CN111778209B - Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 - Google Patents
Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111778209B CN111778209B CN202010774238.5A CN202010774238A CN111778209B CN 111778209 B CN111778209 B CN 111778209B CN 202010774238 A CN202010774238 A CN 202010774238A CN 111778209 B CN111778209 B CN 111778209B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- svf
- collagenase
- cell
- extraction reagent
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 14
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 45
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 18
- YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N chembl176323 Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@]3(C)CC(N=C4C[C@]5(C)CCC6[C@]7(C)CC[C@@H]([C@]7(CC[C@]6(C)[C@@]5(C)CC4=N4)C)CCCCCCCC)=C4C[C@]3(C)CCC2[C@]2(C)CC[C@H](CCCCCCCC)[C@]21C YRQNKMKHABXEJZ-UVQQGXFZSA-N 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004182 chemical digestion Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了SVF提取试剂及其制备方法与在提取SVF细胞中的应用，将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂。本发明采用限定比例的混合胶原酶结合透明质酸，制备的SVF细胞活性好、活率高，而且得到的SVF细胞中胶原酶几乎没有残留，制备的SVF细胞可用于后续临床疾病治疗研究。
Description
技术领域
本发明属于生物技术，具体涉及SVF提取试剂及其制备方法与在提取SVF中的应用。
背景技术
脂肪移植物的低存活率及其体积存留的不可预知性限制了其临床应用；间充质干细胞(MSCs)被首次发现存在于骨髓中,它是一种具有多向分化潜能的细胞,具有促进组织再生的潜能。研究发现脂肪组织中也存在着大量的MSCs,而脂肪组织具有来源丰富、获取对组织损伤小的特点，传统的化学消化法所分离获得基质血管片段(SVF)为细胞悬液,并非黏附在细胞外基质(ECM)上的生理状态,所以移植后ASCs易被宿主巨噬细胞吞噬,使成熟脂肪细胞和ASCs均不能长久成活,这是导致脂肪移植保留率不稳定的主要原因。现有技术公开了一种SVF提取用试剂盒，包括内身、盒套、副盒体和外盒。内身和盒套构成主盒体。内身的上端面上开设第一凹槽，在该第一凹槽的底面上开设一个离心管放置腔、两个过滤器放置腔、一个广口瓶放置腔及一个滴管放置腔；盒套由顶面、底面及宽度方向的两侧面构成，使内身从盒套的长度方向的任意一个敞开面能插入盒套的内腔；该盒套的顶面开设七个第一插孔和一个第二插孔，该盒套的底面开设七个第三插孔；副盒体的上端面开设第二凹槽，在该第二凹槽的底面上开设两个试剂瓶放置腔；外盒包括底盒和可开启的盒盖，使试剂盒保持密封状态；不仅便于携带仪器和试剂，更能方便临床医护人员对SVF进行提取。现有技术一般采用胶原酶溶解脂肪后离心过滤，对细胞活性有较大影响。
发明内容
本发明提供SVF提取试剂及其制备方法与在提取SVF中的应用，得到的SVF细胞存活率高，其中SVF可以称为基质血管成分，优选脂肪基质血管成分。
本发明采用如下技术方案：
SVF提取试剂，包括胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸以及生理盐水。
上述SVF提取试剂在提取SVF细胞中的应用。
本发明中，SVF提取试剂由胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到；SVF提取试剂中，胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.05～0.15%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.15～0.25%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.03～0.08%、透明质酸的浓度为0.8～1.5g/L，优选的，SVF提取试剂中，胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%、透明质酸的浓度为1g/L。
本发明SVF提取试剂用于提取SVF细胞时，将洗涤后的脂肪与SVF提取试剂混合，消化后离心处理，然后去除上层脂质，剩余部分加入洗涤液后过滤，所得细胞与洗涤液混合后离心分离，去除上清液，得到SVF细胞。洗涤后的脂肪为现有技术，本发明的创造性在于提供新的SVF提取试剂，采用限定比例的混合胶原酶结合透明质酸，制备的SVF细胞活性好、活率高；优选的，洗涤后的脂肪与SVF提取试剂的体积比为1∶1；消化为37℃消化1小时，进一步优选的，消化时振荡。
本发明中，洗涤液为生理盐水；生理盐水一般为0.9%生理盐水。
现有技术一般采用一种胶原酶或者再加入添加剂进行消化脂肪得到SVF细胞，存在胶原酶残留以及细胞过度消化的问题，尤其是加入白蛋白后，SVF细胞纯度不高；本发明采用限定比例的混合胶原酶结合透明质酸，制备的SVF细胞活性大、活率高，而且得到的SVF细胞中胶原酶几乎没有残留，制备的SVF细胞可用于后续临床疾病治疗研究，比如关节炎药物的制备研究、软骨损伤药物的制备研究、美容药物的制备研究等。
附图说明
图1为本发明采集的脂肪图；
图2为本发明脂肪酶解消化同样；
图3为本发明实施例消化获得的SVF细胞；
图4为本发明实施例获得SVF细胞直径分布图；
图5为本发明实施例以及对比SVF细胞活性；
图6为本发明实施例以及对比SVF细胞总数图；
图7为本发明实施例获得SVF细胞活率；
图8为本发明实施例获得SVF细胞活率；
图9为本发明对比例获得SVF细胞-2活率；
图10为本发明对比例获得SVF细胞-3活率；
图11为本发明对比例获得SVF细胞-4活率；
图12为本发明对比例获得SVF细胞-5活率。
具体实施方式
本发明的SVF提取试剂由胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸以及生理盐水组成。本发明将洗涤后的脂肪与SVF提取试剂混合，消化后离心处理，然后去除上层脂质，剩余部分加入洗涤液后过滤，滤饼与洗涤液混合后离心分离，去除上清液，得到SVF细胞。
涉及的原料为市售常规产品，具体的操作方法以及测试方法为本领域常规方法，制备在室温、常规条件下进行；使用Sigma公司胶原酶、默克公司的透明质酸。本发明实施例与对比例进行平行试验，除了SVF提取试剂的组成不同，其他条件都一样。
实施例一
将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%、透明质酸为1g/L。
实施例二
提取SVF细胞的方法，包括以下步骤：
（1）将脂肪组织（腹部、如图1）加入PBS（pH7.2）中洗涤，静置分层后，吸除下层洗涤液，再洗涤至洗涤液无色，吸除下层洗涤液，得到洗涤后的脂肪；
（2）将洗涤后的脂肪加入离心管中，再加入等体积的实施例一SVF提取试剂，于37℃振荡（80rpm）消化1小时，得到消化液，肉眼观察不到颗粒状物质，见图2；
（3）将消化液500g离心5分钟，然后去除上层脂质，剩余部分加入5倍体积的生理盐水，然后过滤（80μm滤膜），滤饼加入生理盐水中，然后300g离心3分钟，去除上清液，得到SVF细胞-1，见图3，图4为其粒径分布（细胞计数仪），可以看出本发明得到的SVF细胞中，脂肪干细胞比例很高。
对比例
将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%。然后按照实施例二提取SVF细胞的方法，得到SVF细胞-2。
将胶原酶Ⅰ加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.3%。然后按照实施例二提取SVF细胞的方法，得到SVF细胞-3。
将胶原酶Ⅰ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.3%、透明质酸为1g/L。然后按照实施例二提取SVF细胞的方法，得到SVF细胞-4。
将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、人血白蛋白加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%、人血白蛋白的质量浓度为1%。然后按照实施例二提取SVF细胞的方法，得到SVF细胞-5。
将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂，其中胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%、透明质酸为10g/L。然后按照实施例二提取SVF细胞的方法，得到SVF细胞-6。
结果表征
1、胶原酶残留
使用Sigma公司的胶原酶活性检测试剂盒检测胶原酶在最终的SVF细胞中的含量，实施例未检测到胶原酶残留。
2、SVF细胞活性
采用常规CCK8法，培养120h的结果见图5，横坐标1～6分别表示SVF细胞-1、SVF细胞-2、SVF细胞-3、SVF细胞-4、SVF细胞-5、SVF细胞-6。
3、SVF细胞量与细胞活率
将实施例提取的SVF细胞、对比例提取的SVF细胞每个重复1次，每次取5个样本，按平均值计算平均细胞数量，用台盼蓝计算细胞存活率，具体为现有常规方法。图6（第二次制备）为实施例提取的SVF细胞、对比例提取的SVF细胞平均细胞数量（数量级为107），横坐标1～6分别对应SVF细胞-1、SVF细胞-2、SVF细胞-3、SVF细胞-4、SVF细胞-5、SVF细胞-6。SVF细胞-1、SVF细胞-2、SVF细胞-3、SVF细胞-4、SVF细胞-5、SVF细胞-6第一次制备、第二次制备的细胞存活率分别为95.94%、94.07%，91.79%、90.28%，68.68%、73.27%，78.43%、79.21%，90.81%、88.18%，90.67%、87.14%。
使用台盼蓝染色法鉴定细胞活率，结果经本发明实施例方法消化获得的SVF细胞活率高，见图7、图8，分别为第一次制备、第二次制备；图9为SVF细胞-2台盼蓝染色法鉴定细胞活率图，图10为SVF细胞-3台盼蓝染色法鉴定细胞活率图，图11为SVF细胞-4台盼蓝染色法鉴定细胞活率图，图12为SVF细胞-5台盼蓝染色法鉴定细胞活率图。
Claims (3)
1.SVF提取试剂，其特征在于，室温下，将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂；SVF提取试剂中，胶原酶Ⅰ的质量浓度为0.1%、胶原酶Ⅱ的质量浓度为0.2%、胶原酶Ⅳ的质量浓度为0.05%、透明质酸的浓度为1g/L。
2.权利要求1所述SVF提取试剂在提取SVF细胞中的应用。
3.权利要求1所述SVF提取试剂的制备方法，其特征在于，室温下，将胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ、透明质酸加入生理盐水中制备得到SVF提取试剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010774238.5A CN111778209B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010774238.5A CN111778209B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111778209A CN111778209A (zh) | 2020-10-16 |
| CN111778209B true CN111778209B (zh) | 2023-02-28 |
Family
ID=72766463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010774238.5A Active CN111778209B (zh) | 2020-08-04 | 2020-08-04 | Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111778209B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102443566A (zh) * | 2012-01-20 | 2012-05-09 | 天津和泽干细胞科技有限公司 | 一种脂肪干细胞的获取方法 |
| CN105132500A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-09 | 李青峰 | 一种svf的制备方法 |
| CN106978391A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-07-25 | 西藏农牧学院 | 家禽胫骨生长板软骨原代细胞分离用消化酶液及胫骨生长板软骨原代细胞的分离培养方法 |
| CN107475190A (zh) * | 2017-10-13 | 2017-12-15 | 上海莱馥医疗科技有限公司 | 一种脂肪svf细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途 |
| CN111249527A (zh) * | 2018-12-03 | 2020-06-09 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种富血小板血浆的软组织填充剂及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10933096B2 (en) * | 2017-12-22 | 2021-03-02 | Aesthetics Biomedical, Inc. | Biologic preserving composition and methods of use |
-
2020
- 2020-08-04 CN CN202010774238.5A patent/CN111778209B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102443566A (zh) * | 2012-01-20 | 2012-05-09 | 天津和泽干细胞科技有限公司 | 一种脂肪干细胞的获取方法 |
| CN105132500A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-09 | 李青峰 | 一种svf的制备方法 |
| CN106978391A (zh) * | 2017-04-06 | 2017-07-25 | 西藏农牧学院 | 家禽胫骨生长板软骨原代细胞分离用消化酶液及胫骨生长板软骨原代细胞的分离培养方法 |
| CN107475190A (zh) * | 2017-10-13 | 2017-12-15 | 上海莱馥医疗科技有限公司 | 一种脂肪svf细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途 |
| CN111249527A (zh) * | 2018-12-03 | 2020-06-09 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种富血小板血浆的软组织填充剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "Comparative Efficacy of Autologous Stromal Vascular Fraction and Autologous Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells Combined With Hyaluronic Acid for the Treatment of Sheep Osteoarthritis";Xiaoteng Lv等;《Cell Transplantation》;20181231;第27卷(第7期);第1111-1125页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111778209A (zh) | 2020-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109536440A (zh) | 外泌体的提取方法 | |
| CN102058905B (zh) | 一种复合脂肪颗粒及其制备方法 | |
| CN104498433B (zh) | 一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用 | |
| EP3174973B1 (en) | Method and assembly for extraction of regenerative cellular components from adipose tissue | |
| KR20180111674A (ko) | 중간엽줄기세포 유래 고순도, 고농도 엑소좀을 포함하는 배양액 및 이의 제조방법 | |
| CN107475190B (zh) | 一种脂肪svf细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途 | |
| CN109234229A (zh) | 从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物 | |
| US8673639B2 (en) | Methods for isolating stem cells | |
| CN101693884A (zh) | 一种从胎盘、脐带或脂肪组织中分离提取干细胞的方法 | |
| CN111778206B (zh) | 一种抗皮肤衰老的鹿茸干细胞条件培养液的制备方法 | |
| CN109200011A (zh) | 一种护肤品及其制备方法 | |
| CN101705209A (zh) | 一种从棕色脂肪分离心脏干细胞及其成心肌分化的方法 | |
| CN106399236A (zh) | 一种促进脂肪干细胞生长的培养方法 | |
| CN109628388A (zh) | 用消化酶组合物从胎盘血管分离间充质干细胞 | |
| JP6362588B2 (ja) | 毛髪再生用の細胞製剤 | |
| CN115521909A (zh) | 一种滑膜间充质干细胞的制备方法及应用 | |
| CN114469855A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞诱导分化为成纤维细胞组合应用技术 | |
| CN115337261A (zh) | 富含胶原蛋白和血小板裂解物的生物凝胶的制备方法及其应用 | |
| CN111778209B (zh) | Svf提取试剂及其制备方法与在提取svf细胞中的应用 | |
| CN102747033A (zh) | 一种由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法 | |
| KR101719743B1 (ko) | 지방 조직으로부터 지방줄기세포를 수득하는 방법 | |
| CN107898812A (zh) | 一种基于脐带干细胞及活性成分的软骨损伤混合修复液 | |
| CN111849886B (zh) | Svf细胞以及制备方法与应用 | |
| WO2019237812A1 (zh) | 脂肪组织消化液和快速获得基质血管成分细胞的方法 | |
| CN111172107B (zh) | 一种牙髓干细胞条件培养基及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20220722 Address after: 101199 Room 201, floor 2, building 6, yard 1, Yuxi 1st Street, Tongzhou District, Beijing 62148 Applicant after: Beijing bopinbeilai Biomedical Technology Co.,Ltd. Address before: 200438 Room 301, 75 Lane 1688, Guoquan North Road, Yangpu District, Shanghai Applicant before: BOPIN (SHANGHAI) BIO-MEDICINE TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |