DK168443B1

DK168443B1 - Pyrimid-2-on-1-yl-forbindelser, farmaceutiske præparater indeholdende disse forbindelser og fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne

Info

Publication number: DK168443B1
Application number: DK696988A
Authority: DK
Inventors: Roelf Datema; Zsuzanna Maria Ilona Kovacs; Karl Nils Gunnar Johansson; Bjoern Gunnar Lindborg; Goeran Bertil Stening; Bo Fredrik Oeberg
Original assignee: Medivir Ab
Priority date: 1987-04-16
Filing date: 1988-12-15
Publication date: 1994-03-28
Also published as: JPH01503069A; HU211547A9; DK696988A; AU614082B2; SE8701605D0; DK696988D0; WO1988008001A1; ATE115958T1; DK104994A; DK108491D0; AU1689988A; CA1336088C; DE3852531T2; DK108491A; DE3852531D1

Description

i DK 168443 B1

Den foreliggende opfindelse angår kemiske forbindelser med den i krav 1 angivne formel I og terapeutisk acceptable salte heraf til anvendelse ved terapeutisk og profylaktisk kontrol og behandling af erhvervet immundefekt 5 syndrom (AIDS), infektioner med human immundefekt-virus, hepatitis B-virusinfektioner og retrovirus infektioner hos dyr og mennesker, terapeutiske præparater indeholdende sådanne forbindelser, samt fremgangsmåde til fremstilling af disse.

10 I den sidste del af 1970'erne blev en ny sygdom rapporteret, der senere blev betegnet som erhvervet immundefekt-syndrom (AIDS). Det er nu generelt accepteret, at et retrovirus betegnet HIV (human immundefekt virus), tidlige-15 re betegnet human T-celle lymphotrop virus (HTLV-III) eller lymphadenopathi associeret virus (LAV) spiller en afgørende rolle i ætiologien af AIDS.

AIDS er karakteriseret ved en alvorlig immunmangel på 20 grund af lave antal af en undergruppe af lymphocyt-T-hjælperceller, der er et mål for HIV-infektion. Den alvorlige immunmangel hos AIDS patienter gør disse patienter stærkt modtagelige for en hel række tilfældige infektioner af bakteriel, svampe, protozo eller viral 25 ætiologi. De ætiologiske agens blandt virale tilfældige infektioner findes ofte inden for herpes virusgruppen, dvs. Herpes simplex virus (HSV), varicella zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV) og specielt cytomegalovirus (CMV). Andre retrovira, der påvirker mennesker, er 30 HTLV-I og II og eksempler på retrovira, der påvirker dyr, er katteleukæmivirus og hesteinfektiøs anæmivirus.

Hepatitis B virus infektioner forårsager alvorlige sygdomme som f.eks. akut hepatitis, kronisk hepatitis og 35 fulminant hepatitis hos et betydeligt antal personer. Man har beregnet, at der findes 200 mio patienter med kronisk hepatitis B infektion i verden. Et betydeligt antal af de 2 DK 168443 B1 kroniske tilfælde går over til levercirrosis og levertumorer. I visse tilfælde tager hepatitis infektionerne også en alvorlig og hurtig vending til fulminant B hepatitis med ca. 90% dødelighed. Der kendes for øjeblikket in-5 gen effektiv behandling af hepatitis B infektioner.

Et stort antal nucleosidanaloge udviser indtil flere an-timetaboliske aktiviteter. Dette sker ved at erstatte eller konkurrere med naturligt forekommende nucleosider.

10 For nylig har man beskrevet visse nucleosidanaloge, der i cellekultur hæmmer multiplikation af human immundefekt virus (HIV, også betegnet HTLV-III, LAV), der er det kau-sative agens for AIDS og det AIDS-relaterede kompleks (ARC). Disse forbindelser er for eksempel azidothymidin, 15 dideoxycytidin og dideoxyadenosin. Disse og andre beskrevne HIV-antimetaboliske nucleosidanaloge har det samme geometriske forhold mellem nucleosidbasen og glycosid-delen som de naturligt forekommende nucleosider, dvs. de er Ø-anomere.

20 Følgende β-anomere forbindelser er kendte: 1. Forbindelser med formlen 25 Å ^ wr lF^ R3 30 / \ Η0_1^ 0/ 3 1 hvor R betegner OH, og R betegner følgende: 35 R^ er H og CH^: T. Nishimura, B. Shinizu, I. Iwai, Chem.

Pharm. Bull. (Tokyo) 12 (1964, 1471) 3 DK 168443 B1 R er C2H5: m· Swierkowski,D. Shugar, J. Med. Chem.

12 (1969), 533 R"*· er n-CgH^: A. Szaboles, J. Sågi, L. Otvos, J. Carbo- 5 hydrates, Nucleosides, Nucleosides 2 (1975), 197-211 i R er i-CgH^: M. Draminski, A. Zgit-Wroblewska, Polish J. Chemistry 54 (1980), 1085 10 R1 er C=CH: P.J. Barr, A.S. Jones, P. Serafinowski, R. Walker, J. Chem. Soc. Perkin I (1978), 1263-1267 3 1 15 og hvori R er Ng, og R er CH^: M. Imezawa, F. Eckstein, J. Org. Chem. 43 (1978), 3044-3048.

2. Forbindelser med formlen NH- 20 . 2 n^Y'R1

OH

” A

H0_I

30 R1 er C=CH er beskrevet af P.J. Barr, A.S. Jones, P. Serafinowski, R. Walker, J. Chem. Soc. Perkin I (1978), 1263-1267 R er H er beskrevet af J.J. Fox, N.C. Yung, I. Wempen og 35 M. Hoffer, J. Am. Chem. Soc., Vol. 83 (1961), 4066-4070.

4 DK 168443 B1 Både gruppe 1 og 2 angår kun forbindelser med 3'-gruppen og 4’-hydroxymethylgruppen i trans-konfiguration.

Herudover beskriver C.A. vol 92 (1980) 208903d den anti-5 virale virkning af α-anomeren af 5-isopropyl 2’-deoxyuri-din.

FR-patentskrift nr. 2 040 177 og DK patentansøgning nr. 3722/83 beskriver henholdsvis β-anomere 5-propyl-2'-des-10 oxyribosyluracilderivater og a-anomere 5-halogenethyl-2' desoxyuridinderivater, der udviser antiviral virkning.

Samtlige ovenfor nævnte kendte α-anomere forbindelser udviser aktivitet overfor Herpes-virus, hvorimod disse for-15 bindeiser ikke har antiviral virkning overfor HIV og hepatitis B virus. En undersøgelse af de kendte forbindelser Acyclovir og Ganciclovirs virkning overfor hepatitis B virus er anført nedenfor i tabel 2.

20 Det har nu overraskende vist sig, at visse hidtil ukendte a-anomere pyrimid-2-on-l-yl-forbindelser er kraftige inhibitorer af HIV multiplikation, men ikke af celledeling.

Disse forbindelser ifølge opfindelsen med den i krav 1 25 angivne formel I, der er α-anomere, og terapeutisk acceptable salte heraf kan anvendes som terapeutiske og/-eller profylaktiske midler til kontrol og behandling af HIV virusinfektioner hos pattedyr og mennesker.

30 Mere generelt kan de omhandlede forbindelser med formlen I anvendes som terapeutiske og/eller profylaktiske midler til kontrol og behandling af infektioner forårsaget af retrovira og hepatitis B virus hos pattedyr og mennesker.

35 Alle retrovira, herunder HIV, kræver enzymet revers trånsskriptase i deres naturlige formeringscyklus.

5 DK 168443 B1

Hepatitis B virus (HBV) er et DNA virus med et unikt cirkulært dobbeltstrenget DNA genom, der er delvist enkelt-strenget. Det indeholder en specifik DNA polymerase, der er nødvendig for viral kopiering. Denne DNA polymerase 5 virker også som en revers transskriptase under kopieringen af HBV DNA via et RNA mellemprodukt.

Forbindelserne med formlen I hæmmer aktiviteten af revers transskriptase fra retrovira, herunder HIV, såvel som 10 aktiviteten af DNA polymerase fra hepatitis B virus.

Opfindelsen angår således: 1. de forbindelser, som er defineret i krav 1 til 8 15 2. farmaceutiske præparater, der omfatter en forbindelse ifølge krav 1 som den aktive bestanddel, omhandlet i krav 11 20 3. en forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse som læge middel omhandlet i krav 9 4. en forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved terapeutisk behandling af infektion hos mennesker for- 25 årsaget af HIV virus, omhandlet i krav 10, og ved fremstilling af et lægemiddel til terapeutisk og/eller profylaktisk behandling af infektioner forårsaget af en retrovirus, herunder HIV, eller af hepatitis B virus, omhandlet i krav 12 og 30 5. en fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, omhandlet i krav 13.

Udtrykket "alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer" for grup-35 pen R1 betyder CH3, CgHg, CH2CH2CH3 og CH(CH3)2.

3 6 DK 168443 B1 R i formel I er F eller CI^OH, og begge kan have enten cis-konfiguration eller trans-konfiguration i forhold til hydroxymethylgruppen ved stilling 4’.

5 Eksempler på foretrukne forbindelser er: 0 A/ T j 10 °An R3

H

15

R1 er CH3; R3 er CH20H R1 er CH3; R3 er F R1 er C2H5; R3 er CH20H 20 R1 er C2H3; R3 er F

nh2 nAX.

sO

A

HO_I

30 R3 er CH20H eller F.

3 I alle eksemplerne for foretrukne forbindelser har R ved stilling 3’ og hydroxymethyl ved stilling 4' trans-konfiguration.

35 -klinisk praksis vil forbindelserne med formlen I normalt blive administreret peroralt, ved injektion eller 7 DK 168443 B1 ved infusion i form af et farmaceutisk præparat omfattende den aktive bestanddel i form af den omhandlede forbindelse eller eventuelt i form af et farmaceutisk acceptabelt salt heraf sammen med et farmaceutisk acceptabelt 5 bærestof, der kan være et fast, halvfast eller flydende fortyndingsmiddel eller en spiselig kapsel. Forbindelsen kan også anvendes uden bærematerialer. Som eksempler på farmaceutiske præparater kan nævnes tabletter, dragéer, kapsler, granulater, suspensioner, eliksirer, sirupper og 10 opløsninger. Sædvanligvis udgør den aktive forbindelse mellem 0,05 og 20% af præparater til injektionsformål og mellem 10 og 90% af præparater til peroral administrering.

15 Ved behandlingen af patienter, der lider af retrovirus infektion, specielt HIV eller hepatitis B virusinfektioner, foretrækkes det at administrere forbindelserne på en hvilken som helst passende måde, herunder ved peroral, parenteral, rectal, nasal, topisk og vaginal administre-20 ringsmåde. Den parenterale måde omfatter subkutan, intra-muskulær, intravenøs og sublingual administrering. Den topiske vej omfatter buccal og sublingual administrering.

Den dosis, med hvilken de aktive ingredienser administreres, kan variere inden for vide grænser og afhænger af 25 forskellige faktorer som f.eks. infektionens sværheds grad, patientens alder osv. og kan indstilles individuelt. Et muligt administreringsområde for de omhandlede forbindelser eller fysiologisk acceptable salte heraf er pr. dag fra ca. 10 mg til ca. 10 000 mg, fortrinsvis 100-30 500 mg til intravenøs administrering og fortrinsvis 100- 3000 mg til peroral administrering.

Eksempler på farmaceutisk acceptable salte af forbindelserne med formel I omfatter basesalte, dvs. afledt af en 35 passende base som f.eks. alkalimetal- (som natrium), jordalkalimetal- (som magnesium)- salte, ammonium og NX^+ (hvor X er alkyl). Fysiologisk acceptable salte af 8 DK 168443 B1 et hydrogenatom eller en aminogruppe omfatter salte af organiske carboxylsyrer som eddikesyre, mælkesyre, glu-consyre, citronsyre, vinsyre, maleinsyre, æblesyre, pan-totensyre, isætionsyre, ravsyre, oxalsyre og lactobionsy-5 re; organiske sulfonsyrer som methansulfonsyre, ethansul-fonsyre, benzensulfonsyre, p-chlorbenzensulfonsyre og p-toluensulfonsyrer og uorganiske syrer som saltsyre, hy-drogeniodidsyre, svovlsyre, fosforsyre og sulfaminsyre. Fysiologisk acceptable salte af en forbindelse med en hy-10 droxygruppe omfatter anionen af forbindelsen sammen med en passende kation som f.eks. Na+, NH4+ og NX4+ (hvor X er en C^_4 alkylgruppe).

De administrerede forbindelser kan også anvendes ved te-15 rapi sammen med andre lægemidler som f.eks. 9-[(2-hydr-oxy-1-(hydroxymethyl)ethoxy)-methyl]guanin, 9-(2-hydroxy-ethoxymethyl)guanin (acyclovir), 2-amino-9-(2-hydroxyeth-oxymethyl)purin, interferon, interferon, interleukin II og phosphonoformiat eller sammen med immunmodulerende te-20 rapi, herunder knoglemarvs- eller lymphocyttransplanta-tioner eller medikamentering med f.eks. levamisol eller thymosin, der vil forøge lymphocytantallet og/eller funktionen heraf afhængig af, hvad der er passende.

25 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav 13's kendetegnende del angivne.

De omhandlede forbindelser kan således fremstilles ved en af følgende almene metoder.

30 A. Kondensering af et glycosid med formel II, hvor hydr-oxylgrupperne eventuelt kan være beskyttet, til N-l stillingen af et pyrimidin-derivat, svarende til gruppen A i formel I ved kendte metoder beskrevet i litteraturen, ef-35 terfulgt af adskillelse af den α-anomere og fjernelse af eventuelle beskyttende gruppe/grupper. Sådanne fremgangsmåder er beskrevet f.eks. i "Basic Principles in Nucleic 9 DK 168443 B1

Acid Chemistry", Vol. 1 (Academic Press, 1974, udg.

P.O.P.Ts'o), i "Nucleoside Analogues, Chemistry, Biology and Medical Applications" (Pharma Press, 1979, udg. R.T. Walker, E. De Clercq og F. Eckstein) og i Nucleic Acids 5 Research Vol. 12, 1984, side 6827-6837 (A.J. Hubbard, A.S. Jones and R.T. Walker). Et eksempel på denne metode er angivet i det tilfælde, hvor det drejer sig om en uracil baseanalog: 10 R5o1/\ Γ'"3’,3 HnA^'

\ y—Hal ] I

R« 4 JL Γ -

(CH3)3SiO''^N/ r4 I

r5o_jO

II

20 hvor R^ er F eller CH0OR^, R^ er en beskyttende gruppe, f.eks. p-toluoyl, acetyl, trityl og benzyl. R er som defineret ovenfor.

25 30 35 10 DK 168443 B1 B. Anomerisering af en Ø-anomer med formlen

A

s RVX\|

P

10 4 hvor A og X er som defineret i krav 1; R er F eller 5 C^ORp.; hvor R er H eller en hydroxybeskyttende gruppe, til en blanding af a- og Ø-anomere, hvorefter den a-ano-mere fraskilles, og eventuelle beskyttende grupper fjer-15 nes. Anomeriseringen kan udføres ved kendte metoder, f.eks. med et eventuelt beskyttet /5-nucleosid, f.eks. et silyleret nucleosid med en katalysator som f.eks. trime-thylsilyltrifluormethansulfonat OSiMe, 0SiMe~ XJ --^ 0 Xj - . ^ 14 5 R , R og R er som defineret ovenfor.

30 C. En transglycosyleringsreaktion, ved hvilken sukkerdelen, der danner en binding, «- eller 0-, til en nucleo-sidbase, overføres til den ønskede pyrimidinbase. Omsætningen udføres med katalysator som f.eks. trimethylsilyl- 35 trifluormethansulfonat og efterfølges af fraskillelse af den e-anomere og fjernelse af beskyttelsen.

11 DK 168443 B1 OSHCHJ, R*0 o B I V fUCH3>3 Ύ Ί rY n"Vr1 5 Γ ^ rj 10 ' R50—l\o/ + andre produkter 15 14 5 hvor R , R og R er som defineret ovenfor. Gruppen B er en pyrimidin- eller purinbase, idet hvilken base, der anvendes, ikke er af afgørende betydning.

20 D· Indførsel af F eller CH90H i 3'-stillingen som er- z 7 statning for en passende fraspaltelig gruppe, R , efterfulgt af fjernelse af eventuelle OH-beskyttelsesgrupper.

25 30 35 12 DK 168443 B1

0 O

AA A r1

HN Y HN^VR

5 oAnJ X J· R7 _> ° " A r9 <, r5ojC/ ' r , Λ.Τ_> " , jcJ Jj

R O—1 N(K

15 7 20 R og R er defineret ovenfor, R er en let fraspaltelig g gruppe som f.eks. trifluormethansulfonyloxy, R er F βία ler et synteseforstadium for CI^OH-gruppen; R er en passende beskyttende gruppe.

O

25 En alternativ vej til indførsel af R funktionen er omsætning af den 2,31-vandfrie a-anomere.

0 0 nAr1 Jl r1 .17 Η 4ΓΛ1 35 R50—r50—· 0^ 13 DK 168443 B1 15 8 hvor k, Ra og R° er som defineret ovenfor.

Hovedprincipperne ved metoderne A-D angivet ovenfor er anvendelige til syntese af både uridin- og cytidin analo-5 ge med formlerne I (a) og (b), skønt formlerne kun illustrerer omsætningerne med uridin analoge.

E. Omdannelse af uracilgruppen af de 5-substituerede eller usubstituerede α-uridinforbindelser til en cytosin-10 gruppe af de tilsvarende α-cytidin analoge. Dette udføres på kendt måde, idet principperne er beskrevet f.eks. af W.L. Sung (J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1981, side 1089 og J. Organic Chemistry 1982, vol. 47, side 3623-3628) og af P. Herdewijn et al. (J. Medicinal Chemistry 1985, vol.

15 28, side 550-555).

Følgende eksempler illustrerer opfindelsen nærmere. Fremstilling af mellemprodukter 20 A. Fremstilling af 3’F-S'-deoxy-S*-O-acetylthymidin (VSB 423) 45 mg 31F-31-deoxythymidin (0,184 mmol) i 2,0 ml eddike-25 syreanhydrid opvarmedes under omrøring i et oliebad ved 80 °C i 7 timer. Opløsningen blev inddampet i vakuum, og det tilbageblevne eddikesyreanhydrid og eddikesyre blev fjernet ved adskillige tilsætninger og gentagne fordampninger af benzen-toluen (1:1). Remanensen anvendtes uden 30 yderligere rensning.

Fremstilling af de omhandlede forbindelser 35 14 DK 168443 B1 EKSEMPEL 1

Fremstilling af l-(3-F-2,3-dideoxy-tt-D-ribofuranosyl)thy-min (VSA 419) (metode B) 5 23 mg thymin (0,18 mmol) og S'F-S'-deoxy-S'-O'-acetylthy-midin blev opslæmmet i 1,2 ml acetonitril og 0,35 ml N,0-Bis (trimethylsilyl)-acetamid blev tilsat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i halvanden time. 0,05 ml 10 trimethylsilyltrifluormethansulfonat blev herefter tilsat. Efter omrøring ved stuetemperatur i 192 timer, ud-hældtes blandingen under omrøring i en 1:1 (rumfang/rum-fang) blanding af 20 ml 10% vandig KHCO^ -ethylacetat. De to faser blev adskilt, og vandfasen blev ekstraheret med 15 ethylacetat (3 x 10 ml). Den samlede ethylacetatfase blev filtreret og inddampet i vakuum. Remanensen blev opløst i dichlormethan-ethylacetat 1:1 og påført en søjle af sili-cagel, og søjlen blev elueret med dichlormethan-ethylacetat 1:1 til opnåelse af 28 mg (53%) udgangsmateriale (VBS 20 423) (Rf 0,37 på TLC silicagel CI^Clg-EtoAc 1:1) og 18 mg (34%) l-(3-F-2,3-dideoxy-5-0-acetyl-a-D-ribofuranosyl)-thymin (VBS 424) (Rf 0,29 på TLC silicagel C^C^-EtoAc 1:1).

25 NMR (CDgOD) 61,95 (s, 3H, CH3~5), 2,12 (s, 3H, CH3C0j, 2,3-3,0 (m, 2H, H-2'a,b), 4,15 (d, 2H, J4',5'=4,4 Hz, H-5’a,b), 4,81 (dt, IH, J3'F,4'=30,0 Hz, J4',5'=4,6 Hz, H-4’), 5,23 (dd, IH, J3'F,3'=53,7 Hz> J2',3'=5,0, H-3'), 6,36 (d, IH, J1',21=7,57 Hz, H-l'), 7,27 (d, IH, J H-6, 30 CH3=1,47, H-6) 13C(CD30D) 612,80 (CH3), 20,87 (CH3C0), 39,40 (d, J-20,8 Hz, C-2'), 63,37 (d, J=12,2 Hz, C-5'), 84,65 (d, J=24,4 Hz, C-4'), 86,50 (s, C-l') 93,82 (d, J=178 Hz, C-3’), 35 111,12 (C-5), 135,07 (d, J=6,l Hz, C-6), 150,48 (C-2), 163,68 (C-4), 170,30 (CRjCO).

15 DK 168443 B1 16 mg af forbindelsen VSB 424 blev opløst i 5 ml mættet methanolisk ammoniak og henstod natten over ved stuetemperatur. Opløsningen blev inddampet, og remanensen blev behandlet med acetone-benzen (1:4) til opnåelse af kry-5 staller af den ønskede forbindelse, VSA 419 (9,4 mg, 69%) UV Mnax (H2O) 269 nm.

NMR (DMS0-d6) Ή 61,79 (d, 3H, J CH3, H-6=l,2 Hz CHg), 2,16-2,90 (m, 2H, H-2'), 3,2-3,6 (m, 2H, H-5'), 4,61 (dt, 10 IH, J3’F,4'=23,4 Hz, J4',5'=~4 Hz, H-4'), 5,06 (t, IH, J5',0H=5,6 Hz, OH), 5,32 (dd, IH, J3'F,3'=54,2 Hz J2'3'=4,9 Hz, H-3' ), 6,18 (dd, IH, Jl'2'=7,7 Hz og 2,1 Hz, H-l'), 7,39 (d, IH, J CH3, H-6=l,2 Hz, H-6) 15 13C (DMS0-d6) 612,46 (CH3),~39 (C-2'), 61,17 (d, J=11,0

Hz, C-5'), 85,85 (C-l'), 87,15 (d, J=20,8 Hz, C-4*), 94,75 (d, J=173 Hz, C-3'), 109,15 (C-5), 135,63 (d, J=6,l Hz, C-6), 150,53 (C-2), 163,95 (C-4) 20 EKSEMPEL 2

Fremstilling af l-(3-F-2,3-dideoxy-e-D-ribofuranosyl)- 5-propyluracil (VSA 409) (metode C) 25 56 mg 5-propyluracil og 47 mg 3 ' -F-3 ’ -deoxythymidin blev opslæmmet i 1,2 ml acetonitril og 0,35 N,O-Bis (trime-thylsilyl) acetamid blev tilsat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i halvanden time. 0,05 ml trimethylsi-lyltrifluormethansulfonat blev tilsat. Efter omrøring ved 30 stuetemperatur i 138 timer inddampedes blandingen i vakuum, og der tilsattes 0,5 ml ^0, filtreredes og vaskedes med 0,5 ml ^0. Den samlede vandfase påførtes en C^g-søj-le (HPLC) og blev elueret med methanol-vand (35:65) med en hastighed på 7,0 ml/min. Den Æ-anomere eluerede efter 35 12,9 minutter, og den ønskede α-anomere, VSA 409, efter 18,0 minutter. Udbytte 9,3 mg (18%) UV λ max (H30) 269 nm, MS M+272 (10%), 154 (100%), 119 (76%).

16 DK 168443 B1 EKSEMPEL 3

Fremstilling af 1-(3-F-2,3-dideoxy-g-D-ribofuranosyl)- 5-ethyluracil (VSA 411) (metode C) 5 51 mg 5-ethyluracil og 48 mg 3' -F-3' -deoxythymidin blev opslæmmet i 1,2 ml acetonitril og 0,35 ml N,O-Bis (trime-thylsilyl)acetamid blev tilsat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i halvanden time. 0,05 ml trimethylsi-10 lyltrifluormethansulfonat blev tilsat. Efter omrøring ved stuetemperatur i 161 timer blev blandingen inddampet i vakuum, der tilsattes 0,5 ml vand og filtreredes og vaskedes med 0,5 ml vand. Den samlede vandfase påførtes en Cig-søjle (HPLC) og blev elueret med methanol-vand (1:3) 15 med en hastighed på 8,0 ml/min. Den Ø-anomere eluerede efter 12,3 minutter, og den ønskede a-anomere, VSA 411, efter 16,4 minutter. Udbytte 13,1 mg (26%). UV λ max (H20) 267,5 nm. MS M+258 (9%), 140 (100%), 119 (67%).

20 Forbindelser med formlen I er blevet syntetiseret, hvor X

3 3 er CH2 og 0, og R er CH20H; R har trans-konfiguration i forhold til hydroxymethylfunktionen ved stilling 4'. Disse forbindelser er alle ifølge opfindelsen og har den almene formel: 25 30 35 17 DK 168443 B1 f-fO-i / V—A X er CH2 og 0

Syntesen af forbindelserne, hvor X er CH2, er afbildet i efterfølgende reaktionsskema. Forbindelserne, hvor X er 10 Cii2' ^an adskilles i de enantiomere ved adskillelsesmetoder for enantiomere som er velkendte for fagmanden. I

eksemplerne er detaljeret angivet fremstillingen af for- bindeiser, hvor R er H eller CHQ, en forbindelse, hvor 1 J R er ethyl, propyl, isopropyl, ethenyl, prop-l-enyl, 15 prop-2-enyl, isopropenyl, ethylnyl og lignende kan også fremstilles.

De carbocycliske nucleosidanaloge (X = CH2) i reaktionsskemaet blev opbygget ved at danne en pyrimidinring på 20 aminogruppen af l-[(3,4-trans-C-dibenzyloxymethyl)cyclo-pentyl]amin (forbindelse 8). Tilsætning af et isocyanat-derivat af alkoxypropenoat, der kan fremstilles på kendt måde, efterfulgt af sur katalyseret ringslutning giver de dibenzyloxy-beskyttede carbocycliske nucleosidanaloge 10 25 og 16. Fjernelse af beskyttelsen med trimethylsilyliodid giver de carbocycliske nucleosidanaloge 11 og 17 (henholdsvis eksempel 7 og 8).

Uracilbasen af forbindelse 10 kan yderligere funktionali-30 seres ved at omsætte forbindelse 10 under velkendte betingelser for fagmanden og som f.eks. beskrevet af Bergstrom et al., (J. Am. Chem. Soc. 1976, vol. 98, pp. 1587-1589) og Bigge et al., (Ibid. 1980, vol. 102, pp. 2033-2038). På denne måde fremstilles forbindelser, hvor R* er 35 ethenyl, propenyl, isopropenyl eller ethynyl.

18 DK 168443 B1

Cyclopentylaminen, forbindelse 8, opbygges ud fra natriumcyanid og diethylmaleat. Den dannede keton (forbindelse 2) beskyttes, de to carboxylsyreestergrupper isomeriseres til trans, reduceres, og de dannede hydroxygrupper be-5 skyttes (forbindelse 5). Beskyttelsen fjernes selektivt fra ketonen, en oxim dannes og reduceres til aminen, forbindelse 8. Denne amin kan adskilles i de enantiomere ved metoder, der er velkendte af fagmanden.

3 10 De carbocycliske nucleosidanaloge (X = CH2), hvor R er CH20H, er stereokemisk afbildet i cis-stilling i forhold til 4'CH20H gruppen og er blevet fremstillet på en måde, der er analog med den, der er beskrevet i reaktionsskemaet, men under anvendelse af udgangsmaterialer med modsat 15 stereokemi. På denne måde fremstilledes de to forbindelser i eksempel 10 og 11.

Eksempel 10 A Gr 25 Λ/ ' i 30

Eksempel 11 A er tf-fJ

35 I

19 DK 168443 B1

Trans-3,4-dihydroxymethylforbindelserne med formlen I, hvor X er 0, fremstilles ved at omsætte en persilyleret pyrimidinbase med methyl-(3-hydroxymethyl)-2,3-dideoxy-D-erythro-pentofuranosid indeholdende to hydroxy-beskytten-5 de grupper (benzoyl). Reaktionen katalyseres med en si-lyltriflatester og giver den a- og Ø-anomere i omtrent lige store mængder. Efter kondensation fjernes benzoyl-grupperne. Fremstillingen af de e- og Ø-anomere af cyto-sinanaloge er angivet i eksempel 5, og fremstillingen af 10 a- og Ø-anomere af thyminanaloge er angivet i eksempel 6.

γ. μμ, 0 B ί0 RO—p/ 20 3-hydroxymethylpentofuranosidringen ombygges ved at omsætte et mono-beskyttet epoxid af 1,4-butan-diol med ally lmagnesiumbromid (reaktionsskemaet er angivet i den 25 eksperimentelle del, der beskriver syntesen af udgangsmaterialerne fra eksempel 5 og 6). Herefter oxideres allyl-gruppen med osmiumtetraoxid og natriumperiodat, ringsluttes til dannelse af pentofuranosidringen, og hydroxygrup-perne beskyttes.

30 35 20 DK 168443 B1

Reaktionsskema til fremstilling af forbindelser, hvori X = CH2 5 i ] ulql, . ud ,

\ /~ noc«tCHtOH \ /\QJ

fto/ c'°^ co°^ * L· L· 10

COOCHj H

is 100-“^ />0 COOCU ‘ *—ΟΗ A Jl 20 CWn _ w-> 25 ‘-““r© *-««c© S 6 /—' 30 Q-OjO—r -Mjt OH . , * kÉy±., \Y^ 35 Loc^^-^) *—οα^ίτΟ)

i _L

DK 168443 B1 21

Reaktionsskema (fortsat) K

- ^ ?' ^°-] - LftJc^o «· EtOCHr C-t-W =C=0-v yf* 5 Lo6m L0<b^ ,? I S /<T /2f * CH-, . 'ix ‘ti- --^VJ —γ

—0¾^ —OH

15 i i lo R. *U Ji_ M 21 z'~CH3 tICk 0-4Π) Λ/^α, ” i'-AT *'Jw ¢,0 ^Οη 25 ·& ---> ^ / 16 \_/ \-/ ’ ^ /Z ft'-/* ^ , /δ -&- ^‘=Η 30 ^ Y^S/ ~ il *'-c/<3 %/A) _ HO—i /^Λ

_> \LJ

35 ]

—OH

Ilj R * ^ 20 /2.' -c“j, 22 DK 168443 B1 EKSEMPEL 4

Fremstilling af l-[2',3'-dideoxy-31-C-(hydroxymethyl)-a-og 0-D-erythro-pentofuranosyl]-cytosin (forbindelse 21a 5 og 21b)

En suspension af cytosin (120 mg, 1,08 mmol) og en lille krystal (NH^^SO^ i hexamethyldisilazan (2 ml) og trime-thylchlorsilan (0,2 ml) blev opvarmet med tilbagesvaling, 10 indtil der blev opnået en klar opløsning. Opløsningen blev koncentreret i vakuum og inddampet sammen med tør xylen. Den faste remanens blev opløst i tør CH2C12 (2 ml) under nitrogen, og methyl-5-0-benzoyl-3-[(benzoyloxy)-methyl] -2,3-dideoxy-D-erythro-pentof uranosid (170 mg, 15 0,46 mmol) blev tilsat efterfulgt af tilsætning af t-bu- tyldimethylsilyl-triflat (0,22 ml, 0,96 mmol). Efter 24 timer ved stuetemperatur blev reaktionen bratkølet ved tilsætning af vandig mættet NaHCOg, og den fremkomne blanding blev omrørt i 30 minutter. Opløsningen blev for-20 tyndet med CH2C12 og vasket med mættet NaHCOg, tørret, filtreret og koncentreret til opnåelse af en anomer blanding af det beskyttede nucleosid. Denne blanding blev behandlet med methanolisk ammoniak (20 ml, mættet) i 24 timer ved stuetemperatur. Efter koncentrering blev rema-25 nensen opløst i vand og ekstraheret med CH2C12· Den vandige fase blev koncentreret til et ringe rumfang og påført en semi-præparativ C-18 omvendt fase kromatografisk søjle og elueret med vand indeholdende 2% methanol. Først blev den α-isomere opsamlet, efterfulgt af den Ø-isomere.

30 Passende fraktioner blev slået sammen og inddampet, hvorved der blev opnået 33 mg af den a-anomere (30%) og 27 mg af 0- anomere (24%).

et-Anomer: [a]26_:-54° (c 0,3 Ho0); UV (Ho0) K: 272 nm - D z z max 35 (e 10894); 1H-NMR (270 MHz, D20): 1,92 (m, J2,a 2lfa = 13.5 Hz, J2,a/3, = 9 Hz, J2'a,l’ = 6,5 Hz' 1H' *~2'a)·, 2.5 (m, IH, H-31); 2,7 (m, J2,a 2,b = 13,5 Hz, = 23 DK 168443 B1 8 H2, J2,a , = 6 Hz, IH, H-2'b); 3,67, 8,69 (d og q, overlap, jJ, 3, = 6,2 Hz, J5,a 5tb = 12,5 Hz, J4,5,a = 5,3 Hz, 3H, H-6' og H-5'a); 3,85 (q, Jg,a g,b = 12,5 Hz, = ^ Hz, IH, H-5'b); 4,28 (ro, *4T = ® Hz, ^41513 5 = 5,3 Hz, J4.5.b = 3 Hz, IH, H-4'); 6,1 (d og q, overlap, J5 6 = 7,3 Hz, J-p 2, = 6,5 Hz, 2H H-5 og H-l'); 7,8 (d, J5'6 - 7,3 Hz, IH,' H-6); 13C-NMR (25,05 MHz, D20); 36,4 (C-2'); 42,3 (C-3*); 62,7, 63,6 (C-5',C-6'); 84,4, 88,2 (C-l', C-41); 96,6 (C-5); 141,9 (C-6); 158,1 (C-2); 66,8 10 (c-4).

0-Anomer: [α]26π:+64° (c 0,27 Ho0); UV (H«0) hi 272 nm (e 9208); 1H-NMR (270 MHz, D20): δ 2,2-2,46 (ro, 3H, H-2' og H-3'), 3,68 (d, J3, g, = 5,5 Hz, 2H, H-6'), 3,76 (dd, 15 J4' 5'a = 5'5 Ez' J5'a,5’b = 12'5 Ez' 1H' H_5'a)' 3'92 (dd' J4', 5 *b = 2'9 Hz',J5’a,5'b = 12,5 Ez' 1E' H_5'b)' 4.01 (ro, Jø, 4, = 8,1 Hz, Jpja, 4» = 5,5 Hz, Jøib 4» = 2,9

Hz, IH, H-4’'), 6,05 (d, J5 6'= 7,3 Hz, IH, H-5), 6,11 (dd, Jr 2,a = 7,0 Hz, J1( 2,b = 4,0 Hz, IH, H-l’), 7,91 20 (d, J5 6'= 7,3 Hz, IH, H-6); 13C-NMR (25,05 MHz, D20) δ 36.1 (C-2’), 40,8 (C-3’), 62,7, 63,1 (C-5' og C-6’), 84,7, 87,1 (C-l’ og C-4’), 96,5 (C-5), 142,2 (C-6), 158,2 (C-2), 166,8 (C-4), Anal. beregnet for C^qH^^O^NøXO, 7

H20: C, 47,3; H, 6,1; N 16,6. Fundet C 47,2, H 5,8, N

25 16,4.

EKSEMPEL 5

Fremstilling af l-[2* ,3'-dideoxy-3'-C-(hydroxymethyl)-a-30 og Ø-D-erythro-pentofuranosyl]-thymin (forbindelse nr.

22a og 22b)

Thymin (150 mg, 1,19 mmol) blev kondenseret med methyl-3-C-[(benzoyloxy)methyl]-5-0-p-brombenzyl-2,3-dideoxy-D-35 erythropentofuranosid (205 mg, 0,47 mmol) efterfulgt af samme metode som beskrevet i eksempel 1 og 2, hvorved man fik en anomer blanding af det beskyttede nucleosid. Bian- 24 DK 168443 B1 dingen blev opløst i ethanol indeholdende NaHCO^ (overskud) og hydrogeneret over Pd (10% på carbon, 1 atmosfære) i 3 timer. Efter oparbejdning af remanensen blev den yderligere omsat med methanolisk ammoniak i 24 timer. Ef-5 ter koncentrering blev remanensen opløst i vand og ekstraheret med CH2C12· Det vandige lag blev koncentreret til et ringe rumfang og underkastet semipræparativ C-18 omvendt fase søjlekromatografi og elueret med vand indeholdende 10% methanol. Først eluerede den a-isomere ef-10 terfulgt af den &-isomere. Passende fraktioner blev slået sammen og inddampet, hvorved der blev opnået 40 mg af den a-anomere (33%) og 41 mg af den Ø-anomere (33%).

α-Isomer: [et]28 :-3,60 (c 0,36 Ho0); UV (Ho0) h : 268 m u z z mcLx 15 nm (e 13756); XH-NMR (270 MHz, D20): 1,89 (d, J - 1,1 Hz, 3H, 5-CH3); 1,96 (m, J2'a,2b' = 13/2 Hz' J2'a,3* = 9'9

Hz, J2,a lt » 7,7 Hz, IH, H-2'a); 2,47 (m, IH, H-3'); 2,6 (m' J2'a,2'b' = 13,2 Hz' J2'b,3' = 8,1 Hz' J2'b,l' = 6/2

Hz, IH, H-2'b); 3,64 og 3,68 (d og q overlap, Jg»a 4i = 20 5,5 Hz, J5,a 5,b = 12,1 Hz, Jg, 3, = 6,1 Hz, 8H, H-5'a, H-6' ); 3,81 (q, = 2,9 Hz, J5,b5,a = 12,1 Hz, H- 5'b); 4,24 (m, = 8,4 Hz, J4»^5ta = 5,5 Hz, J4,^4-b - 2,9 Hz, IH, H-4)'; 6,11 (q, ^ , 2 ,'a = 7,7 Hz, J±, =

6,2 Hz, IH, H-l’); 7,59 (d, J = 1,1 Hz, IH, H-6); 1SC-NMR

25 (25,05 MHz, D20); 12,5 (5-CH3); 35,7 (C-2'); 42,7 (C-3'); 62,6, 63,5 (C-51, C-6'); 84,2, 87,3 (C-l\ C-4'); 111,6 (C-5); 138,1 (C-6); 152,4 (C-2); 167,3 (C-4).

0-Isomer: [ot]26_:+17,8° (c 0,41 Ho0); UV (Ho0) 268 30 nm (e 8516); H-NMR (270 MHz, D20): δ 1,91 (s, 3H, 5- CH3), 2,2 (m, 2H, H-2' ), 2,5 (m, IH, H-3'), 3,69 (d, J3, 6, = 5,9 Hz, 2H, H-6'), 3,76 (dd, J5«b/5.a B 12,4 Hz, J5'b,4' = 5fl Hz' lH' H~5'b)' 3'9 J5'a,5'b = 12'4

Hz, J5.a 4, = 2,9 Hz, IH, H-5'a), 3,99 m, J4,/5,a = 2,9 35 Hz, J4,5,'b » 5,1 Hz, J4, 3, - 8,1 Hz, IH, H-4)/ 6,14 (dd,

J1',2'a = 4'8 Hz' Jl' 2'b = 6,6 HZ/ 1H' H“1}' 7'73 (d' J

= l',l Hz, IH, H-6). i3C-NMR (25,05 MHz D20) δ 12,5 (5- 25 DK 168443 B1 CH3), 35,4 (c-2'), 40,9 (C-3'), 62,8, 62,9 (C-5' og C-6’), 84,5, 86,1 (C-1’ ogC-4'), 111,7 (C-5), 138,3 (C-6), 152,7 (C-2), 167,5 (C-4).

5 Analyse beregnet for C1;LH1605N2x0,8 H20: C 48,8, H 6,6, N 10,4.

Fundet C 48,9, H 6,1, N 10,2.

10 15 20 25 30 35 26 DK 168443 B1

Fremstilling af mellemprodukter

Udgangsmaterialerne for forbindelserne 21 og 22 i eksempel 4 og 5 blev fremstillet efter følgende reaktionsskema 5 a-d: OR6 OR6 0R° <f ' — f* [ 10 Ηθ·-\ OR5 OR5 OR5 15 R^ = p-brombenzyl = p-brombenzyl 5 5

R = H R° = H

6 T

R = p-brombenzyl 5 20 R = benzoyl

r6o I CJ

—„

25 J

r5o ^ g 30 R = p-brombenzyl 5 R = benzoyl i" 6 5 R = R = benzoyl 35 27 DK 168443 B1 ét) (2S,3R)-l-O-p-brombenzyl-3-C-(2'-propenyl)-1,2,4-butantriol

Til en kold opløsning af allylmagnesiumbromid -50 °C (20 5 ml, 1M) i 100 ml tør diethylether under en nitrogenatmosfære blev dryppet en opløsning af (2S,3R)-3-[[(4-bromben-zyl)oxy]methyl]oxiran-2-methanol-l (1,36 g, 5 mmol) i 140 ml tør diethylether i løbet af 30 minutter. Blandingen blev omrørt kraftigt i 30 minutter ved -50 °C og derefter 10 bratkølet med mættet vandig ammoniumchlorid. Den organiske fase blev opsamlet, og den vandige fase blev ekstraheret med diethylether. De organiske faser blev slået sammen og vasket med saltsyre (1M), natriumhydrogencarbo-nat (mættet), tørret, filtreret, koncentreret og adskilt 15 ved søjlekromatografi (toluen:ethylacetat, 1:5) hvorved 22 titelforbindelsen blev opnået (1 g, 64%), [a] β:+1,56° (c 1,03 CHC13); XH-NMR (100 MHz, CDClg): 1,8 (m, IH, H- 3); 2,13 (t, Jlt 2, = 3 = 6/8 Hz, 2H, H-l')i 3,3 og 3,0 (bred, 2H, OH-2); 3,59#(m, 4H, H-l, H-4); 4,0 (m, IH, 20 H-2); 4,48 (s, 2H, CH2Ph); 4,94 og 5,09 (m, 2H, H-3’a, H- 3'b); 5,78 (m, IH, H-2'); 7,14-7,5 (m, 4H, arom); 13C-NMR (25,05 (MHz, CDC13); 30,6 (C-l·); 42,3 (C-3); 63,3 (C-4); 71,9, 72,3, 72,5 (CH2Ph, C-l, C-2'); U6,4 (C-3’); 121,5, 129,1, 131,3 (aromatisk C); 136,4 (C-2 og aromatisk C).

25 b) (2S,3R)-4-0-Benzoyl-l-0-p-brombenzyl-3-C-(21-propenyl )-1,2,4-butan-triol

Benzoylchlorid (3,21 ml, 27,6 mmol) blev dryppet til en 30 opløsning af forbindelse 2 (8,54 g, 27 mmol) i tør pyri-din (50 ml) ved 0 °C. Reaktionsblandingen blev omrørt 15 minutter ved 0 °C. Vand (5 ml) blev tilsat, og opløsningsmidlet blev af dampet. Remanensen blev opløst i di-chlormethan og vasket med saltsyre (1M), vandig natrium-35 hydrogencarbonat (mættet), tørret, koncentreret og renset ved flashkromatografi (toluen:ethylacetat, 2:1) hvorved 97 titelforbindelsen blev opnået (9,77 g, 86%). [«] D:+8,5° 28 DK 168443 B1 (c O,71, CHC13); 1H-NMR (100 MHz, CDClg); 1,95-2,43 (m, 3H, H-3, H-l' ); 2,59 (d, JH(0H) 2 = 3'9 Hz' 1H' 0H"2)'* 3,54 (m, sek. orden, 2H,H-la, H-lb); 3,95 (m, IH, H-2); 4,34 (d, J4 g = 5,1 Hz, 2H-4); 4,48 (s, 2H, CH2Ph); 5,14 5 og 5,0 (m, *2H, H-3'a, H-3'b); 5,78 (m, IH, H-2'); 8,1-7,14 (m, 9H, arom); 13C-NMR (25,05 MHz, CDC13); 31,3 (C-1'; 40,4 (C-3); 70,1 (C-2; 64,0 (C-4); 72,3 (CH2Ph); 72,5 (C-l); 116,3 (C-31); 121,4-134,7 (arom.); 136,4 (C-2'); 166,1 (COPh).

10 c) Methyl-3-C-[(benzoyloxy)methyl]-5-O-p-brombenzyl-2,3-dideoxy-D-erythro-pentofuranosid

Til en iskold blanding af forbindelse b (7,5 g, 17,9 15 mmol) og N-methylmorpholin-N-oxid (4,8 g, 35,5 mmol) i tetrahydrofuranrvand (3:1, 70 ml), blev sat OsO^ i t-bu-tanol (18 ml, 0,02 M, behandlet med 1% TBHP, 0,36 mmol). Efter nogle få minutters forløb blev isbadet fjernet, og reaktionsblandingen blev omrørt natten over ved stuetem-20 peratur under nitrogen. NaHCSO^ (2 g) blev tilsat, og blandingen blev omrørt 15 minutter. Opløsningsmidlet blev afdampet, og remanensen blev fortyndet med ethylacetat, vasket med HC1 (1M), NaHCO^ (mættet), tørret, filtreret og koncentreret. Den urensede forbindelse blev opløst i 25 tetrahydrofuranrvand (3:1, 200 ml) og behandlet med NalO^ (7,65 g, 35,8 mmol). Cis-diolen blev spaltet fuldstændig efter 30 minutter ved stuetemperatur. Tetrahydrofuranen blev afdampet, og den vandige remanens blev mættet med NaCl og ekstraheret med diethylether. Den organiske fase 30 blev tørret og koncentreret. Remanensen blev behandlet med methanolisk HC1 (0,05%, 50 ml) i 10 minutter, neutraliseret med Dowex 2x8 (HC03), filtreret, inddampet, hvorefter remanensen blev renset ved flashkromatografi (toluen;ethylacetat, 3:1) hvorved der opnåedes en anomer 35 blanding af titelforbindelsen (6,63 g, 85%) som en farveløs sirup.

29 DK 168443 B1 1H-NMR (100 MHz, CDC13); 1,7-2,9 (tre m, 3H, H-3, H-2a, H-2b); 3,31, 3,35 (2s, 3H, OCH3); 3,6 (m, 2H, H-5), 4,1 (m, IH, H-4); 4,4 m, 2H, H-6); 4,6 (m, 2H, CH2Ph); 5,1 (m, IH, H-l); 7,1-8,0 (m, 9H, aromatisk); 13C-NMR (25,05 5 (MHz, CDC13); 35,6, 36,4 (C-2); 38,7, 39,3 (C-3); 54,3, 54,5 (0CH3); 65,7, 66,6, (C-6); 71,5, 72,35, 72,37, 73,8 (C-5, (CH2Ph); 79,9, 80,1 (C-4); 104,8 (C-l); 121,0-136,4 (aromatisk); 165,8 (COPh).

10 d) Methyl-5-0-benzoyl-3-C-[(benzoyloxy)methyl]-2,3-dide-oxy-D-erythro-pentafuranosid

En opløsning af forbindelse c (1 g, 2,3 mmol) i tør di-ethylether (3 ml) blev opløst i flydende ammoniak (50 ml) 15 i en Dewar kolbe. Natrium (300 mg, 13 mmol) blev tilsat portionsvis i løbet af 5 minutter. Opløsningen blev omrørt i 30 minutter og herefter bratkølet med fast NH^Cl. Ammoniakken blev afdampet i en strøm af nitrogen, og den faste remanens blev fortyndet med ethylacetat. Det faste 20 materiale blev frafiltreret og vasket flere gange med ethylacetat. Filtratet blev koncentreret og herefter inddampet sammen med tør toluen. Den urensede remanens blev opløst i tør pyridin (30 ml). Benzoylchlorid (0,8 ml, 6,9 mmol) blev tilsat, og opløsningen blev omrørt 40 minutter 25 ved stuetemperatur, hvorefter vand (5 ml) blev tilsat, og blandingen blev koncentreret til tørhed. Remanensen blev opløst i CH2C12 og vasket med vandig HC1 (1M), vandig NaHC03 (mættet), tørret, filtreret og inddampet til tørhed. Flashkromatografi (toluen:ethylacetat, 3:1) gav ti-30 telforbindelsen (580 mg, 68%) som en anomer blanding. En lille prøve af forbindelsen blev adskilt ved hjælp af si-licagel. ^H-NMR og smp. af den Æ - anomere var i overensstemmelse med det tidligere angivne.

35 EKSEMPEL 6 30 DK 168443 B1

Fremstilling af l-[(3,4-trans-C-dihydroxymethyl)cyclopen-tyl]uracil (forbindelse 11) 5 3,4-Dibenzylcyclamin (1,0 g, 3,1 mmol) (forbindelse 8) blev opløst i 10 ml CgHg under nitrogen. C-ethoxyacrylo-ylisocyanat (Y.F. Shealy, J. Hetrocycl. Chem. 1976, Vol.

13, p. 1015) (0,38 M i CgHg, 8,2 ml, 3,1 mmol) blev til-10 sat ved 20 °C under kraftig omrøring. Efter en reaktionstid på 20 minutter blev opløsningen inddampet, og remanensen blev opløst i trifluoreddikesyre (20 ml, 70% vandig). Opløsningen blev opvarmet 30 minutter med tilbagesvaling. Opløsningen blev afkølet og fortyndet med 50 15 ml vand og ekstraheret med Et20/toluen 1:1. Den organiske fase blev vasket med vand (3 x 50 ml) og tørret med Na2S04 og NaHCOg.

Filtrering og inddampning gav en lysebrun gummi af 1-20 [ (3,4-trans-C-dibensylomethyl)) cyclopentyl ] uracil (for bindelse 10). Denne gummi blev opløst i CH2C12 (5 ml) tinder nitrogen og behandlet med trimethylsilyliodid (0,72 ml, 5,11 mmol). Den fremkomne uklare gule opløsning blev omrørt 1 time ved 20 °C. Opløsningen blev inddampet, op-25 løst i CH2C12 og ekstraheret med vand (3 x 2 ml). Den vandige fase blev vasket med Et20 (3 x 5 ml) og inddampet.

Rensning ved flashkromatografi (Merck Si60) og eluering 30 med ethylacetat (7)-methanol (1)-H20 (0,5). Inddampning af de rene fraktioner gav titelforbindelsen som en farveløs gummi.

1H-NMR Bruker 250 MHz, D20; 1,5-2,4 ppm-CH2 CHN, 4H, 35 CHCH20, 2H. 3,4-3,8 ppm (CH20,4H (m) 4,7-4,9 ppm. CHN,

IH, 5,8-5,9 ppm (CH = CH, IH (d) 7,7-7,8 ppm CH = CH IH

(d).

EKSEMPEL 7 31 DK 168443 B1

Fremstilling af 1- [ (3,4-trans-C-dihydroxyinethyl-) -cyclo-pentyl]thymin (forbindelse 17) 5

Forbindelsen blev fremstillet som beskrevet for forbindelse 11 i eksempel 7, idet man anvendte methoxymetacry-loyl-isocyanat i stedet for ethoxyacryloylisocyanat (fremstillet som beskrevet af 6. Shaw og R.N. War rener, 10 J. Chem. Soc. 1958, p. 157) ethoxyacryloylisocyanat.

1H-NMR Bruker 250 MHz, D20; 1,87 ppm-CH3 (d) 3H, 1,9-2,3 CH2CHN (m) 4H, 3,5-3,7 CH2OH (m) 4H, 4,7-4,9 (CHN (m), 7,57 CH = C (s), IH.

15 EKSEMPEL 8

Fremstilling af 1-[3,4-trans-C-dihydroxymethyl (cyclo-pen-tyljcytosin (forbindelse 14) 20 1- [(3,4-trans-C-dibensyloxymethyl)cyclopentyl]uracil (forbindelse 10, fremstillet som beskrevet i eksempel 7), 0,5 g, 1,9 mmol blev opløst i CH2C12 (20 ml) og tri-ethylamin (0,31 ml, 3 mmol) mesitylensulfonylchlorid 25 (0,33 g, 1,5 mmol) og dimethylaminopyridin (0,037 g, 0,3 mmol) blev tilsat under en nitrogenatmosfære og omrørt kraftigt. Opløsningen blev omrørt 2 timer ved 40 °C, og 2- nitrophenol (0,67 g, 5,0 mmol) blev tilsat sammen med triethylamin (0,50 ml, 3,6 mmol). Opløsningen blev omrørt 30 natten over. Diethylether (50 ml) blev tilsat, og opløsningen blev vasket med 0,5 N NaOH (3 x 20 ml). Den organiske fase blev tørret med Na2S0^ og inddampet. Remanensen blev renset ved flashkromatografi på silicagel (Merck Si60) (eluering med EtoAc/cyclohexan 1:1). De rene frak-35 tioner blev opsamlet og inddampet til en farveløs gummi. Gummien blev opløst i THF (5 ml), og NH^OH vandig (25%, 2 ml) blev tilsat, og blandingen blev omrørt ved 0,5 bar og 32 DK 168443 B1 65 °C natten over. Opløsningen blev inddampet, og remanensen blev renset på silicagel ved eluering med ethylacetat/methanol 8:1. Inddampning af de rene fraktioner gav en gummi.

5

Gummien blev opløst i CH2C12 (1 ml) og trimethylsilyl-iodid (0,018 ml, 0,125 mmol) blev tilsat under nitrogen. Opløsningen blev omrørt 60 minutter ved 20 “C og inddampet.

10

Remanensen blev opløst i vand (1 ml) og vasket med Et20 (2 x 2 ml). Den vandige fase blev inddampet til opnåelse af titelforbindelsen som et fast hvidt materiale.

15 -hi-NMR Bruker 250 MHz, D20; 20 °C: 1,4-2,4 ppm (CH2CHN, CHCH20 (m) 6H 3,4-3,8 ppm CH20H (m) 4H, 4,6-4,8 (CHN) (m) IH, 5,8-5,9 ppm CH = CH (d) IH 7,7-7,8 CH = CH (d) IH.

EKSEMPEL 9 20

Fremstilling af 1 - [ (3,4-trans-C-dihydroxymethyl) cyclopen-tyl]-5-methylcytosin (forbindelse 20)

Titelforbindelsen blev fremstillet ud fra l-[(3,4-trans-25 C-dibensyloxymethyl)-cyclopentyl]-thymin (forbindelse 16) på samme måde som beskrevet for forbindelse 14 i eksempel 8.

30 35 EKSEMPEL 10 33 DK 168443 B1 1-[(3,4-dis-C-dihydroxymethyl(cyclopentyl)]cytosin 5 (blanding af a- og Ø-anomerer) •JO-' a .· r ίο o i TLC: Et0Ac/Me0H/H20 7:2:1, Silica Rf: 0,25 1H-NMR (D20): 87,65 (d, IH, CH = CH), 5,95 (d, IH, CH = 15 CH), 4,75-4,65 (m, IH, H-l'), 3,70-3,60 (dd, 2H, CH2OH), 3,55-3,45 (dd, 2H, CH20H), 2,35-1,35 (m, 6H, H-2’, H-3’, H-4', H-5').

EKSEMPEL 11 20 1-[(3,4-cis-C-dihydroxymethyl(cyclopentyl)]thymin (blanding af a- og Ø-anomerer) 25 ^

A:LJ

0 V

30 TLC: Et0Ac/Me0H/H20 7:2:1, Silica Rf: 0,35 1H-NMR (D20): 87,55 (s, IH, C =. CH), 4,85-4,65 (m, IH, H-1'), 3,80-3,70 (dd, 2H, CH20H), 3,65-3,55 (dd, 2H, CH2OH), 2,55-1,50 (m, 6H, H-2’, H-3', H-4', H-5’), 1,85 35 (s, 3H, CH3).

34 DK 168443 B1

Fremstilling af mellemprodukter

Udgangsmaterialerne for forbindelserne 11, 17, 14 og 20 i henholdsvis eksempel 6, 7, 8 og 9 blev fremstillet på 5 følgende måde:

Den carbocycliske ring blev opbygget under anvendelse af natriumcyanamiddimer i sering af diethylmaleat som beskre-I vet af Dolly et al., [1].

i I io

Cyclopentanon-3,4-dicarboxylsyre-dimethylester (forbin delse 1) blev opløst i ethylenglycol [2], Opløsningen blev mættet med HC1. Ketalisering fik lov at skride frem natten over ved stuetemperatur. Herefter fjernedes salt-15 syren ved 12 mmHg tryk ved stuetemperatur. Destillation under reduceret tryk (<1 mmHg) muliggjorde at 1-dioxolan- 3,4-dicarboxylsyredimethylester kunne isoleres.

Ovennævnte forbindelse er en 1:1 blanding af cis og trans 20 dicarboxylsyredimethylestere (forbindelse 2), der kan isomeriseres hovedsageligt til (30%) af transformen ved følgende betingelser. Ketalen opløses i toluen-methanol (5:1, 10 ml/g), og natriummethylat (0,3 ækvivalenter) tilsættes, og hele blandingen opvarmes 5 timer ved 50 °C.

25 Herefter udhældes reaktionsblandingen i vand, og der eks-traheres med ethylacetat til opnåelse af forbindelse 3.

^C-NMR (CDClg): 173,5 (2) estercarbonyl; 114,9 (s) C-l; 64,0 (t, JCH = 147,74 (H3) dioxolano; 51,6 (q, JCH = 30 147,74 H3) OCHg,· 43,5 (d, JCH = 173,3 H3) C-3 og C-4; 38,6 (t, JCH = 133,0 H3) C-2 og C-5.

1. L.J. Dolly. S. Esfandiari, C.A. Elliger, K.S. Marshall. J. Eng. Chem., 36, 1277 (1971).

35 2. B.G. Howard, R.V. Lindsey, J.Am. Chem. Soc., 82, 158 (1960).

35 DK 168443 B1 l-Dioxolano-3,4-trans-dicarboxylsyredimethylester (for bindelse 3) opslæmmes i tetrahydrofuran (10 ml/g) og li-thiumaluminiumhydrid (0,32 g/g udgangsmateriale) tilsættes portionsvis under hurtig omrøring tilstrækkelig til 5 at opretholde en sagte tilbagesvaling. Omrøringen fortsætter 1 time efter tilsætningen er afsluttet. Reaktionsblandingen udhældes herefter i ethylacetat og filtreres over et Celite® leje. Efter afdampning af opløsningsmidlet anvendes det urensede materiale i næste trin.

10 l-Dioxolano-3,4-trans-C-dihydroxymethyl (forbindelse 4) (7,8 g, 44,6 mmol) opløses i THF-DMF blanding (9:1) og sættes til en suspension af 80% natriumhydrid (2,81 g, 94 mmol) i samme opløsningsmiddel under tilbagesvaling. Ca.

15 30 minutter senere tildryppes ren benzylbromid under til bagesvaling. Tilbagesvalingen opretholdes i 2 timer efter tilsætningen er afsluttet. Efter afkøling udhældes reaktionsblandingen i ethylacetat og vaskes grundigt med vand.

20

Det urensede dibenzylerede materiale (forbindelse 5) opløses dernæst i dichlormethan indeholdende 15% isopropa- • nol (5 ml/mmol) og toluensulfonsyremonohydrat (1,05 ækvivalent) tilsættes. Omrøringen fortsætter i 4 timer, hvor-25 efter reaktionsblandingen udhældes i 0,01 N NaOH og eks-traheres med dichlormethan. Rensning ved hjælp af søjlekromatografi under anvendelse af hexan:ethylacetat 1:1 som elueringsmiddel giver l-oxo-3,4-trans-di-C-hydroxyme-thyl-3,4-di-0-benzyl-cyclopentan (forbindelse 6) (27,6 30 mmol, 9 g) i totaludbytte på 62%.

^H-NMR (CDClg); S 7,30 (m, 10H) benzylaromatiske frak tioner; 4,5 (2,4H) benzyl CH2; 3,5 (m, 4H) Cfl^O; 2,5 (m, 4H) H-2 og H-5; 2,2 (m, 2H) H-3 og H-4.

13C-NMR (CDC13): 138,3, C-l; 127,9 og 126,8 benzylaroma-tisk carbonatomer; 73,0, benzyl CH2; 72,2, -CH20-; 41,7, 35 36 DK 168443 B1 C-3 og C-4; 38,9, C-2 og C-5.

En opløsning af forbindelse 6 (0,50 g, 1,54 iranol) i EtOH (30 ml) blev opvarmet med tilbagesvaling og K2C03 (0/300 5 g, 2,2 mmol) blev tilsat efterfulgt af NK^OHxHCl (0,26 g, 3,71 mmol) i små portioner. Opløsningen blev afkølet og fortyndet med 100 ml vand og ekstraheret med CH2C12 (3 x 50 ml). De forenede ekstrakter blev tørret over Na2S0^ og inddampet. Remanensen blev opløst i THF (50 ml) og LAH 10 (0,23 g, 6,16 mmol) blev forsigtigt tilsat. Opløsningen blev opvarmet 5 timer med tilbagesvaling, afkølet og bratkølet med vand (1 ml). Opløsningen blev fortyndet med Et20 (200 ml) og filtreret gennem Celite®.

15 Opløsningen blev vasket med vand (3 x 20 ml), ekstraheret med vandig saltsyre (3 x 20 ml), ekstraheret med vandig saltsyre (3 x 20 ml, 2M), og den vandige fase indstillet til alkalisk reaktion med NaOH (vandig) til pH 14.

20 Den vandige fase blev ekstraheret med Et20 (3 x 20 ml), de forenede ekstrakter blev tørret med Na2S0^ og inddampet til opnåelse af en gul olie. Olien blev renset ved flashkromatografi på silicagel (Merck Si60) ved eluering med OE^C^/MeOH/NHg 95:3:2. De rene fraktioner blev ind-25 dampet til opnåelse af l-[(3,4-trans-C-dibensyloxyme- thyl)cyclopentyl]amin (forbindelse 8) som en olie.

1H-NMR Bruker 250 MHz, (CDCl^, 1,3-2,5 ppm CHCH20,2H,CH2CHNH2 4H, 3,3-3,7 CH20, 4H, 4,4-4,7 (pH-CH2, 30 4H, CHNH2, IH, NH2, 2H, 7,3-7,4 ppm CgHg-O^ 10H.

Biologiske forsøg

Undersøgelse I. Virkning af forbindelser med formel I på 35 HIV i H9-celler 37 DK 168443 B1

Materialer og metoder: HIV infektion af H9-celler 5 H9-celler, 10 celler pr. brønd pa en 24 brønds plade, opslæmmet i 2 ml RPMI-medium indeholdende 10% føtalt kal-5 veserum, 100 ug/ml penicillin, 10 ug/ml streptomycinsulfat og 2 μ9/πι1 polybren blev udsat for HIV (HTLV-IIIg) og forskellige koncentrationer af forsøgsforbindelserne. Pladerne blev inkuberet ved 37 eC i 5% CO2 i 6-7 dage. Indholdet i hver brønd blev herefter homogeniseret med en 10 pipette og overført til et centrifugeglas. Efter centrifugering i 10 minutter ved 1500 omdr./min. blev den su-pernatante del fjernet, og cellepelleten blev analyseret ved fiksering i methanol på glasplader. Humant HIV positivt serum fortyndet 1:80 eller 1:160 blev tilsat, og der 15 blev inkuberet ved 37 0 i 30 minutter. Herefter blev pladen vasket med phosphatpuffer i saltvand (PBS) indehol-2+ 2+ dende Ca og Mg . Fåre-antihumant konjugat (FITC) blev tilsat, og efter en ny inkubation blev pladen atter vasket med PBS. Kontrastfarvning blev foretaget med Evans 20 blåt, og efter tørring blev frekvensen af HIV antigenhol-dige celler bestemt i mikroskop. Forsøgsresultaterne er angivet i tabel 1.

25 30 35

Tabel 1 38 DK 168443 B1

Koncentration (uM) for 50% hæmning (IC^q) af human immun-defektvirus-opformering i cellekultur 5 ----

Forbindelser IC5Q (uM) % Hæmning 1-(3-fluor-2,3-dideoxy-10 a-D-ribofuranosyl-5- ethyluracil (VSA 411) 0,1 50 1-(3-fluor-2,3-dideoxy-a-D-ribofuranosyl-5- 15 propyluracil (VSA 409) 2,5 50 1-[2',3'-dideoxy-3T C-(hydroxymethyl) - er -D-erythro-pentafuranosyl]- 20 cytosin (forbindelse 21a) 5 50 1-[21,3'-dideoxy-3'C-(hydroxymethyl)-«-D-erythro-pentafuranosyl]- 25 thymin (forbindelse 22a) 10 50

Af tabel 1 fremgår det, at de omhandlede undersøgte for-30 bindeiser er aktive inhibitorer af HIV virus-opformering.

For at vise de kendte antiherpes forbindelser Acyclovir og Ganciclovirs virkning på HSV-1 og HIV multiplikation blev nedenstående forsøg udført, idet resultaterne er an-35 givet i tabel 2 nedenfor.

39 DK 168443 B1 Hæmningen af multiplikation af HSV-1 (stamme C-42) blev bestemt i abenyreceller (GMK) efter metoden beskrevet af Ejercito et al. (J. Gen. Virol. 2, p. 234-241, 1968) og hæmningen af HIV blev bestemt efter metoden beskrevet af 5 Koshida et al. (Antimicrob. Agents and Chemother. 33, p. 778-780, 1989). Hæmningsværdien er angivet som den koncentration (uM), der giver 50% hæmning af virusmultiplikation .

10 TABEL 2

Undersøgelse af antiherpes forbindelser overfor HSV-1 og HIV-virus 15 --

Nucleosid IC,-n

analog HSV-1 HIV

Acyclovir 0,3 >50

Ganciclovir 0,05 >50 9Π w Af ovenstående resultater fremgår det, at Acyclovir, der er et vidt udbredt anvendt og kraftigt virkende middel til bekæmpelse af herpes simplex virus infektioner, er fuldstændig inaktiv overfor HIV og retrovirus. Det samme gør sig gældende for den anden afprøvede forbindelse Gan-

OK

ciclovir.

30 35 40 DK 168443 B1

Undersøgelse II. Cellulær toxicitet 7

Hg-celler, 2x10 celler pr. plade, blev inkuberet i RPMI-1640 medium indeholdende 10% føtalt kalveserum, 70 mg/1 5 penicillin, 100 mg/1 streptomycin og 10 mM hepes, med eller uden forsøgsforbindelser. Antallet af celler pr. plade blev bestemt efter 48 timer. Celler inkuberet uden forsøgsforbindelse gennemgik herefter to celledelingscykler.

10 F5000-celler, der er humane embryonale celler, lxl0B celler pr. plade, blev inkuberet i Eagle’s minimalt essentielle medium, tilsat Earle's salte, ikke-essentielle aminosyrer, 10% føtalt kalveserum, 10 mM Hepes, 70 ml/1 pe-15 nicillin og 100 mg/1 streptomycin, med eller uden forsøgsforbindelser. Antallet af celler pr. plade blev bestemt efter 48 timers forløb. Celler inkuberet uden forsøgsforbindelser gennemgik herefter en celledelingscyklus. Resultaterne er angivet som TCgg, der er koncen-20 tr at ionen i uM af en forbindelse, der giver 50% hæmning af celleopformering.

25 30 35

Tabel 3 41 DK 168443 B1

Cellulær toxicitet over for H9 og F5000 celler 5 TC5Q(>iM)

Forbindelse H9 F5000 1-(3-fluor-2,3-dideoxy-a-D-ribo-10 furanosyl-5-ethyluracil (VSA 411) 400 500 1-(3-fluor-2,3-dideoxy-a-D-ribo- furanosyl-5-raethyluracil (VSA 419) 250 15 1-(2^31 -dideoxy-3' C- (hydroxy methyl )-a-D-erythro-pentafurano- syl]thymin (forbindelse 22a) >100 20

Af tabel 3 fremgår det, at forsøgsforbindelserne udviser TC50-værdier, der i høj grad overskrider koncentrationen af ICgg ifølge tabel 1 for 50% hæmning af HIV virus-opformering.

25

Herudover blev forbindelsen l-[(1'a,3'0,4'α)-3',4'-dihy-droxymethylcyclopent-1'-yl]thymin (forbindelse med formlen 1, hvor X = CH2, R3 = CH20H) afprøvet overfor HIV-1 type virus.

30

Virus multiplikationen i H9 celler blev hæmmet 42%, dersom ovennævnte forbindelse var tilsat i en koncentration på 1 jig/ml.

35 Undersøgelsen blev udført under følgende betingelser: 42 DK 168443 B1

Medium: RPMI 1640,5% FCS, penicillin/streptomycin 5 VDB (virus itubrydningsbuffer): 50 mM Tris-HCl pH = 7,6, 35 mM KC1, 4 mM DTT, 1 mM EDTA, 1,3% Triton X-100 10 RT test:

10 nl kul tur supernatant, 40 ni VDB og 50 ni reaktionsblanding til opnåelse af en slutkoncentration på 100 mM

Tris-HCl pH = 7,6, 100 mM KC1, 4 mM MgOU, 4 mM DTT, 275 Z 3

15 ng/ml BSA/ml, 5 ng (rA)n (άΤ)^.·^/®! uM H*dTTP

(specifik aktivitet 18.000 cpm/pmol).

5 H9 celler justeres til 2 x 10 celler/ml medium og udsås på mikroplader (96 brønde/plade) med 100 ni cellesuspen- 4 20 sion/brønd, hvilket giver 2 x 10 celler/brønd.

Forbindelsen, der skal undersøges, opløses med 10 mg/ml i DMSO = stamopløsning (lagres ved 20 °C).

25 Forbindelsen, der er opløst i DMSO, fortyndes 25 gange i medium, hvilket giver 400 ng/ml. Yderligere fortyndinger til 40 ng/ml og 4 ng/ml foretages i mikroplader.

50 ni af fortyndingerne 40 ng/ml og 4 ng/ml overføres til 30 den "celle-holdige" mikroplade med en multikanal pipette (Slutkoncentration: 10 og 1 ng/ml).

Til slut sættes 50 ni virussuspension til hver brønd (med en repetitiv "Eppendorf multipelt"). Hver plade har 35 mindst 4 brønde med virus, men intet lægemiddel (viruskontrol ) og to brønde uden virus (medium kontrol).

43 DK 168443 B1

Pladen anbringes i en plastpose for at undgå fordampning og Inkuberes 6 dage i en CC^-atmosfære.

Bestemmelse af RT-aktivitet 5 10 al supernatant fra hver brønd overføres med en multikanalpipette til en ny mikroplade, hvor der er sat 40 al VDB til hver brønd. Tilsætning af 50 al RT-reaktionsblanding giver et slutrumfang på 100 al/brønd.

10

Efter 60 sekunders inkubation overføres hele forsøgsrumfanget med en cellehøster til en med 5% TCA forud fugtet filtermåtte. Filteret vaskes i 5% TCA og skylles en gang i ethanol. Efter tørring af filtermåtten ved 60 °C i 30 15 minutter udstanses hvert filter (96/måtte) og anbringes i tælleglas, hvorefter 2 ml scintillationsvæske tilsættes, og prøverne tælles (1 min) eller hele filtermåtten anbringes i en plastpose, 10 ml scintillationsvæske tilsættes, og filtermåtten tælles på en Beckman Betaplate coun-20 ter.

% reduktion af RT aktivitet bestemmes ved at sammenligne RT aktivitet af viruskontrol med den målte RT aktivitet for hver fortynding af forbindelsen.

25 30 35

Claims

44 DK 168443 B1 Patentkrav :
1. Pyrimid-2-on-l-yl-forbindelser med formlen 5
3 A r hvor A betyder:
15 J\ «’ A : (a) Ί" γ 0^\Ν / 20 eller Jk r1 1,1 £y X betyder O eller CH2 30 betyder H, alkyl indeholdende 1-3 carbonatomer, -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -C-CH3 eller -C=CH, og CH2 35 3 45 DK 168443 B1 R betyder F eller CH^OH, der begge kan have enten ciskonfiguration eller trans-konfiguration i forhold til hy-droxymethylgruppen ved stilling 4', og terapeutisk acceptable salte heraf. 5
2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at A er A*1
10 FN I i 15 hvor R er som defineret i krav 1.
3. Forbindelse ifølge krav 2, kendetegnet ved, at R·*· er H, CH^ eller ¢2¾.
4. Forbindelse ifølge krav 3, kendetegnet ved, 3 at R ved stilling 3' og hydroxymethylgruppen i stillingen 4' har trans-konfiguration.
5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, 25 at A er NH9 fY 30 0^-Y hvor R^ er som defineret i krav 1. 35
6. Forbindelse ifølge krav 5, kendetegnet ved, at R1 er H; CH3 eller C2H5. 46 DK 168443 B1
7. Forbindelse ifølge krav 6, kendetegnet ved, at R1 er H.
8. Forbindelse ifølge krav 7, kendetegnet ved, 3 5 at R ved stilling 3' og hydroxymethyl gruppen i stilling 4’ har trans-konfiguration.
9. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse som lægemiddel. 10
10. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved terapeutisk behandling af infektion hos mennesker forårsaget af HIV virus.
11. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved som aktiv bestanddel at indeholde en forbindelse ifølge krav 1.
12. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved frem-20 stilling af et lægemiddel til terapeutisk og/eller profylaktisk behandling af infektioner forårsaget af en retrovirus eller af hepatitis B virus.
13. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse 25 ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man A) kondenserer et eventuelt ved hydroxylgrupperne beskyttet glycosid med formlen 30 P-7 JL & 4 5 5 hvor R betegner F eller CH^OR , og R betegner H eller en beskyttende gruppe, til N-l-stillingen af et 35 47 DK 168443 B1 pyrimidin-derivat svarende til gruppen A i formel I, hvorefter den α-anomere af den dannede forbindelse I fraskilles, og eventuelle beskyttende grupper fjernes;
5 B) anomeriserer en Ø-anomer med formlen .A R 0 -i 10 \^X Π1 15 4 5 hvor A, X, R og R er som defineret ovenfor, til en blanding af a- og Ø-anomere, hvorefter den a-anomere fraskilles, og eventuelle beskyttende grupper fjernes? 20 25 30 35 48 DK 168443 B1 C) transglycosylerer et nucleosid med formlen B r5° —j / X \ 1V 4 5 hvor X, R og R er som defineret ovenfor, og B er en 10 eventuelt beskyttet pyrimidin- eller purinbase, til fremstilling af en forbindelse indeholdende gruppen A som defineret ovenfor, hvorefter den .α-anomere fraskilles, og eventuelle beskyttende grupper fjernes; 7
15 D) substituerer gruppen R i en forbindelse med formlen A R7 20 5 / V R50-1 x 5 7 hvor A, X og R er som defineret ovenfor, og R er en fraspaltelig gruppe, med F eller CI^OH, hvorefter 25 eventuelle beskyttende grupper fjernes; eller E) omdanner uracilgruppen ly
30 HH Y 35. en forbindelse med formel I til en cytosingruppe 49 DK 168443 B1 i2 «1 5 hvor R* er som defineret ovenfor, hvorefter den fremstillede forbindelse med formel I eventuelt omdannes 10 til et terapeutisk acceptabelt salt. 15 20 25 30 35