HUT65368A - Vaccines - Google Patents
Vaccines Download PDFInfo
- Publication number
- HUT65368A HUT65368A HU9202436A HU243692A HUT65368A HU T65368 A HUT65368 A HU T65368A HU 9202436 A HU9202436 A HU 9202436A HU 243692 A HU243692 A HU 243692A HU T65368 A HUT65368 A HU T65368A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- gene
- adenovirus
- promoter
- canine
- cell
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 24
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 14
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 7
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 5
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 claims description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 5
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims description 4
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 4
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 3
- 244000062645 predators Species 0.000 claims description 3
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 claims description 2
- 241000725579 Feline coronavirus Species 0.000 claims description 2
- 101900068883 Feline leukemia virus Envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims 2
- 101900225097 Feline immunodeficiency virus Envelope glycoprotein gp150 Proteins 0.000 claims 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 6
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 7
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 2
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 2
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701114 Canine adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000006800 cellular catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
DANUBIA SZABADALMI ÉS VÉDJEGY IRODA KFT.
65368
VAKCINÁK
The University Court of the University of Glasgow, Glasgow,j
Nagy-Britannia
Feltaláló: ( <x
SPIBEY Norman, Glasgow,/Nagy-Britannia
A bejelentés napja: 1991. 01. 25.
Elsőbbsége: 1990. 01. 25. (9001766.6) Nagy-Britannia
A nemzetközi bejelntés száma: PCT/GB91/00107
A nemzetközi közzététel száma: WO 91/11525
A találmány húsevők oltására használatos vakcinákra, különösen olyan vírusos betegségek elleni vakcinákra vonatkozik, mint amilyen a veszettség, a kutya és a macska parvovírus és a macska leukémia vírus. Ezen vakcinák megkülömböztetett előnyökkel rendelkeznek a jelenleg használatosakhoz képest.
75441-7412-GI
Nemrégen egy DNS vektor rendszert javasoltak, amelyben a célzott antigént kódoló gént élő adenovírusba ültetik, melyet ezután bélben oldódó adagolási formává alakítanak.
Sok adenovírus ismeretes azonban. Nehézséget okoz a gén számára vektorként szolgáló megfelelő vírus kiválasztása, és a gén beültetésére alkalmas, nem létfontosságú génszakasz azonosítása. Különösen az inzerció helyének kell nem létfontosságúnak lennie a vírus életképes szaporodása és in vivő hatásossága szempontjából. Ezenkívül, az inzerciós helynek képesnek kell lennie jelentős mennyiségű új genetikai anyag befogadására, miközben a vírus folyamatos szaporodása biztosított kell legyen. A CAV-2 adenovírus közismerten biztonságos vektor, azonban DNS-e kb. 31 000 bázispárt tartalmaz, amelyet végig kell vizsgálnunk alkalmas (inzerciós) hely azonosítása vagy annak megállapítása céljából, hogy egyáltalán tartalmaz-e megfelelő (inzerciós) helyet vagy sem.
Kísérleteink során azonosítottunk egy alkalmas, nem létfontosságú szakaszt egy élő, nem kórokozó, immunogén kutya CAV-2 típusú adenovírusban, és húsevők kórokozó vírusaiból alkalmas expressziót iránnyító rendszerekkel együtt géneket inzertáltunk anélkül, hogy ez az adenovírus vektor stabil szaporodóképességét befolyásolná.
A találmány tárgya tehát egy fertőző organizmus ellen ellenanyagok termelődését vagy sejt által közvetített immunitást kiváltani képes rekombináns vírus, amely egy élő, nem kórokozó, immunogén, életképes kutya adenovírus, úgy módosítva, hogy az említett ellenanyagoknak megfelelő antigént kódoló vagy az említett, sejt által közvetített immunitást
kiváltani képes gént tartalmazza, amely az említett gén számára hatásos promoterrel oly módon van kialakítva és kapcsolva, hogy az említett ellenanyagok vagy sejt által közvetített immunitás elemei immunogén, nem kórokozó mennyiségben fejeződjenek ki.
Kutya adenovírusként előnyösen egy ismert, hosszú távra biztonságosra módosított CAV-2 vakcina típus törzset alkalmazunk, amely az inzertált gént a vírus genom jobbkéz felőli végéhez közel eső pozícióban tartalmazza.
Az invertált terminális ismétődés (ITR) egy olyan DNSszekvencia, amely az adenovírus genom mindkét végén megtalálható. A máig vizsgált összes adenovírusban kimutatták az ITR jelenlétét, ezek hosszúsága azomban szerotípusonként különbözik. A CAV-2-ben található ITR 197 bázispárból áll (vagyis a 0-197 szakasz). Az ITR-ek a vírus DNS replikáció és a vírus genom DNS-ének hatásos becsomagolása szempontjából alapvetően szükséges szekvenciákat tartalmaznak. A CAV-2 ITR végén azonosítottunk azonban egy szakaszt, amely jelentős mennyiségű többlet DNS befogadására képes. Ez a szakasz körülbelül az ITR vége közelében (még éppen az ITR-en belül) található a Smal restrikciós helytől a 4-es korai szakasz (E4) promoteréig terjed. Ily módon a Smal restrikciós hely idegen gének beültetése számára alkalmas hely. Ebbe a szakaszba egyéb restrikciós helyek is beépíthetők.
