FI113298B - Diagnostinen reagenssi, menetelmä ja testitarvikesarja EBV:n vasta-aineiden detektoimiseksi - Google Patents
Diagnostinen reagenssi, menetelmä ja testitarvikesarja EBV:n vasta-aineiden detektoimiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI113298B FI113298B FI944225A FI944225A FI113298B FI 113298 B FI113298 B FI 113298B FI 944225 A FI944225 A FI 944225A FI 944225 A FI944225 A FI 944225A FI 113298 B FI113298 B FI 113298B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- protein
- ebv
- ebna
- vca
- gly
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 63
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims abstract description 12
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical compound CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 63
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 7
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 21
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 32
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 28
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 27
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 11
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 6
- ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N His-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O ZIMTWPHIKZEHSE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 206010015108 Epstein-Barr virus infection Diseases 0.000 description 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N phosphonoacetic acid Chemical compound OC(=O)CP(O)(O)=O XUYJLQHKOGNDPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N Arg-Gly-Arg Chemical compound N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WZZSKAJIHTUUSG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N Glu-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OAGVHWYIBZMWLA-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 3
- GBRUQFBAJOKCTF-DCAQKATOSA-N Pro-His-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GBRUQFBAJOKCTF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N Ser-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JPIDMRXXNMIVKY-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 3
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N Thr-Ala-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 3
- OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N Val-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OVLIFGQSBSNGHY-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 2
- SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N Arg-Ala-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SGYSTDWPNPKJPP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NVMMUAUTQCWYHD-ABHRYQDASA-N Asp-Val-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 NVMMUAUTQCWYHD-ABHRYQDASA-N 0.000 description 2
- 101150089516 BLLF1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000605059 Bacteroidetes Species 0.000 description 2
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 101100476885 Epstein-Barr virus (strain B95-8) SCP gene Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N Gly-Ala-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PUUYVMYCMIWHFE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N Gly-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N RJIVPOXLQFJRTG-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 102100033337 PDZ and LIM domain protein 7 Human genes 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- CYQQWUPHIZVCNY-GUBZILKMSA-N Pro-Arg-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CYQQWUPHIZVCNY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N Pro-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SGCZFWSQERRKBD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N Pro-Phe-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 2
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N Thr-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 2
- MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N Thr-Gly-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O MSIYNSBKKVMGFO-BHNWBGBOSA-N 0.000 description 2
- LRHBBGDMBLFYGL-FHWLQOOXSA-N Tyr-Phe-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LRHBBGDMBLFYGL-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 2
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 2
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WXERCAHAIKMTKX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZVFVBBGVOILKPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N Ala-Thr-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N Arg-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N WVRUNFYJIHNFKD-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OVVUNXXROOFSIM-SDDRHHMPSA-N Arg-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O OVVUNXXROOFSIM-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N Arg-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HPKSHFSEXICTLI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N Arg-Glu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QAODJPUKWNNNRP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N AQPVUEJJARLJHB-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NMRHDSAOIURTNT-RWMBFGLXSA-N Arg-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NMRHDSAOIURTNT-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N BTJVOUQWFXABOI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Pro Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 YCYXHLZRUSJITQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MOGMYRUNTKYZFB-UNQGMJICSA-N Arg-Thr-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MOGMYRUNTKYZFB-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N Asp-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O LKIYSIYBKYLKPU-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N Asp-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HICVMZCGVFKTPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HICVMZCGVFKTPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150036640 BLLF2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- HYKFOHGZGLOCAY-ZLUOBGJFSA-N Cys-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HYKFOHGZGLOCAY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 101150059079 EBNA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N Glu-Cys-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O MXPBQDFWIMBACQ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- BUAKRRKDHSSIKK-IHRRRGAJSA-N Glu-Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BUAKRRKDHSSIKK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N Glu-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MOJKRXIRAZPZLW-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BEQGFMIBZFNROK-JGVFFNPUSA-N Gly-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN)C(=O)O BEQGFMIBZFNROK-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YOBGUCWZPXJHTN-BQBZGAKWSA-N Gly-Ser-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YOBGUCWZPXJHTN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(=O)O ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N Gly-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N His-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N His-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N Leu-Gly-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O VWHGTYCRDRBSFI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030289 Lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N Lys-Gly-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O ISHNZELVUVPCHY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N Lys-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101150047390 MCP gene Proteins 0.000 description 1
- MVQGZYIOMXAFQG-GUBZILKMSA-N Met-Ala-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MVQGZYIOMXAFQG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- DHZOGDVYRQOGAC-BZSNNMDCSA-N Phe-Cys-Tyr Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N DHZOGDVYRQOGAC-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UAMFZRNCIFFMLE-FHWLQOOXSA-N Phe-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N UAMFZRNCIFFMLE-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- TXJJXEXCZBHDNA-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC3=CN=CN3)C(=O)O)N TXJJXEXCZBHDNA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- AAERWTUHZKLDLC-IHRRRGAJSA-N Phe-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O AAERWTUHZKLDLC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 VYWNORHENYEQDW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N Ser-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FKYWFUYPVKLJLP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PMTWIUBUQRGCSB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- YGCDFAJJCRVQKU-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O YGCDFAJJCRVQKU-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- 206010057179 Toxoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 108091061763 Triple-stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- ACGIVBXINJFALS-HKUYNNGSSA-N Trp-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N ACGIVBXINJFALS-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 1
- DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 DOFAQXCYFQKSHT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 1
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029539 arginyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010059459 arginyl-threonyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002307 glutamic acids Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 1
- 108010001064 glycyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010037248 lantibiotic Pep5 Proteins 0.000 description 1
- SRCAXTIBNLIRHU-JJKPAIEPSA-N lantibiotic pep5 Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N\C(=C/C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N\C(=C/C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N\C(=C(/C)S)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(=O)CC SRCAXTIBNLIRHU-JJKPAIEPSA-N 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000001268 lymphoproliferative syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002736 metal compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical class N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000007442 viral DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16211—Lymphocryptovirus, e.g. human herpesvirus 4, Epstein-Barr Virus
- C12N2710/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
113298
Diagnostinen reagenssi, menetelmä ja testitarvikesarja EBV:n vasta-aineiden detektoimiseksi Tämä keksintö koskee diagnostisia reagensseja, 5 joilla voidaan havaita Epstein-Barr-virusta vastaan suunnattuja vasta-aineita, ja menetelmää ja testitarvikesarjaa, joilla voidaan havaita Epstein-Barr-virusta vastaan suunnattuja vasta-aineita näytteessä.
EBV on kaikkialla läsnä oleva ihmisen herpesvirus, 10 joka havaittiin ensiksi Burkittin lymfooman (BL) afrikkalaisen muodon (endeeminen tai e) yhteydessä. Tämän jälkeen virus havaittiin myös nenä-nielusyövän (NPC) yhteydessä ja sen osoitettiin olevan tarttuvan mononukleoosin (IM) aiheuttava agenssi. Infektio tapahtuu yleensä varhaislapsuudes-15 sa ja johtaa yleensä subkliiniseen ilmenemismuotoon, satunnaisesti vähäisillä oireilla. Infektio nuoruus- tai aikuisiässä voi kuitenkin aiheuttaa IM:n, jonka piirteenä ovat epätyypilliset lymfosyytit elimistön perifeerisissä osissa. Valtaosa näistä lymfosyyteistä on T-lymfosyyttejä; 20 niihin lukeutuu kuitenkin pieni populaatio B-lymfosyyttejä, jotka ovat infektoituneet EBV:llä. B-lymfosyyttien infek- · toituminen voidaan saada aikaan myös in vitro. Sellaiset ί solut transformoituvat ja lisääntyvät rajattomasti viljel- ; j mässä, ja niihin on viitattu nimellä "kuolemattomiksi muut- 25 tuneet", "latentisti infektoituneet" tai "kasvun suhteen transformoituneet". Sikäli kuin tiedetään, kaikki yksilöt, t·;' jotka infektoituvat EBVrllä, pysyvät latentisti infektoitu- * * · neina loppuelämänsä. Tätä heijastaa se, että EBV-genomin , suhteen positiivisia, transformoituneita B-soluja on pieni- • ** 30 nä määrinä läpi elämän läsnä verenkierrossa perifeerisen • · '··.* veren lymfosyyttien joukossa, ja virusta irtautuu jatkuvas- ;’· · ti mutta ajoittain suunielussa.
• ·
Hyvin suuressa valtaosassa tapauksista EBV-infektio johtaa lymfoproliferatiiviseen sairauteen, joka voi ol-: " 35 la tilapäisesti heikentävä, mutta se on aina hyvänlaatuinen ·' · ja itsensä rajoittava. Tietyissä immunosuppressoiduissa yk- 113298 2 siioissa tulos voi kuitenkin olla täysimittainen pahanlaatuinen tila. Tämä tapahtuu yksilöillä, jotka on tietoisesti immunosuppressoitu, erityisesti lapsilla, jotka saavat elinsiirrännäisiä ja joita hoidetaan syklosporiini A:lla, 5 tai opportunistisesti, kuten niiden yksilöiden tapauksessa joilla on HIV-infektio, tai geneettisesti, kuten taudin kohtaamilla miespuolisilla ihmisillä, joilla on XLP.-n (X:ään kytkeytynyt proliferatiivinen syndrooma) geeni. Näissä tapauksissa tuloksena olevat pahanlaatuiset tilat 10 johtuvat EBV-infektoituneiden B-solujen polyklonaalisesta lisääntymisestä. Lisäksi sellaisissa potilaissa on havaittavissa viruksen kontrolloimatonta, epiteelissä tapahtuvaa lisääntymistä suuontelon karvaisen leukoplakian leesioissa. Täten immuunivasteella on keskeinen rooli EBV-infektion 15 kontrolloimisessa.
