CN113956327A

CN113956327A - 靶向人apc蛋白的多肽及其在制备药物中的应用

Info

Publication number: CN113956327A
Application number: CN202111181312.3A
Authority: CN
Inventors: 王凤伟; 谢丹; 凌晗; 曹静桦; 林晋隆; 蔡木炎; 项志成
Original assignee: Institute Of Oncology Sun Yat Sen University; Sun Yat Sen University Cancer Center
Current assignee: Institute Of Oncology Sun Yat Sen University; Sun Yat Sen University Cancer Center
Priority date: 2021-10-11
Filing date: 2021-10-11
Publication date: 2022-01-21
Anticipated expiration: 2041-10-11
Also published as: CN113956327B

Abstract

本发明涉及生物医药领域，更具体地，本发明涉及靶向人APC蛋白的多肽及其在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。人APC蛋白的多肽片段可以靶向抑制截断型APC蛋白的出核，因此所述多肽可以抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力，从而用于制备和开发治疗结直肠癌和/或家族性腺瘤性息肉病的药物。

Description

靶向人APC蛋白的多肽及其在制备药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，本发明涉及靶向人APC蛋白的多肽及其在制备治疗结直肠癌和家族性腺瘤性息肉病的药物中的应用。

背景技术

结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)是人类常见的恶性肿瘤，亦是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位居前列。根据国家癌症中心公布的最新数据，2015年我国新发的结直肠癌病例达38.76万人，约占全部恶性肿瘤发病的9.87％；而由结直肠癌导致的死亡病例达18.71万人，约占全部恶性肿瘤死亡的8％，造成了严重的社会负担。

结直肠癌主要分为散发性和家族性两种，绝大部分结直肠癌为散发性结直肠癌。家族性腺瘤性息肉病(Familial adenomatous polyposis,FAP)约占全部结直肠癌的1％。FAP发病率大概是每30,000人群中可有1人患FAP。典型的FAP主要临床表现为：结肠及直肠遍布数目超过100个以上的腺瘤性息肉和微腺瘤。约90％的FAP患者在30岁前可见息肉，且随着息肉体积和数量的增长导致大部分患者产生血便、排便习惯改变、腹痛及消瘦等症状。如不及早进行手术干预，FAP发展为结直肠癌的概率为100％，癌变的平均年龄为40岁。

由于结直肠癌发病隐匿，早期诊断困难，多数结直肠癌患者在初诊时已出现淋巴转移或远处器官转移，是造成死亡的最主要原因之一。对于不可手术切除的晚期及复发性结直肠癌，以氟尿嘧啶+铂类为基础的化疗仍是主要的姑息治疗手段，且有效率低。近年来，虽然西妥昔单抗、贝伐单抗、曲妥珠单抗、阿帕替尼等靶向药物及免疫治疗在一定程度上提高了结直肠癌患者的生存预后，但仅有少部分患者获益。因此，亟需探索新的治疗策略和靶点让更多患者收益。

众所周知，结直肠癌的发生发展是一个多分子异常、多阶段进展的复杂过程。目前已公认：APC(adenomatous polyposis coli)基因突变导致其蛋白功能异常或其表达异常是结直肠癌“腺瘤-腺癌”恶性进展的关键引发步骤。其中，APC基因的胚系突变可导致FAP；而体细胞性突变与80％以上的散发性结直肠腺瘤和结直肠癌的发生及预后有密切关系。并且APC基因研究早期阶段发现的小鼠动物模型同样确证了APC基因突变在FAP和结直肠癌发病和进展中的驱动作用。

APC基因定位在5号染色体的q21-22区段，编码蛋白含有2843个氨基酸，蛋白质分子量达311.8KD并含有多个结构域。APC蛋白的经典作用是Wnt信号转导通路中的关键负性调节因子。其与轴蛋白(Axin)、GSK3β等组成复合物结合并抑制β-连环蛋白(β-catenin)的稳定性。95％APC的突变是导致其翻译提前终止，表达截断型APC蛋白的无义突变。这种截断型蛋白没有β-连环蛋白和轴蛋白的结合位点以及GSK3磷酸化位点，导致细胞内β-连环蛋白水平升高并促进肿瘤形成。另外，APC蛋白可通过与肌动蛋白及细胞黏附分子相关蛋白α-连环蛋白及β-连环蛋白等结合直接调控细胞的运动、黏附能力进而调节细胞的生长、分化及染色体稳定性。

多项研究发现，APC基因突变可导致细胞的黏附能力减弱并促进结直肠癌细胞转移；过表达截断型APC蛋白可促进结直肠癌细胞的迁移能力，而抑制截断型APC蛋白或抑制其与相互作用的蛋白如Asef结合可以显著降低结直肠癌细胞的迁移转移能力。这提示截断型APC蛋白不仅是导致了与β-连环蛋白、肌动蛋白等蛋白失去结合能力的功能缺失(loss-of-function)蛋白，同时很可能是获取新功能(gain-of-function)并发挥重要促癌调控作用的蛋白。因此，靶向截断型APC蛋白很可能是结直肠癌治疗的新策略和重要靶点。但目前尚无较强的系统性阻断截断型APC蛋白分子功能的研究及低毒性药物报道。

近年来，在抗肿瘤药物方面，靶向多肽因具有亲和力高、特异性强、毒副作用少及容易合成等特点，一直是肿瘤治疗领域的研究热点。多肽体积小、结构简单、但通常具有与天然蛋白/抗体类似的生物学功能。相比抗体识别、靶向多肽穿透性强、免疫原性低、易于化学合成与修饰、批次重复性高。目前尚无可靶向截断型APC蛋白的多肽研究报道。

因此，本领域亟需一种毒性副作用小、特异性强的靶向截断型APC蛋白的药物以用于治疗结直肠癌和家族性腺瘤性息肉病。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种毒性副作用小、特异性强的靶向截断型APC蛋白的多肽，从而有效抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力。

本发明人系统回顾检索总结了截断型APC蛋白的报道，发现截断型APC蛋白是一种核浆穿梭蛋白。由于正常定位是蛋白发挥其生物学功能的重要前提条件，发明人根据影响APC蛋白定位的氨基酸位点，设计了多条可以特异性扰乱截断型APC蛋白出核或正常定位过程的多肽，从而抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力。

因此，在第一方面，本发明提供了一种靶向人APC蛋白的多肽，所述多肽包含SEQID NO：1所示的人APC蛋白第68-74位的氨基酸序列(SEQ ID NO：7)并且其余氨基酸在存在的情况下与人APC蛋白的氨基酸序列完全匹配，所述多肽由7-25个氨基酸组成，优选由10-25个氨基酸组成，更优选由12-23个氨基酸组成。

在第二方面，本发明提供了一种融合多肽，所述多肽包含本发明第一方面所述的靶向人APC蛋白的多肽，以及跨膜肽。

在第三方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：(1)本发明第一方面所述的靶向人APC蛋白的多肽、或者本发明第二方面所述的融合多肽，以及(2)药学上可接受的载体。

在第四方面，本发明提供了本发明第一方面所述的靶向人APC蛋白的多肽、或者本发明第二方面所述的融合多肽在制备用于治疗结直肠癌、直结肠癌转移和/或家族性腺瘤性息肉病的药物中的用途，其中，所述结直肠癌、直结肠癌转移和/或家族性腺瘤性息肉病中存在有APC基因突变。

本发明的有益效果为：本发明提供了一种靶向人APC蛋白的多肽，该多肽可以扰乱截断型APC蛋白出核或正常定位过程，从而抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力。本发明的多肽毒性副作用小、特异性强，因此可用于制备治疗直肠癌和/或家族性腺瘤性息肉病的发病和转移的药物。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的实施方案。

图1显示了敲除内源性突变的APC基因可以显著抑制结肠癌细胞在裸鼠上的成瘤性和增殖能力。其中，图1A为通过CRISPR/Cas9方法敲除肿瘤细胞SW480和DLD-1细胞株中的APC基因的示意图；图1B为通过蛋白质印迹法检测的不同克隆的APC蛋白表达结果图；图1C示出了SW480细胞株在裸鼠中的形成的皮下瘤的大小和HE染色切片；图1D示出了DLD-1细胞株在裸鼠中的形成的皮下瘤的大小和HE染色切片。NC：阴性对照；KO：敲除；C1、C2、C3和C4分别表示不同的经APC基因敲除的细胞株。

图2显示了发明人设计的多条靶向人APC蛋白的多肽(TrunAPC-NEIP1、TrunAPC-NEIP2、TrunAPC-NEIP3、TrunAPC-NEIP4、TrunAPC-NEIP5、TrunAPC-NEIP6)以及TrunAPC-NEIP1 mut(其中TrunAPC-NEIP1的亮氨酸突变为丙氨酸)的免疫荧光实验结果。NC：阴性对照。实验结果显示TrunAPC-NEIP 1可以导致截断型APC蛋白不能均匀分布在胞浆，而聚集在核周。而将TrunAPC-NEIP1中的亮氨酸突变为丙氨酸(TrunAPC-NEIP1 mut)则会明显减弱TrunAPC-NEIP 1的出核阻断功能。将TrunAPC-NEIP1氨基酸从两端缩短(序列TrunAPC-NEIP3至TrunAPC-NEIP5)则导致其阻断效果较TrunAPC-NEIP1减弱，而增加TrunAPC-NEIP 1两端的氨基酸长度(序列TrunAPC-NEIP6，APC蛋白的第58-80位氨基酸)并未提高其阻断效果。

图3显示了尾静脉注射TrunAPC-NEIP1多肽对结肠癌细胞在裸鼠上的增殖能力的影响及多肽对裸鼠重要脏器的影响。其中，图3A示出了结直肠癌细胞的裸鼠模型中皮下瘤的大小；图3B为结直肠癌细胞的裸鼠模型中皮下瘤的HE染色切片图；NC：阴性对照。图3C是小鼠重要脏器细胞(肺、肝、肾和脾)的HE染色切片结果图。实验结果显示尾静脉注射TrunAPC-NEIP1多肽对小鼠重要脏器无明显损伤。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施方案和附图，对本发明进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本发明的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本发明中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本发明保护的范围。

如上所述，本发明旨在提供一种毒性副作用小、特异性强的靶向截断型APC蛋白的多肽，其可以有效抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力，从而可用于制备治疗直肠癌和/或家族性腺瘤性息肉病的发病和转移的药物。

如背景技术部分所述，所谓“家族性腺瘤性息肉病”是指一种常染色体显性遗传性疾病，其临床病症主要表现为整个结直肠(大肠)布满大小不一的腺瘤。病人在出生时并无结直肠息肉，多在15岁前后出现息肉，初起时息肉为数不多，随着年龄增长而增多。可出现腹部不适、腹痛、大便带血或带黏液、大便次数增多等症状。FAP患者的大肠息肉为腺瘤性息肉，属癌前病变，如不及时治疗，终将100％发生癌变。

结直肠的癌前损害通过原癌基因或抑癌基因的遗传学改变而发展为肿瘤，该过程为“腺瘤-腺癌”过程。APC基因是结直肠癌抑癌基因，但APC基因突变导致其蛋白功能异常或其表达异常是引发结直肠癌“腺瘤-腺癌”恶性进展的关键步骤。其中，APC基因的胚系突变可导致FAP，而体细胞性突变驱动了大部分散发性结直肠腺瘤和结直肠癌的发生及恶性进展。

研究报道APC基因突变产生的截断型APC蛋白是一个核浆穿梭蛋白，用出核阻断剂来普霉素B(Leptomycin B，LMB)处理后可显著抑制截断型APC蛋白的出核。由于正常定位是蛋白发挥其生物学功能的重要前提条件，发明人想通过阻断截断型APC蛋白出核，来达到阻断其生物学功能的目的。但发明人用LMB处理细胞时发现，该抑制剂的细胞毒性较大，且特异性不强，不利于开展动物体内实验和临床转化。因此，发明人根据影响APC蛋白定位的氨基酸位点，设计了多条可以特异性扰乱截断型APC蛋白出核或正常定位过程的多肽。

因此，在第一方面，本发明提供了一种靶向人APC蛋白的多肽，所述多肽包含人APC蛋白第68-74位的氨基酸序列(SEQ ID NO：7)与人APC蛋白的氨基酸序列完全匹配，所述多肽由7-25个氨基酸组成。

在一个优选的实施方案中，所述多肽由10-25个氨基酸组成。在一个更优选的实施方案中，所述多肽由12-23个氨基酸组成。

本说明书中的“靶向多肽”是指针对特定的生物靶标具有特异性亲和作用的肽分子。多肽由几个到几十个结构、性质、功能各异的氨基酸按照一定的顺序通过酰胺键连接而成。

发明人选取了多个包含人APC蛋白的部分氨基酸序列的多肽片段进行免疫荧光实验，所述多肽片段包括以下序列：

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第67-78位(TrunAPC-NEIP1)的氨基酸序列(SEQ IDNO:2)；

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第164-175位(TrunAPC-NEIP2)的氨基酸序列(SEQ IDNO:4)；

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第68-77位(TrunAPC-NEIP3)的氨基酸序列(SEQ IDNO:6)；

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第70-77位(TrunAPC-NEIP4)的氨基酸序列(SEQ IDNO:8)；

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第68-74位(TrunAPC-NEIP5)的氨基酸序列(SEQ IDNO:7)；以及

·人APC蛋白(SEQ ID NO:1)第58-80位(TrunAPC-NEIP6)的氨基酸序列(SEQ IDNO:9)。

发明人发现TrunAPC-NEIP1、TrunAPC-NEIP3、TrunAPC-NEIP4、TrunAPC-NEIP5、TrunAPC-NEIP6都可以导致截断型APC蛋白不能均匀分布在胞浆，而聚集在核周，其中TrunAPC-NEIP1和TrunAPC-NEIP6的效果最佳。此外，TrunAPC-NEIP1在两种动物模型中均可以显著抑制人结直肠癌细胞的增殖及小鼠肠道腺瘤的形成。经过多次实验，发明人发现并认为其中最为关键的是人APC蛋白的第68、69、72、75和77位的亮氨酸。并且多肽中其余的氨基酸在存在的情况下必须与人APC蛋白的氨基酸序列完全匹配，因为该多肽为阻断型多肽，目的是阻断人APC蛋白该片段与结合分子的作用，该作用是序列依赖性的，若序列不匹配，则会影响阻断效果。

发明人发现多肽片段的大小最优选为12个氨基酸(即，TrunAPC-NEIP1)，因为将TrunAPC-NEIP1氨基酸序列从两端缩短后会降低其出核阻断功能的效果，而增加TrunAPC-NEIP1的长度并未提高其效果但却增加了生成成本。此外，如果多肽片段过长，其生成时长和生成难度均会增加，并且可能会产生新的二级机构反而干扰其核心肽段的作用。

因此，在一个实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成。

本说明书中的“跨膜肽”是指一类具有跨细胞膜转运功能的多肽。通过将治疗性多肽与跨膜肽相结合是提高治疗性多肽通过细胞膜的一种有效方法。

在一个具体实施方案中，所述跨膜肽可以为SEQ ID NO：3所示的跨膜肽。

本发明的多肽，包括融合多肽在内，可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

在第四方面，本发明提供了本发明第一方面所述的靶向人APC蛋白的多肽、或者本发明第二方面所述的融合多肽在制备用于治疗结直肠癌、直结肠癌转移和/或家族性腺瘤性息肉病的药物中的用途，其中，所述结直肠癌和/或家族性腺瘤性息肉病中存在有APC基因突变。

在一个实施方案中，所述药物为注射制剂。

综上所述，本发明提供了一种靶向人APC蛋白的多肽，该多肽可以扰乱截断型APC蛋白出核或正常定位过程，从而抑制结直肠癌细胞的成瘤性和增殖能力。本发明的多肽毒性副作用小、特异性强，因此可用于制备治疗直肠癌和/或家族性腺瘤性息肉病的发病和转移的药物。

实施例

发明人首先选取两株APC基因突变且产生截断型APC的常用CRC细胞系SW480和DLD-1，通过CRISPR/Cas9方法敲除结直肠癌细胞系SW480和DLD-1内源性突变的APC基因，并建立稳定细胞株，然后进行裸鼠皮下瘤实验，以明确突变型APC基因及其产生的截断型APC蛋白的功能。

实施例1.突变型APC基因及其产生的截断型APC蛋白的功能

1)细胞：本实验中所用人结肠癌细胞系SW480及DLD-1均购自美国模式培养物集存库(American type culture collection,ATCC)，使用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基,于5％CO₂、37℃的恒温培养箱中培养。SW480及DLD-1细胞均具有内源性APC基因突变(分别在第1338和1427位氨基酸处发生突变)，并产生截断型APC蛋白。

2)CRISPR/Cas9方法敲除APC基因：利用http://crispr.mit.edu/在线设计单导RNA(single-guide RNAs，sgRNA)，sgRNA-1序列为：CCGGCTTCCATAAGAACGGA，sgRNA-2序列为CGTTCTTATGGAAGCCGGGA。经过酶切及连接，将此sgRNA序列克隆入lentiCRISPR v2质粒(52961，购自Addgene)，由此构建好用于敲除细胞中APC基因的敲除载体。图1A示出了sgRNA-1和sgRNA-2在APC基因上的作用位点。然后，用Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染APC基因敲除载体及对照空载体进入SW480及DLD-1细胞，用2μg/ml为终浓度的嘌呤霉素处理细胞两周。之后，将细胞转至96孔板进行单细胞培养，3周后提取单细胞培养的细胞，并用蛋白质印迹法检测APC蛋白的表达情况。

图1B通过蛋白质印迹法的检测结果。从该图中可以看出，无论是SW480细胞还是DLD-1细胞，其阴性对照组(NC)均正常地表达出APC蛋白，而在四个基因敲除的细胞克隆中，未见APC蛋白的表达或APC蛋白的表达显著降低。选取APC基因被成功敲除的克隆继续扩大培养用于后续实验。

3)裸鼠皮下瘤实验：裸鼠购自北京维通利华公司，周龄为3-4周，雌雄不限，每组实验6只。扩大培养所需细胞，即转入空载的SW480和DLD-1细胞及稳定敲除APC基因的单克隆株细胞，取对数生长期的细胞用0.25％胰酶消化，并用PBS洗两遍以去除含血清培养基。对所得细胞计数，用无血清培养基重悬细胞浓度至4×10⁶个细胞/0.1ml，然后注射至裸鼠后肢背面的皮下。每周观察2-3次。三周后或若实验过程中发现肿瘤长径接近2cm，则脱臼处死小鼠，然后取出皮下瘤拍照，然后进行10％福尔马林固定、石蜡包埋、切片。

图1C为在裸鼠中注射肿瘤细胞SW480而形成的肿瘤的照片，以及相应的HE染色切片的照片，图1D为在裸鼠中注射肿瘤细胞DLD-1而形成的肿瘤的照片，以及相应的HE染色切片的照片。从这些图中可以看出，在NC组中，即在没有敲除APC基因的细胞注射的裸鼠中，形成了体积相对较大的肿瘤；而在APC基因被敲除的情况下，形成的肿瘤体积大大下降，甚至肿瘤消失(在APC基因被敲除的DLD-1细胞处理组中)。在HE染色切片中，NC组呈现出大量增殖的细胞，而在基因敲除的SW480细胞处理组中，可以看到细胞增殖受到很大影响。

以上实验结果表明，敲除突变型APC基因，可显著抑制结直肠癌细胞在裸鼠中的成瘤性及增殖能力。

实施例2.靶向人APC蛋白的多肽的合成

通过实施例1的结果可以知晓，截断型APC蛋白会导致结直肠癌。因此，为寻找阻断截断型APC蛋白发挥作用的方法，发明人根据截断型APC蛋白是核浆穿梭蛋白的特性，想到通过抑制APC蛋白的出核来影响蛋白的生物学功能。

为此，发明人根据影响APC蛋白定位的氨基酸位点，设计了多条有可能特异性扰乱截断型APC蛋白出核或正常定位过程的多肽。

靶向人APC蛋白的多肽的序列如下：

TrunAPC-NEIP1：人APC蛋白的第67-78位氨基酸，序列为DLLERLKELNLD；

TrunAPC-NEIP2：人APC蛋白的164-175位氨基酸，序列为NLTKRIDSLPLT；

TrunAPC-NEIP1 Mut：将TrunAPC-NEIP1中的亮氨酸全部突变为丙氨酸，序列为DAAERAKEANAD。

TrunAPC-NEIP3：人APC蛋白的第68-77位氨基酸，序列为LLERLKELNL；

TrunAPC-NEIP4：人APC蛋白的第70-77位氨基酸，序列为ERLKELNL；

TrunAPC-NEIP5：人APC蛋白的第68-74位氨基酸，序列为LLERLKE；

TrunAPC-NEIP6：人APC蛋白的第58-80位氨基酸，序列为EAMASSGQIDLLERLKELNLDSS

为了促进这些多肽进入到细胞内与APC蛋白相互作用，还在上述多肽的C端均添加了跨膜肽序列CRGDKGPDC，并且将跨膜肽序列自身作为对照多肽(NC：阴性对照)。

上述多肽均由中国金斯瑞生物科技股份有限公司合成，测定其溶解性，合成纯度大于95％。第一次使用时：用DMSO溶解多肽粉末至最大浓度，然后用生理盐水稀释至所需浓度。药物避免反复冻融，于-80℃冰箱保存。

实施例3.本发明多肽对截断型APC蛋白定位的影响

在本实施例中，通过免疫荧光观察多肽对截断型APC蛋白定位的影响。

取对数生长期状态良好的DLD-1细胞，常规胰酶消化后铺板在共聚焦玻璃小皿中，按照细胞培养皿与共聚焦小皿的面积比例，计算所需铺板细胞数，目的是包装铺板后小皿的细胞密度<50％，从而有利于观察细胞形态。待细胞贴壁并恢复正常形态后，在常规培养基中加入多肽，终浓度为5μg/0.2ml。24小时后弃掉培养基，PBS洗脱后用4％多聚甲醛室温固定15分钟，弃掉固定剂后加入0.5％Triton X-100，4℃破膜10分钟。后续按照常规免疫荧光的步骤封闭、孵育一抗、二抗、DAPI染核及洗脱，加入适量50％甘油防止荧光淬灭。APC抗体购自abcam(ab16794)，稀释比例为1：100。完成后即于激光共聚焦显微镜下观察并拍照。

图2示出了实验结果。从该图中可以发现：TrunAPC-NEIP2(第164-175位氨基酸)对截断型APC蛋白的定位几乎没有影响，截断型APC蛋白分布与对照组(NC)中分布非常相似，两者均广泛地分布在胞浆中，而TrunAPC-NEIP1(第67-78位氨基酸)却导致截断型APC蛋白凝集在核周，不能广泛分布在胞浆，说明该多肽可以有效地防止截断型APC蛋白出核；而亮氨酸突变为丙氨酸的TrunAPC-NEIP1 Mut却失去了上述的防止出核功能。将TrunAPC-NEIP1氨基酸从两端缩短(序列TrunAPC-NEIP3至TrunAPC-NEIP5)则导致其阻断效果较TrunAPC-NEIP1减弱，而增加TrunAPC-NEIP1两端的氨基酸长度(TrunAPC-NEIP6序列，APC蛋白的第58-80位氨基酸)并未提高其阻断效果。因此，发明人认为TrunAPC-NEIP1对截断型APC蛋白定位有着显著影响，并且其中的亮氨酸可能起到重要作用。

实施例4.本发明多肽的抑癌作用

进一步地，通过DLD-1细胞的裸鼠皮下瘤实验检测本发明多肽的抑癌效果。

采用购自北京维通利华公司的裸鼠，年龄为3周-4周，雌雄不限，每组实验6只。取无血清培养基重悬的DLD-1细胞(浓度为4×10⁶个细胞/0.1ml)，注射至裸鼠后肢背面的皮下。待皮下瘤肉眼可见长出后，按照5mg/kg体重尾静脉注射C端添加了跨膜肽的TrunAPC-NEIP1或作为阴性对照的跨膜肽，浓度为75μg/200μl，每周两次，连续注射三周。每次注射前测量肿瘤的长短径。若实验过程中发现肿瘤长径大于2cm，即脱臼处死小鼠终止实验。处死小鼠后，取出皮下瘤及重要脏器，包括心、肝、肺、肾，进行大体组织拍照后及时10％福尔马林固定、石蜡包埋、切片。观察皮下瘤及重要脏器的HE染色，看是否有重要脏器的损伤。

图3A为给具有皮下瘤的裸鼠中注射TrunAPC-NEIP1多肽后的肿瘤照片，图3B为相应的HE染色切片的照片。在NC组中，即仅注射了跨膜肽的裸鼠中，形成了体积相对较大的肿瘤；而在注射TrunAPC-NEIP1多肽情况下，形成的肿瘤体积显著下降。在HE染色切片中，NC组呈现出大量增殖的细胞，而在注射TrunAPC-NEIP1多肽的实验组中，可以看到细胞增殖受到很大影响。

以上实验结果表明，TrunAPC-NEIP1可明显抑制结直肠癌细胞的裸鼠皮下增殖能力，并且多肽的生物学毒性低。因此，本发明的多肽在制备用于治疗结直肠癌和家族性腺瘤性息肉病的发生及转移的药物中，有很好的临床转化前景。

表1.序列表

序列表

<110> 中山大学肿瘤防治中心

中山大学附属肿瘤医院

中山大学肿瘤研究所

<120> 靶向人APC蛋白的多肽及其在制备药物中的应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2843

<212> PRT

<213> 人类(Homo sapiens)

<400> 1

Met Ala Ala Ala Ser Tyr Asp Gln Leu Leu Lys Gln Val Glu Ala Leu

1 5 10 15

Lys Met Glu Asn Ser Asn Leu Arg Gln Glu Leu Glu Asp Asn Ser Asn

20 25 30

His Leu Thr Lys Leu Glu Thr Glu Ala Ser Asn Met Lys Glu Val Leu

35 40 45

Lys Gln Leu Gln Gly Ser Ile Glu Asp Glu Ala Met Ala Ser Ser Gly

50 55 60

Gln Ile Asp Leu Leu Glu Arg Leu Lys Glu Leu Asn Leu Asp Ser Ser

65 70 75 80

Asn Phe Pro Gly Val Lys Leu Arg Ser Lys Met Ser Leu Arg Ser Tyr

85 90 95

Gly Ser Arg Glu Gly Ser Val Ser Ser Arg Ser Gly Glu Cys Ser Pro

100 105 110

Val Pro Met Gly Ser Phe Pro Arg Arg Gly Phe Val Asn Gly Ser Arg

115 120 125

Glu Ser Thr Gly Tyr Leu Glu Glu Leu Glu Lys Glu Arg Ser Leu Leu

130 135 140

Leu Ala Asp Leu Asp Lys Glu Glu Lys Glu Lys Asp Trp Tyr Tyr Ala

145 150 155 160

Gln Leu Gln Asn Leu Thr Lys Arg Ile Asp Ser Leu Pro Leu Thr Glu

165 170 175

Asn Phe Ser Leu Gln Thr Asp Met Thr Arg Arg Gln Leu Glu Tyr Glu

180 185 190

Ala Arg Gln Ile Arg Val Ala Met Glu Glu Gln Leu Gly Thr Cys Gln

195 200 205

Asp Met Glu Lys Arg Ala Gln Arg Arg Ile Ala Arg Ile Gln Gln Ile

210 215 220

Glu Lys Asp Ile Leu Arg Ile Arg Gln Leu Leu Gln Ser Gln Ala Thr

225 230 235 240

Glu Ala Glu Arg Ser Ser Gln Asn Lys His Glu Thr Gly Ser His Asp

245 250 255

Ala Glu Arg Gln Asn Glu Gly Gln Gly Val Gly Glu Ile Asn Met Ala

260 265 270

Thr Ser Gly Asn Gly Gln Gly Ser Thr Thr Arg Met Asp His Glu Thr

275 280 285

Ala Ser Val Leu Ser Ser Ser Ser Thr His Ser Ala Pro Arg Arg Leu

290 295 300

Thr Ser His Leu Gly Thr Lys Val Glu Met Val Tyr Ser Leu Leu Ser

305 310 315 320

Met Leu Gly Thr His Asp Lys Asp Asp Met Ser Arg Thr Leu Leu Ala

325 330 335

Met Ser Ser Ser Gln Asp Ser Cys Ile Ser Met Arg Gln Ser Gly Cys

340 345 350

Leu Pro Leu Leu Ile Gln Leu Leu His Gly Asn Asp Lys Asp Ser Val

355 360 365

Leu Leu Gly Asn Ser Arg Gly Ser Lys Glu Ala Arg Ala Arg Ala Ser

370 375 380

Ala Ala Leu His Asn Ile Ile His Ser Gln Pro Asp Asp Lys Arg Gly

385 390 395 400

Arg Arg Glu Ile Arg Val Leu His Leu Leu Glu Gln Ile Arg Ala Tyr

405 410 415

Cys Glu Thr Cys Trp Glu Trp Gln Glu Ala His Glu Pro Gly Met Asp

420 425 430

Gln Asp Lys Asn Pro Met Pro Ala Pro Val Glu His Gln Ile Cys Pro

435 440 445

Ala Val Cys Val Leu Met Lys Leu Ser Phe Asp Glu Glu His Arg His

450 455 460

Ala Met Asn Glu Leu Gly Gly Leu Gln Ala Ile Ala Glu Leu Leu Gln

465 470 475 480

Val Asp Cys Glu Met Tyr Gly Leu Thr Asn Asp His Tyr Ser Ile Thr

485 490 495

Leu Arg Arg Tyr Ala Gly Met Ala Leu Thr Asn Leu Thr Phe Gly Asp

500 505 510

Val Ala Asn Lys Ala Thr Leu Cys Ser Met Lys Gly Cys Met Arg Ala

515 520 525

Leu Val Ala Gln Leu Lys Ser Glu Ser Glu Asp Leu Gln Gln Val Ile

530 535 540

Ala Ser Val Leu Arg Asn Leu Ser Trp Arg Ala Asp Val Asn Ser Lys

545 550 555 560

Lys Thr Leu Arg Glu Val Gly Ser Val Lys Ala Leu Met Glu Cys Ala

565 570 575

Leu Glu Val Lys Lys Glu Ser Thr Leu Lys Ser Val Leu Ser Ala Leu

580 585 590

Trp Asn Leu Ser Ala His Cys Thr Glu Asn Lys Ala Asp Ile Cys Ala

595 600 605

Val Asp Gly Ala Leu Ala Phe Leu Val Gly Thr Leu Thr Tyr Arg Ser

610 615 620

Gln Thr Asn Thr Leu Ala Ile Ile Glu Ser Gly Gly Gly Ile Leu Arg

625 630 635 640

Asn Val Ser Ser Leu Ile Ala Thr Asn Glu Asp His Arg Gln Ile Leu

645 650 655

Arg Glu Asn Asn Cys Leu Gln Thr Leu Leu Gln His Leu Lys Ser His

660 665 670

Ser Leu Thr Ile Val Ser Asn Ala Cys Gly Thr Leu Trp Asn Leu Ser

675 680 685

Ala Arg Asn Pro Lys Asp Gln Glu Ala Leu Trp Asp Met Gly Ala Val

690 695 700

Ser Met Leu Lys Asn Leu Ile His Ser Lys His Lys Met Ile Ala Met

705 710 715 720

Gly Ser Ala Ala Ala Leu Arg Asn Leu Met Ala Asn Arg Pro Ala Lys

725 730 735

Tyr Lys Asp Ala Asn Ile Met Ser Pro Gly Ser Ser Leu Pro Ser Leu

740 745 750

His Val Arg Lys Gln Lys Ala Leu Glu Ala Glu Leu Asp Ala Gln His

755 760 765

Leu Ser Glu Thr Phe Asp Asn Ile Asp Asn Leu Ser Pro Lys Ala Ser

770 775 780

His Arg Ser Lys Gln Arg His Lys Gln Ser Leu Tyr Gly Asp Tyr Val

785 790 795 800

Phe Asp Thr Asn Arg His Asp Asp Asn Arg Ser Asp Asn Phe Asn Thr

805 810 815

Gly Asn Met Thr Val Leu Ser Pro Tyr Leu Asn Thr Thr Val Leu Pro

820 825 830

Ser Ser Ser Ser Ser Arg Gly Ser Leu Asp Ser Ser Arg Ser Glu Lys

835 840 845

Asp Arg Ser Leu Glu Arg Glu Arg Gly Ile Gly Leu Gly Asn Tyr His

850 855 860

Pro Ala Thr Glu Asn Pro Gly Thr Ser Ser Lys Arg Gly Leu Gln Ile

865 870 875 880

Ser Thr Thr Ala Ala Gln Ile Ala Lys Val Met Glu Glu Val Ser Ala

885 890 895

Ile His Thr Ser Gln Glu Asp Arg Ser Ser Gly Ser Thr Thr Glu Leu

900 905 910

His Cys Val Thr Asp Glu Arg Asn Ala Leu Arg Arg Ser Ser Ala Ala

915 920 925

His Thr His Ser Asn Thr Tyr Asn Phe Thr Lys Ser Glu Asn Ser Asn

930 935 940

Arg Thr Cys Ser Met Pro Tyr Ala Lys Leu Glu Tyr Lys Arg Ser Ser

945 950 955 960

Asn Asp Ser Leu Asn Ser Val Ser Ser Ser Asp Gly Tyr Gly Lys Arg

965 970 975

Gly Gln Met Lys Pro Ser Ile Glu Ser Tyr Ser Glu Asp Asp Glu Ser

980 985 990

Lys Phe Cys Ser Tyr Gly Gln Tyr Pro Ala Asp Leu Ala His Lys Ile

995 1000 1005

His Ser Ala Asn His Met Asp Asp Asn Asp Gly Glu Leu Asp Thr Pro

1010 1015 1020

Ile Asn Tyr Ser Leu Lys Tyr Ser Asp Glu Gln Leu Asn Ser Gly Arg

1025 1030 1035 1040

Gln Ser Pro Ser Gln Asn Glu Arg Trp Ala Arg Pro Lys His Ile Ile

1045 1050 1055

Glu Asp Glu Ile Lys Gln Ser Glu Gln Arg Gln Ser Arg Asn Gln Ser

1060 1065 1070

Thr Thr Tyr Pro Val Tyr Thr Glu Ser Thr Asp Asp Lys His Leu Lys

1075 1080 1085

Phe Gln Pro His Phe Gly Gln Gln Glu Cys Val Ser Pro Tyr Arg Ser

1090 1095 1100

Arg Gly Ala Asn Gly Ser Glu Thr Asn Arg Val Gly Ser Asn His Gly

1105 1110 1115 1120

Ile Asn Gln Asn Val Ser Gln Ser Leu Cys Gln Glu Asp Asp Tyr Glu

1125 1130 1135

Asp Asp Lys Pro Thr Asn Tyr Ser Glu Arg Tyr Ser Glu Glu Glu Gln

1140 1145 1150

His Glu Glu Glu Glu Arg Pro Thr Asn Tyr Ser Ile Lys Tyr Asn Glu

1155 1160 1165

Glu Lys Arg His Val Asp Gln Pro Ile Asp Tyr Ser Leu Lys Tyr Ala

1170 1175 1180

Thr Asp Ile Pro Ser Ser Gln Lys Gln Ser Phe Ser Phe Ser Lys Ser

1185 1190 1195 1200

Ser Ser Gly Gln Ser Ser Lys Thr Glu His Met Ser Ser Ser Ser Glu

1205 1210 1215

Asn Thr Ser Thr Pro Ser Ser Asn Ala Lys Arg Gln Asn Gln Leu His

1220 1225 1230

Pro Ser Ser Ala Gln Ser Arg Ser Gly Gln Pro Gln Lys Ala Ala Thr

1235 1240 1245

Cys Lys Val Ser Ser Ile Asn Gln Glu Thr Ile Gln Thr Tyr Cys Val

1250 1255 1260

Glu Asp Thr Pro Ile Cys Phe Ser Arg Cys Ser Ser Leu Ser Ser Leu

1265 1270 1275 1280

Ser Ser Ala Glu Asp Glu Ile Gly Cys Asn Gln Thr Thr Gln Glu Ala

1285 1290 1295

Asp Ser Ala Asn Thr Leu Gln Ile Ala Glu Ile Lys Glu Lys Ile Gly

1300 1305 1310

Thr Arg Ser Ala Glu Asp Pro Val Ser Glu Val Pro Ala Val Ser Gln

1315 1320 1325

His Pro Arg Thr Lys Ser Ser Arg Leu Gln Gly Ser Ser Leu Ser Ser

1330 1335 1340

Glu Ser Ala Arg His Lys Ala Val Glu Phe Ser Ser Gly Ala Lys Ser

1345 1350 1355 1360

Pro Ser Lys Ser Gly Ala Gln Thr Pro Lys Ser Pro Pro Glu His Tyr

1365 1370 1375

Val Gln Glu Thr Pro Leu Met Phe Ser Arg Cys Thr Ser Val Ser Ser

1380 1385 1390

Leu Asp Ser Phe Glu Ser Arg Ser Ile Ala Ser Ser Val Gln Ser Glu

1395 1400 1405

Pro Cys Ser Gly Met Val Ser Gly Ile Ile Ser Pro Ser Asp Leu Pro

1410 1415 1420

Asp Ser Pro Gly Gln Thr Met Pro Pro Ser Arg Ser Lys Thr Pro Pro

1425 1430 1435 1440

Pro Pro Pro Gln Thr Ala Gln Thr Lys Arg Glu Val Pro Lys Asn Lys

1445 1450 1455

Ala Pro Thr Ala Glu Lys Arg Glu Ser Gly Pro Lys Gln Ala Ala Val

1460 1465 1470

Asn Ala Ala Val Gln Arg Val Gln Val Leu Pro Asp Ala Asp Thr Leu

1475 1480 1485

Leu His Phe Ala Thr Glu Ser Thr Pro Asp Gly Phe Ser Cys Ser Ser

1490 1495 1500

Ser Leu Ser Ala Leu Ser Leu Asp Glu Pro Phe Ile Gln Lys Asp Val

1505 1510 1515 1520

Glu Leu Arg Ile Met Pro Pro Val Gln Glu Asn Asp Asn Gly Asn Glu

1525 1530 1535

Thr Glu Ser Glu Gln Pro Lys Glu Ser Asn Glu Asn Gln Glu Lys Glu

1540 1545 1550

Ala Glu Lys Thr Ile Asp Ser Glu Lys Asp Leu Leu Asp Asp Ser Asp

1555 1560 1565

Asp Asp Asp Ile Glu Ile Leu Glu Glu Cys Ile Ile Ser Ala Met Pro

1570 1575 1580

Thr Lys Ser Ser Arg Lys Ala Lys Lys Pro Ala Gln Thr Ala Ser Lys

1585 1590 1595 1600

Leu Pro Pro Pro Val Ala Arg Lys Pro Ser Gln Leu Pro Val Tyr Lys

1605 1610 1615

Leu Leu Pro Ser Gln Asn Arg Leu Gln Pro Gln Lys His Val Ser Phe

1620 1625 1630

Thr Pro Gly Asp Asp Met Pro Arg Val Tyr Cys Val Glu Gly Thr Pro

1635 1640 1645

Ile Asn Phe Ser Thr Ala Thr Ser Leu Ser Asp Leu Thr Ile Glu Ser

1650 1655 1660

Pro Pro Asn Glu Leu Ala Ala Gly Glu Gly Val Arg Gly Gly Ala Gln

1665 1670 1675 1680

Ser Gly Glu Phe Glu Lys Arg Asp Thr Ile Pro Thr Glu Gly Arg Ser

1685 1690 1695

Thr Asp Glu Ala Gln Gly Gly Lys Thr Ser Ser Val Thr Ile Pro Glu

1700 1705 1710

Leu Asp Asp Asn Lys Ala Glu Glu Gly Asp Ile Leu Ala Glu Cys Ile

1715 1720 1725

Asn Ser Ala Met Pro Lys Gly Lys Ser His Lys Pro Phe Arg Val Lys

1730 1735 1740

Lys Ile Met Asp Gln Val Gln Gln Ala Ser Ala Ser Ser Ser Ala Pro

1745 1750 1755 1760

Asn Lys Asn Gln Leu Asp Gly Lys Lys Lys Lys Pro Thr Ser Pro Val

1765 1770 1775

Lys Pro Ile Pro Gln Asn Thr Glu Tyr Arg Thr Arg Val Arg Lys Asn

1780 1785 1790

Ala Asp Ser Lys Asn Asn Leu Asn Ala Glu Arg Val Phe Ser Asp Asn

1795 1800 1805

Lys Asp Ser Lys Lys Gln Asn Leu Lys Asn Asn Ser Lys Val Phe Asn

1810 1815 1820

Asp Lys Leu Pro Asn Asn Glu Asp Arg Val Arg Gly Ser Phe Ala Phe

1825 1830 1835 1840

Asp Ser Pro His His Tyr Thr Pro Ile Glu Gly Thr Pro Tyr Cys Phe

1845 1850 1855

Ser Arg Asn Asp Ser Leu Ser Ser Leu Asp Phe Asp Asp Asp Asp Val

1860 1865 1870

Asp Leu Ser Arg Glu Lys Ala Glu Leu Arg Lys Ala Lys Glu Asn Lys

1875 1880 1885

Glu Ser Glu Ala Lys Val Thr Ser His Thr Glu Leu Thr Ser Asn Gln

1890 1895 1900

Gln Ser Ala Asn Lys Thr Gln Ala Ile Ala Lys Gln Pro Ile Asn Arg

1905 1910 1915 1920

Gly Gln Pro Lys Pro Ile Leu Gln Lys Gln Ser Thr Phe Pro Gln Ser

1925 1930 1935

Ser Lys Asp Ile Pro Asp Arg Gly Ala Ala Thr Asp Glu Lys Leu Gln

1940 1945 1950

Asn Phe Ala Ile Glu Asn Thr Pro Val Cys Phe Ser His Asn Ser Ser

1955 1960 1965

Leu Ser Ser Leu Ser Asp Ile Asp Gln Glu Asn Asn Asn Lys Glu Asn

1970 1975 1980

Glu Pro Ile Lys Glu Thr Glu Pro Pro Asp Ser Gln Gly Glu Pro Ser

1985 1990 1995 2000

Lys Pro Gln Ala Ser Gly Tyr Ala Pro Lys Ser Phe His Val Glu Asp

2005 2010 2015

Thr Pro Val Cys Phe Ser Arg Asn Ser Ser Leu Ser Ser Leu Ser Ile

2020 2025 2030

Asp Ser Glu Asp Asp Leu Leu Gln Glu Cys Ile Ser Ser Ala Met Pro

2035 2040 2045

Lys Lys Lys Lys Pro Ser Arg Leu Lys Gly Asp Asn Glu Lys His Ser

2050 2055 2060

Pro Arg Asn Met Gly Gly Ile Leu Gly Glu Asp Leu Thr Leu Asp Leu

2065 2070 2075 2080

Lys Asp Ile Gln Arg Pro Asp Ser Glu His Gly Leu Ser Pro Asp Ser

2085 2090 2095

Glu Asn Phe Asp Trp Lys Ala Ile Gln Glu Gly Ala Asn Ser Ile Val

2100 2105 2110

Ser Ser Leu His Gln Ala Ala Ala Ala Ala Cys Leu Ser Arg Gln Ala

2115 2120 2125

Ser Ser Asp Ser Asp Ser Ile Leu Ser Leu Lys Ser Gly Ile Ser Leu

2130 2135 2140

Gly Ser Pro Phe His Leu Thr Pro Asp Gln Glu Glu Lys Pro Phe Thr

2145 2150 2155 2160

Ser Asn Lys Gly Pro Arg Ile Leu Lys Pro Gly Glu Lys Ser Thr Leu

2165 2170 2175

Glu Thr Lys Lys Ile Glu Ser Glu Ser Lys Gly Ile Lys Gly Gly Lys

2180 2185 2190

Lys Val Tyr Lys Ser Leu Ile Thr Gly Lys Val Arg Ser Asn Ser Glu

2195 2200 2205

Ile Ser Gly Gln Met Lys Gln Pro Leu Gln Ala Asn Met Pro Ser Ile

2210 2215 2220

Ser Arg Gly Arg Thr Met Ile His Ile Pro Gly Val Arg Asn Ser Ser

2225 2230 2235 2240

Ser Ser Thr Ser Pro Val Ser Lys Lys Gly Pro Pro Leu Lys Thr Pro

2245 2250 2255

Ala Ser Lys Ser Pro Ser Glu Gly Gln Thr Ala Thr Thr Ser Pro Arg

2260 2265 2270

Gly Ala Lys Pro Ser Val Lys Ser Glu Leu Ser Pro Val Ala Arg Gln

2275 2280 2285

Thr Ser Gln Ile Gly Gly Ser Ser Lys Ala Pro Ser Arg Ser Gly Ser

2290 2295 2300

Arg Asp Ser Thr Pro Ser Arg Pro Ala Gln Gln Pro Leu Ser Arg Pro

2305 2310 2315 2320

Ile Gln Ser Pro Gly Arg Asn Ser Ile Ser Pro Gly Arg Asn Gly Ile

2325 2330 2335

Ser Pro Pro Asn Lys Leu Ser Gln Leu Pro Arg Thr Ser Ser Pro Ser

2340 2345 2350

Thr Ala Ser Thr Lys Ser Ser Gly Ser Gly Lys Met Ser Tyr Thr Ser

2355 2360 2365

Pro Gly Arg Gln Met Ser Gln Gln Asn Leu Thr Lys Gln Thr Gly Leu

2370 2375 2380

Ser Lys Asn Ala Ser Ser Ile Pro Arg Ser Glu Ser Ala Ser Lys Gly

2385 2390 2395 2400

Leu Asn Gln Met Asn Asn Gly Asn Gly Ala Asn Lys Lys Val Glu Leu

2405 2410 2415

Ser Arg Met Ser Ser Thr Lys Ser Ser Gly Ser Glu Ser Asp Arg Ser

2420 2425 2430

Glu Arg Pro Val Leu Val Arg Gln Ser Thr Phe Ile Lys Glu Ala Pro

2435 2440 2445

Ser Pro Thr Leu Arg Arg Lys Leu Glu Glu Ser Ala Ser Phe Glu Ser

2450 2455 2460

Leu Ser Pro Ser Ser Arg Pro Ala Ser Pro Thr Arg Ser Gln Ala Gln

2465 2470 2475 2480

Thr Pro Val Leu Ser Pro Ser Leu Pro Asp Met Ser Leu Ser Thr His

2485 2490 2495

Ser Ser Val Gln Ala Gly Gly Trp Arg Lys Leu Pro Pro Asn Leu Ser

2500 2505 2510

Pro Thr Ile Glu Tyr Asn Asp Gly Arg Pro Ala Lys Arg His Asp Ile

2515 2520 2525

Ala Arg Ser His Ser Glu Ser Pro Ser Arg Leu Pro Ile Asn Arg Ser

2530 2535 2540

Gly Thr Trp Lys Arg Glu His Ser Lys His Ser Ser Ser Leu Pro Arg

2545 2550 2555 2560

Val Ser Thr Trp Arg Arg Thr Gly Ser Ser Ser Ser Ile Leu Ser Ala

2565 2570 2575

Ser Ser Glu Ser Ser Glu Lys Ala Lys Ser Glu Asp Glu Lys His Val

2580 2585 2590

Asn Ser Ile Ser Gly Thr Lys Gln Ser Lys Glu Asn Gln Val Ser Ala

2595 2600 2605

Lys Gly Thr Trp Arg Lys Ile Lys Glu Asn Glu Phe Ser Pro Thr Asn

2610 2615 2620

Ser Thr Ser Gln Thr Val Ser Ser Gly Ala Thr Asn Gly Ala Glu Ser

2625 2630 2635 2640

Lys Thr Leu Ile Tyr Gln Met Ala Pro Ala Val Ser Lys Thr Glu Asp

2645 2650 2655

Val Trp Val Arg Ile Glu Asp Cys Pro Ile Asn Asn Pro Arg Ser Gly

2660 2665 2670

Arg Ser Pro Thr Gly Asn Thr Pro Pro Val Ile Asp Ser Val Ser Glu

2675 2680 2685

Lys Ala Asn Pro Asn Ile Lys Asp Ser Lys Asp Asn Gln Ala Lys Gln

2690 2695 2700

Asn Val Gly Asn Gly Ser Val Pro Met Arg Thr Val Gly Leu Glu Asn

2705 2710 2715 2720

Arg Leu Asn Ser Phe Ile Gln Val Asp Ala Pro Asp Gln Lys Gly Thr

2725 2730 2735

Glu Ile Lys Pro Gly Gln Asn Asn Pro Val Pro Val Ser Glu Thr Asn

2740 2745 2750

Glu Ser Ser Ile Val Glu Arg Thr Pro Phe Ser Ser Ser Ser Ser Ser

2755 2760 2765

Lys His Ser Ser Pro Ser Gly Thr Val Ala Ala Arg Val Thr Pro Phe

2770 2775 2780

Asn Tyr Asn Pro Ser Pro Arg Lys Ser Ser Ala Asp Ser Thr Ser Ala

2785 2790 2795 2800

Arg Pro Ser Gln Ile Pro Thr Pro Val Asn Asn Asn Thr Lys Lys Arg

2805 2810 2815

Asp Ser Lys Thr Asp Ser Thr Glu Ser Ser Gly Thr Gln Ser Pro Lys

2820 2825 2830

Arg His Ser Gly Ser Tyr Leu Val Thr Ser Val

2835 2840

<210> 2

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Asp Leu Leu Glu Arg Leu Lys Glu Leu Asn Leu Asp

1 5 10

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Cys Arg Gly Asp Lys Gly Pro Asp Cys

1 5

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Asn Leu Thr Lys Arg Ile Asp Ser Leu Pro Leu Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Asp Ala Ala Glu Arg Ala Lys Glu Ala Asn Ala Asp

1 5 10

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Leu Leu Glu Arg Leu Lys Glu Leu Asn Leu

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Leu Leu Glu Arg Leu Lys Glu

1 5

<210> 8

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Glu Arg Leu Lys Glu Leu Asn Leu

1 5

<210> 9

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Glu Ala Met Ala Ser Ser Gly Gln Ile Asp Leu Leu Glu Arg Leu Lys

1 5 10 15

Glu Leu Asn Leu Asp Ser Ser

20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ccggcttcca taagaacgga 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

cgttcttatg gaagccggga 20

Claims

1.一种靶向人APC蛋白的多肽，所述多肽包含SEQ ID NO：1所示的人APC蛋白第68-74位的氨基酸序列(SEQ ID NO：7)并且其余氨基酸在存在的情况下与人APC蛋白的氨基酸序列完全匹配，所述多肽由7-25个氨基酸组成，优选由10-25个氨基酸组成，更优选由12-23个氨基酸组成。

2.根据权利要求1所述的靶向人APC蛋白的多肽，所述多肽由SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列组成。

3.一种融合多肽，所述多肽包含权利要求1或2所述的靶向人APC蛋白的多肽，以及跨膜肽，例如SEQ ID NO：3所示的跨膜肽。

4.一种药物组合物，所述药物组合物包含：

(1)权利要求1或2所述的靶向人APC蛋白的多肽、或者权利要求3所述的融合多肽，以及

(2)药学上可接受的载体。

5.权利要求1或2所述的靶向人APC蛋白的多肽、或者权利要求3所述的融合多肽在制备用于治疗结直肠癌、直结肠癌转移和/或家族性腺瘤性息肉病的药物中的用途，其中，所述结直肠癌、直结肠癌转移和/或家族性腺瘤性息肉病中存在有APC基因突变。

6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述药物为注射制剂。