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CN113454459A - 诊断方法 - Google Patents

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CN113454459A
CN113454459A CN202080015187.6A CN202080015187A CN113454459A CN 113454459 A CN113454459 A CN 113454459A CN 202080015187 A CN202080015187 A CN 202080015187A CN 113454459 A CN113454459 A CN 113454459A
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adiponectin
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polypeptide
pancreatitis
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CN202080015187.6A
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E·科斯特洛
W·格林哈尔弗
L·奥德菲尔德
C·哈洛伦
P·加奈
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University of Liverpool
Original Assignee
University of Liverpool
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Abstract

本公开涉及一种诊断测试，其用于患者群组中的胰腺癌[即胰腺导管腺癌，‘PDAC’]或胰腺炎的早期检测且包括用于治疗患有PDAC的受试者的治疗方案和用于本发明方法的试剂盒，所述患者是因与糖尿病(DM)相关的发生PDAC的风险增加而被选择。

Description

诊断方法
技术领域
本公开涉及一种诊断测试，所述诊断测试用于因发生与糖尿病(DM)相关的PDAC的风险增加而选择的患者群组中的胰腺癌[即胰腺导管腺癌，‘PDAC’]或胰腺炎的早期检测。
背景技术
将正常细胞转化为癌细胞涉及通常若干基因的DNA序列中的连续体细胞和/或可遗传突变，导致细胞蛋白的功能变化，所述功能变化赋予自身未突变但有助于癌细胞的增殖优点的其它基因的增殖优点和表达水平(在mRNA和蛋白质水平)的变化。在生殖系(来自一个或两个亲本)中遗传的遗传突变也可能在个体中易于发展成癌症。然而，一般而言，癌症和尤其是胰腺导管腺癌(PDAC)在经典意义上主要不是‘遗传确定的’。
胰腺具有复杂的解剖和细胞组合物，其包括将若干重要激素释放到血液中的内分泌细胞(如胰岛素、升糖素和生长抑素)和将脂肪酶和蛋白酶分泌到肠道中以帮助消化的外分泌细胞。外分泌胰腺被认为是PDAC的起源组织。PDAC通常具有模糊症状或被视为无症状的，直到晚期常常使得疾病在其诊断之前转移到其它器官。未治疗的转移性PDAC具有3-5个月的中值存活率。局部晚期疾病的存活期为6-10个月。然而，大部分病例在是晚期诊断的，对于潜在治愈性切除来说太晚。此外，化学疗法并非治愈性的，使得PDAC的死亡率接近发病率。
在导致临床诊断的无症状期间，原发性肿瘤将潜在转移性的“种子”细胞释放到循环中。在肿瘤<1cm时进行切除的情况下，与肿瘤较大(与约5％相比75％)相比，五年存活率显著更好。如果可以在肿瘤小于1cm的同时对所有患者进行诊断，那么可以通过手术切除显著改善存活率。然而，目前不存在检测无症状PDAC的可靠手段。
PDAC的发病率增加，预计到2030年，其将超过乳腺癌，成为癌症相关死亡的第二主因。因为通常在晚期检测到PDAC，所以大部分PDAC患者并不符合潜在治愈性手术的条件，然而，在可能进行手术的情况下，总存活率已显示出显著改进。
对公众进行PDAC筛查存在现实障碍。尽管疾病是癌症死亡的主因，但其相对罕见且发生率仅为0.014％。因此，筛查测试将必须极其具体且几乎接近100％，以便避免大量假阳性。然而，目前不存在此类筛查测试。CA19-9是用于管理PDAC的常规临床用途中的唯一生物标记。然而，由于其低灵敏度和特异性，筛查测试中的假阳性率异常高，并且确认诊断的额外测试昂贵，使得筛查效率低并且成本高。
所属领域中已知其它标记。US9863960公开了一种通过测量介白素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的存在而诊断胰腺癌的方法。WO2017109518公开了确定靶蛋白的蛋白质糖基化标记以确定受试者是否患有胰腺癌的方法。CA-19-9和CEA的超糖基化显示为与胰腺癌相关。此外，US20170003294和WO2015157557公开了用于检测例如胰腺癌或胰腺发炎病况的疾病的诊断测试，其包括确定是否存在多种生物标记。
研究已显示，在PDAC诊断时，大部分PDAC患者患有糖尿病(DM)1、2。相比之下，患有肺、乳房、前列腺和结肠直肠癌的个体中DM的发病率不高于非癌症对照组3。PDAC与DM之间的关系是复杂的。长期DM增加PDAC的风险，但仅增加大约两倍(大致等效于吸烟)。然而，流行病学数据表明PDAC可以引起DM，新发病的DM是PDAC4存在的早期预警标志。在大约50％的PDAC病例中，糖尿病是最近发作的(≤3年)，使得患有新发作DM的个体成为PDAC的最大高风险组。新发作DM的诊断与PDAC的后续诊断之间的平均时间为13个月5。
虽然此表示对PDAC的较早检测来说是相当大的机会，但是存在挑战。DM在一般群体中的发病率上升，其中估计英国每年诊断出200,000例新的2型DM(T2DM)。在10％的新发作DM病例中，DM继发于胰腺疾病(PDAC、慢性胰腺炎和其它)，并且被称为3cDM型；然而，在大多数情况下，其被误诊为T2DM。
本公开涉及一种用于在患有新发作糖尿病的个体中检测PDAC或胰腺炎的高度特异性测试的表征，其测量生物样本中脂联素和IL-1Ra的水平以区分外分泌胰腺(3c型，包括PDAC和胰腺炎相关的DM)的糖尿病与T2DM，使得前者进入PDAC的筛查。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供一种确定受试者是否具有升高水平的脂联素多肽和IL-1Ra多肽的免疫分析，其包括以下步骤：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；以及
iv)将脂联素和IL-1Ra的水平与相关匹配对照进行比较。
本公开将从待测试的受试者获得的样本与相关匹配对照进行比较。例如，相关匹配对照可以是在无相关胰腺癌的情况下患有或疑似患有新发作DM的受试者。
根据本发明的一个方面，提供一种确定受试者是否疑似患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎的免疫分析，其包括以下步骤：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；以及
iv)将脂联素多肽和IL-1Ra多肽的水平与相关匹配对照进行比较。
胰腺炎为可以是急性或慢性的胰腺的炎症。在急性胰腺炎中，胰腺在短时间内发炎，通常没有持续的损伤；在慢性胰腺炎中，胰腺永久损坏且不能够产生任何或足够量的消化液。慢性胰腺炎的症状通常极类似于胰腺癌。
在本发明的优选方法中，所述胰腺炎为急性或慢性胰腺炎，优选慢性胰腺炎。
在本发明的优选方法中，脂联素多肽包括SEQ ID NO:1中阐述的氨基酸序列或其多晶序列变体。
在本发明的优选方法中，与所述正常匹配对照相比，脂联素多肽的水平提高至少2倍。
在本发明的优选方法中，IL-1Ra多肽包括SEQ ID NO:2中阐述的氨基酸序列或其多晶序列变体。
在本发明的优选方法中，与所述正常匹配对照相比，IL-1Ra多肽的水平提高至少2倍。
在本发明的优选方法中，对所述受试者进行预筛查以确定受试者是患有前期糖尿病还是患有早期T2DM。
糖尿病的症状可以变化，但包括过度口干、尿频、疲倦、体重减轻和肌肉体积的损失、频繁发作的鹅口疮、缓慢愈合的切口或创伤以及视力模糊。糖尿病通常通过测量血液中的血糖来诊断。
在本发明的优选方法中，针对糖尿病来测试所述受试者。
在本发明的优选方法中，确定CA19-9的水平作为受试者是否患有PDAC或对PDAC具有易感性的量度。
在本发明的替代性方法中，确定CA19-9的水平作为受试者是否患有胰腺炎或对胰腺炎具有易感性的量度。
在本发明的优选方法中，所述胰腺炎为急性或慢性胰腺炎，优选慢性胰腺炎。
许多单克隆抗体已经针对CA19-9抗原开发，其为被称为唾液酸基-路易斯A的碳水化合物结构(血型抗原路易斯家族的一部分)，具有序列Neu5Acα2,3Galβ1,3(Fucα1,4)GlcNAc。唾液酸基路易斯A通过将单糖前体依序连接到N-连接聚糖和O-连接聚糖两者上的糖基转移酶来合成。
在本发明的优选方法中，CA19-9的水平是通过免疫分析测定。
在本发明的优选方法中，所述免疫分析为ELISA或基于磁珠的免疫分析。
所公开的免疫分析的替代形式可例如获得夹层分析、蛋白质印迹法、基于质谱的检测、ELISA或基于磁珠的免疫分析，例如
Figure BDA0003217476540000041
然而，本发明的工作不限于特定免疫分析形式和可供技术人员使用的其它形式。
在本发明的优选方法中，所述生物样本选自由以下组成的群组：尿液、血液、血浆或血清。
尿液是生物标记的重要来源，并且可以以非侵入性方式连续地收集，并且通常比血液取样优选。尿液中的IL-1Ra检测是标准程序(21)，并且用于检测尿液中的IL-1Ra的市售试剂盒是广泛可获得的(表1)。可以用市售试剂盒，如Luminex分析试剂盒在来自健康受试者的尿液中检测脂联素。
在本发明的优选方法中，所述生物样本是尿液。
在本发明的优选方法中，所述抗体是多克隆血清。
在本发明的替代性方法中，所述抗体是单克隆抗体。
在本发明的优选方法中，例如通过断层摄影或磁共振成像对受试者进行成像，以确定受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
根据本发明的另一方面，提供一种早期胰腺导管腺癌或胰腺炎的治疗方案，其包括：
i)对疑似患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎的受试者进行根据本发明的方法；以及
ii)如果所述方法确定所述受试者患有或容易患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎，那么治疗所述受试者的早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
在本发明的优选实施例中，所述治疗是切除肿瘤组织。
在本发明的替代性实施例中，所述治疗是施用一种或多种化学治疗剂。
在本发明的一个优选实施例中，所述治疗剂选自FOLFIRINOX(奥沙利铂、白霉素、伊立替康和氟尿嘧啶)、吉西他滨、GemCap(吉西他滨和卡培他滨)、FOLFOX(奥沙利铂、氟尿嘧啶和亚叶酸)和Nab-紫杉醇与吉西他滨。
根据本发明的另一方面，提供一种包括特异性结合脂联素和/或IL-1Ra的固定抗体的固体支持物。
在本发明的优选实施例中，所述固体支持物还包括特异性结合CA19-9的固定抗体。
优选地，特异性结合脂联素、IL-1Ra和CA19-9的抗体是单克隆抗体。
根据本发明的另一方面，提供一种包括根据本发明的固体支持物的床旁装置。
根据本发明的另一方面，提供一种试剂盒，其包括以下或由以下组成：
特异性结合脂联素多肽的抗体；
特异性结合IL-1Ra多肽的抗体；以及
结合所述单克隆抗体的二级抗体和结合IL-1Ra多肽的二级抗体，所述单克隆抗体结合脂联素多肽，其中所述二级抗体包括独立的可检测标记。
在本发明的优选实施例中，提供结合CA-19的抗体和结合CA19-9的二级抗体，其包括独立的可检测标记。
优选地，所述特异性结合脂联素、IL-1Ra和CA19-9的抗体是单克隆抗体。
根据本发明的另一方面，提供一种确定受试者是否应针对早期胰腺导管腺癌或胰腺炎进行成像的方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；
iv)将脂联素多肽和IL-1Ra多肽的水平与相关匹配对照进行比较；以及
v)确定是否应对所述受试者进行成像以确定受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
在本发明的优选方法中，例如通过断层摄影或磁共振成像对受试者进行成像，以确定受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
贯穿本说明书的实施方式和权利要求，单词“包括(comprise/contain)”以及所述单词的变型(例如“包括(comprising/comprises)”意指“包括(但不限于)”，且并不意欲(且不)排除其它部分、添加物、成分、整数或步骤。“基本上由...组成”意指具有必要整数，但包括基本上不影响必要整数的功能的整数。
贯穿本说明书的实施方式和权利要求，除非上下文另有规定，否则单数包涵复数。具体来说，当使用不定冠词时，除非本文另有规定，否则本说明书应理解为考虑到复数以及单数。
结合本发明的具体方面、实施例或实例一起描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应被理解为可适用于在此所描述的任何其它方面、实施例或实例，除非与之不相容。
现将仅通过实例且参考以下各图描述本发明的实施例：
附图说明
图1：新诊断患有T2DM的所有个体的约10％实际上患有T3cDM。PDAC相关DM占T3cDM的8％到10％。T3cDM，3c型糖尿病；T2DM，2型糖尿病；
图2：在三个独立组中测量的血清脂联素显示与DM对照相比，此脂肪素在PDAC-DM患者中的水平更高，并且可以区分PDAC与长期存在和新发作的T2DM。PC，胰腺癌；PDAC-DM，胰腺癌相关糖尿病；DM，长期糖尿病；NOD，新发作的糖尿病；HC，健康对照；
图3：在两个独立组中测量的IL-1Ra的循环水平与患有T2DM的患者相比，在患有PDAC和PDAC-DM的患者中上调IL-1Ra，而不考虑持续时间(A、B)。PDAC，胰腺癌；PDAC-DM，胰腺癌相关糖尿病；DM，长期糖尿病；NOD，新发作的糖尿病。
图4：与患有T2DM的患者相比，患有T3cDM(PDAC和慢性胰腺炎相关)的患者中脂联素(A)的血清水平和IL-1Ra(B)的血浆水平显著升高。T3cDM，3c型糖尿病；T2DM，2型糖尿病。
图5：组合地，血清脂联素和血浆IL-1Ra在区分3c型糖尿病与2型糖尿病方面显示良好性能，无关于糖尿病持续时间(A)或与单独新发作的(B)(T3cDM，3c型糖尿病；T2DM，2型糖尿病；NOD，新发作的糖尿病)相比较。
图6：生物标记介导的PDAC(黑色个体)在新发作的DM个体(所有颜色)中的鉴定和诊断途径。区分T3cDM(深灰色和黑色个体)与T2DM(灰色个体)将鉴别富含PDAC的群体，使得对此亚群的筛查是可行的。所有T3cDM患者需要与通常提供给T2DM患者的管理不同的管理。我们专注于PDAC的检测。PDAC占T3cDM群组中的病例的10％。
图7：从Luminex分析的组1获得的校准曲线显示每一标准品和样本中所测量的脂联素浓度(pg/mL)相对于荧光强度。将尿液的最优稀释置于S2与S4之间的曲线的线性区段(以红色圈出)上。
图8：从Luminex分析的组2获得的校准曲线显示每一标准品和样本中所测量的脂联素浓度(pg/mL)相对于荧光强度。将尿液的最优稀释置于S2与S4之间的曲线的线性区段(以红色圈出)上。
具体实施方式
材料和方法
患者群组
来自患有胰腺癌(手术前)的个体和健康受试者的血清和血浆样本获自利物浦大学GCP实验室设备生物库(University of Liverpool GCP Laboratory FacilityBiobank)。在糖尿病诊所和初级保健中心转诊后，在皇家利物浦大学医院(RoyalLiverpool University Hospital)收集来自糖尿病个体的血清和血浆样本。所有参与者均使用经批准的道德协议，在皇家利物浦大学医院提供了书面知情同意书(道德标识符：11/NW/0083和16/LO/1630)。
样本组
分析三个独立样本组。第一发现组(n＝60)由40个患有组织学上确认的PDAC的个体和20个健康对照个体组成。将患有PDAC的个体进一步细分为患有糖尿病阳性诊断的个体(12名患者，HbA1c≥48mmol/mol)和糖尿病阴性或无明确诊断的个体(28名患者，HbA1c<47mmol/mol或无数据)。为了确定患有2型糖尿病的个体中的候选标记的水平，分析第二独立的训练样本组(n＝135)。这包括80名患有组织学上确认的PDAC的个体(40名诊断患有糖尿病的个体和40名诊断患有阴性糖尿病的个体)、20名患有慢性胰腺炎的个体(10名诊断患有糖尿病的个体和10名诊断为阴性糖尿病的个体)、20名患有长期(诊断后>3年)2型糖尿病的个体和15名健康受试者。第三独立验证组(n＝175)用于评估患有新发作的2型糖尿病(诊断后<3年)的个体中候选标记的水平。验证组由78名患有组织学上确认的PDAC的个体(37名诊断患有糖尿病和41名诊断为阴性糖尿病)、39名患有慢性胰腺炎的个体(19名诊断患有糖尿病和20名诊断为阴性糖尿病)、20名患有长期(诊断后>3年)2型糖尿病的个体、18名患有新发作(诊断后≤3年)2型糖尿病的个体和20名健康受试者组成。
患有PDAC的个体患有可切除的疾病，并以治愈为目的进行手术。
样本收集
在Sarstedt Monovette血清Z管或K+EDTA管(英国莱斯特莎斯特有限公司(Sarstedt Ltd,Leicester,UK))中收集血液，并且使其在室温下静置30分钟，随后在800×g下离心10min以用于血清分离，并且在16000x g下离心1分钟以用于血浆分离。将血清和血浆部分等分到冷冻管中并且在使用之前储存于-80℃下。
发现分析
使用如先前所描述的样本的发现组；PDAC(n＝40)和健康对照(n＝20；总n＝60)进行用于相对和绝对定量(iTRAQ)的Luminex和基于质谱基的等压标签6、7。将由我们的iTRAQ数据产生的显著更改的蛋白质的列表上载到生物反应路径分析(Ingenuity PathwayAnalysis，IPA)软件(http://www.ingenuity.com)中。进行核心分析和生物标记过滤器两者以鉴别与代谢疾病途径和糖尿病相关的那些蛋白质。
训练分析
使用对135血清和血浆样本的免疫分析评估经由IPA产生的候选生物标记；PDAC(n＝40，患有糖尿病，n＝40，无糖尿病)、慢性胰腺炎(n＝10，患有糖尿病，n＝10，无糖尿病)、长期2型糖尿病(n＝20)和健康对照(n＝20)。
验证分析
使用对175血清和血浆样本的免疫分析评估从训练分析产生的最有前景的标记；PDAC(n＝37，患有糖尿病，n＝41，无糖尿病)、慢性胰腺炎(n＝19，患有糖尿病，n＝20，无糖尿病)、长期2型糖尿病(n＝20)、新发作的2型糖尿病(n＝18)和健康对照(n＝20)。
生物标记测量和数据过滤
使用市售Luminex(分别为生物-Plex Pro糖尿病脂联素分析和生物-Plex Pro人类细胞因子27-Plex分析；生物-Rad，英国)在生物-Plex200系统(生物-Rad，英国)上测量血清脂联素和血浆IL-1Ra水平。所有样本遵循制造商的说明书重复测量两次，其中使用3个质量对照/组评估组间变化性。
使用四或五参数逻辑回归模型，由阳性对照蛋白质的标准曲线测定生物标记浓度。小于或等于15％的组间偏差被视为可接受的；重复落在该范围之外的任何组。从数据集去除浓度落在线性范围外的定量生物标记和具有变异系数(CV)>20％的重复测量值的那些定量生物标记。
血糖(HbA1c mmol/mol)通过皇家利物浦大学医院临床生物化学系(RoyalLiverpool University Hospital Clinical Biochemistry Department)使用国际临床化学联合会(nternational Federation of Clinical Chemistry)批准的方法测量。
统计分析
使用JMP14版(美国北卡罗来纳州凯瑞SAS学会公司(SAS Institute Inc.,Cary,NC,USA))和RStudio 1.1.463版(R,RStudio Inc.,波士顿，马塞诸塞州，美国；http://rstudio.com/的联合开发)。使用双尾Mann–Whitney U测试分析蛋白质表达数据，并使用逐步回归模型来选择最有前景的标记组合。通过ROC分析评估单独和以组合形式的每一候选标记(脂联素和IL-1Ra)的诊断精确性。
尿样收集
从两个健康受试者获得尿样并且在含有及不含有蛋白酶抑制剂的情况下处理。将尿样进行以下稀释：(1:1)、(1:2)、(1:4)、(1:5)、(1:10)、(1:20)、(1:100)。从一个健康受试者和一个胰腺癌患者处获得血浆对照并且制备成(1:400)稀释液。使用生物-Plex Pro人类糖尿病脂联素分析(生物-Rad,#171A7003M)测量脂联素水平。
使用生物-Plex管理器软件处理数据。将脂联素浓度取平均值并且计算出的<15％的变异系数(CV)值对于标准品和样本视为可接受的。具有CV>15％的数据点被标记为离群值，因此产生用于进一步分析的8点校准曲线。
还使用血浆对照的脂联素浓度进行质量控制检查，其中CV值<15％被认为是可接受的。
表1：用于检测尿液中的IL-1Ra的市售试剂盒
Figure BDA0003217476540000101
实例1
将由PDAC引起的新发作的DM与T2DM区分开将允许更早诊断PDAC。
DM在一般群体中的发病率上升，其中估计英国每年诊断出200,000例新的2型DM(T2DM)。在10％的新发作DM病例中，DM继发于胰腺疾病(PDAC、慢性胰腺炎和其它)，并且被称为3cDM型(T3cDM)；然而，在大多数情况下，其被误诊为T2DM(图1)8。PDAC相关DM占误诊新发作的T3cDM(等于T2DM的新诊断的0.8-1％)的病例的8-10％。
使用当前筛查模式，鉴别具有潜在PDAC相关DM的0.8-1％的患有新发作的糖尿病的个体是不可行的。将T3cDM与T2DM区分开将鉴别富含PDAC的群体，使得筛查此亚群是可行的。如果建立将结合其它临床特征辅助鉴别这些高风险个体的诊断生物标记，那么将有利于筛查。
为了改进PDAC的早期诊断，我们广泛分析了用于检测和开发蛋白质生物标记6、7、9-15的血清和血浆。使用等压标签进行相对和绝对定量(iTRAQ)结合液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和免疫分析(Luminex，基于规则的药物、ELISA和蛋白质印迹法)，我们执行了全面的发现程序。
使用来自利物浦的>500个诊断和对照样本，我们的发现工作已经在PDAC中鉴别了379种差异调节的血清蛋白质。生物反应路径分析(IPA)选择与代谢疾病路径和糖尿病相关联的那些差异表达的蛋白质。这些样本的子集的分析(其中DM状态为已知的)使得我们能够观察胰腺癌(无关于DM状态)与健康对照之间的差异。使用独立血清和血浆训练和验证组的19种候选生物标记的后续分析突出显示脂联素和介白素-1受体拮抗剂IL-1Ra)作为用于检测T3cDM(包括PDAC-DM)的新颖组的重要潜在组分。
低循环脂联素(<4μg/mL)与T2DM16相关。然而，我们观察到，与独立发现、训练和验证样本组(图2)中的健康对照(无关于DM状态)相比，在PDAC患者中观察到此脂肪素的血清水平显著升高。在我们的训练组中，对于PDAC和DM个体(n＝89)，与长期DM对照(分别为p＝0.001和p＝0.0004；图2B)相比，显示糖尿病和非糖尿病PDAC患者两者中的脂联素升高。脂联素水平在慢性胰腺炎患者与PDAC患者之间是类似的且不受黄疸影响(数据未示出)，这是重要的考虑因素，因为我们先前已经证明升高胆红素对血液12中的某些蛋白质的所测量水平的影响。
独立组中的验证(n＝175)证实相比于患有T2DM的那些个体，在患有PDAC的个体中存在显著较高水平的脂联素。无关于DM的持续时间(长期和新发作的T2DM；图2C)，都观察到血清脂联素中升高。还发现与T2DM对照(n＝39，数据未示出)相比，在糖尿病(n＝19)和非糖尿病(n＝20)慢性胰腺炎(CP)患者中也发现脂联素升高。
在新诊断DM的个体中，在诊断时脂联素水平显著降低17个更高水平的脂联素可以突出显示PDAC的存在。此外，脂联素的较低循环水平为T2DM的预测值，并且逐渐表明脂联素测量将提供对即将发生的糖尿病18的更早鉴别的手段。随着脂联素在DM诊断中的作用的认识增加，产生了检测PDAC相关的DM的机会。
我们的数据表明，应检测患有DM但具有正常至高脂联素的临床指标的个体的胰腺癌。
介白素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)降低促炎性细胞因子的IL-1家族的内源活性，保护β细胞免于高葡萄糖暴露的破坏性影响，并且尽管IL-1Ra的β细胞表达在患有T2DM19的患者中降低，血液水平提高。我们发现，在基于Luminex的发现程序中，与血清和血浆中的健康对照相比，IL-1Ra表达不受黄疸影响并且PDAC升高(p<0.05，数据未示出20)。在独立训练和验证组中的血浆中证实了这种观察，与T2DM(分别为p<0.006和<0.03；图3A和B)和新发作的T2DM(p<0.0001；图3B)相比，PDAC和PDAC-DM两者中的水平均显著升高。我们的数据支持使用循环IL-1Ra作为在新诊断患有DM的高风险个体中更早检测PDAC的有价值的标记。
尽管发现脂联素和IL-1Ra的血液水平在PDAC和CP(未示出)中升高，而不考虑DM状态，但其在鉴别患有T2DM个体中的T3cDM(PDAC相关和CP相关)的潜在作用被突出显示，其中在两个组之间观测到的中值生物标记水平的显著分离(p<0.0001；图4A和B)。
与T2DM对照相比，PDAC和慢性胰腺炎(CP)中脂联素和IL-1Ra两者的表达增加与DM状态无关，表明3c型特异性效应(图4)。此外，脂联素与IL-Ra的组合在区分T3cDM(PDAC相关和CP相关)与T2DM(AUC 0.90，图5A)方面表现出良好性能，灵敏度/特异性为73.7％/83.7％。更确切地说，在将T3cDM与患有新发作的T2DM的个体区分开时，脂联素与IL-1Ra的组合实现了0.91的AUC，灵敏度和特异性为83.7％(图5B)。
我们的测试针对的是估计每年在英国新诊断出患有T2DM的20万名个体。我们的标记使得我们能够区分由常见T2DM引起的新发作的DM与由T3cDM引起的新发作的DM。鉴别患有T3cDM(包括PDAC和CP两者)的个体将选择极大地富含PDAC的亚群(图6)。反过来，鉴别患有PDAC诊断的最高风险的那些人将使使用现有模态(EUS、CT/MRI扫描、生物化学组)的(此亚群的)未来筛查是可行的(图6)。我们的测试还将选择患有CP的患者。
实例2
使用Luminex分析(表2)在尿液中成功地检测到了脂联素，其中浓度可根据所产生的校准曲线测量(图7和图8)。尿液的最优稀释为(1:1)和(1:2)，因为这些样本位于标准曲线的线性区段之间。对于使用和不使用蛋白酶抑制剂处理的尿液，观察到脂联素浓度存在极小差异。可在尿液中测量脂联素水平。因此，尿液适合于测量脂联素和IL-1RA。
表2：表格显示在含有和不含有蛋白酶抑制剂的情况下患者尿液样本中的平均脂联素浓度以及其对应CV值。
Figure BDA0003217476540000131
参考文献
1.Permert J、Ihse I、Jorfeldt L等人，《胰腺癌与葡萄糖代谢受损相关(Pancreatic cancer is associated with impaired glucose metabolism)》。《欧洲外科杂志(Eur J Surg)》1993；159：101-7。
2.Pannala R、Leirness JB、Bamlet WR等人，《胰腺癌相关糖尿病的发病率和临床概况(Prevalence and clinical profile of pancreatic cancer-associated diabetesmellitus)》。《胃肠病学(Gastroenterology)》2008；134：981-7。
3.Aggarwal G、Kamada P、Chari ST。《与常见癌症相比，胰腺癌中糖尿病的发病率(Prevalence of diabetes mellitus in pancreatic cancer compared to commoncancers)》。《胰腺(Pancreas)》2013；42：198-201。
4.Andersen DK、Korc M、Petersen GM等人，《糖尿病、胰源性糖尿病和胰腺癌(Diabetes,Pancreatogenic Diabetes,and Pancreatic Cancer)》。《糖尿病(Diabetes)》2017；66：1103-1110。
5.Sah RP、Nagpal SJ、Mukhopadhyay D等人，《对胰腺癌诱导的副肿瘤性糖尿病的新见解(New insights into pancreatic cancer-induced paraneoplastic diabetes)》。《胃肠病学与肝脏病学自然综述(Nat Rev Gastroentol Hepalle)》2013；10：423-33。
6.Jenkinson C、Elliott VL、Evans A等人，《胰腺癌患者中降低的血清凝血栓蛋白-1水平在临床诊断前多达24个月：与糖尿病相关(Decreased Serum Thrombospondin-1Levels in Pancreatic Cancer Patients Up to 24Months Prior to ClinicalDiagnosis:Association with Diabetes Mellitus)》。《临床癌症研究(Clin CancerRes)》2016；22：1734-43。
7.Shaw VE、Lane B、Jenkinson C等人，《用于区分胰腺癌与良性胰腺疾病的血清细胞因子生物标记小组(Serum cytokine biomarker panels for discriminatingpancreatic cancer from benign pancreatic disease)》。《分子癌症(Mol Cancer)》2014；13：114。
8.Woodmansey C、McGovern AP、McCullough KA等人，《外分泌胰腺(3c型)的糖尿病的发病率、人口统计学和临床特征：回顾性组研究(Incidence,Demographics,andClinical Characteristics of Diabetes of the Exocrine Pancreas(Type 3c):ARetrospective Cohort Study)》。《糖尿病保健(Diabetes Care)》2017；40：1486-1493。
9.Jenkinson C、Elliott V、Menon U等人，《诊断前样本的评估将ICAM-1和TIMP-1作为用于更早诊断胰腺癌的生物标记而折扣(Evaluation in pre-diagnosis samplesdiscounts ICAM-1and TIMP-1as biomarkers for earlier diagnosis of pancreaticcancer)》。《蛋白质组学杂志(J Proteomics)》2014；113C：400-402。
10.O'Brien DP、Sandanayake NS、Jenkinson C等人，《血清CA19-9在诊断患有胰腺癌之前长达2年显著上调：对早期疾病检测的影响(Serum CA19-9 is significantlyupregulated up to 2years before diagnosis with pancreatic cancer:implicationsfor early disease detection)》。《临床癌症研究(Clin Cancer Res)》2015；21：622-31。
11.Sinclair J、Tims JF。《使用TMT蛋白标记、分馏和LC-MS/MS定量分析血清样本(Quantitative profiling of serum samples using TMT protein labelling,fractionation and LC-MS/MS)》。《方法(Methods)》2011；54：361-9。
12.Tonack S、Jenkinson C、Cox T等人，《iTRAQ揭示了候选胰腺癌血清生物标记：阻塞性黄疸对其性能的影响(iTRAQ reveals candidate pancreatic cancer serumbiomarkers:influence of obstructive jaundice on their performance)》。《英国癌症杂志(Br J Cancer)》2013；108：1846-53。
13.Tonack S、Neoptolemos JP、Costello E.《通过LC-MS/MS分析血清蛋白(Analysis of serum proteins by LC-MS/MS)》。《分子生物学方法(Methods Mol Biol)》2010；658：281-91。
14.Tonack S、Aspinall-O'Dea M、Jenkins RE等人，《一种用于使用iTRAQ定量血清蛋白质组学的技术详细且实用的方案(A technically detailed and pragmaticprotocol for quantitative serum proteomics using iTRAQ)》。《蛋白质组学杂志(JProteomics)》2009；73：352-6。
15.Yan L、Tonack S、Smith R等人，《阻塞性黄疸在解释胰腺癌的蛋白质组学血浆分析数据时的混淆效应(Confounding effect of obstructive jaundice in theinterpretation of proteomic plasma profiling data for pancreatic cancer)》。《蛋白质组学研究杂志(J Proteome Res)》2009；8：142-8。
16.Kawada T、Hasegawa M.《血清高分子量脂联素结合血清胰岛素和血清C-反应蛋白预测代谢综合症发生的能力(Predictive ability of serum high-molecular-weight adiponectin in combination with serum insulin and serum C-reactiveprotein for the presence of metabolic syndrome)》。《人类生物学年鉴(Ann HumBiol)》2012；39：108-12。
17.Herder C、Carstensen M、Ouwens DM。《抗炎细胞因子和2型糖尿病的风险(Anti-inflammatory cytokines and risk of type 2diabetes)》。《糖尿病肥胖&代谢(Diabetes Obesity&Metabolism)》2013；15：39-50。
18.Anderson SG、Dunn WB、Banerjee M等人，《证据表明，在2型糖尿病先兆期间在高血糖症之前，脂质调节存在多重缺陷(Evidence That Multiple Defects in LipidRegulation Occur before Hyperglycemia during the Prodrome of Type-2Diabetes)》。《科学公共图书馆综合(Plos One)》2014；9。
19.Marculescu R、Endler G、Schillinger M等人，《介白素-1受体拮抗剂基因型与2型糖尿病患者的冠状动脉粥样硬化相关(Interleukin-1receptor antagonistgenotype is associated with coronary atherosclerosis in patients with type2diabetes)》。《糖尿病(Diabetes)》2002；51：3582-5。
20.Shaw VE、Lane B、Jenkinson C等人，《用于区分胰腺癌与良性胰腺疾病的血清细胞因子生物标记小组》。《分子癌症》2014；13。
21.Zwiech R.《在患有原发性肾小球肾炎患者中联合检查IL-1ra、TNF-R I、TNF-RII和RANTES的预测值(Predictive value of conjointly examined IL-1ra,TNF-R I,TNF-R II,and RANTES in patients with primary glomerulonephritis)》。《韩国医学科学杂志(J Korean Med Sci.)》2013；28(2)：261-7。
22.Karpenko MN、Vasilishina AA、Gromova EA、Muruzheva ZM、Miliukhina IV、Bernadotte A.《介白素-1β、介白素-1受体拮抗剂、介白素-6、介白素-10和肿瘤坏死因子α在CSF和血清中的水平与帕金森氏病的临床多样性有关(Interleukin-1beta,interleukin-1receptor antagonist,interleukin-6,interleukin-10,and tumornecrosis factor-alpha levels in CSF and serum in relation to the clinicaldiversity of Parkinson's disease)》。《细胞免疫学(Cell Immunol.)》2018；327：77-82。
23.Arnalich F、Lopez J、Codoceo R、Jim nez M、Madero R、Montiel C.《血浆瘦素与血浆细胞因子、人类survivalin脓毒症和脓毒性休克的关系(Relationship ofplasma leptin to plasma cytokines and human survivalin sepsis and septicshock)》。《传染病杂志(The Journal of infectious diseases)》。1999；180(3)：908-11。
24.Zwiech R.《在患有原发性肾小球肾炎患者中联合检查IL-1ra、TNF-R I、TNF-RII和RANTES的预测值》。《韩国医学科学杂志》2013；28(2)：261-7。
序列表
<110> 利物浦大学
<120> 诊断方法
<130> 4728P/WO
<150> GB1903424.8
<151> 2019-03-13
<150> GB1902193.0
<151> 2019-02-18
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 244
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Leu Leu Leu Gly Ala Val Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Gly His
1 5 10 15
Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro Gly Val Leu Leu Pro Leu Pro
20 25 30
Lys Gly Ala Cys Thr Gly Trp Met Ala Gly Ile Pro Gly His Pro Gly
35 40 45
His Asn Gly Ala Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Thr Pro Gly Glu
50 55 60
Lys Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu Ile Gly Pro Lys Gly Asp Ile
65 70 75 80
Gly Glu Thr Gly Val Pro Gly Ala Glu Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly
85 90 95
Ile Gln Gly Arg Lys Gly Glu Pro Gly Glu Gly Ala Tyr Val Tyr Arg
100 105 110
Ser Ala Phe Ser Val Gly Leu Glu Thr Tyr Val Thr Ile Pro Asn Met
115 120 125
Pro Ile Arg Phe Thr Lys Ile Phe Tyr Asn Gln Gln Asn His Tyr Asp
130 135 140
Gly Ser Thr Gly Lys Phe His Cys Asn Ile Pro Gly Leu Tyr Tyr Phe
145 150 155 160
Ala Tyr His Ile Thr Val Tyr Met Lys Asp Val Lys Val Ser Leu Phe
165 170 175
Lys Lys Asp Lys Ala Met Leu Phe Thr Tyr Asp Gln Tyr Gln Glu Asn
180 185 190
Asn Val Asp Gln Ala Ser Gly Ser Val Leu Leu His Leu Glu Val Gly
195 200 205
Asp Gln Val Trp Leu Gln Val Tyr Gly Glu Gly Glu Arg Asn Gly Leu
210 215 220
Tyr Ala Asp Asn Asp Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gly Phe Leu Leu Tyr
225 230 235 240
His Asp Thr Asn
<210> 2
<211> 177
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Glu Ile Cys Arg Gly Leu Arg Ser His Leu Ile Thr Leu Leu Leu
1 5 10 15
Phe Leu Phe His Ser Glu Thr Ile Cys Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser
20 25 30
Ser Lys Met Gln Ala Phe Arg Ile Trp Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe
35 40 45
Tyr Leu Arg Asn Asn Gln Leu Val Ala Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn
50 55 60
Val Asn Leu Glu Glu Lys Ile Asp Val Val Pro Ile Glu Pro His Ala
65 70 75 80
Leu Phe Leu Gly Ile His Gly Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys
85 90 95
Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gln Leu Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp
100 105 110
Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gln Asp Lys Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser
115 120 125
Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp
130 135 140
Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala Asp Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn
145 150 155 160
Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp
165 170 175
Glu

Claims (27)

1.一种免疫分析，其用于确定受试者是否具有升高水平的脂联素多肽和IL-1Ra多肽，其包括以下步骤或由以下步骤组成：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；以及
iv)将脂联素和IL-1Ra的水平与相关匹配对照进行比较。
2.一种免疫分析方法，其用于确定受试者是否疑似患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；以及
iv)将脂联素多肽和IL-1Ra多肽的水平与相关匹配对照进行比较。
3.根据权利要求2所述的方法，其中胰腺炎是急性或慢性胰腺炎。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述脂联素多肽包括SEQ ID NO:1中所阐述的氨基酸序列或其多晶序列变体。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中与所述正常匹配对照相比，所述脂联素多肽的水平提高至少2倍。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra多肽包括SEQ ID NO:2中所阐述的氨基酸序列或其多晶序列变体。
7.根据权利要求6所述的方法，其中与所述正常匹配对照相比，所述IL-1Ra多肽的水平提高至少2倍。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中对所述受试者进行预筛查以确定所述受试者是患有前期糖尿病还是患有早期2型糖尿病。
9.根据权利要求8所述的方法，其中针对糖尿病来测试所述受试者。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中确定CA19-9的水平作为所述受试者是否患有PDAC或对PDAC具有易感性的量度。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述CA19-9的水平是通过免疫分析测定。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述免疫分析为ELISA或基于磁珠的免疫分析。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述生物样本选自由以下组成的群组：尿液、血液、血浆或血清。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中结合脂联素、IL-1Ra和任选地CA19-9的所述抗体是单克隆抗体。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中例如通过断层摄影或磁共振成像对所述受试者进行成像，以确定所述受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
16.一种早期胰腺导管腺癌或胰腺炎的治疗方案，其包括：
i)对疑似患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎的受试者进行根据权利要求1至15中任一项所述的方法；以及
ii)如果所述方法确定所述受试者患有或容易患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎，那么治疗所述受试者的早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
17.根据权利要求16所述的方案，其中所述治疗是切除肿瘤组织。
18.根据权利要求16所述的方案，其中所述治疗是施用一种或多种化学治疗剂。
19.根据权利要求18所述的方案，其中所述治疗剂选自由以下组成的群组：FOLFIRINOX(laxiliplatin、leucovirin、伊立替康和氟尿嘧啶)、吉西他滨、GemCap(吉西他滨和卡培他滨)、FOLFOX(laxlatin、氟尿嘧啶和亚叶酸)和Nab-紫杉醇与吉西他滨
20.一种固体支持物，其包括特异性结合脂联素和/或IL-1Ra的固定抗体。
21.根据权利要求20所述的固体支持物，其中所述固体支持物还包括特异性结合CA19-9的固定抗体。
22.根据权利要求20或21所述的固体支持物，其中特异性结合脂联素、IL-1Ra和CA19-9的所述抗体是单克隆抗体。
23.一种床旁装置，其包括根据权利要求20至22中任一项所述的固体支持物。
24.一种试剂盒，其包括或由以下组成：
特异性结合脂联素多肽的抗体；
特异性结合IL-1Ra多肽的抗体；以及
结合所述单克隆抗体的二级抗体，所述单克隆抗体结合脂联素多肽；和结合所述单克隆抗体的二级抗体，所述单克隆抗体结合IL-1Ra多肽，其中所述二级抗体包括独立的可检测标记。
25.根据权利要求24所述的试剂盒，其中所述试剂盒还提供结合CA19-9的抗体和结合CA19-9的二级抗体，其包括独立的可检测标记。
26.一种免疫分析方法，其用确定受试者是否应针对早期胰腺导管腺癌或胰腺炎进行成像，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：
i)从待测试的受试者获得生物样本；
ii)形成包括所述样本和结合脂联素的一种或多种抗体和结合IL-1Ra的一种或多种抗体的制剂以形成抗体/脂联素多肽复合物和抗体/IL-1Ra多肽复合物；
iii)检测每一复合物；
iv)将脂联素多肽和IL-1Ra多肽的水平与相关匹配对照进行比较；以及
v)确定是否应对所述受试者进行成像以确定所述受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
27.根据权利要求26所述的方法，其中例如通过断层摄影或磁共振成像对所述受试者进行成像，以确定所述受试者是否患有早期胰腺导管腺癌或胰腺炎。
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CA (1) CA3127569A1 (zh)
WO (1) WO2020169511A1 (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108138238A (zh) * 2015-07-28 2018-06-08 约翰霍普金斯大学 用于检测胰腺癌的组合物和方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7067634B2 (en) * 2001-08-17 2006-06-27 Rebio Gen, Inc. Method for diagnosing or monitoring carbohydrate metabolism disorders
WO2004065547A2 (en) * 2003-01-17 2004-08-05 The Research Foundation Of The State University Of New York Pancreatic cancer associated antigen, antibody thereto, and diagnostic and treatment methods
EP1991872A1 (en) * 2006-03-02 2008-11-19 Oncotherapy Science, Inc. Methods for diagnosing pancreatic cancer using reg4 protein
GB201103726D0 (en) * 2011-03-04 2011-04-20 Immunovia Ab Method, array and use thereof
CA2828411A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-13 Intrexon Corporation Vectors conditionally expressing protein
WO2015112429A1 (en) 2014-01-23 2015-07-30 Newomics Inc Methods and systems for diagnosing diseases
WO2015157557A1 (en) 2014-04-09 2015-10-15 Myriad Rbm, Inc. Methods of diagnosing pancreatic cancer and methods related thereto
EP3699930B1 (en) * 2014-08-14 2024-02-07 MeMed Diagnostics Ltd. Computational analysis of biological data using manifold and a hyperplane
WO2016065204A1 (en) * 2014-10-22 2016-04-28 The George Washington University, A Congressionally Chartered Not-For-Profit Corporation Blood biomarkers for appendicitis and diagnostics methods using biomarkers
GB201522839D0 (en) 2015-12-23 2016-02-03 Randox Lab Ltd And Randox Teoranta Method

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108138238A (zh) * 2015-07-28 2018-06-08 约翰霍普金斯大学 用于检测胰腺癌的组合物和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EWA KONTNY等: "Comparison of rheumatoid articular adipose and synovial tissue reactivity to proinfl ammatory stimuli: contribution to adipocytokine network", ANN RHEUM DIS, vol. 71, pages 262 - 267 *

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