DE102005011957A1 - New hair treatment composition containing L-carnitine or L-carnitine derivatives - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Haarbehandlungsmittel, enthaltend mindestens eine Verbindung, die ausgewählt ist unter L-Carnitin oder L-Carnitinderivaten. Weiterhin betrifft die Erfindung ein Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen, ein Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen, ferner ein Testverfahren zum Nachweis der Wirksamkeit von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels sowie ein Screening-Verfahren zur Identifikation von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels und ein Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen oder pharmazeutischen Zubereitung zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels.The present invention relates to a hair treatment agent containing at least one compound selected from L-carnitine or L-carnitine derivatives. Furthermore, the invention relates to a method for extracorporeal analysis of hair follicle cells, a method for extracorporeal determination of the ATP synthesis rate in hair follicle cells, and a test method for demonstrating the efficacy of cosmetic or pharmaceutical agents for maintaining or promoting the homeostasis of the hair follicle or for the treatment of pathological conditions of the hair follicle and a screening method for the identification of cosmetic or pharmaceutical agents for maintaining or promoting the homeostasis of the hair follicle or for treating pathological conditions of the hair follicle and a method for producing a cosmetic or pharmaceutical preparation for maintaining or promoting the homeostasis of the hair follicle for the treatment of pathological conditions of the hair follicle.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Haarbehandlungsmittel, enthaltend mindestens eine Verbindung, die ausgewählt ist unter L-Carnitin oder L-Carnitinderivaten. Weiterhin betrifft die Erfindung ein Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen, ein Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen, ferner ein Testverfahren zum Nachweis der Wirksamkeit von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels sowie ein Screening-Verfahren zur Identifikation von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels und ein Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen oder pharmazeutischen Zubereitung zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des HaarfollikelsThe The present invention relates to a hair treatment composition containing at least one compound selected from L-carnitine or L-carnitine derivatives. Furthermore, the invention relates to a method for extracorporeal Analysis of hair follicle cells, a procedure for extracorporeal Determination of ATP synthesis rate in hair follicle cells, also a Test method to demonstrate the efficacy of cosmetic or pharmaceutical Active ingredients for maintaining or promoting the homeostasis of Hair follicle or for the treatment of pathological conditions of the Hair follicle and a screening method for the identification of cosmetic or pharmaceutical agents for maintenance or promotion the homeostasis of the hair follicle or for the treatment of pathological conditions of the hair follicle and a method of making a cosmetic or pharmaceutical preparation for maintenance or promotion the homeostasis of the hair follicle or for the treatment of pathological conditions of the hair follicle
L-Carnitin ist ein vitaminähnlicher Wirkstoff, der mit den Vitaminen des B-Komplexes verwandt ist und essentiell wichtig für die Energieproduktion und den Fettstoffwechsel des menschlichen Körpers ist. Aus diesem Grund wird L-Carnitin vor allem als Nahrungsergänzungsmitel eingesetzt (US20040170709 A1). Ebenso wie L-Carnitin findet auch L-Carnitin-Tartrat Verwendung als Nahrungsergänzung, z.B. zur Unterstützung der Gewichtsreduktion (US20040028668 A1).L-carnitine is a vitamin-like Active ingredient, which is related to the vitamins of the B-complex and essential important for the energy production and the fat metabolism of the human body is. For this reason, L-carnitine especially as a dietary supplement used (US20040170709 A1). Just as L-carnitine also finds L-carnitine tartrate Use as a nutritional supplement, e.g. to support weight loss (US20040028668 A1).
ATP (Adenosintriphosphat) ist die universelle Speicherform für chemische Energie in Zellen. Bei der Abspaltung der distalen Phosphatgruppe entsteht ADP und Pi (anorganisches Phosphat). Diese Reaktion ist stark exergon, d.h. es wird Energie frei. Produziert wird ATP beim zellulären, oxidativen Abbau von Fetten, Kohlehydraten und Proteinen. ATP dient der Zelle, auch den biologisch aktiven Zellen des Haarfollikels, als Energielieferant für biochemische Synthesen und Transportvorgänge. Diese Vorgänge sind endergon, d.h. sie laufen nur unter Energiezufuhr ab. Um ihren Stoffwechsel und zelluläre Strukturen optimal aufrecht zu erhalten und zu erneuern, sind Zellen also auf eine ausreichende Versorgung mit ATP angewiesen. So ist beispielsweise die Proliferation und Differenzierung von ORS-Keratinozyten (Keratinocyten der äußeren Wurzelscheide, „outer root sheath") an die ATP-Synthese gekoppelt, da für beide Vorgänge die Biosynthese spezifischer Proteine essentielle Voraussetzung ist. Auch dermale Papillenzellen benötigen beispielsweise zur Produktion von Wachstumsfaktoren und damit zur Steuerung des Haarzyklus ATP. Daher ist eine ausreichende Versorgung des Haarfollikels mit ATP essentielle Voraussetzung für kräftiges, vitales und gesundes Haar.ATP (Adenosine triphosphate) is the universal storage form for chemical Energy in cells. In the cleavage of the distal phosphate group arises ADP and Pi (inorganic phosphate). This reaction is strong exergon, i. it releases energy. ATP is produced in cellular, oxidative Degradation of fats, carbohydrates and proteins. ATP serves the cell, also the biologically active cells of the hair follicle, as an energy supplier for biochemical Syntheses and transport processes. These processes are endergon, i. they only run with energy. For your Metabolism and cellular Optimal structures to maintain and renew are cells So rely on an adequate supply of ATP. So is for example, the proliferation and differentiation of ORS keratinocytes (Keratinocytes of the outer root sheath, "outer root sheath ") the ATP synthesis coupled, since for both processes the biosynthesis of specific proteins is essential is. For example, dermal papilla cells also require production of growth factors and thus to control the hair cycle ATP. Therefore, an adequate supply of the hair follicle with ATP essential requirement for strong, vital and healthy hair.
Die Menge eines haaraktiven Wirkstoffes, der üblicherweise transdermal und speziell transfollukulär bis zum Haarbulbus penetrieren kann, ist äußerst gering und hängt im Wesentlichen von den physikochemischen Eigenschaften der Substanz selber (z.B: Größe, Ladung, Lipophilie) sowie der Wahl der Formulierung ab.The Amount of a hair-active ingredient, usually transdermal and especially transfollukular up penetrate to the hair bulb, is extremely low and depends essentially from the physicochemical properties of the substance itself (e.g. Size, charge, Lipophilicity) and the choice of formulation.
Haarfollikelzellen unterliegen einem genetisch festgelegten Zyklus von Wachstum, Regression, und Ruhephase. Der Haarfollikel ist damit das einzige Organ, dass sich ständig selbst erneuert und somit einen, in Abhängigkeit von der jeweiligen Wachstumsphase, einzigartigen Metabolismus aufweist. So kommt der Metabolismus des Haarfollikels in der Ruhephase fast völlig zum Erliegen und wird mit jedem neuem Beginn eines weiteren Zyklus ebenfalls neu initiiert.hair follicle cells are subject to a genetically determined cycle of growth, regression, and rest phase. The hair follicle is thus the only organ that constantly self renewed and thus one, depending on the particular Growth phase, unique metabolism. So comes the Hair follicle metabolism in resting phase almost entirely to Succumb and will with every new beginning of another cycle also newly initiated.
Gesteuert wird dieser Zyklus von einer kleinen, hochspezialisierten Zellpopulation im Haarbulbus, den dermalen Papillenzellen, die durch ein komplexes Set molekularer Signale, das spezifisch für jede Phase des Haarzyklus ist, das Haarwachstum kontrollieren (Botchkarev VA et al. (2003) J Investig Dermatol Symp Proc 8:46-55).controlled This cycle is from a small, highly specialized cell population in the Haarbulbus, the dermal Papillenzellen, by a complex Set of molecular signals specific to each phase of the hair cycle is to control hair growth (Botchkarev VA et al. (2003) J Investig Dermatol Symp Proc 8: 46-55).
Überraschenderweise wurde gefunden, daß durch die topische Anwendung von L-Carnitin oder L-Carnitinderivaten auf behaarter Haut, insbesondere Kopfhaut, der Metabolismus dieser hochspezialisierten Zellen moduliert werden und die ATP-Synthese im Haarfollikel stimuliert werden kann.Surprisingly was found that through topical application of L-carnitine or L-carnitine derivatives hairy skin, especially the scalp, the metabolism of this highly specialized Cells are modulated and stimulates ATP synthesis in the hair follicle can be.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher ein Haarbehandlungsmittel, enthaltend mindestens eine Verbindung, die ausgewählt ist unter L-Carnitin oder L-Carnitinderivaten, wobei die L-Carnitinderivate ausgewählt sind unter Acetyl-L-Carnitin, L-Carnitin-Fumarat, L-Carnitin-Citrat, Lauroyl-L-Carnitin und insbesondere L-Carnitin-Tartrat.The The present invention therefore relates to a hair treatment composition, containing at least one compound that is selected under L-carnitine or L-carnitine derivatives, wherein the L-carnitine derivatives are selected from acetyl-L-carnitine, L-carnitine fumarate, L-carnitine citrate, lauroyl-L-carnitine and especially L-carnitine tartrate.
Die genannten L-Carnitin-Verbindungen sind beispielsweise von der Firma Lonza GmbH (Wuppertal, Deutschland) erhältlich.The L-carnitine compounds mentioned are, for example, from the company Lonza GmbH (Wuppertal, Germany) available.
Durch die Behandlung von Kopfhaar mit L-Carnitinderivaten, vorzugsweise L-Carnitintartrat, in einem Haarbehandlungsmittel, beispielsweise einem Haartonic mit geeigneter Formulierung, kann die ATP-Menge in den behandelten Follikeln signifikant im Vergleich zur einer Placeboformulierung erhöht werden. Die Behandlung mit L-Carnitintartrat einer Rinse-off Formulierung führt ebenso zu einer signifikanten Erhöhung des ATP-Gehalts in gezupften Haarfollikeln. Damit wird dem biologisch aktiven Teil des Haares signifikant mehr ATP als Energielieferant für biochemische Synthesen und Transportvorgänge zur Verfügung gestellt, so dass Stoffwechselvorgänge und zelluläre Strukturen optimal aufrecht erhalten und erneuert werden können.By the treatment of hair with L-carnitine derivatives, preferably L-carnitine tartrate, in a hair treatment agent, for example a hair tonic appropriate formulation, the amount of ATP in the treated follicles be significantly increased compared to a placebo formulation. Treatment with L-carnitine tartrate of a rinse-off formulation leads as well to a significant increase of ATP content in plucked hair follicles. This is the biological active part of the hair significantly more ATP as an energy source for biochemical Syntheses and transport processes to disposal posed, allowing metabolic processes and cellular structures optimally maintained and renewed.
Die Penetration von Wirkstoffen zum Follikel ist üblicherweise erschwert, da das entsprechende Target, die dermale Papille sowie die ORS-Keratinozyten, ca. 2 mm tief in der Kopfhaut eingebettet ist. Die Verwendung von Liposomen erhöht die Penetration eines Wirkstoffes, so daß liposomal verkapseltes L-Carnitin bzw. L-Carnitinderivate erfindungsgemäß sehr gut wirken. Überraschenderweise wurde festgestellt, daß L-Carnitin bzw. die eingesetzten L-Carnitinderivate selbst dann eine ausreichende Penetration zum Wirkungsort zeigen, wenn die Verwendung von Liposomen aus formulierungstechnischen Gründen nicht möglich ist.The Penetration of drugs to the follicle is usually difficult since the corresponding target, the dermal papilla and the ORS keratinocytes, 2 mm deep embedded in the scalp. The usage of Increased liposomes the penetration of an active ingredient so that liposomally encapsulated L-carnitine or L-carnitine derivatives according to the invention very good Act. Surprisingly it was found that L-carnitine or the L-carnitine derivatives used even a sufficient Penetration to the site of action when the use of liposomes for technical reasons not possible is.
Das erfindungsgemäße Haarbehandlungsmittel kann L-Carnitin und/oder ein L-Carnitinderivat oder auch mehrere voneinander verschiedene L-Carnitinderivate enthalten.The Hair treatment agent according to the invention may be L-carnitine and / or an L-carnitine derivative or also contain several mutually different L-carnitine derivatives.
L-Carnitin bzw. L-Carnitinderivate sind in dem erfindungsgemäßen Mittel bevorzugt in Mengen von 0,005 bis 10 Gew.-%, bezogen auf die gesamte Zubereitung, enthalten. Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-% sind besonders bevorzugt, Mengen von 0,5 bis 3 Gew.-% sind in besonderem Maße bevorzugt, und Mengen von 1 bis 2 Gew.-% sind ganz besonders bevorzugt.L-carnitine or L-carnitine derivatives are in the agent according to the invention preferably in amounts of 0.005 to 10 wt .-%, based on the total Preparation, included. Amounts of 0.1 to 10 wt .-% are special Preferably, amounts of 0.5 to 3 wt .-% are particularly preferred, and amounts of 1 to 2 wt .-% are very particularly preferred.
Das erfindungsgemäße Mittel kann zusätzlich Proteinhydrolysate umfassen, vorzugsweise kationisierte Proteinhydrolysate, wobei das zugrunde liegende Proteinhydrolysat vom Tier, beispielsweise aus Collagen, Milch oder Keratin, von der Pflanze, beispielsweise aus Weizen, Mais, Reis, Kartoffeln, Soja oder Mandeln, von marinen Lebensformen, beispielsweise aus Fischcollagen oder Algen, oder biotechnologisch gewonnenen Proteinhydrolysaten, stammen kann. Die den kationischen Derivaten zugrunde liegenden Proteinhydrolysate können aus den entsprechenden Proteinen durch eine chemische, insbesondere alkalische oder saure Hydrolyse, durch eine enzymatische Hydrolyse und/oder einer Kombination aus beiden Hydrolysearten gewonnen werden. Die Hydrolyse von Proteinen ergibt in der Regel ein Proteinhydrolysat mit einer Molekulargewichtsverteilung von etwa 100 Dalton bis hin zu mehreren tausend Dalton. Bevorzugt sind solche kationischen Proteinhydrolysate, deren zugrunde liegender Proteinanteil ein Molekulargewicht von 100 bis zu 25000 Dalton, bevorzugt 250 bis 5000 Dalton aufweist. Weiterhin sind unter kationischen Proteinhydrolysaten quaternierte Aminosäuren und deren Gemische zu verstehen. Die Quaternisierung der Proteinhydrolysate oder der Aminosäuren wird häufig mittels quarternären Ammoniumsalzen wie beispielsweise N,N-Dimethyl-N-(n-Alkyl)-N-(2-hydroxy-3-chloro-n-propyl)-ammoniumhalogeniden durchgeführt. Weiterhin können die kationischen Proteinhydrolysate auch noch weiter derivatisiert sein. Als typische Beispiele für die kationischen Proteinhydrolysate und – derivate seien die unter den INCI – Bezeichnungen im "International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook", (seventh edition 1997, The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association 1101 17th Street, N.W., Suite 300, Washington, DC 20036-4702) genannten and im Handel erhältlichen Produkte genannt: Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Cocodimopnium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Hair Keratin, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Rice Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Silk Amino Acids, Hydroxypropyl Arginine Lauryl/Myristyl Ether HCl, Hydroxypropyltrimonium Gelatin, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Casein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Collagen, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Conchiolin Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed keratin, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Rice Bran Protein, Hydroxyproypltrimonium Hydrolyzed Silk, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Soy Protein, Hydroxypropyl Hydrolyzed Vegetable Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Wheat Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Wheat Protein/Siloxysilicate, Laurdimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Laurdimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Laurdimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein/Siloxysilicate, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Rice Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Vegetable Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Steartrimonium Hydroxyethyl Hydrolyzed Collagen, Quaternium-76 Hydrolyzed Collagen, Quaternium-79 Hydrolyzed Collagen, Quaternium-79 Hydrolyzed Keratin, Quaternium-79 Hy drolyzed Milk Protein, Quaternium-79 Hydrolyzed Silk, Quaternium-79 Hydrolyzed Soy Protein, Quaternium-79 Hydrolyzed Wheat Protein.The composition according to the invention may additionally comprise protein hydrolysates, preferably cationized protein hydrolysates, wherein the underlying protein hydrolyzate is derived from the animal, for example from collagen, milk or keratin, from the plant, for example from wheat, maize, rice, potatoes, soya or almonds, from marine life forms, from fish collagen or algae, or biotechnologically derived protein hydrolysates. The protein hydrolyzates on which the cationic derivatives are based can be obtained from the corresponding proteins by chemical, in particular alkaline or acid hydrolysis, by enzymatic hydrolysis and / or a combination of both types of hydrolysis. The hydrolysis of proteins usually results in a protein hydrolyzate having a molecular weight distribution of about 100 daltons up to several thousand daltons. Preference is given to those cationic protein hydrolyzates whose underlying protein content has a molecular weight of 100 to 25,000 daltons, preferably 250 to 5000 daltons. Furthermore, cationic protein hydrolyzates are to be understood as meaning quaternized amino acids and mixtures thereof. The quaternization of the protein hydrolyzates or amino acids is often carried out using quaternary ammonium salts such as N, N-dimethyl-N- (n-alkyl) -N- (2-hydroxy-3-chloro-n-propyl) ammonium halides. Furthermore, the cationic protein hydrolysates may also be further derivatized. Typical examples of the cationic protein hydrolysates and derivatives are those listed under the INCI names in the "International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook", (seventh edition 1997, The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association 1101 17 th Street, NW, Suite 300, Washington, DC 20036-4702) and commercially available products: Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Cocodimopnium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Hair Keratin, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Rice Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Cocodimonium Hydroxypropyl Silk Amino Acids, Hydroxypropyl Arginine Lauryl / Myristyl Ether HCl, Hydroxypropyltrimonium Gelatin, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Casein, Hydroxyprop yltrimonium Hydrolyzed Collagen, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Conchiolin Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Keratin, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Rice Bran Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Silk, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Soy Protein, Hydroxypropyl Hydrolyzed Vegetable Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Wheat Protein, Hydroxypropyltrimonium Hydrolyzed Wheat Protein / Siloxysilicate, Laurdimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein , Lauridimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Laurydimium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein / Siloxysilicate, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Lauryldimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Casein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Collagen , Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Keratin, Steardimoni around hydro xypropyl Hydrolyzed Rice Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Silk, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Soy Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Vegetable Protein, Steardimonium Hydroxypropyl Hydrolyzed Wheat Protein, Steartrimonium Hydroxyethyl Hydrolyzed Collagen, Quaternium-76 Hydrolyzed Collagen, Quaternium-79 Hydrolyzed Collagen, Quaternium-79 Hydrolyzed Keratin Quaternium-79 Hydrolyzed Milk Protein, Quaternium-79 Hydrolyzed Silk, Quaternium-79 Hydrolyzed Soy Protein, Quaternium-79 Hydrolyzed Wheat Protein.
Hinsichtlich des zeitlichen Ablaufs unterliegt der Einsatz des erfindungsgemäßen Mittels keinerlei Beschränkungen. Es ist prinzipiell möglich, zwei separate Zubereitungen, enthaltend (a) L-Carnitin oder ein L-Carnitinderivat und (b) mindestens eine weitere Komponente nacheinander in beliebiger Reihenfolge auf die Haare aufzubringen. Hierbei sollte allerdings zwischen den Schritten (a) und (b) kein allzu großer zeitlicher Abstand liegen, so daß die Haare zwischen den Schritten nicht trocknen.Regarding the timing is subject to the use of the agent according to the invention no restrictions. It is possible in principle two separate preparations containing (a) L-carnitine or an L-carnitine derivative and (b) at least one further component in succession in any one Order on the hair. This should, however between steps (a) and (b) not too long in time Distance, so that the Do not dry hair between steps.
Obwohl das erfindungsgemäße Mittel prinzipiell auf dem Haar verbleiben kann, wird das Mittel vorzugsweise nach einer Einwirkzeit von 10 Sekunden bis 60 Stunden ausgespült. Dieses Ausspülen kann mit reinem Wasser oder einem marktüblichen Shampoo erfolgen. Einwirkzeiten von 1 bis 15 Minuten haben sich in den meisten Fällen als ausreichend erwiesen.Even though the agent of the invention in principle can remain on the hair, the agent is preferred rinsed after an exposure time of 10 seconds to 60 hours. This rinse can be done with pure water or a regular shampoo. Exposure times from 1 to 15 minutes have proven sufficient in most cases.
Unabhängig von dem genauen Ablauf der Behandlung hat es sich als vorteilhaft erwiesen, das erfindungsgemäße Mittel bei einer Temperatur von 20 bis 55 °C, insbesondere von 35 bis 40°C, anzuwenden.Independent of the exact course of treatment has proven to be advantageous the agent of the invention at a temperature of 20 to 55 ° C, in particular from 35 to 40 ° C, apply.
Hinsichtlich der Art, gemäß das erfindungsgemäße Mittel auf das Haar, aufgebracht wird, bestehen keine prinzipiellen Einschränkungen.Regarding the type, according to the agent of the invention Applied to the hair, there are no fundamental restrictions.
Erfindungsgemäß von besonderem Interesse sind Haartonics, insbesondere als leave on Formulierung. Diese werden vorzugsweise bei Raumtemperatur angewendet, der alkoholische Gehalt liegt bevorzugtermaßen im Bereich von etwa 30 % bis etwa 35 % und der pH-Wert sollte etwa bei pH 7 liegen. Insbesondere bei Haartonics hat sich der Einsatz von in Liposomen verkapseltem L-Carnitin bzw. L-Carnitinderivaten als vorteilhaft erwiesen.According to the invention of particular Haartonics is of interest, especially as a leave on formulation. These are preferably used at room temperature, the alcoholic Content is preferred in the range of about 30% to about 35% and the pH should be about at pH 7. Especially at Haartonics has the use liposome-encapsulated L-carnitine and L-carnitine derivatives, respectively proved to be advantageous.
Als Konfektionierung der das erfindungsgemäße Mittel enthaltenden Zubereitungen sind beispielsweise Cremes, Lotionen, Lösungen, Wässer, Emulsionen wie W/O-, O/W-, PIT-Emulsionen (Emulsionen nach der Lehre der Phaseninversion, PIT genannt), Mikroemulsionen und multiple Emulsionen, Gele, Sprays, Aerosole und Schaumaerosole geeignet. Diese werden in der Regel auf wäßriger oder wäßrig-alkoholischer Basis formuliert. Als alkoholische Komponente kommen dabei niedere Alkanole sowie Polyole wie Propylenglykol und Glycerin zum Einsatz. Ethanol und Isopropanol sind bevorzugte Alkohole. Wasser und Alkohol können in der wäßrig alkoholischen Basis in einem Gewichtsverhältnis von 1 : 10 bis 10 : 1 vorliegen. Wasser sowie wäßrig-alkoholische Mischungen, die bis zu 50 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-%, Alkohol, bezogen auf das Gemisch Alkohol/Wasser, enthalten, können erfindungsgemäß bevorzugte Grundlagen sein. Der pH-Wert dieser Zubereitungen kann prinzipiell bei Werten von 2–11 liegen. Er liegt bevorzugt zwischen 2 und 7, wobei Werte von 3 bis 5 besonders bevorzugt sind. Zur Einstellung dieses pH-Wertes kann praktisch jede für kosmetische Zwecke verwendbare Säure oder Base verwendet werden. Üblicherweise werden als Säuren Genußsäuren verwendet. Unter Genußsäuren werden solche Säuren verstanden, die im Rahmen der üblichen Nahrungsaufnahme aufgenommen werden und positive Auswirkungen auf den menschlichen Organismus haben. Genußsäuren sind beispielsweise Essigsäure, Milchsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Äpfelsäure, Ascorbinsäure und Gluconsäure. Im Rahmen der Erfindung ist die Verwendung von Zitronensäure und Milchsäure besonders bevorzugt. Bevorzugte Basen sind Ammoniak, Alkalihydroxide, Triethanolamin sowie N,N,N',N'-Tetrakis-(2-hydroxypropyl)-ethylendiamin.When Preparation of the preparations containing the agent according to the invention For example, creams, lotions, solutions, waters, emulsions such as W / O, O / W, PIT emulsions (emulsions according to the teaching of phase inversion, Called PIT), microemulsions and multiple emulsions, gels, sprays, Aerosols and foam aerosols suitable. These are usually on aqueous or aqueous-alcoholic Basis formulated. The alcoholic component is lower Alkanols and polyols such as propylene glycol and glycerol are used. Ethanol and isopropanol are preferred alcohols. Water and alcohol can in the watery alcoholic Base in a weight ratio from 1:10 to 10: 1. Water and aqueous-alcoholic mixtures, which up to 50 wt .-%, in particular up to 25 wt .-%, based on alcohol to the mixture alcohol / water, can according to the invention preferred Be fundamentals. The pH of these preparations can in principle at values of 2-11 lie. It is preferably between 2 and 7, with values of 3 to 5 are particularly preferred. To adjust this pH can virtually every one for cosmetic use acid or base can be used. Usually be called acids Consumed acids. Be under enjoyment of acids such acids understood that under the usual Food intake and positive effects to have the human organism. Eat acids are, for example, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, citric acid, malic acid, ascorbic acid and gluconic acid. in the The invention is the use of citric acid and lactic acid particularly preferred. Preferred bases are ammonia, alkali hydroxides, Triethanolamine and N, N, N ', N'-tetrakis (2-hydroxypropyl) ethylenediamine.
Das Mittel kann als Einkammersystem oder als Zweikammersystem konfektioniert werden.The Medium can be made up as a single-chamber system or as a two-chamber system become.
Neben dem erfindungsgemäß zwingend erforderlichen L-Carnitin bzw. L-Carnitinderivat kann das Mittel prinzipiell alle weiteren, dem Fachmann für solche kosmetischen Mittel bekannten Komponenten enthalten.Next the invention mandatory required L-carnitine or L-carnitine derivative the agent can in principle all others, the expert for such cosmetic agent known components.
Weitere Wirk-, Hilfs- und Zusatzstoffe sind beispielsweise
- – nichtionogene Tenside wie beispielsweise Alkylphenolpolyglycolether, Fettsäurepolyglycolester, Fettsäureamidpolyglycolether, Fettaminpolyglycolether, alkoxylierte Triglyceride, wie insbesondere ethoxyliertes Rizinusöl, Alk(en)yloligoglucoside, Fettsäure-N-alkylglucamide, Polyolfettsäureester, Zuckerester, Sorbitanester und Polysorbate. Sofern die nichtionischen Tenside Polyglycoletherketten enthalten, können sie eine konventionelle oder eingeengte Homologenverteilung aufweisen.
- – anionische Tenside, insbesondere Alkylsulfate, Alkylpolyglykolethersulfate und Ethercarbonsäuren mit 10 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe und bis zu 12 Glykolethergruppen im Molekül, Seifen sowie Sulfobernsteinsäuremono- und
- – dialkylester mit 8 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe und Sulfobernsteinsäuremono-alkylpolyoxyethyl-ester mit 8 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe und 1 bis 6 Oxyethylgruppen,
- – zwitterionische Tenside, insbesondere die sogenannten Betaine wie die N-Alkyl-N,N-dimethylammonium-glycinate, beispielsweise das Kokosalkyl-dimethylammonium-glycinat, N-Acyl-aminopropyl-N,N-dimethylammoniumglycinate, beispielsweise das Kokosacylaminopropyl-dimethylammoniumglycinat, und 2-Alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethyl-imidazoline mit jeweils 8 bis 18 C-Atomen in der Alkyl- oder Acylgruppe sowie das Kokosacylaminoethylhydroxyethylcarboxymethylglycinat,
- – ampholytische Tenside wie beispielsweise N-Alkylglycine, N-Alkylpropionsäuren, N-Alkylaminobuttersäuren, N-Alkyliminodipropionsäuren, N-Hydroxyethyl-N-alkylamidopropylglycine, N-Alkyltaurine, N-Alkylsarcosine, 2-Alkylaminopropionsäuren und Alkyl-aminoessigsäuren mit jeweils etwa 8 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe,
- – nichtionische Polymere wie beispielsweise Vinylpyrrolidon/Vinylacrylat-Copoly mere, Polyvinylpyrrolidon und Vinylpyrrolidon/Vinylacetat-Copolymere und Polysiloxane,
- – Verdickungsmittel wie Agar-Agar, Guar-Gum, Alginate, Xanthan-Gum, Gummi arabicum, Karaya-Gummi, Johannisbrotkernmehl, Leinsamengummen, Dextrane, Cellulose-Derivate, z. B. Methylcellulose, Hydroxyalkylcellulose und Carboxymethylcellulose, Stärke-Fraktionen und Derivate wie Amylose, Amylopektin und Dextrine, Tone wie z. B. Bentonit oder vollsynthetische Hydrokolloide wie z. B. Polyvinylalkohol,
- – Strukturanten wie Maleinsäure und Milchsäure,
- – haarkonditionierende Verbindungen wie Phospholipide, beispielsweise Sojalecithin, Ei-Lecitin und Kephaline, sowie Silikonöle,
- – Parfümöle, Dimethylisosorbid und Cyclodextrine,
- – Lösungsmittel und -vermittler wie Ethanol, Isopropanol, Ethylenglykol, Propylenglykol, Glycerin und Diethylenglykol,
- – symmetrische und unsymmetrische, lineare und verzweigte Dialkylether mit insgesamt zwischen 12 bis 36 C-Atomen, insbesondere 12 bis 24 C-Atomen, wie beispielsweise Di-n-octylether, Di-n-decylether, Di-n-nonylether, Di-n-undecylether und Di-n-dodecylether, n-Hexyl-n-octylether, n-Octyl-n-decylether, n-Decyl-n-undecylether, n-Undecyl-n-dodecylether und n-Hexyl-n-Undecylether sowie Di-tert-butylether, Di-iso-pentylether, Di-3-ethyldecylether, tert.-Butyl-n-octylether, iso-Pentyl-n-octylether und 2-Methyl-pentyl-n-octylether,
- – Fettalkohole, insbesondere lineare und/oder gesättigte Fettalkohole mit 8 bis 30 C-Atomen, und Monoester der Fettsäuren mit Alkoholen mit 6 bis 24 C-Atomen,
- – faserstrukturverbessernde Wirkstoffe, insbesondere Mono-, Di- und Oligosaccharide, wie beispielsweise Glucose, Galactose, Fructose, Fruchtzucker und Lactose,
- – konditionierende Wirkstoffe wie Paraffinöle, pflanzliche Öle, z. B. Sonnenblumenöl, Orangenöl, Mandelöl, Weizenkeimöl und Pfirsichkernöl sowie Phospholipide, beispielsweise Sojalecithin, Ei-Lecithin und Kephaline,
- – quaternierte Amine wie Methyl-1-alkylamidoethyl-2-alkylimidazolinium-methosulfat,
- – Entschäumer wie Silikone,
- – Farbstoffe zum Anfärben des Mittels,
- – Antischuppenwirkstoffe wie Piroctone Ölamine, Zink Omadine und Climbazol,
- – Lichtschutzmittel, insbesondere derivatisierte Benzophenone, Zimtsäure-Derivate und Triazine,
- – weitere Substanzen zur Einstellung des pH-Wertes, wie beispielsweise α- und β-Hydroxycarbonsäuren
- – Wirkstoffe wie Allantoin und Bisabolol,
- – Cholesterin,
- – Konsistenzgeber wie Zuckerester, Polyolester oder Polyolalkylether,
- – Fette und Wachse wie Walrat, Bienenwachs, Montanwachs und Paraffine,
- – Fettsäurealkanolamide,
- – Komplexbildner wie EDTA, NTA, β-Alanindiessigsäure und Phosphonsäuren,
- – Quell- und Penetrationsstoffe wie Glycerin, Propylenglykolmonoethylether, Carbonate, Hydrogencarbonate, Guanidine, Harnstoffe sowie primäre, sekundäre und tertiäre Phosphate,
- – Trübungsmittel wie Latex, Styrol/PVP- und Styrol/Acrylamid-Copolymere
- – Perlglanzmittel wie Ethylenglykolmono- und -distearat sowie PEG-3-distearat,
- – Pigmente,
- – Reduktionsmittel wie z. B. Thioglykolsäure und deren Derivate, Thiomilchsäure, Cysteamin, Thioäpfelsäure und α-Mercaptoethansulfonsäure,
- – Treibmittel wie Propan-Butan-Gemische, N2O, Dimethylether, CO2 und Luft,
- – Antioxidantien.
- Nonionic surfactants such as, for example, alkylphenol polyglycol ethers, fatty acid polyglycol esters, fatty acid amide polyglycol ethers, fatty amine polyglycol ethers, alkoxylated triglycerides, in particular ethoxylated castor oil, alk (en) yl oligoglucosides, fatty acid N-alkylglucamides, polyol fatty acid esters, sugar esters, sorbitan esters and polysorbates. If the nonionic surfactants contain polyglycol ether chains, they may have a conventional or narrow homolog distribution.
- - anionic surfactants, in particular alkyl sulfates, alkyl polyglycol ether sulfates and ether carboxylic acids having 10 to 18 carbon atoms in the alkyl group and up to 12 glycol ether groups in the molecule, soaps and sulfosuccinic mono- and
- Dialkyl esters having 8 to 18 C atoms in the alkyl group and sulfosuccinic acid monoalkyl polyoxyethyl esters having 8 to 18 C atoms in the alkyl group and 1 to 6 oxyethyl groups,
- Zwitterionic surfactants, in particular the so-called betaines such as N-alkyl-N, N-dimethylammonium glycinates, for example cocoalkyldimethylammonium glycinate, N-acylaminopropyl-N, N-dimethylammoniumglycinates, for example cocoacylaminopropyl-dimethylammonium glycinate, and Alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethylimidazolines having in each case 8 to 18 C atoms in the alkyl or acyl group and the cocoacylaminoethylhydroxyethylcarboxymethylglycinate,
- Ampholytic surfactants such as N-alkylglycines, N-alkylpropionic acids, N-alkylaminobutyric acids, N-alkyliminodipropionic acids, N-hydroxyethyl-N-alkylamidopropylglycines, N-alkyltaurines, N-alkylsarcosines, 2-alkylaminopropionic acids and alkylaminoacetic acids each having about 8 to 18 C atoms in the alkyl group,
- Nonionic polymers such as, for example, vinylpyrrolidone / vinyl acrylate copolymers, polyvinylpyrrolidone and vinylpyrrolidone / vinyl acetate copolymers and polysiloxanes,
- Thickeners such as agar-agar, guar gum, alginates, xanthan gum, gum arabic, karaya gum, locust bean gum, linseed gums, dextrans, cellulose derivatives, e.g. For example, methylcellulose, hydroxyalkylcellulose and carboxymethylcellulose, starch fractions and derivatives such as amylose, amylopectin and dextrins, clays such. As bentonite or fully synthetic hydrocolloids such. For example, polyvinyl alcohol,
- - structurants such as maleic acid and lactic acid,
- Hair-conditioning compounds such as phospholipids, for example soya lecithin, egg lecithin and cephalins, and silicone oils,
- Perfume oils, dimethylisosorbide and cyclodextrins,
- Solvents and mediators such as ethanol, isopropanol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerol and diethylene glycol,
- - symmetrical and unsymmetrical, linear and branched dialkyl ethers having a total of from 12 to 36 carbon atoms, in particular 12 to 24 carbon atoms, such as di-n-octyl ether, di-n-decyl ether, di-n-nonyl ether, di-n -undecyl ether and di-n-dodecyl ether, n-hexyl n-octyl ether, n-octyl n-decyl ether, n-decyl n-undecyl ether, n-undecyl n-dodecyl ether and n-hexyl n-undecyl ether and di tert-butyl ether, di-isopentyl ether, di-3-ethyldecyl ether, tert-butyl n-octyl ether, iso-pentyl n-octyl ether and 2-methyl pentyl n-octyl ether,
- Fatty alcohols, in particular linear and / or saturated fatty alcohols containing 8 to 30 carbon atoms, and monoesters of the fatty acids with alcohols having 6 to 24 carbon atoms,
- Fiber-structure-improving active substances, in particular mono-, di- and oligosaccharides, such as, for example, glucose, galactose, fructose, fructose and lactose,
- - Conditioning agents such as paraffin oils, vegetable oils, eg. Sunflower oil, orange oil, almond oil, wheat germ oil and peach kernel oil, as well as phospholipids, for example soya lecithin, egg lecithin and cephalins,
- Quaternized amines such as methyl-1-alkylamidoethyl-2-alkylimidazolinium methosulfate,
- Defoamers like silicones,
- Dyes for staining the agent,
- Antidandruff active ingredients such as Piroctone Ölamine, Zink Omadine and Climbazole,
- - light stabilizers, in particular derivatized benzophenones, cinnamic acid derivatives and triazines,
- - Other substances for adjusting the pH, such as α- and β-hydroxycarboxylic acids
- - active substances such as allantoin and bisabolol,
- - cholesterol,
- Bodying agents such as sugar esters, polyol esters or polyol alkyl ethers,
- - fats and waxes such as spermaceti, beeswax, montan wax and paraffins,
- Fatty acid alkanolamides,
- Complexing agents such as EDTA, NTA, β-alaninediacetic acid and phosphonic acids,
- - swelling and penetrating substances such as glycerol, propylene glycol monoethyl ether, carbonates, bicarbonates, guanidines, ureas and primary, secondary and tertiary phosphates,
- Opacifiers such as latex, styrene / PVP and styrene / acrylamide copolymers
- Pearlescing agents such as ethylene glycol mono- and distearate and PEG-3-distearate,
- - pigments,
- - Reducing agents such. B. thioglycolic acid and its derivatives, thiolactic acid, cysteamine, thiomalic acid and α-mercaptoethanesulfonic acid,
- Propellants such as propane-butane mixtures, N 2 O, dimethyl ether, CO 2 and air,
- - antioxidants.
Das erfindungsgemäße Mittel kann außerdem Tenside enthalten. Bei diesen kann es sich sowohl um anionische, ampholytische, zwitterionische oder nichtionogene Tenside als auch um kationische Tenside handeln.The inventive agent can also Containing surfactants. These can be both anionic, ampholytic, zwitterionic or nonionic surfactants as well to act cationic surfactants.
In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird, beispielsweise in einem Shampoo, eine Kombination aus anionischen und nichtio nischen Tensiden oder eine Kombination aus anionischen und amphoteren Tensiden eingesetzt. In einem Haartonic kann der Fachmann jedoch auch weitgehend oder vollständig auf den Einsatz von Tensiden verzichten.In a preferred embodiment of the present invention, for example in a shampoo, a combination of anionic and nonionic surfactants or a combination of anionic and amphoteric surfactants used. However, in a hair tonic, the skilled person can also largely or Completely refrain from the use of surfactants.
Es hat sich in Einzelfällen als vorteilhaft erwiesen, die Tenside aus amphoteren oder nichtionischen Tensiden auszuwählen.It has in individual cases proved to be advantageous, the surfactants from amphoteric or nonionic surfactants select.
Als anionische Tenside eignen sich in erfindungsgemäßen Mitteln alle für die Verwendung am menschlichen Körper geeigneten anionischen oberflächenaktiven Stoffe. Diese sind gekennzeichnet durch eine wasserlöslich machende, anionische Gruppe wie z. B. eine Carboxylat-, Sulfat-, Sulfonat- oder Phosphat-Gruppe und eine lipophile Alkylgruppe mit etwa 10 bis 22 C-Atomen. Zusätzlich können im Molekül Glykol- oder Polyglykolether-Gruppen, Ester-, Ether- und Amidgruppen sowie Hydroxylgruppen enthalten sein.When Anionic surfactants are all suitable for use in compositions according to the invention on the human body suitable anionic surface-active Substances. These are characterized by a water-solubilizing, anionic group such as. As a carboxylate, sulfate, sulfonate or phosphate group and a lipophilic alkyl group of about 10 up to 22 C atoms. additionally can in the molecule Glycol or polyglycol ether groups, ester, ether and amide groups and hydroxyl groups.
Nichtionogene Tenside enthalten als hydrophile Gruppe z. B. eine Polyolgruppe, eine Polyalkylenglykolethergruppe oder eine Kombination aus Polyol- und Polyglykolethergruppe. Solche Verbindungen sind beispielsweise
- – Anlagerungsprodukte von 2 bis 30 Mol Ethylenoxid und/oder 0 bis 5 Mol Propylenoxid an lineare Fettalkohole mit 8 bis 22 C-Atomen, an Fettsäuren mit 12 bis 22 C-Atomen und an Alkylphenole mit 8 bis 15 C-Atomen in der Alkylgruppe,
- – C12-C22-Fettsäuremono- und -diester von Anlagerungsprodukten von 1 bis 30 Mol Ethylenoxid an Glycerin,
- – C8-C22-Alkylmono- und -oligoglycoside und deren ethoxylierte Analoga sowie
- – Anlagerungsprodukte von 5 bis 60 Mol Ethylenoxid an Rizinusöl und gehärtetes Rizinusöl.
- Addition products of 2 to 30 moles of ethylene oxide and / or 0 to 5 moles of propylene oxide onto linear fatty alcohols having 8 to 22 carbon atoms, to fatty acids containing 12 to 22 carbon atoms and to alkylphenols having 8 to 15 carbon atoms in the alkyl group,
- C 12 -C 22 -fatty acid mono- and diesters of addition products of 1 to 30 mol of ethylene oxide with glycerol,
- C 8 -C 22 alkyl mono- and oligoglycosides and their ethoxylated analogs, and
- - Addition products of 5 to 60 moles of ethylene oxide with castor oil and hydrogenated castor oil.
Bevorzugte nichtionische Tenside sind Alkylpolyglykoside der allgemeinen Formel R1O-(Z)X. Diese Verbindungen sind durch die folgenden Parameter gekennzeichnet.Preferred nonionic surfactants are alkyl polyglycosides of the general formula R 1 O- (Z) X. These connections are identified by the following parameters.
Der Alkylrest R1 enthält 6 bis 22 Kohlenstoffatome und kann sowohl linear als auch verzweigt sein. Bevorzugt sind primäre lineare und in 2-Stellung methylverzweigte aliphatische Reste. Solche Alkylreste sind beispielsweise 1-Octyl, 1-Decyl, 1-Lauryl, 1-Myristyl, 1-Cetyl und 1-Stearyl. Besonders bevorzugt sind 1-Octyl, 1-Decyl, 1-Lauryl, 1-Myristyl. Bei Verwendung sogenannter "Oxo-Alkohole" als Ausgangsstoffe überwiegen Verbindungen mit einer ungeraden Anzahl von Kohlenstoffatomen in der Alkylkette.The alkyl radical R 1 contains 6 to 22 carbon atoms and may be both linear and branched. Preference is given to primary linear and methyl-branched in the 2-position aliphatic radicals. Such alkyl radicals are, for example, 1-octyl, 1-decyl, 1-lauryl, 1-myristyl, 1-cetyl and 1-stearyl. Particularly preferred are 1-octyl, 1-decyl, 1-lauryl, 1-myristyl. When using so-called "oxo-alcohols" as starting materials, compounds with an odd number of carbon atoms in the alkyl chain predominate.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Alkylpolyglykoside können beispielsweise nur einen bestimmten Alkylrest R1 enthalten. Üblicherweise werden diese Verbindungen aber ausgehend von natürlichen Fetten und Ölen oder Mineralölen hergestellt. In diesem Fall liegen als Alkylreste R Mischungen entsprechend den Ausgangsverbindungen bzw. entsprechend der jeweiligen Aufarbeitung dieser Verbindungen vor.The alkyl polyglycosides which can be used according to the invention can contain, for example, only one particular alkyl radical R 1 . Usually, however, these compounds are prepared starting from natural fats and oils or mineral oils. In this case, the alkyl radicals R are mixtures corresponding to the starting compounds or corresponding to the particular work-up of these compounds.
Besonders bevorzugt sind solche Alkylpolyglykoside, bei denen R1
- – im wesentlichen aus C8- und C10-Alkylgruppen,
- – im wesentlichen aus C12- und C14-Alkylgruppen,
- – im wesentlichen aus C8- bis C16-Alkylgruppen oder
- – im wesentlichen aus C12- bis C16-Alkylgruppen besteht.
- Consisting essentially of C 8 and C 10 -alkyl groups,
- Essentially of C 12 and C 14 alkyl groups,
- - Essentially from C 8 - to C 16 alkyl groups or
- - Consists essentially of C 12 - to C 16 -alkyl groups.
Als Zuckerbaustein Z können beliebige Mono- oder Oligosaccharide eingesetzt werden. Üblicherweise werden Zucker mit 5 bzw. 6 Kohlenstoffatomen sowie die entsprechenden Oligosaccharide eingesetzt. Solche Zucker sind beispielsweise Glucose, Fructose, Galactose, Arabinose, Ribose, Xylose, Lyxose, Allose, Altrose, Mannose, Gulose, Idose, Talose und Sucrose. Bevorzugte Zuckerbausteine sind Glucose, Fructose, Galactose, Arabinose und Sucrose; Glucose ist besonders bevorzugt.When Sugar component Z can any mono- or oligosaccharides are used. Usually Sugar with 5 or 6 carbon atoms and the corresponding oligosaccharides used. Such sugars are, for example, glucose, fructose, Galactose, arabinose, ribose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, Gulose, idose, talose and sucrose. Preferred sugar building blocks are Glucose, fructose, galactose, arabinose and sucrose; Glucose is particularly preferred.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Alkylpolyglykoside enthalten im Schnitt 1,1 bis 5 Zuckereinheiten. Alkylpolyglykoside mit x-Werten von 1,1 bis 1,6 sind bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt sind Alkylglykoside, bei denen x 1,1 bis 1,4 beträgt.The usable according to the invention Alkyl polyglycosides contain on average from 1.1 to 5 sugar units. Alkyl polyglycosides having x values of 1.1 to 1.6 are preferred. Very particular preference is given to alkyl glycosides in which x 1.1 to 1.4.
Die Alkylglykoside können neben ihrer Tensidwirkung auch dazu dienen, die Fixierung von Duftkomponenten auf dem Haar zu verbessern. Der Fachmann wird also für den Fall, daß eine über die Dauer der Haarbehandlung hinausgehende Wirkung des Parfümöles auf dem Haar gewünscht wird, bevorzugt zu dieser Substanzklasse als weiterem Inhaltsstoff der erfindungsgemäßen Zubereitungen zurückgreifen.In addition to their surfactant action, the alkyl glycosides can also serve to improve the fixation of fragrance components on the hair. The expert is so in the event that one over the duration of Haarbehandlung beyond effect of the perfume oil on the hair is desired, preferably resort to this class of substance as a further ingredient of the preparations of the invention.
Auch die alkoxylierten Homologen der genannten Alkylpolyglykoside können erfindungsgemäß eingesetzt werden. Diese Homologen können durchschnittlich bis zu 10 Ethylenoxid- und/oder Propylenoxideinheiten pro Alkylglykosideinheit enthalten.Also The alkoxylated homologs of said alkyl polyglycosides can be used according to the invention become. These homologs can an average of up to 10 ethylene oxide and / or propylene oxide units per alkyl glycoside unit.
Weiterhin können, insbesondere als Co-Tenside, zwitterionische Tenside verwendet werden. Als zwitterionische Tenside werden solche oberflächenaktive Verbindungen bezeichnet, die im Molekül mindestens eine quartäre Ammoniumgruppe und mindestens eine -COOL(–)- oder -SO3 (–)-Gruppe tragen. Besonders geeignete zwitterionische Tenside sind die sogenannten Betaine wie die N-Alkyl-N,N-dimethylammonium-glycinate, beispielsweise das Kokosalkyl-dimethylammonium-glycinat, N-Acyl-aminopropyl-N,N-dimethylammoniumglycinate, beispielsweise das Kokosacylaminopropyl-dimethylammoniumglycinat, und 2-Alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethyl-imidazoline mit jeweils 8 bis 18 C-Atomen in der Alkyl- oder Acylgruppe sowie das Kokosacylaminoethylhydroxyethylcarboxymethylglycinat. Ein bevorzugtes zwitterionisches Tensid ist das unter der INCI-Bezeichnung Cocamidopropyl Betaine bekannte Fettsäureamid-Derivat.Furthermore, zwitterionic surfactants can be used, in particular as cosurfactants. Zwitterionic surfactants are surface-active compounds which carry at least one quaternary ammonium group and at least one -COOL (-) or -SO 3 (-) group in the molecule. Particularly suitable zwitterionic surfactants are the so-called betaines such as N-alkyl-N, N-dimethylammonium glycinates, for example cocoalkyl dimethylammonium glycinate, N-acylaminopropyl N, N-dimethylammonium glycinates, for example cocoacylaminopropyl-dimethylammonium glycinate, and Alkyl-3-carboxylmethyl-3-hydroxyethyl-imidazolines each having 8 to 18 carbon atoms in the alkyl or acyl group and Kokosacylaminoethylhydroxyethylcarboxymethylglycinat. A preferred zwitterionic surfactant is the fatty acid amide derivative known by the INCI name Cocamidopropyl Betaine.
Ebenfalls insbesondere als Co-Tenside geeignet sind ampholytische Tenside. Unter ampholytischen Tensiden werden solche oberflächenaktiven Verbindungen verstanden, die außer einer C8-C18-Alkyl- oder Acylgruppe im Molekül min destens eine freie Aminogruppe und mindestens eine -COOH- oder -SO3H-Gruppe enthalten und zur Ausbildung innerer Salze befähigt sind. Beispiele für geeignete ampholytische Tenside sind N-Alkylglycine, N-Alkylpropionsäuren, N-Alkylaminobuttersäuren, N-Alkyliminodipropionsäuren, N-Hydroxyethyl-N-alkylamidopropylglycine, N-Alkyltaurine, N-Alkylsarcosine, 2-Alkylaminopropionsäuren und Alkylaminoessigsäuren mit jeweils etwa 8 bis 18 C-Atomen in der Alkylgruppe. Besonders bevorzugte ampholytische Tenside sind das N-Kokosalkylaminopropionat, das Kokosacylaminoethylaminopropionat und das C12-18-Acylsarcosin.Also particularly suitable as co-surfactants are ampholytic surfactants. Ampholytic surfactants are understood as meaning those surface-active compounds which, apart from a C 8 -C 18 -alkyl or acyl group in the molecule, contain at least one free amino group and at least one -COOH or -SO 3 H group and are capable of forming internal salts , Examples of suitable ampholytic surfactants are N-alkylglycines, N-alkylpropionic acids, N-alkylaminobutyric acids, N-alkyliminodipropionic acids, N-hydroxyethyl-N-alkylamidopropylglycines, N-alkyltaurines, N-alkylsarcosines, 2-alkylaminopropionic acids and alkylaminoacetic acids each having about 8 to 18 C Atoms in the alkyl group. Particularly preferred ampholytic surfactants are N-cocoalkylaminopropionate, cocoacylaminoethylaminopropionate and C 12-18 acylsarcosine.
Erfindungsgemäß werden als kationische Tenside insbesondere solche vom Typ der quartären Ammoniumverbindungen, der Esterquats und der Amidoamine eingesetzt.According to the invention as cationic surfactants, especially those of the quaternary ammonium type, the esterquats and amidoamines used.
Bevorzugte quaternäre Ammoniumverbindungen sind Ammoniumhalogenide, insbesondere Chloride und Bromide, wie Alkyltrimethylammoniumchloride, Dialkyldimethylammoniumchloride und Trialkylmethylammoniumchloride, z. B. Cetyltrimethylammoniumchlorid, Stearyltrimethylammoniumchlorid, Distearyldimethylammoniumchlorid, Lauryldimethylammoniumchlorid, Lauryldimethylbenzylammoniumchlorid und Tricetylmethylammoniumchlorid, sowie die unter den INCI-Bezeichnungen Quaternium-27 und Quaternium-83 bekannten Imidazolium-Verbindungen. Die langen Alkylketten der oben genannten Tenside weisen bevorzugt 10 bis 18 Kohlenstoffatome auf.preferred quaternary Ammonium compounds are ammonium halides, especially chlorides and Bromides such as alkyltrimethylammonium chlorides, dialkyldimethylammonium chlorides and trialkylmethylammonium chlorides, e.g. Cetyltrimethylammonium chloride, Stearyltrimethylammonium chloride, distearyldimethylammonium chloride, Lauryldimethylammonium chloride, Lauryldimethylbenzylammoniumchlorid and tricetylmethylammonium chloride, as well as those under the INCI names Quaternium-27 and quaternium-83 known imidazolium compounds. The long alkyl chains of the above surfactants are preferred 10 to 18 carbon atoms.
Bei Esterquats handelt es sich um bekannte Stoffe, die sowohl mindestens eine Esterfunktion als auch mindestens eine guartäre Ammoniumgruppe als Strukturelement enthalten. Bevorzugte Esterquats sind quaternierte Estersalze von Fettsäuren mit Triethanolamin, quaternierte Estersalze von Fettsäuren mit Diethanolalkylaminen und quaternierten Estersalze von Fettsäuren mit 1,2-Dihydroxypropyldialkylaminen. Solche Produkte werden beispielsweise unter den Warenzeichen Stepantex®, Dehyquart® und Armocare® vertrieben. Die Produkte Armocare® VGH-70, ein N,N-Bis(2-Palmitoyloxy- ethyl)dimethylammoniumchlorid, sowie Dehyquart® F-75 und Dehyquart® AU-35 sind Beispiele für solche Esterquats.Esterquats are known substances which contain at least one ester function as well as at least one quaternary ammonium group as structural element. Preferred ester quats are quaternized ester salts of fatty acids with triethanolamine, quaternized ester salts of fatty acids with diethanolalkylamines and quaternized ester salts of fatty acids with 1,2-dihydroxypropyldialkylamines. Such products are marketed under the trade names Stepantex® ®, ® and Dehyquart® Armocare® ®. The products Armocare ® VGH-70, a N, N-bis (2-Palmitoyloxy- ethyl) dimethyl ammonium chloride, as well as Dehyquart ® F-75 and Dehyquart ® AU-35 are examples of such esterquats.
Die Alkylamidoamine werden üblicherweise durch Amidierung natürlicher oder synthetischer Fettsäuren und Fettsäureschnitte mit Dialkylaminoaminen hergestellt. Eine erfindungsgemäß besonders geeignete Verbindung aus dieser Substanzgruppe stellt das unter der Bezeichnung Tegoamid® S 18 im Handel erhältliche Stearamidopropyl-dimethylamin dar.The alkylamidoamines are usually prepared by amidation of natural or synthetic fatty acids and fatty acid cuts with dialkylaminoamines. An inventively particularly suitable compound from this group is that available under the name Tegoamid ® S 18 commercially stearamidopropyl dimethylamine.
Bei den als Tensid eingesetzten Verbindungen mit Alkylgruppen kann es sich jeweils um einheitliche Substanzen handeln. Es ist jedoch in der Regel bevorzugt, bei der Herstellung dieser Stoffe von nativen pflanzlichen oder tierischen Rohstoffen auszugehen, so daß man Substanzgemische mit unterschiedlichen, vom jeweiligen Rohstoff abhängigen Alkylkettenlängen erhält.at it may be the compounds with alkyl groups used as surfactant each are uniform substances. It is, however, in usually preferred in the preparation of these substances by native vegetable or animal raw materials, so that you substance mixtures obtained with different, depending on the raw material alkyl chain lengths.
Bei den Tensiden, die Anlagerungsprodukte von Ethylen- und/oder Propylenoxid an Fettalkohole oder Derivate dieser Anlagerungsprodukte darstellen, können sowohl Produkte mit einer "normalen" Homologenverteilung als auch solche mit einer eingeengten Homologenverteilung verwendet werden. Unter "normaler" Homologenverteilung werden dabei Mischungen von Homologen verstanden, die man bei der Umsetzung von Fettalkohol und Alkylenoxid unter Verwendung von Alkalimetallen, Alkalimetallhydroxiden oder Alkalimetallalkoholaten als Katalysatoren erhält. Eingeengte Homologenverteilungen werden dagegen erhalten, wenn beispielsweise Hydrotalcite, Erdalkalimetallsalze von Ethercarbonsäuren, Erdalkalimetalloxide, -hydroxide oder -alkoholate als Katalysatoren verwendet werden. Die Verwendung von Produkten mit eingeengter Homologenverteilung kann bevorzugt sein.In the case of the surfactants which are adducts of ethylene oxide and / or propylene oxide with fatty alcohols or derivatives of these addition products, both products with a "normal" homolog distribution and those with a narrow homolog distribution can be used. By "normal" homolog distribution are meant mixtures of homologues which are used in the reaction of Fatty alcohol and alkylene oxide using alkali metals, alkali metal hydroxides or alkali metal alcoholates as catalysts. Narrowed homolog distributions, on the other hand, are obtained when, for example, hydrotalcites, alkaline earth metal salts of ether carboxylic acids, alkaline earth metal oxides, hydroxides or alcoholates are used as catalysts. The use of products with narrow homolog distribution may be preferred.
Bezüglich weiterer fakultativer Komponenten sowie die eingesetzten Mengen dieser Komponenten wird ausdrücklich auf die dem Fachmann bekannten einschlägigen Handbücher, z. B. Kh. Schrader, Grundlagen und Rezepturen der Kosmetika, 2. Auflage, Hüthig Buch Verlag, Heidelberg, 1989, verwiesen.Regarding further optional components as well as the amounts of these components used expressly on the specialist manuals known to those skilled in the art, eg. B. Kh. Schrader, Basics and formulations of cosmetics, 2nd edition, Hüthig Buch Verlag, Heidelberg, 1989, referenced.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung von L-Carnitin und/oder mindestens einem L-Carnitinderivat, das ausgewählt ist unter Acetyl-L-Carnitin, L-Carnitin-Fumarat, L-Carnitin-Citrat, Lauroyl-L-Carnitin und insbesondere L-Carnitin-Tartrat zur Vitalisierung von Haaren, Anregung des Energiestoffwechsel in Haarfollikeln, Aktivierung von Haarfollikeln, Förderung oder Verstärkung des Haarwuchses, Haarverdickung, Behandlung von Haarausfall und zur Beeinflussung der Keratinsynthese, bzw. zur Haarkonditionierung.One Another object of the present invention is the use of L-carnitine and / or at least one L-carnitine derivative selected from acetyl-L-carnitine, L-carnitine fumarate, L-carnitine citrate, lauroyl-L-carnitine and in particular L-carnitine tartrate for revitalizing hair, stimulating energy metabolism in hair follicles, activation of hair follicles, promotion or reinforcement hair growth, hair thickening, hair loss and treatment for influencing the keratin synthesis, or for hair conditioning.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Vitalisierung von Haaren, Anregung des Energiestoffwechsel in Haarfollikeln, Aktivierung von Haarfollikeln, Förderung oder Verstärkung des Haarwuchses bzw. zur Haarkonditionierung, dadurch gekennzeichnet, daß man ein erfindungsgemäßes Mittel auf die Haare bzw. die behaarte Haut aufbringt.One Another object of the present invention is a method for revitalizing hair, stimulating energy metabolism in Hair follicles, activation of hair follicles, promotion or enhancement of the Hair growth or for hair conditioning, characterized that he an inventive agent on the hair or the hairy skin.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
- a) mindestens ein Haar unter Erhalt des Haarfollikels aus behaarter Haut gewinnt und
- b) den mindestens einen Haarfollikel auf die Expression haarspezifischer Faktoren untersucht.
- a) wins at least one hair to preserve the hair follicle from hairy skin and
- b) examining the at least one hair follicle for the expression of hair-specific factors.
Die dem derzeitigen Stand der Technik entsprechenden Methoden zur Untersuchung von Haarfollikelzellen umfassen Analysen in-vitro als auch in-vivo. In-vitro-Systeme sind zwar gut geeignet, um zelluläre Effekte zu erfassen, sind aber aufgrund ihres Modellcharakters nur von eingeschränkter Relevanz für die in-vivo Situation. Die gängigen in-vivo Untersuchungen umfassen Trichogramme oder Phototrichogramme, Haardichtemessungen, histologische Auswertung von Stanzbiopsien, Haargewichtsbestimmung und globale Photographien.The the current state of the art methods for investigation of hair follicle cells include in vitro and in vivo analyzes. In vitro systems Although they are well suited to detect cellular effects, they are but due to their model character only of limited relevance for the in-vivo situation. The common ones In vivo studies include trichograms or phototrichograms, Hair density measurements, histological evaluation of punch biopsies, Hair weighting and global photographs.
Diese Methoden sind oft nur unter hohem Kosten und Zeitaufwand realisierbar und liefem nur eine geringe Anzahl messbarer Parameter. Außerdem werden zelluläre Effekte, die über den Parameter „Haarwuchs" hinausgehen nicht erfasst. Darüber hinaus sind Analysen verschiedener Art an gezupften Haaren aus der Literatur bekannt, oft beschränken Sie sich aber auf eine Statusbestimmung der gezupften Haare, oder sie beleuchten nur einzelne Aspekte, um die Effektivität und Verträglichkeit von Wirkstoffen zu beurteilen.These Methods are often only feasible at high cost and time and only a small number of measurable parameters. In addition, will cellular Effects over the parameter "hair growth" does not go out detected. About that In addition, analyzes of various types of plucked hair from the Literature known, often restrict But you are on a status determination of the plucked hair, or they only highlight individual aspects in terms of effectiveness and compatibility of active ingredients.
Bei den Verfahren nach dem Stand der Technik werden 10-20 Haare für die Messungen benötigt, bei dem erfindungsgemäßen Verfahren ist jedoch ein einzelnes Haar zur extrakorporalen Analyse ausreichend. Außerdem erfolgt die Messung gemäß Stand der Technik nach einer Behandlungsdauer von mehreren Wochen. Mit der im Rahmen der vorliegenden Erfindung dargelegten Methode gelingt es, solche Effekte bereits nach 15h nachzuweisen.at The prior art methods use 10-20 hairs for the measurements needed in the method according to the invention however, a single hair is sufficient for extracorporeal analysis. Also done the measurement according to state the technique after a treatment period of several weeks. With the method set out in the context of the present invention succeeds it to prove such effects already after 15h.
Die Beurteilung der Pigmentierung in Haarfollikeln erfolgt im Stand der Technik üblicherweise durch die Bestimmung des Melaningehaltes. Da die Produktion von Melanin jedoch ein sehr spätes Ereignis im Prozess der Pigmentierung ist, können mit dieser Methode kurzfristig zu erzielende Effekte nicht nachgewiesen werden. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren werden an der Pigmentierung beteiligte Wachstumsfaktoren, Rezeptoren und Proteine, die bereits in sehr frühen Stadien des Pigmentierungsprozesses expremiert werden, untersucht, um so frühzeitig auftretende Effekte zu erfassen.The Assessment of pigmentation in hair follicles takes place in the state the technique usually by determining the content of melanin. Since the production of Melanin, however, a very late Event is in the process of pigmentation, can use this method in the short term effects to be achieved can not be proven. In the method according to the invention become growth factors involved in pigmentation, receptors and proteins that are already at very early stages of the pigmentation process expremiert, examined, so as early occurring effects capture.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren bevorzugt zu analysierende Faktoren sind beispielsweise ausgewählt unter
- – HGF, KGF, SCF, cmet, nkibeteb, TRP1, TRP2, NCAM, IGFBP3, TGFβ-1, TGFβ-2, TGF-Rezeptor, IGF und Versican,
- – den in den Patentanmeldungen DE-A-102 60 931.4-41 und DE-A-103 40 373.6-41 der Anmelderin identifizierten Markern,
- – Entzündungmediatoren, z.B. Interleukinen (IL-8, IL1, IL8 ect.), Interferony (IFN-y), TNFa, etc.,
- – Apoptosemarkern (z. B. Caspasen, Heat shock proteine), Haarkeratinen, insbesondere: hHa1, hHa2, hHa3-I, hHa3-II, hHa4, hHa5, hHa6 sowie hHb1, hHb2, hHb3, hHb5, hHb6 und
- – Bone morphogenic protein 4 (BMP4), Bone morphogenic protein 2 (BMP2), vanilloid receptor-1, Proopiomeianocortin (POMC), Adrenocorticotropic hormon (ACTH)
- - HGF, KGF, SCF, cmet, nkibeteb, TRP1, TRP2, NCAM, IGFBP3, TGFβ-1, TGFβ-2, TGF receptor, IGF and versican
- The markers identified in Applicant's patent applications DE-A-102 60 931.4-41 and DE-A-103 40 373.6-41,
- - inflammatory mediators, eg interleukins (IL-8, IL1, IL8 ect.), Interferon (IFN-y), TNFa, etc.,
- - apoptotic markers (eg caspases, heat shock proteins), hair keratins, especially: hHa1, hHa2, hHa3-I, hHa3-II, hHa4, hHa5, hHa6 and hHb1, hHb2, hHb3, hHb5, hHb6 and
- - Bone morphogenic protein 4 (BMP4), Bone morphogenic protein 2 (BMP2), vanilloid receptor-1, Proopiomeianocortin (POMC), Adrenocorticotropic hormone (ACTH)
Vorzugsweise führt man die Untersuchung in Schritt b des erfindungsgemäßen Verfahrens mittels einer Methode durch, die ausgewählt ist unter
- i. Ein- oder zweidimensionaler Gelelektrophorese
- ii. Affinitätschromatographie
- iii. Protein-Protein-Komplexierung in Lösung
- iv. ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)
- v. enzymgekoppelte Stoffwechelassays
- vi. Massenspektrometrie, insbesondere Matrix Assistierter Laser Desorptions Ionisation (MALDI) und insbesondere
- vii. Einsatz von Proteinchips, Northern Blots,
- viii. Reverse Transkriptase Polymerasekettenreaktion (RT-PCR),
- ix. RNase-Schutzexperimente,
- x. Dot-Blots,
- xi. CDNA-Sequenzierung,
- xii. Klon-Hybridisierung,
- xiii. Differential Display,
- xiv. Subtraktive Hybridisierung,
- xv. cDNA-Fragment-Fingerprinting,
- xvi. Durchflusszytometrieanalysen,
- xvii. Serielle Analyse der Genexpression (SAGE) und insbesondere
- xviii. Einsatz von Nukleinsäurechips, oder mittels geeigneter Kombinationen dieser Methoden.
- i. One- or two-dimensional gel electrophoresis
- ii. affinity
- iii. Protein-protein complexation in solution
- iv. ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
- v. enzyme-linked metabolism assays
- vi. Mass spectrometry, in particular Matrix Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI) and in particular
- vii. Use of protein chips, Northern blots,
- viii. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR),
- ix. RNase protection experiments
- x. Dot blots,
- xi. CDNA sequencing,
- xii. Clone hybridization,
- xiii. Differential display,
- xiv. Subtractive hybridization,
- xv. cDNA fragment fingerprinting,
- xvi. flow cytometry analysis,
- xvii. Serial analysis of gene expression (SAGE) and in particular
- xviii. Use of nucleic acid chips, or by means of suitable combinations of these methods.
Diese erfindungsgemäß einsetzbaren Methoden sind in den Übersichtsartikeln von Akhilesh Pandey und Matthias Mann: „Proteomics to study genes and genomes", Nature, Volume 405, Number 6788, 837–846 (2000), und „Genomics, gene expression and DNA arrays", Nature, Volume 405, Number 6788, 827–836 (2000), und den dort angegebenen Referenzen beschrieben, worauf hiermit in vollem Umfang Bezug genommen wird.These can be used according to the invention Methods are in the review articles by Akhilesh Pandey and Matthias Mann: "Proteomics to study genes and genomes ", Nature, Volume 405, Number 6788, 837-846 (2000), and "Genomics, gene expression and DNA arrays ", Nature, Volume 405, Number 6788, 827-836 (2000), and those cited therein References are described, to which reference is hereby made in their entirety becomes.
Die 2D-Gelelektrophorese, wird beispielsweise in L.D. Adams, Two-dimensional Gel Electrophoresis using the Isodalt System oder in L.D. Adams & S.R. Gallagher, Two-dimensional Gel Electrophoresis using the O'Farrell System; beide in Current Protocols in Molecular Biology (1997, Eds. F.M. Ausubel et al.), Unit 10.3.1–10.4.13; oder in 2-D Electrophoresis-Manual; T. Berkelman, T. Senstedt; Amersham Pharmacia Biotech, 1998 (Bestell-Nr. 80-6429-60), beschrieben.The 2D gel electrophoresis is described, for example, in L.D. Adams, two-dimensional Gel electrophoresis using the Isodalt system or in L.D. Adams & S.R. Gallagher, Two-dimensional gel electrophoresis using the O'Farrell system; both in current protocols in Molecular Biology (1997, Eds. F.M. Ausubel et al.), Unit 10.3.1-10.4.13; or in 2-D electrophoresis manual; T. Berkelman, T. Senstedt; Amersham Pharmacia Biotech, 1998 (Order No. 80-6429-60).
Die massenspektrometrische Charakterisierung der Proteine oder Proteinfragmente erfolgt in der Fachwelt bekannter Weise, beispielsweise wie in den folgenden Literaturstellen beschrieben:
- Methods in Molecular Biology, 1999; Vol 112; 2-D Proteome Analysis Protocols; Editor: A. J. Link; Humana Press; Totowa; New Jersey. Darin insbesondere: Courchesne, P. L. und Patterson, S. D.; S. 487-512.
- Carr, S. A. und Annan, R. S.; 1997; in: Current Protocols in Molecular Biology; Editor: Ausubel, F. M. et al.; John Wiley and Sons, Inc. 10.2.1-10.21.27.
- Methods in Molecular Biology, 1999; Vol 112; 2-D Proteome Analysis Protocols; Editor: AJ Link; Humana Press; Totowa; New Jersey. In particular: Courchesne, PL and Patterson, SD; Pp. 487-512.
- Carr, SA and Annan, RS; 1997; in: Current Protocols in Molecular Biology; Editor: Ausubel, FM et al .; John Wiley and Sons, Inc. 10.2.1-10.21.27.
Es können jedoch erfindungsgemäß auch andere dem Fachmann bekannte Methoden zur Untersuchung auf die Expression haarspezifischer Faktoren eingesetzt werden.It can but according to the invention also other methods known to those skilled in the art for the study of expression hair-specific factors.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen, dadurch gekennzeichnet, daß man
- a. mindestens ein Haar unter Erhalt des Haarfollikels aus behaarter Haut gewinnt und
- b. die ATP-Syntheserate in dem mindestens einen Haarfollikel bestimmt.
- a. wins at least one hair while preserving the hair follicle from hairy skin and
- b. determines the ATP synthesis rate in the at least one hair follicle.
ATP (Adenosintriphosphat) ist die universelle Speicherform für chemische Energie in Zellen. Bei der Abspaltung der distalen Phosphatgruppe entsteht ADP und PI (anorganisches Phosphat). Diese Reaktion ist stark exergon, d.h. es wird Energie frei. Produziert wird ATP beim zellulären, oxidativen Abbau von Fetten, Kohlehydraten und Proteinen. Es dient als Energielieferant für biochemische Synthesen, für Transportvorgänge (aktiver Transport) und für mechanische Arbeit. Diese Vorgänge sind endergon, d.h. sie laufen nur unter Energiezufuhr ab. Um ihren Stoffwechsel optimal aufrecht zu erhalten, sind Zellen also auf eine ausreichende Versorgung mit ATP angewiesen. Auch dermale Papillenzellen benötigen beispielsweise zur Produktion von Wachstumsfaktoren und damit zur Steuerung des Haarzyklus ATP. Die Proliferation und Differenzierung von ORS Keratinozyten ist ebenfalls an die ATP-Synthese gekoppelt, da für beide Vorgänge die Biosynthese spezifischer Proteine essentielle Voraussetzung ist. Kann durch ein Produkt die ATP-Syntheserate der haarrelevanten Zellen erhöht werden, so steht den Zellen mehr Energie zur Verfügung um Stoffwechselvorgänge und zelluläre Strukturen aufrecht zu erhalten, und um Strukturen zu erneuern, z.B. bei Reparaturprozessen oder dem Neuaufbau von Haaren.ATP (adenosine triphosphate) is the universal storage form for chemical energy in cells. Cleavage of the distal phosphate group produces ADP and P I (inorganic phosphate). This reaction is highly exergonic, meaning it releases energy. ATP is produced in the cellular, oxidative degradation of fats, carbohydrates and proteins. It serves as an energy supplier for biochemical syntheses, for transport processes (active transport) and for mechanical work. These processes are endergonic, ie they only take place when energy is supplied. In order to optimally maintain their metabolism, cells are therefore sufficient Supply with ATP instructed. For example, dermal papilla cells also require the production of growth factors and thus the control of the hair cycle ATP. The proliferation and differentiation of ORS keratinocytes is also coupled to the ATP synthesis, as the biosynthesis of specific proteins is an essential prerequisite for both processes. If the ATP synthesis rate of the hair-relevant cells can be increased by a product, the cells have more energy available to maintain metabolic processes and cellular structures, and to renew structures, eg during repair processes or the rebuilding of hair.
Die ATP-Bestimmungen erfolgen erfindungsgemäß vorzugsweise mittels eines Luciferase-basierten Lumineszenztests, insbesondere mit Hilfe des ATPLiteTMM Assays (Packard). Das Testprinzip dieses Assays beruht darauf, dass die Luciferase von Photinus pyralis eine Reaktion katalysiert, bei der in Gegenwart von ATP D-Luciferin in Oxyluciferin umgewandelt wird. Bei dieser Reaktion wird grünes Licht emittiert, das mit einem Luminometer gemessen werden kann. Das emittierte Biolumineszenzlicht ist proportional zur Menge des vorhandenen ATP.The ATP determinations are carried out according to the invention preferably by means of a Luciferase-based luminescence tests, in particular with the help of ATPLite ™ assays (Packard). The test principle of this assay is based that the luciferase of Photinus pyralis catalyzes a reaction, when converted to oxyluciferin in the presence of ATP D-luciferin becomes. In this reaction, green light is emitted, which with a luminometer can be measured. The emitted bioluminescent light is proportional to the amount of available ATP.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Testverfahren zum Nachweis der Wirksamkeit von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels, wie Alopezie in vitro, dadurch gekennzeichnet, daß man
- a) den Haarfollikelstatus durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen oder durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen bestimmt,
- b) einen Wirkstoff zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels einmal oder mehrmals auf die behaarte Haut aufbringt,
- c) erneut den Haarfollikelstatus durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen oder durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen bestimmt, und
- d) die Wirksamkeit des Wirkstoffs durch den Vergleich der Ergebnisse aus a) und c) bestimmt.
- a) the hair follicle status is determined by a method according to the invention for extracorporeal analysis of hair follicle cells or by a method according to the invention for the extracorporeal determination of the ATP synthesis rate in hair follicle cells,
- b) applying an active substance once or several times to the hairy skin in order to maintain or promote homeostasis of the hair follicle or to treat pathological conditions of the hair follicle,
- c) again determines the hair follicle status by a method according to the invention for extracorporeal analysis of hair follicle cells or by a method according to the invention for extracorporeal determination of the ATP synthesis rate in hair follicle cells, and
- d) the effectiveness of the active substance is determined by comparing the results of a) and c).
Unter „Förderung der Homeostase des Haarfollikels" wird beispielhaft und nicht abschließend unter anderem die Förderung der Haarwuchses, der Haardicke, des Stoffwechsels und die Beeinflussung der Keratinsynthese verstanden.Under "Promotion the homeostasis of the hair follicle " exemplary and not exhaustive including promotion the hair growth, the hair thickness, the metabolism and the influence understood the Keratinsynthese.
„Alopezie" bezeichnet erfindungsgemäß insbesondere androgenetische Alopezie, Alopezia Areata, Telogenes Effluvium, Anagenes Effluvium, Induziertes Effluvium (z.B. durch Medikamente) sowie das Loose Anagen Hair syndrome."Alopecia" refers to the invention in particular androgenetic alopecia, alopecia areata, telogen effluvium, Anagen effluvium, induced effluvium (e.g., by drugs) as well as the Loose Anagen Hair syndrome.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Test-Kit zum Nachweis der Wirksamkeit von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels in vitro, umfassend Mittel zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen oder des erfindungsgemäßen Verfahrens zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen.One Another object of the present invention is a test kit to prove the efficacy of cosmetic or pharmaceutical Active ingredients for maintaining or promoting the homeostasis of Hair follicle or for the treatment of pathological conditions of the Hair follicle in vitro, comprising means for carrying out the inventive method for extracorporeal analysis of hair follicle cells or the method according to the invention for extracorporeal determination of ATP synthesis rate in hair follicle cells.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Screening-Verfahren zur Identifikation von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels, wie Alopezie, dadurch gekennzeichnet, daß man
- a) den Haarfollikelstatus durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen oder durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen bestimmt,
- b) einen potentiellen Wirkstoff zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels einmal oder mehrmals auf die behaarte Haut aufbringt,
- c) erneut den Haarfollikelstatus durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Analyse von Haarfollikelzellen oder durch ein erfindungsgemäßes Verfahren zur extrakorporalen Bestimmung der ATP-Syntheserate in Haarfollikelzellen bestimmt, und
- d) wirksame Wirkstoffe durch den Vergleich der Ergebnisse aus a) und c) identifiziert.
- a) the hair follicle status is determined by a method according to the invention for extracorporeal analysis of hair follicle cells or by a method according to the invention for the extracorporeal determination of the ATP synthesis rate in hair follicle cells,
- b) applying a potential active substance to the maintenance or promotion of the homeostasis of the hair follicle or to the treatment of pathological conditions of the hair follicle once or several times on the hairy skin,
- c) again determines the hair follicle status by a method according to the invention for extracorporeal analysis of hair follicle cells or by a method according to the invention for extracorporeal determination of the ATP synthesis rate in hair follicle cells, and
- d) active substances identified by comparing the results of a) and c).
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung einer kosmetischen oder pharmazeutischen Zubereitung zur Aufrechterhaltung oder Förderung der Homeostase des Haarfollikels bzw. zur Behandlung pathologischer Zustände des Haarfollikels, wie Alopezie, dadurch gekennzeichnet, daß man
- a) wirksame Wirkstoffe mit Hilfe des erfindungsgemäßen Screening-Verfahrens bestimmt und
- b) als wirksam befundene Wirkstoffe mit kosmetisch und pharmakologisch geeigneten und verträglichen Trägem vermischt.
- a) effective agents determined using the screening method of the invention and
- b) active ingredients found to be mixed with cosmetically and pharmacologically suitable and compatible carriers.
Die
folgenden Beispiele erläutern
die Erfindung, ohne sie jedoch darauf einzuschränken:
Alle Angaben sind
in Gewichtsprozent (w%).The following examples illustrate the invention without, however, limiting it to:
All figures are in weight percent (w%).
Informationen zu den in den Beispielen eingesetzten Stoffen:information to the substances used in the examples:
Gluadin WQGluadin WQ
- Cognis Deutschland GmbH,Cognis Germany GmbH,
- AQUA (WATER), LAURDIMONIUM HYDROXYPROPYL HYDROLYZED WHEAT PROTEIN, ETHYLPARABEN, METHYLPARABENAQUA (WATER), LAURDIMONIUM HYDROXYPROPYL HYDROLYZED WHEAT PROTEIN, ETHYLPARABLES, METHYLPARABES
- Protein hydrolyzates, wheat germ, (3-(dodecyldimethylammonio)-2-hydroxypropyl), chloridesProtein hydrolyzates, wheat germ, (3- (dodecyldimethylammonio) -2-hydroxypropyl), chlorides
- ca. 30-35 % Gehaltabout 30-35% salary
Gluadin WLMGluadin WLM
- Cognis Deutschland GmbHCognis Germany GmbH
- Weizenproteinhydrolysat in H2OWheat protein hydrolyzate in H2O
- INCI declaration [INCI] HYDROLYZED WHEAT PROTEININCI declaration [INCI] HYDROLYZED WHEAT PROTEIN
- Gehalt ca. 20-24 %Salary about 20-24%
Salcare SC 96Salcare SC 96
- CibaCiba
- INCI declaration [INCI] POLYQUATERNIUM-37, PROPYLENE GLYCOL DICAPRYLATE/DICAPRATE,INCI declaration [INCI] POLYQUATERNIUM-37, PROPYLENE GLYCOL Dicaprylate / dicaprate,
- Gehalt ca. 50 %Salary about 50%
Cetiol HECetiol HE
- Cognis Deutschland GmbHCognis Germany GmbH
- Kokosmonoglycerid ethoxyliert (7 EO)Coconut monoglyceride ethoxylated (7 EO)
- INCI declaration [INCI] PEG-7 GLYCERYL COCOATEINCI declaration [INCI] PEG-7 GLYCERYL COCOATE
Sepigel 305Sepigel 305
- Seppic (Interorgana)Seppic (Interorgana)
- INCI declaration [INCI] POC13-14 ILYACRYLAMIDE, SOPARAFFIN, LAURETH-7INCI declaration [INCI] POC13-14 ILYACRYLAMIDE, SOPARAFFIN, LAURETH-7
- Gehalt ca. 45-50 %Salary about 45-50%
Euperlan PK 3000Euperlan PK 3000
- Cognis Deutschland GmbHCognis Germany GmbH
- INCI declaration [INCI] GLYCOL DISTEARATE, GLYCERIN, LAURETH-4, COCAMIDOPROPYL BETAINEINCI declaration [INCI] GLYCOL DISTEARATE, GLYCERINE, LAURETH-4, COCAMIDOPROPYL BETAINE
Plantacare 818 UPPlantacare 818 UP
- Cognis Deutschland GmbHCognis Germany GmbH
- C8-16 AlkylpolyglucosidC8-16 alkylpolyglucoside
- *NLP* NLP
- COCO-GLUCOSIDE, AQUA (WATER)COCO-GLUCOSIDE, AQUA (WATER)
Ajidew NL 50Ajidew NL 50
- AjinomotoAjinomoto
- Pyrrolidoncarbonsäure Natrium Salzpyrrolidone Sodium salt
- Na-PCANa-PCA
- SODIUM PCASODIUM PCA
Uvinul MS 40Uvinul MS 40
- BASFBASF
- Hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsäure *2-BENZOPHENONE-4Hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonic acid * 2-BENZOPHENONE-4
Arlypon FArlypon F
- Cognis Deutschland GmbHCognis Germany GmbH
- Lauromacrogol JP 12 (Pharmacopoe of Japan)Lauromacrogol JP 12 (Pharmacopoeia of Japan)
- *NLP* NLP
- C12-14 Fettalkohole ethoxyliert (2.5 EO)C12-14 fatty alcohols ethoxylated (2.5 EO)
- LAURETH-2LAURETH-2
Antil 171Antil 171
- Goldschmidt (Degussa)Goldschmidt (Degussa)
- Polyol Fettsäure EsterPolyol fatty acid ester
- PEG-18 GLYCERYL OLEATE/COCOATEPEG-18 GLYCERYL OLEATE / COCOATE
Synthalen KSynthetic K
- Synthalen KD (alt)Synthal KD (old)
- 3V Sigma3V Sigma
- Polyacrylsäurepolyacrylic acid
- CARBOMERCARBOMER
Cremophor RH 40Cremophor RH 40
- BASFBASF
- Riechstoff C 041Perfume C 041
- Rizinusöl, gehärtet, ethoxyliert (45 EO)Castor oil, hardened, ethoxylated (45 EO)
- PEG-40 HYDROGENATED CASTOR OILPEG-40 HYDROGENATED CASTOR OIL
Neutrol TENeutrol TE
- BASFBASF
- Tetrakis-(2-hydroxypropyl)-ethylendiamin *N,N,N',N',-EdetolTetrakis (2-hydroxypropyl) ethylenediamine * N, N, N ', N', - edetol
- TETRAHYDROXYPROPYL ETHYLENEDIAMINETETRAHYDROXYPROPYL ETHYLENEDIAMINE
Beispiel 1: Example 1:
Haarspülung
Beispiel 2:Example 2:
Haarspülung
Beispiel 3:Example 3:
Haarspülung
Beispiel 4:Example 4:
Haarkur
(rinse off)
Beispiel 5:Example 5:
Haarkur
(rinse off)
Beispiel 6:Example 6:
Haarkur
(auf dem Haar verbleibend)
Beispiel 7: Example 7:
Haarkur
(auf dem Haar verbleibend)
Beispiel 8:Example 8:
Haarkur
Beispiel 9:Example 9:
Shampoo:
Beispiel 10:Example 10:
Shampoo:
Beispiel 11:Example 11:
Shampoo:
Beispiel 12:Example 12:
Shampoo:
Beispiel 13:Example 13:
Haarstylinggel:
Beispiel 14:Example 14:
Haarspray:
Beispiel 15:Example 15:
Haartonic:
Beispiel 16:Example 16:
Haartonic:
Beispiel 17:Example 17:
Haarspülung wie in Bsp. 1, als 2-K SystemHair rinse as in Ex. 1, as 2-K system
1.
Kammer:
2.
Kammer
Beispiel 18:Example 18:
Haarkur analog Bsp. 7, aber in zwei Anwendungsschritten:Hair condition analogous Ex. 7, but in two application steps:
Vorbehandlung
mit L-Carnitin-Tartrat und Enzym
Nachbehandlung
Beispiel 19:Example 19:
Untersuchung der Haarkeratine mittels Multiplex-PCR:Examination of hair keratins by multiplex PCR:
Die Haarstruktur ist im Wesentlichen von der Zusammensetzung spezieller haarspezifischer Strukturproteine abhängig, den Haarkeratinen. Durch die Beeinflussung der Zusammensetzung dieser spezifischen Proteine kann auf biologischer Ebene Einfluss auf die Haarstruktur genommen werden. Verschiedene murine Mutationsvarianten, z.B. die Msx2 defiziente Maus, haben gezeigt, dass die abnormale Entwicklung von Haarschäften in diesen Mutanten oft auf eine Störung in der Differenzierung zurückzuführen ist (Ma L et al. (2003) Development 130 (2): 379-389). So ist in Msx2 defizienten Mäusen das haarspezifische Keratin Ha3 im Vergleich zum Wildtyp signifikant reduziert. Monilethrix ist ein struktureller Defekt des Haarschaftes, der zu vermehrtem Haarbruch und diffusem Haarverlust führt. Charakterisiert ist dieser Defekt unter anderem durch eine Genmutation der basischen Haarkeratine hHb1 und hHb6.The Hair structure is essentially more specific to the composition hair-specific structural proteins, the hair keratins. By influencing the composition of these specific proteins can affect the hair structure at the biological level become. Various murine mutation variants, e.g. the msx2 deficient Mouse, have shown that the abnormal development of hair shafts in these mutants often on a disorder is due to the differentiation (Ma L et al. (2003) Development 130 (2): 379-389). So in Msx2 deficient mice the hair-specific keratin Ha3 compared to the wild type significantly reduced. Monilethrix is a structural defect of the hair shaft, which leads to increased hair breakage and diffuse hair loss. characterized this defect is due, among other things, to a genetic mutation of the basic Hair keratins hHb1 and hHb6.
Die Expression verschiedener Haarkeratine im gezupften Haarfollikel kann mit Hilfe eines Multiplex-PCR-Verfahrens untersucht werden. Zur Durchführung der PCR wird zunächst mit Hilfe des RNeasy Mini Kit der Fa. Qiagen die RNA aus 25 gezupften Haarfollikeln isoliert und mittels reverser Transkription in cDNA umgeschrieben. Bei der anschließenden PCR Reaktion, die mit Hilfe genspezifischer Primer für die jeweiligen Haarkeratine durchgeführt wird, werden die jeweiligen PCR-Produkte gleichzeitig amplifiziert und nachfolgend mit einem DNA-Chip der Fa. Agilent kapillarelektrophoretisch aufgetrennt. Die fünf Haarkeratine hHa1, hHa2, hHb2, hHa5 hHb5 konnten so simultan in einem Experiment analysiert werden. Als Housekeeping-Gen und Relationsgrösse wurde 1B15 (Cyclophilin A) eingesetzt. Nach 28 Zyklen konnten mit Hilfe der Kapillarelektrophorese folgende PCR-Produkte anhand ihrer Größe identifiziert werden:.The Expression of various hair keratins in the plucked hair follicle can be assayed using a multiplex PCR method. To carry out the PCR is first Using the RNeasy Mini Kit from Qiagen the RNA from 25 plucked Hair follicles isolated and transcribed by reverse transcription into cDNA. In the subsequent PCR reaction using gene-specific primers for the respective hair keratins carried out is, the respective PCR products are amplified simultaneously and subsequently with a DNA chip from Agilent capillary electrophoretically separated. The five Hair keratins hHa1, hHa2, hHb2, hHa5 hHb5 could be synthesized simultaneously in to be analyzed in an experiment. As a housekeeping gene and relationship size was 1B15 (cyclophilin A) used. After 28 cycles could help with capillary electrophoresis, the following PCR products identified by their size become:.
Bis auf hHa5 konnten alle Keratine direkt anhand ihrer Größe eindeutig identifiziert werden. HHa5 wurde durch ein Ausschlussverfahren identifiziert, bei dem die Multiplex-PCR einmal mit und einmal ohne die Zugabe des entsprechenden Primers durchgeführt wurde.To On hHa5, all keratins could be identified directly by their size be identified. HHa5 was identified by an exclusion procedure, where the multiplex PCR once with and once without the addition of the corresponding primer was carried out.
Wahlweise kann die Analyse der Amplifikate auch mit Hilfe eines Real Time PCR-Verfahrens durchgeführt werden.Optional The analysis of the amplificates can also be done using a real time PCR procedure performed become.
Beispiel 20:Example 20:
Pigmentierung und Haarzyklus werden durch ein definiertes komplexes Set molekularer Signale, das spezifisch für die Pigmentierung und jede Phase des Haarzyklus ist, gesteuert (Botchkarev VA et al. (2003) J Investig Dermatol Symp Proc 8:46-55). Soll durch die Anwendung einer Testformulierung die Pigmentierung oder eine bestimmte Phase des Haarzyklus moduliert werden, so ist es essentiell, gezielt auf die entsprechenden molekularen Steuermoleküle einzuwirken. Dabei ist es ebenso wichtig, die geplante Wirkung in-vivo am Haarfollikel nachzuweisen. Dazu wird die Expression bestimmter, für den Haarzyklus und die Pigmentierung relevanter Marker auf Genebene mittels PCR bestimmt. Als Beispielmarker dienen:
- 1) Hepatocyte Growth Factor (HGF), Insulin-like Growth Factor (IGF) und Keratinocyte Growth Factor (KGF), Wachstumsfaktoren, die von der dermalen Papille und den den Follikel umschließenden Fibroblasten (Connective Tissue Sheath Fibroblasten oder CTS-Fibroblasten) ausgeschleust werden, um damit die Keratinozytenproliferation, die letztlich für die Haarschaftelongation verantwortlich ist, zu steuern.
- 2) c-met, HGF-Rezeptor, wird von ORS-Keratinozyten exprimiert.
- 3) gp100, Marker für nicht differenzierte sowie differenzierte Melanozyten, kommt in der Membran von Premelanosomen, im Anfangsstadium des Pigmentierungsprozesses vor.
- 4) Stem Cell Factor (SCF) und ckit, ein SCF Rezeptor, der von ORS-Keratinozyten expremiert wird. Stem Cell Factor stimuliert die Proliferation und Differenzierung von Melanozyten, wird durch Fibroblasten des den Follikel umgebenden Connective Tissue Sheaths und der dermalen Papille ausgeschüttet. SCF Signaling ist verantwortlich für die zyklische Regeneration der pigmentierenden Einheit im Haarfollikel während des Haarzyklus.
- 5) Tyrosinase related protein TRP1 und TRP2, regulierendes, an der Melanogenese beteiligtes Protein
- 6) Versican, wird in der dermalen Papille und Fibroblasten des Connective Tissue Sheaths gebildet, wichtig für das haarindiktive Potential der Zellen
- 7) weitere haarelevante Marker, wie NCAM (Neuronal Cell Adhesion Molecule), IGFBP3 (insulin-like Growth Factor Binding Protein 3), TGFβ1 und TGFβ2 (Transforming Growth Factor Beta 1 und 2)
- 1) Hepatocyte Growth Factor (HGF), Insulin-like Growth Factor (IGF) and Keratinocyte Growth Factor (KGF), growth factors secreted by dermal papilla and connective tissue sheath fibroblasts (CTS fibroblasts) in order to control the keratinocyte proliferation, which is ultimately responsible for the Haarschaftelongation.
- 2) c-met, HGF receptor, is expressed by ORS keratinocytes.
- 3) gp100, marker for undifferentiated and differentiated melanocytes, occurs in the membrane of premelanosomes, in the early stages of the pigmentation process.
- 4) Stem Cell Factor (SCF) and ckit, an SCF receptor expressed by ORS keratinocytes. Stem Cell Factor stimulates the proliferation and differentiation of melanocytes, is released by fibroblasts of the connective tissue sheath surrounding the follicle and the dermal papilla. SCF Signaling is responsible for the cyclic regeneration of the pigmenting unit in the hair follicle during the hair cycle.
- 5) Tyrosinase related protein TRP1 and TRP2, regulatory protein involved in melanogenesis
- 6) Versican is formed in the Connective Tissue Sheath's dermal papilla and fibroblasts, which are important for the hair-indicative potential of the cells
- 7) other hair-relevant markers such as Neuronal Cell Adhesion Molecule (NCAM), Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3), TGFβ1 and TGFβ2 (Transforming Growth Factor Beta 1 and 2)
Zur Durchführung der PCR wurde zunächst mit Hilfe des RNeasy Mini Kit der Fa. Qiagen die RNA aus 10 gezupften Haarfollikeln isoliert und mittels reverser Transkription in cDNA umgeschrieben. Bei der anschließenden PCR Reaktion, die mit Hilfe genspezifischer Primer für die jeweiligen Macker durchgeführt wurde, wurden die PCR-Produkte einzeln amplifiziert und nachfolgend mit einem DNA-Chip der Fa. Agilent kapillarelektrophoretisch aufgetrennt.to execution the PCR was first using the RNeasy Mini Kit from the company Qiagen the RNA plucked from 10 Hair follicles isolated and by reverse transcription into cDNA rewritten. In the subsequent PCR reaction using gene-specific primers for each Macker performed was PCR amplified individually and subsequently with a DNA chip from. Agilent capillary electrophoretically separated.
Die PCR-Produkte aller hier aufgeführten Marker HGF, KGF, cmet, Nkibeteb, SCF und ckit konnten anhand ihrer Größe eindeutig identifiziert werden und stehen somit für eine Analyse zur Verfügung. Als Housekeeping-Gen und Relationsgröße wurde 1B15 (Cyclophilin A) eingesetzt: The PCR products of all of the markers HGF, KGF, cmet, Nkibeteb, SCF and ckit listed here were able to be unambiguously identified on the basis of their size and are therefore available for analysis. The housekeeping gene and relationship size used was 1B15 (cyclophilin A):
Wahlweise kann die Analyse der Amplifikate auch mit Hilfe eines Real Time PCR-Verfahrens durchgeführt werden.Optional The analysis of the amplificates can also be done using a real time PCR procedure performed become.
Beispiel 21:Example 21:
Analyse von relevanten Markern, die die Verankerung des Haares in der Kopfhaut beeinflussen mittels Real Time PCRAnalysis of relevant Markers that affect the anchoring of the hair in the scalp using Real Time PCR
Während der Wachstumsphase ist das Haar in der Kopfhaut fest verankert. Verantwortlich hierfür sind Proteine der Extrazellulären Matrix wie Laminin-5 und Laminin-1 sowie Collagen IV und VII, und α6β4-Integrin. Diese Moleküle können im gezupften Haarfollikel mittels immunhistochemischen Verfahren (Markierung mit Primär- und Sekundär-Antikörper) und mit Hilfe eines Real-Time PCR-Verfahrens untersucht werden. Zur Durchführung der PCR wird zunächst mit Hilfe des RNeasy Mini Kits der Fa. Qiagen die RNA aus den Haarfollikelmodellen isoliert und mittels reverser Transkription in cDNA umgeschrieben. Bei der anschließenden PCR Reaktion, die mit Hilfe genspezifischer Primer für die jeweiligen extrazellulären Proteine durchgeführt wird und die der Amplifikation der gesuchten Genabschnitte dient, wird die Bildung der PCR-Produkte online über ein Fluoreszenzsignal detektiert. Das Fluoreszenzsignal ist dabei proportional zur Menge des gebildeten PCR-Produktes. Je stärker die Expression eines bestimmten Gens ist, desto größer ist die Menge an gebildetem PCR-Produkt und um so höher ist das Fluoreszenzsignal.During the Growth phase, the hair is firmly anchored in the scalp. Responsible therefor are extracellular proteins Matrix such as laminin-5 and laminin-1 as well as collagen IV and VII, and α6β4 integrin. These molecules can in the plucked hair follicle by immunohistochemical method (Marking with primary and secondary antibodies) and with the help of a real-time PCR procedure are examined. To carry out the PCR is first with Help of the RNeasy Mini Kit of the company Qiagen the RNA from the hair follicle models isolated and transcribed by means of reverse transcription into cDNA. In the subsequent PCR Reaction using gene-specific primers for the respective extracellular proteins carried out and that serves to amplify the gene segments sought, will the formation of the PCR products online about Fluorescence signal detected. The fluorescence signal is proportional to the amount of PCR product formed. The stronger the expression of a particular Gene is, the bigger it is the amount of PCR product formed and the higher the fluorescence signal.
Beispiel 22:Example 22:
Nachweis zellzyklusrelevanter Gene mittels Western-Blot:Detection of cell cycle relevant Gene by Western blot:
Proliferation und Apoptose sind wichtige Merkmale bei der Beurteilung der Wirksamkeit von Formulierungen auf den Haarfollikel. Proliferation z.B. von Matrixkeratinozyten ist Voraussetzung für Haarwachstum, während Apotptose an den Eintritt in die Katagenphase, mit anschliessendem Ausfall des Haares, gekoppelt ist (Botchkarev VA, Kishimoto J.(2003), J Investig Dermatol Symp Proc 8:46-55). Die Wirkung einer Substanz auf das Haarwachstum kann also frühzeitig auf zellulärer Ebene erfasst werden. Wichtige mit der Apoptose (programmierter Zelltod) assoziierte Proteine sind beispielsweise Bcl-2 und Bax. Bcl-2 wirkt antiapoptotisch, also als Apoptoseschutz und ist überwiegend an der äußeren Mitochondrienmembran, aber auch an der Zellkernmembran und dem endoplasmatischen Reticulum lokalisiert. Auch Bax ist an der Regulation apoptotischer Mechanismen beteiligt, wirkt jedoch apoptosefördernd, also proapoptotisch. Positiv reguliert wird es durch die Produkte pro-apoptotischer Gene (wie z.B. Bad, Bak und das Tumorsuppressor-Gen p53) und negativ reguliert durch die Produkte anti-apoptotischer Gene der Bcl-Familie (wie Bcl-2 oder Bcl-xl). Das Mengenverhältnis von pro- zu antiapoptotischen Familienmitgliedern entscheidet über Tod oder Überleben der Zelle. Wirkt eine Testsubstanz potentiell wacshtumsfördernd oder erhaltend, so kann davon ausgegangen werden, dass sich dieser Effekt auf zellzyklusrelevante Marker auswirkt. Diese Marker können mit Hilfe von proteinanalytischen Methoden z.B. Western Blot oder Proteinarray) nachgewiesen werden. Zur Optimierung des Western Blots wurde zunächst die Proteinausbeute aus den Follikeln maximiert. Dazu wurden dem Probanden jeweils 10 Follikel entnommen, diese in einen mit Proteaseinhibitoren versetzten Lyspuffer aufgenommen und mit Hilfe einer Mixermill homogenisiert. Die im Lysat enthaltenen Proteine werden mit einem Micro BCA Protein Assay Kit der Fa. Pierce quantifiziert und ein Aliquot zur Durchführung einer Polyacrylamidelektrophorese auf ein Minigel (4-12% Bis-Tris Gradientengel) aufgetragen. Anschließend erfolgt der Transfer der aufgetrennten Proteine auf eine Nitrocellulosemembran (Transferpuffer mit 10% Methanol). Die Membran wird fixiert und zur Überprüfung der Proteinverteilung eine Ponceau-S-Färbung durchgeführt. Zur Detektion und Quantifizierung speziefischer Proteine wie Bax und Bcl-2 wird die Membran zunächst 1 h mit spezifischen Primärantikörpern (polyclonal rabbit anti-Bax, Fa. Cell Signaling, polyclonal rabbit anti-human Bcl-2, Fa. Cell Signaling) inkubiert, anschließend erfolgt die Markierung mit einem mit Horseradish-Peroxidase gekoppelten Sekundärantikörper (Goat anti-rabbit IgG, Fa. Chemicon). Die Detektion erfolgt mit Hilfe der ECL-Methode (Enhanced Chemoluminescence) durch die Zugabe eines speziellen Substrats, bei dessen Reaktion mit Horseradish-Peroxidase Luminol freigesetzt wird. Die freiwerdende Lumineszenz wird mit Hilfe eines lumineszenzempfindlichen Films detektiert. Die Schwärzung des Films an der markierten Stelle ist proportional zum in der Probe enthaltenen Gehalt an Bcl-2 und Bax. Beide Marker konnten mit Hilfe des Western-Blots nachgewiesen werden, wobei Bax wie erwartet nur schwach expremiert ist, da anagene Haarfollikel eingesetzt wurden.Proliferation and apoptosis are important features in evaluating the efficacy of Formulie tions on the hair follicle. Proliferation, for example, of matrix keratinocytes is a prerequisite for hair growth, while apoptosis is coupled to the entry into the catagen phase, with subsequent hair loss (Botchkarev VA, Kishimoto J. (2003), J Investig Dermatol Symp Proc 8: 46-55). The effect of a substance on hair growth can thus be detected early on the cellular level. Important proteins associated with apoptosis (programmed cell death) are, for example, Bcl-2 and Bax. Bcl-2 is anti-apoptotic, ie as apoptosis protection and is predominantly localized on the outer mitochondrial membrane, but also on the cell nucleus membrane and the endoplasmic reticulum. Bax, too, is involved in the regulation of apoptotic mechanisms, but it is apoptosis-promoting, ie pro-apoptotic. It is positively regulated by the products of pro-apoptotic genes (such as Bad, Bak and the tumor suppressor gene p53) and negatively regulated by the products of anti-apoptotic genes of the Bcl family (such as Bcl-2 or Bcl-xl). The proportion of pro- to anti-apoptotic family members determines the death or survival of the cell. If a test substance potentially promotes or sustains growth, it can be assumed that this effect has effects on cell cycle-relevant markers. These markers can be detected by means of protein analytical methods, eg Western blot or protein array. To optimize the Western blot, the protein yield from the follicles was first maximized. In each case 10 follicles were removed from the subject, taken up in a lysis buffer mixed with protease inhibitors and homogenized using a Mixermill. The proteins contained in the lysate are quantified with a Micro BCA Protein Assay Kit from Pierce and an aliquot applied to a mini gel (4-12% Bis-Tris gradient gel) to perform a polyacrylamide electrophoresis. Subsequently, the separated proteins are transferred to a nitrocellulose membrane (transfer buffer with 10% methanol). The membrane is fixed and carried out to check the protein distribution, a Ponceau-S staining. For the detection and quantification of specific proteins such as Bax and Bcl-2, the membrane is first incubated for 1 h with specific primary antibodies (polyclonal rabbit anti-Bax, Fa. Cell Signaling, polyclonal rabbit anti-human Bcl-2, Fa. Cell Signaling), then the labeling is carried out with a horseradish peroxidase-coupled secondary antibody (Goat anti-rabbit IgG, Fa. Chemicon). The detection is carried out by the ECL method (Enhanced Chemoluminescence) by the addition of a special substrate, is released in the reaction with horseradish peroxidase luminol. The luminescence released is detected by means of a luminescence-sensitive film. The blackening of the film at the marked position is proportional to the content of Bcl-2 and Bax contained in the sample. Both markers could be detected by Western blotting, with Bax, as expected, showing only weak expression since anagen hair follicles were used.
Wahlweise kann die quantitative Analyse der Marker (extra- und intrazellulär nach Zelllyse) auch mit Hilfe eines ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) Verfahrens erfolgenOptional can be the quantitative analysis of the markers (extra and intracellular after cell lysis) also with the aid of an ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method respectively
Beispiel 22:Example 22:
Haarfollikelanalyse in-vivo nach Behandlung mit Haartonic:Hair follicle analysis in vivo after treatment with hair tonic:
Es wurden 11 männliche Probanden in einem Halbseitenvergleich, bei dem die Verumformulierung (mit 2% L-Carnitintartrat) gegen eine Placeboformulierung (ohne L-Carnitintartrat) aufgetragen wurde, vermessen. Dazu wurden zunächst von beiden Seiten am Kopf jeweils 5 Haare zur Bestimmung der ATP-Syntheserate als Nullwert entnommen. Danach erfolgte die Applikation von jeweils 2 ml Formulierung auf je einer Kopfhälfte. 15h nach der Applikation wurden auf beiden Seiten jeweils 5 Haare zur Bestimmung des ATP-Gehalts entnommen.It were 11 male Subjects in a half-page comparison, in which the drug formulation (with 2% L-carnitine tartrate) against a placebo formulation (without L-carnitine tartrate) was applied, measured. This was initially on both sides of the head each 5 hair taken to determine the ATP synthesis rate as zero value. Thereafter, the application of each 2 ml formulation was carried out one half of the head each. 15h after the application 5 hairs were on each side taken to determine the ATP content.
Zur Bestimmung des ATP-Gehalts in Haarfollikeln wurden die Haare einem ATP-stabilisierendem Gemisch aus Lysepuffer und PBS aufgenommen und in einer Mixermill homogenisiert. Nach Zentrifugation wurde ein 150 μl Aliquot entnommen und mit 50 μl Substratlösung in eine schwarze Mikrotiterplatte überführt. Nach einer Inkubationszeit von 10 min in der Dunkelheit erfolgte die Messung der Lumineszenz. Zur Bildung der Ausgangslagendifferenzen wurde der Nullwert jedes Probanden vom entsprechenden 15h-Wert subtrahiert und der Mittelwert berechnet. Der Halbseitenvergleich 15h nach Applikation zeigt einen statistisch signifikanten Vorteil (99% statistische Sicherheit, p-value=0,0053) der Formulierung mit L-Carnitintartrat gegenüber der Placeboformulierung.to Determination of the ATP content in hair follicles was the hair one ATP-stabilizing mixture of lysis buffer and PBS added and homogenized in a Mixermill. After centrifugation was a 150 μl aliquot taken and with 50 ul substrate solution transferred to a black microtiter plate. After an incubation period 10 min in the dark, the luminescence was measured. To form the starting point differences, the zero value became each Subjects are subtracted from the corresponding 15h value and the mean calculated. The half-page comparison 15h after application shows one statistically significant advantage (99% statistical security, p-value = 0.0053) formulation with L-carnitine tartrate versus placebo formulation.
Beispielformulierung des Haartonic:Example formulation of Hair Tonic:
Rezeptur Verum:Recipe Verum:
- 30 % Ethanol (kosmetisch)30% ethanol (cosmetic)
- 2% Liposomen PC (Lipoid SL80, Supplier Lipoid)2% liposomes PC (Lipoid SL80, Supplier Lipoid)
- 2% L-Carnitin-L-tartrat (Supplier: Loncha)2% L-carnitine L-tartrate (Supplier: Loncha)
- 66% Wasser66% water
Rezeptur Placebo:Formulation Placebo:
- 30 % Ethanol (kosmetisch)30% ethanol (cosmetic)
- 2% Liposomen PC (Lipoid SL80, Supplier Lipoid)2% liposomes PC (Lipoid SL80, Supplier Lipoid)
- 68% Wasser68% water
Beispiel 23:Example 23:
Haarfollikelanalyse nach Behandlung mit HaarshampooHair follicle analysis after Treatment with hair shampoo
Es wurden 10 männliche Probanden in einem Halbseitenvergleich (Verum mit 2% Carnitintartrat/unbehandelt), vermessen. Dazu wurden zunächst von beiden Seiten am Kopf jeweils 5 Haare zur Bestimmung der ATP-Syntheserate als Nullwert entnommen. Danach erfolgte die Haarwäsche mit jeweils 3 ml Formulierung. 15h nach der Applikation wurden auf beiden Seiten jeweils 5 Haare zur Bestimmung des ATP-Gehalts entnommen.It were 10 male Subjects in a half-side comparison (verum with 2% carnitine tartrate / untreated), measured. This was initially 5 hairs from both sides of the head to determine the ATP synthesis rate taken as zero value. Then the hair was washed with 3 ml each of formulation. 15h after the application were on both 5 hairs each to determine the ATP content.
Zur Bestimmung des ATP-Gehalts in Haarfollikeln wurden die Haare einem ATP-stabilisierendem Gemisch aus Lysepuffer und PBS aufgenommen und in einer Mixermill homogenisiert. Nach Zentrifugation wurde ein 150 μl Aliquot entnommen und mit 50 μl Substratlösung in eine schwarze Mikrotiterplatte überführt. Nach einer Inkubationszeit von 10 min in der Dunkelheit erfolgte die Messung der Lumineszenz. Zur Bildung der Ausgangslagendifferenzen wurde der Nullwert jedes Probanden vom entsprechenden 15h Wert subtrahiert und der Mittelwert berechnet. 15h nach Applikation konnte für die Testformulierung mit 2% L-Carnitintartrat ein statistisch auffälliger Anstieg (Student t-Test) der ATP-Konzentration in den behandelten Haarfollikeln nachgewiesen werden.to Determination of the ATP content in hair follicles was the hair one ATP-stabilizing mixture of lysis buffer and PBS added and homogenized in a Mixermill. After centrifugation was a 150 μl aliquot taken and with 50 ul substrate solution transferred to a black microtiter plate. After an incubation period 10 min in the dark, the luminescence was measured. To form the starting point differences, the zero value became each Subjects subtracted from the corresponding 15h value and the mean calculated. 15h after application could for the test formulation with 2% L-carnitine tartrate shows a statistically significant increase (Student t-test) ATP concentration in the treated hair follicles become.
Durch ein weiteres statistische Verfahren (Vergleich der Kovarianzen) wurde darüber hinaus ein statistisch signifikanter Unterschied in der ATP-Konzentration zwischen der mit der Testformulierung behandelten Seite gegenüber der unbehandelten Seite bei der Nachhermessung nachgewiesen (p=0,01).By another statistical procedure (comparison of covariances) was about it There was also a statistically significant difference in the ATP concentration between the side treated with the test formulation versus the untreated side detected during the subsequent measurement (p = 0.01).
Beispielformulierung
Haarshampoo:
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