Asp Pro Lys Ser
12455 12460 12465
Pro Gly Leu Asn Arg Glu Arg Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu
12470 12475 12480
Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn
12485 12490 12495
Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Thr Ser Val Pro Thr
12500 12505 12510
Ser Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly
12515 12520 12525
Thr Pro Phe Ser Leu Pro Ser Pro Ala Thr Ala Gly Pro Leu Leu
12530 12535 12540
Val Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Lys Tyr Glu
12545 12550 12555
Glu Asp Met His Arg Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu
12560 12565 12570
Arg Val Leu Gln Thr Leu Leu Gly Pro Met Phe Lys Asn Thr Ser
12575 12580 12585
Val Gly Leu Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Ser
12590 12595 12600
Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr His
12605 12610 12615
Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Val Asp Arg Glu Gln Leu Tyr
12620 12625 12630
Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro
12635 12640 12645
Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His
12650 12655 12660
Trp Ile Pro Val Pro Thr Ser Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val
12665 12670 12675
Asp Leu Gly Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Pro Ser Pro Thr Thr
12680 12685 12690
Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr
12695 12700 12705
Asn Leu Lys Tyr Glu Glu Asp Met His Cys Pro Gly Ser Arg Lys
12710 12715 12720
Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Ser Leu Leu Gly Pro Met
12725 12730 12735
Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu
12740 12745 12750
Thr Leu Leu Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp
12755 12760 12765
Ala Ile Cys Thr His Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Val Asp
12770 12775 12780
Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr Asn Gly Ile
12785 12790 12795
Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val
12800 12805 12810
Asn Gly Phe Thr His Gln Thr Ser Ala Pro Asn Thr Ser Thr Pro
12815 12820 12825
Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Ser Ser
12830 12835 12840
Leu Pro Ser Pro Thr Ser Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr
12845 12850 12855
Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu Asp Met His
12860 12865 12870
His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln
12875 12880 12885
Gly Leu Leu Gly Pro Met Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Leu Leu
12890 12895 12900
Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asn Gly
12905 12910 12915
Ala Ala Thr Gly Met Asp Ala Ile Cys Ser His Arg Leu Asp Pro
12920 12925 12930
Lys Ser Pro Gly Leu Asn Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser
12935 12940 12945
Gln Leu Thr His Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp
12950 12955 12960
Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Val
12965 12970 12975
Ala Pro Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr
12980 12985 12990
Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Pro Ser Pro Thr Thr Ala Val Pro
12995 13000 13005
Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln
13010 13015 13020
Tyr Gly Glu Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr
13025 13030 13035
Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Gly Pro Leu Phe Lys Asn
13040 13045 13050
Ser Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Ile Ser Leu
13055 13060 13065
Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys
13070 13075 13080
Thr His His Leu Asn Pro Gln Ser Pro Gly Leu Asp Arg Glu Gln
13085 13090 13095
Leu Tyr Trp Gln Leu Ser Gln Met Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu
13100 13105 13110
Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe
13115 13120 13125
Thr His Arg Ser Ser Gly Leu Thr Thr Ser Thr Pro Trp Thr Ser
13130 13135 13140
Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Ser Pro Val Pro Ser
13145 13150 13155
Pro Thr Thr Thr Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe
13160 13165 13170
Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu Asn Met Gly His Pro Gly
13175 13180 13185
Ser Arg Lys Phe Asn Ile Thr Glu Ser Val Leu Gln Gly Leu Leu
13190 13195 13200
Lys Pro Leu Phe Lys Ser Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly
13205 13210 13215
Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asp Gly Val Ala Thr
13220 13225 13230
Arg Val Asp Ala Ile Cys Thr His Arg Pro Asp Pro Lys Ile Pro
13235 13240 13245
Gly Leu Asp Arg Gln Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr
13250 13255 13260
His Ser Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser
13265 13270 13275
Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr
13280 13285 13290
Ser Thr Pro Gly Thr Phe Thr Val Gln Pro Glu Thr Ser Glu Thr
13295 13300 13305
Pro Ser Ser Leu Pro Gly Pro Thr Ala Thr Gly Pro Val Leu Leu
13310 13315 13320
Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu
13325 13330 13335
Asp Met Arg Arg Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg
13340 13345 13350
Val Leu Gln Gly Leu Leu Met Pro Leu Phe Lys Asn Thr Ser Val
13355 13360 13365
Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu
13370 13375 13380
Lys Asp Gly Ala Ala Thr Arg Val Asp Ala Val Cys Thr His Arg
13385 13390 13395
Pro Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asp Arg Glu Arg Leu Tyr Trp
13400 13405 13410
Lys Leu Ser Gln Leu Thr His Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr
13415 13420 13425
Thr Leu Asp Arg His Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Gln
13430 13435 13440
Ser Ser Met Thr Thr Thr Arg Thr Pro Asp Thr Ser Thr Met His
13445 13450 13455
Leu Ala Thr Ser Arg Thr Pro Ala Ser Leu Ser Gly Pro Met Thr
13460 13465 13470
Ala Ser Pro Leu Leu Val Leu Phe Thr Ile Asn Phe Thr Ile Thr
13475 13480 13485
Asn Leu Arg Tyr Glu Glu Asn Met His His Pro Gly Ser Arg Lys
13490 13495 13500
Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Val
13505 13510 13515
Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu
13520 13525 13530
Thr Leu Leu Arg Pro Lys Lys Asp Gly Ala Ala Thr Lys Val Asp
13535 13540 13545
Ala Ile Cys Thr Tyr Arg Pro Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asp
13550 13555 13560
Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Ser Ile
13565 13570 13575
Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser Leu Tyr Val
13580 13585 13590
Asn Gly Phe Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr Ser Ile Pro
13595 13600 13605
Gly Thr Pro Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Val Ser
13610 13615 13620
Lys Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ser Pro Leu Leu Val Leu Phe Thr
13625 13630 13635
Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Arg Tyr Glu Glu Asn Met Gln
13640 13645 13650
His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln
13655 13660 13665
Gly Leu Leu Arg Ser Leu Phe Lys Ser Thr Ser Val Gly Pro Leu
13670 13675 13680
Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asp Gly
13685 13690 13695
Thr Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr His His Pro Asp Pro
13700 13705 13710
Lys Ser Pro Arg Leu Asp Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser
13715 13720 13725
Gln Leu Thr His Asn Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Ala Leu Asp
13730 13735 13740
Asn Asp Ser Leu Phe Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Val
13745 13750 13755
Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Pro Thr Val Tyr Leu Gly Ala
13760 13765 13770
Ser Lys Thr Pro Ala Ser Ile Phe Gly Pro Ser Ala Ala Ser His
13775 13780 13785
Leu Leu Ile Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Arg
13790 13795 13800
Tyr Glu Glu Asn Met Trp Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr
13805 13810 13815
Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Leu Phe Lys Asn Thr
13820 13825 13830
Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg
13835 13840 13845
Pro Glu Lys Asp Gly Glu Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr
13850 13855 13860
His Arg Pro Asp Pro Thr Gly Pro Gly Leu Asp Arg Glu Gln Leu
13865 13870 13875
Tyr Leu Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Ser Ile Thr Glu Leu Gly
13880 13885 13890
Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr
13895 13900 13905
His Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr Ser Thr Gly Val Val Ser Glu
13910 13915 13920
Glu Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Asn Asn Leu Arg Tyr Met
13925 13930 13935
Ala Asp Met Gly Gln Pro Gly Ser Leu Lys Phe Asn Ile Thr Asp
13940 13945 13950
Asn Val Met Gln His Leu Leu Ser Pro Leu Phe Gln Arg Ser Ser
13955 13960 13965
Leu Gly Ala Arg Tyr Thr Gly Cys Arg Val Ile Ala Leu Arg Ser
13970 13975 13980
Val Lys Asn Gly Ala Glu Thr Arg Val Asp Leu Leu Cys Thr Tyr
13985 13990 13995
Leu Gln Pro Leu Ser Gly Pro Gly Leu Pro Ile Lys Gln Val Phe
14000 14005 14010
His Glu Leu Ser Gln Gln Thr His Gly Ile Thr Arg Leu Gly Pro
14015 14020 14025
Tyr Ser Leu Asp Lys Asp Ser Leu Tyr Leu Asn Gly Tyr Asn Glu
14030 14035 14040
Pro Gly Pro Asp Glu Pro Pro Thr Thr Pro Lys Pro Ala Thr Thr
14045 14050 14055
Phe Leu Pro Pro Leu Ser Glu Ala Thr Thr Ala Met Gly Tyr His
14060 14065 14070
Leu Lys Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Ile Ser Asn Leu Gln Tyr
14075 14080 14085
Ser Pro Asp Met Gly Lys Gly Ser Ala Thr Phe Asn Ser Thr Glu
14090 14095 14100
Gly Val Leu Gln His Leu Leu Arg Pro Leu Phe Gln Lys Ser Ser
14105 14110 14115
Met Gly Pro Phe Tyr Leu Gly Cys Gln Leu Ile Ser Leu Arg Pro
14120 14125 14130
Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Thr Thr Cys Thr Tyr
14135 14140 14145
His Pro Asp Pro Val Gly Pro Gly Leu Asp Ile Gln Gln Leu Tyr
14150 14155 14160
Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Gly Val Thr Gln Leu Gly Phe
14165 14170 14175
Tyr Val Leu Asp Arg Asp Ser Leu Phe Ile Asn Gly Tyr Ala Pro
14180 14185 14190
Gln Asn Leu Ser Ile Arg Gly Glu Tyr Gln Ile Asn Phe His Ile
14195 14200 14205
Val Asn Trp Asn Leu Ser Asn Pro Asp Pro Thr Ser Ser Glu Tyr
14210 14215 14220
Ile Thr Leu Leu Arg Asp Ile Gln Asp Lys Val Thr Thr Leu Tyr
14225 14230 14235
Lys Gly Ser Gln Leu His Asp Thr Phe Arg Phe Cys Leu Val Thr
14240 14245 14250
Asn Leu Thr Met Asp Ser Val Leu Val Thr Val Lys Ala Leu Phe
14255 14260 14265
Ser Ser Asn Leu Asp Pro Ser Leu Val Glu Gln Val Phe Leu Asp
14270 14275 14280
Lys Thr Leu Asn Ala Ser Phe His Trp Leu Gly Ser Thr Tyr Gln
14285 14290 14295
Leu Val Asp Ile His Val Thr Glu Met Glu Ser Ser Val Tyr Gln
14300 14305 14310
Pro Thr Ser Ser Ser Ser Thr Gln His Phe Tyr Leu Asn Phe Thr
14315 14320 14325
Ile Thr Asn Leu Pro Tyr Ser Gln Asp Lys Ala Gln Pro Gly Thr
14330 14335 14340
Thr Asn Tyr Gln Arg Asn Lys Arg Asn Ile Glu Asp Ala Leu Asn
14345 14350 14355
Gln Leu Phe Arg Asn Ser Ser Ile Lys Ser Tyr Phe Ser Asp Cys
14360 14365 14370
Gln Val Ser Thr Phe Arg Ser Val Pro Asn Arg His His Thr Gly
14375 14380 14385
Val Asp Ser Leu Cys Asn Phe Ser Pro Leu Ala Arg Arg Val Asp
14390 14395 14400
Arg Val Ala Ile Tyr Glu Glu Phe Leu Arg Met Thr Arg Asn Gly
14405 14410 14415
Thr Gln Leu Gln Asn Phe Thr Leu Asp Arg Ser Ser Val Leu Val
14420 14425 14430
Asp Gly Tyr Ser Pro Asn Arg Asn Glu Pro Leu Thr Gly Asn Ser
14435 14440 14445
Asp Leu Pro
14450
<210> 3
<211> 400
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 3
Met Thr Ser Tyr Ser Tyr Arg Gln Ser Ser Ala Thr Ser Ser Phe Gly
1 5 10 15
Gly Leu Gly Gly Gly Ser Val Arg Phe Gly Pro Gly Val Ala Phe Arg
20 25 30
Ala Pro Ser Ile His Gly Gly Ser Gly Gly Arg Gly Val Ser Val Ser
35 40 45
Ser Ala Arg Phe Val Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala Tyr Gly Gly Gly
50 55 60
Tyr Gly Gly Val Leu Thr Ala Ser Asp Gly Leu Leu Ala Gly Asn Glu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Met Gln Asn Leu Asn Asp Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Asp
85 90 95
Lys Val Arg Ala Leu Glu Ala Ala Asn Gly Glu Leu Glu Val Lys Ile
100 105 110
Arg Asp Trp Tyr Gln Lys Gln Gly Pro Gly Pro Ser Arg Asp Tyr Ser
115 120 125
His Tyr Tyr Thr Thr Ile Gln Asp Leu Arg Asp Lys Ile Leu Gly Ala
130 135 140
Thr Ile Glu Asn Ser Arg Ile Val Leu Gln Ile Asp Asn Ala Arg Leu
145 150 155 160
Ala Ala Asp Asp Phe Arg Thr Lys Phe Glu Thr Glu Gln Ala Leu Arg
165 170 175
Met Ser Val Glu Ala Asp Ile Asn Gly Leu Arg Arg Val Leu Asp Glu
180 185 190
Leu Thr Leu Ala Arg Thr Asp Leu Glu Met Gln Ile Glu Gly Leu Lys
195 200 205
Glu Glu Leu Ala Tyr Leu Lys Lys Asn His Glu Glu Glu Ile Ser Thr
210 215 220
Leu Arg Gly Gln Val Gly Gly Gln Val Ser Val Glu Val Asp Ser Ala
225 230 235 240
Pro Gly Thr Asp Leu Ala Lys Ile Leu Ser Asp Met Arg Ser Gln Tyr
245 250 255
Glu Val Met Ala Glu Gln Asn Arg Lys Asp Ala Glu Ala Trp Phe Thr
260 265 270
Ser Arg Thr Glu Glu Leu Asn Arg Glu Val Ala Gly His Thr Glu Gln
275 280 285
Leu Gln Met Ser Arg Ser Glu Val Thr Asp Leu Arg Arg Thr Leu Gln
290 295 300
Gly Leu Glu Ile Glu Leu Gln Ser Gln Leu Ser Met Lys Ala Ala Leu
305 310 315 320
Glu Asp Thr Leu Ala Glu Thr Glu Ala Arg Phe Gly Ala Gln Leu Ala
325 330 335
His Ile Gln Ala Leu Ile Ser Gly Ile Glu Ala Gln Leu Gly Asp Val
340 345 350
Arg Ala Asp Ser Glu Arg Gln Asn Gln Glu Tyr Gln Arg Leu Met Asp
355 360 365
Ile Lys Ser Arg Leu Glu Gln Glu Ile Ala Thr Tyr Arg Ser Leu Leu
370 375 380
Glu Gly Gln Glu Asp His Tyr Asn Asn Leu Ser Ala Ser Lys Val Leu
385 390 395 400
<210> 4
<211> 381
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 4
Met Ala Glu Ser His Leu Leu Gln Trp Leu Leu Leu Leu Leu Pro Thr
1 5 10 15
Leu Cys Gly Pro Gly Thr Ala Ala Trp Thr Thr Ser Ser Leu Ala Cys
20 25 30
Ala Gln Gly Pro Glu Phe Trp Cys Gln Ser Leu Glu Gln Ala Leu Gln
35 40 45
Cys Arg Ala Leu Gly His Cys Leu Gln Glu Val Trp Gly His Val Gly
50 55 60
Ala Asp Asp Leu Cys Gln Glu Cys Glu Asp Ile Val His Ile Leu Asn
65 70 75 80
Lys Met Ala Lys Glu Ala Ile Phe Gln Asp Thr Met Arg Lys Phe Leu
85 90 95
Glu Gln Glu Cys Asn Val Leu Pro Leu Lys Leu Leu Met Pro Gln Cys
100 105 110
Asn Gln Val Leu Asp Asp Tyr Phe Pro Leu Val Ile Asp Tyr Phe Gln
115 120 125
Asn Gln Thr Asp Ser Asn Gly Ile Cys Met His Leu Gly Leu Cys Lys
130 135 140
Ser Arg Gln Pro Glu Pro Glu Gln Glu Pro Gly Met Ser Asp Pro Leu
145 150 155 160
Pro Lys Pro Leu Arg Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Leu Asp Lys Leu
165 170 175
Val Leu Pro Val Leu Pro Gly Ala Leu Gln Ala Arg Pro Gly Pro His
180 185 190
Thr Gln Asp Leu Ser Glu Gln Gln Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys
195 200 205
Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys
210 215 220
Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu
225 230 235 240
Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile
245 250 255
Leu Leu Asp Thr Leu Leu Gly Arg Met Leu Pro Gln Leu Val Cys Arg
260 265 270
Leu Val Leu Arg Cys Ser Met Asp Asp Ser Ala Gly Pro Arg Ser Pro
275 280 285
Thr Gly Glu Trp Leu Pro Arg Asp Ser Glu Cys His Leu Cys Met Ser
290 295 300
Val Thr Thr Gln Ala Gly Asn Ser Ser Glu Gln Ala Ile Pro Gln Ala
305 310 315 320
Met Leu Gln Ala Cys Val Gly Ser Trp Leu Asp Arg Glu Lys Cys Lys
325 330 335
Gln Phe Val Glu Gln His Thr Pro Gln Leu Leu Thr Leu Val Pro Arg
340 345 350
Gly Trp Asp Ala His Thr Thr Cys Gln Ala Leu Gly Val Cys Gly Thr
355 360 365
Met Ser Ser Pro Leu Gln Cys Ile His Ser Pro Asp Leu
370 375 380

Claims (228)

1.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物样品中CEA的水平；
测量所述生物样品中CA125的水平；
测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；
测量所述生物样品中Pro-SFTPB的水平；
其中CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
2.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
使所述样品与结合CEA的第一报告分子接触；
使所述样品与结合CA125的第二报告分子接触；
使所述样品与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；
使所述样品与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
3.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
提供结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的表面；
将所述表面与所述生物样品一起孵育；
使所述表面与结合CEA的第一报告分子接触；
使所述表面与结合CA125的第二报告分子接触；
使所述表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；
使所述表面与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；
测量与所述表面相关联的所述第一报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第二报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第三报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第四报告分子的量；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
4.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
提供具有用于结合CEA的手段的第一表面；
提供具有用于结合CA125的手段的第二表面；
提供具有用于结合CYFRA21-1的手段的第三表面；
提供具有用于结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；
将所述第一表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第二表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第三表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第四表面与所述生物样品一起孵育；
使所述第一表面与结合CEA的第一报告分子接触；
使所述第二表面与结合CA125的第二报告分子接触；
使所述第三表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；
使所述第四表面与结合pro-SFTPB的第三报告分子接触；
测量与所述第一表面相关联的所述第一报告分子的量；
测量与所述第二表面相关联的所述第二报告分子的量；
测量与所述第三表面相关联的所述第三报告分子的量；
测量与所述第四表面相关联的所述第三报告分子的量；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
5.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
提供具有用于结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的手段的表面；
将所述表面与所述生物样品一起孵育；
使所述表面与结合CEA的第一中继分子接触；
使所述表面与结合CA125的第二中继分子接触；
使所述表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；
使所述表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；
使所述表面与结合所述第一中继分子的第一报告分子接触；
使所述表面与结合所述第二中继分子的第二报告分子接触；
使所述表面与结合所述第三中继分子的第三报告分子接触；
使所述表面与结合所述第四中继分子的第四报告分子接触；
测量与所述第一中继分子和CEA相关联的所述第一报告分子的量；
测量与所述第二中继分子和CA125相关联的所述第二报告分子的量；
测量与所述第三中继分子和CYFRA21-1相关联的第三报告分子的量；
测量与所述第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的第四报告分子的量；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
6.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
提供具有用于结合CEA的手段的第一表面；
提供具有用于结合CA125的手段的第二表面；
提供具有用于结合CYFRA21-1的手段的第三表面；
提供具有用于结合Pro-SFTPB的手段的第四表面；
将所述第一表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第二表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第三表面与所述生物样品一起孵育；
将所述第四表面与所述生物样品一起孵育；
使所述第一表面与结合CEA的第一中继分子接触；
使所述第二表面与结合CA125的第二中继分子接触；
使所述第三表面与结合CYFRA21-1的第三中继分子接触；
使所述第四表面与结合Pro-SFTPB的第四中继分子接触；
使所述第一表面与结合所述第一中继分子的第一报告分子接触；
使所述第二表面与结合所述第二中继分子的第二报告分子接触；
使所述第三表面与结合所述第三中继分子的第三报告分子接触；
使所述第四表面与结合所述第四中继分子的第四报告分子接触；
测量与所述第一中继分子和CEA相关联的所述第一报告分子的量；
测量与所述第二中继分子和CA125相关联的所述第二报告分子的量；
测量与所述第三中继分子和CYFRA21-1相关联的所述第三报告分子的量；
测量与所述第四中继分子和Pro-SFTPB相关联的所述第四报告分子的量；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的量在所述受试者中升高。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物的受体分子。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的量升高。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原的受体分子。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，还包括：
测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；
其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述生物样品是血清。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度确定所述受试者是否患有肺癌。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。
20.如权利要求19所述的方法，其中小组选自：
a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或
b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。
21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中至少一个表面是固体颗粒的表面。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。
23.如权利要求2-22中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。
24.如权利要求2-23中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述光谱测定方法是质谱术。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。
29.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第一报告分子选择性结合CEA。
30.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第二报告分子选择性结合CA125。
31.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。
32.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中所述第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
38.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括
用权利要求1-37中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险，和
施用治疗有效量的对癌症的治疗。
39.如权利要求38所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
42.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
43.如权利要求1-42中任一项所述的方法，还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中所例示的截止值进行比较。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。
45.如权利要求43所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。
46.根据权利要求43所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
47.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。
48.如权利要求47的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。
49.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从所述受试者获取生物样品；
通过使所述生物样品与CEA抗体接触并观察CEA与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CEA的水平；
通过使所述生物样品与CA125抗体接触并观察CA125与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CA125的水平；
通过使所述生物样品与CYFRA21-1抗体接触并观察CYFRA21-1与抗体之间的结合来测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；
通过使所述生物样品与pro-SFTPB抗体接触并观察pro-SFTPB与抗体之间的结合来测量所述生物样品中pro-SFTPB的水平；
如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测量所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
50.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物样品中CEA的水平；
测量所述生物样品中CA125的水平；
测量所述生物样品中CYFRA21-1的水平；
测量所述生物样品中pro-SFTPB的水平；
确定CEA相对于第一标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；
确定CA125相对于第二标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；
确定CYFRA21-1相对于第三标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；和
确定pro-SFTPB相对于第四标准值的水平，其中该比率预测肺癌的存在；和
如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的比率的统计分析所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
51.一种预测受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；和
如通过对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，计算预测因子。
52.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB生物标志物的水平；
如通过对所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的统计分析所确定，将所述受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
53.一种使用从疑似患有肺癌的受试者获得的生物样品确定受试者患肺癌的风险的方法，所述方法包括
使用至少一种对CEA具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CEA的水平；和
使用至少一种对CA125具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CA125的水平；和
使用至少一种对CYFRA21-1具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的CYFRA21-1的水平；和
使用至少一种对pro-SFTPB具有特异性的抗体或抗体部分，测定所述生物样品中存在的pro-SFTPB的水平；和
确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示所述受试者患有肺癌。
54.一种用于确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从受试者获取生物样品；
用抗CEA抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；
用抗CA125抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；
用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；
用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段对所述样品进行免疫测定；
其中抗体的结合指示所述受试者中的肺癌，并且免疫测定能够检测早期肺癌。
55.一种用于确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从所述受试者获取生物样品；
用抗CEA抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；
用抗CA125抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；
用抗CYFRA21-1抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；
用抗pro-SFTPB抗体或其抗原结合片段进行免疫测定；
确定CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平是否指示所述受试者患有肺癌。
56.如权利要求49-55中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的水平在所述受试者中升高。
57.如权利要求49-56中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。
59.如权利要求49-58中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原的受体分子。
60.如权利要求49-59中任一项所述的方法，其中至少一个表面是固体颗粒的表面。
61.如权利要求49-60中任一项所述的方法，还包括：
测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；
其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
62.如权利要求49-61中任一项所述的方法，其中所述样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述生物样品是血清。
64.如权利要求49-63中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。
65.如权利要求49-64中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。
67.如权利要求49-66中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。
68.如权利要求49-66中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。
70.如权利要求49-69中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。
71.如权利要求49-70中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度，确定所述受试者是否患有肺癌。
72.如权利要求71所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。
73.如权利要求49-72中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。
74.如权利要求49-73中任一项所述的方法，其中小组选自：
a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或
b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。
75.如权利要求49-74中任一项所述的方法，其中小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。
76.如权利要求49-75中任一项所述的方法，其中小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。
77.如权利要求49-76中任一项所述的方法，其中第一报告分子选择性结合CEA。
78.如权利要求49-77中任一项所述的方法，其中第二报告分子选择性结合CA125。
79.如权利要求49-78中任一项所述的方法，其中第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。
80.如权利要求49-79中任一项所述的方法，其中第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。
81.如权利要求49-80中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。
82.如权利要求49-81中任一项所述的方法，对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。
83.如权利要求49-82中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。
84.如权利要求49-83中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
86.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括
用权利要求49-85中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险；和
施用治疗有效量的对癌症的治疗。
87.如权利要求86所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
88.如权利要求49-87中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
89.如权利要求49-88中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
90.如权利要求49-89中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
91.如权利要求49-89中任一项所述的方法，其还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。
92.如权利要求91所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。
93.如权利要求91所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。
94.如权利要求49-93中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
95.如权利要求49-94中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。
96.如权利要求49-95中任一项所述的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。
97.一试剂盒，其用于权利要求1-24中任一项所述的方法，所述试剂盒包括包含以下溶质的试剂溶液：
用于检测CEA的第一溶质；
用于检测CA125的第二溶质；
用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和
用于检测pro-SFTPB的第四溶质。
98.一试剂盒，其用于权利要求1-24中任一项所述的方法，所述试剂盒包括
第一试剂溶液，其包括用于检测CEA的第一溶质；
第二试剂溶液，其包括用于检测CA125的第二溶质；
第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1的第三溶质；和
第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质。
99.如权利要求97至98所述的试剂盒，还包括：
包含以下溶质的试剂溶液：
用于检测CEA抗原的第一溶质；
用于检测CA125抗原的第二溶质；
用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；
用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和
用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
100.如权利要求97-99中任一项所述的试剂盒，其包括用于使所述试剂溶液与生物样品接触的装置。
101.如权利要求97-100中任一项所述的试剂盒，其包括至少一个表面，所述表面具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。
102.如权利要求97-101中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一种生物标志物选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。
103.如权利要求97-102中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。
104.如权利要求97-103中任一项所述的试剂盒，还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。
105.如权利要求97-104中任一项所述的试剂盒，其中抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
106.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括
从患者获取生物样品；
测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；
其中二乙酰精胺(DAS)的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
107.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，包括血浆衍生的生物标志物组和蛋白质标志物组：
其中所述血浆衍生的生物标志物组包括二乙酰精胺(DAS)；
其中所述蛋白质生物标志物组包括CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB；
其中所述方法包括：
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物标品中所述血浆衍生的生物标志物和所述蛋白质生物标志物的水平；
其中所述血浆衍生的生物标志物和所述蛋白质生物标志物的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
108.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，包括确定一种或多种蛋白质生物标志物和一种或多种代谢物标志物的水平，所述方法包括：
从所述受试者获取生物样品；
使所述样品与结合CEA抗原的第一报告分子接触；
使所述样品与结合CA125抗原的第二报告分子接触；
使所述样品与结合CYFRA21-1抗原的第三报告分子接触；和
使所述样品与结合pro-SFTPB抗原的第四报告分子接触；和
确定一种或多种生物标志物的水平，其中所述一种或多种生物标志物选自二乙酰精胺(DAS)；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子、第四报告分子和所述一种或多种生物标志物的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
109.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
从所述受试者获取生物样品；
测量所述生物样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB抗原的水平；和
测量所述生物样品中一种或多种选自二乙酰精胺(DAS)的代谢物标志物的水平；
如通过对所述生物样品中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原和二乙酰精胺(DAS)的水平的统计分析所确定，将受试者的状况指定为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
110.如权利要求106-109中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的水平在所述受试者中升高。
111.如权利要求106-110中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
112.如权利要求111所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。
113.如权利要求106-112中任一项所述的方法，其包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的生物标志物或抗原。
114.如权利要求106-113中任一项所述的方法，还包括：
测量所述生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；
其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
115.如权利要求106-114中任一项所述的方法，其中所述样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。
116.如权利要求115所述的方法，其中所述生物样品是血清。
117.如权利要求106-116中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。
118.如权利要求106-117中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。
119.如权利要求118所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。
120.如权利要求106-119中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。
121.如权利要求106-120中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。
122.如权利要求121所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。
123.如权利要求106-122中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。
124.如权利要求106-123中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度，确定所述受试者是否患有肺癌。
125.如权利要求106-124中任一项所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。
126.如权利要求106-125中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。
127.如权利要求106-126中任一项所述的方法，其中小组选自：
a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或
b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。
128.如权利要求106-127中任一项所述的方法，其中小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。
129.如权利要求106-128中任一项所述的方法，其中小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。
130.如权利要求106-129中任一项所述的方法，其中第一报告分子选择性结合CEA。
131.如权利要求106-130中任一项所述的方法，其中第二报告分子选择性结合CA125。
132.如权利要求106-131中任一项所述的方法，其中第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。
133.如权利要求106-132中任一项所述的方法，其中第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。
134.如权利要求106-133中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。
135.如权利要求106-134中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。
136.如权利要求106-135中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。
137.如权利要求106-136中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。
138.如权利要求137所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
139.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括
用权利要求106-138中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险；和
施用治疗有效量的对癌症的治疗。
140.如权利要求139所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
141.如权利要求106-140中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
142.如权利要求106-141中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
143.如权利要求106-142中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
144.如权利要求106-143中任一项所述的方法，其还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。
145.如权利要求144所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。
146.如权利要求144所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。
147.如权利要求106-146中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
148.如权利要求106-147中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。
149.如权利要求106-148中任一项所述的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。
150.一试剂盒，其用于权利要求106-149中任一项所述的方法，所述试剂盒包括包含以下溶质的试剂溶液：
用于检测CEA抗原的第一溶质；
用于检测CA125抗原的第二溶质；
用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；
用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和
用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
151.一试剂盒，其用于权利要求106-150中任一项所述的方法，所述试剂盒包括
第一试剂溶液，其包括用于检测CEA抗原的第一溶质；
第二试剂溶液，其包括用于检测CA125抗原的第二溶质；
第三试剂溶液，其包括用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；
第四试剂溶液，其包括用于检测pro-SFTPB的第四溶质；
第五试剂溶液，其包括用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
152.如权利要求150-151中任一项所述的试剂盒，还包括：
包含以下溶质的试剂溶液：
用于检测CEA抗原的第一溶质；
用于检测CA125抗原的第二溶质；
用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；
用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和
用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
153.如权利要求150-152中任一项所述的试剂盒，其包括用于使所述试剂溶液与生物样品接触的装置。
154.如权利要求150-152中任一项所述的试剂盒，其包括至少一个表面，所述表面具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。
155.如权利要求154所述的试剂盒，其中所述至少一种生物标志物选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。
156.如权利要求154所述的试剂盒，其中所述至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。
157.如权利要求150-156中任一项所述的试剂盒，还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。
158.如权利要求150-157中任一项所述的试剂盒，其中所述抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
159.一种治疗或预防受试者肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平将所述受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌的风险，所述方法包括以下一项或多项：
i.向患有肺癌的所述受试者施用化学治疗药物；
ii.向患有肺癌的所述受试者施用治疗性放射；和
iii.外科手术，用于部分或完全手术切除患有肺癌的所述受试者中的癌组织。
160.一种治疗或预防受试者中肺癌进展的方法，其中CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原、pro-SFTPB抗原、二乙酰精胺(DAS)的水平将所述受试者分类为患有肺癌或处于患肺癌的风险，所述方法包括以下一项或多项：
i)向患有肺癌的所述受试者施用化学治疗药物；
ii)向患有肺癌的所述受试者施用治疗性放射；和
iii)外科手术，用于部分或完全手术切除患有肺癌的所述受试者中的癌组织。
161.一种用于检测和治疗肺癌的方法，其包括：
通过免疫测定法检测从人获得的生物样品中的CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB；
对所述收集样品中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量；
将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与截止值进行比较，以确定所述人是否处于增加的患肺癌风险；其中如果水平高于截止值，则所述人患有肺癌，并向所述患有肺癌的人施用用于肺癌的治疗。
162.一种确定受试者患肺癌的风险的方法，其包括：
在来自需要分析的受试者的生物样品中，测量CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的浓度；和
将需要分析的所述受试者的所述样品中生物标志物的浓度与正常或非患病受试者中的浓度进行比较，
其中需要分析的所述受试者患有肺癌或处于患肺癌的风险，其中所述确定基于表10中所列的灵敏度或特异性值处的截止值。
163.一种确定生物样品中肺癌的证据的方法，其包括测量来自受试者的生物样品中的包括CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)、以及其可识别部分的生物标志物组的浓度，其中基于表10中所列的截止值的灵敏度或特异性，每种生物标志物的浓度变化是肺癌的特征。
164.如权利要求159-163中任一项所述的方法，其中相对于健康受试者，CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB或与其结合的报告分子的水平在所述受试者中升高。
165.如权利要求159-164中任一项所述的方法，其中与不患肺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
166.如权利要求165所述的方法，其中所述参照受试者或组是健康的。
167.如权利要求159-166中任一项所述的方法，其中至少一个表面还包括至少一种受体分子，其选择性结合选自CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的生物标志物或抗原。
168.如权利要求159-167中任一项所述的方法，其中至少一个表面是固体颗粒的表面。
169.如权利要求168所述的方法，其中所述固体颗粒包括珠子。
170.如权利要求159-169中任一项所述的方法，其包括：
测量生物样品中二乙酰精胺(DAS)的水平；
其中二乙酰精胺(DAS)的量将患者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
171.如权利要求159-170中任一项所述的方法，其中样品包括选自血液、血浆和血清的生物样品。
172.如权利要求171所述的方法，其中所述生物样品是血清。
173.如权利要求159-172中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量进行定量。
174.如权利要求159-173中任一项所述的方法，其中对CEA、CA125、CYFRA21-1、pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的量的检测包括使用固体颗粒。
175.如权利要求174所述的方法，其中所述固体颗粒是珠子。
176.如权利要求159-175中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子与酶连接。
177.如权利要求159-176中任一项所述的方法，其中至少一种报告分子提供能够检测到的信号。
178.如权利要求177所述的方法，其中所述能够检测到的信号能够通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法检测。
179.如权利要求159-179中任一项所述的方法，其中测量CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)的浓度。
180.如权利要求159-179中任一项所述的方法，其中基于所测量的生物标志物的浓度确定所述受试者是否患有肺癌。
181.如权利要求159-180中任一项所述的方法，其中所测量的浓度用于基于表10中所列的截止值处的灵敏度和特异性值计算生物标志物得分。
182.如权利要求159-181中任一项所述的方法，还包括以下步骤：将所测量的所述生物样品中每种生物标志物的浓度与统计模型的预测进行比较。
183.如权利要求159-182中任一项所述的方法，其中小组选自：
a.由CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB组成的小组；或
b.由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成的小组。
184.如权利要求159-183中任一项所述的方法，其中小组包括已通过选自UV-可见光谱学、质谱术、核磁共振(NMR)光谱学、质子NMR光谱学、核磁共振(NMR)光谱术、气相色谱-质谱术(GC-MS)、液相色谱-质谱术(LC-MS)、相关光谱学(COSy)、奥氏核效应光谱学(NOESY)、旋转框架奥氏核效应光谱学(ROESY)、LC-TOF-MS、LC-MS/MS和毛细管电泳-质谱术的方法鉴定的生物标志物。
185.如权利要求159-184中任一项所述的方法，其中小组包括已通过UV-可见光谱学或质子NMR光谱学鉴定的生物标志物。
186.如权利要求159-185中任一项所述的方法，其中第一报告分子选择性结合CEA。
187.如权利要求159-186中任一项所述的方法，其中第二报告分子选择性结合CA125。
188.如权利要求159-187中任一项所述的方法，其中第三报告分子选择性结合CYFRA21-1。
189.如权利要求159-188中任一项所述的方法，其中所述第四报告分子选择性结合Pro-SFTPB。
190.如权利要求159-189中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定基本上同时进行。
191.如权利要求159-190中任一项所述的方法，其中CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB水平的测定以逐步方式进行。
192.如权利要求159-191中任一项所述的方法，其包括将受试者病史信息包括在患有肺癌或不患有肺癌的指定中。
193.如权利要求159-192中任一项所述的方法，其包括对指定为患有肺癌的受试者施用至少一种替代诊断测试。
194.如权利要求193所述的方法，其中所述至少一种替代诊断测试包括至少一种ctDNA的测定或测序。
195.一种治疗疑似患有肺癌的受试者的方法，其包括
用权利要求159-194中任一项所述的方法分析所述受试者患肺癌的风险；和
施用治疗有效量的对癌症的治疗。
196.如权利要求195所述的治疗方法，其中所述治疗是外科手术、化学疗法、免疫疗法、放射疗法、靶向疗法、或其组合。
197.如权利要求159-196中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
198.如权利要求159-197中任一项所述的方法，其中与患有腺癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
199.如权利要求159-198中任一项所述的方法，其中与患有鳞状细胞癌的参照受试者或组中的CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平相比，CEA抗原、CA125抗原、CYFRA21-1抗原和pro-SFTPB抗原的水平升高。
200.如权利要求159-199中任一项所述的方法，其还包括将CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的量与表10中例示的截止值进行比较。
201.如权利要求200所述的方法，其中所述截止值包括至少0.83的AUC(95％CI)。
202.如权利要求200所述的方法，其中所述截止值包括至少0.80的AUC(95％CI)。
203.如权利要求159-202中任一项所述的方法，其中所述受试者为患有肺癌的分类在78％和94％特异性下分别具有0.76和0.42的灵敏度。
204.如权利要求159-203中任一项所述的方法，其中所述肺癌在临界可切除阶段或之前诊断。
205.如权利要求159-204中任一项所述的方法，其中所述肺癌在可切除阶段诊断。
206.如权利要求159-205中任一项所述的方法，还包括：
提供结合CEA、CA125、CYFRA21-1和Pro-SFTPB的表面；
将所述表面与生物样品一起孵育；
使所述表面与结合CEA的第一报告分子接触；
使所述表面与结合CA125的第二报告分子接触；
使所述表面与结合CYFRA21-1的第三报告分子接触；
使所述表面与结合Pro-SFTPB的第四报告分子接触；
测量与所述表面相关联的所述第一报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第二报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第三报告分子的量；
测量与所述表面相关联的所述第四报告分子的量；
其中所述第一报告分子、所述第二报告分子、所述第三报告分子和所述第四报告分子的量将所述受试者分类为处于患肺癌的风险或不处于患肺癌的风险。
207.一种用于确定来自受试者的样品中肺癌指标存在的试剂盒，所述试剂盒包括：
(a)与选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB的每种蛋白质生物标志物结合的抗原结合试剂，或包括所述抗原结合试剂的阵列；和
(b)用于进行确定个体肺癌存在的方法的说明。
208.如权利要求205所述的试剂盒，还包括：
包含以下溶质的试剂溶液：
用于检测CEA抗原的第一溶质；
用于检测CA125抗原的第二溶质；
用于检测CYFRA21-1抗原的第三溶质；
用于检测pro-SFTPB抗原的第四溶质；和
用于检测二乙酰精胺(DAS)的第五溶质。
209.如权利要求205-206中任一项所述的试剂盒，其包括用于使所述试剂溶液与生物样品接触的装置。
210.如权利要求205-207中任一项所述的试剂盒，其包括至少一个表面，所述表面具有用于结合至少一种生物标志物或抗原的手段。
211.如权利要求208所述的试剂盒，其中所述至少一种生物标志物或抗原选自CEA、CA125、CYFRA21-1和pro-SFTPB。
212.如权利要求205-209中任一项所述的试剂盒，其中所述至少一个表面包括用于结合ctDNA的手段。
213.如权利要求205-210中任一项所述的试剂盒，还包括与代谢物生物标志物二乙酰精胺(DAS)结合的抗体或其抗原结合片段。
214.如权利要求205-211中任一项所述的试剂盒，其中所述抗原结合试剂包括抗体或其抗原结合片段、RNA、DNA或RNA/DNA杂合体。
215.一种方法，其包括：
a)从对于肺癌无症状的受试者中获取样品；
b)测量样品中的一组标志物，其中所述标志物包括CEA、CA125、Cyfra 21-1和二乙酰精胺(DAS)；
c)确定每种标志物的生物标志物得分；
d)对每种标志物的生物标志物得分求和，以获得每名受试者的综合得分，将所述受试者的增加的肺癌存在风险定量为风险得分，其中将所述综合得分与分层受试者群体的分组的风险类别相匹配，其中每个风险类别包括乘数，所述乘数表示与使用单个阈值相比，与一系列综合得分相关联的增加的患肺癌可能性，其中所述乘数是根据回顾性样品的阳性预测得分确定的；
e)对具有所定量的增加的肺癌存在风险的受试者进行计算机断层扫描(CT)扫描或其它设想方式。
216.如权利要求215所述的方法，其中所述标志物由CEA、CA125、CYFRA21-1、Pro-SFTPB和二乙酰精胺(DAS)组成。
217.如权利要求215或216所述的方法，其中所述样品是血液、血清、血浆、或其某些部分。
218.如权利要求215-217中任一项所述的方法，其中所述分层受试者群体的所述分组、表示增加的患肺癌可能性的所述乘数、和所述一系列综合得分是根据群体的回顾性临床样品确定的。
219.如权利要求215-218中任一项所述的方法，其中所述风险类别还包括风险标识符。
220.如权利要求215-219中任一项所述的方法，其中所述风险标识符选自低风险、中低风险、中等风险、中高风险和最高风险。
221.如权利要求215-220中任一项所述的方法，其中对每个风险类别计算表示增加的患癌症可能性的所述乘数包括基于回顾性生物标志物得分对受试者队列进行分层，并通过每个分层群体的阳性预测得分对所述队列中已知的癌症患病率进行加权。
222.如权利要求215-221中任一项所述的方法，其中分层受试者群体的所述分组包括至少三个风险类别，其中表示增加的患癌症可能性的所述乘数为约2或更大。
223.如权利要求215-222中任一项所述的方法，其中分层受试者群体的所述分组包括至少两个风险类别，其中表示增加的患癌症可能性的所述乘数为约5或更大。
224.如权利要求215-223中任一项所述的方法，其中所述受试者年龄为50岁或更大并且具有吸烟史。
225.如权利要求215-224中任一项所述的方法，还包括生成风险分类表，其中测量所述一组标志物，确定每种标志物的生物标志物得分，通过对所述生物标志物得分求和获得综合得分；确定用于将综合得分划分为风险组的阈值，并为每组指定乘数，所述乘数指示无症状受试者具有经定量的增加的癌症存在风险的可能性。
226.如权利要求215-225中任一项所述的方法，其中该组的形式选自电子表格形式、软件应用程序、计算机程序和excel电子表格。
227.如权利要求215-226中任一项所述的方法，其中所述一组标志物包括在结合测定中测量的蛋白质、多肽或代谢物。
228.如权利要求215-227中任一项所述的方法，其中所述一组标志物包括使用流式细胞仪测量的蛋白质或多肽。
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