HUT65677A - Production of plants resistant to attacks of sclerotinia sclerotiorum - Google Patents
Production of plants resistant to attacks of sclerotinia sclerotiorum Download PDFInfo
- Publication number
- HUT65677A HUT65677A HU9203473A HU9203473A HUT65677A HU T65677 A HUT65677 A HU T65677A HU 9203473 A HU9203473 A HU 9203473A HU 9203473 A HU9203473 A HU 9203473A HU T65677 A HUT65677 A HU T65677A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- prpa
- oxo
- plant
- ecori
- gene
- Prior art date
Links
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 title description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 55
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 26
- 108010063734 Oxalate oxidase Proteins 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 9
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 2
- 241000966613 Sclerotinia sp. Species 0.000 claims 2
- 244000188595 Brassica sinapistrum Species 0.000 claims 1
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 32
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 22
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 22
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 20
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 20
- 241001167018 Aroa Species 0.000 description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 14
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 description 12
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 3
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- ZAQJHHRNXZUBTE-NQXXGFSBSA-N D-ribulose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 2
- ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N D-threo-2-Pentulose Natural products OCC(O)C(O)C(=O)CO ZAQJHHRNXZUBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150111720 EPSPS gene Proteins 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 4-n-(4-aminophenyl)benzene-1,4-diamine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1NC1=CC=C(N)C=C1 QZHXKQKKEBXYRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- RNPABQVCNAUEIY-GUQYYFCISA-N Germine Chemical compound O1[C@@]([C@H](CC[C@]23C)O)(O)[C@H]3C[C@@H](O)[C@@H]([C@]3(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]4[C@]5(C)O)[C@@]12C[C@H]3[C@@H]4CN1[C@H]5CC[C@H](C)C1 RNPABQVCNAUEIY-GUQYYFCISA-N 0.000 description 1
- 101000617808 Homo sapiens Synphilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102100021997 Synphilin-1 Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- RNPABQVCNAUEIY-UHFFFAOYSA-N germine Natural products O1C(C(CCC23C)O)(O)C3CC(O)C(C3(O)C(O)C(O)C4C5(C)O)C12CC3C4CN1C5CCC(C)C1 RNPABQVCNAUEIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 231100001222 nononcogenic Toxicity 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 244000086221 rape kale Species 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0008—Oxidoreductases (1.) acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y102/00—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2)
- C12Y102/03—Oxidoreductases acting on the aldehyde or oxo group of donors (1.2) with oxygen as acceptor (1.2.3)
- C12Y102/03004—Oxalate oxidase (1.2.3.4)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Networks Using Active Elements (AREA)
Description
A találmány tárgya egy oxalát-oxidázt kódoló gén, az ez által a gén által kódolt protein, ezt a gént magukban foglaló kiméra gének, és ezek alkalmazása transzformációra annak érdekében, hogy gombamegbetegedések iránti rezisztenciát átvigyünk.
A sclerotiniózis egy jelentős gombabetegség, amely nagyszámú kétszikűt érint. A kórokzó a Sclerotinia sclerotiorum egy polifágos gomba, amely kevés gazda-fajlagossággal bír.
A gomba a növényeket közvetlenül megtámadhatja a szár szintjén vagy a levelek szintjén, és aztán terjed rá a szárra, vagy megtámadhatja a virágzó fészekvirágzatot. Az első két esetben a növény a táplálékellátás megszakadása folytán elsorvad. Az utolsó esetben a virágzat elsorvad, veszélyeztetve a betakarítást.
A gomba litikus enzimeket termel, amelyek a fertőzött növény sejtfalát lebontják, és segítik a gomba elterjedését a növényben. Ezek az enzimek a patogenitásban fontos szerepet játszanak, de hatásuk önmagukban nem teljes. A gomba oxálsavat is termel (Godov és munkatársai, 1990), ez az oxálsav a fertőzött szövetek pH-jának csökkenését okozza, elősegítve ezzel a sejtfal litikus enzimek által történő hidrolízisét. Az oxálsav termelés csökkentése, vagy a képződött oxálsav elbontása a gomba fejlődésének lassulásához, vagy éppen gátlásához vezethetne.
Egy nos rezisztens növény kifejlesztése érdekében az oxálsavtól történő detoxifikálás stratégiája használható. Ennek a savnak a lebontása korlátozza a megtámadott növényi szövet intracelluláris pH-jának csökkenését, ennek folytán a litikus enzimek pH optimumuktól igen távoli pH értéken fognak működni, miáltal nem lesznek igazán aktívak és hatékonyak. Ez a gomba patogenitásának csökkenéséhez vezet. Ennek a célnak az elérésére az oxalát-oxidáz használható, ami a következő reakciót katalizálja:
θ2 C2°4H2 ------------------> 2CO2 + H2°2 oxalát-oxidáz
Az oxalát-oxidázt különböző növényekből izolálják, általában egyszikűekből (Piéta és munkatársai, 1982) , a fehérje tisztítható például árpából szokásos kromatográfiás eljárások alkalmazásával (például Sephadex G-75 gélszűréssel és MonoQ ioncserélő gélen, Pharmacia), az enzim aktivitásnak az alábbi kolorimetriás eljárással való nyomonkövetésével (Obzansky és Richardson, 1983):
Oxálsav + 02----------------> 2CO2 + H2O2 oxalát oxidáz
H2O2 + MBTH + DMA--------------> indamin + H20 peroxidáz
MBTH = 3-metil-2-benzotiazolon-hidrazon
DMA = N,N-dimetil-alinin.
Ez lehetővé tette egy olyan protein tisztítását, amely akrilamid gélen, denaturáló körülmények mellett 26 000 daltonos molekulatömeget mutat. A tisztított oxalát-oxidáz egy részét arra használjuk, hogy nyúl anti oxalát-oxidáz antitesteket nyerjünk; a megmaradt fehérjét a natív fehérje (N-terminális) szekvenálásának elvégzésére használjuk vagy, cianogén-bromidos hasítás után, bizonyos belső peptidek szekvenálására. A kapott eredmények a következők:
N-terminális: IDPDPLQDF-VADLDGKAVSVNGH
S
2. számú belső peptid: HFQFNVGKTEAY
CDNS
A fent leírt peptid szekvenciáknak a Swiss-Prot fehérjekönyvtárban található adatokkal való összehasonlítása lehetővé tette számunkra egy Germine elnevezésű búzafehérje azonosítását, amelyet 1989-ben Dratewka-kos és munkatársai írtak le. Vizsgálatokat végeztünk, amelyek alapján megállapítottuk, hogy a szerzők által leírt cDNS egy 201 aminosavból álló fehérjét kódol, amely oxalát-oxidáz aktivitással bír. A vizsgálatok további leírásánál a szerzők által közölt cikk [J. Bioi. Chem., 264. 4896-4900] 2. ábráján szereplő nukleotid-számozást alkalmazzuk.
A fenti cDNS szekvenciája 1075 nukleotid hosszúságú egy 85 egységből álló nem leolvasott 5' véggel, egy 672 nukleotidos nyílt leolvasási kerettel (a 86 - 757 helyzet között), és egy 318 egységből álló nem leolvasott 3' véggel.
A cDNS szekvenciából kikövetkeztetett protein szekvenciának a natív protein szekvenálásával kapott szekvenciával történő összehasonlítása azt mutatja, hogy a cDNS nem csak az érett oxalát-oxidázt kódolja, hanem egy az N-terminális végen lévő, 23 aminosavból álló szignál peptidet is. Ezért az oxalát-oxidáz egy előprotein (preprotein) formájában szintetizálódik (szignál peptid + érett peptid), amely a szignál peptid eltávolításával érésen megy át, így szabadul fel az érett, aktív enzim.
A következőkben vagy azt a részt fogjuk használni, amely az előproteint kódolja (86 - 757 helyzetű nukleotidok), vagy csak azt a részt, amely az érett proteint kódolja (155 - 757 helyzetű nukleotidok) . Az utóbbi esetben az ACC kodon elé (amely az érett fehérje első aminosavját, a treonint kódolja) egy AUG kodont helyezünk (amely metionint kódol).
A Sclerotinia sclerotiorum főként a növény szárán támad, ezért előnyös, ha az oxalát-oxidázt vagy a klorofilos szövetben tudjuk kifejezni, erre a Helionthus annuus ribulóz 1,5-difoszfát-karboxiláz kis alegységének promoterjét (SSUHa, Waksman és munkatársai, 1987) használhatjuk; vagy a növény különböző szöveteiben fejezzük ki, erre a karfiol mozaikvírus 35S RNS mindenütt jelenlévő promoterjét (CaMV 35S) használjuk, amelynek egy része duplikált, és amelyet kettős CaMV néven neveznek.
A találmány szerinti kiméra gének például a következő elemekből konstruálhatok:
A. Kettős CaMV promoter, amelyet az oxalát-oxidáz cDNS-nek az előproteint (szignál peptid + érett peptid) kódoló része követ, és a pTi 37 nopalin szintetáz génből (Bevan és munkatársai, 1983) nyert nos terminátor.
B. Kettős CaMV promoter, amelyet az oxalát-oxidáz cDNS-nek csak az érett proteint kódoló része követ, majd ezt a nos terminátor követi.
C. A gén azonos az A pontban leírttal, de a kettős CaMV helyén napraforgó ribulóz 1,5-difoszfát-karboxiláz kis alegységének (SSUHa) promoterét tartalmazza.
D. A gén azonos a B pontban leírttal, de a kettős CaMV helyén az SSUHa promoterét tartalmazza.
• * · · ·« · • · · ·
Minden kiméra gént beviszünk a növényi sejtbe egy Agrobacterium-ot alkalmazó rendszer segítségével, vagy bármely más olyan rendszerrel, amely egyébként növényi sejtek transzformálására ismert. Ezekből a transzformált sejtekből regeneráljuk a növényeket. A növények megnövekedett tűrést mutatnak Sclerotinia sclerotiorum iránt.
1. Példa
Két kódoló szekvencia készítése:
Előprotein: ezt a fenti cDNS-ből nyerjük HindlII-mal végzett emésztéssel (a 66. helyzetben). A kapott tapadós véget Klenow polimerázzal végzett kezeléssel tompává tesszük. Ezt a DNS-t azután Nhel-vel emésztjük (a 811. helyzetben).
A pUC 19 plazmidot (Yanisch-Perron és munkatársai, 1985) párhuzamosan emésztjük SacI alkalmazásával.
A kapott tapadós véget Klenow polimeráz alkalmazásával tompává tesszük. A plazmidot ezután Xbal-vel emésztjük (kompatibilis Nhel-vel).
Az előző módon készített cDNS fragmentumot és plazmidot ligáljuk. Az így kapott új plazmid elnevezése pRPA-oxo-01, térképét az 1. ábrán mutatjuk be.
B. Érett protein: ezt a fenti cDNS-ből nyerjük BstNI-vel végzett emésztés után (a 173. helyzetben). A kapott fragmentumot és a
5' 3'
ATGACCGACCCAGACCCTCTCC TACTGGCTGGGTCTGGGAGAGGT
3' 5' szekvenciájú linkért ligáljuk. Ez az érett protein N-terminális szekvenciájának módosításához vezet, amely TDPDPLQ-ról MTDPDPLQra változik.
Ezt a cDNS fragmentumot azután Nhel-vel emésztjük (a 811. helyzetben), hogy azután az előzőekben leírt módon elkészített pUC19 plazmiddal ligálhassuk. Az új, így kapott plazmid elnevezése pRPA-oxo-02, térképe az 1. ábrán látható.
2. Példa
A kiméra gének készítése
a. A promotert és a nos terminátort tartalmazó vektorok készítése;
- példa a kettős CaMV: ezt a vektort az alábbi módon előállított pRPA-BL-410 plazmidból nyerjük:
Kukorica RuBisCO SSU tranzit peptid/AroA gén fúzió:
A kukorica RuBisCO SSU gén tranzit peptidje egy 192 bázispár hosszúságú EcoRI-Sphl fragmentumból származik, amelyet a Lebrun és munkatársai (1987) által leírt kukorica RuBisCO SSU génnek megfelelő olyan cDNS-ből nyertünk, amely egy olyan Ncol hellyel bír, amely a transzláció iniciátor kodonjától a tranzit peptid hasítási helyének megfelelő Sphl helyig terjed.
A kukorica tranzit peptid és a bakteriális EPSPS gén közötti transzlációs fúziót az Sphl végnek bakteriofág T4 polimerázzal való kezelésével, és ennek pRPA-BL 104 AroA gén Klenow polimerázzal kezelt, EcoRI-vel vágott Ncol végével való ligálásával érjük el.
Kukorica RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO ssu érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén fúzió
Hasonló módon ligáljuk kukorica RuBisCO gén SSU cDNS-ének
228 bázispárból álló EcoRI-HindlI fragmentumát pRPA-BL 104 AroA génjének Klenow polimerázzal kezelt és EcoRI-vel vágott Ncol végével. Transzlációs fúziót nyerünk a kukorica RuBisCO SSU tranzit peptidje, a kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavja és a bakteriális EPSPS gén között.
Napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptid
A fragmentumot a Waksman és Freyssinet (1987) által izolált cDNS-ből nyerjük. Egy Sphl helyet hozunk létre Zoller és Smith (1984) eljárása szerint a tranzit peptid hasítási helyén. Az így nyert napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje egy 171 bázispárból álló EcoRI-Sphl fragmentum.
Napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén fúzió
A kukorica RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája gén-fúziót tartalmazó konstrukciót a 171 bázispárból álló EcoRI-Sphl fragmenttel hasítjuk, amely megfelel a fenti napraforgó RuBisCO gén kis alegysége (SSU) tranzit peptidjének. A kapott konstrukció az EcoRI-Sphl fragmentum egy szubsztitúcióját képezi, és ez egy transzlációs fúzió, a napraforgó RuBisCO SSU tranzit-peptidje/kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén fúzió.
Az EcoRI-Sall fragmentumot a 31 nos szekvenciát és a T-DNS jobboldali végét tartalmazó Sall-SstI fragmentummal ligáijuk. A kapott EcoRI-SstI fragmentumot, amely a napraforgó RuBisCO SSu tranzit peptidje/a kukorica SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén/3' nos/T-DNS jobboldali vége
- 9 egységet tartalmazza, behelyettesítjük az olyan EcoRI-SstI fragmentum helyére, amely a kettős CaMV promotert tartalmazó 150 A alfa 2 plazmid T-DNS-ének jobboldali végét tartalmazza. Azt a transzkripciós fúziót, amely a 150 A alfa 2 vektorban tartalmazza a kettős CaMV/napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén/3’ nos egységet, pRPA-BL 294-nak nevezzük.
Napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO SSU 22 aminosavból álló szekvenciája/kukorica RuBisCO tranzit peptidje/AroA gén fúzió:
A fenti konstrukciót NcoI-HindlII-mal hasítva szabaddá tesszük az AroA gént. Ezt azután egy olyan 1,5 kbp méretű NcolHindlII fragmentummal ligáljuk, amely a kukorica RuBisCO SSU tranzit peptid/AroA gén fúziót tartalmazza. A kapott konstrukció az Ncol-Hindlll fragmentum egy szubsztitúciója, és a napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/kukorica RuBisCO SSU tranzit peptidje/AroA gén egy transzlációs fúziója.
Az EcoRI-Sall fragmentumot a 3' nos szekvenciát és a T-DNS jobboldali végét tartalmazó Sall-SstI fragmentummal ligáljuk. A kapott EcoRI-SstI fragmentumot, amely tartalmazza a napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica RuBisCO gén SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/AroA gén/3’nos/T-DNS jobboldali vége fúziót, behelyettesítjük az olyan EcoRI-SstI fragmentum helyére, amely a kettős CaMV promotert tartalmazó 150 A alfa 2 plazmid T-DNS-ének jobboldali végét tartalmazza. A kettős CaMV/napraforgó RuBisCO SSU tranzit peptidje/kukorica • 4« »· ·« · • · · * · · · « · · ··· · • · « · • ·· ·· · · ·
RuBisCO gén SSU érett részének 22 aminosavból álló szekvenciája/kukorica RuBisCO SSU tranzit peptidje/AroA gén/3'nos 150 A alfa 2 vektorban lévő transzkripciós fúziójának elnevezése pRPA-BL 410. Ezt a plazmidot EcoRI és Sall-vel emésztjük, hogy eltávolítsuk az optimalizált tranzit peptid - érett EPSPS-t kódoló régió struktúrgént, a pRPABL-410 deléció után elnevezésű plazmidot nyerjük (lásd az
1. ábrán).
- SSUHa példa: Ezt a vektort a 0 337 899 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett pRPA-BL-207 plazmidból nyerjük, amelyet EcoRI-vel és HindlII-mal emésztünk a nitrilázt kódoló régió eltávolítására, így a pRPA-BL-207 deléció után elnevezésű plazmidot nyerjük (lásd az 1. ábrán).
b. Kiméra gének konstruálása pRPA-oxo-03: ezt pRPA-oxo-01 EcoRI-vei és Sall-vel történő emésztésével nyerjük. A kapott fragmentumot, amely az előproteint kódolja, ezután beépítjük az EcoRI és Sáli helyek közé, a kettős CaMV-tól a 3' vég irányába, és a nos terminátortól az 5' vég irányába.
pRPA-oxo-04: a pRPA-oxo-02 EcoRI-vel és Sall-val végzett emésztésével nyerjük. A kapott fragmentumot, amely az érett proteint kódolja, ezután beépítjük az EcoRI és Sáli helyek közé a kettős CamV-tól a 3' vég irányába, és a nos terminátortól az 5’ vég irányába.
pRPA-oxo-05: a pRPA-oxo-01 EcoRI-vel és HindlII-val történő emésztésével nyerjük. A kapott fragmentumot, amely az előproteint kódolja, ezután beépítjük az EcoRI és Hindin helyek közé, a kettős SSUHa-tól a 3' vég irányába, és a nos
V · • · · · · « ♦· ·· ·»·
- 11 terminátortól az 5' vég irányába.
pRPA-oxo-06: ezt pRPA-oxo-02-nek EcoRI-vel és HindlII-val történő emésztésével nyerjük. A kapott fragmentumot, amely az érett proteint kódolja, ezután beültetjük az EcoRI és Hindin helyek közé, az SSUHa promotertől és a nos terminátortól a 3' vég irányába.
1. Táblázat: A négy kiméra gén vázlatos bemutatása:
| Azonosítás | Promoter | Oxalát-oxidázt kódoló réaió | Terminátor |
| pRPA-OXO-03 | dCaMV | előprotein | nos |
| pRPA-oxo-04 | dCaMV | érett | nos |
| pRPA-oxo-05 | SSUHa | előprotein | nos |
| pRPA-oxo-06 | SSUHa | érett | nos |
3. Példa
Transzgénes repce előállítása
a. Transzformálás
Minden vektort, az előzőekben leirt módon, beviszünk a pTVK 291 kozmidot (Komari és munkatársai, 1986) hordozó nem-onkogén Agrobacterium tumefaciens EHA 101 törzsbe (Hood és munkatársai, 1987).
A Westar változatú repce transzformálására szolgáló módszer lényegében a Boulter és munkatársai (1990) által leírtakon alapszik, 2,5 x 109/ml (OD 600 nm = 1) baktériumkoncentráció alkalmazásával.
- 12 b. Regenerá1 á s
A regenerálási eljárás lényegében a Boulter és munkatársai (1990) által leírtakon alapszik. A növényeket De Block és munkatársai (1989) szerinti közegben gyökereztetjük, majd melegházban virágzó állapotig neveljük.
4. Példa
Repce Sclerotinia sclerotiorum iránti rezisztenciájának mérése
In vitro:
- Levél-lemezeken: a rezisztencia mérésére három levéllemez tömegének azt követő mérése szolgál, hogy ezeket 11 napon át hormonokat tartalmazó, 1 mmól/1 oxálsawal kiegészített Murashige és Skoog (MS) tápközegen tenyésztjük.
Ilyen körülmények mellett azt figyeltük meg, hogy a pRPAoxo-03, pRPA-oxo-04, pRPA-oxo-05 és pRPA-oxo-06 kiméra gének valamelyikével módosított repce alkalmazásakor a levél-lemez tömege lényegesen növekszik, míg módosítatlan repcéből származó levél-lemezek tömege stagnál vagy éppen csökken.
- Gyökér megnyúlás: a rezisztenciát a gyökér megnyúlásával in vitro is mérjük 2 napon át 5 mmól/1 oxálsawal kiegészített vízben való tenyésztést követően. Megfigyelésünk szerint ebben az esetben a pRPA-oxo-03 és pRPA-oxo-04 kiméra gének valamelyikével módosított repce növény gyökerei növekedésre képesek, hosszúságuk nő, míg a módosítatlan repce gyökerei ilyen körülmények mellett nem növekednek.
In vivő:
Az in vivő rezisztenciát melegházban vizsgáljuk a regene·· »
- 13 rálódás után, az első virágok megjelenése állapotában lévő repce növények befertőzésével, amelyet úgy végzünk, hogy vagy S. sclerotiorum spórákat viszünk a szirmokra, a levelek fertőződése ezáltal természetes módon, a virágok elhullásával következik be, vagy micéliumot vagy micéliummal átitatott virágszirmokat közvetlenül ráhelyezünk a levelekre. A pRPA-oxo-03, pRPA-oxo-04, pRPA-oxo-05 és pRPA-oxo-06 kiméra gének valamelyikével módosított növények ellenállnak a gomba kifejlődésének, nem mutatnak semmiféle rothadási tünetet, amely a sclerotiniózisra jellemző, míg a módosítatlan növények a Sclerotinia sclerotiorum kifejlődésére jellemző gyors rothadást mutatnak.
A mellékelt ábrán a négy kiméra gén előállítási eljárását mutatjuk be a két kódoló génből, pRPA-oxo-01 és pRPA-oxo-02H, Hind III; B, BstN; N, Nhe I; E, Eco Rí; Se, Sac I; S, Sál I és X, Xba I.
Claims (8)
- Szabadalmi igénypontok1. Oxalát-oxidázt kódoló DNS szekvencia, amely alkalmas növények Sclerotinia sp. által okozott megbetegedései elleni rezisztencia létrehozására.
- 2. Egy oxalát-oxidáz fehérje, amely növények Sclerotinia sp. okozta betegségei elleni rezisztencia létrehozására használható.
- 3. Kiméra gén, amely kódoló szekvenciaként egy az 1. igénypont szerinti DNS szekvenciát tartalmaz.
- 4. Vektor növények transzformálására, amely a 3. igénypont szerinti kiméra gént tartalmazza.
- 5. Transzformált növényi sejt, amely a 4. igénypont szerinti vektort tartalmazza.
- 6. Transzformált növény, amelyet az 5. igénypont szerinti sejtből nyerünk.
- 7. A 6. igénypont szerinti növény, azzal jellemezve, hogy a növény kétszikű.
- 8. A 7. igénypont szerinti növény, azzal jellemezve, hogy a növény repce.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9102874A FR2673644A1 (fr) | 1991-03-05 | 1991-03-05 | Sequence adn codant pour une oxalate oxydase et plantes transformees contenant cette sequence et resistantes au sclerotinia. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9203473D0 HU9203473D0 (en) | 1993-01-28 |
| HUT65677A true HUT65677A (en) | 1994-07-28 |
Family
ID=9410559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9203473A HUT65677A (en) | 1991-03-05 | 1992-03-04 | Production of plants resistant to attacks of sclerotinia sclerotiorum |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0531498B1 (hu) |
| JP (1) | JPH05506582A (hu) |
| KR (1) | KR930700665A (hu) |
| CN (1) | CN1051576C (hu) |
| AT (1) | ATE338129T1 (hu) |
| AU (1) | AU660976B2 (hu) |
| BG (1) | BG61275B1 (hu) |
| BR (1) | BR9204788A (hu) |
| CA (1) | CA2082042C (hu) |
| CZ (1) | CZ289623B6 (hu) |
| DE (1) | DE69233653T2 (hu) |
| DK (1) | DK0531498T3 (hu) |
| EG (1) | EG21465A (hu) |
| ES (1) | ES2273329T3 (hu) |
| FR (1) | FR2673644A1 (hu) |
| HU (1) | HUT65677A (hu) |
| IE (1) | IE920691A1 (hu) |
| IL (1) | IL101117A (hu) |
| MX (1) | MX9200917A (hu) |
| NZ (1) | NZ241829A (hu) |
| PT (1) | PT100203B (hu) |
| UA (1) | UA43308C2 (hu) |
| WO (1) | WO1992015685A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA921647B (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0636181T3 (da) * | 1991-02-25 | 2000-12-27 | Zeneca Ltd | Anvendelse af et gen kodende for oxalatoxidase til transformation af planter |
| EP0673416A1 (en) * | 1992-11-30 | 1995-09-27 | Zeneca Limited | Oxalate decarboxylase |
| CA2151146C (en) * | 1992-12-07 | 2005-06-28 | Annie Pignard | Use of a dna sequence coding for an oxalic acid degrading protein as a selection gene |
| AUPM379294A0 (en) * | 1994-02-10 | 1994-03-03 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Expression of the glucose oxidase gene in transgenic organisms |
| ZA986308B (en) * | 1997-07-18 | 1999-11-24 | Pioneer Hi Bred Int | The induction of stress-related factors in plants. |
| US6166291A (en) | 1997-07-18 | 2000-12-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Production of pathogen resistant plants |
| AU8919098A (en) * | 1997-08-26 | 1999-03-16 | North Carolina State University | Fumonosin resistance |
| FR2844142B1 (fr) | 2002-09-11 | 2007-08-17 | Bayer Cropscience Sa | Plantes transformees a biosynthese de prenylquinones amelioree |
| FR2848570B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-04-01 | Bayer Cropscience Sa | Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant |
| CN100383239C (zh) * | 2004-07-21 | 2008-04-23 | 华南农业大学 | 从小麦麸皮中提取草酸氧化酶的方法 |
| AR074941A1 (es) | 2009-01-07 | 2011-02-23 | Bayer Cropscience Sa | Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion |
| US20110191903A1 (en) | 2009-12-31 | 2011-08-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Engineering plant resistance to diseases caused by pathogens |
| CN103060350A (zh) * | 2011-10-21 | 2013-04-24 | 华中农业大学 | 核盘菌草酸脱羧酶基因SsOXDC2及其在大豆抗病改良中的应用 |
| CN103911384B (zh) * | 2014-01-21 | 2016-05-25 | 江苏大学 | 一种控制油菜菌核病的基因及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988008450A1 (en) * | 1987-05-01 | 1988-11-03 | Birdwell Finlayson | Gene therapy for metabolite disorders |
| DK0636181T3 (da) * | 1991-02-25 | 2000-12-27 | Zeneca Ltd | Anvendelse af et gen kodende for oxalatoxidase til transformation af planter |
-
1991
- 1991-03-05 FR FR9102874A patent/FR2673644A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-02-28 CN CN92101989A patent/CN1051576C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-02 IL IL10111792A patent/IL101117A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-03-03 MX MX9200917A patent/MX9200917A/es unknown
- 1992-03-03 EG EG12792A patent/EG21465A/xx active
- 1992-03-04 IE IE069192A patent/IE920691A1/en unknown
- 1992-03-04 CA CA002082042A patent/CA2082042C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 JP JP92507499A patent/JPH05506582A/ja active Pending
- 1992-03-04 AU AU16820/92A patent/AU660976B2/en not_active Expired
- 1992-03-04 ES ES92908073T patent/ES2273329T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 CZ CS19923369A patent/CZ289623B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 AT AT92908073T patent/ATE338129T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 DK DK92908073T patent/DK0531498T3/da active
- 1992-03-04 KR KR1019920702749A patent/KR930700665A/ko not_active Ceased
- 1992-03-04 UA UA93004232A patent/UA43308C2/uk unknown
- 1992-03-04 BR BR9204788A patent/BR9204788A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-03-04 DE DE69233653T patent/DE69233653T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-04 NZ NZ241829A patent/NZ241829A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-03-04 HU HU9203473A patent/HUT65677A/hu unknown
- 1992-03-04 WO PCT/FR1992/000195 patent/WO1992015685A1/fr active IP Right Grant
- 1992-03-04 EP EP92908073A patent/EP0531498B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-03-05 ZA ZA921647A patent/ZA921647B/xx unknown
- 1992-03-05 PT PT100203A patent/PT100203B/pt not_active IP Right Cessation
- 1992-11-03 BG BG97042A patent/BG61275B1/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05506582A (ja) | 1993-09-30 |
| UA43308C2 (uk) | 2001-12-17 |
| FR2673644B1 (hu) | 1994-12-02 |
| DE69233653T2 (de) | 2007-10-04 |
| PT100203B (pt) | 1999-06-30 |
| MX9200917A (es) | 1992-11-01 |
| KR930700665A (ko) | 1993-03-15 |
| IE920691A1 (en) | 1992-09-09 |
| EP0531498A1 (fr) | 1993-03-17 |
| IL101117A0 (en) | 1992-11-15 |
| EG21465A (en) | 2001-11-28 |
| CZ289623B6 (cs) | 2002-03-13 |
| BG61275B1 (en) | 1997-04-30 |
| BR9204788A (pt) | 1993-07-27 |
| AU1682092A (en) | 1992-10-06 |
| CA2082042C (en) | 2007-05-29 |
| NZ241829A (en) | 1994-04-27 |
| CN1051576C (zh) | 2000-04-19 |
| CN1065683A (zh) | 1992-10-28 |
| IL101117A (en) | 2004-09-27 |
| HU9203473D0 (en) | 1993-01-28 |
| WO1992015685A1 (fr) | 1992-09-17 |
| DK0531498T3 (da) | 2007-01-02 |
| ATE338129T1 (de) | 2006-09-15 |
| EP0531498B1 (fr) | 2006-08-30 |
| CZ336992A3 (en) | 1994-01-19 |
| ES2273329T3 (es) | 2007-05-01 |
| CA2082042A1 (en) | 1992-09-06 |
| FR2673644A1 (fr) | 1992-09-11 |
| PT100203A (pt) | 1993-07-30 |
| DE69233653D1 (de) | 2006-10-12 |
| ZA921647B (en) | 1992-11-25 |
| AU660976B2 (en) | 1995-07-13 |
| BG97042A (bg) | 1993-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5866778A (en) | Newly characterized oxalate and uses therefor | |
| BG100619A (bg) | Метод за контролиране на патогени по растенията | |
| HUT65677A (en) | Production of plants resistant to attacks of sclerotinia sclerotiorum | |
| US20100269225A1 (en) | Tissue specific promoters | |
| HU219268B (en) | Transgenic organism resistante to fungi | |
| AU677976B2 (en) | Oxalate decarboxylase | |
| EP0270248B1 (en) | DNA useful for the transport of foreign proteins to the plant cell wall | |
| US5658773A (en) | Tomato acid invertase gene | |
| US6489541B1 (en) | Genetic control of plant hormone levels and plant growth | |
| US6229065B1 (en) | Production of plants resistant to attacks by Sclerotinia sclerotiorum by the introduction of a gene encoding an oxalate oxidase | |
| CA2051240A1 (en) | Histidinol dehydrogenase protein, dna and muteins and transgenic plants thereof | |
| US7557264B2 (en) | Gossypium hirsutum tissue-specific promoters and their use | |
| Araki et al. | Ethylene formation and phenotypic analysis of transgenic tobacco plants expressing a bacterial ethylene-forming enzyme | |
| KR20040003855A (ko) | 고추 한별 품종 (Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ Ｌ.ｃｖ. Ｈａｎｂｙｕｌ)으로부터 유래한리피드트랜스퍼단백질 ＣＡＬＴＰ Ⅰ·ＣＡＬＴＰⅡ·ＣＡＬＴＰⅢ을 코딩하는 유전자 및 마커로서의 활용 | |
| AU769546B2 (en) | Method for obtaining transgenic plants expressing a protein with activity producing hydrogen peroxide by transformation by Agrobacterium rhizogenes | |
| KR940001266B1 (ko) | 내빙 단백질이 발현되는 식물체의 제조방법 | |
| JP2003250370A (ja) | 病害抵抗性イネ科植物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |