DE69820861T2

DE69820861T2 - Teilchenförmige arzneimittelträger

Info

Publication number: DE69820861T2
Application number: DE69820861T
Authority: DE
Inventors: Florence Ijeoma UCHEGBU
Original assignee: University of Strathclyde
Current assignee: University of Strathclyde
Priority date: 1997-03-25
Filing date: 1998-03-25
Publication date: 2004-12-30
Anticipated expiration: 2018-03-26
Also published as: GB9706195D0; EP0970131A1; WO1998042755A1; DE69820861D1; EP0970131B1; US20020198373A1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Gegenstand der Erfindung sind aus Polysaccharid-Derivaten gebildete partikuläre Arzneimittelträger. Ein Polysaccharid, das mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe trägt, die an die einzelnen Monosaccharid-Einheiten gebunden ist, wird zur Bildung eines Derivats, das mindestens einen langkettigen Alkylrest trägt, hydrophobisiert. Die Partikelbildung wird dann in Gegenwart von Cholesterin induziert. Die Partikel sind zum Einschluss oder zur Konjugation pharmazeutisch aktiver Bestandteile geeignet.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Chitosan (N-deacetyliertes Chitin) wurde als ein Arzneimittelabgabemittel untersucht, als es zu vernetzten Mikrosphären (Thanoo et al., J. Pharma. Pharmacol., 1992, 44, 283–286) und als eine Beschichtung für Liposomen (Henriksen et al., Int. J. Pharm., 1994, 101, 227–236) verarbeitet wurde. Chitosan-Lösungen wurden auch als Penetrations-Enhancer (Aspden et al., Eur. J. Pharm. Sci., 1996, 4, 23–32) verwendet.
Yoshioka et al. (Biosci. Biotech. Biochem., 1993, 57, 1053–1057) haben gezeigt, dass die Präzipitation (beim Stehen) einer aus hydriertem Eigelb-Lecithin hergestellten Liposomen-Suspension durch Behandlung der Suspension mit einer wässrigen Lösung aus sulfatiertem N-Myristoylchitosan (S-M-Chitosan) verhindert werden konnte. Dieses Ergebnis wird durch die Oberfläche der Liposomen erklärt, die mit S-M-Chitosan beschichtet sind, wobei die Ionisierung der Sulfatgruppe zu einer negativen Ladung an den Liposomen führt. Dies wiederum führt zur Abstoßung zwischen den Liposomen-Partikeln und verhindert die Präzipitation. Es wurde festgestellt, dass das Beschichtungsverfahren die Lipid-Doppelschicht nicht zerstört.
In jüngerer Zeit hat die gleiche Gruppe (in Biosci. Biotech. Biochem., 1995, 59, 1901–1904) die Eigenschaften wässriger Lösungen von Chitosan-Derivaten, nämlich sulfatiertem N-Acylchitosan (S-C_n-Chitosan) mit unterschiedlichen Alkylkettenlängen untersucht. S-C_n-Chitosane aus C₂ bis C₁₄ lösten sich zur Bildung transparenter Lösungen vollkommen in Wasser auf. Es wurde auch S-C₁₆-Chitosan hergestellt, seine Eigenschaften wurden aber nicht untersucht, da das gebildete wässrige Gemisch nicht transparent war und die Annahme bestand, dass ein Aggregat, wie zum Beispiel ein Flüssigkristall gebildet wurde. Die Solubilisierungskapazität der wässrigen S-C_n-Chitosan-Lösungen in Richtung einer hydrophoben Substanz (Azobenzen) wurde untersucht, und es wurde festgestellt, dass die Löslichkeit mit zunehmender Kohlenstoffzahl über C₁₀ scharf zunahm. Die Autoren folgerten daraus, dass die langen Alkylketten zur Bildung von Micellen, die zum Auflösen der Azobenzen-Moleküle fähig sind, aggregiert wurden. Die gebildeten Micellen werden als „Polymer-Micellen" beschrieben, obwohl der gebildete Micellentyp nicht ermittelt wurde. Die „Polymer-Micellen" werden zur Verwendung als Arzneimittelträger vorgeschlagen.
Sunamoto et al. (Chem. Lett., 1991, 1263–1266) haben berichtet, dass Palmitoyl- oder Cholesterin-substituierte Derivate von Polysacchariden, wie zum Beispiel Pullulan, Amylopectin und Dextran in wässriger Lösung Selbstaggregate bilden. Es wird über ein an 5,4 Palmitoyl-Gruppen pro 100 Glucoseeinheiten substituiertes Palmitoyl-Pullulan-Derivat zusammen mit Cholesterin-substituierten Pullulanen mit unterschiedlichen Substitutionsgraden berichtet. Die Untersuchung der Interaktion zwischen den Pullulan-Derivaten und einer Fluoreszenz-Sonde zeigte, dass die Pullulan-Derivate über einer kritischen Konzentration Polymer-Selbstaggregate bildeten. Die treibende Kraft für die Aggregation wird einer hydrophoben Interaktion zwischen hydrophoben Teilen zugeschrieben, und es wird bemerkt, dass die Palmitoyl-Gruppe bei der Bildung der Selbstaggregate weniger wirksam war. Es wird beschrieben, dass die Aggregate die Kapazität besitzen, verschiedene Substanzen, wie zum Beispiel Arzneimittel, Proteine und Nukleinsäuren, durch hydrophobe Interaktion einzukapseln.
Die gleiche Gruppe berichtet auch (in Macromolecules, 1993, 26, 3062–3068) über die Synthese und Lösungseigenschaften eines nichtionischen Cholesterin-modifizierten Pullulan-Derivates (CHP) in Wasser. In dieser Arbeit wurde Pullulan durch 1,6 Cholesteringruppen pro 100 Anhydroglucosid-Einheiten substituiert. Die Autoren geben an, dass es sich bei den gebildeten CHP-Selbstaggregaten um relativ monodisperse Partikel handelt, und es wird vorgeschlagen, dass ein CHP-Selbstaggregat aus ca. 13 CHP-Molekülen besteht. Experimentelle Daten weisen darauf hin, dass der hydrophobe Kern der CHP-Aggregate vollständig und stabil vom hydrophilen Mantel des Polysaccharidgerüsts bedeckt ist, wobei über der kritischen Konzentration kolloidal stabile Nanopartikel gebildet werden. Die Bindung von verschiedenen Fluoreszenz-Sonden wurde untersucht, und es wurde gezeigt, dass sie mit einer Zunahme der Hydrophobie der Sonde zunimmt. Daraus wird deshalb gefolgert, dass es sich bei der wichtigsten treibenden Kraft für die Komplexbildung um eine hydrophobe Interaktion handelt.
Diese Forschungsarbeiten haben (in Chem. Lett., 1995, 707–708) weiter die Komplexbildung des Hydrogel-Nanopartikels beschrieben, der durch Selbstassemblierung von CHP mit 5–10 Insulin-Monomeren in Wasser gebildet wurde. Die Zahl komplexierter Insulin-Moleküle nahm mit einer Zunahme des Substitutionsgrades der Cholesteringruppe von CHP zu. Es wird angegeben, dass Insulin tief im Inneren der amphiphilen Hydrogel-Matrix des Nanopartikels, worin die hydrophobe Mikrodomäne des assoziierenden Cholesterins nicht kovalente Vernetzungen der Gelstruktur bildet, komplexiert ist. Die Zahl der Vernetzungen eines Nanopartikels nimmt mit einer Zunahme der Zahl des Substitutionsgrades von Cholesterin zu, was zu einer Zunahme des Bindungsortes für Insulin führt.
Die gleiche Gruppe berichtet (in J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 6110–6115) schließlich über eine Studie zur Komplexbildung zwischen dem CHP-Selbstaggregat und bovinem Serumalbumin (BSA). In allen Fällen wurde ca. ein BSA-Molekül durch einen Nanopartikel des CHP-Selbstaggregats, ungeachtet der Struktur des CHP-Selbstaggregats, komplexiert. Das Entfalten von BSA durch thermische Mittel oder durch ein Denaturierungsmittel, wie zum Beispiel Harnstoff, wurde bei der Komplexbildung größtenteils unterdrückt. Diese Stabilisierung von BSA bei der Komplexbildung wird der Bildung mehrfacher nicht kovalenter Interaktionen zwischen BSA und dem Hydrogel des CHP-Selbstaggregats zugeschrieben.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Es wird erfindungsgemäß eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend Partikel, wobei die Partikel lineare Polysaccharid-Derivate umfassen, die mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Molekül tragen und einen pharmazeutisch verträglichen Träger, worin die hydrophile Gruppe an die einzelnen Monosaccharid-Einheiten des Polysaccharid-Moleküls gebunden ist und die hydrophobe Gruppe an eine Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls gebunden ist, und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acylrest umfasst.
Die nichtionische hydrophile Gruppe ist bevorzugt eine Gruppe der Formel R¹, worin R¹ ausgewählt ist aus: Mono- und Oligo-hydroxy-C_1-4-alkyl, Mono- und Oligo-hydroxy-substituiertem C_2-6-Acyl, C_1-2-Alkoxyalkyl mit optional einer oder mehreren Hydroxygruppe(n) substituiert an den Alkoxy- oder Alkylen-Gruppen, Oligo- oder Poly-(oxa-C_1-3-alkylen), bevorzugt Polyoxyethylen, umfassend bis zu ca. 120 Ethylenoxid-Einheiten (d. h. bis zu einem Molekulargewicht von 5000) und C_1-4-Alkyl(oligo- oder poly-oxa-C_1-3-alkylen), optional Hydroxy-substituiert, bevorzugt Oligo- oder Polyglycerolether, wie zum Beispiel die, die in GB-A-1,529,625 beschrieben sind, die zum Beispiel bis zu 10 Glycerol-Einheiten enthalten; und worin R¹ über eine Ether-Verknüpfung mit einer Saccharid-Einheit des Polysaccharids verbunden ist. Man sollte hierin zur Kenntnis nehmen, dass der Begriff Acyl sowohl Alkenoyl- und Alkinoyl-Gruppen als auch Alkanoyl-Gruppen einschließt.
Bei der Anforderung, dass es sich bei der hydrophilen Gruppe um eine nichtionische handelt, ist ein wichtiges Merkmal, da eine geladene ionische Gruppe, wie zum Beispiel Sulfat, die anionische DNA, die – in einer Ausführungsform – mit den Partikeln als ein Mittel zur Genabgabe oder -vakzination assoziiert ist, abstoßen würde.
Das Polysaccharid-Derivat ist bevorzugt ein Derivat von Chitosan, Pullulan oder Dextran und umfasst am bevorzugtesten 1,4-verknüpfte Saccharid-Einheiten. Die Substitution durch den nichtionischen hydrophilen Teil tritt in der Regel an der C₆-Position einer Saccharid-Einheit auf.
Die hydrophobe Gruppe ist bevorzugt durch eine Amid-, Ester-, Ether- oder Amin-Verknüpfung, am bevorzugtesten durch eine Amid-Verknüpfung mit einer Saccharid-Einheit verbunden. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist diese Gruppe an der C₂-Position in einer 1,4-verknüpften Saccharid-Einheit substituiert.
Die Verbindung besitzt einen Grad der Substitution durch nichtionische hydrophile Gruppen im Bereich von 0,1–1,5, bevorzugt größer als 0,9 und am bevorzugtesten 1 pro Saccharid-Einheit.
Das Verhältnis von hydrophilen : hydrophoben Gruppen in den erfindungsgemäßen Verbindungen liegt im Bereich von 100 : 1 bis 1 : 2, bevorzugt zwischen 10 : 1 und 2 : 1, bevorzugter 5 : 1 und 2 : 1. Es wurde festgestellt, dass Verbindungen mit einem Grad der hydrophoben Substitution von 0,5 oder darüber pro hydrophile Gruppe aufgrund der hohen hydrophoben Belastung, schwer zu dispergieren sind. Verbindungen mit einem Substitutionsgrad von 0,25 oder weniger sind folglich bevorzugt.
Eine bevorzugte erfindungsgemäße Reihe von Verbindungen sind die N-substituierten Derivate von Polyaminoglykanen, am bevorzugtesten N-Acylglykol-chitosanen, insbesondere N-Palmitoylglykolchitosan (Poly[β(1→4)-2-deoxy-2-hexadecanamido-6-0-(2-hydroxyethyl)-D-glucopyranose]. In diesem Fall ist die Anwesenheit freier Aminogruppen vom Standpunkt des Zulassens der Komplexbildung mit anionischer DNA her gesehen, vorteilhaft. Solche Gruppen könnten außerdem zur Konjugation von Arzneimittel-Molekülen verwendet werden.
Es ist erfindungsgemäß weiter eine Zusammensetzung vorgesehen, umfassend Partikel, die aus einer Verbindung mit der folgenden Formel gebildet sind:
worin jedes R¹ ausgewählt ist aus: Wasserstoff, Mono- und Oligo-hydroxy-C_1-6-alkyl, Mono- und Oligo-hydroxy-substituiertem C_2-6-Acyl, C_1-2-Alkoxyalkyl, optional mit einer oder mehreren Hydroxygruppe(n) substituiert an den Alkoxy- oder Alkylengruppen, Oligo- oder Poly-(oxa-C_1-3-alkylen), wie zum Beispiel Polyoxyethylen umfassend bis zu ca. 120 Ethylenoxid-Einheiten und C_1-4-Alkyl(oligo- oder poly-oxa-C_1-3-alkylen), optional Hydroxy-substituiert, wie zum Beispiel Polyglycerolether, die zum Beispiel bis zu 10 Glycerol-Einheiten enthalten, vorausgesetzt, dass mindestens eine der Gruppen R¹ nicht Wasserstoff ist;
A für -NH- oder -O- steht;
jedes R² aus Wasserstoff, C_12-24-Alkyl, -Alkanoyl, -Alkenyl, -Alkenoyl, -Alkinyl oder -Alkinoyl ausgewählt ist, vorausgesetzt dass mindestens eine der Gruppen R² nicht Wasserstoff ist; und
n für 5–2000 steht.
Die Gruppe R¹ weist bevorzugt die Formel -CH₂CH₂OH oder -CH₂CH(OH)CH₂OH auf, R² steht für C_16-18-Acyl und A steht für -NH-.
In einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt ist auch ein Polysaccharid-Derivat bereitgestellt, das mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül trägt, worin die hydrophile Gruppe an der C₆-Position einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls über eine Amid-Verknüpfung oder Amin-Verknüpfung substituiert ist und die hydrophobe Gruppe an der C₂-Position einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls über eine Amid-Verknüpfung oder Amin-Verknüpfung substituiert ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Akenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest umfasst.
In einem noch weiteren erfindungsgemäßen Aspekt ist ein Polysaccharid-Derivat bereitgestellt, das mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül zur Verwendung in der Therapie trägt, worin die hydrophile Gruppe an eine Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls gebunden ist und die hydrophobe Gruppe an eine Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls gebunden ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest umfasst.
In einem noch weiteren erfindungsgemäßen Aspekt ist die Verwendung eines Polysaccharid-Derivats bereitgestellt, das mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül zur Herstellung eines Medikamentes zur Verwendung in der Therapie trägt, worin die hydrophile Gruppe an eine Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls gebunden ist und die hydrophobe Gruppe an eine Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid- Moleküls gebunden ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Akinyl- oder -Acyl-Rest umfasst.
Die Verbindungen können gemäß jedwedem im Stand der Technik für die Derivatisierung von Polysacchariden beschriebenen Standardverfahren gebildet werden (siehe zum Beispiel die Referenzen von Yoshioka et al., op cit.). Das Verfahren kann die Derivatisierung eines Polysaccharid-Ausgangsmaterials durch eine hydrophile Gruppe in einem ersten Schritt, gefolgt von einem zweiten Schritt, umfassend die Bindung einer hydrophoben Gruppe oder umgekehrt, beinhalten. Als Alternative können kommerziell erhältliche Polysaccharid-Derivate, die bereits eine hydrophile Gruppe besitzen, unter Verwendung von Standardverfahren zur Bildung einer erfindungsgemäßen Verbindung hydrophobisiert werden.
Die beschriebenen Verbindungen werden in Kombination mit Cholesterin oder einem Derivat davon zur Bildung von Partikeln verwendet. In Abwesenheit von Cholesterin tritt die Partikelbildung nicht auf und das Material präzipitiert. Die Anwesenheit von Cholesterin ist folglich zur Förderung der Selbstassemblierung der Polysaccharid-Derivate zur Bildung von Partikeln erforderlich.
Die Partikel werden mittels Verfahren ähnlich denen hergestellt, die zur Bildung von Liposomen und Niosomen, zum Beispiel durch Mischen der Verbindungen in einem organischen Lösungsmittel und dann Kontaktieren des getrockneten Gemischs mit einer wässrigen Lösung, optional gefolgt von einem Schritt zur Reduktion der Partikelgrößen, verwendet werden.
Die gebildeten Partikel können in einem wässrigen Vehikel suspendiert werden oder können als Alternative im Trockenzustand isoliert werden. Die Partikel können optional einen sterischen Stabilisator, zum Beispiel eine nichtionische amphiphile Verbindung, bevorzugt einen Poly-24-oxyethylen-cholesterylether, inkorporieren. Die Partikel können mikro- oder nanopartikulär sein, wobei Nanopartikel bevorzugt in Gegenwart des sterischen Stabilisators gebildet werden. In diesem Fall wird der sterische Stabilisator in die Struktur des Partikels inkorporiert.
Die Partikel umfassen bevorzugt auch einen assoziierten pharmazeutisch aktiven Bestandteil. Der Wirkstoff kann wasserlöslich sein, in welchem Fall er mit den hydrophilen Regionen des Partikels assoziiert ist, oder wasserunlöslich und folglich mit den hydrophoben Regionen der Partikel assoziiert ist.
Ein derartiger Bestandteil ist bevorzugt physikalisch in dem Partikel eingeschlossen, kann aber auch durch kovalente Konjugation gehalten werden. Der pharmazeutisch aktive Bestandteil kann eine therapeutische Peptid- oder Proteinverbindung sein. Eine weitere bevorzugte Alternative für die pharmazeutisch aktive Verbindung ist Nukleinsäure (z. B. DNA), bevorzugt in der Form eines Gens zur Gentherapie oder Vakzinierung mit einem Gen.
Diese Arzneimittelträger können zur Behandlung eines Menschen oder Tieres mittels Therapie, insbesondere zur oralen Arzneimittelabgabe von Peptiden oder Proteinen oder als Genabgabevektoren verwendet werden. Es wird angenommen, dass dieses Arzneimittelabgabesystem auch geeignet ist, wenn es über die intravenösen, intramuskulären, intraperitonealen oder topischen Wege (Inhalation, intranasal, Applikation auf die Haut) verwendet wird.
Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen können auch zur Beschichtung von vorgeformten Liposomen oder Niosomen, die zum Beispiel in einem wässrigen Träger suspendierte Arzneimittelträger sind, verwendet werden.
Die Erfindung wird nun weiter unter Bezugnahme auf die folgenden nicht einschränkenden Beispiele erläutert, worin der wässrige Fluoreszenz-Marker 5(6)-Carboxyfluoreszein (CF) als ein Modellarzneimittel und unter Bezugnahme auf die Figuren verwendet wird, worin:
1 die Stabilität von auf Bleomycin-GCP41 basierenden Vesikeln nach Lagerung bei 4°C (•,
und Raumtemperatur bei 16–25°C (o, ☐) zeigt.
, ☐ = Einkapselung (%), •o = mittlere Größe. Datenpunkte = Mittelwert ± SD, n = 3;
2 die Freisetzung von 5(6)-Carboxyfluoreszein aus GCP41-, Cholesterin-Vesikeln zeigt. Datenpunkte = Mittelwert von 3 Bestimmungen. Δ = auf Palmitoylglykolchitosan basierende Vesikel (Mittelwert ± SD, n = 6),
= Spanne von 60 Vesikeln (Mittelwert, n = 3), ♦ = 5(6)-Carboxyfluoreszein-Lösung;
3 die Biokompatibilität von auf GCP41 basierenden Vesikeln gegen 3 Zelllinien,
= A549, • = A431,
= A2780 zeigt. Datenpunkte = Mittelwert ± SD, n = 3; und ...
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
BEISPIEL 1
SYNTHESE VON N-PALMITOYLGLYKOLCHITOSAN (Poly[β(1→4)-2-deoxy-2-hexadecanamid-6-0-(2-hydroxyethyl)-D-glucopyranose]
a) GCP41 (initiales Verhältnis von Glykolchitosan : Palmitoyl-Einheiten (4 : 1))
200 mg Glykolchitosan (GC) und 150 mg Natriumbicarbonat wurden in 35 ml Wasser aufgelöst. Es wurden 10 ml absolutes Ethanol zugefügt, gefolgt von einer tropfenweisen Zugabe einer Lösung aus 79 mg Palmitoyl-N-hydroxysuccinimidester, aufgelöst in 60 ml absolutem Ethanol. Das Zufügen des Palmitoyl-N-hydroxysuccinimidesters wurde unter Rühren über 30 Minuten durchgeführt. Das Reaktionsgemisch war initial trüb, wurde aber nach ca. 1 h klar. Das Reaktionsgemisch wurde 72 h gerührt.
Nach dieser Zeit wurden 100 ml Aceton unter Bildung eines leichten Präzipitats zugefügt. Dieses Gemisch wurde zu einem reduzierten Volumen unter reduziertem Druck bei 60°C verdampft. Die resultierende Flüssigkeit wurde mit 3 Volumen Ether extrahiert und 24 h erschöpfend gegen Wasser dialysiert. Das dialysierte Gemisch wurde gefriergetrocknet, um eine weiße, lockere, watteartige Substanz zu ergeben.
b) GCP21 (initiales Verhältnis von Glykolchitosan : Palmitoyl-Einheiten (2 : 1))
200 mg Glykolchitosan (GC) und 150 mg Natriumbicarbonat wurden in 35 ml Wasser aufgelöst. 10 ml absolutes Ethanol wurden zugefügt, gefolgt von einer tropfenweise Zugabe einer Lösung aus 150 mg Palmitoyl-N-hydroxysuccinimidester, aufgelöst in 120 ml absolutem Ethanol. Das Zufügen des Palmitoyl-N-hydroxysuccinimidesters wurde unter Rühren über 30 Minuten durchgeführt. Das Reaktionsgemisch war initial trüb, wurde aber nach ca. 6 h klar. Das Reaktionsgemisch wurde 72 h rühren lassen. Nach dieser Zeit wurden 100 ml Aceton unter Bildung eines leichten Präzipitats zugefügt. Dieses Gemisch wurde dann zu einem reduzierten Volumen unter reduziertem Druck bei 60°C verdampft. Die resultierende Flüssigkeit wurde mit 3 Volumen Diethylether extrahiert und 24 h erschöpfend gegen Wasser dialysiert. Das dialysierte Gemisch wurde zu einer weißen, lockeren, watteartigen Substanz gefriergetrocknet. Diese wurde mit Wasser gewaschen und die klebrige Masse gefriergetrocknet, um eine lockere, watteartige Substanz zu ergeben.
c) Charakterisierung von GCP41
¹H-NMR
Glykolchitosan ist in Wasser mäßig löslich (2 mg ml^–1), und es wurden am Glykolchitosan in (D₂O, Sigma Chemical Co., UK) und GCP41 in einem CD₃OD/D₂O-Gemisch unter Verwendung eines Bruker AMZ 400 MHz ¹H-NMR- (mit Integration) und ¹H,¹H-COSY-Experimente durchgeführt, um die nicht austauschbar gekoppelten Protonen zuzuordnen.
FT-IR
FT-IR wurde mit Kaliumbromid-Scheiben an einem Mattson Galaxy FT-IR durchgeführt.
Der Grad der hydrophoben Modifikation in GCP41 und der urspüngliche Grad der Acetylierung in Glykolchitosan wurden anhand der ¹H-NMR beurteilt (Vårum et al. 1991, Yoshioka et al. 1993). Auf diese Weise wurde festgestellt, dass die verwendete Glykolchitosan-Charge (Sigma Chemical Co., UK – 105H0111) zu einem Drittel acetyliert war. Die Protonen-Zuordnungen waren wie folgt:
δ 0,86 ppm = CH₃ (Palmitoyl) δ 1,25 ppm = CH₂ (Palmitoyl), δ 1,89 ppm = CH₂ (Palmitoyl – abgeschirmt durch Carbonyl), δ 2,13 ppm = CH₃ (Acetyl – GCP41), δ 2,14 ppm = CH₂ (benachbart zu den Carbonyl-Protonen),
δ 1,99 ppm = CH₃ (Acetyl – Glykolchitosan), δ 2,71 ppm = CH (C₂-Zucker- Proton – GCP41), δ 2,64 ppm = CH (C₂-Zucker-Proton – GCP41), δ 3,31 ppm = Methanol-Protonen, δ 3,3–4,0 ppm = nicht austauschbare Zucker-Protonen, δ 4,4 ppm = Wasser-Protonen. Der Grad der hydrophoben Modifikation in GCP41 wurde unter Verwendung des Verhältnisses von nicht austauschbaren C₂-Protonen zu Methyl-Protonen (Spektrum b) beurteilt, und es wurde ermittelt, dass es 14,48 ± 2,88% (Mittelwert ± SD, n = 3) mit zwischen 11 und 16 Mol-% liegenden Werten beträgt. Das Verhältnis der N-Acetyl-Protonen, C₂-Zucker-Protonen, 9 zusätzlichen nicht austauschbaren Zucker/Glykol-Protonen bleibt in allen drei Spektren bei (ca. 1 : 1 : 10).
GCP41 war unlöslich, wenngleich in D₂O dispergierbar, um eine trübe Flüssigkeit zu geben, die mindestens 4 Wochen lang ohne Sediment blieb. Den ¹H-NMR-Spektren einer frischen Probe dieser Dispersion mangelt es an Signalen für die Protonen der Fettsäureseitenkette. Dies deutet darauf hin, dass Palmitoylglykolchitosan in Wasser eine Ausrichtung annimmt, worin die Fettsäureseitenketten in hydrophoben Domänen vorliegen, die vom hydrophilen Teil des Polymers getrennt sind. Die Acetylgruppe scheint ein integraler Teil des hydrophilen Anteils des Moleküls im modifizierten Polymer zu sein, da Signale für die Acetylgruppen in den GCP41-D₂O-Spektren deutlich zu sehen sind. Folglich bestand keine kooperative Assoziation zwischen der Acetylgruppe und den hydrophoben Seitenketten, wenn Palmitoylglykolchitosan in Wasser dispergiert war. Die Gefrierbruch-Elektronenmikroskopie wies in dieser trüben Flüssigkeit nicht auf das Vorliegen irgendeiner wahrnehmbaren partikulären Substanz hin.
Das FT-IR-Spektrum für GCP41 ließ eine Verschärfung des Amid-Peaks bei 1648 cm^–1 erkennen. Das Ausgangsmaterial Glykolchitosan enthält bei 1653 cm^–1 einen relativ kleineren Amid-Peak.
BEISPIEL 2
HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON GCP41- UND GCP21-MIKRO- UND NANOPARTIKELN
a) GCP21-Cholesterin-Partikel
7,2 mg Cholesterin wurden in 10 ml Chloroform aufgelöst. Dieser Lösung wurden 12,2 mg GCP21 zugefügt. Das organische Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und die feste Ablagerung unter einem Stickstoffstrom getrocknet. Dieser festen Ablagerung wurden 2 ml wässriges CF (5 mM) zugefügt und das Gemisch 1 h bei 70°C zur Bildung einer homogenen Dispersion aus Mikropartikeln geschüttelt.
0,1 ml dieser Dispersion wurden dann über einer Sephadex G50-Säule (205 × 8 mm) fraktioniert und die im Totvolumen eluierende Probe gesammelt. Diese Probe wurde in einem Malvern Mastersizer klassiert. Der Assay auf eingeschlossenes Material wurde durch Solubilisieren der Partikel in Isopropanol (0,1 ml Dispersion zu 1 ml Isopropanol) durchgeführt. CF wurde dann anhand der Fluorometrie (Anregung = 486 nm, Emission = 514 nm) bestimmt.
b) GCP21-Cholesterin-Soluan-C24-Partikel
6,2 mg Cholesterin und 5,4 mg Soluan-C24 wurden in 10 ml Chloroform aufgelöst. Dieser Lösung wurden 11 mg GCP21 zugefügt. Das organische Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und die feste Ablagerung unter einem Stickstoffstrom getrocknet. Dieser festen Ablagerung wurden 2 ml wässrige CF (5 mM) zugefügt und das Gemisch zur Bildung einer homogenen Dispersion aus Mikropartikeln 1 h bei 70°C geschüttelt.
Die Nanopartikel wurden durch Filtration dieser Dispersion (0,22 μm) hergestellt.
0,1 ml dieser Dispersionen wurden dann über einer Sephadex G50-Säule (205 × 8 mm) fraktioniert und die im Totvolumen eluierende Probe gesammelt. Diese Probe wurde in einem Malvern Mastersizer oder Autosizer, abhängig von der Partikelgröße, klassiert. Der Assay auf eingeschlossenes Material wurde durch Solubilisieren der Partikel in Isopropanol (0,1 ml Dispersion zu 1 ml Isopropanol) durchgeführt. CF wurde dann mittels Fluorometrie (Anregung = 486, Emission = 514 nm) bestimmt.
c) GCP41-Cholesterin-Partikel
7,3 mg Cholesterin wurden in 10 ml Chloroform aufgelöst. Dieser Lösung wurden 19,8 mg GCP41 zugefügt. Das organische Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und die feste Ablagerung unter einem Stickstoffstrom getrocknet. Dieser festen Ablagerung wurden 2 ml wässrige CF (5 mM) zugefügt und das Gemisch zur Bildung einer homogenen Dispersion aus Mikropartikeln 1 h bei 70°C geschüttelt.
0,1 ml dieser Dispersion wurden dann über einer Sephadex G50-Säule (205 × 8 mm) fraktioniert und die im Totvolumen eluierende Probe gesammelt. Diese Probe wurde in einem Malvern Mastersizer klassiert. Der Assay auf eingeschlossenes Material wurde durch Solubilisieren der Partikel in Isopropanol (0,1 ml Dispersion zu 1 ml Isopropanol) durchgeführt. CF wurde dann mittels Fluorometrie (Anregung = 486 nm, Emission = 514 nm) bestimmt.
d) GCP41-Cholesterin-Solulan-C24-Partikel
6,5 mg Cholesterin und 5,4 mg Solulan-C24 wurden in 10 ml Chloroform aufgelöst. Dieser Lösung wurden 17,3 mg GCP41 zugefügt. Das organische Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und die feste Ablagerung unter einem Stickstoffstrom getrocknet. Dieser festen Ablagerung wurden 2 ml wässriges CF (5 mM) zugefügt und das Gemisch zur Bildung einer homogenen Dispersion aus Mikropartikeln 1 h bei 70°C geschüttelt.
Die Nanopartikel wurden durch Filtration dieser Dispersion (0,22 μm) gebildet.
0,1 ml dieser Dispersion wurden dann über einer Sephadex G50-Säule (205 × 8 mm) fraktioniert und die im Totvolumen eluierende Probe gesammelt. Diese Probe wurde in einem Malvern Mastersizer oder Autosizer klassiert. Der Assay auf eingeschlossenes Material wurde durch Solubilisierung der Partikel in Isopropanol (0,1 ml Dispersion zu 1 ml Isopropanol) durchgeführt. CF wurde dann mittels Fluorometrie (Anregung = 486 nm, Emission = 514 nm) bestimmt.
Die Größen und Einkapselungseffizienzen sind in Tabelle 1 ersichtlich.
BEISPIEL 3
HERSTELLUNG VON IN VESIKELN EINGESCHLOSSENEM BLEOMYCIN
Es wurden GCP41-Vesikel durch Beschallung von GCP41 (8 mg) und Cholesterin (4 mg, Sigma Chemical Co., UK) in Wasser 2 × 2 Minuten mit dem bei 20% seiner Maximalkapazität eingestellten Instrument hergestellt. Bleomycin-GCP41-Vesikel wurden durch Beschallung von GCP41 (8 mg) und Cholesterin (4 mg) in 2 ml Ammoniumsulfat (0,12 M, Sigma Chemical Co., UK) hergestellt. Nicht eingeschlossenes Ammoniumsulfat wurde durch Ultrazentrifugation (150 000 g × 1 h – MSE 75 Superspeed) entfernt. Die Vesikel wurden dann 1 h bei 60°C mit Bleomycin-Lösung (2 ml, 6 U ml^–1) (Lundbeck, UK) inkubiert und über Nacht bei Raumtemperatur stehen lassen. Nicht eingeschlossenes Bleomycin wurde auch durch Ultrazentrifugation (150 000 g × 1 h) entfernt, und der Einschluss wurde durch Zerreißen der Vesikel in Isopropanol (10 × Volumen) (Rathburn Chemical Co., UK), gefolgt von der Ultraviolett-Absorptionsspektrometrie bei 254 nm (Unicam UV-1) gemessen.
Bei der Lagerung bei Raumtemperatur trat ein initialer Verlust von Bleomycin auf, obwohl über 60% des Arzneimittels in den Vesikeln zurückgehalten werden (siehe 1). Es wurde auch festgestellt, dass sich die Partikelgröße sehr wenig änderte. Die Stabilitätsdaten deuten darauf hin, dass eine lose gebundene und eine mit GCP41-Vesikeln assoziierte fest gebundene Bleomycin-Fraktion vorliegt. Es wird angenommen, dass die fest gebundene Fraktion die Bleomycin-Fraktion ist, die die Membran des polymeren Vesikels überquert und sich tatsächlich in ihr als Reaktion auf den Ammoniumsulfat-Gradienten akkumuliert.
BEISPIEL 4
5(6)-CARBOXYFLUORESZEIN-FREISETZUNG AUS VESIKELN
Die Vesikel wurden wie in Beispiel 3 beschrieben aus GCP41 (16 mg) und Cholesterin (8 mg) hergestellt, außer dass es sich bei der Hydratisierungslösung um 4 ml 5(6)-Carboxyfluoreszein (5,03 mM, Sigma Chemical Co., UK) handelte. Die Sorbitan-Monostearat-Vesikel wurden durch Hydratisieren von Sorbitan-Monostearat (24 mg, Sigma Chemical Co., UK), Cholesterin und Poly-24-oxyethylencholesterylether (16 mg, D. F. Anstead, UK) in Gegenwart von 4 ml 5(6)-Carboxyfluoreszein (5,03 mM) hergestellt. Nicht eingeschlossenes Material wurde wieder durch Ultrazentrifugation wie in Beispiel 3 beschrieben entfernt. Die Freisetzung von 5(6)-Carboxyfluoreszein aus GCP41 und Sorbitan-Monostearat-Vesikeln wurde wie folgt überwacht. Ein Gemisch (1 : 2) aus den Vesikeln und 2 Gew.-% Gallensalzen (Natriumcholat und Natriumdesoxycholat, Sigma Chemical Co., UK) wurden in ein 5 cm langes Visking-Schlauchstück (MG-Cutoff 12 000–14 000) gegeben und an beiden Enden fest verschlossen. Dieses Gemisch wurde gegen ein 13faches Volumen der Gallensalz-Lösung dialysiert. 5(6)-Carboxyfluoreszein extern zum Dialyseschlauch wurde in regelmäßigen Zeitabständen fluorometrisch überwacht (Anregung = 486, Emission = 514 nm, Perkin Elmer LS-5). Ein Gemisch (1 : 2) aus 5(6)-Carboxyfluoreszein in Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS, pH = 7,4) (0,5 ml) und 2 Gew.-% Gallensalzen (1 ml) wurden als Kontrolle eingeschlossen.
Unter Verwendung der Freisetzung der Verbindung 5(6)-Carboxyfluoreszein mit kleinem Molekulargewicht (MG = 387) als ein Marker für die Vesikelintegrität wurde festgestellt, dass diese polymeren Vesikel gegen eine Attacke durch Detergenzien widerstandsfähiger sind als Vesikel, die aus dem nichtionischen Tensid Sorbitan-Monostearat hergestellt wurden (siehe 2). Es wird angenommen, dass dies auf die Schwierigkeit zurückzuführen ist, die lösliche Gallensalz-Tenside beim Insertieren in eine polymere Doppelschicht im Vergleich zur Leichtigkeit der Insertion in eine Doppelschicht, die sich aus der Selbstassemblierung von Monomeren ergibt, aufweisen.
BEISPIEL 5
BIOKOMPATIBILITÄT UND HÄMOKOMPATIBILITÄTSSTUDIEN
Biokompatibilitätsstudien
Die Cytotoxizität wurde anhand des IC50-Wertes in einem auf MTT-basierenden Standardassay (Freshney et al., Culture of Animal Cells, 3. Auflage, Wiley-Liss, New York, 1994) bewertet. In Abhängigkeit von der Wachstumsrate wurden 0,5 – 2,0 × 10³ Zellen pro Vertiefung in Platten mit 96 Vertiefungen geimpft und 24 h inkubiert. Es wurden Reihenverdünnungen der Suspensionen zugefügt und 12 h mit den Zellen inkubiert. Die Suspensionen wurden gegen frisches Medium ausgetauscht, und die Zellen wurden mit wiederholter Einspeisung 72 h inkubiert. Jeder Vertiefung wurden 50 mg ml^–1 MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (50 μl, Sigma Chemical Co., UK) zugefügt. Nach 4-stündiger Inkubation im Dunkeln wurden das Medium und die MTT-Lösung entfernt, und die Zellen wurden in DMSO (200 μl, Sigma Chemical Co., UK) lysiert. Nach dem Zufügen von S⌀rensen-Glycinpuffer (25 μl) wurde die Absorption bei 570 nm gemessen.
Hämokompatibilitätsstudien
Frisch entnommenes humanes Blut wurde zentrifugiert (3 000 g), um die roten Blutzellen zu trennen. Diese wurden mit PBS (pH = 7,4) gewaschen und gewogen. 3 g des Erythrozytenpellets wurden in 100 ml PBS (pH = 7,4) dispergiert und 5 h mit verschiedenen Konzentrationen von GCP41-, Cholesterin-Vesikeln, die wie vorstehend beschrieben hergestellt wurden, oder DOTAP-Vesikeln (Sigma Chemical Co., UK) inkubiert. Die Hämolyse wurde durch Zentrifugation (3 000 g) zur Isolierung des freigesetzten Hämoglobins, Zufügen von Isopropanaol (2 × Volumen) zum Überstand und die Messung der Absorption (570 nm) beurteilt.
GCP41-Vesikel waren mit 3 humanen Zelllinien A2780 (Ovarialkarzinom-Zelllinie), A549 (Lungenkarzinom) und A431 (Epidermoidkarzinom) mit keiner evidenten Toxizität bei GCP41-Konzentrationen unter 150 μg ml^–1 und IC50-Werten von 0,2, 1,0 bzw. 1,0 mg ml^–1 biokompatibel (3). Die GPC41-Vesikel zeigten eine gute Hämokompatibilität mit humanen Erythrozyten und eine Fähigkeit, die hämolytische Aktivität von N-[1-(2,3-Dioloyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammoniummethylsulfat (DOTAP) – das DNA-Transfektionsmittel – zu modulieren (Porteous et al., (1997) Gene Therapy 4 210–218), (Tabelle 2). Diese Biokompatibilitätsdaten stimmen gut mit denen überein, die für lösliches Glykolchitosan gegen die B16F10-Zelllinie und Rattenerythrozyten berichtet wurden (Carreno-Gomez und Duncan (1997) Int. J. Pharm. 148, 231–240.
BEISPIEL 6
HERSTELLUNG VON IN VESIKELN EINGESCHLOSSENEM INSULIN UND LHRH
GCP21 wurde gemäß Beispiel 1 hergestellt:

a) Insulin. Die GCP21-Vesikel wurden durch Beschallung eines Gemischs aus GCP21 (8 mg) und Cholesterin (4 mg) in 2 ml Wasser hergestellt. Die GCP21-Vesikel wurden mit Insulin durch entweder Inkubation von 1 ml der Vesikel-Dispersion mit 1 ml Insulin (160 IU ml^–1) 16 h bei Raumtemperatur oder durch die Verwendung des Dehydratation-Rehydratationsverfahrens (DRV-Verfahren) beladen (Kirkby C., Gregoriadis G. (1984) Biotechnology 979–984), worin die Insulin-Vesikel-Gemische, wie vorstehend beschrieben, über Nacht lyophilysiert und anschließend auf ein Volumen von 2 ml rehydratisiert wurden. Die eingeschlossene Insulinmenge wurde mittels HPLC nach der Trennung von eingekapseltem Insulin vom nicht eingekapselten Material durch Ultrazentrifugation (150 000 g) und Zerreißen der Vesikel mit Isopropanol (1 ml Isopropanol zu 1 ml der Vesikeldispersion) beurteilt. Die Vesikel wurden auch anhand der Photonenkorrelationsspektroskopie klassiert und des Zeta-Potenzials der Dispersion gemessen.
b) Luteinisierendes Hormon-Releasing-Hormon (LHRH). LHRH wurde unter Verwendung von Ammoniumsulfat-Gradienten auf GCP21-Vesikel geladen (Haran, G. et al. (1993) Biochim. Biophys. Acta 1151, 210–205). Vesikel, die Ammoniumsulfat einschließen, wurden durch Beschallung von GP21 (8 mg), Cholesterin-Gemischen (4 mg) in 2 ml einer Lösung aus Ammoniumsulfat (0,03 M) hergestellt. Nicht eingeschlossenes Ammoniumsulfat wurde durch Ultrazentrifugation (150 000 g) getrennt, und die pelletierten Ammoniumsulfat-Vesikel wurden mit 2 ml LHRH (2,5 mg ml^–1) inkubiert. Nicht eingeschlossenes LHRH wurde auch durch Ultrazentrifugation (eine Stunde bei 150 000 g) entfernt. Diese Vesikel wurden auch anhand der Photonenkorrelationsspektroskopie klassiert.
a) Insulin. Die Insulin-GCP21-Vesikel konnten durch Inkubation von vorgeformten GCP21-Vesikeln mit Insulin ca. 16 h bei Raumtemperatur inkubiert werden (Tabelle 3). Es wurde mit dem DRV-Verfahren keine Verbesserung des Anteils von mit den Vesikeln assoziiertem Insulin beobachtet. Das Zeta-Potenzial der GCP21-Vesikel nahm beim Beladen mit Insulin von –5 mV auf +10 mV zu, was darauf hindeutet, dass sich das Insulin bis zu einem bestimmten Grad mit der Oberfläche der Vesikel assoziiert.
b) LHRH. Die LHRH-Vesikel konnten auch durch die Verwendung von Ammoniumsulfat-Gradienten hergestellt werden (Tabelle 4).

TABELLE 1: Größe und CF-Einkapselungseffizienz von GCP21- und GCP41-Partikeln
TABELLE 2: Die Hämokompatibilität von GCP41-Vesikeln
TABELLE 3: Die Größe und Einkapselungs-Effizienz von Insulin-GCP21-Vesikeln
TABELLE 4: Die Einkapselung von LHRH in GCP21-Vesikeln

Claims

Pharmazeutische Zusammensetzung, aufweisend Partikel, welche Partikel unverzweigte Polysaccharid-Derivate aufweisen, wobei jedes Polysaccharid-Derivat mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe trägt und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül, und einen pharmazeutisch zulässigen Träger, wobei die hydrophile Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und die hydrophobe Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und wobei die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest aufweist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin die nichtionische hydrophile Gruppe eine Gruppe R¹ ist, worin R¹ ausgewählt ist aus Mono- und Oligo-Hydroxy-C_1-6-Alkyl, Mono- und Oligo-Hydroxy-substituiertes C_2-6-Acyl, C_1-2-Alkoxyalkyl, Oligo- oder Poly-(Oxa-C_1-3-alkylen) und C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen); und worin R¹ über eine Etherverknüpfung mit einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharids verbunden ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2, bei welcher das C_1-2-Alkoxyalkyl eine oder mehrere Gruppen hat, substituiert an den Alkoxy- oder Alkylen-Gruppen.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2, worin das Oligo- oder Poly-(Oxa-C_1-3-alkylen) Polyoxyethylen ist, das bis zu 120 Ethylenoxid-Einheiten aufweist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 2, bei welcher das C_1-4-Alkyl(oligo- oder polyoxa-C_1-3-alkylen) Hydroxy-substituiert ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 5, worin das Hydroxy-substituierte C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen) Oligo- oder Polyglycerinether ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, worin das Polysaccharid 1,4-verknüpfte Monosaccharid-Einheiten hat.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 7, worin jede nichtionische hydrophile Gruppe substituiert ist an der C₆-Position einer Monosaccharid-Einheit.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 7 oder Anspruch 8, worin die hydrophobe Gruppe an der C₂-Position substituiert ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, worin der Substitutionsgrad durch nichtionische hydrophile Gruppen 0,1 bis 1,5 pro Monosaccharid-Einheit beträgt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 10, worin der Substitutionsgrad durch nichtionische hydrophile Gruppen mindestens 0,9 pro Monosaccharid-Einheit beträgt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, worin das Verhältnis von hydrophilen : hydrophoben Gruppen im Bereich von 100 : 1 bis 1 : 2 liegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 12, worin das Verhältnis von hydrophilen : hydrophoben Gruppen im Bereich von 10 : 1 bis 2 : 1 liegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 13, worin das Verhältnis von hydrophilen : hydrophoben Gruppen im Bereich von 5 : 1 bis 2 : 1 liegt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, worin die hydrophobe Gruppe über eine Amid-, Ester-, Ether, oder Amin-Verknüpfung mit einer Monosaccharid-Einheit verbunden ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, worin das Polysaccharid ein Derivat von Chitosan, Pullulan oder Dextran ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, die ein N-substituiertes Derivat von Polyaminoglykan ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, worin das N-substituierte Derivat eines Polyaminoglykans ein N-Acylglykolchitosan ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17 oder 18, worin das N-Acylglykolchitosan N-Palmitoylglykolchitosan ist.
Zusammensetzung, aufweisend Partikel, die erzeugt sind aus einer Verbindung mit der Formel:
worin jedes R¹ ausgewählt ist aus: Wasserstoff, Mono- und Oligo-Hydroxy-C_1-6-Alkyl, Mono- und Oligo-Hydroxy-substituiert-C_2-6-Acyl, C_1-2-Alkoxyalkyl, Oligo- oder Poly-(oxa-C_1-3-alkylen) und C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen) unter der Voraussetzung, dass mindestens eine der Gruppen R¹ nicht Wasserstoff ist; A ist -NH- oder -O-; R² ist ausgewählt aus Wasserstoff, C_12-24-Alkyl, -Alkanoyl, -Alkenyl, -Alkenoyl, -Alkinyl oder -Alkinoyl unter der Voraussetzung, dass mindestens eine der Gruppen R² nicht Wasserstoff ist; und n beträgt 5 bis 2.000.
Zusammensetzung nach Anspruch 20, worin das C_1-2-Alkoxyalkyl eine oder mehrere Hydroxy-Gruppen substituiert an den Alkoxy- oder Alkylen-Gruppen hat.
Zusammensetzung nach Anspruch 20, worin das Oligo- oder Poly-(oxa-C_1-3-alkylen) Polyoxyethylen ist, das bis zu 120 Ethylenoxid-Einheiten aufweist.
Zusammensetzung nach Anspruch 20, worin das C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen) Hydroxy-substituiert ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 23, worin das C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen) Hydroxy-substituiert ist unter Verwendung von Polyglycerinethern.
Zusammensetzung nach Anspruch 24, worin das C_1-4-Alkyl(Oligo- oder Polyoxa-C_1-3-alkylen) Hydroxy-substituiert ist unter Anwendung von Polyglycerinethern, die bis zu 10 Glycerin-Einheiten enthalten.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 20 bis 25, worin R¹ -CH₂CH₂OH oder -CH₂CH(OH)CH₂OH ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 20 bis 26, worin R² C_16-18-Acyl ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 20 bis 27, worin A -NH- ist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, die ein wässriges Vehikel aufweist, worin die Partikel suspendiert sind.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, die zusätzlich Cholesterin oder ein Derivat davon aufweist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 30, die ferner ein sterisches Stabilisiermittel aufweist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 31, worin das sterische Stabilisiermittel eine nichtionische amphiphile Verbindung ist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 32, worin das sterische Stabilisiermittel ein Poly-24-oxyethylencholesterylether ist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, ferner aufweisend einen pharmakologisch zulässigen Träger.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche, die einen pharmazeutisch aktiven Wirkstoff in Verbindung mit den Partikeln aufweist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 35, die einen eingeschlossenen pharmazeutisch aktiven Wirkstoff aufweist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 35 und 36, die einen kovalent konjugierten pharmazeutisch aktiven Wirkstoff aufweist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 35 bis 37, worin der pharmazeutisch aktive Wirkstoff eine Peptid- oder Protein-therapeutische Verbindung oder DNA ist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 38, worin die DNA ein Gen für die Gentherapie oder Genvakzination ist.
Zusammensetzung oder pharmazeutische Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche zur Verwendung in der Therapie.
Verwendung einer Zusammensetzung oder pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Therapie.
Verwendung einer Zusammensetzung oder pharmazeutischen Zusammensetzung nach einem der vorgenannten Ansprüche und eines pharmazeutisch aktiven Wirkstoffes für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Therapie.
Polysaccharid-Derivat, mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe tragend und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül, worin die hydrophile Gruppe in der C₆-Position mit einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls verbunden ist und worin die hydrophobe Gruppe in der C₂-Position mit einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls über eine Amid-Verknüpfung oder Amin-Verknüpfung verbunden ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest aufweist.
Polysaccharid-Derivat, mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe tragend und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül zur Verwendung in der Therapie, worin die hydrophile Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und worin die hydrophobe Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest aufweist.
Verwendung eines Polysaccharid-Derivats, mindestens eine nichtionische hydrophile Gruppe tragend und mindestens eine hydrophobe Gruppe pro Polysaccharid-Molekül für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Therapie, worin die hydrophile Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und worin die hydrophobe Gruppe an einer Monosaccharid-Einheit des Polysaccharid-Moleküls angebracht ist und worin die hydrophobe Gruppe einen C_12-24-Alkyl-, -Alkenyl-, -Alkinyl- oder -Acyl-Rest aufweist.