CN120531843A - 基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药领域，公开了基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，包括以下步骤：S1、提供包含海洋生物活性物质的组合物，所述海洋生物活性物质包括海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖；S2、将所述组合物配制成局部凝胶制剂；S3、通过阴道或宫腔给药，将所述局部凝胶制剂施用于女性生殖道，以进行子宫内膜再生、瘢痕减少或炎症微环境改善，所述海参皂苷来源于白刺海参；所述牡蛎多肽来源于太平洋牡蛎；所述褐藻多糖来源于马尾藻，为硫酸化多糖。通过将海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖以特定比例(0.5‑1.2％、1‑2.5％、2‑4％)组合，显著提升女性生殖道修复效果，优于单一成分凝胶或现有透明质酸凝胶。

Description

基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体为基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法。

背景技术

女性生殖道损伤(如子宫内膜菲薄、术后瘢痕、子宫内膜异位症等)的修复是生殖医学领域的重要研究方向。现有技术中，常用透明质酸凝胶通过保湿和润滑作用促进内膜修复，聚维酮碘凝胶用于术后抗感染，激素类凝胶(如左炔诺孕酮)用于子宫内膜异位症的炎症控制，此外，单一海洋生物提取物因其抗氧化或抗炎特性被用于局部治疗，这些技术通过局部给药提供了一定的修复支持，广泛应用于临床治疗。

然而，现有技术的修复效果受限于单一成分的作用机制，难以实现全面的生殖道修复。例如，透明质酸凝胶主要提供物理屏障，缺乏促增殖或抗炎活性，内膜厚度增幅有限(通常<6mm)；聚维酮碘凝胶仅具抗菌作用，对瘢痕减少效果较弱(减少率约40％)；激素凝胶虽能缓解异位症炎症，但副作用(如头痛)较多，且对其他病症无效；单一海藻多糖缺乏协同机制，修复效率较低(细胞增殖率约20-25％)。与本发明“三种活性物质协同增强修复效果”(权利要求1、2、3)相比，现有技术未见将海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖组合使用，无法通过抗炎、促增殖和抗氧化的协同作用显著提升修复效率，限制了治疗效果和适用范围。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，解决现有技术的修复效果受限于单一成分的作用机制，难以实现全面的生殖道修复的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，包括以下步骤：

S1、提供包含海洋生物活性物质的组合物，所述海洋生物活性物质包括海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖；

S2、将所述组合物配制成局部凝胶制剂；

S3、通过阴道或宫腔给药，将所述局部凝胶制剂施用于女性生殖道，以进行子宫内膜再生、瘢痕减少或炎症微环境改善。

通过上述技术方案，步骤S1中，从白刺海参提取海参皂苷，通过水解和乙醇萃取获得；从太平洋牡蛎提取牡蛎多肽，通过酶解和超滤制备；从马尾藻提取褐藻多糖，通过热水提取和纯化获得。三种活性物质按比例混合形成组合物。步骤S2中，将组合物与透明质酸钠、卡波姆等辅料混合，调整pH后高压均质化，制成局部凝胶。步骤S3中，通过阴道给药器将凝胶施用于阴道，每日2g，连续14天。实验验证显示，子宫内膜菲薄患者治疗后内膜厚度显著增加，炎症因子水平降低，无不良反应。本方法适用于子宫内膜损伤修复，提高生育潜力。

优选的，所述海参皂苷来源于白刺海参，纯度≥90％；所述牡蛎多肽来源于太平洋牡蛎，分子量<5kDa；所述褐藻多糖来源于马尾藻，为硫酸化多糖。

优选的，所述局部凝胶制剂中，所述海参皂苷的重量百分比为0.5-2％，所述牡蛎多肽的重量百分比为1-3％，所述褐藻多糖的重量百分比为2-5％。

优选的，所述局部凝胶制剂的配制步骤S2包括：

S201、将所述海洋生物活性物质与辅料混合，所述辅料包括透明质酸钠和卡波姆；

S202、通过高压均质化形成均匀凝胶。

优选的，所述步骤S3包括每日施用2-3g所述局部凝胶制剂，连续使用7-14天。

优选的，所述女性生殖道修复适用于治疗子宫内膜损伤、术后瘢痕或子宫内膜异位症。

优选的，所述局部凝胶制剂的pH为5.5-6.5。

优选的，所述海参皂苷通过乙醇萃取获得，所述牡蛎多肽通过酶解技术获得，所述褐藻多糖通过热水提取获得。

优选的，所述局部凝胶制剂在施用后于女性生殖道内释放活性物质的时间为8-12小时。

优选的，所述方法在治疗子宫内膜损伤时，使子宫内膜厚度增加至7-9mm。

本发明提供了基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法。

具备以下有益效果：

1、本发明通过将海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖以特定比例(0.5-1.2％、1-2.5％、2-4％)组合，显著提升女性生殖道修复效果，优于单一成分凝胶或现有透明质酸凝胶。

2、本发明采用透明质酸钠和卡波姆配制凝胶，通过高压均质化实现8-12小时的缓释特性，延长药物在生殖道的局部作用时间，优于现有凝胶的4-6小时释放，减少给药频率，提高治疗便利性。

3、本发明以单一凝胶配方适用于子宫内膜菲薄、术后瘢痕、子宫内膜异位症、宫腔粘连和慢性子宫内膜炎，优于现有技术中针对单一病症的药物，减少了多种药物开发的复杂性。

4、本发明凝胶通过选用透明质酸钠和卡波姆并调整pH至5.5-6.5，确保与生殖道环境的生物相容性，减少副作用，优于现有聚维酮碘或激素凝胶，提升治疗安全性和患者接受度。

附图说明

图1为本发明基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明的附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅附图1，本发明实施例提供基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，包括以下步骤：

S1、提供包含海洋生物活性物质的组合物，海洋生物活性物质包括海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖；

S2、将组合物配制成局部凝胶制剂；

S3、通过阴道或宫腔给药，将局部凝胶制剂施用于女性生殖道，以进行子宫内膜再生、瘢痕减少或炎症微环境改善。

具体的，步骤S1中，组合物的制备涉及从海洋生物中提取活性物质。具体地，海参皂苷通过以下工艺获得：取白刺海参(Holothurialeucospilota)体壁100g，清洗后切碎，加5倍体积蒸馏水，60℃水解4小时，随后用70％乙醇萃取，旋转蒸发浓缩，得到纯度≥90％的海参皂苷(高效液相色谱检测)。牡蛎多肽的制备为：取太平洋牡蛎(Crassostreagigas)软体部分200g，加入蛋白酶K(酶活100U/mg)，37℃、pH7.5酶解6小时，超滤(截留分子量5kDa)，冷冻干燥得到牡蛎多肽。褐藻多糖的提取为：取马尾藻(Sargassumfusiforme)干品100g，加10倍体积热水(80℃)提取3小时，离心取上清液，经离子交换树脂(DEAE-纤维素)纯化，获得硫酸化多糖。这些活性物质按重量比1:2:3混合，溶于磷酸盐缓冲液(pH7.0)，形成组合物。步骤S2中，组合物配制成局部凝胶制剂，具体工艺为：取组合物10g，加入透明质酸钠2g、卡波姆5g、甘油3g，蒸馏水80g，搅拌均匀后用1mol/LNaOH调整pH至6.0，高压均质机(100MPa)处理10分钟，形成均匀凝胶，装入无菌给药器(2g/支)。步骤S3中，给药方式为：患者取仰卧位，使用阴道给药器将凝胶(2g)缓慢注入阴道深处，每日1次，连续14天。实验验证中，30名子宫内膜菲薄患者(平均厚度4.2mm)接受治疗，14天后B超检测显示内膜厚度增至8.1±0.5mm，炎症因子IL-6水平降低55％(ELISA检测)，无不良反应。本方法适用于子宫内膜损伤修复，显著提高了内膜厚度和受孕率。

海参皂苷来源于白刺海参，纯度≥90％；牡蛎多肽来源于太平洋牡蛎，分子量<5kDa；褐藻多糖来源于马尾藻，为硫酸化多糖。

具体的，海参皂苷来源于白刺海参(Holothurialeucospilota)，采集自南海海域，捕捞后立即冷冻(-20℃)保存。提取工艺为：取海参体壁500g，清洗去杂，加蒸馏水2L，60℃搅拌水解5小时，过滤后取上清液，加95％乙醇1.5L萃取12小时，离心(8000rpm，10分钟)，沉淀经乙醇洗涤、真空干燥，得到海参皂苷(产率约1.2％)，HPLC检测纯度达92.5％，主要成分为HolothurinA。牡蛎多肽来源于太平洋牡蛎(Crassostreagigas)，采自山东沿海养殖场，软体部分经高压灭菌后使用。制备工艺为：取牡蛎肉1kg，加水2L，加入蛋白酶K(0.5％w/w)，37℃、pH7.5酶解8小时，离心(6000rpm，15分钟)，上清液经超滤膜(5kDa)分离，冷冻干燥得到多肽(产率约8％)，SDS-PAGE检测分子量分布为2-4kDa，富含赖氨酸和锌(ICP-MS检测锌含量15mg/g)。褐藻多糖来源于马尾藻(Sargassumfusiforme)，采自浙江舟山海域，晒干后粉碎。提取工艺为：取马尾藻干品200g，加蒸馏水3L，85℃提取4小时，过滤后上清液加4％CaCl2沉淀杂质，透析(截留分子量10kDa)，经DEAE-纤维素柱纯化，冻干得到硫酸化多糖(产率约5％)，硫酸基含量18％(红外光谱检测)。三种物质经质谱和核磁共振分析，确认化学结构稳定，适用于凝胶制剂配制。体外实验显示，组合物(含1％海参皂苷、2％牡蛎多肽、3％褐藻多糖)在Ishikawa细胞中促进增殖率提升42％，优于单一成分(增殖率20-25％)。

局部凝胶制剂中，海参皂苷的重量百分比为0.5-2％，牡蛎多肽的重量百分比为1-3％，褐藻多糖的重量百分比为2-5％。

具体的，海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖的重量百分比分别为0.5-2％、1-3％、2-5％，通过正交实验确定最佳配比为1％、2％、3％。具体配制为：取海参皂苷1g、牡蛎多肽2g、褐藻多糖3g，溶于50mL磷酸盐缓冲液(pH7.0)，加入透明质酸钠1.5g、卡波姆4g、甘油2g，补加蒸馏水至100g，搅拌均匀后高压均质化(120MPa，15分钟)，得到凝胶。体外释放实验(Franz扩散池，37℃，pH5.5缓冲液)显示，活性物质在12小时内释放率达85％，其中海参皂苷释放最快(6小时达70％)，褐藻多糖释放最慢(12小时达60％)，确保协同作用。动物实验中，选用SD大鼠(雌性，200g)建立子宫内膜损伤模型(机械刮伤)，分为三组：最佳配比组(1％、2％、3％)、低剂量组(0.5％、1％、2％)、对照组(空白凝胶)。治疗7天后，最佳配比组内膜厚度恢复至1.2±0.1mm(对照组0.6±0.1mm)，瘢痕面积减少65％，优于低剂量组(瘢痕减少45％)。临床前测试中，20名术后瘢痕患者使用最佳配比凝胶(每日2g，10天)，瘢痕面积平均减少60％(超声检测)，炎症因子TNF-α水平降低48％(血清ELISA)。比例优化确保了修复效率和稳定性，适用于多种生殖道损伤。

局部凝胶制剂的配制步骤S2包括：

S201、将海洋生物活性物质与辅料混合，辅料包括透明质酸钠和卡波姆；

S202、通过高压均质化形成均匀凝胶。

具体的，步骤S201中，海洋生物活性物质与辅料混合，具体为：取海参皂苷1g、牡蛎多肽2g、褐藻多糖3g，溶于50mL蒸馏水，加入透明质酸钠(分子量100kDa)2g、卡波姆940(黏度50000mPa·s)5g，搅拌机(500rpm)混合30分钟，形成均匀悬浊液。透明质酸钠增强凝胶的黏附性和保湿性，卡波姆提供稳定的胶体结构。步骤S202中，高压均质化使用高压均质机(型号：AH-2010，压力150MPa)，循环处理3次，每次10分钟，温度控制在25℃以下，避免活性物质降解。均质后凝胶粒径分布为50-100nm(动态光散射检测)，黏度为60000mPa·s(旋转黏度计，25℃)。为确保无菌，凝胶经0.22μm滤膜过滤，装入2g无菌给药器，4℃储存，保质期12个月。体外实验验证，凝胶在模拟阴道环境(pH4.5，37℃)中保持稳定，48小时内无活性物质降解(HPLC检测)。动物实验中，30只新西兰白兔(雌性，2kg)接受凝胶局部施用(2g/天，7天)，皮肤刺激性测试(Draize评分)为0，无红肿或过敏反应。工艺优化提高了凝胶的均匀性和生物相容性，适合宫腔或阴道给药。

步骤S3包括每日施用2-3g局部凝胶制剂，连续使用7-14天。

具体的，给药采用一次性阴道给药器(容量5mL，注射头长5cm)，每次施用凝胶2-3g(活性物质含量：海参皂苷20-60mg、牡蛎多肽40-90mg、褐藻多糖60-150mg)。具体操作为：患者取仰卧位，双膝屈曲，暴露阴道口，给药器缓慢插入阴道深处(约7cm)，推注凝胶后静卧10分钟，确保药物分布均匀。每日给药1次，推荐时间为睡前，连续使用7-14天，具体疗程根据病情调整。例如，子宫内膜菲薄患者(内膜厚度<5mm)使用14天，术后瘢痕患者使用10天，子宫内膜异位症患者使用7天。临床试验中，50名患者(年龄25-40岁)分为两组：凝胶组(2g/天，14天)和对照组(透明质酸凝胶)。凝胶组内膜厚度增加至8.3±0.6mm(对照组6.1±0.5mm)，受孕率提高至35％(对照组15％)，盆腔疼痛评分(VAS)从6.5降至2.8(对照组降至4.5)。给药器设计确保药物精准送达，凝胶黏附性使活性物质在阴道内驻留8-12小时(荧光标记跟踪)。安全性评估显示，无局部刺激或全身不良反应，患者依从性达95％。本给药方式适合多种生殖道损伤修复场景。

女性生殖道修复适用于治疗子宫内膜损伤、术后瘢痕或子宫内膜异位症。

具体的，案例1：子宫内膜损伤，患者(32岁，多次流产后内膜厚度4.0mm)接受凝胶治疗(2g/天，14天)。治疗前B超显示内膜不均匀，治疗后厚度增至8.5mm，内膜呈三线征，月经量恢复正常，3个月后成功妊娠。案例2：术后瘢痕，患者(38岁，子宫肌瘤剔除术后)术区瘢痕面积10mm2(超声检测)。使用凝胶(3g/天，10天)，瘢痕面积减至3mm2，术区血流信号增强(多普勒超声)，术后6个月无复发。案例3：子宫内膜异位症，患者(29岁，慢性盆腔痛，CA125水平150U/mL)。凝胶治疗(2g/天，7天)后，疼痛评分从7降至2，CA125降至80U/mL，炎症因子IL-6降低60％(血清检测)。体外实验中，凝胶对子宫内膜异位症细胞(12Z细胞)增殖抑制率达40％，优于对照组(20％)。动物实验(SD大鼠，子宫内膜异位模型)显示，凝胶组病灶体积减少70％，对照组减少30％。三种适应症的治疗均采用相同凝胶配方(1％海参皂苷、2％牡蛎多肽、3％褐藻多糖)，通过协同作用(抗炎、促再生、抗氧化)实现疗效，适用性广泛。

局部凝胶制剂的pH为5.5-6.5。

具体的，pH调整为模拟阴道自然环境(pH4.5-5.5)，同时确保活性物质稳定性。制备时，取组合物(1％海参皂苷、2％牡蛎多肽、3％褐藻多糖)6g，加入透明质酸钠2g、卡波姆5g、蒸馏水87g，搅拌均匀后分批加入1mol/LNaOH(每次0.5mL)，实时监测pH(pH计，精度±0.01)。实验测试三种pH值(5.0、6.0、6.5)：pH6.0凝胶在37℃、pH4.5缓冲液中48小时内活性物质保留率最高(海参皂苷95％、牡蛎多肽92％、褐藻多糖90％)，pH5.0保留率略低(85-88％)，pH6.5出现轻微沉淀。体外释放实验显示，pH6.0凝胶12小时释放率达88％，优于pH5.0(80％)。临床前测试中，15名健康女性志愿者(年龄25-35岁)使用pH6.0凝胶(2g/天，7天)，阴道pH维持在4.8±0.3，无刺激感或不适。动物实验(新西兰白兔，局部施用pH6.0凝胶，7天)显示，阴道黏膜组织学检查无炎症细胞浸润，pH6.0优于pH5.0(轻微充血)。pH6.0的凝胶兼顾稳定性、释放效率和生物相容性，为最佳选择。

海参皂苷通过乙醇萃取获得，牡蛎多肽通过酶解技术获得，褐藻多糖通过热水提取获得。

具体的，海参皂苷：白刺海参体壁1kg，清洗后加蒸馏水5L，55℃水解6小时，过滤后加70％乙醇4L，静置12小时，离心(10000rpm，15分钟)，沉淀用50％乙醇洗涤2次，40℃真空干燥，得到海参皂苷12g(产率1.2％)，HPLC检测纯度93％，主要成分为HolothurinA和B。牡蛎多肽：太平洋牡蛎软体2kg，加水4L，加入蛋白酶K(0.4％w/w)和木瓜蛋白酶(0.2％w/w)复合酶，37℃、pH7.5酶解7小时，离心(8000rpm，20分钟)，上清液经超滤膜(3kDa和5kDa串联)，冻干得到多肽150g(产率7.5％)，氨基酸分析显示赖氨酸占12％，锌含量18mg/g。褐藻多糖：马尾藻干品500g，粉碎后加蒸馏水8L，90℃提取3.5小时，离心(6000rpm，15分钟)，上清液加2％CaCl2沉淀蛋白，透析48小时(截留分子量12kDa)，经DEAE-纤维素柱(0-1MNaCl梯度洗脱)纯化，冻干得到硫酸化多糖25g(产率5％)，硫酸基含量20％。三种工艺均在GMP车间完成，批次间产率波动<5％。提取物经LC-MS和NMR鉴定，结构稳定，适合凝胶制备。体外抗氧化实验显示，组合物清除DPPH自由基能力为85％，优于单一成分(60-70％)。

局部凝胶制剂在施用后于女性生殖道内释放活性物质的时间为8-12小时。

具体的，凝胶配方为：1％海参皂苷、2％牡蛎多肽、3％褐藻多糖，辅料为2％透明质酸钠、5％卡波姆，pH6.0。缓释设计通过透明质酸钠的高分子网络和卡波姆的胶体结构实现，凝胶黏度65000mPa·s确保黏附性。体外释放实验使用Franz扩散池，接收液为pH4.5磷酸盐缓冲液(含0.5％吐温80)，37℃，搅拌100rpm。结果显示，8小时释放率达75％(海参皂苷80％、牡蛎多肽75％、褐藻多糖70％)，12小时达90％，释放曲线符合Higuchi模型(R²＝0.98)。体内实验中，10只SD大鼠(雌性，200g)阴道内施用荧光标记凝胶(2g)，荧光显微镜观察显示，8小时后活性物质分布于阴道和子宫内膜，12小时后仍检测到20％残留。临床前测试中，20名子宫内膜异位症患者使用凝胶(2g/天，7天)，血浆中未检出活性物质(LC-MS检测，LOD0.1μg/mL)，证明局部滞留有效。缓释特性延长了药物作用时间，减少给药频率，患者每日1次给药的依从性达98％。与市售透明质酸凝胶(释放时间4小时)相比，本凝胶显著提高了疗效。

方法在治疗子宫内膜损伤时，使子宫内膜厚度增加至7-9mm。

具体的，治疗方案为：凝胶(1％海参皂苷、2％牡蛎多肽、3％褐藻多糖，2g/支)每日阴道给药1次，连续14天。临床试验招募40名子宫内膜菲薄患者(年龄25-35岁，内膜厚度3.5-5.0mm，平均4.3mm)，随机分为凝胶组(n＝20)和对照组(n＝20，透明质酸凝胶)。凝胶组治疗后，B超检测内膜厚度增至8.2±0.6mm(范围7.2-9.0mm)，对照组为6.0±0.5mm(t检验，P<0.01)。凝胶组内膜呈典型三线征，血流丰富度(阻力指数RI)从0.85降至0.65，提示血管化改善。6个月随访显示，凝胶组受孕率达40％(8/20)，对照组为15％(3/20)。体外实验中，凝胶处理Ishikawa细胞72小时，细胞增殖率提高48％(MTT法)，VEGF表达上调2.5倍(qPCR检测)，支持内膜再生。动物实验(SD大鼠，子宫内膜损伤模型)显示，凝胶组内膜厚度恢复至1.3±0.1mm(对照组0.7±0.1mm)，上皮细胞覆盖率达95％。治疗过程无感染、过敏或阴道分泌物异常，安全性良好。本方法显著改善内膜菲薄患者的生育潜力。

下面结合具体实施例进行介绍：

实施例1：子宫内膜菲薄患者的修复治疗

本实施例展示了一种基于海洋生物活性物质治疗子宫内膜菲薄的方法。步骤S1：组合物制备，从白刺海参(Holothurialeucospilota，海南陵水产)体壁150g提取海参皂苷：清洗后加蒸馏水1.2L，55℃水解5小时，加75％乙醇1L萃取12小时，离心(8000rpm，10分钟)，沉淀经50％乙醇洗涤，40℃真空干燥，得海参皂苷1.8g(纯度92％，HPLC检测，HolothurinA为主)。从太平洋牡蛎(Crassostreagigas，山东烟台养殖)肉250g提取牡蛎多肽：加水800mL，加入木瓜蛋白酶(0.4％w/w)，38℃、pH7.0酶解6小时，超滤(4kDa)，冻干得牡蛎多肽18g(产率7.2％，分子量2-4kDa，锌含量15mg/g，ICP-MS检测)。从马尾藻(Sargassumfusiforme，浙江温州产)干品100g提取褐藻多糖：加水1.5L，85℃提取3小时，离心(6000rpm，15分钟)，上清液加3％CaCl2沉淀，透析(10kDa)，经DEAE-纤维素柱纯化，冻干得硫酸化多糖5g(硫酸基含量18％)。混合海参皂苷0.5g、牡蛎多肽1g、褐藻多糖2g，溶于50mL磷酸盐缓冲液(pH7.0)。步骤S2：凝胶配制，取组合物3.5g，加透明质酸钠(分子量80kDa)1g、卡波姆940(黏度50000mPa·s)3g、甘油1.5g，补水至100g，搅拌(600rpm，20分钟)，用1mol/LNaOH调pH至5.5，高压均质机(100MPa)处理12分钟，粒径60-100nm(动态光散射检测)，装入2g无菌给药器。步骤S3：给药，患者(30岁，内膜厚度4.3mm)每日睡前用阴道给药器(5cm注射头)注入凝胶2g，仰卧10分钟，连续14天。结果：B超显示内膜厚度增至7.6mm，三线征明显，血流阻力指数(RI)从0.83降至0.63。临床试验(20名患者，凝胶组vs空白凝胶组)显示，凝胶组内膜厚度达7.8±0.5mm(对照组5.9±0.4mm)，受孕率30％vs10％。体外实验(Ishikawa细胞)显示，凝胶促进增殖率45％，VEGF表达上调2.3倍(qPCR)。动物实验(SD大鼠，内膜损伤模型)显示，内膜厚度恢复至1.1±0.1mm，瘢痕减少60％。凝胶释放时间10小时(Franz扩散池，37℃，pH4.5)，无刺激性(兔阴道实验，Draize评分0)，患者依从性95％。本方法有效修复内膜菲薄，提升生育潜力。

实施例2：子宫肌瘤术后瘢痕修复

本实施例针对子宫肌瘤术后瘢痕患者。步骤S1：组合物制备，从白刺海参(Holothurialeucospilota，广东湛江产)体壁200g提取海参皂苷：加蒸馏水1.5L，60℃水解4小时，加80％乙醇1.2L萃取10小时，离心(9000rpm，12分钟)，沉淀用60％乙醇洗涤，45℃干燥，得海参皂苷2.4g(纯度93％)。从太平洋牡蛎(Crassostreagigas，辽宁大连养殖)肉400g提取牡蛎多肽：加水1.2L，加入碱性蛋白酶(0.5％w/w)，37℃、pH8.0酶解5小时，超滤(5kDa)，冻干得牡蛎多肽30g(产率7.5％，锌含量17mg/g)。从马尾藻(Sargassumfusiforme，福建宁德产)干品150g提取褐藻多糖：加水2L，90℃提取2.5小时，离心后加4％NaCl沉淀，透析(12kDa)，经Q-Sepharose柱纯化，冻干得硫酸化多糖7.5g(硫酸基含量20％)。混合海参皂苷1g、牡蛎多肽2g、褐藻多糖3g，溶于60mL蒸馏水。步骤S2：凝胶配制，取组合物6g，加透明质酸钠1.5g、卡波姆934(黏度48000mPa·s)4g、甘油2g，补水至100g，搅拌后调pH至6.0，高压均质机(120MPa)处理10分钟，黏度60000mPa·s，装入3g给药器。步骤S3：给药，患者(36岁，术后瘢痕面积9mm2)术后第5天开始，每日宫腔给药3g(8cm给药器)，平卧15分钟，连续10天。结果：超声显示瘢痕面积减至3mm2，术区血流增强(RI从0.81降至0.61)。临床试验(25名患者，凝胶组vs聚维酮碘凝胶组)显示，凝胶组瘢痕减少65％(对照组40％)，无复发。体外实验(HFF-1细胞)显示，凝胶减少胶原沉积38％。动物实验(Wistar大鼠，术后瘢痕模型)显示，瘢痕面积减少70％。凝胶释放时间12小时，无感染或粘连，满意度92％。本方法显著改善术后恢复。

实施例3：子宫内膜异位症炎症控制

本实施例针对子宫内膜异位症。步骤S1：组合物制备，从白刺海参(Holothurialeucospilota，广西北海产)体壁100g提取海参皂苷：加水800mL，50℃水解6小时，加85％乙醇700mL萃取8小时，离心(8500rpm，10分钟)，沉淀洗涤，50℃干燥，得海参皂苷1.2g(纯度91％)。从太平洋牡蛎(Crassostreagigas，江苏连云港产)肉200g提取牡蛎多肽：加水600mL，加入中性蛋白酶(0.3％w/w)，35℃、pH7.2酶解7小时，超滤(3kDa)，冻干得牡蛎多肽14g(锌含量16mg/g)。从马尾藻(Sargassumfusiforme，山东威海产)干品80g提取褐藻多糖：加水1L，88℃提取3.5小时，离心后透析(8kDa)，经SephadexG-100柱纯化，冻干得硫酸化多糖4g(硫酸基含量17％)。混合海参皂苷0.8g、牡蛎多肽1.5g、褐藻多糖4g，溶于50mL水。步骤S2：凝胶配制，取组合物6.3g，加透明质酸钠1.2g、卡波姆940(黏度52000mPa·s)3.5g、甘油1g，补水至100g，调pH至5.7，纳米均质机(110MPa)处理8分钟，装入2.5g给药器。步骤S3：给药，患者(29岁，VAS评分7，CA125160U/mL)每日阴道给药2.5g，连续7天。结果：VAS评分降至2，CA125降至85U/mL，MRI显示病灶体积从2.8cm3减至1.0cm3。临床试验(20名患者，凝胶组vs左炔诺孕酮凝胶组)显示，凝胶组病灶减少70％(对照组45％)。体外实验(hEM15A细胞)显示，凝胶抑制增殖42％，IL-8表达下调55％。动物实验(BALB/c小鼠，异位症模型)显示，病灶重量减少72％。凝胶释放时间11小时，无副作用，患者舒适度评分9/10。

实施例4：宫腔粘连术后修复

本实施例针对宫腔粘连术后修复。步骤S1：组合物制备，从白刺海参(Holothurialeucospilota，福建厦门产)体壁300g提取海参皂苷：加水2L，65℃水解3.5小时，加90％乙醇1.5L萃取12小时，离心(10000rpm，10分钟)，沉淀洗涤，40℃干燥，得海参皂苷3.6g(纯度94％)。从太平洋牡蛎(Crassostreagigas，浙江舟山产)肉500g提取牡蛎多肽：加水1.5L，加入胃蛋白酶和木瓜蛋白酶(0.2％+0.2％w/w)，40℃、pH7.5酶解6小时，超滤(5kDa)，冻干得牡蛎多肽38g(锌含量18mg/g)。从马尾藻(Sargassumfusiforme，海南三亚产)干品200g提取褐藻多糖：加水3L，92℃提取3小时，离心后加5％CaCl2沉淀，透析(10kDa)，经DEAE-纤维素柱纯化，冻干得硫酸化多糖10g(硫酸基含量19％)。混合海参皂苷1.2g、牡蛎多肽2.5g、褐藻多糖3.5g，溶于70mL水。步骤S2：凝胶配制，取组合物7.2g，加透明质酸钠1.8g、卡波姆934(黏度49000mPa·s)4.5g、甘油2g，补水至100g，调pH至6.0，高压均质机(130MPa)处理10分钟，黏度62000mPa·s，装入3g给药器。步骤S3：给药，患者(34岁，粘连分离术后)术后第2天每日宫腔给药3g，连续12天。结果：宫腔镜显示粘连面积从12cm2减至2cm2，内膜厚度达8.2mm。临床试验(15名患者，凝胶组vs透明质酸凝胶组)显示，凝胶组粘连复发率5％(对照组20％)。体外实验(ECC-1细胞)显示，凝胶促进增殖50％。动物实验(SD大鼠，粘连模型)显示，粘连评分降低80％。凝胶释放时间12小时，无术后感染，满意度90％。

实施例5：慢性子宫内膜炎治疗

本实施例针对慢性子宫内膜炎。步骤S1：组合物制备，从白刺海参(Holothurialeucospilota，山东青岛产)体壁120g提取海参皂苷：加水1L，58℃水解4小时，加70％乙醇800mL萃取10小时，离心(8000rpm，12分钟)，沉淀洗涤，45℃干燥，得海参皂苷1.5g(纯度92％)。从太平洋牡蛎(Crassostreagigas，广东深圳产)肉300g提取牡蛎多肽：加水900mL，加入中性蛋白酶(0.4％w/w)，36℃、pH7.4酶解6小时，超滤(4kDa)，冻干得牡蛎多肽22g(锌含量15mg/g)。从马尾藻(Sargassumfusiforme，江苏盐城产)干品100g提取褐藻多糖：加水1.5L，87℃提取3小时，离心后透析(12kDa)，经SephadexG-100柱纯化，冻干得硫酸化多糖5g(硫酸基含量18％)。混合海参皂苷0.6g、牡蛎多肽1.2g、褐藻多糖2.5g，溶于50mL水。步骤S2：凝胶配制，取组合物4.3g，加透明质酸钠1g、卡波姆940(黏度51000mPa·s)3g、甘油1.2g，补水至100g，调pH至5.8，纳米均质机(100MPa)处理12分钟，装入2g给药器。步骤S3：给药，患者(32岁，炎症因子IL-6120pg/mL)每日阴道给药2g，连续10天。结果：IL-6降至50pg/mL，内膜厚度从5.0mm增至7.9mm。临床试验(18名患者，凝胶组vs抗生素凝胶组)显示，凝胶组炎症消退率85％(对照组60％)。体外实验(THP-1细胞)显示，凝胶抑制NF-κB活性40％。动物实验(Wistar大鼠，炎症模型)显示，炎症细胞浸润减少75％。凝胶释放时间10小时，无刺激，满意度95％。

表一：

表格字符与术语解释：

1.表格结构与标题

实施例/对比例：指本发明的具体实施案例(实施例1-5)与用于对比的现有技术或简化方案(对比例1-5)。实施例基于权利要求1-10的技术特征(海参皂苷、牡蛎多肽、褐藻多糖的组合凝胶)，对比例反映现有技术或单一成分方案的局限性。

适应症：指治疗的特定女性生殖道疾病或状态，包括子宫内膜菲薄(内膜厚度不足)、子宫肌瘤术后瘢痕、子宫内膜异位症、宫腔粘连术后、慢性子宫内膜炎，对应权利要求6。

活性物质及比例：指凝胶中的活性成分及其重量百分比(w/w)，如海参皂苷、牡蛎多肽、褐藻多糖，来源于白刺海参(Holothurialeucospilota)、太平洋牡蛎(Crassostreagigas)、马尾藻(Sargassumfusiforme)，对应权利要求2-3。

主要效果：量化治疗效果的指标，如内膜厚度、瘢痕减少率、病灶体积、炎症因子水平等，结合体外、动物和临床数据，支持权利要求6、10。

安全性/依从性：描述治疗的安全性(副作用、刺激性)和患者使用体验(满意度、依从性)，以百分比或评分表示，支持实用性。

2.具体字符与术语解释

海参皂苷0.5％-1.2％：表示凝胶中海参皂苷的重量百分比(0.5-1.2g/100g凝胶)，来源于白刺海参，纯度≥90％(权利要求2)。例如，实施例1为0.5％，实施例4为1.2％，反映比例优化(权利要求3)。

牡蛎多肽1％-2.5％：凝胶中牡蛎多肽的比例(1-2.5g/100g)，来源于太平洋牡蛎，分子量<5kDa，富含锌(15-18mg/g)，促进细胞增殖。

褐藻多糖2％-4％：凝胶中褐藻多糖的比例(2-4g/100g)，来源于马尾藻，为硫酸化多糖，具有抗氧化作用。

白刺海参、太平洋牡蛎、马尾藻：活性物质的生物来源，括号中为学名(Holothurialeucospilota、Crassostreagigas、Sargassumfusiforme)，符合权利要求2的中文描述。

内膜厚度：7.8±0.5mm(基线4.3mm)：治疗后子宫内膜厚度(平均值±标准差，单位毫米)，基线为治疗前厚度。例如，实施例1从4.3mm增至7.8mm，符合权利要求10(7-9mm)。对比例1仅增至5.9mm，效果较差。

受孕率：30％：治疗后患者成功妊娠的比例(如实施例1，20名患者中6人妊娠)，反映生育潜力改善，对比例1为10％。

VEGF表达上调2.3倍：血管内皮生长因子(VEGF)在体外细胞实验(Ishikawa细胞，qPCR检测)中的表达量增加倍数，促进内膜血管化。对比例1无显著变化。

释放时间10小时：凝胶在体内或体外(Franz扩散池，pH4.5，37℃)释放活性物质的持续时间，体现缓释特性(权利要求9)。对比例释放时间4-6小时。

瘢痕面积减少65％(基线9mm2至3mm2)：术后瘢痕面积(超声测量，平方毫米)的减少百分比，实施例2从9mm2减至3mm2，对比例2减至5.4mm²(40％)。

血流RI：0.61：阻力指数(ResistanceIndex，多普勒超声测量)，反映术区血流改善，实施例2从0.81降至0.61，对比例2为0.75。

胶原沉积减少38％：体外成纤维细胞(HFF-1，SiriusRed染色)胶原沉积量的减少百分比，表明抗瘢痕作用。

病灶体积减少70％(2.8cm³至1.0cm³)：子宫内膜异位症病灶体积(MRI测量，立方厘米)的减少百分比，实施例3从2.8cm³减至1.0cm3，对比例3为1.5cm3(45％)。

VAS评分：2(基线7)：视觉模拟评分(VisualAnalogScale，0-10分)衡量盆腔疼痛，实施例3从7分降至2分，对比例3降至4分。

CA125：85U/mL(基线160)：血清CA125水平(单位U/mL，ELISA检测)，异位症标志物，实施例3降至85U/mL，对比例3为120U/mL。

IL-8表达下调55％：炎症因子IL-8在体外细胞(hEM15A，qPCR检测)的表达量减少百分比，反映抗炎效果。

粘连面积减少83％(12cm²至2cm²)：宫腔粘连面积(宫腔镜测量，平方厘米)的减少百分比，实施例4从12cm2减至2cm2，对比例4为6cm²(50％)。

复发率：5％：治疗后粘连复发的患者比例，实施例4为5％(15名患者中1人)，对比例4为15％。

增殖率提高50％：体外细胞(ECC-1，MTT法)增殖率的提升百分比，实施例4优于对比例4(25％)。

IL-6：50pg/mL(基线120)：炎症因子IL-6的血清水平(pg/mL，ELISA检测)，实施例5从120pg/mL降至50pg/mL，对比例5为80pg/mL。

炎症消退率：85％：慢性子宫内膜炎患者炎症消退的比例(基于症状和炎症因子)，实施例5为85％，对比例5为60％。

NF-κB活性抑制40％：体外细胞(THP-1，WesternBlot检测)NF-κB信号通路活性的抑制百分比，反映抗炎机制。

无刺激(Draize评分0)：动物实验(兔阴道，Draize评分法)评估局部刺激性，0分为无刺激，实施例全为0，对比例有轻微刺激(10-20％患者)。

依从性95％：患者按治疗方案完成疗程的比例，实施例为90-95％，对比例为70-80％(因副作用降低)。

满意度92％：患者对治疗舒适度的主观评分(0-100％)，实施例为90-95％，对比例为70-75％。

舒适度9/10：患者对凝胶使用体验的评分(0-10分)，实施例3为9分，对比例3为6分(因头痛)。

3.对比例特有术语

透明质酸(无活性物质)：对比例1使用的常规保湿凝胶，无海洋生物活性物质，代表现有技术(如CN1980650B中的阴道凝胶)，效果有限。

聚维酮碘(5％)：对比例2使用的抗感染凝胶，含5％聚维酮碘，常见于术后护理，但瘢痕修复效果较差。

左炔诺孕酮(0.1％激素)：对比例3使用的激素类凝胶，含0.1％左炔诺孕酮，治疗异位症但有副作用(如头痛)。

海参皂苷(1％单一成分)：对比例4仅使用海参皂苷，缺乏牡蛎多肽和褐藻多糖的协同作用(权利要求3)，效果较弱。

甲硝唑(0.75％抗生素)：对比例5使用的抗生素凝胶，含0.75％甲硝唑，治疗炎症但效果和安全性不如本发明。

4.数据与单位

±0.5mm：标准差，表示内膜厚度等数据的变异性，如7.8±0.5mm表示平均值7.8mm，变异±0.5mm。

mm,mm2,cm3：长度单位(毫米)、面积单位(平方毫米)、体积单位(立方厘米)，用于内膜厚度、瘢痕/粘连面积、病灶体积。

pg/mL,U/mL：浓度单位，皮克/毫升(炎症因子IL-6)、单位/毫升(CA125)，反映血清标志物水平。

％：百分比，用于减少率(如瘢痕减少65％)、受孕率、依从性等。

小时：释放时间单位，如10小时表示凝胶在体内释放活性物质的持续时间。

5.实验方法缩写

HPLC：高效液相色谱，用于检测海参皂苷纯度。

ICP-MS：电感耦合等离子体质谱，测定牡蛎多肽中锌含量。

qPCR：实时荧光定量PCR，检测VEGF、IL-8表达。

MTT法：细胞增殖实验，测定细胞增殖率。

SiriusRed染色：检测胶原沉积量。

WesternBlot：检测NF-κB活性。

Franz扩散池：体外释放实验装置，模拟药物释放。

B超,MRI,宫腔镜：超声、核磁共振、宫腔镜，用于测量内膜厚度、病灶体积、粘连面积。

ELISA：酶联免疫吸附法，检测IL-6、CA125水平。

Draize评分：皮肤/黏膜刺激性评分法，0分为无刺激。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提供包含海洋生物活性物质的组合物，所述海洋生物活性物质包括海参皂苷、牡蛎多肽和褐藻多糖；

S2、将所述组合物配制成局部凝胶制剂；

S3、通过阴道或宫腔给药，将所述局部凝胶制剂施用于女性生殖道，以进行子宫内膜再生、瘢痕减少或炎症微环境改善。

2.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述海参皂苷来源于白刺海参，纯度≥90％；所述牡蛎多肽来源于太平洋牡蛎，分子量<5kDa；所述褐藻多糖来源于马尾藻，为硫酸化多糖。

3.根据权利要求2所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述局部凝胶制剂中，所述海参皂苷的重量百分比为0.5-2％，所述牡蛎多肽的重量百分比为1-3％，所述褐藻多糖的重量百分比为2-5％。

4.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述局部凝胶制剂的配制步骤S2包括：

S201、将所述海洋生物活性物质与辅料混合，所述辅料包括透明质酸钠和卡波姆；

S202、通过高压均质化形成均匀凝胶。

5.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述步骤S3包括每日施用2-3g所述局部凝胶制剂，连续使用7-14天。

6.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述女性生殖道修复适用于治疗子宫内膜损伤、术后瘢痕或子宫内膜异位症。

7.根据权利要求4所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述局部凝胶制剂的pH为5.5-6.5。

8.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述海参皂苷通过乙醇萃取获得，所述牡蛎多肽通过酶解技术获得，所述褐藻多糖通过热水提取获得。

9.根据权利要求1所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述局部凝胶制剂在施用后于女性生殖道内释放活性物质的时间为8-12小时。

10.根据权利要求6所述的基于海洋生物活性物质在女性生殖道的修复方法，其特征在于，所述方法在治疗子宫内膜损伤时，使子宫内膜厚度增加至7-9mm。