[go: up one dir, main page]

EA032434B1 - Применение изохинолонов для получения лекарственных средств, изохинолоны и способ их синтеза - Google Patents

Применение изохинолонов для получения лекарственных средств, изохинолоны и способ их синтеза Download PDF

Info

Publication number
EA032434B1
EA032434B1 EA201290843A EA201290843A EA032434B1 EA 032434 B1 EA032434 B1 EA 032434B1 EA 201290843 A EA201290843 A EA 201290843A EA 201290843 A EA201290843 A EA 201290843A EA 032434 B1 EA032434 B1 EA 032434B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
alkyl
compound
substituted
group
cycloalkyl
Prior art date
Application number
EA201290843A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290843A1 (ru
Inventor
Андрей Попов
Орели Жюэм
Жан-Клод Флоран
Ши-Юнг Н'Гуйен
Original Assignee
Юниверсите Гренобль Альп
Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьянтифик
Энститю Кюри
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юниверсите Гренобль Альп, Сантр Насьональ Де Ля Решерш Сьянтифик, Энститю Кюри filed Critical Юниверсите Гренобль Альп
Publication of EA201290843A1 publication Critical patent/EA201290843A1/ru
Publication of EA032434B1 publication Critical patent/EA032434B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/24—Oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4704—2-Quinolinones, e.g. carbostyril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A61K31/4725—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/695—Silicon compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
    • C07D215/233—Oxygen atoms attached in position 2 or 4 only one oxygen atom which is attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/10—Compounds having one or more C—Si linkages containing nitrogen having a Si-N linkage

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к применению изохинолонов для получения лекарственных средств, в том числе, новых изохинолонов. Изобретение относится также к этим новым изохинолонам, а также к способу их синтеза. В частности, изобретение относится к производным изохинолонов, используемым в лечении патологического ангиогенеза, в частности рака.

Description

Изобретение относится к применению изохинолонов для получения лекарственных средств, в том числе, новых изохинолонов. Изобретение относится также к этим новым изохинолонам, а также к способу их синтеза. В частности, изобретение относится к производным изохинолонов, используемым в лечении патологического ангиогенеза, в частности рака.
(I)
Изобретение относится к применению изохинолонов для получения лекарственных средств, в том числе новых изохинолонов.
Изобретение относится также к этим новым изохинолонам, а также к способу их синтеза.
В частности, изобретение относится к производным изохинолонов, используемым для лечения патологического ангиогенеза, более конкретно, рака.
Химиотерапия вместе с хирургией и лучевой терапией остается одним из наиболее применяемых подходов к лечению рака. Хотя для клинического использования были одобрены десятки противораковых соединений, сохраняется постоянная потребность в новых лекарственных средствах, более избирательных, более эффективных и менее токсичных.
Лекарственных средств для химиотерапии много, и они различаются как по механизму их действия, так и по их клеточной мишени. Большинство этих лекарственных средств относится к следующим категориям: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды, ингибиторы топоизомераз, антимитотические и противоопухолевые антибиотики. Большинство антимитотических соединений взаимодействует с микротрубочками цитоскелета. Эти соединения действуют напрямую на тубулин и/или на микротрубочки, либо деполимеризуя микротрубочки, как это делают винбластин и винкристин, либо стабилизируя их, как это делают таксол и его производные Иогбап МА апб ХУПкоп Б., №11 Кеу Сапсег 2004, ν4(4): рр. 253-65). Эти деполимеризующие или стабилизирующие соединения действуют в основном при митозе, и их антипролиферативная активность обязана подавлению физиологической динамики микротрубочек (1отбап МА е! а1., Сапсег Кек. 1991, ν51(8): рр. 2212-22; Иетту ХУВ, ХУПкоп Б. апб 1отбап МА, Вюс11епик!гу. 1995; 34(7): рр. 2203-11). Ингибирование динамики микротрубочек приводит к образованию аберрантного веретена, что сохраняет активной митотическую контрольную точку и вызывает задержку клеток в метафазе. Длительная остановка митоза запускает митотическую катастрофу и, таким образом, вызывает смерть клетки Иогбап МА апб ХУПкоп Б, №11 Кеу Сапсег. 2004 Арг; ν4(4): рр 253-65). Этот механизм действия составляет основу терапевтического применения этих соединений, так как раковые клетки при быстром делении особенно чувствительны к нарушениям динамики микротрубочек и, таким образом, становятся предпочтительными мишенями по сравнению с большинством соматических клеток организма.
Наиболее известными стабилизирующими соединениями являются таксол и его производные, они широко используются для лечения рака груди или яичников. К соединениям, дестабилизирующим микротрубочки, относятся винка-алкалоиды, такие как винбластин и винкристин, используемые предпочтительно при гематологических опухолях, а также при некоторых солидных опухолях, таких как рак легкого и яичек.
Аналогично, продукты с низкой молекулярной массой, такие как 2-фенил-4-хинолоны (Бее е! а1., 1. Меб. СБет., 1994, ν37: рр. 1126-35 и рр. 3400-07; 2009, 52, 4883-4891) или 1,2,3,4-тетрагидро-2-фенил-4хинолоны (Бее е! а1., 1. Меб. СБет., 1998, ν41, рр. 1155-62) также продемонстрировали способность ингибирования полимеризации тубулина (антитубулиновые соединения).
Однако, хотя антитубулиновые соединения эффективны для большого числа видов рака и широко используются в клинике, периферическая нейротоксичность и явления резистентности, развивающиеся у млекопитающих, в частности, у человека, демонстрируют необходимость поиска новых антимитотических агентов, действующих на новые мишени.
Под млекопитающим следует понимать, в частности, домашних животных.
Другой большой класс противораковых лекарственных средств представлен ингибиторами ферментов, такими как метотрексат (ингибитор дигидрофолатредуктазы: ИНБК), фторурацил (ингибитор тимидилатсинтазы), С1ееуес и ВМ8-354825 (ингибиторы активности тирозинкиназы Вст-АЫ), эрлонитиб (ингибитор рецептора эпидермического фактора роста: БОБК), РАБАС1-1040 и ΡΌ0325901 (ингибиторы протеинкиназы, активированной митогенами: МАРКК), РАБА (ингибитор аспартат-транскарбамоилазы), флавопиридол (Каиг О. е! а1., 1 №ι!1 Сапсег 1пк!. 1992, ν84(22): рр. 1736-40) и К-росковитин (Меует Б. е! а1., Еиг 1 ВюсБет. 1997, ν243(1-2): рр. 527-36), циклинзависимые ингибиторы киназы.
Что касается ингибиторов ферментов, предварительная обработка ш νί!ΐΌ бензопироновыми производными - ингибиторами поли(АДФ-рибоза)полимеразы (рАИРКТ) и, в частности, соединением 5-йодо6-амино-1,2-бензопирон (1№Н2ВР), коровьих эндотелиальных клеток, трансформированных посредством Е-гак, и клеток человеческой аденокарциномы простаты, ИШ45, продемонстрировала активность ингибирования онкогенности (этих предварительно обработанных клеток) в модели ксенотрансплантации на голых мышах.
Другие соединения-ингибиторы рАИРКТ, типа изохинолинона, описаны в международной заявке ХУО 98/51307 (Ос!атег) для лечения воспаления и воспалительных заболеваний, артрита и сердечных приступов.
Фосфорилирование белков определяется переносом фосфата высокой энергии от молекулы АТФ (аденозинтрифосфат), на белок посредством протеинкиназы. Его удаление протеинфосфатазой называется дефосфорилированием. Более 98% фосфата, присоединенного к белкам, связано посредством серина или треонина (Ветпб!, Ргодгекк ш Се11 Сус1е Кек. 2003, (5): рр 497-510).
Обратимое фосфорилирование белков представляет собой наиболее важный процесс для быстрой
- 1 032434 регуляции активности белков в эукариотных клетках. Оно вовлечено в регуляцию (активация/инактивация) различных клеточных активностей, как, например, экспрессия генов, клеточный цикл и клеточная дифференцировка.
Циклы фосфорилирования/дефосфорилирования обеспечиваются большим числом киназ (518) и фосфатаз (более 130) (Άίοπδο е! а1., Се11. 2004 (117): рр. 699-711). К последним относится семейство РРР (фосфопротеинфосфатаза), содержащее: РР1, РР2А, РР2В, РР4, РР5, РР6 и РР7. И в этом семействе две протеинфосфатазы, РР1 и РР2А, ответственны за более чем 90% активности внутриклеточной серин/треонинфосфатазы (81е\гаг1 е! а1., Вюогд. Меб. СЬет.. 2007 (15): рр7301-10). РР1 и РР2А являются ферментами, образованными из каталитической субъединицы, связанной с одной или несколькими регулирующими субъединицами. Эти регулирующие части регулируют каталитическую часть и определяют внутриклеточную локализацию голофермента и его специфичность. Таким образом, каталитические субъединицы могут действовать на широкой группе субстратов.
Каталитический домен протеинфосфатазы 1 (РР1С) существует в трех изоформах: альфа, бета (называемая также дельта) и гамма. При митозе они находятся в митотическом веретене, точно на уровне центросомы, кинетохоров, микротрубочек и хромосом (Аибгеаккеи РЕ е! а1., 1 Се11 Вю1. 1998, 141(5): рр. 1207-15; Тг1ик1е-Ми1сайу Ь апб Ьатоиб ΑΙ, Сигг Орт Се11 Βίο1. 2006, (6): рр 623-31).
РР1 участвует, посредством регулирующих субъединиц, контролирующих ее субклеточную локализацию, во многих физиологических процессах, таких как синтез белков, деление клеток, метаболизм гликогена, апоптоз, перенос кальция или мышечное сокращение.
В многочисленных статьях было показано, что РР1 участвует в регулировании клеточного цикла:
(ί) РР1 блокирует вход в фазу 8, останавливая клетки в 61 (Ветб! N. е! а1., Сигг Βίο1 1997, ν7: рр. 375-86).
(ίί) Активность РР1 необходима для входа в фазу М (Маг^Нк 88 е! а1., ЕМВО 1. 2003, 22(21): рр. 5734-45).
(ΐϊϊ) РР1 необходима для дефосфорилирования гистона Н3 и препятствует активности киназы Аигога В (6ο!ο Н. е! а1., 6еиек Се11к. 2002, 7(1): рр 11-7).
(ίν) РР1 вовлечена в когезию центриолей, образующих центросому (Мега1б1 Р., Νί§§ ЕА, 1 Се11 8с1. 2001, 114 (Р! 20): рр. 3749-57).
(ν) Активность РР1 участвует в контрольной точке, связанной с повреждением ДНК (Таид X е! а1., 2008, Мο1 Се11 Вю1, 28 (8): рр. 2559-66).
(νί) РР1 необходима для ингибирования контрольной точки веретена и дезинтеграции кинетохоров на выходе из фазы М (Етаиие1е М1 е! а1., 1 Се11 Вю1. 2008, 181(2): рр. 241-54).
(νίί) Дефосфорилирование фосфопротеинов посредством РР1 необходимо для выхода из фазы М (Аи 10 е! а1. №!иге Се11 Вю1, 2009, ν11(5): рр. 644-51).
(νίίί) РР1 участвует в переходе М/61, способствуя повторной сборке ядерной оболочки в конце митоза, дефосфорилируя пластинки В (Т^тртои Ы е! а1., 1997, 1 Вю1 Сйет. 1997, 272(47): рр. 29693-7).
Все упомянутые выше пункты (ί)-(νίίί) предполагают, что селективное ингибирование РР1 окажет значительный эффект на регуляцию клеточного цикла, в частности, на уровне фазы М. Таким образом, применение в химиотерапии антипролиферативных лекарственных средств, влияющих на развитие клеточного цикла, делает РР1 мишенью выбора при разработке новых противораковых соединений.
Кроме того, РР1 участвует в развитии рака. Действительно, анализ транскриптов 60 раковых клеточных линий (ΝΟΙ-60: 1Шр://деηοте-\ν\ν\ν.кιаηΓο^б.еби/ηс^60/) показал, что разные изоформы РР1 сверхэкспрессировались при раках прямой кишки, груди, легкого и центральной нервной системы (Εοκκ ΌΤ е! а1., 2000; Ν! 6еие!., ν24(3): рр. 227-35).
Кроме того, при сквамозных карциномах ротоглотки (О8СС) часто наблюдается амплификация генов сегмента хромосомы 11д13, и эта амплификация генов была бы под контролем гена РР1СА (кодирующего каталитическую субъединицу РР1, альфа-изоформа). Другие исследования предполагают, что РР1СА напрямую вовлечена в онкогенность и/или развитие опухолей при раке этого типа (Нки ЬС е! а1., Оиотдеие, 2006, ν25 (40): рр. 5517-26).
Существует много соединений, ингибирующих активность РР1, но большинство из них не селективны и нацелены предпочтительно на РР2А.
Например, РР1 и РР2А ингибируются большим числом натуральных токсинов, таких как окадаиновая кислота, каликулин А, таутомицин, таутомицетин или фостриецин (Мс^итей 1Ь аиб Ааб/иМо ВЕ, Мο1 РИатта^, 2009, ν75: рр. 1249-61). Среди этих токсинов фостриецин обладает высокой селективностью к РР2А (40000 раз), тогда как таутомицин и таутомицетин (которые более специфичны к РР1) показывают низкую селективность к РР1 по сравнению с РР2А (в 4 раза и 40 раз соответственно). Фосфатидная кислота имеет в 100 раз более высокую селективность к РР1, чем к РР2А, но это окно остается закрытым для исследования конкретных ингибиторов РР1 (81е\\аг1 86 е! а1., В^гд. Меб. Сйет. 2007 (15): рр. 7301-10).
Открытие селективного ингибитора РР1 позволило бы разделить эффекты ингибирования РР1 от эффектов инактивации РР2А.
Хотя потенциал ингибиторов протеинфосфатаз в качестве противораковых лекарственных средств
- 2 032434 был признан уже давно, в клинике оценивались только фостриецин и кантаридин. Фостриецин, являющийся селективным ингибитором РР2А, тестировали в клиническом испытании фазы I, где он оказался неактивным ввиду его структурной нестабильности (Ьё ЬН с! а1., ΙηνοδΙ №\у Эгндх. 2004, ν22(2): рр. 15967). Равным образом, испытания с кантаридином (неспецифический ингибитор РР2А и РР1) также были остановлены ввиду слишком высокой нефротоксичности (Нопкапеп; 8сппс/Т11гсоптс Рго1еш Р1юхр11а1ахс 1пЫЬйогх νί(1ι Аийишог ΛοΙίνίΙν. в 1пЫЬйогх οί Рго1сш Ктахсх апб Рго1ст Рйохрйа1ахсх, Всг1ш: 8ргтдсгУсг1ад, 2005, ν167, Ι8ΒΝ 3-540-21242-6: рр. 295-317).
Идея разрушения опухолевых новообразованных сосудов для лечения рака, выдвинутая 1. Пспскатр в 1982, привела к рождению нового класса противораковых соединений, называемых УЭА от Уахеи1аг 01хгир(11гд Адсйх (агенты, разрушающие сосуды) (Эспскатр 1., Вг 1 Сапссг. 1982, 45(1): рр. 1369; Тохсг С с! а1., №11игс Ясу. 2005, ν5: рр. 423-35). Эти соединения четко отличаются от антиангиогенных агентов, которые интерферируют с появлением и ростом новых сосудов.
Молекулы УЭА действуют на эндотелиальные клетки, из которых состоят новообразованные опухолевые сосуды, и провоцируют коллапс сосудистой системы, который вызывает остановку кровотока, быстро приводя к некрозу опухолевой массы.
Большинство агентов разрушения сосудов (УЭА) способны деполимеризовать микротрубочки эндотелиальных клеток, из которых состоят новообразованные сосуды. Эта деполимеризация вызывает округление клетки и истинное ослабление сосудов, что мешает, таким образом, течению крови.
Из антитубулиновых УЭА можно назвать: ΖΌ6126 (АNС453; А2Э6126), СА4 (комбретастатин А-
4), СА4Р (УуЬгсх1аЕ 0X12021, фосбретабулин, комбретастатин А-4 динатрийфосфат), ΒΝΟ05, ΜΝ-029 (денибулин), СУТ997, АУЕ8062 (АС7700, омбрабулин), ΝΈΙ-2358 (дикетопиперазин), ЕРС2407 (МХ116407, МХ-2407), ΤΖΤ-1027 (ауристатин РЕ, соблидотин, №С-654663), МРС-6827 (Аала), АВТ751, тризенокс (триоксид мышьяка), 0X14503 (СА1Р), 2-метоксиэстрадиол (Рап/спт Ν8ί.’-659853; 2-МЕ).
Существует также другая категория УЭА, которые не действуют на тубулин, к ним относятся: 8И6668 (ингибитор УЕСЕВ, РИСЕВ, ЕСЕВ), РТК787 (ΖΚ222584; ингибитор УЕСЕВ1, 2, 3), ΖΌ6474 (ингибитор УЕСЕВ2 и ЕСЕВ) и Е.хНспп (эксгерин) (АПН-1, Абйсгсх; ингибитор Ν-кадгерина), А8А404 (ИМХАА, А8 1404; индуктор цитокинов, такой как Т№ и ΙΝΡ) и ЕАА (флавонуксусная кислота, N86’ 347512, БМ975).
Селективность, связанная с этими агентами, объясняется в основном более высокой чувствительностью незрелых эндотелиальных клеток (более хрупких и более проницаемых), образующих стенки новых сосудов (Тохсг С с! а1., №11игс Всуюух. 2006, ν5: рр. 423-35).
Важно, что противоопухолевые средства класса УЭА часто более активны по отношению к большим опухолям с агрессивным ростом, чем к маленьким опухолям, возможно потому, что последние менее васкуляризированы, чем крупные новообразования (Банбиу! 1п!1 1 οί Ваб 0псо1 Вю1 РНух. 2001, ν49(2): рр. 443-50; 81стап Э\У апб 8Ы 8ст т Ваб 0псо1. 2003, ν13(1): рр. 53-61).
По-видимому, УЭА особенно хорошо подходят для лечения патологического ангиогенеза. Этот последний, характеризующийся чрезмерным и/или аномальным образованием кровеносных сосудов, вовлечен в большое число заболеваний, прежде всего пролиферативных заболеваний, особенно зависящих от роста сосудов. Чрезмерный и/или аномальный ангиогенез наблюдается при раке, псориазе, инфекционных заболеваниях (патогены сами могут экспрессировать ангиогенные факторы, вызывать экспрессию таких факторов хозяином или могут видоизменять эндотелиальные клетки), при аутоиммунных заболеваниях (с активацией лейкоцитов и/или мастоцитов).
Кроме того, в жировой ткани ангиогенез может быть вызван приемом слишком жирной пищи (применение ингибиторов ангиогенеза вызывает потерю веса).
Ретинальная неоваскуляризация является основной причиной слепоты, является осложнением большого числа заболеваний, включая диабетическую ретинопатию, возрастную дегенерацию желтого пятна и окклюзию сосудов.
Одной из целей изобретения является получение ингибиторов: селективных к РР1, обладающих, кроме того, УЭА-активностью и/или активностью в деполимеризации микротрубочек, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения патологического ангиогенеза и/или доброкачественных или злокачественных (раковых) опухолей, каким бы ни было их происхождение или их размер, в рамках лечения первой линии или лечения млекопитающих, в частности человека, резистентных к традиционному лечению.
Другой целью изобретения является получение фармацевтических композиций, содержащих селективные ингибиторы РР1, обладающие, кроме того, УЭА-активностью и/или активностью в деполимеризации микротрубочек, для профилактики или лечения патологического ангиогенеза и/или доброкачественных или злокачественных опухолей.
Настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (Ι), ниже, в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1 и/или полимеризации тубулина, и/или в качестве агента, разрушающего сосуды (УЭА), для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или для лечения больных, пораженных патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, доброкачественными опухолями или злокачественными (раковыми) опухолями.
- 3 032434
Настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения следующей общей формулы (I):
в которой:
1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной при условии, что:
a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула I соответствует ароматической системе следующей формулы ΙΑ:
К1
2) η означает 0 или 1,
3) X означает:
a) когда η=1, тогда X обозначает О или 8,
b) когда η=0, тогда X обозначает ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ЧН-(С1-С6) алкил, 8(С3-С6) циклоалкил,
4) К1 означает
ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
СР3, СН2ОК', где К' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО,
СОЧКсКа, где Кс и независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил и ЧКсКа означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Кс и вместе означают (С2-С6)алкил, ^2, N3, , СЧ, С(=ЧЯН2,
ЧКаКЬ, где Ка и КЬ независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, или
Ка означает Н, (СгС6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, и КЬ=СОК£, СООК£ или СОЧК£К£, где К£ и К£ означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ка и КЬ вместе означают (С2С6)алкил,
Ка и КЬ могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола,
5) К2 означает фенил, незамещенный или замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ЧНКа,
ОКе, где Ке означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6)алкилом,
ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ΝΗ2, группу ЧН-СОКс, в которой Кс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь,
О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, О-СОКЬ где К1 означает О-(С1-С6)алкил, или ΝΚ1Κ11, причем К, и обозначают (С1-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4-(ЧН2-(СН2-СН2О)р)Рй, в которой р означает целое число от 1 до 6,
6) К3 означает
Н, (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С1-С6)алкил, ЧН2, группу пропаргил, СН2СЧ,
7) К4 и К5 независимо друг от друга означают
Н, ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, или О-(С1-С6)алкил, или (С1-С6)алкил, причем алкил может
- 4 032434 быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (Сз-Сб)циклоалкил, галоген,
К.4 и К5 вместе означают (С1-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, и его фармацевтически приемлемых солей, в качестве агента, разрушающего сосуды, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями.
Различные определенные ниже термины имеют одинаковое значение во всем описании.
Термин галоген означает бром (Вг), хлор (С1), фтор (Р) и йод (I).
Термин алкил означает линейные или разветвленные углеводородные радикалы, которые могут быть произведены из алканов за счет потери атома водорода. Если не указано иное, они содержат от 1 до 10 атомов углерода и включают все возможные изомеры положения.
Термин циклоалкил соответствует циклизованному алкану, содержащему от 3 до 10 атомов углерода.
Аминокислота, связанная своей кислотной группой, означает любую аминокислоту, природную или неприродную, которая связана амидной связью (ΝΗ-СО) между амином молекулы и главной кислотной группой или боковой цепью аминокислоты для таких кислых аминокислот, как аспарагиновая или глутаминовая кислота.
Термин замещенный фенил означает фенильную группу, которая может содержать от 1 до 5 заместителей, причем указанные заместители могут независимо друг от друга представлять собой галоген, гидрокси, тиол, циано, азидо, нитро, амино, возможно замещенный моно- или ди (С1-4)алкилом, (С1-4)алкилом, (С3-6) циклоалкилом, (С2-4)алкенилом, (С2-4)алкинилом, (С1-4)алкилокси или фенилом.
Термин замещенный гетероарил означает ароматическое ядро, содержащее по меньшей мере один гетероатом, такой как О, N или 8 и которое может содержать один или несколько заместителей, независимых друг от друга, как определено выше.
Выражение и фармацевтически приемлемые соли означает соли молекул по изобретению, которые содержат обратимую в соль группу, такую как группа карбоновой, или фосфорной (ОРО3Н), или сульфоновой (8О3Н), или серной (О8О3Н) кислоты, или фенольная группа, причем указанная соль получена с органическими или минеральными основаниями, приводя, например, к солям щелочных металлов, таким как соли лития, натрия или калия;
замещенная или незамещенная аминогруппа, при этом указанная соль получена реакцией неорганической кислоты, органической кислоты или алкилгалогенида с амином, приводя к четвертичному аммонию.
Примеры неорганических кислот, позволяющих получить фармацевтически приемлемые соли, включают, без ограничений, хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, азотную кислоту, углекислоту, муравьиную кислоту, моногидрокарбоновую кислоту, фосфорную кислоту, моногидрофосфорную кислоту, дигидрофосфорную кислоту, перхлорную кислоту, серную кислоту, моногидросерную кислоту, йодистоводородную кислоту.
Примеры органических кислот, позволяющих получить фармацевтически приемлемые соли, включают, без ограничений, уксусную кислоту, молочную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту, изомасляную кислоту, пальмитиновую кислоту, малеиновую кислоту, глутаминовую кислоту, гидроксималеиновую кислоту, малоновую кислоту, бензойную кислоту, янтарную кислоту, гликолевую кислоту, субериновую (пробковую) кислоту, фумаровую кислоту, миндальную кислоту, фталевую кислоту, салициловую кислоту, бензолсульфокислоту, п-толуолсульфокислоту, лимонную кислоту, винную кислоту, метансульфокислоту, гидроксинафтойную кислоту.
Включены также соли аминокислот, такие как аргинаты и их эквиваленты, а также соли таких органических кислот, как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, и их эквиваленты (см., например, Вегде ек а1., Рйагтасеикюа1 8а1к§, 1оитпа1 οί Рйаттасеик1са1 8с1епсе, 1977, 66, 1-19).
Алкилгалогениды, позволяющие получить фармацевтически приемлемые соли, включают, без ограничений, алкилбромид, йодид, -фторид или -хлорид, в которых указанный алкильный остаток является насыщенным или ненасыщенным, линейным или разветвленным, содержащим от 1 до 20 атомов углерода, или О-циклоалкильную группу с 3-8 атомами углерода.
Термин патологический (аномальный) ангиогенез означает патологический процесс, состоящий из пролиферации и устойчивости, вследствие указанной пролиферации, кровеносных сосудов в аномальных тканях, например и без ограничений, в опухолевых тканях или в здоровых тканях, но в аномальных положениях или имеющих аномальную морфологию.
Выражение лечение патологического ангиогенеза означает, что млекопитающие, в частности человек, страдают диагностированным патологическим ангиогенезом/васкуляризацией и будут получать лечение лекарственным средством, чтобы привести к исчезновению указанных ангиогенеза/васкуляризации.
Выражение профилактика патологического ангиогенеза означает, что у млекопитающего, в частности человека, не был диагностирован патологический ангиогенез, то есть он им не страдает, но патоло
- 5 032434 гический ангиогенез может развиться, и что прием или введение лекарственного средства согласно изобретению препятствует развитию или появлению патологического ангиогенеза.
Профилактика патологического ангиогенеза может быть предусмотрена для млекопитающего, в частности человека, который уже страдает патологическим ангиогенезом, в рамках терапии, направленной на ограничение распространения или продления процесса патологического ангиогенеза.
Этот процесс патологического ангиогенеза наблюдается при многих патологиях, таких как ретинопатия, которая означает все заболевания сетчатки, в частности диабетические, гипертензивные или пигментарные ретинопатии, дегенерацию желтого пятна, покраснение радужки, неоваскулярную глаукому или ретролентальную фиброплазию.
Патологический ангиогенез характерен также, без ограничений, для поражений кожи при псориазе или ангиогенезе миокарда, атеросклероза, бокового коронарного ангиогенеза, бокового церебрального ангиогенеза, артериовенозных мальформаций, ангиогенеза при ишемии конечностей, ангиопластики или артериовенозного шунтирования, синдрома Ди Джорджи, сосудистых мальформаций, наследственной геморрагической телеангиэктазии, кавернозной гемангиомы или гемангиомы кожи, лимфатических мальформаций, артериопатии, неоваскуляризации атеросклеротических бляшек, гемангиомы, гемангиоперицитомы, гемангиоэндотелиомы формы Капоши, ангиокератомы, капиллярной гемангиомы, лимфангиомы, невриномы слухового нерва, нейрофибромы, ангиофибромы, пиогенной гранулемы, факоматозов, болезни Рендю-Ослера-Вебера.
Термин опухоль означает новообразование тканей тела (неоплазия), связанное с разрегулированием роста клеток доброкачественного или злокачественного типа.
Выражение доброкачественные опухоли означают опухоли, каковы бы ни были их происхождение или их размер, с медленным ростом, четко очерченные, образованные из однородной ткани с хорошо дифференцируемыми клетками, с низкой митотической активностью, без метастазов.
Выражение раковые опухоли или злокачественные опухоли означают опухоли, каковы бы ни были их происхождение или их размер, с быстрым и инвазивным ростом, плохо очерченные, образованные из неоднородной ткани с недифференцированными клетками, называемыми незрелыми, с высоким клеточным делением, часто с метастазами.
Выражения раковые опухоли или злокачественные опухоли означают также, без ограничений первичные опухоли, опухолевые метастазы, солидные опухоли, рак кроветворных клеток, лейкемию, лимфомы, карциномы, аденокарциномы, саркомы, меланому, карциному головы и шеи, рак пищевода, рак полости рта и глотки, рак гортани, рак мочевого пузыря, рак прямой кишки, рак яичников, рак матки, рак полового члена, рак вульвы и влагалища, рак шейки матки, рак простаты, рак почки, рак кожи, рак кости, рак суставов и хрящей, рак яичек, рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта, рак мочеполовой системы, рак легкого, тимому, мезотелиому, тератому, рак мозга, рак печени, рак поджелудочной железы, глиому, глиобластому, олигоастроцитому, менингиому, аденому гипофиза, мультиформную глиобластому, медуллобластому, эпендимому, анапластическую астроцитому, олигодендроглиому, рак щитовидной железы, анапластический рак щитовидной железы, гемангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиосаркому, злокачественные ганглионарные и экстраганглионарные лимфомы, лимфому Ходжкина, безболезненные неходжкинские лимфомы, ретинобластому.
Одним из преимуществ соединений по изобретению является то, что они обладают способностью разрушать сосуды, что быстро вызывает некроз опухоли в результате механического разрушения кровеносной сети в опухоли. Кроме того, вызывая разрушение кровотока, соединения согласно изобретению (а также другие противораковые продукты, вводимые до или вместе с соединениями по изобретению) удерживаются в опухоли, а не выводятся посредством кровообращения, что приводит к повышенной эффективности.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), определенной выше, в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1.
Выражение протеинфосфатаза 1 означает как каталитический домен протеинфосфатазы 1С (РР1С) в одной из ее трех изоформ, так и каталитическую субъединицу фосфатазы легкой цепи миозина (МЬСР).
Выражение протеинфосфатаза 1 означает также голофермент протеинфосфатазы 1 в том смысле, что он содержит одну из трех изоформ (альфа, бета/дельта и гамма) каталитической части протеинфосфатазы 1.
Известно, что разные изоформы РР1 сверхэкспрессируются в клеточных линиях нескольких типов рака, таких как рак ободочной кишки, груди, легкого и 8ЫС (Ро55 с1 а1., №1Шгс Сснс1. 2000; ν24(3): рр. 208-9). Кроме того, при чешуйчатом раке клеток полости рта часто наблюдается генная амплификация сегмента хромосомы 11ц13. В эту амплификацию 11ц13 вовлечен ген РРР1СА (каталитическая субъединица РР1, альфа-изоформа), который, в свою очередь, коррелирует со сверхэкспрессией РР1-альфа. Снижение уровня РР1-альфа малыми интерферирующими РНК позволяет остановить ίη νίίτο пролиферацию клеток чешуйчатого рака полости рта (Н§ц с1 а1., Опсодепе. 2006, ν25(40): рр 5517-26). Следовательно, селективный ингибитор РР1 позволил бы лечение этого типа рака.
Вторым преимуществом соединений по изобретению является то, что они способны избирательно
- 6 032434 ингибировать протеинфосфатазу 1, а не протеинфосфатазу 2А, что дает им преимущество по сравнению с неспецифическими ингибиторами, снижая токсические эффекты.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), определенной выше, в качестве агента, разрушающего сосуды, ингибитора протеинфосфатазы 1 и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями.
Под антипролиферативным агентом понимается лекарственное средство, которое интерферирует с пролиферацией клеток, какой бы ни была фаза клеточного цикла, на которую воздействует указанный агент.
Взаимодействие ингибитора РР1 с клеточным циклом (как подробно указано выше) эквивалентно антипролиферативному эффекту.
Другим преимуществом соединений по изобретению является то, что они обладают способностью одновременно разрушать сосуды и избирательно ингибировать протеинфосфатазу 1.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), определенной выше, в качестве агента, разрушающего сосуды, ингибитора протеинфосфатазы 1 и в качестве антипролиферативного агента, но не имеющего активности ингибирования полимеризации тубулина. Активность ингибирования полимеризации тубулина может быть вредной в случае, когда у млекопитающих, в частности человека, может развиться периферическая невропатия (Сйшса1 Ьиид Сапсег, νοί. 2, ЫитЬет Шаииату 2011, радек 18-25).
Активность ингибирования полимеризации тубулина может также вызывать ингибирование кроветворения.
Следовательно, одним из преимуществ этого типа соединений является то, что они могут быть направлены на популяцию млекопитающих, в частности человека, способных развивать периферическую невропатию, не вызывая ингибирования кроветворения, и, в частности, могут лечить млекопитающих, в частности, человека, в возрасте.
Анти-РР1 соединения способны иметь минимальную токсичность или, по меньшей мере, очень отличающуюся от токсичности антитубулиновых агентов, которые вызывают эффекты периферической нейротоксичности, главным образом, у старых млекопитающих, в частности, человека (РН1ь1ег 1Е е1 а1., Эгидк. 1989, 37 [4] рр. 551-65; Керейо Ь., 1 8иррой Оисо1., 2003, 1 [4 8ирр1 2]: рр. 18-24).
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), определенной выше, в качестве агента, разрушающего сосуды, ингибитора полимеризации тубулина и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями.
В этом варианте осуществления соединение по изобретению не обладает или обладает низкой активностью ингибирования РР1.
Еще одним преимуществом соединений по изобретения является то, что они обладают способностью деполимеризовать микротрубочки в клетках, таким образом, придавая соединениям по изобретению антимитотический эффект, позволяющий ингибировать пролиферацию клеток по механизму, не зависимому от ингибирования РР1.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения общей формулы (I), определенной выше, в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1, полимеризации тубулина, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями.
Другим преимуществом соединений по изобретению является то, что они, помимо описанной выше способности разрушать сосуды и ингибировать РР1, обладают способностью деполимеризовать микротрубочки в клетках, что, таким образом, придает соединениям по изобретению антимитотический эффект.
Соединения по изобретению благодаря их ингибирующей активности на РР1 и их активности в деполимеризации микротрубочек в клетках, отражающейся в антипролиферативном эффекте, помимо их УЭА-активности, способны быть активными в отношении опухолей, какими бы ни были размер и происхождение этих опухолей. Некроз опухоли, вызванный этой тройной активностью, является очень быстрым и осуществляется за 24 часа или быстрее, позволяя иметь целью, в частности, большие опухоли, и позволяя также целевое применение на неоперабельных млекопитающих, в частности человеке.
Наличие четырех упомянутых выше активностей (анти-РР1, антитубулин, антипролиферативная и УЭА) придает соединениям по изобретению очень интересные свойства, в частности возможность практического применения терапии на млекопитающем, в частности, человеке, без развития у него рези
- 7 032434 стентности.
Другим преимуществом соединений по изобретению является то, что они активны после парентерального или перорального введения.
Еще одним преимуществом соединений по изобретению является то, что они не обладают токсичностью ίη νίνο, причем предельно допустимую пероральную дозу у голых мышей можно оценить как от 200 до 400 мг/кг.
Соединения по изобретению очень активны ίη νίΐτο в отношении эндотелиальных клеток вены пупочного канатика человека (НИУЕС), а также в отношении микрососудистых эндотелиальных клеток дермы человека (НМЕС) с концентрацией, вдвое ингибирующей пролиферацию клеток (С150). намного ниже, чем С150 для раковых линий или для первичных фибробластов кожи (фиг. 7 и 8 и табл. I).
Результаты, полученные с клетками НМЕС, характеризуют активность УЭЛ (Раэдшег Е. с1 а1., Μοί Сапсег Тйег; 9(5) 2010. Рр 1408-18: ΕΝΜΌ-1198, а пе\у апа1одие о£ 2-ше1йохуе81гад1о1, б18р1ау8 Ьо111 апЦапдюдешс апб уа5си1аг-д15гир11пд ргорегйек).
Соединения по изобретению способны нацеливаться предпочтительно на эндотелиальные клетки опухолей и отличать зрелые эндотелиальные клетки здоровых тканей от молодых эндотелиальных клеток, недавно занесенных в опухоль кровотоком, то есть они воздействуют только на молодые клетки, а не на зрелые эндотелиальные клетки.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), в которой когда η=0, X обозначает ОСН3.
В одном предпочтительном варианте осуществления изобретение относится, в частности, к применению по меньшей мере одного из соединений общей формулы (I), определенной выше, или их фармацевтически приемлемых солей в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1 и/или полимеризации тубулина, и/или в качестве агента, разрушающего сосуды, и/или антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие опухолями, устойчивы к традиционному лечению или не способны развить резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
Под традиционным лечением следует понимать любое противоопухолевое лечение, хорошо известное специалисту, такое как, но без ограничений хирургия, лучевая терапия, химиотерапия, терапия, называемая прицельной, генная терапия, терапия биопродуктами, в том числе продуктами для пассивной или активной иммунизации.
Под химиотерапией следует понимать способ обработки химическими веществами для лечения заболевания, в частности, опухолей. Под химическим веществом для химиотерапии следует понимать следующие соединения, такие как, но без ограничений, 5-фторурацил, гемцитабин, гидроксимочевина, алкилирующие агенты, цисплатин, паклитаксел, винка-алкалоиды, такие как винбластин или винкристин, метотрексат, камптотецины, этопозид, даунорубицин и доксорубицин, и другие соединения, хорошо известные специалисту.
Под прицельной терапией следует понимать терапевтический продукт или стратегию с фокусированной стратегией, которая действует на хорошо определенную мишень или маршрут биологической сигнализации, который после инактивации приводит к регрессии или уничтожению рака. Под веществом для прицельной терапии следует понимать вещества химической или белковой/пептидной природы, такие как, но без ограничений, иматиниба мезилат (С1ееνес®), гефитиниб (1ге88а®), бевацизумаб (ЛуаЩп®), трастузумаб (Негсерйп®), цетуксимаб (ЕгЬйих®), тозитумомаб, меченный йодом-131 (Веххаг®), ритуксимаб (КДихап®), алемтузумаб (СашраШ®), ибритумомаб тиуксетан (2еуа1т®) или гемтузумаб озогамицин (Му1о1агд®);
антигормональные продукты, такие как анастрозол, лейпролид, бикалутамид.
Под лучевой терапией следует понимать способ местно-регионарной обработки опухолей, использующий радиацию для уничтожения опухолевых клеток, блокируя их способность к размножению.
Выражение млекопитающие, в частности, человек, резистентные к традиционному лечению означает млекопитающих, в частности человека, которые с самого начала были устойчивы к традиционному лечению или стали устойчивыми к традиционному лечению после лечения.
Например, соединения по изобретению могут быть использованы для предупреждения резистентности к химиотерапии у млекопитающих, в частности, человека, никогда не подвергавшихся лечению химиотерапевтическим средством, предупреждения резистентности к химиотерапии у млекопитающих, в частности, человека, уже резистентных к химиотерапевтическому средству, предупреждения резистентности к химиотерапии у млекопитающих, в частности, человека, уже резистентных к химиотерапевтическому средству, с помощью комбинации продукта по изобретению и химиотерапевтического средства, идентичного или отличного от тех, к которым резистентны млекопитающие, в частности человек.
Модулирование или воздействие на устойчивость к химиотерапии, в частности устойчивость к хи
- 8 032434 миотерапии паклитакселом, соединениями по изобретению, в частности соединением 6 или комбинацией соединения по изобретению и химиотерапевтического средства, идентичного или отличного от тех, к которым резистентны млекопитающие, в частности, человек, можно оценить согласно протоколу примера 14.
Таким образом, наличие трех упомянутых выше активностей дает также соединениям по изобретению возможность определить целью млекопитающих, в частности человека, резистентных к традиционному лечению.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора полимеризации тубулина и/или агента, разрушающего сосуды, и в качестве антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности, человек, страдающие доброкачественными или злокачественными опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора полимеризации тубулина, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности, человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности, человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1 и/или агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1 и/или полимеризации тубулина и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности, человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности, ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1, полимеризации тубулина и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) в качестве ингибитора протеинфосфатазы 1, полимеризации тубулина, в качестве агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, причем указанные млекопитающие, в частности человек, страдающие доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями,
- 9 032434 резистентны к обычному лечению или не способны развивать резистентность после лечения указанным лекарственным средством.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к одному из указанных выше применений по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности, человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями, или доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, какими бы ни были их размер и их происхождение.
В одном предпочтительном варианте осуществления определенные выше соединения используются для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или лечения млекопитающих, в частности, человека, страдающих доброкачественными или злокачественными (раковыми) опухолями, выбранными из следующих: крупноклеточная карцинома легкого, карцинома почечных клеток, эпителиальная аденокарционома матки, карцинома простаты, глиобластома, карцинома груди, карцинома прямой кишки и аденокарцинома прямой кишки.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения определенной выше формулы (I), причем группа Κ1 в общей формуле (I) выбрана из Н, NО2 или пиррола.
Соединения согласно этому варианту осуществления обладают, главным образом, активностью УВД и являются ингибиторами РР1.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, в котором Κι обозначает ΝΚ^, причем указанные заместители КаКь вместе образуют пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, или Κι обозначает гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, в котором К2 обозначает фенил, замещенный ОСН3, или К2 обозначает фенил замещенный гетероарилом, выбранным из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола.
В этом варианте осуществления соединение согласно изобретению используется, в частности, для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения млекопитающих, в частности человека, страдающих патологическим ангиогенезом, в частности ретинопатиями.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, выбранного из следующих соединений:
- 10 032434
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, выбранного из следующих соединений:
о
- 11 032434
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, выбранного из следующих соединений:
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, выбранного из следующих соединений:
- 12 032434
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I), определенной выше, выбранного из следующих соединений:
- 13 032434
Соединения по изобретению вызывают асфиксию внутри труднодоступной опухоли, которая обычно не разрушается традиционно используемыми продуктами, главным образом, антимитотическими продуктами, в частности, потому что в центре опухолей присутствует очень мало митотических клеток, поскольку указанные митотические клетки находятся преимущественно на периферии опухолей.
Соединения по изобретению вызывают также воспаление тканей вокруг некротических зон, которое может, таким образом, привести к разрушению опухолевых масс не только в результате асфиксии, но также благодаря неспецифическому воспалению.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения определенной выше формулы (I), причем указанное соединение формулы (I) не обладает противовоспалительными свойствами.
Отсутствие противовоспалительных свойств у соединений по изобретению можно оценить согласно протоколу в примере 15.
Следовательно, продукты согласно изобретению не обладают противовоспалительными свойствами, в отличие от соединений, описанных в патентной заявке ШО 98/51307.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения определенной выше формулы (I), причем указанное соединение формулы (I) вводят перорально в дозе, составляющей от примерно 1 до примерно 200 мг/кг, предпочтительно от примерно 10 до примерно 100 мг/кг, более предпочтительно от 20 до 50 мг/кг, в частности 40 мг/кг.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения определенной выше формулы (I), причем указанное соединение формулы (I) вводят перорально, разделенным на одну или несколько доз от примерно 3 до примерно 600 мг/м2, предпочтительно от примерно 30 до примерно 300 мг/м2, более предпочтительно от 60 до 150 мг/м2, в частности 120 мг/м2.
В одном предпочтительном варианте осуществления доза соединения определенной выше формулы (I), (II) или (III), используемая для лечения, может составлять примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 20 мг/кг или она может составлять примерно 30 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 80 мг/кг или же примерно 100 мг/кг, примерно 120 мг/кг, примерно 140 мг/кг, примерно 150 мг/кг, примерно 160 мг/кг, примерно 180 мг/кг, примерно 200 мг/кг.
В одном предпочтительном варианте осуществления доза соединения определенной выше формулы (I), (II) или (III), используемая для лечения, может быть введена разделенной на одну или несколько доз, составляющих примерно 3 мг/м2, примерно 6 мг/м2, примерно 15 мг/м2, примерно 21 мг/м2, примерно 30 мг/м2, примерно 60 мг/м2, или доза может составлять примерно 90 мг/м2, примерно 120 мг/м2, примерно 2 2 2 2 2 150 мг/м , примерно 180 мг/м , примерно 240 мг/м или же примерно 300 мг/м , примерно 360 мг/м , примерно 420 мг/м2, примерно 450 мг/м2, примерно 480 мг/м2, примерно 540 мг/м2, примерно 60 0 мг/м2.
В одном предпочтительном варианте осуществления доза соединения определенной выше формулы (I), используемая для лечения, может содержать от примерно 200 до примерно 400 мг/кг, в частности от примерно 200 до примерно 300 мг/кг, предпочтительно примерно 200 мг/кг, примерно 210 мг/кг, примерно 220 мг/кг, примерно 230 мг/кг, примерно 240 мг/кг, примерно 250 мг/кг, примерно 260 мг/кг, при
- 14 032434 мерно 270 мг/кг, примерно 280 мг/кг, примерно 290 мг/кг или примерно 300 мг/кг, в зависимости от эффективной и/или предельно допустимой дозы для млекопитающего, в частности человека.
В одном предпочтительном варианте осуществления соединение определенной выше формулы (I), используемое для лечения, может быть введено в виде одной или нескольких разделенных доз, составляющих от примерно 600 до примерно 1200 мг/м2, в частности от примерно 600 до примерно 900 мг/м2, предпочтительно примерно 600 мг/м2, примерно 630 мг/м2, примерно 660 мг/м2, примерно 690 мг/м2, о о о о о примерно 720 мг/м , примерно 750 мг/м , примерно 780 мг/м , примерно 810 мг/м , примерно 840 мг/м , примерно 870 мг/м2 или примерно 900 мг/м2, в зависимости от эффективной и/или предельно допустимой дозы для млекопитающего, в частности, человека.
Кроме того, как показано в примерах, представляющих активность ίη νίνο соединений по изобретению и, в частности, соединения 6, или как показано на фиг. 14, иллюстрирующей доказательство отсутствия высокой токсичности ίη νίνο соединений по изобретению и, в частности, соединения 6 ίη νίνο, соединения по изобретению, в частности соединение 6, производят эффект (фиг. 15), йе £ас!о подтверждающий биодоступность продуктов по изобретению и, в частности, соединения 6.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению по меньшей мере одного соединения определенной выше формулы (I), причем указанное соединение формулы (I) подходит для внутривенного введения в дозе, составляющей от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг/сут, в частности 50 мг/кг/сут, в частности 10 мг/кг/сут.
Согласно другому аспекту изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного вещества соединение формулы (I), как определено выше, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, причем соединение соответствует следующей формуле I:
X □ I: ΐ θ
3? Т Е (1)
I 5 в которой:
1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной при условии, что:
a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула I соответствует ароматической системе следующей формулы IА:
х
К1
2) η означает 0 или 1,
3) X означает:
a) когда η=1, тогда X обозначает О или 8,
b) когда η=0, тогда X обозначает ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ЫН-(С1-С6)алкил, 8(С3-С6)циклоалкил,
4) К1 означает
ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2) алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
СЕ3, СН2ОК', где К' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО,
СОЫКсКй, где Кс и К^ независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, и ЫКсКй означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Кс и вместе означают (С2-С6)алкил,
ЫО2, N3, =, СЫ, С(=Ы)КН2, 8О3Н, 8О2ЫН2, 8О2ЫНСН3, ЫН8О2СН3, СН2§О2ЫКсКа, СН2ЫН8О2Кс, 8О2-ЫКаКЬ, 8О2-имидазол,
ЫКаКь, где:
Ка и Кь независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, или
Ка означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, и КЬ=СОК£, СООК£ или СОЫК£К£, где К£ и К£ означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ка и Кь вместе означают (С2С6)алкил,
Ка и Кь могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола,
- 15 032434
5) К2 означает фенил, возможно замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ΝΗΚα, ОКе, где Ке означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6)алкилом, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ΝΗ2, группу ΝΗ-СОКс, в которой Кс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь,
О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, О-СОК1, где К1 означает О-(С1-С6) алкил, или ККДц, причем К, и Кп обозначают (С1-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом,
Гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4(ΝΗ^ΟΗ^ΟΗ^^ΡΗ, в которой р означает целое число от 1 до 6,
6) КЗ означает
Н, (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С1-С6)алкил, ΝΗ2, группу пропаргил, ΟΗ2ΟΝ,
7) К4 и К5 независимо друг от друга означают:
Н, ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, или О-(С1-С6)алкил, или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3-С6)циклоалкил, галоген,
К4 и К5 вместе означают (С1-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, или его фармацевтически приемлемую соль.
Фармацевтически приемлемые носители, которые могут быть использованы в рамках фармацевтических композиций по изобретению, хорошо известны специалисту.
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, определенная выше, содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из
- 16 032434
- 17 032434
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, определенная выше, содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, определенная выше, содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из
- 18 032434
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, определенная выше, содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из
- 19 032434
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция, определенная выше, содержит в качестве активного вещества соединение, выбранное из
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально в дозе, составляющей от примерно 1 до примерно 200 мг/кг, предпочтительно от примерно 10 до примерно 100 мг/кг, более предпочтительно от 20 до 50 мг/кг, в частности 40 мг/кг.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально, разделенной на одну или несколько доз от примерно 3 до примерно 600 мг/м2, предпочтительно от примерно 30 до примерно 300 мг/м2, более предпочтительно от 60 до 150 мг/м2, в частности 120 мг/м2.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально в дозе, составляющей примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 20 мг/кг или доза может составлять примерно 30 мг/кг, примерно 40 мг/кг, примерно 50 мг/кг, примерно 60 мг/кг, примерно 80 мг/кг или же примерно 100 мг/кг, примерно 120 мг/кг, примерно 140 мг/кг, примерно 150 мг/кг, примерно 160 мг/кг, примерно 180 мг/кг, примерно 200 мг/кг.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально, разделенной на одну или несколько доз примерно 3 мг/м2, примерно 6 мг/м2, примерно 15 мг/м2, примерно 21 мг/м2, примерно 30 мг/м2, примерно 60 мг/м2, или доза может составлять примерно 90 мг/м2, примерно 120 мг/м2, примерно 150 2 2 2 2 2 мг/м2, примерно 180 мг/м2, примерно 240 мг/м2, или же примерно 300 мг/м2, примерно 360 мг/м2, при22222 мерно 420 мг/м , примерно 450 мг/м , примерно 480 мг/м , примерно 540 мг/м , примерно 600 мг/м .
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально разделенной на одну или несколько доз от примерно 600 до примерно 1200 мг/м2, в частности от примерно 600 до примерно 900 мг/м2, предпочтительно примерно 600 мг/м2, примерно 630 мг/м2, примерно 660 мг/м2, примерно 690 мг/м2, примерно 720 мг/м2, примерно 750 мг/м2, примерно 780 мг/м2, примерно 810 мг/м2, примерно 840 мг/м2, примерно 870 мг/м2 или примерно 900 мг/м2, в зависимости от предельно допустимой дозы для млекопитающего, в частности, человека.
В другом предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят перорально, разделенной на одну или несколько доз от примерно 3 до примерно 600 мг/м2, предпочтительно от примерно 30 до примерно 300 мг/м2, более предпочтительно от 60 до 150 мг/м2, в частности 120 мг/м2, в зависимости от предельно допустимой дозы для млекопитающего, в частности человека.
Использование такого фармацевтически приемлемого наполнителя, как бета-циклодекстрин (β-ΟΌ), позволяет повысить растворимость соединений по изобретению и, следовательно, вводить соединения по изобретению перорально.
Бета-циклодекстрин имеет следующую структуру:
- 20 032434
но как средство повышения растворимости продукта в воде могут быть также использованы альфа циклодекстрин или гамма-циклодекстрин.
Само собой разумеется, можно использовать и другие фармацевтически приемлемые наполнители, разбавители или эксципиенты, даже те, которые не улучшают растворимость. Другим примером фармацевтически подходящего наполнителя для продуктов по изобретению является альбумин или другой белок, и/или другое фармацевтически приемлемое небелковое соединение, наполненные продуктом по изобретению, в естественном состоянии или в виде наночастиц.
В одном предпочтительном варианте осуществления фармацевтическую композицию, содержащую соединение определенной выше формулы (I), вводят, например, но без ограничения: парентерально, внутривенно, в дозе, составляющей от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг/сут, в частности от 0,1 мг/кг до 50 мг/кг/сут, в частности 10 мг/кг/сут.
Согласно другому аспекту изобретение относится к определенному выше соединению следующей общей формулы (I):
в которой:
1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной при условии, что:
a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула I соответствует ароматической системе следующей формулы IА:
х
2) п означает 0 или 1,
3) X означает:
a) когда п=1, X обозначает О, 8,
b) когда п=0, X обозначает ОРО3Н2, ОРО-(О-(СгС2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, №Н-(С1-С6)алкил, 8(С3-С6)циклоалкил,
4) К1 означает:
ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
СБ3, СН2ОК', где К' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО,
СО№КсКб, причем Кс и Ка независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, и \КсКб означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Кс и Кб вместе означают (С2-С6)алкил, №О2, №3, , С(=№)№Н2, №КаКь, где
Ка и Кь независимо друг от друга означают Н, СНО, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, или
Ка означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил и КЬ=СОК£, СООК£ или СО№К£К£, где К£ и К£ означают Н, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ка и Кь вместе означают (С2-С6)алкил, или Ка и Кь могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пир рола и тетразола,
5) К2 означает
- 21 032434 фенил, замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ЧНКа,
ОКе, где Ке означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6)алкилом,
ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ЧН2, группу ЧН-СОКс, в которой Кс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
О-СОК1, где Κι означает О-(С1-С6)алкил, или ЧКЩц, причем К и Кп обозначают (С1-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4(ЧН2-(СН2-СН2О)р)РИ, в которой р означает целое число от 1 до 6,
6) К3 означает
Н, (С3-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С1-С6)алкил, ЧН2, группу пропаргил, СН2СЧ,
7) К4 и К5 независимо друг от друга означают
Н, ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, или О-(С1-С6)алкил, или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3-С6)циклоалкил, галоген, или К4 и К5 вместе означают (С3-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, за исключением следующих соединений:
когда Х=О, К3=Н, и когда связь между углеродом 1 и группой X является двойной:
a) К1=ЧН2, К2=4-метоксифенил, К4=ОСН3 и К5=Н,
b) К1=ЧО2, К2=4-метоксифенил, К4=ОСН3 и К5=Н,
c) К1=ЧО2, К2=4-метоксифенил, К4=Н и К5=Н,
б) К1=ЧН2, К2=4-метоксифенил, К4=Н и К5=Н,
е) К1=ЧН2, К2=фенил или 4-ОН-фенил, замещенный или незамещенный, К4=Н, ОН, О-(СГ С6)алкил, (С1-С6) алкил, (С3-С6) циклоалкил, и К5=Н, ОН, О-(С1-С6)алкил, (С1-С6)алкил, (С3С6)циклоалкил,
£) соединения, в которых один из К4 и К5 означает галоген. Соединения, описанные в этом варианте осуществления, являются новыми.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где когда η=0,
X обозначает ОСН3.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где К| обозначает ЧКаКЬ, причем указанные заместители КаКЬ вместе образуют пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где К, обозначает гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где К2 обозначает фенил замещенный ОСН3.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где К2 обозначает фенил замещенный гетероарилом, выбранным из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению общей формулы (I), как определено выше, где по меньшей мере один из К4 и К5 обозначает группу ОСН3.
В одном предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к определенному выше соединению следующей общей формулы (I):
в которой η=0, связь между углеродом 1 и группой X является одинарной и X обозначает ОСН3, и К1 обозна
- 22 032434 чает NО2, или п=1, связь между углеродом 1 и группой X является двойной, Х=О или 8, и Κ2 означает фенил, замещенный в положении 4 группой, выбранной из ОН, ОСН3, О-бензила, Вг, (С2-С4)алкинильной группы, возможно замещенной триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2-пропилом или изопропилом.
В другом варианте осуществления определенное выше соединение общей формулы (I) выбрано из следующих соединений:
Фиг. 1А-1Р показывают снимки непрямой иммунофлуоресценции, демонстрируя фенотипы, вызванные соединением 6 на микротрубочках и актиновом цитоскелете клеток НеЬа в интерфазе. Это соединение вызывает деполимеризацию микротрубочек и перестройку актинового цитоскелета (укрепление актина на уровне клеточного кортекса и уменьшение стрессорных волокон).
Фиг. 1А-1С показывают микротрубочки, меченные антителами анти-а-тубулин, а фиг. 1Ό-1Ε показывают Р-актин, меченный конъюгатом фаллоидина А1еха Р1иог® 568.
Фиг. 1А и 1Ό показывают контрольные клетки, инкубированные с ДМСО.
Фиг. 1В и 1Е показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 1 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 1С и ΣΕ показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 10 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 2Α-2Σ показывают снимки непрямой иммунофлуоресценции, демонстрируя фенотипы, вызванные соединением 6 на микротрубочках и актиновом цитоскелете клеток НеЬа в митозе. Это соединение вызывает деполимеризацию микротрубочек веретена и пузырение актина на уровне кортекса (ЫеЬЬшд).
Фиг. 2А-2С показывают микротрубочки, меченные антителами анти-а-тубулин. Фиг. 2Ό-2Ε показывают Р-актин, меченный конъюгатом фаллоидина А1еха Е1иог® 568. Фиг. 2Ο-2Σ представляют суперпозицию двух снимков, показывающих тубулин и актин плюс митотическая ДНК (черные стрелки соответствуют ДНК, меченной Ноесйзк 33258).
Фиг. 2А, 2Ό и 20 показывают контрольные клетки, инкубированные с ДМСО.
- 23 032434
Фиг. 2В, 2Е и 2Н показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 1 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 2С, 2Е и 21 показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 10 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 3А-3Е показывают снимки непрямой иммунофлуоресценции, демонстрируя фенотипы, вызванные соединением 6 на микротрубочках и актиновом цитоскелете первичных человеческих фибробластов в интерфазе. Это соединение вызывает деполимеризацию микротрубочек и перестройку актинового цитоскелета (небольшое упрочнение актина на уроне клеточного кортекса).
Фиг. 3А-3С показывают микротрубочки, меченные антителами анти-а-тубулин, а фиг. 3Ό-3Ε показывают Е-актин, меченный конъюгатом фаллоидина А1еха Е1иог® 568.
Фиг. ЗА и 3Ό показывают контрольные клетки, инкубированные с ДМСО.
Фиг. 3В и 3Е показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 5 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. ЗС и ЗЕ показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 10 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 4А-41 показывают снимки непрямой иммунофлуоресценции, демонстрируя фенотипы, вызванные соединением 6 на микротрубочках и актиновом цитоскелете первичных человеческих фибробластов в митозе. Это соединение вызывает деполимеризацию микротрубочек веретена и образование эктопических бороздок.
Фиг. 4А-4С показывают микротрубочки, меченные антителами анти-а-тубулин, фиг. 4Ό-4Ε показывают Е-актин, меченный конъюгатом фаллоидина А1еха Е1иог® 568. Фиг. 40-41 представляют суперпозицию 2 снимков, показывающих тубулин и актин плюс митотическая ДНК (черные стрелки соответствуют ДНК, меченной НоесйД 33258).
Фиг. 4А, 4Ό и 40 показывают контрольные клетки, инкубированные с ДМСО.
Фиг. 4В, 4Е и 4Н показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 5 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 4С, 4Е и 41 показывают клетки, инкубированные с соединением 6 в концентрации 10 мкМ в течение 24 ч.
Фиг. 5А-51 иллюстрируют прекращение митоза, вызванное соединением 6 на клетках НеЬа, фазовоконтрастная микроскопия в течение 24 ч (видеомикроскопия).
Они показывают накопление круглых клеток НеЬа в присутствии соединения 6 (0,5 мкМ).
Съемку производили на одном и том же поле каждые 5 мин в течение 24 ч, используя объектив №ойиаг 20х (2е188).
Фиг. 6А-6Э показывают снимки фазово-контрастной микроскопии, иллюстрирующие кортикальное пузырение, вызванное соединением 6 (0,5 мкМ) на клетках НеЬа (в интерфазе и в митозе).
Фиг. 6А - контрольные клетки, инкубированные с ДМСО.
Фиг. 6В - клетки после 3 ч инкубации с соединением 6.
Фиг. 6С - крупный план адгезивной интерфазной клетки после 3 ч инкубации с соединением 6 (взято с фиг. 6В).
Фиг. 6Ό - крупный план круглой клетки после 3 ч инкубации с соединением 6 (взято с фиг. 6В).
Снимки получали с объективом №ойиаг 20х (2е188).
Фиг. 7 представляет график, показывающий антипролиферативную активность соединения 6 на разных типах клеток.
График показывает концентрацию соединения 6, необходимую для ингибирования на 50% (О150 от 0го\\111 1пЪ1Ьйюп 50) пролиферации разных клеток или клеточных линий.
Значения указаны как среднее ±ЗЕМ (среднеквадратичное отклонение) по двум опытам, проводившимся по три раза.
Фиг. 8 представляет график, показывающий антипролиферативную активность соединения 6 в отношении НИУЕС и клеточной линии НТВ 177.
Он показывает концентрацию соединения 6, необходимую для ингибирования на 50% пролиферации клеток НТВ177 (клеточная линия, наиболее чувствительная к соединению 6) и НИУЕС (эндотелиальные клетки пупочной вены человека).
Значения указаны как среднее ±ЗЕМ (среднеквадратичное отклонение) по двум опытам, проводившимся по три раза.
Фиг. 9 представляет график, показывающий влияние соединения 6 (50 мкМ) на полимеризацию тубулина 1п νίΙΐΌ.
Контроль осуществляется с ДМСО 0,5%, что соответствует количеству ДМСО, добавленного с соединением 6, так как последнее солюбилизовано в ДМСО.
Значения указаны как среднее ±ЗЕМ (среднеквадратичное отклонение) по двум опытам, проводившимся по три раза.
Фиг. 10А-10С представляют собой график, показывающий продолжительность митоза клеток НеЬа
- 24 032434 в присутствии соединения 6, а также дает иллюстрацию согласно фазово-контрастной микроскопии становления этих клеток, митоз которых остановлен.
Соединение 6 повышает продолжительность митоза в клетках НеЬа по сравнению с контролем (ДМСО).
Фиг. 10А - митоз длится 22 ч в присутствии 0,5 мкМ соединения 6, тогда как в контрольных условиях он длится 1 ч.
Фиг. 10В - контроль. По истечении 1 ч клетка делится на две дочерние клетки.
Фиг. 10С - отслеживание с помощью видеомикроскопии (фазово-контрастной) митоза в присутствии 0,5 мкМ соединения 6. Митоз длится 22 ч с высокой активностью мембранного пузырения до самой смерти клетки. 80% наблюдаемых митотических клеток обнаруживают интенсивное пузырение, 20% клеток остаются круглыми.
Клетки снимали на пленку в течение 48 ч (съемка каждые 5 мин) с объективом №οΠι.ι;·ιγ 40х (2е1кк).
Значения на фиг. 10А являются средними ±8ЕМ (среднеквадратичное отклонение) по двум опытам, в которых отслеживались 50 митотических клеток.
Фиг. 11Α-11Ό представляют снимки фазово-контрастной микроскопии, показывающие, что одновременное подавление трех изоформ РР1 (α+β+γ) в клетках НеЬа посредством малых интерферирующих РНК воспроизводит фенотип, вызванный соединением 6.
Одновременное подавление трех изоформ РР1 малыми интерферирующими РНК вызывает мембранное пузырение клеток НеЬа через 48 ч после трансфекции.
Фиг. 11А - контрольные клетки.
Фиг. 11В - клетки НеЬа, инкубированные с соединением 6 в концентрации 0,5 мкМ в течение 3 ч.
Фиг. 11С - подавление трех каталитических форм РР1, приведшее к появлению фенотипа мембранного пузырения, идентичного показанному на фиг. 11В.
Фиг. 11Ό - подавление каталитического домена РР2А соответствующими малыми интерферирующими РНК вызывает накопление круглых клеток.
Фиг. 12А и 12В показывают соединение 37, которое специфически удерживает каталитические домены РР1.
(A) структура соединения 37 (соответствует соединению 6 с группой РЕ6).
(B) Соединение 37, иммобилизованное на сефарозной смоле, специфически удерживает РР1С. Иммуноблот элюентов условий 1 и 2 с антителами анти-РР1С и анти-РР2А.
1: Ν-гидроксисукцинимид сефарозы, блокированный моноэтаноламином (контроль).
2: соединение 37, связанное с NН8-сефарозой.
Следует отметить отсутствие РР1С в контроле и сходные количества РР2А (в виде следов) в обоих условиях (РМ: молекулярный вес).
Фиг. 13 представляет график, показывающий ингибирование активности РР1Са соединением 6 ш νίΐτο. РР1Са (Νον Еид1аиб Вю1аЬк. 30 мЕд/лунка) инкубировали в присутствии соединения 6 в различных концентрациях и в присутствии флуоресцентного субстрата б1ЕМИР.
Следует отметить, что комбретастатин А-4 (СА-4) (вещество, используемое в качестве отрицательного контроля) не ингибировал активность РР1.
Значения указаны как среднее ±8ЕМ (среднеквадратичное отклонение) по двум опытам, проводившимся по три раза.
Аи: произвольные единицы.
Фиг. 14 показывает эволюцию веса голых мышей в течение 63 дней. Мышам вводили соединение 6 (200 мг/кг) перорально два раза в неделю в течение 2 месяцев.
Соединение 6 растворяли до 8 мг/мл в водном растворе бета-циклодекстрина 60 мг/мл (наполнитель).
Соединение 6 не оказывало значительного влияния на вес голых мышей.
Фиг. 15А-15С показывают снимки человеческих опухолей (НТВ-177: карцинома легкого), ксенотрансплантированных голым мышам после обработки соединением 6 (40 мг/кг, вводят 2 раза в неделю перорально) или одним наполнителем.
Фиг. 15А: контрольная опухоль на седьмые сутки.
Фиг. 15В: опухоль, обработанная соединением 6, на седьмые сутки.
Фиг. 15С: опухоль, обработанная соединением 6, на 20-ые сутки.
Животные, которым ксенотрансплантировали НТВ-177, получавшие перорально соединение 6, обнаруживают центральный некроз уже после одного цикла введения соединения 6 (день 7). Следует отметить, что контрольные животные не имели признаков некроза.
Фиг. 16Λ-16Ω представляют фотографии, показывающие некроз ксенотрансплантированных опухолей (НТВ177) через 48 ч после введения соединения 6 (40 мг/кг). Срезы опухолей (толщиной 10 мкм) окрашивали Н&Е (гематоксилин-эозин). Срезы опухолей, взятых у животных, обработанных соединением 6, показывают обширные зоны некроза, тогда как контрольные опухолевые ткани являются незатронутыми.
- 25 032434
Фиг. 16А и 16С показывают срезы опухолей, полученных от контрольных животных.
Фиг. 16В и 16Ό показывают срезы опухолей после обработки соединением 6.
Материалы и методы
Пример 1. Клеточная культура
Все культурные среды обогащали эмбриональной бычьей сывороткой (10%), пенициллином (100 Ед/мл) и стрептомицином (100 мг/мл). Клетки культивировали в термостате при 37°С в присутствии 5% СО2.
Первичные человеческие фибробласты (РНЕ) готовили, исходя из крайней плоти новорожденных, как описано в публикации Хайт ШК е! а1., 1 Эегта1о1. 8сй 2002, 28(2): рр 152-8.
Следующие клеточные линии: НеЬа (АТСС # ССЬ-2, человеческая карцинома шейки матки), ХСЕ Н460 (АТСС # НТВ-177, крупноклеточная карцинома легкого человека), 786-О (АТСС # СКЕ-1932, аденокарцинома почки человека), КТ-112 (Веийат Е. е! а1., 1 Н1к!осйет. Су!осйет. 1977, 25: рр. 266-74, карцинома мочевого пузыря человека), НМЕС (Ракцшег Е. е! а1., Мо1 Саисег Тйег 9(5) 2010, рр. 1408-18: ЕХМО-1198, А пе\\' аиа1одие о£ 2-те!йохуекйадю1, Фкр1аук Ьо!й аийаидюдешс аид νакси1а^-ά^к^ирйид ргорегйек) культивировали в среде КРМI 1640.
Следующие клеточные линии: И87 (АТСС # НТВ-14, глиобластома человека), НТ-29 (АТСС # НТВ-38, аденокарцинома II степени прямой кишки человека), МСЕ7 (АТСС # НТВ-22, человеческая аденокарцинома груди) культивировали в среде ЭМЕМ. Для МСЕ7 среду обогащали инсулином (0,01 мг/мл).
Клетки А549 (АТСС #ССЬ-185, человеческая карцинома легкого) культивировали в среде Е-12К.
НИУЕС (эндотелиальные клетки пупочной вены человека, РготоСе11 # с-12203) культивировали в среде для роста эндотелиальных клеток, рекомендованной поставщиком (Рготосе11 # с-22010).
Пример 2. Испытания соединений по изобретению ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό
Для исследований ш νίΙΐΌ все соединения суспендировали в безводном ДМСО, чтобы получить маточный раствор 10 мкМ, который хранили в аликвотах при -20°С.
Для экспериментов ш νί\Ό соединение 6 (8 мг/мл) готовили в 60 мг/мл β-циклодекстрина (81дта # 4805), растворенного в воде и встряхиваемого.
Пример 3. Экстракты яиц ксенопуса
Цитоплазматические экстракты яиц ксенопуса готовили из неоплодотворенных яиц Хеиорик 1ае\зк согласно методу, описанному в публикации Эека1 А е! а1., Ме1йодк Се11 Вю1. 1999; 61: рр 385-412).
Пример 4. Анализ клеток непрямой иммунофлуоресценцией
Клетки культивировали на пластинках в 24-луночных планшетах и инкубировали 24 ч с соединением 6 в различных концентрациях от 1 до 10 мкМ.
В контрольные лунки в культурную среду добавляли соответствующие количества ДМСО.
Клетки фиксировали в растворе РВ8 посредством 4% пара-формальдегида (РЕА) и 0,1% глутаральдегида (СА) в течение 15 мин и центрифугировали при 300 об/мин в течение последних 10 мин фиксации. Пластинки ополаскивали в РВ8 и свободные альдегидные группы восстанавливали путем двух последовательных 5-минутных инкубации в РВ8, содержащем 1 мг/мл ХаВН4.
После промывки РВ8, а затем в РВ8Т (РВ8 с 0,5% тритон-Х-100), клетки инкубировали 30 мин при температуре окружающей среды с раствором моноклональных антител анти-а-тубулин (клон ЭМ1А, 81дта # Т6199), разбавленных в отношении 1:200 в РВ8Т. После 3 10-минутных промывок РВ8Т клетки инкубировали 30 мин при температуре окружающей среды в растворе поликлональных козьих антимышиных антител, комбинированных с А1еха 488 (1:1000, Мо1еси1аг РгоЬек # А-11029), и фаллоидина, комбинированного с Красным Техасом для мечения актина (1:2000, Мо1еси1аг РгоЬек # Т7471), в РВ8Т, содержащем также Ноесйк! 33258 (1 мкг/мл) для мечения ДНК. После 3 10-минутных промывок в РВ8Т препараты помещали на предметное стекло в среду для заключения Ейюгкате™ (Са1Ьюсйет # 345789) и рассматривали и анализировали с помощью инвертированного флуоресцентного микроскопа Ахю\гег1 200М (2е1кк®). Съемку производили с объективом Р1аи-Аросйгота! 63 х (масло) (2е1кк®) с помощью камеры Соо1киар НО (Корег каеиййск®) и программы обработки изображений Ме!атогрй Шш\'егка1 Iтадтд™ Согрогайои).
Чтобы оценить действие аналогов соединения 6 на РНЕ и клетки НеЬа, использовали описанный выше метод иммунофлуоресценции, адаптированный к формату 96-луночного планшета. Клетки засеивали в 96-луночные планшеты со стеклянным дном и инкубировали 24 ч в присутствии разных концентраций соединения, от 100 мкМ до 50 нМ. Идентично тому, как описано выше, клетки фиксировали и иммуннометили. Анализ фенотипов, а также подсчет митотических клеток был реализован с тем же микроскопом, но при использовании объектива х40 (О1утрик). Соединения сравнивали между собой в отношении прекращения митоза, вызванного у РНЕ и клеток НеЬа, при концентрациях 25 и 0,3 мкМ.
Для видеомикроскопии с Ζ-серией срезов клетки НеЬа культивировали в планшетах со стеклянным дном (Бхакт М1йаи # ВУ-3910035). Система включает: инвертированный микроскоп АХЮУЕКТ 200М ^екк®), термостатированную инкубационную камеру, которая поддерживает температуру 37°С и постоянное содержание СО2 5%, моторизованную платформу и камеру Соо1 8ХАР НО (Корег 8аеиййск®),
- 26 032434 связанную с системой сбора и обработки данных Ме^ашогрЬ (ип1уег8а1 1шадшд™ СогрогаДоп).
Исследования проводили с объективами х20 или х40 (№оПиаг 2е188).
Сначала выбирали зоны сбора данных и записывали в память, затем выбирали параметры съемки, такие как длительность эксперимента (48 ч), интервалы между снимками (5 мин) или число срезов в глубину ζ (9 срезов). В конце 48 ч записи пакеты с полученными данными восстанавливали со снимком по ζ, имеющим лучший фокус, с помощью компьютерной программы МеШшогрЬ
Пример 5. Тест на пролиферацию клеток
Клетки засеивали в 96-луночные планшеты (1000 на лунку) и инкубировали с разными концентрациями соединения 6 (от 1 нМ до 100 мкМ) в течение 5 дней (120 ч). В конце этого инкубирования в культуральную среду добавляли ΗоесЬ8ΐ 33342 (1 мкг/мл) и живые клетки подсчитывали под флуоресцентным микроскопом (2е188 Ахюуег! 200М). Данные представляют среднее по двум независимым экспериментам, в которых 10 полей, выбранных случайным образом, анализировали для каждой концентрации соединения 6, причем каждый эксперимент повторяли по три раза.
Пример 6. Очистка тубулина бычьего мозга и тест на полимеризацию Ιη уйго
Тубулин очищали, исходя из бычьего мозга, используя способ полимеризации-деполимеризации, описанный в публикации Са81о1Ш М апб Ророу АУ. Рго!ет Ехрг РипТ 2003, 32(1): рр 83-8.
Тесты на полимеризацию тубулина ίη νΐΐΐΌ (при 50 мкМ) проводили в присутствии ОТР 1 мМ в буфере ВКВ80 (80 мМ К-Р1РЕ8 рН 6,8, 1 мМ МдС12, 1 мМ ЕОТА) при 37°С. Тесты проводили в 96луночных микропланшетах (с полуюбкой) (Со^аг р1а1ез, Согшпд # 3695), с трехкратным повторением и при конечном объеме 70 мкл. Сборку тубулина осуществляли в присутствии соединения 6 или его аналогов (все использовали в концентрации 50 мкМ) и отслеживали по измерению турбидиметрии на 350 нм на спектрометре (8рес!гашах Р1из, Мо1еси1аг ИеуКез).
Результаты, полученные ίη νΐΐΐΌ в примерах 4, 6, 9 с соединениями по изобретению, представлены ниже в табл. I.
Таблица I
№ Код Структура Бруттоформула Т-ра плавл. Ингибирование РР1 1С50 Ингибирование полимиризации турбулина Эффект на Не1_а при 25 мкг С150 на НМЕС
1СС128-Ц- о Л
ΑΑ
004-Н09 Г с17н16х2 Оз 296,32 - - *** ++
1 и 7
1СС108-Ц- О
006-С05- ο15η12ν2 О 236,28 - - - +
2 и А
1СС123-Ц-
022-С04- ЛЛ; Г ο17η15ν 281,3 -
1 Оз но эффект **
при 50 и 100 мкМ
о
Л о
ΗΝ
1СС103-Ц- ^ЛЛЛ
030-005- ί ο24Η21Ν 387,4 +++ *** +++
о о4
5 лл
\
О
Λ
1СС128-Ц- ........аХ) ο17η14ν2 326,3 ++++ + ++++
013-В06- ίί о5
6 л 1 -Ή.
О о о
О
1СС108-Ь- я ΗΝ
006-006- Οι6Ηι2Ν2 о4 296,27 - + *** ++
7
А. /Ν-,
''0^ О О
О
1СС108-Ь- II
006-608- ην γ Οι6Ηι4Ν2
02 266,29 - - - -
8
А^А ΝΗ2
О
- 27 032434
0
9 1СС108-Ь- 006-Н06- ) Ж У ΗΝ 11 0 О ο17η14ν2 03 294,3 - - но эффект ** при 50 и 100 мкМ +
10 1СС108-Ь- 006-Н03- с 0 Л/-. ΗΝ 'А X νη2 О ο16η14ν2 ο2 266,29 - + но эффект * при 50 и 100 мкМ -
12 СН1583А ,1............. ............ГУ) О ' ' /°\ ο17η15ν Ο28 297,37 ++++ ++ но эффект * при 100 мкМ ++
13 СН1585 %% ОН <-ф° ,1.......... ................о'У о..................... ζ°\ ο17η15ν Ο58 345,37 - ++ но эффект * при 100 мкМ -
14 СН1587А % о Л. . нУ г ϊ 4 У I' С17Н14СЬ ΝΟ3 315,75 - +++ - +
15 СН1584А -У О А ,. Ύ Г1 угг ζ°\ С17Н14Вг ΝΟ3 360,2 - ++ *** +++
16 СН1586 и 0 о II . .... 1 У 4 □' 4.....’ Οι-Η,,ΙΝ 03 407,2 - +++ *** +++
17 СН1576 ... 4 0 С1 . Лу г у...... О' о ζο4 С17Н13С1 ν204 344,75 - ++ - +
18 СН1590 ......1 0 Ϊ...... .......14% 4У X о о ζ°\ <%η14ν2 Ο48 342,4 +++ +++ ++
19 СН1577 .... 4 0 сГ , УТУ 41X о о 61§η16ν2 05 340,33 ++ + но эффект ** при 100 мкМ -
- 28 032434
20 СН1591 ο23η18ν2 О48 418,46 ++ ++ но эффект * при 50 и 100 мкМ -
1 . ...............χΤ .07........ О о .о. т
21 СН1592 0.....7.....- 01x1 Ο'Ί........ 0 т 624Η20Ν2 О48 432,49 ++ +++ - -
22 СН1594 XXV _χχ: X ο24η21ν3 о4 415,44 ++++ + - -
ж Л/ А
23 ΏΝ78-2 0 ЛХ?|^ с19н20м2 Оз 324,37 - + *** ++
24 ϋΝ86 о Λ Ζ- ΗΝ γ о.....X ΪΙ о ° Ϊ с18н16м2 о4 324,33 - + ++
25 ΏΝ77-1 0 Л — ΗΝ ДУ -XXX ох 1] Ο18Η15Ν 04 309,3 + +++ +++
Ж/ ж
26 Ρ123 χοζ С1 X —. ,...........οχ: ох....... ,оч С17Н13Вг сшо2 378,65 - - - -
27 ΡΙ24 0 о ...............Х)0 о.....о........ о. С18Н1бВг ΝΟ3 374,23 - + - +
28 ΡΙ3812 о ,......, X,....... ООО! О'.....х.............. о о оч ί ο20η16ν2 о5 364,35 ++ - но эффект ** при 50 и 100 мкМ -
29 Р138П ζ/^Ο О — .................ХО о.....о.............. СГ о Οχ ο20η16ν2 05 364,35 + + - -
- 29 032434
30 ΡΙ4612 о ......Д..... А., \ А. А /1% о о о ο19η15ν3 о5 365,34 + + - -
31 ΡΙ46Ϊ1 1% I хА 1\Ю .........о.....1....... о о хо Ο19Η15Ν3 о5 365,34 - ++ - -
32 РЛ37 о ΗΝ ......0АЛ^ вг С1бН12Вг νο2 330,18 +++ - +++
33 РВ9 ^лХА Г/ /δι ο21η21ν Ο28ί 347,48 - - - +
34 ΡΙ47 ° ...... 0..... АО XX А χΝ. Вг О 0 С1бНцВг Ν2Ο4 375,17 ++ +++ *** ++++
35 РВ4 0 ^лХХА ХТХа /б! €2|Η20Ν2 Ο48ί 392,48 +++ - *** ++++
36 РВб о А/%^ ΗΝ А А С+ % с18н12м2 о4 320,30 +++ +++ ++++
37 сиз 1963 %СА _____^..аУг Ο24Η29Ν3 08 487.5 - - - +
38 РЬ58 о \—-ζ. о ο20η17ν Оз 319.35 - + - -
39 ΏΝ103-1 Д.....- 0 ..............нОЭ........ АХ.......... 2_] Ο2ιΗ18Ν2 О3 346,38 +++ + - +++
- 30 032434
40 ΏΝ114 V ° .......... о ..............дат О А............ 0 Ο22Η24Ν2 Оз 364,43 - +++ - +++
41 ϋΝ122 V ...........АА....... А.......С............. ο17η15ν 04 297.31 - - - ++
44 СЬ6 1929 о αΎΤ _ТТ 0 ο23η19ν Оз 357,4 +++ - - +
о
45 СЬО 1930 .1 но А о АХ) Ο16Η13Ν О3 267,28 - ++ +++
V. Ηϊ ιιΓ ο23η18ν2 о5
46 СЬО 1939 о X® Х+х ^ΧΧν Аг СА А 402,40 +++ +
0 Ηϊ,......а
48 ΏΝ141-2 0 СТ I '? N АЛ νΑ 0 А° о ο23η20ν4 07 464,42 - - но эффект * при 50 мкМ +
о Л/-./То ΗΝ уА- -
49 ϋΝ 145-1 χοζ А/Аэ /1 А ,С Г Ί Ο21Η22Ν2 о4 366,4 - + ** +++
о
о
50 ϋΝ 145-3 . ] 0' ,Α // о . Т ГТ Ύ А Α Ν^/θ/^^ΟΗ Ο21Η24Ν2 о5 384,42 - +++ - +
56 ϋΝ 174-2 НО А./.,он 7 1 А С' С15НюС1 ΝΟ3 287,7 +++ - но эффект * при 100 мкМ -
- 31 032434
57 ϋΝ 171 Μετ' 0 Λ он τ 015ΗηΝ 03 253,25 - + *** ++
59 Αϋν 1-116 1-1(/5] 0 ДхО /0. τ ο21η18ν2 ο5 378,38 ++ - - -
60 Αϋν 1-112 0 Λ ίΥΓ XXν τ ο22η20ν2 04 376,41 ++++ - *** ++
61 ΏΝ228-1 ο η2ν.Λ^ ^ϊυΟ ο Γ ο17η16ν2 03 296,12 - - - -
62 ΏΝ282 ο Η2Ν. I ........ .........Εΐ/ э.....χ~...... ο ο 0 Γ ο17η15ν3 05 341,10 - - *** ++
64 ΏΝ263-1 ο ο X χθν ,ο. Γ ο18η19ν 03 297.36 +++ - - -
65 ΏΝ263-2 Л ο ο /°\ ο18η17ν 03 295,12 + + * ++
66 ΏΝ264 Д 0 ο ........II............ .........χχ: э.....χ...... ο Γ ο18η16ν2 ο5 340,11 ++++ + * ++
67 ΏΝ267 но Д ο ο χ СОС ο Γ ο19η19ν 04 325,13 ++ - - +
68 ΏΝ281-2 но ο ο ........Д ...... ΧΟ7 χχ.......... ,ο. Γ ο19η18ν2 06 370,12 - - - +
- 32 032434
69 ΏΝ274 ο25η22ιν 04 527.06 ++ + - +
4=7 о 1 щ°\
О .....ГЛ Λι................
О—\ Г
\= 7 о
70 ΏΝ279 с Τι^ о Г С2бН22Гз νο4 469,15 +++ + - +
ΝΗ, ДЯ Ν/Ду А ° т
71 ΏΝ278 г о Λ 1 / Я τ 7 νο2 ο17η15ν3 о4 325,11 + +
72 АОУ2-029 о Л ΗΝ А/ А· лЛх о Г ο16η12ν2 о5 312,28 +++ ++ +++
I νο2
О с21н20х2 07
73 АОУ2-046 1 О Ял. О О ^тЯ Ον Я 412,39 +++ *** ++
он
74 ΑϋΥ2-035 л°................. .....яз Л :] ο23η18ν2 Об 418.39 +++ + но эффект * при 50 мкМ +
и
Примечания: АМ: Прекращение митоза; РНЕ: первичные человеческие фибробласты; МТ§: Микротрубочки
1. Влияние на активность РР1СА ш сйго
Определение 1С50 проводили с РР1СА в концентрации 80 мЕд в присутствии флуоресцентного субстрата (50 мкМ) и разных концентраций соединений (от 50 мкМ до 50 нМ).
(-) отсутствие ингибирующей активности на РР1 даже при 50 мкМ.
(+) слабое ингибирование РР1: 1С50 >50 мкМ.
(++) умеренное ингибирование РР1: 1С50 от 25 до 50 мкМ.
(+++) выраженное ингибирование РР1: 1С50 от 10 до 24 мкМ.
(++++) сильное ингибирование РР1: 1С50 <9 мкМ. ΝΤ: соединение не испытывалось
2. Влияние на полимеризацию тубулина ш νΐΐΐΌ
Измерение влияния соединения на полимеризацию рассчитывали при ΐ=3000 с, принимая значение для контроля в тот же момент времени за 100%.
(-) означает, что соединение не вызывает или вызывает очень слабое ингибирование сборки тубулина 1п ν^ΐ^ο: 0±5% от контрольного ДМСО.
(+) означает, что соединение вызывает ингибирование сборки тубулина т νΐΐΐΌ в диапазоне от 6 до 25% от контрольного ДМСО.
(++) означает, что соединение вызывает ингибирование сборки тубулина ш νΐΐΐΌ в диапазоне от 26 до 50% от контрольного ДМСО.
(+++) означает, что соединение вызывает ингибирование сборки тубулина т уйго более 50% относительно контрольного ДМСО.
ΝΤ: соединение не испытывалось
3. Влияние на клетки НеЕа
Митотический индекс и/или показатель деполимеризации МТ оценивали при концентрации 25 мкМ.
-: отсутствие активности на клетки при 25 мкМ (если эффект имеется при более высоких концентрациях, это уточняется в табл.).
*: низкая активность (АМ, и/или легкая деполимеризация МТ, и/или легкое ингибирование пролиферации),
- 33 032434 **: средняя активность (АМ, и/или умеренная деполимеризация МТ, и/или умеренное ингибирование пролиферации), ***: сильная активность (АМ, и/или выраженная деполимеризация МТ, и/или выраженное ингибирование пролиферации), **** очень высокая активность (АМ, и/или очень выраженная деполимеризация МТ, и/или очень выраженное ингибирование пролиферации).
ΝΤ: соединение не испытывалось
4. С150 для клеток НМЕС
НМЕС засеивали на 10% слияния и инкубировали с соединениями в разных концентрациях (от 50 мкМ до 1 нМ) в течение 5 дней. С150 (от СтоМй Ιπΐιίόίΐίοη 50% - ингибирование роста на 50%) определяет концентрацию, вызывающую снижение пролиферации на 50% относительно контроля.
(-) отсутствие ингибирующей активности на клетки при 50 мкМ.
(+) легкое ингибирование пролиферации: С150 от 25 до 50 мкМ.
(++) умеренное ингибирование пролиферации: С150 от 1 до 25 мкМ.
(+++) выраженное ингибирование пролиферации: С150 от 0,1 до 1 мкМ.
(++++) сильное ингибирование пролиферации: С150 <0,1 мкМ.
ΝΤ: соединение не испытывалось.
Пример 8. Аффинная хроматография и иммуноблоттинг
Соединение 32 иммобилизовали на сефарозной смоле, активированной Ν-гидроксисукцинимидной группой (ΝΗ8) (СЕ НеаНйеате # 17-0906-01) следующим образом: 100 мкг соединения 37 на мл ΝΗ8сефарозы в РВ8 рН 8,3, в течение 1 ч при температуре окружающей среды. Сефароза, связанная с соединением 37, была обозначена как смола соединение 6, тогда как параллельно готовили другую контрольную смолу с инкубированием в 0,5 М моноэтаноламина (МЕА) рН 8,3, в тех же условиях, чтобы нейтрализовать группы ΝΗ8. После нескольких промывок РВ8 рН 8,3 оставшиеся свободные группы ΝΗ8 блокировали МЕА 0,5 М в течение 30 мин. После тщательной промывки РВ8 контрольную смолу и смолу соединение 6 инкубировали 1 ч при перемешивания при 4°С с 1 мл экстракта яиц ксенопуса, разбавленного 1:1 в буфере С8Е-ХВ, содержащем ингибиторы протеаз (#1873580 Косйе®). После 2 промывок в РВ8Т оставшиеся связанными белки экстракта элюировали 100 мкл буфера наполнителя для электрофореза 8Ό8 (Ьаеттй, и.К., С1еатаде о£ 81гис1ига1 рго1еш8 бигтд 1Пе аккетЫу о£ 1Пе йеаб о£ Ьас1епорйаде Т4. №1иге 1970; 227, 680-685), обогащенного мочевиной 6М. Денатурированные таким образом образцы анализировали на полиакриламидном геле (градиент с 6 до 18%), затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану.
Иммунологический анализ проводили, используя мышиные антитела анти-РР1 (8щта # 7979) или кроличьи анти-РР2А антитела (ир§1а1е # 07-324) в разбавлении 1:1000, и соответствующие вторичные антитела в сочетании с антителами ИКРО (1:5000, антимышиные козьи 1д 8щта # А3683; антикроличьи козьи 1д, 8щта # А0545).
Для обнаружения сигнала ΗΚΓΟ использовали набор ЕСЬ плюс Атеткйат (СЕ ШаИ^ате # ΚΓΝ2132).
Пример 9. Тест на протеинфосфатазу
Для испытаний на активность использовали РР1а (Νον Епд1апб Вю1аЬ§ # Р0754) в конечной концентрации 30 мЕд или 80 мЕд для рассева всех аналогов. 6,8-Дифтор-4-метилумбеллиферилфосфат (И1ЕМИР, 1пуйтодеп # Ό6567) использовали как флуоресцентный субстрат в концентрации 60 мкМ. Все испытания проводили в конечном объеме 100 мкл при 37°С в 96-луночных микропланшетах (Стешет # 655096).
Соединение 6, комбретастатин А4 (СА-4), а также все аналоги разбавляли 50 мкл буфера РР1 (ΤτίδΗΟ 100 мМ рН 7,5, ΌΤΤ 4 мМ, ЕИТА 0,2 мМ, МпС12 0,5 мМ) от 50 мкМ до 50 нМ. В контрольные лунки добавляли соответствующие количества ДМСО. В каждую лунку добавляли РР1а (30 или 80 мЕд в 30 мкл буфера РР1). После 15 мин инкубации при температуре окружающей среды добавляли субстрат (в 20 мкл буфера РР1). Через 20 мин инкубации при 37°С измеряли флуоресценцию на флуориметре с пластинками 355-460 нм, чтобы определить активность фосфатазы. Испытание проводили три раза, дублируя для каждого условия.
Пример 10. Проведение экспериментов ίη у1уо
Все эксперименты на животных проводили согласно рекомендациям местного комитета по этике. Голые мыши (самки Νί.'Γ-ηιι/ηι.ι (лаборатории ΗπιΈιη) были размещены в помещении с фильтруемым воздухом при 22°С с чередованием 12 ч день и 12 ч ночь.
Клетки НТВ177 (1х106) имплантировали подкожно в бока мышей. Рост опухоли контролировали два раза в неделю, измеряя размер опухолей штангенциркулем, что позволяло оценить объем опухоли, рассчитанный в мм3 по следующей формуле: длина х ширина х высота х π/6.
Лечение начинали, когда опухоли достигали размера приблизительно 250 мм3. Вес животного, объем опухоли и распространение некроза измеряли два раза в неделю.
Животных умерщвляли, когда опухоль достигала 2000 мм3 или раньше, если наблюдались клиниче
- 34 032434 ски признаки страдания, определенные комитетом по этике.
Мыши получали соединение 6 перорально в дозах и через интервалы, описанные в подписях к фигурам. Контрольные мыши получали только наполнитель (объем, идентичный бета-циклодекстрину концентрацией 60 мг/мл).
Пример 11. Гистология
После эвтаназии животных опухоли извлекали, разрезали стреловидно вдоль срединной линии, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С. Делали срезы опухоли (толщиной 10 мкм), затем окрашивали гематоксилином-эозином (Н&Е), следуя стандартным методикам.
Снимки срезов опухоли проводили на оптическом микроскопе (объектив х10) с камерой О1утрик ВХ41.
Пример 12. Сравнительные опыты с INН2ΒР:
Полученное соединение 5-йодо-6-амино-1,2-бензопирон (ШН2ВР). описанное в патентной заявке АО 98/51307, не оказывает антипролиферативной активности при 50 мкМ на клетки НеЬа.
Пример 13. Синтез соединений
Соединения 1, 2, 4, 6-8 и 10 были синтезированы согласно В1кадш е! а1., Тет-Фебтои, 1996, 52, 10427-10440.
Соединение 5 было синтезировано согласно Сгснку-0е1кеу е! а1., В^гд. Меб. СЬет., 200, 8, 26292641.
Соединения общей формулы (11а) могут быть синтезированы следующим образом:
Общий протокол:
для Х=О способ синтеза осуществляется согласно В1кадш е! а1., Те1гайебгои 1996, 52, 10427-10440 и включает следующие основные стадии:
a) конденсация арилуксусной кислоты с арилкарбоксальдегидом с образованием промежуточного продукта 2,3-диарилакриловой кислоты,
b) преобразование кислотной группы в соответствующий азид посредством Ν;·ιΝ3 через смешанный ангидрид,
c) термоциклизация азида с получением 3-арилизохинолин-1(2Н)-она,
б) распределение функциональных групп согласно протоколам, подробнее описываемым ниже.
- для Х=8 синтез включает следующие стадии:
a) если исходить из 3-арилизохинолин-1(2Н)-она, то синтез изохинолин-1(2Н)-тиона проводят с реагентом Лавессона,
b) если исходить из 3-арил-4-нитроизохинолин-1(2Н)-она, то способ синтеза изохинолин-1(2Н)тиона включает следующие основные стадии:
хлорирование оксихлоридом фосфора или реагентом Вильсмайера с получением промежуточного 1-хлоризохинолеина, преобразование группы хлора в тионовую группу посредством тиомочевины.
Соединения общей формулы (11Ь) могут быть синтезированы следующим образом:
Общий протокол:
исходя из 3-арилизохинолин-1(2Н)-она: синтез изохинолина (11Ь) проводят с желаемым галогеналкилом в присутствии основания, такого как К2СО3;
