CN202297608U - 一种细菌耐药基因的检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种细菌耐药基因的检测试剂盒。包括盒体、盒盖、衬垫，其盒体内设置有定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因的检测试剂及盛装容器；采用新型探针及实时荧光定量聚合酶链式反应技术，定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因，经“超级细菌”阳性菌株和从国际旅行人员及货物采集的样本分离得到的病原菌进行验证，该“超级细菌”I型新德里金属β-内酰胺酶基因检测试剂盒切实可行，可以灵敏快速，特异准确地检测国际旅行人员和货物是否感染了携带该基因的“超级细菌”，为保障我国国境卫生检疫安全建立了一道坚实的屏障。
Description
技术领域
本实用新型属于生物技术领域，涉及一种细菌耐药基因的检测试剂盒。
背景技术
I型新德里金属β-内酰胺酶基因是科学家发现的一种新型细菌耐药基因，它编码一种新的金属-β-内酰胺酶，能水解几乎所有的β-内酰胺类抗菌药物，使细菌几乎对所有抗生素耐药，很难治愈。此外，由于该基因属于可移动的遗传因子，因此可以在不同细菌基因组间传递，使更多细菌变得耐药。目前，针对外来传染病的实验室快速检测技术主要采用的是免疫学检测及核酸检测技术，尤其是以聚合酶链式反应技术为代表的核酸检测技术，能够非常灵敏的检测到各种传染病的病原体。而实时荧光定量聚合酶链式反应技术以其特异性强、定量、敏感、方便等优点已得到全世界的公认，越来越广泛用于病原体等诸多检测。其中探针法以其对目标序列的高特异性、高重复性及设计简单的特点而更为常用。实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测病原体的成功应用就是研发出成熟、标准的试剂盒。目前国内还没有运用该技术检测“超级细菌”I型新德里金属β-内酰胺酶基因的试剂盒。
发明内容
本实用新型的目的在于提供一种细菌耐药基因的检测试剂盒，采用探针及实时荧光定量聚合酶链式反应技术，可以快速、准确地检测国际旅行人员和货物是否携带了具有I型新德里金属β-内酰胺酶基因的“超级细菌”，保障国家公共卫生安全。
本实用新型采用的技术方案：一种细菌耐药基因的检测试剂盒，包括盒体、盒盖、衬垫，其盒体内设置有定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因的检测试剂及盛装容器。
所述的盒体内设置有上衬垫、下衬垫，上衬垫、下衬垫为分体或整体结构，上衬垫和下衬垫上设置有数个上下相互对应的孔位。
所述的上衬垫和下衬垫上的孔位内分别放置有盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器、盛装有脱氧核糖核酸聚合酶的容器、盛装有阴性对照品的容器、盛装有阳性对照品的容器。
所述的盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器内设置有荧光定量聚合酶链式反应缓冲液、氯化镁、探针、四种脱氧核糖核苷三磷酸及检测用引物，检测用引物为一对，即上游引物和下游引物，四种脱氧核糖核苷三磷酸为三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸。
所述的盛装有阳性对照品的容器内设置有含有I型新德里金属β-内酰胺酶基因的脱氧核糖核酸样本，盛装有阴性对照品的容器内设置有无I型新德里金属β-内酰胺酶基因的脱氧核糖核酸样本。
所述的盒盖为分体或与盒体连为一体结构。
本实用新型采用新型探针及实时荧光定量聚合酶链式反应技术，定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因，经“超级细菌”阳性菌株和从国际旅行人员及货物采集的样本分离得到的病原菌进行验证，证明该“超级细菌”I型新德里金属β-内酰胺酶基因检测试剂盒切实可行，可以灵敏快速，特异准确地检测国际旅行人员和货物是否感染了携带该基因的“超级细菌”，为保障我国国境卫生检疫安全建立了一道坚实的屏障。
附图说明
图1为本实用新型结构示意图；
图2为本实用新型的内部结构示意图。
具体实施方式
参照图1、图2所示，一种细菌耐药基因的检测试剂盒，主要包括盒体1、盛装有脱氧核糖核酸聚合酶的容器2、上衬垫3、盒盖4、下衬垫5、盛装有阴性对照品的容器6、盛装有阳性对照品的容器7、盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器8等；其盒体1内设置有定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因的各种检测试剂及盛装容器；所述的盒体1内设置有上衬垫3、下衬垫5，上衬垫3、下衬垫5可以是分体或整体结构；上衬垫3和下衬垫5上设置有数个上下相互对应的孔位，各孔位内分别放置有现有技术的盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器8、盛装有脱氧核糖核酸聚合酶的容器2、盛装有阴性对照品的容器6、盛装有阳性对照品的容器7等；盒体1上设置有盒盖4。本试剂盒保存于-20摄氏度，尽量减少反复冻融。
所述的盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器8内设置有荧光定量聚合酶链式反应缓冲液、氯化镁、探针、四种脱氧核糖核苷三磷酸、检测用引物，所述的探针为5’-FAM-CGCACCGAATGTCTGGCAGCACAC-BHQ1-3’，四种脱氧核糖核苷三磷酸为三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸。
检测用引物为一对，包括上游引物F：5’-ACCCGGCATGTCGAGATAGG-3’及下游引物R：5’-CGGTTTGGCGATCTGGTTTTC-3’；用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因。上述探针及检测试剂均为现有技术，可市售。
所述的盛装有阳性对照品的容器7内设置有含有I型新德里金属β-内酰胺酶基因的脱氧核糖核酸样本，盛装有阴性对照品的容器6内设置有无I型新德里金属β-内酰胺酶基因的脱氧核糖核酸样本。
本实用新型的使用方法：每次检测均应设置阳性对照品和阴性对照品；扩增检测在实时荧光定量聚合酶链式反应仪上进行，分为三个反应管，其中一个反应管为被检测样品，阳性对照品和阴性对照品各需要一个反应管，每管中总体积为25微升，其中探针法荧光定量聚合酶链式反应液为19微升，脱氧核糖核酸聚合酶为1微升，检测样品为5微升，检测样品即基因组脱氧核糖核酸或阳性对照品或阴性对照品。反应条件为95摄氏度30秒，95摄氏度5秒和60摄氏度20秒为一个循环，循环四十次，在退火阶段检测荧光；反应完成后在荧光定量聚合酶链式反应仪上进行终点荧光读取，根据得到的二维荧光图和实时扩增曲线读取被检测样品是否含有I型新德里金属β-内酰胺酶基因。
Claims (4)
1.一种细菌耐药基因的检测试剂盒，包括盒体、盒盖、衬垫，其特征在于盒体(1)内设置有定性检测细菌耐药基因I型新德里金属β-内酰胺酶基因的检测试剂及盛装容器。
2.根据权利要求1所述的细菌耐药基因的检测试剂盒，其特征在于所述的盒体(1)内设置有上衬垫(3)、下衬垫(5)，上衬垫(3)、下衬垫(5)为分体或整体结构，上衬垫(3)和下衬垫(5)上设置有数个上下相互对应的孔位。
3.根据权利要求2所述的细菌耐药基因的检测试剂盒，其特征在于所述的上衬垫(3)和下衬垫(5)上的孔位内分别放置有盛装有探针法荧光定量聚合酶链式反应液的容器(8)、盛装有脱氧核糖核酸聚合酶的容器(2)、盛装有阴性对照品的容器(6)、盛装有阳性对照品的容器(7)。
4.根据权利要求1所述的细菌耐药基因的检测试剂盒，其特征在于所述的盒盖(4)为分体或与盒体(1)连为一体结构。
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