CN110432537B - 烟草衍生的o-甲基化的类黄酮组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了烟草衍生的O‑甲基化的类黄酮组合物以及一种制备烟草组合物的方法。本发明涉及从烟草属种植物衍生出的分离的O‑甲基化的类黄酮化合物和o‑甲基化的类黄酮化合物的混合物以及得到这样的化合物的方法。所述o‑甲基化的类黄酮可以与烟草材料组合以产生烟草产品(例如，吸烟制品)，从而增强其感觉特征。所述o‑甲基类黄酮可以可替换地与用于饮食添加物和/或药物用途的非烟草材料组合。

Description

烟草衍生的O-甲基化的类黄酮组合物

本申请是国际申请号为PCT/US2013/063812，国际申请日为2013年10月8日的PCT国际申请进入中国国家阶段后的申请，申请号为201380059571.6，发明名称为“烟草衍生的O-甲基化的类黄酮组合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及从烟草制成或衍生出的产品，或者所述产品以其它方式包含烟草或烟草组分，且意图用于人消费。特别感兴趣的是从来自烟草属种(Nicotiana species)的植物或植物部分得到或衍生出的成分或组分。

背景技术

香烟、雪茄和烟丝是处于不同形式的使用烟草的常见发烟制品。如下使用这些发烟制品：加热或燃烧烟草，以产生可被吸烟者吸入的气溶胶(如烟)。流行的吸烟制品，诸如香烟，具有大致圆柱棒形结构，并包括被纸包装材料围绕的可抽吸材料诸如撕碎的烟草(例如，以切割填充物形式)的包、卷或柱，从而形成所谓的“烟丝条”。通常，香烟具有与烟丝条成端到端关系排列的圆柱形过滤元件。通常，过滤元件包括被称为“成型纸(plug wrap)”的纸材料围绕的塑化乙酸纤维素丝束。某些香烟并入的过滤元件具有多段，并且这些段之一可包含活性炭颗粒。通常，过滤元件使用称为“接装纸(tipping paper)”的外围包装材料连接至烟丝条的一端。为了提供环境空气对抽吸的主流烟气的稀释，将接装材料和成型纸打孔也已成为需要。吸烟者通过点燃香烟的一端并燃烧烟丝条而使用香烟。然后，吸烟者通过抽吸香烟的相对端(例如，过滤嘴端)而接收主流烟气进入他/她的口腔。

用于香烟生产的烟草通常以掺合形式使用。例如，某些流行的的烟草掺合物(通常被称为“美国掺合物”)包括烟道烘烤的烟草、白肋烟草和香料烟草的混合物，并在许多情况下，包括某些加工过的烟草，如重构烟草及加工过的烟茎。用于制造特定香烟品牌的烟草掺合物中的每类烟草的精确量随品牌而不同。然而，对于许多烟草掺合物而言，烟道烘烤的烟草占该掺合物的比例相对较大，而香料烟草占该掺合物的比例相对较小。参见，例如，Tobacco Encyclopedia,Voges(编)第44-45页(1984),Browne,The Design ofCigarettes,第3版,第43页(1990)和Tobacco Production,Chemistry and Technology,Davis等人(编)第346页(1999)。

烟草还可以以所谓“无烟”形式享用。通过一些形式的经过处理的烟草或含烟草制剂插入使用者嘴中，使用特别流行的无烟烟草产品。参见例如，在下述文献中阐述的无烟烟草制剂类型、成分和加工方法：Schwartz的美国专利号1,376,586；Levi的美国专利号3,696,917；Pittman等人的美国专利号4,513,756；Sensabaugh,Jr.等人的美国专利号4,528,993；Story等人的美国专利号4,624,269；Tibbetts的美国专利号4,991,599；Townsend的美国专利号4,987,907；Sprinkle,III等人的美国专利号5,092,352；White等人的美国专利号5,387,416；Williams的美国专利号6,668,839；Williams的美国专利号6,834,654；Atchley等人的美国专利号6,953,040；Atchley等人的美国专利号7,032,601；和Atchley等人的美国专利号7,694,686；Williams的美国专利公开号2004/0020503；Quinter等人的美国专利公开号2005/0115580；Strickland等人的美国专利公开号2005/0244521；Strickland等人的美国专利公开号2006/0191548；Holton,Jr.等人的美国专利公开号2007/0062549；Holton,Jr.等人的美国专利公开号2007/0186941；Strickland等人的美国专利公开号2007/0186942；Dube等人的美国专利公开号2008/0029110；Robinson等人的美国专利公开号2008/0029116；Mua等人的美国专利公开号2008/0029117；Robinson等人的美国专利公开号2008/0173317；Engstrom等人的美国专利公开号2008/0196730；Neilsen等人的美国专利公开号2008/0209586；Crawford等人的美国专利公开号2008/0305216；Mua等人的美国专利公开号2009/0025738；Brinkley等人的美国专利公开号2009/0025739；Essen等人的美国专利公开号2009/0065013；Kumar等人的美国专利公开号2009/0293889；Doolittle等人的美国专利公开号2010/0018540；Gerardi等人的美国专利公开号2010/0018541；Gao等人的美国专利公开号2010/0291245；Mua等人的美国专利公开号2011/0139164；Coleman,III等人的美国专利公开号2011/0174323；Beeson等人的美国专利公开号2011/0247640；Coleman,III等人的美国专利公开号2011/0259353；Cantrell等人的美国专利公开号2012/0037175；Hunt等人的美国专利公开号2012/0055494；Sebastian等人的美国专利公开号2012/0103353；Byrd等人的美国专利公开号2012/0125354；Cantrell等人的美国专利公开号2012/0138073；和Cantrell等人的美国专利公开号2012/0138074；Arnarp等人的PCT WO04/095959；Atchley等人的PCT WO 05/063060；Engstrom的PCT WO 05/004480；Bjorkholm的PCT WO 05/016036；Quinter等人的PCT WO 05/041699，和Atchley的PCT WO 10/132444；它们中的每一篇通过引用并入本文。

一类无烟烟草产品被称作“鼻烟”。湿鼻烟产品的代表类型(一般被称作“snus”)已经在欧洲、特别是在瑞典由或通过诸如以下公司制造：Swedish Match AB,Fiedler&Lundgren AB,Gustavus AB,Skandinavisk Tobakskompagni A/S,and Rocker ProductionAB。在美国可得到的Snus产品已经在以下商业名称下面市：R.J.Reynolds TobaccoCompany的Camel Snus Frost、Camel Snus Original和Camel Snus Spice。也参见，例如，Bryzgalov等人,1N1800 Life Cycle Assessment,Comparative Life Cycle Assessmentof General Loose and Portion Snus(2005)。另外，与snus生产有关的某些质量标准已经被组合为所谓的GothiaTek标准。代表性的无烟烟草产品还已经在以下商业名称下面市：House of Oliver Twist A/S的Oliver Twist；U.S.Smokeless Tobacco Co.的Copenhagen湿烟、Copenhagen袋、Skoal Bandits、Skoal Pouches、SkoalDry、Rooster、Red Seal长切割物、Husky和Revel Mint Tobacco Packs；Philip Morris USA的Marlboro Snus和“taboka”；American Snuff Company,LLC的Levi Garrett、Peachy、Taylor’s Pride、Kodiak、Hawken Wintergreen、Grizzly、Dental、Kentucky King和Mammoth Cave；R.J.Reynolds Tobacco Company的Camel Snus、Camel Orbs、Camel Sticks和CamelStrips。其它已经面市的示例性无烟烟草产品包括被称作以下名称的那些：SwisherInternational,Inc.的Kayak湿鼻烟和Chattanooga Chew嚼烟；和Pinkerton TobaccoCo.LP的Redman嚼烟。

多年以来，已经提出了各种处理方法和添加剂来改变用于烟草产品中的烟草材料的总体特性或性质。例如，已经利用添加剂或处理方法来改变烟草材料的化学或感官特性，或者在可抽吸的烟草材料的情况下，改变通过抽吸包括烟草材料的制品而生成的主流烟气的化学或感官特性。香烟烟气的感官属性可通过在香烟的各种组分中引入调味材料来增强。示例性的调味添加剂包括薄荷醇以及美拉德反应产物，如吡嗪、氨基糖和Amadori化合物。美国香烟烟草掺合物通常含有外壳组合物，所述外壳组合物包括调味成分，诸如甘草或可可粉和糖源诸如高果糖玉米糖浆。也参见,Leffingwell等人,Tobacco Flavoring forSmoking Products,R.J.Reynolds Tobacco Company(1972)，其通过引用并入本文。在某些情况下，涉及使用热的处理方法可以给经过加工的烟草赋予期望的颜色或视觉特征、期望的感觉性质或期望的物理性状或质地。制备用于烟草组合物中的风味和芳香组合物的各种方法记载在：Rooker的美国专利号3,424,171；Luttich的美国专利号3,476,118；Osborne,Jr.等人的美国专利号4,150,677；Roberts等人的美国专利号4,986,286；White等人的美国专利号5,074,319；White等人的美国专利号5,099,862；Sensabaugh,Jr.的美国专利号5,235,992；Raymond等人的美国专利号5,301,694；Coleman,III等人的美国专利号6,298,858；Coleman,III等人的美国专利号6,325,860；Coleman,III等人的美国专利号6,428,624；Dube等人的美国专利号6,440,223；Coleman,III的美国专利号6,499,489；和White等人的美国专利号6,591,841；Coleman,III的美国专利申请公开号2004/0173228和Coleman,III等人的美国专利申请公开号2010/0037903，它们中的每一篇通过引用并入本文。

通过掺入某些调味材料，也可以增强无烟烟草的感官属性。参见，例如，Williams的美国专利申请公开号2002/0162562；Williams的美国专利申请公开号2002/0162563；Atchley等人的美国专利申请公开号2003/0070687；Williams的美国专利申请公开号2004/0020503，Breslin等人的美国专利申请公开号2005/0178398；Strickland等人的美国专利申请公开号2006/0191548；Holton,Jr.等人的美国专利申请公开号2007/0062549；Holton,Jr.等人的美国专利申请公开号2007/0186941；Strickland等人的美国专利申请公开号2007/0186942；Dube等人的美国专利申请公开号2008/0029110；Robinson等人的美国专利申请公开号2008/0029116；Mua等人的美国专利申请公开号2008/0029117；Robinson等人的美国专利申请公开号2008/0173317；和Neilsen等人的美国专利申请公开号2008/0209586，它们中的每一篇通过引用并入本文。

希望提供改变可用于制备吸烟制品和/或无烟烟草产品的烟草(和烟草组合物和制剂)的特征和性质的其它组合物和方法。具体地，需要开发使用烟草衍生的风味材料改变烟草组合物和制剂的特征和性质的组合物和方法。

发明内容

本发明提供了得自烟草属种的材料(例如，烟草衍生的材料)，其包含得自烟草属种植物的分离的组分，所述材料可用于掺入在多种烟草产品(诸如吸烟制品和无烟烟草产品)中使用的烟草组合物中。本发明还提供了从烟草属种(例如，烟草材料)分离组分的方法，和用于加工那些组分的方法和掺入那些组分的烟草材料。

具体地，本发明提供了o-甲基化的类黄酮化合物。令人惊奇地，以前尚未以本文中指出的量报道这些化合物。在本发明的一个方面，提供了从烟草属种植物提取和分离一种或多种o-甲基化的类黄酮的方法，所述方法包括：接收烟草属种的植物材料；使所述植物材料与溶剂在一定条件下接触一定时间，所述条件和时间足以将一种或多种o-甲基化的类黄酮从所述植物材料提取进所述溶剂中；使含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂与经提取的植物材料分离；和纯化含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂以提供分离物，所述分离物包含至少约50重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

在某些实施方案中，烟草属种的植物材料可以呈叶的形式。在某些实施方案中，以生坯形式提供烟草属种的植物材料。植物材料的来源可以变化，但是在示例性实施方案中，从Galpao communs植物得到烟草属种的植物材料。

用于提取的溶剂可以变化。例如，在某些实施方案中，所述溶剂包含醇溶剂，例如，甲醇。在某些实施方案中，所述溶剂可以基本上由甲醇组成，例如，如以绝对或非绝对形式(例如，掺入水)使用的。在某些实施方案中，所述溶剂也可以是醇溶剂(例如，甲醇)和微量的一种或多种可与其混溶的溶剂的共溶剂混合物。

在某些实施方案中，含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少约0.2重量％、至少约0.5重量％或至少约0.8重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。在某些实施方案中，所述纯化步骤会提供分离物，所述分离物包含至少约70重量％的一种或多种o-甲基化的类黄酮或至少约90重量％的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

根据本文所述的方法提供的o-甲基化的类黄酮的具体类型可以例如选自：o-甲基化的山柰酚化合物、o-甲基化的槲皮素化合物和o-甲基化的四羟黄酮化合物。化合物类型包括、但不限于槲皮素甲基醚、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。某些示例性的化合物包括、但不限于：槲皮素甲基醚，其选自槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚和槲皮素4-甲基醚；槲皮素3,3’,4’-三甲基醚；和山柰酚甲基醚，其选自山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚和山柰酚5-甲基醚。

在某些实施方案中，所述方法可以进一步包括，将所述分离物加入烟草组合物中，所述烟草组合物适合用在吸烟制品、无烟烟草产品，或产生气溶胶的装置中，所述装置含有烟碱和/或烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料。例如，可以以在其上吸附有所述分离物的烟草或非烟草材料的形式添加所述分离物。在某些实施方案中，所述烟草组合物适合用在吸烟制品中，且所述分离物以下述形式加入：应用于烟草条的外壳制剂或表面装饰制剂的形式，或重构烟草材料的组分的形式。加入烟草组合物中的分离物的量可以是，例如，约5ppm至约5重量％，基于吸烟制品中的烟草材料的总干重。在其它实施方案中，所述分离物可以掺入在药物或饮食添加物组合物中。

在本发明的另一个方面，提供了得自烟草属种植物或其组分的分离物，其中所述分离物包含约50％或更多的一种或多种o-甲基化的类黄酮(基于干重)、约70％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮(基于干重)或约90％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮(基于干重)。在某些实施方案中，提供了烟草组合物，其用在吸烟制品、无烟烟草产品或产生气溶胶的装置中，所述装置含有烟碱和/或烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料，其中所述烟草组合物包含在本文中提供的分离物。

本发明包括、但不限于下述实施方案。

实施方案1:从烟草属种植物提取和分离一种或多种o-甲基化的类黄酮的方法，所述方法包括：接收烟草属种的植物材料；使所述植物材料与溶剂在一定条件下接触一定时间，所述条件和时间足以将一种或多种o-甲基化的类黄酮从所述植物材料提取进所述溶剂中；使含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂与经提取的植物材料分离；和纯化含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂以提供分离物，所述分离物包含至少约50重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案2:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述烟草属种的植物材料呈叶的形式。

实施方案3:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述烟草属种的植物材料以生坯形式提供。

实施方案4:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述烟草属种的植物材料得自Galpao communs植物。

实施方案5:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述溶剂包含甲醇。

实施方案6:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少约0.2重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案7:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少约0.5重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案8:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述含有一种或多种o-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少约0.8重量％(基于干重)的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案9:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述纯化步骤会提供分离物，所述分离物包含至少约70重量％的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案10:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述纯化步骤会提供分离物，所述分离物包含至少约90重量％的一种或多种o-甲基化的类黄酮。

实施方案11:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述一种或多种o-甲基化的类黄酮选自：o-甲基化的山柰酚化合物、o-甲基化的槲皮素化合物和o-甲基化的四羟黄酮化合物。

实施方案12:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述一种或多种o-甲基化的类黄酮选自：槲皮素甲基醚、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。

实施方案13:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述槲皮素甲基醚选自：槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚、槲皮素4-甲基醚；所述槲皮素三甲基醚是槲皮素3,3’,4’-三甲基醚；且所述山柰酚甲基醚选自：山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚和山柰酚5-甲基醚。

实施方案14:任意前述或后续实施方案的方法，所述方法进一步包括：将所述分离物加入烟草组合物中，所述烟草组合物适合用在吸烟制品、无烟烟草产品或产生气溶胶的装置中，所述装置含有烟碱或烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料。

实施方案15:任意前述或后续实施方案的方法，其中以在其上吸附有所述分离物的烟草或非烟草材料的形式添加所述分离物。

实施方案16:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述烟草组合物适合用在吸烟制品中，且所述分离物以下述形式加入：应用于烟草条的外壳制剂或表面装饰制剂的形式，或重构烟草材料的组分的形式。

实施方案17:任意前述或后续实施方案的方法，其中所述烟草组合物中的分离物的量是在约5ppm至约5重量％之间，基于所述吸烟制品中的烟草材料的总干重。

实施方案18:任意前述或后续实施方案的方法，所述方法进一步包括：将所述分离物掺入药物或饮食添加物组合物内。

实施方案19:得自烟草属种植物或其组分的分离物，其中所述分离物包含约50％或更多的一种或多种o-甲基化的类黄酮，基于干重。

实施方案20:任意前述或后续实施方案的分离物，其中所述分离物包含约70％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮，基于干重。

实施方案21:任意前述或后续实施方案的分离物，其中所述分离物包含约90％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮，基于干重。

实施方案22:任意前述或后续实施方案的分离物，其中所述一种或多种o-甲基化的类黄酮选自：o-甲基化的山柰酚化合物、o-甲基化的槲皮素化合物和o-甲基化的四羟黄酮化合物。

实施方案23:任意前述或后续实施方案的分离物，其中所述一种或多种o-甲基化的类黄酮选自：槲皮素甲基醚、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。

实施方案24:任意前述或后续实施方案的分离物，其中所述槲皮素甲基醚选自：槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚、槲皮素4-甲基醚；所述槲皮素三甲基醚是槲皮素3,3’,4’-三甲基醚；且所述山柰酚甲基醚选自：山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚和山柰酚5-甲基醚。

实施方案25:一种用在吸烟制品、无烟烟草产品或产生气溶胶的装置中的烟草组合物，所述装置含有烟碱、烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料，所述烟草组合物包含任意前述或后续实施方案的分离物。

通过阅读下述详细描述以及在下面简要描述的附图，将会明白本公开内容的这些和其它特征、方面和优点。本发明包括2个、3个、4个或更多个上面指出的实施方案的任意组合以及任意2个、3个、4个或更多个在本公开内容中阐述的特征或要素的组合，不论这样的特征或要素是否明确地组合在本文中的一个具体实施方案描述中。本公开内容意图整体解读，使得在它的不同方面和实施方案中的任一个中，公开的发明的任何可分离的特征或要素应当视作意图可组合的，除非上下文另外清楚地指明。从以下内容会明白本发明的其它方面和优点。

附图说明

为了提供对本发明的实施方案的理解，参考了附图，所述附图不一定按比例绘制，且其中附图标记表示本发明的示例性实施方案的组分。附图仅仅是示例性的，不应解释为限制本发明。

图1是具有香烟形式的吸烟制品的分解透视图，其显示了香烟的可抽吸材料、包装材料部件和过滤元件；和

图2是无烟烟草产品实施方案的横截面视图，其沿着产品的宽度做出，显示了填充有本发明的无烟烟草组合物的外部小袋。

具体实施方式

现在将在下文中更充分地描述本发明。但是，本发明可以以许多不同的形式具体化，不应解释为限于本文阐述的实施方案；相反，提供这些实施方案是为了使本公开内容彻底和完整，并向本领域技术人员充分传达本发明的范围。如在本说明书和权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地指明对“干重百分比”或“基于干重”的提及表示基于干燥成分(即，除了水之外的所有成分)的重量。

本发明提供了从烟草材料提取的o-甲基化的类黄酮、从烟草材料提取o-甲基化的类黄酮的方法和掺入了从烟草材料提取的o-甲基化的类黄酮的产品。有利地，可以以显著量从烟草材料提取o-甲基化的类黄酮。根据本发明，通常以提取物的形式提供o-甲基化的类黄酮，所述提取物可以应用于烟草材料或非烟草材料以增强它的某些特征。在某些实施方案中，为了它们的已知健康益处而采用o-甲基化的类黄酮(例如，在饮食添加物或药物产品中)。

类黄酮通常被理解为具有2个或3个苯基环的含酮的化合物，它们是从苯丙素途径衍生出的次级代谢物。通常，类黄酮可以分类为黄酮醇、黄酮、花色素、异类黄酮(异黄酮和异黄酮醇)和新类黄酮。通常被视作类黄酮的其它化合物类别包括二氢黄酮、花色素、儿茶素、二氢黄酮醇和查耳酮。天然存在的类黄酮可以例如作为糖苷(结合至糖部分)或作为糖苷配基(未结合至糖部分)而存在。在某些实施方案中，它们可以是O-糖苷(具有结合至氧原子的糖部分)或C-糖苷(具有结合至碳原子的糖部分)，且除非另外指出，否则在本文中提及的类黄酮意图涵盖糖苷(O-糖苷和C-糖苷)和糖苷配基形式。

已经报道，已经从不同植物来源分离和鉴别出超过8,000种不同的类黄酮。以前在某些烟草属种中指出的示例性的类黄酮包括、但不限于芦丁、芹菜配基、槲皮素和异槲皮素。参见，例如，Kaushik等人,J.Pharm.Res.(2010),3(5):1144-1145；Fathiazad等人,Ir.J.Pharm.Res.(2006)3:222-227；Wollenweber等人,Z.Naturforsch(2005)60c:661-670；和Roda等人,Phytochemistry(2003)62:527-536，它们通过引用并入本文。

O-甲基化的类黄酮是这样的类黄酮：其中一个或多个羟基被甲氧基(O-甲基)基团替代。通常，通过O-甲基转移酶在类黄酮上的作用，形成O-甲基化的类黄酮。以前已经发现仅非常少量的o-甲基化的类黄酮存在于烟草材料中。参见，例如，Rodgman,A.等人,TheChemical Components of Tobacco and Tobacco Smoke(2009),CRC Press,第524页；Roda等人,Phytochemistry(2003)62:527-536；Yang等人,Tso,T.C.,Production,Physiology,and Biochemistry of Tobacco Plant(1990),Ideals,Inc.第600页；J.Org.Chem.(1960)25(11):2063-2064；和Frankenburg,W.G.；Southern Chemist,March Issue(1949),第315-330页，它们都通过引用并入本文。实际上，在植物界中，通常，这些化合物以非常小的量被发现(通常，在被发现的情况下，小于约0.01重量％)。

根据本发明的某些实施方案，有利地从烟草材料提取和分离的o-甲基化的类黄酮是黄酮醇(例如，o-甲基化的槲皮素、o-甲基化的山柰酚和它们的类似物和异构体)。可以提取和分离的其它o-甲基化的类黄酮包括o-甲基化的二氢黄酮醇(例如，o-甲基化的二氢山柰酚)和o-甲基化的黄酮(例如，o-甲基化的四羟黄酮)。在某些实施方案中，可以从烟草植物得到显著量的o-甲基化的类黄酮(例如，以烟草植物或其部分的提取物的形式)。

本公开内容的产品包含某种形式的烟草属种植物，且最优选地，那些组合物或产品包含某种形式的烟草。烟草属种植物的选择可以变化；且具体地，一种或多种烟草的种类可以变化。可以采用的烟草包括：烟道烘烤的烟草或弗吉尼亚(例如，K326)、白肋烟草、晒干的烟草(例如，印度Kurnool和Oriental烟草，包括Katerini、Prelip、Komotini、Xanthi和Yambol烟草)、马里兰烟草、深色烟草、深色烘烤的烟草、深色风干烟草(例如，Passanda、Cubano、Jatin和Bezuki烟草)、轻风风干的烟草(例如，North Wisconsin和Galpao烟草)、印度风干的烟草、Red Russian烟草和Rustica烟草以及各种其它罕见的或专用的烟草。不同类型的烟草、种植实践和收获实践的描述阐述在Tobacco Production,Chemistry andTechnology,Davis等人(编)(1999)，其通过引用并入本文。使用遗传修饰或杂交育种技术可以衍生出烟草属种(例如，可以对烟草植物进行遗传工程改造或杂交以增加或减少某些组分、特征或属性的产生或以其它方式改变某些组分、特征或属性)。关于适合用在本发明中的烟草属种的类型的其它信息可以参见Dube等人的美国专利申请公开号2012/0192880，其通过引用并入本文。可以在温室、栽培室或室外田野中种植烟草植物，或者可以无土栽培。

可以针对其中存在的多种化合物的含量来选择烟草属种。例如，可以在下述基础上选择植物：那些植物产生相对较高量的一种或多种希望从其分离出的化合物。在某些实施方案中，针对它们的叶表面化合物丰度而专门种植烟草属种植物(例如，Galpao commun烟草)。在某些实施方案中，Galpao commun和其它类型的具有“粘性”叶子的植物(例如，香料品种)是特别优选的。在某些实施方案中，可以使用Nicotiana glutonisa。

根据本发明使用的烟草属种植物的一个或多个部分可以变化。例如，可以收获基本上所有的植物(例如，整个植物)，并原样使用。可替换地，可以收获或分离植物的多个部位或片段，用于在收获后进一步使用。例如，可以分离叶、茎、杆、根、囊盘总层、花、种子和不同部分和它们的组合用于进一步使用或处理。本发明的植物材料因而可以包含烟草属种植物的整个植物或任意部分。参见，例如，在Coleman,III等人的美国专利申请公开号2011/0174323和Dube等人的美国专利申请公开号2012/0192880中阐述的烟草植物的部分，它们通过引用并入本文。

所述烟草属种植物可以以未成熟形式或成熟形式使用，且可以以生坯形式或干制形式使用，如在Dube等人的2012/0192880中所述，其通过引用并入本文。可以对烟草材料进行不同的处理过程，例如，冷冻、冷藏、干燥(例如，冷冻干燥或喷雾干燥)、辐照、黄化、加热、蒸煮(例如，烘焙、煎炸或煮沸)、发酵、漂白或以其它方式进行储存或处理以供以后使用。示例性的加工技术描述在例如Brinkley等人的美国专利申请公开号2009/0025739和Coleman,III等人的美国专利申请公开号2011/0174323中，它们通过引用并入本文。

可以在收获之前或之后用酶和/或益生菌处理烟草属种植物的至少一部分，如在以下文献中讨论的：2012年4月11日提交的Marshall等人的美国专利申请号13/444,272和2012年7月19日提交的Moldoveanu的美国专利申请号13/553,222，它们通过引用并入本文。

可以物理加工收获的烟草属种植物的一个或多个部分。可以将植物的一个或多个部分分离成各个部分或片段(例如，可以从秆除去根，可以从秆除去茎，可以从秆和/或茎除去叶子，可以从花的其它部分除去花瓣)。可以将收获的植株的一个或多个部分进一步细分成部分或片段(例如，切丝、切碎、破碎、粉碎、研磨或磨碎成碎片或部分，其可以被表征为填充剂型碎片、颗粒、微粒或细粉)。可以使收获的植株的一个或多个部分遭受外力或压力(例如，通过压制或进行辊压处理)。当进行这样的加工条件时，收获的植株的一个或多个部分可以具有接近其天然含水量(例如，其在收获后不久的含水量)的含水量、通过对收获的植株的一个或多个部分增湿实现的含水量、或从干燥收获的植株的一个或多个部分得到的含水量。这样，收获的植株的一个或多个部分可以用作诸如烟草产品的组分或进行进一步加工。

在某些实施方案中，处理烟草属种植物的一个或多个部分，从而以更有用的(例如，更浓缩的)形式提供其中所含的一种或多种组分。通过本文提供的方法，可以分离得自烟草属植物或其部分的各种化合物或化合物的混合物。本文中使用的“分离的组分”或“植物分离物”是从烟草属种植物或其部分分离的化合物或化合物的复杂混合物。分离的组分可以是单一化合物、类似化合物(例如，香料化合物的异构体)的同源混合物、或不同化合物的异源混合物(例如，不同类型的各种化合物的复杂混合物，优选地具有合乎需要的感官属性)。参见，例如，在以下申请中描述的分离的烟草组分和分离技术：Coleman,III等人的美国专利申请公开号2011/0174323；Coleman,III等人的美国专利申请公开号2011/0259353；Dube等人的美国专利申请公开号2012/0192880；Dube等人的美国专利申请公开号2012/0192882；和Byrd,Jr.等人的美国专利申请公开号2012/0211016，它们通过引用并入本文。

通过多种方式，可以从烟草属种植物分离期望的组分或期望的组分的混合物。典型分离方法可以包括一个或多个方法步骤诸如溶剂萃取(例如，使用极性溶剂、有机溶剂或超临界流体)、色谱法(例如，制备型液相色谱法)、澄清、蒸馏、过滤(例如，超滤)、重结晶和/或溶剂-溶剂分配。在某些实施方案中，预处理烟草属种的植物或部分，例如，以释放某些化合物从而使得期望的化合物可用于更有效的分离。在某些实施方案中，使用多种方法来分离和/或纯化期望的化合物。

在某些实施方案中，可以使分离的化合物或其混合物处于一定条件，从而造成那些化合物发生化学转化。例如，可以处理从烟草属种植物或其部分得到的烟草材料以造成化学转化或与其它成分混合。在某些实施方案中，可以处理从其得到的提取物或分离的化合物(分离物)以造成化学转化或与其它成分混合。烟草材料、提取物或分离的化合物的化学转化或改性可以导致烟草材料、提取物或分离的化合物的某些化学和物理性能(例如，其感官属性)的变化。示例性的化学改性方法可以通过酸/碱反应、水解、氧化、加热和/或酶处理来进行；这样，化合物可以经历各种降解反应。示例性的化学转化技术阐述在Coleman,III,等人的美国专利申请公开号2011/0174323和Coleman,III等人的美国专利申请公开号2011/0259353，它们通过引用并入本文。

在某些实施方案中，处理烟草材料、提取物或分离物以提供降解产物。降解产物是从根据本发明提取和/或分离的化合物生产的任意化合物。降解产物可以从这样的化合物天然地形成，或可以通过加速降解方法(例如，通过添加热和/或化学物质来加速化合物的降解)来产生。例如，借助于氧化(例如，通过用H₂O₂或其它氧化剂处理)和/或水解反应，可以降解这些化合物。

尽管在某些实施方案中，直接地使用烟草材料、提取物或分离物，可能合乎需要的是，热处理烟草材料、提取物或分离物，以便例如对所述材料进行巴氏消毒或以其它方式热改变所述材料。该热处理可以在本文中关于从烟草属种植物分离一种或多种组分描述的任何方法之前或之后进行。例如，可以如下热处理烟草材料：混合所述烟草材料、水和选自以下的添加剂：赖氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、精氨酸、二价和三价阳离子、天门冬酰胺酶、糖、酚类化合物、还原剂、具有游离巯基的化合物、氧化剂(例如，过氧化氢)、氧化催化剂、植物提取物和它们的组合，以形成湿烟草混合物；并在至少约60℃的温度加热湿烟草混合物以形成热处理的烟草混合物。在一个实施方案中，将所述经处理的烟草提取物在有水、NaOH和添加剂(例如，赖氨酸)存在下在约88℃热处理约60分钟。这样的热处理可以帮助阻止由天冬酰胺与烟草材料中的还原糖的反应引起的丙烯酰胺产生，且可以提供一定程度的巴氏消毒。参见，例如，Chen等人的美国专利公开号2010/0300463，其通过引用并入本文。在某些其中将热处理的烟草分离物用在本发明的无烟烟草产品中的实施方案中，可以通过非常低的丙烯酰胺含量来表征所述产品。例如，在某些实施方案中，通过小于约500ppb(ng/g)、小于约400ppb、小于约300ppb、小于约200ppb或小于约100ppb的丙烯酰胺含量来表征所述无烟烟草产品。

在本文中关于从烟草属种植物分离一种或多种组分公开的一种或多种方法以后，如果需要的话，可以进一步加工如此得到的任何液体材料。例如，可以以适合于通过除去至少一部分溶剂(例如，水)来浓缩溶解或分散的液体组分的方式处理所述液体。所述浓缩步骤会从提取的水性液体除去水，这可以提供具有增加的浓度的不同化合物的粉末。

还可以对烟草材料进行其它处理步骤，所述步骤可以替代本文描述的其它分离步骤或在本文描述的其它分离步骤以外来使用。例如，在某些实施方案中，使分离物与诸如在例如以下文献中描述的印迹聚合物或非印迹聚合物接触：Bhattacharyya等人的美国专利公开号2007/0186940；Rees等人的美国专利公开号2011/0041859；和Jonsson等人的美国专利公开号2011/0159160；和2011年5月19日提交的Byrd等人的美国专利申请号13/111,330,它们都通过引用并入本文。可以使用分子印迹或非印迹聚合物的处理来除去提取物的某些组分，诸如烟草特异性的亚硝胺(TSNA)，包括N′-亚硝基去甲烟碱(NNN)、(4-甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK),N′-亚硝基新烟草碱(NAT)和N′-亚硝基八角枫碱(NAB)；多环芳烃(PAHs)，包括苯并[a]蒽、苯并[a]芘、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、

二苯并[a,h]蒽和茚并[1,2,3-cd]芘；或其它Hoffmann分析物。

在某些实施方案中，使用溶剂萃取来从烟草属种植物分离期望的组分或期望的组分的混合物。示例性的提取和分离溶剂或载体包括水、醇(例如，甲醇或乙醇)、烃(例如，庚烷和己烷)、乙醚、二氯甲烷、超临界二氧化碳和它们的组合。在某些实施方案中，使用包含一种或多种醇(例如，甲醇)的溶剂。在某些实施方案中，所述溶剂可以基本上由甲醇组成，例如，如以绝对或非绝对形式(例如，掺入水)使用的。在某些实施方案中，所述溶剂也可以是醇溶剂(例如，甲醇)和微量的一种或多种可与其混溶的溶剂的共溶剂混合物。可用于从烟草属种提取组分的示例性技术描述在或参见Fagg的美国专利号5,065,775；和Coleman,III等人的申请公开号2011/0259353和Byrd,Jr.等人的申请公开号2012/0211016，它们通过引用并入本文。

提取过程的条件可以变化。在某些实施方案中，将烟草属种植物与溶剂组合以形成材料(例如，呈混悬液或浆的形式)。在某些实施方案中，为了形成湿材料而加入的溶剂的量可以是至少约50重量％或至少约60重量％或至少约70重量％，基于所述材料的总重量。在某些情况下，溶剂的量可以被描述为至少约80重量％或至少约90重量％。

可以将各种试剂加入提取溶剂中。在某些实施方案中，加入加工助剂以促进提取。加工助剂是促进期望的组分提取进提取溶剂中的任何试剂。例如，合适的加工助剂包括、但不限于无机酸和酶。多种其它添加剂可以用在提取过程中，包括、但不限于，表面活性剂和共溶剂。

实现提取所需的时间的量部分地依赖于进行提取时的温度和压力。例如，在某些实施方案中，将材料加热至高温和/或给材料增压会增加提取速率。提取过程的时间范围通常是至少约30分钟(例如，至少约1小时或至少约2小时)，且通常小于约24小时(例如，小于约12小时或小于约8小时)，尽管可以使用其它时间段而不脱离本发明。在某些实施方案中，可以进行多次提取以从其中提前额外的化合物。参见，例如，Havkin-Frenkel的美国专利申请公开号2008/0254149，其通过引用并入本文。

在某些实施方案中，所述提取物包含显著量的o-甲基化的类黄酮。它可以包含o-甲基化的黄酮醇、o-甲基化的黄酮、o-甲基化的花色素、o-甲基化的异类黄酮(异黄酮和异黄酮醇)和o-甲基化的新类黄酮的某些混合物。o-甲基化的类黄酮可以作为糖苷或作为糖苷配基存在。在某些实施方案中，根据本发明的提取物中的o-甲基化的类黄酮的量是提取的化合物的至少约0.1％，基于干重(例如，提取的化合物的约0.1至约1.5％之间，基于干重)。在某些实施方案中，基于干重，提取物可以包含约0.3％或更多、约0.5％或更多、约0.8％或更多、或约1％或更多o-甲基化的类黄酮(例如，约1％)。在某些实施方案中，含有o-甲基化的类黄酮的提取物是甲醇提取物，尽管可以使用其它溶剂(例如，其它醇溶剂)。

在某些实施方案中，可以采用多个连续分离过程以期望的方式纯化和精制样品。例如，在某些实施方案中，可以对溶剂提取物或馏出液进行额外的分离步骤，以改变提取物或馏出液的化学组成，诸如通过增加某些合乎需要的化合物(诸如某些可口化合物或芳族化合物)的相对量。在某些实施方案中，可以通过过滤来处理提取物或馏出液。作为另一个例子，上述方法之一(例如，溶剂萃取或蒸馏)可以与一种或多种色谱方法组合。在某些实施方案中，首先处理样品以除去一种或多种化合物，所述化合物已知在与要通过快速色谱法分离的化合物类似的条件下洗脱。在其它实施方案中，可以将样品溶解并直接进行色谱分离。

在某些实施方案中，使用制备型液相色谱法从烟草材料(例如，从烟草提取物或馏出液)分离和/或纯化某些目标化合物。在某些实施方案中，基于标准物的洗脱时间，使用制备型液相色谱法分离一种或多种目标化合物。各种自动化的市售的prep-LC系统可得自生产商，包括Waters、Agilent Technologies和Bio-Rad。本领域技术人员可以改变prep LC系统的具体参数，以达到期望的拆分水平。例如，所述溶剂可以是足以溶解目标化合物的任何溶剂或溶剂混合物。所述溶剂可以是例如水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、石油醚和/或己烷类。所述系统可以与等度或梯度溶剂系统(即，随时间改变两种或更多种溶剂的比例)一起工作。在某些实施方案中，可以选择溶剂系统，使得它提供存在于混合物中的目标化合物和其它化合物之间的最佳拆分。系统的流速可以变化，例如，从约10mL/min至约100mL/min(例如，约36mL/min)。

在某些实施方案中，使用快速色谱法从烟草提取物分离和/或纯化某些目标化合物。快速色谱法系统是本领域已知的，且示例性的系统在例如Still等人,J.Org.Chem.42:2923-2925(1978)和Andrews的美国专利4,591,442(它们通过引用并入本文)中进行了讨论。各种自动化的市售的快速色谱法系统可得自生产商，包括Biotage、Teledyne Isco、Grace Davison Discovery Sciences、和Buchi。快速色谱法可以是合乎需要的，以提供适当大量的化合物，因为柱通常具有相对大的颗粒尺寸(例如，大致30-40μm)，且可以适应更大量的样品(和更浓的样品)，从而允许在每次注射中分离更多的目标化合物。

本领域技术人员可以改变使用的快速色谱法系统的具体参数，以达到期望的拆分水平。例如，所述溶剂可以是足以溶解目标化合物的任何溶剂或溶剂混合物。所述溶剂可以是例如水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、石油醚和/或己烷类。所述系统可以与等度或梯度溶剂系统(即，随时间改变两种或更多种溶剂的比例)一起工作。在某些实施方案中，可以选择溶剂系统，以提供存在于混合物中的目标化合物和其它化合物之间的最佳拆分。系统的流速可以变化，例如，从约20至约200mL/min(例如，约150mL/min)。

快速色谱法可以提供或不提供足够纯度水平的目标化合物。在某些实施方案中，可以将与目标化合物对应的级分收集、合并和浓缩，以产生包含足够纯度水平的目标化合物的分离物(即，其中目标化合物以分离物的足够重量百分比存在)。例如，本发明的分离物可以包含大于约75重量％、大于约80重量％、大于约85重量％、大于约90重量％、大于约95重量％、大于约98重量％或大于约99重量％的量的目标化合物。在某些实施方案中，使用制备型液相色谱法，可以进一步拆分从快速色谱法得到的级分。

可以采用各种溶剂除去方法，诸如热处理，以蒸发溶剂、反渗透膜处理、喷雾干燥或冷冻干燥。在一个实施方案中，浓缩过程可以需要在通气的容器中加热提取的液体以蒸发一部分水。加热液体的温度和压力可以变化。参见，例如，在Dube等人的美国专利公开号2012/0152265中阐述的溶剂除去技术，其通过引用并入本文。

根据本发明得到的烟草分离物的形式可以变化。通常，所述分离物呈固体、液体或半固体或凝胶形式。可以以浸膏、绝对纯的或不稀释的形式使用制剂。烟草分离物的固体形式可以包括喷雾干燥形式和冷冻干燥形式。烟草分离物的液体形式可以包括被包含在水性或有机溶剂载体内的制剂。

所述烟草分离物可以包含不同量的一种或多种o-甲基化的类黄酮。在某些实施方案中，所述烟草分离物含有单一o-甲基化的类黄酮。在其它实施方案中，所述烟草分离物含有o-甲基化的类黄酮的混合物。例如，在某些实施方案中，槲皮素、山柰酚和/或四羟黄酮的o-甲基化的类似物存在于本文描述的提取物和分离物中。

根据本文所述的方法提取并存在于本文描述的提取物和分离物中的o-甲基化的类黄酮可以变化。至少一个O-甲基存在于类黄酮上；但是，至少一个O-甲基的位置可以变化。o-甲基化的部分的数目也可以变化；例如，在某些实施方案中，1、2、3、4或5个O-甲基部分存在于类黄酮上。根据本发明可以得到的某些示例性的类黄酮包括、但不限于：槲皮素甲基醚(例如，槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚、槲皮素4-甲基醚)、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚(例如，槲皮素3,3’,4’-三甲基醚)、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚(例如，山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚、山柰酚5-甲基醚)、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。

根据本发明制备的分离物可以具有不同水平的纯度。例如，在某些实施方案中，基于干重，以至少约50重量％的纯度、至少约60重量％的纯度、至少约70重量％的纯度、至少约80重量％的纯度、至少约90重量％的纯度或至少约95重量％的纯度，提供包含单一o-甲基化的类黄酮的分离物。在某些实施方案中，这些纯度水平意图应用于任何特定的o-甲基化的类黄酮，包括上面具体地列出的那些。在某些实施方案中，所述分离物可以包含超过一种o-甲基化的类黄酮，其中所述分离物含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％或至少约95重量％的超过一种o-甲基类黄酮。换而言之，根据本发明制备的分离物可以主要包含一种或多种o-甲基化的类黄酮。再次，在某些实施方案中，这些纯度应用于任何o-甲基化的类黄酮，包括在上面的段落中列出的那些。示例性的分离物可以包含小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％或小于约5％的杂质(即，除了o-甲基化的类黄酮以外的化合物)。

根据本发明的方法制备的烟草分离物可用作不同组合物的材料。尽管通常在烟草组合物的背景下描述这样的烟草分离物的应用，应当指出，这样的制剂可以应用于许多其它类型的组合物中。

在某些实施方案中，将本文描述的烟草提取物和分离物掺入到烟草组合物、特别是用于掺入吸烟制品或无烟烟草产品中的烟草组合物中。根据本发明，烟草产品包含与根据本发明的一种或多种烟草衍生的分离物组合的烟草。也就是说，烟草产品的一部分可以包含某种形式的根据本发明制备的烟草分离物制剂。在某些实施方案中，将烟草提取物或分离物吸附在烟草材料上。在某些实施方案中，可以将本发明的提取物或分离物加入非烟草材料中。

所述非烟草材料可以是从烟草属种植物以外的来源得到的任意材料。例如，可以在其上吸附本发明的提取物或分离物的可能非烟草材料包括、但不限于：得自蔬菜、水果或其它纤维性植物材料的浆料(例如，经加工的甜菜浆料或纤维质材料)，作为水提取处理的结果在除去水溶性组分以后得到的浆料，或它们的组合。应当指出，本文中使用的术语“吸附”表示，通过任何已知的方法，包括吸收和吸附，将水性烟草提取物掺入衬底(即，烟草材料或非烟草材料)中。

本文描述的烟草分离物向烟草组合物中的添加可以以多种方式增强烟草组合物，取决于烟草分离物的性质和烟草组合物的类型。示例性的分离物可以用于给烟草产品提供风味和/或芳香(例如，所述组合物可以改变烟草组合物或从其衍生出的烟气的感觉特征)。其它分离物可以在烟草组合物中用于功能目的，诸如粘合剂或填充剂功能。某些分离物可以充当烟草产品的一种或多种传统组分的替代物。例如，在某些实施方案中，本发明的提取物和分离物可以被描述为，提供香料烟草特有的香味和香气。

向其中加入本发明的烟草分离物的烟草产品可以变化，且可以包括被构造成或适用于给产品用户递送烟草或其某些组分的任何产品。示例性的烟草产品包括吸烟制品(例如，香烟)、无烟烟草产品和产生气溶胶的装置，所述装置含有烟碱和/或烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料。本发明的烟草分离物在烟草产品中的掺入，可以涉及使用烟草材料或非烟草植物材料作为制剂的载体，诸如通过将所述分离物吸附进烟草或其它植物材料中或以其它方式使所述分离物与载体材料结合(如上面更详细地描述的)。可以充当本发明的制剂的载体的烟草的类型可以变化，且可以包括本文中讨论的任何烟草类型，包括各种干制的烟草材料(例如，烟道烘烤的或晾干的烟草)或其部分(例如，烟草片或烟草茎)。向其中加入所述制剂的烟草材料的物理构型也可以变化，且可以包括以下形式的烟草材料：碎片或微粒形式，或片形式(例如，重构烟草片)，或整个叶形式。因此，在某些实施方案中，本文中提供的烟草分离物可以用作制备吸烟制品的组合物。例如，根据本发明制备的制剂可以与外壳材料混合并作为外壳成分或作为表面装饰而应用于烟草。更进一步，在香烟制造过程中，可以将本发明的制剂掺入香烟过滤嘴中(例如，过滤嘴塞、成型纸或接装纸中)或掺入香烟包装纸中，优选地在内表面上。参见，例如，在以下文献中阐述的、与在吸烟制品中使用的烟草分离物有关的描述和参考文献：Dube等人的美国专利公开号2012/0192880，其通过引用并入本文。代表性的烟草掺合物、非烟草组分和从其制造的代表性香烟也阐述在上面指出的Dube等人的参考文献中。

参考图1，显示了香烟形式的吸烟制品10，其具有可含有本发明的制剂的吸烟制品的某些代表性的组分。香烟10包括被包含在外围包装材料16中的一团或一卷可抽吸填充材料(例如约0.3至约1.0g可抽吸填充材料，诸如烟草材料)的通常圆柱形条12。条12通常被称为“烟丝条”。烟丝条12的端部是开放的，以暴露可抽吸填充材料。香烟10显示为具有附着在所述包装材料16上的一个任选带22(例如，印制覆层，包括成膜剂，如淀粉、乙基纤维素或海藻酸钠)，该带在与香烟的纵向轴线横切的方向上包围香烟条。带22可以印制在包装材料的内表面上(即，面对可抽吸填充材料)，或者次优选地，印制在所述包装材料的外表面上。

在烟丝条12的一端是点燃端18，在嘴端20处设置有过滤元件26。所述过滤元件26位于烟丝条12的一端附近，使得所述过滤元件和烟丝条以端对端关系呈轴向排列，优选彼此相邻。过滤元件26可以具有通常圆柱形形状，且其直径可以基本上等于烟丝条的直径。过滤元件26的两端允许空气和烟气在其中通过。

采用任选的空气稀释装置，如一系列洞孔30(各洞孔穿透接装材料和成型纸延伸)，可以提供通气的或空气稀释的吸烟制品。通过本领域普通技术人员已知的各种技术，诸如激光穿孔技术，可以制成任选的洞孔30。可替换地，可以使用所谓的离线空气稀释技术(例如，通过使用多孔成型纸和预穿孔的接装纸)。本发明的制剂可以掺入吸烟制品的任意组分内，包括、但不限于，作为烟草负荷的组分，作为包装纸的组分(例如，被包括在纸内或涂在纸的内部或外部上)，作为粘合剂，作为过滤元件组分，和/或在位于吸烟制品的任何区域内的胶囊中。

本发明的制剂也可以掺入产生气溶胶的装置中，所述装置含有烟碱和/或在使用过程中不希望燃烧的烟草材料(或其某些部分或组分)，包括所谓的“e-香烟”。这些类型的吸烟制品中的一些采用可燃燃料源，其被燃烧以提供气雾剂和/或加热气溶胶形成材料。其它采用电池供电的加热元件来加热形成气溶胶的组合物。描述产生经调味的蒸汽、可见气溶胶或者经调味的蒸汽与可见气溶胶的混合物的类型的吸烟制品的示例性参考文献包括在Dube等人的美国专利公开号2012/0192880(其通过引用并入本文)中阐述的那些。

本发明的制剂可以掺入无烟烟草产品中，所述无烟烟草产品是例如松散的潮湿鼻烟(例如，snus)；松散的干燥鼻烟；嚼烟；颗粒状烟草片；挤压或形成的烟草条、片、棒、圆柱或棍；精细粉碎的碾碎粉末；精细粉碎的或研磨的粉末状片和组分的团块；薄片状片；模塑加工的烟草片；树胶；带状膜卷；易溶于水的或可分散于水的膜或条；可熔化的组合物；锭剂；软锭剂；或具有外壳和内部区域的胶囊样材料。在Dube等人的美国专利公开号2012/0152265(其通过引用并入本文)中描述或提及了不同类型的无烟烟草产品。

参考图2，显示了包含本发明的制剂的代表性的snus型烟草产品。具体地，图2解释了无烟烟草产品40，其具有含有无烟烟草组合物44的水可透过的外部小袋42。烟草产品的任何组分可以包含如本文中所述的烟草分离物(例如，袋衬里的内部或外部，或其中所含的无烟烟草组合物的部分)。

许多可以受益于本发明的制剂的应用的示例性无烟烟草组合物包含碎片或微粒烟草材料，所述材料可以充当本发明的烟草分离物的载体。本发明的无烟烟草组合物还可以包括水溶性的聚合粘合剂材料和任选的其它成分，它们会提供这样的可溶解的组合物：其在使用过程中在口腔中缓慢地崩解。在某些实施方案中，所述无烟烟草组合物可以包括脂质组分，所述脂质组分会提供在口腔中融化的可融化组合物(不同于仅仅溶解)，诸如在Cantrell等人的美国专利公开号2012/0037175(其通过引用并入本文)中阐述的组合物。

在一个特定的无烟烟草产品实施方案中，将本发明的组合物加入非烟草植物材料中，诸如选自马铃薯、甜菜(例如，糖用甜菜)、谷物、豌豆、苹果等的植物材料。所述非烟草植物材料可以以经过加工的形式使用。在某些优选的实施方案中，所述非烟草植物材料可以经过提取的形式使用，这样，从该材料中除去某些溶剂可溶性组分中的至少一部分。非烟草的提取的植物材料通常被高度提取，这意味着，植物材料的大量的水溶性部分已经被除去。参见，例如，Beeson等人的美国专利公开号2011/0247640，其通过引用并入本文。

其它成分可与根据本发明的无烟烟草组合物混合，或以其它方式掺入其中。所述成分可以是人工成分，或可以从草药或生物源得到或衍生出。示例性的成分类型包括：盐(例如，氯化钠、氯化钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、乙酸钠、乙酸钾等)、天然甜味剂(例如，果糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、香草醛、乙基香草醛葡萄糖苷、甘露糖、半乳糖、乳糖等)、人工甜味剂(例如，三氯蔗糖、糖精、阿斯巴甜、安赛蜜、纽甜等)、有机和无机填充剂(例如，细粒、已加工细粒、疏松细粒、麦芽糊精、右旋糖、碳酸钙、磷酸钙、玉米淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、山梨醇、精细粉碎的纤维素等)、粘合剂(例如，聚维酮、羧甲基纤维素钠和其它改性纤维素类粘合剂、藻酸钠、黄原胶、淀粉基粘合剂、阿拉伯树胶、卵磷脂等)、pH调节剂或缓冲剂(例如，金属氢氧化物，优选碱金属氢氧化物，如氢氧化钠和氢氧化钾，和其它碱金属缓冲剂如金属碳酸盐，优选碳酸钾或碳酸钠，或金属碳酸氢盐如碳酸氢钠等)、着色剂(例如，染料和颜料、包括焦糖色和二氧化钛等)、湿润剂(例如，甘油、丙二醇等)、泡腾材料诸如某些酸/碱组合、口腔护理添加剂(例如，百里香油、桉叶油和锌)、防腐剂(例如，山梨酸钾等)、糖浆(例如，蜂蜜、高果糖玉米糖浆等)、崩解助剂(例如，微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、淀粉羟乙酸钠、预胶凝化玉米淀粉等)、调味剂和调味混合物、抗氧化剂、及其混合物。示例性的包囊化的添加剂描述在，例如，Atchley的WO 2010/132444，其已经在前面通过引用并入本文。也参见，在Hunt等人的美国专利公开号2012/0055494和Byrd等人的美国专利公开号2012/0199145中阐述的无烟烟草成分，它们通过引用并入本文。

掺入烟草组合物或烟草产品中的本发明的烟草分离物的量可以取决于所述分离物的期望功能、所述分离物的化学构成、以及向其中加入所述分离物的烟草组合物的类型。加入烟草组合物中的烟草分离物的量可以变化，但是通常不超过约50重量％，基于向其中加入所述组合物的烟草组合物的总干重。例如，加入烟草组合物中的烟草分离物的量可以是在约0.25至约25重量％或约1至约10重量％的范围内，基于烟草组合物的总干重。

根据本申请的方法提供的分离的o-甲基类黄酮也可以用在烟草产品领域以外。例如，公知某些类黄酮对植物生态学的潜在益处。某些类黄酮可以在以下方面提供益处：保护免于紫外线、驱退病原性微生物和其它害虫、促进花粉的能育性和萌发、活化细菌结瘤基因以及调节植物生长和酶活性。

通常公知类黄酮对人类和动物的健康益处，且可以作为药物和/或饮食添加物(被理解为包括含有饮食成分和意图补充饮食的产品，其意图用于以丸粒、胶囊、片剂、粉末或液体形式摄取，且没有被表示为用作常规食品)的组分而掺入。类黄酮会促进水果和蔬菜的营养特性。已经报道类黄酮会提供针对自由基和活性氧的抗氧化活性，且已经表现出雌激素和抗癌活性(例如，抗增殖、促进分化和细胞凋亡)。其它报道已经指出了抗炎、抗溃疡发生、抗糖尿病、抗过敏、抗病毒、抗细菌、抗真菌、抗焦虑、抗肿瘤、抗血栓形成和抗动脉粥样硬化的作用。还已经提示，类黄酮在肝病、白内障和心血管疾病中起保护作用。参见，例如，Kumar等人,Int.Pharm.Sciencia(2011)1(1):25-41；Cui等人,Cancer(2008)112(10):2241-2248和Tapas.,A.,Pharm.Res.(2008),7(9月):1089-1099和其中引用的参考文献，它们通过引用并入本文。

O-甲基化的类黄酮可以表现出这样的益处，且可以用于这些目的。实际上，已经发现，与非甲基化的类似物相比，某些o-甲基化的类黄酮表现出优良的代谢稳定性、肠吸收和运输。参见Bernini等人,Molecules(2011)16(2):1418-1425；Wen等人,Drug Metabolism&Disposition(2006),34:1786-1792；Spencer,J.Nutr.(2003),133(10):32555-32615，它们通过引用并入本文。注意到这些优点，已经提出了多种通向o-甲基化的类黄酮的合成途径(即，通过甲基化天然类黄酮的一个或多个羟基)。本发明直接提供了一种或多种天然存在的o-甲基化的类黄酮的相对纯的分离物。

根据本发明，通过本领域已知的任何方式，可以将烟草衍生的一种或多种o-甲基类黄酮的分离物掺入饮食添加物或药物制剂中。所述分离物可以直接引入制剂中，或可以在掺入制剂中之前吸附在另一类材料(例如，植物材料诸如纤维素)上。通常以足以引起某种预期效应的量提供o-甲基化的类黄酮分离物。在某些实施方案中，将一种或多种额外的生物活性化合物掺入相同的药物或饮食添加物组合物内。通常，除了本文描述的分离物以外，药物和饮食添加物组合物还包含各种药学上可接受的赋形剂和添加剂(例如，糖、糖替代物、淀粉、填充剂、盐、调味剂、缓冲剂、防腐剂等)。关于在药物生产中的不同考虑因素的综述，参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版；Mack PublishingCompany,Eaton,Pennsylvania,1990)，其通过引用整体并入本文。

实验部分

以下实施例更充分地例证了本发明的方面，阐述所述实施例来例证本发明的某些方面，且不应解释为其限制。

得到Galpao Commun烟草的绿叶的甲醇提取物。粗质谱法分析指示几个高强度质量峰，它们没有对应于烟草中的已知化合物(在299.06、313.07、315.05、327.05、329.07、341.11和343.10的质量)。为了进一步评价提取物的组成，将0.1克提取物加入含有10mLMeOH的烧瓶中。将混合物在定轨摇床上在250rpm摇动30分钟。然后将MeOH提取物穿过Whatman 0.45μm注射式注射器过滤进LC管形瓶中用于分析。

以负电喷射电离模式，在与Thermo LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪(HighResolution Mass Spectrometer)偶联的Waters Acquity UPLC上进行MeOH提取物中的未知化合物的定性分析。通过在谱图中选择小分离质量宽度并在色谱仪中应用该质量宽度(例如，对于质量峰329.0697，为提取的离子色谱图选择的宽度是329.0690-329.0710)，产生增强的提取的离子色谱图。对于该样品，观察到3个彩色峰。尽管无意受理论限制，据信，所述3个峰对应于3种不同的异构体或甲氧基化的不同位置。

为了证实子结构，将未知质量的MS2和MS3片段化模式与3-O-甲基槲皮素、异鼠李素(槲皮素类似物)、鼠李素(槲皮素类似物)和山奈素(山柰酚类似物)的高纯度标准样品(得自Sigma-Aldrich)的MS2和MS3片段化模式进行了对比。在MS2实验中，标准品以及提取的化合物表现出相对于母体质量的质量损失，这对应于甲基和中性电荷。该模式与O-甲基化的类黄酮的预测性质相一致。MS3实验的结果同样揭示了类似的片段化模式。在所有情况下，未知的质量峰和甲氧基化的类黄酮的预测的经验公式是在7ppm内，这指示，预测的经验公式是高概率匹配。

为了估计提取物中的每种化合物的浓度，将在本实验中从提取的离子色谱图表现出的区域计数与香料烟草样品中的蔗糖酯的已知区域计数进行了对比。基于在已知运行序列中产生的芦丁外部校正曲线，已知区域计数对应于在叶干重的0.1-0.2％范围内的浓度。已知的是，这样的香料烟草烟叶在叶表面化学品的浓度方面比Galpao Commun低大约4-5倍，然后提取物中的化合物(o-甲基化的类黄酮)的浓度将是约1％(基于干重)或更大。

Claims (22)

1.一种制备烟草组合物的方法，所述方法包括：

接收烟草属种的植物材料；

使所述植物材料与溶剂在一定条件下接触一定时间，所述条件和时间足以将一种或多种O-甲基化的类黄酮从所述植物材料提取进所述溶剂中，所述溶剂由甲醇组成；

使含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂与经提取的植物材料分离，其中，基于干重，所述含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少0.1％的O-甲基化的类黄酮；和

纯化含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂以提供分离物，基于干重，所述分离物包含至少50重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮；和

将所述分离物加入烟草组合物中，所述烟草组合物适合用在吸烟制品、无烟烟草产品或产生气溶胶的装置中，所述产生气溶胶的装置含有烟碱或烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述烟草属种的植物材料呈叶的形式。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述烟草属种的植物材料以生坯形式提供。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述烟草属种的植物材料得自Galpao communs植物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中基于干重，所述含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少0.2重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮。

6.根据权利要求1所述的方法，其中基于干重，所述含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少0.5重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮。

7.根据权利要求1所述的方法，其中基于干重，所述含有一种或多种O-甲基化的类黄酮的溶剂包含至少0.8重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述纯化步骤提供包含至少70重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮的分离物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述纯化步骤提供包含至少90重量％的一种或多种O-甲基化的类黄酮的分离物。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种O-甲基化的类黄酮选自：O-甲基化的山柰酚化合物、O-甲基化的槲皮素化合物和O-甲基化的四羟黄酮化合物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种O-甲基化的类黄酮选自：槲皮素甲基醚、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述槲皮素甲基醚选自：槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚、槲皮素4-甲基醚；所述槲皮素三甲基醚是槲皮素3,3’,4’-三甲基醚；且所述山柰酚甲基醚选自：山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚和山柰酚5-甲基醚。

13.根据权利要求1所述的方法，其中以在其上吸附有所述分离物的烟草或非烟草材料的形式，加入所述分离物。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述烟草组合物适合用在吸烟制品中，且所述分离物以下述形式加入：应用于烟草条的外壳制剂或表面装饰制剂的形式，或重构烟草材料的组分的形式。

15.根据权利要求1所述的方法，其中基于所述吸烟制品中的烟草材料的总干重，所述烟草组合物中的分离物的量是在5ppm至5重量％之间。

16.根据权利要求1所述方法制得的得自烟草属种植物或其组分的分离物，其中基于干重，所述分离物包含50％或更多的一种或多种O-甲基化的类黄酮。

17.根据权利要求16所述的分离物，其中基于干重，所述分离物包含70％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮。

18.根据权利要求16所述的分离物，其中基于干重，所述分离物包含90％或更多的一种或多种o-甲基类黄酮。

19.根据权利要求16所述的分离物，其中所述一种或多种O-甲基化的类黄酮选自：O-甲基化的山柰酚化合物、O-甲基化的槲皮素化合物和O-甲基化的四羟黄酮化合物。

20.根据权利要求16所述的分离物，其中所述一种或多种O-甲基化的类黄酮选自：槲皮素甲基醚、槲皮素二甲基醚、槲皮素三甲基醚、槲皮素四甲基醚、槲皮素五甲基醚、山柰酚甲基醚、山柰酚二甲基醚、山柰酚三甲基醚和山柰酚四甲基醚。

21.根据权利要求20所述的分离物，其中所述槲皮素甲基醚选自：槲皮素3-甲基醚、槲皮素4’-甲基醚、槲皮素4-甲基醚；所述槲皮素三甲基醚是槲皮素3,3’,4’-三甲基醚；且所述山柰酚甲基醚选自：山柰酚3-甲基醚、山柰酚4’-甲基醚和山柰酚5-甲基醚。

22.一种用在吸烟制品、无烟烟草产品或产生气溶胶的装置中的烟草组合物，所述产生气溶胶的装置含有烟碱、烟草材料或在使用过程中不燃烧的其它植物材料，所述烟草组合物包含根据权利要求16-21中的任一项所述的分离物。

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