исходя из 1-хлор-4-нитроизохинолина, синтез которого упоминался выше: синтез изохинолина 11Ь проводят с желаемым нуклеофильным соединением в основной среде.
Соединение 9: N-(7 -Метокси-1-оксо-3 -фенил-1,2-дигидроизохинолин-4-ил)метанамид
Раствор муравьиной кислоты (2,40 мл; 63 ммоль) и соединения 10 (500 мг, 1,88 ммоль) в толуоле (50 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч и жидкость выпаривают досуха при пониженном давлении. Затем остаток растирают в смеси муравьиной кислоты и воды (80/20), затем дают остыть, получая ожидаемое соединение 9 (450 мг; 77%) в виде бледно-розовых микрокристаллов.
Ή-ЯМР (СОС13): δ 3,90 (3Н, с), 7,39 (1Н, дд), 7,42-7,5 (5Н, м), 7,52 (1Н, д), 7,67 (1Н, д), 8,18 (1Н, с), 9,43 (1Н, шир.с), 11,51 (1Н, шир.с). Расчетный хим. состав для С17Н14^О3-0,17НСО2Н: С 68,47; Н 4,76; N 9,30. Найдено: С 68,43; Н 4,89; N 9,35.
Соединение 12: 7-Метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-тион
Реагент Лавессона (975 мг, 2,4 ммоль) добавляют в атмосфере аргона к суспензии лактама 4 (584 мг, 2,1 ммоль) в безводном толуоле (25 мл) при 85°С. Реакционную смесь перемешивают при этой температуре в течение 20 ч. Добавляют воду (150 мл) и смесь экстрагируют этилацетатом (2x150 мл). Органическую фазу промывают рассолом (2x150 мл), сушат над Мд8О4 и твердый остаток, полученный после выпаривания растворителя, перекристаллизуют в абсолютированном этаноле, получая соединение тиолактам 12 в виде ярко-желтых игл (550 мг, 89%). Тпл. 188-190°С;
Ή-ЯМР (ДМСО-б6) δ 13,21 (1Н, шир.с), 8,21 (1Н, д), 7,80-7,70 (3Н, м), 7,45 (1Н, дд), 7,30 (1Н, с), 7,06 (2Н, д), 3,91 (3Н, с), 3,83 (3Н, с); МС 298 (М+Н). Расчетный хим. состав для С17Н15да28-0,5Н2О: С 66,66; Н 5,22; N 4,57. Найдено: С 66,31; Н 4,87; N 5,05.
Соединение 13: 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1-сульфоновая кислота
- 35 032434
Раствор азотной кислоты (б 1,33; 146 мкл) в АсОН (650 мкл) добавляют по каплям к суспензии тиолактама 12 (275 мг, 0,9 ммоль) в АсОН (4,3 мл) и АсОЕ1 (1,2 мл) при 0°С. Затем смеси дают дойти до температуры окружающей среды и продолжают перемешивать еще 1 ч, после чего добавляют воду (30 мл). Осадок фильтруют, промывают водой, сушат, затем хроматографируют на колонке с силикагелем, используя СН2С12 в качестве элюента, с получением соединения 13 в виде бледно-желтых микрокристаллов (180 мг; 56%). Тпл. 226-228°С;
1Н-ЯМР (ДМСО-б6) δ 8,14 (1Н, с), 8,00 (1Н, д), 7,83 (2Н, д), 7,68 (1Н, д), 7,54 (1Н, дд), 6,72 (2Н, д),
3.97 (3Н, с), 3,71 (3Н, с); МС 344 (М-Н).
Соединение 14: 4-Хлор-7-метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1 (2Н)-он
При температуре окружающей среды Ν-хлорсукцинимид (67 мг; 0,5 ммоль) добавляют за один раз к раствору лактама 4 (128 мг, 0,45 ммоль), растворенного в АсОН (1,2 мл) и АсОЕ1 (1,2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч и добавляют новую порцию Ν-хлорсукцинимида (67 мг; 0,5 ммоль). Реакционную смесь снова перемешивают в течение 24 ч, затем добавляют воду (10 мл) и образованный осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Затем хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент этанола (от 0 до 1,5%) в СН2С12 в качестве элюента, получая ожидаемое соединение 14 (140 мг; 97%) в виде бледно-желтой смолы.
1Н-ЯМР (СБС13) δ 7,96 (1Н, д), 7,75 (1Н, д), 7,51 (2Н, д), 7,17 (1Н, дд), 6,85 (2Н, д), 6,66 (1Н, шир.с),
3.98 (3Н, с), 3,77 (3Н, с); МС 316 и 318 (М+Н).
Соединение 15: 4-Бром-7-метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1 (2Н)-он
При температуре окружающей среды Ν-бромсукцинимид (92 мг; 0,5 ммоль) добавляют за один раз к раствору лактама 4 (108 мг, 0,38 ммоль), растворенного в АсОН (1,0 мл) и АсОЕ1 (1,0 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч, добавляют воду (10 мл) и образованный осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Затем хроматографируют на колонке с нейтральным алюмогелем, используя градиент этанола (от 0 до 1%) в СН2С12 в качестве элюента, получая ожидаемое соединение 15 (80 мг; 58%) в виде белых микрокристаллов. Тпл. 240-242°С;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6) δ 11,72 (1Н, шир.с), 7,89 (1Н, д), 7,70 (1Н, д), 7,50-7,43 (3Н, м), 7,05 (2Н, д), 3,91 (3Н, с), 3,83 (3Н, с); МС 359 и 361 (М+Н). Расчетный хим. состав для С^Н^^Оу С 56,69; Н 3,92; Ν 3,89. Найдено: С 56,58; Н 3,92; Ν 3,66.
Соединение 16: 4-Йод-7-метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
При температуре окружающей среды Ν-йодсукцинимид (12 7 мг; 0,5 ммоль) добавляют за один раз в раствор лактама 4 (130 мг, 0,46 ммоль), растворенного в АсОН (1,2 мл) и АсОЕ1 (1,2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 ч, добавляют воду (10 мл) и образованный осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Затем хроматографируют на колонке с нейтральным алюмогелем, используя градиент этанола (от 0 до 1%) в СН2С12 в качестве элюента, получая ожидаемое соединение 16 (130 мг; 69%) в виде белых микрокристаллов. Тпл. 216-218°С;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6) δ 11,72 (1Н, шир.с), 7,89 (1Н, д), 7,70 (1Н, д), 7,50-7,43 (3Н, м), 7,05 (2Н, д), 3,91 (3Н, с), 3,83 (3Н, с); МС 408 (М+Н); Расчетный хим. состав для С^НцВ^О^ С 50,14; Н 3,47; Ν 3,44. Найдено: С 50,32; Н 3,48; Ν 3,45.
Соединение 17: 1-Хлор-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин
В атмосфере аргона оксихлорид фосфора (3,2 мл) добавляют за один раз в раствор нитролактама 6 (1,33 г, 40 ммоль) и хлорида бензилтриэтиламмония в ацетонитриле (27 мл). Затем реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, после чего выпаривают при пониженном давлении. Добавляют холодную воду (50 мл) и устанавливают рН 7-8 добавлением 14%-ного NΗ4ОΗ. Образованный осадок фильтруют, промывают водой, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь СН2С12/ацетон=8:2 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 17 (1,18 г; 83%) в виде блестящих желтых чешуек. Тпл. 196-198°С;
!Н-ЯМР (ΟϋΟ13) δ 7,71 (1Н, д), 7,70-7,64 (2Н, м), 7,63 (1Н, д), 7,53 (1Н, дд), 7,00 (2Н, д), 4,03 (3Н, с), 3,86 (3Н, с); МС 345 и 347 (М+Н). Расчетный хим. состав для С17Н13СШ2О4: С 59,23; Н 3,80; Ν 8,13; Найдено: С 59,17; Н 3,75; Ν 7,88.
Соединение 18: 7 -Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-тион
В атмосфере аргона смесь, состоящую из хлорнитро-производного 17 (230 мг, 0,66 ммоль), тиомочевины (164 мг, 2,1 ммоль) и абсолютированного этанола (7 мл), кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Образованный осадок фильтруют, промывают этанолом, сушат и хроматографируют на колонке с нейтральным алюмогелем, используя СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 18 (150 мг; 65%) в виде бледно-оранжевых микрокристаллов. Тпл. 226-228°С;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6) δ 13,83 (1Н, шир.с), 8,31 (1Н, с), 7,61 (2Н, шир.с), 7,47 (2Н, д), 7,07 (2Н, д), 7,00 (2Н, д), 3,95 (3Н, с), 3,83 (3Н, с); МС 343 (М+Н). Расчетный хим. состав для С17Η14N2О48·0,25Η2О: С 58,87; Н 4,18; Ν 8,08. Найдено: С 58,83; Н 4,05; Ν 7,94.
Соединение 19: 1,7-Диметокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин
В атмосфере аргона смесь, состоящую из хлорнитропроизводного 17 (209 мг, 0,60 ммоль), ДМФА (2 мл) и 30%-ного раствора метоксида натрия в метаноле (9 мл), кипятят с обратным холодильником в
- 36 032434 течение 18 ч. Добавляют холодную воду (40 мл) и образованный осадок фильтруют, промывают водой, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 19 (158 мг; 76%) в виде блестящих желтых чешуек. Тпл. 176-178°С;
Ή-ЯМР (СБС13) δ 7,70-7,65 (3Н, м), 7,57 (1Н, д), 7,42 (1Н, дд), 6,98 (2Н, д), 4,22 (3Н, с), 3,97 (3Н, с), 3,86 (3Н, с); МС 363 (М+Ха). Расчетный хим. состав для С18Н16Х2О5: С 63,52; Н 4,74; Х 8,23. Найдено: С 63,46; Н 4,78; Х 7,99.
Соединение 20: 7 -Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитро-1-(фенилтио)изохинолин
В атмосфере аргона смесь, состоящую из хлорнитро-производного 17 (110 мг, 0,32 ммоль), абсолютированного этанола (5 мл), триэтиламина (0,1 мл) и тиофенола (70 мг, 0,6 ммоль), кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч. Образованный осадок фильтруют, промывают этанолом, сушат, получая ожидаемое соединение 20 (120 мг; 90%) в виде блестящих желтых игл. Тпл. 169-171°С;
Ή-ЯМР (СОС13) δ 7,70 (1Н, д), 7,67-7,62 (2Н, м), 7,57 (1Н, д), 7,50-7,44 (4Н, м), 7,39 (2Н, д), 6,82 (2Н, д), 4,02 (3Н, с), 3,80 (3Н, с); МС 419 (М+Н). Расчетный хим. состав для С23Н18Х2О48: С 66,01; Н 4,34; Х 6,39. Найдено: С 65,85; Н 4,15; Х 6,61.
Соединение 21: 1 -(Бензилтио)-7-метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин
В атмосфере аргона смесь, состоящую из хлорнитропроизводного 17 (138 мг, 0,40 ммоль), абсолютированного этанола (4 мл), триэтиламина (0,1 мл) и бензилмеркаптана (60 мг, 0,48 ммоль), кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч. Образованный осадок фильтруют, промывают этанолом, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 21 (120 мг; 69%) в виде бледно-оранжевых микрокристаллов. Тпл. 148-150°С;
Ή-ЯМР (СОС13) δ 7,72-7,62 (3Н, м), 7,48-7,42 (4Н, м), 7,36-7,27 (3Н, м), 6,99 (2Н, д), 4,68 (2Н, с), 3,96 (3Н, с), 3,87 (3Н, с); МС 433 (М+Н); Расчетный хим. состав для С24Н20Х2О48: С 66,65; Н 4,66; Х 6,48; Найдено: С 66,85; Н 4,58; Х 6,51.
Соединение 22: Х-бензил-Х-[7-метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1 -ил]амин
В атмосфере аргона смесь, состоящую из хлорнитропроизводного 17 (145 мг, 0,42 ммоль), абсолютированного этанола (4 мл), триэтиламина (0,1 мл) и бензиламина (136 мг, 1,30 ммоль), кипятят с обратным холодильником в течение 18 ч.
Образованный осадок фильтруют, промывают этанолом, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 22 (110 мг; 62%) в виде бледно-оранжевых микрокристаллов. Тпл. 199-201°С;
Ή-ЯМР (СОС13) δ 7,81 (1Н, д), 7,62 (2Н, д), 7,47-7,30 (6Н, м), 7,02-6,92 (3Н, м), 5,75-5,67 (1Н, м), 4,93 (2Н, д), 3,93 (3Н, с), 3,84 (3Н, с); МС 414 (М-Н). Расчетный хим. состав для С24Н21Х3О4-0,25 Н2О: С 68,65; Н 5,12; Х 10,01. Найдено: С 68,59; Н 4,92; Х 9,95.
Соединение 23: 4-(Диметиламино)-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
К смеси 4-амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-она (соединение 1) (200 мг, 0,67 ммоль), 37%-ного водного раствора формальдегида (0,54 мл, 6,7 ммоль) и ацетонитрила (5 мл) при температуре окружающей среды добавляют цианоборгидрид (126 мг, 2,01 ммоль). Затем медленно добавляют ледяную уксусную кислоту (116 мкл, 2,01 ммоль) и смесь оставляют перемешиваться в течение 5 ч. Снова вводят второе количество ледяной уксусной кислоты (116 мкл, 2,01 ммоль), перемешивание продолжают еще 30 мин, затем систему выпаривают при пониженном давлении и добавляют эфир (15 мл). Эфирную фазу последовательно промывают однонормальным раствором КОН (3х30 мл), рассолом (3 мл), затем сушат над Мд8О4 и выпаривают при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент этанола (от 0 до 2%) в СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 23 (54 мг, 25%) в виде твердого вещества оранжевого цвета. Тпл. 183-185°С; Ή-ЯМР (СОС13): δ 8,30 (1Н, шир.с), 7,85 (1Н, д), 7,81 (1Н, д), 7,38 (2Н, д), 7,33 (1Н, дд), 6,99 (2Н, д), 3,94 (3Н, с), 3,88 (3Н, с), 2,64 (6Н, с); МС 325 (М+Н); Расчетный хим. состав для С19Н20Х2О3-1,1Н2О: С 66,2; Н 6,44; Х 8,13. Найдено: С 66,24; Н 5,81; Х 8,13.
Соединение 24: Х-(7-Метокси-3-(4-метоксифенил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-4-ил)метанамид
К смеси 4-амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-она (соединение 1) (100 мг, 0,33 ммоль) и этилформиата (7 мл, предварительно перегнанного над гидридом кальция) добавляют муравьиную кислоту (1,6 мл) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 12 ч. Затем систему выпаривают досуха при пониженном давлении и полученный остаток промывают этанолом, фильтруют, сушат в вакууме, получая 36 мг ожидаемого соединения 24. Фильтрат концентрируют, затем хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент этанола (от 0 до 5%) в СН2С12 в качестве элюента, с получением второй фракции продукта 24 высокого качества (15 мг, суммарный выход 46%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. >270°С;
Ή-ЯМР (СБС13): δ 11,44 (1Н, шир.с), 9,41 (1Н, шир.с), 8,18 (1Н, с), 7,65 (1Н, с), 7,51 (1Н, д), 7,42 (2Н, д), 7,38 (1Н, дд), 7,00 (2Н, д), 3,89 (3Н, с), 3,81 (3Н, с); МС 347 (М+Ха); Расчетный хим. состав для С18Н16Х2О4: С 66,66; Н 4,97; Х 8,64. Найдено: С 66,75; Н 4,92; Х 8,53.
Соединение 25: 7 -Метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1 (2Н)-он-4-карбальдегид
При -78°С Н-ВиЫ (1,6 М в гексане, 1,8 мл, 1,1 ммоль) добавляют к раствору 4-бром-7-метокси-3-(4
- 37 032434 метоксифенил) изохинолин-1(2Н)-она (соединение 15, 200 мг, 0,55 ммоль) и ТГФ (10 мл). Полученную желтую суспензию перемешивают еще 15 мин при той же температуре, затем вводят ДМФА (85 мкл, 1,1 ммоль). Через 1 ч выдерживания при -78°С добавляют воду (10 мл), затем смесь экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Объединенные органические фазы промывают водой, сушат над Мд8О4 и остаток, полученный после выпаривания растворителя, хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент этанола (от 0 до 2%) в СН2С12 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 25 (46 мг, 27%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. 232°С,
Ή-ЯМР (СБС13): δ 3,91 (3Н, с), 3,95 (3Н, с), 7,06 (2Н, д), 7,4 (1Н, дд), 7,48 (2Н, д), 7,81 (1Н, д), 8,77 (1Н, шир.с), 9,15 (1Н, д), 9,79 (1Н, с); МС 310 (М+Н). Расчетный хим. состав для С18Н^О4-0,2Н2О: С 69,07; Н 4,92; N 4,47. Найдено: С 68,68; Н 4,98; N 4,34.
Соединение 26: 4-Бром-1-хлор-7-метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин
Суспензию реагента Вильсмайера (1,7 г, 13,2 ммоль) в 13 мл дихлорэтана перемешивают в течение нескольких минут, затем добавляют соединение 4-бром-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин1(2Н)-он (2,1 г, 6 ммоль). Смесь кипятят с обратным холодильником. По истечении одного часа охлаждают до температуры окружающей среды. Затем раствор разбавляют 750 мл хлороформа, промывают водой (3x200 мл). Органическую фазу сушат над Мд8О4, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество кристаллизуют в метаноле. Получают ожидаемое соединение 26 в виде белых кристаллов (1,78 г, 95%). Тпл. 164-166°С, МС 378 [М+Н]+,
Ή-ЯМР (СБС13): δ 3,86 (с, 3Н), 4,00 (с, 3Н), 6,95-7,02 (м, 2Н), 7,47 (дд, 1=2,6 и 1=9,2 Гц, 1Н), 7,54 (д, 1=2,5 Гц, 1Н), 7,65-7,70 (м, 2Н), 8,24 (д, 1=9,3 Гц, 1Н);
13С-ЯМР (СОС13): δ 55,4, 55,8, 104,2, 113,4, 117,0, 125,2, 127,7, 129,3, 131,4, 131,8, 133,0, 148,0, 148,5, 159,7, 159,8.
Соединение 27: 4-Бром-1,7-диметокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин
К суспензии соединения 4-бром-1-хлор-7-метокси-3-(4-метоксифенил) изохинолин 26 (1,78 г, 4,7 ммоль) в 70 мл метанола добавляют метилат натрия (1,26 г, 23,5 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней. Затем растворитель выпаривают, неочищенный продукт реакции растворяют в 100 мл воды и экстрагируют 300 мл хлороформа. Органическую фазу сушат над Мд8О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество очищают хроматографией на колонке с кремнеземом (СН2С12/циклогексан 1/1, затем 7/3). Получают ожидаемое соединение 27 в виде порошка белого цвета (1,55 г, 88%). Тпл. 138-140°С, МС 375 и 377 [М+Н]+,
Ή-ЯМР (СБС13): δ 3,89 (с, 3Н), 3,97 (с, 3Н), 4,13 (с, 3Н), 6,97-7,04 (м, 2Н), 7,39 (дд, 1=2,7 и 1=9,2 Гц, 1Н), 7,53 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 7,74-7,81 (м, 2Н), 8,15 (д, 1=9,2 Гц, 1Н); 13С-ЯМР (СВС13, 300 МГц): δ 53,8, 55,2, 55,5, 102,4, 109,3, 113,0, 120,5, 123,4, 128,4, 131,4, 132,5, 133,1, 145,8, 158,2, 158,4, 159,3.
Соединение 28: 7 -Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитро-2-(пропаргил)изохинолин-1 (2Н)-он
Смесь соединения 6 (1,36 г, 4,17 ммоль), К2СО3 (57 6 мг, 4,17 ммоль) в 42 мл ДМФА перемешивают при температуре окружающей среды в течение 15 мин. Затем добавляют бромистый пропаргил (450 мкл, 4,17 ммоль) и раствор перемешивают при температуре окружающей среды. По истечении 24 ч добавляют 80 мл воды и смесь экстрагируют этилацетатом (4x40 мл). Органические фазы объединяют, промывают насыщенным водным раствором №1С1 (2x20 мл), сушат над Мд8О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Полученное желтое масло очищают хроматографией на колонке с кремнеземом (циклогексан/этилацетат 95/5). Собирают 1,1 г (75%) соединения 20 в виде порошка желтого цвета. Тпл. 162-164°С; МС 365 [М+Н]+;
Ή-ЯМР (СОС13): δ 2,24 (т, 1Н), 3,87 (с, 3Н), 3,95 (с, 3Н), 4,55 (д, 1=2,4 Гц, 2Н), 6,98-7,04 (м, 2Н), 7,36 (дд, 1=2,7 и 1=9,0 Гц, 1Н), 7,40-7,47 (м, 3Н), 7,90 (д, 1=2,7 Гц, 1Н);
13С-ЯМР (СОС13, 300 МГц): δ 36,2, 55,5, 56,0, 72,4, 78,4, 108,8, 114,6, 121,4, 122,7, 123,2, 124. 125,9,
130.9, 134,0, 136,7, 160,1, 160,7, 161,3.
Соединение 29: 7-Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитро-1-(проп-2-инилокси)изохинолин
Это соединение образуется одновременно с соединением 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитро-2(пропаргил)изохинолин-1(2Н)-он 28, получение которого уже было описано выше. Оно получено в виде твердого вещества 29 желто-оранжевого цвета (228 мг, 11%). Тпл. 177-179°С, очищено хроматографией на колонке с кремнеземом и соответствует наименее полярному производному, МС 365 [М+Н]+;
Ή-ЯМР (СВС13) δ 2,55 (т, 1=2,4 Гц, 1Н), 3,85, 3,96 (2x0, 2x3^, 5,26 (д, 1=2,4 Гц, 2Н), 6,96-7,02 (м, 2Н), 7,42 (дд, 1=2,6 и 1=9,2 Гц, 1Н), 7,56 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 7,64-7,72 (м, 3Н); 13С-ЯМР (СОС13): δ 54,6, 55,5,
55.9, 75,0, 78,8, 102,8, 114,3, 119,3, 122,8, 125,3, 126,0, 128,5, 129,8, 138,2, 139,9, 157,4, 159,2, 160,7.
Соединение 30: 2-(7-Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-нитро-1 -оксоизохинолин-2(1Н)-ил)этаннитрил
Смесь соединения 6 (1,47 г, 4,5 ммоль), К2СО3 (622 мг, 4,5 ммоль) в 45 мл ДМФА перемешивают при температуре окружающей среды в течение 15 мин. Затем добавляют бромацетонитрил (313 мкл, 4,5 ммоль) и раствор перемешивают при температуре окружающей среды. По истечении 3 ч добавляют 100 мл воды и смесь экстрагируют этилацетатом (4x100 мл). Органические фазы объединяют, промывают насыщенным водным раствором №1С1 (2x20 мл), затем сушат над Мд8О4, фильтруют и концентрируют
- 38 032434 при пониженном давлении. Полученное желтое твердое вещество очищают хроматографией на колонке с кремнеземом (циклогексан/этилацетат 95/5). Собирают 980 мг (60%) соединения 30 в виде порошка желтого цвета. Тпл. 194-196°С; МС 366 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,85 (с, 3Н), 3,95 (с, 3Н), 4,65 (с, 2Н), 7,14-7,19 (м, 2Н), 7,46-7,61 (м, 4Н), 7,80 (д, 1=2,4 Гц, 1Н); 13С-ЯМР (ДМСО, 300 МГц): δ 34,6, 55,4, 55,9, 108,9, 114,8, 115,6, 120,6, 121,9, 123,3, 124,1, 124,9, 130,9, 133,8, 136,5, 159,7, 159,8, 161,0.
Соединение 31: 2-(7-Метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1-илокси)этаннитрил
Это соединение образуется одновременно с соединением 2-(7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитро1-оксоизохинолин-2(1Н)-ил) этаннитрил 30, синтез которого был описан ранее. Оно получено в виде твердого вещества желтого цвета (118 мг, 11%). Тпл. 192-194°С, очищено на колонке с кремнеземом и соответствует наименее полярному производному, МС 366 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (СОС13) δ 3,86 (с, 3Н), 3,98 (с, 3Н), 5,27 (с, 2Н), 6,98-7,02 (м, 2Н), 7,46-7,51 (м, 2Н), 7,677,71 (м, 3Н); 13С-ЯМР (СОС13): δ 51,2, 55,5, 56,0, 102,3, 114,5, 115,4, 118,8, 123,0, 125,9, 126,2, 127,8,
129.8, 138,9, 139,5, 156,0, 159,6, 160,9.
Соединение 32: 3-(4-Бромфенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он
Синтез соединения 32 проводят согласно протоколу, описанному в литературе: Вйадш е! а1., Те1гайебгоп 1996, 52, 10427-10440. Только 4-метоксифенилуксусная кислота заменена на 4бромфенилуксусную кислоту. Соединение 32 (7,18 г, 90%) получают в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. >250°С; МС 330 и 332 [М+Н]+; ' Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,88 (с, 3Н), 6,93 (с, 1Н), 7,35 (дд, 1=2,6 и 1=8,6 Гц, 1Н), 7,61-7,74 (м, 6Н), 11,54 (шир.с, 1Н).
Соединение 33: 7-Метокси-3-(4-((триметилсилил)этинил)фенил)изохинолин-1(2Н)-он
Смесь бромпроизводного 32 (1 г, 3,03 ммоль), йодида меди (29 мг, 0,15 ммоль), Рб(РРй3)2С12 (53 мг, 0,076 ммоль) и триметилсилилацетилена (915 мкл, 6,1 ммоль) в 45 мл ДМФА и 12 мл диизопропилэтиламина перемешивают в атмосфере аргона при 80°С в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтруют через целит и фильтрат растворяют в 100 мл воды и 500 мл этилацетата. Органическую фазу промывают насыщенным водным раствором Ν^Ο до нейтральности, сушат над Мд§О4 и выпаривают при пониженном давлении. Полученное твердое вещество очищают хроматографией на колонке с кремнеземом (циклогексан/этилацетат, 9/1). Собирают 400 мг (40%) продукта 33 в виде порошка белого цвета. Тпл. 133135°С; МС 348 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (СОС13, 300 МГц): δ 0,27 (с, 9Н), 3,95 (с, 3Н), 6,78 (с, 1Н), 7,30 (дд, 1=2,7 и 1=5,8 Гц, 2Н), 7,51-7,67 (м, 5Н), 7,80 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 9,9 (шир.с, 1Н).
Соединение 34: 3 -(4-Бромфенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1 (2Н)-он
К смеси соединения 32 (4 г, 12,1 ммоль), суспендированного в 20 мл этилацетата и 40 мл уксусной кислоты, добавляют 53%-ный водный раствор азотной кислоты (6 мл, 50 ммоль), разбавленный 25 мл этилацетата. Суспензию нагревают при 50°С в течение 2 ч. В присутствии 100 мл воды образуется осадок, который фильтруют, сушат и перекристаллизуют в толуоле. Получают 4 г (89%) соединения 34 в виде твердого вещества оранжевого цвета. Тпл. 222-224°С; МС 375 и 377 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,93 (с, 3Н), 7,45-7,55 (м, 3Н), 7,67 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,69-7,75 (м, 3Н), 10,5 (шир.с, 1Н).
Соединение 35: 7 -Метокси-4-нитро-3 -(4-((триметилсилил)этинил)фенил)изохинолин-1 (2Н)-он
Получение соединения 35 осуществляют исходя из соединения 34 согласно протоколу, описанному ранее для синтеза соединения 33. В этих условиях собирают ожидаемый продукт 35 (2,45 г, 75%) в виде порошка желтого цвета. Тпл. 178-180°С; МС 393 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (ДМСО, 300 МГц): δ 0,25 (с, 9Н), 3,93 (с, 3Н), 7,47-7,6 (м, 5Н), 7,65 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 7,72 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 12,3 (шир.с, 1Н); 13С-ЯМР (ДМСО-б6): δ 54,9, 55,7, 92,0, 108,2, 123,2, 123,5, 123,6, 123,9,
125.9, 128,7, 130,0, 131,2, 131,8, 136,9, 159,2, 160,6.
Соединение 36: 3-(4-Этинилфенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
К раствору соединения 35 (2 г, 5,1 ммоль) в 100 мл перегнанного ТГФ добавляют фторид трибутиламмония на оксиде кремния (5 г, 7,61 ммоль). Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 4 ч. Затем раствор фильтруют через целит и фильтрат выпаривают при пониженном давлении. Затем неочищенный продукт очищают хроматографией на колонке с кремнеземом (циклогексан/этилацетат 7/3). Собирают соединение 36 в виде порошка желтого цвета (1,33 г, 81%). Тпл. 246-248°С; МС 321 [М+Н]+;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 3,91 (с, 3Н), 4,37 (с, 1Н), 7,49-7,54 (м, 3Н), 7,61 (м, 2Н), 7,68 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 7,72 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 12,2 (шир.с, 1Н); 13С-ЯМР (ДМСО-б6): δ 55,7, 82,7, 108,2, 123,1, 123,5, 123,6, 125,9, 128,7, 130,2, 131,2, 132,0, 136,9, 159,1, 160,5.
Соединение 37: 3-(4-(2-(2-(2-(2-Аминоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
К раствору диметансульфоната тетраэтиленгликоля (5,25 г, 15 ммоль), полученного согласно А.^. СйтаЪасйег е! а1. (1. Огд. Сйеш. 1998, 65(5), 1717), в 18 мл 95%-ного этанола добавляют азид натрия (1,0 г). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч. Затем растворитель выпари
- 39 032434 вают, неочищенный продукт реакции помещают в 100 мл рассола и экстрагируют эфиром (3х100 мл). Органическую фазу сушат над Мд§О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с кремнеземом, используя градиент АсОЕ1 в гексане (от 1/1 до 3/1) в качестве элюента. Получают 2-(2-(2-(2-азидоэтокси) этокси) этокси) этил монометансульфонат 47 (2,10 г, 47%), который сразу используют на следующей стадии.
К смеси 3-(4-гидроксифенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-она (соединение 45) (130 мг, 0,48 ммоль) в ДМФА (6 мл) добавляют 2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этил метансульфонат (175 мг, 0,58 ммоль) и С§2СО3 (190 мг, 0,58 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 24 ч. Затем растворитель выпаривают, неочищенный продукт реакции помещают в воду (100 мл) и экстрагируют в 0Η2Ο2 (3х100 мл). Органическую фазу сушат над Мд§О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с кремнеземом, используя градиент ЕΐΟΗ (от 1 до 3%) в 0Η2Ο2 в качестве элюента. Получают промежуточный продукт 3-(4-(2-(2-(2-(2азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он (52 мг, 23%), который сразу используют на следующей стадии.
Нитрирование полученного выше соединения 3-(4-(2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он проводят в условиях, описанных Е. Вкадш е1 а1. (Τеΐгайебгоп, 1996, 52, 10427-10440), с получением соединения 3-(4-(2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он с выходом 50%. МС 512 [МН]+;
Ή-ЯМР (С0С1з) δ 8,63 (1Н, шир.с), 7,82 (1Н, шир.с), 7,63 (1Н, д), 7,42 (3Η, м), 7,03 (2Н, д), 4,19 (2Н, т), 3,96 (3Η, с), 3,89 (2Н, т), 3,71 (10Н, м), 3,38 (2Н, т). Расчетный хим. состав для С24Η27N5Ο8·Η2Ο: С 54,23; Н 5,50. Найдено: С 54,49; Н 5,21.
При температуре окружающей среды смесь 3-(4-(2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-она (56 мг, 0,11 ммоль), трифенилфосфина (52 мг) и ТГФ/вода (1/4 об./об., 1 мл) перемешивают в течение 4 дней. Смесь выпаривают при пониженном давлении и полученный остаток очищают хроматографией на колонке с кремнеземом, используя смесь СΗ2С12/ЕΐΟΗ/NΗ4ΟΗ 90/10/5 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 37 (20 мг, 38%). МС 488 (М+Н), Ή-ЯМР (СВС13) δ 7,75 (1Н, д), 7,57 (1Н, д), 7,35 (1Н, д), 7,30 (1Н, дд), 6,98 (1Н, д), 4,16 (2Н, т), 3,88 (3Η, с), 3,81 (2Н, т), 3,66 (2Н, м), 3,57 (4Н, м), 3,48 (2Н, м), 3,36 (2Н, т). Расчетный хим. состав для ^Η^Ν^-Η^: С 57,02; Н 6,18. Найдено: С 57,41; Н 6,39.
Соединение 3 8: 4-Этинил- 1,7-диметокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин
Смесь соединения 4-бром-1,7-диметокси-3-(4-метоксифенил) изохинолин (соединение 26) (187 мг, 0,5 ммоль), (триметилсилил)этинилтрифторбората калия (133 мг, 0,65 ммоль), диацетата палладия (3,5 мг, 0,015 ммоль), КиРйок (14 мг, 0,03 ммоль) и карбоната калия (318 мг, 1,5 ммоль), растворенного в 2 мл смеси перегнанный ТГФ/дегазованная Н2О (10/1), кипятят с обратным холодильником в атмосфере аргона в течение 2 ч. Реакционную среду фильтруют на кремнеземе, затем конденсируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают на колонке с кремнеземом (циклогексан/дихлорметан, 7/3). Получают 182 мг (93%) промежуточного продукта 1,7-диметокси-3-(4-метоксифенил)-4-((триметилсилил)этинил)изохинолина в виде твердого вещества светло-коричневого цвета, которое сразу используют на следующей стадии.
К раствору 1,7-диметокси-3-(4-метоксифенил)-4-((триметилсилил)этинил)изохинолина (175 мг, 0,447 ммоль) в 25 мл дистиллированного ТГФ добавляют (450 мг, 0,67 ммоль) трибутиламмонийфторида, адсорбированного на оксиде кремния. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционный раствор фильтруют через целит, затем фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Затем неочищенный продукт очищают на колонке с кремнеземом (циклогексан/дихлорметан, 1/1). Получают 133 мг (90 %) ожидаемого соединения 38 в виде порошка серо-зеленого цвета. Тпл. 209-210°С; МС 320 [М+Н]+;
Ή-ЯМР (СВС13) δ 3,52 (с, 1Н), 3,88 (с, 3Η), 3,96 (с, 3Η), 4,20 (с, 3Η), 7,00 (м, 2Н), 7,38 (дд, 1=2,7 и 1=9,1 Гц, 1Н), 7,53 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 8,14-8,24 (м, 3Η); 13С-ЯМР (СОС13) δ 53,8, 55,3, 55,6, 80,1, 84,9, 102,5, 104,1, 113,2, 118,6, 123,3, 127,1, 131,0, 132,3, 133,2, 134,3, 150,4, 158,3, 158,7, 160.
Соединение 3 9: 4-(Пиррол-1-ил)-7 -метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
Диметокситетрагидрофуран (42 мкл, 0,32 ммоль) добавляют при 0°С и перемешивании к суспензии 4-амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил) изохинолин-1(2Н)-она (соединение 1, 80 мг, 0,27 ммоль) в НОАс (5 мл), затем смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. В охлажденную реакционную смесь вводят воду (10 мл) и 14%-ый ΝΗ^Η (2 мл). Образованный осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Фильтрат экстрагируют СШСЕ. затем органическую фазу сушат над Мд§О4 и остаток, полученный после испарения растворителя, объединяют с полученным ранее осадком, все это хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент этанола (от 0 до 5%) в 0Η2Ο2 в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 39 (26 мг, 28%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. 238°С,
Ή-ЯМР (СИС13): δ 9,42 (1Н, шир.с), 7,82 (1Н, д, 1=3 Гц), 7,25 (1Н, дд, 1=6 Гц, 1=3 Гц), 7,18 (2Н, д, 1=9 Гц), 7,05 (1Н, д, 1=9 Гц), 6,85 (2Н, д, 1=9 Гц), 6,66 (2Н, д, 1=1,8 Гц), 6,29 (2Н, д, 1=1,8 Гц), 6,29 (2Н, д,
- 40 032434
1=1,8 Гц), 3,96 (3Н, с), 3,81 (3Н, с); МС 347 (М+Н). Расчетный хим. состав для С21Н18^03-0,5Н2О: С 70,98; Н 5,07; N 7,88. Найдено: С 70,99; Н 5,41; N 7,57.
Соединение 40: 4-(Пиперидин-1-ил)-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
Цианоборгидрид натрия (21 мг, 0,33 ммоль) медленно добавляют к раствору 4-амино-7-метокси-3(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-она (соединение 1, 100 мг, 0,33 ммоль) и глутаральдегида (25% в Н2О, 0,377 мл, 0,99 ммоль), растворенного в εΠΙΝ (5 мл). Затем вводят уксусную кислоту (3 капли) и реакционную смесь оставляют перемешиваться при температуре окружающей среды в течение 2 ч, после чего выливают в воду (15 мл). Полученный осадок фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме, получая ожидаемое соединение 40 (80 мг, 66%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. 206°С;
!Н-ЯМР (СБС1з) δ 8,16 (1Н, шир.с), 7,95 (1Н, д), 7,82 (1Н, д), 7,36 (2Н, д), 7,34 (1Н, дд), 7,01 (2Н, д), 3,96 (3Н, с), 3,90 (3Н, с), МС 387 (М+Ыа). Расчетный хим. состав для С21Н18^03-0,5Н2О: С 70,77; Н 6,7; N 7,5. Найдено: С 7 0,63; Н 6,41; N 7,63.
Соединение 41: 4-Гидрокси-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
При 0°С раствор нитрита натрия (24,8 мг, 0,36 ммоль) в воде (0,5 мл) медленно добавляют к раствору 4-амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-она (100 мг, 0,33 ммоль), растворенного в уксусной (1 мл) и серной (0,5 мл) кислоте. Смесь оставляют перемешиваться на холоде в течение 30 мин, затем медленно вводят азид натрия (25,7 мг, 0,39 ммоль), растворенный в минимальном количестве воды (0,2 мл). Продолжают перемешивать на холоде еще 3 ч, затем в реакционную смесь вливают воду (10 мл) и образованный твердый остаток собирают фильтрованием. Хроматография на колонке с силикагелем с использованием градиента этанола (от 0 до 2%) в СН2С12 в качестве элюента позволяет выделить соединение, обладающее наибольшей подвижностью, которое соответствует ожидаемому соединению 41 (31 мг, 31%) в виде твердого вещества белого цвета.
!Н-ЯМР (СБС1з) δ 7,91 (1Н, д), 7,74 (1Н, д), 7,41 (2Н, д), 7,16 (1Н, дд), 6,85 (2Н, д), 6,75 (1Н, шир.с), 4,60 (1Н, шир.с), 3,98 (3Н, с), 3,78 (3Н, с); МС 295 (М-2Н).
Соединение 44: 3 -(4-(Бензилокси)фенил)-7 -метоксиизохинолин-1(2Н)-он
Синтез этого соединения проводили согласно способу, описанному Е. В1хадш с! а1. (ТсЕгайсбгоп, 1996, 52, 10427-10440), в котором 4-метоксифенилуксусная кислота была заменена 4бензилоксифенилуксусной кислотой. Однако, ввиду нестабильности промежуточного продукта, 2-(4(бензилокси)фенил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еноилазида, последний сразу преобразуют в карбамат путем кипячения с обратным холодильником в абсолютированном этаноле. Циклизацию этил 1-(4(бензилокси)фенил)-2-(4-метоксифенил)винилкарбамата осуществляют путем кипячения с обратным холодильником в дифениловом эфире в присутствии трибутиламина (3%, об./об.) в течение 3,5 ч, что дает ожидаемый продукт 44 с выходом 51%. Тпл. >260°С, МС 380 |М+№1|', !Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 11,45 (1Н, шир.с), 7,76 (2Н, д), 7,66 (2Н, м), 7,42 (6Н, м), 7,15 (2Н, д), 6,87 (1Н, с), 5,22 (2Н, с), 3,91 (3Н, с). Расчетный хим. состав для С23Н19да3-1/3 Н2О: С 76,02; Н 5,45; N 3,85. Найдено: С 76,01; Н 5,47; N 3,93.
Соединение 45: 3-(4-Гидроксифенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он
При температуре окружающей среды смесь 3-(4-(бензилокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)она (150 мг, 0,42 ммоль), Рб/С (10%, 70 мг) и абсолютированного этанола (60 мл) перемешивают при обычном давлении водорода в течение 18 ч. Затем катализатор отфильтровывают, промывают спиртом, затем растворитель выпаривают при пониженном давлении. К остатку добавляют этиловый эфир (50 мл), затем собирают полученное серое твердое вещество, которое соответствует ожидаемому соединению 3(4-гидроксифенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он 45 (90 мг, 80%). Тпл. 255°С, !Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 11,36 (1Н, шир.с), 9,88 (1Н, шир.с), 7,68-7,57 (4Н, м), 7,36 (1Н, дд), 6,88 (2Н, д), 6,80 (1Н, с), 3,98 (3Н, с), 3,90 (3Н, с), МС 268 (М+Н). Расчетный хим. состав для С1бН13ДО3-1/3Н20: С 70,32; Н 5,04; N 5,13. Найдено: С 69,92; Н 4,95; N 5,09.
Соединение 46: 3 -(4-(Бензилокси)фенил)-7 -метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
Синтез этого соединения осуществляют согласно способу нитрирования, описанному Е. В|хадш с! а1. (Тс1га11сбгоп, 1996, 52, 10427-10440), в котором 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он заменяют на 3-(4-(бензилокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он. Соединение получено в виде порошка желтого цвета (выход 77%) Тпл. 252-254°С, МС 401 [М-Н]+;
!Н-ЯМР (ДМСО-б6): δ 12,11 (1Н, с), 7,75 (1Н, д), 7,63 (1Н, д), 7,55-7,35 (8Н, м), 5,21 (2Н, с), 3,36 (3Н, с). Расчетный хим. состав для С23Н18^05: С 68,65; Н 4,51; N 6,96. Найдено: С 68,72; Н 4,49; N 6,72.
Соединение 47: 3-(4-(2-(2-(2-(2-Азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
К раствору диметансульфоната тетраэтиленгликоля (5,25 г, 15 ммоль), полученного согласно А.^. С11\\аЬас11сг с! а1. (1. 0гд. С1ст. 1998, 65(5), 1717), в 18 мл этанола при 95°С добавляют азид натрия (1,0 г). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч. Затем растворитель выпаривают, неочищенный продукт реакции помещают в 100 мл рассола и экстрагируют эфиром (3x100 мл). Органическую фазу сушат над Мд804, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с кремнеземом, используя градиент Ас0Е! в гек
- 41 032434 сане (от 1/1 до 3/1) в качестве элюента. Получают 2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этил монометансульфонат 47 (2,10 г, 47%), который сразу используют на следующей стадии.
К смеси 3-(4-гидроксифенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-она (соединение 45) (130 мг, 0,48 ммоль) в ДМФА (6 мл) добавляют 2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этил метансульфонат (175 мг, 0,58 ммоль) и Сз2СО3 (190 мг, 0,58 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 24 ч. Затем растворитель выпаривают, неочищенный продукт реакции помещают в воду (100 мл) и экстрагируют СН2С12 (3x100 мл). Органическую фазу сушат над Мд8О4, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении.
Полученный остаток очищают хроматографией на колонке с кремнеземом, используя градиент ЕкОН (от 1 до 3%) в СН2С12 в качестве элюента. Получают промежуточный продукт 3-(4-(2-(2-(2-(2азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-он (52 мг, 23%), который сразу используют на следующей стадии.
Нитрирование полученного выше соединения, 3-(4-(2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метоксиизохинолин-1(2Н)-она, проводят в соответствии с условиями, описанными Е. В18адп1 ек а1. (Текгайейгоп, 1996, 52, 10427-10440), с получением ожидаемого продукта, 3-(4-(2-(2-(2-(2азидоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-она 47 с выходом 50%. МС 512 [М-Н]+;
’Н-ЯМР (СРС13) δ 8,63 (1Н, шир.с), 7,82 (1Н, шир.с), 7,63 (1Н, д), 7,42 (3Н, м), 7,03 (2Н, д), 4,19 (2Н, т), 3,96 (3Н, с), 3,89 (2Н, т), 3,71 (10Н, м), 3,38 (2Н, т). Расчетный хим. состав для С24Н27^О8-Н2О: С 54,23; Н 5,50. Найдено: С 54,49; Н 5,21.
Соединение 48: Диметил 1-[7-метокси-3-(4-метоксифенил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-4-ил]1Н-[1,2,3]триазол-4,5-дикарбоксилат
При 0°С раствор нитрита натрия (12 мг, 0,17 ммоль) в ДМФА (0,2 мл) по каплям добавляют к раствору 4-амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-она (соединение 1) (47 мг, 0,16 ммоль) в АсОН (0,7 мл). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин, затем в реакционную смесь добавляют азид натрия (12,3 мг, 0,19 ммоль) и смесь перемешивают 1 ч при 0°С. Реакцию останавливают добавлением 10 мл воды и среду экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Органические фазы промывают водой (3x10 мл), сушат над Мд8О4 и концентрируют в вакууме. Полученный остаток, помещенный в атмосферу аргона, растворяют в 1 мл диоксана, затем к раствору добавляют диметилацетилендикарбоксилат (77,7 мкл, 0,63 ммоль), после чего смесь нагревают при 50°С в течение 12 ч. Затем растворители выпаривают, добавляют воду и среду экстрагируют три раза ЕкОАс. Органическую фазу сушат над Мд8О4, фильтруют, затем выпаривают. Остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем, используя смесь СН2С12/этанол в качестве элюента (от 100% до 98/2), с получением ожидаемого соединения 48 (10 мг, 13%) в виде твердого вещества желтого цвета. Тпл. 220°С;
’Н-ЯМР (СИСЬ): δ 9,76 (1Н, шир.с), 7,82 (1Н, с), 7,28 (1Н, дд), 7,23 (2Н, д), 6,86 (2Н, д), 6,75 (1Н, д), 3,98 (3Н, с), 3,95 (3Н, с), 3,81 (3Н, с), 3,69 (3Н, с); МС 487 (М+23).
Соединение 49: 7 -Метокси-3 -(4-метоксифенил)-4-морфолиноизохинолин-1 (2Н)-он
Соединение 50: 4-(2-(2-гидроксиэтокси)этиламино)-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин1(2Н)-он о
В колбу, содержащую 1,4-ангидроэритритол (34 мг, 0,33 ммоль), растворенный в смеси вода/СΗ3СN (1:1; 4 мл), добавляют ОЮ4 (66 мг, 0,33 ммоль) и смесь поддерживают при перемешивании в течение 18 ч. Затем к полученному выше раствору 2,2'-оксибис(ацетальдегида) добавляют 4-амино-7-метокси-3-(4метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он (соединение 1) (100 мг, 0,33 ммоль) и NаВΗ3СN (63 мг, 1 ммоль). Затем добавляют 3 капли уксусной кислоты и среду перемешивают 3 ч при температуре окружающей среды. Реакцию останавливают добавлением 10 мл воды. Среду экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Органические фазы промывают водой (3x10 мл), сушат над Мд8О4 и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем со смесью дихлорметан-этанол (от 100/0 до 98/2) в качестве элюента, получая последовательно:
1) соединение 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-морфолиноизохинолин-1(2Н)-он 49 (10 мг, 8%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. >270°С;
’Н-ЯМР (СРС13): δ 8,18 (1Н, шир.с), 7,99 (1Н, д), 7,83 (1Н, дд), 7,37 (3Н, м), 7,03 (2Н, д), 3,97 (3Н, с),
- 42 032434
3,91 (3Н, с), 3,72 (4Н, м), 2,90 (2Н, м), 2,75 (2Н, м); МС 367 (М+Н); и ίί) соединение 4-(2-(2-гидроксиэтокси)этиламино)-7 -метокси-3 -(4-метоксифенил)изохинолин-1 (2Н)он 50 (15 мг, 12%) в виде твердого вещества белого цвета. Тпл. 139°С;
1Н-ЯМР (СЭС13): δ 8,71 (1Н, шир.с), 7,89 (1Н, д), 7,82 (1Н, с), 7,45 (2Н, д), 7,34 (1Н, дд), 7,01 (2Н, д), 3,94 (3Н, с), 3,87 (3Н, с), 3,60 (2Н, т), 3,49 (2Н, т), 3,38 (2Н, т), 3,03 (2Н, т), 1,75 (1Н, шир.с), МС 385 (М+Н).
Соединение 56: 4-Хлор-7-гидрокси-3 -(4-гидроксифенил)изохинолин-1 (2Н)-он о
В колбе Шленка растворяют 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он (соединение 6) (150 мг, 0,46 ммоль) и хлорид бензилтриэтиламмония (732 мг, 3,22 ммоль) в 37%-ной соляной кислоте (13 мл). Смесь нагревают при 130°С в течение 20 ч. После выпаривания при пониженном давлении добавляют воду (20 мл) и образованный осадок фильтруют, промывают водой, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент СНгС^/этанол: от 100/0 до 98/2 в качестве элюента, с получением соединения 56 (6 мг, 4%) в виде твердого вещества черного цвета.
1Н-ЯМР (ДМСО-й6) δ 11,42 (с, 1Н), 10,20 (с, 1Н), 9,82 (с, 1Н), 7,79 (д, 1Н), 7,58 (д, 1Н), 7,36 (д, 2Н), 7,33 (с, 1Н), 6,85 (д, 2Н).
Соединение 57: 7-Г идрокси-3 -(4-гидроксифенил)изохинолин-1 (2Н)-он
В запаянную трубку вводят соединение 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он (300 мг, 1 ммоль), хлорид бензилтриэтиламмония (1,68 г, 7 ммоль) и 37%-ную соляную кислоту (20 мл). Среду нагревают в течение 20 ч при 140°С, затем ее выпаривают досуха при пониженном давлении. После добавления воды (20 мл) в полученный остаток образуется осадок. Его фильтруют и сушат, получая ожидаемый 7-гидрокси-3-(4-гидроксифенил)изохинолин-1(2Н)-он 57 (200 мг, 74%) в виде твердого ве щества светло-коричневого цвета.
1Н-ЯМР (ДМСО-й6) δ 11,14 (шир.с, 1Н), 9,86 (шир.с, 1Н), 9,74 (шир.с, 1Н), 7,51 (м, 4Н), 7,16 (с, 1Н), 6,82 (с, 2Н), 6,67 (с, 1Н); МС 252 [М+Н]+;
Расчетный хим. состав для С15Н11ЫО3: С 71,14; Н 4,38; N 5,53. Найдено: С 69,77; Н 4,53; N 5,86.
Соединение 58: 6-Метокси-2-(4-метоксифенил)хинолин-4(1Н)-он
В колбе на 100 мл п-анизидин (300 мг, 2,4 ммоль) растворяют в 2-метоксиэтаноле (20 мл). К полученному выше раствору добавляют этил 3-(4-метоксифенил)-3-оксопропаноат (459 мкл, 2,4 ммоль), затем в реакционную среду добавляют также 3 капли уксусной кислоты. Смесь нагревают в течение 24 ч при 120°С. Затем эту смесь выпаривают при пониженном давлении и полученный остаток разбавляют дифениловым эфиром (10 мл), затем добавляют в трехгорлую колбу на 100 мл, содержащую кипящий дифениловый эфир (25 мл). Среду кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч и затем охлажденный раствор выливают в гексан (100 мл). Образованный осадок фильтруют, промывают гексаном, сушат и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент СНзС^/этанол: от 100/0 до 98/2 в качестве элюента, с получением соединения 58 (100 мг, 15%) в виде порошка светло-коричневого цвета.
1Н-ЯМР (ДМСО-й6) δ 11,55 (с, 1Н), 7,76 (д, 2Н), 7,69 (д, 1Н), 7,47 (с, 1Н), 7,28 (д, 1Н), 7,10 (д, 2Н), 6,26 (с, 1Н), 3,82 (с, 6Н); МС 282 [М+Н]+;
Расчетный хим. состав для С17Н15ЫО3-0,1 Н2О: С 72,05; Н 5,36; N 4,64. Найдено: С 71,85; Н 5,27; N 4,94.
Соединение 59: 3-(4-(3,3-Диметилбут-1-инил)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
- 43 032434
Соединение 59 синтезируют аналогично соединению 60, но исходят из 2-метилбут-3-ин-2-ола и соединения 32, синтез которого указан выше.
2Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО): 12,21 (1Н), 7,26 (1Н), 7,65 (1Н), 7,52 (1Н), 7,50 (4Н), 5,54 (1Н), 3,92 (1Н), 1,48 (6Н).
Соединение 60: 3-(4-(3,3-Диметилбут-1-инил)фенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
К раствору соединения 32 (100 мг, 0,26 ммоль, 1,0 экв.) в смеси ТГФ/ТЕА (1 мл/0,75 мл) в запаянной трубке добавляют алкин (87,6 мг, 1,06 ммоль, 4,0 экв.), РбС12(РРБ3) (15 мг, 0,021 ммоль, 0,08 мол.%) и Си! (2,0 мг, 0,011 ммоль, 0,04 мол.%).
Реакционную среду перемешивают при 70°С в течение 18 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды реакционную среду концентрируют при пониженном давлении, разбавляют этилацетатом, фильтруют через целит, промывают этилацетатом. Затем неочищенный продукт очищают хроматографией на силикагеле (циклогексан/этилацетат, 3:2), получая 3-(4-(3,3-диметилбут-1-инил)фенил)-7метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он 60 в виде твердого вещества желтого цвета (70 мг, выход=71%).
2Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО): 9,02 (1Н), 7,8 (1Н), 7,65 (1Н), 7,42 (2Н), 7,38 (3Н), 3,96 (3Н), 1,33 (9Н) Соединение 61: 2-Амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он (100 мг, 0,38 ммоль) растворяют в ДМФА (5 мл). При 0°С добавляют гидрид натрия (60% в масле, 30 мг, 0,76 ммоль). После 30 мин перемешивания при 0°С добавляют О-мезитиленсульфонилгидроксиламин (свежеприготовленный согласно литературе: Υ. Татига е! а1. 8уп1Бек1к 1977, 1) (82 мг, 0,38 ммоль) при температуре окружающей среды. Продолжают перемешивать в течение 12 ч, затем в реакционную среду добавляют воду (20 мл). Эту среду экстрагируют дихлорметаном. Органические фазы промывают водой, сушат над Мд8О4 и концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент СН2С12/этанол: от 100/0 до 98/2 в качестве элюента, с получением соединения 61 (51 мг, 46%) в виде твердого вещества оранжевого цвета.
2Н-ЯМР СЭСД δ 7,82 (с, 1Н), 7,50 (т, 3Н), 7,29 (д, 1Н), 7,01 (д, 2Н), 6,50 (с, 1Н), 5,18 (с, 2Н), 3,93 (д, 6Н);
МС 297 [М+Н]+.
Соединение 62: 2-Амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он (соединение Ώ5, 150 мг, 0,46 ммоль) растворяют в 5 мл диметилформамида. При 0°С добавляют карбонат калия (317 мг, 2,3 ммоль). После 30 мин перемешивания при 0°С добавляют 0мезитиленсульфонилгидроксиламин (свежеприготовленный согласно литературе: Υ. Татига е! а1. 8уп1Нек!к 1977, 1) (93 мг, 0,46 ммоль). Продолжают перемешивать в течение 12 ч при температуре окружающей среды. Затем среду нейтрализуют 20 мл 1 н. раствора соляной кислоты, затем экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Органические фазы промывают Н2О (3x10 мл), сушат над Мд8О4 и концентрируют в ва
- 44 032434 кууме. Полученный остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент СН2С12/этанол: от 100/0 до 97/3 в качестве элюента, с получением соединения 62 (65 мг, 41%) в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή-ЯМР СОС13 δ 7,88 (с, 1Н), 7,56 (д, 1Н), 7,40 (д, 3Н), 7,04 (д, 2Н), 5,10 (с, 2Н), 3,99 (с, 3Н), 3,88 (с, 3Н);
МС 342 [М+Н]+.
Соединение 64: 1,7-Диметокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин и соединение 65: 7-метокси-3-(4метоксифенил)-2-метилизохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он (200 мг, 0,71 ммоль) растворяют в 5 мл диметилформамида. При 0°С добавляют карбонат калия (4 91 мг, 3,5 ммоль). После 30 мин перемешивания при 0°С добавляют йодометан (444 мкл, 7,1 ммоль). Продолжают перемешивать в течение 12 ч при температуре окружающей среды. Среду нейтрализуют 20 мл 1 н. рас твора соляной кислоты, затем экстрагируют дихлорметаном (3х10 мл). Органические фазы промывают Н2О (3х10 мл), сушат над Мд8О4 и концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя градиент СН2С12/этанол: от 100/0 до 95/5 в качестве элюента, с получением соединения 64 (39 мг, 18%) в виде твердого вещества белого цвета и соединения 65 (122 мг, 58%) в виде твердого вещества бежевого цвета.
Соединение 64:
Ή-ЯМР СОС13 δ 8,11 (д, 2Н), 7,70 (д, 1Н), 7,58 (с, 1Н), 7,53 (с, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 7,03 (д, 2Н), 4,25 (с, 3Н), 3,97 (с, 3Н), 3,90 (с, 3Н);
МС 296 [М+Н]+.
Соединение 65: 7-Метокси-3-(4-метоксифенил)-2-метилизохинолин-1(2Н)-он
Ή-ЯМР СОС13 δ 7,84 (с, 1Н), 7,40 (д, 1Н), 7,31 (д, 2Н), 7,24 (д, 1Н), 6,97 (д, 2Н), 6,40 (с, 1Н), 3,93 (с, 3Н), 3,86 (с, 3Н), 3,44 (с, 3Н);
МС 296 [М+Н]+.
Соединение 66: 7-Метокси-3-(4-метоксифенил)-2-метил-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-2-метилизохинолин-1(2Н)-он (соединение 65, 50 мг, 0,17 ммоль) растворяют в 0,5 мл этилацетата и 1,5 мл уксусной кислоты. При 0°С в среду добавляют азотную кислоту (52,5%-ная, 38 мкл, 0,425 ммоль) и продолжают перемешивать в течение 3 ч. Добавляют 10 мл ледяной воды и полученный желтый осадок затем фильтруют, промывают водой и сушат, получая соединение 66 (25 мг, 44%) в виде твердого вещества желтого цвета.
Ή-ЯМР СОС13 δ 7,91 (с, 1Н), 7,50 (д, 1Н), 7,38 (д, 1Н), 7,32 (д, 2Н), 7,03 (д, 2Н), 3,98 (с, 3Н), 3,88 (с, 3Н), 3,35 (с, 3Н);
МС 341 [М+Н]+.
Соединение 67: 2-(2-Гидроксиэтил)-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона соединение 7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)он (300 мг, 1,06 ммоль) растворяют в 10 мл ДМФА. Затем добавляют карбонат калия (737 мг, 5,3 ммоль). После 30 мин перемешивания добавляют 2-бромэтанол (746 мкл, 10,6 ммоль). Продолжают перемешивать в течение 24 ч при 100°С. После достижения температуры окружающей среды среду нейтрализуют
- 45 032434 мл 1 н. раствора соляной кислоты, затем экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Органические фазы промывают Н2О (3x10 мл), сушат над Мё8О4 и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем со смесью циклогексан-этилацетат (60/40) в качестве элюента, получая соединение 67 (35 мг, 10%) в виде твердого вещества белого цвета.
1Н-ЯМР СВС13 δ 7,98 (д, 2Н), 7,68 (д, 1Н), 7,54 (д, 2Н), 7,32 (д, 1Н), 7,02 (д, 2Н), 4,84 (д, 2Н), 4,23 (шир.с, 1Н), 4,13 (д, 2Н), 3,96 (с, 3Н), 3,87 (с, 3Н); МС 326 [М+Н]+.
Соединение 68: 2-(2-Гидроксиэтил)-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона растворяют 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4нитроизохинолин-1(2Н)-он (соединение Ό5, 150 мг, 0,46 ммоль) в 5 мл ДМФА. Затем добавляют карбонат калия (317 мг, 2,3 ммоль). После 30 мин перемешивания добавляют 2-бромэтанол (329 мкл, 4,6 ммоль). Продолжают перемешивать в течение 24 ч при 50°С. После достижения температуры окружающей среды среду нейтрализуют 20 мл 1 н. раствора соляной кислоты, затем экстрагируют этилацетатом (3x10 мл). Органические фазы промывают Н2О (3x10 мл), сушат над Мё8О4 и концентрируют в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь циклогексанэтилацетат (60/40) в качестве элюента, с получением ожидаемого соединения 68 2-(2-гидроксиэтил)-7метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин-1(2Н)-она (73 мг, 43%) в виде твердого вещества жел того цвета.
' Н-ЯМР СВС13 δ 7,90 (с, 1Н), 7,49 (д, 1Н), 7,42 (д, 1Н), 7,34 (д, 2Н), 7,02 (д, 2Н), 4,12 (д, 2Н), 3,99 (с, 3Н), 3,89 (с, 3Н), 3,80 (д, 2Н), 2,80 (шир.с, 1Н); МС 393 [М+№]+.
Соединение 69: 4-Йод-7-метокси-1-(4-метоксибензилокси)-3-(4-метоксифенил)изохинолин
В колбе на 25 мл в атмосфере аргона 4-йод-7-метокси-3-(4-метоксифенил)изохинолин-1(2Н)-он (500 мг, 1,23 ммоль) растворяют в 15 мл безводного ТГФ. К полученному раствору добавляют 4метоксибензиловый спирт (217 мкл, 1,84 ммоль), трифенилфосфин (482 мг, 1,84 ммоль) и диизопропилазодикарбоксилат (261 мкл, 1,84 ммоль). После перемешивания в течение ночи при температуре окружающей среды среду гидролизуют 20 мл воды и экстрагируют дихлорметаном (3x20 мл). Органические фазы промывают водой (3x10 мл), сушат над Мё8О4 и концентрируют в вакууме. Соединение 69 получают перекристаллизацией в эфире (358 мг, 55%).
1Н-ЯМР СВС13 δ 7,94 (с, 1Н), 7,89 (д, 1Н), 7,34 (д, 1Н), 6,98 (д, 2Н), 6,91 (д, 2Н), 6,81 (д, 2Н), 6,72 (д, 2Н), 5,19 (с, 2Н), 3,97 (с, 3Н), 3,88 (с, 3Н), 3,74 (с, 3Н); МС 528 [М+Н]+.
Соединение 70: 7-Метокси-1-(4-метоксибензилокси)-3-(4-метоксифенил)-4-(трифторметил)изохинолин
В колбе на 10 мл 4-йод-7-метокси-1-((4-метоксибензил)окси)-3-(4-метоксифенил)изохинолин (100 мг, 0,2 ммоль) растворяют в 2 мл безводного ДМФА. К полученному раствору добавляют йодид меди (95,2 мг, 0,5 ммоль) и метил 2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)ацетат (119 мкл, 0,94 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 80°С реакционную среду фильтруют, промывают 30 мл дихлорметана. Полученный фильтрат промывают водой (3x10 мл), сушат над Мё8О4 и концентрируют в вакууме, получая ожидаемое соединение 70 (75 мг, 80%).
' Н-ЯМР СВС13 δ 7,97 (с, 1Н), 7,87 (д, 1Н), 7,37 (дд, 1Н), 6,98 (д, 2Н), 6,85 (д, 2Н), 6,80-6,62 (м, 4Н), 5,04 (с, 2Н), 3,96 (с, 3Н), 3,86 (с, 3Н), 3,75 (с, 3Н); МС 470 [М+Н]+.
Соединение 71: 1-Амино-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4-нитроизохинолин
- 46 032434
В колбе Шленка на 25 мл в атмосфере аргона 1-хлор-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4нитроизохинолин (100 мг, 0,43 ммоль) растворяют в 20 мл насыщенного раствора аммиака в этаноле. После перемешивания в течение 4 суток при 80°С среду концентрируют в вакууме, затем очищают на хроматографической колонке с силикагелем, используя смесь дихлорметан/этанол (95/5) в качестве элюента, с получением ожидаемого аминосоединения 71 (79 мг, 56%) в виде твердого вещества желтого цве та.
1Н-ЯМР СБС13 δ 7,81 (д, 1Н), 7,60 (д, 2Н), 7,45 (д, 1Н), 7,07 (с, 1Н), 6,99 (д, 2Н), 5,44 (с, 2Н), 3,99 (с, 3Н), 3,87 (с, 3Н); МС 326 [М+Н]+.
Соединение 72: 3-(4-гидроксифенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-он:
Соединение получали согласно методике, описанной В1§а§ш (В1§а§ш, Е.; Ьапдгаз, С; ТЫгоб, 8.; Ние1, С, Те1гаЕе4гоп 1996, 52 (31), 10427-10440.), исходя из 2-(4-(бензилокси)фенил)уксусной кислоты (Маппекеп§, Е.; Тоните, Ό.; ЕиЬе11, Ό., 8уп1Ье§18 2000, 2000 (09), 1214,1216) и 4-метоксибензальдегида. Промежуточный продукт О-бензил затем дебензилируют согласно способу, описанному Маппекепз (Маппекеп§, Е.; Тойгне, Ό.; ЬиЬе11, Ό., 8упЛе818 2000, 2000 (09), 1214, 1216).
1Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 12,01 (с, 1Н), 10,01 (с, 1Н), 7,70 (д, 1Н), 7,56 (д, 1Н), 7,49 (дд, 1Н), 7,31 (д, 1Н), 6,86 (д, 2Н), 3,91 (с, 3Н)
Соединение 73: трет-Бутил 4-(7-метокси-4-нитро-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)фенилкарбонат
Раствор 3-(4-гидроксифенил)-7-метокси-4-нитроизохинолин-1(2Н)-она (50,0 мг, 0,16 ммоль, 1,0 экв.), К2СО3 (22,15 мг, 0,16 ммоль, 1,0 экв.) и Вос2 (34,9 мг, 0,16 ммоль, 1,0 экв.) в ДМФА (1 мл), дегазованный аргоном в запаянной трубке, перемешивают при температуре окружающей среды в течение 18 ч. Реакционную среду разбавляют Н2О. Органические фазы экстрагируют этилацетатом (2 раза), промывают насыщенным раствором №С1 (2 раза), сушат над М§8О4, затем концентрируют при пониженном давлении, получая чистый продукт (выход=100%).
1Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ 12,21 (с, 1Н), 7,70 (д, 1Н), 7,63 (д, 1Н), 7,56 (д, 1Н), 7,50 (дд, 1Н), 7,33 (д, 1Н), 3,92 (с, 3Н), 1,51 (с, 9Н)
Соединение 74: 2-(п-Гидроксибензил)-3-фенилизохинолин-1(2Н)-он
В сухую колбу в вакууме добавляют ШОИЗи (68,23 мг, 0,71 ммоль, 3,0 экв.), Хап1р1ю8 (6,8 мг, 0,012 ммоль, 5 мол.%), РТ2ТЬа3 (10,8 мг, 0,012 ммоль, 5 мол.%). Реагенты растворяют в толуоле, перегнанном над СаН2 в атмосфере аргона (0,8 мл). Раствор красного цвета дегазуют в атмосфере аргона, облучая ультразвуком в течение 30 с. К каталитической системе добавляют раствор (2)-1-бром-2-(2-бром-2фенилвинил)бензола (80 мг, 0,24 ммоль, 1,0 экв.) и п-метоксибензиламина (114 мг, 0,83 ммоль, 3,5 экв.) в толуоле, перегнанном над СаН2 в атмосфере аргона (0,8 мл). После добавления реакционную среду дегазуют аргоном и перемешивают в течение 1 ч 30 мин при 55°С. Затем реакционную среду дегазуют моноксидом углерода (в баллоне, 1 атм.) в течение 25 мин при 55°С. Затем реакционную среду перемешивают при 90°С в течение 16 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды реакционную среду быстро охлаждают 1 н. раствором НС1 (5 мл). Органические фазы экстрагируют дихлорметаном (2 раза), промывают насыщенным раствором ШС1 (2 раза), сушат над М§8О4, затем концентрируют при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищают затем хроматографией на силикагеле (пен
- 47 032434 тан/диэтиловый эфир (7/3)), получая 2-(4-метоксибензил)-3-фенилизохинолин-1(2Н)-он (45 мг, выход=54%) в виде твердого вещества желтоватого цвета.
1Н-ЯМР (300 МГц, СЭС13): δ 8,49 (д, 1Н), 7,67 (т, 1Н), 7,50 (м, 2Н), 7,44-7,35 (м, 3Н), 7,22 (д, 2Н), 6,83 (д, 2Н), 6,69 (д, 2Н), 5,20 (с, 2Н), 3,76 (с, 3Н);
13С-ЯМР (75 МГц, СЭС13): δ 163,2 (СО); 158,6 (С); 143,9 (С); 136,5 (С); 136,0 (С); 132,5 (СН); 129,8 (СН); 129,3 (СН); 128,8 (СН); 128,4 (СН); 128,3 (СН, СН); 126,7 (СН); 125,6 (СН); 125,3 (С); 113,7 (СН); 108,2 (СН); 55,2 (-ОМе); 48,0 (-СН2-).
К раствору 2-(4-метоксибензил)-3-фенилизохинолин-1(2Н)-она, полученного выше (30 мг, 0,087 в СН2С12 (1 мл)), при -78°С добавляют раствор ВВг3 (170 мкл раствора (1М) в СН2С12). Раствор оранжевого цвета перемешивают от 0°С до температуры окружающей среды в течение 1 ч. Завершение реакции определяют по тонкослойной хроматографии (циклогексан/этилацетат/триэтиламин 1%). Добавляют Е!ОН (2 мл), насыщенный водный раствор ХаНРО4 и СН2С12 (2 мл). После экстракции собранные органические фазы сушат (Мд8О4) и выпаривают в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на колонке 8ΐϋ2 (циклогексан-этилацетат, 1:1). Получают 25 мг соединения 74 (93%).
Ή-ЯМР (СРС13, 300 МГц): δ 9,27 (с, Н); 8,41 (д, 1Н, 1=14); 7,66-7,52 (м, Н); 7,50-7,40 (м, 1Н); 7,467,32 (м, 3Н); 7,26-7,21 (м, 2Н); 6,72 (д, 1=7, 1Н); 6, (д, 1=7, 1Н); 6,46 (с, 1Н).
Пример 14. Модулирование устойчивости к химиотерапии паклитакселом соединениями по изобретению
Как описано в публикации Куи-Но Наи е! а1., Моди1а!юи оГ дгид гек1к!аисе Ьу а-!иЬи1т ш расШахе1гекЮаЩ йитаи 1иид саисег се11 1шек Еигореаи 1оита1 оГ Саисег 2000 36 (12): 1565-1571, выбирали клоны линии ХСПН460 (АТСС # НТВ-177, крупноклеточная карцинома легкого человека), резистентные к паклитакселу, которые были обозначены как ХСI-Н460/К.
Эти резистентные клетки, а также нормальные клетки ХСПН460 засеивали в 96-луночные планшеты (по 1000 на лунку) и инкубировали с разными концентрациями соединения 6, или паклитаксела, или винбластина (от 0,01 нМ до 100 мкМ) на протяжении 5 дней (120 ч).
В конце этой инкубации в культуральную среду добавляли Ноесйк! 33342 (1 мкг/мл) и живые клетки подсчитывали под флуоресцентным микроскопом ^е1кк Ахюуег! 200М), чтобы для каждого испытуемого соединения оценить концентрацию, уменьшающую на 50% число клеток через 120 ч по сравнению с контролем.
Пример 15. Оценка противовоспалительной активности соединения по изобретению
Чтобы вызвать воспалительный отек лапы крысы или мыши, осуществляли внутрикожную инъекцию каррагенина (САК) (1%, об./об.) и оценивали по методу Шш!ег С.А., К1к1еу Е.А. аид Хикк С.Ш. (Саггадееиаи-шдисед едета ш !йе йшдра^ оГ га!к ак аи аккау Гог аий-тПаттаЩгу дгидк. Ргос. 8ос. Ахр. Вю1. Мед, 1962, ν. 111: рр 544-7).
Соединения по изобретению давали перорально за 1-6 ч до инъекции САК. Раствор САК (1% в солевом растворе) инъецировали подкожно в подподошвенную часть правой задней лапы крысы (мыши). Затем измеряли объем воспалительной реакции путем плетизмографии через 1-5 ч после инъекции САК. Объем воспалительной реакции сравнивали с объемом у контроля (инъекция САК без обработки или после обработки носителем).

Claims (7)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение по меньшей мере одного соединения следующей общей формулы (I) х в которой:
    1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной при условии, что:
    a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
    b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула (I) соответствует ароматической системе следующей формулы ПА:
    Р1
  2. 2) и означает 0 или 1,
    - 48 032434
  3. 3) X означает:
    a) когда п=1, тогда X обозначает О или 8,
    b) когда п=0, тогда X обозначает ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ХИДС-Сб^лкил, 8(С3-С6)циклоалкил,
  4. 4) К1 означает
    ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
    СЕ3, СЩОК', где К' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО, ί,ΌΝΚΒ,ι. где Кс и Κι независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил и ЖсК| означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Кс и Ка вместе означают (С2-С6)алкил,
    ЫО2, Ν3, = СК, Ο(=Ν)ΝΗ2,
    ХКаКЬ, где Ка и КЬ независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, или
    Ка означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил и КЬ=СОК£, СООК£ или ίΌΝΚ'Κ’, где К£ и К£ означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ка и КЬ вместе означают (С2С6)алкил,
    Ка и КЬ могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола,
  5. 5) К2 означает фенил, незамещенный или замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ΝΗΚ,
    ОК·· где К· означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6)алкилом,
    ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, ΝΗ2, группу ΝΗ-СОКс, в которой Кс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь,
    О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, О-СОК1, где К1 означает О-(С1-С6)алкил, или ΝΚΚ8 причем К1 и К11 обозначают (С1-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4-(NΗ2-(СΗ2-СΗ2О)ρ)Ρй· в которой р означает целое число от 1 до 6,
  6. 6) К3 означает
    Н, (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С1-С6)алкил, ΝΗ2, группу пропаргил, ΟΗ2ΟΝ,
  7. 7) К4 и К5 независимо друг от друга означают
    Н, ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, или О-(С1-С6)алкил, или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3-С6)циклоалкил, галоген,
    К4 и К5 вместе означают (С1-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, и его фармацевтически приемлемых солей, в качестве агента, разрушающего сосуды, для профилактики и лечения патологического ангиогенеза, выбранного из ретинопатий и доброкачественных или злокачественных опухолей у млекопитающих.
    2. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п. 1, в котором когда п=0,
    X обозначает ОСН3.
    3. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1, в котором К1 обозначает Ν^Αι·, причем указанные заместители КаКЬ вместе образуют пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин.
    4. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1, в котором К1 обозначает гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола.
    5. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1, в котором К2 обозначает фенил, замещенный ОСН3.
    6. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1, в котором К2 обозначает фенил, замещенный гетероарилом, выбранным из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола.
    7. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1, в котором по мень
    - 49 032434 шей мере один из К4 и К5 обозначает группу ОСН3.
    8. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1 в качестве ингибитора протеинфосфатазы-1, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для профилактики и лечения патологического ангиогенеза, выбранного из ретинопатий и доброкачественных или злокачественных опухолей у млекопитающих.
    9. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1 в качестве ингибитора полимеризации тубулина, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для профилактики и лечения патологического ангиогенеза, выбранного из ретинопатий и доброкачественных или злокачественных опухолей у млекопитающих.
    10. Применение по меньшей мере одного соединения общей формулы (I) по п.1 в качестве ингибитора протеинфосфатазы-1, полимеризации тубулина, агента, разрушающего сосуды, и антипролиферативного агента для профилактики и лечения патологического ангиогенеза, выбранного из ретинопатий и доброкачественных или злокачественных опухолей у млекопитающих.
    11. Применение по одному из пп.1 и 8-10, в котором злокачественная опухоль представляет собой раковую опухоль.
    12. Применение по одному из пп.8-10, в котором группа К1 в общей формуле (I) выбрана из NО2 или пиррола.
    13. Применение по одному из пп.8-10, в котором группа К2 в общей формуле (I) означает фенил, замещенный в пара-положении группой, выбранной из ОКе, где Ке определен в п.1, галогеном, (С2С4)алкиновой группой, возможно замещенной триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2-пропилом или изопропилом.
    14. Применение по одному из пп.1-10, в котором группа К1 в общей формуле (I) выбрана из NО2 или пиррола, и группа К2 в общей формуле (I) означает фенил, замещенный в пара-положении группой, выбранной из ОКе, где Ке определен в п.1, галогеном, (С2-С4)алкиновой группой, возможно замещенной триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2-пропилом или изопропилом.
    15. Применение по п.14, в котором группа К3 в общей формуле (I) означает Н.
    16. Применение по п.1, в котором соединения формулы (I) выбраны из следующих соединений:
    - 50 032434
    17. Применение по одному из пп.1-15, в котором соединения формулы (I) выбраны из следующих соединений:
    - 51 032434
    18. Применение по одному из пп.1-15, в котором соединения формулы (I) выбраны из следующих соединений:
    19. Применение по одному из пп.1-15, в котором соединения формулы (I) выбраны из следующих соединений:
    - 52 032434
    20. Применение по одному из пп.1-15, в котором соединения формулы (I) выбраны из следующих соединений:
    1)
    21. Применение по одному из пп.1-20, в котором указанное соединение вводят перорально в дозе, составляющей от примерно 1 до примерно 200 мг/кг.
    22. Применение по п.21, в котором указанное соединение вводят перорально в дозе 40 мг/кг.
    23. Применение по одному из пп.1-20, в котором указанное соединение вводят парентерально, внутривенно в дозе, составляющей от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг/сут.
    24. Применение по п.23, в котором указанное соединение вводят парентерально, внутривенно в дозе
    - 53 032434
    10 мг/кг/сут.
    25. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения патологического ангиогенеза, выбранного из ретинопатий и доброкачественных и злокачественных опухолей, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, причем соединение соответствует следующей формуле (I):
    X
    Д Т Д (I)
    А2^''~Х'А'к5
    К1 5 в которой:
    1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной при условии, что:
    a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
    b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула (I) соответствует ароматической системе следующей формулы Σ-А:
    X
    К1
    2) п означает 0 или 1,
    3) X означает:
    a) когда п=1, тогда X обозначает О или 8,
    b) когда п=0, тогда X обозначает ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, НН-(С1-С6)алкил, 8(С3-С6)циклоалкил,
    4) К1 означает
    ОН, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
    СЕ3, СН2ОК', где К' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО,
    СОНКсКб, где К и Ка независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил и НКсКб означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Кс и Кб вместе означают (С2-С6)алкил,
    НО2, N3, СН, С( 8О3Н, 8О2НН2, 8О2ННСН3, N18ОА11;, СН28О2НКсКа, С1ΙΛΊ 18( АС
    8О2-НКаКЬ, 8О2-имидазол,
    ХКХь· где
    Ка и КЬ независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или
    Ка означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, и КЬ=СОК£, СООК£ или СОНК£К£, где К£ и К£ означают Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ка и КЬ вместе означают (С2С6)алкил,
    Ка и КЬ могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола,
    5) К2 означает фенил, возможно замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ННКа, ОКе, где Ке означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6)алкилом, ОРО3Н2, ОРО-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, N112, группу НН-СОКс, в которой Кс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь,
    О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, О-СОК1, где К1 означает О-(С1-С6)алкил, или НК^Кц, причем К и Ки обозначают (С1-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4- 54 032434
    6) Е3 означает
    Н, (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С1-С6)алкил, NН2, группу пропаргил, СН2С^
    7) Е4 и Е5 независимо друг от друга означают быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3-С6)циклоалкил, галоген,
    Е4 и Е5 вместе означают (С1-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, или его фармацевтически приемлемую соль.
    26. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором когда и=0,
    X обозначает ОСН3.
    27. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором Е1 обозначает NΕаΕЬ, причем указанные заместители ЕаЕЬ вместе образуют пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин.
    28. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором Е! обозначает гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола.
    29. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором Е2 обозначает фенил, замещенный ОСН3.
    30. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором Е2 обозначает фенил, замещенный гетероарилом, выбранным из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола.
    31. Фармацевтическая композиция по п.25, содержащая в качестве активного вещества соединение формулы (I) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, в котором по меньшей мере один из Е4 и Е5 обозначает группу ОСН3.
    32. Фармацевтическая композиция по одному из пп.25-31, содержащая в качестве активного вещества соединение в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, причем соединение выбрано из .ОМе
    МеО'
    7,
    МеО'
    8,
    МеО'
    - 55 032434
    МеО' о
    О
    СООМе
    48.
    33. Фармацевтическая композиция по одному из пп.25-31, содержащая в качестве активного вещества соединение, выбранное из следующих соединений:
    о
    - 56 032434
    34. Фармацевтическая композиция по одному из пп.25-31, содержащая в качестве активного вещества соединение, выбранное из следующих соединений:
    из пп.25-31, содержащая в качестве активного веще-
    35. Фармацевтическая композиция по одному ства соединение, выбранное из следующих соединений:
    - 57 032434
    36. Фармацевтическая композиция по одному из пп.25-31, содержащая в качестве активного вещества соединение, выбранное из следующих соединений:
    37. Соединение следующей общей формулы (I): х в которой:
    1) связь между углеродом 1 и группой X является одинарной или двойной, связь между азотом 2 и углеродом 1 может быть одинарной или двойной
    - 58 032434 при условии, что:
    a) когда связь между X и указанным углеродом 1 является двойной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является одинарной, и
    b) когда связь между X и указанным углеродом 1 является одинарной, то связь между азотом 2 и углеродом 1 является двойной и формула (I) соответствует ароматической системе следующей формулы Ι-А:
    К1
    2) п означает 0 или 1,
    3) X означает:
    a) когда п=1, X обозначает О, 8,
    b) когда п=0, X обозначает ОРО3Н2, 0Р0-(О-(С1-С2)алкил)2 или О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, МН-(С1-С6)алкил, 8(С3-С6)циклоалкил,
    4) В1 означает
    ОРО3Н2, 0Р0-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
    СР3, СН20В', где В' означает Н или (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, СНО,
    С0NΚсΚб, причем Вс и Вб независимо друг от друга означают Н, (С1-С6)алкил и NΚсВб означает аминокислоту, связанную своей аминогруппой, выбранную из серина и треонина, (С3-С6)циклоалкил, или Вс и Вб вместе означают (С2-С6)алкил,
    N02, N3, С(=^МЙ2,
    ЖаВЬ, где
    Ва и ВЬ независимо друг от друга означают Н, СНО, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил, или
    Ва означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил и ВЬ=С0ВЬ С00Вί или СХ)М<(К(ч где Вί и Вг означают Н, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, Ва и ВЬ вместе означают (С2-С6)алкил, или Ва и ВЬ могут образовать цикл С5-С7, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола,
    5) В2 означает фенил, замещенный одним-тремя заместителями, выбранными из галогена, ОН, ИНВа,
    0Вс, где Вс означает бензил, метилентриазол, незамещенный или замещенный (С1-С6) алкилом,
    ОРО3Н2, 0Р0-(О-(С1-С2)алкил)2, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, N112группу NН-С0Вс, в которой Вс означает Н, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил или аминокислотную цепь, О-(С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора,
    0-С0Вь где В3 означает О-(С1-С6)алкил или NВ1В11, причем В, и Вп обозначают (С3-С6)алкил, (С2-С4)алкильную группу, причем алкильная группа может быть замещена одним или несколькими атомами фтора, (С2-С4)алкенильную группу, (С2-С4)алкинильную группу, возможно замещенную триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2пропилом или изопропилом, гетероарил, выбранный из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола, циклогексил, пиперазин, морфолин, тиоморфолин, пиперидин, группу 4-(ХН2-(СН2-СН2О)р)Р1, в которой р означает целое число от 1 до 6
    6) В3 означает
    Н, (С1-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3С6)циклоалкил, О-(С]-С6)алкил, КН2, группу пропаргил, СН2СН
    7) В4 и В5 независимо друг от друга означают
    Н, ОН, ОРО3Н2, 0Р0-(О-(С1-С2)алкил)2, или О-(С]-С6)алкил, или (С]-С6)алкил, причем алкил может быть замещен одним или несколькими атомами фтора, (С3-С6)циклоалкил, галоген, или В4 и В5 вместе означают (С1-С2)алкенилдиокси, возможно замещенный одним или несколькими атомами фтора, за исключением следующих соединений:
    когда Х=0, В3=Н и когда связь между углеродом 1 и группой X является двойной:
    a) В1=NН2, В2=4-метоксифенил, В4=0СН3 и В5=Н,
    b) В1=N02, В2=4-метоксифенил, В4=0СН3 и В5=Н,
    c) В1=N02, В2=4-метоксифенил, В4=Н и В5=Н,
    б) В1=NН2, В2=4-метоксифенил, В4=Н и В5=Н,
    с) В1=NН2, В2=фенил или 4-ОН-фенил, замещенный или незамещенный, В4=Н, ОН, О-(С1- 59 032434
    С6)алкил, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил и К5=Н, ОН, О-(С1-С6)алкил, (С1-С6)алкил, (С3-С6)циклоалкил,
    ί) соединения, в которых один из Κ4 и Κ5 означает галоген.
    38. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором когда п=0,
    X обозначает ОСН3.
    39. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором Κ1 обозначает ΝΚΚ,, причем указанные заместители КаКЬ вместе образуют пирролидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин.
    40. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором Κ1 обозначает гетероарил, выбранный из пи ридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола и тетразола.
    41. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором К2 обозначает фенил, замещенный ОСН3.
    42. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором К2 обозначает фенил, замещенный гетероарилом, выбранным из пиридина, имидазола, оксазола, триазола, пиррола, бензофурана, тиофена, бензотиофена и индола.
    43. Соединение общей формулы (I) по п.37, в котором по меньшей мере один из Κ4 и Κ5 обозначает группу ОСН3.
    44. Соединение по одному из пп.37-43 общей формулы (I)
    X в которой п=0, связь между углеродом 1 и группой X является одинарной и X обозначает ОСН3, и Κ1 обозначает NО2, или п=1, связь между углеродом 1 и группой X является двойной, Х=О или 8 и Κ2 означает фенил, замещенный в положении 4 группой, выбранной из ОН, ОСН3, О-бензила, Вг, (С2-С4)алкинильной группы, возможно замещенной триметилсилилом, трет-бутилом, гидрокси-2-пропилом или изопропилом.
    45. Соединение по одному из пп.37-43, выбранное из следующих соединений:
    - 60 032434
EA201290843A 2010-03-01 2011-03-01 Применение изохинолонов для получения лекарственных средств, изохинолоны и способ их синтеза EA032434B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1000829A FR2956816B1 (fr) 2010-03-01 2010-03-01 Utilisation de quinolones pour la preparation de medicaments, nouvelles quinolones et leur procede de synthese
PCT/FR2011/050431 WO2011107709A1 (fr) 2010-03-01 2011-03-01 Utilisation d'isoquinolones pour la preparation de medicaments, nouvelles isoquinolones et leur procede de synthese

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201290843A1 EA201290843A1 (ru) 2013-04-30
EA032434B1 true EA032434B1 (ru) 2019-05-31

Family

ID=43247863

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290843A EA032434B1 (ru) 2010-03-01 2011-03-01 Применение изохинолонов для получения лекарственных средств, изохинолоны и способ их синтеза

Country Status (7)

Country Link
US (1) US8883763B2 (ru)
EP (1) EP2542239B1 (ru)
JP (1) JP5856086B2 (ru)
CA (1) CA2791490C (ru)
EA (1) EA032434B1 (ru)
FR (1) FR2956816B1 (ru)
WO (1) WO2011107709A1 (ru)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102875466A (zh) * 2012-04-23 2013-01-16 中国药科大学 异喹啉酮衍生物,其制备方法及其医药用途
RU2654216C2 (ru) * 2012-08-08 2018-05-17 Мерк Патент Гмбх Производные (аза-)изохинолинона
CN103709138B (zh) * 2013-12-23 2015-09-09 河南大学 5-(氟喹诺酮c3-叉甲基)-3-吡咯酰胺衍生物、制备方法及应用
RU2585623C1 (ru) * 2014-11-20 2016-05-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологически активных веществ Российской академии наук СПОСОБ СИНТЕЗА 7-МЕТОКСИ-4-НИТРО-3-(п-МЕТОКСИФЕНИЛ) ИЗОХИНОЛИНОНА
KR101800876B1 (ko) * 2015-10-28 2017-11-27 전남대학교 산학협력단 신규한 디아릴이소퀴놀론 또는 디아릴이소퀴놀린 화합물 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
RU2613146C1 (ru) * 2015-11-17 2017-03-15 Общество с ограниченной ответственностью "Биофармацевтические инвестиции РВК" (ООО "Биофонд РВК") Желатиновая капсула избирательного разрушения сосудов в опухолях
JPWO2018074563A1 (ja) * 2016-10-21 2019-08-08 学校法人慶應義塾 フェニルフタルイミド修飾体及びそれを有効成分とする医薬組成物
KR20200128379A (ko) * 2017-10-30 2020-11-12 신블리아 테라퓨틱스 인코포레이티드 Irak4 억제제 및 이의 용도
CN110498784B (zh) * 2019-05-20 2022-06-14 广东克冠达医药科技有限公司 一类川陈皮素衍生物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
AU2022380979A1 (en) 2021-11-02 2024-06-06 Flare Therapeutics Inc. Pparg inverse agonists and uses thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992003419A1 (en) * 1990-08-23 1992-03-05 Synphar Laboratories, Inc. Isocarbostiryl compounds and antitumor use thereof
WO2006058201A2 (en) * 2004-11-23 2006-06-01 Reddy Us Therapeutics, Inc. Heterocyclic and bicyclic compounds, compositions and methods
EP1724262A1 (en) * 2004-02-06 2006-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 1-(2h)-isoquinolone derivative
EP1854792A1 (en) * 2005-02-22 2007-11-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 1-(2h)-isoquinolone derivative
WO2008063548A2 (en) * 2006-11-17 2008-05-29 Rexahn Pharmaceuticals, Inc. 5, 6, or 7-substituted-s- (hetero)arylisoquinolinamine derivatives as antitumor agents

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1526841A (fr) * 1966-06-01 1968-05-31 Nouveaux dérivés de la 2 h-isoquinoléine-thione-1 et procédé de leur préparation
US3452027A (en) * 1967-07-03 1969-06-24 American Home Prod 2-hydroxyalkylisocarbostyrils
FR2728900B1 (fr) * 1994-12-29 1997-01-31 Synthelabo Derives de 3-phenylisoquinolein-1(2h)-one, leur preparation et leur application en therapeutique
JP3989102B2 (ja) * 1997-10-02 2007-10-10 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 縮合ピリジン誘導体
CZ300589B6 (cs) * 2006-09-04 2009-06-24 Univerzita Palackého Deriváty 2-fenyl-3-hydroxychinolin-4(1H)-onu a zpusob jejich prípravy a použití
WO2008036540A2 (en) * 2006-09-20 2008-03-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Rho kinase inhibitors
TWI499418B (zh) * 2009-05-21 2015-09-11 Nerviano Medical Sciences Srl 異喹啉－１（２ｈ）－酮衍生物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992003419A1 (en) * 1990-08-23 1992-03-05 Synphar Laboratories, Inc. Isocarbostiryl compounds and antitumor use thereof
EP1724262A1 (en) * 2004-02-06 2006-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 1-(2h)-isoquinolone derivative
WO2006058201A2 (en) * 2004-11-23 2006-06-01 Reddy Us Therapeutics, Inc. Heterocyclic and bicyclic compounds, compositions and methods
EP1854792A1 (en) * 2005-02-22 2007-11-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 1-(2h)-isoquinolone derivative
WO2008063548A2 (en) * 2006-11-17 2008-05-29 Rexahn Pharmaceuticals, Inc. 5, 6, or 7-substituted-s- (hetero)arylisoquinolinamine derivatives as antitumor agents

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BISAGNI, E. LANDRAS, C. THIROT, S. HUEL, C.: "A convenient way to dibenzo[c,h]-1,5-naphthyridines (11-aza-benzo[c] phenanthridines).", TETRAHEDRON, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS, AMSTERDAM, NL, vol. 52, no. 31, 29 July 1996 (1996-07-29), AMSTERDAM, NL, pages 10427 - 10440, XP004104029, ISSN: 0040-4020, DOI: 10.1016/0040-4020(96)00579-0 *
CHO W-J, ET AL.: "Molecular Modeling of 3-Arylisoquinoline Antitumor Agents Active Against A-549. A Comparative Molecular Field Analysis Study", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, PERGAMON, GB, vol. 10, no. 9, 1 January 2002 (2002-01-01), GB, pages 2953 - 2961, XP002485790, ISSN: 0968-0896, DOI: 10.1016/S0968-0896(02)00137-2 *
CHO W-J, ET AL.: "Synthesis of New 3-Arylisoquinolinamines: Effect on Topoisomerase I Inhibition and Cytotoxicity", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, AMSTERDAM, NL, vol. 13, no. 24, 1 January 2003 (2003-01-01), AMSTERDAM, NL, pages 4451 - 4454, XP002485791, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/j.bmcl.2003.09.001 *
CHO, W.-J. PARK, M.-J. CHUNG, B.-H. LEE, C.-O.: "Synthesis and biological evaluation of 3-arylisoquinolines as antitumor agents", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, AMSTERDAM, NL, vol. 8, no. 1-6, 6 January 1998 (1998-01-06), AMSTERDAM, NL, pages 41 - 46, XP004136619, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/S0960-894X(97)10190-1 *
WON-JEA CHO, EUI-KI KIM, MYUN-JI PARK, SANG-UN CHOI, CHONG-OCK LEE, SEUNG HOON CHEON, BO-GIL CHOI, BYUNG-HO CHUNG: "Synthesis and comparative molecular field analysis (CoMFA) of antitumor 3-arylisoquinoline derivatives�", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY, PERGAMON, GB, vol. 6, 1 January 1998 (1998-01-01), GB, pages 2449 - 2458, XP009143318, ISSN: 0968-0896 *

Also Published As

Publication number Publication date
US8883763B2 (en) 2014-11-11
CA2791490A1 (fr) 2011-09-09
CA2791490C (fr) 2020-04-07
EA201290843A1 (ru) 2013-04-30
FR2956816B1 (fr) 2012-05-18
JP2013521265A (ja) 2013-06-10
EP2542239B1 (fr) 2015-11-11
US20130096083A1 (en) 2013-04-18
EP2542239A1 (fr) 2013-01-09
WO2011107709A1 (fr) 2011-09-09
JP5856086B2 (ja) 2016-02-09
FR2956816A1 (fr) 2011-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA032434B1 (ru) Применение изохинолонов для получения лекарственных средств, изохинолоны и способ их синтеза
JP6790040B2 (ja) Ｆａｓｎを阻害するための新規化合物および組成物
RU2124510C1 (ru) Производные аминохинолона, замещенные фенильной или гетероароматической группой
JP6049630B2 (ja) Ａｉｄｓを処置する為に有用な化合物
KR101421786B1 (ko) 단백질 키나제 및 히스톤 디아세틸라제의 억제제로서 나프탈렌 카르복스아미드 유도체, 그 제조 방법 및 용도
ES2536313T3 (es) Imidazo[4,5-c]quinolinas como inhibidores de ADN–-PK
EP2799437B1 (en) Quinoline and cinnoline derivatives and use thereof
WO2005009971A1 (ja) キノロン誘導体又はその塩
JP6005524B2 (ja) ユビキチン特異的プロテアーゼ７の選択的阻害剤として有用なアミドアクリジン誘導体
JP2020510642A (ja) ｏ−アミノヘテロアリールアルキニル基含有化合物およびその製造方法と用途
CN106279147A (zh) 一种吡啶并氮杂环化合物及其制备方法和用途
EA028035B1 (ru) Производные пиразолопирролидин-4-она и их применение при лечении заболевания
WO2006077851A1 (ja) キノロン誘導体又はその塩
CN112920176B (zh) 可诱导prc2蛋白复合物核心亚基降解的双功能化合物和药物组合物及应用
WO2022240966A1 (en) Compounds and methods for yap/tead modulation and indications therefor
WO2023279938A1 (zh) 2,6,8-多取代咪唑并[1,2-a]吡嗪及其合成方法和应用
JP6987125B2 (ja) 新規２，４，６−三置換ｓ−トリアジン化合物並びにその製造方法および使用
CN113461687B (zh) 2,8-氮杂-[4,5]十螺环酮衍生物及其制备方法和用途
JPH05507072A (ja) Ｅｇｆレセプタチロシンキナーゼを阻害する複素環式エテンジイル化合物
CN111108083B (zh) 氨基亚甲基环己烷1,3-二酮化合物的用途
CN118359627A (zh) 具有四环并环结构的mta协同性prmt5抑制剂化合物
CA3177022A1 (en) Compounds and methods for yap/tead modulation and indications therefor
JP4853824B2 (ja) キノロン誘導体を有効成分とする医薬組成物
CN109134433B (zh) 一种抑制rock的化合物及其应用
CN111164087B (zh) 有助于抑制人三叶因子3的化合物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM