HUT60606A - Enzyme treatment of silage fodder - Google Patents
Enzyme treatment of silage fodder Download PDFInfo
- Publication number
- HUT60606A HUT60606A HU92960A HU96092A HUT60606A HU T60606 A HUT60606 A HU T60606A HU 92960 A HU92960 A HU 92960A HU 96092 A HU96092 A HU 96092A HU T60606 A HUT60606 A HU T60606A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- silage
- activity
- endo
- xylanase
- endoxylanase
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT OF FLOUR OR DOUGH FOR BAKING, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS
- A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
- A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
- A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
- A21D8/042—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01032—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1-3-beta-xylanase
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Treatment Of Sludge (AREA)
- Paper (AREA)
- Secondary Cells (AREA)
- Professional, Industrial, Or Sporting Protective Garments (AREA)
- Auxiliary Devices For And Details Of Packaging Control (AREA)
- Earth Drilling (AREA)
Description
A bejelentés napja: 1991. 07. 24.
Elsőbbsége: 1990. 07. 24. (90202020.5) EURÓPA
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/NL91/00136
A nemzetközi közzététel száma: WO 92/01389
A találmány a mezőgazdaság területére vonatkozik.
Részletesebben kifejtve, a találmány a szilázstakarmány enzimes kezelésének a javítására vonatkozik.
- 2 A szilázs-technológiában végrehajtott fejlesztések következtében, a természetes és mesterséges szárítás mellett, a silózás vált a legszélesebben alkalmazott technológiává a takarmány tartósítására. Úgy becsülik, hogy Nyugat-Európában a télire tartósított takarmány 60 %-át (körülbelül 77 millió tonna szárazanyag) silózzák. Az Egyesült Államokban körülbelül évi 80 millió tonnát (szárazanyag) silóznak. A silózást széles körben alkalmazzák Kelet-Európábán és Kanadában is. Azonban az erjedés (főként vajsavas erjedés) következtében a keletkező csurgaléklé és a tápanyag veszteségek, valamint az aerob bomlás egyre növekvő problémává vált azáltal, hogy megnőtt az igény a nagyobb hatékonyságú állattenyésztés iránt. Ezek a problémák gyakran olyan faktoroktól függenek, mint a termény típusa, az éghajlati viszonyok és a rendelkezésre álló technológia. Néhány ország tejgazdálkodásában legújabban bevezetett termelési korlátozások és a környezetvédelmi törvények, amelyek közvetve korlátozzák az állattenyésztéshez használt tápanyag típusát és mennyiségét, aláhúzzák annak szükségességét, hogy nagyon jó minőségű szilázstakarmánnyal kell etetni [_ S. F. Spoelstra, Forage Conservation Towards 2000; Proceedings of the EGF Conference, Braunschweig, Németország (1991)_/.
A fűfélék (ilyenek például a perjék stb.), a gabonafélék (például a kukorica, cirok, búza stb.) és a pillangósok (például a lucerna, lóhere stb.) azok a termények, amelyeket elsődlegesen silóznak takarmány céljára.
- 3 A leveles répafejet és a cukorrépa pépet szintén felhasználják, de viszonylag kis mennyiségben.
A kukorica jól silózódik, de érzékeny az aerob bomlásra. A fűféléket— főként az angol perjét (perennial rye-grass)— gyakran erősen trágyázzák, és ennek eredményeként kevés vízoldható szénhidrátot tartalmaznak a pufferkapacitás biztosításához, s így silózás után érzékennyé válnak a vajsavas erjedésre. A vajsavas erjedés szárazanyag veszteséget okoz a szilázstakarmányban, tehát csökkenti tápértékét, s ennek következtében az állattartás hatékonyságát.
A nem kívánt vajsavas erjedés elkerülése érdekében a füvet rendszerint fonnyasztják a réten, amikoris kg-onként átlag 500 g szárazanyag keletkezik. Egy más módszer szerint 350 g szárazanyag/kg tartalom alatt adalékanyagokat - például enzimeket - alkalmaznak.
Folyamatos kísérletek során erőfeszítések történtek annak tanulmányozására, hogy vajon a szilázs eltarthatóságát javítja-e és a szilázs felvételét és emészthetőségét fokozza-e a sejtfalat bontó enzimek, azaz a cellulázok és hemicellulázok adagolása.
A cellulázok és a hemicellulázok hatására vízoldható szénhidrátok szabadulnak fel a növényi sejtfal struktúrális poliszacharidjaiból, s e szénhidrátok a tejsav termelésben mint szubsztrátumok vesznek részt. A tejsav képződés a szilázstakarmányban jelenlévő tejsav baktériumok fermentatív tevékenységének a következménye. Valószínűleg ezek az enzimek felelősek a növényi sejtfalak biolítikus felhasításáért, melynek következtében további víz- 4 oldható szénhidrátok és más anyagok szabadulnak fel, amelyeket a tej sav baktériumok felhasználnak. A szilázs tárolása folyamán a növényi sejtfalak előemésztésének ezenkívül az lesz a következménye, hogy a szilázs a bendőben gyorsabban lebomlik, s ez fokozza emészthetőségét; továbbá, hogy növeli a felszabadított szénhidrátok mennyiségét, tehát az így kezelt szilázstakarmányt fogyasztó állat számára nagyobb tápértékét biztosít.
A szilázsban jelenlévő tej sav baktériumok által termelt tejsav (és ecetsav) szintén felelős a szilázs pH-jának csökkenéséért. Az alacsony pH — a pH általában körülbelül 4,5-ig csökken, de körülbelül 4 is lehet — kedvezőtlen környezetet teremt az élesztők és számos más nem kívánt mikróba— ilyenek a vaj sav termelő mikroorganizmusok — növekedése számára. Ez a környezet tartósítja a szilázst, és fenntartja tápanyagtartalmát.
A tej sav baktériumok ezenkívül mint probiotikumok, jótékonyan növelik a szilázst fogyasztó állat bélflóráját.
A legtöbb — hacsak nem az összes — olyan vizsgált enzim-készítmény, amely szilázsban való felhasználás céljára készül, gomba eredetű, meglehetősen nyers fermentációs termék. Ezek az enzim készítmények több különböző enzim aktivitást tartalmaznak.
Például a DD-278359 számú németországi szabadalmi bejelentés (nyilvánosságra hozva 1990. május 2-án) tárgya egy celluláz készítmény, amelyet Penicillium verruculosum mutáns törzsből állítottak elő, cellulóz és hemicellulóz részleges vagy teljes hidrolízisére olyan ipari eljárásokbán való felhasználás céljára, mint — többek között — a szilázstakarmány előállítás. E celluláz készítményről azt állítják, hogy magas cellulolítikus aktivitású, mely béta-glükozidáz, xilanáz és amiláz aktivitással párosul. A WO 89/01970 közzétételi számú PCT szabadalmi bejelentés (nyilvánosságra hozva 1989. március 9-én) szilázstakarmány számára előállított probiotikus inokulumot ír le, amely a szilázstakarmányban lévő poliszacharidok és oligoszacharidok lebontására képes enzimet kódoló exogén DNS-sel transz formált tejsav baktériumokat tartalmaz, és így a baktérium magának állítja elő a vízoldható szénhidrát forrást.
A feltalálók — a találmány szerint — megállapították, hogy a takarmány silózáshoz használt enzim készítményekben lévő enzim aktivitások közül főként az endo-xilanáz felelős a vízoldható szénhidrátok felszabadításáért, és ez a tejsav baktériumok erjesztő tevékenységén keresztül a szilázstakarmány tartósítását és tápértékének minőségi javulását eredményezi. Ezenkívül megállapították, hogy ha a silózandó takarmányt megfelelő mennyiségű endoxilanázzal egészítik ki más enzim aktivitások jelenlétében vagy távollétében, úgy ez az ilyen módon kezelt szilázstakarmánynak optimális eltarthatóságot és tápértékének optimális minőséget biztosít. Megfigyelték, hogy az állatok nagyobb mennyiséget fogyasztanak az így tartósított szilázsból, mint a megromlott szilázsból. Mindezen faktorok az állattenyésztés hatékonyságát fokozzák.
A találmány tehát olyan szilázs készítményt ismertet, amelyet annyi endo-xilanáz aktivitással egészítünk ki, amenynyi hatékonyan szabadítja fel a vízoldható szénhidrátokat a • · · · · · • ·· · · · . · · · · · ·· ·· ·· ·* besilózott növényi sejt anyagból (takarmányból), és így fokozza a tejsavbaktériumok tejsav és ecetsav termelését, melynek következtében javul a szilázstakarmány eltarthatósága és tápértékének minősége. Az endo-xilanázt előnyösen lényegében más enzimaktivitástól mentes formában adagoljuk.
Minthogy a silózandó takarmány nem tartalmaz mindig elégséges mennyiséget tej sav baktériumokból a célravezető silózáshoz, a találmányban olyan szilázs összetételeket ismertetünk, amelyek még tejsav baktérium inokulumot is tartalmaznak. Ezt a kiegészítést olyan mennyiségben alkalmazzuk, amely elégséges ahhoz, hogy a szilázstakarmány tartósítását segítse, és mint probiotikum közreműködjék az ilyen módon kezelt szilázs készítményt fogyasztó állat bélflórájának javításában.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy eljárás a szilázstakarmány tartósítására. Az eljárás abból áll, hogy a szilázst olyan mennyiségben egészítjük ki endo-xilanáz aktivitással, amennyi hatékonyan növeli meg a szilázsban jelenlévő vízoldható szénhidrátok mennyiségét. A keletkező szénhidrátokat a tej sav baktériumok tej sav és ecetsav termelésükhöz használják fel.
Vonatkozik a találmány a szilázs tápértékének javítását szolgáló eljárásra, amelyben a szilázst annyi endo-xilanáz aktivitással egészítjük ki, amennyi hatékonyan szabadítja fel a besilózott növényi sejt anyagból a vízoldható szénhidrátokat a szilázst elfogyasztó állat számára. A szilázsban jelenlévő endo-xilanáz magának az állatnak is fontos enzim kiegészítést jelent.
- 7 A találmány tárgyát képezi egy további eljárás is, amellyel állatokban a szilázstakarmány in vivő (szárazanyag) emészthetőségét javítjuk. Eszerint az állat étrendje legalább részben szilázstakarmányból áll, amelyet annyi endo-xilanáz aktivitással egészítettünk ki, hogy az legalább részben elbontsa— tehát előeméssze — a növényi sejtfalat.
Az ábra rövid ismertetése
1. ábra:
Aspergillus niger DS16813 (CBS 323.90) törzs tenyészlé szűrletének HPLC elúciós képe. Ezt a törzset később újból osztályozták, tekintettel arra, hogy valószínűbb, hogy az Aspergillus tubigensis fajhoz tartozik.
A jelen találmány szerint tehát olyan mennyiségű endo-xilanáz aktivitással egészítjük ki a silózandó takarmányt, hogy az hatékony legyen a szilázs előállításában, azaz a szilázsban jelentősen növelje a vízoldható szénhidrátok mennyiségét a tejsav baktériumok számára vagy táplálékul szolgáljon a szilázst fogyasztó állat számára; hogy javítsa a minőséget, például úgy, hogy a (probiotikus) tejsav baktériumok tejsav és ecetsav termelő fermentatív tevékenysége (a tejsav nagyobb mennyiségben termelődik az ecetsavhoz képest) növekedjék, melynek következtében csökken a pH. Az alacsony pH arra szolgál, hogy a szilázs készítményt tartósítsa, és tápértékét biztosítsa. Mindezen faktorok hozzájárulnak az állattenyésztés hatékonyságának a javításához. E találmány bejelentéséig nem volt ismert, hogy speciálisan az endo-xilanázok azok, amelyeknek igen jelentős a szerepük a javított szilázstakarmányok termelésében. Az sem volt ismeretes,
- 8 hogy lényegében más enzim aktivitásoktól (főként más sejtfal bontó enzimaktivitásoktól) mentes endo-xilanáz adagolása a silózandó takarmányhoz olyan szilázstakarmányt eredményez, amely nemcsak jobban tartósított, hanem jobb tápértékkel is rendelkezik.
A jelen találmány szerinti szilázs készítmények előnyösen több mint 50.000 egység endo-xilanáz aktivitást tartalmaznak 1 kg (betárolt tömeg) takarmányra számítva. Az endo-xilanáz optimális pH tartománya 3,5-6,0 közé esik. Ez biztosítja, hogy a takarmány silózásánál uralkodó savanyú pH viszonyok mellett maximális enzim hatékonyságot érjünk el. Mint fent megjegyeztük, előnyös, ha az endo-xilanázt olyan formában adagoljuk, amely általában lényegében más enzim aktivitásokat és főként más sejtfal bontó enzim aktivitásokat nem tartalmaz.
A silózandó takarmány kiegészítése más enzim aktivitásokat lényegében nem tartalmazó endo-xilanáz aktivitással, mint költségre ható tényező, kereskedelmi szempontból is előnyös az olyan enzim keverékekkel szemben, amelyekben a másodlagos enzim aktivitásokat gyakran kell kiegészíteni a kívánt hatás elérése érdekében. A találmány szövegében a más enzimektől lényegében mentes kifejezés azt jelenti, hogy az enzim készítményben lévő össz-protein nagy része (azaz a tömeg legalább 50 %-a, előnyösen a tömeg 80 %-a) endo-xilanáz.
Endo-xilanáz aktivitás nagymennyiségben való előállítását teszi lehetővé a rekombináns DNS technológia használata, lásd például a 90202020.5 számú európai sza-
badalmi bejelentést (benyújtva 1990. július 24-én), mely ebben a leírásban referenciaként szerepel. Egy másik lehetőség szerint, az endo-xilanáz termelést úgy is növelhetjük, hogy az endo-xilanáz termelő mikroorganizmus fermentációs feltételeit, például xilánt tartalmazó indukciós közeg használatával szabályozzuk .
A találmány szerinti felhasználáshoz az endo-xilanázokat előnyösen fonalas gombákból állítjuk elő, még előnyösebben az Aspergillus, Disporotrichum, Penicillium, Neurospora, Fusarium és Trichoderma nemzetségekből kiválasztott fonalas gombából és legelőnyösebben az Aspergillus niger, Aspergillus awamori, Aspergillus aculeatus, Aspergillus tubigensis, Disporotrichum dimorphosporum és Trichoderma reesei fajokból kiválasztott fonalas gombából.
A jelen találmány szerint használatos endo-xilanáz azonosítására szolgáló vizsgáló módszerek nem lényegesek a találmány szempontjából. Ilyen például a spot teszt. Eszerint a módszer szerint az endo-xilanáz termelésre indukált (például tönkönybúza xilánnal) mikroorganizmus tenyésztésének szűrletét endo-xilanáz jelenlétére vizsgálhatjuk. A kioldott frakciókból egy-egy cseppet citrát-foszfát puffért (lásd alább az 1. példát) és tönkönybúza xilánt tartalmazó agar filmre cseppentünk. A filmet ezután inkubáljuk. Ha van endo-xilanáz aktivitás, az agar filmen lévő egyes cseppek helye feltisztul.
Az endo-xilanáz aktivitást úgy is kimutathatjuk, hogy egy xilánt tartalmazó oldatot összehozunk egy olyan enzim oldattal, amely gyaníthatóan endo-xilanáz aktivitást tar···· • ·» · · · .
- 10 talmaz, majd spektrofotometriásán mérjük a redukáló cukrokat a T. D. Leathers és munkatársai által leírt /_ Biotechnol. Bioeng. Symp., 14, 225 (1984)_/ módszerrel.
Az endo-xilanáz aktivitás egységét a következőképpen határoztuk meg: egy egység aktivitás alatt a xilóz ekvivalensek azon mennyisége (yumól) értendő, melyet 1 mg protein 1 perc alatt szabadít fel 39 °C-on pH = 3,5 mellett. A protein meghatározást Μ. M. Bradford _/ Anal. Biochem. , 7 2, 248 (1976)_/ módszerével végeztük. Protein standardként bovin immun-gamma-globulint (BIgG) használtunk.
Mihelyt azonosítunk egy endo-xilanáz termelő mikroorganizmust, fermentációját olyan körülmények mellett végezhetjük, melyek elősegítik az endo-xilanáz termelését, majd a kívánt enzim aktivitást a termelő mikroorganizmus tenyészlevéből izolálhatjuk, és kívánt esetben a találmány szempontjából nem lényeges, hagyományos módon tisztíthatjuk. Például affinitás- és/vagy ioncserélő-kromatográfiás technikák előnyösen használhatók az endo-xilanáz tenyészléből való preparatív tisztítására.
A jelen találmány egy másik megvalósítási formája célul tűzi ki a kereskedelmi enzim készítmények kiegészítését endo-xilanáz aktivitással. Előnyös, ha annyi endo-xilanáz aktivitást adagolunk, mellyel a végső keverékben a teljes endo-xilanáz aktivitást több mint 50.000 egység/kg betárolt takarmány tömegre állítjuk be.
A találmány egy további kivitelezése szerint olyan szilázs készítményeket állítunk elő, amelyek még tejsav baktérium inokulumot is tartalmaznak kiegészítés gyanánt, • · · ·
- 11 a szilázs tartósításának elősegítésére. A tejsav baktériumokat előnyösen a Lactobacillus, Enterococcus, Lactococcus, Pediococcus és Leuconostoc nemzetségekből álló csoportból választjuk ki. A találmány szerint legelőnyösebb tejsav baktériumokat a következő csoportból választjuk ki: Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus fermentum és Lactobacillus lactis.
A találmány szeritn a szilázstakarmány endo-xilanázzal való kiegészítése a gyakorlott szakemberek által ismert minden silózható növényi anyagnál - ilyenek a füvek, gabonafélék és pillangósok - alkalmazható. A takarmánynak mindamellett rendes körülmények között 1 kg (friss, betárolt tömeg) takarmányra számítva 350 g alatt lesz a szárazanyag tartalma, s így az enzim szabadon hozzáfér a növényi sejt anyaghoz.
Az alábbi példák közreadásával teljes ismertetést és leírást adunk a szakterületen jártas szakemberek számára arról, hogy a találmányt hogyan alkalmazzák és használják. A feltalálók e példákkal nem óhajtják korlátozni találmányuk oltalmi körét. Ami a megadott számokat illeti (például: mennyiség, hőmérséklet, pH stb.) törekedtünk a pontosságra, de bizonyos kísérleti hibákkal és eltérésekkel számolni kell. Ha másként nem jeleztük, a hőmérsékletet Celsius fokban adtuk meg. A nyomás atmoszferikus vagy ahhoz közeli.
1. példa:
Aspergillus tubigensis endo-xilanáz tisztítása
Aspergillus niger DS16813 törzset J_ CBS 323.90; letétbe helyezve a Centraal Bureau voor Schimmelcultures • · · intézményben (Baarn, Hollandia) 1990. július 20-án - a törzset később újra osztályozták, tekintve, hogy inkább az A. tubigensis fajhoz tartozik; Kusters-van Someren et al., Curr. Génét., 19, 21 (1991)_/ tenyésztünk olyan táptalajban, mely literenként 30 g tönkönybúza xilánt (SIGMA), 7,5 g ammónium-nitrátot, 0,5 g magnézium-szulfátot, 15 g kálium-dihidrogén-foszfátot és 0,5 g élesztő kivonatot (pH = 6,0) tartalmaz. A tenyészet szűrletét körülbleül 35 ml-re koncentráljuk, s e mennyiséget ezután Diaflo PM 10 szűrőn, 50 ml-es Amicon készülékben ultraszűrjük.
A felülúszót ezután 10 ml-re koncentráljuk, és a viszszamaradt anyagot kétszer mossuk 25 ml 25 mM trisz.HCl pufferrel (pH = 7,0). Mosás után a kapott mennyiséget 25 ml-re egé szítjük ki.
Ezt az anyagot 1 ml-es mennyiségekben Syn Chropak AX 300 oszlopra (10 x 250 mm) visszük fel, ahonnan a következő HPLC előírás szerint eluáljuk:
elúciós sebesség ml/perc elúciós puffer A: 25 ml trisz.HCl, pH = 7,0, elúciós puffer B: 25 ml trisz.HCl, pH = 7,0 + 1 M
| nátrium-klorid, | ||
| elúciós grádiens: idő (perc) | %A | %B |
| 0 | 99 | 1 |
| 12 | 97 | 3 |
| 30 | 80 | 20 |
| 50 | 50 | 50 |
| 70 | 0 | 100 |
| 90 | 0 | 100 |
| 95 | 99 | 1 |
• · · ·
- 13 A frakciókat 1 ml-enként szedjük. A leoldott proteint folyamatosan, a 280 nm-en leolvasott UV abszorpcióval mérjük. Az elúciós profilt az 1. ábrán mutatjuk be.
A frakciókat endo-xilanáz jelenlétére spot teszt segítségével vizsgáljuk. A spot tesztet a következőképpen végezzük: 12 ml 0,5 % tönkönybúza xilánt (Sigma) tartalmazó citrát-foszfát puffért (úgy készítjük, hogy 900 ml 0,2 M dinátrium-hidrogén-foszfát-oldatot és 125 ml 0,5 M citromsav oldatot elegyítünk, majd az oldat pH-ját 5,6-ra állítjuk be vagy 0,5 M citromsav oldattal, vagy 0,1 M dinátrium-hidrogén-foszfát-oldattal adunk 180 mg agárhoz (Difco), s a keveréket 100 °C-ra melegítjük, hogy az agar oldódjék. Az agaros keveréket 60 °C-ra hűtjük, és ezután egyenletesen agaróz gél filmre önjtük. Az eluált frakciókból egy-egy cseppet cseppentünk a filmre, és 30 percig 30 °C-on inkubáljuk. Ha endo-xilanáz aktivitás van jelen, akkor az agar filmen a cseppek helye tiszta lesz.
A leszedett frakciókban az ossz xilanáz aktivitás menynyiségi meghatározását úgy végezzük, hogy mérjük egy előre meghatározott időtartam alatt a termelt redukáló cukrok menynyiségét a Leathers és munkatársai (1984) által leírt mikroassay segítségével, szubsztrátumként 50 mM nátrium-acetátban (pH = 5,0) tönkönybúza xilán használatával. Az aktivitás egységét szintén Leathers (lásd fent) határozta meg.
A kioldott frakciókban az endo-xilanáz aktivitást Poutanen és Puls (1988) módszerével határoztuk meg, szubsztrátumként p-nitro-fenil-B-D-xilopiranozid (0,3 mM; Sigma) használatával, pH = 5,0 és 30 °C mellett.
A spot teszttel kimutattuk, hogy a B, F és K csúcsoknak (lásd az 1. ábrát) megfelelő eluált frakciók endo-xilanáz aktivitást tartalmaznak. Az ossz xilanáz vizsgálat a B, F, H és K csúcsoknak megfelelő kioldott frakciókban mutatott ki aktivitást. A B és H csúcsoknak megfelelő frakciókban exo-xilanáz aktivitást mutatott ki a vizsgálat.
Az F csúcs (XYL2 protein) és a K csúcs (XYL A protein) kioldott frakcióit tovább tisztítottuk ismételt ioncserélő kromatográfiával.
2. példa:
Angol perjét (perennial English rye-grass) kaszálunk, 24 óra hosszat szárítjuk, míg egy körülbelül 25 %-os szárazanyag tartalmat el nem érünk. 1-2 cm-es szálakra vágjuk, és 1 literes laboratóriumi silókban besilózzuk, majd analízis előtt 3 hónapig tároljuk a környezet hőmérsékletén.
A silózott fűhöz Cellulase ABG-7 enzim készítményt adunk 0,2 g protein/kg friss fű-tömeg koncentrációban /~egyenértékű 3200 egység endo-xilanáz aktivitás/kg takarmánnyal; a protein tartalmat Μ. M. Bradford (lásd fent) módszerével határoztuk meg_/. A Cellulase ABG-7 kereskedelmi enzim készítmény; kapható MAXAZYM CL-2000 néven (IBIS N.V. , Rijswijk, Hollandia). Az enzimet a Trichoderma reesei termeli. E termék enzim aktivitásait az 1. táblázatban foglaljuk össze.
• · « · · · ····· ···· «.· · · · · ·
- 15 Cellulase ABG-7
Aktivitás
1. táblázat észítmény enzimatikus aktivitásai
Mért termék Specifikus aktivitás /Umól/perc/mg protein
CMC-áz
Aviceláz
Endo-xilanáz
Exo-xilanáz
Exo-arabináz Acetil-észteráz Poli-galakturoná
Glukuronidáz c^-amiláz
A szilázs glükóz ekvivalens0,79 glükóz ekvivalensek0,11 xilóz ekvivalensek16,0 p-nitro-fenol0,48 p-nitro-fenol0,51 p-nitro-fenol0,16 galaktóz ekvivalensek3,56 p-nitro-fenol0,003 glükóz0,25 kísérlet eredményeit a 2. táblázatban mutatjuk be.
- 16 2. táblázat
A fű, a kontroll szilázs, valamint — Cellulase ABG-7 készítménnyel való kezelés után — az enzimmel kezelt szilázs átlagos (N=3) összetétele
SZILÁZS
FŰ Kontroll Cellulase ABG-7
| Szárazanyag (SZA) | (g/kg) | 273 | 269 | 259 | ||
| Hamu | (g/kg | SZA) | 124 | 124 | 136 | & |
| Tejsav | (g/kg | SZA) | - | 45,5 | 59,4 | * |
| Etanol | (g/kg | SZA) | - | 7,33 | 19,1 | |
| Ecetsav | (g/kg | SZA) | - | 46,9 | 82,8 | * |
| Nyers rost | (g/kg | SZA) | 258 | 262 | 194 | |
| Neutrális detergens rost (DNF) | (g/kg | SZA) | 523 | 446 | 351 | |
| Savanyú detergens rost (ADF) | (g/kg | SZA) | 279 | 281 | 204 | * |
| Savanyú detergens lignin (ADL) | (g/kg | SZA) | 17,5 | 15,9 | 18,5 | * |
| Tömegveszteség | (g/kg | SZA) | - | 49,9 | 76,3 | |
| NH^-N/össz N | (össz-Ntömeg%) | — | 5,42 | 4,72 |
Statisztikusan eltér a kontrolitól. P-<0,05 (Student T-teszt)
NDF = Neutral Detergent Fiber
ADF = Acid Detergent Fiber
ADL = Acid Detergent Lignin
A Cellulase ABG-7 a sejtfal alkotórészének nagy részét fermentálható (erjeszthető) szénhidrátokká hidrolizálja. Ez a körülmény a szilázs minőségének javulását eredményezi, melyet a vízoldható szénhidrátok felszabadulása jellemez. Ennek bizonyítéka a megnövekedett tejsav koncentráció és az alacsonyabb nyersrost tartalom, az alacsonyabb NDF tartalom, az alacsonyabb ADF tartalom, valamint az alacsonyabb pH és ammónia érték a kontrollal való összehasonlításban.
3. példa:
Angol perjét készítünk elő a 2. példában leírtak szerint, majd 1 literes laboratóriumi silókban besilózzuk, és analizálás előtt 3 hónapig tároljuk a környezet hőmérsékletén.
A Cellulase ABG-7 enzimet a következő koncentrációkban adagoljuk: 0,05 g protein (80 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg; 0,025 g protein (400 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg; 0,050 g protein (800 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg; 0,075 g protein (1200 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg [a protein tartalmakat Μ. M. Bradford (lásd fent) módszerével határoztuk meg].
Az eredményeket a 3. táblázatban mutatjuk be.
- 18 • 4 · 4 4· • 4 · · · 4
LíO r** O o
| 4K | * LD o> s> | LD K | * | * | * | r- | CO K | i-H t—1 *» | ||
| 05 | O | CO | co | O | kO | in | ||||
| pH | CM | CO | co | o | LÖ | CM | CO | 1 | ||
| CM | t—1 | CM | CM |
fű és a szilázsok átlagos (N=3) összetétele
iJ <n o n tó
H tói X H O N tó ω tó m O O
O
| * | •K ro> | ko K | * | * | 00 | * | * o r-4 | |||
| 05 | kD | CT | CM | CM | CO | Γ- | O | |||
| r-i | CM | CO | «—1 | η | CM | co | r-H | |||
| CM | rH | CM | CM |
| •K | * | •K o | CO | * 00 | * | * CO σι | ||||
| r-H | kO | o | > | r-* | rH | «—1 | LD | r—1 | co | |
| CM | !—1 | CM | CM | kO | CM | CM | r—d | |||
| CM | CM | CM |
| 4K (N CM | 4K LO K | ** | 05 | •EK | * σι O | |||||
| co | CM | kO | CM | O | kO | o | kO | |||
| <M | O | CM | LT) | CO | kŰ | CM | CM | r—1 | ||
| CM | !—1 | CM | CM |
m CM CM m<-H n<-1
CMϊ—i
| r* | r* | |||
| in | co | 05 | 00 | |
| r-d | co | CM | ||
| i—1 | CM |
in
| 00 *> | 05 | CM | ||
| CO | O | 05 | kO | |
| kO | CM | CO | rH | |
| CM |
r~
| kD | in | in | 05 |
| in | O | r*· | rH |
| CM | m | CM |
| < | < | < | < | < | < | < | < | < | 0\0 | ||
| CM | CM | CM | CM | CM | CM | CM | CM | CM | tn | ||
| tn | <n | <n | cn | cn | tn | ω | cn | cn | ω | ||
| S | |||||||||||
| tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | :O | |
| tó | tó! | tó | 44 | tó | tói | tói | tói | tói | •tó | ||
| *— | *— | ||||||||||
| tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | tn | X | |
| - | * | *—* | *—·* | ||||||||
| N | |||||||||||
| tn | |||||||||||
| tn | |||||||||||
| :O | |||||||||||
| tn | |||||||||||
| Ό | |||||||||||
| tn | X | ||||||||||
| tn | a) | ||||||||||
| <0 | +> | +j | N | ||||||||
| >1 | tn | N | tn | ||||||||
| ö | 0 | tn | tn | ||||||||
| (Ö | > | M | CD | :O | |||||||
| N | > | i—1 | <n | > | |||||||
| <0 | <ΰ | o | tn | tn | tn | X | |||||
| >H | tn | G | 4-> | M | <u | 1 | |||||
| XÜ | g | π | (Ö | (1) | ω | tó | tói | £ | cn | ||
| N | <ű | 0) | 4-1 | o | >1 | Q | Q | Q | :O | X | tó |
| ω | K | Eh | tói | tói | X | X | < | < | Eh | X | ító |
Statisztikusan eltér a kontrolitól. P< 0,05 (Student T-teszt) ·« ·
4. példa:
Angol perjét készítünk elő a 2. példában leírtak szerint, majd 1 literes laboratóriumi silókban besilózzuk, és analizálás előtt 3 hónapig tároljuk a környezet hőmérsékletén.
Ebben a kísérletben egy Aspergillus tubigensis eredetű tisztított endo-xilanázt [specifikus aktivitás: 5000 egység endo-xilanáz aktivitás per kg takarmány (Bradford féle protein meghatározási módszer; lásd fent; lásd az 1. példát] kombinálunk Celluláz ABG-7 készítménnyel, hogy növeljük a készítmény endo-xilanáz aktivitását, és ezt adjuk a fűhöz. A fűhöz adagolt kombinált enzim termékben az endo-xilanáz koncentrációja 0,050 g protein (250.000 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg és az adagolt Cellulase ABG-7 koncentrációja 0,200 g protein (3200 egység endo-xilanáz aktivitás) per kg friss fű-tömeg volt [a protein tartalmakat Μ. M. Bradford módszerét használva határoztuk meg (lásd fent)].
Az eredményeket a 4. táblázat tartalmazza.
• · ·
4 · ··
4. táblázat
A fű és a szilázsok átlagos összetétele (N=3) SZILÁZS
FŰ KONTROLL CELLULASE CELLULASE
ABG-7 ENDO-XILANÁZ
| Szárazanyag | (SZA) (g/kg) | 273 | 269 | 259 | * | 259 | * | |
| Hamu | (g/kg | SZA) | 124 | 124 | 136 | * | 133 | * |
| Tej sav | (g/kg | SZA) | - | 45,5 | 59,4 | * | 101 | * |
| Etanol | (g/kg | SZA) | - | 7,33 | 19,1 | * | 7,81* | |
| Ecetsav | (g/kg | SZA) | - | 46,9 | 82,8 | * | 46,6 | * |
| Nyers rost | (g/kg | SZA) | 258 | 262 | 194 | * | 192 | * |
| NDF | (g/kg | SZA) | 523 | 446 | 351 | * | 344 | * |
| ADF | (g/kg | SZA) | 279 | 281 | 204 | * | 205 | * |
| ADL | (g/kg | SZA) | 17,5 | 15,9 | 18,5 | * | 17,3 | |
| Tömegveszteség | (g/kg | SZA) | - | 49,9 | 76,3 | * | 46,4 | |
| NH_-N/össz N | (ossz | N | — | 26 | 20 | * | 20 | * |
| törne g%) | ||||||||
| PH | - | 5,42 | 4,72* | 4,39* |
* Statisztikusan eltér a kontrolitól. P<0,05
Az endo-xilanáz hozzáadása a Cellulase ABG-7 készítményhez meglepő módon azzal az eredménnyel járt, hogy a silózott fűben sokkal magasabb lett a tej sav koncentráció, és ennek következtében sokkal alacsonyabb a pH.
• · ·· · · «··« ···· r· ·· ·♦ ·
- 21 Ezenkívül az etanolos és ecetsavas erjedés visszaszorult, valamint a szén-dioxid és az illő zsírsavak képződésének tulajdonítható tömegveszteség is kisebb lett.
5. Példa:
Angol perjét készítünk elő a 2. példában leírtak szerint, majd 1 literes laboratóriumi silókban besilózzuk, és analizálás előtt 3 hónapig tároljuk a környezet hőmérsékletén.
A fűhöz a következő koncentrációkban adunk endo-xilanázt: 0,010 g, 0,050 g és 0,200 g protein per kg takarmány (betárolt tömeg) (a protein meghatározás Bradford módszerével történt lásd fentebb).
Az eredményeket az 5. táblázatban mutatjuk be.
- 22 ·· « ·· ·· ·* « • · ··«··· • · »· · · · · • · «· · « «*·· • ·♦· ·· ·♦ · * · fű és a szilázsok átlagos (N=3) összetétele co N
H N cn
ι-q cn o N tó «< Eh P) Z H Ο ki tó ω o Cm
| 4K σ> | 34 | ||||||
| CM | cn kD K | ||||||
| o | o | Γ- | LO | CT> | kD | ||
| ko | n | LD | t-1 | γ- | m | ||
| CM | rH | CM | γο | CM |
| •K | CM | * | *4 | * | * | ||
| O | CM | ||||||
| ·» | |||||||
| Γ- | r- | r- | r- | ro | kD | r- | r- |
| kD | CM | kD | in | rH | kD | ||
| CM | t—1 | CM | CM |
| o | m | CM ·· | |||||
| CO | kD | o | kD | co | ro | 00 | ro |
| kD | CM | in | kD | ro | 00 | ||
| CM | rH | CM | CM |
| •K | o | ||
| Γ- | CM | Γ'· | |
| k» | ·» | ||
| kD | ro | r- | |
| rH | in | CM |
| 1K | * co | ||
| 00 | o | o | |
| kD | r- | in | |
| rH | m | CM |
| CO | |||
| O0 | CM | ||
| kD | rH | r- | in |
| r-1 | in | CM |
m
| in | co | σ> | σ> | O> | CM | ||||||
| σ> | in | Γ- | kD | CM | kD | rH | in | CT> | kD | ||
| kD | CM | ’tr | kD | 00 | rH | CM | m | ||||
| CM | rH | CM | CM |
LO
| co | Μ1 1 1 | 1 1 00 | co | σ> | r- |
| r- | CM | in | CM | r- | t—1 |
| CM | rH | CM | in | CM |
tp tP
N ω θ' x
Öl
Statisztikusan eltér a kontrolitól. P<0,05 (Student T-teszt)
N cn tP λ;
tn
| < | < | < | < | < | < | < | 4J |
| N | N | to | N | N | to | to | |
| cn | cn | ω | co | co | co | co | z |
| tp | tP | tp | tP | tP | tP | tP | N |
| Λϋ | Λί | λ: | Λί | cn | |||
| '— | cn | ||||||
| tp | tn | cp | tP | tP | tP | tP | :0 |
<
N cn tp su cn Z
| tP | Φ | ||||||||||
| (Ö | 4-1 | +j | N | ||||||||
| cn | N | cn | |||||||||
| C | o | cn | cn | ||||||||
| <ö | > | M | <D | :O | |||||||
| N | > | i—1 | <ú | > | |||||||
| <Ö | <ϋ | 0 | cn | cn | tP | z | |||||
| ki | cn | c | ki | CD | 1 | ||||||
| Htí | £ | m | tö | CD | CD | fa | fa | i-q | £ | m | |
| N | <ö | Φ | 4-> | o | Q | Q | Q | ••o | z | w | |
| CO | tó | &H | M | w | Z | Z | < | < | Eh | z | fa |
#1 ik •· · · ·« · • ♦ ····· • · · · · · · • · · · ·« · · ···· · · ·♦ 9 9
Az 5. táblázat eredményei világosan mutatják az endo-xi lanáz aktivitással való kiegészítés hatékonyságát a jobb mi-xilanáz aktivitásból növekvő mennyiségeket adagolunk, a tej sav koncentráció lényegesen megnő a silózott fűben. Az ecet sav tartalom enyhe növekedését is észleltük. Az ecetsav és a megnövekedett tej sav tartalom felelősek az alacsony pH érté kért, s ezáltal a szilázs jobb eltarthatóságáért. Az etanol termelés (a nemkívánatos élesztős erjedés következménye) nem növekedett jelentősen. Az adatok ezenkívül a sejtfal biopoli mer paraméterek jelentős csökkenését mutatják (alacsonyabb nyers rost tartalom, alacsonyabb NDF tartalom és alacsonyabb
ADF tartalom a kontrollal való összehasonlításban), ami a tej sav baktériumok és az endo-xilanázzal kezelt szilázst fogyasz tó állat számára a fermentálható cukrok mennyiségét növeli.
A sejtfal anyagának előemésztése a silózott takarmány emészt hetőségének a javulását eredményezi.
• · · ••V »· ·· · • · · · « · · • · · · · · · • · · · · ·*·»» • ·· ·« «· a
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Endo-xilanáz tartalmú szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy 1 kg takarmány (betárolt tömeg) több, mint 50.000 egység endo-xilanázt tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy az endo-xilanázt fonalas gombából állítjuk elő.
- 3. A 2. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy az endo-xilanázt az Aspergillus, Disporotrichum, Penicillium, Neurospora, Fusarium és Trichoderma nemzetségek csoportjából kiválasztott fonalas gombából állítjuk elő.
- 4. A 3. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy az Aspergillus niger, Aspergillus awamori, Aspergillus aculeatus, Aspergillus tubigensis, Disporotrichum dimorphosporum és Trichoderma reesei fajok csoportjából kiválasztott fonalas gombából állítjuk elő.
- 5. Az 1. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy az endo-xilanáz pH optimuma pH 3,5 - 6,0 tartományon belül van.
- 6. Az 1. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy tejsavbaktérium inokulumot is tartalmaz.
- 7. A 6. igénypont szerinti szilázs készítmény, azzal jellemezve, hogy a Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus fermentum és Lactobacillus lactis által alkotott csoportból választott tejsavbaktériumot tartalmaz.• ♦ · · · 4 ·· • * 4 · »··· • · · · ·« 4 4 ·♦
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP90202020 | 1990-07-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9200960D0 HU9200960D0 (en) | 1992-06-29 |
| HUT60606A true HUT60606A (en) | 1992-10-28 |
Family
ID=8205086
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU92960A HUT60606A (en) | 1990-07-24 | 1991-07-24 | Enzyme treatment of silage fodder |
| HU9200961A HU215234B (hu) | 1990-07-24 | 1991-07-24 | Eljárás gomba eredetű, xilanázaktivitással rendelkező polipeptidek rekombináns úton történő előállítására és felhasználására |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9200961A HU215234B (hu) | 1990-07-24 | 1991-07-24 | Eljárás gomba eredetű, xilanázaktivitással rendelkező polipeptidek rekombináns úton történő előállítására és felhasználására |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5358864A (hu) |
| EP (3) | EP0463706B2 (hu) |
| JP (2) | JPH05501657A (hu) |
| KR (1) | KR100212232B1 (hu) |
| AT (2) | ATE124844T1 (hu) |
| AU (2) | AU647170B2 (hu) |
| CA (2) | CA2066734A1 (hu) |
| DE (3) | DE69133201T2 (hu) |
| DK (2) | DK0468596T3 (hu) |
| ES (1) | ES2086267T3 (hu) |
| FI (2) | FI921232A0 (hu) |
| HU (2) | HUT60606A (hu) |
| IE (3) | IE68859B1 (hu) |
| IL (1) | IL98941A (hu) |
| NO (2) | NO307347B1 (hu) |
| NZ (2) | NZ239085A (hu) |
| PL (2) | PL291225A1 (hu) |
| PT (1) | PT98419B (hu) |
| WO (2) | WO1992001389A1 (hu) |
Families Citing this family (89)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5837515A (en) * | 1990-05-16 | 1998-11-17 | Alko-Yhtiot Oy | Enzyme preparations and methods for their production |
| NL9001388A (nl) | 1990-06-19 | 1992-01-16 | Unilever Nv | Recombinant dna, cel die daarvan afgeleid dna bevat, enzym waarvoor het recombinant dna codeert en toepassingen daarvan. |
| NZ239085A (en) * | 1990-07-24 | 1993-08-26 | Gist Brocades Nv | Cloning and expression of xylanase genes from fungal origin |
| GB9027303D0 (en) * | 1990-12-17 | 1991-02-06 | Enzymatix Ltd | Enzyme formulation |
| US5863783A (en) * | 1991-03-27 | 1999-01-26 | Gist-Brocades, N.V. | Cloning and expression of DNA molecules encoding arabinan-degrading enzymes of fungal origin |
| US5705358A (en) * | 1991-12-09 | 1998-01-06 | Unilever Patent Holdings B.V. | Process for producing/secreting a protein by a transformed mould using expression/secretion regulating regions derived from a aspergillus endoxylanase II gene |
| BR9306580A (pt) * | 1992-06-17 | 1998-12-08 | Biotech & Biolog Scien Res | Xilanase molécula de dna isolda ou recombinada codificando umaxilanase sequência de dna célula hospedeira uso de uma xilanase e molécula de dna isolada ou recombinante |
| EP0746607A4 (en) * | 1992-06-17 | 1997-03-12 | Commw Scient Ind Res Org | RECOMBINANT XYLANASE |
| CA2129992A1 (en) * | 1992-12-24 | 1994-07-07 | Albert J. J. Van Ooyen | Cloning and expression of xylanase b |
| ATE258224T1 (de) * | 1993-03-10 | 2004-02-15 | Novozymes As | Enzyme mit xylanaseaktivität aus aspergillus aculeatus |
| GB2279955B (en) * | 1993-07-15 | 1998-02-18 | Solvay | Xylanase derived from a Bacillus species, expression vectors for such xylanase and other proteins, host organisms therefor and use thereof |
| FR2715802B1 (fr) * | 1994-02-04 | 1996-03-15 | Rhone Poulenc Nutrition Animal | Utilisation d'enzymes dans l'alimentation des animaux pour réduire les rejets azotés. |
| US5448645A (en) * | 1994-02-28 | 1995-09-05 | Raymond Guerci International, Inc. | Active fan blade noise cancellation system |
| WO1995023514A1 (en) * | 1994-03-02 | 1995-09-08 | Novo Nordisk A/S | Processing plant material with xylanase |
| AU1945395A (en) * | 1994-03-02 | 1995-09-18 | Novo Nordisk A/S | Use of xylanase in baking |
| GB9406317D0 (en) * | 1994-03-30 | 1994-05-25 | Finnfeeds Int Ltd | Use of an enzyme for assisting an animal to digest protein |
| US6051431A (en) * | 1994-07-22 | 2000-04-18 | Dsm N.V. | Selection marker gene free recombinant strains: a method for obtaining them and the use of these strains |
| US7816129B2 (en) | 1994-07-29 | 2010-10-19 | Ab Enzymes Gmbh | Production and secretion of proteins of bacterial origin in filamentous fungi |
| US5935836A (en) * | 1994-07-29 | 1999-08-10 | Rohm Enzyme Finland Oy | Actinomadura xylanase sequences and methods of use |
| US5871730A (en) * | 1994-07-29 | 1999-02-16 | Universite De Sherbrooke | Thermostable xylanase DNA, protein and methods of use |
| US6300114B1 (en) | 1994-07-29 | 2001-10-09 | Rohm Enzyme Finland Oy | Sequences of xylanase and xylanase expression vectors |
| GB9416841D0 (en) * | 1994-08-19 | 1994-10-12 | Finnfeeds Int Ltd | An enzyme feed additive and animal feed including it |
| US5849559A (en) * | 1994-08-26 | 1998-12-15 | Gist-Brocades, B.V. | Arabinoxylan degrading enzymes |
| CN1165614C (zh) * | 1995-01-26 | 2004-09-08 | 诺沃奇梅兹有限公司 | 含有木聚糖酶的动物饲料添加剂 |
| GB9505479D0 (en) * | 1995-03-17 | 1995-05-03 | Danisco | Enzyme |
| CA2224624A1 (en) | 1995-06-23 | 1997-01-09 | Leendert Hendrik De Graaff | Novel beta-xylosidase, nucleotide sequence encoding it, and use thereof |
| US5720971A (en) * | 1995-07-05 | 1998-02-24 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Department Of Agriculture And Agri-Food Canada | Enzyme additives for ruminant feeds |
| EP0796328A2 (en) * | 1995-10-13 | 1997-09-24 | Gist-Brocades B.V. | Protein detection |
| US5902581A (en) * | 1995-12-04 | 1999-05-11 | Genencor International, Inc. | Xylanase from acidothermus cellulolyticus |
| US6635464B1 (en) | 1995-12-18 | 2003-10-21 | Rohm Enzyme Finland Oy | Xylanases, genes encoding them, and uses thereof |
| AU1437597A (en) * | 1996-01-22 | 1997-08-20 | Novo Nordisk A/S | An enzyme with xylanase activity |
| ES2111495B1 (es) * | 1996-07-19 | 1998-11-01 | Consejo Superior Investigacion | Cepa de levadura de panaderia cect10868 y cepa de panaderia cect10869. su metodo de obtencion por tecnicas de adn recombinante y su aplicacion como levaduras de panaderia. |
| GB9704157D0 (en) | 1997-02-28 | 1997-04-16 | Danisco | Expression element |
| US6140097A (en) * | 1997-03-04 | 2000-10-31 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Mesophilic xylanases |
| CA2298885A1 (en) | 1997-07-31 | 1999-02-11 | Dsm N.V. | Cellulose degrading enzymes of aspergillus |
| US7220542B2 (en) | 2000-07-17 | 2007-05-22 | Van Den Brink Johannes Maarten | Expression cloning in filamentous fungi |
| CA2356255C (en) * | 1998-12-23 | 2011-02-22 | Danisco A/S | Use of a xylanase in the preparation of dough |
| WO2002003805A1 (en) | 2000-07-06 | 2002-01-17 | Novozymes A/S | Method of preparing a dough or a baked product made from a dough, with addition of lipolytic enzymes |
| EP1301618A1 (en) | 2000-07-13 | 2003-04-16 | Danisco Sweeteners Oy | Method for the production of xylitol |
| SK288130B6 (sk) | 2000-09-21 | 2013-10-02 | Basf Aktiengesellschaft | Xylanase polypeptide, a polynucleotide, a vector, a host cell, method of polypeptide production, method of use of polypeptide |
| EP1418819B2 (en) | 2001-08-20 | 2018-11-14 | Cargill, Incorporated | Non-starch-polysaccharides |
| US8022170B2 (en) | 2002-12-17 | 2011-09-20 | Ems-Chemie Ag | Copolyamides |
| WO2004099400A2 (en) | 2003-05-09 | 2004-11-18 | Novozymes A/S | Variant lipolytic ensymes |
| EP1482050A1 (en) * | 2003-05-28 | 2004-12-01 | Facultés Universitaires Notre-Dame de la Paix | Enzyme with xylanase activity at acidic ph |
| EP2322630B1 (en) | 2004-02-12 | 2016-11-16 | Novozymes Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| JP2006219767A (ja) * | 2005-02-08 | 2006-08-24 | Univ Of Tsukuba | 製紙用化学パルプ中の不飽和ウロン酸の除去方法 |
| SG175475A1 (en) | 2005-05-12 | 2011-11-28 | Martek Biosciences Corp | Biomass hydrolysate and uses and production thereof |
| US8268956B2 (en) | 2006-12-08 | 2012-09-18 | Ems-Chemie Ag | Transparent mold made of a polyamide molding material |
| CA2671439C (en) | 2007-01-16 | 2016-03-29 | Puratos N.V. | Bread with increased arabinoxylo-oligosaccharide content |
| US7850382B2 (en) | 2007-01-18 | 2010-12-14 | Sanford, L.P. | Valve made from two materials and writing utensil with retractable tip incorporating same |
| US7488130B2 (en) | 2007-02-01 | 2009-02-10 | Sanford, L.P. | Seal assembly for retractable instrument |
| RU2009137386A (ru) | 2007-03-09 | 2011-04-20 | ДАНИСКО ЮЭс ИНК., ДЖЕНЕНКОР ДИВИЖН (US) | Варианты амилазы алкалифильных видов bacillus, композиции, содержащие варианты амилазы, и способы применения |
| US8916369B2 (en) | 2007-03-14 | 2014-12-23 | Danisco Us Inc. | Trichoderma reesei α-amylase is a maltogenic enzyme |
| AU2008260555B2 (en) | 2007-06-01 | 2012-07-26 | Sapphire Energy, Inc. | High throughput screening of genetically modified photosynthetic organisms |
| GB0718974D0 (en) | 2007-09-28 | 2007-11-07 | Univ Leuven Kath | oligosaccharides derived from arabinoxylan for prevention of gastrointestinal infection |
| EP2060607B2 (de) | 2007-11-16 | 2019-11-27 | Ems-Patent Ag | Gefüllte Polyamidformmassen |
| US8318451B2 (en) | 2008-01-02 | 2012-11-27 | Danisco Us Inc. | Process of obtaining ethanol without glucoamylase using Pseudomonas saccharophila G4-amylase variants thereof |
| GB0805360D0 (en) | 2008-03-25 | 2008-04-30 | Univ Leuven Kath | Arabinoxylan oligosaccharide preparation |
| US8226312B2 (en) | 2008-03-28 | 2012-07-24 | Sanford, L.P. | Valve door having a force directing component and retractable instruments comprising same |
| MX2010011721A (es) | 2008-04-30 | 2010-11-30 | Danisco Inc | Nuevas variantes de alfa-amilasa quimericas. |
| BRPI0913367A2 (pt) | 2008-06-06 | 2015-08-04 | Danisco Us Inc | Alfa-amilases variantes de bacillus subtilis e métodos de uso das mesmas |
| MX2010013122A (es) | 2008-06-06 | 2011-01-21 | Danisco Inc | Composicion de enzima de sacarificacion y metodo de sacarificacion de la misma. |
| BRPI0913378A2 (pt) | 2008-06-06 | 2015-09-01 | Danisco Us Inc | Produção de glicose a partir do amido usando alfa-amilase do bacillus subtilis |
| US8221012B2 (en) | 2008-11-07 | 2012-07-17 | Sanford, L.P. | Retractable instruments comprising a one-piece valve door actuating assembly |
| EP2387327B1 (en) | 2009-01-16 | 2018-03-21 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Enzymatic generation of oligasaccharides from cereals or cereal bi-streams |
| CA2749187C (en) | 2009-01-16 | 2018-02-06 | Danisco A/S | Enzymatic generation of functional lipids from cereals or cereal bi-streams |
| US8393814B2 (en) | 2009-01-30 | 2013-03-12 | Sanford, L.P. | Retractable instrument having a two stage protraction/retraction sequence |
| EP2413715B1 (en) | 2009-03-31 | 2017-10-25 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Prevention of extract darkening and malodor formation during solubilization of plant cell wall material |
| DK3783103T3 (da) | 2009-05-19 | 2022-06-20 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Amylasepolypeptider |
| EP2365033B1 (de) | 2010-03-12 | 2013-07-10 | Ems-Patent Ag | Schlagzähmodifizierte Polyamidformmasse sowie hieraus gebildeter Behälter |
| FR2959515A1 (fr) | 2010-05-03 | 2011-11-04 | Puratos | Compositions riches en oligosaccharides d'arabinoxylane |
| EP2412757B1 (de) | 2010-07-30 | 2013-11-13 | Ems-Patent Ag | Polyamidformmasse zur Herstellung von Formkörpern mit einer Weichgriffoberfläche sowie entsprechende Formkörper |
| WO2012130969A1 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Novozymes A/S | Process for production of a baked product |
| PL2535365T3 (pl) | 2011-06-17 | 2014-01-31 | Ems Patent Ag | Częściowo aromatyczne tłoczywa i ich zastosowania |
| EP2666803B1 (de) | 2012-05-23 | 2018-09-05 | Ems-Patent Ag | Kratzfeste, transparente und zähe Copolyamidformmassen, hieraus hergestellte Formkörper und deren Verwendung |
| EP2716716B1 (de) | 2012-10-02 | 2018-04-18 | Ems-Patent Ag | Polyamid-Formmassen und deren Verwendung bei der Herstellung von Formkörpern |
| SI2746339T1 (sl) | 2012-12-18 | 2015-05-29 | Ems-Patent Ag | Poliamidna oblikovalna masa in oblikovalni deli proizvedeni iz enakega |
| US8759041B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-06-24 | Novozymes Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| EP2778190B1 (de) | 2013-03-15 | 2015-07-15 | Ems-Patent Ag | Polyamidformmasse sowie hieraus hergestellter Formkörper |
| US20170121741A1 (en) | 2014-04-01 | 2017-05-04 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method for increasing crude palm oil yields |
| WO2016097266A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Method of improving palm oil yields from palm fruit or palm fruit liquid |
| AU2016226359A1 (en) | 2015-03-04 | 2017-08-17 | Dupont Nutrition Biosciences Aps | Cereal grain processing |
| GB201522603D0 (en) | 2015-12-22 | 2016-02-03 | Dupont Nutrition Biosci Aps | Composition |
| JP7094652B2 (ja) * | 2016-03-31 | 2022-07-04 | 日油株式会社 | 製パン用油脂組成物および製パン用穀粉生地 |
| KR101898246B1 (ko) * | 2016-11-18 | 2018-09-13 | 전북대학교 산학협력단 | 케나프 사일리지의 제조방법 및 이에 따른 케나프 사일리지 |
| JP7491542B2 (ja) * | 2019-09-09 | 2024-05-28 | 株式会社フジワラテクノアート | 基質培養物の製造方法及び基質培養物 |
| JP7160071B2 (ja) * | 2020-08-17 | 2022-10-25 | 日油株式会社 | 製パン用油脂組成物および製パン用穀粉生地 |
| EP4559324A1 (en) * | 2022-07-20 | 2025-05-28 | Amano Enzyme Inc. | Agent for improving intestinal flora |
| EP4389906A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Methods for the enzymatic treatment of whole stillage |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1109471B (it) * | 1976-08-17 | 1985-12-16 | Deral Sa | Procedimento e prodotto per la conservazione e la valorizzazione di vegetali a verde e dei sotto prodotti umidi delle industrie agro alimentari |
| US4212420A (en) * | 1979-06-18 | 1980-07-15 | International Business Machines Corporation | Ribbon storage device |
| CA1280704C (en) * | 1985-12-03 | 1991-02-26 | Paul Ducroo | Production of beer |
| FI84970C (fi) * | 1988-04-22 | 1992-02-25 | Suomen Sokeri Oy | Foerfarande foer foerbaettring av degens egenskaper och broedets kvalitet. |
| FI881962L (fi) * | 1988-04-26 | 1989-10-27 | Cultor Oy | Foerfarande foer foerbaettring av fodrets smaeltbarhet och med foerfarandet framstaellt foder. |
| CA1341226C (en) * | 1988-08-16 | 2001-05-01 | Wim Van Hartingsveldt | Gene replacement as a tool for the construction of aspergillus strains |
| FI884668A7 (fi) * | 1988-10-11 | 1990-04-12 | Cultor Oyj | Menetelmä kuivien viljatuotteiden valmistusprosessin parantamiseksi entsyymikäsittelyn avulla |
| US5179021A (en) * | 1989-02-10 | 1993-01-12 | Gil Inc. (Now Ici Canada Inc.) | Pulp bleaching process comprising oxygen delignification and xylanase enzyme treatment |
| AU7676791A (en) * | 1990-04-18 | 1991-11-11 | Ssv-Development Oy | Enzyme treated forage for silage |
| NL9001388A (nl) * | 1990-06-19 | 1992-01-16 | Unilever Nv | Recombinant dna, cel die daarvan afgeleid dna bevat, enzym waarvoor het recombinant dna codeert en toepassingen daarvan. |
| NZ239085A (en) * | 1990-07-24 | 1993-08-26 | Gist Brocades Nv | Cloning and expression of xylanase genes from fungal origin |
-
1991
- 1991-07-23 NZ NZ239085A patent/NZ239085A/xx not_active IP Right Cessation
- 1991-07-23 NZ NZ239083A patent/NZ239083A/xx unknown
- 1991-07-23 IE IE258391A patent/IE68859B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-23 IE IE258291A patent/IE912582A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-23 IE IE20040144A patent/IE20040144A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-23 PT PT98419A patent/PT98419B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 FI FI921232A patent/FI921232A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-07-24 EP EP91201944A patent/EP0463706B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 CA CA002066734A patent/CA2066734A1/en not_active Abandoned
- 1991-07-24 HU HU92960A patent/HUT60606A/hu unknown
- 1991-07-24 IL IL9894191A patent/IL98941A/xx not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 DE DE69133201T patent/DE69133201T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 EP EP98114804A patent/EP0892065A1/en not_active Withdrawn
- 1991-07-24 AU AU83205/91A patent/AU647170B2/en not_active Ceased
- 1991-07-24 KR KR1019920700672A patent/KR100212232B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-24 AT AT91201943T patent/ATE124844T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 PL PL29122591A patent/PL291225A1/xx unknown
- 1991-07-24 AU AU83186/91A patent/AU654147B2/en not_active Ceased
- 1991-07-24 CA CA002067329A patent/CA2067329A1/en not_active Abandoned
- 1991-07-24 HU HU9200961A patent/HU215234B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 DK DK91201943.7T patent/DK0468596T3/da active
- 1991-07-24 DE DE0463706T patent/DE463706T1/de active Pending
- 1991-07-24 JP JP3513261A patent/JPH05501657A/ja active Pending
- 1991-07-24 US US07/842,349 patent/US5358864A/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 ES ES91201944T patent/ES2086267T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 DK DK91201944T patent/DK0463706T3/da active
- 1991-07-24 WO PCT/NL1991/000136 patent/WO1992001389A1/en active Application Filing
- 1991-07-24 DE DE69111148T patent/DE69111148T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-24 AT AT91201944T patent/ATE233818T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 JP JP3513262A patent/JPH05500907A/ja active Pending
- 1991-07-24 PL PL91291226A patent/PL171271B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1991-07-24 EP EP91201943A patent/EP0468596B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-24 WO PCT/NL1991/000137 patent/WO1992001793A1/en active IP Right Grant
-
1992
- 1992-03-20 FI FI921231A patent/FI108944B/fi active IP Right Grant
- 1992-03-23 NO NO921134A patent/NO307347B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-03-23 NO NO921133A patent/NO921133D0/no unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT60606A (en) | Enzyme treatment of silage fodder | |
| Yang et al. | Bioconversion of corn straw by coupling ensiling and solid-state fermentation | |
| US5432074A (en) | Formulation for treating silage containing β-1,4-xylanase and β-1,3-xylosidase but essentially free of β-1,4-glucanase and β-1,4-cellobiohydrolase, and one or more lactic acid-producing bacteria | |
| Dierick | Biotechnology aids to improve feed and feed digestion: enzymes and fermentation | |
| CA2222898C (en) | Enzyme additives for ruminant feeds | |
| Weinberg et al. | Ensiling peas, ryegrass and wheat with additives of lactic acid bacteria (LAB) and cell wall degrading enzymes | |
| Kung Jr et al. | Microbial inoculation or cellulase enzyme treatment of barley and vetch silage harvested at three maturities | |
| CA2133748C (en) | Enzyme products for use in the improvement of feed value and conservation of fibrous crops | |
| JP7388628B2 (ja) | セルロース分解能増強組成物及びセルロース分解能増強変異株 | |
| CN115316491B (zh) | 一种饲料添加剂的制备方法、饲料添加剂及饲料 | |
| Ren et al. | The impact of enzyme characteristics on corn stover fiber degradation and acid production during ensiled storage | |
| WO1991015966A1 (en) | Enzyme treated forage for silage | |
| Setälä | Enzymes in grass silage production | |
| Singh et al. | Bioconversion of wheat straw to animal feed by solid substrate fermentation or ensiling. | |
| WO2011050478A1 (en) | Enzyme system for silage preservation | |
| HU185784B (en) | Method for preserving vegetables for foddering purposes | |
| JP2004173688A (ja) | サイレージ調製剤及びサイレージの調製方法 | |
| NZ223021A (en) | Method of preserving protein feed using lactic acid bacteria, glucono-delta-lactone and carbohydrate cleaving enzyme | |
| Yassin et al. | Biotechnological Impacts of Different Fungal and Bacterial Strains Treatment on Nutritive Value of Some Straws. | |
| RU2706068C2 (ru) | Композиция для получения высококачественных кормов из многолетних высокобелковых бобовых трав | |
| RU2705002C2 (ru) | Композиция для получения высококачественных кормов из козлятника восточного и бобово-злаковых травосмесей на его основе | |
| FI112161B (fi) | Kuitukasvien rehuarvon ja kestävöinnin parantamisessa käytettäviksi soveltuvia entsyymituotteita | |
| SURYAHADI et al. | Production and Utilization of Cellulase From Trichoderma Viride | |
| Gwayumba | LACTIC ACID BACTERIAL | |
| Rodriguez et al. | Cell wall disappearance in a forage sorghum hybrid and Johnson grass after treatment with a commercial multi-enzyme preparation |