EBV:n läsnäolo soluissa tai kudoksissa voidaan osoittaa detektoimalla virusgenomi tai osoittamalla EBNA-1-proteiini, ainoa latenssiin liittyvä proteiinituote, joka ekspressoidaan universaalisti EBV-infektoituneissa soluis-20 sa.
Kuten edellä mainitaan, EBV kuuluu herpesviruksiin.
• · ·* ‘ Sillä on seuraavat rakenneominaisuudet: * · ·. i - EBV-genomi koostuu lineaarisesta, kaksijuostei- « · · sesta DNA-molekyylistä (172 000 emäsparia).
:* 25 - Virioni koostuu ytimestä (proteiinit ja DNA) , jo- ·;'* ta ympäröi ikosahedraalinen kapsidi, ja membraanivaipasta, • « « » :*j*; joka sulkee kapsidin sisäänsä. Ikosahedraalinen kapsidi koostuu heksameerisistä ja pentameerisistä kapsomeereistä. Membraanivaippa koostuu kaksikerroksisesta proteiini- • · *..! 30 lipidikalvosta, jonka ulkopinnalla on piikkejä. Kapsidikuo- • · *1* ren ja vaipan välillä olevan tilan täyttää amorfinen prote- « · :.*‘i iini, jota kutsutaan tegumentiksi.
- Kaikkien herpesvirusten tavoin EBV kykenee saa- :·] maan aikaan latentin elinikäisen infektion isännässään pri- » »· 35 määri-infektion jälkeen. Tämä latenssi edustaa EBV:n ja sen
< · · i · J
• · 113298 3 ihmisisännän välistä täydellistä tasapainotilaa, jota isännän immuunijärjestelmä kontrolloi.
Tähän saakka suurin osa biokemiallisista ja biologisista tutkimuksista on suoritettu kolmella EBV-proto-5 tyyppikannalla, jotka ovat B95-8 (silkkiapinan solulinjassa tuotettu transformoiva virus), P3HR1 (ei-transformoiva virus, jota tuottaa Burkittin lymfooma-syöpäsolulinja) ja Ra-ji (latentti virus Burkittin lymfooma-syöpäsolulinjassa).
Viimeisten vuosien aikana prototyyppiviruskannan 10 B95-8 koko DNA-sekvenssi on määritetty. Tämän sekvenssin analysointi on johtanut yli 80:n avoimen lukukehyksen tunnistamiseen (Baer ym. , 1984, Nature 310, s. 207 - 211).
EBV:n biologia asettaa tutkijoille erityisen ongelman, koska sen biologiset piirteet (latentti infektio) ei-15 vät ole soveliaita klassista virusanalyysiä varten. Lisäksi sen solu- ja isäntäspektri ovat tehokkaasti rajoittuneita ihmisen (ja joidenkin korkeampien kädellisten) B-lymfo-syytteihin ja epiteelisoluihin, jotka eivät yleensä ole soveliaita in vitro -viljelyyn. Lisäksi täysin permissiivisen 20 solutyypin, jossa virus replikoituu lyyttisesti, poissaolo on rajoittanut voimakkaasti kykyä tuottaa suuria määriä vi-: rusta.
S/·· B95-8-, P3HR1- ja Raji-isolaattien DNA-molekyylit ovat olleet prototyyppejä ajatellen yksityiskohtaista re-;· 25 striktioendonukleaasikartoitusta ja kloonausta Escherichia
t f I
colin (E. coli) plasmideihin ja bakteriofaagi lambdaan, ja .· ·, nukleotidisekvensointia.
EBV-genomi koostuu yhdestä kaksijuosteisesta DNA- ,,. molekyylistä, joka on rakentunut ainutlaatuisista ja tande- * » · > · 30 minä toistuvista DNA-elementeistä. Kukin DNA-molekyylin pää ’;·* sisältää moninkertaisia terminaalisia sekvenssejä, jotka mahdollistavat genomin kovalenttisen yhteenliittymisen ja ;·· sen muuttumisen rengasmuotoiseksi . Viruspartikkeleissa EBV- genomi on havaittavissa vain lineaarisessa muodossa. Se ‘ , 35 esiintyy sitävastoin rengasmaisena episomina latentisti in- • o 113298 4 fektoituneiden solujen tuman sisällä, ja integroituu satunnaisesti isäntäsolun kromosomeihin.
Sisäiset toistosekvenssit, IR1 - IR4, erottavat EBV-genomin viideksi ainutkertaiseksi alueeksi. U2- ja U3-5 alueet vaihtelevat suuresti eri EBV-isolaattien kesken, ja jälkimmäinen on lähes täysin deletoitunut EBV:n P3HR-1-kannassa.
EBV:n lukukehysten nimistö perustuu niiden sijaintiin virusgenomissa. Nimet alkavat sen BamHI- tai EcoRI- 10 restriktiofragmentin alkukirjaimilla, jossa ekspressio alkaa. Kolmas kirjain nimessä on L tai R, siitä riippuen onko ekspressio vasempaan vai oikeaan suuntaan standardikartas-sa. (Niinpä BLLF2 on toinen vasemmalle menevä lukukehys, joka alkaa BamHI-restriktiofragmentista L).
15 Virusantigeenien serologinen luokittelu EBV:n pro duktiivisessa syklissä perustuu erilaisiin fluoresenssitek-niikoihin.
Antigeenit, jotka havaitaan spesifisesti komple-menttivasta-aineisiin perustuvalla immunofluoresenssitek- 20 nilkalla latentisti infektoituneiden, kestävöityjen B-solujen (esim. Raji-solujen) tumassa, luokitellaan Epstein-' ϊ Barr-tuma-antigeeneiksi (EBNA).
", :* Kun virusgeenien ekspressio aktivoituu kemiallisten * · ·· tai virusperäisten tekijöiden vaikutuksesta, havaitaan var- :* 25 haisten antigeenien (EA) luokka, jonka synteesiä virus- ;· DNA:n synteesin inhibitio ei estä. Riippuen siitä mitä kes- • ( * jt'. tävöintiainetta käytetään (metanolia vai asetonia), on ha vaittavissa kaksi eri Ea-luokkaa, EAR ja EAd. EA on havait-tavissa epäsuoralla immunofluoresenssilla indusoitujen so- k · 3 0 lujen sytoplasmassa ja tumassa. Sen jälkeen kun viruksen • · ‘h DNA-synteesi on alkanut (ja siitä riippuen), syntetisoidaan viruksen rakenneproteiineja (jotka käsittävät membraanian-'1·': tigeenit (MA) ja viruskapsidiantigeenit (VCA) ) , jotka ovat -·[ havaittavissa epäsuoralla immunofluoresenssilla. Virusta t »· 35 tuottavien solujen (esim. P3HR1-solujen) sytoplasmassa ja k · tumassa on havaittavissa epäsuoralla immunofluoresenssilla 5 113298 joukko VCA:ita. Virusta tuottamaan indusoitujen, elinkelpoisten infektoitujen solujen pinnalla on havaittavissa epäsuoralla immunofluoresenssilla joukko antigeenejä (MA) . Nämä antigeenit voidaan havaita myös viruksen vaipassa ja 5 ne ovat tärkeitä kohteita viruksen neutralisaatiossa.
EBV-spesifisten vasta-aineiden havaitseminen ihmis-seerumeissa voidaan suorittaa rutiininomaisesti serologisilla tekniikoilla, kuten ovat kuvanneet Henle ja Henle (Human Pathology, 5, 551 - 565, 1974) .
10 Biokemiallisiin ja immunofluoresenssituloksiin pe rustuen on mahdollista erottaa viisi erilaista antigeenimo-lekyyliluokkaa. Eri viruspolypeptidit nimetään niiden mole-kyylipainon perusteella, eikä kaikille EBV-proteiineille ole saatu aikaan yhteistä nimistöä, mikä mahdollistaisi 15 niiden ainutkertaisen kuvaamisen.
Viisi eri antigeeniryhmää ovat: A. Niiden antigeenien ryhmä, jotka ekspressoituvat latenssitilan aikana (EBNA:t ja LMP:t).
B. Niiden antigeenien ryhmä, jotka ovat vastuussa 20 genomin aktivoimisesta ja viruksen replikaation alkuinduk- tiosta (IEA).
• · • » tl C. Niiden antigeenien ryhmä, jotka ovat IEA- ·. ·* geenituotteiden indusoimia ja jotka vaaditaan viruksen ·, Ί DNA:n replikaatiota varten; nämä antigeenit ovat lähinnä ;· 25 viruksen entsyymejä (EA) .
* * · '· D. Niiden antigeenien ryhmä, jotka ovat viruspar- tikkelin rakennekomponentteja ja jotka ekspressoituvat myöhään viruksen replikaatiosyklissä (VCA) viruksen DNA- .. . synteesin alkamisen jälkeen.
* · 30 E. Niiden antigeenien ryhmä, jotka ekspressoituvat infektoidun solun solumembraanilla (MA) . ί '.ί Epstein-Barr-tuma-antigeenit (EBNA) ·,*’·; Epstein-Barr-tuma-antigeeni 1 (EBNA-1) , jota koodi - tetaan BKRF1-lukukehyksessä, on ainoa EBV:n koodittama pro- » 11 ’ , 35 teiini jota ekspressoidaan universaalisti kaikissa laten-
IIMI
tisti infektoituneissa ja kasvaimiin liittyneissä soluissa 113298 6 in vivo ja in vitro, ja se muodostaa tärkeän kohdemolekyy-lin, jolla voidaan tutkia DNA-repiikaation ja geeniaktivaa-tion mekanismeja.
EBNA-1 tunnistettiin immunologisella blottauksella 5 ja radioimmunoelektroforeesilla EBV-positiivisissa mutta ei kolmessa EBV-negatiivisessa solulinjassa, kun käytettiin hyödyksi neljää EBV-positiivista ihmisseerumia ja vertailtiin kahteen EBV-negatiiviseen ihmisseerumiin. Tunnistetuilla antigeeneillä oli eri analysoiduissa solulinjoissa 10 eri molekyylipainot, jotka olivat välillä 65 000 - 73 000. Komplementtia fiksoiva antigeeni oli puhdistettu osittain yli 200-kertaisesti ja sen havaittiin puhdistuvan yhtaikaa 65 kDa:n EBNA:n kanssa, joka tunnistettiin immunoblottauksella. Koska EBNA määritetään anti-komplementti-15 immunofluoresenssilla (ACIF), ehdotettiin että 65 kDa:n antigeeni oli EBNA:n pääkomponentti.
EBNA-geeni kartoitettiin transfektoimalla hiiren solut EBV-DNA:n kloonatulla BamHI-K-restriktioentsyymi-fragmentilla. Hiiren fibroblastilinjan transfektoiminen 20 tällä fragmentilla yhdessä dominantin selektoitavissa olevan markkerin kanssa johti sellaisen tuma-antigeenin sta-! : hiiliin ekspressoitumiseen, joka tunnistettiin ACIF:ssä EB- : *· NA-positiivisilla mutta ei EBNA-negatiivisilla ihmisseeru-
j meillä. Myöhemmässä tutkimuksessa havaittiin, että Bam K
i* 25 -transfektoidut solut ekspressoivat 78 kDa:n polypeptidin, ·· joka liikkui samalla nopeudella kuin B95-8-solujen EBNA-1- polypeptidi.
Tuoreemmat tutkimukset ovat paljastaneet immunodo-• ^ minantin alueen glysiini-alaniini-toistoalueen sisällä, jo- 30 hon viitataan tavallisesti nimellä p62 tai pl07, joka on ’;* vahvasti reaktiivinen ihmisseerumeiden kanssa. Tämän gly- ala-fragmentin havaittiin kuitenkin sisältyvän normaaleihin ihmisen proteiineihin ja sen havaittiin olevan itseä vas-taan suunnattujen vasta-aineiden ("auto-vasta-aineiden") 35 kohde. Lisäksi jatkotutkimukset ovat paljastaneet, että * » · i · sellaisten potilaiden seerumeissa, joilla on aktiivisia 113298 7 CMV-, HSV- tai toksoplasmainfektioita, IgM-vasta-aineet osoittautuvat satunnaisesti ristireagoiviksi tämän peptidin kanssa. Lisäksi E. colissa ekspressoidun 28 kDa:n C-termi-naalisen fragmentin, joka koodittaa EBNA-l:n aminohappoja 5 461 - 641, osoitettiin olevan reaktiivinen ihmisseerumin vasta-aineiden kanssa. Lisätutkimukset eivät tähän mennessä ole onnistuneet tunnistamaan EBNA-proteiinin pienempiä fragmentteja, joita voidaan käyttää korvaamaan ehjä EBNA-1-proteiini diagnostiikassa.
10 EBV:n viruskapsidiantigeenit (VCA) Tätä antigeeni kompleksi a koskee myös se, että eri tutkimuksissa tunnistettujen EBV-spesifisten proteiinien vertailu on vaikeaa käytettyjen polyakryyliamidigeelijär-jestelmien, solulinjojen ja kemiallisten induktoreiden ja 15 seerumien vaihtelujen vuoksi.
Dolyniuk ym. (1979) kuvasivat kaikkiaan 33 proteiinia, jotka olivat liittyneinä puhdistettuihin virioneihin. Erittelysolubilisaatio ("differential solubilisation") de-tergentteihin viittaa siihen, että nukleokapsidi koostuu 20 ainakin seitsemästä proteiinista. VCA-kompleksin tärkeä komponentti on pääkapsidiproteiini (MCP). EBV-MCP:n koodi : : sijaitsee virusgenomin BcLFl-lukukehyksen sisällä (Bear ·. · ym., 1984) ja EBV-tuottajasolulinjoissa se ekspressoituu | 153 - 160 kDa:n ei-glykosyloituna proteiinina, jonka pl on ;· 25 7,5-9,0. Tämä proteiini syntetisoidaan sytoplasmassa liu- « » * ;· koisessa muodossa ja sitten se siirretään tumaan, jossa se kondensoituu kapsideiksi eikä sitä enää voi saattaa liukoiseen muotoon detergenteillä. Toisella VCA-pääkomponentilla ..(.t on 125 kDa:n molekyylipaino ja se on glykosyloitunut. Tämän • · 30 proteiinia kooditetaan virusgenomin BALF4 - lukukehyksen si-säilä. Vaikkakin tämä glykoproteiini luokiteltiin alun pe- * · ·/·· rin VCA-komponentiksi, viimeaikaiset tutkimukset viittaavat *:*'! siihen, että se saattaisi itse asiassa olla liittyneenä sy- toplasmisiin ja tumamembraanin rakenteisiin.
I » · 35 Aikaisemmin kuvatut kokeet (J. M. Middeldorp ja P.
Herbrink, J. Virol. Meth., 21, 133 - 146, 1988) tähtäsivät 113298 8 diagnostisesti relevanttien EBV-markkeriproteiinien tunnistamiseen ja karakterisointiin eri EBV-tauteihin liittyen.
Tämä tehtiin käyttämällä immunoblottausliuskoja, jotka sisältävät antigeenejä, jotka oli valmistettu virusta 5 tuottavasta solulinjasta HH514-C16 (P3HRl:n superindusoita-vissa oleva johdannainen), joka oli indusoitu VCA/EA:n tai EA:n ekspressiota silmälläpitäen, ja EBV-negatiivisista so-lulinjoista Ramos ja Bjab. Solulinjoja X50-7 ja JC-5, jotka sisältävät EBV-genomin (täysin) latentissa tilassa, voidaan 10 käyttää tutkittaessa EBNA/LMP:tä spesifisesti.
EBV-vasta-ainevastemalleja tutkittiin terveiden se-ropositiivisten verenluovuttajien seerumeista, IM-potilai-den seerumeista ja kroonisten IM-potilaiden seerumeista tai sellaisten potilaiden seerumeista, joilla on EBV:hen liit-15 tyviä kasvaimia kuten nenä-nielusyöpä. Kun halutaan karakterisoida joitakin proteiinijuovia, jotka havaitaan tällä kokeellisella järjestelmällä, voidaan käyttää polyklonaali-sia ja monoklonaalisia vasta-aineita, jotka ovat reaktiivisia määrättyjen EBV-genomituotteiden kanssa. Nämä tutkimuk-20 set kuvasivat kuitenkin vain proteiineja tai polypeptidejä, joilla on tietty molekyylipaino. Mitään sellaista tietoa ei , : ollut saatavilla, joka olisi koskenut näitä proteiineja .· koodittavaa sekvenssiä EBV-genomissa. Ei liioin tiedetty, • · johtuivatko immunoreaktiiviset juovat immunobloteissa reak-;· 25 tiivisuudesta yhden proteiinin kanssa vai monen proteiinin ·· kanssa, joilla oli sama molekyylipaino.
Immunoblottaustekniikalla on mahdollista havaita EBV-antigeeni, jonka molekyylipaino on 18 kDa. Tätä prote- .. . iinia ei ekspressoida, kun fosfonoetikkahappoa (PAA) käyte- • · ‘..1 30 tään viruksen DNA-synteesin estämiseksi, ja se havaitaan • · "·’ kaikilla seerumeilla, jotka sisältävät VCA-vasta-aineita, mikä viittaa siihen että se on VCA:han liittyvä komponent- ti. Toinen VCA-komponentti on proteiini, jonka molekyyli- ./ paino on 40 kDa. Monet viruksen kapsidiantigeeneista ovat * · · ‘ . 35 tumasakkaan liittyviä.
t » · i · * · 9 113298
Menibraaniantigeenit (MA)
Epstein-Barr-viruksen membraaniantigeenit (EBV-MA) ovat läsnä virionin vaipassa, infektoituneen solun ulkomem-braaneilla ja solunsisäisissä membraanirakenteissa. Useiden 5 glykoproteiinien ja yhden ei-glykosyloidun proteiinin on kuvattu käsittävän MA-kompleksin, joista eniten tutkittu on gp350/220, jota kooditetaan BLLF1-lukukehyksessä. MA-gp350/220 on välttämätön EBV:n sitoutumiselle soluresepto-riin CR2 (CD21) , ja gp350/220:tä vastaan suunnatut vasta-10 aineet voivat estää tämän sitoutumisen estämällä EBV:n menon soluun (viruksen neutralisaatio). Toisaalta gp350/220:tä vastaan suunnatut vasta-aineet, jotka sitoutuvat gp350/220:een solun plasmamembraanilla, voivat välittää virusinfektoitujen solujen hajoamista aktivoimalla komple-15 mentin tai T-tappajalymfosyytit. Tällä mekanismilla myös virusepitoopit voivat hajota (virolyysi), mikä tuhoaa näin viruksen infektiivisyyden. Ihmisseerumeissa on havaittu eri luokkiin kuuluvia, gp350/220:tä ja muita MA-kompleksin rakenneosia vastaan suunnattuja vasta-aineita, kun elävien 20 EBV-tuottajasolujen pintaa on tutkittu epäsuoralla immuno-fluoresenssilla, tai käyttämällä entsyymiin kytkettyä immu- » · : :: nologista määritystä (ELISA), jossa näitä proteiineja käy- ,'·· tetään puhtaassa muodossa.
: Sellaisilla vasta-aineilla voi olla tärkeä rooli * · ·· 25 isännän suojauksessa, sikäli että ne estävät viruksen si-
) I
· säänmenoa ja leviämistä. Niinpä EBV-MA ja erityisesti . ;·. gp350/220 on ollut kohteena laajoissa tutkimuksissa, joiden tavoite on alayksikkörokotteen kehittäminen EBV-infektion .. . estämiseksi.
* « · • · 30 Tämä lähestymistapa on osoittautunut soveliaaksi • · eläinmallissa ja se on hiljattain tuotu pieniin kenttäkö-
• I
:/·: keisiin Kiinassa ilmeisellä menestyksellä.
•:··: Tällä hetkellä EBV-spesifinen serodiagnoosi saadaan aikaan varsin subjektiivisilla immunofluoresenssitesteillä.
» » · 35 Yksinkertaisempaa ja yhtäläisempää diagnoosia (esim. ELISA) 1**11 kohti eteneminen on hidasta, koska virusantigeenien massa- 113298 10 tuotanto ja puhdistus eivät ole mahdollisia standardinomai-sia virustuotantosolulinjoja käyttämällä.
Ainoa tapa saada tämä aikaan olisi käyttää vaihtoehtoisesti valmistettu(j)a EBV-antigeeniä/antigeenejä. Nämä 5 EBV-antigeenit voitaisiin valmistaa joko geeniteknologisin menetelmin tai synteettisiä peptidejä käyttävin menetelmin.
Immunodominanttien virusproteiinien ja niiden epi-tooppien tunnistaminen on hyvin tärkeää, jotta voitaisiin kehittää spesifinen ja herkkä menetelmä, joka mahdollistai-10 si luotettavan diagnoosin tekemisen EBV-infektion eri vaiheissa.
Proteiineja ja peptidejä, joita voidaan käyttää Ep-stein-Barr-virusta vastaan suunnattujen vasta-aineiden havaitsemiseen, on kuvattu kahdessa samaan aikaan vireillä 15 olevassa, hakijan toisessa patenttihakemuksessa, joiden sisällöt liitetään tähän viitteenä: ensimmäinen näistä pa tenttihakemuksista käsittää VCA-pl8-proteiinit ja VCA-p40-proteiinit, jotka kooditetaan EBV-genomin lukukehysten BFRF3 ja vastaavasti BdRFl:n sisällä (EP 0 574 048), kun 20 taas toinen patenttihakemus (EP 92 202 794.4) koskee EBNA- . . 1-proteiinia, jota kooditetaan BKRF-1-lukukehyksessä.
* · Ί j Lisäksi membraaniantigeenien ryhmästä peräisin ole- i · '· '·* vaa proteiinien ja peptidien joukkoa, edullisesti • * l gp350/220:aa, voidaan käyttää Epstein-Barr-virusta vastaan 2 5 suunnattujen vasta-aineiden havaitsemista varten. n 1' Näiden proteiinien sisällä on paikannettu immunodo- minantteja epitooppeja jotka - yhdistettyinä synteettisiin peptidimolekyyleihin - voivat korvata ehjät proteiinit ’.V. diagnostiikassa ilman että diagnostista herkkyyttä menetet-
I I
30 täisiin.
t t ’·' Tämänhetkiset edulliset diagnostiset testit EBV- * « : seropositiivisuuden arvioimista varten pohjautuvat siihen, '“· että havaitaan 1) viruksen rakenneproteiineja (mukaan luki- » en viruksen kapsidiantigeenit ja membraaniantigeenit) vas-35 taan suunnatut IgG-vasta-aineet epäsuoralla immunof luore-senssianalyysillä käyttämällä virusta tuottavia soluiinjoja 113298 11 (esim. P3HR1) ja 2) EBNA:aa (Epstein-Barr-tuma-antigeenia) vastaan suunnatut IgG-vasta-aineet käyttämällä anti-komplementti -immunofluoresenssia latentisti infektoituneissa solulinjoissa (esim. Raji). Kukin määritys detektoi 5 erikseen vasta-aineita monimutkaisessa proteiinijoukossa infektoituneessa solussa. Nämä IgG-vasta-ainetyypit ovat läsnä kaikissa EBV-infektoituneissa ihmisissä, sillä rajoituksella että kukin yksilöllinen tyyppi voidaan havaita herkkyydellä 90 - 98 %.
10 Nyt on havaittu, että EBV-seropositiivisten seeru- meiden piirteenä on yleensä viruksen rakenneproteiineja (VCA ja MA) ja EBNA:aa vastaan suunnattujen vasta-aineiden samanaikainen läsnäolo.
Useimmissa tapauksissa EBV-seropositiivisista luo-15 vuttajista saadut seerumit sisältävät vasta-aineita VCA-pl8:lle ja EBNA-1:lie. EBV-seropositiivisilla luovuttajilla on satunnaisesti VCA-pl8-vasta-aineita niin että EBNA-1-vasta-aineiden tasot ovat alhaiset tai negatiiviset, ja päinvastoin. Tämä vastaa tunnettua VCA- ja EBNA-immuno-20 fluoresenssiserologiaa, joista kumpikin tunnistaa 95 -98 %:n herkkyydellä todellisia EBV-seropositiivisia luovut-i tajia. Samalla tavoin MA:ta vastaan suunnatut vasta-aineet • voidaan havaita noin 90 %:n herkkyydellä.
Puhdistettujen dominanttien EBV-diagnostisten mark- 25 kerimolekyylien, se on: VCA-pl8:n tai MA-gp350/220:n ja EB- '· NA-l:n, yhdistäminen yksittäiseksi diagnostiseksi määrityk- seksi tuottaa herkemmän määrityksen EBV-seropositiivisuuden määrittämiseksi. Sekä VCA-pl8:ta tai MA-gp350/ 220:tä ja .. . EBNA-1:tä vastaan suunnattujen vasta-ainevasteiden yhdis- • » 30 tetty arviointi yksittäisessä määrityksessä (esimerkiksi •y’ immunoblottauksella, ELISA:11a, Spia:lla) lisää sekä herk- • » kyyttä että tarkkuutta EBV-seropositiivisuusstatuksen mää-rittämisessä.
..j Sellainen yhdistelmä ei ole mahdollinen nykyisellä • · · 35 immunofluoresenssiin perustuvalla diagnostiikalla.
1 · i2 113298 Nämä markkerimolekyylit voivat olla joko ehjiä pro-teiinilajeja, jotka on puhdistettu EBV-infektoituneista soluista, tai ne voidaan puhdistaa solulinjoista tai mikro-organismeista, jotka on manipuloitu yhdistelmä-DNA-5 tekniikoita käyttämällä tuottamaan näitä proteiineja. Tähän tarkoitukseen voidaan vaihtoehtoisesti käyttää synteettisiä peptidejä, jotka edustavat immunodominantteja alueita (epi-tooppeja) kussakin näissä proteiineissa.
Niinpä tämän keksinnön tavoite on, että yksittäistä 10 diagnostista määritystä varten tehty yhdistelmä, jossa on ainakin VCA-proteiinin osa, kuten VCA-pl8 (jota kooditetaan EBV-genomin BFRF3-lukukehyksen sisällä), VCA-p40 (jota kooditetaan EBV-genomin BdRFl-lukukehyksen sisällä), EBV-MCP (jota kooditetaan EBV-genomin BcRFl-lukukehyksen sisällä), 15 gpl25 (jota kooditetaan EBV-genomin BALF4-lukukehyksen sisällä) tai MA-proteiini, kuten gp350/220 (jota kooditetaan EBV-genomin BLLF1-lukukehyksen sisällä) ja ainakin osa EB-NA-proteiinista, tuottaa EBV-vasta-aineen havaitsemismene-telmän, jolla on suurempi herkkyys ja tarkkuus kuin nykyi-20 sillä menetelmillä.
Keksintö koskee näin ollen kahden erillisen dia- » I % : gnostisen markkerimolekyylin yhdistämistä yksittäiseksi * » * * » 113298 13 ydinantigeenien kanssa (EBNA). Membraaniantigeenien ryhmästä MA-gp350/220-proteiinit ovat edullisia.
Keksintö koskee näin ollen diagnostisia reagensse-ja, jotka käsittävät MA-gp350/220- ja EBNA-l-peräisten pep-5 tidien yhdistelmän.
Toinen tämän keksinnön edullinen suoritusmuoto koskee diagnostisia reagensseja, jotka käsittävät VCA-pl8- ja EBNA-l-peräisten peptidien yhdistelmän, jolloin mainitut peptidit käsittävät ainakin osan aminohapposekvenssistä, 10 kuten esitetään SEQ ID nro l:ssä (VCA-pl8) tai SEQ ID nro 5:ssä (EBNA-1).
VCA-pl8-proteiineista peräisin olevat peptidit, joita voidaan käyttää keksinnön mukaisen diagnostisen rea-genssin edullisessa suoritusmuodossa, yhdistelmänä EBNA-1-15 peräisten peptidien kanssa, ovat peptidejä jotka käsittävät aminohapposekvenssit, jotka ovat SEQ ID nro 2 - 4:n mukaisia. Edullisimmin käytetään peptidiä, joka käsittää SEQ ID nro 4:n mukaisen aminohapposekvenssin, jolloin tämä sekvenssi on yhdistelmä VCA-pl8-proteiinin kahdesta reaktiivi-20 sesta osasta, jotka ovat SEQ ID nro 2:n ja 3:n mukaisia.
, , EBNA-l-peräiset peptidit, joita käytetään edulli- '; j sesti keksinnön mukaisessa diagnostisessa reagenssissa,
’· 1 ovat peptidejä jotka käsittävät yhden tai useamman SEQ ID
: nro 6-9 mukaisen aminohapposekvenssin. Edullisimmin käy- 25 tetään peptidiä, jolla on SEQ ID nro 9:n mukainen sekvens-iti’/ si, jolloin tämä sekvenssi on yhdistelmä EBNA-1-proteiinin ; · : reaktiivisista osista, jotka ovat SEQ ID nro 6 - 8:n mukai sia.
Kenelle tahansa ammattimiehelle on selvää, että » · » | .···, 30 mainittujen polypeptidien konservatiiviset variaatiot ovat ” myös osa tätä keksintöä. Termi "konservatiivinen variaatio" • · \ *: tässä käytettynä tarkoittaa aminohappotähteen korvaamista toisella, biologisesti samanlaisella tähteellä. Esimerkkei- :·. hin konservatiivisista variaatioista kuuluvat yhden hydro- • »·
Mii; 35 fobisen tähteen, kuten isoleusiinin, valiinin, leusiinin
* I
tai metioniinin, substituutio toisella, tai yhden polaari- 113298 14 sen tähteen substituutio toisella, kuten arginiinin substituutio lysiinillä, glutamiinihappojen asparagiinihapoilla, tai glutamiinin asparagiinilla, ja vastaavat. Termi "konservatiivinen variaatio" käsittää myös substituoidun amino-5 hapon käytön substituoimattoman lähtöaminohapon paikalla, edellyttäen että substituoitua polypeptidiä vastaan aikaansaadut vasta-aineet reagoivat immunologisesti myös substituoimattoman polypeptidin kanssa. Niinpä kun käytetään rutiininomaista seulontamenetelmää, kuten konservatiivisen 10 varianttipolypeptidin testaamista seerumeilla, jotka ovat peräisin potilaalta jolla on EBV-assosioitunut sairaus, ammattimies voi helposti määrittää onko varianttipolypepti-dillä keksinnön mukainen vaadittava polypeptidin biologinen aktiivisuus ilman että pitäisi turvautua tarpeettomaan ko-15 keiluun.
Keksinnön mukainen diagnostinen reagenssi käsittää yleensä yhden tai useamman peptidin ja soveliaan kantajan tai leimausaineen.
Käyttökelpoisia kantajia ovat esimerkiksi mikrotes-20 tikuopan sisäseinä tai kyvetti, putki tai kapillaari, mem-braani, suodatin, testiliuska tai sellaisen partikkelin ; : pinta kuten esimerkiksi lateksipartikkeli, erytrosyytti, : · värisooli, metallisooli tai metalliyhdiste soolipartikkeli- . j na, kantajaproteiini kuten BSA tai KLH.
;· 25 Käyttökelpoisia leimausaineita ovat muun muassa ra- ;· dioaktiivinen isotooppi, fluoresoiva yhdiste, entsyymi, vä risooli, metallisooli tai metalliyhdiste soolipartikkelina.
Menetelmässä jolla voidaan havaita EBV:tä vastaan . . suunnattuja vasta-aineita näytteessä, keksinnön mukainen 30 diagnostinen reagenssi saatetaan kontaktiin näytteen kans- > · ·; sa. Peptidin ja näytteessä olevien vasta-aineiden välillä !t’.j muodostuneiden immunokompleksien läsnäolo havaitaan ja tä- män havaitsemisen nojalla EBV-vasta-aineiden läsnäolo näyt-teessä tiedetään ja se voidaan määrittää kvantitatiivises-35 ti.
MMI • » 113298 15
Reagenssin luonteesta ja muista piirteistä riippuen tapahtuva immunokemiailinen reaktio on niin kutsuttu ker-rosreaktio, agglutinaatioreaktio, kompetitioreaktio tai in-hibitioreaktio.
5 EBV:n havaitsemiseksi näytteessä keksinnön mukainen diagnostinen reagenssi, joka sisältää yhden tai useamman peptidin, voidaan saattaa kontaktiin näytteen ja EBV-vasta-aineen kanssa, minkä jälkeen voidaan havaita muodostuneiden immunokompleksien läsnäolo ja tämän pohjalta määrittää 10 EBV:n läsnäolo näytteessä.
Samoin voidaan käyttää kerrosformaattia, jossa näyte saatetaan kontaktiin yhden tai useamman peptidin kanssa, jotka on päällystetty kiinteän kantajan pintaan, esimerkiksi mikrotestikuopan sisäseinään, ja yhden tai useamman lei-15 matun peptidin tai leimatun anti-vasta-aineen kanssa, minkä jälkeen minkä tahansa leiman läsnäolo kiinteässä faasissa voidaan havaita.
Keksintö koskee lisäksi menetelmää, jolla voidaan havaita Epstein-Barr-virusta vastaan suunnattuja vasta- 20 aineita näytteessä, ja jolle on tunnusomaista, että näyte • saatetaan kontaktiin keksinnön mukaisen diagnostisen rea- V ! genssin kanssa, ja mainitun reagenssin ja vasta-aineiden ; ] välillä muodostuneet immunokompleksit havaitaan.
« · · '· Keksinnön mukainen testitarvikesarj a käsittää 2 5 oleellisena ainesosana edellä kuvatun diagnostisen reagens-.,!!* sin. Kun kerrosreaktio suoritetaan, testitarvikesarj a voi : käsittää EBV-vasta-aineiden havaitsemista varten esimerkik si keksinnön mukaisen peptidin, joka on päällystetty kiin-teän kantajan pintaan, esimerkiksi mikrotestikuopan sisä-30 seinään, ja joko keksinnön mukaisen leimatun peptidin tai ,· _ leimatun anti-vasta-aineen.
'· ” Kompetitioreaktion suorittamista varten testitarvi- ‘ ' kesarja voi käsittää keksinnön mukaisen peptidin, joka on t päällystetty kiinteän kantajan pintaan, ja leimatun vasta-35 aineen, joka on suunnattu EBV:tä vastaan, edullisesti mono- 113298 16 klonaalisen vasta-aineen, joka on suunnattu mainittua peptidiä vastaan.
Agglutinaatioreaktiossa testitarvikesarja käsittää immunokemiallisen reagenssin, joka voi käsittää keksinnön 5 mukaisen peptidin, joka on päällystetty partikkeleihin tai sooleihin.
Toinen testitarvikesarjan suoritusmuoto on esimerkiksi keksinnön mukaisen leimatun peptidin käyttö immunoke-miallisena reagenssina kompetitioreaktiossa, jossa se kil- 10 pailee havaittavan EBV-antigeenin kanssa kiinteän kantajan pintaan sidotun, EBV:tä vastaan suunnatun vasta-aineen pinnalla olevasta sitoutumiskohdasta.
Edellä oleva esitys kuvaa yleisesti tätä keksintöä. Täydellisempi ymmärrys voidaan saada aikaan viittaamalla 15 seuraaviin spesifisiin esimerkkeihin, jotka tarjotaan yksinomaan havainnollistamistarkoituksia varten ja joiden ei ole tarkoitus rajoittaa keksinnön suojapiiriä.
Kuvioiden lyhyt kuvaus
Kuvio 1: 20 Immunoblottausanalyysi satunnaisesti kerätyistä terveiden verenluovuttajien näytteistä, jotka testattiin silmälläpitäen seerumin IgG:n reaktiivisuutta EBV-• proteiinien kanssa (EBNA + VCA), jotka ekspressoitiin vi- : -j rustuottajasolulinjassa P3HRi - HH514 - C16.
* 25 Kuvio 2: f· Elisa-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm:n alu- . eella) ihmisen seeruminäytteistä, silmällä pitäen IgG- reaktiivisuutta VCA-pl8:ta ja EBNA-l:tä vastaan yksinään ja yhdistelmänä.
• · 30 ♦ tai 0 osoittaa seerumeita, jotka ovat negatiivi- * * *;* siä standardinomaisessa serologisessa analyysissä sekä VCA- ·“/·! että EBNA-vasta-aineiden suhteen.
tai □ osoittaa seerumeita, jotka ovat positiivi- ;·* siä standardinomaisessa serologisessa analyysissä sekä VCA- * »· 35 että EBNA-vasta-aineiden suhteen.
• > I) I
EBNA-yhdistelmäpeptidi: 113298 17
Peptidi, jonka aminohapposekvenssi on SEQ ID nro 9:n mukainen.
VCA-yhdistelmäpeptidi:
Peptidi, jonka aminohapposekvenssi on SEQ ID nro 5 4:n mukainen.
EBNA- ja VCA-yhdistelmäpeptidi:
Yhdistelmä kahdesta peptidistä, joiden aminohapposekvenssit ovat SEQ ID nro 4:n ja 9:n mukaiset.
Kuvio 3: 10 ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukosta ihmisseerumeita, jotka on hankittu terveiltä veren luovuttajilta Amerikan Yhdysvalloista, silmälläpitäen IgG-reaktiivisuutta VCA-pl8:ta ja EBNA-l:tä vastaan yksin ja yhdistelmänä.
15 Kuvio 4: ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukosta ihmisseerumeita, jotka on hankittu terveiltä veren luovuttajilta Hong Kongista, silmälläpitäen IgG-reaktii-visuutta VCA-pl8:ta ja EBNA-l:tä vastaan yksin ja yhdistel- 2 0 mänä.
Kuvio 5: : ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukos- • ta ihmisseerumeita, jotka on hankittu potilailta Hong Kon- [ gista, jotka kärsivät nenä-nielusyövästä (NPC), silmällä :* 25 pitäen IgG-reaktiivisuutta VCA-pl8:ta ja EBNA-l:tä vastaan ·· yksin ja yhdistelmänä.
. c. Kuvio 6: ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukos-ta ihmisseerumeita, jotka on hankittu terveiltä veren- • » 30 luovuttajilta Amerikan Yhdysvalloista (n = 38), silmällä y pitäen IgG-reaktiivisuutta MA-gp350/220:tä ja EBNA-l:tä vastaan yksin ja yhdistelmänä.
*:**: Kuvio 7: ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukos- ] . 35 ta ihmisseerumeita, jotka on hankittu terveiltä veren- » luovuttajilta Hong Kongista (n=37), silmälläpitäen IgG- 113298 18 reaktiivisuutta MA-gp350/220:tä ja EBNA-l:tä vastaan yksin ja yhdistelmänä.
Kuvio 8: ELISA-reaktiivisuus (optinen tiheys 450 nm) joukos-5 ta ihmisseerumeita, jotka on hankittu potilailta Hong Kongista, jotka kärsivät nenä-nielusyövästä (NPC), silmällä pitäen IgG-reaktiivisuutta MA-gp350/220:tä ja EBNA-l:tä vastaan yksin ja yhdistelmänä.
Esimerkki 1 10 Suoritettiin immunoblottausanalyysi satunnaisesti kerätyistä terveistä verenluovuttajanäytteistä, jotka testattiin silmällä pitäen seerumin IgG:n reaktiivisuutta EBV-proteiinien (EBNA + VCA) suhteen. Proteiinit ekspressoitiin virustuottajasolulinjassa P3HR1-HH514-CI6, erotettiin dena- 15 turoivassa SDS-PAGEssa pelkistävissä olosuhteissa ja siirrettiin nitroselluloosalle kuten jäljempänä yksityiskohtaisesti kerrotaan:
Proteiiniuutteet valmistettiin EBV-tuottajasolu-linjan HH514.C16 (P3HRi6-peräinen) tumafraktiosta, joka oli 20 erotettu denaturoivassa natriumdodekyylisulfaatti (SDS) -polyakryyliamidigeelielektroforeesissa (PAGE) pelkistävis-: sä olosuhteissa 10-prosenttisissa akryyliamidilevygeeleis- : j sä. Elektroforeettisen erottamisen jälkeen proteiinit siir- I j rettiin nitroselluloosa-arkeille, jotka leikattiin sittem- ;· 25 min pieniksi (3 mm:n) liuskoiksi.
:'· EBV-proteiinit sisältäviä liuskoja liotettiin fos- faattipuskuroidussa suolaliuoksessa, pH 7,4 (PBS) , joka oli 4-prosenttinen maitojauheliuoksen ja 5-prosenttinen hevosen ;v# seerumin suhteen ja sisälsi 0,05 % Tween-20:tä (tukkimis- » · 30 puskuri) , 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Ihmisseerumei- • · ”* ta, jotka oli laimennettu 1:100 tukkimispuskurissa, inku- ϊ/.ί boitiin yksittäisten liuskojen kanssa 1 tunnin ajan huo- ·:··: neenlämpöt ilassa, minkä jälkeen liuskat pestiin 4 kertaa PBS:llä, joka oli 0,05-prosenttinen Tween-20:n suhteen. Si- » · » 35 toutunut, EBV:tä vastaan suunnattu IgG havaittiin käyttämällä ihmisen IgG:tä vastaan suunnattuja peroksidaasilei- 113298 19 mattuja lampaan vasta-aineita ja 4-kloronaftolia värinkehi-tykseen.
Nämä menetelmät kuvataan yksityiskohtaisesti artikkeleissa J. Virol. Meth 21 (1988) ja J. Med. Virol. 40 5 (1993) 161 - 169.
Asiaankuuluvien diagnostisten markkerimolekyylien VCA-pl8 ja EBNA-1 sijainti osoitetaan nuolella.
Kontrolliseerumit olivat peräisin tunnetusta EBV-negatiivisesta (-) ja vahvasti EBV-positiivisesta (+) luo- 10 vuttajasta.
Seerumit 1-37 edustavat satunnaisesti kerättyjä seeruminäytteitä terveiltä verenluovuttajilta.
Edellä kuvatun immunoblottausanalyysin tulokset esitetään kuviossa 1.
15 Kaikki seerumit testattiin EBV-seropositiivisiksi standardinomaisilla kaupallisesti saatavilla olevalla immu-nofluoresenssiin perustuvalla diagnostiikalla, lukuun ottamatta seerumia nro 8, joka oli EBV-seronegatiivinen.
Markkeriproteiinit VCA-pl8 ja EBNA-1 osoitetaan.
20 Lukuun ottamatta satunnaisia EBV-seronegatiivisia luovutta- ; jia, joilta EBV-spesifiset vasta-aineet puuttuvat (esim.
! nro 8), EBV-seropositiivisilta luovuttajilta peräisin ole- | van IgG:n havaitaan reagoivan monien erilaisten EBV- ’ ’1 proteiinien kanssa, selkeimmin ja useimmin VCA-pl8:n ja EB- * 1 ί 25 ΝΑ-1:n kanssa (katso nuolet).
,, i’ Seerumit nro 9, 12, 16, 18, 19, 31 ovat VCA-pl8- V · vasta-aineen suhteen positiivisia ja niillä on heikko - ne gatiivinen EBNA-1-vasta-ainereaktiivisuus, kun taas seeru-mit nro 11, 14, 21, 22, 30, 37 ovat EBNA-1-vasta-aineen 1 » 30 suhteen positiivisia ja niillä on matala tai negatiivinen I I · ,· . VCA-pl8-vasta-ainereaktiivisuus.
· Esimerkki 2 * 1 1 « · ‘ 1 Kuvio 2 esittää tulokset entsyymiin kytketystä im- , munosorbenttimäärityksestä, jossa käytettiin puhdistettuja 35 reagensseja, jotka edustivat spesifisesti joko VCA-pl8:aa tai EBNA-1:tä yksinään tai yhdistelmänä. Tässä kokeessa 113298 20
VCA-pl8 tai EBNA-l-yhdistelmäpeptidejä käytettiin konsent-raationa 1 Mg/ml 0,05-molaarisessa NaHC03-puskurissa, pH
9,6, päällysteenä kiinteän faasin pinnalla joko yksinään tai yhdessä 1:1-yhdistelmänä. Samaa seerumijoukkoa, jota 5 käytettiin esimerkissä 1 (kuvio 1) , käytettiin tarkkailtaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien seerumien voidaankin osoittaa olevan (rajalla) EBV-positiivisia, kun käytetään VCA-pl8:sta ja EBNA-l:stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä yksinkertaisempi suora 10 ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
Esimerkki 3
Kuvio 3, 4 ja 5 osoittavat tulokset entsyymiin kytketystä immunosorbenttimäärityksestä, jossa käytettiin puh-15 distettuja reagensseja, jotka spesifisesti edustivat joko VCA-pl8:aa tai EBNA-l:tä yksinään tai yhdistelmänä. Näissä kokeissa VCA-pl8- tai EBNA-l-yhdistelmäpeptidejä käytettiin konsentraationa 1 μ9/ηι1 0,05-molaarisessa NaHCC>3-puskurissa, pH 9,6, päällysteenä kiinteän faasin pinnalla 20 joko yksinään tai yhdessä 1:1-yhdistelmänä.
Kuviossa 3 joukkoa terveiltä verenluovuttajilta ’ Amerikan Yhdysvalloista saatuja seerumeita käytettiin arvi- • oltaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien see- '· rumien voidaankin osoittaa olevan (rajalla) EBV- ♦ : 25 positiivisia, kun käytetään VCA-pl8:sta ja EBNA-l:stä erik- t ·* seen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä yksinker- V · taisempi suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
·*·’. Kuviossa 4 joukkoa terveiltä verenluovuttajilta • » .**·. 3 0 Hong Kongista saatuja seerumeita käytettiin arvioitaessa • · » • vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien seerumien • · • « * '· "· voidaankin osoittaa olevan (rajalla) EBV-positiivisia, kun ‘ ' käytetään VCA-pl8:sta ja EBNA-l:stä erikseen saatujen tu- losten yhdistelmää, voidaan tehdä paljon yksinkertaisempi 3 5 suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yh distämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
113298 21
Kuviossa 5 Hong Kongista peräisin olevilta, nenä-nielusyövästä (NPC) kärsiviltä potilailta saatuja seerumeita käytettiin arvioitaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien seerumien voidaankin osoittaa olevan (ra-5 jalla) EBV-positiivisia, kun käytetään VCA-pl8:sta ja ΕΒΝΆ-l:stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä yksinkertaisempi suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi. Pelkän VCA-yhdistelmäpeptidin (kuvion vasen osa) ja yhdis-10 tetyn VCA- ja EBNA-yhdistelmäpeptidin (kuvion oikea osa) välinen ero on erityisen huomattava.
Edellä esitetyt kokeet osoittavat, että eri ihmispopulaatioissa, joissa EBV:hen liittyvät oireet ovat erilaisia (tai terveissä ihmispopulaatioissa) VCA- ja EBNA-15 yhdistelmäpeptidi osoittaa, että voidaan tehdä yksinkertaisempi suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
Esimerkki 4
Kuviot 6, 7 ja 8 osoittavat tulokset entsyymiin 20 kytketystä immunosorbenttimäärityksestä, jossa käytettiin • ^ puhdistettuja reagensseja, jotka spesifisesti edustivat jo- • » ! ko MA-gp350/220:tä tai EBNA-l:tä yksinään tai yhdistelmänä.
i « ; ; Tässä kokeessa puhdistettua MA-gp350/220-proteiinia (puh- t * · ' '* distettu Hessingin ym. artikkelin mukaisesti, Journal of : 25 Chromatography, 599, s. 267 - 272, (1992)) tai EBNA-1- yhdistelmäpept idej ä käytettiin konsentraationa 1 Mg/ml V · 0,05-molaarisessa NaHCCh-puskurissa, pH 9,6, päällysteenä kiinteän faasin pinnalla joko yksinään tai yhdessä 1:1-yhdistelmänä. Näissä kokeissa käytetty seerumi joukko osoi-30 tetaan kuvioissa (kuvio 6, 7 ja 8) ja sitä käytettiin arvi- < * · ,· , oltaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka useimpien » · * seerumien voidaan osoittaa olevan (rajalla) EBV- <<111 ' · seropositiivisia kun käytetään MA-gp350/220:stä ja EBNA- 1: stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä 3 5 yksinkertaisempi, suora ja tarkempi arvio joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
22 1 13298
Kuviossa 6 joukkoa terveiltä verenluovuttajilta Amerikan Yhdysvalloista saatuja seerumeita käytettiin arvioitaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien seerumien voidaankin osoittaa olevan (rajalla) EBV-5 seropositiivisia, kun käytetään MA-gp350/220:stä ja EBNA-1:stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä yksinkertaisempi suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
Kuviossa 7 joukkoa terveiltä verenluovuttajilta 10 Hong Kongista saatuja seerumeita käytettiin arvioitaessa vasta-aineen reaktiivisuutta. Vaikka kaikkien seerumien voidaankin osoittaa olevan (rajalla) EBV-seropositiivisia, kun käytetään MA-gp350/220:stä ja EBNA-l:stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voidaan tehdä yksinkertaisempi 15 suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
Kuviossa 8 Hong Kongista peräisin olevilta, nenä-nielusyövästä (NPC) kärsiviltä potilailta saatuja seerumeita käytettiin arvioitaessa vasta-aineen reaktiivisuutta.
20 Vaikka kaikkien seerumien voidaankin osoittaa olevan (ra- , . jalla) EBV-seropositiivisia, kun käytetään MA-gp350/220:stä » · ; ja EBNA-1:stä erikseen saatujen tulosten yhdistelmää, voi- » · ' “· daan tehdä yksinkertaisempi suora ja tarkempi arvio, joka 'Ϊ perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi mää- 2 5 ritykseksi.
t 1' Edellä esitetyt kokeet osoittavat, että eri ihmis- : Λ* populaatioissa, joissa EBV:hen liittyvät oireet ovat eri laisia (tai terveissä ihmispopulaatioissa), diagnostinen ;\\ reagenssi, joka käsittää ainakin osan VCA-proteiinista tai ,*··. 3 0 ainakin osan MA-proteiinista yhdistelmänä ainakin EBNA- proteiinin osan kanssa, osoittaa, että voidaan tehdä yksin-kertaisempi suora ja tarkempi arvio, joka perustuu kahden markkerin yhdistämiseen yksittäiseksi määritykseksi.
:*. Edellä olevan kirjoitetun patenttihakemuksen aja- 3 5 teilaan olevan riittävä antamaan ammattimiehelle kyvyn kek sinnön suorittamiseen. Keksintöön voidaan tehdä lukuisia 113298 23 modifikaatioita tässä esitettyjen ja kuvattujen lisäksi, ja ne tulevat ammattimiehille ilmeisiksi edellä olevasta kuvauksesta ja ne kuuluvat liitteenä olevien patenttivaatimusten suojapiiriin.
5 i · » * · • t k · t 9 9 ' · • · * * » 9 • » 9 » * · * * 9 9 9 II»» • t • · 9 MM» » » 24 113298
Sekvenssilista: (1) GENERAL INFORMATION: (i) APPLICANT: (A) NAME: Akzo Nobel N.V.
(B) STREET: Velperweg 76 (C) CITY: Arnhem (E) COUNTRY: The Netherlands
(F) POSTAL CODE (ZIP): 6824 BM
(ii) TITLE OF INVENTION: Diagnostic reagents for the detection of antibodies to EBV.
(iii) NUMBER OF SEQUENCES: 9 (iv) COMPUTER READABLE FORM: (A) MEDIUM TYPE: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC compatible
(C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS/MS-DOS
; (D) SOFTWARE: Patentin Release #1.0, : Version #1.25 (EPO) • j* (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 176 amino acids ,···, (B) TYPE: amino acid 'I’ (C) STRANDEDNESS: single ”\'i (D) TOPOLOGY: linear 1 I t i t t MOLECULE TYPE: peptide 113298 25 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1:
Met Ala Arg Arg Leu Pro Lys Pro Thr Leu 15 10
Gin Gly Arg Leu Glu Ala Asp Phe Pro Asp 15 20
Ser Pro Leu Leu Pro Lys Phe Gin Glu Leu 25 30
Asn Gin Asn Asn Leu Pro Asn Asp Val Phe 35 40
Arg Glu Ala Gin Arg Ser Tyr Leu Val Phe 45 50
Leu Thr Ser Gin Phe Cys Tyr Glu Glu Tyr 55 60
Val Gin Arg Thr Phe Gly Val Pro Arg Arg 65 70
Gin Arg Ala lie Asp Lys Arg Gin Arg Ala 75 80
Ser Val Ala Gly Ala Gly Ala His Ala His -85 90
Leu Gly Gly Ser Ser Ala Thr Pro Val Gin i 95 100 , * Gin Ala Gin Ala Ala Ala Ser Ala Gly Thr . ·; 105 110 I* Gly Ala Leu Ala Ser Ser Ala Pro Ser Thr ·· 115 120
Ala Val Ala Gin Ser Ala Thr Pro Ser Val 125 130
Ser Ser Ser lie Ser Ser Leu Arg Ala Ala \.l* 135 140
Thr Ser Gly Ala Thr Ala Ala Ala Ser Ala '·.*·; 145 150 ·:**: Ala Ala Ala Val Asp Thr Gly Ser Gly Gly ;/ 155 160
Gly Gly Gin Pro His Asp Thr Ala Pro Arg * · * · * 165 170 113298 26
Gly Ala Arg Lys Lys Gin 175 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 2: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 24 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 2:
Ala Val Asp Thr Gly Ser Gly Gly Gly Gly 15 10
Gin Pro His Asp Thr Ala Pro Arg Gly Ala 15 20 ; · Arg Lys Lys Gin » * _ ;· (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 3: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 30 amino acids ;v. (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear 1 MOLECULE TYPE: peptide 113298 27 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 3:
Ser Thr Ala Val Ala Gin Ser Ala Thr Pro 15 10
Ser Val Ser Ser Ser lie Ser Ser Leu Arg 15 20
Ala Ala Thr Ser Gly Ala Thr Ala Ala Ala 25 30 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 4: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 56 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 4:
Ser Thr Ala Val Ala Gin Ser Ala Thr Pro 15 10 !*' Ser Val Ser Ser Ser lie Ser Ser Leu Arg Γ 15 20
Ala Ala Thr Ser Gly Ala Thr Ala Ala Ala 25 30 ; ,·. Cys Cys Ala Val Asp Thr Gly Ser Gly Gly !···, 35 40 ’·’ Gly Gly Gin Pro His Asp Thr Ala Pro Arg :.’·ί 45 50
Gly Ala Arg Lys Lys Gin 55 * · (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 5: 28 1 13 2 9 8 (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 123 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 5:
Gly Gly Ser Gly Gly Arg Arg Gly Arg Gly 15 10
Arg Glu Arg Ala Arg Gly Gly Ser Arg Glu 15 20
Arg Ala Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly 25 30
Glu Lys Arg Pro Arg Ser Pro Ser Ser Gin 35 40
Ser Ser Ser Ser Gly Ser Pro Pro Arg Arg : i 45 50 ·. Pro Pro Pro Gly Arg Arg Pro Phe Phe His 55 60 :* Pro Val Gly Glu Ala Asp Tyr Phe Glu Tyr ;· 65 70 . His Gin Glu Gly Gly Pro Asp Gly Glu Pro 75 80 ;v> Asp Val Pro Pro Gly Ala lie Glu Gin Gly 85 90
Pro Ala Asp Asp Pro Gly Glu Gly Pro Ser 95 100
Thr Gly Pro Arg Gly Gin Gly Asp Gly Gly 105 110
Arg Arg Lys Lys Gly Gly Trp Phe Gly Lys 115 120 113298 29
His Arg Gly (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 6: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 24 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 6:
Arg Ala Arg Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly 15 10
Glu Lys Arg Pro Arg Ser Pro Ser Ser Gin 15 20
Ser Ser Ser Ser * * · M i · • I ·
! I
(2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 7: ;· (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 31 amino acids t (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single ' (D) TOPOLOGY: linear j (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 7: 30 113298
Pro Arg Arg Pro Pro Pro Gly Arg Arg Pro 15 10
Phe Phe His Pro Val Gly Glu Ala Asp Tyr 15 20
Phe Glu Tyr His Gin Glu Gly Gly Pro Asp 25 30
Gly (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 8: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 31 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide ; (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 8: * * t
• I
Gin Glu Gly Gly Pro Asp Gly Glu Pro Asp 15 10 *:· Val Pro Pro Gly Ala lie Glu Gin Gly Pro 15 20
Ala Asp Asp Pro Gly Glu Gly Pro Ser Thr 25 30
Gly F·! (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 9: _ . (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 58 amino acids 31 113298 (B) TYPE: amino acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: peptide (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 9:
Pro Pro Arg Arg Pro Pro Pro Gly Arg Arg 15 10
Pro Phe Phe His Pro Val Gly Glu Ala Asp 15 20
Tyr Phe Glu Tyr His Gin Glu Cys Cys Asp 25 30
Gly Glu Pro Asp Val Pro Pro Gly Ala lie 35 40
Glu Gin Gly Pro Ala Asp Asp Pro Gly Glu 45 50
Gly Pro Ser Thr Gly Pro Arg Gly 55 * · * t • · • 1 · • · • « · • 1 ·
Claims (14)
1. Diagnostinen reagenssi Epstein-Barr-virusta vastaan suunnattujen vasta-aineiden havaitsemista varten, 5 tunnettu siitä, että reagenssi käsittää yhdistelmän, jossa on ainakin osa Epstein-Barr-viruksen puhdistetusta rakenneproteiinista ja ainakin osa Epstein-Barr-viruksen puhdistetusta EBNA-proteiinista.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen diagnostinen rea-10 genssi, tunnettu siitä, että viruksen rakennepro- teiini on MA-proteiini.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että MA-proteiini on MA-gp350/220-proteiini.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen diagnostinen rea genssi, tunnettu siitä, että viruksen rakennepro-teiini on VCA-proteiini.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että VCA-proteiini on VCA- 20 pl8-proteiini.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen diagnostinen rea- * · : ; ·* genssi, tunnettu siitä, että mainittu reagenssi 1 käsittää peptidin, joka mainittu peptidi käsittää ainakin osan SEQ ID nro l:n mukaisesta aminohapposekvenssistä. , ·’ 25
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen diagnostinen rea- 1 i* genssi, tunnettu siitä, että mainittu peptidi kä- sittää SEQ ID nro 2:n, 3 :n tai 4:n mukaisen aminohappose- i kvenssin. ,’V.
8. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-7 mukainen » t ,··, 3 0 diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että EBNA- • · proteiini on EBNA-1-proteiini.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen diagnostinen rea-'·"· genssi, tunnettu siitä, että mainittu reagenssi käsittää peptidin, joka käsittää ainakin osan SEQ ID nro t s » » 35 5:n mukaisesta aminohapposekvenssistä. • · „ 113298
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että mainittu peptidi käsittää SEQ ID nro 6-.n, 7-.n, 8:n tai 9-.n mukaisen aminohapposekvenssin.
11. Patenttivaatimuksen 4 mukainen diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että siinä on peptidi jolla on SEQ ID nro 4:n mukainen aminohapposekvenssi ja peptidi, jolla on SEQ ID nro 9:n mukainen aminohapposekvenssi .
12. Patenttivaatimuksen 3 mukainen diagnostinen reagenssi, tunnettu siitä, että mainittu reagenssi käsittää peptidin jolla on SEQ ID nro 9:n mukainen aminohapposekvenssi.
13. Menetelmä Epstein-Barr-virusta vastaan suunnat- 15 tujen vasta-aineiden havaitsemiseksi näytteessä, tun nettu siitä, että mainittu näyte saatetaan kontaktiin minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-12 mukaisen diagnostisen reagenssin kanssa, ja mainitun reagenssin ja vasta-aineiden välillä muodostuneet immunokompleksit havaitaan.
14. Testitarvikesarja Epstein-Barr-virusta vastaan . suunnattujen vasta-aineiden havaitsemiseksi näytteessä, • j tunnettu siitä, että mainittu testitarvikesarja kä- • · '· sittää minkä tahansa patenttivaatimuksen 1-12 mukaisen i · *. *: diagnostisen reagenssin. • » · * · · * » * » * · » » • * < I I ***** • · I » I ***** * · 113298
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93202659 | 1993-09-14 | ||
| EP93202659 | 1993-09-14 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI944225A0 FI944225A0 (fi) | 1994-09-13 |
| FI944225L FI944225L (fi) | 1995-03-15 |
| FI113298B true FI113298B (fi) | 2004-03-31 |
Family
ID=8214091
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI944225A FI113298B (fi) | 1993-09-14 | 1994-09-13 | Diagnostinen reagenssi, menetelmä ja testitarvikesarja EBV:n vasta-aineiden detektoimiseksi |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5827646A (fi) |
| EP (1) | EP0649904B1 (fi) |
| JP (1) | JP3547493B2 (fi) |
| KR (1) | KR100378942B1 (fi) |
| AT (1) | ATE231556T1 (fi) |
| AU (1) | AU679545B2 (fi) |
| CA (1) | CA2131874C (fi) |
| DE (1) | DE69432043T2 (fi) |
| DK (1) | DK0649904T3 (fi) |
| ES (1) | ES2191673T3 (fi) |
| FI (1) | FI113298B (fi) |
| ZA (1) | ZA947061B (fi) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2765688B1 (fr) * | 1997-07-04 | 1999-09-10 | Pasteur Institut | Reactif de detection et de suivi des infections provoquees par le virus d'epstein-barr et ses applications |
| DE10307517A1 (de) * | 2003-02-21 | 2004-09-02 | Mikrogen Molekularbiologische Entwicklungs-Gmbh | Von Kapsidantigenen des Epstein-Barr-Virus abgeleitete Peptide und ihre Verwendung |
| WO2006098804A2 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-21 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| US7189522B2 (en) | 2005-03-11 | 2007-03-13 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
| EP1908828A1 (en) * | 2005-07-22 | 2008-04-09 | PHG Corporation | Novel polypeptide and method for producing the same |
| GB0701253D0 (en) | 2007-01-23 | 2007-02-28 | Diagnostics For The Real World | Nucleic acid amplification and testing |
| US7628150B2 (en) * | 2007-08-17 | 2009-12-08 | Vladimir Malkov | Versatile flexible mat and method of implementing and using same |
| US20100022916A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Javanbakhsh Esfandiari | Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing |
| US8603835B2 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-10 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Reduced step dual path immunoassay device and method |
| KR101678553B1 (ko) | 2012-04-30 | 2016-11-22 | (주)바이오니아 | 엡스타인-바 바이러스 검출용 키트 및 이를 이용한 엡스타인-바 바이러스의 검출방법 |
| WO2014025254A1 (en) | 2012-08-10 | 2014-02-13 | Stichting Vu-Vumc | Ebv markers and systemic lupus erythematosus |
| MX375411B (es) | 2014-04-02 | 2025-03-06 | Chembio Diagnostic Systems Inc | Inmunoensayo que utiliza un conjugado de captura. |
| US20160116466A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-04-28 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses |
| CN106645715B (zh) * | 2016-11-18 | 2018-11-23 | 安徽医科大学 | 一种用于eb病毒衣壳抗原和核抗原1蛋白抗体联合检测的蛋白质芯片及其制备和应用 |
| CN108490177B (zh) * | 2018-02-08 | 2020-12-29 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 鼻咽癌抗体检测试剂、其制备方法及鼻咽癌检测试剂盒 |
| CN111548411B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-03-29 | 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） | 一种中和eb病毒的单克隆抗体及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5116725A (en) * | 1984-08-08 | 1992-05-26 | Scripps Clinic And Research Foundation | Assay for Epstein-Barr virus infection with solid phase bound synthetic polypeptides |
| JPH04310861A (ja) * | 1991-04-09 | 1992-11-02 | Kazuo Yanagi | 抗ｅｂｎａ抗体の測定方法および抗ｅｂｎａ抗体測定キット |
| ATE380243T1 (de) * | 1992-03-13 | 2007-12-15 | Biomerieux Bv | Epstein-barr-virus verwandte peptide und nukleinsäuresegmente |
-
1994
- 1994-09-09 ES ES94202598T patent/ES2191673T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-09 EP EP94202598A patent/EP0649904B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-09 DE DE69432043T patent/DE69432043T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-09 AT AT94202598T patent/ATE231556T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-09-09 DK DK94202598T patent/DK0649904T3/da active
- 1994-09-12 CA CA002131874A patent/CA2131874C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-13 AU AU72956/94A patent/AU679545B2/en not_active Expired
- 1994-09-13 ZA ZA947061A patent/ZA947061B/xx unknown
- 1994-09-13 FI FI944225A patent/FI113298B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-09-13 KR KR1019940022989A patent/KR100378942B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-14 US US08/306,078 patent/US5827646A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-14 JP JP22048894A patent/JP3547493B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0649904T3 (da) | 2003-04-22 |
| US5827646A (en) | 1998-10-27 |
| FI944225A0 (fi) | 1994-09-13 |
| CA2131874C (en) | 2006-03-28 |
| AU7295694A (en) | 1995-03-30 |
| JP3547493B2 (ja) | 2004-07-28 |
| AU679545B2 (en) | 1997-07-03 |
| ATE231556T1 (de) | 2003-02-15 |
| CA2131874A1 (en) | 1995-03-15 |
| DE69432043D1 (de) | 2003-02-27 |
| ES2191673T3 (es) | 2003-09-16 |
| EP0649904B1 (en) | 2003-01-22 |
| KR100378942B1 (ko) | 2003-05-22 |
| EP0649904A1 (en) | 1995-04-26 |
| ZA947061B (en) | 1995-04-27 |
| HK1001222A1 (en) | 1998-06-05 |
| JPH07209302A (ja) | 1995-08-11 |
| KR950008537A (ko) | 1995-04-19 |
| FI944225L (fi) | 1995-03-15 |
| DE69432043T2 (de) | 2003-10-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU666920B2 (en) | Peptides and nucleic acid sequences related to the Epstein Barr virus | |
| FI113298B (fi) | Diagnostinen reagenssi, menetelmä ja testitarvikesarja EBV:n vasta-aineiden detektoimiseksi | |
| JP4612071B2 (ja) | エプスタイン−バールウイルスペプチド及び該ペプチドに対する抗体 | |
| AU735981B2 (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (CMV) | |
| EP0607425B1 (en) | Epstein-barr virus peptides and antibodies against these peptides | |
| US6008327A (en) | Peptides and nucleic acid sequences related to the Epstein Barr virus | |
| US6926899B2 (en) | Glycoprotein peptide of the human herpesvirus-7 for use in particular in an elisa serologic test | |
| HK1001222B (en) | Diagnostic reagents for the detection of antibodies to ebv | |
| CA2259967C (en) | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) | |
| HK1001164B (en) | Epstein-barr virus peptides and antibodies against these peptides | |
| HK1001461B (en) | Epstein-barr virus peptides and antibodies against these peptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |