FI70719C - Foerfarande foer framstaellning av nya cardenolid-bis-digitoxosider - Google Patents

Description

1 70719

Menetelmä uusien kardenolidL-bis-digitoksosidien valmistamiseksi

Keksinnön kohteena on menetelmä sellaisten kardenolidi-bis-digitoksosidien valmistamiseksi, joilla on kaava I

O <0

R1 ! . I

I CH3 H3C !

.- -J ! J

CH j I ! i

CH I J. J | OH

L 3 / 0 0' ' - f°y κ H. 0 7 0R4 111

* I

0R3 jossa kaavassa on vety tai hydroksyyliryhmä, R2, R^ ja R^ ovat samanlaisia tai erilaisia ja ovat vety, asyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, jolloin yhdiste sisältää kuitenkin vähintään yhden alkyyli-ryhmän.

Sydämen toimintavajavuuden terapiassa pääasiallisesti käyt-tettyjen digitaaliglykosidien, digLtoksiinin ja digoksiinin sekä niiden johdannaisten, esimerkiksi asetyylidigoksiinin ja metyylidigoksiinin suhteen, mitä tulee niiden käyttömahdollisuuksien laajuuteen, on olemassa paljon toivomisen varaa.

2 70719

Munuaiset erottavat suurimman osan digoksiinista ja sen johdannaisista ja alentuneen munuaistoiminnan omaavilla potilailla ne voivat tämän johdosta aiheuttaa myrkytyksiä.

Digitoksiini sitä vastoin erottuu munuaisten ulkopuolella, mutta on edellä mainituista yhdisteistä sellainen glykosidi, jonka vii-pymisaika elimistössä on pisin, jonka johdosta mahdollisesti esiintyviä myrkytystiloja (esimerkiksi yliannostuksesta johtuvia) voidaan tasoittaa vain erittäin hitaasti.

Kuulutusjulkaisusta DE 20 13 221 tunnetaan steroidiglykosideja, joissa on 2-dosoksisokerijäänteitä, mm. digitoksigeniini-bis-di-gitoksosidi ja digoksigeniini-bis-digitoksosidi. Tämäntapaisilla yhdisteillä on äärimmäisen lyhyt viipymisaika, koskei ne poistuvat nopeasti virtsan ja ulosteiden mukana.

Nyt on todettu, että bis-digitoksosidien keksinnön mukaiset johdannaiset omaavat ihanteellisen välitilan edellä esitettyihin verrattuna, koska ne erottuvat nopeammin kuin digitoksiini, samaa suuruusluokkaa kuin digoksiini, mutta hitaammin kuin liian nopeasti vaikuttavat substituoimattomat bis-digitoksosidit. Ennen kaikkea tapahtuu niiden eliminoituminen elimistöstä pääasiallisesti munuaisten ulkopuolella, jonka johdosta ne soveltuvat sydämen toimintavajavuuden terapiaan erinomaisesti ja rasittavat samanaikaisesti vähemmän munuaisten toimintaa.

Näitä uusia kardenolidi-bis-digitoksosideja voidaan valmistaa seu-raavalla tavalla:

a) yhdisteet, joilla on kaava II

», Ρ/0 r AC?3._

3 L t J

ch3 r^' ! L 1. JoH (II) I 3 / °\ ^ o cr\'

... KO j-/ OR

OR" li 3 7071 9 jossa kaavassa on vety tai hydroksyyliryhmä, R' on vety, asyyliryhmä tai alkyyliryhmä, ja R" ja R''' on vety, alkyyliryhmä, asyyliryhmä, tai ne muodostavat yhdessä syklisen asetaalin tai ketaalin, jolloin ainakin yksi ryhmistä R', R" ja R'*’ on vety, asyloidaan tai alkyloidaan sinänsä tunnetulla tavalla kerran tai useamman kerran käyttäen sopivaa asyloimis-tai alkyloimisainetta, jonka jälkeen sopivassa tapauksessa yksi tai useampi asyyli-, asetaali- tai ketaaliryh-mä lohkaistaan selektiivisen hydrolyysin avulla, jonka jälkeen sopivassa tapauksessa vapaa hydroksyyliryhmä asyloidaan tai alkyloidaan jonkin muun asyloimis- täi alkyloimisreagenssin avulla, tai

b) yhdisteet, joilla on kaava III

«1 . J

I CH3 h3C -- L3o

(yy'X

«2°Γ 0R,4 or-3 jossa kaavassa R^ on vety tai hydroksyyliryhmä,· R'3 3a R'3 muodostavat yhdessä syklisen asetaalin tai ketaalin, jossa on 2-5 C-atomia, tai asyyliryhmän, R'4 ja R*3 ovat alkyyliryhmä, jossa on 1-3 C-atomia, tai asyyliryhmä, saatetaan reagoimaan hydrolysoimalla selektiivisesti asyyli-, asetaali- tai ketaaliryhmän R'n 3a ^'3' 3a tämän, jälkeen pääteasemassa oleva digitoksoosi lohkaistaan 7071 9 hapettamalla, jonka jälkeen sopivassa tapauksessa yksi tai useampi vapaa hydroksyyliryhmä muutetaan sopivan asyloimis- ja/tai alkyloimisreagenssin avulla asyyli-oksi- ja/tai alkyylioksiryhmäksi.

Kaavan II ja III mukaisten yhdisteiden alkyloimiseksi käytetään edullisesti alkyloimismenetelmiä, jotka on ' kuvattu julkaisuissa DT-AS 1 961 034 ja DT-OS 2 233 147 esimerkissä 1, käyttäen jaksottain lisättyjä dialkyyli-sulfaattimääriä strontiumhydroksidin tai bariumhydrok-sidin tai aluminiumisopropylaatin ja aluniniumoksidin läsnäollessa inertisessä liuottimessa, mutta kuitenkin voidaan lisätä myös muita tavanomaisia alkyloimisainei-ta, kuten esimerkiksi alkyylihalogenideja tai alkyylito-sylaattia tai alkyylimesylaattia (DT-OS 2 734 401).

Yhdisteiden asyloiminen voidaan suorittaa esimerkiksi siten kuin on kuvattu julkaisussa Arzneim. Forsch. 15, 481, DBP 1 063 160, Pharm. Bull- 5, 171, 1955, jolloin käytetään vähitellen lisättyjä happoanhydridimääriä pyridiinissä tai dimetyyliformamidia, ja tämän jälkeen sopivassa tapauksessa asyloimistuotteet erotetaan suorittamalla jakaminen useampia kertoja tai käyttäen kroma-tograafisia menetelmiä, jolloin asyloiminen suoritetaan pääasiallisesti 10'-asemassa, mutta pitempiä reaktioita käytettäessä saadaan kuitenkin myös täysin asyloituja johdannaisia.

Asyloiminen voidaan suorittaa edelleen julkaisussa DE-AS 2 206 737 kuvatulla menetelmällä käyttäen dialkyyli-asetamididialkyyliasetaalia tai käyttäen ortoestereitä DE-AS 2 010 422 mukaisesti inertisessä liuottimessa, jolloin pääasiallisesti saadaan 9'-asemassa asyloituja tuotteita.

Käytettäessä julkaisussa DE-OS 2 110 646 kuvattua menetelmää, saadaan yhdisteen II reagoidessa asyloimisaineiden 5 7 0 71 9 kanssa tertiäärisen amiinin läsnäollessa pääasiallisesti 910'-diasyylijohdannaisia.

Lopuksi voidaan 12-asyyli-digoksigeniini-bis-digitokso-sideja saada DE-AS 2 126 305 mukaisella menetelmällä perasyloimalla ja suorittamalla osittainen saippuoiminen.

Ketaaliryhmät lohkaistaan pois edullisesti heikosti happamassa liuoksessa, vedessä tai vesipitoisissa alkoholeissa.

Asyyliryhmät, erikoisesti 9',10'- tai 15', 16'-substi-tuentit, voidaan lohkaista pois heikosti emäksisessä liuoksessa, esimerkiksi vesi/bikarbonaatissa. Asyloimisainee-na käytetään niiden yksinkertaisen käsittelyn ja alhaisen hinnan johdosta happoanhydrideja, vast, happoanhydri-diseoksia, mutta mycs vastaavia happoklorideja, imidatso-lideja ja muita tunnettuja asyylijohdannaisia voidaan menestyksellisesti käyttää.

Lopputuotteiden edelleenkäsittely ja puhdistus tapahtuu tavanomaisilla menetelmillä useampikertaisen saostamisen avulla tai käyttäen kromatograafisia menetelmiä ja kiteyttämistä.

Saatujen yhdisteiden identtisyys ja puhtaus tutkittiin ohutkerroskromatogrammien avulla. Tällöin lisättiin DC-valmislevyjä ("Merck Kieselgel 60/F 254" ja kyllästettiin 20 %:sella asetonissa olevalla formamidilla) ja elutoi-misaineena käytettiin ksyloli-metyylietyyliketonia 2:3 + 5 % formamidia. Valmis kromatogrammi suihkutettiin trikloorietikkahappo-kloramiini-reagenssilla ja yhdisteet tutkittiin käyttäen fluorisoimista pitkäaaltoisessa UV-valossa ( λ = 360 nm). Kulkumatkat (R) kromatogrammissa verrattiin kulloinkin määrättyyn standardiin. Tällöin tarkoittaa digitoksigeniini-bis-digitoksosidista saadun kulkumatkan perusteella laskettua R-arvoa ja RDG digoksigeniini-bis-digitoksosidin kulkumatkan perusteella laskettua R-arvoa.

6 7 Ω 7 1 9

Vertailukokeet

Uusien kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuudet saatiin selville ja niitä verrattiin kuten seuraavassa on esitetty:

Jokaista koetta varten otettiin kaksi kissaa, joihin ruiskutettiin suonensisäisesti 30, 50, 100 tai 200 ^u/kg glykosidia, kuten seuraavasta taulukosta ilmenee. Glykosidit merkittiin tritiumilla Haberlandin ja Maertenin, DEA 1959064 menetelmän mukaisesti -digoksiini Wartburgin mukaan - (Biochem. Pharmacol. 14 (1965), s. 1883). 7-päiväisen kokeen aikana määritettiin erikseen ulosteiden ja virtsan radioaktiivisuus. Taulukossa 1 on esitetty näiden eritteiden antamat arvot prosentteina koko käytetystä radioaktiivisuudesta.

Virtsasta ja ulosteista saadut arvot kahden päivän jälkeen osoittavat erittymisnopeuden, erikseen määritetyt arvot virtsalle, ja ulosteille seitsemän päivän jälkeen osoittavat erittymistien.

Taulukko 1.

Glykosid.i 2 päivää 7 päivää

V + U V U

Digitoksiini 7 10 54

Digoksiini 51 39 38

Digitoksigeniini-bis- digitoksosidi 83 3 87 10 *-metyylidigitoksigeniini- bis-digitoksosidi (esim. 2) 64 9 67 10'-metyylidigoksigeniini-bis- digitoksosidi (esim. 10) 62 23 67 9'-metyylidigoksigeniin ί-bis-digitoksosidi (esim. 9) V = virtsa U = ulosteet 7 7071 9

Keksinnön mukaiset kardenolidiglykosidit vaikuttavat samalla väkevyysalueella kuin tavanomaiset sydänglukosi-dit, kuten esimerkiksi digoksiini tai digitoksiini, ja niitä voidaan annostella vuorokaudessa 1-4 kertaa 0,050-0,250 mg suuruisina yksikköannoksina. Annostelu tapahtuu edullisesti oraalisesti, mutta myös parenteraa-linen annostelu on mahdollinen.

Oraaliseen annosteluun käytetään edullisesti tabletteja, mutta myös kovat kapselit ja pehmeät gelatiinikapselit ovat käyttökelpoisia. Yksittäiseen annosteluun esimerkiksi lapsille on nesteen muodossa oleva valmiste sopiva. Hätätapauksissa ja paikalliskäsittelyissä voi annostelu tapahtua injektoimalla vastaavia liuoksia.

Tablettien tai kapselien valmistamiseksi oraalista annostelua varten sekoitetaan vaikuttava aine tavanomaisten lisäaineiden, kuten laktoosin ja tärkkelyksen, kanssa homogeenisesti, jolloin yksikköannoksen pienuudesta johtuen esiseoksen valmistus on edullista. Tehoaine-apuaineseos voidaan, valitsemalla sopivia apuaineita, täyttää kuivana jauhemassana tai rakeisteena sideaineiden kanssa, esimerkiksi tärkkelysliisterin tai polyvinyy-lipyrrolidonin kanssa, ja lisäämällä muita tavanomaisia hajoitus- ja liukkaaksitekeviä aineita, täyttää tableteiksi puristetussa muodossa.

Kantaja-aineet pehmeiden gelatiinikapseleiden valmistamiseksi voivat olla tavanomaisia glyseriini-rasvahappoes-tereitä, mutta myös polyetyleeniglykoleja voidaan käyttää tehoaineen liuottimina. Neste- tai ampuilimuodossa voidaan liuottimena käyttää etanolia tai moniarvoisia alko- 8 70719 holeja erilaisina seoksina.

Esimerkki 1 9'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi 4 g aluminiuraisopropylaattia sekoitetaan 20 mlrssa dime tyyliformamidia ja 3/2 xnl:ssa metyylijodidia 5 tuntia huoneen lämpötilassa, siihen lisätään 4 g digitoksigenii-ni-bis-digitoksosidia ja sekoitetaan vielä 3 vuorokautta huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen laimennetaan 320 ml:11a kloroformia, imus’uodatetaan piimaata käyttäen, pestään kloroformilla ja haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 120 ml:aan metanolia ja 180 ml:aan 10 %:sta etikkahappoa, ravistetaan kloroformin kanssa, klo-roformifaasit pestään 5 S:sella natriumbikarbonaatti-liuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Raakatuote liuotetaan etikkaesteriin ja fraktioidaan käyttäen 200 g aluminiumoksidia (+ 5 % vettä) ja etikkaesteri-kloroformia. Kloroformifraktiosta saadaan kiteyttämisen jälkeen asetonivedestä ja etano-livedestä 2,1 g 9'-raetyyli-digitoksigeniini-bis-digitok-sosidia, sp. 145-148°C. R^: 1,23.

Esimerkki 2 10'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi 2 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, joka on liuotettu 14 ml:aan dimetyyliformamidia ja 14 ml:aan toluo-lia, sekoitetaan sen jälkeen, kun siihen on lisätty 0,68 g aluminiumoksidia (Merck Brockmann), 1,12 g stron-tiumhydroksidia £_ Sr (OH) 2 *81^0/ ja 2,0 ml dimetyylisul-faattia 22 ml:ssa toluolia, 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen laimennetaan 40 ml :11a kloroformia, suodatetaan käyttäen 12 g piimaata, pestään 40 ml :11a kloroformia, lisätään 2,6 ml morfoliiniä, annetaan seistä 30 minuuttia, kun on lisätty 15 ml vettä sekoitetaan 15 minuuttia, kloroformifaasi erotetaan, sekoitetaan vielä kerran 10 ml:n kanssa vettä 15 minuuttia ja kloroformifaasi haihdutetaan tyhjössä. Raakatuote liuotetaan 9 7071 9 etikkaesteriin ja fraktioidaan käyttäen 110 g alu-miniumoksidia (+ 5 % vettä) sekä etikkaesteriä, kloroformia ja kloroformietanolia 1:1. Kloroformifraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen kloroformieetteristä ja etanolivedestä 1,45 g 10'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 197-203°C. RQ: 1,24.

Esimerkki 3 101-etyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi 2 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, joka on liuotettu 15 ml:aan dimetyyliformamidia, sekoitetaan sen jälkeen, kun siihen on lisätty 1,16 g bariumhydroksidia /Ba(OH)2*81^0/, 392 mg bariumoksidia ja 1,68 ml dietyyli-sulfaattia, 6 tuntia lämpötilassa 30-35°C siihen samalla typpeä johtaen. Tämän jälkeen laimennetaan 80 ml:11a kloroformia, suodatetaan piimään avulla, pestään 40 ml :11a kloroformia, lisätään 12 ml morfoliinia, annetaan seistä 30 minuuttia, ravistetaan 20 ml:n kanssa vettä ja kloroformifaasi haihdutetaan tyhjössä. Raakatuote erotetaan sykloheksaani-etikkaesterillä 3:1 selluloosa-patsasta (kyllästetty formamidilla) käyttäen. Kromato-graafisesti yhtenäiset fraktiot muodostavat kiteyttämisen jälkeen etikkaesteristä 920 mg 10'-etyyli-digitoksi-geniini-bis-digitoksosidia. Sp. 213-217°C. : 1,33.

Esimerkki 4 10 *-n-propyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi 2 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 16 ml:aan dimetyyliformamidia, saatetaan reagoimaan 1,16 g:n kanssa bariumhydroksidia, 392 mg kanssa bariumoksidia ja 1,68 ml kanssa di-n-propyylisulfaattia esimerkissä 3 kuvatulla tavalla ja käsitellään edelleen siten kuin tässä esimerkissä on esitetty. * Raakatuote erotetaan heptaani-metyylietyyliketonin 3:1 avulla selluloosapatsasta (formamidilla kyllästettyä) käyttäen. Kromatograafisesti yhtenäiset fraktiot muodostavat kiteyttämisen jälkeen etikkaesteristä 820 mg 10'-n-propyyli-digitoksigeniini* 10 7071 9 bis-digitoksosidia. Sp. 228-232°C. R^: 1,38.

Esimerkki 5 9',10'-dimetyyli-digitoksiqeniini-bis-digitoksosldi 4 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, 48 ml:aan dirae-tyyliasetamidia liuotettuna, sekoitetaan sen jälkeen, kun siihen on lisätty 11,2 g bariumhydroksidia ^Ba(OH)2·8Η2θ7 ja 14,4 ml dimetyylisulfaattia, 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen laimennetaan 300 ml:11a kloroformia, suodatetaan piimään avulla, pestään 300 ml:11a kloroformia, lisätään 20 ml morfoliinia, annetaan seistä 30 minuuttia, sekoitetaan 15 minuuttia sen jälkeen kun on lisätty 90 ml vettä, kloroformifaasl erotetaan, sekoitetaan vielä 60 ml:n kanssa vettä 15 minuutin ajan ja kloroformifaasi haihdutetaan tyhjössä. Raakatuote erotetaan käyttäen sykloheksaani-etikkaesteriä 4:1 selluloo-sapatsaan (formamidilla kyllästetty) avulla. Kromatograa-fisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen etikkaesteristä 1,3 g 9',10'-dimetyyli-digitok-sigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 225-228°C. R^: 1,40.

Esimerkki 6 3^9^ lO'-trimetyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosldi 3 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 36 mlraan dimetyyliasetamidia, saatetaan reagoimaan sen jälkeen, kun on lisätty 8,4 g bariumhydroksidia £Ba(0H)2*8H207 ja 10,8 ml dimetyylisulfaattia, esimerkissä 5 kuvatulla tavalla ja käsitellään edelleen siten kuin tässä esimerkissä on esitetty. Raakatuote erotetaan heptaani-metyylietyyliketonin 3:1 avulla selluloosapat-sasta (formamidilla kyllästettyä) käyttäen. Kromatograa-fisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen kloroformimetanoli-petrolieetteristä 1,06 g 3' ,9 ’ ,10'-trimetyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 91-9 5°C. Rq: 1,48.

1 1 7 0 71 9

Esimerkki 7 3'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi 10 g digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 100 ml:aan kloroformi-metanolia 1:1, sekoitetaan sen jälkeen, kun on lisätty 260 ml asetonia (vedetöntä), 20 ml 2,2-dimetoksipropaania ja 80 mg p-toluolisulfoni-happoa, 2 tuntia huoneen lämpötilassa, laimennetaan 400 ml:11a 5 %:sta natriumbikarbonaattiliucsta ja ravistetaan kloroformin kanssa. Kloroformifaasi haihdutetaan tyhjössä vedellä pesemisen ja natriumsulfaatilla kuivaamisen jälkeen ja fraktioidaan sen jälkeen, kun se on liuotettu 400 ml:aan hiilitetrakloridi-kloroformia 4:1, käyttäen 100 g aluminiumoksidia (Merck; Brockmann). Haihdutetuista hiilitetrakloridi-kloroformi-fraktioista saatiin kiteyttämisen jälkeen eetteristä 6,1 g 9',10'-isopropylideeni-digitoksigeniini-bis-digitoksosidia.

6 g 9',101-isopropylideeni-digitoksigeniini-bis-digitok-sosidia, liuotettuna 45 ml:aan dimetyyliasetamidia, saatetaan reagoimaan ja käsitellään edelleen sen jälkeen, kun on lisätty 21 g bariumhydroksidia ^Ba (OH) ^ * 8^07 ja 13 ml dimetyylisulfaattia, esimerkissä 5 kuvatulla tavalla. Raakatuote (6,1 g) liuotetaan isopropylideeniryhmän poislohkaisemiseksi 360 ml:aan jääetikkavettä 1:1, annetaan seistä 16 tuntia huoneen lämpötilassa, laimennetaan 1,5 litralla vettä, ravistetaan kloroformin kanssa ja haihdutetaan tyhjössä. Raaka 3'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidi puhdistetaan sykloheksaani-etikkaeste-rillä 3:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen etikkaesteristä 1,1 g 3'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 228-233°C.

RD: 1,17.

Esimerkki 8 31,91-dimetyy1i-digitoksigeniini-bis-dieitoksosidi 5 g isopropylideeni-digitoksiiniä, joka on liuotettu ^—1 4*». -- — “ ‘ 1 2 7071 9 37 ml:aan dimetyyliasetamidia, sekoitetaan sen jälkeen, kun on lisätty 17 g bariumhydroksidia /Ba (OH) 2 * 8H2O/ ja 11 ml dimetyylisulfaattia, 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa ja käsitellään edelleen esimerkissä 5 kuvatulla tavalla. Raakatuote (3,4 g) liuotetaan isopropylideeni-ryhmän lohkaisemiseksi 210 ml:aan jääetikkavettä 1:1, seoksen annetaan seistä 16 tuntia huoneen lämpötilassa, se laimennetaan 750 ml:11a vettä, sitä ravistetaan kloroformin kanssa ja se haihdutetaan tyhjössä. Raaka 3',9'-dimetyylidigitoksiini ’puhdistetaan sykloheksaani-etikkaesterillä 4:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan 700 mg puhdasta 3',9'-dimetyylidigitoksiinia.

Pääteasemassa olevan digitoksoosin lohkaisemiseksi liuotetaan tuote 3,7 ml:aan kloroformia ja 11 ml:aan metano-lia, siihen lisätään tipottain samalla sekoittaen huoneen lämpötilassa 30 minuutin kuluessa 2,7 ml 10 %:sta natriumperjodaatin vesiliuosta, sekoitetaan 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa, suodatetaan, laimennetaan vedellä, ravistetaan kloroformin kanssa, kloroformifaasit pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Raakatuotetta sekoitetaan liuotettuna 15 ml:aan 95 %:sta metanolia sen jälkeen,kun on lisätty 75 mg nat-riumboorihydridiä, 1 tunti huoneen lämpötilassa, ravistetaan kloroformin kanssa, kloroformifaasit pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Jäännös (0,6 g) liuotetaan 15 ml:aan metanolia, sitä sekoitetaan 2,7 ml:n kanssa 0,05 N suolahappoa 3 tuntia huoneen lämpötilassa, neutraloidaan 5 %:sella vesipitoisella natriumbikarbonaattiliuoksella, laimennetaan 15 ml :11a vettä, ravistetaan kloroformin kanssa, kloroformifaasit pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan tyhjössä. Jäännöksestä saadaan kiteytettynä kloroformi-eetteri-petrolieetteristä 520 mg 3',9'-dimetyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosi-dia. Sp. 111-115°C. RQ: 1,25.

13 7071 9

Esimerkki 9 9’-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidi 4 g aluminiumisopropylaattia, 20 ml:aan dimetyyliformami-dia liuotettuna, saatetaan reagoimaan 3,2 ml:n kanssa metyylijodidia ja 4 g:n kanssa digoksigeniini-bis-digi-toksosidia esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, ja myös edel-leenkäsittely suoritetaan tässä esimerkissä kuvatulla tavalla. Raakatuote liuotetaan kloroformiin ja fraktioidaan käyttäen 30 g aluminiumoksidia (Merck, Brockmann) ja kloroformia sekä kloroformi-metanolia 1:1. Kloroformi-fraktiosta saadaan kiteyttämisen jälkeen etanolivedestä ja etikkaesteristä 2,34 g 9'-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 223-226°C. R__: 2,62.

L/b

Esimerkki 10 101-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidi 2 g digoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 14 ml:aan dimetyyliformamidia ja 14 ml:aan toluolia, saatetaan reagoimaan ja käsitellään edelleen esimerkissä 2 kuvatulla tavalla. Raakatuote jaetaan useamman kerran faasiseokseen kloroforni-hiilitetrakloridi-metanoli-vesi 1:1:1:1. Haihdutettu orgaaninen faasi jaetaan useamman kerran faasiseokseen hiilitetrakloridietikkaesteri-metanoli-vesi 3:1:2:2. Vesipitoisesta faasista saadaan sen jälkeen, kun on ravistettu kloroformin kanssa, haihdutettu tyhjössä ja kiteytetty metanoli-vedestä 1,48 g 10'-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 154-157°C. RpG: 2,63.

Esimerkki 11 10'-etyyli-digoksiqeniini-bis-digitoksosidi 2 g digoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 16 ml:aan dimetyyliformamidia, -saatetaan reagoimaan ja käsitellään edelleen esimerkissä 3 kuvatulla tavalla. Raakatuote erotetaan sykloheksaani-etikkaesterin 1:1 7071 9 14 avulla selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen asetoni-eetteristä 860 mg 10'-etyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 232-236°C.

rdg: 3/12*

Esimerkki 12 10'-n-propyyli-digoksiaenlini-bis-digitoksosidl 2 g digoksigeniini-bis-digitoksosidia, liuotettuna 16 ml:aan dimetyvliformamidia, ’saatetaan reagoimaan 1,16 g:n kanssa bariumhydroksidia, 392 mg kanssa bariumoksi-dia ja 1,68 ml:n kanssa di-n-propyylisulfaattia esimerkissä 3 kuvatulla tavalla, ja käsitellään edelleen tässä' esimerkissä kuvatulla tavalla. Raakatuote erotetaan syk-loheksaani-etikkaesterillä 2:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen asetonieette-ristä 760 mg 10'-n-propyyli-digoksigeniini-bis-digitokso-sidia. Sp. 248-251°C. R__: 3,62.

L/Vj

Esimerkki 13 91,10'-dimetyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidi 4 g digoksigeniini-bis-digitoksösidia, liuotettuna 48 ml:aan dimetyyliasetamidia, saatetaan reagoimaan ja käsitellään edelleen esimerkissä 5 kuvatulla tavalla. Raa-katuote erotetaan sykloheksaani-etikkaesterillä 3:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograa-fisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen asetonista 1,74 g 9',10'-dimetyyli-digoksigenii-ni-bis-digitoksosidia. Sp. 133-137°C. RDG: 3,62.

Esimerkki 14 31,91,10'-trimetyyli-digokslgeniini-bis-digitoksosidi 3 g digoksigeniini-bis-digitoksosidia liuotettuna 36 ml:aan dimetyyliasetamidia saatetaan sen jälkeen, kun on lisätty 8,4 g bariumhydroksidia /Ba (OH) ^* 8^07 ja 10»8 ml dimetyy-lisulfaattia, reagoimaan esimerkissä 5 kuvatulla tavalla li 15 7071 9 ja edelleenkäsittely suoritetaan tässä esimerkissä kuvatulla tavalla. Raakatuote erotetaan sykloheksaani-etikkaesterillä 3:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen asetonieetteri-petroli-eetteristä 920 mg 3’,9',10'-trimetyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 120-122°C. R__: 4,12.

JJCj

Esimerkki 15 9*-asetyyli-101-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidi , 2 g lO'-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia, 20 ml:aan dimetyyliformamidia liuotettuna, annetaan seistä sen jälkeen, kun on lisätty 400 mg trietyleenidiamiinia ja 0,4 ml etikkahappoanhydridiä, 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen laimennetaan 200 ml:11a vettä, ravistetaan kloroformin kanssa ja kloroformifaasi haihdutetaan tyhjössä sen jälkeen, kun se on pesty 2 N rikkihapolla, soodaliuoksella ja vedellä. Raakatuote erotetaan sykloheksaani-etikkaesterillä 2:1 selluloosanatsaas-sa (kyllästetty formamidilla). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen eetteri-petrolieetteristä 530 mg 9'-asetyyli-10'-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 141-145°C.

*dg! 4'20-

Esimerkki 16 12-asetyyli-lO1-metyyli-digoksigeniinl-bis-digitoksosldl 4 g 101-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia, 20 ml:aan pyridiiniä liuotettuna, annetaan seistä sen jälkeen, kun on lisätty 520 mg etikkahappoanhydridiä, 24 tuntia huoneen lämpötilassa, laimennetaan vedellä, ravistetaan kloroformin kanssa ja kloroformifaasit haihdutetaan tyhjössä pesemisen jälkeen 2 N rikkihapolla ja vedellä. Raakatuote fraktioidaan sykloheksaani-etikkaesterillä 3:1 selluloosapatsaassa (kyllästetty formamidil- 16 7071 9 la). Kromatograafisesti yhtenäisistä fraktioista saadaan kiteyttämisen jälkeen asetonieetteri-petrolieette-ristä 1,43 g 12-asetyyli-10'-metyyli-digoksigeniini-bis-digitoksosidia. Sp. 204-208°C. R^: 4,29.

Esimerkki 17 3', 9 '-diasetyyli-10'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digi-toksosidi 1 g lO'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksosidia, 10 ml:aan pyridiiniä liuotettuna, annetaan seistä sen jälkeen, kun on lisätty 5 ml etikkahappoanhydridiä ja 100 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä, 2 tuntia huoneen lämpötilassa, laimennetaan vedellä, ravistetaan kloroformin kanssa ja kloroformifaasit suodatetaan, pesemisen jälkeen 2 N rikkihapolla ja vedellä, aluminiumoksidin avulla ja haihdutetaan tyhjössä. Raakatuotteesta saadaan kiteyttämisen jälkeen eetteri-petrolieetteristä 960 mg 3',9'-diasetyyli-10'-metyyli-digitoksigeniini-bis-digitoksi-dia. Sp. 116-120°C. R : 1,40.

11

Claims (2)

1. 7071 9