CN110596375A - 微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 - Google Patents
微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110596375A CN110596375A CN201910987915.9A CN201910987915A CN110596375A CN 110596375 A CN110596375 A CN 110596375A CN 201910987915 A CN201910987915 A CN 201910987915A CN 110596375 A CN110596375 A CN 110596375A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microplate
- detection
- enzyme
- fluorescence
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 6
- 238000003491 array Methods 0.000 claims description 5
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001312 dry etching Methods 0.000 claims description 2
- 239000012994 photoredox catalyst Substances 0.000 claims description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 claims description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001039 wet etching Methods 0.000 claims description 2
- 238000003672 processing method Methods 0.000 claims 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- TZDMVWHGWNZKCQ-UHFFFAOYSA-N 1-(2,8-dihydroxy-10H-phenazin-5-yl)ethanone Chemical compound CC(=O)N1C2=CC=C(O)C=C2NC2=CC(O)=CC=C12 TZDMVWHGWNZKCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明涉及材料化学、生物分子检测技术领域，具体涉及一种微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法。一种微孔板，用于酶联免疫分析，包括一平面材料，所述平面材料的平面上加工有微米级尺寸的微腔阵列。本发明中，由于微孔板上的微孔体积微小，单次样本检测只需加入极少量的底物，且酶作用底物产生的荧光分子被很好的聚集在微孔中，可在荧光分子数量很少的情况下仍然被荧光显微镜检测到，从而提升方法的检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及材料化学、生物分子检测技术领域，具体涉及一种微孔板以及以微孔板作为聚集荧光分子，提升检测灵敏度的免疫荧光检测方法。
背景技术
在生命科学研究和临床应用中，生物分子的检测是多种疾病诊断和治疗的基础。作为最常用的生物分子检测方法，酶联免疫分析方法即ELISA，应用酶对检测抗体进行标记，在进行抗原抗体的特异性免疫反应后，酶催化底物发生显色反应，用以定量检测抗原。该方法结合了免疫结合技术和酶的高效催化作用，在快速、低成本、易操作等方面尽显检测优势。相比于免疫荧光法，化学发光法和电化学发光法等，ELISA仍然是多种临床免疫指标检测的不可替代的主导技术。
ELISA既可以用来检测抗原，也可以检测抗体，主要类型包括双抗体夹心法，间接法，竞争法，双位点一步法，捕获法测IgM抗体，应用亲和素和生物素的ELISA。其中，临床检测抗原中最常用的检测方法是双抗体夹心法。该方法目前已经商用制备成为试剂盒。将可与检测抗原特异性配对的捕获抗体作为探针包被到固相载体上并洗去多余未结合的抗体后，加入待检样本适温孵育，在样本中的抗原和固相载体上的抗体通过免疫反应结合后，洗去未结合物质并加入酶标记的抗体孵育，形成抗体-抗原-抗体-酶复合物，再次洗涤去除未结合的酶标抗体，加入底物显色。针对用户不同样本的检测需求，选用与检测抗原特异性配对的捕获抗体包被在96孔板制备特种检测样本的试剂盒。目前已商业化的ELISA试剂盒，操作简单方便，对于检测人员要求不高，检测范围和检测限根据不同的抗原抗体种类不同，大概在纳克至微克级别。
由于96孔板的每个孔具有平方厘米级的底面积，通常需要添加百微升体积的液体覆盖整个孔板底面进行反应，因而当检测样本浓度较低导致酶的量少时，产生的少量荧光分子在百微升的体系里很难被探测到信号，即难以对低浓度的样品进行检测。相较于液相生物芯片，电化学方法等生物分子检测方法，该方法虽然成熟稳定，可操作性强，但在检测灵敏度方面的表现不尽人意。在未来的科学研究和临床应用中，如何发展一种高灵敏、简单、廉价的检测技术用于生物分子分析，尤其是特定疾病的生物标志物的定量检测，仍是亟待解决的问题。
发明内容
为解决上述背景技术中存在的问题，本发明提出一种微孔板以及基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法，该方法具有简单、廉价，易于操作的优点。
一种微孔板，用于酶联免疫分析，其特殊之处在于：
包括一平面材料，所述平面材料的平面上加工有微米级尺寸的微腔阵列。
优选地，上述平面材料可以为PC、PS、PMMA等塑料材料，也可以为石英、硅片等硬质材料。
优选地，平面上加工微米级尺寸的微腔阵列可以采用湿法刻蚀、干法刻蚀、纳米压印、激光加工等方法。
本发明解决上述问题的技术方案是：一种基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：
1)双抗夹心法反应
在96孔板进行检测抗原的捕获和酶标检测抗体的结合；
2)应用微孔板聚集荧光分子
将底物滴在上述微孔板加工有微米级尺寸的微腔阵列的平面上，然后将微孔板的平面向下压实在96孔板底面进行反应；
或者，将少量底物加入步骤1)中96孔板的反应孔中，然后立即将上述微孔板的微腔阵列的平面压实在反应孔底面上，进行反应；
3)荧光显微镜检测
将反应完成后的微孔板通过荧光显微镜成像，然后用图像分析软件对其进行荧光强度计算用以定量检测样本。
优选地，上述荧光显微镜成像可以采用荧光显微镜、共焦荧光显微镜或者荧光扫描显微成像等仪器或技术。
本发明的优点：
1)本发明在现有ELISA的基础上，结合使用微孔板，可以解决传统ELISA灵敏度不够高的问题，且该方法简单、廉价，易于操作；
2)本发明中，由于微孔板上的微孔体积微小，单次样本检测只需加入极少量的底物，且酶作用底物产生的荧光分子被很好的聚集在微孔中，可在荧光分子数量很少的情况下仍然被荧光显微镜检测到，从而提升方法的检测灵敏度。
附图说明
图1是本发明一种基于微孔板的荧光免疫检测方法相对传统ELISA提升灵敏度的原理示意图；
图2是本发明一种基于微孔板的荧光免疫检测方法的检测步骤示意图；
图3是本发明中微纳加工得到的微孔板的明场显微镜图；
图4是本发明应用微孔板聚集荧光分子的不同浓度老鼠肉双抗夹心实验荧光显微图；其中，a-d实验组的检测浓度分别为200U/mL、10U/mL、0.2U/mL、0.002U/mL；e为空白对照组，选用10mM的PBS溶液代替检测样本；
图5是本发明中应用微孔板聚集荧光分子的不同浓度老鼠肉双抗夹心实验浓度响应曲线。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
实施例一
一种微孔板，平面材料是聚碳酸酯板，即PC板。本实施例中的微腔采用纳米压印的方式制备，明场显微镜图如图3所示，微腔分布均匀，单个微腔大小为4.5微米×4.5微米×3微米。微孔板的制备过程与现有微纳加工工艺兼容，便于大规模生产从而降低成本，制备所用材料安全无毒，易于保存和运输，而且应用微孔板在整个流程中，并不会过度增加检测方法的复杂性。微孔板在实际制作中，厚度不限，优选为几百微米至几毫米；边长不限，优选为几毫米。
实施例二
如图2所示，一种基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法，包括以下步骤：
1)双抗夹心法反应
在96孔板进行老鼠肉双抗夹心法反应，包括检测抗原的捕获和酶标检测抗体的结合。在已包被了捕获抗体的96孔板中，每个反应孔加入不同浓度的50μL老鼠肉试剂盒标准品，分别为200U/mL、10U/mL、0.2U/mL、0.002U/mL，并用10mM的PBS溶液作为空白对照组，室温下摇晃反应2小时，然后每孔用300μL,10mM的PBS溶液清洗3次。之后加入50μL HRP标记的检测抗体，在37℃摇晃1小时，重复洗涤四次。
2)应用微孔板聚集荧光分子
每次取3μL，7mM的10-乙酰基-3，7-二羟基吩嗪(ADHP)过氧化氢溶液(0.3％)作为底物滴在一个微孔板的微腔刻蚀面，然后将微孔板的微腔刻蚀面向下压实在96孔板底面。96孔板底面的酶HRP作用底物ADHP产生荧光分子，20分钟后对各个微孔板进行荧光显微镜成像。
3)荧光显微镜检测
反应完成后的微孔板通过荧光显微镜成像，激发波长546nm，然后用Image J对其进行荧光强度计算用以定量检测样本。对四组梯度和一组空白样品进行荧光显微镜成像的结果如图4所示。随着检测样本的浓度降低，微孔板内液体的荧光强度逐渐下降，空白对照组几乎探测不到荧光强度。该实验的浓度响应曲线如图5所示，在我们的检测范围内，荧光强度和检测样本浓度大致呈现线性关系。
本发明的一种基于微孔板的荧光免疫检测方法，是在传统ELISA的基础上，结合使用微孔板来聚集荧光分子，提升检测灵敏度。该方法相较于传统ELISA方法可以提升检测灵敏度，原理如图1所示。对于传统ELISA，由于96孔板的每个反应孔具有0.32平方厘米的底面积，通常需要添加大概百微升体积的液体覆盖整个孔板底面进行反应，因而当检测样本浓度较低导致酶的数量较少时，酶作用底物产生的荧光分子数量也就很少，少量荧光分子分散在百微升的液体体系里难以被探测到信号，即无法对低浓度的样品进行检测。
而本发明实施例中，应用PC板表面微纳加工了只有几个微米边长的微孔作为酶作用底物的微反应腔室，单个微孔大概只有几十飞升的体积。通过使用微孔板减小酶和底物的反应空间，将酶作用底物产生的荧光分子聚集在微孔中，使得只有少量的荧光分子也可以被荧光显微镜探测到信号，从而完成对低浓度目标分析物的检测，提升方法的检测灵敏度。
以上所述仅为本发明的实施例，并非以此限制本发明的保护范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的系统领域，均同理包括在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种微孔板，用于酶联免疫分析，其特征在于：
包括一平面材料，所述平面材料的平面上加工有微米级尺寸的微腔阵列。
2.根据权利要求1所述的一种微孔板，其特征在于：所述平面材料可以为PC、PS、PMMA、石英或硅片材料。
3.根据权利要求1或2所述的一种微孔板，其特征在于：所述平面上加工微米级尺寸的微腔阵列可以采用湿法刻蚀、干法刻蚀、纳米压印或激光加工方法进行加工。
4.一种基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)双抗夹心法反应
在96孔板进行检测抗原的捕获和酶标检测抗体的结合；
2)应用微孔板聚集荧光分子
将底物滴在如权利要求1-3任一所述的微孔板加工有微米级尺寸的微腔阵列的平面上，然后将微孔板的平面向下压实在所述96孔板底面进行反应；
或者，将少量底物加入步骤1)中所述96孔板的反应孔中，然后立即将如权利要求1-3任一所述的微孔板的微腔阵列的平面压实在反应孔底面上，进行反应；
3)荧光显微镜检测
将反应完成后的微孔板通过荧光显微镜成像，然后用图像分析软件对其进行荧光强度计算用以定量检测样本。
5.根据权利要求4所述的一种基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法，其特征在于：
步骤3)中，荧光显微镜成像可以采用荧光显微镜、共焦荧光显微镜、荧光扫描显微成像仪器或技术。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910987915.9A CN110596375B (zh) | 2019-10-17 | 2019-10-17 | 微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910987915.9A CN110596375B (zh) | 2019-10-17 | 2019-10-17 | 微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110596375A true CN110596375A (zh) | 2019-12-20 |
| CN110596375B CN110596375B (zh) | 2022-12-27 |
Family
ID=68850647
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910987915.9A Active CN110596375B (zh) | 2019-10-17 | 2019-10-17 | 微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110596375B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113030038A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-06-25 | 北京理工大学 | 多波长荧光检测装置及方法 |
| CN113125708A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-16 | 暨南大学 | 一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2633398A1 (fr) * | 1988-06-24 | 1989-12-29 | Biokema Sa | Ensemble de test pour analyse biochimique |
| US20050064395A1 (en) * | 2003-07-25 | 2005-03-24 | Platypus Technologies, Llc | Liquid crystal based analyte detection |
| CN101535806A (zh) * | 2006-10-30 | 2009-09-16 | 皇家飞利浦电子股份有限公司 | 多孔生物测定衬底以及用于生产这种衬底的方法和设备 |
| CN102221610A (zh) * | 2010-04-16 | 2011-10-19 | 北京市理化分析测试中心 | 快速高效检测致病菌的方法、生物敏传感器及其制备方法 |
| CN102928584A (zh) * | 2003-09-25 | 2013-02-13 | 富山县政府 | 微孔阵列芯片及其制造方法 |
| CN105689028A (zh) * | 2016-01-20 | 2016-06-22 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 用于免疫微球单一分布的微流体芯片、方法及其应用 |
| CN106133211A (zh) * | 2014-01-14 | 2016-11-16 | 爱普济德生物技术有限公司 | 核酸试剂用于对靶分子进行超灵敏数字检测和定量的用途 |
| CN107709992A (zh) * | 2015-04-30 | 2018-02-16 | 新加坡科技研究局 | 酶联免疫吸附测定板和系统的新设计及其使用方法 |
| CN108163802A (zh) * | 2017-12-06 | 2018-06-15 | 李瑞萱 | 一种抗原检测材料及其制备方法和应用 |
| US20180221876A1 (en) * | 2015-10-01 | 2018-08-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Assay plate and uses thereof |
| WO2018148458A1 (en) * | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Essenlix Corp. | Digital assay |
-
2019
- 2019-10-17 CN CN201910987915.9A patent/CN110596375B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2633398A1 (fr) * | 1988-06-24 | 1989-12-29 | Biokema Sa | Ensemble de test pour analyse biochimique |
| US20050064395A1 (en) * | 2003-07-25 | 2005-03-24 | Platypus Technologies, Llc | Liquid crystal based analyte detection |
| CN102928584A (zh) * | 2003-09-25 | 2013-02-13 | 富山县政府 | 微孔阵列芯片及其制造方法 |
| CN101535806A (zh) * | 2006-10-30 | 2009-09-16 | 皇家飞利浦电子股份有限公司 | 多孔生物测定衬底以及用于生产这种衬底的方法和设备 |
| CN102221610A (zh) * | 2010-04-16 | 2011-10-19 | 北京市理化分析测试中心 | 快速高效检测致病菌的方法、生物敏传感器及其制备方法 |
| CN106133211A (zh) * | 2014-01-14 | 2016-11-16 | 爱普济德生物技术有限公司 | 核酸试剂用于对靶分子进行超灵敏数字检测和定量的用途 |
| CN107709992A (zh) * | 2015-04-30 | 2018-02-16 | 新加坡科技研究局 | 酶联免疫吸附测定板和系统的新设计及其使用方法 |
| US20180221876A1 (en) * | 2015-10-01 | 2018-08-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Assay plate and uses thereof |
| CN105689028A (zh) * | 2016-01-20 | 2016-06-22 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 用于免疫微球单一分布的微流体芯片、方法及其应用 |
| WO2018148458A1 (en) * | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Essenlix Corp. | Digital assay |
| CN108163802A (zh) * | 2017-12-06 | 2018-06-15 | 李瑞萱 | 一种抗原检测材料及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DAVID M.RISSIN, ET AL.: "Single-Molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations.", 《NAT BIOTECHNOL》 * |
| MATTHIAS J. MICKERT, ET AL.: "Measurement of Sub-femtomolar Concentrations of Prostate-Specific Antigen through Single-Molecule Counting with an Upconversion-Linked Immunosorbent Assay", 《ANAL. CHEM.》 * |
| SOO HYEON KIM, ET AL.: "Large-scale femtoliter droplet array for digital counting of single biomolecules.", 《LAB ON CHIP》 * |
| 高鹏等: "编码悬浮微块片上多组分并行免疫检测的方法", 《生物物理学报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113125708A (zh) * | 2019-12-31 | 2021-07-16 | 暨南大学 | 一种基于核孔膜的微孔板及其制备方法与应用 |
| CN113030038A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-06-25 | 北京理工大学 | 多波长荧光检测装置及方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110596375B (zh) | 2022-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Suthanthiraraj et al. | Localized surface plasmon resonance (LSPR) biosensor based on thermally annealed silver nanostructures with on-chip blood-plasma separation for the detection of dengue non-structural protein NS1 antigen | |
| Akama et al. | Droplet-free digital enzyme-linked immunosorbent assay based on a tyramide signal amplification system | |
| Tayyab et al. | Potential microfluidic devices for COVID-19 antibody detection at point-of-care (POC): A review | |
| Dong et al. | ELISA‐type assays of trace biomarkers using microfluidic methods | |
| Chang et al. | Large-scale plasmonic microarrays for label-free high-throughput screening | |
| US20250214082A1 (en) | Nanosensor methods and apparatuses for determination of analytes | |
| Sun et al. | Localized surface plasmon resonance based point-of-care system for sepsis diagnosis | |
| Lin et al. | Washing-free centrifugal microchip fluorescence immunoassay for rapid and point-of-care detection of protein | |
| Cognetti et al. | Disposable photonics for cost-effective clinical bioassays: application to COVID-19 antibody testing | |
| Marquette et al. | Recent advances in multiplex immunoassays | |
| WO2009039170A2 (en) | Integrated protein chip assay | |
| JP2017508993A (ja) | 生物学的検体を分析するための方法およびデバイス | |
| Vashist et al. | Enzyme-linked immunoassays | |
| CN110596375B (zh) | 微孔板、基于微孔板的高灵敏度免疫荧光检测方法 | |
| Ekiz-Kanik et al. | Surface chemistry and morphology in single particle optical imaging | |
| JP4068148B2 (ja) | アッセイ法 | |
| HK1250778A1 (zh) | 分析物检测及其方法 | |
| WO2008150873A1 (en) | Ultrasensitive detection of biomolecules using immunoseparation and diffractometry | |
| Ricciardi et al. | Optofluidic chip for surface wave-based fluorescence sensing | |
| Yang et al. | Automated Electroosmotic Digital Optofluidics for Rapid and Label-Free Protein Detection | |
| Li et al. | Edge-enhanced microwell immunoassay for highly sensitive protein detection | |
| Bacarese-Hamilton et al. | Allergen microarrays | |
| Gong et al. | Highly sensitive digital and analog immunoassay based on submicron magnetic beads and fluorescent microspheres | |
| CN105467113A (zh) | 一种基于荧光素和萤光素酶生物发光反应的免疫分析方法 | |
| Päkkilä et al. | Simple and inexpensive immunoassay-based diagnostic tests |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20250314 Address after: 510700 room 503, building B10, 11 Kaiyuan Avenue, Huangpu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee after: Guangzhou Guanghua Shenqi Technology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 518055 Shenzhen International Graduate School of Tsinghua University, Xili Town, Nanshan District, Shenzhen City, Guangdong Province Patentee before: Tsinghua Shenzhen International Graduate School Country or region before: China |
|
| TR01 | Transfer of patent right |