A Smal restrikciós hely nagyon alkalmas hely a gén beépítésére, leszámítva azt, hogy éppen az ITR-en belül található. Az ITR-be való további beültetés sikere azonban nem valószínű, mivel a vírus funkciókhoz szükség van arra, hogy
az ITR-ek a vírus (genom) ellentétes végein legyenek jelen, és így képesek legyenek összekapcsolódni, ami a két ITR között közeli szekvencia-azonoságot tételez fel.
A kiválasztott, nem patogén CAV-2 vírus genomot egymást átfedő restrikciós szakaszok sorozata formájában bakteriális pazmidokba klónoztuk. Olyan klónozott szakaszra volt szükség, amely áthidalta a fent említett Smal restrikciós helyet, és tartalmazta a vírus jobb oldali végét. Ez okból egy olyan kiónt választottuk, amely a 3,0 kb Sáli B szakaszt hordozta.
A találmány értelmében különböző gének ültethetők az adenovírus DNS-be, hogy a betegségek széles skálája ellen nyújtsunk védelmet, és sok ilyen gén már ismert, a probléma tehát a gének számára egy biztonságos, kényelmes és hatékony vektor biztosítása volt.
A hasznosan inzertálható gének közé tartoznak:
1) A kutya parvovírus kapszid proteinjeinek génje(i). Valójában egyetlen gén létezik. Az eltérő hasítás azonban két vírus kapszid protein termelését eredményezi.
2) A macska pánleukopénia - amely a kutya parvovírussal igen közeli rokonságban levő parvovírus - kapszid proteijelnek a génjei.
3) A kutya, és macska coronavírus peplomerjeit kódoló gének (vagy azok részei).
4) A kutya szopornyica vírus hemagglutininjét és kapszid antigénjeit kódoló gének.
5) A macska leukémia vírus burok-glikoproteinjének génje.
• · ·
6) A veszettség vírus burok-glikoproteinjének génje (különböző törzsek).
7) A macska immunelégtelenség vírus (FIV) burok-glikoproteijének génje.
Lehetséges az is, hogy a vad típusú organizmusban található teljes szekvencia helyett csak a gének részeit használjuk fel (amennyiben ezek elégségesek immunogén protein vagy a sejt által közvetített immunválasz kiváltásához). Amennyiben rendelkezésre állnak, szintetikus gének is felhasználhatók. A találmány a gének széles körében alkalmazható, és nem korlátozódik a fent felsoroltakra.
Egyes esetekben az adott antigén génje nagyszámú intront tartalmazhat vagy származhat RNS vírusból, ezekben az esetekben DNS másolat (cDNS) használható.
A gént - sikeres kifejeződése érdekében - megfelelő promoter szekvenciával együtt kell beépíteni. A fent említett gének számára megfelelő promoter szekvenciák ismeretesek. A promotert úgy választjuk meg, hogy biztosítsa az iminunogén protein optimális kifejeződését vagy az optimális, sejt által közvetített immunitást, az ismert követelményeknek megfelelően.
A rekombináns vírussal fertőzött sejtben in vivő expressz ió révén termelődött protein lehet maga immunogén. Emellett a gén termelhet egynél több hatásos proteint; vagy a vírus genomba egynél több idegen gént építhetünk be.
Ennek megfelelően, a találmány szerinti rekombináns vírus lehetővé teszi, hogy húsevőkben a betegségek széles skálája ellen nyújtsunk védelmet.
• ·♦ ♦ * · · φ • · · · · · ··♦· ·« ·· « · • ··» ·· · · ··
- 6 ~
A találmány tárgya továbbá egy a húsevőkben egy fertőző organizmus ellen ellenanyagokat vagy sejt közvetítette immunválaszt kiváltani képes, élő rekombináns vírus előállításának módszere, ami abban áll, hogy egy élő, nem patogén, kutya adenovírusba az említett ellenanyagoknak megfelelő vagy az említett, sejt által közvetített immunválaszt kiváltó antigént kódoló gént egy hatásos promoterrel együtt ültetjük be abból a célból, hogy élő, nem patogén, immunogén, rekombináns vírusokat állítsunk elő.
A promoter-gén szerkezetet rendszerint olyan DNS-szekvenciába klónozzuk, amely csupán része a teljes vírus genomnak. Ez a szekvencia egy olyan plazmidban lehet jelen, amely lehetővé teszi a sikeres klónozást úgy, hogy a szekvencia nagyszámú másolatát állítsuk elő. A klónozott szekvenciát ezután a teljes vírus genomba foglalhatjuk, a szekvencia végein található restrikciós hasítási helyeknek megfelelő restrikciós enzimek felhasználásával.
A találmány tárgya továbbá az ilyen plazmid, amely ilyen, promoter-gén konstrukciót tartalmazó vírus DNS-szekvencia.
A vírus és a konstrukció DNS-szekvenciája lehet a természetessel azonos vagy azzal egyenértékű az expresszált fehérjét tekintve. Ezenfelül az immunogén protein (és ennélfova a DNS) rendelkezhet immunológiai hatása szempontjából lényegtelen kiegészítésekkel, deléciókkal vagy helyettesítésekkel is.
A találmány tárgya továbbá egy vakcina készítmény, amely a rekombináns vakcinát egy elfogadható hordozóval együtt
tartalmazza. A vakcinát szájon át való adagolás céljára, (pl. bélben oldódó tablettaként), injekcióként vagy másképpen készíthetjük el.
A találmány szerinti megoldást a következő példákkal szemléltetjük. Az alkalmmazott módszereket a Molecular Cloning - A Laboratory Manual (második kiadás, Sambrook, J. , Fritsch, E.F., és Maniatis, T., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) ismerteti.
1. példa:
In vitro liqálás
A kérdéses gént, pl. a veszettség glikoproteinjét kódoló gént először a kiválasztott promoter ellenőrzése alá helyezzük (számos különböző promoter lehetséges). A promoter-gén konstrukciót ezután a plazmidban található Sáli B fragmens Smal hasítási helyére klónozzuk. Ez egy olyan plazmidot eredményez, amely a CAV-2 jobb végéből 3,0 kb-t hordoz a kiválasztott DNS darabbal együtt, éppen az ITR határán belülre klónozva.
Az adenovírus genom módosított jobb végi szakaszát ezután a teljes vírus genomba ültetjük, a következő módon: vírus DNS-t tisztítunk, és Sáli restrikciós enzimmel hasítjuk, a promoter-gén konstrukciót tartalmazó, klónozott, terminális Sáli fragmenst ezután a hordozó plazmidból felszabadítjuk és a hasított vírus DNS-sel összekeverjük. Ezután a DNS szakaszokat újból egyesítjük.
Számos lépést iktatunk be a vad típusú genom visszaalakulásának minimalizálására és a helyes rekombinánsok képzésének maximalizálására. így például a Sall-gyel emésztett • · ·
- 8 vírus DNS-t a jobb végi Sáli fragmens eltávolítása céljából szacharóz gradiensen centrifugálhatjuk a rekombináns jobb végi fragmenssel való összekapcsolás előtt.
A rekombináns vírus DNS-t ismert eljárások alkalmazásával kutya sejttenyészetbe juttatjuk vissza a vírus tenyésztése céljából. Egyedi vírus plakkokat gyűjtünk, és felszaporítjuk abból a célból, hogy ezek genomiális DNS-ét vizsgálva igazoljuk a rekombináns gén jelenlétét.
Ezzel a módszerrel olyan összekapcsolt terméket állítottunk elő, amely magába foglalta a veszettség vírusának és a macska leukémia vírusának a génjét.
Az 1. ábra mutatja a 2-es típusú kutya adenovírus genom jobb végi szakaszának DNS szekvenciáját. A szekvenciát a szokásos 5'-3' irányban ábrázoltuk, a számozást a jobb oldali végtől kezdve. Az érthetőség kedvéért csupán a felső szálat ábrázoltuk. A különböző jellemzőket jelöltünk: (1) az invertált terminális ismétlődés (ITR) végét, a 197-es pozícióban; (2) a Smal restrikciós enzim hasítás helyét a 180-185 pozícióban; (3) az E4 transzkripciós egység TATA box-át a 395-400 pozícióban.
2. példa
Homológ rekombináció
Az 1. példában a célzott géneket a Sáli B klón Smal hasítási helyére klónoztuk, és ezt követően a rekombináns vírusokat a vírus genom és plazmid fragmensek in vitro ligálásával állítottuk elő. Másképp eljárva, a rekombináns Sáli B kiónokat használtuk (azaz, amelyek tartalmazták az adott géneket a szokásos helyre beiktatva) és meghosszabbítottuk a ·· ·
Sáli helyen túl a jobb végtől számított harmadik KpnI hasítási helyig [lásd 3. ábrát, N. Spibey és H.M.A. Cavanagh, J. Gén. Virol. 70, 165-172 (1989)]. Ezt úgy értük el, hogy a KpnI B szakaszt (amelyet előzőleg szokásos bakteriális klónozási vektorba klónoztunk) egyszerűen a megfelelőképpen hasított rekombináns Sáli B plazmidokkal egyesítettük. Mivel ezek a rekombináns jobb végi szakaszt tartalmazó kiónok túlterjednek a Sáli hasítási helyen, ezeknek az ép vírus genomba való beültetését inkább homológ rekombináció útján végeztük, mint in vitro ligálással.
Rekombináns vírusok homológ rekombinációval való előállítása jól ismert, az általunk alkalmazott módszerek röviden a következők voltak: ismert módszerekkel tisztított virionokból vírus DNS-protein komplexet állítottunk elő. A DNSprotein kompexet tartalmazó mintát Sáli restrikciós enzimmel emésztettük. A CAV-2 genom jobb végét - amely a térképen kb. a 74. egységtől (KpnI hasítási helytől) a végéig (100 egység) terjed, és közel az ITR határához a Smal hasítási helyre beültetve a választott promoter-célzott gén konstrukciót tartalmazta - tartalmazó rekombináns plazmidot restrikciós enzimmel hasítottuk oly módon, hogy a plazmidot linearizáltuk, de nem vágtuk el a CAV vagy a célzott gén szekvencián belül. A két DNS mintát (vírus DNS-protein komplex és linearizált plazmid) ezután 1:20 mólarányban összekevertük, és a recipiens sejtvonalba transzfektáltuk, melynek előállítását a következőkben ismertetjük.
3. példa
Ela proteint expresszáló recipiens seitvonal előállítása Elsődleges kutya vese sejttenyészeteket és kialakított kutya vese sejttenyészeteket (MDCK sejtek) a következő két plazmid keverékével transzferáltunk: (1) pGRIC, amely a CAV-2 bal végi EcoRI C fragmensét tartalmazta a szokásosan alkalmazott Bluescript klónozási vektorba klónozva; (2) pSV2-Neo, amely a neomycin rezisztenciát kódoló gént az Sv40 vírus korai promoterének ellenőrzése alá helyezve tartalmazta. Ezen transzfekcióknak az volt a célja, hogy olyan sejtvonalat állítsunk elő, amely termeli a kutya adenovírus Ela proteineket [ezek a proteinek az EcoRI C fragmenten belül kódolódnak, Spibey és munkatársai, Vírus Research, 14, 241 (1989)]. Feltételeztük, hogy egy ilyen sejtvonal sokkal hatásosabb lenne a transzfektált vírus DNS replikációjánál, mivel az El proteinek már jelen vannak. Az El proteinek számos funkcióval rendelkeznek, azonban fő szerepüknek szabályozó funkciójukat tekinthetjük, vagyis más vírusgéneket kapcsolnak be. Ezért, ha ezek a proteinek már jelen vannak, a transzfektált vírus DNS-nek nagyobb esélye lehet a replikálódásra, és így kevésbé bomlik le a sejt lebontási folyamatai hatására. A neomycin rezisztenciát hordozó plazmidot használtuk szelekciós markerként, vagyis egyedi sejtklónokat válogattunk ki neomycin reziszetnciájuk alapján, és ezt követően CAV-2 Ela proteinek termelésére nézve vizsgáltuk őket.
Transzformált (vagyis Ela proteineket expresszáló) sejtvonalakat kaptunk mind az elsődleges, mind a kialakított ku• ·
- 11 tya vese tenyészetekből.
4. példa
Transzfekciós módszer
A transzfékelóknál a következők szerint jártunk el.
Első nap: a sejteket tripszineztük, és l-l,5xlO5 sejt/ml koncentrációig hígítottuk. Ezután 100 mm átmérőjű edényenként 106 sejtet (vagy 175 cm2-es palackonként megfelelő számú sejtet) szélesztettünk.
Második nap: a sejteket egyszer PBS-ben mostuk. Minden edényhez 5 ml szérummentes tápfolyadékot adtunk, amely 20 pg transz fektálandó DNS-t és 50 μΐ DEAE dextránt (5 mg/ml törzsoldat) tartalmazott. Megbizonyosodtunk róla, hogy a DNS/dextrán oldat jól elkeveredett, mielőtt a sejtekhez adtuk volna.
4-6 óra elteltével eltávolítottuk a DNS/dextrán oldatot, és 5 ml, 10 % DMSO-t tartalmazó, szérummentes tápfolyadékot adtunk a sejtekhez, 1-2 percig állni hagytuk, ezután eltávolítottuk, és 0,1 mmol/1 klorokin-difoszfátot tartalmazó teljes tápfolyadékot adtunk hozzá. 4 óra múlva a tápfolyadékot friss teljes tápfolyadékra cseréltük.
A sejteket a kívánt ideig inkubáltuk. Ez 10 napig tarthatott, hogy a vírus fertőzés az egész tenyészeten szétterjedjen.
Neomycin rezisztens kiónokat szelektáltunk szokványos eljárások felhasználásával. Röviden, a transzfekció után 24 óra hosszat a sejteket normális teljes tápfolyadékban hagytuk, mielőtt hozzáadtuk a neomycint (800 Mg/ml végkoncentráció) . A neomycin szelekciót 7-10 napig folytattuk, 2 napon• ·· · ···· ·· · · ·· · · · · • ··· * · ·· ··
- 12 ként cserélt tápfolyadékkal. A rezisztens kiónokat azonosítottuk, összegyűjtöttük és neomycinmentes tápfolyadékban szaporítottunk 3-4 napig. Ezt követően, egy további hígításos klónozási ciklust végeztünk neomycintartalmú tápfolyadékban.
Minden sejt inkubációt 37 °C-on végeztünk.
Claims (10)
- Szabadalmi igénypontok1. Rekombináns adenovírus, amely húsevőkben fertőző organizmus elleni ellenanyagok termelésére vagy sejt által közvetített immunitás kiváltására alkalmas, azzal jellemezve, hogy élő, nem patogén, immunogén, módosított kutya adenovírus, amely tartalmazza az említett ellenanyagoknak megfelelő vagy az említett, sejt által közvetített immunitást kiváltó antigént kódoló gént, az említett génre nézve hatásos promoterrel összekapcsolva, az ellenanyagoknak vagy a sejt által közvetített immunitás elemeinek immunogén, nem patogén mennyiségben történő expresszióját biztosító módon kialakítva és elrendezve.
- 2. Az 1. igénypont szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy módosított CAV-2 törzs, amely az említett promoter szekvenciát tartalmazza.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy a promoter-gén szekvenciát a vírus genom azon szakaszában tartalmazza, amely az invertált terminális ismétlődés (ITR) vége közelében található Smal hasítási helytől a 4-es korai szakasz (E4) promoteréig terjed.
- 4. A 3. igénypont szerinti adenovírus, azzal jelemezve, hogy a promoter-gén szekvenciát a Smal hasítási helyre beültetve tartalmazza.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti adenovírus, azzal jellemezve, hogy a bevitt gén vagy immunogén génszakasz a következő eredetű lehet:(a) kutya parvovírus kapszid proteineket kódoló »« *· »· • · ··· ·· gén(ek);(b) macska pánleukopénia kapszid proteinjeit kódoló gének;(c) kutya és macska coronavírus peploméreket kódoló gének;(d) kutya szopornyica hemagglutininjét és kapszid antigénjét kódoló gének;(e) macska leukémia vírus burok-glikoproteinjét kódoló gének;(f) veszettség vírus burok-glikoproteinjét kódoló gén;(g) macska immunelégtelenség vírus burok-glikoproteinjét kódoló gén.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti rekombináns adenovírus, azzal jellemezve, hogy kutya adenovírus Ela proteinekkel van asszociálva.
- 7. Eljárás húsevőkben fertőző organizmus ellenes ellenanyagok termelésére vagy sejt által közvetített immunválasz kiváltására alkalmas rekombináns adenovírus előállítására, azzal jellemezve, hogy élő, nem patogén, immunogén, életképes kutya adenovírust az említett ellenanyagoknak megfelelő vagy az említett, sejt által közvetített immunválaszt kiváltó antigént kódoló gén beépítésével, az említett génre nézve hatásos promoterrel összekapcsolva, az említett ellenanyagokat vagy a sejt által közvetített immunitás elemeit immunogén, nem patogén mennyiségben expresszáló módon kialakítva és elrendezve módosítjuk.
- 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a rekombináns vírust kutya adenovírus Ela proteineket expresszáló sejtvonalba transzfektálva replikáijuk.
- 9. Plazmid, azzal jellemezve, hogy élő, nem patogén, immunogén, életképes kutya adenovírusből származó génszakaszt és egy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti promoter gén szekvenciát tartalmaz.
- 10. Vakcina készítmény, azzal jellemezve, hogy egy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti rekombináns adenovírust tartalmaz alkalmas hordozóval mellett.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB909001766A GB9001766D0 (en) | 1990-01-25 | 1990-01-25 | Vaccines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9202436D0 HU9202436D0 (en) | 1992-12-28 |
| HUT65368A true HUT65368A (en) | 1994-05-02 |
Family
ID=10669925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9202436A HUT65368A (en) | 1990-01-25 | 1991-01-25 | Vaccines |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0512017B1 (hu) |
| JP (1) | JP3159446B2 (hu) |
| KR (1) | KR920703831A (hu) |
| AU (1) | AU641211B2 (hu) |
| CA (1) | CA2074502C (hu) |
| DE (1) | DE69126606T2 (hu) |
| DK (1) | DK0512017T3 (hu) |
| ES (1) | ES2103001T3 (hu) |
| GB (1) | GB9001766D0 (hu) |
| GR (1) | GR3024242T3 (hu) |
| HU (1) | HUT65368A (hu) |
| NZ (1) | NZ236887A (hu) |
| WO (1) | WO1991011525A2 (hu) |
| ZA (1) | ZA91534B (hu) |
Families Citing this family (71)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2213743T3 (es) * | 1991-04-25 | 2004-09-01 | Akzo Nobel N.V. | Vacuna de subunidad de coronavirus canino. |
| US6743623B2 (en) | 1991-09-27 | 2004-06-01 | Centre National De La Recherche Scientifique | Viral recombinant vectors for expression in muscle cells |
| FR2681786A1 (fr) * | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| US6099831A (en) * | 1992-09-25 | 2000-08-08 | Centre National De La Recherche Scientifique | Viral recombinant vectors for expression in muscle cells |
| FR2705361B1 (fr) * | 1993-05-18 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| FR2705686B1 (fr) * | 1993-05-28 | 1995-08-18 | Transgene Sa | Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes. |
| US5820868A (en) * | 1993-12-09 | 1998-10-13 | Veterinary Infectious Disease Organization | Recombinant protein production in bovine adenovirus expression vector system |
| FR2727689A1 (fr) * | 1994-12-01 | 1996-06-07 | Transgene Sa | Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral |
| DE69740033D1 (de) * | 1996-07-03 | 2010-12-09 | Merial Inc | Rekombinanter hunde-adenovirus 2 (cav2), welcher exogene dna enthält |
| AU8097698A (en) | 1997-06-23 | 1999-01-04 | University Of Saskatchewan | Bovine adenovirus type 3 genome |
| US6517843B1 (en) | 1999-08-31 | 2003-02-11 | Merial | Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2 |
| US6451319B1 (en) | 1999-04-09 | 2002-09-17 | Schering-Plough Veterinary Corporation | Recombinant and mutant adenoviruses |
| CA2410665C (en) | 2000-05-31 | 2017-11-07 | University Of Saskatchewan | Modified bovine adenovirus having altered tropism |
| US6916635B2 (en) | 2000-10-02 | 2005-07-12 | The Research Foundation Of State University Of New York | Hybrid adenovirus/adeno-associated virus vectors and methods of use thereof |
| FR2845395B1 (fr) * | 2002-10-08 | 2008-05-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Vecteurs adenoviraux recombinants et leurs applications |
| EP1606419A1 (en) | 2003-03-18 | 2005-12-21 | Quantum Genetics Ireland Limited | Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds |
| US7468273B2 (en) | 2003-05-01 | 2008-12-23 | Meial Limited | Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use |
| US20050214316A1 (en) | 2003-11-13 | 2005-09-29 | Brown Thomas P | Methods of characterizing infectious bursal disease virus |
| US20050202484A1 (en) | 2004-02-19 | 2005-09-15 | The Governors Of The University Of Alberta | Leptin promoter polymorphisms and uses thereof |
| CA2605629C (en) | 2005-04-25 | 2012-06-26 | Merial Limited | Nipah virus vaccines |
| US20080241184A1 (en) | 2005-08-25 | 2008-10-02 | Jules Maarten Minke | Canine influenza vaccines |
| US7771995B2 (en) | 2005-11-14 | 2010-08-10 | Merial Limited | Plasmid encoding human BMP-7 |
| WO2007056614A1 (en) | 2005-11-14 | 2007-05-18 | Merial Limited | Gene therapy for renal failure |
| US7862821B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-01-04 | Merial Limited | Recombinant vaccine against bluetongue virus |
| US8202967B2 (en) | 2006-10-27 | 2012-06-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | H5 proteins, nucleic acid molecules and vectors encoding for those, and their medicinal use |
| DK2414386T3 (en) | 2009-04-03 | 2016-02-22 | Merial Ltd | Birds of vaccines with newcastle disease virus vectors |
| AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| WO2012030720A1 (en) | 2010-08-31 | 2012-03-08 | Merial Limited | Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines |
| AR083533A1 (es) | 2010-10-22 | 2013-03-06 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Proteinas de hemaglutinina 5 (h5) para el tratamiento y prevencion de las infecciones de gripe |
| WO2012090073A2 (en) | 2010-12-30 | 2012-07-05 | The Netherlands Cancer Institute | Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity |
| US20140287931A1 (en) | 2011-04-04 | 2014-09-25 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut - Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment |
| US20140296248A1 (en) | 2011-04-04 | 2014-10-02 | Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis | Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment |
| US20140155469A1 (en) | 2011-04-19 | 2014-06-05 | The Research Foundation Of State University Of New York | Adeno-associated-virus rep sequences, vectors and viruses |
| WO2012145577A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Merial Limited | Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile |
| EP2701736A1 (en) | 2011-04-25 | 2014-03-05 | Advanced Bioscience Laboratories, Inc. | Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto |
| WO2012166493A1 (en) | 2011-06-01 | 2012-12-06 | Merial Limited | Needle-free administration of prrsv vaccines |
| LT2741740T (lt) | 2011-08-12 | 2017-08-10 | Merial, Inc. | Biologinių produktų, ypatingai vakcinų, vakuuminis konservavimas |
| AR088028A1 (es) | 2011-08-15 | 2014-05-07 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Proteinas h5, de h5n1 para un uso medicinal |
| WO2013033092A2 (en) | 2011-09-03 | 2013-03-07 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Streptococcus suis pilus antigens |
| WO2013093629A2 (en) | 2011-12-20 | 2013-06-27 | Netherlands Cancer Institute | Modular vaccines, methods and compositions related thereto |
| WO2013138776A1 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Merial Limited | Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g |
| ES2689878T3 (es) | 2013-02-21 | 2018-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Proteínas H5 del virus de la gripe H5N1 para su uso como un medicamento |
| EP2968514A1 (en) | 2013-03-12 | 2016-01-20 | Merial, Inc. | Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof |
| AU2015241107B2 (en) | 2014-04-03 | 2019-10-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine epidemic diarrhea virus vaccine |
| EP3215188A1 (en) | 2014-11-03 | 2017-09-13 | Merial, Inc. | Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus |
| CN107922462B (zh) | 2015-06-23 | 2022-03-18 | 勃林格殷格翰动物保健美国公司 | 含prrsv次要蛋白的重组病毒载体及其制造方法与用途 |
| TWI799365B (zh) | 2015-08-31 | 2023-04-21 | 德商百靈佳殷格翰維美迪加股份有限公司 | 用於先天性痙攣症之瘟疫病毒疫苗 |
| US20170072042A1 (en) | 2015-09-16 | 2017-03-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Salmonella choleraesuis-salmonella typhimurium vaccines |
| CN109715219B (zh) | 2016-09-20 | 2024-03-01 | 勃林格殷格翰动物保健有限公司 | 犬腺病毒载体 |
| KR102566066B1 (ko) | 2016-09-20 | 2023-08-16 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 신규한 돼지 인플루엔자 백신 |
| KR102543774B1 (ko) | 2016-09-20 | 2023-06-19 | 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 | 신규한 프로모터 |
| JP6952112B2 (ja) | 2016-09-20 | 2021-10-20 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハーＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ ＧｍｂＨ | 新規なｅｈｖ挿入部位ｏｒｆ７０ |
| AU2017353380B2 (en) | 2016-11-03 | 2024-08-22 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Vaccine against porcine parvovirus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of production thereof |
| JP6876127B2 (ja) | 2016-11-03 | 2021-05-26 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハーＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｖｅｔｍｅｄｉｃａ ＧｍｂＨ | ブタパルボウイルスに対するワクチン |
| US12150983B2 (en) | 2017-01-30 | 2024-11-26 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine coronavirus vaccines |
| WO2019014144A1 (en) | 2017-07-12 | 2019-01-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS BASED ON SENECAVIRUS TYPE A AND CORRESPONDING METHODS |
| BR112020005767A2 (pt) | 2017-09-23 | 2020-10-13 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | sistema de expressão de paramyxoviridae |
| WO2019092027A1 (en) | 2017-11-09 | 2019-05-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Sapelovirus immunogenic compositions and uses thereof |
| MX2020008779A (es) | 2018-02-23 | 2020-10-01 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Sistemas de vectores virales recombinantes que expresan genes de paramixovirus felino exogenos y vacunas elaboradas a partir de estos. |
| CA3091960A1 (en) | 2018-03-19 | 2019-09-26 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | New ehv insertion site ul43 |
| JP7273840B2 (ja) | 2018-03-19 | 2023-05-15 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハー | 不活性化ｕｌ１８および／またはｕｌ８を有する新しいｅｈｖ |
| TW202003027A (zh) | 2018-03-26 | 2020-01-16 | 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 | 製造免疫原組合物之方法 |
| WO2020058341A1 (en) | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Intranasal vector vaccine against porcine epidemic diarrhea |
| WO2020058327A1 (en) | 2018-09-20 | 2020-03-26 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Modified pedv spike protein |
| EP4100420A1 (en) | 2020-02-06 | 2022-12-14 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Polypeptides useful for detecting anti-rhabdovirus antibodies |
| EP4225361A1 (en) | 2020-10-05 | 2023-08-16 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Fusion protein comprising circoviridae capsid protein, and chimeric virus-like particles composed thereof |
| CA3195910A1 (en) | 2020-10-05 | 2022-04-14 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Fusion protein useful for vaccination against rotavirus |
| US20240050555A1 (en) | 2022-04-05 | 2024-02-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Immunogenic composition useful for vaccination against rotavirus |
| WO2024243578A1 (en) | 2023-05-25 | 2024-11-28 | Dispatch Biotherapeutics, Inc. | Synthetic cancer antigens as targets for treating cancers |
| WO2025171383A2 (en) | 2024-02-09 | 2025-08-14 | Dispatch Biotherapeutics, Inc. | Engineered cancer antigens and related methods and uses |
| WO2025171388A1 (en) | 2024-02-09 | 2025-08-14 | Dispatch Biotherapeutics, Inc. | Engineered cancer antigens with modified domains and related methods and uses |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL76751A (en) * | 1984-11-01 | 1991-04-15 | American Home Prod | Method and oral vaccines against infectious organisms using live,recombinant adenovirus for the production of antibodies |
-
1990
- 1990-01-25 GB GB909001766A patent/GB9001766D0/en active Pending
-
1991
- 1991-01-24 ZA ZA91534A patent/ZA91534B/xx unknown
- 1991-01-24 NZ NZ236887A patent/NZ236887A/en unknown
- 1991-01-25 AU AU70756/91A patent/AU641211B2/en not_active Ceased
- 1991-01-25 ES ES91903143T patent/ES2103001T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-25 JP JP50313991A patent/JP3159446B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-25 DE DE69126606T patent/DE69126606T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-25 EP EP91903143A patent/EP0512017B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-25 CA CA002074502A patent/CA2074502C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-25 DK DK91903143.5T patent/DK0512017T3/da active
- 1991-01-25 KR KR1019920701760A patent/KR920703831A/ko not_active Withdrawn
- 1991-01-25 HU HU9202436A patent/HUT65368A/hu unknown
- 1991-01-25 WO PCT/GB1991/000107 patent/WO1991011525A2/en active IP Right Grant
-
1997
- 1997-07-25 GR GR970401882T patent/GR3024242T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU7075691A (en) | 1991-08-21 |
| CA2074502C (en) | 2001-07-17 |
| EP0512017A1 (en) | 1992-11-11 |
| GB9001766D0 (en) | 1990-03-28 |
| DE69126606T2 (de) | 1998-01-08 |
| GR3024242T3 (en) | 1997-10-31 |
| JPH05505306A (ja) | 1993-08-12 |
| JP3159446B2 (ja) | 2001-04-23 |
| ES2103001T3 (es) | 1997-08-16 |
| CA2074502A1 (en) | 1991-07-26 |
| KR920703831A (ko) | 1992-12-18 |
| WO1991011525A3 (en) | 1991-09-05 |
| DE69126606D1 (de) | 1997-07-24 |
| AU641211B2 (en) | 1993-09-16 |
| ZA91534B (en) | 1991-11-27 |
| HU9202436D0 (en) | 1992-12-28 |
| WO1991011525A2 (en) | 1991-08-08 |
| EP0512017B1 (en) | 1997-06-18 |
| NZ236887A (en) | 1992-04-28 |
| DK0512017T3 (da) | 1998-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT65368A (en) | Vaccines | |
| US5616326A (en) | Recombinant canine adenovirus 2 (CAV-2) | |
| US5698202A (en) | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier | |
| US4797368A (en) | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector | |
| CA2331599C (en) | Replication defective hiv vaccine | |
| CN110628730B (zh) | 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒gp蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用 | |
| KR20190055183A (ko) | 개 아데노바이러스 벡터 | |
| WO1988010311A1 (en) | Recombinant human cytomegalovirus containing foreign gene and use thereof | |
| Bayer et al. | Vaccination with an adenoviral vector that encodes and displays a retroviral antigen induces improved neutralizing antibody and CD4+ T-cell responses and confers enhanced protection | |
| EP3320100B1 (en) | Fowl adenovirus 9 (fadv-9) vector system and associated methods | |
| JP2006513714A (ja) | アデノウイルス血清型２４ベクター、核酸およびそれにより製造されたウイルス | |
| EP1611237A1 (en) | Adenovirus serotype 34 vectors, nucleic acids and virus produced thereby | |
| Du et al. | Efficient replication and generation of recombinant bovine adenovirus‐3 in nonbovine cotton rat lung cells expressing I‐SceI endonuclease | |
| WO2023070873A1 (zh) | SARS-CoV-2病毒样颗粒的制备方法及其应用 | |
| IE60285B1 (en) | Method for producing selected polypeptides in virally infected insect cells and polypeptides isolated therefrom | |
| WO2001083737A2 (en) | Porcine adenovirus type 5 vector and vaccine | |
| KR20150074714A (ko) | 돼지유행성 설사 바이러스의 전장 뉴클레오티드를 포함하는 감염성 클론 | |
| JP3710838B2 (ja) | ウマヘルペスウイルス感染からウマを防御するためのワクチン | |
| CN116640736A (zh) | 重组人4型腺病毒载体的SARS-CoV-2疫苗候选株的构建及其应用 | |
| EP0606452A1 (en) | Vector vaccines of recombinant feline herpesvirus | |
| AU2006228037A1 (en) | Adenovirus vectors comprising introns | |
| JP2005519959A (ja) | Ｈｉｖに対する強化された免疫応答を誘導する方法 | |
| CA2164297A1 (en) | Mengovirus as a vector for expression of foreign polypeptides | |
| EP1026252A1 (en) | Synthetic gene of bovine viral diarrhoea virus | |
| WO1994029472A9 (en) | Mengovirus as a vector for expression of foreign polypeptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |