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CN113164597B - 靶向HPTP-β（VE-PTP）和VEGF的多特异性抗体 - Google Patents

靶向HPTP-β（VE-PTP）和VEGF的多特异性抗体 Download PDF

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Abstract

本公开提供了包含多特异性化合物的组合物，所述多特异性化合物包括靶向磷酸酶和受体酪氨酸激酶激动剂的化合物。还提供了治疗与血管生成相关的病况的方法，其包括施用靶向磷酸酶和受体酪氨酸激酶激动剂的多特异性化合物。

Description

靶向HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性抗体
交叉引用
本申请要求2018年9月24日提交的第62/735,331号美国临时申请和2019年4月11日提交的第62/832,461号美国临时申请的权益，所述临时申请中的每一个均通过引用整体并入本文。
背景技术
具有调节不同靶标的能力的单独化合物可以组合起来生成多特异性化合物。这样的多特异性化合物可能比单独施用的母体化合物具有优势。这些优势可包括，例如，更简单的给药方案、受试者体内更长的半衰期或紧密结合靶标的能力。
援引并入
在本申请中引用的每篇专利、出版物和非专利文献均通过引用整体并入本文，如同每一篇分别通过引用而并入。
发明内容
在一些实施方案中，本公开提供了一种化合物，其包含：(a)第一结构域，其中所述第一结构域调节磷酸酶，其中所述磷酸酶调节Tie2；以及(b)特异性结合受体酪氨酸激酶激动剂的第二结构域。
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的受试者中的病况的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物。
附图说明
图1：基本的四链抗体单元的示意图。轻链序列由“SEQ A”表示。重链序列由“SEQB”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图2：有序列附加至重链C末端的四价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图3：有序列附加至轻链C末端的四价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图4：有序列附加至重链和轻链C末端的六价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”和“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图5：有序列附加至重链和轻链C末端的六价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”和“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”和“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图6：具有两个不同的重链序列和两个不同的轻链序列的二价双特异性抗体的示意图。轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图7：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一条轻链C末端上的序列的三价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQD”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图8：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一条重链C末端上的序列的三价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQD”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图9：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQF”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图10：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个重链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQF”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图11：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及顺式附加到一个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图12：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及反式附加到一个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图13：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的五价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQA”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQ F”和“SEQ G”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ H”、“SEQ I”和“SEQ J”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图14：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一个重链C末端和两个轻链C末端上的序列的五价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQA”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQ F”和“SEQ G”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ H”、“SEQ I”和“SEQ J”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图15：具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到重链和轻链C末端上的序列的六价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQF”、“SEQ G”和“SEQ H”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ I”、“SEQ J”、“SEQ K”和“SEQL”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图16：ELISA数据，其证明四价双特异性抗体HC2-AFL:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合。
图17：ELISA数据，其证明四价双特异性抗体HC2-BRO:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合。
图18：ELISA数据，其测试四价双特异性抗体HC2-RAN:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合。
图19：在用包含brolucizumab衍生的或阿柏西普衍生的VEGF结合域的四价双特异性抗体或六价双特异性抗体处理的HUVEC中，Tie2的活化。如通过免疫沉淀和Western印迹所证明的，所有测试的双特异性抗体均增加了基础Tie2活化(在不存在外源Ang1或Ang2的情况下)，而基础VEGFR2磷酸化(在不存在外源VEGF的情况下)不受影响。
图20：如通过免疫沉淀和Western印迹所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含brolucizumab衍生的或阿柏西普衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。
图21A、图21B和图21C：在HUVEC中，包括用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含abicipar衍生的或阿柏西普衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图21A提供了Western印迹。图21B提供了Tie2活化的定量。图21C提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图22A、图22B和图22C：在HUVEC中，包括用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含brolucizumab衍生的、阿柏西普衍生的或abicipar衍生的VEGF结合域的六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图22A提供了Western印迹。图22B提供了Tie2活化的定量。图22C提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图23A和图23B：如通过电化学发光信号定量所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含brolucizumab衍生的、阿柏西普衍生的或abicipar衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图23A提供了Tie2活化的定量。图23B提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图24A和图24B：如通过电化学发光信号定量所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含brolucizumab衍生的、阿柏西普衍生的或abicipar衍生的VEGF结合域的六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图24A提供了Tie2活化的定量。图24B提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图25A和图25B：如通过电化学发光信号定量所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含brolucizumab衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图25A提供了Tie2活化的定量。图25B提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图26A和图26B：如通过电化学发光信号定量所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含abicipar衍生的或阿柏西普衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图26A提供了Tie2活化的定量。图26B提供了VEGFR2磷酸化的定量。
图27A和图27B：如通过电化学发光信号定量所证实的，在用Ang1和VEGF处理的HUVEC中，包含abicipar衍生的或阿柏西普衍生的VEGF结合域的四价双特异性和六价双特异性抗体增强Tie2活化并抑制VEGFR2活化。图27A提供了Tie2活化的定量。图27B提供了VEGFR2磷酸化的定量。
具体实施方式
本公开提供了用于调节磷酸酶和激酶，例如受体酪氨酸激酶的组合物和方法。提供了用于调节Tie2，例如以促进Tie2磷酸化、信号传导和/或活化的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了用于靶向调节Tie2信号传导的磷酸酶的组合物和方法。在一些实施方案中，调节Tie2信号传导的磷酸酶是人蛋白质酪氨酸磷酸酶-β(HPTP-β)。
提供了用于调节受体酪氨酸激酶，例如以减少受体酪氨酸激酶磷酸化、信号传导和/或活化的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了用于靶向受体酪氨酸激酶激动剂，例如血管内皮生长因子(VEGF)的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了用于靶向受体酪氨酸激酶，例如VEGF受体的组合物和方法。
在一些实施方案中，本公开提供了用于靶向人蛋白质酪氨酸磷酸酶-β(HPTP-β)或血管内皮蛋白质酪氨酸磷酸酶(VE-PTP或VEPTP)和血管内皮生长因子(VEGF)的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开提供了靶向HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物、药剂、抗体、片段或衍生物。
本文公开的药剂可用于治疗以例如血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症。本文公开的药剂可用于治疗例如血管病症、眼部病症、癌症、肾脏病症和糖尿病并发症。
HPTP-β/VE-PTP、Tie2和血管稳定性
HPTP-β是蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPase)的受体样家族的成员。HPTP-β是一种主要在血管内皮细胞中发现的跨膜蛋白质，其表现出与细胞粘附分子的结构和功能相似性。在包括例如斑马鱼、鸡、狗、小鼠、狨猴和猴子的各种物种中发现了HPTP-β的直向同源物。直向同源物通常被称为血管内皮蛋白质酪氨酸磷酸酶(VE-PTP)。HPTP-β(VE-PTP)可通过对Tie2介导的信号传导的作用来影响血管稳定性。
Tie2(具有免疫球蛋白和表皮生长因子同源结构域的酪氨酸激酶2)是一种主要在血管内皮细胞中表达的膜受体酪氨酸激酶。上游因素可以调节Tie2磷酸化，影响下游信号传导和血管稳定化。此类因子的非限制性实例包括血管生成素1(Ang1/Angptl)、血管生成素2(Ang2/Angpt2)和HPTP-β(VE-PTP)。
Ang1是Tie2的激动剂。Ang1与Tie2的结合促进受体磷酸化和下游信号传导，以通过高度组织化的血管生成、加强内皮细胞连接、增强内皮活力、减少内皮炎症以及改善内皮功能来诱导血管稳定化。
Ang2在Tie2的背景依赖性拮抗剂或激动剂中起作用。在血管生成过程中，Ang2充当Ang1-Tie2信号传导的负调节物。
HPTP-β(VE-PTP)是可以调节Tie2信号传导的磷酸酶。HPTP-β(VE-PTP)可以使Tie2受体去磷酸化。在生理条件下，HPTP-β(VE-PTP)调节Tie2磷酸化的持续时间。因此，HPTP-β(VE-PTP)的抑制可导致Tie2磷酸化增加、Tie2介导的信号传导增加以及血管稳定性增强。HPTP-β(VE-PTP)的抑制剂是Tie2激活剂。例如，结合HPTP-β(VE-PTP)的化合物、抑制剂、抗体、抗体片段、变体或衍生物可以促进Tie2磷酸化，从而激活Tie2下游信号传导，并促进血管稳定性。
通过上述过程，HPTP-β(VE-PTP)活性可导致例如以血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症。例如，HPTP-β(VE-PTP)活性可导致血管病症、眼部病症、癌症、肾脏病症、糖尿病并发症和其他病症。HPTP-β(VE-PTP)活性的抑制可以减轻此类病症。
VEGF和血管稳定性
血管内皮生长因子(VEGF)主要存在于内皮细胞中，并与许多疾病的病理性新血管形成有关。VEGF是胱氨酸结生长因子超家族、PDGF家族和VEGF家族的成员。VEGF可以充当促血管生成因子。VEGF家族由VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和胎盘生长因子(PGF)组成。存在九种VEGF-A同种型：VEGF121、VEGF145、VEGF148、VEGF162、VEGF165、VEGF165b、VEGF183、VEGF189和VEGF206。
VEGF是一种低氧调节的基因，并且VEGF水平在低氧或缺血性病况中增加。VEGF是VEGF受体(VEGFR)的激动剂。VEGFR是受体酪氨酸激酶；VEGF与VEGFR的结合可导致受体的磷酸化，随后导致下游信号转导物的磷酸化。VEGFR介导的信号传导可导致异常的血管发生、血管生成和血管通透性，从而导致病理性血管不稳定。因此，VEGF的抑制可导致VEGFR介导的信号传导减少和血管稳定性增强。例如，结合VEGF的抑制剂、抗体、抗体片段、变体或其衍生物可以减少VEGFR连接，从而减少VEGFR介导的信号传导，并促进血管稳定性。结合VEGF的药剂的非限制性实例包括阿柏西普——一种重组蛋白，其包含与人IgG1的Fc部分融合的人VEGF受体1和2的VEGF结合部分；brolucizumab——一种人源化单链抗体片段(scFv)；RTH258——一种人源化单链抗体片段(scFv)；雷珠单抗——一种人源化单克隆抗体片段(Fab)；贝伐珠单抗——一种人源化单克隆抗体；康柏西普(conbercept)——一种重组融合蛋白，其包含与人IgG1的Fc部分融合的来自VEGF受体1和2的胞外域；Abicipar——一种设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)；MP0112——一种DARPin；MP0250——一种DARPin；CT-322——一种adnectin；和PRS-050——一种anticalin。
通过上述过程，VEGF可导致例如以血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症。例如，VEGF可导致血管病症、眼部病症、癌症、肾脏病症、糖尿病并发症和其他病症。例如，眼睛的局部缺血可导致VEGF产生增加，从而导致视网膜中的血管渗漏和病理性新血管形成。VEGFR介导的信号传导的抑制可减轻此类病症。
受体酪氨酸激酶(RTK)和受体酪氨酸激酶激动剂
受体酪氨酸激酶(RTK)是参与细胞生长、分化和存活的调节的细胞表面受体。激动剂与RTK的结合可导致相邻的RTK彼此缔合，从而形成二聚体。二聚化可引起交叉磷酸化——二聚体中的每个RTK将另一个RTK上的多个酪氨酸残基磷酸化。一旦被交叉磷酸化，RTK的细胞质尾可以启动信号转导途径，例如，通过充当各种细胞内蛋白质的停靠平台。RTK信号传导可导致细胞中基因转录和表达的变化。
RTK的非限制性实例包括AATK、AATYK、AATYK1、AATYK2、ACH、ALK、ARK、AXL、BDB、BDB1、BEK、BFGFR、BREK、Brt、CAK、CCK4、CD115、CD117、CD135、CD136、CD140a、CD140b、CD167、CD202b、CD220、CD221、CD246、CD309、CD331、CD332、CD333、CD334、CDHF12、CDHR16、CDw136、CEK、CEK2、CEK3、c-Eyk、CFD1、C-FMS、C-Kit、cprk、c-ros-1、CSF1R、CSFR、D3S3195、DDR1、DDR2、DFNB97、DKFZp761P1010、Dtk、ECT1、EDDR1、EGFR、EphA10、EphA1-8、EphB1、EphB2、EphB3、EphB4、EphB6、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Etk-2、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、FLG、FLK1、FLK2、FLT、FLT1、FLT2、FLT3、FLT4、FMS、GAS9、H2、H3、H4、H5、HGFR、HSCR1、IGF1R、IGFIR、IGFR、INSR、INSRR、IRR、JKT5A、JTK11、JTK12、JTK13、JTK14、JTK2、JTK4、JTK5、JWS、KAL2、KDR、KGFR、KIAA0641、KIAA1079、KIAA1883、KIT、KPI2、K-SAM、LMR1、LMR2、LMR3、LMTK1、LMTK2、LMTK3、LTK、MCF3、MEN2A、MEN2B、Mer、MERTK、MET、MGC18216、MST1R、MTC、MTC1、MTRK1、MuSK、NEP、NOK、N-SAM、NTRK2、NTRK3、NTRK4、NTRKR1、NTRKR2、PBT、PCL、PDGFR、PDGFR1、PDGFR2、PDGFRA、PDGFR-alpha、PDGFRB、PDGFR-beta、PPP1R100、PPP1R101、PPP1R77、PTC、PTK3A、PTK7、PTK8、RCCP2、Rek、RET、RET51、RON、ROR1、ROR2、ROS、ROS1、RP38、RSE、RTK6、RYK、Ryk、RYK1、SCFR、Sky、STK、STYK1、SuRTK106、TEK、TIE1、TIE2、Tif、TK14、TK25、TKT、TRK、TrkA、TrkB、TrkC、TYK1、TYKLM3、TYRO10、Tyro12、Tyro3、Tyro7、UFO、VEGFR、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、VMCM和VMCM1。
RTK激动剂的非限制性实例包括VEGF、Ang1、Ang2、BDNF、EGF、FGF、HGF、IGF、胰岛素、MSP、NGF、NT-3和PDGF。
抗体和抗原结合化合物
基本的四链抗体单元包含两个相同的重链(H)多肽序列和两个相同的轻链(L)多肽序列。每条重链可包含一个N末端可变(VH)区和三个或四个C末端恒定(CH1、CH2、CH3和CH4)区。每条轻链可包含一个N末端可变(VL)区和一个C末端恒定(CL)区。轻链可变区与重链可变区对齐，并且轻链恒定区与重链恒定区CH1对齐。重链可变区和轻链可变区的配对一起形成单个抗原结合位点。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接。取决于重链同种型，两条重链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条重链和轻链还包含规律间隔的链内二硫键。重链的C末端恒定区包含抗体的Fc区，其例如通过与Fc受体或补体蛋白的相互作用来介导效应物功能。图1提供了基本四链抗体单元的简单的代表性示意图；轻链序列由“SEQ A”表示。重链序列由“SEQ B”表示，-S-S-表示二硫键，N和C分别表示N末端和C末端。
基于恒定区的氨基酸序列，可以将轻链命名为κ或λ。基于恒定区的氨基酸序列，可以将重链命名为α、δ、ε、γ或μ。基于重链，抗体被分为五个免疫球蛋白类别或同种型。IgA包含α重链，IgD包含δ重链，IgE包含ε重链，IgG包含γ重链，而IgM包含μ重链。IgG、IgD和IgE类别的抗体包含上述四链单元的单体(两条重链和两条轻链)，而IgM和IgA类别的抗体可包含四链单元的多聚体。根据重链恒定区在序列和功能上的差异，将α和γ类别进一步分为亚类。人类表达的IgA和IgG的亚类包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
恒定区最少参与抗原结合。相反，恒定区可以介导各种效应物功能。例如，由于与不同Fc受体和/或补体蛋白的相互作用，不同的IgG同种型或亚类可与不同的效应物功能或治疗特性相关。例如，包含与激活性Fc受体接合的Fc区的抗体可以参与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、补体依赖性细胞毒性(CDC)、通过基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)诱导信号传导以及细胞因子分泌的诱导。例如，包含与抑制性Fc受体接合的Fc区的抗体可以通过基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序(ITIM)诱导信号传导。
不同的抗体亚类具有引发免疫效应物功能的不同能力。例如，IgG1和IgG3可以有效地募集补体以激活CDC，IgG2引发最小的ADCC。IgG4具有较小的触发免疫效应物功能的能力。恒定区的修饰也可影响抗体特性，例如，Fc受体连接的增强或降低，ADCC的增强或降低，ADCP的增强或降低，CDC的增强或降低，通过ITAM的信号传导的增强或降低，细胞因子诱导的增强或降低，通过ITIM的信号传导的增强或降低，半衰期的延长或缩短，或抗原与Fc受体的共接合的增强或降低。修饰可包括，例如，氨基酸突变，改变翻译后修饰(例如糖基化)，组合来自不同同种型或亚类的结构域，或其组合。
本公开的化合物或抗体可包含恒定区或Fc区，这些区域被选择或修饰以提供合适的抗体特征，例如，用于治疗本文公开的疾病或病况的合适的特性。在一些实施方案中，IgG1可用来例如促进免疫活化效应物功能(例如，ADCC、ADCP、CDC、ITAM信号传导、细胞因子诱导或其组合，以用于治疗癌症)。在一些实施方案中，例如，在需要抗体的拮抗性质而不存在免疫效应物功能的情况下(例如，用于治疗眼部病症)的情况下，可以使用IgG4。
在表1中提供了抗体修饰及其效果的非限制性实例。
可变(V)区介导抗原结合并限定特定抗体对抗原的特异性。可变区包含被称为框架区的相对不变的序列和高变区，高变区在具有不同结合特异性的抗体之间的序列差异很大。每个抗体重链或轻链的可变区包含由三个高变区隔开的四个框架区。重链和轻链的可变区以将高变区紧密结合在一起以形成抗原结合位点的方式折叠。四个框架区主要采取β折叠构型，而三个高变区形成环，这些环连接β折叠结构，在一些情况下形成β折叠结构的一部分。
在高变区内有主要决定抗体的结合特异性的氨基酸残基。包含这些残基的序列被称为互补决定区(CDR)。抗体的一个抗原结合位点包含六个CDR，三个在轻链的高变区内，三个在重链的高变区内。轻链中的CDR被命名为L1、L2和L3，而重链中的CDR被命名为H1、H2和H3。CDR也可以分别被指定为LCDR1、LCDR2、LCDR3、HCDR1、HCDR2和HCDR3。每个CDR对抗原结合的贡献因抗体而异。CDR的长度可以不同。例如，CDR的长度通常为5至14个残基，但是存在短至0个残基或长至25个残基或更长的CDR。
有若干方法用于预测或指定CDR序列。这些方法可以使用不同的编号系统，例如，因为序列插入和缺失被不同地编号。
通过比对有限数目的抗体序列并确定最可变残基的位置，开发了Kabat方法。基于比对，为可变区中的残基引入了编号方案。该编号方案可用来确定标记每个CDR的开始和结束的位置。Kabat编号系统的一次迭代使用以下残基位置确定轻链可变区中的CDR：残基24-34附近的LCDR1；残基50-56附近的LCDR2；和残基89-97附近的LCDR3。Kabat编号系统的一次迭代使用以下残基位置确定重链可变区中的CDR：残基31-35附近的HCDR1；残基50-65附近的HCDR2；和残基95-102附近的HCDR3。
基于对三维抗体结构的分析，开发了Chothia方法。分析确定，基于CDR和侧翼框架区关键位置处某些残基的存在，高变环采取了受限的一组构象。该方法使用与Kabat方法类似的编号方案，但是对插入和缺失进行不同的编号。Chothia编号系统的一次迭代使用以下残基位置确定轻链可变区中的CDR：残基24-34附近的LCDR1；残基50-56附近的LCDR2；和残基89-97附近的LCDR3。Chothia编号系统的一次迭代使用以下残基位置确定重链可变区中的CDR：残基26-34附近的HCDR1；残基52-56附近的HCDR2；和残基95-102附近的HCDR3。
IMGT方法(国际ImMunoGeneTics数据库)是通过整合框架区和CDR的现有定义、结构数据以及来自抗体可变区序列比对的数据而开发的。这种整合导致在框架区中的保守残基的鉴定，这些保守残基可用作鉴定CDR的参考点。可变区中的保守残基的实例包括在大约残基23(在框架区1中)处的半胱氨酸、在大约残基41(在框架区2中)处的色氨酸、在大约残基89(在框架区3中)处的疏水氨基酸、在大约残基104(在构架区3中)处的半胱氨酸和在大约残基118(在框架区4中)处的苯丙氨酸或色氨酸。通过使用基于计算比对的算法，可以在编码目的抗体可变区的序列中鉴定CDR。
IMGT编号方法始终为保守的氨基酸分配相同的编号，但允许CDR和框架区的长度发生变化。因此，残基的IMGT编号不一定是连续的。通过IMGT方法确定的CDR的长度可以变化。例如，LCDR1或HCDR1可以是约5至约12个氨基酸，LCDR2或HCDR2可以是约0至约10个氨基酸，而LCDR3或HCDR3可以是约5至约91个氨基酸。
基于可获得的抗体-抗原复合物的多个结构比对，开发了Paratome方法。发现与抗原结合的结构位置在所检查的抗体之间是相似的，并且数据集的抗体序列用抗原结合区(ABR，类似于CDR)进行注释。查询序列中的ABR可以使用计算工具进行确定，其首先将查询序列针对具有已解析的抗体-抗原结构的抗体进行比对，然后基于该比对来推断ABR的位置。结构已解析的抗体也可以使用结构比对方法而不是基于序列的比对方法来确定ABR。
CDR内的残基子集与抗原接触。这些与抗原接触的残基可以被称为特异性决定残基(SDR)。然而，除SDR以外的其他残基可通过帮助维持结合位点的构象来促进结合活性。抗体中SDR的数目可以根据被识别的抗原的大小和类型而不同，例如，在CDR内可以发现0-14个SDR。SDR可以富含一些残基，如酪氨酸、丝氨酸、色氨酸和天冬酰胺。
单克隆抗体可从基本上均质的抗体群体中获得，即除了可能少量存在的天然存在的突变外，构成该群体的各个抗体是相同的。与包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制品相反，每种单克隆抗体针对单个表位。
本文的化合物可以是单克隆抗体，例如，其中重链和/或轻链的部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的嵌合抗体，而链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体或这类抗体的抗原结合片段中的相应序列相同或同源。
抗体片段或抗原结合片段可包含抗体的一部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的非限制性实例包括Fab、Fab'、F(ab′)2、Fab缀合物的二聚体和三聚体、Fv、scFv、小抗体、双抗体、三抗体和四抗体，以及线性抗体。Fab和Fab′是抗原结合片段，其可包含通过二硫键与轻链的VL和CL结构域连接的重链的VH和CH1结构域。F(ab’)2可包含通过二硫键连接的两个Fab或Fab’。Fv可包含通过非共价相互作用保持在一起的VH和VL结构域。scFv(单链可变片段)是可包含通过肽连接体连接的VH和VL结构域的融合蛋白。操纵VH和VL结构域的方向以及连接体长度可用来创建不同形式的分子，这些分子可以是单体的、二聚的(双抗体)、三聚的(三抗体)或四聚的(四抗体)。小抗体是可组装成二价二聚体的scFv-CH3融合蛋白。
表位的非限制性实例包括氨基酸、糖、脂质、磷酰基和磺酰基。表位可具有特定的三维结构特性和/或特定的电荷特性。表位可以是构象的或线性的。
为了人类给药，可以通过人源化过程进一步优化非人类物种产生的单克隆抗体，以降低免疫原性的可能性，同时保留靶标特异性。人源化过程涉及将人类DNA整合到产生分离抗体的基因的遗传序列中。重组DNA被克隆并在细胞中表达，以供大规模生产新人源化的抗体。
人源化抗体的一个实例是修饰的嵌合抗体。如上所述，可以产生嵌合抗体。嵌合抗体进一步在CDR之外突变，以用同源人序列替代可变区中的非人序列。人源化抗体的另一个实例是CDR移植的抗体，其中将非人CDR序列引入人抗体支架的人重链和轻链可变序列中以替换相应的人CDR序列。
可以在哺乳动物细胞、生物反应器或转基因动物如小鼠、鸡、绵羊、山羊、猪或狨猴中产生人源化抗体。转基因动物可将大部分产生人抗体的基因组插入动物的基因组中。
除了抗体和抗体片段外，其他抗原结合化合物还可以结合靶分子。非抗体衍生的抗原结合化合物的非限制性实例包括锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)、亲和体(affibodies)、avimers、adnectins、anticalins、Fynomers、Kunitz结构域、knottins、β-发夹模拟物，及其受体和衍生物，例如，VEGF受体，或人VEGF受体1和2的VEGF结合部分。
经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)可以是基于锚蛋白重复蛋白的蛋白质支架。DARPin可包含一个或多个锚蛋白重复，其包含共有的序列和/或结构基序。当彼此相比时，单独的锚蛋白重复可包含共有的序列和/或结构基序，尽管包含突变、置换、添加和/或缺失。DARPin可包含例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或更多个锚蛋白重复。DARPin可包含N末端封端重复、一个或多个内部锚蛋白重复和C末端封端重复。每个锚蛋白重复可包含框架残基和蛋白质相互作用残基。框架残基可有助于结构或折叠拓扑学，例如锚蛋白重复的结构或与相邻锚蛋白重复的相互作用。蛋白质相互作用残基可例如通过与靶分子的直接相互作用或通过稳定在允许结合的构象中的直接相互作用残基来促进靶分子的结合。
本公开中结合靶分子的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以例如小于约500nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM、小于约9pM、小于约8pM、小于约7pM、小于约6pM、小于约5pM、小于约4pM、小于约3pM、小于约2pM、小于约1pM、小于约900fM、小于约800fM、小于约700fM、小于约600fM、小于约500fM、小于约400fM、小于约300fM、小于约200fM、小于约100fM、小于约90fM、小于约80fM、小于约70fM、小于约60fM、小于约50fM、小于约40fM、小于约30fM、小于约20fM或小于约10fM的KD与靶标结合。
在一些实施方案中，本公开中结合靶分子的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以例如约10fM至约500nM、约30fM至约500nM、约30fM至约400nM、约30fM至约300nM、约30fM至约200nM、约30fM至约100nM、约30fM至约90nM、约30fM至约80nM、约30fM至约70nM、约30fM至约60nM、约30fM至约50nM、约30fM至约40nM、约30fM至约30nM、约30fM至约20nM、约30fM至约10nM、约30fM至约9nM、约30fM至约8nM、约30fM至约7nM、约30fM至约6nM、约30fM至约5nM、约30fM至约4nM、约30fM至约3nM、约30fM至约2nM、约30fM至约1nM、约30fM至约900pM、约30fM至约800pM、约30fM至约700pM、约30fM至约600pM、约30fM至约500pM、约30fM至约400pM、约30fM至约300pM、约30fM至约200pM、约30fM至约100pM、约30fM至约90pM、约30fM至约80pM、约30fM至约70pM、约30fM至约60pM、约30fM至约50pM、约30fM至约40pM、约30fM至约30pM、约30fM至约20pM、约30fM至约10pM、约30fM至约1pM、约30fM至约900fM、约30fM至约800fM、约30fM至约700fM、约30fM至约600fM、约30fM至约500fM、约30fM至约400fM、约30fM至约300fM、约30fM至约200fM、约30fM至约100fM、约30fM至约500nM、约30fM至约400nM、约30fM至约300nM、约30fM至约200nM、约30fM至约100nM、约30fM至约90nM、约30fM至约80nM、约30fM至约70nM、约30fM至约60nM、约30fM至约50nM、约30fM至约40nM、约30fM至约30nM、约30fM至约20nM、约30fM至约10nM、约30fM至约9nM、约30fM至约8nM、约30fM至约7nM、约30fM至约6nM、约30fM至约5nM、约30fM至约4nM、约30fM至约3nM、约30fM至约2nM、约30fM至约1nM、约30fM至约900pM、约30fM至约800pM、约30fM至约700pM、约30fM至约600pM、约30fM至约500pM、约30fM至约400pM、约30fM至约300pM、约30fM至约200pM、约30fM至约100pM、约30fM至约90pM、约30fM至约80pM、约30fM至约70pM、约30fM至约60pM、约30fM至约50pM、约30fM至约40pM、约30fM至约30pM、约30fM至约20pM、约30fM至约10pM、约1pM至约500nM、约1pM至约400nM、约1pM至约300nM、约1pM至约200nM、约1pM至约100nM、约1pM至约90nM、约1pM至约80nM、约1pM至约70nM、约1pM至约60nM、约1pM至约50nM、约1pM至约40nM、约1pM至约30nM、约1pM至约20nM、约1pM至约10nM、约1pM至约9nM、约1pM至约8nM、约1pM至约7nM、约1pM至约6nM、约1pM至约5nM、约1pM至约4nM、约1pM至约3nM、约1pM至约2nM、约1pM至约1nM、约1pM至约900pM、约1pM至约800pM、约1pM至约700pM、约1pM至约600pM、约1pM至约500pM、约1pM至约400pM、约1pM至约300pM、约1pM至约200pM、约1pM至约100pM、约1pM至约90pM、约1pM至约80pM、约1pM至约70pM、约1pM至约60pM、约1pM至约50pM、约1pM至约40pM、约1pM至约30pM、约1pM至约20pM、约1pM至约10pM、约100pM至约500nM、约100pM至约400nM、约100pM至约300nM、约100pM至约200nM、约100pM至约100nM、约100pM至约90nM、约100pM至约80nM、约100pM至约70nM、约100pM至约60nM、约100pM至约50nM、约100pM至约40nM、约100pM至约30nM、约100pM至约20nM、约100pM至约10nM、约100pM至约9nM、约100pM至约8nM、约100pM至约7nM、约100pM至约6nM、约100pM至约5nM、约100pM至约4nM、约100pM至约3nM、约100pM至约2nM、约100pM至约1nM、约100pM至约900pM、约100pM至约800pM、约100pM至约700pM、约100pM至约600pM、约100pM至约500pM、约100pM至约400pM、约100pM至约300pM或约100pM至约200pM的KD与靶标结合。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约500fM至约500pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约500pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约60pM至约500pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约100pM至约500pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约300pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约200pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约120pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约70pM的KD结合HPTP-β(VE-PTP)。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约900pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约600pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约200pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约30pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约40pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约1pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约200fM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约900pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约600pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约200pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约30pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约1pM至约40pM的KD结合VEGF。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约2pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约35fM至约200fM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约100fM至约2pM的KD结合VEGF。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约20pM至约1nM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约20pM至约800pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约20pM至约350pM的KD结合VEGF。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约30fM至约700pM的KD结合VEGF。
在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约40fM至约520pM的KD结合VEGF。在一些实施方案中，本公开的化合物、抗体、其片段或衍生物或其他化合物可以以约40fM至约110pM的KD结合VEGF。
多价多特异性化合物
抗原结合化合物可以组合起来生成多价和/或多特异性化合物。这样的多价和/或多特异性化合物可能比单独施用的母体化合物具有优势。这些优势可包括，例如，更简单的给药方案、受试者体内更长的半衰期和紧密结合靶抗原的能力。
可以通过多种方法产生多特异性抗体。在一种方法中，例如通过将两个IgG抗体单元化学偶合成缀合物，可以化学偶合单特异性抗体或其衍生物。
在另一种方法中，可以使用克隆技术将额外的抗原结合域附加到常规IgG抗体或其衍生物上。额外的抗原结合域可以是，例如，单可变域(sVD)、单链可变片段(scFv)、单链Fab、肽、锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz域、knottin、β-发夹模拟物、四聚聚环氧乙烷成簇肽、衍生自一个或多个受体(例如VEGF受体，或人VEGF受体1和2的VEGF结合部分)的肽或其衍生物。
额外的抗原结合域(例如，sVD、scFv、单链Fab、肽、锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、DARPin、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物，四聚聚环氧乙烷成簇肽或衍生自一个或多个受体的肽)可以例如经由肽连接体附加至IgG或Fab的轻链和/或重链的N或C末端。在一些实施方案中，scFv可以附加至IgG的重链的C末端，以提供四价双特异性抗体。scFv可以附加至IgG的轻链的C末端，以提供四价双特异性抗体。scFv可以附加至IgG的轻链的C末端和重链的C末端，以提供六价双特异性抗体。在一些实施方案中，DARPin可以附加至IgG的重链的C末端，以提供四价双特异性抗体。DARPin可以附加至IgG的轻链的C末端，以提供四价双特异性抗体。DARPin可以附加至IgG的轻链的C末端和重链的C末端，以提供六价双特异性抗体。通过克隆技术产生的多特异性抗体的其他实例包括：(i)DVD-IgTM(双可变域免疫球蛋白，第二个VH和VL分别与HC和LC的N末端的串联连接)，(ii)Tandemab(2个VH-CH1与常见LC的组合串联连接)，(iii)DNL(分别与来自PKA(蛋白激酶A)的DDD(二聚化和停靠域)和来自A-激酶锚定蛋白(AKAP)的AD(锚定域)锚定的2个抗体或抗体片段的天然缔合)，(iv)LUZ-Y(拴系在HC的C末端的亮氨酸拉链，随后通过蛋白水解而去除)，(v)2合1的IgG(能够双重识别的相同的LC和HC)，以及(vi)mAb2(IgG的CH3结构域中的工程化环，以获得第二特异性)。
另一类多特异性抗体的特征可在于具有可变域或scFv作为结构单元的结构。这类多特异性抗体的非限制性实例包括串联接合的两个VH结构域、双抗体(含有2条多肽链的异二聚体，这些多肽链以VH-VL或VL-VH的顺序编码VLA-VHB和VHA-VLB，具有5个氨基酸的连接体)、dsDbs(在同一抗体的VL与VH之间的链间二硫键)、DARTs(双亲和性重新靶向，2个VL之间的链间二硫键)、scDbs(单链双抗体)、tandAbs(通过它们之间的柔性连接体的双抗体二聚体)和通过可调节的连接体串联连接的2个scFv。
另一类多特异性抗体可包含不同的抗原结合片段，同时保留基本的IgG结构。这样的抗体可包含例如两个不同的重链和/或两个不同的轻链。可以使用各种技术来促进所需轻链和重链组合的配对，而不是随机链缔合。这类技术的非限制性实例包括使用共同的轻链、正交Fab界面(在一个Fab中的LC和HC界面处引入互补突变，而对另一Fab没有变化)、CrossMab(其中一个Fab VH或CH1结构域可以用配偶体VL或CL结构域切换，而其他Fab则未受影响)，并用单链抗原结合域替换Fab。进一步的实例包括工程化策略，其可以向CH3结构域中引入突变，以基于空间或静电互补性促进异二聚化。“孔内旋钮(knobs in holes)”方法可涉及通过在一条重链上用大体积色氨酸残基代替位置366处的苏氨酸而创建“旋钮”，并通过配偶体重链上的三重突变(T366S、L368A和Y407V)形成相应的“孔”。另一种方法可涉及在CH3中创建交替的人IgG和IgA片段，以提供所谓的SEEDbody(链交换工程化结构域)来指导重链异二聚化。
多特异性抗体的非限制性示意图在图2-15中提供。
图2提供了有序列附加至重链C末端的四价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图3提供了有序列附加至轻链C末端的四价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图4提供了有序列附加至重链和轻链C末端的六价双特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”和“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图5提供了有序列附加至重链和轻链C末端的六价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”表示。连接体序列由“SEQ C”和“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ D”和“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图6提供了具有两个不同的重链序列和两个不同的轻链序列的二价双特异性抗体的示意图。轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图7提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一条轻链C末端上的序列的三价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图8提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一条重链C末端上的序列的三价三特异性抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ F”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图9提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。
附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图10提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个重链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图11提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及顺式附加到一个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图12提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及反式附加到一个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的四价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”和“SEQ F”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ G”和“SEQ H”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图13提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到两个重链C末端和一个轻链C末端上的序列的五价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQ F”和“SEQ G”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ H”、“SEQ I”和“SEQ J”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图14提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到一个重链C末端和两个轻链C末端上的序列的五价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQ D”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQ F”和“SEQ G”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ H”、“SEQ I”和“SEQ J”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
图15提供了具有两个不同的重链序列、两个不同的轻链序列以及附加到重链和轻链C末端上的序列的六价抗体的示意图。IgG同种型抗体单元的轻链序列由“SEQ A”和“SEQD”表示。IgG同种型抗体单元的重链序列由“SEQ B”和“SEQ C”表示。连接体序列由“SEQ E”、“SEQ F”、“SEQ G”和“SEQ H”表示。附加的抗原结合域序列由“SEQ I”、“SEQ J”、“SEQ K”和“SEQ L”表示。N和C分别表示N末端和C末端。-S-S-表示二硫键。
对例如HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与对例如RTK激动剂具有特异性的抗原结合化合物组合，以提供可以与HPTP-β(VE-PTP)和RTK激动剂均结合的多价多特异性化合物。例如，对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与对VEGF、Ang1、Ang2、BDNF、EGF、FGF、HGF、IGF、胰岛素、MSP、NGF、NT-3、PDGF或其任意组合具有特异性的抗原结合化合物组合，以提供可以与HPTP-β(VE-PTP)和RTK激动剂均结合的多价多特异性化合物。
对例如HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与对例如VEGF具有特异性的抗原结合化合物组合，以提供可以与HPTP-β(VE-PTP)和VEGF均结合的多价多特异性化合物。与HPTP-β(VE-PTP)和VEGF均结合的化合物可以抑制HPTP-β(VE-PTP)，激活Tie2，抑制VEGF与VEGFR的结合，并抑制VEGFR信号传导。
衍生自阿柏西普(包含人VEGF受体1和2的VEGF结合部分的重组蛋白)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，衍生自阿柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。衍生自阿柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。衍生自阿柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
衍生自brolucizumab(VEGF的人源化单链抗体片段(scFv)抑制剂，其与VEGF的受体结合位点结合)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，来自brolucizumab的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。衍生自brolucizumab的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。衍生自brolucizumab的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
衍生自雷珠单抗(人源化单克隆抗体片段(Fab)，其结合并抑制VEGF的活性)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，可以将来自雷珠单抗的序列克隆到scFv中，并且可以将雷珠单抗衍生的scFv与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。雷珠单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。雷珠单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
衍生自贝伐珠单抗(人源化单克隆抗体，其结合并抑制VEGF的活性)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，可以将来自贝伐珠单抗的序列克隆到scFv中，并且可以将贝伐珠单抗衍生的scFv与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。贝伐珠单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。贝伐珠单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
衍生自康柏西普(包含VEGF受体1和2的VEGF结合部分的重组蛋白)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，衍生自康柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。衍生自康柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。衍生自康柏西普的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
衍生自abicipar(与VEGF结合的DARPin)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，衍生自abicipar的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。衍生自abicipar的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。衍生自abicipar的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与DARPin或其氨基酸序列，例如包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列组合。包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
多VEGF特异性化合物可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，一个结合域(例如，阿柏西普衍生的序列)可以与抗HPTP-β(VE-PTP)抗体重链的C末端融合，而另一个结合域(例如，brolucizumab衍生的序列)可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体轻链的C末端融合，以提供六价三特异性抗体(图5)。
如果在基本的四链IgG抗体单元中使用不同的重链(例如，使用“孔内旋钮”方法)，则可以生成二价、三价、四价、五价或六价的，并且是单特异性、双特异性、三特异性、四特异性、五特异性或六特异性的抗体。
在一个非限制性实例中，抗体单元的一个臂可包含对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的CDR，而抗体单元的另一个臂可包含对VEGF具有特异性的CDR(图6)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，并且对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条轻链融合，以提供三价双特异性抗体(图7)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，并且对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，以提供三价双特异性抗体(图8)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，并且对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条轻链融合，并且对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与另一条轻链融合，以提供四价三特异性抗体(图9)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，并且对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与另一条重链融合，以提供四价三特异性抗体(图10)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，并且对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，并且对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与一条轻链顺式融合，以提供四价三特异性抗体(图11)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，并且对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与一条轻链反式融合，以提供四价三特异性抗体(图12)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与第二重链融合，并且对VEGF具有特异性的第三不同的结合域可以与一条轻链融合，以提供五价四特异性抗体(图13)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与一条轻链融合，并且对VEGF具有特异性的第三不同的结合域可以与另一条轻链融合，以提供五价四特异性抗体(图14)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，对VEGF具有特异性的结合域(例如，阿柏西普衍生的序列、brolucizumab衍生的序列、雷珠单抗衍生的序列或贝伐珠单抗衍生的序列)可以与一条重链融合，对VEGF具有特异性的第二不同的结合域可以与另一条重链融合，对VEGF具有特异性的第三不同的结合域可以与一条轻链融合，并且对VEGF具有特异性的第四结合域可以与另一条轻链融合，以提供六价五特异性抗体(图15)。
在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，一个结合域(例如，阿柏西普衍生的序列)可以与一条重链的C末端融合，并且第二结合域(例如，brolucizumab衍生的序列)与另一条重链的C末端融合，以提供四价三特异性抗体(图10)。在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，阿柏西普衍生的序列可以与一条轻链的C末端融合，并且brolucizumab衍生的序列与另一条轻链的C末端融合，以提供四价三特异性抗体(图9)。在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，阿柏西普衍生的序列可以与一条重链的C末端融合，并且brolucizumab衍生的序列与一条轻链的C末端融合，以提供四价三特异性抗体(图11、图12)。在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，阿柏西普衍生的序列可以与一条重链的C末端融合，brolucizumab衍生的序列可以与另一条重链的C末端融合，并且雷珠单抗衍生的序列可以与两条轻链的C末端融合，以提供六价四特异性抗体(图15)。在一个非限制性实例中，基本抗体单元的两个抗原结合片段可以均为HPTP-β(VE-PTP)特异性的，阿柏西普衍生的序列可以与一条重链的C末端融合，brolucizumab衍生的序列可以与另一条重链的C末端融合，雷珠单抗衍生的序列可以与一条轻链的C末端融合，并且贝伐珠单抗衍生的序列可以与另一条轻链的C末端融合，以提供六价五特异性抗体(图15)。
对例如HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与其他氨基酸序列组合，以提供多价多特异性化合物，例如，所述化合物增强Tie2活化，增强Tie2磷酸化，增强Tie2信号传导，减少VEGFR活化，减少VEGFR磷酸化，减少VEGFR信号传导，或其组合。
对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与胶原蛋白IV衍生的生物模拟肽，例如包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列组合。包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。包含SEQID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与Ang1模拟物，例如vasculotide组合。衍生自vasculotide的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。衍生自vasculotide的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。衍生自vasculotide的序列可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
对例如HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与对例如RTK具有特异性的抗原结合化合物组合，以提供可以与HPTP-β(VE-PTP)和RTK均结合的多价多特异性化合物。例如，对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物可以与对VEGFR(VEGFR2)具有特异性的抗原结合化合物组合，以提供可以与HPTP-β(VE-PTP)和VEGFR均结合的多价多特异性化合物。
与HPTP-β(VE-PTP)和VEGFR均结合的化合物可以抑制HPTP-β(VE-PTP)，激活Tie2，抑制VEGF与VEGFR的结合，并抑制VEGFR信号传导。
衍生自雷莫芦单抗(人源化单克隆抗体，其结合VEGFR2的胞外域并抑制VEGFR2信号传导)的序列可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，可以将来自雷莫芦单抗的序列克隆到scFv中，并且可以将雷莫芦单抗衍生的scFv与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的重链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图2)。雷莫芦单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链的C末端融合，以提供四价双特异性抗体(图3)。雷莫芦单抗衍生的scFv可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体的轻链和重链的C末端融合，以提供六价双特异性抗体(图4)。
增强Tie2活化、增强Tie2磷酸化、增强Tie2信号传导、减少VEGFR活化、减少VEGFR磷酸化、减少VEGFR信号传导或其组合的多种化合物可以与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗原结合化合物组合。例如，一个结合域(例如，brolucizumab衍生的序列)可以与抗HPTP-β(VE-PTP)抗体重链的C末端融合，而另一个结合域(例如，vasculotide衍生的序列)可以与HPTP-β(VE-PTP)特异性抗体轻链的C末端融合，以提供六价三特异性抗体(图5)。
本文公开的化合物、抗体或其衍生物可以具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个或更多个结构域。每个结构域可以调节、结合、拮抗、抑制或激活本文公开的任何靶标，例如磷酸酶、调节Tie2信号传导的磷酸酶、蛋白质酪氨酸磷酸酶、受体样蛋白质酪氨酸磷酸酶、Tie2调节剂、HPTP-β(VE-PTP)、HPTP-β(VE-PTP)的胞外域、HPTP-β(VE-PTP)的胞外域的第一FN3重复序列、激酶、酪氨酸激酶、受体酪氨酸激酶、受体酪氨酸激酶激活剂、受体酪氨酸激酶激动剂、生长因子、生长因子受体激活剂、生长因子受体激动剂、半胱氨酸结生长因子超家族成员、促血管生成因子、PDGF家族成员、VEGF受体、VEGF受体激动剂、VEGF家族成员、VEGF、VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PGF、VEGF121、VEGF145、VEGF148、VEGF162、VEGF165、VEGF165b、VEGF183、VEGF189或VEGF206。
抑制剂、激活剂、调节剂和结合剂
本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可包括化合物、重组蛋白、抗体、抗原结合片段、变体或其衍生物、Tie2-拟肽、四聚聚环氧乙烷成簇肽、胶原蛋白IV生物模拟肽、DARPin或其衍生物、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物或衍生自一个或多个受体的肽，它们是单独的或与另一种氨基酸序列或多种其他氨基酸序列组合。抑制剂、调节剂或结合剂可以经历修饰，例如酶切或翻译后修饰。
在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可通过干扰HPTP-β(VE-PTP)和Tie2的相互作用来抑制HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可通过稳定非活性构象的HPTP-β(VE-PTP)来抑制HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可通过促进HPTP-β(VE-PTP)的内化(例如，促进HPTP-β(VE-PTP)的胞吞和降解)来抑制HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可通过阻断激活HPTP-β(VE-PTP)的配体的结合来抑制HPTP-β(VE-PTP)。在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可通过调节HPTP-β(VE-PTP)的寡聚化来抑制HPTP-β(VE-PTP)。
在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可以与HPTP-β(VE-PTP)的显性失活同工型结合。显性失活同工型可对应于磷酸酶活性缺乏的HPTP-β(VE-PTP)形式，其可与内源HPTP-β(VE-PTP)竞争。
本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可包含多个HPTP-β(VE-PTP)结合位点。在一些实施方案中，HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可与两个HPTP-β(VE-PTP)分子同时结合，从而使这两个HPTP-β(VE-PTP)分子紧密靠近。在一些实施方案中，HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可与三个HPTP-β(VE-PTP)分子同时结合，从而使这三个HPTP-β(VE-PTP)分子紧密靠近。在一些实施方案中，HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可与四个HPTP-β(VE-PTP)分子同时结合，从而使这四个HPTP-β(VE-PTP)分子紧密靠近。
本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可以共价或非共价地与另一部分或媒介物缀合。部分或媒介物可以例如提供对另外的靶标的结合特异性，抑制降解，延长半衰期，增加吸收，降低毒性，降低免疫原性，并且/或者增加抑制剂、调节剂或结合剂的生物活性。可以与抑制剂、调节剂或结合剂缀合的部分的非限制性实例包括免疫球蛋白的Fc结构域、肽、脂质、碳水化合物、树状聚体、寡糖、胆固醇基团如类固醇，以及诸如聚乙二醇(PEG)、聚赖氨酸或葡聚糖等聚合物。
本公开的化合物可用于靶向HPTP-β(VE-PTP)以恢复Tie2活性。HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂因此可以是Tie2激活剂。在一些实施方案中，本公开的化合物可以启动或抑制HPTP-β(VE-PTP)或Tie2下游的信号传导级联，例如，Akt/PI3-K信号传导、Rac1信号传导、MAPK/Ras信号传导或NF-κB信号传导。
HPTP-β(VE-PTP)的抑制可导致血管稳定，这对于例如以血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症的治疗可能是有益的。例如，HPTP-β(VE-PTP)的抑制可能有益于血管病症、眼部病症、癌症、肾脏病症、糖尿病并发症和其他病症的治疗。在一些实施方案中，本公开的HPTP-β(VE-PTP)抑制剂、调节剂或结合剂可用来治疗例如糖尿病视网膜病变、非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)、青光眼、眼内压、眼水肿、眼出血、眼高压、眼部炎症、眼部新血管形成、眼部血管渗漏、视网膜灌注或视网膜病变。
本公开的Tie2激活剂、调节剂或结合剂可包括，例如，化合物、重组蛋白、肽、抗体、抗原结合片段、变体或其衍生物、血管生成素1重组蛋白、Ang1模拟物、Tie2激动剂、HPTP-β(VE-PTP)磷酸酶抑制剂、Tie2-拟肽、四聚聚环氧乙烷成簇肽、胶原蛋白IV生物模拟肽、DARPin或其衍生物、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物或衍生自一个或多个受体的肽，它们是单独的或与另一种氨基酸序列或多种其他氨基酸序列组合。激活剂、调节剂或结合剂可以经历修饰，例如酶切或翻译后修饰。
本公开的Tie2激活剂、调节剂或结合剂可以共价或非共价地与另一部分或媒介物缀合。部分或媒介物可以例如提供对另外的靶标的结合特异性，抑制降解，延长半衰期，增加吸收，降低毒性，降低免疫原性，并且/或者增加激活剂、调节剂或结合剂的生物活性。可以与激活剂、调节剂或结合剂缀合的部分的非限制性实例包括免疫球蛋白的Fc结构域、肽、脂质、碳水化合物、树状聚体、寡糖、胆固醇基团如类固醇，以及诸如聚乙二醇(PEG)、聚赖氨酸或葡聚糖等聚合物。
在一些实施方案中，本公开的化合物可以启动或抑制Tie2下游的信号传导级联，例如，Akt/PI3-K信号传导、Rac1信号传导、MAPK/Ras信号传导或NF-κB信号传导。
Tie2的激活可导致血管稳定，这对于例如以血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症的治疗可能是有益的。例如，Tie2的激活可能有益于眼部病症、癌症、肾脏病症、糖尿病并发症和其他病症的治疗。在一些实施方案中，本公开的Tie2激活剂、调节剂或结合剂可用来治疗糖尿病视网膜病变、非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)、青光眼、眼内压、眼水肿、眼出血、眼高压、眼部炎症、眼部新血管形成、眼部血管渗漏、视网膜灌注或视网膜病变。
本公开的VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可包括化合物、重组蛋白、肽、抗体、抗原结合片段、其变体或衍生物、DARPin或其衍生物、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物、四聚聚环氧乙烷成簇肽、胶原蛋白IV生物模拟肽或衍生自一个或多个受体(例如，VEGF受体，或人VEGF受体1和2的VEGF结合部分)的肽，它们是单独的或者与另一种氨基酸序列或多个其他氨基酸序列组合。抑制剂、调节剂或结合剂可以经历修饰，例如酶切或翻译后修饰。
本公开的VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可包含多个VEGF结合位点。在一些实施方案中，VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可与两个VEGF分子同时结合，从而使这两个VEGF分子紧密靠近。在一些实施方案中，VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可与三个VEGF分子同时结合，从而使这三个VEGF分子紧密靠近。在一些实施方案中，VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可与四个VEGF分子同时结合，从而使这四个VEGF分子紧密靠近。
本公开的VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可以共价或非共价地与另一部分或媒介物缀合。部分或媒介物可以例如提供对另外的靶标的结合特异性，抑制降解，延长半衰期，增加吸收，降低毒性，降低免疫原性，并且/或者增加抑制剂、调节剂或结合剂的生物活性。可以与抑制剂、调节剂或结合剂缀合的部分的非限制性实例包括免疫球蛋白的Fc结构域、肽、脂质、碳水化合物、树状聚体、寡糖、胆固醇基团如类固醇，以及诸如聚乙二醇(PEG)、聚赖氨酸或葡聚糖等聚合物。
本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可包括化合物、重组蛋白、抗体、抗原结合片段、变体或其衍生物、四聚聚环氧乙烷成簇肽、胶原蛋白IV生物模拟肽、DARPin或其衍生物、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物或衍生自一个或多个受体的肽，它们是单独的或与另一种氨基酸序列或多种其他氨基酸序列组合。抑制剂、调节剂或结合剂可以经历修饰，例如酶切或翻译后修饰。
本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可包含多个VEGFR结合位点。在一些实施方案中，VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可与两个VEGFR分子同时结合，从而使这两个VEGFR分子紧密靠近。在一些实施方案中，VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可与三个VEGFR分子同时结合，从而使这三个VEGFR分子紧密靠近。在一些实施方案中，VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可与四个VEGFR分子同时结合，从而使这四个VEGFR分子紧密靠近。
本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可以共价或非共价地与另一部分或媒介物缀合。部分或媒介物可以例如提供对另外的靶标的结合特异性，抑制降解，延长半衰期，增加吸收，降低毒性，降低免疫原性，并且/或者增加抑制剂、调节剂或结合剂的生物活性。可以与抑制剂、调节剂或结合剂缀合的部分的非限制性实例包括免疫球蛋白的Fc结构域、肽、脂质、碳水化合物、树状聚体、寡糖、胆固醇基团如类固醇，以及诸如聚乙二醇(PEG)、聚赖氨酸或葡聚糖等聚合物。
在一些实施方案中，本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可通过稳定非活性构象的VEGFR来抑制VEGFR。在一些实施方案中，本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可通过促进VEGFR的内化(例如，促进HVEGFR的胞吞和降解)来抑制VEGFR。在一些实施方案中，本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可通过阻断激活VEGFR的配体的结合(例如，阻断VEGFR的VEGF连接)来抑制VEGFR。在一些实施方案中，本公开的VEGFR抑制剂、调节剂或结合剂可通过调节VEGFR的寡聚化(例如，防止或降低VEGFR的二聚化或寡聚化的可能性)来抑制VEGFR。
本公开的化合物可用于干扰VEGF和VEGFR的相互作用，从而减少VEGFR的磷酸化和下游信号传导。在一些实施方案中，VEGF的抑制可减少异常的血管生成、血管发生或血管透化，从而减少病理性血管不稳定。在一些实施方案中，VEGF的抑制可能有益于治疗以血管不稳定、血管生成、新血管形成、血管渗漏和/或水肿为特征的病症。例如，VEGF的抑制可能有益于血管病症、眼部病症、癌症、肾脏病症、糖尿病并发症和其他病症的治疗。在一些实施方案中，本公开的VEGF抑制剂、调节剂或结合剂可用来治疗糖尿病视网膜病变、非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)、青光眼、眼内压、眼水肿、眼出血、眼高压、眼部炎症、眼部新血管形成、眼部血管渗漏、视网膜灌注或视网膜病变。在一些实施方案中，VEGF的抑制可减轻癌症。
方法
Tie2信号传导的促进和VEGFR信号传导的抑制可导致血管稳定，这可能有益于治疗具有血管组成部分的病况。本文公开的化合物可用来治疗例如以脉管系统改变为特征的疾病、以Tie2活化减少为特征的疾病或以VEGF参与发病机理为特征的疾病，无论是进行性的还是非进行性的、急性的还是慢性的。
在一些实施方案中，本文公开的化合物可用来治疗眼部病症。本文公开的化合物可用来治疗例如年龄相关性黄斑变性(干型)、年龄相关性黄斑变性(湿型)、特应性角膜炎、Bests病、睑炎、视力模糊、脉络膜新血管形成、慢性视网膜脱离、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、脉络膜炎、结膜炎、角膜接触镜过度磨损、角膜移植物新血管形成、角膜移植物排斥、角膜新血管形成、囊样黄斑水肿、糖尿病黄斑水肿、复视、糖尿病视网膜病变、与发红相关的疾病(角的新血管形成)、由纤维血管或纤维组织异常增生引起的疾病，包括所有形式的增生性玻璃体视网膜病变、Eales病、眼内压升高、流行性角结膜炎、飞蚊症(floaters)、青光眼、中央凹中心500μm内的黄色硬渗出物伴邻近的视网膜增厚、高粘稠度综合征、引起脉络膜炎的感染、引起视网膜炎的感染、虹膜新血管形成、缺血性视网膜病变、对比度下降、黄斑毛细血管扩张、边缘角膜层分离(mariginal keratolysis)、多灶性脉络膜炎、近视、新生血管性青光眼、非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)、眼水肿、眼出血、眼组织胞浆菌病、眼高压、眼部炎症、眼部缺血、眼新血管形成、眼外伤、眼血管渗漏、视凹、视盘水肿、睫状体扁平部炎、葡萄球菌病(phylectenulosis)、多息肉状脉络膜血管病、激光后并发症、增生性糖尿病视网膜病变、翼状胬肉角膜炎、放射状角膜切开术、视网膜血管瘤性增生、视网膜变性、视网膜水肿(包括黄斑水肿)、视网膜新血管形成、视网膜灌注、在中央凹中心1个视盘直径内的视网膜增厚、在中央凹中心500μm内的视网膜增厚、视网膜静脉阻塞(中央或分支)、视网膜炎、色素性视网膜炎、视网膜病变、早产儿视网膜病变、巩膜炎、Stargarts病、上缘性角膜炎、手术诱发的水肿、手术诱发的新血管形成、Terrien边缘变性、沙眼、创伤、葡萄膜炎、血管炎(例如视网膜中央静脉阻塞)或其中眼部疾病或病症与眼新血管形成、血管渗漏或视网膜水肿或其组合相关的其他眼科疾病。
在一些实施方案中，本文公开的化合物可用来治疗糖尿病并发症(例如，糖尿病的共病)。本文公开的化合物可用来治疗例如急性肾小球肾炎、急性心肌梗死、切断术、肌萎缩、动脉瘤、心绞痛、主动脉瘤、主动脉夹层、动脉粥样硬化、动脉粥样硬化性心血管疾病、心房颤动、自律神经病变、失明、糖尿病的心血管并发症、糖尿病的脑血管并发症、Charcot关节病、慢性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭、跛行、临床上有意义的黄斑水肿、冠状动脉病、颅神经麻痹、囊样黄斑变性、囊样黄斑水肿、糖尿病心肌病、糖尿病手关节病变、糖尿病昏迷、糖尿病脑病、糖尿病足创伤、糖尿病高血糖症、糖尿病高脂血症、糖尿病高渗综合征、糖尿病低血糖症、糖尿病酮症酸中毒、糖尿病肌坏死症、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病眼科疾病、糖尿病周围血管疾病、糖尿病视网膜病变、弥漫性特发性骨骼骨肥厚、Dupuytren挛缩、栓塞、终末期肾脏疾病、勃起功能障碍、Forestier病、坏疽、气性坏疽、胃肌轻瘫/腹泻、心力衰竭、高血糖危象、高血压、缺血性心脏病、酮症酸中毒、脂肥大、糖尿病的代谢并发症、单神经病变、心肌梗死、肾炎、肾病变、肾病、肾病综合征、神经源性膀胱、神经病性关节病、神经病、直立性低血压、骨关节炎、骨质疏松症、牙周病、外周血管疾病、多神经病、增殖性视网膜病变、肾功能衰竭、肾功能不全、限制性肺疾病、视网膜脱离、视网膜水肿、视网膜病变、中风、血栓形成、短暂性脑缺血发作、溃疡形成、心室颤动、玻璃体出血或其组合。
在一些实施方案中，本文公开的化合物可用来治疗肾脏病症。本文公开的化合物可用来治疗例如急性肾损伤、急性增生性肾小球肾炎、腺嘌呤磷酸核糖基转移酶缺乏症、Alport综合征、无痛性肾病、常染色体显性多囊肾病、常染色体隐性多囊肾病、巴尔干地方性肾病、良性肾硬化、Bright病、心肾综合征、CFHR5肾病、慢性肾病、慢性肾脏疾病-矿物质和骨病症、先天性肾病综合征、先天肾综合征(Conorenal syndrome)、造影剂诱发的肾病、囊性肾病、Dents病、糖尿病肾病、弥漫性增生性肾炎、远端肾小管性酸中毒、利尿、EAST综合征、终末期肾病、上皮-间充质转化、Epstein综合征、Fanconi综合征、Fechtner综合征、局灶性增生性肾炎、局灶性节段性肾小球硬化症、Fraley综合征、Galloway Mowat综合征、Gitelman综合征、肾小球囊性肾病、肾小球病、Goodpasture综合征、高阴离子间隙代谢性酸中毒、HIV相关性肾病、马蹄肾、肾积水、高血压肾病、IgA肾病、间质性肾炎、少年型肾病、肾癌、肾病、肾结石病、Lightwood–Albright综合征、狼疮肾炎、疟疾肾病、髓质囊性肾病、髓状海绵样肾、膜性肾小球肾炎、中美洲肾病、乳-碱综合征、最小膜性肾小球肾炎、多囊性肾发育不良、肾炎、肾钙质沉着症、肾性尿崩症、肾肥大、肾下垂、肾病、肾病综合征、胡桃夹综合征、乳头肾综合征、磷酸肾病、多囊肾病、原发性高草酸尿症、近端肾小管性酸中毒、肾盂肾炎、脓肾、急进性肾小球肾炎、肾发育不全、肾绞痛、肾动脉狭窄、肾囊肿、肾缺血、肾性骨营养障碍、肾乳头坏死、肾小管性酸中毒、肾静脉血栓形成、继发性高血压、蛇形腓骨-多囊肾综合征、分流性肾炎、镰状细胞肾病、薄基膜病、移植肾小球病、肾小管间质性肾炎和葡萄膜炎、肾小管病、尿毒症、尿毒症霜、Wunderlich综合征或其组合。
在一些实施方案中，本文公开的化合物可用来治疗癌症。本文公开的化合物可用来治疗例如急性白血病、星形细胞瘤、胆道癌(胆管癌)、骨癌、乳腺癌、脑干神经胶质瘤、细支气管肺泡细胞肺癌、肾上腺癌、肛区癌、膀胱癌、内分泌系统癌、食管癌、头或颈癌、肾癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、胸膜/腹膜癌、唾液腺癌、小肠癌、甲状腺癌、输尿管癌、尿道癌、宫颈癌、子宫内膜癌、输卵管癌、肾盂癌、肾盂癌、阴道癌、外阴癌、宫颈癌、慢性白血病、结肠癌、结直肠癌、皮肤黑素瘤、室管膜瘤、表皮样肿瘤、尤因肉瘤、胃癌、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、血液系统恶性肿瘤、肝细胞(肝)癌、肝细胞瘤、霍奇金病、眼内黑素瘤、卡波西肉瘤、肺癌、淋巴瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、肌肉癌、中枢神经系统肿瘤(CNS)、神经元癌症、非小细胞肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、小儿恶性肿瘤、垂体腺瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、软组织肉瘤、神经鞘瘤、皮肤癌、脊髓轴肿瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睾丸癌、子宫癌或肿瘤及其转移，包括上述任何癌症的难治性形式，或其组合。
在一些实施方案中，本文公开的化合物可用来治疗以脉管系统改变为特征的疾病、以Tie2活化减少为特征的疾病或以VEGF参与发病机理为特征的疾病。本文公开的化合物可用来治疗例如红斑痤疮、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、腹部手术引起的粘连形成、肥胖、白蛋白尿、变应性水肿、变态反应、心绞痛、血管纤维瘤、动脉硬化、动脉阻塞、腹水、粥样斑、动脉粥样硬化、哮喘、无血管坏死、细菌性溃疡、杆菌状巴尔通体(Bartonellabacilliformis)感染、Behcet病、Buerger病(血栓闭塞性血管炎)、心脏纤维化、心脏肥大、心肌病、颈动脉阻塞性疾病、脑梗死、化学烧伤、COPD、克罗恩病、细胞因子诱发的血管渗漏、血流不稳定、糖尿病(包括非胰岛素依赖型糖尿病)、功能失调性子宫出血、子宫内膜异位症、EB病毒感染、勃起功能障碍、毛发过度生长、滤泡囊肿、足溃疡(例如糖尿病足溃疡)、真菌性溃疡、巨细胞动脉炎、肾小球硬化、格雷夫斯病、桥本氏自身免疫性甲状腺炎、血管瘤、血管内皮瘤、血友病性关节、出血、丙型肝炎、遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、高血压、特发性血小板减少性紫癜、伤口愈合不良、炎性和感染性过程(例如肝炎、肺炎、肾小球肾炎)、间质纤维化、局部缺血、肾病、利什曼病、白质软化症、脂质变性、肝再生、狼疮肾炎、莱姆病、淋巴组织增生性病症、疟疾(疟原虫(Plasmodium)感染)、Mooren溃疡、多发性硬化、分枝杆菌感染、心肌梗死、鼻息肉、肾病、神经元炎症、神经病、肥胖、骨髓炎、骨赘、卵巢过度刺激、佩吉特病、血管翳生长、外周动脉疾病、腹膜硬化、类天疱疮、多动脉炎、原生动物感染、弹性假黄色瘤、银屑病、肺动脉高压、脓性肉芽肿、肾纤维化、呼吸窘迫、类风湿关节炎、立克次体感染、疤痕疙瘩、脓毒症、镰状细胞性贫血、Stevens-Johnson病、中风、滑膜炎、系统性红斑狼疮、梅毒、甲状腺肿大、甲状腺炎、中毒性休克综合征、弓形体病、创伤、溃疡性结肠炎、血管渗漏、血管渗漏综合征、血管畸形(例如Osler-Weber综合征)、静脉阻塞、病毒性出血热(例如登革热)、维生素A缺乏症、疣或韦格纳结节病，或其组合。
序列
如本文所用的，L-对映异构体和D-对映异构体氨基酸的缩写如下：丙氨酸(A，Ala)；精氨酸(R，Arg)；天冬酰胺(N，Asn)；天冬氨酸(D，Asp)；半胱氨酸(C，Cys)；谷氨酸(E，Glu)；谷氨酰胺(Q，Gln)；甘氨酸(G，Gly)；组氨酸(H，His)；异亮氨酸(I，Ile)；亮氨酸(L，Leu)；赖氨酸(K，Lys)；甲硫氨酸(M，Met)；苯丙氨酸(F，Phe)；脯氨酸(P，Pro)；丝氨酸(S，Ser)；苏氨酸(T，Thr)；色氨酸(W，Trp)；酪氨酸(Y，Tyr)；缬氨酸(V，Val)。在一些实施方案中，该氨基酸是L-对映异构体。在一些实施方案中，该氨基酸是D-对映异构体。
表2显示了结合HPTP-β(VE-PTP)的人源化VH抗体区域的氨基酸序列。SEQ ID NO:1为VH1，SEQ ID NO:2为VH2，SEQ ID NO:3为VH3，而SEQ ID NO:4为VH4。
表3显示了结合HPTP-β(VE-PTP)的人源化VL抗体区域的氨基酸序列。SEQ ID NO:5为VL1，SEQ ID NO:6为VL2，SEQ ID NO:7为VL3，而SEQ ID NO:8为VL4。
每个VH结构域可以与恒定域序列如人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA1、IgA2、IgM或IgD序列符合读框地合成。可以对编码整个重链序列的DNA序列进行密码子优化和验证。
表4提供了恒定域序列的示例性氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgG1恒定域序列符合读框地合成。人IgG1恒定域序列可包含SEQ ID NO:220。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgG2恒定域序列符合读框地合成。人IgG2恒定域序列可包含SEQ ID NO:221。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgG3恒定域序列符合读框地合成。人IgG3恒定域序列可包含SEQ ID NO:222。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgG4恒定域序列符合读框地合成。可以将人IgG4同种型恒定域序列在位置228处突变为脯氨酸而不是丝氨酸，以减少Fab-臂交换(稳定S228P突变)。具有S228P突变的IgG4恒定域的氨基酸序列可包含SEQ ID NO:9。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgE恒定域序列符合读框地合成。人IgE恒定域序列可包含SEQ ID NO:223。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgA1恒定域序列符合读框地合成。人IgA1恒定域序列可包含SEQ ID NO:224。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgA2恒定域序列符合读框地合成。人IgA2恒定域序列可包含SEQ ID NO:225。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgM恒定域序列符合读框地合成。人IgM恒定域序列可包含SEQ ID NO:226。在一些实施方案中，本文公开的VH结构域与人IgD恒定域序列符合读框地合成。人IgD恒定域序列可包含SEQ ID NO:227。
每个VL结构域可与人轻链恒定域序列，例如kappa(IgK)或lambda(IgL)链符合读框地合成。然后可以对整个轻链序列进行密码子优化，并可以验证DNA序列。表5提供了示例轻链恒定域序列。
在一些实施方案中，本文公开的VL结构域与人IgK恒定域序列符合读框地合成。人IgK恒定域序列可包含SEQ ID NO:10。在一些实施方案中，本文公开的VL结构域与人IgL恒定域序列符合读框地合成。人IgL恒定域序列可包含SEQ ID NO:228。
信号肽可导致细胞更高的蛋白质表达和/或分泌。可将以下信号肽附加到本文公开的所有构建体上。
重链信号肽(SEQ ID NO:11)：MGWTLVFLFLLSVTAGVHS
轻链信号肽(SEQ ID NO:12)：MVSSAQFLGLLLLCFQGTRC
信号肽酶可以将信号肽从蛋白质上切割下来，例如在分泌过程中，从而生成不包含信号肽序列的成熟蛋白质。在一些实施方案中，从本公开的化合物或抗体上切除信号肽。在一些实施方案中，本公开的成熟化合物或抗体不包含信号肽。
表6和表7分别列出了结合HPTP-β(VE-PTP)的人源化重链和轻链的完整氨基酸序列。HC1、HC2、HC3和HC4是分别与VH1、VH2、VH3和VH4接合的人IgG4同种型恒定域，具有稳定S228P突变，并附加有信号肽。SEQ ID NO:13、14、15和16的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQID NO:11)。还显示了未附加信号肽的HC1、HC2、HC3和HC4(SEQ ID NO:246、247、248和249)。在一些实施方案中，本公开的成熟化合物或抗体不包含信号肽。
LC1、LC2、LC3和LC4是分别与VL1、VL2、VL3和VL4接合的人IgK同种型恒定域，并附加有信号肽。SEQ ID NO:17、18、19和20的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。还显示了未附加信号肽的LC1、LC2、LC3和LC4(SEQ ID NO:250、251、252和253)。在一些实施方案中，本公开的成熟化合物或抗体不包含信号肽。
本文公开的任何VH区可与本文公开的任何VL区组合，附加或不附加额外的序列，以产生结合抗HPTP-β(VE-PTP)的化合物。例如，信号肽和恒定区序列可以分别附加至表6和表7所示的VH和VL区上，并且所得的重链和轻链可以以任何组合配对以形成抗体。表8显示了与HPTP-β(VE-PTP)结合的HC1-4和LC1-4的16种可能的配对。可以探索表8中每种抗HPTP-β(VE-PTP)抗体的转染和表达。
对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗体或抗原结合化合物可以与激活Tie2、抑制VEGF或抑制VEGFR的抗体或化合物组合，以形成多特异性化合物。
表9提供了胶原蛋白IV衍生的生物模拟肽的序列。SEQ ID NO:152是AXT-107，这是一种靶向整联蛋白的胶原蛋白IV衍生的生物模拟肽，其可以抑制VEGFR磷酸化/活化/信号传导并促进Tie2磷酸化/活化/信号传导。SEQ ID NO:153提供了共有序列，其中X是任何标准氨基酸或非遗传编码的氨基酸。在一些实施方案中，第7位的X为M、A或G；第9位的X为F、A、Y或G；第0位的X为M、A、G、D-丙氨酸(dA)或正亮氨酸(Nle)；第11位的X为F、A、Y、G或4-氯苯丙氨酸(4-CiPhe)：第12位和18位的X独立选自2-氨基丁酸(Abu)、G、S、A、V、T、I、L或烯丙基甘氨酸(AllylGly)。
表10提供了与vasculotide有关的序列，vasculotide是一种合成的Ang1模拟肽，其可以充当Tie2激动剂并激活Tie2信号传导。SEQ ID NO:229提供了结合Tie2受体的合成7聚体的序列。SEQ ID NO:230提供了在N末端添加半胱氨酸残基的8聚体，从而允许共价栓系到聚乙二醇骨架上，以生成该肽的四聚聚环氧乙烷成簇形式。
对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗体或抗原结合化合物可以与对VEGF或VEGFR具有特异性的抗体或化合物组合，以形成结合HPTP-β(VE-PTP)和VEGF或VEGFR的多特异性化合物。表11、表12、表13、表14、表15和表17提供了对VEGF具有特异性的化合物的示例序列。表16提供了结合VEGFR的抗体的序列。
表11提供了与阿柏西普有关的序列，阿柏西普是一种重组蛋白，其包含与人IgG1的Fc部分融合的人VEGF受体1和2的VEGF结合部分。SEQ ID NO:21是阿柏西普的完整氨基酸序列。SEQ ID NO:22是包含人VEGF受体1和2的VEGF结合部分的缩短序列，其不含IgG的Fc部分。
表12提供了brolucizumab的序列(SEQ ID NO:23)，brolucizumab是VEGF的人源化单链抗体片段(scFv)抑制剂，其与VEGF的受体结合位点结合，从而干扰VEGF与VEGFR1和VEGFR2的相互作用。
表13提供了与雷珠单抗有关的序列，雷珠单抗是与VEGF结合并抑制其活性的人源化单克隆抗体片段(Fab)。SEQ ID NO:24是雷珠单抗的重链序列。SEQ ID NO:25是雷珠单抗的轻链序列。SEQ ID NO:26是雷珠单抗重链的缩短序列，其可用于克隆单链抗体片段(scFv)。SEQ ID NO:27是雷珠单抗轻链的缩短序列，其可用于克隆单链抗体片段(scFv)。SEQ ID NO:28是包含SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:33(连接肽，带下划线)的单链抗体片段(scFv)。
表14提供了与贝伐珠单抗有关的序列，贝伐珠单抗是与VEGF结合并抑制其活性的人源化单克隆抗体。SEQ ID NO:29是贝伐珠单抗的重链序列。SEQ ID NO:30是贝伐珠单抗的轻链序列。
表15提供了与康柏西普有关的序列，康柏西普是一种重组蛋白，其包含与人IgG1的Fc部分融合的VEGF受体1和2的胞外域。SEQ ID NO:154是康柏西普的完整氨基酸序列。SEQ ID NO:155是包含VEGF受体1和2的序列的缩短序列，其不含IgG的Fc部分。
表16提供了与雷莫芦单抗有关的序列，雷莫芦单抗是一种人源化单克隆抗体，其与VEGFR2的胞外域结合并抑制VEGFR2信号传导。SEQ ID NO:156是雷莫芦单抗的重链序列。SEQ ID NO:157是雷莫芦单抗的轻链序列。
表17提供了结合VEGF并抑制VEGFR信号传导的DARPin和DARPin衍生的氨基酸序列。SEQ ID NO:158-168包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。SEQ ID NO:169包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复和对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。SEQ ID NO:170包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复、对肝细胞生长因子具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复和对血清白蛋白具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。SEQ ID NO:171-177包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。SEQ ID NO:173提供了abicipar的序列，其包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。SEQ ID NO:178-190提供了对VEGF具有结合特异性的单独经设计的锚蛋白重复序列基序，其中X代表任意氨基酸。SEQ ID NO:191-217包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。
对VEGF具有特异性的抗体或抗原结合化合物可与对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的抗体或抗原结合化合物组合，以形成多特异性化合物，如与VEGF和HPTP-β(VE-PTP)结合的双特异性化合物。本公开中对VEGF具有特异性的任何化合物可与本公开中对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的任何化合物组合。在必要时可以修饰本公开中对VEGF或HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的任何化合物，以生成多特异性化合物。生成多特异性化合物所必需的修饰的非限制性实例包括添加氨基酸残基、去除氨基酸残基、替换氨基酸残基和使用连接体。在一些实施方案中，可向本文公开的序列的N末端和/或C末端添加1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个残基，并且所得序列可以用于生成多特异性构建体。在一些实施方案中，可从本文公开的序列的N末端和/或C末端除去1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个残基，并且剩余的序列可以用于生成多特异性构建体。例如，可从SEQ ID NO:173中除去N和/或C末端残基(例如，以生成SEQ ID NO:244)，并且该截短的序列可以用于多特异性构建体中。在一些实施方案中，可以修饰SEQ ID NO:13-20或246-253中的任一个中的序列。例如，可以除去一个或多个C末端残基(例如，可从SEQ ID NO:13-16或246-249中的任一个中除去C末端赖氨酸，并且剩余的残基(残基1-467)可以用于多特异性构建体中)。
本文所述的化合物可在该化合物的不同结构域之间包括连接体。连接体可以是化学键，例如共价键或非共价键。本文所述的连接体可包括柔性或刚性连接体。
本公开的连接体可以包括化学连接体。例如，本公开的两个氨基酸序列可以通过化学连接体连接在一起。本公开的每个化学连接体可以是亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基，其中任一个任选地被取代。在一些实施方案中，本公开的化学连接体可以是酯、醚、酰胺、硫醚或聚乙二醇(PEG)。在一些实施方案中，连接体可以例如颠倒化合物中氨基酸序列的顺序，以使得通过该连接体连接的氨基酸序列是头对头的，而不是头对尾的。此类连接体的非限制性实例包括二羧酸的二酯，如草酰二酯、丙二酰二酯、琥珀酰二酯、戊二酰二酯、己二酰二酯、庚二酰(pimetyl)二酯、富马酰二酯、马来酰二酯、邻苯二酰二酯、间苯二甲酰二酯和对苯二甲酰二酯。此类连接体的非限制性实例包括二羧酸的二酰胺，如草酰二酰胺、丙二酰二酰胺、琥珀酰二酰胺、戊二酰二酰胺、己二酰二酰胺、庚二酰(pimetyl)二酰胺、富马酰二酰胺、马来酰二酰胺、邻苯二酰二酰胺、间苯二甲酰二酰胺和对苯二甲酰二酰胺。此类连接体的非限制性实例包括二氨基连接体的二酰胺，如乙二胺、1,2-二(甲基氨基)乙烷、1,3-二氨基丙烷、1,3-二(甲基氨基)丙烷、1,4-二(甲基氨基)丁烷、1,5-二(甲基氨基)戊烷、1,6-二(甲基氨基)己烷和哌嗪。
任选的取代基的非限制性实例包括羟基基团、巯基基团、卤素、氨基基团、硝基基团、亚硝基基团、氰基基团、叠氮基团、亚砜基团、砜基团、磺酰胺基团、羧基基团、羧醛基团、亚胺基团、烷基基团、卤代-烷基基团、烯基基团、卤代-烯基基团、炔基基团、卤代-炔基基团、烷氧基基团、芳基基团、芳基氧基基团、芳烷基基团、芳基烷氧基基团、杂环基基团、酰基基团、酰氧基基团、氨基甲酸酯基团、酰胺基团、脲基基团、环氧基团和酯基团。
连接体可以是肽。连接体可包含连接体序列，例如连接肽序列。连接体序列的长度可以是，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、51、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70个氨基酸残基。
柔性连接体可具有包含一段甘氨酸和丝氨酸残基的序列。甘氨酸和丝氨酸残基的小尺寸提供了柔性，并允许连接的功能域的移动性。丝氨酸或苏氨酸的并入可通过与水分子形成氢键来维持连接体在水溶液中的稳定性，从而减少连接体与蛋白质部分之间的不利相互作用。
柔性连接体还可以包含另外的氨基酸，如苏氨酸和丙氨酸，以保持柔性，以及极性氨基酸，如赖氨酸和谷氨酰胺，以改善溶解度。
柔性连接体可包含SEQ ID NO:42(GGGS)的重复，例如，SEQ ID NO:42-55。柔性连接体可包含SEQ ID NO:31(GGGGS)的重复，例如，SEQ ID NO:31-41。还可以使用几种其他类型的柔性连接体，包括SEQ ID NO:59(KESGSVSSEQLAQFRSLD)和SEQ ID NO:60(EGKSSGSGSESKST)。还可以使用SEQ ID NO:61(GSAGSAAGSGEF)连接体，其中将大的疏水性残基减至最少，以在水溶液中保持良好的溶解性。可以调节柔性连接体的长度，以允许适当折叠或实现融合蛋白的最佳生物活性。
刚性连接体可具有，例如，α螺旋结构。α-螺旋刚性连接体可以充当蛋白质结构域之间的间隔区。刚性连接体可包含SEQ ID NO:62(EAAAK)的重复，例如，SEQ ID NO:62-66。刚性连接体可包含SEQ ID NO:67(EAAAR)的重复，例如，SEQ ID NO:67-72。刚性连接体可具有富含脯氨酸的序列(XP)n，其中X表示丙氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺或任意氨基酸。非螺旋连接体中脯氨酸的存在可以增加刚度，并且允许有效分离蛋白质结构域。
连接体可包含表18中公开的任何序列，其可用来将本文公开的化合物的任何部分连接至本文公开的另一化合物的任何部分：
表11、表12、表13、表14、表15、表16和表17中描述的VEGF结合化合物和VEGFR结合化合物可与表2、表3、表6、表7和表8中描述的HPTP-β(VE-PTP)结合化合物组合。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与阿柏西普或阿柏西普相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将SEQ IDNO:22附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有SEQ ID NO:22(图2)。可以将SEQ ID NO:22附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有SEQ ID NO:22(图3)。可以将SEQ ID NO:22附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将SEQ ID NO:22附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有SEQ ID NO:22(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与brolucizumab或brolucizumab相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将SEQ ID NO:23附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有SEQ ID NO:23(图2)。可以将SEQ ID NO:23附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有SEQ ID NO:23(图3)。可以将SEQ ID NO:23附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将SEQ ID NO:23附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有SEQ ID NO:23(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与雷珠单抗或雷珠单抗相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将SEQ IDNO:28附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有SEQ ID NO:28(图2)。可以将SEQ ID NO:28附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有SEQ ID NO:28(图3)。可以将SEQ ID NO:28附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将SEQ ID NO:28附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有SEQ ID NO:28(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与贝伐珠单抗或贝伐珠单抗相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，贝伐珠单抗的抗原结合scFv可以如表13中的雷珠单抗所示的那样生成。可以将贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv(图2)。可以将贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv(图3)。可以将贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有贝伐珠单抗衍生的抗原结合scFv(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与abicipar或abicipar相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将SEQ IDNO:173或SEQ ID NO:244附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:14残基1-467或SEQ ID NO:247残基1-467上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:244(图2)。可以将SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:244附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:244(图3)。可以将SEQ ID NO:173或SEQID NO:244附加到SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:14残基1-467或SEQ ID NO:247残基1-467上，并且可以将SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:244附加到抗体HC2:LC1的SEQID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有SEQ ID NO:173或SEQ ID NO:244(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与康柏西普或康柏西普相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将SEQ IDNO:155附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有SEQ ID NO:155(图2)。可以将SEQ ID NO:155附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有SEQ ID NO:155(图3)。可以将SEQ ID NO:155附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将SEQ ID NO:155附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有SEQ ID NO:155(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与雷莫芦单抗或雷莫芦单抗相关序列组合，以生成双特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，雷莫芦单抗的抗原结合scFv可以如表13中的雷珠单抗所示的那样生成。可以将雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv(图2)。可以将雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv(图3)。可以将雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv附加到SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，并且可以将雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有雷莫芦单抗衍生的抗原结合scFv(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与DARPin、DARPin重复或其序列组合，以生成多特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将包含SEQ IDNO:158-217中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列(图2)。可以将包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列(图3)。可以将包含SEQID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ IDNO:247上以及SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有包含SEQ ID NO:158-217中的任一个的氨基酸序列(图4)。
表9和表10中描述的Tie2激活化合物可与表2、表3、表6、表7和表8中描述的HPTP-β(VE-PTP)结合化合物组合。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与胶原蛋白IV衍生的生物模拟肽序列组合，以生成多特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列(图2)。可以将包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列(图3)。可以将包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQID NO:14或SEQ ID NO:247上以及SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有包含SEQ ID NO:152或SEQ ID NO:153的氨基酸序列(图4)。
表8中描述的16种抗体中的任何一种可与Ang2模拟物或其序列组合，以生成多特异性抗体。非限制性的示意性实例在图2、图3和图4中呈现。例如，可以将包含SEQ ID NO:229-230中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链附加有包含SEQ ID NO:229-230中的任一个的氨基酸序列(图2)。可以将包含SEQ ID NO:229-230中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成四价双特异性抗体，其中HC2:LC1的轻链附加有包含SEQ ID NO:229-230中的任一个的氨基酸序列(图3)。可以将包含SEQ IDNO:229-230中的任一个的氨基酸序列附加到抗体HC2:LC1的SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:247上以及SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:250上，以生成六价双特异性抗体，其中HC2:LC1的重链和轻链附加有包含SEQ ID NO:229-230中的任一个的氨基酸序列(图4)。
表9和表10中描述的Tie2激活化合物可与表11、表12、表13、表14、表15、表16和表17中描述的VEGF结合和VEGFR结合化合物组合。
在必要时可以修饰本公开中的任何化合物，例如上述多特异性融合构建体，以促进所需的蛋白质折叠或生物活性。
CDR
本公开中的序列可包含互补决定区(CDR)。CDR可以通过Kabat方法、Chothia方法、IMGT方法或Paratome方法进行鉴定。本文序列的CDR可以是例如0至91个残基的长度、0至25个残基的长度、5至14个残基的长度、约0个残基的长度、约1个残基的长度、约2个残基的长度、约3个残基的长度、约4个残基的长度、约5个残基的长度、约6个残基的长度、约7个残基的长度、约8个残基的长度、约9个残基的长度、约10个残基的长度、约11个残基的长度、约12个残基的长度、约13个残基的长度、约14个残基的长度、约15个残基的长度、约16个残基的长度、约17个残基的长度、约18个残基的长度、约19个残基的长度、约20个残基的长度、约21个残基的长度、约22个残基的长度、约23个残基的长度、约24个残基的长度或约25个残基的长度。
具有对HPTP-β(VE-PTP)的结合特异性或调节HPTP-β(VE-PTP)的能力的本公开的化合物可包含例如表19、表20、表21、表22、表23或表24中的任何CDR。
表19提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的HCDR1序列的非限制性实例。
表20提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的HCDR2序列的非限制性实例。
表21提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的HCDR3序列的非限制性实例。
表22提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的LCDR1序列的非限制性实例。
表23提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的LCDR2序列的非限制性实例。
表24提供了对HPTP-β(VE-PTP)具有特异性的LCDR3序列的非限制性实例。
具有对VEGF的结合特异性或调节VEGF的能力的本公开的化合物可包含表25、表26、表27、表28、表29或表30中的任何CDR。
表25提供了对VEGF具有特异性的HCDR1序列的非限制性实例。
表26提供了对VEGF具有特异性的HCDR2序列的非限制性实例。
表27提供了对VEGF具有特异性的HCDR3序列的非限制性实例。
表28提供了对VEGF具有特异性的LCDR1序列的非限制性实例。
表29提供了对VEGF具有特异性的LCDR2序列的非限制性实例。
表30提供了对VEGF具有特异性的LCDR3序列的非限制性实例。
表31提供了与人VEGF受体1的D2结构域(SEQ ID NO:147)和人VEGF受体2的D3结构域(SEQ ID NO:148)相对应的阿柏西普衍生的序列。
表32提供了abicipar衍生的序列。SEQ ID NO:233-236对应于abicipar内的锚蛋白重复。SEQ ID NO:237-242提供了VEGF结合锚蛋白重复的共有序列。在SEQ ID NO:237中，X1为K、T或Y；X2为N或M；X3为T或F；X4为S或A；X5为H或R；X6为A、Y、H或N；且X7为A或T。在SEQID NO:238中，X1为K、M、N、R或V；X2为Y、H、M或V；X3为F、L、M或V；X4为R、H、V、A、K或N；X5为F、D、H、T、Y、M或K；且X6为A、H、N或Y。在SEQ ID NO:239中，X1为L、S或T；X2为G、S或C；X3为S或A；X4为Q、S、M或N；X5为L、M或Q；且X6为A、H、N、Y或D。在SEQ ID NO:240中，X1为K、S、I、N、T或V；X2为K、N、W、A、H、M、Q或S；X3为F、Q、L、H或V；X4为F或T；X5为Q或H；X6为Y或S；X7为N、H、Y或M；且X8为A、H、N或Y。在SEQ ID NO:241中，X1为A、N、R、V、Y、E、H、I、K、L、Q、S或T；X2为S、A、N、R、D、F、L、P、T或Y；X3为T、V、S、A、L或F；X4为W、F或H；X5为P、I、A、L、S、T、V或Y；X6为W、F、I、L、T或V；X7为L或P；且X8为A、H、N或Y。在SEQ ID NO:242中，X1为H、Q、A、K、R、D、I、L、M、N、V或Y；X2为Y、F或H；X3为Q、F或T；X4为W、M、G、H、N或T；X5为T、A、M、L或V；X6为I、L、V、D或T；且X7为A、H、N或Y。SEQ ID NO:244提供了衍生自abicipar的截短序列，其包含对VEGF具有结合特异性的经设计的锚蛋白重复。
同源性
本文化合物的序列可与本文提供的氨基酸序列具有至少约70％同源性、至少约71％同源性、至少约72％同源性、至少约73％同源性、至少约74％同源性、至少约75％同源性、至少约76％同源性、至少约77％同源性、至少约78％同源性、至少约79％同源性、至少约80％同源性、至少约81％同源性、至少约82％同源性、至少约83％同源性、至少约84％同源性、至少约85％同源性、至少约86％同源性、至少约87％同源性、至少约88％同源性、至少约89％同源性、至少约90％同源性、至少约91％同源性、至少约92％同源性、至少约93％同源性、至少约94％同源性、至少约95％同源性、至少约96％同源性、至少约97％同源性、至少约98％同源性、至少约99％同源性、至少约99.1％同源性、至少约99.2％同源性、至少约99.3％同源性、至少约99.4％同源性、至少约99.5％同源性、至少约99.6％同源性、至少约99.7％同源性、至少约99.8％同源性、至少约99.9％同源性、至少约99.91％同源性、至少约99.92％同源性、至少约99.93％同源性、至少约99.94％同源性、至少约99.95％同源性、至少约99.96％同源性、至少约99.97％同源性、至少约99.98％同源性或至少约99.99％同源性。
可使用多种方法和软件程序测定两种或更多种序列之间的同源性，如NCBIBLAST、Clustal W、MAFFT、Clustal Omega、AlignMe、Praline或另一种合适的方法或算法。
药物组合物
本公开的药物组合物可以是任何本文所述药物化合物与其他化学组分如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的组合。该药物组合物有助于将该化合物施用于生物体。
用于给药的药物制剂可包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。活性化合物的悬浮液可以被制备成油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬浮液可以含有提高悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。悬浮液还可以含有合适的稳定剂或提高化合物溶解度的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。活性成分可以是粉末形式，以供在使用前用合适的媒介物如无菌无热原水重建。
在实施本文提供的治疗或使用方法时，将治疗有效量的本文所述化合物以药物组合物的形式施用于患有待治疗的疾病或病况的受试者。在一些实施方案中，该受试者是哺乳动物，如人。治疗有效量可以根据疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力和其他因素而广泛地变化。
可以使用一种或多种生理学上可接受的载体来配制药物组合物，所述载体包含赋形剂和助剂，其有助于将活性化合物加工成可药用的制品。配方可以根据所选的给药途径进行修改。包含本文所述化合物的药物组合物可以例如通过混合、溶解、乳化、封装、包封或压制工艺来制备。
所述药物组合物可包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂以及游离碱或药学上可接受的盐形式的本文所述化合物。药物组合物可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲液和防腐剂。
用于制备包含本文所述化合物的组合物的方法包括将所述化合物与一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体一起配制以形成固体、半固体或液体组合物。固体组合物包括，例如，粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊和扁囊剂。液体组合物包括，例如，化合物溶解于其中的溶液，包含化合物的乳液，或者含有包含本文公开的化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括例如凝胶、悬浮液和乳膏。该组合物可以是液体溶液或悬浮液，适合于在使用前溶解或悬浮于液体中的固体形式，或者作为乳液。这些组合物还可以含有少量无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂和其他药学上可接受的添加剂。
适用于本公开的剂型的非限制性实例包括液体、粉末、凝胶、纳米悬浮液、纳米颗粒、微凝胶、水性或油性悬浮液、乳液及其任意组合。
适用于本公开的药学上可接受的赋形剂的非限制性实例包括粘合剂、崩解剂、抗粘剂、抗静电剂、表面活性剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、增塑剂、防腐剂、悬浮剂、乳化剂、抗微生物剂、滚圆剂及其任意组合。
本公开的组合物可以是例如立即释放形式或控制释放制剂。立即释放制剂可以被配制为使化合物快速起作用。立即释放制剂的非限制性实例包括易溶解的制剂。控制释放制剂可以是这样的药物制剂，其已经过调整而使得活性剂的释放速率和释放谱可以与生理学要求和时间治疗要求相匹配，或者已经配制成实现活性剂以程序化速率释放。控制释放制剂的非限制性实例包括颗粒、延迟释放颗粒、(例如合成或天然来源的)水凝胶、其他胶凝剂(例如，形成凝胶的膳食纤维)、基于基质的制剂(例如，包含聚合材料的制剂，有至少一种活性成分分散于其中)、基质内的颗粒、聚合混合物和粒状团块。
在一些实施方案中，控制释放制剂是延迟释放形式。延迟释放形式可以被配制为延迟化合物的作用达延长的一段时间。延迟释放形式可以被配制为延迟有效剂量的一种或多种化合物的释放，例如达约4小时、约8小时、约12小时、约16小时或约24小时。
控制释放制剂可以是持续释放形式。持续释放形式可以被配制为在延长的一段时间内维持例如化合物的作用。持续释放形式可以被配制为在约4小时、约8小时、约12小时、约16小时或约24小时内提供有效剂量的任何本文所述化合物(例如，提供生理学有效的血液分布)。
所公开的组合物可任选地包含药学上可接受的防腐剂。
药学上可接受的赋形剂的非限制性实例可见于，例如，Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.编著,Pharmaceutical DosageForms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and DrugDelivery Systems,第七版(Lippincott Williams&Wilkins 1999)，其中每一个均通过引用整体并入本文。
本文所述的化合物可以方便地配制成由一种或多种药学上可接受的载体组成的药物组合物。参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,最新版,E.W.MartinMack Pub.Co.,Easton,PA，通过引用整体并入，其公开了典型的载体和制备药物组合物的常规方法。这样的载体可以是用于将组合物施用于人类和非人类的载体，包括溶液，如无菌水、盐水和生理pH下的缓冲溶液。药物组合物还可以包含一种或多种额外的活性成分，如抗微生物剂、抗炎剂和麻醉剂。
药学上可接受的载体的非限制性实例包括盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。在一些实施方案中，该溶液的pH值可以是约5至约8，并且可以是约7至约7.5。另外的载体包括持续释放制品，如包含该化合物的固体疏水聚合物的半透性基质。该基质可以是成形物品，例如膜、脂质体、微粒或微胶囊的形式。
可使用适合于局部给药的组合物。在一些实施方案中，本公开的组合物可以包括溶液、悬浮液或两者形式的包含活性剂的液体。液体组合物可以包括凝胶。液体组合物可以是例如水性的。组合物是原位可胶凝的水性组合物。在替代方案中，该组合物是原位可胶凝的水溶液。这样的组合物可包含在与眼睛接触或与眼睛外部的泪液接触时其浓度有效地促进胶凝的胶凝剂。水性组合物可具有眼相容的pH和渗透压。该组合物可包括眼用贮库型制剂，其包含用于结膜下给药的活性剂。包含活性剂的微粒可以包埋于生物相容性药学上可接受的聚合物或脂质包封剂中。贮库型制剂可适合于在延长的一段时间内释放所有或基本上所有的活性物质。聚合物或脂质基质(如果存在)可适合于在释放所有或基本上所有的活性剂后充分降解以从施用部位输送。贮库型制剂可以是包含药学上可接受的聚合物和溶解或分散的活性剂的液体制剂。在注射时，该聚合物例如通过胶凝或沉淀在注射部位形成贮库。该组合物可包括固体制品，该固体制品可插入眼睛中的合适位置，如眼睛与眼睑之间或结膜囊中，在该处制品释放活性剂。适合以这样的方式植入眼睛中的固体制品可包含聚合物，并且可以是可生物蚀解的或不可生物蚀解的。
除了本文公开的药剂外，药物制剂还可包含额外的载体，以及增稠剂、稀释剂、缓冲液、防腐剂和表面活性剂。
所公开的组合物的pH可在约3至约12的范围内。该组合物的pH可以是，例如约3至约4、约4至约5、约5至约6、约6至约7、约7至约8、约8至约9、约9至约10、约10至约11或约11至约12个pH单位。该组合物的pH可以是，例如约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11或约12个pH单位。该组合物的pH可以是，例如至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11或至少12个pH单位。该组合物的pH可以是，例如至多3、至多4、至多5、至多6、至多7、至多8、至多9、至多10、至多11或至多12个pH单位。本文公开的药物制剂的pH可以是约5.5至约6.5。例如，本公开的制剂的pH可以是约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4或约6.5。在一些实施方案中，pH为6.2±0.3、6.2±0.2、6.2±0.1、约6.2或6.2。
如果pH在配制者所期望的范围之外，则可使用足够的药学上可接受的酸和碱来调节pH。
根据预期的给药方式，药物组合物可以是固体、半固体或液体剂型的形式，例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉末、液体、悬浮液、洗剂、乳膏或凝胶，例如，适于单次施用精确剂量的单位剂量形式。
对于固体组合物，无毒的固体载体包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖和碳酸镁。
适合与本公开的组合物联合的药物活性剂的非限制性实例包括抗感染药(即氨基糖苷类)、抗病毒剂、抗微生物剂、抗胆碱能药/抗痉挛药、抗糖尿病剂、抗高血压剂、抗肿瘤药、心血管药、中枢神经系统药、凝血调节剂、激素、免疫药、免疫抑制剂和眼用制品。
在一些实施方案中，本文提供的药物组合物包含治疗有效量的化合物与药学上可接受的载体和/或赋形剂的混合物，该药学上可接受的载体和/或赋形剂例如是盐水、磷酸盐缓冲盐水、磷酸盐和氨基酸、聚合物、多元醇、糖、缓冲液、防腐剂和其他蛋白质。示例性药剂包括辛基苯氧基聚乙氧基乙醇化合物、聚乙二醇单硬脂酸酯化合物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、蔗糖、果糖、右旋糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、木糖醇、乳糖、海藻糖、牛或人血清白蛋白、柠檬酸盐、醋酸盐、林格氏溶液和汉克溶液、半胱氨酸、精氨酸、肉碱、丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯和二醇。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂可包含：(i)本文公开的化合物或抗体；(ii)缓冲溶剂化物；(iii)非离子型去污剂；(iv)张度剂；和(v)稳定剂。在一些实施方案中，本文公开的药物制剂是稳定的液体药物制剂。
在一些实施方案中，本文公开的眼科制剂可包含：(i)本文公开的化合物或抗体；(ii)缓冲溶剂化物；(iii)非离子型去污剂；(iv)张度剂；和(v)稳定剂。在一些实施方案中，本文公开的眼科制剂是稳定的液体药物制剂或稳定的液体眼科制剂。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂是液体制剂，其可包含约5mg/mL至约150mg/mL的抗体或化合物，约7.5mg/mL至约140mg/mL的抗体或化合物，约10mg/mL至约130mg/mL抗体或化合物，约10mg/mL至约100mg/mL抗体或化合物，约20mg/mL至约80mg/mL抗体或化合物，或约30mg/mL至约70mg/mL的抗体或化合物。例如，本公开的制剂可包含约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg。/mL、约40mg/mL、约50mg/mL、约60mg/mL、约70mg/mL、约80mg/mL、约90mg/mL、约100mg/mL、约120mg/mL、约140mg/mL或约150mg/mL本文所述的化合物、抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含缓冲液。在一些实施方案中，缓冲液用于维持稳定的pH并帮助稳定本文公开的化合物或抗体。在一些实施方案中，缓冲液或缓冲液体系包含至少一种缓冲液，该缓冲液的缓冲范围与pH 5.5-7.4的范围完全或部分重叠。在一些实施方案中，缓冲液的pKa为约6.2±0.5。在一些实施方案中，缓冲液包括磷酸钠缓冲液。在一些实施方案中，磷酸钠以约5mM至约15mM、约6mM至约14mM、约7mM至约13mM、约8mM至约12mM、约9mM至约11mM或约10mM的浓度存在。在某些实施方案中，缓冲液体系包含10mM的磷酸钠，pH为6.2±0.3或6.1±0.3。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含非离子型去污剂。在一些实施方案中，该非离子型去污剂是含有聚氧乙烯部分的非离子型聚合物。在一些实施方案中，该非离子型去污剂是聚山梨酯20、泊洛沙姆188或聚乙二醇3350中的任何一种或多种。在一些实施方案中，该非离子型去污剂是聚山梨酯20。在一些实施方案中，该非离子型去污剂是聚山梨酯80。在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含约0.01％至约1％的非离子型去污剂。例如，本公开的制剂可包含约0.0085％、约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.04％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.1％、约0.11％、约0.12％、约0.13％、约0.14％、约0.15％、约0.16％、约0.17％、约0.18％、约0.19％、约0.20％、约0.21％、约0.22％、约0.23％、约0.24％、约0.25％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.1％、约1.15％、约1.2％、约1.25％、约1.3％、约1.35％、约1.4％、约1.45％、约1.5％、约1.55％、约1.6％、约1.65％、约1.7％、约1.75％、约1.8％、约1.85％、约1.9％、约1.95％或约2％的聚山梨酯20聚山梨酯80或泊洛沙姆188。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含张度剂。在一些实施方案中，该张度剂是氯化钠或氯化钾。在一些实施方案中，该张度剂是氯化钠。在一些实施方案中，氯化钠以约5mM至约100mM、约10mM至约50mM或约40mM的浓度存在。
在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含稳定剂。在一些实施方案中，该稳定剂是可以在热应激条件下稳定本文公开的抗体或化合物的热稳定剂。在一些实施方案中，当包含化合物或抗体和热稳定剂的溶液在约45℃下保持多达约28天时，稳定剂保持大于约93％的天然构象的化合物或抗体。在一些实施方案中，当包含化合物或抗体和热稳定剂的溶液在约45℃下保持多达约28天时，稳定剂防止化合物或抗体的聚集并且少于4％的化合物或抗体聚集。在一些实施方案中，当包含化合物或抗体和热稳定剂的溶液在约37℃下保持多达约28天时，稳定剂将多于约96％的化合物或抗体维持天然构象。在一些实施方案中，当包含化合物或抗体和热稳定剂的溶液在约37℃下保持多达约28℃时，稳定剂阻止化合物或抗体的聚集并且少于约2％的化合物或抗体聚集。
在一些实施方案中，热稳定剂是糖或糖醇，例如蔗糖、山梨醇、甘油、海藻糖或甘露醇，或其任何组合。在一些实施方案中，稳定剂是糖。在一些实施方案中，该糖是蔗糖、甘露醇或海藻糖。在一些实施方案中，稳定剂是蔗糖。在一些实施方案中，本文公开的药物制剂或眼科制剂可包含约1％至约20％的糖或糖醇、约2％至约18％的糖或糖醇、约3％至约15％的糖或糖醇、约4％至约10％的糖或糖醇或约5％的糖或糖醇。例如，本公开的药物制剂或眼科制剂可包含约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％或约14％的糖或糖醇(例如蔗糖、海藻糖或甘露醇)。在一些实施方案中，稳定剂的浓度为约1％w/v至约20％w/v。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为约1％w/v至约15％w/v或约1％w/v至约10％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为5％w/v或约5％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为7.5％w/v或约7.5％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为10％w/v或约10％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为12.5％w/v或约12.5％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为15％w/v或约15％w/v的蔗糖。在一些实施方案中，稳定剂是浓度为20％w/v或约20％w/v的蔗糖。
药物组合物的施用
本文公开的药物组合物可以通过各种形式和途径以治疗有效量施用，包括例如口服、局部、肠胃外、静脉内注射、静脉内输注、皮下注射、皮下输注、肌肉内注射、肌肉内输注、皮内注射、皮内输注、腹膜内注射、腹膜内输注、脑内注射、脑内输注、蛛网膜下注射、蛛网膜下输注、眼内注射、脊柱内注射、胸骨内注射、眼科给药、内皮给药、局部给药、鼻内给药、肺内给药、直肠给药、动脉内给药、鞘内给药、吸入、病灶内给药、皮内给药、硬膜外给药、通过上皮或粘膜皮肤内衬(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜)的吸收、囊内给药、囊下给药、心内给药、经气管给药、表皮下给药、蛛网膜下给药、囊下给药、椎管内给药或胸骨内给药。
药物组合物可以以局部方式施用，例如，通过将化合物直接注射到器官中，任选地以贮库型制剂或持续释放制剂或植入物的形式。药物组合物可以以快速释放制剂的形式、以延长释放制剂的形式或以中间释放制剂的形式提供。快速释放形式可以提供立即释放。延长释放制剂可以提供控制释放或持续的延迟释放。
在一些实施方案中，泵可用于递送药物组合物。在一些实施方案中，笔递送装置可用于例如皮下递送本公开的组合物。这样的笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔递送装置可以使用包含本文公开的药物组合物的可更换药筒。一旦已经施用了药筒内的所有药物组合物并且药筒是空的，则可以容易地丢弃空的药筒并用包含药物组合物的新药筒替换。然后可以重新使用该笔递送装置。一次性笔没有可更换的药筒。相反，一次性笔递送装置预先填充有保持在该装置内的储存器中的药物组合物。一旦储存器中的药物组合物被清空，便丢弃整个装置。
本文公开的药物组合物可以通过任何合适的形式或途径例如向眼睛施用，包括例如局部、口服、全身、玻璃体内、前房内、颅内、结膜下、球筋膜下、球后、眼内、基质内、角膜内、近巩膜后、眼周、视网膜下或脉络膜上给药。递送方法可以包括用于将组合物直接递送至眼细胞的侵入性方法。在一些实施方案中，包含抗体或化合物的液体药物组合物可以通过视网膜下注射、玻璃体内注射(例如，玻璃体前、中或后注射)、玻璃体内植入物、眶内注射、眶内给药、皮下注射、前房内注射、颅内注射、结膜下注射、结膜下植入物、经颞侧向前房内注射、基质内注射、角膜内注射、房水注射、球筋膜下注射或球筋膜下植入物。可以通过将制剂注射到包括前房、后房、玻璃体房(玻璃体内)、固有视网膜和/或视网膜下间隙在内的眼睛的任何部位来施用组合物。
本文公开的药物组合物可以通过非侵入性方法递送。施用制剂的非侵入性模式的实例可包括使用无针注射装置，以及局部施用，例如向角膜的滴眼剂。可以采用多种给药途径来有效递送药物组合物。在一些实施方案中，通过多种给药途径，例如视网膜下和玻璃体内，来递送组合物，以增加抗体递送的效率。在一些实施方案中，在视网膜下和/或玻璃体内注射之前进行玻璃体切除术。
在一些实施方案中，包含10mg/mL至120mg/mL的抗体或化合物的液体制剂在预填充的注射器中，并且以至多约500μL的体积玻璃体内施用。在一些实施方案中，包含10mg/mL至120mg/mL的抗体或化合物的液体制剂在预填充的注射器中，并且以至多约100μL的体积玻璃体内施用。在一些实施方案中，包含10mg/mL至120mg/mL的抗体或化合物的液体制剂在预填充的注射器中，并且以约50μL的体积玻璃体内施用。
本文公开的药物组合物可靶向至任何合适的眼细胞，包括例如内皮细胞如血管内皮细胞、视网膜细胞如视网膜色素上皮(RPE)、角膜细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞、神经胶质细胞、周细胞、虹膜上皮细胞、神经源细胞、睫状上皮细胞、Müller细胞、眼周围和附接在眼睛上的肌肉细胞，如外直肌的细胞、眼眶脂肪细胞、巩膜和巩膜外层的细胞、小梁网的细胞或结缔组织细胞。
给药
本文所述的化合物、抗体或治疗剂可以在疾病或病况出现之前、期间或之后施用，并且施用含有该化合物、抗体或治疗剂的组合物的时机可以改变。例如，该组合物可以用作预防剂，并且可以连续地施用于易患病况或疾病的受试者，以减小该疾病或病况发生的可能性。可以以足以治愈或至少部分阻止疾病或状况的症状或者治愈、治疗、改善或缓解该状况的量将该组合物施用于已经患有该疾病或状况的受试者。可在症状发作期间或发作之后尽可能快地将该组合物施用于受试者。可在症状发作的前48小时内、症状发作的前24小时内、症状发作的前6小时内或症状发作的3小时内开始该化合物、抗体或治疗剂的施用。可使用本文所述的任何制剂，经由任何实用的途径，如通过本文所述的任何途径进行初始施用。该化合物、抗体或治疗剂可在检测到或怀疑疾病或病况发作后，在可行的情况下尽可能快地施用，并且持续治疗疾病所必须的时间长度，例如约1个月至约3个月。治疗的长度可因每个受试者而异。对于这种用途有效的量可基于疾病或状况的严重程度和病程，既往治疗，受试者的健康状态、体重和对药物的反应以及主治医师的判断而变化。临床症状的改善可通过，例如，间接检眼镜检查、眼底照相、荧光素血管病变(fluorescein angiopathy)、视网膜电描记术、外部眼检查、裂隙灯活组织显微镜检查、压平眼压测量法、厚度测量法、光学相干体层摄影术或自动验光(autorefaction)来监测。
本文所述的药物组合物可以是适合于单次施用精确剂量的单位剂型的形式。在单位剂型中，所述制剂可分为含有适量的一种或多种化合物、抗体或治疗剂的单位剂量。该单位剂量可以是含有离散量的该制剂的包装的形式。非限制性实例是包装的注射剂、小瓶和安瓿。可将本文公开的水性悬浮液组合物包装在不可重新盖紧的单剂量容器中。可重新盖紧的多剂量容器可以例如与防腐剂组合使用或者不与防腐剂组合使用。本文公开的注射用制剂可以以单位剂型存在于例如安瓿或具有防腐剂的多剂量容器中。
本文公开的多种化合物、抗体或治疗剂可以以任意顺序施用或同时施用。如果同时施用，则可以以单一、统一的形式或以多种形式，例如作为多个独立的注射或输注来提供所述多种化合物、抗体或治疗剂。所述化合物、抗体或治疗剂可一起包装在一个包装中或独立地包装在多个包装中。可以以多个剂量来给予一种或全部化合物、抗体或治疗剂。如果并非同时施用，则多次给药之间的时机可变化长达约一个月。
可以在任何时间间隔之间进行眼内注射，以提高递送效率和/或最小化或避免对周围组织的损害。两次或更多次眼内注射之间的时间间隔可以是例如约1分钟至约60分钟、约1分钟至约5分钟、约5分钟至约10分钟、约10分钟至约15分钟、约15分钟至约20分钟、约20分钟至约25分钟、约25分钟至约30分钟、约30分钟至约35分钟、约35分钟至约40分钟、约40分钟至约45分钟、约45分钟约50分钟、约50分钟至约55分钟或约55分钟至约60分钟。
眼内注射可以以任何速率进行。眼内注射的速率可以是例如约1μL/sec至约500μL/sec、约1μL/sec至约10μL/sec、约10μL/sec至约20μL/sec、约20μL/sec至约30μL/sec、约30μL/sec至约40μL/sec、约40μL/sec至约50μL/sec、约50μL/sec至约60μL/sec、约60μL/sec至约70μL/sec、约70μL/sec至约80μL/sec、约80μL/sec至约90μL/sec、约90μL/sec至约100μL/sec、约100μL/sec至约110μL/sec、约110μL/sec至约120μL/sec、约120μL/sec至约130μL/sec、约130μL/sec至约140μL/sec、约140μL/sec至约150μL/sec、约150μL/sec至约160μL/sec、约160μL/sec至约170μL/sec、约170μL/sec至约180μL/sec、约180μL/sec至约190μL/sec、约190μL/sec至约200μL/sec、约200μL/sec至约300μL/sec、约300μL/sec至约400μL/sec或约400μL/sec至约500μL/sec。
本文公开的化合物、抗体或治疗剂可以以0.0001mg/kg至约1000mg/kg、约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约20mg/kg、约0.02mg/kg至约7mg/kg、约0.03mg/kg至约5mg/kg、约0.05mg/kg至约3mg/kg、约0.1mg/kg至约50mg/kg、约0.1mg/kg至约0.5mg/kg、约0.2mg/kg至约0.6mg/kg、约0.3mg/kg至约0.7mg/kg、约0.4mg/kg至约0.8mg/kg、约0.1mg/kg至约0.9mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg或约3mg/kg至约7mg/kg受试者质量的剂量施用。
本文所述的化合物、抗体或治疗剂可以以任何期望的间隔施用。该化合物、抗体或治疗剂的施用可具有规律的或不规律的给药时间表，以适合施用该化合物、抗体或治疗剂的人或接受该化合物、抗体或治疗剂的受试者。例如，该化合物、抗体或治疗剂可以每天两次、每天一次、一周五次、一周四次、一周三次、一周两次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每两个月一次、每十二周一次、每三个月一次、每四个月一次、每六个月一次、每年一次或以更少的频率施用。在一些实施方案中，施用是每隔一周一次。
施用的量可以在每个剂量中是相同的量，或者该剂量可以在剂量之间不同。例如，可以在早上施用第一量而可以在晚上施用第二量。
本文所述的化合物、抗体或治疗剂可以以必要或方便的任何量来施用。例如，本文所述的化合物可通过任何给药途径以每剂量约0.05mg至约300mg、约0.1mg至约300mg、约0.1mg至约200mg、约0.1mg至约100mg、约0.05mg至约1.5mg、约0.1mg至约1.5mg、约0.05mg至约1mg、约1mg至约1.5mg、约0.5mg至约6mg、约1mg至约4mg、约2mg至约10mg、约10mg至约30mg、约30mg至约50mg、约50mg至约70mg、约70mg至约100mg或约0.1mg至约1mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.11mg、约0.12mg、约0.13mg、约0.14mg、约0.15mg、约0.16mg、约0.17,mg、约0.18mg、约0.19mg、约0.2mg、约0.21mg、约0.22mg、约0.23mg、约0.24mg、约0.25mg、约0.26mg、约0.27,mg、约0.28mg、约0.29mg、约0.3mg、约0.31mg、约0.32mg、约0.33mg、约0.34mg、约0.35mg、约0.36mg、约0.37,mg、约0.38mg、约0.39mg、约0.4mg、约0.41mg、约0.42mg、约0.43mg、约0.44mg、约0.45mg、约0.46mg、约0.47,mg、约0.48mg、约0.49mg、约0.5mg、约0.51mg、约0.52mg、约0.53mg、约0.54mg、约0.55mg、约0.56mg、约0.57,mg、约0.58mg、约0.59mg、约0.6mg、约0.61mg、约0.62mg、约0.63mg、约0.64mg、约0.65mg、约0.66mg、约0.67,mg、约0.68mg、约0.69mg、约0.7mg、约0.71mg、约0.72mg、约0.73mg、约0.74mg、约0.75mg、约0.76mg、约0.77,mg、约0.78mg、约0.79mg、约0.8mg、约0.81mg、约0.82mg、约0.83mg、约0.84mg、约0.85mg、约0.86mg、约0.87,mg、约0.88mg、约0.89mg、约0.9mg、约0.91mg、约0.92mg、约0.93mg、约0.94mg、约0.95mg、约0.96mg、约0.97,mg、约0.98mg、约0.99mg、约1mg、约1.5mg、约2mg、约2.5mg、约3mg、约3.5mg、约4mg、约4.5mg、约5mg、约5.5mg、约6mg、约6.5mg、约7mg、约7.5mg、约8mg、约8.5mg、约9mg、约9.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg或约300mg的量施用于受试者。
联合疗法
本文提供的药物组合物可与其他疗法，例如化疗、放疗、手术、抗炎剂或维生素一起施用。其他药剂可在该药物组合物之前、之后或伴随该药物组合物施用。
在一些实施方案中，本文所述的化合物或抗体可以单独使用，或作为混合物的组分与一种或多种治疗剂联合使用。
在一些实施方案中，本公开提供了靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体与一种或多种附加抗VEGF剂的共同施用，这可以稳定脉管系统以防止新血管形成。在一些实施方案中，多特异性化合物或抗体与一种或多种附加抗VEGF剂的共同施用可以稳定脉管系统以防止渗漏。抗VEGF剂可以是化合物、重组蛋白、抗体、抗原结合片段、其变体或衍生物(例如scFv)、包含一个或多个经设计的锚蛋白重复的蛋白质、经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物或衍生自一个或多个受体例如VEGF受体的肽，或人VEGF受体1和2的VEGF结合部分。
抗VEGF剂的非限制性实例包括贝伐珠单抗雷珠单抗阿柏西普康柏普西、brolucizumab、RTH258、VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，如索拉非尼、舒尼替尼、阿昔替尼、帕唑帕尼、vandetinib、卡博替尼、瑞戈非尼和4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474)、VEGF变体、可溶性VEGF受体片段或阱、能够阻断VEGF或VEGFR的适体(例如培加尼布)、中和性抗VEGFR抗体或其片段(例如雷莫芦单抗、p1C11、1121、1121B)、抗KDR抗体、抗flt1抗体、VEGFR酪氨酸激酶的低分子量抑制剂、结合VEGF的DARPin(例如abicipar、MP0112、MP0250)、包含一种或多种与VEGF结合的经设计的锚蛋白重复的蛋白质、adnectin(例如CT-322)、anticalin(例如PRS-050)、胶原蛋白IV衍生的生物模拟肽(例如AXT-107)。
VEGF调节剂的其他非限制性实例包括抗炎剂，例如地塞米松、氟轻松和曲安西龙。靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体可以与任何附加抗VEGF剂以任何组合联合施用，例如在治疗开始时、治疗期间的任何时间或在使用附加抗VEGF剂的治疗已经结束后的任何时间。另外，可以在治疗期间调节多特异性化合物或抗体的剂量。另外，可以在治疗期间调整附加抗VEGF剂的剂量。可以例如每月一次、每三个月一次、每六个月一次或每年一次施用多特异性化合物或抗体，其中附加抗VEGF剂在治疗之间以任何频率施用。本文还公开了治疗本文公开的疾病或病况的方法。该方法包括向受试者施用：
a)治疗有效量的靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体；以及
b)治疗有效量的附加抗VEGF剂；
其中该多特异性化合物或抗体和附加抗VEGF剂的施用可以如本文所述进行。
在一些实施方案中，本公开提供了靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体与一种或多种附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂的共同施用，这可以稳定脉管系统以防止新血管形成。在一些实施方案中，多特异性化合物或抗体与一种或多种附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂的共同施用可以稳定脉管系统以防止渗漏。抗HPTP-β(VE-PTP)剂可以是化合物、重组蛋白、抗体、抗原结合片段、其变体或衍生物(例如，scFv)、包含一个或多个经设计的锚蛋白重复的蛋白质、经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物或衍生自一个或多个受体的肽。在一些实施方案中，附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂可以通过促进蛋白质磷酸化如Tie2蛋白的磷酸化来激活Tie2信号传导。在一些实施方案中，附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂可以与HPTP-β(VE-PTP)结合，
靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体可以与任何附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂以任意组合联合施用，例如在治疗开始时、在治疗期间的任何时间或在使用附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂的治疗已结束后的任何时间。可以在治疗期间调整多特异性化合物或抗体的剂量。可以在治疗期间调整附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂的剂量。例如，可以每月、每三个月一次、每六个月一次或每年一次施用多特异性化合物或抗体，其中在治疗之间以任何频率施用附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂。本文还公开了治疗本文公开的疾病或病况的方法。。该方法包括向受试者施用：
a)治疗有效量的靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体；以及
b)治疗有效量的附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂；
其中该多特异性化合物或抗体和附加抗HPTP-β(VE-PTP)剂的施用可以如本文所述进行。
在一些实施方案中，本公开提供了靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体与一种或多种附加Tie2受体激活化合物的共同施用。附加Tie2受体激活化合物可以是例如血管生成素1重组蛋白、Ang1模拟物、Tie2激动剂、肽、HPTP-β(VE-PTP)磷酸酶抑制剂、Tie2-拟肽、四聚聚环氧乙烷成簇肽、胶原蛋白IV生物模拟肽、化合物、重组蛋白、抗体、抗原结合片段、其变体或衍生物(例如，scFv)、亲和体、avimer、adnectin、包含一个或多个经设计的锚蛋白重复的蛋白质、经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、锚蛋白、锚蛋白重复蛋白、亲和体、avimer、adnectin、anticalin、Fynomer、Kunitz结构域、knottin、β-发夹模拟物，或衍生自一个或多个受体的肽。在一些实施方案中，所述一种或多种附加Tie2受体激活化合物是小分子。在一些实施方案中，所述一种或多种附加Tie2受体激活化合物改善了通过眼淋巴管、Schlemm管或角膜缘淋巴管的排出。在一些实施方案中，所述一种或多种附加Tie2受体激活化合物以滴眼剂的形式施用。在一些实施方案中，施用所述一种或多种附加Tie2受体激活化合物以治疗原发性开角型青光眼、年龄相关性黄斑变性、心血管疾病或囊性肾病。在一些实施方案中，所述一种或多种附加Tie2受体激活化合物可以是，例如，MAN-01、AXT-107或vasculotide。在一些实施方案中，本文公开的化合物可以与例如MAN-01、AXT-107或vasculotide共同施用。
靶向HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体可与任何附加Tie2受体激活化合物以任何组合联合施用，例如在治疗开始时、治疗期间的任何时间或在使用附加Tie2受体激活化合物的治疗已经结束后的任何时间。可以在治疗期间调整多特异性化合物或抗体的剂量。可以在治疗期间调整附加Tie2受体激活化合物的剂量。例如，可以每月、每三个月一次、每六个月一次或每年一次施用多特异性化合物或抗体，其中附加Tie2受体激活化合物在多特异性化合物或抗体治疗之间以任意频率施用。本文还公开了治疗本文公开的疾病或病况的方法。该方法包括向受试者施用：
a)治疗有效量的靶向例如HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的多特异性化合物或抗体；以及
b)治疗有效量的Tie2激活剂；
其中该多特异性化合物或抗体和附加Tie2受体激活化合物的施用可以如本文所述进行。
小鼠模型
氧诱发的缺血性视网膜病变模型
氧诱发的缺血性视网膜病变模型可以被认为模拟增生性视网膜新血管形成和增生性糖尿病视网膜病变的各个方面。可以将一周龄的小鼠放置于密封室中，并暴露于高氧(75±3％氧气)五天，从而在出生后第17天到21天之间，例如在血管化和无血管视网膜之间的连接处导致高氧诱发的新血管形成。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定对新血管形成和/或血管渗漏的作用。新血管形成和/或血管渗漏可以如下所述进行评估，
Rho/VEGF小鼠模型
Rho/VEGF小鼠模型可以模拟新血管年龄相关性黄斑变性的各个方面。具有由视紫红质启动子驱动的血管内皮生长因子(VEGF)表达的转基因小鼠(rho/VEGF小鼠)可以发展出视网膜新血管形成、视网膜血管瘤增生和视网膜血管渗漏。在rho/VEGF小鼠中，光感受器中的VEGF表达可以在出生后的第5天到第10天之间开始，在此期间深毛细血管床发育。新血管形成可以起源于视网膜的深毛细血管床，并生长到视网膜下间隙。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定对新血管形成和/或血管渗漏的作用。新血管形成和/或血管渗漏可以如下所述进行评估。
Tet/视蛋白/VEGF小鼠模型
具有与视紫红质启动子偶联的反向四环素反式激活物(rtTA)诱导型启动子控制下的VEGF的小鼠(Tet/视蛋白/VEGF小鼠)可用作新血管形成、视网膜血管渗漏和视网膜脱离的诱导模型。在这些小鼠中，可以通过施用多西环素来诱导视网膜中的VEGF转基因表达。VEGF诱导后三到四天，新血管形成可能变得明显。新血管形成可能会更广泛，并可能导致视网膜外褶皱，然后在约五天内导致视网膜完全脱离。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定对新血管形成、血管渗漏和/或视网膜脱离的作用。新血管形成和/或血管渗漏可以如下所述进行评估。为了评估视网膜脱离，可以将眼睛冷冻在切割温度包埋溶液中，穿过整个眼睛切出十微米的切片，并用Hoechst对切片进行染色。可以通过光学显微术检查切片，通过图像分析测量每个切片的视网膜脱离的平均长度，并计算视网膜的脱离百分比。
Tet/视蛋白/Ang2小鼠模型
Tet/视蛋白/Ang2小鼠在视网膜中具有可诱导的Ang2表达。这些小鼠可用于研究在各种实验条件下Ang2表达的影响。例如，当VEGF水平高与低时，Tet/视蛋白/Ang2小鼠可用于确定Ang2表达对新血管形成的作用，或在氧诱发的缺血性视网膜病变模型中确定Ang2表达的作用。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定Ang2表达对治疗功效的影响。
激光诱导的脉络膜新血管形成模型
可以认为激光诱导的脉络膜新血管形成模型可模拟新血管年龄相关性黄斑变性的各个方面。可对麻醉的小鼠进行散瞳，可通过使用裂隙灯系统和盖玻片作为接触镜，通过氪激光器例如对视网膜给予烧伤。一只眼睛可以产生多个烧伤，例如，每只眼睛在三个位置处烧伤。燃烧可导致Bruch膜破裂。脉络膜新血管形成可以在激光处理后的多个时间点进行评估，例如，激光处理后一周、两周或四周。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定对新血管形成的作用。眼杯可以用FITC标记的GSA进行染色，将脉络膜平铺封固，并通过荧光显微术和图像分析来测量每个Bruch膜破裂部位的脉络膜新血管形成区域。新血管形成和/或血管渗漏还可以如下所述进行评估。
新血管形成的评估
可以使用多种技术来评估新血管形成。
荧光素血管造影可以通过在注射染料以显现血管后拍摄连续眼底照片来完成，从而允许确定新血管复合物的存在、位置和大小。例如，可以进行0.3mL的1％荧光素钠的腹膜内注射，拍摄连续眼底照片，并可以测量脉络膜新血管形成面积、总病变面积和渗漏面积。
可以通过荧光、光或电子显微术对眼睛进行处理以供评价。例如，可以给小鼠灌注荧光标记的葡聚糖，或者可以向眼睛注射GSA或靶向PECAM的抗体。可以对眼睛进行处理，以供在荧光显微镜下观察，并且可以通过例如量化每个视网膜的新血管形成面积、通过量化每个Bruch膜破裂部位的新血管形成面积或通过量化从视网膜延伸到玻璃体的新血管的核数目来量化新血管形成的程度。
视网膜新血管形成的面积可以例如使用FITC标记的GSA凝集素和荧光显微术来确定。可以将眼睛在10％福尔马林中固定，完整解剖，用PBS洗涤，在8％猪血清中封闭，并用FITC标记的GSA凝集素染色适合染色视网膜新血管形成和玻璃体血管，但不染色正常视网膜的一段时间(例如40-50分钟)。视网膜可以平铺封固，可以使用荧光显微镜获得数字图像，并将其合并为整个视网膜的单张图像。可以使用软件来测量每个视网膜的新血管形成面积。
视网膜下新血管形成的面积可以例如使用FITC标记的GSA凝集素和荧光显微术来确定。可以将眼睛在10％福尔马林中固定，可以解剖视网膜，用5％猪血清封闭，用FITC缀合的GSA染色2小时以染色血管细胞，并以光感受器面朝上的方式平铺封因。视网膜下新血管形成的面积可以通过荧光显微术和图像分析来测量。
视网膜血管渗漏的评估
可以通过使用免疫荧光技术测量渗出的血清白蛋白来评估视网膜血管渗漏。例如，可以将眼睛在10％福尔马林中固定，可以对视网膜进行解剖，洗涤，封闭，并使用抗白蛋白抗体和荧光缀合的第二抗体进行染色。可以通过用GSA凝集素复染来标记血管，并将视网膜平铺封固。视网膜可以通过荧光显微术进行检查，白蛋白染色面积通过图像分析来确定。视网膜血管渗漏与例如糖尿病黄斑水肿和由于视网膜静脉阻塞引起的黄斑水肿有关。
血管渗漏的Miles测定
可以使用Miles测定来评估真皮皮下血管的血管渗漏。伊文思蓝是一种结合白蛋白的染料。在生理条件下，内皮对白蛋白是不可渗透的，因此伊文思蓝结合的白蛋白被限制在血管内。在促进血管通透性增加的病理条件下，内皮细胞部分失去紧密接触。内皮对小蛋白质如白蛋白变得具有渗透性。可以向小鼠静脉内注射PBS中的1％伊文思蓝染料，并皮内注射VEGF。皮内注射后30分钟，可切下皮内注射部位的组织并用甲酰胺提取，以评估伊文思蓝染料的外渗。血管渗漏可以通过测量每毫克组织中所掺入的染料来量化，例如，使用光密度测量和标准曲线。可以给小鼠施用目的化合物，例如本公开的抗体或化合物，以确定对血管渗漏的作用。
癌症模型
可以在多种癌症模型中测试本公开的化合物或抗体作为癌症治疗的功效。在一些癌症模型中，可以将来自细胞系的癌细胞植入受体动物，例如小鼠中。合适的小鼠品系的非限制性实例包括C57BL6、BALB/C、C3H、FVB/N和FVB/N-Tg(MMTV-PyVT)634Mul。合适的癌细胞系的非限制性实例包括4T1、E0771和P0008。例如，可以将4T1或E0771细胞系的细胞植入乳腺垫中作为乳腺癌的模型。4T1或E0771细胞可以植入例如雌性裸鼠的第三乳腺脂肪垫中。
实体瘤的大小可用卡尺测量，并计算肿瘤体积。可以对肿瘤进行处理以进行组织病理学评价或荧光显微镜检查，以评估例如肿瘤面积、肿瘤等级、转移计数、转移面积、每个肿瘤灶的细胞核数量、肿瘤内血管直径、肿瘤内血管密度、肿瘤血管成熟度、血管周细胞覆盖、血管周细胞与内皮细胞之间的接近程度，或将肿瘤灶分级为血管内或血管外的。
可使用自发转移模型研究本公开的化合物或抗体对转移的影响。植入肿瘤后，可以切除原发肿瘤(例如，达到5mm大小时)，然后通过肉眼或组织病理学评价动物的转移，例如以确定肺、肝、淋巴结和骨中的转移数目和大小。
为了评价血管稳定性对转移的影响，可以使用其中可以静脉内注射肿瘤细胞的模型，随后评价动物的血管内转移与外渗转移。例如，可以静脉内注射4T-1细胞，并对肺进行处理以进行组织病理学评价，以量化血管内转移与血管外转移。
可以肉眼对转移进行计数和测量，例如，通过将肺浸入Bouin溶液中，然后用立体显微镜对其进行检查。
为了在体内测量肿瘤血管渗透性，可以使用活体内多光子显微术。例如在治疗前和治疗后时间点，可以给动物注射荧光标记的牛血清白蛋白。在每个时间点，可以选择肿瘤内的两个不同区域，并使用多光子激光扫描显微镜在一个小时内每十分钟通过每个区域拍摄记录BSA荧光的200微米图像堆栈。该分析方法可以涉及三维血管追踪以创建血管度量，以及体素强度相对于到最近血管的距离的随时间的三维图。利用三维图像配准，可以针对样本随时间的移动对图像进行校正。可以计算归一化的经血管通量。
说明性CDR组合
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1和HCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1和HCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2和HCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2和HCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR2。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个和SEQ ID NO:81-87中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个和SEQ ID NO:88-90中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个和SEQ IDNO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:88-90中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ IDNO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:88-90中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ IDNO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ IDNO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:91-93中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ IDNO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ IDNO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ IDNO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:94-96中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ IDNO:91-93中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ IDNO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76-80中的任一个、SEQ ID NO:81-87中的任一个、SEQ ID NO:88-90中的任一个、SEQ ID NO:91-93中的任一个、SEQ ID NO:94-96中的任一个和SEQ ID NO:97-98中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:81。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:81和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88和SEQ IDNO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:82。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:77和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77和SEQ IDNO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:81和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQID NO:81和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:76、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:88。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:82和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQID NO:82和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:77、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:77、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQID NO:81、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88、SEQID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:94。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:94和SEQ ID NO:97。
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在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:92。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:83和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQID NO:83和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:92。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:78、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:78、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:92。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95和SEQID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:92。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ IDNO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQID NO:83、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ IDNO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:95。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:97。
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在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:84。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:90。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:90。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90和SEQ IDNO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:86。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:86和SEQ ID NO:90。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86和SEQ IDNO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:90。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:84和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQID NO:84和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:79、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ IDNO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:96和SEQID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:90。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQID NO:86和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ IDNO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQID NO:84、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ IDNO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:90、SEQID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:93。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQID NO:90、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ IDNO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:93和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:98。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:93、SEQ IDNO:96和SEQ ID NO:98。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:85。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:85和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89和SEQ IDNO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:87。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:87和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87和SEQ IDNO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ IDNO:85和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQID NO:85和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:80、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:96和SEQID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:89。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ IDNO:87和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQID NO:87和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQID NO:85、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:89、SEQID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:91。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQID NO:89、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ IDNO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:96。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ IDNO:91和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ IDNO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ IDNO:96和SEQ ID NO:97。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个和SEQ ID NO:114-123中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:99-113中的任一个和SEQ ID NO:124-131中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:124-131中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:124-131中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ IDNO:114-123中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ IDNO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ IDNO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:132-137中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:138-143中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:99-113中的任一个、SEQ ID NO:114-123中的任一个、SEQ ID NO:124-131中的任一个、SEQ ID NO:132-137中的任一个、SEQ ID NO:138-143中的任一个和SEQ ID NO:144-146中的任一个。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:144。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQID NO:113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145。
在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:144。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:125、SEQ IDNO:132、SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:144。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:143和SEQID NO:145。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:130、SEQ IDNO:135、SEQ ID NO:143和SEQ ID NO:145。在一些实施方案中，本公开的抗体或化合物包含SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:143和SEQID NO:145。
实施例
实施例1：包含抗体HC2:LC1和阿柏西普衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成将抗体HC2:LC1的重链融合到阿柏西普衍生的VEGF结合域上的四价双特异性抗体，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:22(阿非西普衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:149)与SEQ ID NO:17共表达，以提供四价双特异性抗体HC2-AFL:LC1，其包含表33中所示的序列。SEQ ID NO:149的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQID NO:11)。SEQ ID NO:17的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-AFL:LC1不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-AFL:LC1可包含SEQ IDNO:254和SEQ ID NO:250。
实施例2：包含抗体HC2:LC1和brolucizumab衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成将抗体HC2:LC1的重链融合到brolucizumab衍生的VEGF结合域上的四价双特异性抗体，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:150)与SEQ ID NO:17共表达，以提供四价双特异性抗体HC2-BRO:LC1，其包含表34中所示的序列。SEQ ID NO:150的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQID NO:11)。SEQ ID NO:17的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-BRO:LC1不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-BRO:LC1可包含SEQ IDNO:255和SEQ ID NO:250。
实施例3：包含抗体HC2:LC1和雷珠单抗衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成将抗体HC2:LC1的重链融合到雷珠单抗衍生的VEGF结合域上的四价双特异性抗体，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:28(雷珠单抗衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:151)与SEQ ID NO:17共表达，以提供四价双特异性抗体HC2-RAN:LC1，其包含表35中所示的序列。SEQ ID NO:151的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQID NO:11)。SEQ ID NO:17的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-RAN:LC1不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-RAN:LC1可包含SEQ IDNO:256和SEQ ID NO:250。
实施例4：双特异性化合物的表征。
产生了本公开的以下多特异性抗体：(i)HC2-RAN:LC1，(ii)HC2-AFL:LC1，(iii)HC2-BRO:LC1，(iv)HC2-ABI:LC1，(v)HC2:LC1-AFL，(vi)HC2:LC1-BRO，(vii)HC2:LC1-ABI，(viii)HC2-AFL:LC1-AFL，(ix)HC2-BRO:LC1-BRO，和(x)HC2-ABI:LC1-ABI。进行酶联免疫吸附测定(ELISA)，以确定这些抗体与VEGF和HPTP-β(VE-PTP)的结合。对于所有构建体均证实了与HPTP-β(VE-PTP)的结合，并且对于除了HC2-RAN:LC1之外的所有构建体均证实了与VEGF的结合。
如表36、图16、图17和图18所述，产生并表征了实施例1-3中所述的四价双特异性抗体。
表36提供了小规模生产和双特异性候选物表征的结果。
**m/c＝测得的/计算的
图16提供了证明四价双特异性抗体HC2-AFL:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合的ELISA数据。将结合与对照(上图中的HC2:LC1，下图中的VEGF-R2-Fc嵌合体)进行比较。
图17提供了证明四价双特异性抗体HC2-BRO:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合的ELISA数据。将结合与对照(上图中的HC2:LC1，下图中的VEGF-R2-Fc嵌合体)进行比较。
图18提供了证明四价双特异性抗体HC2-RAN:LC1与HPTP-β(上图)和VEGF(下图)的结合的ELISA数据。将结合与对照(上图中的HC2:LC1，下图中的VEGF-R2-Fc嵌合体)进行比较。
实施例5：包含抗体HC2:LC1和abicipar衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成将抗体HC2:LC1的重链融合到abicipar衍生的VEGF结合域上的四价双特异性抗体，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14的残基1-467(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:244(abicipar衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:231)与SEQ ID NO:17共表达，以提供四价双特异性抗体HC2-ABI:LC1，其包含表37中所示的序列。SEQ ID NO:231的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQID NO:11)。SEQ ID NO:17的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-ABI:LC1不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-ABI:LC1可包含SEQ IDNO:257和SEQ ID NO:250。
实施例6：包含抗体HC2:LC1和brolucizumab衍生的序列的六价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有brolucizumab衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有brolucizumab衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:150和SEQ ID NO:218共表达，以提供表38所示的六价双特异性抗体HC2-BRO:LC1-BRO。SEQ ID NO:150的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQID NO:218的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-BRO:LC1-BRO不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-BRO:LC1-BRO可包含SEQ ID NO:255和SEQ ID NO:258。
实施例7：包含抗体HC2:LC1和阿柏西普衍生的序列的六价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有阿柏西普衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:22(阿柏西普衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有阿柏西普衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:22(阿柏西普衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:149和SEQ ID NO:219共表达，以提供表39所示的六价双特异性抗体HC2-AFL:LC1-AFL。SEQ ID NO:149的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQID NO:219的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-AFL:LC1-AFL不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-AFL:LC1-AFL可包含SEQ ID NO:254和SEQ ID NO:259。
实施例8：包含抗体HC2:LC1和雷珠单抗衍生的序列的六价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有雷珠单抗衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:28(雷珠单抗衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有雷珠单抗衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:28(雷珠单抗衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:151和SEQ ID NO:243共表达，以提供表40所示的六价双特异性抗体HC2-RAN:LC1-RAN。SEQ ID NO:151的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQID NO:243的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-RAN:LC1-RAN不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-RAN:LC1-RAN可包含SEQ ID NO:256和SEQ ID NO:260。
实施例9：包含抗体HC2:LC1和abicipar衍生的序列的六价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有abicipar衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14的残基1-467(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:244(abicipar衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有abicipar衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:244(abicipar衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:231和SEQ ID NO:232共表达，以提供表41所示的六价双特异性抗体HC2-ABI:LC1-ABI。SEQ ID NO:231的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQID NO:232的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-ABI:LC1-ABI不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-ABI:LC1-ABI可包含SEQ ID NO:257和SEQ ID NO:261。
实施例10：包含抗体HC2:LC1和brolucizumab衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有brolucizumab衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:218)与SEQ ID NO:14共表达，以提供四价双特异性抗体HC2:LC1-BRO，其包含表42所示的序列。SEQ ID NO:14的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ IDNO:11)。SEQ ID NO:218的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2:LC1-BRO不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2:LC1-BRO可包含SEQ ID NO:247和SEQ ID NO:258。
实施例11：包含抗体HC2:LC1和阿柏西普衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有阿柏西普衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:22(阿柏西普衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:219)与SEQ ID NO:14共表达，以提供四价双特异性抗体HC2:LC1-AFL，其包含表43所示的序列。SEQ ID NO:14的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ IDNO:11)。SEQ ID NO:219的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2:LC1-AFL不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2:LC1-AFL可包含SEQ ID NO:247和SEQ ID NO:259。
实施例12：包含抗体HC2:LC1和雷珠单抗衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有雷珠单抗衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:28(雷珠单抗衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:243)与SEQ ID NO:14共表达，以提供四价双特异性抗体HC2:LC1-RAN，其包含表44所示的序列。SEQ ID NO:14的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ IDNO:11)。SEQ ID NO:243的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2:LC1-RAN不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2:LC1-RAN可包含SEQ ID NO:247和SEQ ID NO:260。
实施例13：包含抗体HC2:LC1和abicipar衍生的序列的四价双特异性抗体。
为了生成在C末端添加有abicipar衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:244(abicipar衍生的序列)。
所得多肽(SEQ ID NO:232)与SEQ ID NO:245(SEQ ID NO:14的残基1-467)共表达，以提供四价双特异性抗体HC2:LC1-ABI，其包含表45所示的序列。SEQ ID NO:245的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQ ID NO:232的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ IDNO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2:LC1-ABI不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2:LC1-ABI可包含SEQ ID NO:247和SEQ ID NO:260。
实施例14：激活Tie2的双特异性抗体
将人脐带内皮细胞(HUVEC)接种到用猪明胶包被的T75烧瓶上。使用完全培养基(EGM或EGM-2)进行细胞维持，并使用胰蛋白酶/EDTA传代培养到100mm培养皿中。3天后，漂洗100mm培养皿，并在基础培养基(EBM、EBM-2、OptiMEM I)中于37℃/5％CO2中用如图19所示的5或50nM的下列抗体之一处理30分钟：(i)HC2:LC1——一种对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体；(ii)HC2-BRO:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(iii)HC2-AFL:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；(iv)HC2-BRO:LC1-BRO——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；或(v)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域。处理后，将细胞用含有1mM NaOV的冰冷PBS漂洗，并在完全Triton X裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，137mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，2mM EDTA，1mM NaOV，1mM NaF，1mM PMSF，1μg/mL亮抑酶肽，1μg/mL抑胃酶肽)中裂解。
用抗Tie2和抗VEGFR2抗体免疫沉淀裂解物。将1-10μg VEGFR2抗体(MAB3573，#89109)、TIE-2抗体(Ab33)和25μL蛋白A/G琼脂糖珠加入1mL HUVEC裂解物中，并将试管置于旋转平台上在4℃下放置1-3天。将IP反应管用1mL完全Triton-X裂解缓冲液漂洗，然后重悬于2x含DTT的加样染料中。将试管在95℃下孵育5分钟，离心，并将每孔25μL加入Tris甘氨酸凝胶中。将样品在凝胶上解析，转移到PVDF膜上，并进行系列Western印迹分析以检测磷酸酪氨酸(磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2)，随后重新探测以对总Tie2和总VEGFR2进行印迹分析。在转移到PVDF膜上之前，将凝胶在125V下运行75分钟。在室温(RT)下，在旋转平台上，将膜在5％BSA/0.05％吐温Tris洗涤缓冲液中封闭1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第一抗体(PY99；VEGFR2-A3；TIE-2Ab33)保持1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第二抗体(抗小鼠hrp)保持1小时。在各步骤之间用0.05-0.1％吐温20+Tris缓冲盐水(TBS)漂洗膜3次。使用ECL检测系统对条带进行可视化。对用200mM甘氨酸处理24-48h的批次进行重新探测。
如图19所示，所有测试的双特异性抗体均增加了HUVECS中的基础Tie2活化，而基础VEGFR2磷酸化不受影响。上图提供的Western印迹显示Tie2活化和VEGFR2活化，如通过分别检测磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2(上半部分)以及总Tie2和VEGFR2(下半部分)所示。下图提供了磷酸化的Tie2与总Tie2的光密度比。
用本公开的以下抗体重复该测定，它们在不存在外源Ang1的情况下也增强了Tie2活化：(i)HC2-RAN:LC1，(ii)HC2-ABI:LC1，(iii)HC2:LC1-AFL，(iv)HC2:LC1-BRO，(v)HC2:LC1-ABI，和(vi)HC2-ABI:LC1-ABI。
实施例15：双特异性抗体增强Ang1介导的Tie2活化并阻断VEGF介导的VEGFR2活化。
将人脐带内皮细胞(HUVEC)接种到用猪明胶包被的T75烧瓶上。使用完全培养基(EGM或EGM-2)进行细胞维持，并使用胰蛋白酶/EDTA传代培养到100mm培养皿中。3天后，漂洗100mm培养皿，并在基础培养基(EBM、EBM-2、OptiMEM I)中于37℃/5％CO2中进行模拟预处理或用如图20所示的5或50nM的下列抗体之一进行预处理30分钟：(i)HC2:LC1——一种对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体；(ii)HC2-BRO:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(iii)HC2-AFL:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；(iv)HC2-BRO:LC1-BRO——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；或(v)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域。预处理后，将细胞在基础培养基(磷酸盐缓冲盐水，PBS+0.2％牛血清白蛋白，或OptiMEM I)中用VEGF(5ng/mL)和Ang1(50ng/mL)于37℃/5％CO2处理6分钟。处理后，将细胞用含有1mM NaOV的冰冷PBS漂洗，并在完全Triton X裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，137mM NaCl，10％甘油，1％TritonX-100，2mM EDTA，1mM NaOV，1mM NaF，1mM PMSF，1μg/mL亮抑酶肽，1μg/mL抑胃酶肽)中裂解。
用抗Tie2和抗VEGFR2抗体免疫沉淀裂解物。将1-10μg VEGFR2抗体(MAB3573，#89109)、TIE-2抗体(Ab33)和25μL蛋白A/G琼脂糖珠加入1mL HUVEC裂解物中，并将试管置于旋转平台上在4℃下放置1-3天。将IP反应管用1mL完全Triton-X裂解缓冲液漂洗，然后重悬于2x含DTT的加样染料中。将试管在95℃下孵育5分钟，离心，并将每孔25μL加入Tris甘氨酸凝胶中。将样品在凝胶上解析，转移到PVDF膜上，并进行系列Western印迹分析以检测磷酸酪氨酸(磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2)，随后重新探测以对总Tie2和总VEGFR2进行印迹分析。在转移到PVDF膜上之前，将凝胶在125V下运行75分钟。在室温(RT)下，在旋转平台上，将膜在5％BSA/0.05％吐温Tris洗涤缓冲液中封闭1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第一抗体(PY99；VEGFR2-A3；TIE-2Ab33)保持1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第二抗体(抗小鼠hrp)保持1小时。在各步骤之间用0.05-0.1％吐温20+Tris缓冲盐水(TBS)漂洗膜3次。使用ECL检测系统对条带进行可视化。对用200mM甘氨酸处理24-48h的批次进行重新探测。
用VEGF和Ang1处理导致VEGFR2和Tie2的磷酸化增加(图20)。在用Ang1和VEGF处理的细胞中，用对HPTP-β具有特异性的HC2:LC1抗体进行处理增强了Ang1介导的Tie2活化。用双特异性抗体处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Ang1介导的Tie2活化并阻断了VEGF介导的VEGFR2活化。上图提供了Western印迹，其显示了Tie2活化和VEGFR2活化，如通过分别检测磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2(上半部分)以及总Tie2和VEGFR2(下半部分)所示。下图提供了磷酸化的Tie2与总Tie2和磷酸化的VEGFR2与总VEGFR2的光密度比。
实施例16：双特异性抗体增强Ang1介导的Tie2活化并阻断VEGF介导的VEGFR2活化(免疫沉淀和western印迹分析)。
将人脐带内皮细胞(HUVEC)接种到用猪明胶包被的T75烧瓶上。使用完全培养基(EGM或EGM-2)进行细胞维持，并使用胰蛋白酶/EDTA传代培养到100mm培养皿中。3天后，漂洗100mm培养皿，并在基础培养基(EBM、EBM-2、OptiMEM I)中于37℃/5％CO2中用如每张图所示的本公开的多特异性抗体之一进行预处理30分钟。预处理后，将细胞在基础培养基(磷酸盐缓冲盐水，PBS+0.2％牛血清白蛋白，或OptiMEM I)中模拟处理或用VEGF和Ang1于37℃/5％CO2处理6分钟。处理后，将细胞用含有1mM NaOV的冰冷PBS漂洗，并在完全Triton X裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，137mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，2mM EDTA，1mMNaOV，1mM NaF，1mM PMSF，1μg/mL亮抑酶肽，1μg/mL抑胃酶肽)中裂解。
用抗Tie2和抗VEGFR2抗体免疫沉淀裂解物。将1-10μg VEGFR2抗体(MAB3573，#89109)、TIE-2抗体(Ab33)和25μL蛋白A/G琼脂糖珠加入1mL HUVEC裂解物中，并将试管置于旋转平台上在4℃下放置1-3天。将IP反应管用1mL完全Triton-X裂解缓冲液漂洗，然后重悬于2x含DTT的加样染料中。将试管在95℃下孵育5分钟，离心，并将每孔25μL加入Tris甘氨酸凝胶中。将样品在凝胶上解析，转移到PVDF膜上，并进行系列Western印迹分析以检测磷酸酪氨酸(磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2)，随后重新探测以对总Tie2和总VEGFR2进行印迹分析。在转移到PVDF膜上之前，将凝胶在125V下运行75分钟。在室温(RT)下，在旋转平台上，将膜在5％BSA/0.05％吐温Tris洗涤缓冲液中封闭1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第一抗体(PY99；VEGFR2-A3；TIE-2Ab33)保持1小时。在洗涤缓冲液中以1:1000的稀释度添加第二抗体(抗小鼠hrp)保持1小时。在各步骤之间用0.05-0.1％吐温20+Tris缓冲盐水(TBS)漂洗膜3次。使用ECL检测系统对条带进行可视化。对用200mM甘氨酸处理24-48h的批次进行重新探测。如下图所示，使用本公开的不同的多特异性抗体以及不同浓度的VEGF和Ang1重复该测定。
对于图21A、图21B和图21C，将细胞进行模拟预处理或用以下之一以5nM或50nM进行预处理：(i)HC2-ABI:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；(ii)HC2-ABI:LC1-ABI——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；或(iii)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域。预处理后，将细胞进行模拟处理(-)或用(5ng/mL)和Ang1(50ng/mL)处理(+)。用VEGF和Ang1处理导致VEGFR2和Tie2的磷酸化增加(图21A、图21B和图21C)。用双特异性抗体处理增强了Tie2活化并阻断了VEGFR2活化，包括在用Ang1和VEGF处理的细胞中(图21A、图21B和图21C)。图21A提供了显示Tie2活化和VEGFR2活化的Western印迹，如通过分别检测磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2(上半部分)以及总Tie2和VEGFR2(下半部分)所示。图21B提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2的光密度比。图21C提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化VEGFR2与总VEGFR2的光密度比。
对于图22A、图22B和图22C，将细胞进行模拟预处理或用以下抗体之一以5nM预处理：(i)HC2-BRO:LC1-BRO——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(ii)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；或(iii)HC2-ABI:LC1:ABI——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域。预处理后，将细胞进行模拟处理(-)，用5ng/mL VEGF和50ng/mL Ang1处理(+)，或用50ng/mL VEGF和250ng/mL Ang1处理(+++)。用VEGF和Ang1处理导致VEGFR2和Tie2的磷酸化增加(图22A、图22B和图22C)。用双特异性抗体处理增强了Tie2活化并阻断VEGFR2活化，包括在用Ang1和VEGF处理的细胞中。(图22A、图22B和图22C)。图22A提供了显示Tie2活化和VEGFR2活化的Western印迹，如通过分别检测磷酸-Tie2和磷酸-VEGFR2(上半部分)以及总Tie2和VEGFR2(下半部分)所示。图22B提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2的光密度比。图22C提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化VEGFR2与总VEGFR2的光密度比。
实施例17：双特异性抗体增强Ang1介导的Tie2活化并阻断VEGF介导的VEGFR2活化(电化学发光测定)。
将人脐带内皮细胞(HUVEC)接种到用猪明胶包被的T75烧瓶上。使用完全培养基(EGM或EGM-2)进行细胞维持，并使用胰蛋白酶/EDTA传代培养到100mm培养皿中。3天后，漂洗100mm培养皿，并在基础培养基(EBM、EBM-2、OptiMEM I)中于37℃/5％CO2中进行模拟预处理或用以下每张图所示的抗体之一预处理30分钟。
预处理后，将细胞在基础培养基(磷酸盐缓冲盐水，PBS+0.2％牛血清白蛋白，或OptiMEM I)中模拟处理或用VEGF和Ang1于37℃/5％CO2处理6分钟。处理后，将细胞用含有1mM NaOV的冰冷PBS漂洗，并在完全Triton X裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，137mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，2mM EDTA，1mM NaOV，1mM NaF，1mM PMSF，1μg/mL亮抑酶肽，1μg/mL抑胃酶肽)中裂解。
通过电化学发光对磷酸化的Tie2和磷酸化的VEGFR2进行定量。将第一抗体或捕获抗体点样到96孔Sector Imager板上。将5μL Tie2抗体(30μg/mL，AF313)或VEGFR2抗体(30μg/mL，89109)包被1小时(在室温下)或过夜(4℃)。每个板用TBS+0.02％吐温20洗涤三次(在每个步骤之间进行)。在室温下在旋转平台上用洗涤缓冲液中的MSD Blocker A-3％将孔封闭1小时。将25μL HUVEC裂解物直接添加到每个孔中，并在室温下在旋转平台上孵育1小时。将检测抗体(1)在1％封闭剂/洗涤缓冲液(Ab33；AF2720/Y992；pTyr 1214；NB100 530)中稀释至2μg/mL，并在室温下在旋转平台上以25μL/孔孵育1小时。将检测抗体(2)在1％封闭剂/洗涤缓冲液(山羊抗小鼠，GAM；山羊抗兔，GAR；均用磺基标签标记)中稀释至1μg/mL，并在室温下在旋转的平台上以25μL/孔孵育1小时。在MSD成像仪上使用150μL Meso ScaleDiscovery(MSD)读取缓冲液在每个孔中捕获信号。如下图所示，使用本公开的不同的多特异性抗体和不同浓度的VEGF和Ang1重复测定。
对于图23A和图23B，将细胞进行模拟处理或用以下抗体之一以5nM预处理：(i)HC2-BRO:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(ii)HC2:LC1-BRO——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(iii)HC2-BRO:LC1-BRO——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(iv)HC2-AFL:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；(v)HC2:LC1-AFL——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；(vi)HC2-AFL:LC1-AFL——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；(vii)HC2-ABI:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；(viii)HC2:LC1-ABI——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；或(ix)HC2-ABI:LC1-ABI——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域。图23A和图23B分别提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2之比和磷酸化VEGFR2与总VEGFR2之比。处理如下：模拟处理(-)，用5ng/mL VEGF和50ng/mL Ang1处理(+)，或用25ng/mL VEGF和250ng/mL Ang1处理(+++)。用VEGF和Ang1处理导致Tie2(图23A)和VEGFR2(图23B)的磷酸化增加。用多特异性抗体预处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Tie2活化(图23A)并抑制了VEGFR2活化(图23B)。
对于图24A和图24B，将细胞进行模拟处理或用以下抗体之一以5nM预处理：(i)HC2-BRO:LC1-BRO——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；(ii)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域；或(iii)HC2-ABI:LC1:ABI——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域。图24A和图24B分别提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2之比和磷酸化VEGFR2与总VEGFR2之比。处理如下：模拟处理(-)，用5ng/mL VEGF和50ng/mL Ang1处理(+)，或用25ng/mL VEGF和250ng/mL Ang1处理(+++)。用VEGF和Ang1处理导致Tie2(图24A)和VEGFR2(图24B)的磷酸化增加。用多特异性抗体预处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Tie2活化(图24A)并抑制了VEGFR2活化(图24B)。
对于图25A和图25B，将细胞进行模拟处理或用以下抗体之一以5或50nM预处理：(i)HC2-BRO:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域；或(ii)HC2-BRO:LC1-BRO——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的brolucizumab衍生的VEGF结合域。图25A和图25B分别提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2之比和磷酸化VEGFR2与总VEGFR2之比。处理如下：模拟处理(-)，用5ng/mL VEGF和50ng/mL Ang1处理(+)，或用25ng/mL VEGF和250ng/mL Ang1处理(+++)。用VEGF和Ang1处理导致Tie2(图25A)和VEGFR2(图25B)的磷酸化增加。用多特异性抗体预处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Tie2活化(图25A)并抑制了VEGFR2活化(图25B)。
对于图26A和图26B，将细胞进行模拟处理或用以下抗体之一以5或50nM预处理：(i)HC2-ABI:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；(ii)HC2-ABI:LC1-ABI——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；或(iii)HC2-AFL:LC1-AFL——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域。图26A和图26B分别提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2之比和磷酸化VEGFR2与总VEGFR2之比。处理如下：模拟处理(-)，或用5ng/mL VEGF和50ng/mL Ang1处理(+)。用VEGF和Ang1处理导致Tie2(图26A)和VEGFR2(图26B)的磷酸化增加。用多特异性抗体预处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Tie2活化(图26A)并抑制了VEGFR2活化(图26B)。
对于图27A和图27B，将细胞进行模拟处理或用以下抗体之一以5或50nM预处理：(i)HC2-ABI:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1(对HPTP-β具有特异性的人源化单克隆抗体)重链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；(ii)HC2-ABI:LC1-ABI——一种六价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链和轻链的C末端融合的abicipar衍生的VEGF结合域；或(iii)HC2-AFL:LC1——一种四价双特异性抗体，其包含与HC2:LC1重链的C末端融合的阿柏西普衍生的VEGF结合域。图27A和图27B分别提供了相对于未处理的细胞归一化的磷酸化Tie2与总Tie2之比和磷酸化VEGFR2与总VEGFR2之比。处理如下：模拟处理(-)，或用25ng/mL VEGF和250ng/mL Ang1处理(+)。用VEGF和Ang1处理导致Tie2(图27A)和VEGFR2(图27B)的磷酸化增加。用多特异性抗体预处理在用Ang1和VEGF处理的细胞中增强了Tie2活化(图27A)并抑制了VEGFR2活化(图27B)。
实施例18：多特异性抗体以高亲和力结合HPTP-β和VEGF(biacore表面等离子体共振测定)
进行Biacore表面等离子体共振测定以确定本公开的抗体对于VEGF和HPTP-β(VE-PTP)的平衡解离常数(KD)。在25℃下在Biacore 3000/Biacore T-200仪器上进行结合实验。
测定缓冲液含有10mM HEPES缓冲液(pH 7.4)，150mM NaCl，3mM EDTA和0.05％P20(聚氧乙烯失山梨聚糖)。再生缓冲液含有10mM甘氨酸缓冲液(pH 1.75)。缀合缓冲液含有10mM乙酸钠缓冲液(pH 5)。5uL/分钟的流速用于捕获配体。30μL/分钟的流速用于动力学分析。
为了分析抗体与HPTP-β的结合，通过抗His抗体将聚组氨酸标记的HPTP-β胞外域(ECD)1/2固定在芯片表面上。首先在CM5(羧甲基化的葡聚糖包被的)芯片的流通池2上，使用EDC/NHS(N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基碳二亚胺)/N-羟基琥珀酰胺)偶合化学方法通过直接固定将山羊抗His抗体固定在芯片表面上。未占据的位点用1M乙醇胺封闭。His标记的配体HPTP-β1/2ECD以50的响应单位(RU)捕获。分析物(抗体)以单一分析物浓度一次流过芯片。实时监测分析物与配体的结合以获得结合(ka)和解离(kd)速率。由观察到的ka和kd计算平衡常数(KD)。
为了分析抗体与VEGF的结合，在CM5芯片的流通池2上，使用EDC/NHS偶合化学方法通过直接固定将抗体固定在芯片表面上。未占据的位点用1M乙醇胺封闭。分析物(VEGF)以单一分析物浓度一次流过芯片。实时监测分析物与配体的结合以获得结合(ka)和解离(kd)速率。由观察到的ka和kd计算平衡常数(KD)。
使用10nM分析物进行探查分析，以确定近似KD。在实际的传感图与BIAnalysis软件生成的传感图之间进行卡方分析，以确认该分析的准确性；1-2的值被认为是准确的，低于1的值被认为是高度准确的。
表46提供了基于在单一配体浓度下进行的探查实验的平衡解离常数。NB＝未检测到显著结合。
使用0nM、0.625nM、1.25nM、5nM和10M分析物进行完全动力学分析，以确定KD。在实际的传感图与BIAnalysis软件生成的传感图之间进行卡方分析，以确认该分析的准确性；1-2的值被认为是准确的，低于1的值被认为是高度准确的。
表47提供了基于在多个配体浓度下进行的完全动力学实验的平衡解离常数。NB＝未检测到显著结合。
这些结果证明了多特异性抗体HC2-AFL:LC1、HC2-BRO:LC1、HC2-ABI:LC1、HC2:LC1-AFL、HC2:LC1-BRO、HC2:LC1-ABI、HC2-AFL:LC1-AFL、HC2-BRO:LC1-BRO和HC2-ABI:LC1-ABI以高亲和力与HPTP-β和VEGF结合。
实施例19：包含抗体HC2:LC1、abicipar衍生的序列和brolucizumab衍生的序列的六价抗体。
为了生成在C末端添加有abicipar衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14的残基1-467(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:244(abicipar衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有brolucizumab衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:231和SEQ ID NO:218共表达，以提供表48所示的六价抗体HC2-ABI:LC1-BRO。SEQ ID NO:231的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQ IDNO:218的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-ABI:LC1-BRO不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-ABI:LC1-BRO可包含SEQ ID NO:257和SEQ ID NO:258。该抗体对靶分子是双特异性的，包括对HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的特异性。该抗体对靶表位是三特异性的，包括对一个HPTP-β(VE-PTP)表位和对两个VEGF表位的特异性。
实施例20：包含抗体HC2:LC1、阿柏西普衍生的序列和brolucizumab衍生的序列的六价抗体。
为了生成在C末端添加有brolucizumab衍生的VEGF结合域的重链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:14(抗体HC2:LC1的重链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:23(brolucizumab衍生的序列)。
为了生成在C末端添加有阿柏西普衍生的VEGF结合域的轻链，产生了氨基酸序列，该序列从N末端到C末端包含以下附加的氨基酸序列：
1)SEQ ID NO:17(抗体HC2:LC1的轻链)；
2)SEQ ID NO:31(连接肽，带下划线)；和
3)SEQ ID NO:22(阿柏西普衍生的序列)。
所得多肽SEQ ID NO:150和SEQ ID NO:219共表达，以提供表49所示的六价抗体HC2-BRO:LC1-AFL。SEQ ID NO:150的氨基酸1-19是重链信号肽(SEQ ID NO:11)。SEQ IDNO:219的氨基酸1-20是轻链信号肽(SEQ ID NO:12)。在一些实施方案中，成熟的HC2-BRO:LC1-AFL不包含信号肽。例如，本公开的成熟的HC2-BRO:LC1-AFL可包含SEQ ID NO:255和SEQ ID NO:259。该抗体对靶分子是双特异性的，包括对HPTP-β(VE-PTP)和VEGF的特异性。该抗体对靶表位是三特异性的，包括对一个HPTP-β(VE-PTP)表位和对两个VEGF表位的特异性。
实施方案
以下非限制性实施方案提供了本公开的说明性示例，但并非限制本公开的范围。
实施方案1.一种化合物，其包含：(a)第一结构域，其中所述第一结构域调节磷酸酶，其中所述磷酸酶调节Tie2；以及(b)特异性结合受体酪氨酸激酶激动剂的第二结构域。
实施方案2.实施方案1的化合物，其中所述化合物是抗体。
实施方案3.实施方案1-2中任一项的化合物，其中所述化合物是多特异性抗体。
实施方案4.实施方案1-3中任一项的化合物，其中所述化合物是四价抗体。
实施方案5.实施方案1-3中任一项的化合物，其中所述化合物是六价抗体。
实施方案6.实施方案1-5中任一项的化合物，其中所述化合物是双特异性抗体。
实施方案7.实施方案1-4和6中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体。
实施方案8.实施方案1-3和5-6中任一项的化合物，其中所述化合物是六价双特异性抗体。
实施方案9.实施方案1-8中任一项的化合物，其中所述化合物抑制调节Tie2的磷酸酶。
实施方案10.实施方案1-9中任一项的化合物，其中所述化合物抑制HPTP-β。
实施方案11.实施方案1-10中任一项的化合物，其中所述化合物抑制VE-PTP。
实施方案12.实施方案1-11中任一项的化合物，其中所述化合物激活Tie2。
实施方案13.实施方案1-12中任一项的化合物，其中所述化合物抑制受体酪氨酸激酶激动剂。
实施方案14.实施方案1-13中任一项的化合物，其中所述化合物抑制VEGF受体信号传导。
实施方案15.实施方案1-14中任一项的化合物，其中所述化合物抑制VEGF。
实施方案16.实施方案1-15中任一项的化合物，其中所述化合物抑制VEGF-A。
实施方案17.实施方案1-16中任一项的化合物，所述化合物抑制调节Tie2的磷酸酶，并抑制受体酪氨酸激酶激动剂。
实施方案18.实施方案1-17中任一项的化合物，其中所述磷酸酶是HPTP-β，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF。
实施方案19.实施方案1-18中任一项的化合物，其中所述磷酸酶是HPTP-β，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF-A。
实施方案20.实施方案1-19中任一项的化合物，其中所述化合物激活Tie2，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF。
实施方案21.实施方案1-20中任一项的化合物，其中所述化合物激活Tie2，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF-A。
实施方案22.实施方案1-21中任一项的化合物，其中所述调节Tie2信号传导的磷酸酶是蛋白质酪氨酸磷酸酶。
实施方案23.实施方案1-22中任一项的化合物，其中所述调节Tie2信号传导的磷酸酶是受体样蛋白质酪氨酸磷酸酶。
实施方案24.实施方案1-23中任一项的化合物，其中所述调节Tie2信号传导的磷酸酶是HPTP-β。
实施方案25.实施方案1-23中任一项的化合物，其中所述调节Tie2信号传导的磷酸酶是VE-PTP。
实施方案26.实施方案1-25中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是生长因子。
实施方案27.实施方案1-26中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是半胱氨酸结生长因子超家族成员。
实施方案28.实施方案1-27中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是PDGF家族成员。
实施方案29.实施方案1-28中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是促血管生成因子。
实施方案30.实施方案1-29中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF受体激动剂。
实施方案31.实施方案1-30中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF。
实施方案32.实施方案1-31中任一项的化合物，其中所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF-A。
实施方案33.实施方案1-32中任一项的化合物，其中所述第一结构域与HPTP-β结合。
实施方案34.实施方案1-33中任一项的化合物，其中所述第一结构域与VE-PTP结合。
实施方案35.实施方案1-34中任一项的化合物，其中所述第一结构域与HPTP-β的胞外域结合。
实施方案36.实施方案1-34中任一项的化合物，其中所述第一结构域与HPTP-β的胞外域的第一FN3重复序列结合。
实施方案37.实施方案1-36中任一项的化合物，其中所述第二结构域与VEGF结合。
实施方案38.实施方案1-37中任一项的化合物，其中所述第二结构域与VEGF-A结合。
实施方案39.实施方案1-38中任一项的化合物，其中所述第一结构域与HPTP-β结合，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF。
实施方案40.实施方案1-39中任一项的化合物，其中所述第一结构域与HPTP-β结合，并且所述受体酪氨酸激酶激动剂是VEGF-A。
实施方案41.实施方案1-40中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:76-98中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案42.实施方案1-41中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80至少80％相同的序列。
实施方案43.实施方案1-42中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87至少80％相同的序列。
实施方案44.实施方案1-43中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90至少80％相同的序列。
实施方案45.实施方案1-44中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:93至少80％相同的序列。
实施方案46.实施方案1-45中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96至少80％相同的序列。
实施方案47.实施方案1-46中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含与SEQID NO:97或SEQ ID NO:98至少80％相同的序列。
实施方案48.实施方案1-47中任一项的化合物，其中所述第一结构域包含：(a)与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90至少80％相同的序列；(d)与SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:93至少80％相同的序列；(e)与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96至少80％相同的序列；以及(f)与SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98至少80％相同的序列。
实施方案49.实施方案1-48中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列。
实施方案50.实施方案1-49中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:99-146中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案51.实施方案1-50中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112或SEQ ID NO:113至少80％相同的序列。
实施方案52.实施方案1-51中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123至少80％相同的序列。
实施方案53.实施方案1-52中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130或SEQ ID NO:131至少80％相同的序列。
实施方案54.实施方案1-53中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:137至少80％相同的序列。
实施方案55.实施方案1-54中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142或SEQ ID NO:143至少80％相同的序列。
实施方案56.实施方案1-55中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:144、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:146至少80％相同的序列。
实施方案57.实施方案1-56中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含：(a)与SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ IDNO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112或SEQ ID NO:113至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ ID NO:123至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130或SEQ ID NO:131至少80％相同的序列；(d)与SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136或SEQ ID NO:137至少80％相同的序列；(e)与SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142或SEQ ID NO:143至少80％相同的序列；以及(f)与SEQID NO:144、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:146至少80％相同的序列。
实施方案58.实施方案1-57中任一项的化合物，其中所述第二结构域包含与SEQID NO:147、SEQ ID NO:148或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案59.实施方案1-58中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:76-98中的任一个至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ IDNO:99-148中的任一个或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案60.实施方案1-59中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含：(i)与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80至少80％相同的序列；(ii)与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87至少80％相同的序列；(iii)与SEQ ID NO:88、SEQID NO:89或SEQ ID NO:90至少80％相同的序列；(iv)与SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQID NO:93至少80％相同的序列；(v)与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96至少80％相同的序列；以及
(vi)与SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含：(i)与SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ IDNO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112或SEQ ID NO:113至少80％相同的序列；(ii)与SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122或SEQ IDNO:123至少80％相同的序列；(iii)与SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、SEQID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ ID NO:130或SEQ ID NO:131至少80％相同的序列；(iv)与SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ IDNO:136或SEQ ID NO:137至少80％相同的序列；(v)与SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:139、SEQID NO:140、SEQ ID NO:141、SEQ ID NO:142或SEQ ID NO:143至少80％相同的序列；以及(vi)与SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:145或SEQ ID NO:146至少80％相同的序列。
实施方案61.实施方案1-60中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案62.实施方案1-61中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案63.实施方案1-62中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案64.实施方案1-63中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQ ID NO:93至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案65.实施方案1-64中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案66.实施方案1-65中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含与SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案67.实施方案1-66中任一项的化合物，其中：(a)所述第一结构域包含：(i)与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79或SEQ ID NO:80至少80％相同的序列；(ii)与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:84、SEQID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87至少80％相同的序列；(iii)与SEQ ID NO:88、SEQID NO:89或SEQ ID NO:90至少80％相同的序列；(iv)与SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:92或SEQID NO:93至少80％相同的序列；(v)与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95或SEQ ID NO:96至少80％相同的序列；以及(vi)与SEQ ID NO:97或SEQ ID NO:98至少80％相同的序列；并且(b)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:233-242中的任一个至少80％相同的序列。
实施方案68.实施方案1-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:151或SEQ ID NO:231至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的轻链序列。
实施方案69.实施方案1-4、6-7和9-68中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列；以及(d)与SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的序列。
实施方案70.实施方案1-4、6-7和9-69中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端；以及(b)第二链，其中所述第二链包含与SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的序列。
实施方案71.实施方案1-4、6-7、9-67和69中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16至少80％相同的序列；以及(b)第二链，其中所述第二链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端。
实施方案72.实施方案1-3、5-6和8-67中任一项的化合物，其中所述化合物是六价双特异性抗体，其包含：(a)与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列；以及(d)与SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的序列。
实施方案73.实施方案1-3、5-6、8-67和72中任一项的化合物，其中所述化合物是六价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15或SEQ IDNO:16至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端；以及(b)第二链，其中所述第二链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQID NO:244至少80％相同的序列的N末端。
实施方案74.实施方案1-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQID NO:245或SEQ ID NO:13-16中的任一个至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ IDNO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:232或SEQ ID NO:243至少80％相同的轻链序列。
实施方案75.实施方案1-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQID NO:149、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:151或SEQ ID NO:231至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:232或SEQ ID NO:243至少80％相同的轻链序列。
实施方案76.实施方案1-75中任一项的化合物，其中所述化合物对HPTP-β的结合亲和力(KD)为约30fM至约70nM。
实施方案77.实施方案1-76中任一项的化合物，其中所述化合物对VEGF的结合亲和力(KD)为约30fM至约70nM。
实施方案78.实施方案1-75中任一项的化合物，其中所述化合物对HPTP-β的结合亲和力(KD)为约30fM至约70nM，并且所述化合物对VEGF的结合亲和力(KD)为约30fM至约70nM。
实施方案79.一种治疗有需要的受试者中的病况的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的根据实施方案1-78中任一项所述的化合物。
实施方案80.实施方案79的方法，其中所述病况是眼病况。
实施方案81.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是糖尿病视网膜病变。
实施方案82.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是新血管形成。
实施方案83.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是血管渗漏。
实施方案84.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是眼内压升高。
实施方案85.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是眼水肿。
实施方案86.实施方案79-80和85中任一项的方法，其中所述病况是糖尿病黄斑水肿。
实施方案87.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是高眼压症。
实施方案88.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是眼部炎症。
实施方案89.实施方案79-80中任一项的方法，其中所述病况是青光眼。
实施方案90.实施方案79-89中任一项的方法，其中所述施用是向所述受试者的眼睛施用。
实施方案91.实施方案79-90中任一项的方法，其中所述施用是玻璃体内施用。
实施方案92.实施方案79-89中任一项的方法，其中所述施用是皮下施用。
实施方案93.实施方案79-90中任一项的方法，其中所述施用是局部施用。
实施方案94.实施方案79-93中任一项的方法，其中所述受试者是人。
实施方案95.实施方案79-94中任一项的方法，其中所述治疗有效量是约0.25mg至约200mg。
实施方案96.实施方案79-95中任一项的方法，其中所述治疗有效量是约1mg/kg至约10mg/kg。
实施方案97.实施方案79-95中任一项的方法，其中所述治疗有效量是约1mg至约50mg。
实施方案98.实施方案79-95中任一项的方法，其中所述治疗有效量是约50mg至约200mg。
实施方案99.实施方案1-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的轻链序列。
实施方案100.实施方案1-4、6-7和9-68中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ IDNO:249至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列；以及(d)与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的序列。
实施方案101.实施方案1-4、6-7和9-69中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ IDNO:249至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端；以及(b)第二链，其中所述第二链包含与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的序列。
实施方案102.实施方案1-4、6-7、9-67和69中任一项的化合物，其中所述化合物是四价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含与SEQ ID NO:246、SEQ IDNO:247、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:249至少80％相同的序列；以及(b)第二链，其中所述第二链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端。
实施方案103.实施方案1-3、5-6和8-67中任一项的化合物，其中所述化合物是六价双特异性抗体，其包含：(a)与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列；(b)与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ IDNO:249至少80％相同的序列；(c)与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列；以及(d)与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的序列。
实施方案104.实施方案1-3、5-6、8-67和72中任一项的化合物，其中所述化合物是六价双特异性抗体，其包含：(a)第一链，其中所述第一链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQID NO:249至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的序列的N末端；以及(b)第二链，其中所述第二链包含连接体，其中所述连接体包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的序列，其中所述连接体包含N末端和C末端，其中所述连接体的N末端连接至与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同的序列的C末端，并且所述连接体的C末端连接至与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQID NO:244至少80％相同的序列的N末端。
实施方案105.实施方案1-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQID NO:262或SEQ ID NO:246-249中的任一个至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ IDNO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261或SEQ ID NO:260至少80％相同的轻链序列。
实施方案106.实施方案1-3、5-6和8-67中任一项的化合物，其中所述化合物包含：(a)与SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257至少80％相同的重链序列；以及(b)与SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261或SEQ ID NO:260至少80％相同的轻链序列。

Claims (55)

1.一种抗体，其包含：
(a)与HPTP-β结合的第一结构域，其中所述第一结构域包含：
(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:76-80中任一个的氨基酸序列，SEQ ID NO:81-87中任一个的氨基酸序列以及SEQ ID NO:88-90中任一个的氨基酸序列；以及
(ii)轻链可变区，其包含SEQ ID NO:91-93中任一个的氨基酸序列，SEQ ID NO:94-96中任一个的氨基酸序列以及SEQ ID NO:97-98中任一个的氨基酸序列；以及
(b)与VEGF结合的第二结构域，其中所述第二结构域包含：
(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO:99-113中任一个的氨基酸序列，SEQ ID NO:114-123中任一个的氨基酸序列以及SEQ ID NO:124-131中任一个的氨基酸序列；以及
(ii)轻链可变区，其包含SEQ ID NO:132-137中任一个的氨基酸序列，SEQ ID NO:138-143中任一个的氨基酸序列以及SEQ ID NO:144-146中任一个的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是多特异性抗体。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是四价抗体。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是六价抗体。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是四价双特异性抗体。
7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是六价双特异性抗体。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第一结构域与HPTP-β的胞外域结合。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第一结构域与HPTP-β的胞外域的第一FN3重复序列结合。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的氨基酸序列。
11.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第二结构域包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中：
所述第二结构域包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中：
所述第二结构域包含SEQ ID NO:244的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中：
所述第二结构域包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。
15.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257至少80％相同；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同。
16.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:250。
17.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:254；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:250。
18.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:262或SEQ ID NO:246-249中的任一个至少80％相同；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:261或SEQ ID NO:260至少80％相同。
19.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:262或SEQ ID NO:247；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:260或SEQ ID NO:261。
20.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:247；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:259。
21.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257至少80％相同；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列与SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:260或SEQ ID NO:261至少80％相同。
22.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256或SEQ ID NO:257；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259、SEQ ID NO:260或SEQ ID NO:261。
23.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
(a)包含所述第一结构域的重链可变区的重链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:254；以及
(b)包含所述第一结构域的轻链可变区的轻链氨基酸序列，且其序列为SEQ ID NO:259。
24.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是四价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:249至少80％相同；
(c)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其氨基酸序列与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同；以及
(d)所述抗体包含接头，其中所述接头将所述第二结构域连接至所述重链氨基酸序列，其中所述接头包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的氨基酸序列。
25.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是四价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列为SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:249；
(c)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其序列为SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253；以及
(d)所述抗体包含接头，其中所述接头将所述第二结构域连接至所述轻链氨基酸序列，其中所述接头包含SEQ ID NO:31-75中的任一个的氨基酸序列。
26.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是四价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列为SEQ ID NO:247；
(c)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其序列为SEQ ID NO:250；以及
(d)所述抗体包含接头，其中所述接头将所述第二结构域连接至所述重链氨基酸序列，其中所述接头包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
27.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是六价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列与SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:249至少80％相同；
(c)所述抗体包含第一接头，其中所述第一接头将所述第二结构域连接至所述重链氨基酸序列，其中所述第一接头包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的氨基酸序列；
(d)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其序列与SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253至少80％相同；
(e)所述抗体包含第三结构域，所述第三结构域包含与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244至少80％相同的氨基酸序列；以及
(f)所述抗体包含第二接头，其中所述第二接头将所述第三结构域连接至所述轻链氨基酸序列，其中所述第二接头包含与SEQ ID NO:31-75中的任一个至少80％相同的氨基酸序列。
28.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是六价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:244的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列为SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:249；
(c)所述抗体包含第一接头，其中所述第一接头将所述第二结构域连接至所述重链氨基酸序列，其中所述第一接头包含SEQ ID NO:31-75中的任一个的氨基酸序列；
(d)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其序列为SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253；
(e)所述抗体包含第三结构域，所述第三结构域包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQID NO:28或SEQ ID NO:244的氨基酸序列；以及
(f)所述抗体包含第二接头，其中所述第二接头将所述第三结构域连接至所述轻链氨基酸序列，其中所述第二接头包含SEQ ID NO:31-75中的任一个的氨基酸序列。
29.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是六价双特异性抗体，其中：
(a)所述第二结构域包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；
(b)所述抗体包含重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，且其序列为SEQ ID NO:247；
(c)所述抗体包含第一接头，其中所述第一接头将所述第二结构域连接至所述重链氨基酸序列，其中所述第一接头包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列；
(d)所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，且其序列为SEQ ID NO:250；
(e)所述抗体包含第三结构域，所述第三结构域包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；以及
(f)所述抗体包含第二接头，其中所述第二接头将所述第三结构域连接至所述轻链氨基酸序列，其中所述第二接头包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
30.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第一结构域的所述重链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，并且所述第一结构域的所述轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
31.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含轻链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列包含所述第一结构域的轻链可变区，并且其序列为SEQ ID NO:250；以及重链氨基酸序列，所述重链氨基酸序列包含所述第一结构域的重链可变区，并且其序列为SEQID NO:247或SEQ ID NO:262。
32.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第一结构域的所述重链可变区包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列、SEQ ID NO:81的氨基酸序列以及SEQ ID NO:88的氨基酸序列，并且所述第一结构域的所述轻链可变区包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列、SEQ ID NO:94的氨基酸序列以及SEQ ID NO:97的氨基酸序列。
33.根据权利要求1-7和15-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体对HPTP-β的结合亲和力(KD)为30fM至70nM。
34.根据权利要求1-7和15-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体对VEGF的结合亲和力(KD)为30fM至70nM。
35.根据权利要求1-7和15-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体对HPTP-β的结合亲和力(KD)为30fM至70nM，并且所述抗体对VEGF的结合亲和力(KD)为30fM至70nM。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的抗体在制备用于治疗有需要的受试者中的病况的药物中的用途。
37.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是眼病况。
38.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是糖尿病视网膜病变。
39.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是新血管形成。
40.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是血管渗漏。
41.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是眼内压升高。
42.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是眼水肿。
43.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是糖尿病黄斑水肿。
44.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是高眼压症。
45.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是眼部炎症。
46.根据权利要求36所述的用途，其中所述病况是青光眼。
47.根据权利要求36所述的用途，其中所述药物配制为向所述受试者的眼睛施用。
48.根据权利要求36所述的用途，其中所述药物配制为玻璃体内施用。
49.根据权利要求36所述的用途，其中所述药物配制为皮下施用。
50.根据权利要求36所述的用途，其中所述药物配制为局部施用。
51.根据权利要求36所述的用途，其中所述受试者是人。
52.根据权利要求36所述的用途，其中治疗有效量是0.25mg至200mg。
53.根据权利要求36所述的用途，其中治疗有效量是1mg/kg至10mg/kg。
54.根据权利要求36所述的用途，其中治疗有效量是1mg至50mg。
55.根据权利要求36所述的用途，其中治疗有效量是50mg至200mg。
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