[go: up one dir, main page]

EA007852B1 - Соединения для лечения расстройств, опосредованных рецепторами адгезии cd11/cd18 - Google Patents

Соединения для лечения расстройств, опосредованных рецепторами адгезии cd11/cd18 Download PDF

Info

Publication number
EA007852B1
EA007852B1 EA200000985A EA200000985A EA007852B1 EA 007852 B1 EA007852 B1 EA 007852B1 EA 200000985 A EA200000985 A EA 200000985A EA 200000985 A EA200000985 A EA 200000985A EA 007852 B1 EA007852 B1 EA 007852B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
acid
alkylene
ethos
resin
Prior art date
Application number
EA200000985A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200000985A1 (ru
Inventor
Даниел Дж. Бурдик
Томас Р. Гадек
Роберт С. Макдауел
Джеймс Си. Марстерс
Девид Оаре
Марк Рейнолдс
Марк Си. Стенли
Кеннет Дж. Уиз
Original Assignee
Джинентех, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джинентех, Инк. filed Critical Джинентех, Инк.
Publication of EA200000985A1 publication Critical patent/EA200000985A1/ru
Publication of EA007852B1 publication Critical patent/EA007852B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4458—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine only substituted in position 2, e.g. methylphenidate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/557—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins
    • A61K31/559—Eicosanoids, e.g. leukotrienes or prostaglandins having heterocyclic rings containing hetero atoms other than oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/166—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the carbon of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. procainamide, procarbazine, metoclopramide, labetalol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/18—Sulfonamides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/341—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide not condensed with another ring, e.g. ranitidine, furosemide, bufetolol, muscarine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A61K31/36—Compounds containing methylenedioxyphenyl groups, e.g. sesamin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4192—1,2,3-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/433—Thidiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)

Abstract

Предлагаются соединения общей формулыобладающие способностью модулировать адгезию между внутриклеточными адгезионными молекулами и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов, а также их фармацевтически приемлемые соли, пригодные для лечения расстройств, опосредованных Мас-1 или LFA-1, таких как воспалительные расстройства, различные виды аллергии и аутоиммунные заболевания.

Description

Изобретение относится к способам и терапевтическим составам для лечения млекопитающих, предпочтительно людей, которые страдают или подвержены расстройствам, опосредованным рецепторами адгезии (ΟΌ11/ΟΌ18), особенно расстройствам, опосредованным лейкоцитарными ЬГА-1. В частности, оно относится к способам улучшения или модулирования иммунных реакций, например, вызываемых воспалительной, аутоиммунной реакцией и отторжением трансплантата, таких как псориаз, ревматоидный артрит, астма, множественный склероз, отторжение после пересадок и т. д.
Предпосылки изобретения
Воспаление.
Периферическая кровь человека состоит, в основном, из красных кровяных телец (эритроцитов), тромбоцитов и белых кровяных телец или лейкоцитов. Семейство лейкоцитов дополнительно классифицируется на нейтрофилы, лимфоциты (основные подтипы - В- и Т-клетки), моноциты, эозинофилы и базофилы. Нейтрофилы, эозинофилы и базофилы иногда называют «гранулоцитами» или «полиморфонуклеарными (ПМН) клетками» из-за наблюдаемости гранул в их цитоплазме и множества ядер в них. Гранулоциты и моноциты часто классифицируются как «фагоциты» из-за их способности к фагоцитозу или расщеплению микроорганизмов и чужеродной материи, в целом называемых «антигенами». Моноциты называются так благодаря их большим одиночным ядрам; эти клетки, в свою очередь, могут превращаться в макрофаги. Фагоциты важны для защиты организма от множества инфекций и вместе с лимфоцитами участвуют в воспалительных процессах. Нейтрофилы представляют собой лейкоциты, наиболее часто встречающиеся в нормальной периферической крови человека, за которыми следуют лимфоциты. В микролитре нормальной периферической крови человека содержится 6000 лейкоцитов, из которых около 4000 составляют нейтрофилы, 1500 - лимфоциты, 250 - моноциты, 150 - эозинофилы и 25 - базофилы.
Во время воспалительного процесса лейкоциты периферической крови накапливаются на участке воспаления или повреждения путем серии специфических клеточных взаимодействий (см. фиг. 1). Инициирование и поддержание иммунных функций регулируются путем внутриклеточных адгезивных взаимодействий, а также трансдукции сигнала в результате взаимодействий между лейкоцитами и другими клетками. Адгезия лейкоцитов к васкулярному эндотелию и миграция из кровообращения к месту воспаления является критическим этапом в воспалительной реакции (фиг. 1). Иммунное узнавание Т-клеточных лимфоцитов требует взаимодействия Т-клеточных рецепторов с антигеном (в сочетании с главным комплексом тканевой совместимости, ГКТ), а также рецепторами адгезии, которые способствуют прикреплению Т-клеток к антигенпредставляющим клеткам и преобразуют сигналы для активации Т-клеток. Функциональная группа лимфоцитов, связывающая антиген-1, была идентифицирована как главный интегрин, который опосредует адгезию и активацию лимфоцитов, ведущую к нормальной иммунной реакции, а также несколько патологических состояний (8ргшдет, Т.А., ИаШте 346:425-434 (1990)). Внутриклеточные адгезионные молекулы (1САМ)-1, -2, -3, члены сверхсемейства иммуноглобулинов, являются лигандами для интегрина ЬГА-1, обнаруженного в эндотелиальных клетках, лейкоцитах и других типах клеток. Связывание ЬГА-1 с молекулами 1САМ опосредует целый ряд функций лимфоцитов, включая продуцирование лимфокинов Т-клеток-помощников в ответ на присутствие антигенпредставляющих клеток, Т-лимфоцит-опосредованный лизис клеток-мишеней, природное уничтожение опухолевых клеток и продуцирование иммуноглобулина путем взаимодействий Т-клеток/В-клеток. Таким образом, многие грани функций лимфоцитов включают взаимодействие интегрина ЬГА-1 и его 1САМ-лигандов. Эти ЬГА-1:1САМ-опосредованные взаимодействия непосредственно участвуют в многочисленных воспалительных состояниях, таких как отторжение трансплантата, дерматиты, псориаз, астма и ревматоидный артрит.
В то время как ЬГА-1 (СЭ11а/СЭ18) в лимфоцитах играет ключевую роль в хронических воспалительных и иммунных реакциях, другие члены семейства лейкоцитарных интегринов (СЭ11Ь/СЭ18. СЭ11с/СЭ18 и СЭ116/СЭ18) также играют важную роль в других лейкоцитах, таких как гранулоциты и моноциты, особенно во время первоначальной реакции на инфицирующие агенты и при острой воспалительной реакции.
Основная функция полиморфонуклеарных лейкоцитов, производных от линий нейтрофилов, эозинофилов и базофилов, состоит в восприятии воспалительных стимулов и проникновении через эндотелиальный барьер для осуществления очистительной функции как первоочередной защиты организма. Интегрин Мас-1 (СЭ11Ь/СЭ18) быстро воздействует на эти клетки после активации и связывания с их многочисленными лигандами, что приводит к высвобождению кислород-производных свободных радикалов, протеаз и фосфолипаз. При некоторых хронических воспалительных состояниях это накопление регулируется неправильно, что приводит к значительным повреждениям клеток и тканей (Наг1ап, ЬМ., Лс1а Меб. 8сапб. 8ирр1., 715:123 (1987); ^е188, 8., Хеи ЕпДапб 1. о£ Меб., 320:365 (1989)).
ЬГА-1 (СП11а/СЭ18) и Мас-1 (СО11Ь/СО18).
Семейство (СЭ11/СЭ18) молекул адгезионных рецепторов включает четыре близкородственных гликопротеина клеточной поверхности: ЬГА-1 (СП11а/СЭ18), Мас-1 (СП11Ь/СЭ18), ЬГА-1 р150.95 (СЭ11с/СЭ18) и (СЭ116/СЭ18). ЬГА-1 присутствует на поверхности всех зрелых лейкоцитов, за исключением подмножества макрофагов, и считается главным лимфоидным интегрином. Экспрессия Мас-1, р150.95 и СП11б/СЭ18, в первую очередь, ограничивается клетками миелоидного происхождения (которые включают нейтрофи
- 1 007852 лы, моноциты, макрофаги и мачтовые клетки). Функциональные исследования показали, что ЬЕА-1 взаимодействует с несколькими лигандами, включая 1САМ-1 (Ко1б1ет е! а1., 1. 1ттипо1. 137:1270-1274 (1986)), 1САМ-2 (δΐαπηίοη е! а1., Иа!иге 339:361-364 (1989)), 1САМ-3 (Еа^ее!! е! а1., Иа!иге 360:481-484 (1992); Уехеих е! а1., Иа!иге 360:485-488 (1992); бе Еоидегобее апб 8рппдег, 1. Ехр. Меб. 175:185-190 (1990)) и теленцефалин (Пап е! а1., 1. 1ттипо1. 158:928-936(1997)).
Семейство СЭ11/СО18 по структуре и генетике отнесено к более крупному интегриновому семейству рецепторов, которые модулируют клеточные адгезивные взаимодействия, включающие эмбриогенез, адгезию к внеклеточным субстратам и дифференциацию клеток (Нупек. К.О., Се11 48:549-554 (1987); К1еЫто!о е! а1., Абу. 1ттипо1. 46:149-182 (1989); К18Ыто!о е! а1., Се11 48:681-690 (1987); Кио81аЬб е! а1., 8аепсе 238:491-497 (1987).
Интегрины представляют собой класс мембраносвязующих гетеродимеров, включающий подгруппу α в нековалентной связи с подгруппой β. Подгруппы β, как правило, способны к связыванию с более чем одной подгруппой α, и гетеродимеры, содержащие общую подгруппу β, классифицируются как подсемейства внутри популяции интегрина (Ьагеоп апб 8рппдег, «8!гис!ше апб Гипебоп оГ 1еикосу!е т!едбп8», 1ттипо1. Кеу. 114:181-217 (1990)).
Было обнаружено, что интегриновые молекулы семейства СО11/СЭ18 и их клеточные лиганды опосредуют множество междуклеточных взаимодействий, особенно при воспалении. Эти протеины имеют важнейшее значение для адгезивных функций в иммунной системе (К1еЫто!о е! а1., Абу. 1ттипо1. 46:149-182 (1989)). Показано, что моноклональные антитела к ЬЕА-1 блокируют адгезию лейкоцитов к эндотелиальным клеткам (Эивбп е! а1., 1. Се11. Бю1. 107:321-331 (1988); 8тбб е! а1., 1. С1ш. 1пуек1. 83:20082017 (1989)) и ингибируют активацию Т-клеток (Киуреге е! а1., Кез. 1ттипо1., 140:461 (1989)), образование конъюгатов, необходимых для антигенспецифического уничтожения ЦТК (цитотоксических Т-клеток) (К1зЫто!о е! а1., Абу. 1ттипо1. 46:149-182 (1989)), пролиферации Т-клеток (Эаущпоп е! а1., 1. 1ттипо1. 127:590-595 (1981)) и уничтожения ИК-клеток (Кгепзку е! а1., 1. 1ттипо1. 131:611-616(1983)).
Молекулы 1САМ.
1САМ-1 (СЭ54) представляет собой рецептор адгезии клеточной поверхности, являющийся членом сверхсемейства иммуноглобулиновых протеинов (Ко1б1ет е! а1., 1. 1ттипо1. 137:1270-1274 (1986); 8!аип!опе е! а1., Се11 52:925-933 (1988)). Для членов этого сверхсемейства характерно присутствие одного или более участков 1д-гомологичности, каждый из которых состоит из петли, связанной дисульфидным мостиком, которая содержит ряд противонаправленных β-складчатых нитей, уложенных в виде двух листов. Идентифицировано три типа участков гомологичности, каждый из которых имеет типичную длину и согласованную последовательность аминокислотных остатков, расположенных между цистеинами дисульфидной связи (Аббате, А.Е. е! а1., Апп. Кеу. 1ттипо1. 6:381-405 (1988); НипкарШаг, Т. е! а1., Абу. 1ттипо1. 44:1-63 (1989)). 1САМ-1 выражены в разнообразных гематопоэтических и негематопоэтических клетках и подвергаются на участках воспаления воздействию различных воспалительных медиаторов (Эизбп е! а1., 1. 1ттипо1., 137:256-254 (1986)). 1САМ-1 представляет собой гликопротеин с молекулярной массой (Мг) 90000-110000 с низкими уровнями РНК-посредников и умеренной поверхностной экспрессией в нестимулированных эндотелиальных клетках. ЬР8, 1Ь-1 и ΤΝΕ сильно воздействуют на мРНК 1САМ-1 и поверхностную экспрессию с пиком экспрессии приблизительно через 18-24 ч (Эизбп е! а1., 1. Се11. Бю1. 107:321-331 (1988); 8!аип!оп е! а1., Се11 52:925-933 (1988)). 1САМ-1 имеет пять внеклеточных иммуноглобулиноподобных доменов (обозначенных доменами 1, 2, 3, 4 и 5 или Ό1, Ό2, Ό3, Ό4 и Ό5) и внутриклеточный или цитоплазматический домен. Структуры и последовательности доменов описаны 8!аип!оп е! а1. (Се11 52:925-933 (1988)).
1САМ-1 первоначально был определен как противорецептор для ЬЕА-1 (8рппдег е! а1., Апп. Кеу. 1ттипо1., 5:223-252 (1987); Магбп, Се11 51:813-819 (1987); 81ттопе е! а1., Иа!иге 331:624-627 (1988); 8!аип!оп, Иа!иге 339:61-64 (1989); 8!аип!оп е! а1., Се11 52:925-933 (1988)). Известно, что взаимодействия ЬЕА-1/1САМ-1, по меньшей мере, частично ответственны за адгезию лимфоцитов (Эиебпд е! а1., 1. Се11. Бю1. 107:321-331 (1988); Меп!хег е! а1., 1. Се11. РЬуею1. 126:285-290 (1986)), адгезию моноцитов (Атаои! е! а1., 1. Се11. РЫузю1. 137:305 (1988); Меп!хег е! а1., 1. Се11. РЫузю1. 130:410-415 (1987); !е Уе1бе е! а1., 1ттипо1оду 61:261-267 (1987)), и адгезию нейтрофилов (Ьо е! а1., 1. 1ттипо1. 143(10):3325-3329 (1989); 8тбб е! а1., 1. Сбп. 1пуее!. 83:2008-2017 (1989)) к эндотелиальным клеткам. Путем развития функции, блокирующей моноклональные антитела к 1САМ-1, были идентифицированы дополнительные лиганды для ЬЕА-1 1САМ-2 и 1САМ-3 (81тшоп5, Сапсег 8игуеуе 24, Се11 Аббезюп апб Сапсег, 1995), которые опосредуют адгезию лимфоцитов к другим лейкоцитам, а также к негематопоэтическим клеткам. Взаимодействия ЬЕА-1 с 1САМ-2 предположительно опосредуют природную губительную активность клеток (Не1апбег е! а1., Иа!иге 382:265-267 (1996)), а связывание 1САМ-3 предположительно играет роль в активации лимфоцитов и инициировании иммунной реакции (81тшоп5, там же). Точную роль этих лигандов в нормальной и аберрантной иммунной реакции еще предстоит выяснить.
Расстройства, опосредованные Т-лимфоцитами.
Функции, блокирующие моноклональные антитела, показали, что ЬЕА-1 важен для Т-лимфоцитопосредованного уничтожения, реакций Т-вспомогательных лимфоцитов, природного уничтожения и ан
- 2 007852 тителозависимого уничтожения (Ърппдсг е! а1., Апп. Кеу. 1ттипо1., 5:223-252 (1987)). Адгезия к клеткаммишеням, а также активация и сигнализация представляют собой этапы, блокируемые антителами к БРА-1.
Многие расстройства и заболевания опосредованы через Т-лимфоциты, и существуют различные подходы к лечению этих заболеваний. Ревматоидный артрит (РА) - одно из таких расстройств. Современные методики лечения РА включают постельный режим, использование тепла и лекарств. Предпочитаемым в настоящее время лекарством является салицилат, в частности, поскольку альтернативные препараты, такие как иммуноподавляющие агенты и адренокортикостероиды, могут вызывать большую заболеваемость, чем само излечиваемое расстройство. Имеются многие нестероидные противовоспалительные средства, и многие из них проявляют анальгезирующую, жаропонижающую и противовоспалительную активность у пациентов, страдающих РА. Эти средства включают циклоспорин, индометацин, фенилбутазон, производные фенилуксусной кислоты, такие как ибупрофен и фенопрофен, нафталенуксусные кислоты (напроксен), пирролалкановая кислота (тометин), индолуксусные кислоты (сулиндак), галогенированная антраниловая кислота (меклофенамат натрия), пироксикам и дифлунизал. Другие средства для применения при РА включают противомалярийные препараты, такие как хлорохин, соли золота и пеницилламин. Эти альтернативные средства часто создают серьезные побочные эффекты, включая ретинальные повреждения и почечный и костно-мозговой токсический эффект. Иммунодепрессивные агенты, такие как метотрексат, используются только при лечении тяжелых и непрерывных РА изза их токсичности. Кортикостероиды также ответственны за нежелательные побочные эффекты (например, катаракты, остеопороз и синдром Кушинга) и плохо воспринимаются многими пациентами.
Другое расстройство, опосредованное Т-лимфоцитами, - отторжение трансплантатов после пересадки. Попытки пролонгировать жизнеспособность пересаженных аллотрансплантатов и ксенотрансплантатов или предотвратить отторжение трансплантата организмом хозяина как в экспериментальных моделях, так и в медицинской практике сконцентрировались, в основном, на подавлении иммунного аппарата хозяина/реципиента. Это лечение направлено на превентивное иммуноподавление и/или лечение отторжения трансплантата. Примеры агентов, используемых для превентивного иммуноподавления, включают цитотоксические препараты, антиметаболиты, кортикостероиды и противолимфоцитную сыворотку. Неспецифические иммунодепрессивные средства, признанные особенно эффективными для превентивного иммуноподавления (азатиоприн, бромокриптин, метилпреднизолон, преднизон и, в недавнее время, циклоспорин А), существенно повышают клинический успех трансплантации. Нефротоксичность циклоспорина А после почечной трансплантации снижается путем сопутствующего применения стероидов, таких как преднизолон или преднизолон в сочетании с азатиоприном. Кроме того, почки успешно пересаживаются с использованием противолимфоцитного глобулина, а затем циклоспорина А. Другой исследуемый протокол лечения включает общее лимфоидное облучение реципиента перед трансплантацией с последующим минимальным иммуноподавлением после трансплантации.
Лечение отторжения включает использование стероидов, 2-амино-6-арил-5-замещенных пиримидинов, гетерологичного противолимфоцитного глобулина и моноклональных антител к различным популяциям лейкоцитов, включая ОКТ-3. См., в целом, 1. Реб1а1пс8, 111: 1004-1007 (1987), и особенно патент США № 4,665,077.
Основное осложнение иммунодепрессивных лекарств состоит в инфекциях. Кроме того, системное иммуноподавление сопровождается нежелательными токсическими эффектами (например, нефротоксичностью при использовании циклоспорина А после почечной трансплантации) и снижением уровня гемопоэтических стволовых клеток. Иммунодепрессивные лекарства могут также привести к ожирению, плохому заживлению ран, стероидной гипергликемии, стероидному психозу, лейкопении, гастроинтестинальному кровотечению, лимфоме и гипертензии.
Ввиду этих осложнений трансплантационные иммунологи изыскивают способы подавления иммунной реактивности антиген-специфическим образом (т.е., чтобы подавлялась лишь иммунная реакция на аллоантиген донора). Кроме того, терапевты, специализирующиеся на аутоиммунных заболеваниях, стремятся к использованию способов подавления аутоиммунной реактивности таким образом, чтобы подавлялась лишь реакция на самоантиген. Такое специфическое иммуноподавление, в целом, достигается путем модификации антигенности пересаживаемой ткани или специфических клеток, способных к опосредованию отторжения. В определенных случаях будет стимулироваться либо иммунитет, либо толерантность, в зависимости от способа, которым антиген будет представлен в иммунной системе. При исследовании в двух мышиных модельных системах было обнаружено, что предварительная обработка тканей аллотрансплантатов путем выращивания в тканевой культуре перед трансплантацией приводит к постоянному акцептированию через барьеры ГКТ. БаГГейу е! а1., Ттап8р1ап1а1юп, 22:138-149 (1976); Во\теп е! а1., Байсе!, 2:585-586 (1979). Было сделано предположение, что такая обработка приводит к угнетению лимфоидных клеток пассажира и, таким образом, к отсутствию популяции клеток-стимуляторов, необходимых для иммуногенности ткани. БаГГейу е! а1., Аппи. Кеу. 1ттипо1, 1:143 (1983). См. также БаГГейу е! а1., 8с1епсе, 188:259-261 (1975) (выдержка щитовидной железы в культуре органа), а также Соге5 е! а1., 1. 1ттипо1., 137:1482-1485 (1986) и Ρаш5!таи е! а1., Ргос. Ыа!1. Асаб. δα. И.8.А., 78: 5156-5159 (1981) (инсулоциты, обработанные мышиной антисывороткой к 1а и комплементированные перед трансплантаци
- 3 007852 ей). Кроме того, щитовидные железы, взятые у доноров-животных, и предварительно обработанные лимфоцитотоксическими препаратами и гамма-облучением, и культивированные в течение 10 дней ίη νίΐτο, не были отторгнуты ни одним нормальным аллогенным реципиентом (Соке апб Васй, 1. Ехр. Меб. 149:1254-1259 (1979)). Все эти методики используют угнетение или удаление лимфоцитных клеток донора.
В некоторых моделях, таких как васкулярные и почечные трансплантаты, существует корреляция между соответствием класса II и пролонгированной жизнеспособностью аллотрансплантатов, кроме трансплантатов кожи (Рексо\'йх е1 а1., 1. Ехр. Меб., 160:1495-1508 (1984); Сопб е1 а1., Ттапкр1ап1. Ргос., 19: 652-654 (1987)). Поэтому используется соответствие ЛАЧ (лейкоцитарного антигена человека) донора и реципиента. Кроме того, была обнаружена эффективность переливаний крови перед трансплантацией (Оре1х е1 а1., Ттапкр1ап1. Ргос., 4: 253 (1973); Реткуп е1 а1., Ттапкр1ап1. Ргос., 23:396 (1979)). Сочетание переливания крови перед трансплантацией, соответствия ЛАЧ донора и реципиента и иммунодепрессивной терапии (циклоспорин А) после трансплантации показало значительное улучшение степени жизнеспособности трансплантатов, а эффекты были признаны взаимодополняющими (Оре1х е1 а1., Ттапкр1ап1. Ргос., 17:2179 (1985)).
Реакция на трансплантацию может быть также модифицирована антителами, действие которых направлено на иммунные рецепторы для антигенов ГКТ (В1иек1опе е1 а1., 1ттипо1. Κν. 90:5-27 (1986)). Кроме того, жизнеспособность трансплантата может быть пролонгирована в присутствии антител к трансплантату, вызывающих реакцию организма хозяина, которая, в свою очередь, обеспечивает специфическое иммуноподавление (Ьапсак1ег е1 а1., №1иге, 315: 336-337 (1985)). Иммунная реакция организмахозяина на антигены ГКТ может быть специфически модифицирована путем трансплантации костного мозга в качестве подготовительной операции перед пересадкой органа. Таким образом, моноклональные антитела к Т-клеткам используются для угнетения зрелых Т-клеток мозгового прививочного материала донора, чтобы обеспечить возможность трансплантации костного мозга, не навлекая опасности реакции «трансплантат против хозяина» (МиеПет-ВисййоШ е1 а1., Ттапкр1ап1. Ргос., 8:537-541 (1976)). В дополнение к этому, элементы лимфоидных клеток хозяина, остающиеся для трансплантации костного мозга, решают проблему иммунонекомпетентности, возникающую при использовании полностью аллогенных трансплантатов.
Как показано на фиг. 1, сцепление лимфоцитов с эндотелием является ключевым событием в воспалительном процессе. Существует по меньшей мере три известных пути сцепления лимфоцитов с эндотелием, в зависимости от состояния активации Т-клеток и эндотелиальных клеток. Иммунное узнавание Тклеток требует участия рецептора Т-клеток, а также адгезионных рецепторов, которые способствуют прикреплению Т-клеток к антигенпредставляющим клеткам и передают регулятивные сигналы для активации Т-клеток. Антиген-1, связанный с лимфоцитной функцией (ЬЕА-1, или СБ11а/СО18, α9β2. где αι=ί.Ό11;·ι. а р2=СО18), идентифицирован как главный интегриновый рецептор в лимфоцитах, участвующий в этих взаимодействиях клеточного сцепления, которые ведут к нескольким патологическим состояниям. 1САМ-1, иммуноглобулиноподобная адгезионная молекула эндотелиальной клетки, является известным лигандом для ЬЕА-1 и непосредственно причастна к отторжению трансплантатов, псориазу и артриту.
ЬЕА-1 необходим для ряда лейкоцитарных функций, включая выработку лимфокинов Т-клеткамипомощниками в ответ на присутствие антигенпредставляющих клеток, Т-лимфоцит-опосредованный лизис клеток-мишеней и продуцирование иммуноглобулина путем взаимодействий Т-клеток/В-клеток. Активация рецепторов антигена на поверхности Т-клеток и В-клеток позволяет ЬЕА-1 связываться с его лигандом с более высоким сродством.
Моноклональные антитела (Май) к ЬЕА-1 обеспечили первоначальную идентификацию и исследование функции ЬЕА-1 (Ба^адпоп е1 а1., 1. 1ттипо1., 127:590 (1981)). ЬЕА-1 присутствует только в лейкоцитах (Кгепккеу е1 а1., 1. 1ттипо1., 131:611 (1983)), а 1САМ-1 распределен по поверхности активированных лейкоцитов, дермальных фибробластов и эндотелия (Бикйп е1 а1., 1. 1ттипо1., 137:245 (1986)).
В предыдущих работах было исследовано действие моноклональных антител к СБ11а на многие иммунные функции, зависимые от Т-клеток, т νίΐΐΌ и ограниченное количество иммунных реакций т νί\Ό. 1п νίΐΐΌ, моноклональные антитела к СБ11а ингибируют активацию Т-клеток (Киурегк еΐ а1., Кек. 1ттипо1., 140:461 (1989)), пролиферацию и дифференциацию В-клеток, зависимых от Т-клеток (^аν^дηοη еΐ а1., выше, Е1ксйег еΐ а1., 1. 1ттипо1., 136:3198 (1986)), лизис клеток-мишеней цитотоксическими Т-лимфоцитами (Кгепкку еΐ а1., выше), образование иммунных конъюгатов (8апбетк еΐ а1., 1. 1ттипо1., 137:2395 (1986); Метает еΐ а1., 1. 1ттипо1., 135:9 (1985)) и адгезию Т-клеток к васкулярному эндотелию (Ьо еΐ а1., 1. 1ттипо1., 143:3325 (1989)). Кроме того, было обнаружено, что антитело 5С6 к СБ11Ь/СБ18 предотвращает внутриинсулоцитную инфильтрацию макрофагами и Т-клетками и ингибирует развитие инсулинзависимого сахарного диабета у мышей (Нтсйюдк еΐ а1., ИаШте, 348: 639 (1990)).
Вывод, что взаимодействие ЬЕА-1:1САМ-1 необходимо для оптимизации функции Т-клеток т νίΐΐΌ и что моноклональные антитела к СБ11а индуцируют толерантность к антигенам протеинов ((Вефатт еΐ а1., Еиг. 1. 1ттипо1., 18:1079 (1988)) и пролонгируют жизнеспособность опухолевых трансплантатов у мышей (Неаду еΐ а1., Ттапкр1айайоп, 37: 520-523 (1984)), был основой для испытаний моноклинальных
- 4 007852 антител к этим молекулам на предотвращение отторжения трансплантатов у людей.
Опыты проводились также на приматах. Например, опыт на обезьянах позволил сделать вывод, что МаЬ к 1САМ-1 может предотвращать или даже поворачивать в обратную сторону отторжение пересаженной почки (Со81Ш1 е! а1., «1ттипо5ирргс55юп оГ Супото1ди8 Кес1р1еи!8 оГ Кеиа1 АПощаГй Ьу К6.5, а Мопос1опа1 АпЬЬобу Ю 1и!егсе11и1аг АбЬеыои Мо1еси1е-1», в Бргшдег е! а1., (еб§.), Ьеикосу!е АбЬеыои Мо1еси1е§ №\ν Уотк: Брпидет, (1988), ρ. 274; Сохши е! а1., I. 1ттиио1оду, 144:4604-4612 (1990)). Кроме того, введение ш у1уо МАЬ к СЭ11а обезьянам Суиото1ди8 пролонгировало жизнеспособность дермальных аллотрансплантатов (Ветки е! а1., Ттап8р1ап!а!юи, 53: 840-849 (1992)).
Первое успешное использование антитела крысы к мышиному СЭ11а (25-3; 1дО1) у детей с наследственными заболеваниями для предотвращения отторжения гаплоидентичных трансплантатов несоответствующего костного мозга описано РЕсЬег е! а1., Ьаисе!, 2: 1058 (1986). Наблюдались минимальные побочные эффекты. См. также РЕсЬет е! а1., В1ооф 77: 249 (1991); уаи Эукеи е! а1., Тгаи8р1аи1айои, 49:882 (1990) и Регех е! а1., Воие Маттов Ттап8р1аи1айои, 4:379 (1989). Кроме того, антитело 25-3 оказалось эффективным при регулировании стероид-устойчивой острой реакции «трансплантат против хозяина» у людей (§!орра е! а1., Ттаи8р1аи!. 1и!., 4:3-7 (1991)).
Однако эти результаты не показали воспроизводимости у взрослых лейкозных пациентов, привитых этим МАЬ (МатаишсЫ е! а1., Воие Маттов Ттап§р1ап!., 4:147-150 (1989)) или МаЬ к СЭ18, действие которого направлено на инвариантную цепь ЬРА-1, в другом экспериментальном исследовании (Вайте е! а1., Ттап8р1ап!а!юи, 47: 472 (1989)). Кроме того, антитело крысы к мышиному СЭ11а, 25-3, оказалось неспособным регулировать ход острого отторжения трансплантированной почки у людей (ЬеМаиГГ е! а1., Ттап8р1ап!а!юи, 52: 291 (1991)).
Обзор использования моноклональных антител при трансплантациях у людей представлен Эап!а1 апб Бои1Шои, Ситтеи! Оршюи ш 1тшиио1оду, 3:740-747 (1991).
В более ранней публикации указывалось, что кратковременное лечение моноклональными антителами к ЬРА-1 или к 1САМ-1 минимально пролонгирует жизнеспособность первично васкуляризованных гетеротопных сердечных аллотрансплантатов у мышей (ПоЬе е! а1., Бшеисе, 255:1125 (1992)). Однако для достижения длительной жизнеспособности трансплантатов в этой модели потребовалось комбинированное лечение обоими этими МаЬ.
Независимо было продемонстрировано, что лечение только антителом к ЬРА-1 эффективно пролонгирует жизнеспособность гетеротопных (из наружных ушей) непервично васкуляризованных сердечных трансплантатов мыши с использованием максимальной дозы 4 мг/кг/день и применением раз в неделю после ежедневных дозировок (Ыакакига е! а1., I. Неай Ьиид Ттап§р1ап!., 11:223 (1992)). Непервично васкуляризованные сердечные аллотрансплантаты более иммуногенны и более устойчивы к пролонгированию жизнеспособности моноклональными антителами, чем первично васкуляризованные сердечные аллотрансплантаты (^аттеи е! а1., Тгапхр1ап1. Ргос., 5:717 (1973); Тгадег е! а1., Ттап8р1аи1а!юи, 47:587 (1989)). В последней ссылке описано лечение антителами Ь3Т4 с использованием высокой начальной дозировки и более низкой последующей дозировки.
Другое исследование в области лечения склерозоподобного заболевания у грызунов с использованием антител, подобных используемым Ыакакига е! а1., выше, описано Уебпоск е! а1., Ма!иге, 356:63-66 (1992).
Дополнительные описания использования антител к ЬРА-1, а также 1САМ-1, 1САМ-2 и 1САМ-3 и их антител для лечения ЬРА-1-опосредованных расстройств включают XVО 91/18011, опубл. 11/28/91, ХУО 91/16928, опубл. 11/14/91, νθ 91/16927, опубл. 11/14/91, патентная заявка Канады 2,008,368, опубл. 6/13/91, νθ 90/03400, νθ 90/15076, опубл. 12/13/90, νθ 90/10652, опубл. 9/20/90, ЕР 387,668, опубл. 9/19/90, νθ 90/08187, опубл. 7/26/90, νθ 90/13281, νθ 90/13316, νθ 90/13281, νθ 93/06864, νθ 93/21953, νθ 93/13210, νθ 94/11400, ЕР 379,904, опубл. 8/1/90, ЕР 346,078, опубл. 12/13/89, патент США № 5,002,869, патент США № 5,071,964, патент США № 5,209,928, патент США № 5,223,396, патент США № 5,235,049, патент США № 5,284,931, патент США № 5,288,854, патент США № 5,354,659, патентная заявка Австралии 15518/88, опубл. 11/10/88, ЕР 289,949, опубл. 11/9/88, и ЕР 303,692, опубл. 2/22/89, ЕР 365,837, ЕР 314,863, ЕР 319,815, ЕР 468,257, ЕР 362,526, ЕР 362,531, ЕР 438,310.
Другие описания использования пептидных фрагментов и антагонистов ЬРА-1 и 1САМ включают патент США № 5,149,780, патент США № 5,288,854, патент США № 5,340,800, патент США № 5,424,399, патент США № 5,470,953, νθ 90/03400, νθ 90/13316, νθ 90/10652, νθ 91/19511, νθ 92/03473, νθ 94/11400, νθ 95/28170, ДР 4193895, ЕР 314,863, ЕР 362,526 и ЕР 362,531.
Вышеописанные методики, успешно использующие антитела к ЬРА-1 или к 1САМ, пептиды ЬРА-1 или 1САМ, фрагменты или пептидные антагонисты, представляют собой шаг вперед по сравнению с традиционным лечением иммунодепрессивными препаратами. Эти исследования показывают, что ЬРА-1 и 1САМ являются подходящими мишенями для антагонизма. Существует необходимость в улучшении лечения расстройств, опосредованных ЬРА-1, включая аутоиммунные заболевания, реакции «трансплантат против хозяина» или «хозяин против трансплантата», а также воспалительные реакции Т-клеток, чтобы минимизировать побочные эффекты и выработать специфическую толерантность к собственным и чужеродным антигенам. Также существует необходимость в создании непептидных или пептидомиметиче
- 5 007852 ских антагонистов к взаимодействию ЬРА-1:1САМ-1.
По меньшей мере один пептидомиметический антагонист взаимодействия ЬРА-1:1САМ-1 показал себя перспективным в различных опытах ΐη νίνο.
2-Бромбензоилтриптофан показывает значения 1С50 около 2 и 10 мкМ, соответственно, в описанных здесь анализах на связывание человеческих рецепторов ЬГА-1:1САМ-1 и на адгезию человеческих Тклеток.
Недавно в патенте США 5,472,973 были описаны флуореновые производные аминобензойной кислоты как полезные противовоспалительные агенты. Их представителем может служить соединение
С1
С1
Задачи изобретения
Таким образом, задачей данного изобретения является создание композиций и терапевтических методик для модулирования адгезии между внутриклеточными адгезионными молекулами (например, 1САМ-1, -2 и -3) и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов.
Задачей является противодействие рецепторам СО11/СО18, связанным с лейкоцитами, особенно расстройствам, опосредованным Мас-1 и кГА-1, с минимальными побочными эффектами.
Задачей является регулирование нежелательных воспалительных реакций и предотвращение повреждения здоровых тканей.
Более конкретно, задачей является лечение ЬГА-1-опосредованных расстройств, включающих псориаз; реакции, связанные с воспалительными кишечными заболеваниями (такими как болезнь Крона и язвенный колит), дерматит, менингит, энцефалит, увеит, аллергические состояния, такие как экзема и астма, состояния, вызывающие инфильтрацию Т-клеток и хронические воспалительные реакции, реакции кожной гиперчувствительности (включая сумах укореняющийся); атеросклероз, аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, системная красная волчанка (СКВ), сахарный диабет, множественный склероз, синдром Рейнода, аутоиммунный тиреоидит, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, синдром Шегрена, юношеский диабет и иммунные реакции, связанные с замедленной гиперчувствительностью, опосредованной цитокинами и Т-лимфоцитами, обычно наблюдаемые при туберкулезе, саркоидозе, полимиозите, гранулематозе и васкулите; злокачественная анемия; заболевания, вызывающие лейкоцитарный диапедез; воспалительные расстройства ЦНС, синдром множественного поражения внутренних органов вследствие заражения крови или травмы; аутоиммунная гемолитическая анемия; тяжелая псевдопаралитическая миастения, заболевания, опосредованные комплексом антигенантитело; все типы трансплантаций, включая реакции «трансплантат против хозяина» или «хозяин против трансплантата», ВИЧ и риновирусные инфекции, фиброз легких и т.д.
Эти и другие задачи будут очевидны любому обычному специалисту в данной области.
Резюме изобретения
Данные задачи решаются путем создания способа и композиций антагонистов для модулирования адгезии между внутриклеточными адгезионными молекулами (например, 1САМ-1, -2, и -3) и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов. Способ и антагонисты особенно полезны для лечения расстройств, опосредованных С011/СЭ18, особенно Мас-1 и ЬГА-1, у млекопитающих, особенно человека, и включают введение млекопитающему терапевтически эффективного количества антагониста. Подходящие антагонисты лейкоцитарных интегринов, особенно анагонисты Мас-1 и кГА-1, по данному изобретению представлены ниже структурной формулой I. Предпочтительно антагонист ЬГА-1 представляет собой специфический антагонист лейкоцитарного интегрина С^11а(α^)/С^18(β2). Такие антагонисты особенно полезны для лечения хронических расстройств, опосредованных ЬГА-1. Предпочтительно эти антагонисты кГА-1 используются для лечения псориаза, алопеции, трансплантации органов, воспалительного кишечного заболевания (ВКЗ), ревматоидного артрита (РА), системной красной волчанки (СКВ), диабетов 1-го типа, множественного склероза (МС), астмы, реакции «трансплантат против хозяина» (ТПХ), склередемы, эндометриоза и витилиго. Иногда некоторые соединения, охватываемые формулой I, также способны к антагонизации связывания Мас-1 С^11Ь(αм)/С^18(β2) с 1САМ и допол
- 6 007852 нительными лигандами, включая 1С3Ь, фибриноген и фактор X. Таким образом, эти соединения полезны для ингибирования адгезии нейтрофилов и лейкоцитов, выражающих оба или один из интегринов БРА-1 и Мас-1 как при хронических, так и при острых расстройствах, опосредованных лейкоцитами/нейтрофилами. Более конкретно, эти расстройства включают поражение при ишемии/реперфузии, опосредованное нейтрофилами, такое как острый инфаркт миокарда, рестеноз после ЧТКА (чрескожной транслюминальной коронарной ангиопластики), инвазивных операций, таких как сердечно-легочная шунтирующая хирургия, церебральный отек, инсульт, травматическое поражение мозга, множественный склероз, системная красная волчанка, геморрагический шок, ожоги, ишемическая почечная болезнь, множественное поражение органов, заживление ран и образование шрамов, атеросклероз, а также посттрансплантационное повреждение органа.
Указанный антагонист представлен соединением общей формулы
где Υ1 выбран из группы, включающей СН и С-ОН; Υ2, Υ3, Υ4 и Υ5 выбраны из группы, включающей СН; Ζ1 выбран из группы, включающей ΝΚη, О и 8; п=0-3;
Бх выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
С2-С5-алкилен,
С3-С6-циклоалкилен,
С0-С3-алкилен-^п-(С=О)-С0-С3-алкилен, С0-С3-алкилен-(С=О)-ЯКп-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-О-С0-С3-алкилен, С0-С3-алкилен^Кп-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-(С=О)-С0-С3-алкилен, С0-С3-алкилен-СК3=СК2-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-С^С-С0-С3-алкилен и
С0-С3-алкилен-гет-С0-С3-алкилен, при этом заместители выбираются из группы, включающей от 1 до 3 радикалов К1, К2 и К3;
ΡΥ выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
С0-С2-алкилен, С0-С2-алкилен^Кп-(С=О)-С0-С2-алкилен, С0-С2-алкилен-(С=О)-ЯКп-С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-О-С0-С2-алкилен, С0-С2-алкилен^Кп-С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-(С=О)-С0-С2-алкилен, при этом заместители выбраны из группы, включающей от 1 до 3 радикалов К1, К2 и К3;
К1, К2 и К3 выбраны из группы, включающей
С1-С8-алкил, водород, гидроксигруппу, феноксигруппу, фенил; и
КС выбран из группы, состоящей из водорода и замещенного или незамещенного гета, при этом заместители в гете представляют собой от 1 до 3 радикалов Ка;
гет является моно-, би- или трициклическим 5-, 6-, 7-, 9- или 10-звенным насыщенным, ненасыщенным или ароматическим кольцом, имеющим от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей
- 7 007852 азот, кислород и серу;
Кр и К4 независимо выбраны из группы, включающей
ОН,
ΟΝ,
ΝΟ2, галоген,
ОКП,
8Кп,
8ΟΚ11,
СЕз,
КС,
ХЕК.
ΝΚΟ^ΟΕΟ-Κ',
ΝΕΓ^Ο)-^,
С0-С6-алкил-8О2-Кп,
Со-Сб-алкил-8О2-№пМКп',
С(С))-К.
С)-С( Ο)-Κ.
С( Ο)-Ο-Κ.
^^ΕΝΚΚ11';
К4 представляет собой химическую связь, когда гет представляет собой двухвалентную соединительную группу;
Кп и Кп независимо выбраны из группы, включающей водород, гидроксигруппу,
С1-С6-алкил, галоген-С1 -С6-алкил,
С1-С6-алкил-гет, гет-С1-С6-алкил,
С6-С12-арил и гет;
Κζ представляет собой гидроксигруппу;
О отсутствует или представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной из
-Ы(Кп)-,
-Ν/Κ11)-^^)-,
-Ν/Κ^^^ΟΕΟ-,
-Ν/Κ^^^ΟΕΝ/Κ11)-,
-Ν(ΚΙ1)-8Ο2-,
-Λ=Ο)-,
-Ο-^Ο^Ν/Κ11)-,
-ϋ^Ν/Κ1*)-;
V отсутствует или представляет собой бивалентную группу, возможно, замещенную, выбранную из группы, включающей
С1-С11-алкилена,
С2-С6-алкенилена,
С0-С6-алкил-гета, при этом заместители в любом алкиле представляют собой от 1 до 3 радикалов Ка, а заместители в любом ариле или гете представляют собой от 1 до 3 радикалов К4;
ЭД представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной группы, включающей
Ка,
ΝΗ^^Ο)-^, ^=Ο)-Κ^ ^^ΕΝΚΚ11', и КС, обладающим способностью модулировать адгезию между внутриклеточными адгезионными молекулами и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов, а также его фармацевтически приемлемые соли;
Ка представляет собой аминогруппу.
Более конкретно, соединение может представлять собой соединение, выбранное из группы, включающей
- 8 007852
а также фармацевтически приемлемые соли этих соединений.
Также, более конкретно, соединение может представлять собой соединение, выбранное из группы, включающей
- 9 007852
где гет выбран из группы, включающей
а также фармацевтически приемлемые соли этих соединений.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 - рисунок, показывающий накопление лимфоцитов на участке инфекции. Показаны перекатывание и адгезия лимфоцитов к клеткам, выражающим 1САМ (лейкоцитам, эндотелию, эпителию).
Фиг. 2 - рисунок, показывающий анализ на связывание человеческого 1САМ с рецептором ЬРА-1 (протеин-протеиновый анализ). Ингибирование взаимодействия СИ11а/СП18-1САМ-1 измеряется путем добавления известных количеств ингибиторов в систему протеин-протеинового анализа, описанную в примере 3.
Фиг. 3 - рисунок, показывающий анализ на адгезию человеческих Т-клеток, описанный в примере 4.
Фиг. 4 - рисунок, показывающий анализ на пролиферацию человеческих Т-клеток. Пролиферацию клеток измеряли путем поглощения тимидина, меченного тритием.
Фиг. 5 - рисунок, показывающий реакцию однообразно смешанные человеческие лимфоциты. Пролиферацию клеток измеряли путем поглощения тимидина, меченного тритием.
- 10 007852
Описание предпочтительных вариантов осуществления
А. Определения.
Выражение «расстройства, опосредованные ЬЕА-1» относится к патологическим состояниям, вызванным взаимодействиями клеточного сцепления, касающимися рецепторов ЬЕА-1 и лимфоцитов. Примеры таких расстройств включают Т-клеточные воспалительные реакции, такие как воспалительные заболевания кожи, включая псориаз; реакции, связанные с воспалительным кишечным заболеванием (таким, как болезнь Крона и язвенный колит); респираторный дистресс-синдром взрослых; дерматит; менингит; энцефалит; увеит; аллергические состояния, такие как экзема и астма, и другие состояния, вызывающие инфильтрацию Т-клеток и хронические воспалительные реакции; реакции кожной гиперчувствительности (включая сумах укореняющийся), атеросклероз; лейкоцитарная адгезионная недостаточность; аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, системная красная волчанка (СКВ), сахарный диабет, множественный склероз, синдром Рейнода, аутоиммунный тиреоидит, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, синдром Шегрена, диабеты типа 1, юношеский диабет и иммунные реакции, связанные с замедленной гиперчувствительностью, опосредованной цитокинами и Тлимфоцитами, обычно наблюдаемые при туберкулезе, саркоидозе, полимиозите, гранулематозе и васкулите; злокачественная анемия; заболевания, вызывающие лейкоцитарный диапедез; воспалительные расстройства ЦНС, синдром множественного поражения внутренних органов вследствие заражения крови или травмы; аутоиммунная гемолитическая анемия; тяжелая псевдопаралитическая миастения, заболевания, опосредованные комплексом антиген-антитело; все типы трансплантаций, включая реакции «трансплантат против хозяина» или «хозяин против трансплантата», и т.д.
«Лечение» таких заболеваний включает терапию, профилактическое лечение, предотвращение отторжения трансплантатов и выработку толерантности трансплантатов на долговременной основе.
Термин «трансплантат» здесь относится к биологическому материалу, взятому от донора для трансплантации реципиенту. Трансплантаты включают такой разнообразный материал, как, например, изолированные клетки, такие как инсулоциты, ткани, такие как амниотические оболочки новорожденных, костный мозг, гематопозтические клетки-предшественники, или органы, такие как кожа, сердце, печень, селезенка, поджелудочная железа, доля щитовидной железы, легкое, почка, трубчатые органы (например, кишки, кровеносные сосуды или пищевод) и т.д. Трубчатые органы могут использоваться для замены поврежденных частей пищевода, кровеносных сосудов или желчного протока. Трансплантаты кожи могут использоваться не только при ожогах, но также и в качестве оболочки для поврежденных кишок или для покрытия некоторых дефектов, таких как диафрагматическая грыжа. Трансплантаты получают из любого источника млекопитающего происхождения, включая человека, в том числе от трупов или от живых доноров. Предпочтительно трансплантат представляет собой костный мозг или орган, такой как сердце, а донор трансплантата и хозяин соответствуют друг другу по классу II ЛАЧ.
Термин «млекопитающие» относится к любому животному, классифицированному как «млекопитающее», включая людей, домашних и диких животных, таких как собаки, лошади, кошки, коровы и т.д. Предпочтительным млекопитающим здесь является человек.
Выражение «млекопитающий хозяин» относится к любому совместимому реципиенту трансплантата. «Совместимый» относится к млекопитающему хозяину, для которого будет приемлемым донорский трансплантат. Предпочтительно хозяином является человек. Если донором трансплантата и хозяином являются люди, они предпочтительно соответствуют друг другу по классу II ЛАЧ, чтобы улучшить биосовместимость.
Термин «донор» здесь относится к представителям млекопитающих, мертвым или живым, от которых берется трансплантат. Предпочтительно донором является человек. Человеческие доноры предпочтительно являются добровольными донорами-родственниками нормального физического статуса и той же основной группы крови «АВО», поскольку преодоление барьеров основной группы крови может повредить жизнеспособности аллотрансплантата. Однако возможна, например, трансплантация почки донора группы «О» реципиенту группы «А», «В» или «АВ».
Термин «трансплантация» и его вариации относятся к введению трансплантата в организм хозяина, где трансплантация может быть сингенной (когда донор и реципиент генетически идентичны), аллогенной (когда донор и реципиент имеют разное генетическое происхождение, но относятся к одному виду) или ксеногенной (когда донор и реципиент относятся к разным видам). Таким образом, в типичном сценарии хозяин является человеком, а трансплантат представляет собой изотрансплантат, полученный от человека того же или иного генетического происхождения. В другом сценарии трансплантат получают от вида, отличного от вида, в который его трансплантируют, например сердце бабуина, трансплантируемое человеку, включая животных из филогенетически разнообразных видов, например сердечный клапан свиньи, или β-инсулоцитные клетки или нейроны животных, трансплантируемые хозяину-человеку.
Выражение «антагонист ЬЕА-1» здесь относится, в целом, к бензоил-аминокислотным (АК) производным или их пептидомиметикам, которые действуют в качестве конкурентного ингибитора взаимодействия СЭ11а и/или СЭ18 с [САМ-1, растворимыми формами К.АМ-1 и связанными или растворимыми формами ГСАМ-2, ГСАМ-3 и теленцефалина.
Выражение «иммунодепрессивный агент», используемое здесь для вспомогательной терапии, отно
- 11 007852 сится к веществам, которые действуют для подавления или маскирования иммунной системы хозяина, в организм которого пересаживается трансплантат. Эти агенты могут включать вещества, подавляющие продуцирование цитокинов, снижающие или угнетающие экспрессию самоантигенов или маскирующие антигены ГКТ. Примеры таких агентов включают 2-амино-6-арил-5-замещенные пиримидины (см. патент США № 4,665,077, выше, описание которого включено в данную заявку в виде ссылки), азатиоприн (или циклофосфамид, если имеется неблагоприятная реакция на азатиоприн); бромокриптин; глутаральдегид (который маскирует антигены ГКТ, как описано в патенте США № 4,120,649, выше); антиидиотипические антитела для антигенов ГКТ и фрагментов ГКТ; циклоспорин А; стероиды, такие как глюкокортикостероиды, например преднизон, метилпреднизолон и дексаметазон; антагонисты цитокинов или цитокиновых рецепторов, включая антитела к интерферону-β или -α; антитела к фактору α опухолевого некроза; антитела к фактору β опухолевого некроза; антитела к интерлейкину-2 и антитела к рецептору интерлейкина-2; антитела к Ь3Т4; гетерологичный противолимфоцитный глобулин; пан-Тантитела, предпочтительно антитела к СЭ-3 или к СО4/СО4а; растворимый пептид, содержащий ЬЕА-3связывающий домен (\УО 90/08187, опубл. 7/26/90), стрептокиназу; РНК или ДНК от хозяина; ЕК506; К.8-61443; дезоксиспергуалин; рапамицин; рецептор Т-клеток (СоНеп с1 а1., патент США № 5,114,721); фрагменты рецепторов Т-клеток (Ойпет с1 а1., 8с1епсе, 251:430-432 (1991); заявка США, сер. № 07/853,362, от 18.03.1992, описание которой включено в данную заявку в виде ссылки; Ηο\\ό11, ХУО 90/11294; 1апетау, ΝηΦίΌ, 341:482 (1989); и УапбепЬатк, \УО 91/01133); и антитела к рецепторам Т-клеток (ЕР 340,109), такие как Т10В9. Эти агенты принимаются в одно и то же время или в разное время с антагонистами С'Э11а или СЭ18, применяемыми по данному изобретению, и используются при таких же или меньших дозировках, которые установлены в обычной практике.
Предпочтительный вспомогательный иммунодепрессивный агент будет зависеть от многих факторов, включая тип излечиваемого расстройства, тип выполняемой трансплантации, а также историю пациента, но, в целом, предпочтение отдается агентам, выбранным из циклоспорина А, глюкокортикостероидов (наиболее предпочтительно преднизон или метилпреднизолон), моноклонального антитела ОКТ-3, азатиоприна, бромокриптина, гетерологичного противолимфоцитного глобулина или их смеси.
Выражение «повышение толерантности пересаженного трансплантата» у хозяина относится к пролонгированию жизнеспособности трансплантата в организме хозяина, т.е. подавлению иммунной системы хозяина таким образом, чтобы он лучше принимал чужеродный трансплантат.
Термин «алкил» означает разветвленный или неразветвленный насыщенный алифатический углеводородный радикал, содержащий указанное число углеродных атомов или, если число атомов не указано, содержащий до 12 углеродных атомов. Если не указано иное, термин также включает ненасыщенные алкилы, определяемые как «циклоалкил», «алкенил» и «алкинил», определение которых приведено ниже. Примеры предпочтительных алкильных радикалов включают метил, этил, п-пропил, изопропил, п-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, п-пентил, 2-метилбутил, 2,2-диметилпропил, п-гексил, 2-метилпентил, 2,2-диметилбутил, п-гептил, 2-метилгексил и т.п. Термин «С0-С6-алкил» и подобные термины, содержащие «Со», означают ковалентную связь, когда число углеродных атомов равно нулю (С0) или С1-С6алкилу. Если необходимо предотвратить свободную валентность, термин «С0» может включать атом водорода. Предпочтительной группой «С1-С6-алкил» является метил.
Термин «замещенный Сп-Ст-алкил», где п и т - целые числа, определяющие диапазон углеродных атомов, содержащихся в алкильной группе, обозначает вышеуказанные алкильные группы, замещенные перечисленными группами или, если группы не перечислены, одним, двумя или тремя галогенами, гидроксигруппой, защищенной гидроксигруппой, аминогруппой, защищенной аминогруппой, С'|-С'--алкоксигруппой, нитрогруппой, карбоксигруппой, защищенной карбоксигруппой, карбамоилом, карбамоилоксигруппой, цианогруппой, метилсульфониламиногруппой или С1-С4-алкоксигруппами. Замещенные алкильные группы могут быть одним, двумя или тремя одинаковыми или разными заместителями.
Примеры вышеупомянутых замещенных алкильных групп включают (но не ограничиваются ими) цианометил, нитрометил, гидроксиметил, триэтилоксиметил, пропионилоксиметил, аминометил, карбоксиметил, алкилоксикарбонилметил, алкилоксикарбониламинометил, карбамоилоксиметил, метоксиметил, этоксиметил, трет-бутоксиметил, ацетоксиметил, хлорметил, бромметил, иодметил, трифторметил, 6-гидроксигексил, 2,4-дихлор(п-бутил), 2-амино(изопропил), 2-карбамоилоксиэтил и т.п. Предпочтительная группа примеров вышеупомянутых «замещенных С1-С12-алкилов» включает замещенную метильную группу, например метильную группу, замещенную теми же заместителями, что «замещенный Сп-Ст-алкил». Примеры замещенной метильной группы включают такие группы, как гидроксиметил, защищенный гидроксиметил (например, тетрагидропиранилоксиметил), ацетоксиметил, карбамоилоксиметил, трифторметил, хлорметил, бромметил и иодметил.
Термины «С1-С12-алкилокси» или «С1-С12-алкокси» здесь являются взаимозаменяемыми и обозначают такие группы, как метокси, этокси, п-пропокси, изопропокси, п-бутокси, трет-бутокси и т.п.
Термины «С1-С12-ацилокси» или «С1-С12-алканоилокси» здесь являются взаимозаменяемыми и обозначают такие группы, как формилокси, ацетокси, пропионилокси, бутирилокси, пентаноилокси, гексаноилокси, гептаноилокси и т.п.
- 12 007852
Термины «С1-С12-алкилкарбонил», «С|-С|2-алканоил» или «С|-С|2-ацил» здесь являются взаимозаменяемыми и обозначают такие группы, как формил, ацетил, пропионил, бутирил, пентаноил, гексаноил, гептаноил, бензоил и т.п.
Термин «циклоалкил» здесь относится к моно-, би- или трициклическому насыщенному или ненасыщенному кольцу, где каждое кольцо содержит от 3 до 14 углеродных атомов, предпочтительно от 3 до 7 углеродных атомов. Как вариант, любое кольцо может быть оксидированным до образования карбонила.
Термин «алкенил» означает разветвленный или неразветвленный углеводородный радикал, содержащий указанное число углеродных атомов и включающий одну или более углерод-углеродных двойных связей, где каждая двойная связь независимо образует цис-, транс- или негеометрический изомер.
Термин «алкинил» означает разветвленный или неразветвленный углеводородный радикал, содержащий указанное число углеродных атомов и включающий одну или более углерод-углеродных двойных связей, где каждая двойная связь независимо образует цис-, транс- или негеометрический изомер.
Термин «алкинил» означает разветвленный или неразветвленный углеводородный радикал, содержащий указанное число углеродных атомов и включающий одну или более углерод-углеродных тройных связей.
Термины «С1-С12-алкилтиогруппа» и «С1-С12-замещенная алкилтиогруппа» обозначают СгС|2-алкильную и С|-С|2-замещенную алкильную группы, соответственно, прикрепленную к атому серы, которая, в свою очередь, является точкой прикрепления алкилтиогруппы или замещенной алкилтиогруппы к указанной группе или заместителю.
Термин «арил» при использовании без дополнений обозначает гомоциклический ароматический радикал, слитый или неслитый и содержащий указанное число углеродных атомов. Предпочтительные арильные группы включают фенил, нафтил, бифенил, фенантренил, нафтаценил и т.п. (см., например, Ьаид'к НапДЬоок οί СЬетзДу (Эеап. ТА., еД.) 134Ь еД. табл. 7-2 (1985)).
Термин «замещенный фенил» или «замещенный арил» обозначает фенильную группу или арильную группу, замещенную одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из перечисленных групп или выбранными из галогена (Т, С1, Вг, I), гидроксигруппы, замещенной гидроксигруппы, цианогруппы, нитрогруппы, С1-С6-алкила, С1-С6-алкоксигруппы, карбоксигруппы, защищенной карбоксигруппы, карбоксиметила, защищенного карбоксиметила, гидроксиметила, защищенного гидроксиметила, аминометила, защищенного аминометила, трифторметила, Ы-(метилсульфониламино)группы или других указанных групп.
Примеры «замещенного фенила» включают (но не ограничиваются ими) моно- или ди(галогено)фенильную группу, такую как 4-хлорфенил, 2,6-дихлорфенил, 2,5-дихлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 3-хлорфенил, 3-бромфенил, 3,4-дибромфенил, 3-хлор-4-фторфенил, 2-фторфенил и т.п.; моно- или ди(гидрокси) фенильную группу, такую как 4-гидроксифенил, 3-гидроксифенил, 2,4-дигидроксифенил, их производные с защищенной гидроксигруппой и т.п.; нитрофенильную группу, такую как 3- или 4-нитрофенил; цианофенильную группу, например 4-цианофенил; моно- или ди(низший алкил) фенильную группу, такую как 4-метилфенил, 2,4-диметилфенил, 2-метилфенил, 4-(изопропил)фенил, 4-этилфенил, 3-(п-пропил)фенил и т.п.; моно- или ди(алкокси)фенильную группу, такую как 2,6-диметоксифенил, 4-метоксифенил, 3-этоксифенил, 4-(изопропокси)фенил, 4-(трет-бутокси)фенил, 3-этокси-4-метоксифенил и т.п.; 3или 4-трифторметилфенил; моно- или дикарбоксифенильную или (защищенную карбокси)фенильную группу, такую как 4-карбоксифенил; моно- или ди(гидроксиметил)фенил или (защищенный гидроксиметил)фенил, такой как 3-(защищенный гидроксиметил)фенил или 3,4-ди(гидроксиметил)фенил; моно- или ди(аминометил)фенил или (защищенный аминометил)фенил, такой как 2-(аминометил) фенил или 2,4(защищенный аминометил)фенил; или моно- или ди(Ы-(метилсульфониламино))фенил, такой как 3-(Νметилсульфониламино))фенил. Кроме того, термин «замещенный фенил» относится к дизамещенным фенильным группам, заместители в которых различны, например 3-метил-4-гидроксифенил, 3-хлор-4гидроксифенил, 2-метокси-4-бромфенил, 4-этил-2-гидроксифенил, 3-гидрокси-4-нитрофенил, 2-гидрокси-4-хлорфенил и т.п. Предпочтительные замещенные фенильные группы включают 2- и 3-трифторметилфенил, 4-гидроксифенил, 2-аминометилфенил и 3-(№(метилсульфониламино))фенил.
Термин «арилалкил» обозначает одну, две или три арильные группы, содержащие указанное число углеродных атомов, которые присоединены к алкильному радикалу, содержащему указанное число углеродных атомов, включая (но не ограничиваясь ими) бензил, нафтилметил, фенэтил, бензгидрил (дифенилметил), тритил и т.п. Предпочтительная арилалкильная группа представляет собой бензил.
Термин «замещенный С6-С10-арил-С1-С8-алкил» обозначает С1-С8-алкильную группу, замещенную у одного углерода С6-С10-арильной группой, связанной с алкильной группой в любом арильном кольцевом положении и замещенной в С1-С8-алкильной части одной, двумя или тремя группами, выбранными из галогена (Р, С1, Вг, I), гидроксигруппы, защищенной гидроксигруппы, аминогруппы, защищенной аминогруппы, С1-С7-алкокси, нитрогруппы, карбоксигруппы, защищенной карбоксигруппы, карбамоила, карбамоилоксигруппы, цианогруппы, С1-С6-алкилтиогруппы, №(метилсульфониламино)группы или С1-С4алкоксигруппы. Как вариант, арильная группа может быть замещенной одной, двумя или тремя группами, выбранными из галогена, гидроксигруппы, замещенной гидроксигруппы, нитрогруппы, С1-С6-алкила, С1С4-алкоксигруппы, карбоксигруппы, защищенной карбоксигруппы, карбоксиметила, защищенного карбоксиметила, гидроксиметила, защищенного гидроксиметила, аминометила, защищенного аминометила
- 13 007852 или №(метилсульфониламино)группы. Как указано выше, если С1-С8-алкильная часть, или арильная часть, или обе эти части являются дизамещенными, заместители могут быть одинаковыми или разными.
Примеры «замещенного С6-С10-арил-С1-С8-алкила^> включают такие группы, как 2-фенил-1-хлорэтил, 2-(4-метоксифенилэтил), 2,6-дигидрокси-4-фенил(п-гексил), 5-циано-3-метокси-2-фенил(п-пентил), 3-(2,6-диметилфенил)п-пропил, 4-хлор-3-аминобензил, 6-(4-метоксифенил)-3-карбокси(п-гексил), 5-(4аминометилфенил)-3-(аминометил)(п-пентил) и т.п.
Термин «карбоксизащитная группа» здесь относится к одному из сложноэфирных производных карбоксильной группы, обычно используемой для блокирования или защиты карбоксильной группы при проведении реакций на других функциональных группах соединения. Примеры таких карбоксизащитных групп включают 4-нитробензил, 4-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, 2,4-диметоксибензил, 2,4,6-триметоксибензил, 2,4,6-триметилбензил, пентаметилбензил, 3,4-метилендиоксибензил, бензгидрил, 4,4'-диметоксибензгидрил, 2,2',4,4'-тетраметоксибензгидрил, трет-бутил, трет-амил, тритил, 4-метокситритил, 4,4'-диметокситритил, 4,4',4-триметокситритил, 2-фенилпроп-2-ил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил, фенацил, 2,2,2-трихлорэтил, Ь-(триметилсилил)этил, Ь-(ди(п-бутил)метилсилил)этил, р-толуолсульфонилэтил, 4-нитробензилсульфонилэтил, аллил, циннамил, 1-(триметилсилилметил)проп-1-ен-3-ил и другие подобные группировки. Выбранные представители карбоксизащитных групп не имеют решающей важности, при условии что дериватизованная карбоновая кислота устойчива к условиям последующей реакции (реакций) в других положениях бензодиазепиндионовой молекулы и может быть удалена в соответствующей точке без разрыва остальной части молекулы. В частности, важно не подвергать карбоксизащищенную бензодиазепиндионовую молекулу воздействиям сильных нуклеофильных оснований или восстановительным условиям, использующим высокоактивированные металлические катализаторы, такие как никелевый катализатор Ренея. (Следует также избегать таких жестких условий при удалении аминозащитных групп и гидроксизащитных групп, описанных ниже.) Предпочтительные карбоксизащитные группы включают аллильную и р-нитробензильную группы. Подобные карбоксизащитные группы, используемые в производстве цефалоспорина, пенициллина и пептидов, могут также использоваться для защиты заместителей карбоксигрупп в бензодиазепиндионе. Дополнительные примеры этих групп можно найти в Е. Наз1ат, «Рго1сс11ус Огоирз ш Огдашс Сйеш151гу», Ю.\У. МсОш1е, Еб., Р1епит Ргезз, №\ν Уогк. Ν.Υ., 1973, С11ар1ег 5, апб Т.^. Огеепе, «Рго1есбуе Огоирз ш Огдашс 8упЛез1з», 1ο1ιπ ХУбеу апб Бопз, №\ν Уогк. ΝΥ, 1981, С11ар1ег 5. Термин «защищенная карбоксигруппа» относится к карбоксигруппе, замещенной одной из вышеупомянутых карбоксизащитных групп.
Термин «амидзащитная группа» относится к любой группе, обычно используемой в производстве пептидов для защиты азотных атомов в пептидах от нежелательных побочных реакций. Такие группы включают р-метоксифенил, 3,4-диметоксибензил, бензил, О-нитробензил, ди-(р-пиридилметил), т-2(пиколил)-№-оксид, 5-дибензосуберил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил и т.п. Дополнительные описания этих защитных групп можно найти в «Рго1есйуе Огоирз ш Огдашс С11е1шз1гу». Тйеобога ^. Огеепе, 1981, 1ойп \УПеу апб Бопз, №\ν Уогк.
Если не указано иное, термины «гетероциклическая группа», «гетероциклический», «ГЕТ», «гет» или «гетероциклил» используются здесь взаимозаменяемо и относятся к любому моно-, би- или трициклическому насыщенному, ненасыщенному или ароматическому кольцу, содержащему указанное число атомов, где по меньшей мере одно кольцо представляет собой 5-, 6- или 7-звенное кольцо, содержащее от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу (Ьапд'з НапбЬоок о£ Сйет1з1гу, выше). Обычно 5-звенное кольцо содержит от 0 до 2 двойных связей, а 6- и 7-звенное кольцо содержит от 0 до 3 двойных связей, а атомы азота, углерода или серы в кольце могут быть, как вариант, оксидированными (например, NО2, С=О и 8О2), и любой азотный гетероатом может быть кватернизирован. В область определения входят любые бициклические группы, в которых любое из вышеупомянутых гетероциклических колец слито с бензольным кольцом. Гетероциклилы, в которых гетероатомами являются кислород или сера, предпочтительны, когда гетероциклил образует всю или часть группы «Ό» в формуле I.
Следующие кольцевые системы являются примерами гетероциклических (замещенных или незамещенных) радикалов, обозначенных термином «гетероциклил» или «гет»: тиенил, фурил, пирролил, имидазолил, пиразолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, триазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиатриазолил, оксатриазолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, тиазинил, оксазинил, триазинил, тиадиазинил, оксадиазинил, дитиазинил, диоксазинил, оксатиазинил, тетразинил, тиатриазинил, оксатриазинил, дитиадиазинил, имидазолинил, дигидропиримидил, тетрагидропиримидил, тетразоло[1,5-Ь]пиридазинил и пуринил, а также бензослитые производные, например бензоксазолил, бензофурил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензотриазолил, бензоимидазолил и индолил.
Гетероциклические 5-звенные кольцевые системы, содержащие атом серы или кислорода и от 1 до 3 атомов азота, также пригодны для использования в данном изобретении. Примеры таких предпочтительных групп включают тиазолил, в частности тиазол-2-ил и тиазол-2-ила Ν-оксид, тиадиазолил, в частности 1,3,4-тиадиазол-5-ил и 1,2,4-тиадиазол-5-ил, оксазолил, предпочтительно оксазол-2-ил, и оксадиазолил, такой как 1,3,4-оксадиазол-5-ил и 1,2,4-оксадиазол-5-ил. Группа дополнительных предпочтительных примеров 5-звенных кольцевых систем с 2-4 атомами азота включает имидазолил, предпочтительно имидазол-2-ил; триазолил, предпочтительно 1,3,4-триазол-5-ил, 1,2,3-триазол-5-ил, 1,2,4-триазол- 14 007852
5- ил, и тетразолил, предпочтительно 1Н-тетразол-5-ил. Предпочтительная группа примеров бензослитых производных включает бензоксазол-2-ил, бензтиазол-2-ил и бензимидазол-2-ил.
Дополнительные подходящие специфические примеры вышеупомянутых гетероциклических кольцевых систем включают 6-звенные кольцевые системы, содержащие от 1 до 3 атомов азота. Такие примеры включают пиридил, например пирид-2-ил, пирид-3-ил и пирид-4-ил; пиримидил, предпочтительно пиримид-2-ил и пиримид-4-ил; триазинил, предпочтительно 1,3,4-триазин-2-ил и 1,3,5-триазин-4-ил; пиридазинил, в частности пиридазин-3-ил, и пиразинил. Пиридина Ν-оксиды и пиридазина Ν-оксиды, а также пиридил, пиримид-2-ил, пиримд-4-ил, пиридазинил и 1,3,4-триазин-2-ил составляют предпочтительную группу радикалов.
Заместители для замещенной (как вариант) гетероциклической кольцевой системы и дополнительные примеры 5- и 6-звенных кольцевых систем, описанных выше, можно найти в №. Огискйсппсг с( а1., патент США № 4,278,793.
Другая предпочтительная группа «гетероциклилов» или «гетов» включает 1,3-тиазол-2-ил, 4-(карбоксиметил)-5-метил-1,3-тиазол-2-ил, 4-(карбоксиметил)-5-метил-1,3-тиазол-2-ила натриевую соль, 1,2,4тиадиазол-5-ил, 3-метил-1,2,4-тиадиазол-5-ил, 1,3,4-триазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-триазол-5-ил, 2-гидрокси-1,3,4-триазол-5-ил, 2-карбокси-4-метил-1,3,4-триазол-5-ила натриевую соль, 2-карбокси-4-метил1,3,4-триазол-5-ил, 1,3-оксазол-2-ил, 1,3,4-оксадиазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-оксадиазол-5-ил, 2-(гидроксиметил)-1,3,4-оксадиазол-5-ил, 1,2,4-оксадиазол-5-ил, 1,3,4-тиадиазол-5-ил, 2-тиол-1,3,4-тиадиазол-5-ил, 2-(метилтио)-1,3,4-тиадиазол-5-ил, 2-амино-1,3,4-тиадиазол-5-ил, 1Н-тетразол-5-ил, 1-метил-1Н-тетразол-5ил, 1 -(1 -(диметиламино)эт-2-ил)-1Н-тетразол-5-ил, 1 -(карбоксиметил)-1Н-тетразол-5-ил, 1 -(карбоксиметил)-1Н-тетразол-5-ила натриевую соль, 1-(метилсульфоновой кислоты)-1Н-тетразол-5-ил, 1-(метилсульфоновой кислоты)-1Н-тетразол-5-ила натриевую соль, 2-метил-1Н-тетразол-5-ил, 1,2,3-триазол-5-ил, 1метил-1,2,3-триазол-5-ил, 2-метил-1,2,3-триазол-5-ил, 4-метил-1,2,3-триазол-5-ил, пирид-2-ила Ν-оксид,
6- метокси-2-(п-оксид)пиридаз-3-ил, 6-гидроксипиридаз-3-ил, 1-метилперид-2-ил, 1-метилперид-4-ил, 2гидроксипиримид-4-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-5,6-диоксо-4-метил-аз-триазин-3-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-4-(формилметил)-5,6-диоксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5оксо-6-гидрокси-аз-триазин-3-ила натриевую соль, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3ила натриевую соль, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-метокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-2-метил-аз-триазин-3-ил, 2,5-дагидро-5-оксо-2,6-диметил-аз-триазин-3-ил, тетразоло[1,5-Ь]пиридазин-6-ил и 8-аминотетразоло [1,5 -Ь]пиридазин-6-ил.
Альтернативная группа «гетероциклилов» включает 4-(карбоксиметил)-5-метил-1,3-тиазол-2-ил, 4(карбоксиметил)-5-метил-1,3-тиазол-2-ила натриевую соль, 1,3,4-триазол-5-ил, 2-метил-1,3,4-триазол-5ил, 1Н-тетразол-5-ил, 1-метил-1Н-тетразол-5-ил, 1-(1-(диметиламино)эт-2-ил)-1Н-тетразол-5-ил, 1-(карбоксиметил)-1Н-тетразол-5-ил, 1-(карбоксиметил)-1Н-тетразол-5-ила натриевую соль, 1-(метилсульфоновой кислоты)-1Н-тетразол-5-ил, 1-(метилсульфоновой кислоты)-1Н-тетразол-5-ила натриевую соль, 1,2,3-триазол-5-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-5,6-диоксо-4-метил-аз-триазин-3-ил, 1,4,5,6-тетрагидро-4-(2-формилметил)-5,6-диоксо-аз-триазин-3-ил, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ила натриевую соль, 2,5-дигидро-5-оксо-6-гидрокси-2-метил-аз-триазин-3-ил, тетразоло[1,5-Ь]пиридазин-6-ил и 8-аминотетразоло [1,5 -Ь]пиридазин-6-ил.
Бивалентные радикалы Ь, разветвленные или неразветвленные, полученные из алканов, алкенов, алкадиенов, алкинов, алкадиинов и аренов, возможно, содержащие атомы О, N и/или 8 или гомо- и гетероциклы, ароматические или алифатические, обозначаются путем добавления свободной валентности «-» на обоих концах соответствующего моновалентного радикала. Атомы, имеющие свободные валентности, могут включать любой из атомов С, О, N или 8.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают соли, полученные в результате реакций как с кислотами, так и с основаниями. Выражение «фармацевтически приемлемые соли с кислотами» относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований и которые не являются нежелательными в биологическом или другом отношении, образованы с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, угольная кислота, фосфорная кислота и т. п., и органическими кислотами, которые могут быть выбраны из алифатических, циклоалифатических, ароматических, аралифатических, гетероциклических, карбоновых и сульфоновых классов органических кислот, такими как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, аспарагиновая кислота, аскорбиновая кислота, глутаминовая кислота, антраниловая кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, эмбонатовая кислота, фенилуксусная кислота, метансульфокислота, этансульфокислота, р-толуолсульфокислота, салициловая кислота и т.п.
«Фармацевтически приемлемые соли с основаниями» включают соли, полученные из неорганических оснований, такие как соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия и т.д. Особо предпочтительны аммониевые, калиевые, натриевые, кальциевые и
- 15 007852 магниевые соли. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, такие как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, 2-диэтиламиноэтанол, триметамин, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, пурины, пиперизин, пиперидин, Ν-этилпиперидин, полиаминные смолы и т.п.
Особо предпочтительны такие органические нетоксические основания, как изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметамин, дициклогексиламин, холин и кофеин.
Термин «пролекарство» здесь означает производное или предшественник молекулы основного лекарства, который улучшает фармацевтически желательные характеристики или свойства (например, транспорт, биоаккумулирование, фармакодинамику и т.д.) и который требует биотрансформации, спонтанной или ферментативной, внутри организма для высвобождения активного основного лекарства. Примеры карбоксильных пролекарств включают такие предшественники, как альдегиды, спирты или амины, или такие производные, как сложные эфиры.
B. Применение.
Антагонисты ЬРА-1 и/или Мас-1 по данному изобретению подходят для терапевтического применения при таких заболеваниях и состояниях, для которых показано ингибирование или модуляция взаимодействия ЬРА-1 и/или Мас-1 с 1САМ, особенно 1САМ-1. Такие заболевания и состояния включают Тклеточные воспалительные реакции, такие как воспалительные заболевания кожи, включая псориаз; реакции, связанные с воспалительным кишечным заболеванием (таким как болезнь Крона и язвенный колит); респираторный дистресс-синдром взрослых; дерматит; менингит; энцефалит; увеит; аллергические состояния, такие как экзема и астма, и другие состояния, вызывающие инфильтрацию Т-клеток и хронические воспалительные реакции; реакции кожной гиперчувствительности (включая сумах укореняющийся); аллергический контактный дерматит; атеросклероз; аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, системная красная волчанка (СКВ), сахарный диабет, множественный склероз, синдром Рейнода, аутоиммунный тиреоидит, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, синдром Шегрена, юношеский диабет и иммунные реакции, связанные с замедленной гиперчувствительностью, опосредованной цитокинами и Т-лимфоцитами, обычно наблюдаемые при туберкулезе, саркоидозе, полимиозите, гранулематозе и васкулите; злокачественную анемию; заболевания, вызывающие лейкоцитарный диапедез; воспалительные расстройства ЦНС, синдром множественного поражения внутренних органов вследствие заражения крови или травмы; аутоиммунную гемолитическую анемию; тяжелую псевдопаралитическую миастению, заболевания, опосредованные комплексом антиген-антитело; все типы трансплантаций, включая реакции «трансплантат против хозяина» или «хозяин против трансплантата», ВИЧ-инфекцию и т.д.
Другие лейкоцитарно-опосредованные заболевания, для которых могут быть использованы данные конкурентные ингибиторы, включают геморрагический шок, ишемическое/реперфузионное поражение, шунтирующую хирургию, ожоги, инсульт, последствия аортокоронарного шунтирования (АКШ), васкулит, церебральный отек (более широко - рестеноз, острый инфаркт миокарда и инфаркт миокарда без зубца С).
C. Предпочтительные варианты осуществления.
1. Конкурентные ингибиторы СИ11а/СП18:1САМ-1.
Один из вариантов осуществления изобретения включает соединение, которое способно ингибировать связывание лейкоцитарного рецептора ЬРА-1 с его нативным т νίνο лигандом (лигандами), особенно
где Υ1 выбран из группы, включающей СН и С-ОН;
- 16 007852
Υ2, Υ3, Υ4 и Υ5 выбраны из группы, включающей СН;
Ζ1 выбран из группы, включающей ΝΚ.. О и 8;
п=0-3;
Ьх выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
С2-С5-алкилен,
С3-С6-циклоалкилен,
С0-С3-алкилен-NΚη-(С=Ο)-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-(С=Ο)-NΚп-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-О-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-NΚп-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-(С=О)-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-СВ1=СВ2-С0-С3-алкилен,
С0-С3-алкилен-С=С-С0-С3-алкилен и
С0-С3-алкилен-гет-С0-С3-алкилен, при этом заместители выбираются из группы, включающей от 1 до 3 радикалов К1, В2 и В3;
ΕΥ выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-NВη-(С=О)-С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-(С=О)-NВп-С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-О-С0-С2-алкилен,
С0-С2-алкилен-NВп-С0-С2-алкилен, С0-С2-алкилен-(С=О)-С0-С2-алкилен, при этом заместители выбраны из группы, включающей от 1 до 3 радикалов В1, В2 и В3;
В1, В2 и В3 выбраны из группы, включающей
С1-С8-алкил, водород, гидроксигруппу, феноксигруппу, фенил и
ВС выбран из группы, состоящей из водорода и замещенного или незамещенного гета, при этом заместители в гете представляют собой от 1 до 3 радикалов В4;
гет является моно-, би- или трициклическим 5-, 6-, 7-, 9- или 10-звенным насыщенным, ненасыщенным или ароматическим кольцом, имеющим от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу,
Вр и В4 независимо выбраны из группы, включающей
ОН,
СН νο2, галоген,
ОВп,
8Вп,
8ОВп,
СР3,
ВС,
ΝΕ^11',
NВηС(=О)-О-Вη',
1\1ВпС(=О)-Вп', С0-С6-алкил-8О2-Вп, Со-Сб-алкил-8О2-№пВп',
С(=О)-Вп,
О-С(=О)-Вп,
С(=О)-О-Вп,
С(=О)^пВп',
В4 представляет собой химическую связь, когда гет представляет собой двухвалентную соединительную группу;
Вп и Вп' независимо выбраны из группы, включающей водород, гидроксигруппу,
С1-С6-алкил, галоген-С1-С6-алкил,
С1-С6-алкил-гет, гет-С1-С6-алкил,
- 17 007852
С6-С12-арил и гет;
К представляет собой гидроксигруппу;
О отсутствует или представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной из ^(Кп)-, ^(Кп)-С(=О)-, ^(Кп)-С(=О)-О-, ^(кп)-с(=ожкп)-, ^(Кп)-8О2-,
-С(-О)-,
-О-С(=О)^(Кп)-, -С(=О)^(Кп)-;
V отсутствует или представляет собой бивалентную группу, возможно, замещенную, выбранную из группы, включающей
С1-С11-алкилена,
С2-С6-алкенилена, С0-С6-алкил-гета, при этом заместители в любом алкиле представляют собой от 1 до 3 радикалов Ка, а заместители в любом ариле или гете представляют собой от 1 до 3 радикалов Ка;
представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной группы, включающей
Ка,
ΝΗ-^^)-^, С(=О)-КС, с(=О)^пКп' и КС, обладающие способностью модулировать адгезию между внутриклеточными адгезионными молекулами и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов, а также его фармацевтически приемлемые соли;
Ка представляет собой аминогруппу.
Более конкретно, соединение может представлять собой соединение, выбранное из группы, включающей
- 18 007852
Рс
ΗΝ
а также фармацевтически приемлемые соли этих соединений.
Также, более конкретно, соединение может представлять собой соединение, выбранное из группы, включающей
- 19 007852
а также фармацевтически приемлемые соли этих соединений.
Примеры предпочтительных соединений по данному изобретению включают
- 20 007852
- 21 007852
- 22 007852
Ώ. Способы производства.
Один из способов получения антагонистов БГА-1 включает химический синтез «пептида» или пептидомиметика. Этот синтез может проводиться по методике, хорошо известной опытным специалистам в данной области (см. 81е\\аП апб Уоипд, 8ойб Рйазе Рерибе 8уп1йез1з Р1егсе С11еппса1 Со. КоскГогб, П. (1984); см. также патенты США № 4,105,603, 3,972,859, 3,842,067 и 3,862,925)).
Из обзора соединений, приведенных выше, становится ясно, что все они содержат одну или более амидных или пептидных связей и поэтому могут рассматриваться как пептидомиметики. Пептидомиметики по изобретению удобно также получать с использованием твердофазного пептидного синтеза (Мегпйе1б, 1. Ат. СЬет. 8ос., 85:2149 (1964); Ноиа1еп, Ргос. Иа11. Асаб. 8ст И.8.А., 82:5132-5159 (1985)). Твердофазный синтез начинается с карбоксильного окончания предполагаемого пептида путем соединения защищенной аминокислоты с подходящей полимерной смолой (например, хлорметилированной полистирольной смолой), как показано на фиг. 1-1 и 1-2, на стр. 2 и 4 работы 81е\\аП апб Уонна, выше. После удаления α-аминозащитной группы посредством, например, трифторуксусной кислоты (ТФУ) в метиленхлориде и нейтрализации, например, в ТЕА в синтез добавляются следующая α-аминокислота и аминокислота с защищенной боковой цепью. Оставшиеся α-аминокислоты и, если необходимо, аминокислоты с защищенной боковой цепью присоединяются последовательно в желаемом порядке путем конденсации для получения промежуточного соединения, соединенного с полимерной смолой. В альтернативе, некоторые амины и кислоты могут соединяться друг с другом, образуя пептид, до добавления пептида в растущую твердофазную пептидную цепь.
Конденсация между двумя аминокислотами может проводиться обычными способами конденсации, такими как азидный способ, смешанный кислотно-ангидридный способ, способы ДЦК (Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид) или ДИНК (Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимид), способ активного эфира (способ р-нитрофенилового эфира, способ ВОР [бензотриазол-1-ил-окси-трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат], способ Ν-гидроксиянтарной кислоты имидоэфира и т.д., а также способ реагента К Вудворда.
Общей для всех химических синтезов пептидов является защита любых реакционноспособных групп боковых цепей аминокислот подходящими защитными группами. В конечном счете, после последовательной сборки нужной полипептидной цепи эти защитные группы удаляются. Также общей является защита α-аминогруппы в аминокислоте или фрагменте, пока этот элемент реагирует на участке кар боксильной группы, с последующим избирательным удалением α-аминозащитной группы для обеспечения возможности реакции теперь на этом участке. Таким образом, для пептидного синтеза общим является то, что вырабатывается промежуточное соединение, в котором аминокислотные остатки располагаются в пептидной цепи в желаемой последовательности, а к боковым цепям этих остатков прикреплены защитные группы. Эти защитные группы затем удаляются вместе, по существу, одновременно, чтобы получить желаемый результирующий продукт после отделения от полимерной смолы.
- 23 007852
Подходящие защитные группы для защиты α- и ε-аминогрупп боковых цепей включают бензилоксикарбонил (ί,’ΒΖ). изоникотинилоксикарбонил (ίΝΟΟ), о-хлорбензилоксикарбонил (2-С1- ί,’ΒΖ). р-нитробензилоксикарбонил [Ζ(ΝΟ2)], р-метоксибензилоксикарбонил |2(0Ме)], трет-бутоксикарбонил (ВОС), трет-амилоксикарбонил (АОС), изоборнилоксикарбонил, адаматилоксикарбонил, 2-(4-бифенил)-2-пропилоксикарбонил (ВРОС), 9-флуоренилметоксикарбонил (ВМ0С), метилсульфонаиэтоксикарбонил (Мкс), трифторацетил, фталил, формил, 2-нитрофенилсульфенил (ΝΡ8), дифенилфосфинотиоил (Рр!), диметилфосфинотиоил (Мр!) и т.п.
Защитные группы для карбоксильной функциональной группы представлены следующими примерами: бензиловый эфир (Οϋζ1), циклогексиловый эфир (Скх), 4-нитробензиловый эфир (0!Вц), 4-пиридилметиловый эфир (0рю) и т.п. Зачастую желательно, чтобы специфические аминокислоты, такие как аргинин, цистеин и серин, содержащие функциональную группу, отличную от амино- и карбоксильной групп, были защищены подходящей защитной группой. Например, гуанидиногруппа аргинина может быть защищена нитрогруппой, р-толуолсульфонилом, бензилоксикарбонилом, адамантилоксикарбонилом, р-метоксибензолсульфонилом, 4-метокси-2,6-диметилбензолсульфонилом (Мбк), 1,3,5-триметилфенилсульфонилом (М!к) и т.п. Тиоловая группа цистеина может быть защищена р-метоксибензилом, трифенилметилом, ацетиламинометилэтилкарбамоилом, 4-метилбензилом, 2,4,6-триметилбензил (ТтЬ) и т.д., а гидроксильная группа серина может быть защищена бензилом, трет-бутилом, ацетилом, тетрагидропиранилом и т.п.
8!е^аг! апб Уоипд, выше, предоставляют детальную информацию относительно методик получения пептидов. Защита α-аминогрупп описана на стр. 14-18, а блокирование боковых цепей описано на стр. 18-28. Таблица защитных групп для амино-, гидроксильной и сульфгидрильной функциональных групп приведена на стр. 149-151.
После составления желаемой аминокислотной последовательности промежуточный пептид отделяется от полимерной подложки путем обработки соответствующим реагентом, таким как жидкий НР и один или более серосодержащих очистителей, которые не только отщепляют пептиды от смолы, но также отщепляют все оставшиеся защитные группы боковых цепей. После НР-отщепления пептидный остаток промывается эфиром и экстрагируется из смолы путем промывки водным ацетонитрилом и уксусной кислотой.
Предпочтительно, для того чтобы избежать алкилирования остатков в полипептиде (например, алкилирования остатков метионина, цистеина и тирозина), используется тиокрезольная и крезольная очистительная смесь.
Другие общие методики
Пептидомиметические соединения по данному изобретению удобно также получать способами пептидного синтеза, описанными в таких монографиях, как «Ргтщр1ек оГ Рерйбе 8уп!йек1к, М. Вобапкку, 8ргтдег-Уег1ад, 2пб Еб., 1993; «8уп!йе!ю Рерйбек: А Икегк Сшбе», С.А. Сгап!, Еб, У.Н. Ргеетап апб Со., 1992; и список ссылок к ним, или другими общеизвестными способами. Синтез соединений по данному изобретению, которые являются пептидомиметическими по природе (т.е., содержат отличные от стандартных амидные связи между двумя или более аминокислотами), могут быть получены путем усовершенствования методик, описанных в примере 6, и путем общих методов синтеза, описанных в «СотргекепкКе Огдашс Т^аикίо^та!^опк», КС. Багоск, УНС РиЬНккегк, 1989, а также другими общими способами, известными специалистам.
Для соединений по п.1, в котором амидные связи (-ί.'(=Ο)-ΝΗ-) заменены амидными изостерическими (А1) связями, такими как (-С(=8)-МН-), (-8(=Ο)2-ΝΉ-), -СЩ-ΝΗ-, -СН2-8-, -СН2-О-, -СН2-СН2-, -СН=СН- (цис- и транс-), -СС^-СН-, -СН^Щ-СЩ-, -СН(СМ)-М1Н-, -О-С^-МТН- и -СЩ-δΟ-, применяются известные методики замены амидных связей. Следующие ссылки описывают получение амидных изостерических связей, которые включают эти альтернативные соединительные группы: 8ра!о1а, А.Р., Уеда Ба1а 1(3): «Рерйбе ВаскЬопе МобШсайопк» (Сепега1 Реу1е\\') (Маг 1983), 8ра!о1а, А.Р., ш «СкетИйу апб Ьюскет1к!гу оГ Атто Ас1бк Рерйбек апб Рго!етк», В. ^ешк!ет, еб., Магсе1 Беккег, №\ν Уогк, Р. 267 (1983); Мог1еу Тгепбк Ркагт. 8ск рр. 463-468; Нибкоп е! а1. 1п!. 1. Рер!. Рго Г. Век., 14:177-185 (1979) (-СН2М1Н-, -СН2СН2-); 8ра!о1а е! а1. БИё 8οΐ. 38:1243-1249 (1986) (-СН2-8-); Наин. 1. Скет. 8ос. Регкт. Тгапк. I 307-314 (1982) (-СН=СН-, цис- и транс-); А1тдшк! е! а1., 1. Меб. Скет. 23:1392-1398 (1980) (-Ο(=Ο)-€Ή2-); .кпшпдк-ХУкПе е! а1., Те!гайебгоп Бей. 23.(1982) (-Ο(=Ο)-€Ή2-); δζе1ке е! а1., ЕР Аррйсайоп Мо. 45665 (1982) Скет. АЬк.: 9739405 (1982) (-СН^Щ-СНД; Но11абау е! а1., Те!гайебгоп Бей. 24:44014404 (1983) (-С^Щ-СЩ-); НгиЬу Бйе 8οΐ. 31:189-199 (1982) (-СН28-); Ско е! а1. 8аепсе 261:1303-1305 (1993) (-Ο^^-ΜΗ-); 8кегтап е! а1. Вюскет. Вюркук. Век. Сотт. 162(3):1126-1132 (1989) (-С(=8)-М1Н-); Са1садш е! а1., 1п!. 1. Рерйбе Рго!ет Век. 34:319-324 (1989) (-δ(=Ο)2-ΝΉ-); ТепЕлиЕ 1. Ογ§. Скет. 52:418422 (1987) (-СЩ-Ο-).
Схема I иллюстрирует один из синтетических подходов, обеспечивающих получение неприродных аминокислотных боковых цепей, в частности, для заместителя Т в формуле I. Способ обеспечивает α-алкилирование «глициновой» боковой цепи с использованием твердофазного синтеза в промышленно выпускаемом аппарате, таком как Агдопаи! Маий1ик 2400.
- 24 007852
ΝΗζ
I] η
По вышеприведенной схеме алкилирования в антагонисты ЬЕА-1 могут вводиться следующие примеры Е-групп:
ОМе \Οόμ. \О*си
9 9 9 9
Если «Е» в схеме I представляет собой алкиламин, полученный из аминокислот лизина, орнитина или ПАРА восстановлением нитрилов, примеры которых приведены выше, или полученный из защищенного (например, ЕМОС) аминоалкилгалогенида, существуют синтетические способы для получения производных Т, включая мочевины, карбаматы, амиды и сульфонамиды, при помощи известных мето дик.
Схема II иллюстрирует твердофазный способ получения этих производных Т.
- 25 007852
Схема II
Мочевины, полученные по схеме II, могут синтезироваться из следующих характерных серийно выпускаемых изоцианатов (ΠΝίΌ):
Другие характерные замещенные арилизоцианаты, пригодные для использования в приведенной выше схеме, включают
Если «К» в схеме I представляет собой спирт, то эти и другие изоцианаты могут использоваться для получения карбаматов по схеме Па.
- 26 007852
Карбаматы (ориентации, противоположной схеме 11а), амиды и сульфонамиды, синтезированные по схеме II, могут быть получены из характерных серийно выпускаемых соединений КОСОС1, КСОС1 и К8О2С1, включая следующие:
Схема III иллюстрирует общий ход синтеза для алкильных линкеров, Ь, для дихлорзамещенных бензоиламинокислот или их производных. Ключевым промежуточным веществом в этом способе является йод-, дихлорбензоил-АА (4).
Схема III
Ключевое промежуточное соединение (4) соединяется с различными алкинами для получения алкильных линкеров различной длины. Например, углеродный линкер 3 может быть получен путем соединения (4) с алкиновым промежуточным соединением (5), полученным по схеме Ша.
Схема Ша
о он
Схема IV иллюстрирует синтез замещенных и незамещенных алканов и замещенных алкиновых линкеров.
- 27 007852 а о я
Схема IV
он
1. Н2, 5%Ю1/А12Оэ
2. ΊΓΓΑ
Т
ОН α о я
Г) [АуЛйЛСО1Н
он а о я
он
Углеродный линкер 4 может быть получен путем соединения (4) с алкиновым промежуточным соединением (6), полученным по схеме V.
Схема VI иллюстрирует синтез незамещенного алканового и алкинового линкеров.
Схемы VIа и VIЬ иллюстрируют синтез замещенных и незамещенных алканового и алкинового линкеров длиной в 3-5 углеродных атомов.
- 28 007852
Схема VII иллюстрирует синтез 3-углеродного алкильного линкера, где «В» представляет собой диметилзамещенный бензоильный антагонист БРА-1.
- 29 007852
Схема VIII иллюстрирует синтез 3-5-атомного диэфирного линкера, где η=1-3. Промежуточный фенол (7) может быть также использован в синтезе моноэфиров, описанном ниже.
Схема VIII
Схема IX иллюстрирует синтез 3-5-атомных моноэфирных линкеров, где η=1-3. Вышеописанный промежуточный фенол (7) используется в этой методике.
Схема IX
Схема X иллюстрирует синтез 5-атомных алкильных линкеров, где дистальная группа «!)» представляет собой 5-звенное ароматическое кольцо. Предпочтительные кольца включают тиофен, фуран, тиазол и оксазол, где Ζ1 представляет собой О или 8, а Υ2, Υ3 или Υ4 выбраны из N или СН.
- 30 007852
Схема XI иллюстрирует синтез 3-атомных аминоспиртовых линкеров, где дистальная группа «Ώ» представляет собой фенил или гет.
β-Гидроксиамины получают реакцией первичного или вторичного амина с эпоксидами. Эпоксиды легко получаются известными способами (т.е. оксидированием алкенов).
Схема XI
Схема XII иллюстрирует синтез 3-5-атомных оксадиазоловых линкеров, где дистальная группа «Ώ» представляет собой фенил или гет.
Схема XII
Оксадиазолы получают соединением гидроксиамидина с активированной карбоновой кислотой в
- 31 007852 условиях дегидратации. Гидроксиамидины удобно получать реакцией нитрила с гидроксиламином для
Схема XIII иллюстрирует синтез 5-атомных аминотетразоловых линкеров, где дистальная группа «Ό» представляет собой фенил или гет.
Ключевым этапом в получении аминотетразолов является реакция 5-галоген-1-фенилтетразола с амином. Аминотетразолы образуются при реакции Ν-бромсукцинимида и азида натрия с фенилизоцианидом в условиях фазового перехода.
Снятие защиты и соединение с карбоксилатом для присоединения левой боковой аминокислоты проводится, как описано выше для других соединений.
Е. Модели осуществления изобретения.
Наилучшая иммунодепрессивная эффективность представляется при таком режиме лечения, который использует начальное введение высокой дозы антагониста ЬЕА-1 с последующим лечением более низкими дозами антагониста.
Обычно антагонист ЬЕА-1, используемый в способе по данному изобретению, составляют путем смешивания его при температуре окружающей среды, при соответствующем рН и при желаемой степени чистоты с физиологически приемлемыми носителями, т.е. носителями, которые являются нетоксическими для реципиентов при используемых дозах и концентрациях. рН состава зависит, в основном, от конкретного использования и концентрации антагониста, но предпочтительно находится в диапазоне от ~3 до ~8. Удобным вариантом осуществления является состав в ацетатном буфере при рН 5.
Антагонист ЬЕА-1 для использования в данном изобретении предпочтительно стерилен. Антагонист ЬЕА-1 обычно должен храниться в виде твердого состава, хотя возможно использование лиофилизованных составов или водных растворов.
Состав антагониста будет смешиваться, дозироваться и применяться способом, согласующимся с испытанной медицинской практикой. Факторы, подлежащие рассмотрению в данном контексте, включают конкретное расстройство, подвергающееся лечению, конкретный вид млекопитающих, подвергающийся лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину расстройства, участок доставки агента, способ применения, схему применения и другие факторы, известные практикующим врачам. В соответствии с этими факторами будут регулироваться «терапевтически эффективное количество» антагониста ЬЕА-1, а также минимальное количество, необходимое для предотвращения, облегчения или лечения ЬЕА-1-опосредованных расстройств, включая лечение ревматоидного артрита, множественного склероза, астмы, псориаза (местное или системное), снижение воспалительных реакций, выработку толерантности к иммуностимуляторам, предотвращение иммунной реакции, которая может привести к отторжению трансплантата хозяином или наоборот, или пролонгирование жизнеспособности пересаженного трансплантата. Такое количество предпочтительно ниже количества, которое является токсическим для хозяина или существенно повышает подверженность хозяина инфекциям.
В качестве общего предложения, начальное фармацевтически эффективное количество антагониста ЬЕА-1, применяемое парентерально на дозу, должно составлять величину в диапазоне примерно от 0,1 до
- 32 007852 мг/кг веса тела пациента в день; типичный начальный диапазон используемого антагониста ЬЕА-1 составляет от 0,3 до 15 мг/кг в день.
Антагонист ЬЕА-1 применяется любыми удобными способами, включая оральное, местное, трансдермальное, парентеральное, подкожное, внутрибрюшинное, внутрилегочное, внутриносовое применение и, если это желательно для местного иммунодепрессивного лечения, применение непосредственно внутрь органа (включая перфузию или другой контакт трансплантата с антагонистом перед трансплантацией). Парентеральные вливания включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное применение. Предпочтительный способ применения для псориаза - местный, в непосредственной близости к пораженной области.
Антагонист ЬЕА-1 необязательно, но как вариант, может быть смешан с одним или более агентами, используемыми в настоящее время для предотвращения или лечения рассматриваемого расстройства. Например, при ревматоидном артрите антагонист ЬЕА-1 может назначаться в сочетании с глюкокортикостероидом. Кроме того, терапия на основе пептидов Т-клеточных рецепторов пригодна в качестве вспомогательной терапии для предотвращения клинических признаков аутоиммунного энцефаломиелита (Ойнег с1 а1., выше). Для трансплантатов антагонист ЬЕА-1 может приниматься одновременно или раздельно с иммунодепрессивным агентом, определенным выше, например циклоспорином А, для модуляции иммунодепрессивного эффекта. Эффективное количество этих других агентов зависит от количества антагониста ЬЕА-1, присутствующего в составе, типа расстройства или лечения и других факторов, описанных выше.
Различные аутоиммунные расстройства, описанные выше, подвергаются лечению антагонистами ЬЕА-1 таким образом, чтобы вызвать иммунную толерантность к самоантигенам при их воздействии в результате расстройства. В этом отношении аутоиммунные расстройства напоминают реакцию «хозяин против трансплантата» и подвергаются лечению антагонистами ЬЕА-1 аналогичным образом. Однако при этих расстройствах у пациента уже установлена иммунная реакция на целевой антиген, в отличие от случая с трансплантатами до пересадки. Таким образом, желательно сначала вызвать и сохранить у таких пациентов кратковременное состояние иммуноподавления обычными способами, например обычным применением циклоспорина А или других обычных иммунодепрессивных агентов (одних или вместе с антагонистом ЬЕА-1), или наблюдать пациента до наступления периода ремиссии (отсутствия или существенного снижения патологических или функциональных показателей аутоиммунной реакции).
Далее изобретение поясняется более подробно при помощи ссылок на следующие примеры. Однако их не следует рассматривать как ограничивающие область изобретения. Все цитаты из литературных источников включены в виде ссылок.
Примеры
Пример 1. Получение и очистка ЬЕА-1 полной длины из клеток 293.
Построение вектора экспрессии кДНК ЬЕА-1.
Плазмиду с обеими человеческими последовательностями СЭ11а (аД и СЭ18 (β2), каждая с отдельным промотором СМУ для экспрессии в клетках 293, конструировали следующим образом. Плазмиду рККСЭ18, содержащую кДНК СЭ18 полной длины, вырезали рестрикционными энзимами Нра1 и Ауг II. Плазмиду рККСЭ11а, содержащую кДНК 0Ό11а полной длины, обработали энзимом Тац I метилазой для метилирования одного из двух участков Хтп I, затем вырезали Хтп I и 8ре I. Фрагмент из гидролизата рККСЭ18, содержащий кодирующую последовательность СЭ18, промотор СМУ, ген устойчивости к антибиотикам и другие плазмидные последовательности, лигировали с фрагментом из гидролизата рККСЭ11а, содержащим кодирующую последовательность СЭ11а и промотор СМУ. Липкие концы 8ре I и Ауг II являются совместимыми и были сшиты друг с другом. Концы ΗраI и Хтп I являются тупыми и были сшиты друг с другом с образованием плазмиды рКК ЬЕА а+Ь.
Выработка клеточной линии 293, выражающей ЬЕА-1.
Клеточную линию, выражающую человеческий ЬЕА-1, создали путем котрансфекции клеток 293 с плазмидой (рКК ЬЕА а+Ь), содержащей кДНК полной длины для элементов а. (СЭ11а) и β2 (СЭ18) вместе с последовательностью рК8Упео, которая кодирует маркер устойчивости 0418, под влиянием промотора К8У, с использованием ранее описанных способов (Войагу, №1р1ег апй №Ьеап, 1. Бю1. СНет., 264, 32, 18859-18862, 1989). После выращивания в присутствии 0,8 мг/мл 0418 в течение 20 дней популяцию устойчивых к лекарствам клеток выбрали для экспрессии ЬЕА-1 с использованием двухцветной ЕАС8 (флуоресцентная сортировка активированных клеток) с моноклональными антителами к элементу аъ (меченный флуоресцеина изотиоцианатом клон антител 25.3, каталог # 0860, АМАСб Шс.) или к комплексу β2 (антитело МНМ23, меченное фикоэритрином). (Ссылка для антитела МНМ23: НййгеШ 1.Е.К., апй Аиди81 1.Т., 1. Iттиηо1., 134, 3272-3280, 1985.) После трех раундов ЕАС8 клоновую популяцию изолировали (клон 19) и методом анализа 8са1с11агй определили число рецепторов, которое составило около 106 ЬЕА-1 на клетку. Эту клеточную линию выращивали в условиях суспензионной культуры, не содержащей сыворотки, с получением клеточных гранул для очистки ЬЕА-1.
Экстракция клеток (все операции выполняли при 0-4°С).
Замороженные клеточные гранулы суспендировали в 5 объемах 0,3М сахарозы/20 мМ НЕРЕ8/5 мМ
- 33 007852
СаС12/5 мМ МдС12/2 мг/мл апротинина рН 7,4 с использованием гомогенизатора Ροϊγΐτοη (Вппктап) приблизительно при 8000 об/мин. После получения равномерной суспензии клетки гомогенизировали при 20000 об/мин в течение 1 мин. Затем к гомогенату добавили фенилметансульфонилфторид (РМ8Е, 100 мМ в изопропаноле) до конечной концентрации 1 мМ и центрифугировали гомогенат при 21000 х д в течение 40 мин. Удалили надосадочную жидкость и суспендировали полученный шарик в объеме 1% ΤπΙοη Х100 (высшей степени очистки)/0,15М №1С1/20 мМ НЕРЕ8/5 мМ СаС12/5 мМ МдС12/20 мг/мл апротинина рН 7,4, равном объему сахарозного буфера, описанного выше. Клетки быстро гомогенизировали приблизительно при 8000 об/мин с использованием Ρο1γΐτοη, затем поместили на рокер (промывной лоток) на 30 мин. Экстракт центрифугировали, как описано выше, и сохранили надосадочную жидкость.
Лентин-лектиновая колонка.
Около 3-4 колоночных объемов клеточного экстракта загрузили при скорости 15 см/ч в лентин-лектиновую колонку 8ерЬаго8е (Рбагтааа), уравновешенную буфером 0,1% ΤπΙοη Х-100/0,15М №1С1/20 мМ НЕРЕ8/5 мМ СаС12/5 мМ МдС12/20 рН 7,4. После загрузки образца колонку промывали равновесным буфером до достижения А280 нм базисной линии. ЬЕА-1 элюировали 0,5М α-метилманнозида в равновесном буфере. Для максимального извлечения элюирование прекратили в начале появления ЬЕА-1, колонку оставили на ночь в элюентном буфере, а затем возобновили элюирование.
Колонка 0 Зербагоке.
Пектиновый элюат разбавили равным объемом буфера 0,1% Τηΐοη Х-100/0,15М №1С1/20 мМ НЕРЕ8/5 мМ СаС12/5 мМ МдС12/20 рН 7,4 и загрузили при скорости 15 см/ч в колонку О 8ер11аго5е Н1дб Рег[огтапсе (Рбагтааа), уравновешенную тем же буфером. После загрузки образца колонку промывали равновесным буфером до достижения А280 нм базисной линии, затем буфером 1% октилглюкозид/20 мМ НЕРЕ8/5 мМ СаС12/5 мМ МдС12/20 рН 7,4 до удаления Τηΐοη Х-100. ЬЕА-1 элюировали 10 колоночными объемами от 0 до 0,3М градиента №1С1 в том же буфере. Фракции анализировали при помощи 8Ό8 РАСЕ, из пиковой фракции получили пул и заморозили для хранения при -70°С.
Пример 2. ГСАМЛ-иммуноадгезин.
Плазмида для экспрессии человеческого ГСАМЛ-иммуноадгезина.
Сконструировали плазмиду для экспрессии человеческого ГСАМЛ-иммуноадгезина и дали наименование рЫОбК'.’АМСа^. Эта плазмида содержит промотор СМV (цитомегаловирус) и область энхансера, промотор 8Р6 для производства рибопроб, пять иммуноглобулиноподобных доменов [САМ-1, шесть участков аминокислотного расщепления, узнаваемых гененазой (генетически сконструированная форма субтилизина), область Ес из человеческого ^С, участок начального полиаденилирования 8ν40, источник репликации 8ν40, бактериальный источник репликации и кодировку бактериального гена для устойчивости к ампициллину.
Эту плазмиду конструировали с использованием фрагментов из двух разных плазмид. Первая плазмида, рККЗСАМтЛ, представляет собой плазмиду для экспрессии ТСАМ-1 полной длины. Следующие два праймера использовали для создания фрагмента, содержащего пять иммуноглобулиноподобных доменов IСАМ-1, путем ПЦР (полимеразной цепной реакции): 1) передний праймер длиной 17 Ьр (нуклеотидных оснований), гомологичный части векторной последовательности 5' кодирующей последовательности ГСАМ-1 -5' ТСС СТТ ТСТ СТС САС АС 3', и 2) задний праймер длиной 48 Ьр, гомологичный 7 аминокислотам у 3'-конца ^-подобного домена 5 и содержащий кодирующую последовательность для участка протеазного расщепления -5' СС ТСС ССА САС АОТ ОТА СТС ССС АСС СТС АΤА ССС ССС ССА САС САС А 3'. В реакции ПЦР использовали 0,2 мкг рККТСАМт.2,1 мкл переднего праймера при 10 ОЭ/мл, 2 мкл заднего праймера при 10 ОЭ/мл, по 0,2 мМ бАΤΡ, бСТР, бОТР и бЕГР, 0,54 мМ добавочного МдС12, 1х полимеразного буфера νΈΝΤ (Νον Е^1аЫ Вю1аЬ8) и 1 мкл полимеразы νΈΝΤ при 2 ед./мкл (Νο\ν ЕпдЕшб Вю1аЬ§). Реакцию денатурировали при 98°С для 5', затем осуществили 20 циклов через следующие температуры: 98°С 1, 98°С 10, 60°С 1, 60°С 1', 72°С 1, 72°С 1'. Реакцию продолжали 20' при 72°С перед выдержкой при 4°С в течение ночи. В результате реакции получили фрагмент длиной 1579 Ьр, который очистили с использованием очистительного комплекта ΟίηςκΕ-δρίη РСК ^адеи) и гидролизовали рестрикционными энзимами СШ и ЭгаШ (№\ν ЕпдЕшб Вю1аЬ8). Результирующий фрагмент подвергли гелевой очистке в 5% акриламидном геле в 1х ТВЕ, электроэлюировали в 0,1х ТВЕ и очистили в колонке 8ρίηΒίη6 (ЕМС). Этот фрагмент-вставка содержит первые 5 иммуноглобулиновых доменов ГСАМ-1 и участок расщепления гененазой.
Вторая плазмида, бксЕсдещ представляет собой плазмиду для экспрессии иммуноадгезина ΤγΚ, содержащую тот же протеазный участок расщепления. Эту плазмиду полностью гидролизовали энзимом СШ (Νον ЕпдЕшб Вю1аЬ8). Этот материал затем гидролизовали энзимом ЭгаШ (Νο\ν Е^ИЫ Вю1аЬ§) с использованием субоптимальных количеств энзима так, чтобы получился ряд частично усеченных фрагментов. Желаемый фрагмент длиной 5378 Ьр изолировали в 0,6% геле СТС Адагоке (ЕМС) в 1х ТВЕ (ВКЬ) и электроэлюировали в 0,1х ТВЕ. Материал экстрагировали сначала бутанолом, затем фенолом, затем хлороформом и осадили 0,1 объемом 3М ацетата натрия, рН 7,0 и 2,5 объемами этанола. Этот векторный фрагмент содержит все вышеперечисленные плазмидные детали, за исключением 5 иммуноглобулиновых доменов ГСАМИ и протеазного участка расщепления.
Два фрагмента, описанных выше, соединили в соотношении вставка: вектор - 3:1 с использованием
- 34 007852 около 50 нг вектора в 1х лигазного буфера и 2 мкл лигазы при 400 ед./мкл (Νο\ν Εηβίαηά Вю1аЬк) в течение 2 ч при комнатной температуре. Половину реакции трансформировали в ММ294-компетентные клетки стандартными способами.
Выработка клеточной линии 293, выражающей ЮАМ-Ъиммуноадгезин.
Клеточную выражающую ЮАМ-Ъиммуноадгезин, создали путем трансфекции клеток 293 с кДНК, кодирующей 5 иммуноглобулиновых доменов человеческого ЮАМ-1, начиная с последовательности человеческого Гс (рККЗФСАМСа^), вместе с ρΚδνηβο, как описано выше для клеточной линии ЬЕА-1. После селекции в 0,8 мг/мл С418 были выделены индивидуальные клоны клеток, устойчивых к лекарствам. Надосадочные жидкости культур этих клонов исследовали на экспрессию человеческого ЮАМ-1иммуноадгезина путем ЕЬЕЗА (иммуносорбентный анализ с применением фиксированных ферментов) с использованием поликлональных антител к человеческому Ес (каталог СаЬад # Н10507, Н10700). Оказалось, что клоновая клеточная линия, выражающая около 1 мг/мл ЮАМ-Ъиммуноадгезина, по результатам ЕЫ8А, реагирует с моноклональным антителом (АМАС, клон 84Н10, каталог # 0544) к человеческому ЮАМ-1. Эту клеточную линию выращивали в условиях культуры, не содержащей сыворотки, и собрали надосадочную жидкость для очистки ЮАМ-Ъиммуноадгезина.
Пример 3. Анализ на связывание рецепторов ЮАМ-ЕЬЕАЛ (протеин-протеиновый анализ).
Рисунок, показывающий поступательный анализ на связывание рецепторов человеческого ЮАМ1:ЬЕА-1, представлен на фиг. 2. Конкурентное ингибирование взаимодействия СО11а/СО18-[САМ-1 измеряется путем добавления известных количеств ингибиторов в соответствии с двумя системами протеин-протеинового анализа, описанными ниже.
Поступательный анализ ЬЕА-ЫСАМ-1 (РРЕЕ).
Очищенный рекомбинантный человеческий протеин ЬЕА-1 полной длины разбавляют до 2,5 мкг/мл в 0,02М НЕРЕ8, 0,15М №-1С1 и 1 мМ МпС12, наносят на 96-луночные диски (50 мкл/лунку) и выдерживают в течение ночи при 4°С. Диски промывают промывочным буфером (0,05% Т\тссп 20 в РВ8) и блокируют в течение 1 ч при комнатной температуре 1% В8А (альбумином бычьей сыворотки) в 0,02М Нерек, 0,15М №С1 и 1 мМ МпС12. Диски промывают. 50 мкл/лунку ингибиторов, соответствующим образом разбавленных во взятом для анализа буфере (0,5% В8А в 0,02М Нерек, 0,15М №-1С1 и 1 мМ МпС12), добавляют к 2Х конечной концентрации и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляют 50 мкл/лунку очищенного рекомбинантного человеческого ЮАМЧд из 5 доменов, разбавленного до 50 нг/мл во взятом для анализа буфере, и инкубируют 2 ч при комнатной температуре. Диски промывают и количество связанного ЮАМЧд определяют при помощи Соа1 аηί^-НиIдС(Ес)-НКР (козье антитело к человеческому Ес) в течение 1 ч при комнатной температуре. Диски промывают и обрабатывают 100 мкл/лунку субстрата ТМВ в течение 10-30' при комнатной температуре. Колориметрическое обнаружение прекращают при помощи 100 мкл/лунку 1М Н3РО4 и считывают результат при длине волны лазера 450 нМ на устройстве считывания дисков.
Альтернативная система протеин-протеинового анализа, описанная ниже, также дает количественное измерение конкурентного ингибирования взаимодействия СБИа/СБ^АСАМ-Е
Анализ на захват антитела РЬМ2 при взаимодействии ЬЕА-ЫСАМ-1 (РЬМ2).
Нефункциональное блокирующее моноклональное антитело РЬМ-2 к человеческому СБ 18 (описанное НПбтеШ, е1 а1., Мо1еси1аг Iттиηο1οду, νο1. 26, Νο. 9, рр. 883-895, 1989), разбавляют до 5 мкг/мл в РВ8, наносят на 96-луночные плоские диски (100 мкл/лунку) и выдерживают в течение ночи при 4°С. Диски блокируют 0,5% В8А во взятом для анализа буфере (0,02М Нерек, 0,15М №-1С1 и 1 мМ МпС12) в течение 1 ч при комнатной температуре. Диски промывают 50 мМ Тпк рН 7,5, 0,1М №С1, 0,05% Ътеен 20 и 1 мМ МпС12. Очищенный рекомбинантный человеческий протеин ЬЕА-1 полной длины разбавляют до 2 мкг/мл во взятом для анализа буфере и добавляют на диски 100 мкг/лунку, и инкубируют 1 ч при 37°С. Диски промывают 3Х. 50 мкл/лунку ингибиторов, соответствующим образом разбавленных во взятом для анализа буфере, добавляют к 2Х конечной концентрации и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляют 50 мкл/лунку очищенного рекомбинантного человеческого ЮАМЧд из 5 доменов, разбавленного до 161 нг/мл (до конечной концентрации 80 нг/мл) во взятом для анализа буфере, и инкубируют 2 ч при 37°С. Диски промывают и количество связанного ЮАМЧд определяют при помощи Сοаΐ апб-НЫдС^сЕНКР в течение 1 ч при комнатной температуре. Диски промывают и обрабатывают субстратом ТМВ 100 мкл/лунку в течение 5-10' при комнатной температуре. Колориметрическое обнаружение прекращают при помощи 100 мкл/лунку 1М Н3РО4 и считывают результат при длине волны лазера 450 нМ на устройстве считывания дисков.
Пример 4. Адгезионный анализ человеческих Т-клеток (анализ на прикрепление клеток).
Рисунок, показывающий адгезионный колориметрический анализ человеческих Т-клеток, представлен на фиг. 3. Анализ адгезии Т-клеток выполняется с использованием человеческой Т-лимфоидной клеточной линии НиТ 78. Сοаΐ аηί^-НиIдС(Ес)-НКР разбавили до 2 мкг/мл в РВ8 (фосфатно-солевой буферный раствор), нанесли на 96-луночные диски (50 мкл/лунку) и выдержали в течение 1 ч при 37°С. Диски промыли РВ8 и блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре 1% В8А в РВ8. ЮАМ-1 из 5 доменов разбавили до 100 нг/мл в РВ8 и добавили на диски по 50 мкл/лунку при 4°С. Клетки НиТ 78 центрифугировали при 100 д и обработали шарик из клеток 5 мМ ЕБТА (этилендиаминтетраацетат) в тече
- 35 007852 ние 5 мин при 37°С в 5% СО2-инкубаторе. Клетки промыли в 0,14М №С1, 0,02М Нерек, 0,2% глюкозы и 0,1М МпС12 (буфер для анализа) и центрифугировали. Клетки пересуспендировали в буфере для анализа до 3,0х106 клеток/мл. Ингибиторы разбавили в буфере для анализа до 2Х конечной концентрации и предварительно инкубировали с клетками НиТ 78 в течение 30 мин при комнатной температуре. 100 мкл/лунку клеток и ингибиторов добавили на диски и инкубировали при комнатной температуре 1 ч. Добавили 100 мкл/лунку РВ8, диски запечатали и центрифугировали перевернутыми при 100 д в течение 5 мин. Неприкрепленные клетки удалили из диска выстукиванием, а избыточный РВ8 промокнули бумажным полотенцем. На диск добавили 60 мкл/лунку р-нитрофенил-п-ацетил-в-Э-глюкозаминида (0,257 г в 100 мл нитратного буфера) и инкубировали 1,5 ч при 37°С. Ферментную реакцию прекратили при помощи 90 мкл/лунку 50 мМ глицина/5 мМ БОТА и считали результат при 405 нМ на устройстве считывания дисков. Адгезию клеток НИТ 78 к 54IСАМ-Iд измеряли с использованием р-нитрофенил-п-ацетил-β-Όглюкозаминидной методики по Ьап4едгеп, и. (1984) 1. !штипо1. Мебю4к 57, 379-388.
Пример 5. Анализ на пролиферацию Т-клеток (анализ на костимуляцию).
Рисунок, показывающий пролиферацию человеческих Т-клеток, представлен на фиг. 4. Этот анализ представляет собой т νίίτο модель пролиферации лимфоцитов в результате активации, вызванной соединением с Т-клеточным рецептором и ЬРА-1 после взаимодействия с антиген-представляющими клетками (8ртшдет, Т.А., %Пиге 346:425-434 (1990)).
Микротитровальные диски (96-луночные Νυπο, сертифицированные для ЕЫ8А) предварительно покрыли при 4°С в течение ночи 50 мкл раствора 2 мкг/мл козьего антитела к человеческому Рс (СаРад Н10700) и 50 мкл 0,07 мкг/мл моноклонального антитела к ί.Ό3 ([ттипоЮсН 0178) в стерильном РВ8. На следующий день растворы покрытий удалили. Диски дважды промыли РВ8 и добавляли 100 мкл 17 нг/мл 54-IСАМ-1-Iд6 в течение 4 ч при 37°С. Диски дважды промыли РВ8 перед добавлением Тклеток СЭ4+. Лимфоциты из периферической крови отделили от гепаринизированной цельной крови, взятой у здоровых доноров. Альтернативный способ заключался в получении цельной крови от здоровых доноров путем лейкофореза. Кровь разбавили 1:1 физраствором, расслоили и центрифугировали при 2500 д в течение 30 мин в Б8М (6,2 г Р1со11 и 9,4 г дизтризоата натрия на 100 мл) (Огдапоп ТесЬшса, N1). Моноциты уничтожили с использованием реагентной методики угнетения миелоидных клеток (Муе1ос1еаг, Се4аг1апе ЬаЬк, НотЬу, Опίа^^ο, Сапа4а). Клетки РВЬ пересуспендировали в 90% теплоинактивированной зародышевой бычьей сыворотки и 10% ЭМ8О (диметилсульфоксида), разделили на аликвоты и заморозили в жидком азоте. После размораживания клетки пересуспендировали в среде ВРМI 1640 (С1Ьсо, Сгап4 1к1ап4, ΝΥ), дополнительно содержащей 10% теплоинактивированной зародышевой бычьей сыворотки (Шегдеп, РигсЬаке, ΝΥ), 1 мМ пирувата натрия, 3 мМ Ь-глутамина, 1 мМ заменимых аминокислот, 500 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина, 50 мкг/мл гентамицина (С1Ьсо).
Очистку Т-клеток СЭ4+ Т производили по методике отрицательной селекции (при помощи колоночного комплекта Нитап СЭ4 Се11 Весονе^у Со1итп Κίί #СЬ11О-5 Ассига1е). 100000 очищенных Т-клеток СЭ4+ (чистота 90%) на лунку микротитровального диска культивировали 72 ч при 37°С в 5% СО2 в 100 мкл среды культуры (КРМI 1640 (С1Ьсо), дополнительно содержащей 10% теплоинактивированной зародышевой бычьей сыворотки Дпетдеп), 0,1 мМ заменимых аминокислот, 1 нМ пирувата натрия, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 50 мкг/мл гентамицина, 10 мМ Нерек и 2 мМ глутамина). Ингибиторы добавили на диск во время инициации культуры. Пролиферативную реакцию в этих культурах измеряли путем добавления 1 мкКи меченного тритием тимидина в последние 6 ч перед сбором клеток. Встраивание радиоактивной метки измеряли при помощи жидкостного сцинтиляционного счетчика (аппарат для сбора клеток из лунок и счетчик Раскаг4 96). Результаты представлены в виде числа импульсов в минуту (срт).
Пример 6. Ш νίίΐΌ модель смешанных лимфоцитных культур.
Рисунок, показывающий анализ на лимфоцитную реакцию, представлен на фиг. 5. Эта модель смешанных лимфоцитных культур, являющаяся ш νίίΐΌ моделью трансплантации (АЛ. СипшпдЬат, «Ип4ет81ап4юд Iттипο1οду, Тгапкр1аЛ:айоп Iттипο1οду раде к 157-159 (1978)), исследует эффекты различных антагонистов ЬРА-1 как на пролиферативные, так и на эффекторные проявления человеческой лимфоцитной реакции.
Изолирование клеток.
Мононуклеарные клетки из периферической крови (РВМС) выделили из гепаринизированной цельной крови, взятой у здоровых доноров. Кровь разбавили физраствором 1:1, расслоили и центрифугировали при 2500 д в течение 30 мин в Ь8М (6,2 г Р1со11 и 9,4 г дизтризоата натрия на 100 мл) (Огдапоп ТесЬшса, N1). Альтернативный способ заключался в получении цельной крови от здоровых доноров путем лейкофореза. РВМС отделили, как описано выше, пересуспендировали в 90% теплоинактивированной зародышевой бычьей сыворотке и 10% ЭМ8О, разделили на аликвоты и заморозили в жидком азоте. После размораживания клетки пересуспендировали в среде ВРМI 1640 (61Ьсо, 6тап4 1к1ап4, ΝΥ), дополнительно содержащей 10% теплоинактивированной зародышевой бычьей сыворотки (Шетдеп, РигсЬаке, ΝΥ), 1 мМ пирувата натрия, 3 мМ Ь-глутамина, 1 мМ заменимых аминокислот, 500 мкг/мл пенициллина, 50 мкг/мл стрептомицина, 50 мкг/мл гентамицина (С1Ьсо).
- 36 007852
Смешанная лимфоцитная реакция (МЬЕ).
Однообразно смешанные человеческие лимфоцитные культуры внесли в лунки 96-луночного плоского микротитровального диска. Коротко, 1,5х105 РВМС-ответчиков сокультивировали с равным количеством аллогенетических облученных (3000 рад в течение 3 мин 52 с) РВМС-стимуляторов в 200 мкл полной среды. Антагонисты ЬЕА-1 добавляли во время инициации культур. Культуры инкубировали при 37°С в 5% СО2 в течение 6 дней, затем добавили 1 мкКи меченного тритием тимидина (6,7 Ки/ммоль, ΝΕΝ, Войоп, МА) в течение 6 ч. Культуры собирали при помощи аппарата сбора клеток Раскагб (Раскагб, СапЬегга, Сапаба). Встраивание радиоактивной метки ([3Н]ТбЕ) измеряли при помощи жидкостного сцинтиляционного счетчика. Результаты представлены в виде числа импульсов в минуту (срт).
Пример 7. Синтез и активность соединений.
Аббревиатуры, используемые в следующем разделе: смола \Уапд = смола р-алкоксибензилового спирта; Етос = 9-флуоренметилоксикарбонил; Етос-О8и = 9-флуоренметилоксикарбонил-Ы-гидроксисукцинимид; Вос = трет-бутилоксикарбонил; Вос2О = трет-бутилоксикарбонилангидрид; ОМА = диметилацетимид; ОМЕ = диметилформамид; ВОР = (бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат; НоЬ( = 1-гидроксибензтриазол; NММ = 4-метилморфолин; ТЕА = трифторуксусная кислота; ЬСМ = дихлорметан; МеОН = метанол; НОАс = уксусная кислота; НС1 = соляная кислота; Н28О4 = серная кислота; К2СО3 = карбонат калия; Р113Р = трифенилфосфин; ТНЕ = тетрагидрофуран; ЕЮАс - этилацетат; ЬФЕА - диизопропилэтиламин; NаНСО3 = гидрокарбонат натрия; NМР = Ν-метилпирролидинон; О^С = диизопропилкарбодиимид; АСN = ацетонитрил; НВТи = 2-(1Н-бензотриазол-1ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат; NС8 = Ν-хлорсукцинимид; №ь-ЕОТА = этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевая соль; ТВАЕ = тетрабутиламмония фторид; ЕЭС = 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбоимид//НС1; ЬЕАЬ = диэтилазокарбоксилат; ТЕА = триэтиламин; Мд8О4 = сульфат магния; ЕьО - диэтиловый эфир; ВВг3 = трибромид бора.
Общие методики синтеза
Методика 61.
Соответствующую Вос-защищенную молекулу растворили в растворе ТЕА в ЬСМ (1:1). Через 20 мин реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Результирующее масло растворили в толуоле и затем концентрировали под вакуумом дважды.
Методика 62.
Соответствующий амин растворили в ЕьО и промыли дважды 10% раствором К2СО3 в воде и 1 раз раствором соли. Органический слой высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Продукт затем использовали без дальнейшей очистки.
Методика 63.
Осуществили реакцию 3 экв. соответствующей карбоновой кислоты с 1 экв. соответствующего амина, используя 3 экв. ЕЭС и 1 экв. НоЬ( в ОМА. Реакцию контролировали при помощи ТЬС (тонкослойная хроматография) (9/1 ЬСМ/МеОН). По окончании смесь концентрировали под вакуумом. Результирующее масло пересуспендировали в Е(2О и промыли дважды 0,1н раствором Н28О4, дважды насыщенным раствором NаНСО3 и 1 раз раствором соли. Органический слой высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Продукт затем использовали без дальнейшей очистки.
Методика 64.
экв. соответствующего метилового эфира растворили в ТНЕ/Н2О (3/1) и добавили 3 экв. ЬЮН-Н2О. Реакцию контролировали при помощи ТЬС (9/1 ЬСМ/МеОН). По окончании смесь осторожно подкислили до рН 2 концентрированной НС1 и затем концентрировали под вакуумом. Полученное твердое вещество пересуспендировали в ЕьО и промыли дважды 0,1н раствором Н28О4 и 1 раз раствором соли. Органический слой высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом.
Методика 65.
экв. соответствующей аминокислоты и 2,5 экв. NаНСО3 растворили в ТНЕ/Н2О (3/1). Когда раствор стал прозрачным, добавили 1,5 экв. Етос-О8и. Реакцию контролировали при помощи ТЬС (9/1 ЬСМ/МеОН). По окончании смесь концентрировали под вакуумом, пока не осталась только водная фаза. Водный раствор экстрагировали дважды ЕьО, а затем осторожно подкислили до рН 2 концентрированной НС1 для осаждения продукта. Затем водный слой и продукт экстрагировали ЕЮАс. Органический слой 1 раз разделили раствором соли и высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика 66.
экв. флуоренилметанола и 2,5 экв. НоЬ( растворили в NМР. Смесь охладили до 0°С при перемешивании. После охлаждения добавили 1 экв. ОГРС в течение 5 мин при перемешивании, после чего добавили порциями 1 экв. 2-бромтерефталевой кислоты и затем 0,01 экв. 4-пирролидинпиридина. Смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, нагрели до комнатной температуры и перемешивали 4 ч, а затем снова охладили до 0°С и погасили добавлением Н2О по каплям. После перемешивания в течение 1 ч смесь разделили ЕЮАс. Органический слой дважды разделили разбавленной НС1, 1 раз раствором соли и высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (смесь
- 37 007852
9:1 правильного и неправильного изомеров) очистили флеш-хроматографией на силикагеле с использованием смеси (3/1) гексанов/ЕЮАс и 3% НОАс.
Методика 67.
Соответствующее метоксисодержащее соединение растворили в ЭС.'М и охладили до -5°С в ацетоноледяной бане в атмосфере азота. 2 экв. ВВг3 добавили по каплям в виде раствора в ЭСМ в течение 30 мин. Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали до окончания реакции, контролируемой при помощи ТЬС (ЭСМ/2% НОАС/2% МеОН). Раствор вылили в лед и дали льду расплавиться. Затем смесь дважды разделили ЕеЮАс, а объединенные органические слои высушили над сульфатом магния. Фильтрат пропустили над пробкой из силикагеля и концентрировали под вакуумом.
Методика 68.
экв. диметил-2-хлортерефталевой кислоты моногидролизовали по методике 69 для получения правильной монозащищенной дикислоты. Затем моноэфир этерифицировали трет-бутилом по методике 610. После этого метиловый эфир удалили по методике 64 для получения карбоновой кислоты (соединение А).
Методика 69.
Сложный диэфир растворили в ЭСМ и охладили до -5°С в ацетоно-ледяной бане в атмосфере азота. 1 экв. ВВг3 добавили по каплям в виде раствора в ЭСМ в течение 30 мин. Реакционную смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали до окончания реакции, контролируемой при помощи ТЬС (ОСМ/2% НОАС/2% МеОН). Раствор вылили в лед и дали льду расплавиться. Затем смесь разделили ЕЮАс и концентрировали под вакуумом. Этот продукт растворили в НЮ с добавлением насыщенного NаНСО3, пока рН раствора не превысила 8. Этот раствор разделили 1 раз равным объемом ЭСМ для удаления непрореагировавшего диэфира. Щелочной раствор подкислили при 0°С концентрированной НС1 до рН 1-1,5, а осадок дважды экстрагировали равными объемами ЕЮАс. Органическую часть разделили 1 раз раствором соли, высушили над сульфатом магния, профильтровали и концентрировали под вакуумом. После НРЬС (жидкостная хроматография высокого давления) продукт представлял собой 7:1 правильного региоизомера.
Методика 610.
Моноэфир, растворенный в ЭСМ, перенесли в предварительно взвешенную колбу Парра, снабженную мешалкой. Колбу охладили до -5°С в ацетоно-ледяной бане в атмосфере азота. После охлаждения около 30 экв. изобутилена закачали в раствор при перемешивании. Добавили 2,1 экв. концентрированной серной кислоты и закупорили колбу резиновой пробкой с обмоткой и оставили нагреваться до комнатной температуры при перемешивании. Раствор перемешивали до осветления (1-2 дня). Когда раствор стал прозрачным, его охладили до 0°С в ледяной бане. Пробку вынули и избыточный изобутилен выдули путем барботирования азота. Для нейтрализации кислоты добавили насыщенный NаНСО3 и концентрировали смесь под вакуумом до полного удаления ЭСМ. Раствор разделили в ЕЮАс. Органическую часть дважды разделили разбавленной НС1, дважды насыщенным NаНСО3, 1 раз раствором соли, высушили над сульфатом магния, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика 611.
Трет-бутил-эфирный продукт растворили в ЭСМ и добавили равный объем ТЕА. Через 30 мин реакционную смесь концентрировали под вакуумом и дважды перерастворили и концентрировали из толуола. Продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика 612.
Соединение А соединили с 3-хлорбензиламином по методике 63. Трет-бутиловый эфир удалили по методике 611 с получением карбоновой кислоты (соединение В).
Методика 613.
Соединение А соединили с 3-метоксибензиламином (методика 638) по методике 63. Этот продукт превратили в метиловый эфир по методике 615. Метоксигруппу деметилировали в фенол по методике 67. Метиловый эфир омылили до карбоновой кислоты по методике 64 и конечный продукт (соединение С) использовали без дальнейшей очистки.
Методика 614.
экв. 4-бром-2-хлорбензойной кислоты превратили в метиловый эфир по методике 615, а бромид превратили в нитрил по методике 616. После омыления по методике 64 нитрил восстановили в амин, защищенный Етос, по методике 617. Конечный продукт (соединение Ό) очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (95/5 ^СМ/МеΟΗ) и проверили путем электрораспылительной масс-спектрометрии.
Методика 615.
Соответствующую карбоновую кислоту растворили в безводном МеОН и добавили 10 экв. НС1/диоксана. Смесь перемешивали в течение ночи до получения метилового эфира. Раствор концентрировали под вакуумом и дважды перерастворили и концентрировали из толуола. Конечный продукт очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (95/5 ^СМ/МеΟΗ) и проверили путем электрораспылительной масс-спектрометрии.
Методика 616.
0,6 экв. цианида цинка и 0,04 экв. тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) поместили в круглодонную колбу и продували в течение 30 мин циркулирующим азотом. Метиловый эфир растворили в без
- 38 007852 водном ΌΜΕ и дегазировали в течение 30 мин азотом. По окончании дегазирования раствор метилового эфира добавили к цианиду цинка и палладию через канюлю и перемешивали в течение ночи при 80°С. По окончании реакции раствор концентрировали под вакуумом и перерастворили в ЕЮАс. Органическую часть дважды разделили разбавленной НС1, дважды насыщенным ЫаНСО3, 1 раз раствором соли, высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Продукт очистили путем флешхроматографии на силикагеле (ΌΕ'Μ) и проверили путем электрораспылительной масс-спектрометрии.
Методика 617.
экв. нитрила растворили в ТНЕ и охладили до 0°С в ледяной бане. После охлаждения к нитрилу быстро добавили 4 экв. супергидрида через канюлю. Через 5 мин реакционную смесь вылили в лед, содержащий 5 экв. серной кислоты, и перемешивали до полного расплавления льда. К раствору добавили два объема ТНЕ и осторожно отрегулировали рН до 8 путем добавления порциями №1НСО3. Добавили 1,5 экв. Етос-О8и. Реакцию контролировали при помощи ТЬС (9/1 ОСМ/МеОН). По окончании реакции смесь концентрировали под вакуумом, пока не осталась только водная фаза. Водный раствор экстрагировали дважды Е!2О, а затем осторожно подкислили до рН 2 концентрированной НС1 для осаждения продукта. Затем водный слой и продукт экстрагировали ЕЮАс. Органический слой 1 раз разделили раствором соли и высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом.
Методика 618.
экв. соответствующей гидроксикарбоновой кислоты, 2,2 экв. трет-бутилдиметилсилилхлорида и 3 экв. имидизола растворили в ΌΜΕ и перемешали при комнатной температуре. Реакцию контролировали при помощи ТЬС (9/1 ОСМ/МеОН). По окончании реакции смесь концентрировали под вакуумом. Полученное масло пересуспендировали в Е!2О и дважды промыли насыщенным ЫаНСО3 и 1 раз раствором соли. Органический слой высушили над сульфатом магния, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Продукт затем использовали без дальнейшей очистки.
Методика 619.
К смоле, которую дважды промыли ОМА, добавили раствор, состоящий из 20% пиперидина в ОМА. Через 20 мин смолу отфильтровали и промыли 5 раз ОМА.
Методика 620.
экв. соответствующей карбоновой кислоты соединили с 3 экв. ВОР, 1 экв. НОВ! и 6 экв. ХММ в ОМА в течение 30 мин. Соединение наблюдали при помощи нингидринового теста Кайзера. Если тест Кайзера был положительным, соответствующую карбоновую кислоту снова соединяли тем же способом.
Методика 621.
В промытой и высушенной смоле в растворе, состоящем из 5% триизопропилсилана в ТЕА, в течение 1 ч расщепили молекулу. Неочищенную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили путем обращенно-фазовой НРЬС, проверили при помощи электрораспылительной масс-спектрометрии и лиофилизовали до порошка.
Методика 622.
экв. соответствующего амина соединили с 3 экв. ВОР, 1 экв. НОВ! и 6 экв. ЫММ в ОМА в течение 60 мин.
Методика 623.
Смолу промыли по очереди ОМА, ОСМ, 20% НОАс в ОСМ, МеОН и ОМЕ. 2 экв. соответствующего альдегида растворили в минимальном объеме 1% НОАс в ОМЕ и добавили к свежепромытой смоле. Через 5 мин добавили 2 экв. натрия цианоборогидрида и оставили смолу на ночь при барботировании. Затем смолу промыли ОМЕ, 20% О1РЕА в ОСМ, ОСМ и МеОН. Соединение наблюдали при помощи нингидринового теста Кайзера. Если тест Кайзера был положительным, соответствующий альдегид снова соединяли тем же способом.
Методика 624.
экв. соответствующей карбоновой кислоты ® соединили с 3 экв. НВТИ и 3 экв. О1РЕА в ОМА. Реакцию контролировали путем ТЬС. По окончании смесь разбавили Е!ОАс. Органический слой разделили разбавленной серной кислотой, насыщенным КаНСО3, высушили над сульфатом магния, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный метиловый эфир использовали без дальнейшей очистки.
Методика 625.
Метиловый эфир соответствующей карбоновой кислоты получили по методике 615, а фенол превратили в трет-бутиловый эфир по методике 610. 1 экв. полученного продукта растворили в смеси 1:2 ТНЕ и Е!ОН, добавили 3 экв. хлорида лития и 3 экв. борогидрида натрия и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. Реакцию погасили Н2О и концентрировали под вакуумом. Остаток разделили между Е!ОАс и Н2О и водный слой экстрагировали Е!ОАс. Объединенные органические слои высушили над Мд8О4, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный спирт очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/Е!2О).
Методика 626.
Раствор 1 экв. спирта и 1,1 экв. Р113Р в ТНЕ охладили до -10°С в этанольно-ледяной бане. При перемешивании добавили по каплям раствор 1,1 экв. фенола и 1,1 экв. ОЕАО в ТНЕ. Холодную баню убрали
- 39 007852 и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и результирующий остаток поместили в минимальное количество ЭСМ и профильтровали через пробку из силикагеля с использованием ЭСМ в качестве элюента. После концентрирования этого раствора под вакуумом остаток очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (8/2/0,5 гексан/ОСМ/ЕьО) для получения чистого эфира.
Методика 627.
экв. спирта растворили в ацетоне и охладили до -10°С. Добавили 1,1 экв. реагента Джонса и перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь профильтровали через пробку из силикагеля и концентрировали под вакуумом. Остаток разделили между ЕЮАс и Н2О и водный слой экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические слои высушили над Мд§04, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Твердое желтое вещество растерли с Е120 для удаления примесей, получив чистый кетон.
Методика 628.
экв. соответствующего дигидроксинафталена растворили в пиридине. Добавили 4 экв. твердого гидрида натрия, затем 2 экв. бромида и 0,4 экв. хлорида меди. Результирующую смесь нагревали при сильно перемешивании в масляной бане при 100°С в течение 2 дней. После концентрирования под вакуумом остаток разделили между ЕЮАс и 1М НС1. Водный слой экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические слои высушили над Мд§04, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток растерли с Е12О. После фильтрации смеси и концентрации фильтрата полученный остаток очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (5:4:1 гексан/ОСМ/Е12О).
Методика 629.
К перемешиваемому при -78°С раствору 1 экв. соответствующего метилового эфира в безводном толуоле добавили раствор 1,5М ΌΙΒΑΕ в толуоле (1,7 экв.) по каплям. Реакционную смесь перемешивали еще 2 ч при -78°С, или пока ТЬС не показала чистое образование продукта лишь со следами исходного вещества. Реакцию погасили путем медленного добавления холодного (-78°С) МеОН. Результирующую белую эмульсию медленно вылили в ледяную смесь 1 н НС1 и ЕЮАс и водный слой экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические слои высушили над Мд§04, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/Е12О) с получением чистого альдегида.
Методика 630.
экв. аминоспирта, полученного по методике 628, и 1,5 экв. РЬ3Р растворили в ТНР и охладили до -5°С. Добавили по каплям 1,5 экв. ΌΕΑΌ и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. После концентрирования под вакуумом остаток поместили в минимальное количество Ό6Μ и очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/Е12О) с получением чистого оксазолина.
Методика 631.
К перемешиваемому при -78°С раствору 1 экв. бромида в ТНР добавили 1,6М п-ВиЫ (1,05 экв.) по каплям. Через 0,5 ч добавили 1,1 экв. альдегида в ТНР через канюлю при -78°С и перемешивали реакционную смесь при -78°С. Через 2 ч реакцию погасили добавлением 2 экв. холодного (-78°С) НОАс в ТНР. Смесь нагрели до комнатной температуры, концентрировали под вакуумом и масляный остаток разделили между Е120 и Н2О. Водный слой экстрагировали Е120. Объединенные органические слои высушили над Мд§04, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (7:3 гексан/Е12О).
Методика 632.
Оксазолиновый спирт растворили в смеси 13:1 этанола и серной кислоты, затем нагревали при орошении в течение 3 дней. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, а остаток разделили между Е120 и Н2О. Водный слой экстрагировали Е120. Объединенные органические слои высушили над Мд§04, профильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили с использованием флешхроматографии на силикагеле (1:1 гексан/Е120) с получением чистого этилового эфира.
Методика 633.
К свежепромытой смоле добавили 2,2 экв. О1РЕА и 2,2 экв. соответствующего изоцианата ® в 1,2дихлорэтане и перемешивали в течение ночи. Смолу промыли 10% пиперидина в ΝΜΡ, ТНР, 30% НОАс в ПСМ и МеОН.
Методика 634.
экв. смолы 4-бензоксибензилового спирта (смолы ^апд) промыли ΌΜΑ и ЭСМ. К смоле добавили 3 экв. соответствующей Ртос-защищеной аминокислоты, 3 экв. ΌΙΡί.' и 0,5 экв. ОМАР в ЭСМ. Смолу перемешивали в течение 2 ч, промыли ОС.'М и ОМА. Затем смолу обработали 10% уксусного ангидрида в ОС.'М в течение 5 мин. Смолу промыли ОСМ и МеОН и затем высушили под вакуумом.
Методика 635.
Смолу промыли ОС.’М и хлороформом. Свежий 0,14М раствор тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) в 2,5% NΜΜ, 5% НОАс в хлороформе добавили к смоле. После перемешивания в течение 1 ч смолу испытали нингидриновым тестом Кайзера. Если тест Кайзера был отрицательным, готовили новый раствор палладия РД(0) и снова проводили реакцию, пока не получили положительные результаты в тес
- 40 007852 те Кайзера. Смолу промыли ЭСМ. МеОН и ОСМ.
Методика 636.
Смолу с удаленными защитными группами обработали в течение 1 ч раствором 10 экв. бензофенонимина и 1,3 экв. НОАс в ΌΜΆ для образования глицинбензофенонимина. После промывки ΌΜΆ смолу обработали 3,5 экв. 2-трет-бутилимино-2-диэтиламино-1,3-диметилпергидро-1,2,3-диазафосфорина в течение 1 ч. Добавили 3 экв. соответствующего алкилирующего агента и перемешивали смесь в течение
ч. Слили растворитель и промыли смолу ΝΜΡ, 20% ΌΙΡΕΆ в ЭСМ, ЭСМ, 10% НОАс в ОСМ и ОСМ. Бензофенон удалили раствором 10 экв. гидроксиламина-НС1 в ТНЕ/Н2О в течение 2 ч. Смолу промыли Н2О, ТНЕ, 20% ΌΙΡΕΆ в ОСМ и ОСМ.
Методика 637.
экв. 2-бромтерефталевой кислоты, 20 экв. НВТИ, 20 экв. НоЫ и 22 экв. ΌΙΡΕΆ растворили в ПМЛ и перемешивали 15 мин для получения эфира 2- бромтерефталевой кислоты. К этому раствору добавили 15 экв. 3-гидроксибензиламина, методика 638, и 15 экв. ΌΙΡΕΆ с получением активного эфира соединения Е. Реакционную смесь перемешивали 30 мин и затем добавили ее к смоле, которую затем перемешивали в течение ночи.
Методика 638.
экв. 3-цианофенола поместили в колбу Парра с Е(ОН, 0,02 экв. НС1 и 10% (вес./вес.) Ρ6 на углероде. Сосуд поместили в шейкер Парра, заполненный водородом Н2 при давлении 50 фунтов/кв.дюйм, и встряхивали в течение 12 ч. Реакционную смесь профильтровали через прокладку из целита и разбавили 1:10 Εΐ2Ο. После отстаивания в течение ночи образовались тонкие белые иглы. Продукт профильтровали, промыли Εΐ2Ο и высушили под вакуумом. Полученный гидрохлорид использовали затем без дальнейшей очистки.
Методика 639.
Смолу промыли ОСМ и хлороформом. Свежий 0,14М раствор тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) в 2,5% NΜΜ, 5% НОАс в хлороформе добавили к смоле. После перемешивания в течение 2 ч слили растворитель, а смолу промыли ОСМ и ОМА. Смолу обработали 10% ΌΙΡΕΛ в ОМА в течение 10 мин, несколько раз промыли ОМА, а затем 5% раствором диэтилдитиокарбаминовой кислоты в ОМА в течение 15 мин. Затем смолу промыли ОМА, ОСМ, МеОН и ОСМ.
Методика 640.
Смолу суспендировали в АСN и охладили до 0°С. После охлаждения добавили 3 экв. Рй3Р и 3 экв. N€.'8 и перемешивали смолу 5 мин. К смоле добавили 6 экв. соответствующего анилина и перемешивали смолу по мере ее нагревания до комнатной температуры. Еще через 10 мин при комнатной температуре реакцию погасили 3 экв. НОАс и промыли смолу 10% НОАс в АСН ОСМ и МеОН.
Методика 641.
Смолу предварительно активировали при помощи 3 экв. НВТИ, 3 экв. НоЫ и 6 экв. ОФБА в ОМА в течение 10 мин. Добавили 2 экв. соответствующего амина и перемешивали смолу 30 мин. Процедуру повторили снова. Смолу промыли ОМА и ОСМ.
Методика 642.
Смолу промыли ОМА, ОСМ и дихлорэтаном. Добавили 1,1 экв. соответствующего сульфонилхлорида и 3 экв. ОФБА в дихлорэтане и перемешивали смолу в течение 12 ч. Реакцию проверяли нингидриновым тестом Кайзера и повторяли процедуру до появления отрицательных результатов теста. Смолу промыли дихлорэтаном и ОСМ.
Методика 643.
Смолу промыли ОМА, ОСМ и дихлорэтаном. Добавили 1,1 экв. соответствующего хлорформата и экв. ОФБА в дихлорэтане и перемешивали смолу в течение 12 ч. Реакцию проверяли нингидриновым тестом Кайзера и повторяли процедуру до появления отрицательных результатов теста. Смолу промыли дихлорэтаном и ОСМ.
Методика 644.
экв. соответствующего амина растворили в растворе 3:2 ТНЕ/Н2О. Добавили 1,1 экв. твердого №НСО3 и 1,1 экв. Вос2О и перемешивали раствор в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и разделили остаток между Н2О и БьО. Водный слой экстрагировали БьО, а объединенные органические слои высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом до твердого состояния. Перекристаллизацией из Εΐ2Ο/гексана получили чистый продукт.
Методика 645.
экв. соответствующего фенола растворили в ОСМ, содержащем 2,6 экв. 2,6-лутидина, и охладили смесь до -78°С. После добавления 1,25 экв. трифлинового ангидрида реакционную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали и разделили остаток между Н2О и НьО. Водный слой экстрагировали Εΐ^, а объединенные органические слои высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флешхроматографии на силикагеле (9:1 гексан/НьО) для получения чистого трифлата.
Методика 646.
К перемешиваемому раствору 1 экв. трифлата в смеси 2/1 ОМЕ/МеОН добавили 0,15 экв. 1,3-бис
- 41 007852 (дифенилфосфин)пропана и 2,5 экв. ТЕА. Газообразный монооксид углерода пропускали через этот раствор в течение 15 мин, затем добавили 0,15 экв. Рб(ОАс)2 и перемешивали реакционную смесь при 70°С в течение 5-7 ч в атмосфере СО (с использованием баллона, заполненного СО). Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и разделили остаток между Е!2О и Н2О. Водный слой дважды экстрагировали Е!2О, а объединенные органические слои высушили над Мд§О4, профильтровали через пробку из силикагеля и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (9:1:0,02 гексан/ОСМ/Е!2О) для получения чистого метилового эфира.
Методика 647.
экв. соответствующего Вос-анилина растворили в метаноле и насытили раствор НС1. Реакционную смесь нагревали при 50°С в течение 3 ч, затем концентрировали под вакуумом. Бледно-желтое твердое вещество нагревали в 35% Н28О4 до полного растворения. После охлаждения смеси путем добавления ледяной воды выпал осадок бисульфата амина. Реакционную колбу охладили в ледяной бане и при сильном перемешивании смеси по каплям добавили 1,1 экв. нитрита натрия в Н2О. Реакционную смесь перемешивали при 0°С еще 1,5 ч. После разбавления реакционной смеси Н2О смесь нагревали при 80°С в течение 10 ч. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и экстрагировали Е!ОАс. Объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (14:6:1 гексан/ОСМ/Е!2О) для получения чистого фенола.
Методика 648.
экв. соответствующего метилбензоата растворили в ЭСМ и добавили 1,5 экв. 1,0М раствора ВВг3. После перемешивания реакционной смеси в течение ночи реакцию погасили льдом и перемешивали еще 1,5 ч. Реакционную смесь трижды экстрагировали Е!2О и объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток поместили в минимальное количество насыщенного ИаНСО3. Продукт осадили из этого водного раствора путем добавления концентрированной НС1 и затем экстрагировали в Е!2О. Объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом для получения чистой бензойной кислоты.
Методика 649.
экв. соответствующей карбоновой кислоты растворили в ОМЕ. Добавили 1,1 экв. твердого ИаНСО3 и 5 экв. аллилбромида и перемешивали реакционную смесь при 45°С в течение ночи. Реакционную смесь затем концентрировали и разделили остаток между Е!2О и Н2О. Водный слой трижды экстрагировали Е!2О, а объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (7:3 гексан/Е!2О) для получения чистого аллилового эфира.
Методика 650.
К раствору 1 экв. соответствующего аллилового эфира в ТНЕ добавили 0,1 экв. тетракис(трифенилфосфина)палладия(0) и 10 экв. морфолина. Реакционную смесь перемешивали 1,5 ч, затем концентрировали под вакуумом. Остаток поместили в ЭСМ, трижды экстрагировали 1 н НС1, высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток растерли с 1:1 гексан/Е!2О, профильтровали через пробку из стекловаты и концентрировали под вакуумом для получения чистой бензойной кислоты.
Методика 651.
экв. фенола растворили в ОМЕ и добавили 2,05 экв. К2СО3 и 4 экв. 1,3-дибромпропана. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи с одновременным нагреванием реакционной колбы в масляной бане при 50°С. После концентрирования смеси под вакуумом остаток разделили между Е!2О и Н2О. Водный слой трижды экстрагировали Е!2О, а объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (95:5 гексан/Е!2О) для получения чистого бромида.
Методика 652.
экв. соответствующего гидроксифенола и 1 экв. К2СО3 добавили к раствору 0,5 экв. бромида в ЭМЕ. После перемешивания в течение ночи реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разделили между Е!2О и Н2О. Водный слой трижды экстрагировали Е!2О, а объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флешхроматографии на силикагеле (18:1 ЭСМ/ЕьО) для получения чистого фенола.
Методика 653.
В стеклянную напорную трубку, продуваемую азотом, поместили 1 экв. соответствующего бромида, 5 экв. п-бутилвинилового эфира, 15 экв. ТЕА, 0,1 экв. 1,3-бис(дифенилфосфин)пропана, 1 экв. ацетата таллия, 0,09 экв. ацетата палладия и ОМЕ. Трубку закупорили и нагревали до 100°С в течение ночи. Реакционную смесь охладили и отфильтровали катализатор. Смесь разбавили Е!ОАс, промыли Н2О и высушили над Мд§О4. Неочищенный продукт очистили на силикагеле (4/1 гексан/ОСМ), затем растворили в ТНЕ и 4 н НС1 в диоксане и перемешивали в течение ночи. Растворители выпарили и продукт очистили на силикагеле (4/1 гексан/ Е!ОАс) для получения чистого продукта.
Методика 654.
экв. соответствующего Вос-анилина растворили в метаноле и насытили раствор НС1. Реакционную смесь нагревали при 50°С в течение 3 ч, затем концентрировали под вакуумом. Бледно-желтое твер
- 42 007852 дое вещество нагревали в 35% Н28О4 до полного растворения. После охлаждения смеси путем добавления ледяной воды выпал осадок бисульфата амина. Реакционную колбу охладили в ледяной бане и при сильном перемешивании смеси по каплям добавили 1,1 экв. нитрита натрия в Н2О. Реакционную смесь перемешивали при 0°С еще 1,5 ч. Добавили водный раствор 10 экв. ΚΣ и сразу после этого - 17 экв. Си! Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 14 ч, затем трижды экстрагировали ЕЦО. Объединенные органические слои промыли 1М NаНСОз, раствором соли, высушили над Мд8О4 и затем концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (95:5 гексан/Е^О) для получения чистого иодида.
Методика С55.
2.3 экв. иодида лития добавили к 1 экв. метил-2,6-дихлор-4-иодбензоата в пиридине и нагревали смесь при орошении в течение 8 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток разделили между ЕЮАс и 1 н НС1. Водный слой трижды экстрагировали ЕЮАс, а объединенные органические слои промыли 1М NаНСОз, высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток растворили в NММ и раствор концентрировали под вакуумом. Остаток поместили в БСМ и затем трижды промыли 1Н НС1. Органический слой высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом для получения бензойной кислоты достаточно высокой чистоты, чтобы использовать ее без дальнейшей очистки.
Методика С56.
1.3 экв. БГРЕА добавили к гетерогенной смеси 1 экв. 3-гидроксибензойной кислоты, 1,3 экв. ΝΌдиметилгидроксиламина гидрохлорида, 1,3 экв. НОВΐ и 1,3 экв. ЕЭС при перемешивании в БМЕ. Все твердые вещества со временем растворились по мере перемешивания при комнатной температуре в течение 28 ч. После концентрирования смеси остаток разделили между Е^О и Н2О. Водный слой трижды экстрагировали Е^О, а объединенные органические слои высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (Е^О) для получения чистого гидроксамата.
Методика С57.
К перемешиваемому при -78°С раствору 1 экв. соответствующего защищенного гидроксамата в ЮТ добавили раствор 1,2М БГВАЬ в толуоле по каплям. Реакционную смесь перемешивали еще 3 ч при -78°С, или пока ТЬС не показала чистое образование продукта лишь со следами исходного вещества. Реакцию погасили, вылив смесь в делительную воронку, содержащую Е^О и 0,35М NаН8О4. Слои разделили. Водный слой трижды экстрагировали этиловым эфиром. Объединенные органические слои дважды промыли 1 н НС1, насыщенным водным NаНСОз, высушили над Мд8О4, профильтровали через пробку из силикагеля и концентрировали под вакуумом. Дальнейшей очистки альдегида не требовалось.
Методика С58.
Раствор 1 экв. соответствующего альдегида в ТНЕ охладили до -78°С и добавили 1,1 экв. 0,5М этинилмагния бромида в ТНЕ. После перемешивания реакционной смеси при комнатной температуре в течение 3 ч ее разбавили Е^О и дважды промыли 10% лимонной кислоты. В объединенных водных слоях произвели однократную обратную экстракцию Е^О. Объединенные органические слои дважды промыли насыщенным водным раствором NаНСОз, высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (от 4:1 до 3:2 гексан/Е^О) для получения чистого алкина.
Методика С59.
экв. арилиодида растворили в ЕЮАс и раствор дегазировали путем пропускания Ν2 через пипетку в раствор в течение 10 мин. Добавили 1,25 экв. алкина, а затем 0,02 экв. дихлорбис(трифенилфосфин)палладия(П), 0,04 экв. Си! и 5 экв. ТЕА. Реакционную смесь перемешивали 14 ч, разбавили ЕЮАс, дважды промыли 5% №2-ЕБТА, раствором соли, высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование с использованием ЕЦО-ЕЮАс) для получения чистого арилалкина.
Методика С60.
экв. арилалкина растворили в МеОН и раствор дегазировали путем пропускания Ν2 через пипетку в раствор в течение 10 мин. Добавили 5% Кй/А12О3, пропустили через раствор полный баллон водорода и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода (с использованием баллона) в течение 7 ч, после чего реакционную смесь профильтровали через прокладку из целита и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование с использованием ЕЬО-ЕЮАс) для получения чистого продукта.
Методика С61.
экв. соответствующей защищенной аминокислоты и 2 экв. Рй3Р суспендировали в БСМ. Добавили 2,2 экв. NС8 и перемешивали смесь в течение 30 мин. 1 экв. анилинсодержащей смолы и 1,1 экв. NММ суспендировали в БСМ и добавили прозрачный раствор кислоты. Смолу перемешивали 2 ч, промыли БСМ, БМА и БСМ. Процедуру повторили снова.
Методика С62.
Соответствующий бензальдегид превратили в гидантоин по методике С63 и затем гидролизовали до аминокислоты по методике С64. Чистую рацемическую аминокислоту защитили по методике С5.
- 43 007852
Методика 663.
экв. соответствующего бензальдегида, 2 экв. цианида калия и 4 экв. карбоната аммония орошали в 50% ЕЮН в течение 2,5 ч. После охлаждения до 0°С раствор подкислили до рН 2 концентрированной НС1. После отстаивания в холодильнике в течение ночи отфильтровали кристаллы, промыли их водой и перекристаллизовали из кипящей смеси Н2О/Е1ОН.
Методика 664.
Чистый гидантоин орошали в 10% №1ОН в течение ночи. После охлаждения добавили активированный уголь и профильтровали раствор через целит. Раствор подкислили до рН 7 концентрированной НС1 и оставили на ночь в холодильнике. Полученные кристаллы отфильтровали, промыли водой и высушили в течение ночи под вакуумом для получения чистой рацемической аминокислоты.
Методика 665.
4-Бром-2-хлорбензойную кислоту превратили в трет-бутиловый эфир по методике 610. третБутилвиниловый эфир соединили с бромидом по методике 653 с получением 4-ацетил-2-хлорбензойной кислоты трет-бутилового эфира. Кетон восстановили в спирт по методике 666 и разложили рацемическую смесь по методике 667 с получением чистого 8-изомера. Фталамид соединили со спиртом по методике 668 и гидролизовали продукт по методике 669 с получением амина.
Методика 666.
экв. соответствующего кетона растворили в МеОН и добавили 1 экв. NаВН4. После перемешивания в течение 1 ч реакцию погасили концентрированной НС1 и концентрировали под вакуумом. Остаток разделили между ЕьО и Н2О. Органическую часть высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Спирт может быть использован без дальнейшей очистки.
Методика 667.
экв. спиртовой смеси растворили в диизопропиловом эфире и добавили по 2 экв. винилацетата и аманолипазы Р (100 мг). Суспензию перемешивали в течение ночи и затем концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (5/1 ЕЮАс/гексан) для получения чистых изомеров К и 8.
Методика 668.
Раствор 1 экв. спирта и 3 экв. Рй3Р в ТНГ охладили до -10°С в этанольно-ледяной бане. При перемешивании добавили по каплям раствор 3 экв. амина и 3 экв. ЭЕАЭ в ТНГ. Холодную баню убрали и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и результирующий остаток поместили в минимальное количество ЭСМ и профильтровали через пробку из силикагеля с использованием ЭСМ в качестве элюента. После концентрирования этого раствора под вакуумом остаток очистили с использованием флеш-хроматографии на силикагеле (8/2/0,5 гексан/ОСМ/Е12О) для получения продукта.
Методика 669.
экв. фталамида растворили в этаноле и ТНГ и добавили 8 экв. гидразингидрата. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч, затем при 50°С в течение 1 ч. Раствор охладили, профильтровали и промыли твердые вещества ЕЮАс. Прозрачный раствор концентрировали под вакуумом и очистили остаток путем флеш-хроматографии на силикагеле (94/4 ЭСМ/МеОН) для получения чистого амина.
Методика 670.
экв. соответствующего серийно выпускаемого кетона, 5 экв. гидроксиламина гидрохлорида и 10 экв. ацетата натрия смешали в МеОН и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и разделили остаток между ЕЮАс и насыщенным NаНСОз. Органический слой промыли 1 раз раствором соли, высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом. Продукт очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (Е12О) для получения чистого оксима.
Методика 671.
экв. соответствующего бензальдегида обработали 2,5 экв. соответствующего К'МдВг в ТНГ при -20°С в атмосфере азота. После нагревания до комнатной температуры реакционную смесь вылили в суспензию из 0,1 н серной кислоты и льда и экстрагировали продукт ЕЮАс. После разделения и промывки раствором соли органическую фазу высушили над Мд8О4 и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного продукта. Окисление до кетона проводили в диоксане с 1,1 экв. 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинона в течение 48 ч. Реакционную смесь профильтровали и фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (1:1 гексан/ЕЮАс) с получением продукта в виде желтого твердого вещества.
Методика 672.
Смолу с 8-тритиловой или О-тритиловой защитными группами трижды промыли ЭСМ. Затем ее трижды промывали в течение 10 мин раствором, состоящим из 1% ТГА, 1% ТЕ8 в ЭСМ. Затем ее трижды промыли ЭСМ. Затем испытали смолу, поместив небольшое ее количество в тестовую пробирку и обработав концентрированной ТГА. Если желтая окраска не появлялась, удаление было полным. Если желтая окраска появлялась, вышеописанную процедуру повторяли, пока не получался чистый тест.
Методика 673.
Смолу, содержащую соответствующий свободный гидроксил, трижды промыли ЭСМ. К смоле добавили раствор 10% О1РЕА в ЭСМ и 0,3М раствор фосгена в толуоле. Реакцию оставили на 10 мин при
- 44 007852 комнатной температуре, после чего слили растворитель и трижды промыли смолу ЭСМ. К смоле добавили 0,3М раствор в ЭСМ соответствующего амина и оставили реакцию на ночь. Затем слили растворитель и трижды промыли смолу ЭСМ.
Методика 674.
Соответствующую смолу трижды промыли ЭСМ и затем обработали 0,3М раствором соответствующего хлорформата ® в 0,33М Э1РЕА в ММР в течение ночи. Соединение контролировали при помощи нингидринового теста Кайзера. Если тест Кайзера был положительным, соответствующий хлорформат снова соединяли тем же способом. Затем смолу трижды промыли ММР и трижды - ЭСМ.
Методика 675.
Соответствующий 2,6-дизамещенный фенол (2,6-дихлорфенол для соединения Р, 2,6-диметилфенол для соединения Н и 2,6-дифторфенол для соединения I) алкилировали по методике 676. Результирующий фталимид гидролизовали и защитили по методике 677. Затем фенол превратили в трифлат по методике 678 и карбонилировали по методике 679 с получением желаемого дважды защищенного соединения.
Методика 676.
Круглодонную колбу снабдили эффективной подвесной мешалкой и заполнили концентрированной Н2БО4 (2,7х объема Н2О) и Н2О и охладили до ~5°С в этанольно-ледяной бане. После охлаждения добавили при сильном перемешивании 1 экв. соответствующего дизамещенного фенола и 1 экв. М-(гидроксиметил)фталимида. Реакционную смесь поддерживали охлажденной в течение 4 ч и затем дали нагреться до комнатной температуры в течение ночи при постоянном перемешивании. Реакция обычно продолжается до момента, когда в круглодонной колбе остается только твердое вещество. В этот момент добавили Е!ОАс и Н2О и смешали с твердым веществом. Большие куски раздробили и затем остаток профильтровали и промыли дополнительным количеством Е!ОАс и Н2О. Продукт использовали без дальнейшей очистки после сушки в течение ночи в вакуумном эксикаторе.
Методика 677.
экв. продукта из методики 676 и (22,5 мл х 3 г исходного материала) метанола добавили в круглодонную колбу, оснащенную водяным конденсатором и мешалкой. Добавили 1,2 экв. гидразина моногидрата и орошали смесь в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры осторожно добавили (4,5 мл х 3 г исходного материала) концентрированной НС1. По окончании добавления смесь снова орошали в течение ночи (более 8 ч). Реакционную смесь охладили до 0°С и осажденный побочный продукт отфильтровали. Затем фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток защитили группой Вос по методике 644, за исключением того, что продукт перекристаллизовали из горячего метанола и воды.
Методика 678.
экв. соответствующего фенола и 1,5 экв. 2,6-лутидина растворили (если необходимо, при умеренном нагреве) в ЭСМ в круглодонной колбе. После полного растворения исходного вещества смесь охладили до -78°С в атмосфере азота в сухой этанольно-ледяной бане. После охлаждения добавили 2,5 экв. трифлинового ангидрида и оставили реакционную смесь медленно нагреваться до комнатной температуры при перемешивании. Реакция контролируется при помощи ТЬС и обычно проводится за 4 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали под вакуумом и разделили остаток между Е!ОАс и Н2О. Органический слой дважды промыли 0,1 н Н2БО4, дважды - насыщенным МаНСОз, 1 раз - раствором соли, высушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили на силикагеле, используя ЭСМ в качестве элюента.
Методика 679.
экв. трифлата растворили в ЭМЕ и МеОН в стеклянной вставке автоклава высокого давления Парра. Исходное вещество затем дегазировали при перемешивании с СО в течение 10 мин. Добавили 0,15 экв. ацетата палладия(11) и 0,15 экв. 1,3-бис(дифенилфосфин)пропана и дегазировали смесь при перемешивании с СО в течение еще 10 мин. Добавили 2,5 экв. диизопропилэтиламина и собрали автоклав Парра. После надлежащей сборки автоклава его заполнили газообразным СО при давлении 300 фунтов/кв.дюйм и нагревали до 70°С при перемешивании в течение ночи. Автоклав охладили и спустили газ. Смесь перенесли в круглодонную колбу и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили на силикагеле, используя ИСМ с 1% ацетона и 1% ТЕА в качестве элюента.
Методика 680.
экв. соответствующего этилового эфира и 1,5 экв. КОН растворили в воде и орошали в течение 3 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали под вакуумом и продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика 681.
экв. соответствующего алкена и 1,5 экв. КОН растворили в Н2О в подходящей по размеру колбе шейкера Парра. Добавили малое количество (около 100 мг на 50 ммоль алкена) 5% Рб/С катализатора, заполнили колбу водородом под давлением 50 фунтов/кв.дюйм и встряхивали в течение ночи. Смесь профильтровали через целит и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика 682.
1,2 экв. МаН (60% дисперсия в минеральном масле) суспендировали в бензоле и охладили до 0°С в
- 45 007852 бане из ледяной воды. Медленно добавили 1,2 экв. триэтилфосфоноацетата и оставили реакцию при перемешивании до осветления раствора. Медленно добавили 1 экв. соответствующего кетона ® и перемешивали реакционную смесь в течение 4 ч. По окончании реакционную смесь разделили толуолом и водой. В водном слое произвели обратную экстракцию. Объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (85:15 гексан/ЕЮАс).
Методика О83.
1,2 экв. №1Н (60% дисперсия в минеральном масле) суспендировали в бензоле и охладили до -10°С в сухой ледяной бане. Медленно добавили 1,2 экв. триэтилфосфонопропионата и оставили реакцию при перемешивании до осветления раствора. Медленно добавили 1 экв. соответствующего альдегида ® и перемешивали реакционную смесь в течение 4 ч. По окончании реакционную смесь разделили толуолом и водой. В водном слое произвели обратную экстракцию. Объединенные органические слои высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (85:15 гексан/ЕЮАс).
Методика О84.
экв. соответствующим образом защищенного толуола растворили в уксусном ангидриде и НОАс, затем охладили в ледосолевой бане (-5°С) перед добавлением концентрированной серной кислоты. Раствор СгОз (2,6 экв.) в уксусном ангидриде и НОАс добавили по каплям и перемешивали реакционную смесь 3,5 ч при -5°С. Реакционную смесь вылили в ледяную воду и перемешивали 30 мин. Смесь трижды экстрагировали этиловым эфиром. Объединенные органические слои промыли насыщенным NаНСО3, раствором соли, высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом до масла. К маслу добавили толуол и раствор снова концентрировали под вакуумом. Эту операцию повторяли до получения кристаллического твердого вещества. Твердое вещество растворили в метаноле и концентрированной НС1 и нагревали при орошении 12 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и очистили остаток путем флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/ЕьО) для получения чистого альдегида.
Методика О85.
экв. соответствующего спирта растворили в ЭМЕ и охладили до -5°С в ледосолевой бане. Добавили по каплям 1,4 экв. бис(триметилсилил)амида лития. Реакционную смесь перемешивали в течение 0,5 ч, затем добавили 1 экв. метилиодида и перемешивали реакционную смесь в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разделили между этиловым эфиром и 10% лимонной кислотой. Водный слой экстрагировали этиловым эфиром, объединенные органические слои промыли насыщенным NаНСО3 и раствором соли, затем высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом до масла. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/ЕьО) для получения чистого метилового эфира.
Методика О86.
Серийно выпускаемую нитротерефталевую кислоту превратили в ее диэтиловый эфир по методике О87. Нитрогруппу заменили бензилмеркаптаном по методике О88 и сняли защиту при помощи А1Вг3 по методике О89. Тиол алкилировали бромацетальдегида диэтилацеталем по методике О90 и затем дегидратировали по методике О91. Диэтиловый эфир обработали ЫОН (методика О4) и затем соединили по методике О3 с 3-гидроксибензиламином (методика О38). Конечный этиловый эфир удалили по методике О4.
Методика О87.
экв. соответствующей промышленной выпускаемой карбоновой кислоты растворили в толуоле с избытком этанола и 0,6 экв. Н28О4 и орошали смесь в течение 4 дней. По окончании реакционную смесь концентрировали под вакуумом и разделили между ЕЮАс и Н2О. Органический слой промыли насыщенным NаНСО3, раствором соли, высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Продукт использовали без дальнейшей очистки.
Методика О88.
1,25 экв. 95% №1Н суспендировали в ЭМЕ и охладили в атмосфере азота до -5°С в ледяной бане. По каплям добавили 1,25 экв. бензилмеркаптана и оставили реакцию при перемешивании на 40 мин. В течение 20 мин добавили 1 экв. соответствующего арилнитросоединения и перемешивали смесь еще 30 мин. После удостоверения в том, что реакция окончена, раствор вылили в лед и перемешивали до полного расплавления льда. Водный раствор трижды разделили ЕЮАс, а объединенные органические слои промыли раствором соли, высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (1:4 гексан/ЕЮАс) для получения продукта.
Методика О89.
экв. бензилзащищенного вещества и 2,2 экв. А1Вг3 орошали в толуоле в течение 3 ч. За это время добавили Н2О и достаточное количество ЕЮАс для разделения смеси. Органический слой трижды промыли Н2О, раствором соли, высушили над Мд§О4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (4:1 гексан/ЕЮАс) для получения продукта.
Методика О90.
экв. тиола растворили в ЭМЕ и добавили 2 экв. К2СО3. Медленно, за 20 мин, добавили 1,1 экв. бромацетальдегида диэтилацеталя и затем порциями добавили 0,1 экв. №1. Реакционную смесь переме
- 46 007852 шивали 2 ч и затем разделили между ЕЮАс и Н2О. Органический слой трижды промыли Н2О, раствором соли, высушили над Мд!Ю4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (9:1 гексан/ЕЮАс) для получения продукта.
Методика 691.
экв. (по весу) соответствующего диэтилацеталя и 2 экв. (по весу) полифосфорной кислоты растворили в хлорбензоле. Реакцию контролировали при помощи ТЬС. По окончании реакции смесь концентрировали под вакуумом и затем разделили между ЕЮАс и насыщенным NаНСО3. Органический слой еще дважды промыли насыщенным NаНСО3, раствором соли, высушили над Мд!Ю4 и концентрировали под вакуумом. Остаток очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (4:1 гексан/ЕЮАс) для получения продукта.
Методика 692.
экв. соответствующей карбоновой кислоты растворили в ЭСМ и охладили до 0°С в бане из ледяной воды. После охлаждения добавили 3 капли ОМЕ и 1,5 экв. оксалилхлорида. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5 ч и затем 0,5 ч при комнатной температуре. После этого реакционную смесь концентрировали под вакуумом и использовали сразу же.
Методика 693.
экв. бис-И-карбоксибензоилцистина дибензилового эфира растворили в НОАс/Н2О (9/1) и обработали газообразным хлором в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, растворили в толуоле и концентрировали под вакуумом снова для получения твердого белого вещества. Этот продукт растворили в ЭСМ и добавили 0,5 экв. соответствующего амина ®. Реакционную смесь перемешивали 30 мин и затем разбавили ЕЮАс и разделили 0,1 н Η28Ο4, а потом раствором соли. Органический слой очистили путем флеш-хроматографии на силикагеле (1:1 ЕЮАс/гексан) для получения чистого продукта. Защитные группы удалили по методике 638 и использовали продукт без дальнейшей очистки.
Примеры специфических методик
Методика 81.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-ЭДапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Х-а-Етос-Х-Р-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий изоцианат ® присоединили по методике 633. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 82.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ОаЬа(а11ос)-ЭДапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Етос-N-γ-аллок-^-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, Методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий изоцианат ® присоединили по методике 633. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 83.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬΟ^η(а11ос)-\Vаηд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты N-α-Етос-N-δ-аллок-^-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий изоцианат ® присоединили по методике 633. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 84.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬу§(а11ос)-ЭДапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты N-α-Етос-N-ε-аллок-^-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий изоцианат ® присоединили по методике 633. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 85.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-ЭДапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Етос-N-β-аллок-^-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу
- 47 007852 обработали по методике 621.
Методика 86.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ОаЬа(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Ы-а-Етос-Ы-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 87.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оги(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты Ν-αЕтос-Ы-З-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 88.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Ьу8(а11ос)\Уапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты Ν-αЕтос-Ы-|®-А11ос-Б-1у5те. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 89.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Εтос-N-β-аллок-^-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-нипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 810.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Εтос-N-β-аллок-^-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-изонипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 811.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Εтос-N-β-аллок-^-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-3-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 812.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой N-α-Εтос-N-β-аллок-^-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-4-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 813.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос,
- 48 007852 на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Оара(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой №а-Етос-Ы-в-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос-в-аланин присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 814.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-0ара(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой №а-Етос-Ы-в-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос-глицин присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 815.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬОгп(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-ЕтосΝ-δ-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую Етос-нипекотиновую кислоту присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 816.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬОгп(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-Ы^-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую Етос-изонипекотиновую кислоту присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 817.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬОгп(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-Ы^-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую Етос-пипеколиновую кислоту присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 818.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬОгп(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-Ы^-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую Етос-3-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 819.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬОгп(а11ос)-+апд). Смолу получили по методике 034 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-ЕтосΝ-δ-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике 019. Соединение С, методика 013, присоединили по методике 020. Группу А11ос удалили по методике 035. Серийно выпускаемую Етос-4аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 020. Группу Етос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
- 49 007852
Методика 820.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-ЬОги(а11ос)^аид). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-РтосΜ-δ-аллок-Ь-орнитин. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Ртос-в-аланин присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 821.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-орнитин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-ЬОгп(а11ос)^аид). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-РтосМА-аллок-Ь-орнитин. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Ртос-глицин присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 822.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Гтос-Ь-0аЬа(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-Ртос-М-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Ртос-нипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 823.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-ОаЬа(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-Ртос-М-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Ртос-изонипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 824.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-ОаЬа(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-Ртос-М-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Ртос-пипеколиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 825.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-ОаЬа(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-Ртос-М-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Ртос-3-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу Ртос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 826.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-ОаЬа(а11ос)^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой М-а-Ртос-М-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Ртос-4-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу
- 50 007852
Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 827.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ОаЬа(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой И-а-Етос-И-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос^-аланин присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 828.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ОаЬа(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой И-а-Етос-И-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос-глицин присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 829.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуе(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты И-а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-нипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 830.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуе(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты И-а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-изонипекотиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 831.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуе(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты И-а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-пипеколиновую кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 832.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуе(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты И-а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-3-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 833.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуе(а11ос)-Аапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты И-а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика
- 51 007852
613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую Етос-4-аминометилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 834.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬу5(а11ос)-\Уапд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-Ы-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос-в-аланин присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 835.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬу8(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-Ы-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Серийно выпускаемую аминокислоту Етос-глицин присоединили по методике 620. Группу Етос удалили по методике 619 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 836.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Эара(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой №а-Етос-Ы-в-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий хлорформат ® присоединили по методике 674. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 837.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-триптофан(Вос)-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение Ό, Методика 614, присоединили по методике 620. Группу Етос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 838.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение Ό, Методика 614, присоединили по методике 620. Группу Етос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 839.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-аспарагин(Тй)-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение Ό, методика 614, присоединили по методике 620. Группу Етос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 840.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-триптофан(Вос)-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике 619. 4-Амино-2-метилбензойную кислоту присоединили по методике 620. Соответствующую карбоновую кислоту ® защитили силилом, методика 618, получили хлорид кислоты по методике 692 и присоединили его в ЭСМ в течение ночи к амину. После промывки смолы ЭСМ и ТНЕ добавили 3 экв. тетрабутиламмония фторида в ТНЕ. Через 20 мин смолу промыли ТНЕ, Н2О и разбавленной НОАс. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 841.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемых смолах Етос-Ь-аминокислота-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике 619. 4-Амино-2-метилбензойную кислоту присоединили по методике 620. 3-Гидроксифенилуксусную кислоту ® защитили силилом, методика 618, получили хлорид кислоты по методике 692 и
- 52 007852 присоединили его в ЭСМ в течение ночи к амину. После промывки смолы ЭСМ и ТНР добавили 3 экв. тетрабутиламмония фторида в ТНР. Через 20 мин смолу промыли ТНР, Н2О и разбавленной НОАс. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 842.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике 620. Ртос-глицин соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 843.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике 620. Ртос-Ь-аланин соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 844.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике 620. Ртос-Ь-фенилглицин соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике
619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 845.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике
620. Ртос-Ь-глутамин соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике
619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 846.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике
620. 3-хлорбензальдегид превратили в Ртос-3-хлорфенилглицин по методике 662 и соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 847.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-диаминопропионовой кислоты(аллок)-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение Ό, методика 614, присоединили по методике 620. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 848.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-лизин(Вос)-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение Ό, методика 614, присоединили по методике 620. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 849.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике 620. 3-Метоксибензальдегид превратили в Ртос-3-хлор-фенилглицин по методике 662 и соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 850.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике 620. Ртос-мета-тирозин соединили с анилином по методике 661. Группу Ртос отщепили по методике
- 53 007852
619. Соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 620. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 851.
3-Гидроксианилин соединили с серийно выпускаемой аминокислотой Вос-б-серин по методике 63. Группу Вос удалили по методике 61 и этот амин соединили с соединением А, методика 68. третБутиловый эфир удалили по методике 611 и кислоту соединили с о-трет-бутиловым эфиром соответствующей аминокислоты ® по методике 63. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 611 и окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной массспектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 852.
Группу Вос в соединении Г, методика 675, удалили по методике 62 и фурилакриловую кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с соответствующей серийно выпускаемой Гшос-защищенной аминокислотной смолой \Уапд с удаленной защитой (0,5 ммоль/г) ®. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 853.
Метиловый эфир из соединения Г, методика 675, удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым Ь-аспарагина трет-бутиловым эфиром. Группу Вос удалили по методике 61 и соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 63. После удаления конечного трет-бутилового эфира по методике 611 молекулу очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 854.
Группу Вос в соединении Г, методика 675, удалили по методике 62 и фурилакриловую кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым β-Вос-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром. Вос-группу удалили по методике 61 и соответствующую карбоновую кислоту ® присоединили по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной массспектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 855.
Группу Вос в соединении I, методика 675, удалили по методике 61 и 3-гидроксибензойную кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым Ь-триптофана метиловым эфиром. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 856.
Группу Вос в соединении Н, методика 675, удалили по методике 61 и 3-гидроксибензойную кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым метиловым эфиром аминокислоты ®. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 857.
Группу Вос в соединении Н, методика 675, удалили по методике 61 и фурилакриловую кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с соответствующим серийно выпускаемым метиловым эфиром аминокислоты ®. Группу Вос удалили по методике 61, если необходимо, и после омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 858.
Группу Вос в соединении Н, методика 675, удалили по методике 61 и 3-(2-тиенил)акриловую кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с соответствующим серийно выпускаемым метиловым эфиром аминокислоты ®. Группу Вос удалили по методике 61, если необходимо, и после омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 859.
Группу Вос в соединении Н, методика 675, удалили по методике 61 и фурилакриловую кислоту соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с соответст- 54 007852 вующим серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 860.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬу8(а11ос)-№апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты Н-а-Етос-Н-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий альдегид ® присоединили по методике 623. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 861.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминопропионовой кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Эара(а11ос)-№апд). Смолу получили по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Н-а-Етос-Н-в-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Группу А11ос удалили по методике 635. Соответствующий альдегид ® присоединили по методике 623. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 862.
Соответствующий амин ® присоединили к соединению А, методика 68, по методике 63. третБутиловый эфир удалили по методике 611. Результирующую кислоту присоединили по методике 63 к смоле, полученной по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Н-а-Етос-Н-в-аллок-Ьдиаминопропионовой кислоты, из которой группу Етос удалили по методике 619. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 863.
Соответствующий амин ® присоединили к соединению А, методика 68, по методике 63. третБутиловый эфир удалили по методике 611. Результирующую кислоту присоединили по методике 63 к серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-аспарагин(Тй)-№апд (0,5 ммоль/г), из которой группу Етос удалили по методике 619. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 864.
Группу Вос в соединении Е, методика 675, удалили по методике 61 и фурилакриловую кислоту, методика 681, соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту ® по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой ЭТЬС, проверили электрораспылительной массспектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 865.
Группу Вос в соединении Е, методика 675, удалили по методике 61. 2-Ацетилфуран превратили в метилакриловой кислоты этиловый эфир по методике 682 и после омыления по методике 680 соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту ® по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой ЭТЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 866.
Группу Вос в соединении Е, методика 675, удалили по методике 61. После превращения 2-ацетилфурана в этиловый эфир метилакриловой кислоты по методике 682, омыления по методике 680 и восстановления по методике 681 его соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой ЭТЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 867.
Группу Вос в соединении Е, методика 675, удалили по методике 61. Фурилальдегид превратили в этиловый эфир метилакриловой кислоты по методике 683 и после омыления по методике 680 соединили с амином после выделения свободного основания, методика 62, по методике 63. Метиловый эфир удалили по методике 655 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым
- 55 007852 метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике С1 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике С3. После омыления по методике С4 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 868.
Группу Вос в соединении Е, методика С75, удалили по методике С1. После превращения фурилальдегида в этиловый эфир метилакриловой кислоты по методике С83, омыления по методике С80 и восстановления по методике С81 его соединили с амином после выделения свободного основания, методика С2, по методике С3. Метиловый эфир удалили по методике С55 и результирующую кислоту соединили по методике С20 с серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике С1 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике С3. После омыления по методике С4 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 869.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на соответствующей серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-аминокислота-^апд (0,5 ммоль/г) ®. Группу Етос отщепили по методике С19. Серийно выпускаемую 2,6-диметилтерефталевую кислоту присоединили по методике С20. 3-Гидроксибензиламин, методика С38, присоединили по методике С20. Окончательную молекулу обработали по методике С21 и правильную стереохимию установили по активности.
Методика 870.
Соединения синтезировали на смоле, полученной по методике С34 с использованием №а-Етос-№ β-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике С19. Серийно выпускаемую 2,6-диметилтерефталевую кислоту присоединили по методике С20. 3-Гидроксибензиламин, методика С38, присоединили по методике С20. Группу А11ос удалили по методике С35 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике С20. Окончательную молекулу обработали по методике С21 и правильную стереохимию установили по активности.
Методика 871.
Группу Вос в соединении Е, методика С75, удалили по методике С1 и соответствующую карбоновую кислоту ® соединили с амином после выделения свободного основания, методика С2, по методике С3. Метиловый эфир удалили по методике С55 и результирующую кислоту соединили по методике С20 с серийно выпускаемым метиловым эфиром β-Вос-диаминопропионовой кислоты. Группу Вос удалили по методике С1 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике С3. После омыления по методике С4 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной массспектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 872.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-триптофан(Вос)-№апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике С19. Серийно выпускаемую 2-бромтерефталевую кислоту защитили группой Етос по методике С6 и результирующий продукт присоединили по методике С20. Соответствующий амин ® присоединили по методике С22. Окончательную молекулу обработали по методике С21.
Методика 873.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Ь-аланин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике С19. Серийно выпускаемую 2-бромтерефталевую кислоту защитили группой Етос по методике С6 и результирующий продукт присоединили по методике С20. Соответствующий амин ® присоединили по методике С22. Окончательную молекулу обработали по методике С21.
Методика 874.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ОаЬа(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике С34 с использованием серийно выпускаемой №а-Етос-№у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике С19. Соединение С, методика С13, присоединили по методике С20. Группу А11ос удалили по методике С35. Соответствующий серийно выпускаемый сульфонилхлорид ® присоединили по методике С42. Окончательную молекулу обработали по методике С21.
Методика 875.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле №а-Етос-№0-аллок-Ь-орнитин-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Огп(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике С34 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-№8-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике С19. Соединение С, методика С13, присоединили по методике С20. Группу А11ос удалили по методике С35. Соответствую
- 56 007852 щий серийно выпускаемый сульфонилхлорид ® присоединили по методике О42. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 876.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-ЬЬуз(аИос)-^апд). Смолу получили по методике О34 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты №а-Етос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение С, методика О13, присоединили по методике О20. Группу А11ос удалили по методике О35. Соответствующий серийно выпускаемый сульфонилхлорид ® присоединили по методике О42. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 877.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-диаминомасляной кислоты-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-ЭаЬа(а11ос)-^апд). Смолу получили по методике О34 с использованием серийно выпускаемой ^а-Етос-И-у-аллок-Ь-диаминомасляной кислоты. Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение С, методика О13, присоединили по методике О20. Группу А11ос удалили по методике О35. Соответствующий серийно выпускаемый хлорформат ® присоединили по методике О43. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 878.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле №«-Етос-№0-А11ос-Ь-орнитин-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола ЕтосЬ-От(а11ос)-^аид). Смолу получили по методике О34 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты ^а-Етос-И-б-аллок-Ь-орнитин. Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение С, методика О13, присоединили по методике О20. Группу А11ос удалили по методике О35. Соответствующий серийно выпускаемый хлорформат ® присоединили по методике О43. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 879.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етос-Ь-лизин-(аллок)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Етос-Ь-Ьуз(а11ос)^апд). Смолу получили по методике О34 с использованием серийно выпускаемой аминокислоты Ν-αЕтос-И-е-аллок-Ь-лизин. Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение С, методика О13, присоединили по методике О20. Группу А11ос удалили по методике О35. Соответствующий серийно выпускаемый хлорформат ® присоединили по методике О43. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 880.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на серийно выпускаемой смоле Етос-Е-аспарагин(Тг1)-\Уапд (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике О19. Серийно выпускаемую 2-бромтерефталевую кислоту защитили группой Етос по методике О6 и результирующий продукт присоединили по методике О20. Соответствующий амин ® присоединили по методике О22. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 881.
Соединения синтезировали на смоле, полученной по методике О34 с использованием серийно выпускаемой №а-Етос-И-в-аллок-Ь-диаминопропионовой кислоты. Группу Етос отщепили по методике О19. Серийно выпускаемую 2-бромтерефталевую кислоту защитили группой Етос по методике О6 и результирующий продукт присоединили по методике О20. Соответствующий амин ® присоединили по методике О22. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 882.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на соответствующей серийно выпускаемой смоле Етос-аминокислоты-р-алкоксибензилового спирта ® (смола ^апд) (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение С, методика О13, присоединили по методике О20. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 883.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на соответствующей серийно выпускаемой смоле Етос-аминокислоты-р-алкоксибензилового спирта ® (смола ^апд) (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике О19. Соединение В, методика О12, присоединили по методике О20. Окончательную молекулу обработали по методике О21.
Методика 884.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етос, на смоле Етοс-^-триптофан(Βοс)-^аид (0,5 ммоль/г). Группу Етос отщепили по методике О19. Серийно выпускаемую 4-амино-2-хлорбензойную кислоту присоединили по методике О20. Смолу обработали избыточным количеством 0,5М 4-нитрофенилхлорформата и 0,5М ΌΙΡΕΑ в течение 45 мин. После двукратной промывки смолы ТНЕ/ОСМ добавили избыток соответствующего амина ® в 0,5М ΌΙΡΕΑ/ЭМЕ
- 57 007852 и оставили смолу при барботировании на 20 мин. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 885.
Соответствующую аминокислоту ® превратили в ее метиловый эфир по методике 015. После выделения свободного основания амина по методике 02 соединили соединение С, методика 013, с метиловым эфиром аминокислоты по методике 03. После омыления по методике 04 молекулу очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 886.
3-Гидроксиацетофенон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011, кислоту соединили с серийно выпускаемым трет-бутиловым эфиром Ь-аспарагина по методике 024. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 011 и окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 887.
3-Гидроксиацетофенон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011, кислоту соединили с серийно выпускаемым метиловым эфиром Ь-триптофана по методике 024. Конечный метиловый эфир удалили по методике 04 и окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 888.
3-Гидроксибензальдегид и этилмагния бромид превратили в кетон по методике 071. Кетон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011, кислоту соединили с серийно выпускаемым трет-бутиловым эфиром Ь-аспарагина по методике 024. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 011 и окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 889.
3-Гидроксибензальдегид и этилмагния бромид превратили в кетон по методике 071. Кетон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011, кислоту соединили с серийно выпускаемым метиловым эфиром Ь-триптофана по методике 024. Конечный метиловый эфир удалили по методике 04 и окончательную молекулу очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 890.
3-Гидроксибензальдегид и Ν-пропилмагния бромид превратили в кетон по методике 071. Кетон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011 кислоту соединили с серийно выпускаемым трет-бутиловым эфиром Ь-аспарагина по методике 024. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 011 и окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 891.
3-Гидроксибензальдегид и Ν-пропилмагния бромид превратили в кетон по методике 071. Кетон превратили в оксим по методике 070 и затем гидрогенизировали по методике 038 для получения амина. Этот амин соединили с соединением А, методика 08, по методике 024. После удаления трет-бутилового эфира по методике 011 кислоту соединили с серийно выпускаемым метиловым эфиром Ь-триптофана по методике 024. Конечный метиловый эфир удалили по методике 04 и окончательную молекулу очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 892.
Соответствующий сульфонамид синтезировали по методике 093 с использованием аммиака в качестве амина ® и этот продукт превратили в метиловый эфир по методике 015. Соединение С, методика 013, соединили с сульфонамида метиловым эфиром по методике 03. Конечный метиловый эфир удалили по методике 04. Окончательную молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 893.
Соединения синтезировали на серийно выпускаемой смоле Ртос-Ь-аспарагин(Тй)-Аапд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос удалили по методике 019. Продукт методики 065, за исключением того, что его не расщепляли по методике 067, защитили группой Ртос по методике 05 и удалили трет-бутиловый эфир по методике 011. Этот продукт соединили со смолой по методике 020. Группу Ртос удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную моле
- 58 007852 кулу обработали по методике 021.
Методика 894.
Соединения синтезировали на серийно выпускаемой смоле Гтοс-^-аспарагин(Τ^ι)-\Vаηд (0,5 ммоль/г). Группу Етοс удалили по методике 019. 8-Изомер по методике 065 защитили группой Етοс по методике 05 и удалили трет-бутиловый эфир по методике 011. Этот продукт соединили со смолой по методике 020. Группу Етοс удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 895.
Соединения синтезировали на серийно выпускаемой смоле Етοс-^-аланин-^аηд (0,5 ммоль/г). Группу Етοс удалили по методике 019. 8-Изомер по методике 065 защитили группой Етοс по методике 05 и удалили трет-бутиловый эфир по методике 011. Этот продукт соединили со смолой по методике 020. Группу Етοс удалили по методике 019 и присоединили соответствующую карбоновую кислоту ® по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021.
Методика 896.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етοс, на серийно выпускаемой смоле Гтοс-^-трипто(|)ан(Вοс)-\Vаηд (0,5 ммоль/г). Группу Етοс отщепили по методике 019. Соответствующую серийно выпускаемую дикислоту ® присоединили по методике 020. 3-Гидроксибензиламин, методика 038, присоединили по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021 и правильную стереохимию установили по активности.
Методика 897.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Етοс, на серийно выпускаемой смоле Гтοс-^-аспарагин(Τ^ι)-\Vаηд (0,5 ммоль/г). Группу Етοс удалили по методике 019. Соответствующую серийно выпускаемую дикислоту ® присоединили по методике 020. 3-Гидроксибензиламин, методика 038, присоединили по методике 020. Окончательную молекулу обработали по методике 021 и правильную стереохимию установили по активности.
Методика 898.
Продукт методики 086 присоединили по методике 020 к соответствующей серийно выпускаемой смоле Етοс-^-аминокислота-^аηд ® после удаления группы Етοс по методике 019. Окончательную молекулу обработали по методике 021 и правильную стереохимию установили по активности.
Методика 899.
3-Гидроксиминдальную кислоту превратили в ее соответствующий спирт по методике 025 и соединили с метиловым эфиром 4-гидрокси-2-хлорбензойной кислоты, методика 015, по методике 026. Метиловый эфир удалили по методике 04 и карбоновую кислоту соединили с Ь-аспарагина третбутиловым эфиром по методике 03. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 011 и молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8100.
3-Гидроксиминдальную кислоту превратили в ее соответствующий спирт по методике 025 и соединили с метиловым эфиром 4-гидрокси-2-хлорбензойной кислоты, методика 015, по методике 026. Метиловый эфир удалили по методике 04 и карбоновую кислоту соединили с Ь-аланина трет-бутиловым эфиром по методике 03. Конечный трет-бутиловый эфир удалили по методике 011 и молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8101.
Метиловый эфир 3-(3-гидроксифенил)пропионовой кислоты получили по методике 015 и превратили в альдегид по методике 029. Оксазолин 4-бром-2-хлорбензойной кислоты получили по методике 030. Альдегид соединили с бромидом по методике 031, а оксазолин превратили в этиловый эфир по методике 032. После омыления по методике 04 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8102.
Метиловый эфир 3-(3-гидроксифенил)пропионовой кислоты получили по методике 015 и превратили в альдегид по методике 029. Оксазолин 4-бром-2-хлорбензойной кислоты получили по методике 030. Альдегид соединили с бромидом по методике 031, а оксазолин превратили в этиловый эфир по методике 032. Аллиловый спирт оксидировали в кетон по методике 027, а этиловый эфир омылили по методике 04. Карбоновую кислоту соединили с Ь-аланина метиловым эфиром по методике 03 и после омыления по методике 04 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8103.
Метиловый эфир 4-гидрокси-2-хлорбензойной кислоты получили по методике 015. 1,2-Дибромэтан соединили с фенолом по методике 051. Соответствующий гидроксифенол ® присоединили по методике 052 и удалили метиловый эфир по методике 04. Ь-Аланина о-трет-бутиловый эфир присоединили по методике 03. трет-Бутиловый эфир удалили по методике 011 и конечное соединение очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
- 59 007852
Методика 8104.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в фенол по методике С47 и затем удалили метиловый эфир по методике С48. Результирующую карбоновую кислоту превратили в ее аллиловый эфир по методике С49 (соединение С). 3-Гидроксиминдальную кислоту превратили в ее соответствующий спирт по методике С25 и соединили с фенолом (соединение С) по методике С26. Аллиловый эфир удалили по методике С50. Результирующую бензойную кислоту соединили с серийно выпускаемым Ь-аспарагина о-третбутиловым эфиром по методике С3. трет-Бутиловый эфир удалили по методике С11 без ΊΈ8. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8105.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в фенол по методике С47 и затем удалили метиловый эфир по методике С48. Результирующую карбоновую кислоту превратили в ее аллиловый эфир по методике С49 (соединение С). 1,3-Дибромпропан соединили с фенолом (соединение С) по методике С81. 3-Гидроксифенол присоединили по методике С52, а метиловый эфир удалили по методике С4. Аллиловый эфир удалили по методике С50. Результирующую бензойную кислоту соединили с серийно выпускаемым Ьаспарагина о-трет-бутиловым эфиром по методике С3. трет-Бутиловый эфир удалили по методике С11 без ΤЕ8. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8106.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в фенол по методике С47 и затем удалили метиловый эфир по методике С48. Результирующую карбоновую кислоту превратили в ее аллиловый эфир по методике С49 (соединение С). 1,2-Дибромпропан соединили с фенолом (соединение С) по методике С51. 3-Гидроксифенол присоединили по методике С52, а метиловый эфир удалили по методике С4. Аллиловый эфир удалили по методике С50. Результирующую бензойную кислоту соединили с серийно выпускаемым Ьаспарагина о-трет-бутиловым эфиром по методике С3. трет-Бутиловый эфир удалили по методике С11 без ΤЕ8. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8107.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в фенол по методике С47 и затем удалили метиловый эфир по методике С48. Результирующую карбоновую кислоту превратили в ее аллиловый эфир по методике С49 (соединение С). 1,2-Дибромпропан соединили с фенолом (соединение С) по методике С51. 3-Гидроксифенол присоединили по методике С52, а метиловый эфир удалили по методике С4. Аллиловый эфир удалили по методике С50. Результирующую бензойную кислоту соединили с серийно выпускаемым Ьаланина-о-трет-бутиловым эфиром по мМетодике С3. трет-Бутиловый эфир удалили по методике С11 без ΤЕ8. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8108.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в иодид по методике С54 и затем удалили метиловый эфир по методике С55. Эту бензойную кислоту соединили с Ь-аспарагина-о-трет-бутиловым эфиром по методике С3. 3-Гидроксибензойную кислоту превратили в гидроксамат по методике С56. Гидроксил защитили как трет-бутиловый простой эфир по методике С10, а гидроксамат превратили в альдегид по методике С57. Альдегид соединили с этинилмагния бромидом по методике С58, а результирующий продукт соединили с вышеописанным арилиодидом по методике С59. Алкин восстановили в алкан по методике С60. третБутиловый сложный эфир и простой эфир удалили по методике С11 без ΊΈ8. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8109.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике С44 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике С45. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике С46. Вос-анилин превратили в иодид по методике С54 и затем удалили метиловый эфир по методике С55. Эту бензойную кислоту соединили с Ь-аспарагина-о-трет-бутиловым эфиром по методике С3. 3-Гидроксибензойную кислоту превратили в гидроксамат по методике С56. Гидроксил защитили как
- 60 007852 трет-бутиловый эфир по методике С10, а гидроксамат превратили в альдегид по методике 057. Альдегид соединили с этинилмагния бромидом по методике 058, а результирующий продукт соединили с вышеописанным арилиодидом по методике 059. Алкин восстановили в алкан по методике 060. трет-Бутиловый сложный эфир и простой эфир удалили по методике 011. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8110.
3.5- Диметил-4-гидроксибензальдегид соединили с этинилмагния бромидом по методике 058 и этот продукт соединили с 3-иоданизолом по методике 059. Алкинол гидрогенизировали в алкан по методике 038, за исключением того, что продукт очищали флеш-хроматографией на силикагеле (3/6/1 гексан/ БСМ/Е!2О) для получения чистого арилового спирта. Спирт защитили силиловой группой по методике 018. Фенол превратили в соответствующий трифлат по методике 045. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 046. Метиловый простой эфир и сложный эфир удалили по методике 055. Кислоту соединили с Ь-аспарагина-о-трет-бутиловым эфиром по методике 03. трет-Бутиловый эфир удалили по методике 011 без ТЕ8, а силиловый простой эфир удалили в ходе той же реакции путем добавления 3 экв. ТВАР. Окончательную молекулу концентрировали под вакуумом, очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8111.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 044 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 045. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 046. Вос-анилин превратили в иодид по методике 054 и затем удалили метиловый эфир по методике 055. Эту бензойную кислоту соединили с Ь-аспарагина-о-трет-бутиловым эфиром по методике 03. 3'-Гидроксиацетофенон превратили в трет-бутиловый эфир по методике 010. Результирующий алкин соединили с арилиодидом по методике 059. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 060. Восстановительное удаление бензилового спирта, а также отщепление групп трет-бутилового простого эфира и сложного эфира выполняли по методике 011 (с использованием избыточного ТЕ8). Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8112.
2.6- Дихлор-4-метилфенол превратили в трифлат по методике 045. Этот трифлат карбонилировали в метиловый эфир по методике 046, а затем превратили в альдегид по методике 084. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 058 и результирующий алкин соединили с 3-Йодфенолом по методике 059. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 060, а метиловый эфир отщепили по методике 055. Результирующую карбоновую кислоту соединили с Ь-аспарагина-о-трет-бутиловым эфиром по методике 03. Отщепление трет-бутиловой сложноэфирной группы выполняли по методике 011 (без ТЕ8). Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8113.
2,6-Дихлор-4-метилфенол превратили в трифлат по методике 045. Этот трифлат карбонилировали в метиловый эфир по методике 046, а затем превратили в альдегид по методике 084. 3-Йодфенол силилировали по методике 018 с получением о-трет-бутилдиметилсилил-3-иодфенола. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 058 и результирующий алкин соединили с о-трет-бутилдиметилсилил-3-иодфенолом по методике 059. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 060. Результирующий спирт превратили в метиловый эфир по методике 085, а метиловый эфир отщепили по методике 055. Результирующую карбоновую кислоту соединили с Ь-аспарагина о-трет-бутиловым эфиром по методике 03. Отщепление трет-бутиловой сложноэфирной группы выполнили по методике 011 без ТЕ8, а силиловый простой эфир удалили в ходе той же реакции путем добавления 3 экв. ТВАР. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8114.
2,6-Дихлор-4-метилфенол превратили в трифлат по методике 045. Этот трифлат карбонилировали в метиловый эфир по методике 046, а затем превратили в альдегид по методике 084. 3-Йодфенол силилировали по методике 018 с получением о-трет-бутилдиметилсилил-3-иодфенола. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 058 и результирующий алкин соединили с о-трет-бутилдиметилсилил-3иодфенолом по методике 059. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 060, а метиловый эфир отщепили по методике 055. Результирующую карбоновую кислоту соединили с М-в-аллок-Ь-а,в-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром по методике 03 (при добавлении 1 экв. Б1РЕА). Силиловый простой эфир удалили по методике 011 без ТЕ8 с добавлением 3 экв. ТВАР. Метиловый эфир омылили по методике 04. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8115.
2,6-Дихлор-4-метилфенол превратили в трифлат по методике 045. Этот трифлат карбонилировали в
- 61 007852 метиловый эфир по методике 646, а затем превратили в альдегид по методике 684. 3-Йодфенол силилировали по методике 618 с получением о-трет-бутилдиметилсилил-3-иодфенола. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658 и результирующий алкин соединили с о-трет-бутилдиметилсилил-3-Йодфенолом по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660, а метиловый эфир отщепили по методике 655. Результирующую карбоновую кислоту соединили с Ν-ε-Вос-Ь-лизина метиловым эфиром по методике 63 (при добавлении 1 экв. ОГРЕА). Метиловый эфир омылили по методике 64, группу Вос удалили по методике 611 без ТЕ8, а силиловый простой эфир удалили в ходе той же реакции путем добавления 3 экв. ТВАГ. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8116.
3-Гидроксибензойную кислоту превратили в N-метокси-N-метиламид по методике 656. Гидроксильную группу защитили как трет-бутиловый простой эфир по методике 610. N-Метокси-N-метиламид восстановили в альдегид по методике 657. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658. 4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 646. Вос-анилин превратили в иодид по методике 654. Результирующий арилиодид соединили с вышеописанным алкином по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660. Метиловый эфир отщепили по методике 655. Карбоновую кислоту соединили с N-β-а11ос-^-α,β-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром по методике 63 (при добавлении 1 экв. О1РЕА). Метиловый эфир омылили по методике 64. Отщепление трет-бутиловой простой эфирной группы выполнили по методике 611 (без ТЕ8). Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8117.
3- Гидроксибензойную кислоту превратили в Ν-метокси-М-метиламид по методике 656. Гидроксильную группу защитили как трет-бутиловый простой эфир по методике 610. N-Метокси-Nметиламид восстановили в альдегид по методике 657. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658. 4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 646. Вос-анилин превратили в иодид по методике 654. Результирующий арилиодид соединили с вышеописанным алкином по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660. Результирующий спирт превратили в метиловый простой эфир по методике 685, а метиловый эфир отщепили по методике 655. Результирующую карбоновую кислоту соединили с Ь-аспарагина о-третбутиловым эфиром по методике 63. Отщепление трет-бутиловой сложноэфирной группы выполнили по методике 611 (без ТЕ8), а силиловый простой эфир удалили в ходе той же реакции путем добавления 3 экв. ТВАГ. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8118.
4- Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 646. Вос-анилин превратили в иодид по методике 654. 3-Хлорбензальдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658 и результирующий алкин соединили с вышеописанным арилиодидом по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660. Метиловый эфир отщепили по методике 655. Карбоновую кислоту соединили с N-β-а11ос-^-α,β-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром по методике 63 (при добавлении 1 экв. О1РЕА). Метиловый эфир омылили по методике 64. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращеннофазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8119.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 646. Вос-анилин превратили в иодид по методике 654. 3-Хлорбензальдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658 и результирующий алкин соединили с вышеописанным арилиодидом по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660 и результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым β-Вос-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8120.
3-Гидроксибензойную кислоту превратили в Ν-метокси-М-метиламид по методике 656. Гидроксильную группу защитили как трет-бутиловый простой эфир по методике 610. N-Метокси-N-метиламид восстановили в альдегид по методике 657. Альдегид обработали этинилмагния бромидом по методике
- 62 007852
658. 4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по мМетодике 646. Вос-анилин превратили в иодид по мМетодике 654. Результирующий арилиодид соединили с вышеописанным алкином по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660. Метиловый эфир отщепили по методике 655, а результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым β-Вос-диаминопропионовой кислоты метиловым эфиром. Группу Вос удалили по методике 61 и присоединили тиофен-2-карбоновую кислоту по методике 63. После омыления по методике 64 молекулу очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной массспектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8121.
4-Амино-2,6-дихлорфенол защитили группой Вос по методике 644 и превратили фенол в его соответствующий трифлат по методике 645. Трифлат превратили в карбоновой кислоты метиловый эфир по методике 646. Вос-анилин превратили в иодид по методике 654. 3-Хлорбензальдегид обработали этинилмагния бромидом по методике 658 и результирующий алкин соединили с вышеописанным арилиодидом по методике 659. Алкин гидрогенизировали в алкан по методике 660. Метиловый сложный эфир удалили по методике 655, а результирующую кислоту соединили по методике 620 с серийно выпускаемым Ν-ε-Вос-Ь-лизина метиловым эфиром по методике 63 (при добавлении 1 экв. Э1РЕА). Метиловый эфир омылили по методике 64, группу Вос удалили по методике 611 (без ТЕ8), а силиловый простой эфир удалили в ходе той же реакции путем добавления 3 экв. ТВАР. Неочищенный продукт изолировали путем концентрирования под вакуумом, очистили обращенно-фазовой НРЬС, проверили электрораспылительной масс-спектрометрией и лиофилизовали в порошок.
Методика 8122.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на серийно выпускаемой смоле Ртос-глицин-^апд (0,5 ммоль/г). Группу Ртос отщепили по методике 619. α-Углерод α-глицина алкилировали соответствующим серийно выпускаемым бромидом или хлоридом по методике 636, получив соответствующую рацемическую аминокислоту. Соединение Е соединили со смолой по методике 637 и окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 8123.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-аспарагиновой кислоты(аллил)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г). Смолу получали по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-Ртос-в-аллил-Ьаспарагиновой кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение Е соединили со смолой по методике 637. Аллильную группу удалили по методике 639. Соответствующий анилин ® присоединили по методике 640. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 8124.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-аспарагиновой кислоты(аллил)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-а§р(а11ос)-^апд). Смолу получали по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-Ртос-в-аллил-Ь-аспарагиновой кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Аллильную группу удалили по методике 639. Соответствующий амин ® присоединили по методике 641. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 8125.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ртос-Ь-глутаминовой кислоты(аллил)-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь-д1и(а11ос)-^аид). Смолу получали по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Να-Ртос-в-аллил-Ь-глутаминовой кислоты. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Аллильную группу удалили по методике 639. Соответствующий амин ® присоединили по методике 641. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 8126.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ν-α-Ртос-О-тритил-Ь-серин-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола Ртос-Ь8ег(1п1у1)-\Уапд). Смолу получали по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-РтосО-тритил-Ь-серина. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по Методике 620. Тритильную группу удалили по Методике 672. Соответствующий амин ® присоединили по методике 673. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Методика 8127.
Соединения синтезировали при помощи стандартных твердофазных методик с использованием Ртос, на смоле Ν-α-Ртос-О-тритил-Ь-треонин-р-алкоксибензилового спирта (0,5 ммоль/г) (смола РтосЬ-111г(1г11у1)-\Уапд). Смолу получали по методике 634 с использованием серийно выпускаемой Ν-α-РтосО-тритил-Ь-треонина. Группу Ртос отщепили по методике 619. Соединение С, методика 613, присоединили по методике 620. Тритильную группу удалили по методике 672. Соответствующий амин ® при- 63 007852 соединили по методике 673. Окончательную молекулу обработали по методике 621.
Примеры 1-39.
Примеры 1-39 синтезировали по методике 81.
Пример № Группа К
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 2- Изопропилфенилизоцианат Фенэтилизоцианат 1-Нафтилилизоцианат (8)-(-)-а-Метилбензилизоцианат Цикло гексилизо цианат Этоксикарбонилизоцианат Изопропилизоцианат транс-2-Фенилциклопропилизоцианат 1- Адамантилизоцианат Фенилизоцианат 4-(Метилтио)фенилизоцианат 3- (Метилтио)фенилизоцианат 3- Этоксикарбонилфенилизоцианат 4- Этоксикарбонилфенилизоцианат 4-Фторфенилизоцианат 2- Фторфенилизоцианат 2- (Трифторметокси)фенилизоцианат 3- Фторфенилизоцианат 3- Бромфенилизоцианат 4- Метоксифенилизоцианат 4-Изопропилфенилизоцианат 3- (2-Гидрокси)этилфенилизоцианат 4- Этилфенилизоцианат 2- Нитрофенилизоцианат 3- Нитрофенилизо цианат 4- Нитрофенилизоцианат 3- Цианофенилизоцианат 4- Трифторметилизоцианат 3-Трифторметилизоцианат 2- Трифторметилизоцианат 3- Метилфенилизоцианат 4- Хлорфенилизоцианат 3-Хлорфенилизоцианат 3-Хлор-4-метилфенилизоцианат 3-Этилфенилизоцианат Аллилизоцианат (8)-(-)-Аметилбензилизоцианат Цикло гексилизо цианат транс-2-Фенилциклопропилизоцианат
Примеры 40-43.
- 64 007852
Примеры 40-43 синтезировали по методике 82.
Пример № Группа К
40 41 42 43 Бензилизоцианат Этоксикарбонилизоцианат 2-Хлор-6-метилфенилизоцианат Этоксикарбонилизоцианат
Примеры 44-62.
Примеры 44-62 синтезировали по методике 83.
Пример № Группа К
44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 Фенэтилизоцианат Изопропилизоцианат Циклогексилизоцианат 3- Этоксикарбонилфенилизоцианат 4- Этоксикарбонилфенилизоцианат 4-Фторфенилизоцианат 2- Фторфенилизоцианат 3- Фторфенилизоцианат 4- Метоксифенилизоцианат 4-Изопропилфенилизоцианат 3- (2-Гидроксиэтил)фенилизоцианат 2- Нитрофенилизоцианат 4- Нитрофенилизоцианат 3- Цианофенилизоцианат 3- Метилфенилизоцианат 4- Хлорфенилизоцианат 3- Хлор-4-метилфенилизоцианат 2-Хлор-6-метилфенилизоцианат 4- Этилфенилизоцианат
Примеры 63-71.
Примеры 63-71 синтезировали по методике 84.
Пример № Группа К
63 64 65 66 67 68 69 70 71 Фенэтилизоцианат Изопропилизоцианат Бензилизоцианат Пропилизоцианат Этоксикарбонилизоцианат Этил-2-изоцианат-4-метилвалерат (8)-(-)-Аметилбензилизоцианат Бензилсульфонилизоцианат Бензилизоцианат
- 65 007852
Примеры 72-95.
Примеры 72-95 синтезировали по методике 85.
Пример № Группа К
72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 3-Метилинден-2-карбоновая кислота 3- Метилбензофуран-2-карбоновая кислота 4- Оксо-4,5,6,7-тетрагидробензофуран-3-карбоновая кислота 1.2.5- Триметил-1 Н-пиррол-3 -карбоновая кислота 4-Метил-[1,2,3 ]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4- Фенил-[1,2,3]тиадиазол-5-карбоновая кислота 3-Хлор-2-тиофенкарбоновая кислота 3.5- Диметил-изоксазол-4-карбоновая кислота 3-Метил-2-фуранкарбоновая кислота 3-Бромтиофен-2-карбоновая кислота 2- Фуранкарбоновая кислота 3- Фуранкарбоновая кислота 2- Тиофенкарбоновая кислота 3- Тиофенкарбоновая кислота 5- Хлор-2-тиофенкарбоновая кислота 5-Бром-2-тиофенкарбоновая кислота Индол-5-карбоновая кислота Индол-4-карбоновая кислота Индол-6-карбоновая кислота Бензойная кислота Циклогексилкарбоновая кислота Уксусная кислота Изонипекотиновая кислота Пипеколиновая кислота
Примеры 96-113.
Примеры 96-113 синтезировали по методике 86.
Пример № Группа К
96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 3.4.5- Триметоксибензойная кислота Пропионовая кислота Циклопропилкарбоновая кислота Триметилуксусная кислота 1.2.5- Триметил-1 Н-пиррол-3 -карбоновая кислота 3- Хлор-4-метансульфонил-тиофен-2-карбоновая кислота 4- Метил-[1,2,3 ]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4-Фенил-[1,2,3]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4- Бром-2-этил-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновая кислота 3-Хлортиофен-2-карбоновая кислота 3.5- Диметилизоксазол-4-карбоновая кислота 5- Метил-2-фенил-2Н-[1,2,3]триазол-4-карбоновая кислота 3-Метил-2-фуранкарбоновая кислота 3-Бромтиофен-2-карбоновая кислота Бензойная кислота Циклогексилкарбоновая кислота Уксусная кислота Нет
- 66 007852
Примеры 114-126.
о
Примеры 114-126 синтезировали по методике 87.
Пример № Группа К
114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 Триметилуксусная кислота 3-Хлор-бензо[Ь]тиофен-2-карбоновая кислота 3-Хлортиофен-2-карбоновая кислота 3,5-Диметил-изоксазол-4-карбоновая кислота 3-Бромтиофен-2-карбоновая кислота 3- Метилинден-2-карбоновая кислота 4- Оксо-4,5,6,7-тетрагидробензофуран-3-карбоновая кислота 3- Хлор-4-метансульфонилтиофен-2-карбоновая кислота 4- Метил-[1,2,3]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4-Бром-2-этил-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновая кислота Бензойная кислота Циклогексанкарбоновая кислота Уксусная кислота
Примеры 127-144.
Примеры 127-144 синтезировали по методике 88.
Пример № Группа К
127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 3.4.5- Триметоксибензойная кислота Изовалериановая кислота Пропионовая кислота Циклопропилкарбоновая кислота 4-Ацетил-3,5-диметил-2-пирролкарбоновя кислота 3- Метилинден-2-карбоновая кислота 4- Оксо-4,5,6,7-тетрагидробензофуран-3-карбоновая кислота 1.2.5- Триметил-1Н-пиррол-3-карбоновая кислота 3- Хлор-4-метансульфонилтиофен-2-карбоновая кислота 4- Метил-[1,2,3]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4-Фенил-[1,2,3]тиадиазол-5-карбоновая кислота 4- Бром-2-этил-5-метил-2Н-пиразол-3-карбоновая кислота 3-Хлортиофен-2-карбоновая кислота 3.5- Диметилизоксазол-4-карбоновая кислота 5- Метил-2-фенил-2Н-[1,2,3]триазол-4-карбоновая кислота 3-Бромтиофен-2-карбоновая кислота Бензойная кислота Циклогексилкарбоновая кислота
- 67 007852
Примеры 145-147.
о
Примеры 145-147 синтезировали по методике 89.
Пример № Группа К
145 146 147 Пропионовая кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 148-150.
Примеры 148-150 синтезировали по методике 810.
Пример № Группа К
148 Пропионовая кислота
149 Масляная кислота
150 Уксусная кислота
Примеры 151-154.
Группа К
Примеры 151-154 синтезировали по методике 811. Пример №
151 Пропионовая кислота
152 Масляная кислота
153 Уксусная кислота
154 Нет
Примеры 155-158.
Примеры 155-158 синтезировали по методике 812.
Пример № Группа К
155 156 157 158 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
- 68 007852
Примеры 159-161.
Примеры 159-161 синтезировали по методике 813.
Пример № Группа К
159 Пропионовая кислота
160 Уксусная кислота
161 Нет
Примеры 162-163.
Примеры 162-163 синтезировали по методике 814.
Пример № 162 163 Группа К Уксусная кислота Нет
Примеры 164-167.
Примеры 164-167 синтезировали по методике 815.
Пример № Группа К
164 165 166 167 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 168-171.
Примеры 168-171 синтезировали по методике 816.
Пример № Группа К
168 169 170 171 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
- 69 007852
Пример 172.
Пример 172 синтезировали по методике 817.
Примеры 173-176.
Примеры 173-176 синтезировали по методике 818.
Пример № Группа К
173 174 175 176 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 177-180.
Примеры 177-180 синтезировали по методике 819.
Пример № Группа К
177 178 179 180 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 181-184.
Примеры 181-184 синтезировали по методике 820.
Пример № Группа К
181 182 183 184 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 185-188.
Примеры 185-188 синтезировали по методике 821.
Пример № Группа В
185 186 187 188 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 189-192.
Примеры 189-192 синтезировали по методике 822.
Пример № Группа В
189 190 191 192 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 193-196.
Примеры 193-196 синтезировали по методике 823.
Пример № Группа В
193 194 195 196 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Пример 197.
Пример 197 синтезировали по методике 824.
Примеры 198-201.
Примеры 198-201 синтезировали по методике 825.
Пример № Группа К
198 199 200 201 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 202-205.
Примеры 202-205 синтезировали по методике 826.
Пример № Группа К
202 203 204 205 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 206-209.
Примеры 206-209 синтезировали по методике 827.
Пример № Группа К
206 207 208 209 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 210-213.
Примеры 210-213 синтезировали по методике 828.
Пример № Группа К
210 211 212 213 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 214-217.
- 72 007852
Примеры 214-217 синтезировали по методике 829.
Пример № Группа К
214 215 216 217 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 218-221.
Примеры 218-221 синтезировали по методике 830.
Пример № Группа К
218 219 220 221 Пропионовая кислота Масляная кислота Уксусная кислота Нет
Примеры 222-223.
Примеры 222-223 синтезировали по методике 831.
Пример №
222
223
Группа К Уксусная кислота Нет
Примеры 224-225.
Примеры 224-225 синтезировали по методике 832.
Пример № Группа К
224 225 Пропионовая кислота Нет
Примеры 226-227.
- 73 007852
Примеры 226-227 синтезировали по методике
833.
Пример №
226
227
Группа К
Уксусная кислота
Нет
Примеры 228-229.
834.
Примеры 228-229 синтезировали по методике
Пример №
228
229
Группа К Уксусная кислота Нет
Пример 230.
Пример 230 синтезировали по методике 835.
Примеры 231-237.
Примеры 231-237 синтезировали по методике 836.
Пример № Группа К
231 232 233 234 235 236 237 Пропилхлорформат Бензилхлорформат Изопропилхлорформат Метилхлорформат Этилхлорформат Бутилхлорформат 3-Бутенилхлорформат
Примеры 238-240.
- 74 007852
Примеры 238-240 синтезировали по методике 837.
Пример № Группа К
238 239 240 3-Гидроксибензойная кислота 2- Гидроксикоричная кислота 3- Гидроксибензойная кислота
Примеры 241-245.
Примеры 241-245 синтезировали по методике 838.
Пример № Группа К
241 242 243 244 245 3-Гидроксибензойная кислота 2- Гидроксикоричная кислота 3- Хлорбензойная кислота Индол-5-карбоновая кислота 3-(2-Тиенил)акриловая кислота
Примеры 246-253.
Примеры 246-253 синтезировали по методике 839.
Пример № Группа К
246 247 248 249 250 251 252 253 3-Хлорбензойная кислота 3-(2-Тиенил)акриловая кислота 2- Фуранакриловая кислота 3- Гидроксибензойная кислота Индол-5-карбоновая кислота Бензофуран-5-карбоновая кислота Бензофуран-4-карбоновая кислота Индол-6-карбоновая кислота
Пример 254.
он
Пример 254 синтезировали по методике 840.
Примеры 255-256.
Примеры 255-256 синтезировали по методике 841.
Пример №
255
256
Группа К
Ь-А1а
Ь-Тйг
Пример 257.
- 75 007852
Пример 257 синтезировали по методике 842.
Примеры 258-259.
Примеры 258-259 синтезировали по методике 843.
Пример № Группа К
258 259 2- Тиофенкарбоновая кислота 3- Гидроксибензойная кислота
Примеры 260-261.
Примеры 260-261 синтезировали по методике 844.
Пример № Группа К
260 261 3-Гидроксибензойная кислота 2-Тиофенкарбоновая кислота
Примеры 262-263.
Примеры 262-263 синтезировали по методике 845.
Пример № Группа К
262 263 Бензойная кислота 2-Тиофенкарбоновая кислота
Примеры 264-265.
Примеры 264-265 синтезировали по методике 846.
Пример № Группа К
264 265 3-Гидроксибензойная кислота 2-Тиофенкарбоновая кислота
Примеры 266-267.
Примеры 266-267 синтезировали по методике 847.
- 76 007852
Пример № Группа К
266 267 3-(2-Тиенил)-акриловая кислота Фурилакриловая кислота
Пример 268.
Пример 268 синтезировали по методике 848.
Пример 269.
Пример 269 синтезировали по методике 849.
Примеры 270-271.
Примеры 270-271 синтезировали по методике 850.
Пример №
270
271
Группа К
3-Гидроксибензойная кислота
2-Тиофенкарбоновая кислота
Пример 272.
Пример 272 синтезировали по методике 851.
Примеры 273-275.
Примеры 273-275 синтезировали по методике 852.
Пример № Группа К
273 274 275 Ь-А1а Ь-Азп Ь-Диаминопропионовая кислота(аллок)
- 77 007852
Пример 276.
Пример 276 синтезировали по методике 853.
Примеры 277-282.
Примеры 277-282 синтезировали по методике 854.
Пример № Группа К
277 Тиофен-2-карбоновая кислота
278 2-Фуранкарбоновая кислота
279 2-Пиразинкарбоновая кислота
280 3-Метилтиофер-2-карбоновая кислота
281 3-Метил-2-фуранкарбоновая кислота
282 3-Хлортиофен-2-карбоновая кислота
Пример 283.
Пример 283 синтезировали по методике 855.
Примеры 284-285.
Примеры 284-285 синтезировали по методике 856.
Пример № Группа К
284 Ь-А1а
285 Ь-Άδη
Примеры 286-287.
Примеры 286-287 синтезировали по методике 857.
Пример №
286
287
Группа К
Ь-Диаминопропионовая кислота(аллок)
Ь-Ьу§
Примеры 288-289.
Примеры 288-289 синтезировали по методике 858.
- 78 007852
Пример № ГруппаЕ
288 289 Ь-Диаминопропионовая кислота(аллок) Ь-Ьуз
Пример 290.
Пример 290 синтезировали по методике 859.
Примеры 291-292.
Примеры 291-292 синтезировали по методике 860.
Пример № ГруппаЕ
291 292 2- Фуральдегид 3- Метил-2-фуральдегид
Примеры 293-294.
Примеры 293-294 синтезировали по методике 861.
Пример № ГруппаЕ
293 294 2- Фуральдегид 3- Метил-2-фуральдегид
Примеры 295-296.
Примеры 295-296 синтезировали по методике 862.
Пример №
295
296
ГруппаЕ
6-Аминометилбензофуран
4-Аминометилбензофуран
Пример 297.
Пример 297 синтезировали по методике 863.
Пример 298.
Пример 298 синтезировали по методике 864.
Пример 299.
Пример 299 синтезировали по методике 865.
Пример 300.
Пример 300 синтезировали по методике 866.
Пример 301.
о
Пример 301 синтезировали по методике 867.
Пример 302.
О
Пример 302 синтезировали по методике 868.
Примеры 303-305.
Примеры 303-305 синтезировали по методике 869.
- 80 007852
Пример №
303 Б-Азп
Группа К
304 Ь-Диаминопропионовая кислота(аллок)
305 Ь-1у8
Пример 306.
Пример 306 синтезировали по методике 870.
Пример 307.
Пример 307 синтезировали по методике 871.
Примеры 308-309.
Примеры 308-309 синтезировали по методике 872.
Пример № Группа К
308 309 3-Гидроксибензиламин 3-(3-Гидроксифенил)пропаргиламин
Примеры 310-312.
Примеры 310-312 синтезировали по методике 873.
Пример № Группа К
310 3-Фторбензиламин
311 Бензиламин
312 3-(3-Гидроксифенил)пропаргиламин
Примеры 313-315.
К ж ΗΝ О
О
Примеры 313-315 синтезировали по методике 874.
- 81 007852
Пример № Группа К
313 314 315 Ν-Ацетилсульфанилилхлорид 2-Бромбензолсульфонилхлорид 2-Тиофенсульфонилхлорид
Примеры 316-317.
Примеры 316-317 синтезировали по методике 875.
Пример № Группа К
316 317 2-Тиофенсульфонилхлорид 8-Хинолинсульфонилхлорид
Примеры 318-322.
Примеры 318-322 синтезировали по методике 876.
Пример №
318
319
320
321
322
Группа К
Бензолсульфонилхлорид
Ν-Ацетилсульфанилилхлорид
2-Тиофенсульфонилхлорид
2-Бромбензолсульфонилхлорид
2-Ацетамид-4-метил-5-тиазолсульфонилхлорид
Примеры 323-328.
Примеры 323-328 синтезировали по методике 877.
Пример № Группа К
323 324 325 326 327 328 Изобутилхлорформат Аллилхлорформат Бутилхлорформат Этилхлорформат Изопропилхлорформат Пропилхлорформат
Примеры 329-333.
Примеры 329-333 синтезировали по методике 878.
- 82 007852
Пример № Группа К
329 330 331 332 333 Изобутилхлорформат Циклопропилхлориформат Этилхлорформат Метилхлорформат 2,2,2-Трихлорэтилхлорформат
Примеры 334-337.
Примеры 334-337 синтезировали по методике 879.
Пример № Группа К
334 335 336 337 Бутилхлорформат Пропилхлорформат Этилхлорформат Метилхлорформат
Пример 338.
Пример 338 синтезировали по методике 880.
Пример 339.
Пример 339 синтезировали по методике 881.
Примеры 340-354.
но о
о
Примеры 340-354 синтезировали по методике 882.
Пример № Группа К
340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 Ь-А1а Ъ-ТЬг Ъ-Тгр Ъ-а/аТгр Ъ-8ег(ОВ/1) Ъ-Азп Ъ-Ъуз Ь-Н18 Ъ-Ъу^И-е-Ас) Ъ-61п Ъ-Диаминопропионовая(аллок) кислота Ъ-Диаминомасляная(аллок) кислота Ъ-Ъу8(аллок) Ъ-Огп(аллок) Ъ-Туг
- 83 007852
Примеры 355-357.
С1 о
о
Примеры 355-357 синтезировали по методике 883.
Пример № Группа В
355 Ь-А1а
356 Ь-Н18
357 Ь-Акп
Пример 358.
Пример 358 синтезировали по методике 884.
Примеры 359-362.
Примеры 359-362 синтезировали по методике 885.
Пример № 359 360 361 362 Группа В 1-Амино-1 -циклопропанкарбоновая кислота т-Тирозин о-Гидрокситирозин Ь-Иодтирозин
Пример 363.
Пример 363 синтезировали по методике 886.
Пример 364.
Пример 364 синтезировали по методике 887.
Пример 365.
- 84 007852
Пример 365 синтезировали по методике
888.
Пример 366.
889.
Пример 366 синтезировали по методике
Пример 367.
890.
Пример 367 синтезировали по методике
Пример 368.
891.
Пример 368 синтезировали по методике
Пример 369.
Пример 369 синтезировали по методике 892.
Примеры 370-371.
893.
Примеры 370-371 синтезировали по методике
Пример № Группа К
370 371 3-Гидроксибензойная кислота Бензойная кислота
Примеры 372-375.
Примеры 372-375 синтезировали по методике 894.
- 85 007852
Пример № Группа В
372 Фурилакриловая кислота
373 3-(2-Тиенил)акриловая кислота
374 3-Гидроксибензойная кислота
375 Бензойная кислота
Примеры 376-377.
Примеры 376-377 синтезировали по методике 895.
Пример № группа В
376 377 3-Гидроксибензойная кислота 3-(2-Тиенил)акриловая кислота
Пример 378.
Пример 378 синтезировали по методике 896.
Пример 379.
Пример 379 синтезировали по методике 897.
Примеры 380-383.
Примеры 380-383 синтезировали по методике 898.
Пример №
380
381
Группа В
Ь-Тгр
Ь-Акп
382 Ь-бара(а11ос)
383 Ь-Ьук
Пример 384.
Пример 384 синтезировали по методике 899.
Пример 385.
он
Пример 385 синтезировали по методике 8100.
- 86 007852
Пример 386.
Пример 386 синтезировали по методике 8101.
Пример 387.
Пример 387 синтезировали по методике 8102.
Пример 388.
Пример 388 синтезировали по методике 8103.
Пример 389.
Пример 389 синтезировали по методике 8104.
Пример 390.
Пример 390 синтезировали по методике 8105.
Пример 391.
Пример 391 синтезировали по методике 8106.
Пример 392.
Пример 392 синтезировали по методике 8107.
Пример 393.
Пример 393 синтезировали по методике 8108.
- 87 007852
Пример 394.
Пример 394 синтезировали по методике 8109.
Пример 395.
Пример 395 синтезировали по методике 8110.
Пример 396.
Пример 396 синтезировали по методике 8111.
Пример 397.
Пример 397 синтезировали по методике 8112.
Пример 398.
Пример 398 синтезировали по методике 8113.
Пример 399.
Пример 399 синтезировали по методике 8114.
Пример 400.
Пример 400 синтезировали по методике 8115.
- 88 007852
Пример 404.
- 89 007852
Примеры 407-416.
Примеры 407-416 синтезировали по методике 8122.
Пример № Группа К
407 408 409 410 411 412 413 414 415 416 3-Метоксибензилбромид 3-Бромбензилбромид 3,5-Диметоксибензилбромид 5- Бромвалеронитрил 6- Бромгексаннитрил 3-Нитробензилбромид 3-Цианобензилбромид 5-Бромметил-фуран-2-карбоновой кислоты этиловый эфир 5-Бромметил-фуран-2-карбоновой кислоты этиловый эфир 3-Бромметилбензамид
Примеры 417-423.
Примеры 417-423 синтезировали по методике 8123.
Пример № 417 418 419 420 421 422 423 Группа К 1- Аминонафтален 2- Цианоанилин 3- Цианоанилин 2- Фторанилин 3- Фторанилин 4- Фторанилин 3-Метоксианилин
Примеры 424-436.
Примеры 424-436 синтезировали по методике 8124.
Пример № Группа К
424 425 426 427 428 429 430 431 432 433 434 435 436 2- (Аминометил)пиридин 3- Фторбензиламин Бензиламин Аллиламин Фенэтиламин Гистамин 4- Фторбензиламин 3- Метоксифенэтиламин 4- Аминобензиламин 2-Аминобензиламин 2-[1,3] Диоксаан-5-ил-этиламин Пиперониламин Анилин
- 90 007852
Примеры 437-440.
Примеры 437-440 синтезировали по методике 8125.
Пример № Группа К
437 438 439 440 Изоамиламин 4-(Аминометил)пиридин 2-[1,3]Диоксан-5-ил-этиламин анилин
Пример №
441
442
443
Группа К о-Толуидин Аллиламин Пропиламин
Пример № Группа К
444 445 446 447 448 449 450 451 452 453 454 455 456 457 458 459 Пропиламин 3- ( Аминометил)пиридин 4- (Аминометил)пиридин 2- Метилбензиламин 3- Метилбензиламин 4- Метилбензиламин (8)-(-)-α-Метилбензиламин 2-(Аминометил)пиридин 2- Фторбензиламин 3- Фторбензиламин 4- Фторбензиламин 3- Хлорбензиламин 4- Хлорбензиламин 4-Метоксибензиламин 1-Нафталенметиламин Бензиламин
В табл. 3 представлены данные биологического анализа для соединений, полученных по методикам, описанным выше. Данные представлены для двух форматов анализа: поступательный анализ ЬТАЛСАМ (РРТТ) и анализ на захват антитела РЬМ2 при взаимодействии ЬРА/1САМ (РЬМ2).
Таблица 3
Данные анализов РРТТ и РЬМ2 для соединений из примеров
Пример № РРРР (мкМ) РЬМ2 (мкМ)
1 0,149 0,028
2 0,035
3 0,069
4 0,038
5 0,013
6 0,045
7 0,004
8 0,021
9 0,033
10 0,003
И 0,065
12 0,029
13 0,064
14 0,024
15 0,010
16 0,011
1*7 X / Л М£. ν,ν^ν
18 0,010
19 0,037
20 0,029
21 0,023
22 0,019
23 0,072
24 0,012
25 0,019
л ΖΟ 0,021
27 0,008
28 0,092
29 0,055
30 0,064
31 0,014
32 0,047
33 0,023
34 0,078
- 92 007852
0,069
0,013
0,038
0,013
0,021
0,076
0,098
0,046
0,098
0,095
0,059
0,066
0,070
0,046
0,038
0,052
0,056
0,050
0,094
0,014
0,047
0,052
0,036
0,080
0,066
0,078
0,052
0,046
0,062
0,055
0,044
0,072
0,046
0,071
0,084
0,088
0,040
0,063
0,063
0,087
0,011
0,010
0,017
0,031
0,033
0,005
0,008
0,004
- 93 007852
83 0,006
84 0,001
85 0,003
86 0,012
87 0,009
88 0,005
89 0,004
90 0,021
91 0,004
92 0,066
93 0,024
94 0,002
95 0,006
96 0,070
97 0,042
98 0,033
99 0,046
100 0,031
101 0,022
102 0,025
103 0,044
104 0,044
105 0,004
106 0,026
107 0,087
108 0,021
109 0,026
110 0,052
111 0,007
112 0,036
113 0,086
114 0,018
115 0,073
116 0,026
117 0,045
118 0,031
119 0,077
120 0,064
121 0,055
122 0,050
123 0,054
124 0,035
125 0,058
126 0,033
127 0,017
128 0,035
129 0,029
130 0,036
- 94 007852
131 0,025
132 0,057
133 0,020
134 0,053
135 0,021
136 0,029
137 0,039
138 0,071
139 0,064
140 0,023
141 0,068
142 0,074
143 0,031
144 0,093
145 0,004
146 0,004
147 0,004
148 0,004
149 0,004
150 0,004
151 0,004
152 0,004
153 0,003
154 0,003
155 0,006
156 0,009
157 0,007
158 0,004
159 0,017
160 0,004
161 0,004
162 0,004
163 0,005
164 0,012
165 0,015
166 0,018
167 0,017
168 0,012
169 0,006
170 0,007
171 0,011
172 0,037
173 0,010
174 0,004
175 0,005
176 0,011
177 0,006
178 0,011
- 95 007852
179 0,009
180 0,011
181 0,016
182 0,011
183 0,013
184 0,016
185 0,016
186 0,015
187 0,017
188 0,018
189 0,018
190 0,016
191 0,016
192 0,029
193 0,014
194 0,012
195 0,016
196 0,019
197 0,017
198 0,019
199 0,029
200 0,018
201 0,013
202 0,023
203 0,037
204 0,025
205 0,082
206 0,023
207 0,062
208 0,021
209 0,053
210 0,022
211 0,019
212 0,016
213 0,035
214 0,028
215 0,027
216 0,022
217 0,031
218 0,018
219 0,018
220 0,016
221 0,042
222 0,021
223 0,035
224 0,026
225 0,029
226 0,025
- 96 007852
227 0,034
228 0,018
229 0,026
230 0,016
231 0,003
232 0,005
233 0,001
234 0,044
235 0,002
236 η плл ν,νντ
237 0,003
238 0,099
239 0,180 0,053
240 0,085
241 0,053
242 0,054
243 0,082
244 0,077 0,078
245 0,058 0,164
246 0,067 0,059
247 0,022 0,034
248 0,027 0,026
249 0,030
250 0,034
251 0,038
252 0,060
253 0,014
254 0,094 0,036
255 0,042
256 0,076
257 0,042
258 0,038
259 0,049
260 0,071
261 0,052
262 0,075
263 0,066
264 0,093
А» V·/ Л ГУЛУ и,и*ю
266 0,046
267 0,021
268 0,019
269 0,046
270 0,055
271 0,086
272 0,080
273 0,016
274 0,006
- 97 007852
275 0,006
276 0,012
277 0,003
278 0,002
279 0,004
280 0,007
281 0,004
282 0,024
283 0,092
284 0,093 0,079
285 0,064
286 0,014
287 0043
288 0,023
289 0,074
290 0,009
291 0,007
292 0,015
293 0,083
294 0,100
295 0,047
296 0,017
297 0,028
298 0,009
299 0,016
300 0,074
301 0,025
302 0,023
303 0,005
304 0,003
305 0,015
306 0,004
307 0,004
308 0,061
309 0,057
310 0,082
311 0,079
312 0,089
313 0,069
314 0,028
315 0,037
316 0,030
317 0,055
318 0,031
319 0,023
320 0,007
321 0,020
322 0,011
- 98 007852
323 0,036
324 0,042
325 0,056
326 0,042
327 0,070
328 0,074
329 0,033
330 0,009
331 0,027
332 (ΙΜΊ Ό*'·' *
333 0,090
334 0,072
335 0,096
336 0,066
337 0,079
338 0,060
339 0,020
340 0,014 0,006
341 0,031
342 0,057 0,004
343 0,030
344 0,183 0,053
345 0,019 0,004
346 0,071
347 0,044 0,004
348 0,090 0,023
349 0,042
350 0,027 0,005
351 0,067 0,032
352 0,042
353 0,074
354 0,008
355 0,100 0,094
356 0,068
357 0,057 0,023
358 0,230 0,032
359 0,016
360 0,018
361 0,018
362 0,005
363 0,014 0,010
364 0,087 0,035
365 0,024
366 0,062
367 0,020
368 0,043
369 0,019
370 0,055 0,025
- 99 007852
371 0,055 0,037
372 0,013
373 0,021
374 0,021
375 0,040
376 0,078 0,061
377 0,016 0,051
378 0,007
379 0,010
380 0 пол
381 0,035
382 0,012
383 0,060
384 0,046 0,018
385 0,070 0,048
386 0,030
387 0,098 0,043
388 0,050
389 0,054 0,010
390 0,079
391 0,007
392 0,025
393 0,003
394 0,012
395 0,006
396 0,062
397 0,005
398 0,015
399 0,002
400 0,007
401 0,002
402 0,004
403 0,009
404 0,002
405 0,001
406 0,022
407 0,045
408 0,071
409 0,054
410 0,065
411 0,055
412 0,074
413 0,051 0,045
414 0,087
415 0,059
416 0,036
417 0,086
418 0,056
- 100 007852
0,079
0,015
419
420
421
422
0,056
0,083
423
424
425
426
427
428
429
430
431
432
433
434
435
436
437
438
439
440
441
442
443
444
445
446
447
448
449
450
451
452
453
454
455
456
457
458
459
0,032
0,038
0,082
0,057
0,044
0,029
0,094
0,070
0,070
0,070
0,046
0,050
0,074
0,011
0,083 0,034
0,082
0,089
0,068
0,015
0,006
0,010
0,041
0,029
0,020
0,085
0,094
0,071
0,061
0,030
0,040
0,056
0,046
0,071
0,064
0,036
0,083
0,058
1. Соединение общей формулы

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    - 101 007852 где Ό выбран из группы где Υ1 выбран из группы, включающей СН и С-ОН;
    Υ2, Υ3, Υ4 и Υ5 выбраны из группы, включающей СН;
    Ζ1 выбран из группы, включающей ΝΚη, О и 8;
    и=0-3;
    Ьх выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
    С2-С5-алкилен,
    Сз-Сб-циклоалкилен,
    С0-Сз-алкилен-1\1Кп-(С=0)-Со-Сз-алкилен,
    С0-Сз-алкилен-(С=0)-1\1Кп-Со-Сз-алкилен,
    Со-Сз-алкилен-О-Со-Сз-алкилен,
    Со-Сз-алкилен-ЬПГ-Со-Сз-алкилен, Со-Сз-алкплен-(С=0)-Со-Сз-алкилен, Со-Сз-алкилен-СК1=СК2-Со-Сз-алкилен,
    Со-Сз-алкилен-С^С-Со-Сз-алкилен, и
    Со-Сз-алкилен-гет-Со-Сз-алкилен, при этом заместители выбираются из группы, включающей от 1 до 3 радикалов К1, К2 и К3; Ь¥ выбран из группы, включающей замещенные или незамещенные
    С0-С2-алкилен,
    С0-С2-алкилен-1\1Кп-(С=0)-Со-С2-алкилен, С0-С2-алкилен-(С=О)-МКп-С0-С2-алкилен, Со-С2-алкнлен-0-Со-С2-алкилен,
    Со-С2-алкилен-1\1Кп-Со-С2-алкилен, Со-С2-алкплен-(С=0)-Со-С2-алкилен, при этом заместители выбраны из группы, включающей от 1 до 3 радикалов К1, К2 и К3;
    К1, К2 и К3 выбраны из группы, включающей
    С1-С8-алкил, водород, гидроксигруппу, феноксигруппу, фенил и
    Кс выбран из группы, состоящей из водорода и замещенного или незамещенного гета, при этом заместители в гете представляют собой от 1 до 3 радикалов К4;
    гет является моно-, би- или трициклическим 5-, 6-, 7-, 9- или 10-звенным насыщенным, ненасыщенным или ароматическим кольцом, имеющим от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу;
    Кр и К4 независимо выбраны из группы, включающей
    ОН,
    ΟΝ, νο2, галоген,
    ОКП,
    8КП,
    8ОКП,
    СЕз,
    Кс,
    ΝΚηΚη,
    ΝΚη0(=Ο)-Ο-Κη,
    ΝΚη0(=Ο)-Κη,
    С0-С6-алкил-8О2-Кп,
    Со-С6-алкил-802-МКпКп',
    С(=О)-КП,
    О-С(=О)-КП,
    С(=О)-О-КП,
    -102007852
    С^-ЖТ';
    Вб представляет собой химическую связь, когда гет представляет собой двухвалентную соединительную группу;
    Вп и Вп независимо выбраны из группы, включающей водород, гидроксигруппу,
    С1-С6-алкил, галоген-С1-С6-алкил,
    С1-С6-алкил-гет, гет-С1-С6-алкил,
    С6-С12-арил и гет;
    ВΖ представляет собой гидроксигруппу;
    Р отсутствует или представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной из
    -М(Вп)-,
    -Ν^^^Ο)-,
    -Ν^^^Ο^Ο-,
    -МВУС^ЖВ11)-,
    -Ν^-δΟζ-, <(=Ο)-,
    -Ο^^Ο^Ν^)-, ^(^Ο^Ν^)-;
    У отсутствует или представляет собой бивалентную группу, возможно, замещенную, выбранную из группы, включающей
    С1-С11-алкилена,
    С2-С6-алкенилена,
    С0-С6-алкил-гета, при этом заместители в любом алкиле представляют собой от 1 до 3 радикалов Ва, а заместители в любом ариле или гете представляют собой от 1 до 3 радикалов Вб;
    Ψ представляет собой С0-С3-алкил, замещенный группой, выбранной группы, включающей
    Ва,
    NН-С(=Ο)-ВС,
    С^-Вк С(=Ο)-NВиВи', и ВС, обладающее способностью модулировать адгезию между внутриклеточными адгезионными молекулами и лейкоцитарным интегриновым семейством рецепторов, а также его фармацевтически приемлемые соли;
    Ва представляет собой аминогруппу.
    2. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей
    - 103 007852
    3. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей
    - 104 007852
    Вс где гет выбран из группы, включающей
    Накопление лимфоцитов
    Перекатывание Адгезия Активация и кровоизлияние
    0 00 1САМ 30^ Ί - Эпителии, эндотелии... 1 1 1 1 1 1 . Э 1 1 1 . 1 I 1 1 1 I ] 1 . 1 . 1 1 1 1 1 1 1 1 и ——------------п )Г-|П Воспаление, вызванное цитокинами \ _____ о о ° Я I ® А ------------------------------------------------------------X ЗЕ-------------------*Х----------------------------------------------------------------------------
EA200000985A 1998-03-27 1999-03-24 Соединения для лечения расстройств, опосредованных рецепторами адгезии cd11/cd18 EA007852B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US7973298P 1998-03-27 1998-03-27
PCT/US1999/006410 WO1999049856A2 (en) 1998-03-27 1999-03-24 Antagonists for treatment of cd11/cd18 adhesion receptor mediated disorders

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200000985A1 EA200000985A1 (ru) 2001-06-25
EA007852B1 true EA007852B1 (ru) 2007-02-27

Family

ID=22152446

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200000985A EA007852B1 (ru) 1998-03-27 1999-03-24 Соединения для лечения расстройств, опосредованных рецепторами адгезии cd11/cd18

Country Status (19)

Country Link
US (1) US20050203135A1 (ru)
EP (1) EP1063982B1 (ru)
JP (2) JP2002509881A (ru)
KR (1) KR100596109B1 (ru)
CN (1) CN1191063C (ru)
AT (1) ATE353640T1 (ru)
AU (1) AU764524B2 (ru)
BR (1) BR9909418A (ru)
CA (1) CA2325986A1 (ru)
DE (1) DE69935133T2 (ru)
EA (1) EA007852B1 (ru)
HU (1) HUP0101587A3 (ru)
IL (2) IL138297A0 (ru)
NO (1) NO20004800L (ru)
NZ (1) NZ506779A (ru)
PL (1) PL343555A1 (ru)
UA (1) UA74531C2 (ru)
WO (1) WO1999049856A2 (ru)
ZA (1) ZA200004653B (ru)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6331640B1 (en) * 1998-10-13 2001-12-18 Hoffmann-La Roche Inc. Diaminopropionic acid derivatives
US6878700B1 (en) 1998-12-29 2005-04-12 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds
US6867203B2 (en) 1998-12-29 2005-03-15 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds
US6110922A (en) 1998-12-29 2000-08-29 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory and immune-suppressive compounds
WO2001006984A2 (en) 1999-07-21 2001-02-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
WO2001007052A1 (en) 1999-07-21 2001-02-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
US6492408B1 (en) 1999-07-21 2002-12-10 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
WO2001007044A1 (en) 1999-07-21 2001-02-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Small molecules useful in the treatment of inflammatory disease
PL354063A1 (en) * 1999-08-13 2003-12-15 Biogen, Inc.Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
US6515124B2 (en) 2000-02-09 2003-02-04 Hoffman-La Roche Inc. Dehydroamino acids
RU2276133C2 (ru) * 2000-03-27 2006-05-10 Дзе Скриппс Рисерч Инститьют Соединения, фармацевтическая композиция и способ ингибирования опухолевого роста (варианты)
US6521619B2 (en) 2000-06-29 2003-02-18 Icos Corporation Aryl phenylcyclopropyl sulfide derivatives and their use as cell adhesion inhibiting anti-inflammatory and immune suppressive agents
AU6871801A (en) 2000-06-29 2002-01-14 Abbott Lab Aryl phenylheterocyclyl sulfide derivatives and their use as cell adhesion-inhibiting anti-inflammatory and immune-suppressive agents
JP2004517928A (ja) 2000-11-28 2004-06-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｌｆａ−１アンタゴニスト化合物
EP1546089A2 (en) * 2002-08-09 2005-06-29 TransTech Pharma Inc. Aryl and heteroaryl compounds and methods to modulate coagulation
WO2004032861A2 (en) 2002-10-11 2004-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Hexahydro-benzimidazolone compounds useful as anti-inflammatory agents
CA2520763A1 (en) 2003-04-03 2004-10-21 The Regents Of The University Of California Improved inhibitors for the soluble epoxide hydrolase
US7208601B2 (en) * 2003-08-08 2007-04-24 Mjalli Adnan M M Aryl and heteroaryl compounds, compositions, and methods of use
WO2005014532A1 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Transtech Pharma, Inc. Aryl and heteroaryl compounds, compositions and methods of use
US7920906B2 (en) 2005-03-10 2011-04-05 Dexcom, Inc. System and methods for processing analyte sensor data for sensor calibration
US7199125B2 (en) 2003-10-02 2007-04-03 Bristol-Myers Squibb Company Spiro-cyclic compounds useful as anti-inflammatory agents
AU2004287875B2 (en) 2003-11-05 2011-06-02 Bausch + Lomb Ireland Limited Modulators of cellular adhesion
US9247900B2 (en) 2004-07-13 2016-02-02 Dexcom, Inc. Analyte sensor
CA2559665A1 (en) 2004-03-16 2005-09-29 The Regents Of The University Of California Reducing nephropathy with inhibitors of soluble epoxide hydrolase and epoxyeicosanoids
US7946984B2 (en) 2004-07-13 2011-05-24 Dexcom, Inc. Transcutaneous analyte sensor
US20060270922A1 (en) 2004-07-13 2006-11-30 Brauker James H Analyte sensor
US7375237B2 (en) 2004-08-18 2008-05-20 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolizine compounds useful as anti-inflammatory agents
TW200616634A (en) 2004-10-01 2006-06-01 Bristol Myers Squibb Co Crystalline forms and process for preparing spiro-hydantoin compounds
NZ554555A (en) 2004-10-20 2011-09-30 Univ California Cyclohexyl-urea derivatives as improved inhibitors for the soluble epoxide hydrolase
US7186727B2 (en) 2004-12-14 2007-03-06 Bristol-Myers Squibb Company Pyridyl-substituted spiro-hydantoin compounds and use thereof
CN102617557A (zh) 2005-05-17 2012-08-01 萨可德生物科学公司 治疗眼病的组合物和方法
EP2020992A2 (en) * 2006-04-24 2009-02-11 The CBR Institute for Biomedical Research, Inc. Method of producing immunoliposomes and compositions thereof
US20100008937A1 (en) * 2006-04-25 2010-01-14 Immune Disease Institute, Inc. Targeted delivery to leukocytes using non-protein carriers
CA2702984C (en) 2007-10-19 2017-04-11 Sarcode Corporation Compositions and methods for treatment of diabetic retinopathy
WO2009070485A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh DERIVATIVES OF 6,7-DIHYDRO-5H-IMIDAZO[1,2-α]IMIDAZOLE-3- CARBOXYLIC ACID AMIDES
JP2011521896A (ja) 2008-04-15 2011-07-28 サーコード コーポレイション 免疫関連障害に対する局部治療に使用するための局所ｌｆａ−１アンタゴニスト
US20090258069A1 (en) * 2008-04-15 2009-10-15 John Burnier Delivery of LFA-1 antagonists to the gastrointestinal system
US8080562B2 (en) 2008-04-15 2011-12-20 Sarcode Bioscience Inc. Crystalline pharmaceutical and methods of preparation and use thereof
JP5785491B2 (ja) 2008-05-05 2015-09-30 サノフイ アシルアミノ置換縮合シクロペンタンカルボン酸誘導体及び医薬としてのその使用
MX2011004006A (es) 2008-11-19 2011-05-19 Pola Chem Ind Inc Agentes antiarrugas.
JP5384733B2 (ja) 2009-06-02 2014-01-08 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ６，７−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］イミダゾール−３−カルボン酸アミドの誘導体
WO2010141273A1 (en) 2009-06-02 2010-12-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh DERIVATIVES OF 6,7-DIHYDRO-5H-IMIDAZO[1,2-a]IMIDAZOLE-3-CARBOXYLIC ACID AMIDES
US8378105B2 (en) 2009-10-21 2013-02-19 Sarcode Bioscience Inc. Crystalline pharmaceutical and methods of preparation and use thereof
AR079022A1 (es) 2009-11-02 2011-12-21 Sanofi Aventis Derivados de acido carboxilico ciclico sustituidos con acilamino, su uso como productos farmaceuticos, composicion farmaceutica y metodo de preparacion
US8404859B2 (en) 2011-03-16 2013-03-26 Hoffmann-La Roche Inc. Thiazole and thiophene compounds
CN103420917B (zh) * 2012-05-18 2015-08-19 国药一心制药有限公司 含稠环结构的苯甲酰胺类化合物及其作为抗肿瘤药物应用
IN2015DN00847A (ru) 2012-07-25 2015-06-12 Sarcode Bioscience Inc
FR3019901B1 (fr) * 2014-04-09 2020-10-30 Bio Rad Innovations Marqueur de controle pour la mise en oeuvre de procedes d'analyse sur spots
WO2017102014A1 (en) * 2015-12-17 2017-06-22 Universite D'aix-Marseille Propenamide thiophene derivatives as flavivirus inhibitors and their use
CN107987105B (zh) * 2017-11-24 2019-10-01 无锡微色谱生物科技有限公司 一种可用于皮肤敷料的h2s给体化合物、海绵敷料和制备方法
AU2020401188A1 (en) 2019-12-10 2022-06-23 Shanghai Chempartner Co., Ltd. Alpha-5 beta-1 inhibitors
CA3181786A1 (en) * 2020-05-01 2021-11-04 The Regents Of The University Of California Inhibitors of alpha 2 beta 1 integrin and methods of use thereof
WO2023204330A1 (ko) * 2022-04-22 2023-10-26 트윈피그바이오랩(주) Itgb2 매개 약물 전달시스템

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0325343A2 (en) * 1988-01-19 1989-07-26 The Trustees Of Princeton University L-glutamic acid derivatives
EP0452660A2 (en) * 1990-04-18 1991-10-23 The Trustees Of Princeton University L-glutamic acid derivatives
EP0530537A1 (en) * 1991-08-12 1993-03-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Condensed pyrimidine derivatives, their production and use as antitumor agents
JPH05306226A (ja) * 1992-04-27 1993-11-19 Takeda Chem Ind Ltd 慢性免疫疾患治療剤
WO1994013295A1 (en) * 1992-12-16 1994-06-23 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Antiproliferative substituted 5-thiapyrimidinone and 5-selenopyrimidinone compounds
WO1997008133A1 (en) * 1995-08-22 1997-03-06 Japan Tobacco Inc. Amide compounds and use of the same
WO1999010312A1 (en) * 1997-08-22 1999-03-04 F. Hoffmann-La Roche Ag N-alkanoylphenylalanine derivatives
WO1999026923A1 (en) * 1997-11-20 1999-06-03 Merck & Co., Inc. Para-aminomethylaryl carboxamide derivatives
WO1999036393A1 (en) * 1998-01-20 1999-07-22 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. INHIBITORS OF α4 MEDIATED CELL ADHESION

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1182518A (en) * 1968-11-01 1970-02-25 Parke Davis & Co Novel Dibasic Acid Compounds and Means for the Production Thereof
US4314988A (en) * 1979-10-31 1982-02-09 Baker Instruments Corp. Folic acid derivatives and process for preparation

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0325343A2 (en) * 1988-01-19 1989-07-26 The Trustees Of Princeton University L-glutamic acid derivatives
EP0452660A2 (en) * 1990-04-18 1991-10-23 The Trustees Of Princeton University L-glutamic acid derivatives
EP0530537A1 (en) * 1991-08-12 1993-03-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Condensed pyrimidine derivatives, their production and use as antitumor agents
JPH05306226A (ja) * 1992-04-27 1993-11-19 Takeda Chem Ind Ltd 慢性免疫疾患治療剤
WO1994013295A1 (en) * 1992-12-16 1994-06-23 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Antiproliferative substituted 5-thiapyrimidinone and 5-selenopyrimidinone compounds
WO1997008133A1 (en) * 1995-08-22 1997-03-06 Japan Tobacco Inc. Amide compounds and use of the same
WO1999010312A1 (en) * 1997-08-22 1999-03-04 F. Hoffmann-La Roche Ag N-alkanoylphenylalanine derivatives
WO1999026923A1 (en) * 1997-11-20 1999-06-03 Merck & Co., Inc. Para-aminomethylaryl carboxamide derivatives
WO1999036393A1 (en) * 1998-01-20 1999-07-22 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. INHIBITORS OF α4 MEDIATED CELL ADHESION

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI, Section Ch, Week 9351, Derwent Publications Ltd., London, GB; Class B02, AN 93-408840, XP002115880, & JP 05 306226 A (TAKEDA CHEM IND LTD.), 19 November 1993 (1993-11-19), abstract, & CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 120, no. 14, 4 April 1994 (1994-04-04), Columbus, Ohio, US; abstract no. 173481, abstract *

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0101587A3 (en) 2003-03-28
IL138297A (en) 2006-06-11
CA2325986A1 (en) 1999-10-07
DE69935133D1 (de) 2007-03-29
UA74531C2 (en) 2006-01-16
AU3113799A (en) 1999-10-18
KR20010034708A (ko) 2001-04-25
JP2007224037A (ja) 2007-09-06
WO1999049856A3 (en) 1999-11-18
BR9909418A (pt) 2001-09-25
IL138297A0 (en) 2001-10-31
NO20004800L (no) 2000-11-24
PL343555A1 (en) 2001-08-27
KR100596109B1 (ko) 2006-07-05
US20050203135A1 (en) 2005-09-15
DE69935133T2 (de) 2007-11-22
CN1295471A (zh) 2001-05-16
EP1063982B1 (en) 2007-02-14
CN1191063C (zh) 2005-03-02
EP1063982A2 (en) 2001-01-03
HUP0101587A2 (hu) 2001-08-28
NZ506779A (en) 2003-08-29
NO20004800D0 (no) 2000-09-26
ZA200004653B (en) 2002-02-27
JP2002509881A (ja) 2002-04-02
EA200000985A1 (ru) 2001-06-25
WO1999049856A2 (en) 1999-10-07
AU764524B2 (en) 2003-08-21
ATE353640T1 (de) 2007-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA007852B1 (ru) Соединения для лечения расстройств, опосредованных рецепторами адгезии cd11/cd18
US6872735B2 (en) LFA-1 antagonist compounds
JP3068200B2 (ja) グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤としての置換ｎ−（インドール−２−カルボニル−）アミドおよび誘導体
RU2194528C2 (ru) Способы и композиции, используемые для ингибирования ангиогенеза
RU2143424C1 (ru) Замещенные n-(индол-2-карбонил)-глицинамиды и их производные, способы лечения и фармкомпозиция
AU2002248142A1 (en) LFA-1 antagonist compounds
JP2002533322A (ja) ヒドロキサム酸スルホンアミド
JP4255285B2 (ja) インテグリン発現抑制を介した血管新生抑制剤の効果を検定する方法
EP1754705A2 (en) Antagonists for treatment of CD11/CD18 adhesion receptor mediated disorders
CZ301893B6 (cs) Imidazolidinový derivát, tento imidazolidinový derivát pro použití jako lécivo a farmaceutický prípravek obsahující tento imidazolidinový derivát jako úcinnou látku
MXPA00009117A (en) Antagonists for treatment of cd11/cd18 adhesion receptor mediated disorders
EP1613268A2 (en) Methods for inhibition of angiogenesis
KR100658962B1 (ko) 스피로이미다졸리딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 제제
US20030176334A1 (en) Methods and compositions useful for inhibition of angiogenesis
MXPA00005025A (en) Combination of an aldose reductase inhibitor and a glycogen phosphorylase inhibitor

Legal Events

Date Code Title Description
FA9A Withdrawal of a eurasian application
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM