CN120209083A - 多肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及多肽及其在制备治疗口腔黏膜疾病药物中的应用。本发明所述多肽可用于复发性阿弗他口腔溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎的治疗。本发明所述的多肽具有显著的治疗效果，能够促进溃疡愈合，并呈剂量和时间依赖性；且本发明所述多肽安全性较高，降解产物为天然氨基酸，具有广阔的应用前景。

Description

多肽及其应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及多肽及其在制备治疗口腔黏膜疾病药物中的应用。

背景技术

口腔黏膜指覆盖在口腔内部呈粉红色湿润和柔软组织。口腔黏膜疾病指发生在口腔黏膜上的类型各异、种类众多疾病的总称，包括口腔溃疡、口腔黏膜炎等。大多数口腔黏膜疾病病因比较复杂，病程呈慢性迁延，口腔会溃烂疼痛，并有癌变危险性。

复发性阿弗他溃疡（Recurrent aphthous ulcer，RAU）又称为复发性口腔溃疡，是最常见的口腔黏膜疾病。一项在浙江省展开的20~69岁居民复发性阿弗他溃疡流行病学调查显示，在被调查的11212人中，RAU患病率高达9.99%（王晓东,郑卫军,杜羽等.浙江省20～ 69岁居民复发性阿弗他溃疡流行病学调查[J].中华中医药杂志,2018,33(06):2687- 2689.）。RAU临床表现为反复发作的圆形或椭圆形溃疡，特征为病损表面覆盖黄色假膜，周围有充血红晕带，中央凹陷，灼痛明显（黄、红、凹、痛），具有复发性、周期性、自限性的特点。溃疡的发作妨碍饮食及语言，影响患者的生活质量。目前，复发性阿弗他溃疡的病因及发病机制仍不明确，但学界普遍认为是多种因素综合作用的结果，包括免疫、遗传、局部创伤、精神紧张焦虑等（施琳俊,周曾同.复发性阿弗他溃疡的诊断与疾病管理[J].中华口腔医学杂 志,2022,57(3):314-318.）。近年研究进展提示，免疫功能异常可能是RAU最重要的潜在发病机制，尤其是细胞免疫功能异常。Nature子刊报道了T细胞调节在RAU病因中的作用（Dudding T,Haworth S Lind PA, et al.Genome wide analysis for mouth ulcers identifies associations at immune regulatory loci [J].Nat Commun, 2019,10(1): 1052.）。也有研究发现，RAU的形成主要依赖于局部Thl型免疫反应的激活（Lewkowicz N, Kur B, Kurnatowska A, et al.Expression of Thl/Th2/Th3/Thl7-related genes in recurrent aphthous ulcers [J]. Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 2011, 59(5): 399-406.）。

在恶性肿瘤的治疗过程中，尤其治疗头颈部肿瘤时，口腔黏膜炎（Oralmucositis，OM）是常见的并发症，一般认为其发生与化疗、分子靶向治疗、免疫治疗、放疗（照射野、剂量和技术）以及患者自身的危险因素等密切有关。化疗相关性口腔黏膜炎，又称化疗诱发性口腔黏膜炎（Chemotherapy induced oral mucositis，CTOM），是化疗时最常见的口腔并发症，通常于化疗开始后4~7天内发生，10~14天时达到高峰。放疗相关性口腔黏膜炎（Radiotherapy induced oral mucositis，RTOM），则是指放射治疗所导致的口腔黏膜的炎症或溃疡性病变。抗肿瘤治疗引起的OM，主要表现为口腔黏膜充血、红斑、水肿、糜烂以及不同程度的溃疡等，患者往往表现为局部疼痛、进食困难、口干以及味觉障碍等，影响患者生活质量，还可能影响抗肿瘤治疗的耐受性和依从性，降低抗肿瘤疗效（中国临床肿瘤学会 抗肿瘤药物安全管理专家委员会,中国临床肿瘤学会肿瘤支持与康复治疗专家委员会.抗 肿瘤治疗引起急性口腔黏膜炎的诊断和防治专家共识[J].临床肿瘤学杂志,2021,26(05): 449-459.）。

目前，临床治疗均以局部对症治疗为主，主要目的是消炎、止痛、促进溃疡愈合，如乙醇、糖皮质激素、中药等制成的口腔含漱液、口腔凝胶等。治疗方法虽多，但均有其局限性，如含漱液类产品以清洁口腔为主，疗效有限；糖皮质激素类药物，长期使用导致的不良反应可能超过患者的获益；中药口感较差等；总体治疗效果不理想，很难根治。综而言之，RAU及抗肿瘤治疗引起的OM尚无特效药，严重影响患者的健康水平及生活质量。

多肽是一类三个或三个以上α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，一般由12~50个左右氨基酸组成，具有多种多样的生物学活性。研究发现，某些多肽对细菌、真菌、病毒、原虫、癌细胞等有抑制杀灭作用，可促进伤口愈合过程、提高免疫力，如Melitiin具有抗病毒作用（Memariani H, et al. Melittin: a venom-derived peptide with promising anti-viral properties. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2020 Jan;39 (1):5-17.），Cathelicidin LL-37可能通过激活AKT和ERK以及FoxO3a的磷酸化和核输出，对心肌细胞凋亡和心肌I/R损伤起到保护作用（Bei Y, et al. Cathelicidin-related antimicrobial peptide protects against myocardial ischemia/reperfusion injury. BMC Med. 2019 Feb 20;17(1):42.）。我们也发现有些多肽具有抗病毒的作用（凌 建群等，一种多肽在制备治疗肠道病毒感染药物的应用，中国专利申请号201710201536.3； 凌建群等，一种多肽在制备预防和治疗流感病毒感染的药物中的应用，中国专利申请号 202010925748.8）、抗肺炎作用（凌建群等，一种多肽在预防和治疗肺炎的药物中的应用，中 国专利申请号202010925707.9）及抗胃溃疡作用（凌建群等，一种多肽在预防和治疗胃部疾 病的药物中的应用，中国发明申请号202011228345.4）。

经过全面深入的研究，申请人惊喜地发现，本发明所述的几种多肽具有良好的抗口腔溃疡、抗口腔黏膜炎的作用，可为临床治疗RAU及抗肿瘤治疗引起的OM等口腔黏膜疾病提供全新的治疗方法和药物。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的第一方面在于提供多肽，所述多肽的氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6。

本发明的第二个方面在于提供多肽在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用。

特别的，所述多肽的氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQID No:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6。

特别的，所述的口腔黏膜疾病包括复发性阿弗他溃疡或抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

特别的，所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

特别的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

特别的，所述多肽可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物等其他治疗药物中的一种或多种组合使用。

本发明的第三方面在于提供一类药物，所述药物包含氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6的多肽。

特别的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

本发明第四方面在于提供一类药物在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用，所述药物含有氨基酸序列为SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ IDNo:5、或SEQ ID No:6的多肽。

特别的，所述的口腔黏膜疾病优选为复发性阿弗他溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

特别的，所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

特别的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

特别的，所述药物可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物等其他治疗药物中的一种或多种组合使用。

本发明相对于现有技术存在以下优点及效果：

本发明提供了几种多肽及其在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用，同时，提供了一类以多肽为有效成分的药物及其在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用。与现有技术相比，本发明所述的多肽在治疗口腔黏膜疾病中的应用中，与市售药物的治疗效果相当，甚至优于其治疗效果，可广泛用于口腔黏膜疾病的治疗，且本发明所述多肽安全性较高，最终降解产物为氨基酸，无不良反应。具有广阔的应用前景。

附图说明

图1：各给药组溃疡面积缩小效果图

具体实施方式

本发明的一种实施方式在于提供多肽；所述多肽可按照授权专利（凌建群等，一种 抗菌肽的制备方法和应用，中国专利申请号201310245373.0）中所述多肽的制备方法获得；也可通过固相合成法合成、制备及纯化。所述多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ IDNo:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，实施例中，加入的各原料除特别说明外，均为市售。

本发明的一种实施方式在于提供多肽在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用，所述多肽的氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ IDNo:5或SEQ ID No:6。

优选的，所述的口腔黏膜疾病包括复发性阿弗他溃疡或抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

优选的，所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

优选的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

药学上可接受的辅料是指生产药品和调配处方时，使用的赋形剂和附加剂，为除活性成分外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。同一药用辅料可用于不同给药途径的药物制剂，且有不同的作用和用途。合适的药学上可接受的辅料是本领域普通技术人员所熟知的。

药学上可接受的载体指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。

药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。

在本发明提供的药物中添加的药学上可接受的辅料、载体或辅助性成分，能够起到赋型、充当载体或提高稳定性的作用，此外，还具有增溶、助溶或缓控释等重要功能。

对于上述药用辅料、载体或辅助性成分不做特别限定，可根据具体剂型的选择，选择适宜的药用制剂。可用的药用辅料、载体或辅助性成分包括赋形剂(例如糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、蜂蜜、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠；阿拉伯胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物如偏硅酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙等)、粘合剂(例如明胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇)、崩解剂(例如纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮)、润滑剂(例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮氨酸)、稳定剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、矫味剂(例如常用的甜味剂、酸味剂和香料)等。对于喷雾剂，还可根据需要可加入溶剂、助溶剂、抗氧剂、抑菌剂、表面活性剂等附加剂。

关于药学上可接受的载体或辅料不再一一例举，本领域普通技术人员可根据所掌握的公知常识进行具体选择。

优选的，所述多肽可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物等其他治疗药物中的一种或多种组合使用。与该等药物配合使用，不仅能够增强治疗效果，而且能够提高口腔黏膜疾病患者的舒适度。其中，维生素药物包括以复合维生素 B 族、维生素 C或维生素 E 为主要成分的药物，抗生素类药物包括甲硝唑、替硝唑、庆大霉素、环丙沙星、氧氟沙星或四环素；皮质激素类药物包括强的松、地塞米松或氢化可的松；中药类如蒲公英、忍冬藤等；中成药如含有蒽醌类、维生素、糖类、脂类等活性物质的芦荟凝胶等；局麻止痛药物如利多卡因等；促组织修复药物如表皮生长因子和成纤维细胞生长因子等；免疫类药物药物包括环孢素、胸腺素、胸腺肽肠溶片或α肽甘露聚糖等。

本发明的一种实施方式在于提供一类药物，所述药物包含多肽，多肽氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6。

优选的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

本发明一种实施方式在于提供一类药物在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用，所述药物含有氨基酸序列为SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5、或SEQ ID No:6的多肽。

优选的，所述口腔黏膜疾病为复发性阿弗他溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

优选的，所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

优选的，所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

优选的，所述药物可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物等其他治疗药物中的一种或多种组合使用。

在一种实施方式中，本发明涉及用于治疗口腔黏膜疾病特别是复发性阿弗他溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎的方法，其包括下述步骤：向口腔黏膜病变部位施用含有本发明所述多肽的水溶液，所述多肽氨基酸序列为：SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ IDNo:3、SEQ ID No:4、SEQ ID No:5或SEQ ID No:6，将所述多肽水溶液灌入喷雾瓶，使用前先将喷雾瓶摇匀，对准口腔黏膜疾病的口腔黏膜病变部位进行喷雾，每日1-6次。

本发明上下文所采用的术语“治疗”指得到期望的药理或生理效应。该效应在如下方面可以是预防疾病的：防止或部分防止疾病、症状或病理状态，和/或在如下方面可以是治疗疾病的：部分或完全治愈疾病、病症、症状或由病理状态引起的反作用。因此，“治疗”涵盖了对哺乳动物尤其是人类的疾病的任何治疗，包括：(a)防止病理状态在个体中出现，所述个体可能有产生病理状态的倾向但还没有诊断出来具有这种病理状态，即：对可能有倾向产生病理状态但还没有经历或显示出所述状态的症状的受治者而言，使其体内不会产生病理状态的临床症状；(b)抑制，即：阻止或减轻病理状态或其临床症状的发展；或者(c)解除与病理状态有关联的症状。就本发明的目的而言，包括但不限于症状缓解、疾病程度降低、疾病状态稳定(即不恶化)、疾病进展延迟或减缓、疾病状态改善或缓和以及缓解(无论部分或总体)，而无论可检测或不可检测。术语“治疗”包括相对于不存在治疗来说抑制或降低病理状态或症状(例如改善或减轻了口腔黏膜疾病的症状、缩短症状持续的时间、不恶化疾病状态。如针对RAU，减轻疼痛、促进溃疡愈合、缩短病程、延长复发间歇期等。如针对CTOM/RTOM，控制口腔炎症、缓解疼痛、保护溃疡面、促进及早愈合、阻止粘膜炎进一步恶化发展等)之严重度的提高，且不一定意在表示相关疾病、病症或病状的完全停止。

本发明首次公开了以本发明所述多肽为药物活性成份在制备治疗与预防口腔黏膜疾病，特别是复发性阿弗他口腔溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎药物中的应用，因此，以本发明所述多肽单独或与其他物质组合作为药物活性成份与辅料组合制成任何一种药剂，在其包装或说明书等标识上或者在其他任何宣传品上只要注明或提示具有治疗和预防口腔黏膜疾病，特别是复发性阿弗他口腔溃疡、抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎时，均属于本发明的保护范围。

实施例1本发明所述多肽的固相合成及制备纯化方法

合成方法：在本发明所述SEQ ID No:1~ 6线性肽的合成中，运用9-芴甲氧羰基(FMOC)作为氨基端的保护基团，选用4-甲基二苯基甲胺树脂(4-methyl-benzhydrylamineresin: HCl, MBHA resin)为多肽合成的固相载体，使用HOBt/DCC（1-羟基苯并三唑/N,N'-二环己基碳二亚胺）为反应的缩合剂，由羧基末端向氨基末端(C端→N端)延长肽链。用90.0％三氟乙酸、4.0％水和6.0％三异丙甲硅烷(TIA)的混合液(质量百分比)将含有15-20个氨基酸残基的多肽序列从MBHA树脂上裂解下来。经乙醚反复几次沉淀后，通过制备型反向高效液相色谱RP-HPLC纯化。

纯化过程：使用C18反相制备柱(250mm×20 mm，5 μm)；流动相：1‰三氟乙酸，0％～65％(体积百分比)乙腈为流动相，1.5 mL/min的流速进行梯度洗脱。收集主峰洗脱液，-80℃冻存6小时后放入冻干机冻干，冻干成疏松的固体粉末后置于-20℃冰箱备用。经HPLC分析，纯度为92%~99%；经ESI-Q-TOF-MS/MS 鉴定，其分子量及氨基酸序列与拟制备多肽一致。

制备获得多肽如表1所示。

表1制备获得的多肽及检测结果

多肽序号	重量(g)	纯度(%)	分子量（Da）	氨基酸序列	AA
						SEQ ID No:1	5.6	92.5	2571.26	MGRFKRFRKKFKKLFKKLSP	20
SEQ ID No:2	6.2	92.3	2474.11	MGRFKRFRKKFKKLFKKLS	19
						SEQ ID No:3	5.7	95.6	2342.95	GRFKRFRKKFKKLFKKLS	18
SEQ ID No:4	9.6	97.6	2255.87	GRFKRFRKKFKKLFKKL	17
						SEQ ID No:5	8.2	95.1	2142.71	GRFKRFRKKFKKLFKK	16
SEQ ID No:6	8.1	95.8	2085.66	RFKRFRKKFKKLFKK	15

实施例2 不同剂量的本发明所述多肽对复发性阿弗他口腔溃疡大鼠模型的治疗效果

1.方法

SPF级SD大鼠，体重150-180 g，雄性。经1周适应性喂养，所有大鼠在免疫前1天，用8%硫化钠脱毛，于脱毛处选取2个点，抗原注射面积为脊柱左右各2 cm²，皮内注射免疫抗原乳化剂，每点0.1 mL，每周1次，连续8周进行免疫。在进行免疫后的第54天，模型组（给予生理盐水）、受试物3个剂量组（本发明所述多肽SEQ ID No:4，低中高剂量分别为0.2、2、20mg/kg/d），以丙泊酚麻醉后固定于操作台上，用无菌棉球干燥大鼠下唇侧黏膜，隔湿，将3mm×3 mm 含50%浓度冰醋酸正方形滤纸片放置于干燥后的下唇黏膜上，维持30 s后取下滤纸片，用于灼伤口腔黏膜。

于冰醋酸处理48 h后，以口腔内黏膜出现“黄、红、凹、痛”临床特征的溃疡灶作为建模成功的标志。待造模成功后，将SD大鼠随机分成4组，每组5只，将本发明所述多肽冻干粉末直接溶于灭菌水配制成不同浓度0.13 mg/mL、0.6 mg/mL、3mg/mL，灌入喷雾瓶中，隔天开始连续口腔喷雾给药7天，具体给药方案如表2所示。实验终点，4组大鼠均于10%水合氯醛腹腔注射麻醉，处死。

表2 给药方案

组别	给药方式	给药剂量（mg/kg）	给药浓度（mg/mL）	给药频次
					模型组	口腔喷雾	0	0	一天6次，每次3喷
SEQ ID No:4低剂量组	口腔喷雾	0.2	0.13	一天1次，每次2喷
					SEQ ID No:4中剂量组	口腔喷雾	2	0.6	一天3次，每次3喷
SEQ ID No:4高剂量组	口腔喷雾	20	3	一天6次，每次3喷

注：造模周期较长，期间大鼠体重增长，给药时体重按0.4 kg计算；每喷0.15 mL，不足1喷以1喷记

2. 观察并测量大鼠口腔溃疡面积，评估愈合变化溃疡面积：给药前，给药第3天，第5天以及给药7天后，测量溃疡面积；游标卡尺测量溃疡面直径，给药后每天测量一次，并根据公式计算溃疡面积。

溃疡面积=π×[(最大横径值/2)×(最大纵径值/2)]。

3.统计学处理

统计学方法：采用Microsoft Excel 2019处理数据，计量资料使用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

4.结果

如表3所示，不同剂量的本发明所述多肽对复发性阿弗他口腔溃疡大鼠均有一定治疗作用，能够促进溃疡愈合，并呈剂量和时间依赖性。

表3各组试验动物溃疡面积变化结果

实施例3 本发明所述多肽对复发性阿弗他口腔溃疡大鼠模型的治疗效果

1.方法

SPF级雄性SD大鼠，体重150-180 g，经1周适应性喂养，随机取6只作为空白组正常饲养不进行造模处理，其余动物造模方法按照实施例2的方法进行，造模成功的大鼠随机分成5组，模型组、阳性药组、3种受试物组（SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3），每组6只。参考实施例2，多肽水溶液通过口腔喷雾给药，实际使用浓度为0.36 mg/mL，每天5次，每次3喷，大鼠体重以0.4 kg计，最终剂量为2 mg/kg，阳性药组给予曲安奈德软膏（0.1%，w/w），每天5次，涂抹于溃疡部位。检测指标同实施例2。

2.结果

对照组与各给药观察组观察效果见表4。表4结果显示：与模型组相比，给药组在阿弗他口腔溃疡模型上具有显著的治疗效果。与阳性药相比，本发明所述的多肽治疗效果，在有效率和溃疡面积缩短时间方面，均具有明显优势。

表4 各组试验动物溃疡面积变化结果

实施例4 本发明所述多肽对复发性阿弗他口腔溃疡大鼠模型的治疗效果

1.方法

SPF级雄性SD大鼠，体重150-180 g，经1周适应性喂养，随机取6只作为空白组正常饲养不进行造模处理，其余动物造模方法同实施例2，造模成功的大鼠随机分成5组，模型组、阳性药组、3种受试物组（SEQ ID No:4、SEQ ID No:5、SEQ ID No:6），每组6只。参考实施例2，多肽水溶液通过口腔喷雾给药，实际使用浓度为0.36 mg/mL，每天5次，每次3喷，大鼠体重以0.4 kg计，最终剂量为2 mg/kg，阳性药组给予曲安奈德软膏（0.1%，w/w），每天5次，涂抹于溃疡部位。检测指标同实施例2。

2.结果

各组动物模型观察效果见表5。表5结果显示：与模型组相比，给药组在阿弗他口腔溃疡模型上具有显著促进溃疡愈合的治疗效果。

表5各组试验动物溃疡面积变化结果

实施例5 本发明所述多肽对评估化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导口腔粘膜溃疡的大鼠模型的缓解效果

1.方法

雄性SD大鼠48只，随机取6只作为空白对照组，正常饲养不进行造模处理，其余动物连续2日腹腔注射5-氟尿嘧啶（5-FU，0. 05 mg/g），记首次造模当日为D1，D3应用NaOH颗粒接触颊部粘膜建立口腔溃疡模型，随机分组，分成7组，模型组及6种受试物组，即本专利所述多肽SEQ ID No:1~6。D5给予实验大鼠本专利所述多肽SEQ ID No:1~6。参考实施例2，多肽水溶液通过口腔喷雾给药，实际使用浓度为0.72 mg/mL，每天2次，每次2喷，大鼠体重以0.22kg计，最终剂量为2 mg/kg；于D10处死动物取材。

2. 大鼠口腔溃疡愈合变化评估

观察口腔粘膜损伤情况，并使用Image J 软件测量溃疡面积。

3.统计学处理

统计学方法：采用Microsoft Excel 2019处理数据，计量资料使用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

4.结果

对照组与各给药观察组观察效果见表6。表6和图1结果显示：与模型组相比，多肽SEQ ID No:1~.6组动物D10溃疡损伤面积明显减小，差异具有统计学意义（P <0. 05）。在治疗5-氟尿嘧啶（5-FU）联合氢氧化钠诱导口腔溃疡模型上具有显著的治疗效果。

表6 各给药组试验动物观察和评分结果-个体结果

实施例6 本发明所述多肽对评估放射线照射诱导的口腔粘膜溃疡小鼠模型的缓解效果

1.方法

6-8周的雄性C57BL/6J小鼠，对小鼠头颈部使用每天8 Gy，连续3 d放射线照射，一周后，约有80%的小鼠产生口腔溃疡。将造模成功的小鼠随机分为4组，每组6只，另取6只健康小鼠作为空白对照，空白对照组及模型组口腔喷雾给予生理盐水，给药组每天口腔喷雾给予本发明所述多肽水溶液，实际使用浓度为1.44 mg/mL，每天2次，每次1喷，连续7天。实验进行2次，第一次给予本发明所述多肽SEQ ID No:1、SEQ IDNo:2、SEQ IDNo:3，第二次给予本发明所述多肽SEQ ID No:4、SEQ IDNo:5、SEQ IDNo:6。

2. 观察小鼠口腔黏膜损伤变化并评分

通过观察小鼠口腔粘膜情况，根据黏膜损伤程度（红肿、糜烂、破溃等）、溃疡数量/大小等进行综合评分。

评分标准如下，各项分值相加为最终得分：

评分示例：某只动物口腔黏膜有1处红肿，2处溃疡，溃疡长径分别约0.4、0.8mm，则分值为1+2*2+1=6分

3.结果

如表7、表8所示，与模型组相比，给药组口腔黏膜损伤程度明显减轻，本发明所述多肽SEQ ID No:1~6对放射线照射诱导的口腔黏膜溃疡小鼠模型具有良好的治疗作用，与模型组相比，治疗效果具有显著性差异。

表7 各组动物口腔溃疡评分结果

表8各组动物口腔溃疡评分结果

本部分实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

Claims (13)

1.多肽，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:6。

2.多肽在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述口腔黏膜疾病包括复发性阿弗他口腔溃疡或抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

5.根据权利要求2-4任一所述的应用，其特征在于：所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

6.根据权利要求2-5任一所述的应用，其特征在于：所述多肽可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物中的一种或多种组合使用。

7.药物，其特征在于：含有权利要求1所述的任一多肽。

8.如权利要求7所述的药物，其特征在于：所述药物还包括药学上可接受的其他辅料、载体或辅助性成分。

9.如权利要求7、8所述的任一药物在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用。

10.含有氨基酸序列为SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽的药物在制备治疗口腔黏膜疾病的药物中的应用。

11.根据权利要求9、10任一所述的应用，其特征在于：所述口腔黏膜疾病包括复发性阿弗他口腔溃疡或抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤治疗引起的口腔黏膜炎包括化疗相关性口腔黏膜炎或放疗相关性口腔黏膜炎。

13.如权利要求8-12所述的任一应用，其特征在于：所述药物可与维生素药物、抗生素类药物、皮质激素类药物、中药、中成药、局麻止痛药物、促组织修复药物或免疫类药物药物中的一种或多种组合使用。