ES2265669T3

ES2265669T3 - Uso de una composicion nutritiva especifica para un organo.

Info

Publication number: ES2265669T3
Application number: ES98950034T
Authority: ES
Inventors: Olivier Ballevre; Lionel Bovetto; Sophie Charrier-Bromont; Jean Grizard; Jean-Claude Maire
Original assignee: Societe des Produits Nestle SA; Nestle SA
Current assignee: Societe des Produits Nestle SA; Nestle SA
Priority date: 1997-09-16
Filing date: 1998-09-14
Publication date: 2007-02-16
Anticipated expiration: 2018-09-14
Also published as: AU9625498A; CA2300076A1; EP1024709A1; DE69834929D1; ATE329500T1; DE69834929T2; EP1024709B1; HK1031664A1; WO1999013738A1

Abstract

Un procedimiento para proporcionar una fórmula nutritiva, que comprende una forma seleccionada de proteína láctica hidrolizada, como fuente de proteína, para fomentar el crecimiento o recuperación de un órgano específico, en un mamífero, seleccionado entre el intestino delgado o el duodeno, el yeyuno, y el hígado, en donde, el procedimiento, comprende las etapas de determinar un órgano específico, de entre varios órganos, e hidrolizar una proteína láctica, a un grado de hidrólisis predeterminado, de tal forma que, el grado de hidrólisis, determine el órgano cuyo crecimiento o recuperación se fomenta.

Description

Uso de una composición nutritiva específica para un órgano.

Resumen de la invención

La presente invención, se refiere a un procedimiento para proporcionar nutrición a un paciente, con objeto de provocar un efecto deseado, en un órgano seleccionado; por ejemplo, incrementando la concentración de proteínas, en la tasa de síntesis de proteínas, en el órgano.

Antecedentes y trasfondo de la invención

Las fórmulas nutritivas basadas en proteínas de procedencia natural, son bien conocidas en la nutrición infantil, y en la nutrición clínica; de una fórmula específica, las fórmulas basadas en proteínas lácticas y de soja. Adicionalmente, los hidrolizados de estas proteínas, se utilizan comúnmente en la nutrición infantil y la nutrición clínica; de una forma particular, en fórmulas hipoalergénicas y en fórmulas para pacientes afectados de varios problemas de adsorción intestinal. También, los hidrolizados, se utilizan usualmente en la nutrición clínica, debido a su reducida tendencia a coagular, en comparación con las proteínas. Se conoce, también, el utilizar aminoácidos libres en fórmulas nutritivas; bien ya sea solos, o bien ya sea en combinación con proteínas o hidrolizados de proteínas. Usualmente, los aminoácidos libres, se utilizan para pacientes afectados de enfermedades particulares, o de patologías, tales como la enfermedad del intestino inflamado, diarrea intratable, síndrome del intestino corto, y por el estilo.

El resumen de la base de datos WPI, con el número 92 - 013 563, describe soluciones que contienen aminoácidos libres y dipéptidos de glutamina y aminoácidos de cadena ramificada, para mantener y mejorar las funciones del tracto intestinal, prevenir el catabolismo de las proteínas musculares, y acelerar la síntesis de las proteínas de tejidos.

La solicitud de patente europea EP - A - 0 189 161, describe una fórmula nutricional entérica, hipoalergénica. La fórmula, contiene hidratos de carbono, lípidos, hidrolizados de proteínas, vitaminas y minerales, y un almidón modificado con anhídrido octenilsuccínico, el cual se utiliza como agente emulsionante único, de lípidos.

La patente estadounidense US 5 221 668, describe un producto nutritivo, líquido, que comprende un sistema de proteínas, el cual comprende, en peso, un 20 - 30% de hidrolizado de lactoalbúmina, un 60 - 70% de caseinato sódico, parcialmente hidrolizado, y aproximadamente un 8 - 14% de L-arginina. El producto, es específico para pacientes afectados de trauma y pacientes que han sufrido cirugía.

La solicitud de patente europea EP - A - 0 704 218, describe un producto para uso como agente reforzante de los huesos, el cual comprende una fracción péptida, básica, derivada de la leche. La fracción péptida, básica, derivada de la leche, se obtiene procediendo a prepara leche, o una primera materia derivada de la leche, en una resina intercambiadora de cationes, y eluyendo la fracción adherida. Se sugiere que, el producto, fomenta el crecimiento de los osteoblastos, y suprime la resorción de los osteoclastos.

La patente estadounidense US 5 580 903, describe un procedimiento para tratar un paciente en necesidad de estimulación de la mitosis de hematocitos, el cual comprende el administrar, a este paciente, una cantidad efectiva de alanina y/o glutamina.

El documento de patente internacional WO 97/39 641, describe un aditivo para su uso en un nutriente de suplemento de energía o nutriente metabólico, en forma de una bebida, u otro nutriente para atletas u otros, que se encuentren en necesidad de un incremento del nivel de glicógeno. El aditivo, comprende un hidrolizado de proteína, el cual puede ser de origen animal o vegetal.

En todos los casos, la proteína, los hidrolizados o los aminoácidos libres, en la fórmula nutritiva, están pensados para proporcionar una fuente de aminoácidos, para cumplir con las necesidades generales de aminoácidos del paciente. El utilizar proteína, utilizar hidrolizado, utilizar aminoácido libre, o utilizar una mezcla de éstos, dependerá, usualmente, de las condiciones del consumidor que está previsto. Si el consumidor previsto, es una persona normal, sana, se utilizará, generalmente, una dieta de proteína entera. No obstante, si la persona está afectada de una enfermedad o una patología particular, o es alérgico a la proteína entera, o se encuentra en riesgo de desarrollar una alergia, se utiliza, generalmente, una mezcla de hidrolizados o de aminoácidos, la cual pueda tolerase o absorberse de una forma mejor.

Existe también un interés en cuanto a la utilización de hidrolizados de proteínas, en nutrición, debido al hecho de que, se encuentra generalmente aceptado que, los hidrolizados de proteínas, se absorben de una forma más rápida, en el intestino, que la proteína entera o aminoácidos libres (Rerat A.A.; 1993; Proceedings of the Nutrition Society, - Procedimientos de la Sociedad de Nutrición -, 52, 335 - 334). No obstante, no está claro si, esta absorción más rápida, se traslada en una mejor utilización del nitrógeno, debido al hecho de que, los estudios llevados a cabo hasta la fecha, han proporcionado resultados conflictivos (Collin - Vidal et al.; 1994; Endocrinol. Metab., 30, E 907-914). Adicionalmente, este interés, es en el sentido de proporcionar una fuente de aminoácidos, con objeto de cumplir con las necesidades generales de aminoácidos del paciente, y no para cumplir específicamente con las necesidades de órganos individuales.

No obstante, en muchos casos, una persona, puede estar sufriendo de problemas específicos de un órgano, tal como la depleción de células, funcionamiento incompleto o impropio, subdesarrollo o fatiga, en los órganos. El proporcionar nutrición a la persona, en sentido general, si bien es beneficioso, no se dirige a estos problemas específicos de órganos.

En la literatura especializada, se han reportado varios péptidos de origen natural y péptidos sintéticos, como siendo de utilidad para estimular el crecimiento de tejido específico. Así, por ejemplo, la publicación de patente internacional WO 92/20 707, da a conocer ciertos análogos de bombesina, los cuales pueden utilizarse para estimular o antagonizar el crecimiento de tejido pulmonar. La bombesina, es en sí misma un péptido de 14 aminoácidos, el cual se aísla de la piel de la rana Bombina Bombina. Como otro ejemplo, la patente europea EP 0 017 867, da a conocer el uso de un hidrolizado de un extracto de plasma sanguíneo, como un agente para incrementar el crecimiento del hígado. Otros péptidos sintéticos para incrementar el crecimiento del hígado, se dan a conocer en Pickart et al; 1973; Biochem. Biophys. Res. Commun. 54 (2), 562-6 (Gly-His-Lys); y la solicitud de patente japonesa 05 - 229 940 (di- y tri-péptidos que contienen Ala y Gln). No obstante, estos péptidos, no se consideran como proteína dietética, y no es practicable el utilizarlos como la fuente primaria de proteínas, en las fórmulas nutritivas.

Alimentary Pharmacology and Therapeutics, Vol. 11, Nº 4, páginas 735 - 740, da a conocer el uso de una dieta elemental oral (Peptamen), como un tratamiento primario para la enfermedad de Crohn.

American Journal of Physiology, Vol. 269, Nº 5, páginas L625 - L630, da a conocer el uso de Peptamen, como una dieta elemental para ratones mutantes de homozigosis CFTR 5489X, dando como resultado una tasa de supervivencia mejorada, debido a la reducción de la obstrucción intestinal y una reducción en la dilatación de células crípticas.

Journal of Pedriatic Gastroenterology and Nutrition, 22, 2, 186 - 193, da a conocer el uso de proteína de suero láctico, para la reparación intestinal de tasas de malnutrición en el destete, dando como resultado una mejora de los parámetros evaluados, incluyendo la permeabilidad intestinal a macromoléculas, actividad enzimática del yeyuno y del hígado.

Se ha descubierto ahora que, la forma en la cual se proporciona la proteína dietética, tiene un efecto selectivo en la concentración de proteínas, la concentración de RNA, la eficacia ribosómica, y la tasa de síntesis de proteína en diferentes órganos. Esto ofrece la desventaja de ser apto para promover el crecimiento o recuperación de un órgano particular, proporcionado la proteína dietética en una forma que incrementa la concentración de proteínas o la tasa de síntesis de proteína, o ambas, en el órgano.

Correspondientemente en concordancia, la presente invención, proporciona un procedimiento para proporcionar una fórmula nutritiva, tal y como se define en las reivindicaciones anexas.

Sin ánimo de querer ligarlo a ninguna teoría, se cree que, los hidrolizados de proteínas que tienen un alto grado de hidrólisis, se digieren rápidamente y se absorben en el intestino delgado superior. Por lo tanto, el substrato de proteínas, es asequible para las síntesis de proteína, en el intestino delgado superior. Así, de este modo, el intestino delgado superior, puede tomarse como diana. La proteína intacta y los hidrolizados de proteína que tienen un reducido grado de hidrólisis, tardan más tiempo en digerirse, y se absorben más lentamente, en el intestino delgado inferior. Así, por lo tanto, el substrato de proteínas, es asequible para la síntesis de proteínas en el intestino delgado inferior. También, la tasa inferior de absorción, puede dar como resultado que, más substrato de proteínas, sea asequible para la síntesis de proteínas, en los músculos, debido al decrecimiento en la oxidación del hígado. Así, de este modo, el intestino delgado inferior y los músculos, pueden tomarse como diana.

La fuente de proteína láctica, se encuentra en forma de un hidrolizado de proteínas, o aminoácidos libres, o una combinación de éstos. De una forma preferible, los hidrolizados de proteína, son hidrolizados de proteína láctica, o una mezcla de péptidos aislados de hidrolizados de proteína láctica.

En una forma específica de presentación, la invención, proporciona un hidrolizado de proteínas, que tiene un grado de hidrólisis de por lo menos un porcentaje de aproximadamente un 30%, de una fórmula nutritiva, para incrementar la concentración y la síntesis de proteínas, en el intestino delgado. De una forma preferible, el hidrolizado de proteína, comprende un porcentaje de más de aproximadamente un 30%, en peso, de di- y tri-péptidos. Adicionalmente, el hidrolizado de proteína, tiene preferiblemente una concentración de nitrógeno no proteínico, de por lo menos un porcentaje del 85%, del total de nitrógeno.

De una forma preferible, la fórmula, se utiliza para tratar pacientes que sufren de enfermedad o daños en el duodeno y yeyuno, y para fomentar la recuperación del duodeno y del yeyuno. El procedimiento, se utiliza, de una forma preferible, para tratar pacientes que sufren de enfermedades o daños en el duodeno, y para fomentar la recuperación del duodeno.

De una forma preferible, el hidrolizado de proteínas, comprende más de aproximadamente un 20%, en peso, de di- y tri-péptidos. Adicionalmente, el hidrolizado de proteínas, tiene preferiblemente una concentración de nitrógeno no proteínico, de un porcentaje de por lo menos un 60%, del nitrógeno total.

De una forma preferible, el procedimiento, puede utilizarse para tratar pacientes afectados de enfermedades o daños en el yeyuno, con objeto de fomentar la recuperación del yeyuno.

De una forma preferible, la presente invención, proporciona el uso de un hidrolizado de proteínas, que tiene un grado de hidrólisis de por lo menos un porcentaje de aproximadamente el 30%, en la fabricación de una fórmula para el tratamiento de un paciente afectado de una enfermedad o de daños en el duodeno.

La presente invención, puede también utilizarse para proporcionar una proteína dietética, en forma de aminoácidos libres, para mantener la síntesis muscular de proteínas, y para la profilaxis o tratamiento de atrofia muscular.

De una forma preferible, la fórmula nutritiva para incrementar la concentración de proteínas en el intestino, comprende: una fuente de proteína dietética, en forma de un hidrolizado de proteínas, que tiene un grado de hidrólisis de por lo menos aproximadamente un porcentaje del 30%, una concentración de nitrógeno no proteínico de por lo menos un porcentaje del 85%, y que comprende, por lo menos, un porcentaje de aproximadamente un 30%, en peso, de di- y tri-péptidos; una fuente de hidrocarburos; y una fuente de lípidos.

De una forma preferible, por lo menos un porcentaje de aproximadamente un 60% de los componentes del hidrolizado de proteínas, tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 367; de una forma más preferible, por lo menos un porcentaje de aproximadamente un 50% de los componentes del hidrolizado de proteínas, tiene un peso molecular comprendido dentro de unos márgenes que van de aproximadamente 127 a aproximadamente
367.

La fórmula nutritiva es, de una forma preferible, una fórmula administrable enteralmente; por ejemplo, en forma de una materia en polvo, un concentrado líquido, o una bebida lista para beberse.

Las formas de presentación de la invención, se describirán, ahora, únicamente por vía de ejemplos.

Descripción detallada de formas preferidas de presentación de la invención

En esta especificación, el término "grado de hidrólisis" (DH), significa el porcentaje de nitrógeno en forma de nitrógeno amino, en comparación con el nitrógeno total. Ésta es una medida de la extensión a la cual se ha hidrolizado la proteína.

Se ha descubierto ahora, el hecho de que, la forma en la cual se consume la proteína dietética, influye en varios órganos, en diferentes extensiones. Esto proporciona la significativa ventaja de que, el crecimiento o recuperación de un órgano específico, puede mejorarse selectivamente, mediante la nutrición. Todo lo que se requiere, es el mejorar específicamente el crecimiento o recuperación de un órgano, al que se le administra una fórmula nutritiva la cual contiene la proteína dietética, en la forma correcta.

La proteína dietética que se utiliza, son mezclas de proteínas lácticas; mezclas de aminoácidos libres; o combinaciones de éstos. Se prefieren, de una forma particular, las proteínas lácticas, tales como la caseína, y la proteína de suero láctico.

Con objeto de objetivar la nutrición al intestino delgado, como diana, una forma apropiada de la proteína dietética, es hidrolizado de proteína láctica. Los hidrolizados de caseína y de proteína de suero láctico, son los que se prefieren. La extensión a la cual la proteína se hidroliza, influencia el área del intestino, en el cual, la proteína se digiere, y se utiliza para la proteína de síntesis.

De una forma particular, se ha encontrado que, los hidrolizados que tienen un grado de hidrólisis comprendido dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente un 15% hasta aproximadamente un 25%, incrementan el peso relativo del hígado, si se compara con las mezclas de aminoácidos libres. Se ha encontrado que, los hidrolizados que tienen un alto grado de hidrólisis, comprendido dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente un 15% hasta aproximadamente un 25%, incrementan la concentración de proteínas en el yeyuno, el peso relativo del yeyuno, y la tasa de síntesis de proteínas en el yeyuno. Se ha encontrado que, la proteína altamente hidrolizada, que tiene un grado de hidrólisis de un porcentaje mayor del 25%, ó que contiene un porcentaje de más del 25%, en peso, de di- y tri-péptidos, de una forma más preferible, en un porcentaje mayor del 30%, incrementa el grado de síntesis de proteínas en el yeyuno y el duodeno, particularmente, en el duodeno.

Los hidrolizados de proteínas, pueden producirse utilizando procedimientos que son bien conocidos en el arte especializado de la técnica, o pueden obtenerse comercialmente en el mercado. Así, por ejemplo, las fórmulas nutritivas que contienen hidrolizados que tienen un grado de hidrólisis de un porcentaje menor del 15%, son comercialmente obtenibles en el mercado, de procedencia de la firma Nestlé Nutrition Company, bajo la marca comercial Peptamen®. Los hidrolizados que tienen un grado de hidrólisis de un porcentaje por encima del 15%, pueden prepararse utilizando el procedimiento descrito en el documento de patente europea EP 0 322 589.

La proteína dietética, puede también encontrarse en forma de una mezcla de aminoácidos libres: de una forma preferible, de tal forma que, la mezcla, proporcione un perfil equilibrado de aminoácidos. Se ha encontrado que, la proteína dietética en forma de una mezcla de aminoácidos libres, incrementa el peso relativo del yeyuno, y la tasa de síntesis de proteínas en el yeyuno.

Es también posible el proporcionar la proteína dietética, en una variedad de formas, de tal forma que, se proporcione simultáneamente una nutrición específica, a una pluralidad de órganos.

La fuente de proteínas dietéticas, proporciona de aproximadamente un 5% a aproximadamente un 30% de la energía de la fórmula nutritiva: por ejemplo, de aproximadamente un 10% a aproximadamente un 20% de la energía. La energía restante de la fórmula nutritiva, puede aportarse en forma de hidratos de carbono y de grasas.

Si la fórmula nutritiva incluye una fuente de grasas, la fuente de grasas, proporciona, de una forma preferible, de aproximadamente un 5% a aproximadamente un 35% de la energía de la fórmula nutritiva: por ejemplo, de aproximadamente un 20% a aproximadamente un 50% de la energía. Los lípidos que forman la fuente de grasas, pueden ser cualquier grasa apropiada o una mezcla de grasas. Las grasas vegetales, son particularmente apropiadas; por ejemplo, el aceite de soja, el aceite de palma, el aceite de coco, el aceite de cártamo, el aceite de girasol, el aceite de maíz, el aceite de cánola, las licitinas, y por el estilo. Las grasas animales, tales como las grasas de leche, pueden también añadirse, en caso deseado. Los lípidos, pueden también incluir a los triglicéridos de cadena media: por ejemplo, hasta un porcentaje del 80%, en peso, de lípidos, como triglicéridos de cadena media.

Si la fórmula nutritiva incluye una fuente de hidratos de carbono, la fuente de hidratos de carbono, proporciona, de una forma preferible, un porcentaje de aproximadamente un 40% a aproximadamente un 80%, de la energía de la fórmula nutritiva. Pueden utilizarse cualesquiera hidratos de carbono que sean apropiados, por ejemplo, sacarosa, lactosa, glucosa, fructosa, sólidos de jarabe de maíz, y maltodextrinas, y mezclas de éstos.

En caso deseado, puede también añadirse fibra dietética. En el mercado, son obtenibles numerosos tipos de fibras dietéticas. Las fuentes apropiadas de fibra dietética, incluyen, entre otras, a la soja, guisantes, avena, pectina, goma de guar y goma arábiga. En caso de que se utilice, la fibra dietética, comprende, de una forma preferible, un porcentaje de hasta un 50%, en peso, de la fórmula nutritiva.

En la fórmula nutritiva, pueden incluirse vitaminas y minerales apropiados, en la forma usual, con objeto de cumplir con las directrices apropiadas.

En caso deseado, en la fórmula nutritiva, pueden incorporarse uno o más emulsionantes de grado alimenticio: por ejemplo, ésteres de mono-diglicéridos, del ácido diacetiltartárico, lecitina y mono- y di-glicéridos. De una forma similar, pueden incluirse sales y estabilizadores apropiados.

La fórmula nutritiva, puede prepararse de cualquier forma que sea apropiada. Así, por ejemplo, la fórmula nutritiva, puede prepararse procediendo a mezclar conjuntamente la fuente de proteína dietética, la fuente de hidratos de carbono, y la fuente de grasas, en proporciones que sean apropiadas. En caso de utilizarse, los emulsionantes, pueden incluirse en la mezcla. Las vitaminas y minerales, pueden añadirse en este punto, pero, usualmente, se añaden más tarde, con objeto de evitar la degradación térmica. Cualesquiera vitaminas lipofílicas, emulsionantes, y por el estilo, pueden disolverse en la fuente de grasa, previamente al mezclado. A continuación, puede añadirse agua, de una forma preferible, agua que haya sido sometida a osmosis inversa, con objeto de formar una mezcla líquida. La temperatura del agua, de una forma conveniente, es de un nivel comprendido dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente 50ºC hasta aproximadamente 80ºC, con objeto de ayudar en la dispersión de los ingredientes. Con objeto de formar la mezcla líquida, pueden utilizarse cualesquiera licuefactores comercialmente obtenibles en el mercado. Se procede, a continuación, a homogeneizar la mezcla líquida; por ejemplo, en dos etapas.

La mezcla líquida, puede tratarse térmicamente, a continuación, con objeto de reducir las cargas bacterianas. Así, por ejemplo, la mezcla líquida, puede calentarse rápidamente, a una temperatura comprendida dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente 80ºC hasta aproximadamente 150ºC, durante un transcurso de tiempo que va desde aproximadamente 5 segundos hasta aproximadamente 5 minutos. Este tratamiento, puede realizarse mediante inyección de vapor, mediante autoclave, o mediante un intercambiador de calor, por ejemplo, un intercambiador de calor, del tipo de placa.

La mezcla líquida, puede a continuación enfriarse, a una temperatura comprendida dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente 60ºC hasta aproximadamente 85ºC; por ejemplo, mediante enfriamiento por evaporación instantánea. La mezcla líquida, puede a continuación homogeneizarse otra vez; por ejemplo, en dos etapas, a unos valores de aproximadamente 7 MPa a aproximadamente 40 MPa, en la primera etapa, y de aproximadamente 2 MPa a 14 MPa, en la segunda etapa. La mezcla homogeneizada, puede a continuación enfriarse adicionalmente, con objeto de añadir cualquier tipo de componentes sensibles al calor; tales como vitaminas y minerales. El valor pH y el contenido de sólidos de la mezcla homogeneizada, se estandariza, de una forma conveniente, en este punto.

En caso de que se desee producir una fórmula nutritiva en forma de materia en polvo, la mezcla homogenizada, se transfiere a un aparato de secado apropiado, tal como un secador por proyección pulverizada (spray), o un secador por congelación, y se convierte en una materia en polvo. La materia en polvo, debería tener un contenido de humedad de menos un 5%, en peso.

Si se desea producir una fórmula líquida, la mezcla homogeneizada, se llena preferiblemente de una forma aséptica, en recipientes contenedores apropiados. El llenado de forma aséptica de los recipientes contenedores, puede llevarse a cabo procediendo a pre-calentar la mezcla homogeneizada (por ejemplo, a una temperatura de 75 a 85ºC) y, a continuación, procediendo a inyectar vapor al interior de la mezcla homogeneizada, para aumentar la temperatura a un nivel comprendido dentro de unos márgenes que van de aproximadamente 140 a aproximadamente 160ºC; por ejemplo, a un nivel de aproximadamente 150ºC. La mezcla homogeneizada, puede enfriarse a continuación, por ejemplo, mediante enfriamiento por evaporación instantánea, a una temperatura comprendida dentro de unos márgenes que van desde aproximadamente 75 hasta aproximadamente 85ºC. A continuación, puede procederse a homogeneizar la mezcla homogeneizada, enfriarse adicionalmente a aproximadamente la temperatura ambiente, y llenarse en recipientes contenedores. Los aparatos apropiados para llevar a cabo el llenado aséptico de esta naturaleza, se encuentran comercialmente disponibles en el mercado. La fórmula líquida, puede ser en forma de una fórmula lista para alimentarse, que tenga un contenido de sólidos comprendido dentro de unos márgenes que van de aproximadamente un 10% a aproximadamente un 14%, en peso, o puede ser en forma de un concentrado; usualmente, de un contenido de sólidos comprendido dentro de unos márgenes que van de aproximadamente un 20% a aproximadamente un 26%, en peso. A las fórmulas líquidas, se les puede añadir saborizantes, de tal forma que las fórmulas, se proporcionen en forma de bebidas convenientes, provistas de algún tipo de sabor, listas para beberse.

La fórmula nutritiva, puede utilizarse para la profilaxis o tratamiento de una variedad de patologías o estados de enfermedades. Así, por ejemplo, muchos bebés prematuros, sufren de intestinos subdesarrollados. A los bebés, se les puede administrar, como alimentación, una fórmula nutritiva que contenga proteína dietética, en forma de proteína hidrolizada o aminoácidos libres, con objeto de fomentar un incremento en la concentración de proteínas y síntesis de proteínas en el tejido intestinal y, así, de este modo, incrementar el desarrollo del intestino. Como ejemplo adicional, mucha población mayor, sufre de atrofia del intestino. Así, de esta forma, las fórmulas nutritivas, pueden administrarse como alimento, a las personas mayores, para la profilaxis o tratamiento de la atrofia intestinal.

Adicionalmente, las fórmulas nutritivas que contienen proteína dietética en forma de proteína hidrolizada o aminoácidos libres, puede administrarse, como alimentación, a pacientes que sufran de enfermedades o de daños en el intestino, con objeto de fomentar la recuperación del intestino; por ejemplo, patología inflamatoria del tracto intestinal (tal como la enfermedad de Crohn y sepsis), daños epiteliales del intestino, consecuencias de la diarrea grave, colitis postantibiótica, cirugía del intestino, reserción del yeyuno, y atrofia después de la alimentación parenteral.

La cantidad de fórmula nutritiva a ser administrada, variará en dependencia de la edad del paciente, la condición de la enfermedad, y la gravedad de la patología o enfermedad. No obstante, la cantidad, puede ajustarse fácilmente, mediante un practicante médico. De una forma general, la cantidad de la fórmula nutritiva suficiente como para proporcionar una dosificación diaria de la proteína dietética de aproximadamente 3 g a aproximadamente 300 g. Una dosificación diaria de proteína dietética, de aproximadamente 50 g a aproximadamente 150 g, es la que se prefiere, para aplicaciones clínicas.

La fórmula nutritiva, puede tomarse en múltiples dosis, por ejemplo, en una dosis de 2 a 10 veces por día, con objeto de seleccionar la dosificación diaria, o puede tomarse en una dosis individual. En el caso de la forma de una dosis individual, la fórmula nutritiva, se toma, de una forma conveniente, como reemplazo de una comida. En el caso de múltiples dosis, la fórmula nutritiva, será, de una forma conveniente, en forma de un alimento de conveniencia; por ejemplo, una bebida del tipo lista para ser bebida. La fórmula nutritiva, puede también administrarse de una forma continua, por mediación de tubos nasogástricos, o mediante tubos enterales, tales como tubos de yeyuno.

Ejemplo 1 a) Proteínas enteras

Se procede a dispersar una cantidad de 5 kg de proteína de suero lácteo (obtenida de procedencia de la firma Meggle GmbH, con el nombre comercial de Globulal 80), en agua desmineralizada, a una temperatura de 55ºC, con objeto de obtener una concentración de proteínas (N*6,38) del 10%, en peso. El valor pH de la dispersión, se ajusta mediante la adición de 190 g de hidróxido cálcico y, la dispersión, se enfría a la temperatura ambiente. Las proteínas, se secan, a continuación, mediante liofilización, y se envasan en latas metálicas.

Las proteínas enteras, tienen un grado de hidrólisis de aproximadamente un 4,41%, y una concentración de amina no proteínica de aproximadamente un 1,1%, en base al nitrógeno total.

b) Hidrolizado 1

Se procede a dispersar una cantidad de 6,25 kg de proteína de suero lácteo (obtenida de procedencia de la firma Meggle GmbH, con el nombre comercial de Globulal 80), en 50 litros de agua desmineralizada, a una temperatura de 55ºC. El pH de la dispersión, se ajusta a un valor de 8,2, mediante la adición de 1,8 litros de Ca(OH)_{2} 2 M. Las proteínas, se hidrolizan, a continuación, utilizando 30 g de tripsina (tripsina pancreática exenta de sal, la cual tiene una actividad de 6,8 AU/g, y un contenido de quimotripsina, inferior a un porcentaje del 5%, y el cual es comercialmente obtenible en el mercado, de procedencia de la firma Novo Nordisk Ferment AG, Dittingen, Suiza). La reacción de hidrólisis, se continúa durante un transcurso de tiempo de 4 horas, a una temperatura de 55ºC. Durante la reacción, el pH, se regula a un valor de 7,4, mediante la adición de NaOH 1,6 N, y KOH 0,4 N. Se procede, a continuación, a inactivar las enzimas, mediante el calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura de 80ºC, y manteniendo la mezcla a esta temperatura, durante un transcurso de tiempo de aproximadamente 5 minutos. La mezcla, se enfría, a continuación, a una temperatura de 16ºC. Las proteínas hidrolizadas, se secan, a continuación, mediante liofilización, y se envasan en latas de metal. Se procede, a continuación, a someter una muestra de las proteínas hidrolizadas, a filtración de gel en HPLC, con objeto de determinar la distribución del peso molecular.

Peso molecular	Porcentaje	Porcentaje acumulativo
33730	0	0
25820	2.3	2.3
19860	4.3	6.6
15210	5.5	12.1
11670	6.9	19.0
8933	3.9	22.9
6855	3.6	26.5
5248	3.1	29.6
4027	3.7	33.3
3083	4.5	37.8
2366	9.4	47.2
1811	6.9	54.1
1387	6.9	61.0
1064	3.9	64.9
815	9.2	74.2
625	6.7	80.9
479	1.6	82.5
367	1.5	84.0
281	3.6	87.6
215	8.4	96.0
165	3.4	99.4
127	0.4	99.8
97	0.1	99.9
74	0.1	100.0

El hidrolizado, tiene un grado de hidrólisis, de aproximadamente un 14%, y una concentración de nitrógeno no proteínico, de aproximadamente un 54,5%, en base al nitrógeno total.

c) Hidrolizado 2

Se procede a dispersar una cantidad de 6,25 kg de proteína de suero lácteo (obtenida de procedencia de la firma Meggle GmbH, con el nombre comercial de Globulal 80), en 50 litros de agua desmineralizada, a una temperatura de 55ºC. El pH de la dispersión, se ajusta a un valor de 7,5, mediante la adición de 1,6 litros de Ca(OH)_{2} 1 M y 162 ml de una solución de NaOH 1,6 M y KOH 0,4 M. Las proteínas, se hidrolizan, a continuación, utilizando 50 g de tripsina (obtenible en el mercado, de procedencia de la firma Novo Nordisk Ferment AG). La reacción de hidrólisis, se continúa durante un transcurso de tiempo de 4 horas, a una temperatura de 55ºC. Durante la reacción, el pH, se regula a un valor de 7,4, mediante la adición de NaOH 1,6 N, y KOH 0,4 N. Se procede, a continuación, a inactivar las enzimas, y la proteína no hidrolizada, se desnaturaliza, mediante el calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura de 90ºC, y manteniendo la mezcla a esta temperatura, durante un transcurso de tiempo de aproximadamente 5 minutos.

La mezcla, se enfría, a continuación, a una temperatura de 56ºC y se hidroliza otra vez, durante un transcurso de tiempo de 1 hora, utilizando 50 g de tripsina, a una temperatura de 55ºC. Durante la reacción, el pH, se regula a un valor de 7,4, mediante la adición de NaOH 1,6 N y KOH 0,4 N. Las enzimas, se inactivan a continuación, mediante el calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura de 80ºC, y manteniendo la mezcla, a esta temperatura, durante un transcurso de tiempo de aproximadamente 5 minutos. A continuación, la mezcla, se enfría a una temperatura de 18ºC. Las proteínas hidrolizadas, se secan a continuación, mediante liofilización, y se envasan en latas de metal.

Se procede, a continuación, a someter una muestra de las proteínas hidrolizadas, a filtración de gel en HPLC, con objeto de determinar la distribución del peso molecular.

Peso molecular	Porcentaje	Porcentaje acumulativo
33730	1.0	1.0
25820	2.7	3.7
19860	3.0	6.7
15240	2.8	9.5
11670	3.2	12.7
8954	2.1	14.8
6855	2.2	16.9
5260	2.3	19.2
4027	3.0	22.2
3090	3.8	26.0
2366	9.7	35.7
1811	7.0	42.7
1390	7.5	50.2
1064	4.2	54.4
817	10.4	64.8
625	8.7	73.5
480	2.1	75.6
367	1.7	77.3
282	5.2	82.5
216	11.1	93.6
165	4.9	98.5
127	0.8	99.3
97	0.2	99.5
74	0.3	99.8
57	0.2	100.0

El hidrolizado, tiene un grado de hidrólisis, de aproximadamente un 17,3, y una concentración de nitrógeno no proteínico, de aproximadamente un 65,9%, en base al nitrógeno total.

d) Hidrolizado 3

Se procede a dispersar una cantidad de 6,25 kg de proteína de suero lácteo (obtenida de procedencia de la firma Meggle GmbH, con el nombre comercial de Globulal 80), en 50 litros de agua desmineralizada, a una temperatura de 55ºC. El pH de la dispersión, se ajusta a un valor de 7,5, mediante la adición de 1,6 litros de Ca(OH)_{2} 1 M y 162 ml de una solución de NaOH 1,6 M y KOH 0,4 M. Las proteínas, se hidrolizan, a continuación, utilizando 250 g de Alcalase 2,4 l (obtenible en el mercado, de procedencia de la firma Novo Nordisk Ferment AG). La reacción de hidrólisis, se continúa durante un transcurso de tiempo de 4 horas, a una temperatura de 55ºC. Durante la reacción, el pH, se regula a un valor de 7,6, mediante la adición de NaOH 1,6 N, y KOH 0,4 N.

Se procede a añadir 250 g de Neutrasa 0,5 l (obtenible en el mercado, de procedencia de la firma Novo Nordisk Ferment AG) y, las proteínas, se hidrolizan adicionalmente, durante un transcurso de tiempo de 4 horas, a una temperatura de 50ºC. Se procede, a continuación, a inactivar las enzimas, mediante el calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura de 90ºC, y manteniendo la mezcla a esta temperatura, durante un transcurso de tiempo de aproximadamente 5 minutos.

El pH de la mezcla de reacción, se ajusta un valor de 7,33, mediante la adición de NaOH 1,6 N y KOH 0,4 N y, la mezcla de reacción, se hidroliza otra vez, durante un transcurso de tiempo de 4 horas, utilizando 100 g de pancreatina, a una temperatura de 55ºC. Durante la reacción, el pH, se regula a un valor de 7,5, mediante la adición de NaOH 1 M. Las enzimas, se inactivan a continuación, mediante el calentamiento de la mezcla de reacción, a una temperatura de 90ºC, y manteniendo la mezcla, a esta temperatura, durante un transcurso de tiempo de aproximadamente 5 minutos. A continuación, la mezcla, se enfría a una temperatura de 4ºC. Las proteínas hidrolizadas, se secan a continuación, mediante liofilización, y se envasan en latas de metal.

Peso molecular (Dalton)	Porcentaje	Porcentaje acumulativo
5248	0.1	0.1
3083	0.1	0.2
2366	0.9	1.1
1811	1.2	2.3
1387	3.0	5.3
1064	1.4	6.7
815	6.7	13.4
625	14.2	27.6
479	5.3	32.9
367	1.6	34.5
281	10.3	44.8
215	22.2	67.0
165	14.5	82.4
127	6.8	89.2
97	10.5	99.7
74	0.2	99.9
57	0.1	100.00

El hidrolizado, tiene un grado de hidrólisis, de aproximadamente un 35%, y una concentración de nitrógeno no proteínico, de aproximadamente un 92,6%, en base al nitrógeno total. El hidrolizado, es rico en péptidos pequeños, especialmente, en di- y tri-péptidos, los cuales tienen un peso molecular de aproximadamente 127 a 367.

Ejemplo 2 a) Productos alimenticios experimentales

En los ensayos, se utilizaron cinco diferentes productos alimenticios. La composición, en su totalidad, de estos productos alimenticios, se proporcionan en la tabla 1.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 1 Composición de los productos alimenticios

	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	alimenticio 1	alimenticio 2	alimenticio 3	alimenticio 4	alimenticio 1
	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)
Fuente de	14,62	14,77	14,78	14,93	15,51
proteínas
Hidratos de	67,4	64,4	64,1	63,4	65,4
carbono
Lípidos	8,21	8,27	8,26	8,37	7,90
Minerales	6,18	5,72	5,69	5,07	6,38
Ceniza	2,98	3,00	3,00	3,04	2,87

\vskip1.000000\baselineskip

Los valores, se proporcionan en g de componente, por 100 g de materia seca. La energía proporcionada por todos los productos alimenticios, es de 405,9 a 412,5 kCal/100 g. La fuentes de proteínas utilizadas, en cada producto alimenticio, son diferentes, y se proporcionan en la tabla 2.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 Fuentes de proteínas para los productos alimenticios

Producto alimenticio	Fuente de proteínas
1	Proteínas enteras del ejemplo 1
2	Hidrolizado 1 del ejemplo 1
3	Hidrolizado 2 del ejemplo 1
4	Hidrolizado 3 del ejemplo 1
5	Aminoácidos libres

\vskip1.000000\baselineskip

Los aminoácidos de la composición de cada fuente de proteínas, se proporcionan en la tabla 3.

TABLA 3 Composición de aminoácidos de la fuente de proteínas

Aminoácido	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	alimenticio 1	alimenticio 2	alimenticio 3	alimenticio 4	alimenticio 5
	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)	(g/100 g)
Asp	1.00	1.01	1.01	1.02	1.06
Asn	0.66	0.67	0.67	0.68	0.71
Thr	0.77	0.78	0.78	0.79	0.82
Ser	0.72	0.73	0.73	0.73	0.76
Glu	1.60	1.62	1.62	1.64	1.70
Gln	0.86	0.87	0.87	0.88	0.91
Pro	0.60	0.61	0.61	0.62	0.64
Gly	0.29	0.30	0.30	0.30	0.31
Ala	0.68	0.69	0.69	0.70	0.72
Val	0.71	0.72	0.72	0.72	0.75
Cys^{1}	0.43	0.43	0.43	0.43	0.45
Met	0.29	0.30	0.30	0.30	0.31
Ile	0.74	0.74	0.74	0.75	0.78
Leu	1.80	1.82	1.82	1.84	1.91
Tyr	0.51	0.51	0.51	0.52	0.54
Phe	0.53	0.54	0.54	0.54	0.56
Lys	1.43	1.44	1.44	1.46	1.51
His	0.27	0.28	0.28	0.28	0.29
Arg	0.42	0.42	0.42	0.43	0.44
Trp	0.31	0.31	0.31	0.32	0.33

Total de aminoácidos	14.62	14.77	14.78	14.93	15.51
(1) en forma de cistina, para el producto alimenticio 5

b) Protocolo experimental y determinación del peso

Se utilizó un grupo de 40 ratas machos, de la raza Sprague Dawley, suministrado por parte de la firma IFFA CREDO de Albresle, Francia. Las ratas, tenían un peso medio de 82,3 g \pm 1,0. Las ratas, permanecieron en jaulas separadas, las cuales se encontraban iluminadas desde las 7,30 am, a las 7 pm. Durante un transcurso de tiempo de algunos días previos a los ensayos, se dejó que, las ratas, se alimentaran "ad libitum", de un producto alimenticio standard en forma de gránulos. Las ratas, tenían un libre acceso al agua.

Dos días previos a los ensayos, las ratas, se separaron en 5 grupos de 8 ratas. Cada grupo de ratas, se alimentó ad libidum, con uno de los productos alimenticios 1 a 5, durante un período de adaptación de 2 días. Empezando con el primer día del ensayo, cada día, a las 3 am, 7 am, y 11 am, 3 pm, 7 pm y 11 pm, las ratas de cada grupo, se alimentaron, a continuación, con una cantidad de producto alimenticio dosificado de una forma precisa, del producto alimenticio que habían recibido durante el período de adaptación. El régimen de alimentación, se continuó durante un transcurso de tiempo de 15 días. Cada rata, se pesó cada día.

En el 16^{avo} día, se procedió a preparar una mezcla radioactiva, mediante la adición de 1,7 g de una solución que contenía ^{14}C Phe (170 \muCi por 2,9 \mumol), a 9,3 g de una solución que contenía 30,2 g/l de Phe (no radiactivo). La mitad de las ratas, se anestesiaron y se sacrificaron a las 1,30 pm; la otra mitad, se anestesiaron y se sacrificaron a las 3 pm. Aproximadamente 20 minutos antes de ser sacrificadas, la mezcla reactiva, se inyectó por vía intravenosa, en cada rata, a una dosis de 2 ml/200 g de peso corporal.

Después de haberse sacrificado, la sangre de cada rata, se retiró, y se centrifugó inmediatamente, a una temperatura de 4ºC. Se procedió, a continuación, a separar el plasma, en fracciones y, las fracciones, se almacenaron a una temperatura de -20ºC. Se procedió, a continuación, a retirar rápidamente el hígado de cada rata, éstos se lavaron en una solución fría, la cual contenía un porcentaje del 9% de NaCl, se secaron, se lavaron, y se congelaron en nitrógeno líquido. Se retiró el intestino de cada rata, se vació y se lavó con una solución de ácido tricloroacético al 5%, y se separó en tres fracciones: el duodeno entero, aproximadamente 13 cm del yeyuno, y el resto del intestino. Cada fracción, se secó, se pesó, y se congeló en nitrógeno líquido. Las fracciones, se molieron en el nitrógeno líquido, previamente a su utilización. El estómago, se retiró y se pesó, previamente y posteriormente a su vaciado. Los músculos (gastrocnemio, sóleo y extesor largo de los dedos [extensor digitorium longus]), se retiraron, se desgrasaron, se lavaron, se secaron, y se congelaron en nitrógeno líquido.

El peso medio de las ratas, en el sacrificio, y el peso medio de las partes del cuerpo, eran las siguientes:

		Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
		alimenticio 1	aliment. 2	aliment. 3	aliment. 4	aliment. 5
Peso corporal/g	173,9	159,4	164,2	154,1	157,7
Estómago	Absoluto %	1,19	1,11	1,32	1,25	1,32
	Relativo %	0,68	0,70	0,78	0,80	0,84
Intestino	Absoluto %	5,95	5,51	5,66	6,02	5,65
	Relativo %	3,42	3,46	3,44	3,90	3,59
Duodeno	Absoluto %	0,40	0,34	0,34	0,36	0,38
	Relativo %	0,23	0,21	0,21	0,24	0,24
Yeyuno	Absoluto %	1,13	1,15	1,24	1,21	1,24
	Relativo %	0,65	0,73	0,76	0,78	0,79
Hígado	Absoluto %	8,59	8,40	7,87	7,37	7,29
	Relativo %	4,93	5,24	4,77	4,80	4,62
Gastrocnemio	Absoluto %	0,96	0,96	1.04	0,95	0,87
	Relativo %	0,55	0,60	0,64	0,62	0,55
Sóleo	Absoluto %	0,069	0,066	0,068	0,064	0,060
	Relativo %	0,040	0,041	0,042	0,042	0,038
Extensor	Absoluto %	0,075	0,075	0,072	0,070	0,067
	Relativo %	0,043	0,047	0,044	0,046	0,042

El valor absoluto, es el peso del órgano en gramos. El valor relativo, es un porcentaje basado en el peso del órgano por 100 g de peso corporal.

c) Determinación del contenido de proteína y de RNA

Se procedió a extraer muestras de tejido de 1 g de músculo, 1 g de hígado, y 0,5 a 1 g de intestino, con una solución fría de ácido tricloroacético al 10%, para disolver los aminoácidos libres, y precipitar la proteína. El extracto, se centrifugó a una temperatura de 4ºC, y 10000 g, durante un transcurso de tiempo de 15 minutos. El residuo, se extrajo con una solución de ácido tricloroacético al 10%, y se centrifugó a una temperatura de 4ºC, y 10000 g, durante un transcurso de tiempo de 15 minutos. El procedimiento de extracción y de centrifugación, se volvió a repetir. El residuo, se recolectó, y se procedió a combinar los tres filtrados.

Se procedió a neutralizar una columna que contenía 3 ml de resina Anberlite (AG 50 X8, 100 - 200 mesh), en forma de H^{+}, con objeto de fijar los aminoácidos libres. El filtrado combinado, se añadió a la columna y, la columna, se lavó tres veces, con agua destilada. Los aminoácidos libres, se eluyeron, a continuación, utilizando amoníaco 4 N. El eluyente, se recolectó y, el amoníaco, se retiró mediante evaporación, bajo la acción de vacío, a una temperatura de 40ºC. El residuo seco, se rehidrató, con objeto de proporcionar una primera solución de aminoácidos, que tenía una concentración de Phe, de un valor de aproximadamente 1 \mumol/ml. El pH de la primera solución de aminoácidos, se ajustó a un valor de 7.

El residuo procedente del centrifugado, se extrajo con ácido perclórico 0,2 M y, el extracto, se centrifugó a una temperatura de 4ºC, y 10000 g, durante un transcurso de tiempo de 15 minutos. El residuo, se extrajo otra vez con ácido perclórico, y se centrifugó de la misma forma. El residuo, se rehidrató, a continuación, en una solución de agua y NaOH 3 N. Se recolectó un alícuoto del resido rehidratado, para la cuantificación de la proteína, utilizando el procedimiento del ácido bicinconínico, descrito en Smith et al., 1985; Anal. Biochem. 150. 76 - 85.

Se procedió a añadir una cantidad de ácido perclórico 3 N, al residuo rehidratado restante, con objeto de precipitar la proteína. La solución, se centrifugó, a continuación, a una temperatura de 4ºC, y 10000 g, durante un transcurso de tiempo de 15 minutos. La concentración de RNA, en el filtrado, se determinó, a continuación, mediante espectrofotometría (\lambda_{1} = 232 y \lambda_{2} = 260), utilizando la técnica de Baillie A.G.S. y Garlick, P.J.: 1991; Am. J. Physiol. 260, E891-E896.

El residuo, procedente del centrifugado, se hidrolizó, utilizando HCl 5,5 N, a una temperatura de 150ºC, durante un transcurso de tiempo de 24 horas, con objeto de liberar Phe. El HCl, se evaporó, bajo la acción del vacío y, el residuo, se rehidrató con agua, con objeto de proporcionar una segunda solución de aminoácidos, que tenía una concentración de Phe de aproximadamente 1 \mumol/ml. El pH de la segunda solución de aminoácidos, se ajustó a un valor de 7.

d) Determinación de la radioactividad del Phe, y la tasa de síntesis de proteínas

Con objeto de separar y detectar los aminoácidos, se utilizó HPLC de Kontron, y un espectrómetro U.V. Kontron (\lambda = 330 nm). Para la fase móvil, se utilizaron dos disolventes:

- disolvente A, el cual comprendía 69 g de NaH_{2}PO_{4}\cdotH_{2}O, 40 g partículas de NaOH, una solución de NaOH al 30%, para ajustar el pH a un valor de 7, y agua ultrapura, con objeto de ajustar el volumen a 5 litros.

- disolvente B, el cual comprendía 200 ml de un disolvente A, diluido con 300 ml de agua ultrapura, 350 ml de metanol, y 150 ml de acetonitrilo.

i) Radioactividad del Phe libre

Se procedió a llenar la columna de HPLC, con una columna de Spherisorb OD2 (5 \mum, 250 x 4,6 mm) y se operó a una temperatura de 25ºC. Se añadió una solución de ortoftaldialdehído, a la primera solución de aminoácidos, en un factor de relación de masas de 2:1 y, la mezcla, se dejó reaccionar. A la columna, se le añadió una cantidad de 40 \mul de la mezcla. La columna, se eluyó con disolventes A y B, varias veces: siendo, la cantidad total añadida, cada vez, de 1 ml/min. El factor de relación de disolvente A, con respecto a disolvente B, en cada vez, era de 100 : 0, en el momento 0, de 40 : 60, después de un tiempo de 7 minutos, de 27 : 73, después de un tiempo de 22 minutos, de 0 : 100, después de un tiempo de 26 minutos, y de 100 : 0, después de un tiempo de 28 minutos. La elución, se continuó durante un transcurso de tiempo de 33 minutos. El eluyente, se recolectó en fracciones de 0,5 ml. Se procedió a hacer pasar, también, por la columna, soluciones standard que contenían una mezcla de 20 aminoácidos, incluyendo ^{14}C-Phe, con objeto de identificar y estandarizar los picos de aminoácidos.

Se procedió a recolectar las fracciones de la primera solución de aminoácidos, que contenía el pico de Phe y, el volumen, se ajustó a 5 ml, con agua ultrapura. A la solución, se le añadieron diez ml de un centelleante (Quick Safe A). Se procedió, a continuación, a determinar la radioactividad, utilizando un detector de centelleo Kontron.

(ii) Radioactividad del Phe enlazado

Se procedió a llenar la columna de HPLC, con una columna de Spherisorb OD2 (5 \mum, 250 x 4,6 mm) y se operó a una temperatura de 25ºC. Se añadió una solución de ortoftaldialdehído, a la segunda solución de aminoácidos, en un factor de relación de masas de 1:1 y, la mezcla, se dejó reaccionar. A la columna, se le añadió una cantidad de 800 \mul de la mezcla. La columna, se eluyó con disolventes A y B, varias veces: siendo, la cantidad total añadida, cada vez, de 4,25 ml/min. El factor de relación de disolvente A, con respecto a disolvente B, en cada vez, era de 100 : 0, en el momento 0, de 50 : 50, después de un tiempo de 7 minutos, de 34 : 66, después de un tiempo de 27 minutos, de
0 : 100, después de un tiempo de 29 minutos, de 0 : 100, después de un tiempo de 32 minutos, y de 100 : 0, después de un tiempo de 34 minutos. La elución, se continuó durante un transcurso de tiempo de 39 minutos. El eluyente, se recolectó en fracciones de 0,5 ml. Se procedió a hacer pasar, también, por la columna, soluciones standard que contenían una mezcla de 20 aminoácidos, incluyendo ^{14}C-Phe, con objeto de identificar y estandarizar los picos de
aminoácidos.

\newpage

Se procedió a recolectar las fracciones de la segunda solución de aminoácidos, que contenía el pico de Phe y, el volumen, se ajustó a 5 ml, con agua ultrapura. A la solución, se le añadieron diez ml de un centelleante (OPTI Phase "Hilsafe"). Se procedió, a continuación, a determinar la radioactividad, utilizando un detector de centelleo
Kontron.

(iii) Cálculo de la tasa de síntesis de proteínas

Puede obtenerse una medición de la tasas de síntesis de proteínas, utilizando la fórmula (McNurlan et al; 1979; Biochem. J. 178, 373 - 379).

\text{Tasa de síntesis (% por día)} = S_{B}/(S_{A}\cdot t)

En donde,

S_{B,} es el valor de la radioactividad específica (dpm/\mumol) del Phe enlazado,

S_{A}, es el valor de la radioactividad específica media (dpm/\mumol) del Phe libre, y

t, es el tiempo, en días.

d) Contenido de proteínas y de RNA, de la síntesis de proteínas

El contenido de proteínas y de RNA, de los diferentes órganos, y la tasa de la síntesis de proteínas, en los diferentes órganos son, para cada producto alimenticio, de la forma que sigue:

\vskip1.000000\baselineskip

Hígado	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	aliment. 1	aliment. 2	aliment. 3	aliment. 4	aliment. 5
Concentración de proteína
\hskip0,6cm mg/g tejido	139,9	160,9	156,4	165,2	147,2
\hskip0,6cm g/100 g rata	0,69	0,84	0,75	0,79	0,68
\hskip0,6cm Total proteína, g	1,20	1,34	1,24	1,23	1,07
Concentración de RNA
\hskip0,6cm mg/g tejido	7,89	8,10	8,00	8,20	8,17
\hskip0,6cm g/100 g rata	38,8	42,4	38,1	38,9	37,7
\hskip0,6cm Total RNA, mg	67,47	67,93	62,73	60,43	59,45
Capacidad de síntesis de proteínas	56,46	51,86	51,76	50,62	56,62
\hskip0,6cm (mg RNA/g proteína)
Tasa de síntesis de proteínas	82,29	86,94	85,55	89,68	91,53
\hskip0,6cm (% por día)
Síntesis diaria de proteínas	1,01	1,18	1,08	1,16	1,01
\hskip0,6cm (g proteína/día)
Eficacia ribosómica	14,69	17,53	17,00	18,50	16,85
\hskip0,6cm (mg proteína/día. mg RNA)

\vskip1.000000\baselineskip

No se nota una diferencia significativa entre los efectos que tienen los productos alimenticios, en el hígado. El producto alimenticio 2, no obstante, parece proporcionar una concentración relativa mayor de la proteína y de RNA en el hígado.

\newpage

Intestino (duodeno)	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	aliment. 1	aliment. 2	aliment. 3	aliment. 4	aliment. 5
Concentración de proteína
\hskip0,6cm mg/g tejido	178,6	180,9	165.0	191,4	162,0
\hskip0,6cm g/100 g rata	41,9	39,1	34,2	46,4	41,1
\hskip0,6cm Total proteína, g	72,0	61,8	56.0	71,3	65,0
Concentración de RNA
\hskip0,6cm mg/g tejido	8,32	7,97	6,55	8,43	7,59
\hskip0,6cm g/100 g rata	1,98	1,64	1,36	2,05	1,92
\hskip0,6cm Total RNA, mg	3,39	2,59	2,21	3,12	3,03
Capacidad de síntesis de proteínas	46,23	44,46	39,69	44,23	48,03
\hskip0,6cm (mg RNA/g proteína)
Tasa de síntesis de proteínas	97,9	105,7	100,3	135,9	108,0
\hskip0,6cm (% por día)
Síntesis diaria de proteínas	72,99	68,52	57,01	97,89	74,44
\hskip0,6cm (g proteína/día)
Eficacia ribosómica	31,2	25,7	25,3	30,8	23,0
\hskip0,6cm (mg proteína/día. mg RNA)

\vskip1.000000\baselineskip

El producto alimenticio 4, tiene un significativo efecto (P < 0,05 en la síntesis de proteínas, en el duodeno, al compararse con los otros productos alimenticios. Las concentraciones de proteínas y de RNA, se encuentran incrementadas, pero no de una forma significativa. Adicionalmente, la síntesis diaria de proteínas, y la eficacia ribosómica, se encuentran todas ellas acrecentadas.

\vskip1.000000\baselineskip

Intestino (yeyuno)	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	aliment. 1	aliment. 2	aliment. 3	aliment. 4	aliment. 5
Concentración de proteína
\hskip0,6cm mg/g tejido	109,9	109,5	112,2	106,5	110,0
\hskip0,6cm g/100 g rata	71,7	79,6	84,1	83,8	87,1
\hskip0,6cm Total proteína, g	124,8	126,3	138,7	130,2	137,2
Concentración de RNA
\hskip0,6cm mg/g tejido	7,56	7,39	7,55	7,36	7,87
\hskip0,6cm g/100 g rata	4,90	5,38	5,71	5,82	6,23
\hskip0,6cm Total RNA, mg	8,49	8,50	9,34	8,98	9,79
Capacidad de síntesis de proteínas	70,35	67,48	68,31	69,58	71,70
\hskip0,6cm (mg RNA/g proteína)
Tasa de síntesis de proteínas	89,9	88,4	103,8	111,8	109,5
\hskip0,6cm (% por día)
Síntesis diaria de proteínas	111,6	111,8	141,4	144,9	147,7
\hskip0,6cm (g proteína/día)
Eficacia ribosómica	13,02	13,25	15,15	16,14	15,24
\hskip0,6cm (mg proteína/día. mg RNA)

La tasa de síntesis de proteínas, la síntesis diaria de proteínas, y la eficacia ribosómica, se encuentran significativamente incrementadas (P < 0,05), con los productos alimenticios 3 a 5, al compararse con los productos alimenticios 1 y 2.

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Músculo (gastrocnemio)	Producto	Producto	Producto	Producto	Producto
	aliment. 1	aliment. 2	aliment. 3	aliment. 4	aliment. 5
Concentración de proteína
\hskip0,6cm mg/g tejido	189,0	183,2	189,8	180,7	182,4
\hskip0,6cm g/100 g rata	109,3	109,7	113,2	108,4	99,9
\hskip0,6cm Total proteína, g	188,2	174,7	185,1	166,4	157,4
Concentración de RNA
\hskip0,6cm mg/g tejido	2,14	2,18	1,97	1,91	1,95
\hskip0,6cm g/100 g rata	1,24	1,31	1,18	1,15	1,07
\hskip0,6cm Total RNA, mg	2,14	2,10	1,92	1,77	1,69
Capacidad de síntesis de proteínas	11,31	11,94	10,36	10,59	10,84
\hskip0,6cm (mg RNA/g proteína)
Tasa de síntesis de proteínas	11,00	9,87	9,53	8,83	11,26
\hskip0,6cm (% por día)
Síntesis diaria de proteínas	20,75	17,33	18,01	15,38	17,58
\hskip0,6cm (g proteína/día)
Eficacia ribosómica	9,69	8,57	9,17	8,24	10,33
\hskip0,6cm (mg proteína/día. mg RNA)

No se determinaron diferencias significativas. No obstante, la síntesis diaria de proteínas, se redujo, con el producto alimenticio 4, cuando se compara con los productos alimenticios 1 y 5.

Claims

1. Un procedimiento para proporcionar una fórmula nutritiva, que comprende una forma seleccionada de proteína láctica hidrolizada, como fuente de proteína, para fomentar el crecimiento o recuperación de un órgano específico, en un mamífero, seleccionado entre el intestino delgado o el duodeno, el yeyuno, y el hígado, en donde, el procedimiento, comprende las etapas de determinar un órgano específico, de entre varios órganos, e hidrolizar una proteína láctica, a un grado de hidrólisis predeterminado, de tal forma que, el grado de hidrólisis, determine el órgano cuyo crecimiento o recuperación se fomenta.

2. Un procedimiento, según la reivindicación 1, en donde, el órgano específico, es el intestino delgado o duodeno y, el grado predeterminado de hidrólisis, es de por lo menos un 30%.

3. Un procedimiento, según la reivindicación 2, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, comprende más de aproximadamente un 30%, en peso, de di- y tri-péptidos, y una concentración de nitrógeno no proteínico, de por lo menos aproximadamente un 85% del nitrógeno total.

4. Un procedimiento, según la reivindicación 1, en donde, el órgano específico, es el yeyuno y, la proteína láctica hidrolizada, es

(i): un hidrolizado de proteínas, que tiene un grado de hidrólisis de por lo menos aproximadamente un 15%;

(ii): aminoácidos libres; o

(iii): mezclas de éstos.

5. Un procedimiento, según la reivindicación 4, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, es un hidrolizado de proteínas, que comprende más de aproximadamente un 20%, en peso, de di- y tri-péptidos, y el cual tiene una concentración de nitrógeno no proteínico, de por lo menos aproximadamente un 60% del nitrógeno total.

6. Un procedimiento, según la reivindicación 1, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, es en forma de aminoácidos libres.

7. Un procedimiento, según la reivindicación 6, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, se utiliza en la preparación de una fórmula nutritiva para mamíferos, que tiene la función del intestino comprometida.

8. Un procedimiento, según la reivindicación 1, en donde, el órgano, es el hígado, y el grado de hidrólisis predeterminado, es del 10 al 15%.

9. Un procedimiento, según la reivindicación 1, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, se utiliza en la preparación de una fórmula nutritiva, para incrementar la concentración y la síntesis de proteínas, en intestinos subdesarrollados o en bebés prematuros.

10. Un procedimiento, según la reivindicación 9, en el cual, la proteína láctica hidrolizada, comprende más de aproximadamente un 30%, en peso, de di- y tri-péptidos, y una concentración de nitrógeno no proteínico, de por lo menos aproximadamente un 85% del nitrógeno total.

11. Un procedimiento, según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el cual, la proteína láctica utilizada, es suero láctico hidrolizado y/o proteína de caseína.