[go: up one dir, main page]

CN113461757B - 新型十六元大环内酯的制备方法及用途 - Google Patents

新型十六元大环内酯的制备方法及用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113461757B
CN113461757B CN202110711042.6A CN202110711042A CN113461757B CN 113461757 B CN113461757 B CN 113461757B CN 202110711042 A CN202110711042 A CN 202110711042A CN 113461757 B CN113461757 B CN 113461757B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
culturing
column chromatography
hours
subjecting
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110711042.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113461757A (zh
Inventor
王继栋
葛海霞
张绍勇
齐欢
张立钦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huzhou University
Original Assignee
Huzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huzhou University filed Critical Huzhou University
Priority to CN202110711042.6A priority Critical patent/CN113461757B/zh
Publication of CN113461757A publication Critical patent/CN113461757A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113461757B publication Critical patent/CN113461757B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及新型大环内酯类化合物5”‑hydroxymethyl‑25‑methylivermecti、3”‑hydroxy‑25‑methyl ivermectin、5”‑hydroxymethyl‑25‑ethylivermectin和3”‑hydroxy‑25‑ethyl ivermectin及其微生物转化制备方法和在制备防治农林害虫和害螨药物中的应用。

Description

新型十六元大环内酯的制备方法及用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及5”-hydroxymethyl-25-methyl ivermecti、3”-hydroxy-25-methyl ivermectin、5”-hydroxymethyl-25-ethyl ivermectin及3”-hydroxy-25-ethyl ivermectin及其微生物转化制备的方法和在制备防治农林害虫和害螨药物中的应用。
背景技术
25-methyl ivermectin和25-ethyl ivermectin是新型十六元大环内酯类抗生素，具有广谱、高效、低毒、剂量小、使用更安全等特点，它们的化学结构式如下：
经活性测定，其与阿维菌素、伊维菌素和米尔贝霉素相比，对猪、牛、羊、马、兔及家禽等动物的线虫、螨、蜱、虱、蝇、蛆等体内外寄生虫病，对多种寄生虫均具有驱杀作用，是一种前景非常好的抗寄生虫先导化合物。
微生物转化是通过微生物细胞将复杂的底物进行结构修饰，也就是利用微生物代谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物特定部位(基团)进行催化反应，使底物分子结构变化为相类似的另一种化合物。微生物转化具备反应定向，产物较为单一，副反应少，生物量积累快、转化时间短、转化酶表达效率高，反应条件温和，安全环保等优点，是天然活性化合物进行结构修饰的一种便利手段。
本发明利用灰黄青霉菌株Penicilium griseofulvum转化25-methyl/25-ethylivermectins，得到新的、结构新颖的4个十六元大环内酯类活性化合物，其活性与前体化合物25-methyl/25-ethyl ivermectins相当，但是其结晶性要好于前体化合物，有利于后续产品的质量控制和降低生产成本。此外，化合物1-4的结构与母体化合物相比，多了一个羟基，表明水溶性会增加，有利于开发为水基化杀虫剂。
发明内容
1、一种具有如下结构式的化合物：
其中，R1＝CH3或CH2CH3；R2＝OCH3或OH；R3＝CH2OH或CH3。
其中，R1＝CH3,R2＝OCH3,R3＝CH2OH，其为如下结构式的化合物1：
或者
R1＝CH3,R2＝OH,R3＝CH3，其为如下结构式的化合物2：
或者
R1＝CH2CH3,R2＝OCH3,R3＝CH2OH，其为如下结构式的化合物3：
或者
R1＝CH2CH3,R2＝OH,R3＝CH3，其为如下结构式的化合物4：
本发明提供化合物1-4的制备方法，包括如下步骤：
1)制备灰黄青霉种子液：取保藏号为CICC 40293的灰黄青霉菌株Peniciliumgriseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液；
2)制备化合物1-4：将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的25-methyl/25-ethylivermectins(浓度10mg/mL)，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液；采用萃取剂萃取发酵液并回收萃取剂后经过色谱分离得到化合物1-4的纯品。
作为优选的技术方案，所述步骤1)的液体培养基的制备方法为：取葡萄糖30g、酵母抽提物5g、NaCl 5g和K2HPO4 5g，蒸馏水定容至1000ml后，用1mol/l的NaOH调节pH至7.0-7.2，采用250ml三角瓶每瓶分装50ml，并称量0.25-0.30g豆粕放入三角瓶中，包扎，在121℃、0.15MPa条件下灭菌20min。
作为优选的技术方案，所述步骤2)的有机溶剂包括甲醇、乙醇、DMSO中的一种或几种。
作为优选的技术方案，所述步骤2)的萃取剂包括乙酸乙酯、正丁醇、醋酸异丁酯、乙醚、石油醚、二氯甲烷或三氯甲烷中的一种或几种。
作为优选的技术方案，所述步骤2)的纯化包括反相高效液相色谱层析。
作为优选的技术方案，所述步骤2)的纯化还包括硅胶柱层析。
本发明进一步提供了含有如前所述化合物1和/或化合物2和/或化合物3和/或化合物4的农药组合物，所述组合物还含有一种或者多种常规载体和/或稀释剂。所述农药组合物的剂型可以为水分散粒剂、乳油、水悬浮剂、油悬浮剂、微乳剂或片剂。
本发明进一步提供了如前所述的化合物1-4在制备用于防治农作物病虫害药物中的用途。所述农作物病虫害包括线虫和红蜘蛛。
附图说明
图1实施例1所得化合物1的高分辨质谱；
图2实施例1所得化合物1的氢谱；
图3实施例1所得化合物1的碳谱；
图4实施例1所得化合物2的高分辨质谱；
图5实施例1所得化合物2的氢谱；
图6实施例1所得化合物2的碳谱；
图7实施例2所得化合物3的高分辨质谱；
图8实施例2所得化合物3的氢谱；
图9实施例2所得化合物3的碳谱；
图10实施例2所得化合物4的高分辨质谱；
图11实施例2所得化合物4的氢谱；
图12实施例2所得化合物4的碳谱。
具体实施方式
下面用具体实施例予以说明本发明，应该理解的是，实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制，本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
实施例1
1)取保藏号为CICC 40293的灰黄青霉菌株Penicilium griseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的25-methyl ivermectin(浓度10mg/mL)，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液。
2)按上述方法发酵培养得到2L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到4.5g油状物质。
将所得的油状物质上硅胶柱(粒径100-200目)进行柱层析，用氯仿：甲醇＝100:0-60:40(V/V)进行梯度洗脱，通过薄层鉴定(TLC)检测，得到3个组分。将组分2经凝胶(Sephadex LH-20)柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进行进一步纯化得到纯的5”-hydroxymethyl-25-methyl ivermectin(1)、3”-hydroxy-25-methyl ivermectin(2)。
其中薄层鉴定方法：转化后的样品和空白对照点于硅胶G薄层板上，在氯仿:甲醇(9:1)的展开剂条件展开，跑完后取出晾干，先紫外灯254nm下观察，再用浓硫酸显色，检视转化结果。
半制备柱色谱条件：流动相：甲醇-水(92:8)；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL。收集保留时间为11.5min和15.5min的峰得到5”-hydroxymethyl-25-methyl ivermectin(1，6.9mg)、3”-hydroxy-25-methylivermectin(2，61.3mg)。
3)化合物1-2的结构鉴定。
通过1D和2D NMR、MS等波谱分析确定化合物1-2的结构如下：
化合物鉴定涉及仪器如下：
核磁共振谱采用中科牛津公司的超导核磁共振仪(中科-400)测定；
质谱及高分辨质谱采用Waters公司的Q-TOF Micro LC-MS-MS质谱仪测定；
紫外光谱采用Varian公司的Varian Cary 300 Bio spectrophotometer光谱仪测定；
化合物具体数据如下：
化合物1的结构:
性状:白色结晶性粉末；
溶解性:易溶解于氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，不溶于水；
分子式:C45H68O15；
HRESI-MS m/z:871.4500(计算值：C45H68NaO15,871.4456)；
UVλmax(EtOH)nm(logε):245(4.05)；
IR vmax cm-1：3371,2927,1734,1456,1384,1261,1040；
氢谱(1H NMR)和碳谱(13C NMR)数据见表1和2。
化合物2的结构:
性状:白色结晶性粉末；
溶解性:易溶解于氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，不溶于水；
分子式:C44H66O14；
HRESI-MS m/z:841.4350(计算值：C44H66NaO14,841.4399)；
UVλmax(EtOH)nm(logε):245(4.00)；
IR vmax cm-1：3466,2932,1722,1451,1380,1183,1064,992；
氢谱(1H NMR)和碳谱(13C NMR)数据见表1和2。
实施例2
1)取保藏号为CICC 40293的灰黄青霉菌株Penicilium griseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的25-ethyl ivermectin(浓度10mg/mL)，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液。
2)按上述方法发酵培养得到3L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到6.5g油状物质。
将所得的油状物质上硅胶柱(粒径100-200目)进行柱层析，用氯仿：甲醇＝100:0-60:40(V/V)进行梯度洗脱，通过薄层鉴定(TLC)检测，得到3个组分。将组分2经凝胶(Sephadex LH-20)柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进行进一步纯化得到纯的5”-hydroxymethyl-25-ethyl ivermectin(3，11.4mg)、3”-hydroxy-25-ethyl ivermectin(4，98.9mg)。
其中薄层鉴定方法：转化后的样品和空白对照点于硅胶G薄层板上，在氯仿:甲醇(9:1)的展开剂条件展开，跑完后取出晾干，先紫外灯254nm下观察，再用浓硫酸显色，检视转化结果。
半制备柱色谱条件：流动相：甲醇-水(92:8)；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL。收集保留时间为12.1min和16.0min的峰得到5”-hydroxymethyl-25-ethyl ivermectin(3)、3”-hydroxy-25-ethyl ivermectin(4)。
3)化合物3-4的结构鉴定。
化合物3的结构：
性状:白色结晶性粉末；
溶解性:易溶解于氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，不溶于水；
分子式:C46H70O15；
HRESI-MS m/z:885.4646(计算值：C46H70NaO15,885.4612)；
UVλmax(EtOH)nm(logε):245(4.06)；
IR vmax cm-1：3466,2931,1719,1451,1380,1120,1066,993；
氢谱(1H NMR)和碳谱(13C NMR)数据见表1和2。
化合物4的结构：
性状:白色结晶性粉末；
溶解性:易溶解于氯仿、丙酮、甲醇、乙醇，不溶于水；
分子式:C45H68O14；
HRESI-MS m/z:855.4514(计算值：C45H68NaO14,855.4507)；
UVλmax(EtOH)nm(logε):243(4.01)；
IR vmax cm-1：3451,2921,1737,1455,1377,1003；
氢谱(1H NMR)和碳谱(13C NMR)数据见表1和2。
表1化合物物1-4在CDCl3中的氢谱(400MHz)核磁数据
表2化合物物1-4在CDCl3中的碳谱(100MHz)核磁数据
实施例3
化合物物1-4对朱砂叶螨的生物活性
供试生物：朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)：在人工气候室条件下[(26±1)℃，RH(70±5)％，H/D14]，接种于蚕豆苗上培养。
实验方法：采用叶碟浸虫浸液法：选择室内饲养、生理状态一致的成螨虫。选取生长一致的蚕豆叶片，用打孔器做成直径2cm叶碟，叶背朝上置于塑料皿中心的脱脂棉上，每皿3片叶蝶，用小号毛笔挑接成螨接种到叶碟上，每叶碟30头，并加适量水，放于(26±1)℃，光照强度3000～4500lx、14h/d，RH 50％～75％的培养室内。2h后于体视显微镜下检查成螨数，每皿叶碟上螨的数量不低于20头。将待测样品溶于少量丙酮中，以烷基酚聚氧乙烯醚作为乳化剂，用水稀释，制备质量浓度0.005、0.01、0.02、0.04、0.08mg/L的药剂放于烧杯中，用镊子夹住叶片从低浓度到高浓度依次浸药，浸药时间为5s，对照用蒸馏水处理雌成螨，每个质量浓度为一处理，每处理重复3次。待叶片上的药剂晾干，将处理过的叶碟置于(26±1)℃和14h光周期的人工气候室培养24h，并于培养皿中加少量水保湿。浸药后螨虫非常活跃，处理后5-8小时就开始减慢活动，12-24小时后虫体静止。死亡判定标准：检查时用毛笔轻触螨体，完全不动者判定为死亡。试验结果见表3
表3：化合物1-4对朱砂叶螨的活性
实施例4
化合物1-4对松材线虫的活性测定
供试生物：以松材线虫为试虫
试验方法：将备好的松材线虫接种到长满番茄灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的PDA培养基上，于25℃恒温培养箱中培养7天后，将含有松材线虫的培养基挑出，用蒸馏水浸泡，24h后过滤分离出线虫，并将其配制成2500头/mL左右的悬浊液，备用。
采用浸液法，将待测样品溶于少量丙酮中，以烷基酚聚氧乙烯醚作为乳化剂，用水稀释，分别配置成5个质量浓度1、2、5、10、20mg/L。各取10μL供试药剂和90μL松材线虫悬浊液于96孔培养板中，以不含待测样品的乳油为对照，置于25℃培养箱中培养。每个质量浓度为1个处理，每处理重复3次，24h后显微镜镜检，统计松材线虫存活数和死亡数。
凡运动或呈“S”形、波浪形、卷曲形、螺旋形的线虫视为活虫，凡不动且呈“C”形、“J”形、僵直、体壁无遮光性的线虫视为死虫。分别计算死亡率和矫正死亡率，并用软件SPSS22.0计算毒力回归方程、LC50值、相关系数和95％置信限。其中死亡率＝(死亡线虫数/供试线虫数)×100％；矫正死亡率＝(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)×100％。试验结果见表4。
表4：化合物1-4对松材线虫的活性
本发明利用灰黄青霉菌株Penicilium griseofulvum转化25-methyl/25-ethylivermectins，可制备出4个新颖的十六元大环内酯化合物：5”-hydroxymethyl-25-methylivermectin(1)、3”-hydroxy-25-methyl ivermectin(2)、5”-hydroxymethyl-25-ethylivermectin(3)及3”-hydroxy-25-ethyl ivermectin(4)。该4个化合物在防治农林害虫或害螨时具有良好的效果。
本发明化合物1-4的用途已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。
以上所述的实施例只是本发明较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (2)

1.一种制备大环内酯化合物的方法，其特征在于，所述大环内酯化合物选自化合物1或化合物2/>所述方法包括如下步骤：
1)取保藏号为CICC40293的灰黄青霉菌株Peniciliumgriseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的浓度为10mg/mL的25-methylivermectin，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液；按上述方法发酵培养得到2L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到4.5g油状物质；将所得的油状物质上粒径100-200目的硅胶柱进行柱层析，用体积比100:0-60:40的氯仿：甲醇进行梯度洗脱，通过TLC薄层鉴定检测，得到3个组分；将组分2经Sephadex LH-20凝胶柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进一步纯化得到纯的化合物1、化合物2，其中半制备柱色谱条件：流动相为92:8的甲醇-水；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL，收集保留时间为11.5min的峰得到化合物1，收集保留时间为15.5min的峰得到化合物2。
2.一种制备大环内酯化合物的方法，其特征在于，所述大环内酯化合物选自化合物3或化合物4/>所述方法包括如下步骤：
1)取保藏号为CICC40293的灰黄青霉菌株Peniciliumgriseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的浓度为10mg/mL的25-ethylivermectin，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液；按上述方法发酵培养得到3L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到6.5g油状物质；将所得的油状物质上粒径100-200目的硅胶柱进行柱层析，用体积比100:0-60:40的氯仿：甲醇进行梯度洗脱，通过TLC薄层鉴定检测，得到3个组分；将组分2经Sephadex LH-20凝胶柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进一步纯化得到纯的化合物3、化合物4，其中半制备柱色谱条件：流动相为92:8的甲醇-水；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL，收集保留时间为12.1min的峰得到化合物3，收集保留时间为16.0min的峰得到化合物4。
CN202110711042.6A 2021-06-25 2021-06-25 新型十六元大环内酯的制备方法及用途 Active CN113461757B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110711042.6A CN113461757B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 新型十六元大环内酯的制备方法及用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110711042.6A CN113461757B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 新型十六元大环内酯的制备方法及用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113461757A CN113461757A (zh) 2021-10-01
CN113461757B true CN113461757B (zh) 2023-08-22

Family

ID=77872990

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110711042.6A Active CN113461757B (zh) 2021-06-25 2021-06-25 新型十六元大环内酯的制备方法及用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113461757B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114931144A (zh) * 2022-06-21 2022-08-23 台州科技职业学院 一种大环内酯类化合物及其在防治农林害虫和害螨中的应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1043742A (zh) * 1988-12-19 1990-07-11 伊莱利利公司 大环内酯类化合物
EP1632498A1 (en) * 2004-09-03 2006-03-08 Syngenta Participations AG Derivatives of avermectin, avermectin monosaccharide and avermectin aglycone
CN101679451A (zh) * 2007-05-03 2010-03-24 梅瑞尔有限公司 包含c-13烷氧基醚大环内酯类化合物和苯基吡唑类化合物的组合物
KR20150008725A (ko) * 2013-07-15 2015-01-23 한국생명공학연구원 피리피로펜 ｓ 및 그의 제조방법
CN104910228A (zh) * 2014-03-10 2015-09-16 浙江农林大学 十六元大环内酯类化合物及其应用
CN106167815A (zh) * 2016-05-30 2016-11-30 浙江农林大学 天维菌素衍生物的制备方法及用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1043742A (zh) * 1988-12-19 1990-07-11 伊莱利利公司 大环内酯类化合物
EP1632498A1 (en) * 2004-09-03 2006-03-08 Syngenta Participations AG Derivatives of avermectin, avermectin monosaccharide and avermectin aglycone
CN101679451A (zh) * 2007-05-03 2010-03-24 梅瑞尔有限公司 包含c-13烷氧基醚大环内酯类化合物和苯基吡唑类化合物的组合物
KR20150008725A (ko) * 2013-07-15 2015-01-23 한국생명공학연구원 피리피로펜 ｓ 및 그의 제조방법
CN104910228A (zh) * 2014-03-10 2015-09-16 浙江农林大学 十六元大环内酯类化合物及其应用
CN106167815A (zh) * 2016-05-30 2016-11-30 浙江农林大学 天维菌素衍生物的制备方法及用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Biotransformation of Erythrodiol for New Food Supplements with Anti-Inflammatory Properties";Pingping Shen，et al.;《J. Agric. Food Chem.》;20200730;第68卷;第5910-5916页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113461757A (zh) 2021-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ286032B6 (cs) Polycyklická sloučenina, způsob její výroby, farmaceutický prostředek a biologicky čistá kultura
CN106167815A (zh) 天维菌素衍生物的制备方法及用途
CN113817008B (zh) 新型琥珀酰基十六元大环内酯的制备方法及用途
CN103740606A (zh) 植生链霉菌及其产生新抗生素诺沃巢霉素的方法与应用
CN104098585B (zh) 米尔贝霉素类似物、其制备方法和应用
CN113461757B (zh) 新型十六元大环内酯的制备方法及用途
CN106810601B (zh) 一种Destruxin类缩酚酸肽衍生物及其制备方法和应用
CN111004106B (zh) 具反式萘烷环的聚酮化合物及其制备方法和应用
CN102675293B (zh) 一种吲哚二酮哌嗪类衍生物及其制备方法和应用
CN109400444B (zh) 抑制植物病源真菌的倍半萜类化合物及其制备方法
CN115806907A (zh) 一种深海链霉菌及其拒食与抗真菌活性物质的制备和应用
CN111153797B (zh) 一种杀线虫活性物质及其制备方法和用途
CN103361276B (zh) 刺糖多胞菌hberc‑25376及其培养、活性物质分离方法与应用
CN111909166B (zh) 两个新的米尔贝霉素类化合物、其制备方法及用途
CN101830868B (zh) 法尼基环六烷醇类衍生物及其应用
CN118048412B (zh) 一种烟曲霉震颤素c的制备方法
CN116478880B (zh) 一株图库曼拟无枝菌酸菌kc 316及其应用
CN102532026B (zh) 蓝状热素类化合物及其应用
CN119899111B (zh) 一种具有白蚁防治活性的三硝基丙酸类衍生物及其制备方法和应用
CN107827950A (zh) 一种Trichomide类环肽衍生物及其制备方法和应用
CN103540535A (zh) 胞内脂肪酶产生菌及其应用及筛选方法及使用方法
CN119954655B (zh) 一种具有白蚁防治活性的三硝基丙酸类衍生物及其制备方法和应用
CN109265397B (zh) 一种窿缘桉内生真菌次生代谢产物的快速分离方法及用途
CN117510441B (zh) 一种具有抗植物病原菌活性的酮类化合物penlactone A及其制备方法
CN101967131B (zh) 一种法尼基环六烷醇类衍生物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant