JP2002500035A - ３６個のヒト分泌タンパク質 - Google Patents
３６個のヒト分泌タンパク質Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、新規ヒト分泌タンパク質およびそのようなタンパク質をコードする遺伝子のコード領域を含む単離された核酸に関する。ヒト分泌タンパク質を産生するためのベクター、宿主細胞、抗体、および組換え方法がまた提供される。本発明はさらに、これらの新規ヒト分泌タンパク質に関する障害を診断および処置するための有用な診断方法および治療方法に関する。
Description
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチドおよびこれらのポリヌクレオチ
ドによってコードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの使用、ならびにそれらの産生に関する。
ドによってコードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの使用、ならびにそれらの産生に関する。
【０００２】 （発明の背景） 膜によって取り囲まれる単一コンパートメントとして存在する細菌とは異なり
、ヒト細胞および他の真核生物は、膜によって多くの機能的に異なるコンパート
メントに細分される。それぞれの膜で区切られたコンパートメント、すなわちオ
ルガネラは、そのオルガネラの機能に不可欠な異なるタンパク質を含む。細胞は
、特定の細胞オルガネラにタンパク質を標的化するために、タンパク質内部に位
置するアミノ酸モチーフである「選別シグナル」を使用する。
、ヒト細胞および他の真核生物は、膜によって多くの機能的に異なるコンパート
メントに細分される。それぞれの膜で区切られたコンパートメント、すなわちオ
ルガネラは、そのオルガネラの機能に不可欠な異なるタンパク質を含む。細胞は
、特定の細胞オルガネラにタンパク質を標的化するために、タンパク質内部に位
置するアミノ酸モチーフである「選別シグナル」を使用する。
【０００３】 シグナル配列、シグナルペプチド、またはリーダー配列と呼ばれる選別シグナ
ルの１つの型は、小胞体（ＥＲ）と呼ばれるオルガネラに１つのクラスのタンパ
ク質を指向させる。ＥＲは、膜で区切られたタンパク質をすべての他の型のタン
パク質から分離する。一旦ＥＲに局在すると、両方の群のタンパク質とも、ゴル
ジ装置と呼ばれる別のオルガネラにさらに指向され得る。ここで、ゴルジは、タ
ンパク質を、分泌小胞を含む小胞、細胞膜、リソソーム、および他のオルガネラ
に分布させる。
ルの１つの型は、小胞体（ＥＲ）と呼ばれるオルガネラに１つのクラスのタンパ
ク質を指向させる。ＥＲは、膜で区切られたタンパク質をすべての他の型のタン
パク質から分離する。一旦ＥＲに局在すると、両方の群のタンパク質とも、ゴル
ジ装置と呼ばれる別のオルガネラにさらに指向され得る。ここで、ゴルジは、タ
ンパク質を、分泌小胞を含む小胞、細胞膜、リソソーム、および他のオルガネラ
に分布させる。
【０００４】 シグナル配列によってＥＲに標的化されたタンパク質は、分泌タンパク質とし
て細胞外間隙に放出され得る。例えば、分泌タンパク質を含む小胞は、細胞膜と
融合し得、そして細胞外間隙にその内容物を放出し得る（エキソサイトーシスと
呼ばれるプロセスである）。エキソサイトーシスは、構成的に、または誘発シグ
ナルの受け取りの後に生じ得る。後者の場合には、タンパク質は、エキソサイト
ーシスが誘発されるまで、分泌小胞（または分泌顆粒）に貯蔵される。同様に、
細胞膜上に存在するタンパク質はまた、タンパク質を膜に保持する「リンカー」
のタンパク質分解切断によって、細胞外間隙に分泌され得る。
て細胞外間隙に放出され得る。例えば、分泌タンパク質を含む小胞は、細胞膜と
融合し得、そして細胞外間隙にその内容物を放出し得る（エキソサイトーシスと
呼ばれるプロセスである）。エキソサイトーシスは、構成的に、または誘発シグ
ナルの受け取りの後に生じ得る。後者の場合には、タンパク質は、エキソサイト
ーシスが誘発されるまで、分泌小胞（または分泌顆粒）に貯蔵される。同様に、
細胞膜上に存在するタンパク質はまた、タンパク質を膜に保持する「リンカー」
のタンパク質分解切断によって、細胞外間隙に分泌され得る。
【０００５】 近年大きく進歩したにもかかわらず、ヒトの分泌タンパク質をコードする遺伝
子は少数しか同定されていない。これらの分泌タンパク質としては、商業的価値
のあるヒトインスリン、インターフェロン、第ＶＩＩＩ因子、ヒト成長ホルモン
、組織プラスミノーゲンアクチベーター、およびエリスロポエチンが挙げられる
。したがって、ヒトの生理学における分泌タンパク質の広範な役割を考慮すると
、新規のヒトの分泌タンパク質およびそれらをコードする遺伝子を同定および特
徴付けるためのの必要性がある。この知見は、分泌タンパク質またはそれらをコ
ードする遺伝子を使用することによって、医学的障害を検出、処置、および予防
することを可能にする。
子は少数しか同定されていない。これらの分泌タンパク質としては、商業的価値
のあるヒトインスリン、インターフェロン、第ＶＩＩＩ因子、ヒト成長ホルモン
、組織プラスミノーゲンアクチベーター、およびエリスロポエチンが挙げられる
。したがって、ヒトの生理学における分泌タンパク質の広範な役割を考慮すると
、新規のヒトの分泌タンパク質およびそれらをコードする遺伝子を同定および特
徴付けるためのの必要性がある。この知見は、分泌タンパク質またはそれらをコ
ードする遺伝子を使用することによって、医学的障害を検出、処置、および予防
することを可能にする。
【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、新規ポリヌクレオチドおよびコードされたポリペプチドに関する。
さらに、本発明は、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベク
ター、宿主細胞、抗体、および組換え方法に関する。ポリペプチドに関連する障
害を検出するための診断方法、およびこのような障害を処置するための治療方法
もまた提供される。本発明は、さらに、ポリペプチドの結合パートナーを同定す
るためのスクリーニング方法に関する。
さらに、本発明は、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するためのベク
ター、宿主細胞、抗体、および組換え方法に関する。ポリペプチドに関連する障
害を検出するための診断方法、およびこのような障害を処置するための治療方法
もまた提供される。本発明は、さらに、ポリペプチドの結合パートナーを同定す
るためのスクリーニング方法に関する。
【０００７】 （詳細な説明） （定義） 以下の定義は、本明細書全体を通して使用される特定の用語の理解を容易にす
るために提供される。
るために提供される。
【０００８】 本発明において、「単離された」とは、その本来の環境（例えば、それが天然
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然
の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌク
レオチドは、ベクターまたは物質の組成物の一部であり得るか、あるいは細胞中
に含まれ得、そしてなお「単離される」。なぜなら、ベクター、物質の組成物、
または特定の細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないからである。
に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質をいい、したがって、天然
の状態から「人間の手によって」変更されている。例えば、単離されたポリヌク
レオチドは、ベクターまたは物質の組成物の一部であり得るか、あるいは細胞中
に含まれ得、そしてなお「単離される」。なぜなら、ベクター、物質の組成物、
または特定の細胞は、ポリヌクレオチドの本来の環境ではないからである。
【０００９】 本発明において、「分泌」タンパク質とは、ＥＲ、分泌小胞、または細胞外間
隙にシグナル配列の結果として指向され得るタンパク質、ならびにシグナル配列
を必ずしも含まないが細胞外間隙に放出されるタンパク質をいう。分泌タンパク
質が、細胞外間隙に放出される場合、この分泌タンパク質は、「成熟」タンパク
質を産生するために細胞外プロセシングを受け得る。細胞外間隙への放出は、エ
キソサイトーシスおよびタンパク質分解切断を含む多くの機構によって生じ得る
。
隙にシグナル配列の結果として指向され得るタンパク質、ならびにシグナル配列
を必ずしも含まないが細胞外間隙に放出されるタンパク質をいう。分泌タンパク
質が、細胞外間隙に放出される場合、この分泌タンパク質は、「成熟」タンパク
質を産生するために細胞外プロセシングを受け得る。細胞外間隙への放出は、エ
キソサイトーシスおよびタンパク質分解切断を含む多くの機構によって生じ得る
。
【００１０】 本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」とは、配列番号Ｘに含まれ
る核酸配列を有する分子、またはＡＴＣＣに寄託されたクローン内に含まれるｃ
ＤＮＡをいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および３’非翻訳配列、シグ
ナル配列を含むかもしくは含まないコード領域、分泌タンパク質コード領域を含
む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列、ならびにこの核酸配列のフラグメント
、エピトープ、ドメイン、および改変体を含み得る。さらに、本明細書で使用さ
れる場合、「ポリペプチド」とは、広く定義される場合、ポリヌクレオチドから
生じた翻訳されたアミノ酸配列を有する分子をいう。
る核酸配列を有する分子、またはＡＴＣＣに寄託されたクローン内に含まれるｃ
ＤＮＡをいう。例えば、ポリヌクレオチドは、５’および３’非翻訳配列、シグ
ナル配列を含むかもしくは含まないコード領域、分泌タンパク質コード領域を含
む全長ｃＤＮＡ配列のヌクレオチド配列、ならびにこの核酸配列のフラグメント
、エピトープ、ドメイン、および改変体を含み得る。さらに、本明細書で使用さ
れる場合、「ポリペプチド」とは、広く定義される場合、ポリヌクレオチドから
生じた翻訳されたアミノ酸配列を有する分子をいう。
【００１１】 本発明では、配列番号Ｘとして同定された全長配列は、しばしば、複数のクロ
ーンに含まれる配列を重複させることによって生成された（コンティグ分析）。
配列番号Ｘについての配列のすべてまたはほとんどを含む代表的クローンを、ア
メリカンタイプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託した。表１に示
すように、各クローンは、ｃＤＮＡクローンＩＤ （識別子）およびＡＴＣＣ寄
託番号によって同定される。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−
２２０９， ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続の目的のための微生
物の寄託の国際承認に係るブダペスト条約の条項によって行われた。
ーンに含まれる配列を重複させることによって生成された（コンティグ分析）。
配列番号Ｘについての配列のすべてまたはほとんどを含む代表的クローンを、ア
メリカンタイプカルチャーコレクション（「ＡＴＣＣ」）に寄託した。表１に示
すように、各クローンは、ｃＤＮＡクローンＩＤ （識別子）およびＡＴＣＣ寄
託番号によって同定される。ＡＴＣＣは、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ， Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−
２２０９， ＵＳＡに位置する。ＡＴＣＣ寄託は、特許手続の目的のための微生
物の寄託の国際承認に係るブダペスト条約の条項によって行われた。
【００１２】 本発明の「ポリヌクレオチド」はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体、またはＡＴＣＣに寄
託されたクローン内に含まれるｃＤＮＡにハイブリダイズし得るポリヌクレオチ
ドを含む。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホ
ルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム
）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫
酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で
の４２℃での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にて
フィルターを洗浄することをいう。
ション条件下で、配列番号Ｘに含まれる配列、その相補体、またはＡＴＣＣに寄
託されたクローン内に含まれるｃＤＮＡにハイブリダイズし得るポリヌクレオチ
ドを含む。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、５０％ホ
ルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸ナトリウム
）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫
酸デキストラン、および２０μｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で
の４２℃での一晩インキュベーション、次いで０．１×ＳＳＣ中で約６５℃にて
フィルターを洗浄することをいう。
【００１３】 より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件で本発明のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた意図される。ハイブリダイゼー
ションのストリンジェンシーおよびシグナル検出の変化は、主として、ホルムア
ミド濃度（より低い百分率のホルムアミドが、低下したストリンジェンシーを生
じる）；塩条件、または温度の操作によって行われる。例えば、より低いストリ
ンジェンシー条件は、６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２
Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、
３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液
中、３７℃で一晩のインキュベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤ
Ｓを用いた５０℃での洗浄を含む。さらに、さらにより低いストリンジェンシー
を達成するために、ストリンジェントなハイブリダイゼーション後に行われる洗
浄は、より高い塩濃度（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
クレオチドにハイブリダイズする核酸分子もまた意図される。ハイブリダイゼー
ションのストリンジェンシーおよびシグナル検出の変化は、主として、ホルムア
ミド濃度（より低い百分率のホルムアミドが、低下したストリンジェンシーを生
じる）；塩条件、または温度の操作によって行われる。例えば、より低いストリ
ンジェンシー条件は、６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ＝３Ｍ ＮａＣｌ；０．２
Ｍ ＮａＨ2ＰＯ4；０．０２Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）、０．５％ ＳＤＳ、
３０％ホルムアミド、１００μｇ／ｍｌサケ精子ブロッキングＤＮＡを含む溶液
中、３７℃で一晩のインキュベーション；次いで１×ＳＳＰＥ、０．１％ ＳＤ
Ｓを用いた５０℃での洗浄を含む。さらに、さらにより低いストリンジェンシー
を達成するために、ストリンジェントなハイブリダイゼーション後に行われる洗
浄は、より高い塩濃度（例えば、５×ＳＳＣ）で行われ得る。
【００１４】 上記の条件における変化が、ハイブリダイゼーション実験においてバックグラ
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、お
よび市販の製品処方物が挙げられる。特異的ブロッキング試薬の包含は、適合性
の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要とし得る。
ウンドを抑制するために使用される代替的なブロッキング試薬の包含および／ま
たは置換によって達成され得ることに留意すること。代表的なブロッキング試薬
としては、デンハルト試薬、ＢＬＯＴＴＯ、ヘパリン、変性サケ精子ＤＮＡ、お
よび市販の製品処方物が挙げられる。特異的ブロッキング試薬の包含は、適合性
の問題に起因して、上記のハイブリダイゼーション条件の改変を必要とし得る。
【００１５】 もちろん、ポリＡ＋配列（例えば、配列表に示されるｃＤＮＡの任意の３’末
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオ
チドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、事実上任意の二本鎖
ｃＤＮＡクローン）を含む任意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌ
クレオチド」の定義に包含されない。
端ポリＡ＋領域（ｔｒａｃｔ））に、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的スト
レッチにのみハイブリダイズするポリヌクレオチドは、このようなポリヌクレオ
チドが、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例えば、事実上任意の二本鎖
ｃＤＮＡクローン）を含む任意の核酸分子にハイブリダイズするので、「ポリヌ
クレオチド」の定義に包含されない。
【００１６】 本発明のポリヌクレオチドは、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキ
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域
の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得
る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡおよびＤ
ＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安定
性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基また
はＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例えば
、トリチル化された塩基およびイノシンのような普通でない塩基が挙げられる。
種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得；したがって、「ポリヌク
レオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
シリボヌクレオチドから構成され得、これは、非改変ＲＮＡもしくは非改変ＤＮ
Ａまたは改変ＲＮＡもしくは改変ＤＮＡであり得る。例えば、ポリヌクレオチド
は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ
、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物である
ＲＮＡ、一本鎖、またはより代表的には二本鎖もしくは一本鎖および二本鎖領域
の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得
る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡおよびＤ
ＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドはまた、安定
性のために、または他の理由のために改変された１つ以上の改変された塩基また
はＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格を含み得る。「改変された」塩基としては、例えば
、トリチル化された塩基およびイノシンのような普通でない塩基が挙げられる。
種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対して行われ得；したがって、「ポリヌク
レオチド」は、化学的、酵素的、または代謝的に改変された形態を含む。
【００１７】 本発明のポリペプチドは、ペプチド結合または改変されたペプチド結合、すな
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該技術分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで、改
変され得る。このような改変は、基本テキスト、およびより詳細な研究論文、な
らびに多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖
、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのどこにでも生
じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまたは
種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの
型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分枝
状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない、環状であり
得る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセス
から生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセチ
ル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部
分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または
脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、
ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、Ｇ
ＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ
化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニ
ル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質への
アミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加、およびユビキチン化が挙げられる。
（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡ
Ｒ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， 第２版， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｗ
．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１
９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩ
ＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ．Ｃ． Ｊｏｈｎｓｏｎ編，
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １−１２頁 （１９
８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６−６
４６ （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６
６３：４８−６２ （１９９２）を参照のこと）。
わち、ペプチドアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）によって互いに連結したアミ
ノ酸から構成され得、そして遺伝子がコードする２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含み得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングのような天然のプロセスに
よって、または当該技術分野で周知の化学的改変技術によってのいずれかで、改
変され得る。このような改変は、基本テキスト、およびより詳細な研究論文、な
らびに多くの研究文献に十分記載される。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖
、およびアミノ末端またはカルボキシル末端を含むポリペプチドのどこにでも生
じ得る。同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で同じまたは
種々の程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの
型の改変を含み得る。ポリペプチドは、例えば、ユビキチン化の結果として分枝
状であり得、そしてポリペプチドは、分枝を含むかまたは含まない、環状であり
得る。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチドは、天然の翻訳後プロセス
から生じ得るか、または合成方法によって作製され得る。改変としては、アセチ
ル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部
分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または
脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、
ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、Ｇ
ＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ
化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニ
ル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質への
アミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加、およびユビキチン化が挙げられる。
（例えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ−ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡ
Ｒ ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ， 第２版， Ｔ．Ｅ． Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｗ
．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１
９９３）；ＰＯＳＴＴＲＡＮＳＬＡＴＩＯＮＡＬ ＣＯＶＡＬＥＮＴ ＭＯＤＩ
ＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｂ．Ｃ． Ｊｏｈｎｓｏｎ編，
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １−１２頁 （１９
８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら， Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ １８２：６２６−６
４６ （１９９０）；Ｒａｔｔａｎら， Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６
６３：４８−６２ （１９９２）を参照のこと）。
【００１８】 「配列番号Ｘ」とは、ポリヌクレオチド配列をいうが、「配列番号Ｙ」とは、
ポリペプチド配列をいい、両方の配列とも、表１に特定された整数によって同定
される。
ポリペプチド配列をいい、両方の配列とも、表１に特定された整数によって同定
される。
【００１９】 「生物学的活性を有するポリペプチド」とは、特定の生物学的アッセイで測定
した場合、用量依存性を伴なっても伴なわなくても、本発明のポリペプチド（成
熟形態を含む）の活性と類似であるが、必ずしも同一ではない活性を示すポリペ
プチドをいう。用量依存性が存在する場合、ポリペプチドの用量依存性と同一で
ある必要はないが、むしろ本発明のポリペプチドと比較した場合に、所定の活性
における用量依存性に実質的に類似する（すなわち、候補ポリペプチドは、本発
明のポリペプチドと比較して、より大きな活性を示すか、または約１／２５以上
、そして好ましくは約１／１０以上の活性、そして最も好ましくは約１／３以上
の活性を示す）。
した場合、用量依存性を伴なっても伴なわなくても、本発明のポリペプチド（成
熟形態を含む）の活性と類似であるが、必ずしも同一ではない活性を示すポリペ
プチドをいう。用量依存性が存在する場合、ポリペプチドの用量依存性と同一で
ある必要はないが、むしろ本発明のポリペプチドと比較した場合に、所定の活性
における用量依存性に実質的に類似する（すなわち、候補ポリペプチドは、本発
明のポリペプチドと比較して、より大きな活性を示すか、または約１／２５以上
、そして好ましくは約１／１０以上の活性、そして最も好ましくは約１／３以上
の活性を示す）。
【００２０】 （本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド） （遺伝子番号１によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、抗原に対する免疫応答を調節する際に重要であると考えられる
、ヒトＴ細胞レセプター相互作用分子（ＴＲＩＭ）タンパク質と相同性を有する
ことが示された。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のア
ミノ酸配列を含む：ＩＫＩＳＬＫＫＲＳ（配列番号１０１）。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。Ｕ９３７
細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から得られた上清は、ＧＡ
Ｓ（γ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化した。したがって、この遺
伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して前骨髄細胞、またはより一
般的には、免疫細胞または他の細胞あるいは細胞型を活性化するようである。Ｇ
ＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流にみられるプロモ
ーターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖
に関与する、広範なシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合
により反映される、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に
関与するタンパク質を示すために用いられ得る。
、ヒトＴ細胞レセプター相互作用分子（ＴＲＩＭ）タンパク質と相同性を有する
ことが示された。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のア
ミノ酸配列を含む：ＩＫＩＳＬＫＫＲＳ（配列番号１０１）。これらのポリペプ
チドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって含まれる。Ｕ９３７
細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から得られた上清は、ＧＡ
Ｓ（γ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化した。したがって、この遺
伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して前骨髄細胞、またはより一
般的には、免疫細胞または他の細胞あるいは細胞型を活性化するようである。Ｇ
ＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流にみられるプロモ
ーターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化および増殖
に関与する、広範なシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメントの結合
により反映される、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に
関与するタンパク質を示すために用いられ得る。
【００２１】 この遺伝子は、主に、正常なＴ細胞、アポトーシス性Ｔ細胞、および形質転換
されたＴ細胞で発現される。
されたＴ細胞で発現される。
【００２２】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫状態、炎症状
態、および新形成状態を含むがそれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提
供に有用である。上記組織または細胞、特にリンパ系の多くの障害に関連して、
標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または
体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝
子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細
胞型（例えば、免疫組織、炎症組織、新形成組織、ならびに癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、
または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫状態、炎症状
態、および新形成状態を含むがそれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提
供に有用である。上記組織または細胞、特にリンパ系の多くの障害に関連して、
標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または
体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝
子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細
胞型（例えば、免疫組織、炎症組織、新形成組織、ならびに癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、
または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００２３】 好ましいエピトープは、配列番号５６において、残基Ｇｌｕ−３５〜Ａｓｐ−
５３、Ｍｅｔ−８２〜Ｇｌｎ−１０７、Ｖａｌ−１１７〜Ｇｌｙ−１２５として
示される配列を含むエピトープを含む。
５３、Ｍｅｔ−８２〜Ｇｌｎ−１０７、Ｖａｌ−１１７〜Ｇｌｙ−１２５として
示される配列を含むエピトープを含む。
【００２４】 ＴＲＩＭタンパク質との相同性と組み合わされ、そしてＧＡＳ生物学的活性が
検出される、アポトーシス性Ｔ細胞および形質転換されたＴ細胞における組織分
布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、炎症、血
液障害および新形成の研究および処置のために有用であることを示す。さらに、
この遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、造血細胞系列の増殖；生存；分化
；および／または活性化を調節する際に役割を示す。この遺伝子産物は、サイト
カイン産生、抗原提示、または癌の処置においてまた有用性を示唆し得る他のプ
ロセスの調節に関与し得る（例えば、免疫応答をブーストすることにより）。
検出される、アポトーシス性Ｔ細胞および形質転換されたＴ細胞における組織分
布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、炎症、血
液障害および新形成の研究および処置のために有用であることを示す。さらに、
この遺伝子産物の発現は、血液幹細胞を含む、造血細胞系列の増殖；生存；分化
；および／または活性化を調節する際に役割を示す。この遺伝子産物は、サイト
カイン産生、抗原提示、または癌の処置においてまた有用性を示唆し得る他のプ
ロセスの調節に関与し得る（例えば、免疫応答をブーストすることにより）。
【００２５】 この遺伝子はリンパ球起源の細胞において発現されるため、天然の遺伝子産物
は、免疫機能、特にＴ細胞指向性免疫応答に関与し得る。従って、これは関節炎
、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、慢性肉芽
腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏
症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害性）；移植器官および組織への免疫反応（例え
ば、対移植片性宿主病および対宿主性移植片病）、または自己免疫性障害（例え
ば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物
誘引溶血性貧血、慢性関節リウマチ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む
免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物
は、種々の血液系の幹細胞および方向付けられた前駆体の増殖において、および
種々の細胞型の分化および／または増殖において、商業的な有用性を有し得る。
タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対
する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
は、免疫機能、特にＴ細胞指向性免疫応答に関与し得る。従って、これは関節炎
、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、慢性肉芽
腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏
症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害性）；移植器官および組織への免疫反応（例え
ば、対移植片性宿主病および対宿主性移植片病）、または自己免疫性障害（例え
ば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物
誘引溶血性貧血、慢性関節リウマチ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む
免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物
は、種々の血液系の幹細胞および方向付けられた前駆体の増殖において、および
種々の細胞型の分化および／または増殖において、商業的な有用性を有し得る。
タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対
する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【００２６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１１の１〜１６９９の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
１３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１１の１〜１６９９の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
１３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００２７】 （遺伝子番号２によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主として胎盤、および少ない程度に卵巣腫瘍および精巣腫瘍、
ならびにＴ細胞において発現される。
ならびにＴ細胞において発現される。
【００２８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫状態、発生状
態、生殖状態、血管状態および／または新形成状態を含むが、これらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫
系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高
いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、発生組織、生殖組織、
血管組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血
清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で
、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫状態、発生状
態、生殖状態、血管状態および／または新形成状態を含むが、これらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫
系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高
いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、発生組織、生殖組織、
血管組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血
清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で
、慣用的に検出され得る。
【００２９】 精巣組織および卵巣組織におけるその組織分布は、この遺伝子に対応するポリ
ヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫障害および生殖障害ならびに癌の研究
および処置のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子はまた、リンパ
球起源のＴ細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与
し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、関節
リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加
症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害性）；移植器官および組織への
免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主病）、または自己免疫性
障害（例えば、自己免疫性不妊症）、水晶体組織損傷、脱髄、全身性エリテマト
ーデス、薬物誘引溶血性貧血、関節リューマチ、シェーグレン病、強皮症および
組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。
ヌクレオチドおよびポリペプチドが、免疫障害および生殖障害ならびに癌の研究
および処置のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子はまた、リンパ
球起源のＴ細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与
し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、関節
リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加
症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害性）；移植器官および組織への
免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主病）、または自己免疫性
障害（例えば、自己免疫性不妊症）、水晶体組織損傷、脱髄、全身性エリテマト
ーデス、薬物誘引溶血性貧血、関節リューマチ、シェーグレン病、強皮症および
組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。
【００３０】 さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系の幹細胞および方向付けられた前駆
体の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において、
商業的な有用性を有し得る。あるいは、このタンパク質は、微小血管疾患、血管
漏出症候群、動脈瘤、発作、アテローム硬化、動脈硬化、または塞栓症を含むが
、これらに限定されない血管状態の検出、処置および／または防止に有用である
。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に
対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
体の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において、
商業的な有用性を有し得る。あるいは、このタンパク質は、微小血管疾患、血管
漏出症候群、動脈瘤、発作、アテローム硬化、動脈硬化、または塞栓症を含むが
、これらに限定されない血管状態の検出、処置および／または防止に有用である
。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に
対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【００３１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１２の１〜２０４８の任意の整数であり、ｂは１５〜２０
６２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１２に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１２の１〜２０４８の任意の整数であり、ｂは１５〜２０
６２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１２に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３２】 （遺伝子番号３によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、ヒトの３６ｋＤａのホスホチロシンタンパク質に対する保存さ
れたＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡに相同性を有することが示された（Ｇ
ｅｎｂａｎｋ寄託番号ｇｂ｜ＡＪ２２３２８０｜ＨＳＡＪ３２８０、およびＪ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １９９８ Ａｐｒ ６；１８７（７）：１１５７−６１を参照
のこと（これらは本明細書中において参照として援用される））。このタンパク
質は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化の間のシグナル伝達において強力に、免疫
応答の調節に関与すると考えられている。特定の実施態様において、本発明のポ
リぺプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＴＲＧＬＳＴＶＳＷＴＨＴＱＰＳ
ＫＲＧＤＰＳＲＥＰＲＧＧＨＳＣＬＬＰＧＳＰＡＴＷＣＬＰＡＰＣＳＬＰＧＰＶ
ＬＴＰＳＳＳＧＬＤＳＡＬＥＧＰＲＧＡＡＳＬＬＲＡＰＬＱ（配列番号１０２）
、ＨＴＱＰＳＫＲＧＤＰＳＲＥＰＲＧＧＨＳＣＬＬＰ（配列番号１０３）、およ
び／またはＶＬＴＰＳＳＳＧＬＤＳＡＬＥＧＰＲＧＡＡＳＬ（配列番号１０４）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって
含まれる。Ｊｕｒｋｅｔ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞か
ら取り出した上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化配列）プロモーターエレメントを活
性化した。従って、この遺伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して
、Ｔ細胞、またはより一般的な免疫細胞または他の細胞および組織型を活性化す
るようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流
に見いだされるプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞
の分化および増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエ
レメントの結合によって反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増
殖および分化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。
れたＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ｍＲＮＡに相同性を有することが示された（Ｇ
ｅｎｂａｎｋ寄託番号ｇｂ｜ＡＪ２２３２８０｜ＨＳＡＪ３２８０、およびＪ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １９９８ Ａｐｒ ６；１８７（７）：１１５７−６１を参照
のこと（これらは本明細書中において参照として援用される））。このタンパク
質は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の活性化の間のシグナル伝達において強力に、免疫
応答の調節に関与すると考えられている。特定の実施態様において、本発明のポ
リぺプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＴＲＧＬＳＴＶＳＷＴＨＴＱＰＳ
ＫＲＧＤＰＳＲＥＰＲＧＧＨＳＣＬＬＰＧＳＰＡＴＷＣＬＰＡＰＣＳＬＰＧＰＶ
ＬＴＰＳＳＳＧＬＤＳＡＬＥＧＰＲＧＡＡＳＬＬＲＡＰＬＱ（配列番号１０２）
、ＨＴＱＰＳＫＲＧＤＰＳＲＥＰＲＧＧＨＳＣＬＬＰ（配列番号１０３）、およ
び／またはＶＬＴＰＳＳＳＧＬＤＳＡＬＥＧＰＲＧＡＡＳＬ（配列番号１０４）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明によって
含まれる。Ｊｕｒｋｅｔ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞か
ら取り出した上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化配列）プロモーターエレメントを活
性化した。従って、この遺伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して
、Ｔ細胞、またはより一般的な免疫細胞または他の細胞および組織型を活性化す
るようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流
に見いだされるプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞
の分化および増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエ
レメントの結合によって反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増
殖および分化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。
【００３３】 この遺伝子は、主に種々のＴ細胞株およびマクロファージ株、ならびにより少
ない程度に内皮細胞において発現される。
ない程度に内皮細胞において発現される。
【００３４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血性障害、特に、炎症、感染、または免疫不全を含むが、これらに限定されない
疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドお
よびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の
多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体
由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベ
ルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組
織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、ま
たは別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血性障害、特に、炎症、感染、または免疫不全を含むが、これらに限定されない
疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドお
よびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の
多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体
由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベ
ルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組
織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、ま
たは別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００３５】 好ましいエピトープとしては、配列番号５８で残基：Ｐｒｏ−３３〜Ｈｉｓ−
４９、Ｇｌｕ−７４〜Ｌｙｓ−８３として示される配列を含むエピトープが挙げ
られる。
４９、Ｇｌｕ−７４〜Ｌｙｓ−８３として示される配列を含むエピトープが挙げ
られる。
【００３６】 Ｔ細胞およびマクロファージにおけるその組織分布は、保存されたリン酸チロ
シンタンパク質との相同性および検出されたＧＡＳ生物的活性と相まって、この
遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、炎症および一般的な
免疫障害の研究および処置のために有用であることを示す。さらにこの遺伝子産
物の発現は、造血細胞系列（血液幹細胞を含む）の増殖；生存；分化；および／
または活性化の制御に役割を果たすこと示す。この遺伝子産物は、サイトカイン
産生、抗原提示、または（例えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処
置における有用性もまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
シンタンパク質との相同性および検出されたＧＡＳ生物的活性と相まって、この
遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、炎症および一般的な
免疫障害の研究および処置のために有用であることを示す。さらにこの遺伝子産
物の発現は、造血細胞系列（血液幹細胞を含む）の増殖；生存；分化；および／
または活性化の制御に役割を果たすこと示す。この遺伝子産物は、サイトカイン
産生、抗原提示、または（例えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処
置における有用性もまた示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
【００３７】 この遺伝子は、リンパ起源の細胞において発現するので、天然の遺伝子産物は
、免疫機能に関与し得る。従って、これらをまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのよ
うな免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血
症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細
胞傷害性）；移植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および
移植片対宿主病）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体
組織損傷、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘引溶血性貧血、関節リューマ
チ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤として
もまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系の幹細胞および
方向付けられた前駆体の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／ま
たは増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパ
ク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／また
は免疫治療の標的として有用性を示し得る。
、免疫機能に関与し得る。従って、これらをまた、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのよ
うな免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血
症、挫瘡、好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細
胞傷害性）；移植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および
移植片対宿主病）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体
組織損傷、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘引溶血性貧血、関節リューマ
チ、シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤として
もまた使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系の幹細胞および
方向付けられた前駆体の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／ま
たは増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパ
ク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／また
は免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【００３８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１３の１〜１２１０の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
２４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１３の１〜１２１０の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
２４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００３９】 （遺伝子番号４によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＡＧＳＲＴＮＮＥＱＩＥ（配列番号１０５）。これらのポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。
む：ＡＧＳＲＴＮＮＥＱＩＥ（配列番号１０５）。これらのポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。
【００４０】 この遺伝子は、主に大動脈内皮細胞、心臓細胞、および脂肪細胞において発現
される。
される。
【００４１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに代謝状態および血
管状態含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として
有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は
、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である
。上記組織または細胞、特に心血管系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現
レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベ
ル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障
害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、代謝組織、
血管組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、
血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中
で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに代謝状態および血
管状態含むが、これらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として
有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は
、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である
。上記組織または細胞、特に心血管系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現
レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベ
ル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障
害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、代謝組織、
血管組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、
血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中
で、慣用的に検出され得る。
【００４２】 大動脈内皮組織および心臓組織における組織分布は、この遺伝子に対応するポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドが、心臓血管障害および代謝障害の研究およ
び処置のために有用であることを示す。さらに一般には、このタンパク質は、微
小血管疾患、血管漏出症候群、動脈瘤、発作、アテローム硬化、動脈硬化、また
は塞栓症を含むが、これらに限定されない血管状態の検出、処置および／または
防止に有用である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に
挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用
性を示し得る。
リヌクレオチドおよびポリペプチドが、心臓血管障害および代謝障害の研究およ
び処置のために有用であることを示す。さらに一般には、このタンパク質は、微
小血管疾患、血管漏出症候群、動脈瘤、発作、アテローム硬化、動脈硬化、また
は塞栓症を含むが、これらに限定されない血管状態の検出、処置および／または
防止に有用である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に
挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用
性を示し得る。
【００４３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１４の１〜１６０７の任意の整数であり、ｂは１５〜１６
２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１４の１〜１６０７の任意の整数であり、ｂは１５〜１６
２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００４４】 （遺伝子番号５によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の転写産物は、ヒト抗原ＮＹ−ＣＯ−３８（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番
号ｇｉ｜３１７０２００（ＡＦ０３９７００）を参照のこと）に相同性を有する
ことが示された。このタンパク質は、免疫応答の調節に重要であると考えられて
いる。本発明のポリヌクレオチドは、本明細書中で参考として援用される、Ｇｅ
ｎｂａｎｋ寄託番号ｇｉ｜３１７０２００に示されるポリヌクレオチドを含まな
い。特定の実施態様において、本発明のポリぺプチドは、以下のアミノ酸配列を
含む：
号ｇｉ｜３１７０２００（ＡＦ０３９７００）を参照のこと）に相同性を有する
ことが示された。このタンパク質は、免疫応答の調節に重要であると考えられて
いる。本発明のポリヌクレオチドは、本明細書中で参考として援用される、Ｇｅ
ｎｂａｎｋ寄託番号ｇｉ｜３１７０２００に示されるポリヌクレオチドを含まな
い。特定の実施態様において、本発明のポリぺプチドは、以下のアミノ酸配列を
含む：
【００４５】
【化１】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる
。
。
【００４６】 この遺伝子は、主に精巣上体、およびより少ない程度に単核細胞において発現
される。
される。
【００４７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに生殖障害および免
疫障害、特に、自己免疫状態および／または不妊症を含むが、それらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖
系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高
いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、生殖組織、免疫組織、ならびに癌
性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液
および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され
得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに生殖障害および免
疫障害、特に、自己免疫状態および／または不妊症を含むが、それらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に生殖
系および免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障
害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高
いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採
取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、生殖組織、免疫組織、ならびに癌
性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液
および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され
得る。
【００４８】 好ましいエピトープとしては、配列番号６０で残基：Ｐｒｏ−１８〜Ｌｙｓ−
２６として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
２６として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００４９】 精巣上体および単球における組織分布は、ＮＹ−ＣＯ−３８抗原との相同性と
相まって、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、不妊
症を含む精巣上体の異常の診断および処置のために有用であることを示す。さら
にこのタンパク質は、避妊薬の開発、免疫応答の調節（例えば、活性化または抑
制）、または炎症状態において使用され得る。タンパク質ならびにこのタンパク
質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または
免疫治療の標的として有用性を示し得る。
相まって、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、不妊
症を含む精巣上体の異常の診断および処置のために有用であることを示す。さら
にこのタンパク質は、避妊薬の開発、免疫応答の調節（例えば、活性化または抑
制）、または炎症状態において使用され得る。タンパク質ならびにこのタンパク
質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または
免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【００５０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１５の１〜１４０６の任意の整数であり、ｂは１５〜１４
２０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１５に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１５の１〜１４０６の任意の整数であり、ｂは１５〜１４
２０の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１５に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５１】 （遺伝子番号６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に好中球において発現される。
【００５２】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血性障害、特に、急性炎症反応を含むが、それらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プ
ローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関
して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織
または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子
の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞
型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織も
しくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血性障害、特に、急性炎症反応を含むが、それらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プ
ローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関
して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織
または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子
の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞
型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組織も
しくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００５３】 好ましいエピトープとしては、配列番号６１中で残基：Ｇｌｙ−１８〜Ｓｅｒ
−２７、Ｇｌｙ−４６〜Ａｓｐ−５１として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
−２７、Ｇｌｙ−４６〜Ａｓｐ−５１として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
【００５４】 好中球におけるその組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドが、敗血症性ショックおよび急性炎症状態のような好中球媒介疾
患の処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子産物の発現は、血液幹細
胞を含む、造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節にお
いて役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または（例
えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性をまた示唆
し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
びポリペプチドが、敗血症性ショックおよび急性炎症状態のような好中球媒介疾
患の処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子産物の発現は、血液幹細
胞を含む、造血細胞系列の増殖；生存；分化；および／または活性化の調節にお
いて役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、または（例
えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性をまた示唆
し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
【００５５】 この遺伝子はリンパ球起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産物
は、免疫機能に関与し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全
疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好
中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞毒性）；移
植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主病
の疾患）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷害
、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導溶血性貧血、慢性関節リューマチ、
シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもま
た使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方
向付けられた前駆体の拡大において、および種々の細胞型の分化および／または
増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫療法の標的として有用性を示し得る。
は、免疫機能に関与し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全
疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、好
中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞毒性）；移
植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主病
の疾患）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷害
、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導溶血性貧血、慢性関節リューマチ、
シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤としてもま
た使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および方
向付けられた前駆体の拡大において、および種々の細胞型の分化および／または
増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫療法の標的として有用性を示し得る。
【００５６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１６の１〜１０２１の任意の整数であり、ｂは１５〜１０
３５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１６に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１６の１〜１０２１の任意の整数であり、ｂは１５〜１０
３５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１６に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００５７】 （遺伝子番号７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に脳前頭皮質において発現される。
【００５８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、および神経障害（特に、中
枢神経系（ＣＮＳ）および脳前頭皮質の疾患）を含むが、これらに限定されない
、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳ
の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別
の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、および神経障害（特に、中
枢神経系（ＣＮＳ）および脳前頭皮質の疾患）を含むが、これらに限定されない
、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳ
の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有していない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別
の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００５９】 好ましいエピトープとしては、配列番号６２中で残基：Ａｓｎ−１７〜Ａｒｇ
−２９、Ｇｌｙ−３７〜Ｃｙｓ−４５として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
−２９、Ｇｌｙ−３７〜Ｃｙｓ−４５として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
【００６０】 前頭皮質におけるその組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドお
よびポリペプチドが、ＣＮＳの疾患の研究、診断および処置に有用であることを
示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、アルツハイマー病、パーキンソ
ン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢性壊疽
、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄損傷、虚血および梗塞、動脈瘤、出血、精神
分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、
ＡＬＳ、精神病、自閉、ならびに行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、お
よび知覚の障害を含む）を含むが、これらに限定されない、神経変性疾患状態お
よび行動障害または炎症状態の検出、処置および／または予防のために有用であ
る。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の上昇された発現は、この遺伝子
産物が、正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝
子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認知、ホメオスタシス、または神経
分化もしくは生存に関する。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体
は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的と
しての有用性を示し得る。
よびポリペプチドが、ＣＮＳの疾患の研究、診断および処置に有用であることを
示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、アルツハイマー病、パーキンソ
ン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢性壊疽
、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄損傷、虚血および梗塞、動脈瘤、出血、精神
分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、
ＡＬＳ、精神病、自閉、ならびに行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、お
よび知覚の障害を含む）を含むが、これらに限定されない、神経変性疾患状態お
よび行動障害または炎症状態の検出、処置および／または予防のために有用であ
る。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の上昇された発現は、この遺伝子
産物が、正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝
子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認知、ホメオスタシス、または神経
分化もしくは生存に関する。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体
は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的と
しての有用性を示し得る。
【００６１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは、配列番号１７の１〜８４４の任意の整数であり、ｂは、１５〜８
５８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１７に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは、配列番号１７の１〜８４４の任意の整数であり、ｂは、１５〜８
５８の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１７に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００６２】 (遺伝子番号８によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＨＴＭＬＰＬＫＩＡＡＰＹＬＬＥＮＣＳＣＰＩＹＩＳＴＳＰＨＬＦＬＳＴ（
配列番号１１５）。これらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドは
また、本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第２０
染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは
、第２０染色体の連鎖解析においてマーカーとして有用である。
む：ＨＴＭＬＰＬＫＩＡＡＰＹＬＬＥＮＣＳＣＰＩＹＩＳＴＳＰＨＬＦＬＳＴ（
配列番号１１５）。これらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドは
また、本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第２０
染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは
、第２０染色体の連鎖解析においてマーカーとして有用である。
【００６３】 この遺伝子は、主に、Ｔ細胞において発現される。
【００６４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、白血病、リンパ腫、造血障害、自己免疫、免疫不全症）を含むが
これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。
同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または
細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供において有用である。上記
の組織または細胞、特に免疫系の多数の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル
（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に
対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような
障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織
、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、
血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの
中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、白血病、リンパ腫、造血障害、自己免疫、免疫不全症）を含むが
これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。
同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または
細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供において有用である。上記
の組織または細胞、特に免疫系の多数の障害に関して、標準の遺伝子発現レベル
（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に
対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような
障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織
、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、
血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの
中で、慣用的に検出され得る。
【００６５】 好ましいエピトープとしては、配列番号６３中で残基：Ｈｉｓ−３１〜Ａｌａ
−４０として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−４０として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００６６】 Ｔ細胞におけるその組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドが、以下を含む免疫障害の診断および処置に有用であることを示
す：白血病、リンパ腫、自己免疫、免疫不全症（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制
状態（移植）および造血障害。さらにこの遺伝子産物は、一般的微生物感染、炎
症または癌の状態において適用可能であり得る。さらに、この遺伝子産物の発現
は、血液幹細胞を含む造血細胞系の増殖、生存、分化、および／または活性化の
調節おいて役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、また
は（例えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性をま
た示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
びポリペプチドが、以下を含む免疫障害の診断および処置に有用であることを示
す：白血病、リンパ腫、自己免疫、免疫不全症（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制
状態（移植）および造血障害。さらにこの遺伝子産物は、一般的微生物感染、炎
症または癌の状態において適用可能であり得る。さらに、この遺伝子産物の発現
は、血液幹細胞を含む造血細胞系の増殖、生存、分化、および／または活性化の
調節おいて役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、抗原提示、また
は（例えば、免疫応答をブーストすることによる）癌の処置における有用性をま
た示唆し得る他のプロセスの調節に関与し得る。
【００６７】 この遺伝子はリンパ球様起源の細胞において発現されるので、天然の遺伝子産
物は、免疫機能に関与し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不
全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、
好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞毒性）；
移植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主
病の疾患）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷
害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導溶血性貧血、慢性関節リューマチ
、シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤としても
また使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および
方向付けられた前駆体の拡大において、および種々の細胞型の分化および／また
は増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク
質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または
免疫療法の標的として有用性を示し得る。
物は、免疫機能に関与し得る。従って、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不
全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、
好中球減少症、好中球増加症、乾癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞毒性）；
移植器官および組織への免疫反応（例えば、宿主対移植片病および移植片対宿主
病の疾患）、または自己免疫性障害（例えば、自己免疫不妊症）、水晶体組織傷
害、脱髄、全身性エリテマトーデス、薬物誘導溶血性貧血、慢性関節リューマチ
、シェーグレン病、強皮症および組織を含む免疫学的障害のための薬剤としても
また使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および
方向付けられた前駆体の拡大において、および種々の細胞型の分化および／また
は増殖において、商業的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク
質に対する抗体は、上記に列挙された組織に対する腫瘍マーカーおよび／または
免疫療法の標的として有用性を示し得る。
【００６８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは、配列番号１８の１〜９２２の任意の整数であり、ｂは、１５〜９
３６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１８に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは、配列番号１８の１〜９２２の任意の整数であり、ｂは、１５〜９
３６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号１８に示されるヌクレ
オチド残基の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１
つ以上のポリヌクレオチドが除外される。
【００６９】 (遺伝子番号９によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＦＳＩＬＦＡＦＶＬＦＹＰＧＳＦＦＴＬＰ（配列番号１１６）。これらのポ
リペプチドをコードしているポリヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
む：ＦＳＩＬＦＡＦＶＬＦＹＰＧＳＦＦＴＬＰ（配列番号１１６）。これらのポ
リペプチドをコードしているポリヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
【００７０】 この遺伝子は、主に、松果体、骨髄、胎児肝臓および胎盤で発現される。
【００７１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに内分泌障害、免疫
障害、造血障害、または生殖障害、特に血液形成細胞の癌を含むがそれらに限定
されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示
的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特
に免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有
さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高い
またはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から
採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、内分泌組織、免疫組織、造血組
織、生殖組織ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、
血清、血漿、羊水、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに内分泌障害、免疫
障害、造血障害、または生殖障害、特に血液形成細胞の癌を含むがそれらに限定
されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示
的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特
に免疫系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有
さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高い
またはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から
採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、内分泌組織、免疫組織、造血組
織、生殖組織ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、
血清、血漿、羊水、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
【００７２】 好ましいエピトープとしては、配列番号６４中で残基：Ｃｙｓ−２９〜Ｓｅｒ
−４１として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−４１として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００７３】 骨髄および胎児肝臓におけるこの遺伝子の組織分布は、この遺伝子に対応する
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、リンパ腫および白血病を含む血液の障
害のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物はまた
、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症または白血病のような造血
関連障害の処置および診断に有用である。なぜなら、間質細胞は、造血系統の細
胞の産生において重要だからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構成、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球新生に関与し得、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などの
ような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、様々な血液
系統の幹細胞および関係付けられた前駆体の拡大において、および様々な細胞型
の分化および／または増殖において商業上の有用性を有し得る。あるいは、この
タンパク質は、種々の内分泌障害または生殖障害（特に、不妊症）、ならびに生
物時計障害およびイオンホメオスタシス障害の検出、処置、および／または予防
において有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用
性を示し得る。
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、リンパ腫および白血病を含む血液の障
害のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物はまた
、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症または白血病のような造血
関連障害の処置および診断に有用である。なぜなら、間質細胞は、造血系統の細
胞の産生において重要だからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構成、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球新生に関与し得、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などの
ような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、様々な血液
系統の幹細胞および関係付けられた前駆体の拡大において、および様々な細胞型
の分化および／または増殖において商業上の有用性を有し得る。あるいは、この
タンパク質は、種々の内分泌障害または生殖障害（特に、不妊症）、ならびに生
物時計障害およびイオンホメオスタシス障害の検出、処置、および／または予防
において有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用
性を示し得る。
【００７４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１９の１〜５９９の任意の整数であり、ｂは１５〜６１３
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１９に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号１９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号１９の１〜５９９の任意の整数であり、ｂは１５〜６１３
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号１９に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【００７５】 (遺伝子番号１０によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子の翻訳産物は、形態学的整合性および虚血後の腎臓に対する機能の
調節において重要な役割を果たすと考えられる、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉ
ｃｕｓの腎臓傷害分子−１と配列相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅ ｓｓｉｏｎ 番号ｇｉ｜２６６５８９２（ＡＦ０３５９６３）参照のこと）。本 発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、新しい組織の増殖および損傷さ
れた組織の生存を促進するために有用である。本発明の組換えポリペプチドは、
請求項に記載されるプロセスを使用して、原核生物宿主細胞および真核生物宿主
細胞において発現され得る。毒素、考えられ得る化合物または放射性核種と融合
した改変体、およびＩｇＧ融合タンパク質もまた、請求項に記載される。
調節において重要な役割を果たすと考えられる、Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉ
ｃｕｓの腎臓傷害分子−１と配列相同性を共有する（Ｇｅｎｂａｎｋ Ａｃｃｅ ｓｓｉｏｎ 番号ｇｉ｜２６６５８９２（ＡＦ０３５９６３）参照のこと）。本 発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、新しい組織の増殖および損傷さ
れた組織の生存を促進するために有用である。本発明の組換えポリペプチドは、
請求項に記載されるプロセスを使用して、原核生物宿主細胞および真核生物宿主
細胞において発現され得る。毒素、考えられ得る化合物または放射性核種と融合
した改変体、およびＩｇＧ融合タンパク質もまた、請求項に記載される。
【００７６】 本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドまたはアゴニストは、腎臓疾患
を処置するために、および新しい組織の増殖または損傷された組織の生存を促進
するために、一般に、本発明の特異的リガンドの結合が、細胞増殖を刺激するか
、細胞分化を維持するか、またはアポトーシスを減少する条件で、例えば、腎不
全、腎炎、腎臓移植、毒性傷害または低酸素性傷害の場合に、使用され得る。本
発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、
例えば、リガンドへの本発明の結合が、新形成、細胞機能の損失、アポトーシス
に対する感受性または炎症の促進を生じる場合に、腎臓疾患を処置するために、
本発明をインビボでまたはインビトロで発現する細胞に結像剤を送達するために
、および免疫アッセイにより本発明の濃度を測定するために、使用され得る。腎
臓細胞の損傷／再生は、本発明を測定することにより、特に、疾患または治療の
進行を、診断あるいはモニターするために、決定し得る。
を処置するために、および新しい組織の増殖または損傷された組織の生存を促進
するために、一般に、本発明の特異的リガンドの結合が、細胞増殖を刺激するか
、細胞分化を維持するか、またはアポトーシスを減少する条件で、例えば、腎不
全、腎炎、腎臓移植、毒性傷害または低酸素性傷害の場合に、使用され得る。本
発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、
例えば、リガンドへの本発明の結合が、新形成、細胞機能の損失、アポトーシス
に対する感受性または炎症の促進を生じる場合に、腎臓疾患を処置するために、
本発明をインビボでまたはインビトロで発現する細胞に結像剤を送達するために
、および免疫アッセイにより本発明の濃度を測定するために、使用され得る。腎
臓細胞の損傷／再生は、本発明を測定することにより、特に、疾患または治療の
進行を、診断あるいはモニターするために、決定し得る。
【００７７】 本発明を発現する腫瘍細胞は、本発明のリガンドを含む融合タンパク質か、ま
たは毒素もしくは放射性核種を有するＭＡｂでの処置により阻害し得る。そして
、本発明のリガンドを発現する腫瘍細胞は、同様にタグ化された本発明のポリペ
プチドまたは抗本発明のリガンド抗体で、阻害され得る。特定の実施態様におい
て、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＨＥＳＴＶＫ（配列番号１
１７）を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本
発明に包含される。
たは毒素もしくは放射性核種を有するＭＡｂでの処置により阻害し得る。そして
、本発明のリガンドを発現する腫瘍細胞は、同様にタグ化された本発明のポリペ
プチドまたは抗本発明のリガンド抗体で、阻害され得る。特定の実施態様におい
て、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：ＨＥＳＴＶＫ（配列番号１
１７）を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本
発明に包含される。
【００７８】 この遺伝子は、主に、幼児脳および胎児肝臓、ならびにより少ない程度で、新
形成細胞株および内分泌器官において発現されることが、発見されている。
形成細胞株および内分泌器官において発現されることが、発見されている。
【００７９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、神経障
害、内分泌障害、および増殖障害を含むが、これらに限定されない、疾患および
状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および内分泌
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、神経組織、内分泌組織、増
殖組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清
、血漿、尿、羊水、胆汁、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、神経障
害、内分泌障害、および増殖障害を含むが、これらに限定されない、疾患および
状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれら
のポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学
的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および内分泌
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、神経組織、内分泌組織、増
殖組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清
、血漿、尿、羊水、胆汁、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
【００８０】 好ましいエピトープとしては、配列番号６５において残基：Ｓｅｒ−４４〜Ｓ
ｅｒ−５１、Ｃｙｓ−５３〜Ｃｙｓ−６４、Ｖａｌ−７６〜Ｌｙｓ−８３、Ｐｒ
ｏ−１０２〜Ｇｌｙ−１０８、Ａｒｇ−１３３〜Ｔｈｒ−１６２、Ｔｈｒ−１６
９〜Ｌｙｓ−１８３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
ｅｒ−５１、Ｃｙｓ−５３〜Ｃｙｓ−６４、Ｖａｌ−７６〜Ｌｙｓ−８３、Ｐｒ
ｏ−１０２〜Ｇｌｙ−１０８、Ａｒｇ−１３３〜Ｔｈｒ−１６２、Ｔｈｒ−１６
９〜Ｌｙｓ−１８３として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００８１】 胎児肝臓および乳児脳における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレ
オチドおよびポリペプチドが、免疫状態および発達状態の研究および処置のため
に有用であることを示す。さらに、増殖する細胞により特徴付けられる乳児組織
および胎児組織ならびに他の細胞供給源での発現は、このタンパク質が細胞分裂
の調節において役割を果たし得、そして、癌および他の増殖性障害の診断および
処置において有用性を示し得ることを示す。同様に、発生組織は、パターン形成
における細胞分化および／またはアポトーシスに関する決定に依存する。従って
、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そして、癌
治療においてまた有用で有り得る。あるいは、この遺伝子のタンパク質産物は、
腎不全、腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｕｓ）、尿細管性アシドーシス、蛋白尿、膿尿、
水腫、腎盂腎炎、水腎（ｈｙｄｒｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群、
圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛および腎臓結石、さらにウィルムス腫瘍
疾患、および先天性の腎臓異常（例えば、馬蹄腎、多発性嚢胞腎、およびファル
コーニ（Ｆａｌｃｏｎｉ）症候群）を含む腎臓疾患の処置および／または検出に
おいて使用され得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上
記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての
有用性を示し得る。
オチドおよびポリペプチドが、免疫状態および発達状態の研究および処置のため
に有用であることを示す。さらに、増殖する細胞により特徴付けられる乳児組織
および胎児組織ならびに他の細胞供給源での発現は、このタンパク質が細胞分裂
の調節において役割を果たし得、そして、癌および他の増殖性障害の診断および
処置において有用性を示し得ることを示す。同様に、発生組織は、パターン形成
における細胞分化および／またはアポトーシスに関する決定に依存する。従って
、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組織分化に関与し得、そして、癌
治療においてまた有用で有り得る。あるいは、この遺伝子のタンパク質産物は、
腎不全、腎炎（ｎｅｐｈｒｉｔｕｓ）、尿細管性アシドーシス、蛋白尿、膿尿、
水腫、腎盂腎炎、水腎（ｈｙｄｒｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ）、ネフローゼ症候群、
圧挫症候群、糸球体腎炎、血尿、腎仙痛および腎臓結石、さらにウィルムス腫瘍
疾患、および先天性の腎臓異常（例えば、馬蹄腎、多発性嚢胞腎、およびファル
コーニ（Ｆａｌｃｏｎｉ）症候群）を含む腎臓疾患の処置および／または検出に
おいて使用され得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上
記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての
有用性を示し得る。
【００８２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２０の１〜５５７の任意の整数であり、ｂは１５〜５７１
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２０に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２０の１〜５５７の任意の整数であり、ｂは１５〜５７１
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２０に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【００８３】 （遺伝子番号１１によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＬＥＮＬＧＴＨＫＫＫＤＳＦＳＶＫＴＶＧＩＣＣＣＦＨＬＮ（配列番号１１
８）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に包
含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１４染色体に存在する
と考えられる。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは、第１４染色体の
連鎖解析においてマーカーとして有用である。
む：ＬＥＮＬＧＴＨＫＫＫＤＳＦＳＶＫＴＶＧＩＣＣＣＦＨＬＮ（配列番号１１
８）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に包
含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１４染色体に存在する
と考えられる。従って、本発明に関連したポリヌクレオチドは、第１４染色体の
連鎖解析においてマーカーとして有用である。
【００８４】 この遺伝子は、主に乳児脳、およびより低い程度で単球において発現される。
【００８５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、免疫障
害、または発達障害（特に、乳児脳の異常）を包含するがそれらに限定されない
疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドお
よびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に中枢神経
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、免疫組織、発生組織、なら
びに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、
羊水、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的
に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、免疫障
害、または発達障害（特に、乳児脳の異常）を包含するがそれらに限定されない
疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドお
よびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のた
めの免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に中枢神経
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、免疫組織、発生組織、なら
びに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、
羊水、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的
に検出され得る。
【００８６】 乳児脳および単球における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、中枢神経系異常の診断および処置のために有用である
ことを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神経変性疾患状態、行動
障害、または炎症状態（これは、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチン
トン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外
傷、先天異常、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁
病、痴呆、偏執症、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病
、自閉、ならびに行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害
を含む）を含むが、これらに限定されない）の検出、処置、および／または予防
のために有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現の上昇は
、それが正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝
子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、またはニューロンの
分化もしくは生存に関与する。このタンパク質はまた、自己抗原に対する免疫応
答を調節することにおいても、有用であり得る。
ドおよびポリペプチドが、中枢神経系異常の診断および処置のために有用である
ことを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神経変性疾患状態、行動
障害、または炎症状態（これは、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチン
トン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外
傷、先天異常、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁
病、痴呆、偏執症、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病
、自閉、ならびに行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害
を含む）を含むが、これらに限定されない）の検出、処置、および／または予防
のために有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現の上昇は
、それが正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝
子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、またはニューロンの
分化もしくは生存に関与する。このタンパク質はまた、自己抗原に対する免疫応
答を調節することにおいても、有用であり得る。
【００８７】 さらに、胚組織および増殖する細胞によって特徴付けられた他の細胞供給源内
の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌
および他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシ
スに関する決定に依存する。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは
組織分化に関与し得、そして癌治療においてもまた有用であり得る。タンパク質
、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍
マーカーおよび／または免疫治療標的として有用性を示し得る。
の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌
および他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシ
スに関する決定に依存する。従ってこのタンパク質はまた、アポトーシスまたは
組織分化に関与し得、そして癌治療においてもまた有用であり得る。タンパク質
、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍
マーカーおよび／または免疫治療標的として有用性を示し得る。
【００８８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２１の１〜２０１０の任意の整数であり、ｂは１５〜２０
２４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２１の１〜２０１０の任意の整数であり、ｂは１５〜２０
２４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【００８９】 （遺伝子番号１２によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＦＴＫＣＦＨ（配列番号１１９）。これらのポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
む：ＦＴＫＣＦＨ（配列番号１１９）。これらのポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
【００９０】 この遺伝子は主に、活性化された単球において発現される。
【００９１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、単核細胞症）を包含するがそれらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プ
ローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関
して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織
または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこ
の遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もし
くは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の
組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、単核細胞症）を包含するがそれらに限定されない疾患および状態
の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポ
リペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プ
ローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関
して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織
または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこ
の遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もし
くは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の
組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００９２】 好ましいエピトープとしては、配列番号６７において残基：Ｓｅｒ−２７〜Ａ
ｒｇ−３９、Ｐｒｏ−９１〜Ａｒｇ−１００として示される配列を含むエピトー
プが挙げられる。
ｒｇ−３９、Ｐｒｏ−９１〜Ａｒｇ−１００として示される配列を含むエピトー
プが挙げられる。
【００９３】 単球における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドが、単核細胞症のような単球の疾患の診断および処置のために有用であ
ることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎血球減少症、
白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連した障害の処置
および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞産生において
重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄
再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産物はまた、リ
ンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などのよ
うな免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系
列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならびに種々の細胞
型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質なら
びにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカ
ーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
ペプチドが、単核細胞症のような単球の疾患の診断および処置のために有用であ
ることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎血球減少症、
白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連した障害の処置
および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞産生において
重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄
再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産物はまた、リ
ンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などのよ
うな免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系
列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならびに種々の細胞
型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質なら
びにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカ
ーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【００９４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２２の１〜５６１の任意の整数であり、ｂは１５〜５７５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２２に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２２の１〜５６１の任意の整数であり、ｂは１５〜５７５
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２２に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【００９５】 (遺伝子番号１３によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＱＮＭＮＤＹＮＩ（配列番号１２０）。これらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
む：ＱＮＭＮＤＹＮＩ（配列番号１２０）。これらのポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドはまた、本発明に包含される。
【００９６】 この遺伝子は主に、骨髄細胞株において発現される。
【００９７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、免疫不全）を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織ま
たは体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組
織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害または造
血障害（特に、免疫不全）を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系の多くの障害に関し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織ま
たは体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液および髄液）、または別の組
織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【００９８】 好ましいエピトープとしては、配列番号６８において残基：Ａｒｇ−２６〜Ｔ
ｒｐ−３２として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
ｒｐ−３２として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【００９９】 骨髄細胞における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドが、免疫不全のような、骨髄に関連した異常の診断および処置のた
めに有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎
血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連し
た障害の処置および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞
産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などのような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、
種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならび
に種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タ
ンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織について
の腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
ポリペプチドが、免疫不全のような、骨髄に関連した異常の診断および処置のた
めに有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎
血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連し
た障害の処置および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞
産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などのような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、
種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならび
に種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。タ
ンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織について
の腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１００】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２３の１〜１１６７の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
８１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２３の１〜１１６７の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
８１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１０１】 (遺伝子番号１４によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＰＡＲＨＬＷＴＰＳＰＶＣＫＰＳＩＫＰＨＶＳＦＡＧＳＧＳＬＷＲＬＥＰＹ
ＡＦＰＩＥＶＮＲＧＳＡＱＨＷＶＰＧ（配列番号１２１）、および／またはＶＣ
ＫＰＳＩＫＰＨＶＳＦＡＧＳＧＳＬＷＲＬＥＰＹＡＦＰＩＥ（配列番号１２２）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に包含さ
れる。
む：ＰＡＲＨＬＷＴＰＳＰＶＣＫＰＳＩＫＰＨＶＳＦＡＧＳＧＳＬＷＲＬＥＰＹ
ＡＦＰＩＥＶＮＲＧＳＡＱＨＷＶＰＧ（配列番号１２１）、および／またはＶＣ
ＫＰＳＩＫＰＨＶＳＦＡＧＳＧＳＬＷＲＬＥＰＹＡＦＰＩＥ（配列番号１２２）
。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、本発明に包含さ
れる。
【０１０２】 この遺伝子は主に、胎児肝臓および脳において発現される。
【０１０３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、代謝障
害、または発達障害（特に、胎児の免疫不全）を包含するがそれらに限定されな
い疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系
の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個
体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはよ
り低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取され
た特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、代謝組織、発生組織、ならび
に癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、羊
水、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、代謝障
害、または発達障害（特に、胎児の免疫不全）を包含するがそれらに限定されな
い疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチド
およびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定の
ための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系
の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個
体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはよ
り低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取され
た特定の組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、代謝組織、発生組織、ならび
に癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、羊
水、滑液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
【０１０４】 好ましいエピトープとしては、配列番号６９において残基：Ｍｅｔ−２４〜Ａ
ｒｇ−２９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
ｒｇ−２９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１０５】 胎児肝臓における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドが、胎児の免疫不全のような胎児肝臓の異常の診断および処置のた
めに有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎
血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連し
た障害の処置および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞
産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などのような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、
種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならび
に種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。
ポリペプチドが、胎児の免疫不全のような胎児肝臓の異常の診断および処置のた
めに有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、貧血、汎
血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造血に関連し
た障害の処置および診断に有用である。なぜなら、支質細胞が、造血系列の細胞
産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ培養、骨
髄移植、骨髄再構築、新形成の放射線療法または化学療法を含む。この遺伝子産
物はまた、リンパ球産生に関与し得、そのため、感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などのような免疫障害において使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、
種々の血液系列の幹細胞および方向付けられた前駆細胞の拡大において、ならび
に種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的有用性を有し得る。
【０１０６】 あるいは、この遺伝子のタンパク質産物は、神経変性疾患状態、行動障害また
は炎症状態（これは、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病
、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外傷、先
天性異常、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、
痴呆、偏執症、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自
閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む
）を含むが、これらの限定されない）の検出、処置および／または予防に有用で
ある。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現の上昇は、それが正常な
神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝子産物は、シナ
プス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、あるいはニューロンの分化または生
存に関連する。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列
挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性
を示し得る。
は炎症状態（これは、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病
、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外傷、先
天性異常、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、
痴呆、偏執症、強迫性障害、鬱病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自
閉、および行動変化（栄養補給、睡眠パターン、平衡、および知覚の障害を含む
）を含むが、これらの限定されない）の検出、処置および／または予防に有用で
ある。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現の上昇は、それが正常な
神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この遺伝子産物は、シナ
プス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、あるいはニューロンの分化または生
存に関連する。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列
挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性
を示し得る。
【０１０７】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２４の１〜１７５１の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
６５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２４の１〜１７５１の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
６５の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１０８】 （遺伝子番号１５によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＱＦＳＦＬＳＡＫＧＬＨＷＡＬＦＶＦＦＹＦＬＳＴＡＣＱＲＷＡＷＧＬ（配
列番号１２３）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、
この発明に含まれる。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１染色体に
存在すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、第１染色
体の連鎖分析におけるマーカーとして有用である。
む：ＱＦＳＦＬＳＡＫＧＬＨＷＡＬＦＶＦＦＹＦＬＳＴＡＣＱＲＷＡＷＧＬ（配
列番号１２３）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、
この発明に含まれる。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１染色体に
存在すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは、第１染色
体の連鎖分析におけるマーカーとして有用である。
【０１０９】 この遺伝子は主に胎盤、乳房、精巣、胎児肝臓で発現され、そしてより低い程
度に内分泌器官で発現される。
度に内分泌器官で発現される。
【０１１０】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖状態およびホ
ルモン状態を包含するがそれらに限定されない疾患ならびに状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特に性腺系および内分泌系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組
織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、生殖組織、内分泌組織、発達組織、ならびに癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、精液、母乳、
羊水、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖状態およびホ
ルモン状態を包含するがそれらに限定されない疾患ならびに状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特に性腺系および内分泌系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組
織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、生殖組織、内分泌組織、発達組織、ならびに癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、精液、母乳、
羊水、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
【０１１１】 好ましいエピトープとしては、配列番号７０において、残基Ｔｈｒ−１５〜Ｔ
ｒｐ−２１、Ｖａｌ−３３〜Ｇｌｎ−３９として示される配列を含むエピトープ
が挙げられる。
ｒｐ−２１、Ｖａｌ−３３〜Ｇｌｎ−３９として示される配列を含むエピトープ
が挙げられる。
【０１１２】 胎盤、乳房および精巣の組織分布は、ポリヌクレオチドおよびこの遺伝子に対
応するポリペプチドが、生殖障害およびホルモン障害の研究および処置のために
有用であることを示す。さらに、このタンパク質は、種々の代謝障害（例えば、
テイ−サックス病、フェニルケトン尿症、ガラクトース血症、高脂血症、ポルフ
ィリン症、およびフルラー症候群）の診断、予防、および／または処置において
有用である。さらに、胎児組織および増殖細胞により特徴付けられた他の細胞供
給源における発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得
ること、そして癌および他の増殖性障害の診断ならびに処置における有用性を示
し得ることを示す。同様に、発達組織は、パターン形成における細胞分化および
／またはアポトーシスを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、
アポトーシスまたは組織分化に関連し得、そしてまた、癌治療において有用であ
り得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した
組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し
得る。
応するポリペプチドが、生殖障害およびホルモン障害の研究および処置のために
有用であることを示す。さらに、このタンパク質は、種々の代謝障害（例えば、
テイ−サックス病、フェニルケトン尿症、ガラクトース血症、高脂血症、ポルフ
ィリン症、およびフルラー症候群）の診断、予防、および／または処置において
有用である。さらに、胎児組織および増殖細胞により特徴付けられた他の細胞供
給源における発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得
ること、そして癌および他の増殖性障害の診断ならびに処置における有用性を示
し得ることを示す。同様に、発達組織は、パターン形成における細胞分化および
／またはアポトーシスを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、
アポトーシスまたは組織分化に関連し得、そしてまた、癌治療において有用であ
り得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した
組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し
得る。
【０１１３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２５の１〜８７７の任意の整数であり、ｂは１５〜８９１
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２５に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２５の１〜８７７の任意の整数であり、ｂは１５〜８９１
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２５に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１１４】 （遺伝子番号１６によってコードされるタンパク質の特徴） Ｊｕｒｋｅｔ細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から除去さ
れた上清は、ＧＡＳ（γ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化した。し
たがって、この遺伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介してＴ細胞、
あるいはより一般的には、免疫細胞または他の細胞もしくは他の細胞型を活性化
するようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上
流にみられるプロモーターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は大き
く、細胞の分化および増殖に関与するシグナル伝達経路である。したがって、Ｊ
ａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化（ＧＡＳ要素の結合により反映される）は、細胞の
増殖および分化に関与するタンパク質を示すために用いられ得る この遺伝子は、主にＣＤ３４枯渇臍帯血において発現される。
れた上清は、ＧＡＳ（γ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化した。し
たがって、この遺伝子は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介してＴ細胞、
あるいはより一般的には、免疫細胞または他の細胞もしくは他の細胞型を活性化
するようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上
流にみられるプロモーターエレメントである。このＪａｋ−ＳＴＡＴ経路は大き
く、細胞の分化および増殖に関与するシグナル伝達経路である。したがって、Ｊ
ａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化（ＧＡＳ要素の結合により反映される）は、細胞の
増殖および分化に関与するタンパク質を示すために用いられ得る この遺伝子は、主にＣＤ３４枯渇臍帯血において発現される。
【０１１５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫状態および造
血状態を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として
有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は
、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供において有用
である。上記の組織または細胞、特に免疫系および造血系の多数の障害において
、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織また
は体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発
現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（
例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（
例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、羊水、滑液および髄液）、または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫状態および造
血状態を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として
有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は
、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供において有用
である。上記の組織または細胞、特に免疫系および造血系の多数の障害において
、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織また
は体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発
現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（
例えば、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（
例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、羊水、滑液および髄液）、または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１１６】 好ましいエピトープは配列番号７１において残基：Ｇｌｎ−２６〜Ｈｉｓ−３
４として示される配列を含むエピトープである。
４として示される配列を含むエピトープである。
【０１１７】 検出されたＧＡＳ生物学的活性と組み合わせて、ＣＤ３４枯渇臍帯血における
この組織分布は、ポリヌクレオチドおよびこの遺伝子に対応するポリペプチドが
免疫学的障害および血液障害の研究ならびに処置に有用であることを示す。さら
に、この遺伝子のタンパク質産物は、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球減少
症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病）の処置および診断のために有
用である。なぜならば、間質細胞は、造血系の細胞産生において重要であるから
である。この使用は、骨髄細胞のエクスビボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新生
物の放射線治療または化学療法を含む。この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に
関与し得る。従って、これは、免疫障害、例えば感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などに使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および方向付けら
れた種々の血液系前駆体の拡大、ならびに種々の細胞タイプの分化および／また
は増殖において市場的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療の標的として有用性を示し得る。
この組織分布は、ポリヌクレオチドおよびこの遺伝子に対応するポリペプチドが
免疫学的障害および血液障害の研究ならびに処置に有用であることを示す。さら
に、この遺伝子のタンパク質産物は、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球減少
症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病）の処置および診断のために有
用である。なぜならば、間質細胞は、造血系の細胞産生において重要であるから
である。この使用は、骨髄細胞のエクスビボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新生
物の放射線治療または化学療法を含む。この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に
関与し得る。従って、これは、免疫障害、例えば感染、炎症、アレルギー、免疫
不全などに使用され得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および方向付けら
れた種々の血液系前駆体の拡大、ならびに種々の細胞タイプの分化および／また
は増殖において市場的な有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療の標的として有用性を示し得る。
【０１１８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２６の１〜４５１の任意の整数であり、ｂは１５〜４６５の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２６に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２６の１〜４５１の任意の整数であり、ｂは１５〜４６５の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２６に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【０１１９】 （遺伝子番号１７によってコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第１０染色体に位置すると考
えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１０染色体の連鎖
分析においてマーカーとして有用である。
えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１０染色体の連鎖
分析においてマーカーとして有用である。
【０１２０】 この遺伝子は、主に前立腺癌において、およびそしてより低い程度で脳におい
て発現される。
て発現される。
【０１２１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖障害または神
経障害、特に前立腺癌を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提
供において有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関連し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健
常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、生殖組織、神経組織、ならびに癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、精液、滑液および髄液）、また
は別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに生殖障害または神
経障害、特に前立腺癌を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提
供において有用である。上記組織または細胞、特に生殖系の多くの障害に関連し
て、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取された健
常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの
遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしく
は細胞型（例えば、生殖組織、神経組織、ならびに癌性組織および創傷組織）ま
たは体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、精液、滑液および髄液）、また
は別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１２２】 好ましいエピトープは配列番号７２において残基：Ｈｉｓ−３４〜Ａｓｎ−４
０として示される配列を含むエピトープである。
０として示される配列を含むエピトープである。
【０１２３】 前立腺組織および脳組織におけるこの組織分布は、ポリヌクレオチドおよびこ
の遺伝子に対応するポリペプチドが、前立腺癌の診断および処置のために有用で
あることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神経変性疾患状態、
行動障害、または炎症性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハ
ンチントン舞踏病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄性疾患、末梢神経障害
、新形成、外傷、先天性異常、脊髄損傷、虚血および梗塞、動脈瘤、出血、精神
分裂病、躁病、痴呆、偏執狂、強迫性障害、うつ病、恐慌性障害、学習障害、Ａ
ＬＳ、精神病、自閉、および行動変化；栄養補給、睡眠パターン、平衡、および
知覚の障害を含むがこれらに限定されない）の検出、処置および／または予防に
有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現上昇は、これが正
常な神経機能においてある役割を果たすことを示す。潜在的には、この遺伝子産
物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、または神経分化もしくは
生存に関与する。さらに、このタンパク質は、新規の避妊薬の開発において有用
である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた
組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得
る。
の遺伝子に対応するポリペプチドが、前立腺癌の診断および処置のために有用で
あることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神経変性疾患状態、
行動障害、または炎症性状態（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハ
ンチントン舞踏病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄性疾患、末梢神経障害
、新形成、外傷、先天性異常、脊髄損傷、虚血および梗塞、動脈瘤、出血、精神
分裂病、躁病、痴呆、偏執狂、強迫性障害、うつ病、恐慌性障害、学習障害、Ａ
ＬＳ、精神病、自閉、および行動変化；栄養補給、睡眠パターン、平衡、および
知覚の障害を含むがこれらに限定されない）の検出、処置および／または予防に
有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現上昇は、これが正
常な神経機能においてある役割を果たすことを示す。潜在的には、この遺伝子産
物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、または神経分化もしくは
生存に関与する。さらに、このタンパク質は、新規の避妊薬の開発において有用
である。タンパク質ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた
組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得
る。
【０１２４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２７の１〜７６９の任意の整数であり、ｂは１５〜７８３の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２７に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号２７の１〜７６９の任意の整数であり、ｂは１５〜７８３の
整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２７に示されるヌクレオチド残
基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【０１２５】 （遺伝子番号１８によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様では、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
【０１２６】
【化２】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた本発明に包含される
。
。
【０１２７】 この遺伝子は、主に胎児脳およびＣＤ３４枯渇臍帯血において発現される。
【０１２８】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経状態、免疫状
態、または生殖状態を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のため
の試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供
において有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および神経系の多くの障
害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採
取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の
組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、免疫組織、生殖組織、ならびに癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、羊水、尿、滑
液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出さ
れ得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに神経状態、免疫状
態、または生殖状態を含むがこれらに限定されない疾患および状態の診断のため
の試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに
対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供
において有用である。上記組織または細胞、特に免疫系および神経系の多くの障
害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採
取された健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の
組織もしくは細胞型（例えば、神経組織、免疫組織、生殖組織、ならびに癌性組
織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、羊水、尿、滑
液および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出さ
れ得る。
【０１２９】 好ましいエピトープには、配列番号７３において残基：Ｓｅｒ−３５〜Ａｓｐ
−４８として示される配列を含むエピトープが含まれる。
−４８として示される配列を含むエピトープが含まれる。
【０１３０】 胎児脳およびＣＤ３４枯渇臍帯血におけるこの組織分布は、ポリヌクレオチド
およびこの遺伝子に対応するポリペプチドが、神経系および免疫障害の研究なら
びに処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神
経変性疾患状態、行動障害、または炎症性状態（例えば、アルツハイマー病、パ
ーキンソン病、ハンチントン舞踏病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄性疾
患、末梢神経障害、新形成、外傷、先天性異常、脊髄損傷、虚血および梗塞、動
脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執狂、強迫性障害、うつ病、恐慌性障
害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化；栄養補給、睡眠パター
ン、平衡、および知覚の障害を含むがこれらに限定されない）の検出、処置およ
び／または予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現
上昇は、これが正常な神経機能においてある役割を果たすことを示す。潜在的に
は、この遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、または
神経分化もしくは生存に関与する。このタンパク質はまた、免疫応答、特に自己
抗原の調節において有用である。
およびこの遺伝子に対応するポリペプチドが、神経系および免疫障害の研究なら
びに処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、神
経変性疾患状態、行動障害、または炎症性状態（例えば、アルツハイマー病、パ
ーキンソン病、ハンチントン舞踏病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄性疾
患、末梢神経障害、新形成、外傷、先天性異常、脊髄損傷、虚血および梗塞、動
脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、偏執狂、強迫性障害、うつ病、恐慌性障
害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉、および行動変化；栄養補給、睡眠パター
ン、平衡、および知覚の障害を含むがこれらに限定されない）の検出、処置およ
び／または予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の発現
上昇は、これが正常な神経機能においてある役割を果たすことを示す。潜在的に
は、この遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、または
神経分化もしくは生存に関与する。このタンパク質はまた、免疫応答、特に自己
抗原の調節において有用である。
【０１３１】 胚形成組織内、および増殖する細胞によって特徴付けられた他の細胞供給源で
の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌
および他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシ
スを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは
組織分化に関連し得、そしてまた、癌治療において有用であり得る。タンパク質
、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍
マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
の発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、そして癌
および他の増殖性障害の診断および処置において有用性を示し得ることを示す。
同様に、発生組織は、パターン形成における細胞分化および／またはアポトーシ
スを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは
組織分化に関連し得、そしてまた、癌治療において有用であり得る。タンパク質
、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍
マーカーおよび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１３２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２８の１〜４５６の任意の整数であり、ｂは１５〜４７０
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２８に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２８の１〜４５６の任意の整数であり、ｂは１５〜４７０
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２８に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１３３】 （遺伝子番号１９によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＬＲＲＡＳＣＰＩＷＳＫＤ（配列番号１２７）。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドはまた本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコ
ードするこの遺伝子は、第Ｘ染色体に位置すると考えられる。従って、本発明に
関連するポリヌクレオチドは、第Ｘ染色体の連鎖分析においてマーカーとして有
用である。
む：ＬＲＲＡＳＣＰＩＷＳＫＤ（配列番号１２７）。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドはまた本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコ
ードするこの遺伝子は、第Ｘ染色体に位置すると考えられる。従って、本発明に
関連するポリヌクレオチドは、第Ｘ染色体の連鎖分析においてマーカーとして有
用である。
【０１３４】 この遺伝子は主に、胎児肝臓脾臓および網膜で発現され、より低い程度で胎盤
および胎児の肺において発現される。
および胎児の肺において発現される。
【０１３５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発達障害、造血障
害、網膜障害、または血管障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状
態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらの
ポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的
プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に網膜、造血、および胎
盤の組識ならびに系の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわ
ち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有
意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体
から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発達組織、造血組織、網膜
組識、血管組識、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リン
パ液、血清、血漿、尿、羊水、胆汁、肺サーファクタントおよび痰、滑液および
髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発達障害、造血障
害、網膜障害、または血管障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状
態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらの
ポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的
プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に網膜、造血、および胎
盤の組識ならびに系の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわ
ち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有
意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体
から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、発達組織、造血組織、網膜
組識、血管組識、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リン
パ液、血清、血漿、尿、羊水、胆汁、肺サーファクタントおよび痰、滑液および
髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１３６】 胎児肝臓脾臓および網膜の組識分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、網膜障害、造血障害および発達障害の研究、診断およ
び治療に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、造血
関連障害（例えば、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症または白
血病）の処置および診断のために有用である。なぜならば、間質細胞は、造血系
列細胞の産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ
培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学治療を含む。従っ
て、この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関与し得、それは免疫障害（例えば
、感染、炎症、アレルギー、免疫不全など）において使用され得る。さらに、こ
の遺伝子産物は、種々の血液系列の幹細胞および関係付けられた前駆細胞の増大
において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業上の有
用性を有し得る。このタンパク質はまた、免疫応答、特に自己免疫障害における
自己抗原の調節において、有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対
する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法
標的としての有用性を示し得る。
ドおよびポリペプチドが、網膜障害、造血障害および発達障害の研究、診断およ
び治療に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、造血
関連障害（例えば、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症または白
血病）の処置および診断のために有用である。なぜならば、間質細胞は、造血系
列細胞の産生において重要であるからである。この使用は、骨髄細胞エキソビボ
培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学治療を含む。従っ
て、この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関与し得、それは免疫障害（例えば
、感染、炎症、アレルギー、免疫不全など）において使用され得る。さらに、こ
の遺伝子産物は、種々の血液系列の幹細胞および関係付けられた前駆細胞の増大
において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業上の有
用性を有し得る。このタンパク質はまた、免疫応答、特に自己免疫障害における
自己抗原の調節において、有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対
する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法
標的としての有用性を示し得る。
【０１３７】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２９の１〜１３０７の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号２９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号２９の１〜１３０７の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
２１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号２９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１３８】 (遺伝子番号２０によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子は、成長調節において重要であると考えられるフラットフィッシュ
成長ホルモンと配列相同性を共有する（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ｇｂ｜Ｅ０２２２１
｜Ｅ０２２２１を参照のこと）。特定の実施態様において、本発明のポリぺプチ
ドは、以下のアミノ酸配列：
成長ホルモンと配列相同性を共有する（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ｇｂ｜Ｅ０２２２１
｜Ｅ０２２２１を参照のこと）。特定の実施態様において、本発明のポリぺプチ
ドは、以下のアミノ酸配列：
【０１３９】
【化３】 を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に
含まれる。
含まれる。
【０１４０】 この遺伝子は主に、乳児の脳、胎児肝臓脾臓において発現され、より低い程度
で膵臓腫瘍および骨髄において発現される。
で膵臓腫瘍および骨髄において発現される。
【０１４１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに成長障害、発達障
害、免疫障害、神経障害、および代謝障害、特に癌を包含するがそれらに限定さ
れない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同
定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内
分泌組識および造血組識の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（す
なわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対し
て有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する
個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、成長組識、発達組織、
神経組織、免疫組識、代謝組識、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、羊水、滑液および髄液）また
は別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに成長障害、発達障
害、免疫障害、神経障害、および代謝障害、特に癌を包含するがそれらに限定さ
れない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同
定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に内
分泌組識および造血組識の多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（す
なわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対し
て有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する
個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、成長組識、発達組織、
神経組織、免疫組識、代謝組識、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、羊水、滑液および髄液）また
は別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１４２】 好ましいエピトープとしては、配列番号７５中で残基：Ｇｌｙ−３１〜Ｐｒｏ
−３７、Ｈｉｓ−４６〜Ａｌａ−５２として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
−３７、Ｈｉｓ−４６〜Ａｌａ−５２として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
【０１４３】 フラットフィッシュ成長ホルモンに対する相同性と組み合せた乳児の脳におけ
るこの組識分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチド
が、癌、特に膵臓腫瘍のような成長障害の研究、治療および診断に有用であるこ
とを示す。さらに、胎児肝臓脾臓および骨髄における組識分布は、この遺伝子の
タンパク質産物が、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球減少症、白血球減少症
、血小板減少症または白血病）の処置および診断に有用である。なぜならば、間
質細胞は、造血系統細胞の産生において重要であるからである。この使用は、骨
髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学
治療を含む。従って、この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関与し得、それは
免疫障害（例えば、感染、炎症、アレルギー、免疫不全など）において使用され
得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および関係付けられ
た前駆細胞の増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖に
おいて商業上の有用性を有し得る。
るこの組識分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよびポリペプチド
が、癌、特に膵臓腫瘍のような成長障害の研究、治療および診断に有用であるこ
とを示す。さらに、胎児肝臓脾臓および骨髄における組識分布は、この遺伝子の
タンパク質産物が、造血関連障害（例えば、貧血、汎血球減少症、白血球減少症
、血小板減少症または白血病）の処置および診断に有用である。なぜならば、間
質細胞は、造血系統細胞の産生において重要であるからである。この使用は、骨
髄細胞エキソビボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学
治療を含む。従って、この遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関与し得、それは
免疫障害（例えば、感染、炎症、アレルギー、免疫不全など）において使用され
得る。さらに、この遺伝子産物は、種々の血液系統の幹細胞および関係付けられ
た前駆細胞の増大において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖に
おいて商業上の有用性を有し得る。
【０１４４】 さらに、胎児および乳児組識ならびに増殖細胞によって標識される他の細胞供
給源内での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、
そして癌および他の増殖性障害の診断ならびに処置における有用性を示し得るこ
とを示す。同様に、発達組識は、パターン形成において、細胞分化および／また
はアポトーシスを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポト
ーシスまたは組識の分化に関与し得、そして癌治療において再び有用となり得た
。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対
する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
給源内での発現は、このタンパク質が細胞分裂の調節において役割を果たし得、
そして癌および他の増殖性障害の診断ならびに処置における有用性を示し得るこ
とを示す。同様に、発達組識は、パターン形成において、細胞分化および／また
はアポトーシスを含む決定に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポト
ーシスまたは組識の分化に関与し得、そして癌治療において再び有用となり得た
。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対
する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
【０１４５】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３０の１〜６０６の任意の整数であり、ｂは１５〜６２０
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３０に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３０の１〜６０６の任意の整数であり、ｂは１５〜６２０
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３０に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１４６】 (遺伝子番号２１によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子の翻訳産物は、Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ ｄｉｓｃｏｉｄｅｕ
ｍランダムスラッグｃＤＮＡ２５タンパク質と相同な配列を共有する。特定の実
施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
ｍランダムスラッグｃＤＮＡ２５タンパク質と相同な配列を共有する。特定の実
施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
【０１４７】
【化４】 を含む。これらのポリペプチドを含むポリヌクレオチドもまた、本発明に含まれ
る。ジャーカット細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から除去
された上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化し
た。従って、この遺伝子は、Ｔ細胞を、またはより一般的には、免疫細胞または
他の細胞または細胞型を、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を通して活性化す
るようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流
に見出されたプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の
分化および増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレ
メントの結合により反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖お
よび分化に関与するタンパク質を指し示すために使用され得る。
る。ジャーカット細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から除去
された上清は、ＧＡＳ（ガンマ活性化配列）プロモーターエレメントを活性化し
た。従って、この遺伝子は、Ｔ細胞を、またはより一般的には、免疫細胞または
他の細胞または細胞型を、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を通して活性化す
るようである。ＧＡＳは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流
に見出されたプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の
分化および増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレ
メントの結合により反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖お
よび分化に関与するタンパク質を指し示すために使用され得る。
【０１４８】 この遺伝子は、主に肝臓（肝細胞癌）において発現される。
【０１４９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、および肝障害、特に肝疾患
を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有
用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、
組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。
上記組織または細胞の多くの障害、特に肝臓系に関して、標準の遺伝子発現レベ
ル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）
に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このよう
な障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、肝臓組
織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血
漿、尿、胆液、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で
、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、および肝障害、特に肝疾患
を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有
用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、
組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。
上記組織または細胞の多くの障害、特に肝臓系に関して、標準の遺伝子発現レベ
ル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）
に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このよう
な障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、肝臓組
織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血
漿、尿、胆液、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で
、慣用的に検出され得る。
【０１５０】 好ましいエピトープとしては、配列番号７６中で残基：Ｇｌｕ−３９〜Ｇｌｙ
−４５、Ｔｈｒ−５１〜Ｇｌｙ−６０、Ａｌａ−６３〜Ｇｌｎ−８２として示さ
れる配列を含むエピトープが挙げられる。
−４５、Ｔｈｒ−５１〜Ｇｌｙ−６０、Ａｌａ−６３〜Ｇｌｎ−８２として示さ
れる配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１５１】 Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍランダムスラッグｃＤＮ
Ａ２５タンパク質に対する相同性および検出されたＧＡＳ生物学的活性と組み合
わせた、肝臓における組識分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドが、肝臓疾患および障害の研究、診断および治療に有用であるこ
とを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、肝臓障害および癌（例えば
、胚芽腫、黄疸、肝炎、肝前駆細胞の分化に起因する肝臓代謝疾患および症状）
の検出および処置に有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗
体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的と
しての有用性を示し得る。
Ａ２５タンパク質に対する相同性および検出されたＧＡＳ生物学的活性と組み合
わせた、肝臓における組識分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドが、肝臓疾患および障害の研究、診断および治療に有用であるこ
とを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は、肝臓障害および癌（例えば
、胚芽腫、黄疸、肝炎、肝前駆細胞の分化に起因する肝臓代謝疾患および症状）
の検出および処置に有用である。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗
体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的と
しての有用性を示し得る。
【０１５２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３１の１〜１１８０の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
９４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３１の１〜１１８０の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
９４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１５３】 (遺伝子番号２２によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
【０１５４】
【化５】 を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に
含まれる。
含まれる。
【０１５５】 この遺伝子は主に、肝臓（肝細胞癌）、胎児の硬膜、および胎児の脳において
発現される。
発現される。
【０１５６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに肝臓および中枢神
経系（ＣＮＳ）疾患または障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状
態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらの
ポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的
プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肝臓系およびＣＮＳの
多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個
体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の
組織もしくは細胞型（例えば、肝組識、神経組織、発達組識、ならびに癌性組織
および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、羊水、胆液、尿
、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出
され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに肝臓および中枢神
経系（ＣＮＳ）疾患または障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状
態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらの
ポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的
プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肝臓系およびＣＮＳの
多くの障害に関連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個
体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレ
ベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の
組織もしくは細胞型（例えば、肝組識、神経組織、発達組識、ならびに癌性組織
および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、羊水、胆液、尿
、滑液および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出
され得る。
【０１５７】 好ましいエピトープとしては、配列番号７７中で残基：Ｌｅｕ−１８〜Ｈｉｓ
−２３、Ｐｒｏ−２５〜Ａｓｐ−３２として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
−２３、Ｐｒｏ−２５〜Ａｓｐ−３２として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
【０１５８】 肝臓、胎児の硬膜、および胎児の脳におけるこの組識分布は、この遺伝子に対
応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、肝臓およびＣＮＳの疾患の研究
、診断および治療に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産
物が、神経変性性疾患状態、行動障害、または炎症性状態（アルツハイマー病、
パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、
末梢神経障害、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動
脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、うつ病、恐慌
性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、ならびに食餌、睡眠の型、平衡性
、および知覚における障害を含む行動変化を含むがこれらに限定されない）の検
出、処置、および／または予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺
伝子産物の高い発現は、それが正常の神経機能において役割を果たすことを示す
。潜在的に、この遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認知、ホメオ
スタシス、または神経分化もしくは生存に関与する。
応するポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、肝臓およびＣＮＳの疾患の研究
、診断および治療に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産
物が、神経変性性疾患状態、行動障害、または炎症性状態（アルツハイマー病、
パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎、脱髄疾患、
末梢神経障害、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄傷害、虚血および梗塞形成、動
脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、うつ病、恐慌
性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、ならびに食餌、睡眠の型、平衡性
、および知覚における障害を含む行動変化を含むがこれらに限定されない）の検
出、処置、および／または予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺
伝子産物の高い発現は、それが正常の神経機能において役割を果たすことを示す
。潜在的に、この遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認知、ホメオ
スタシス、または神経分化もしくは生存に関与する。
【０１５９】 このタンパク質はまた、肝臓障害および癌（例えば、胚芽腫、黄疸、肝炎、肝
臓代謝疾患および肝前駆細胞の分化に起因する症状）の検出および処置に有用で
ある。胚組識および増殖する細胞によって特徴付けられる細胞供給源内での発現
は、このタンパク質が細胞分裂の調節の役割を果たし得、そして癌および他の増
殖障害の診断および処置における有用性を示し得ることを示す。同様に、発達組
識は、パターン化様式において細胞分化および／またはアポトーシスを含む決定
に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組識分化に関
与し得、癌治療に再び有用であり得る。タンパク質ならびにそのタンパク質に対
する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法
標的としての有用性を示し得る。
臓代謝疾患および肝前駆細胞の分化に起因する症状）の検出および処置に有用で
ある。胚組識および増殖する細胞によって特徴付けられる細胞供給源内での発現
は、このタンパク質が細胞分裂の調節の役割を果たし得、そして癌および他の増
殖障害の診断および処置における有用性を示し得ることを示す。同様に、発達組
識は、パターン化様式において細胞分化および／またはアポトーシスを含む決定
に依存する。従って、このタンパク質はまた、アポトーシスまたは組識分化に関
与し得、癌治療に再び有用であり得る。タンパク質ならびにそのタンパク質に対
する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法
標的としての有用性を示し得る。
【０１６０】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３２の１〜８１５の任意の整数であり、ｂは１５〜８２９
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３２に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３２の１〜８１５の任意の整数であり、ｂは１５〜８２９
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３２に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０１６１】 (遺伝子番号２３によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列：
【０１６２】
【化６】 を含む。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に
含まれる。開示されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第２０染色体に位置
すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第２０染色体の
連鎖解析においてマーカーとして有用である。
含まれる。開示されたｃＤＮＡをコードするこの遺伝子は、第２０染色体に位置
すると考えられる。従って、本発明に関するポリヌクレオチドは第２０染色体の
連鎖解析においてマーカーとして有用である。
【０１６３】 この遺伝子は主に、好酸球および胎児の肺において発現し、より低い程度で骨
髄において発現する。
髄において発現する。
【０１６４】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、造血障
害および呼吸障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提
供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系、造血系、および呼吸系の多
くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由
来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベル
のこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織
もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、呼吸組織、ならびに癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、肺の界面活性
物質および痰、羊水、滑液、ならびに髄液）、または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに免疫障害、造血障
害および呼吸障害を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のた
めの試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチド
に対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提
供に有用である。上記組織または細胞、特に免疫系、造血系、および呼吸系の多
くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由
来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベル
のこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織
もしくは細胞型（例えば、免疫組織、造血組織、呼吸組織、ならびに癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、肺の界面活性
物質および痰、羊水、滑液、ならびに髄液）、または別の組織もしくは細胞サン
プルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１６５】 好酸球および骨髄における組織分布は、この遺伝子に対応するポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドが、免疫疾患、造血疾患および呼吸疾患の研究、診断およ
び処置のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は
、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造
血関連障害の処置および診断のために有用である。なぜなら、間質細胞は、造血
系統の細胞の産生において重要だからである。この使用には、骨髄細胞エキソビ
ボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学療法を含む。こ
の遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関連し得る。従って、この遺伝子産物は、
免疫障害（例えば、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などにおいて使用され得
る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の関連する前駆細
胞の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商
業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、
上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として
の有用性を示し得る。
ドおよびポリペプチドが、免疫疾患、造血疾患および呼吸疾患の研究、診断およ
び処置のために有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物は
、貧血、汎血球減少症、白血球減少症、血小板減少症、または白血病のような造
血関連障害の処置および診断のために有用である。なぜなら、間質細胞は、造血
系統の細胞の産生において重要だからである。この使用には、骨髄細胞エキソビ
ボ培養、骨髄移植、骨髄再形成、新形成の放射線治療または化学療法を含む。こ
の遺伝子産物はまた、リンパ球産生に関連し得る。従って、この遺伝子産物は、
免疫障害（例えば、感染、炎症、アレルギー、免疫不全などにおいて使用され得
る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の関連する前駆細
胞の増殖において、ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商
業的有用性を有し得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、
上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として
の有用性を示し得る。
【０１６６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３３の１〜１３２２の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
３６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３３の１〜１３２２の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
３６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３３に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１６７】 (遺伝子番号２４によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子の翻訳産物は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ過渡レセプター潜在的タンパク
質およびヒトＯ３Ｏ遺伝子（ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ９６３０３８９）と配
列相同性を有し、これは腫瘍細胞において差示的に発現されると考えられている
。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
質およびヒトＯ３Ｏ遺伝子（ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ９６３０３８９）と配
列相同性を有し、これは腫瘍細胞において差示的に発現されると考えられている
。特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：
【０１６８】
【化７】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた本発明に包含される
。
。
【０１６９】 この遺伝子は、主に樹状細胞および成体脳、ならびにより低い程度で小脳にお
いて発現される。
いて発現される。
【０１７０】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、免疫障
害または造血障害（特に、中枢神経（ＣＮＳ）の障害）、ならびに脳の疾患（例
えば、腫瘍）を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳの多くの障害に関して、標準の遺
伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の
発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現
が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例
えば、中枢組織、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）また
は体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに神経障害、免疫障
害または造血障害（特に、中枢神経（ＣＮＳ）の障害）、ならびに脳の疾患（例
えば、腫瘍）を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための
試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対
する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に
有用である。上記組織または細胞、特にＣＮＳの多くの障害に関して、標準の遺
伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の
発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現
が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例
えば、中枢組織、免疫組織、造血組織、ならびに癌性組織および創傷組織）また
は体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１７１】 好ましいエピトープとしては、配列番号７９中で残基：Ｐｒｏ−４１〜Ａｌａ
−５５として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−５５として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０１７２】 成体脳および小脳における組織分布は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ過渡レセプター潜
在的タンパク質に対する相同性と組み合わせて、この遺伝子に対応するポリヌク
レオチドおよびポリペプチドが、腫瘍のようなＣＮＳの障害の研究、診断および
処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物が、アルツ
ハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎
、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄損傷、虚血および
梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、
うつ病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、および行動変化（栄
養補給、睡眠パターン、平衡および知覚の障害を含む）を含むが、これらに限定
されない神経変性疾患状態、行動障害、または炎症状態の検出、処置および／ま
たは予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の増大した発
現は、これが正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この
遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、またはニューロ
ン分化もしくは生存に関与する。
在的タンパク質に対する相同性と組み合わせて、この遺伝子に対応するポリヌク
レオチドおよびポリペプチドが、腫瘍のようなＣＮＳの障害の研究、診断および
処置に有用であることを示す。さらに、この遺伝子のタンパク質産物が、アルツ
ハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ツレット症候群、髄膜炎、脳炎
、脱髄疾患、末梢神経障害、新形成、外傷、先天性奇形、脊髄損傷、虚血および
梗塞形成、動脈瘤、出血、精神分裂病、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、
うつ病、恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症、および行動変化（栄
養補給、睡眠パターン、平衡および知覚の障害を含む）を含むが、これらに限定
されない神経変性疾患状態、行動障害、または炎症状態の検出、処置および／ま
たは予防に有用である。さらに、脳の領域におけるこの遺伝子産物の増大した発
現は、これが正常な神経機能において役割を果たすことを示す。潜在的に、この
遺伝子産物は、シナプス形成、神経伝達、学習、認識、恒常性、またはニューロ
ン分化もしくは生存に関与する。
【０１７３】 あるいは、この遺伝子産物は、サイトカインの産生、抗原提示、または癌の処
置（例えば、免疫応答を追加免疫することによる）においての有用性をまた示唆
し得る他のプロセスの制御に関与し得る。この遺伝子が、リンパ系起源の細胞に
おいて発現しているので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。従って
、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、
慢性肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫創、好中球減少症、好中球増加症、乾
癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害）；移植器官および組織に対する免疫
反応（例えば、対移植片性宿主病および対宿主性移植片病）または自己免疫障害
（例えば、自己免疫不妊症、水晶体組織傷害、脱髄、全身エリテマトーデス、薬
物誘導溶血性貧血、慢性関節リウマチ、シェ−グレン病、強皮症）ならびに組織
を含む、免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺
伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の関連する前駆細胞の増殖において、
ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し
得る。
置（例えば、免疫応答を追加免疫することによる）においての有用性をまた示唆
し得る他のプロセスの制御に関与し得る。この遺伝子が、リンパ系起源の細胞に
おいて発現しているので、天然の遺伝子産物は、免疫機能に関与し得る。従って
、関節炎、喘息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、白血病、慢性関節リウマチ、
慢性肉芽腫症、炎症性腸疾患、敗血症、挫創、好中球減少症、好中球増加症、乾
癬、過敏症（例えば、Ｔ細胞媒介細胞傷害）；移植器官および組織に対する免疫
反応（例えば、対移植片性宿主病および対宿主性移植片病）または自己免疫障害
（例えば、自己免疫不妊症、水晶体組織傷害、脱髄、全身エリテマトーデス、薬
物誘導溶血性貧血、慢性関節リウマチ、シェ−グレン病、強皮症）ならびに組織
を含む、免疫学的障害のための薬剤としてもまた使用され得る。さらに、この遺
伝子産物は、幹細胞および種々の血液系統の関連する前駆細胞の増殖において、
ならびに種々の細胞型の分化および／または増殖において商業的な有用性を有し
得る。
【０１７４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３４の１〜１３００の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
１４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３４の１〜１３００の任意の整数であり、ｂは１５〜１３
１４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３４に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１７５】 （遺伝子番号２５によってコードされるタンパク質の特徴） 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＰＥＳＦＮＦＣＦＧＰＧＶＰＭＰＷＣＬＬＰＶＬＳＶＬＨＷＳＴＥＤＴＲＳ
ＣＧＡＱＧＧＧＰＰＬＰＰＲＧ（配列番号１６１）。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。開示されたｃＤＮＡをコ
ードする遺伝子は、第１１染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関
するポリヌクレオチドは、第１１染色体についての連鎖分析におけるマーカーと
して有用である。
む：ＰＥＳＦＮＦＣＦＧＰＧＶＰＭＰＷＣＬＬＰＶＬＳＶＬＨＷＳＴＥＤＴＲＳ
ＣＧＡＱＧＧＧＰＰＬＰＰＲＧ（配列番号１６１）。これらのポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。開示されたｃＤＮＡをコ
ードする遺伝子は、第１１染色体に存在すると考えられる。従って、本発明に関
するポリヌクレオチドは、第１１染色体についての連鎖分析におけるマーカーと
して有用である。
【０１７６】 この遺伝子は、主に幼児脳および骨芽細胞組織、ならびにより低い程度で白血
球細胞型において発現される。
球細胞型において発現される。
【０１７７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに脳の発生疾患およ
び神経変性疾患、骨肉腫、骨粗しょう症および骨壊死、造血障害ならびに他の免
疫不全を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬と
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗
体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用で
ある。上記組織または細胞、特に中枢神経系および免疫系の多くの障害に関して
、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織また
は体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発
現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（
例えば、免疫組織、神経変性組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに脳の発生疾患およ
び神経変性疾患、骨肉腫、骨粗しょう症および骨壊死、造血障害ならびに他の免
疫不全を包含するがそれらに限定されない疾患および状態の診断のための試薬と
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗
体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プローブの提供に有用で
ある。上記組織または細胞、特に中枢神経系および免疫系の多くの障害に関して
、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織また
は体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺伝子の発
現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（
例えば、免疫組織、神経変性組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体
液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織
もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１７８】 脳組織、免疫組織および骨芽細胞組織における組織分布は、この遺伝子のタン
パク質産物が、中枢神経系、骨格系、および免疫系に影響する状態の処置および
診断のために有用であることを示す。幼児脳における発現は、脳の発生疾患およ
び神経変性疾患、ならびに行動障害または他の神経系障害（例えば、うつ病、精
神分裂病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、躁病、痴
呆、パラノイア、習慣的行動の障害および睡眠障害）における潜在的な役割を示
す。この遺伝子産物の骨芽細胞組織における発現は、大理石骨病（ｏｓｔｅｏｐ
ｅｒｏｓｉｓ）、骨折、骨肉腫、骨形成、骨壊死、関節炎および外傷の処置およ
び診断における役割を示唆する。潜在的に適用可能な免疫および造血障害は、白
血病、リンパ腫、自己免疫、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）および免疫抑制状態
（移植）を含む。さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症、およ
び癌の状態において適用可能であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療標的としての有用性を示し得る。
パク質産物が、中枢神経系、骨格系、および免疫系に影響する状態の処置および
診断のために有用であることを示す。幼児脳における発現は、脳の発生疾患およ
び神経変性疾患、ならびに行動障害または他の神経系障害（例えば、うつ病、精
神分裂病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、躁病、痴
呆、パラノイア、習慣的行動の障害および睡眠障害）における潜在的な役割を示
す。この遺伝子産物の骨芽細胞組織における発現は、大理石骨病（ｏｓｔｅｏｐ
ｅｒｏｓｉｓ）、骨折、骨肉腫、骨形成、骨壊死、関節炎および外傷の処置およ
び診断における役割を示唆する。潜在的に適用可能な免疫および造血障害は、白
血病、リンパ腫、自己免疫、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）および免疫抑制状態
（移植）を含む。さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症、およ
び癌の状態において適用可能であり得る。タンパク質、ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０１７９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３５の１〜１２５０の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
６４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３５に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３５の１〜１２５０の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
６４の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３５に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１８０】 （遺伝子番号２６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子は、主に子宮内膜組織、より低い程度で乳癌組織において発現する
。
。
【０１８１】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発生異常、胎児不
全、女性不妊症、卵巣癌、乳癌、および子宮内膜癌を含むが、これらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に女性
生殖系の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有して
いない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して、有意に高いま
たは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、子宮内膜組織、乳房組織、癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄
液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに発生異常、胎児不
全、女性不妊症、卵巣癌、乳癌、および子宮内膜癌を含むが、これらに限定され
ない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチ
ドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定
のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に女性
生殖系の多くの障害に関して、標準遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有して
いない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して、有意に高いま
たは低いレベルのこの遺伝子の発現は、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、子宮内膜組織、乳房組織、癌性組織お
よび創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄
液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１８２】 子宮内膜および乳癌組織におけるその組織分布は、この遺伝子のタンパク質産
物が、発生異常または胎児不全、ならびに乳癌、卵巣癌、および子宮内膜癌、さ
らに発現が観察される他の組織の癌の処置および診断に有用であることを示す。
さらに、この組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物は、女性不妊症の処置に
有用であり得ることを示す。タンパク質産物は、移植の子宮内膜の調製に関与す
るようであり、そして局所的または経口的に投与され得る。あるいは、この遺伝
子は、遺伝子置換処置において、子宮内膜の細胞へトランスフェクトされ得、そ
してタンパク質産物が産生され得る。同様に、この処置は、健常な胚の移植およ
び発生の可能性を増加する目的で、人工授精の期間に行われ得る。両方の場合に
おいて、この遺伝子またはその遺伝子産物は、子宮内膜の健常な発生を促進する
ために妊娠の後期で投与され得る。タンパク質、ならびにそのタンパク質に対す
る抗体は、上記に列挙した組織についての組織特異的マーカーおよび／または免
疫療法の標的としての有用性を示し得る。
物が、発生異常または胎児不全、ならびに乳癌、卵巣癌、および子宮内膜癌、さ
らに発現が観察される他の組織の癌の処置および診断に有用であることを示す。
さらに、この組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物は、女性不妊症の処置に
有用であり得ることを示す。タンパク質産物は、移植の子宮内膜の調製に関与す
るようであり、そして局所的または経口的に投与され得る。あるいは、この遺伝
子は、遺伝子置換処置において、子宮内膜の細胞へトランスフェクトされ得、そ
してタンパク質産物が産生され得る。同様に、この処置は、健常な胚の移植およ
び発生の可能性を増加する目的で、人工授精の期間に行われ得る。両方の場合に
おいて、この遺伝子またはその遺伝子産物は、子宮内膜の健常な発生を促進する
ために妊娠の後期で投与され得る。タンパク質、ならびにそのタンパク質に対す
る抗体は、上記に列挙した組織についての組織特異的マーカーおよび／または免
疫療法の標的としての有用性を示し得る。
【０１８３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを介してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連したポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を記載することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３６の１〜６７４の任意の整数、ｂは１５〜６８８の整数
であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号３６に示されたヌクレオチド残基
の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを介してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連したポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を記載することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３６の１〜６７４の任意の整数、ｂは１５〜６８８の整数
であり、ここでａおよびｂの両方は、配列番号３６に示されたヌクレオチド残基
の位置に対応し、そしてここでｂは、ａ＋１４以上である）を含む１つ以上のポ
リヌクレオチドが除外される。
【０１８４】 （遺伝子番号２７によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、アミロイド前駆体タンパク質プロテアーゼと配列相
同性を有し、これはβ−アミロイドペプチドを形成するためにアミロイド前駆体
タンパク質のプロセッシングまたはクリアランスにおいて重要であると考えられ
ている。この遺伝子の翻訳産物はまた、Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ由来のエナメルマ
トリックスセリンプロテアーゼ１に有意な相同性を示す。
同性を有し、これはβ−アミロイドペプチドを形成するためにアミロイド前駆体
タンパク質のプロセッシングまたはクリアランスにおいて重要であると考えられ
ている。この遺伝子の翻訳産物はまた、Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ由来のエナメルマ
トリックスセリンプロテアーゼ１に有意な相同性を示す。
【０１８５】 この遺伝子は、主にケラチノサイトにおいて発現される。
【０１８６】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに皮膚癌（黒色腫）
、湿疹、乾癬、または皮膚の他の障害、ならびに伝染性海綿状脳障害（ＴＳＥ）
、クロイツフェルト‐ヤーコプ病（ＣＪＤ）およびアルツハイマー病のようなア
ミロイドタンパク質関連状態を含むが、これらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に皮膚および脳の多くの障害
に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常
組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺
伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは
細胞型（例えば、皮膚組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例
えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしく
は細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の差示的同定のため、ならびに皮膚癌（黒色腫）
、湿疹、乾癬、または皮膚の他の障害、ならびに伝染性海綿状脳障害（ＴＳＥ）
、クロイツフェルト‐ヤーコプ病（ＣＪＤ）およびアルツハイマー病のようなア
ミロイドタンパク質関連状態を含むが、これらに限定されない疾患および状態の
診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリ
ペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の差示的同定のための免疫学的プロ
ーブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に皮膚および脳の多くの障害
に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常
組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルのこの遺
伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは
細胞型（例えば、皮膚組織、ならびに癌性組織および創傷組織）または体液（例
えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしく
は細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１８７】 好ましいエピトープとしては、配列番号８２において残基：Ａｓｎ−３１〜Ｔ
ｈｒ−４１、Ｐｒｏ−４３〜Ａｓｐ−４９、Ｇｌｕ−５６〜Ａｒｇ−６６、Ｓｅ
ｒ−７１〜Ｔｒｐ−８０、Ａｓｎ−１６０〜Ｖａｌ−１６９、Ｔｈｒ−１９２〜
Ｖａｌ−１９８、Ｌｙｓ−２１５〜Ａｓｐ−２２６、Ａｓｐ−２３４〜Ｇｌｙ−
２４６、Ｐｒｏ−２６５〜Ｇｌｙ−２７３、として示される配列を含むエピトー
プが挙げられる。
ｈｒ−４１、Ｐｒｏ−４３〜Ａｓｐ−４９、Ｇｌｕ−５６〜Ａｒｇ−６６、Ｓｅ
ｒ−７１〜Ｔｒｐ−８０、Ａｓｎ−１６０〜Ｖａｌ−１６９、Ｔｈｒ−１９２〜
Ｖａｌ−１９８、Ｌｙｓ−２１５〜Ａｓｐ−２２６、Ａｓｐ−２３４〜Ｇｌｙ−
２４６、Ｐｒｏ−２６５〜Ｇｌｙ−２７３、として示される配列を含むエピトー
プが挙げられる。
【０１８８】 皮膚における組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、皮膚癌（黒色腫）
、湿疹、乾癬、または皮膚の他の障害の処置および診断に有用であることを示す
。アミロイド前駆体タンパク質を切断するプロテアーゼに対する相同性は、この
遺伝子産物が、アミロイド前駆体タンパク質のプロセシングまたは清澄化におい
て、β−アミロイドペプチドを形成するという役割を有し、そのためにアルツハ
イマー病、伝染性海綿状脳障害（ＴＳＥ）およびクロイツフェルトヤコブ病（Ｃ
ＪＤ）のようなβ−アミロイドペプチドに関連する状態の処置および予防に有用
であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織についての組織特異的マーカーおよび／または免疫治療標的とし
ての有用性を示し得る。
、湿疹、乾癬、または皮膚の他の障害の処置および診断に有用であることを示す
。アミロイド前駆体タンパク質を切断するプロテアーゼに対する相同性は、この
遺伝子産物が、アミロイド前駆体タンパク質のプロセシングまたは清澄化におい
て、β−アミロイドペプチドを形成するという役割を有し、そのためにアルツハ
イマー病、伝染性海綿状脳障害（ＴＳＥ）およびクロイツフェルトヤコブ病（Ｃ
ＪＤ）のようなβ−アミロイドペプチドに関連する状態の処置および予防に有用
であることを示す。タンパク質、ならびにこのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織についての組織特異的マーカーおよび／または免疫治療標的とし
ての有用性を示し得る。
【０１８９】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３７の１〜１５０２の任意の整数であり、ｂは１５〜１５
１６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３７に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３７の１〜１５０２の任意の整数であり、ｂは１５〜１５
１６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３７に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１９０】 (遺伝子番号２８によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＬＷＴＭＮＰＡＳＤＧＧＴＳＥＳＩＦＤＬＤＹＡＳＷＧＩＲＳＴＬ（配列番
号１６２）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発
明に包含される。
む：ＬＷＴＭＮＰＡＳＤＧＧＴＳＥＳＩＦＤＬＤＹＡＳＷＧＩＲＳＴＬ（配列番
号１６２）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発
明に包含される。
【０１９１】 この遺伝子は、主に肺組織および内皮組織において発現される。
【０１９２】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに喘息、肺水腫、ア
テローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中の可能性（ｓｔｒｏｋｅ ｐｏｔｅｎｔ
ｉａｌ）、血栓症、および高血圧症を含むが、これらに限定されない、疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫
学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肺系および心血管
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の
組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに喘息、肺水腫、ア
テローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中の可能性（ｓｔｒｏｋｅ ｐｏｔｅｎｔ
ｉａｌ）、血栓症、および高血圧症を含むが、これらに限定されない、疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫
学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、特に肺系および心血管
系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない
個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたは
より低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取さ
れた特定の組織もしくは細胞型（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）
または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の
組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０１９３】 肺組織および内皮組織におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物
が、喘息、肺水腫、肺炎、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中、アンギナ
、血栓症、高血圧症、炎症、および創傷治癒のような、心血管障害、呼吸器障害
または肺障害の処置および診断において有用であることを示す。タンパク質なら
びにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカー
および／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
が、喘息、肺水腫、肺炎、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中、アンギナ
、血栓症、高血圧症、炎症、および創傷治癒のような、心血管障害、呼吸器障害
または肺障害の処置および診断において有用であることを示す。タンパク質なら
びにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカー
および／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
【０１９４】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３８の１〜１２５３の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３８に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３８に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３８の１〜１２５３の任意の整数であり、ｂは１５〜１２
６７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３８に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０１９５】 (遺伝子番号２９によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子の翻訳産物は、カテプシンｂ（脱髄、気腫、慢性関節リウマチ、お
よび新生物性浸潤（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）におい
て重要であると考えられる、システインプロテアーゼ）と配列相同性を有する。
特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む
：ＧＴＳＧＧＡＲＡＳＬＧＰＳＰＨＬＨＱＧＰＧＡＴ（配列番号１６３）。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。
よび新生物性浸潤（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）におい
て重要であると考えられる、システインプロテアーゼ）と配列相同性を有する。
特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む
：ＧＴＳＧＧＡＲＡＳＬＧＰＳＰＨＬＨＱＧＰＧＡＴ（配列番号１６３）。これ
らのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。
【０１９６】 この遺伝子は、主に内皮細胞において発現される。
【０１９７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに脱髄、気腫、慢性
関節リウマチ、新生物性浸潤、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血栓症、およ
び炎症を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬と
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗
体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用で
ある。上記組織または細胞、特に内皮の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現
レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベ
ル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、この
ような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、内
皮組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、
尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに脱髄、気腫、慢性
関節リウマチ、新生物性浸潤、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、血栓症、およ
び炎症を含むが、これらに限定されない、疾患および状態の診断のための試薬と
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗
体は、組織または細胞型の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用で
ある。上記組織または細胞、特に内皮の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現
レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベ
ル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、この
ような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、内
皮組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、
尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に
検出され得る。
【０１９８】 好ましいエピトープとしては、配列番号８４において残基：Ｇｌｎ−２３〜Ｇ
ｌｕ−３０、Ａｌａ−４３〜Ｌｅｕ−５３、Ｔｙｒ−１１８〜Ｇｌｎ−１３７、
Ｇｌｎ−１５２〜Ｔｒｐ−１５７、として示される配列を含むエピトープが挙げ
られる。
ｌｕ−３０、Ａｌａ−４３〜Ｌｅｕ−５３、Ｔｙｒ−１１８〜Ｇｌｎ−１３７、
Ｇｌｎ−１５２〜Ｔｒｐ−１５７、として示される配列を含むエピトープが挙げ
られる。
【０１９９】 システインプロテアーゼカテプシンｂに対する相同性は、この遺伝子のタンパ
ク質産物が、脱髄、気腫、慢性関節リウマチ、および新生物性浸潤のような症状
の処置および診断に有用であることを示す。さらに、内皮組織および細胞におけ
るこの遺伝子の発現は、喘息、肺炎、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中
、アンギナ、血栓症、高血圧症、炎症、および創傷治癒のような心血管の状態お
よび肺の状態の診断および処置において有用であり得ることを示す。タンパク質
ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対する組織特異
的マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
ク質産物が、脱髄、気腫、慢性関節リウマチ、および新生物性浸潤のような症状
の処置および診断に有用であることを示す。さらに、内皮組織および細胞におけ
るこの遺伝子の発現は、喘息、肺炎、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、脳卒中
、アンギナ、血栓症、高血圧症、炎症、および創傷治癒のような心血管の状態お
よび肺の状態の診断および処置において有用であり得ることを示す。タンパク質
ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織に対する組織特異
的マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用性を示し得る。
【０２００】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３９の１〜２１８９の任意の整数であり、ｂは１５〜２２
０３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号３９に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号３９の１〜２１８９の任意の整数であり、ｂは１５〜２２
０３の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号３９に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２０１】 (遺伝子番号３０によりコードされるタンパク質の特徴) Ｕ９３７骨髄性細胞株に対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から取り
出された上清は、ＧＡＳアッセイを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊａｋ
−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して骨髄性細胞（またはより一般的には、他の
細胞または他の細胞型に加えて、免疫細胞）を活性化するようである。γ活性化
配列（ＧＡＳ）は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流に見出
されるプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化お
よび増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメント
の結合により反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分
化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。特定の実施態様において、
本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＹＬＶＩＦＦＬＫＣ（配
列番号１６４）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、
本発明に包含される。
出された上清は、ＧＡＳアッセイを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊａｋ
−ＳＴＡＴシグナル伝達経路を介して骨髄性細胞（またはより一般的には、他の
細胞または他の細胞型に加えて、免疫細胞）を活性化するようである。γ活性化
配列（ＧＡＳ）は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に関与する多くの遺伝子の上流に見出
されるプロモーターエレメントである。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路は、細胞の分化お
よび増殖に関与する大きなシグナル伝達経路である。従って、ＧＡＳエレメント
の結合により反映されるＪａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分
化に関与するタンパク質を示すために使用され得る。特定の実施態様において、
本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：ＹＬＶＩＦＦＬＫＣ（配
列番号１６４）。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、
本発明に包含される。
【０２０２】 この遺伝子は、主に胎盤、脾臓および種々の血液細胞型において発現される。
【０２０３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫障害および造
血障害、ならびにそれらの生殖および胎児の発育への影響を含むが、これらに限
定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポ
リペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示
差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、
特に免疫系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すな
わち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して
有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、生殖
組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、
尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的
に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに免疫障害および造
血障害、ならびにそれらの生殖および胎児の発育への影響を含むが、これらに限
定されない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポ
リペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示
差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞、
特に免疫系および生殖系の多くの障害に関して、標準の遺伝子発現レベル（すな
わち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して
有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を
有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、生殖
組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、
尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的
に検出され得る。
【０２０４】 免疫組織におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、白血病、
リンパ腫、自己免疫、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制状態（移植）お
よび造血傷害を含む免疫障害の診断および処置のために有用であることを示す。
さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症、または癌の状態に適用
可能であり得る。さらに、胎盤におけるこの発現は、発生異常または胎児欠損の
処置および診断における潜在的な適用を示唆する。胎盤内における特定の発現は
、この遺伝子産物が、胎盤機能の適切な確立および維持における役割を果たし得
ることを示す。あるいは、この遺伝子産物は、胎盤によって生成され得、次いで
胚に輸送され、ここで、発達している胚または胎児の発達および／または生存に
おいて重要な役割を果たし得る。
リンパ腫、自己免疫、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制状態（移植）お
よび造血傷害を含む免疫障害の診断および処置のために有用であることを示す。
さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症、または癌の状態に適用
可能であり得る。さらに、胎盤におけるこの発現は、発生異常または胎児欠損の
処置および診断における潜在的な適用を示唆する。胎盤内における特定の発現は
、この遺伝子産物が、胎盤機能の適切な確立および維持における役割を果たし得
ることを示す。あるいは、この遺伝子産物は、胎盤によって生成され得、次いで
胚に輸送され、ここで、発達している胚または胎児の発達および／または生存に
おいて重要な役割を果たし得る。
【０２０５】 胎盤のような血管の豊富な組織におけるこの遺伝子産物の発現はまた、この遺
伝子産物が、より一般には内皮細胞においてか、または循環内で生成され得るこ
とを示す。このような例において、この遺伝子産物は血管形成のような、血管機
能においてより一般化された役割を果たし得る。この遺伝子産物はまた、血管系
において生成され得、そして循環内で他の細胞（例えば、造血細胞）への影響を
有し得る。この遺伝子産物は、造血細胞、ならびに全身中の他の細胞、の増殖、
生存、活性化、および／または分化の促進に役立ち得る。タンパク質、ならびに
このタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーお
よび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
伝子産物が、より一般には内皮細胞においてか、または循環内で生成され得るこ
とを示す。このような例において、この遺伝子産物は血管形成のような、血管機
能においてより一般化された役割を果たし得る。この遺伝子産物はまた、血管系
において生成され得、そして循環内で他の細胞（例えば、造血細胞）への影響を
有し得る。この遺伝子産物は、造血細胞、ならびに全身中の他の細胞、の増殖、
生存、活性化、および／または分化の促進に役立ち得る。タンパク質、ならびに
このタンパク質に対する抗体は、上記に列挙した組織についての腫瘍マーカーお
よび／または免疫治療標的としての有用性を示し得る。
【０２０６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４０の１〜１７１２の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
２６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４０に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４０に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４０の１〜１７１２の任意の整数であり、ｂは１５〜１７
２６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４０に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２０７】 (遺伝子番号３１によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＧＳＱＶＮＧＶ（配列番号１６５）。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に包含される。
む：ＧＳＱＶＮＧＶ（配列番号１６５）。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドもまた、本発明に包含される。
【０２０８】 この遺伝子は、主に好中球において発現される。
【０２０９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに自己免疫、免疫不
全、造血傷害、一般的な微生物感染、炎症および癌を含むが、これらに限定され
ない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞の多くの
障害、特に免疫系に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さな
い個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまた
はより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取
された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織
）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別
の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織または細胞型の示差的同定のため、ならびに自己免疫、免疫不
全、造血傷害、一般的な微生物感染、炎症および癌を含むが、これらに限定され
ない、疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプ
チドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織または細胞型の示差的同
定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記組織または細胞の多くの
障害、特に免疫系に関して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さな
い個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまた
はより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取
された特定の組織もしくは細胞型（例えば、免疫組織、癌性組織および創傷組織
）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別
の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２１０】 好ましいエピトープとしては、配列番号８６中で残基：Ｇｌｙ−１５〜Ｇｌｙ
−２１、Ｐｒｏ−３２〜Ｔｒｐ−３８として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
−２１、Ｐｒｏ−３２〜Ｔｒｐ−３８として示される配列を含むエピトープが挙
げられる。
【０２１１】 好中球におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、（白血病、
リンパ腫、自己免疫、免疫不全、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制状態
（移植）および造血傷害を含む）免疫系障害の診断および処置のために有用であ
ることを示す。さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症または癌
の状態において適用可能であり得る。さらに、好中球におけるこの遺伝子産物の
発現はまた、免疫機能および免疫サーベイランスにおけるこのタンパク質につい
ての役割を強く示す。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用
性を示し得る。
リンパ腫、自己免疫、免疫不全、免疫不全（例えば、ＡＩＤＳ）、免疫抑制状態
（移植）および造血傷害を含む）免疫系障害の診断および処置のために有用であ
ることを示す。さらに、この遺伝子産物は、一般的な微生物感染、炎症または癌
の状態において適用可能であり得る。さらに、好中球におけるこの遺伝子産物の
発現はまた、免疫機能および免疫サーベイランスにおけるこのタンパク質につい
ての役割を強く示す。タンパク質ならびにそのタンパク質に対する抗体は、上記
に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標的としての有用
性を示し得る。
【０２１２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４１の１〜１０８８の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
０２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４１に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４１の１〜１０８８の任意の整数であり、ｂは１５〜１１
０２の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４１に示されるヌクレオ
チド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以
上のポリヌクレオチドが除外される。
【０２１３】 (遺伝子番号３２によりコードされるタンパク質の特徴) 特定の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含
む：ＲＰＴＲＰＬＮＣＧＲ（配列番号１６６）。これらのポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコー
ドするこの遺伝子は、第１染色体に位置すると考えられる。従って、本発明に関
連するポリヌクレオチドは第１染色体の連鎖解析においてマーカーとして有用で
ある。
む：ＲＰＴＲＰＬＮＣＧＲ（配列番号１６６）。これらのポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドもまた、本発明に包含される。開示されたｃＤＮＡをコー
ドするこの遺伝子は、第１染色体に位置すると考えられる。従って、本発明に関
連するポリヌクレオチドは第１染色体の連鎖解析においてマーカーとして有用で
ある。
【０２１４】 この遺伝子は、血管系におけるその存在を示唆する広範な種々の組織において
発現される。これらの組織は、横紋筋肉腫、肝癌、肝細胞癌、子宮癌、血管外皮
細胞腫、リンパ腫、および精巣腫瘍のような腫瘍を含むが、これらは、Ｔ細胞画
分、樹状細胞、内皮細胞、骨髄間質細胞、およびメラノサイトにおいてもまた存
在する。
発現される。これらの組織は、横紋筋肉腫、肝癌、肝細胞癌、子宮癌、血管外皮
細胞腫、リンパ腫、および精巣腫瘍のような腫瘍を含むが、これらは、Ｔ細胞画
分、樹状細胞、内皮細胞、骨髄間質細胞、およびメラノサイトにおいてもまた存
在する。
【０２１５】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに高度に血管新生化した腫瘍の処置を包含するがそれらに限
定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）
または細胞型（単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供
に有用である。上記組織または細胞、特に血管系の多くの障害に関連して、標準
の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液
中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の
発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型
（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液
、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの
中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに高度に血管新生化した腫瘍の処置を包含するがそれらに限
定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）
または細胞型（単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供
に有用である。上記組織または細胞、特に血管系の多くの障害に関連して、標準
の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液
中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の
発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型
（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ液
、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの
中で、慣用的に検出され得る。
【０２１６】 好ましいエピトープとしては、配列番号８７で残基：Ｐｒｏ−５６〜Ｐｒｏ−
６３、Ｍｅｔ−９２〜Ｔｈｒ−９８、Ｓｅｒ−１１２〜Ｐｒｏ−１２０、Ｐｒｏ
−１６２〜Ｓｅｒ−１６９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
６３、Ｍｅｔ−９２〜Ｔｈｒ−９８、Ｓｅｒ−１１２〜Ｐｒｏ−１２０、Ｐｒｏ
−１６２〜Ｓｅｒ−１６９として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０２１７】 血管組織におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物は、発現が観
察されている場合、脈管構造および高度に血管新生化した腫瘍、ならびに他の組
織の腫瘍の障害の処置のために有用であることを示す。さらに、血管組織の組織
分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、心臓血管系の状態および症状（例えば
、心臓疾患、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、発作（ｓｔｏｋｅ）、アンギナ
、血栓症および創傷治癒）の診断および処置のために有用である。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織のための腫瘍マー
カーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
察されている場合、脈管構造および高度に血管新生化した腫瘍、ならびに他の組
織の腫瘍の障害の処置のために有用であることを示す。さらに、血管組織の組織
分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、心臓血管系の状態および症状（例えば
、心臓疾患、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、発作（ｓｔｏｋｅ）、アンギナ
、血栓症および創傷治癒）の診断および処置のために有用である。タンパク質な
らびにこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織のための腫瘍マー
カーおよび／または免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【０２１８】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４２の１〜１３８３の任意の整数であり、ｂは１５〜１３９
７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４２に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される （遺伝子番号３３によってコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１１染色体上に位置すると考え
られる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１１染色体のための
連鎖解析のマーカーとして有用である。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４２に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４２の１〜１３８３の任意の整数であり、ｂは１５〜１３９
７の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４２に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される （遺伝子番号３３によってコードされるタンパク質の特徴） 開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１１染色体上に位置すると考え
られる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１１染色体のための
連鎖解析のマーカーとして有用である。
【０２１９】 この遺伝子は、胎児組織由来のいくつかのライブラリーにおける発現を含み広
範に発現される。この遺伝子はまた、胎盤、肺、滑膜、骨髄、精巣および脳のい
くつかの領域において発現される。
範に発現される。この遺伝子はまた、胎盤、肺、滑膜、骨髄、精巣および脳のい
くつかの領域において発現される。
【０２２０】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の差示的
同定のため、ならびに血管変性状態または腫瘍関連新血管新生を包含するがそれ
らに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に
、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または
複数）または細胞型（単数または複数）の差示的同定のための免疫学的プローブ
の提供において有用である。上記組織または細胞、特に血管系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取され
た健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例え
ば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、ならびに髄液）、または別の組織もしくは
細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の差示的
同定のため、ならびに血管変性状態または腫瘍関連新血管新生を包含するがそれ
らに限定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に
、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または
複数）または細胞型（単数または複数）の差示的同定のための免疫学的プローブ
の提供において有用である。上記組織または細胞、特に血管系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体から採取され
た健常組織または体液中の発現レベル）に対して有意に高いまたは低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば、血管組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例え
ば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、ならびに髄液）、または別の組織もしくは
細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２２１】 好ましいエピトープとしては、配列番号８８中で残基：Ａｓｐ−４０〜Ｇｌｕ
−５０、Ｓｅｒ−５９〜Ｇｌｙ−６９、Ａｌａ−９８〜Ｈｉｓ−１０５、Ａｒｇ
−１０８〜Ｇｌｕ−１１４、Ｐｒｏ−１２４〜Ｓｅｒ−１３８、Ａｌａ−１４３
〜Ｇｌｙ−１５４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−５０、Ｓｅｒ−５９〜Ｇｌｙ−６９、Ａｌａ−９８〜Ｈｉｓ−１０５、Ａｒｇ
−１０８〜Ｇｌｕ−１１４、Ｐｒｏ−１２４〜Ｓｅｒ−１３８、Ａｌａ−１４３
〜Ｇｌｙ−１５４として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０２２２】 血管組織における組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、異常な血管状
態（例えば、特定の網膜症、糖尿病誘導虚血（ｅｓｃｈｅｍｉａ）、あるいは特
定の腫瘍の型に関連した血管新生）に関する状態の処置のために有用であること
を示す。さらに、この遺伝子の翻訳産物は、心臓血管系（例えば、心臓疾患、再
狭窄、アテローム性動脈硬化症、発作（ｓｔｏｋｅ）、アンギナ、血栓症および
創傷治癒）の状態および症状の処置および診断に有用である。血管に富んだ（ｖ
ａｓｃｕｌａｒ−ｒｉｃｈ）組織（例えば、胎盤）におけるこの遺伝子産物の発
現はまた、この遺伝子産物が、内皮細胞または血液循環内においてより一般的に
産生され得ることを示す。この例のように、この遺伝子産物は、血管機能（例え
ば、脈管形成）においてより全身性の役割をはたし得る。この遺伝子産物はまた
、血管系において産生され得、そして血液循環内の他の細胞（例えば、造血細胞
）に効果を有し得る。これは、造血細胞ならびに身体中の他の細胞の増殖、生存
、活性化および／または分化の促進に貢献し得る。タンパク質ならびにこのタン
パク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／ま
たは免疫治療の標的として有用性を示し得る。
態（例えば、特定の網膜症、糖尿病誘導虚血（ｅｓｃｈｅｍｉａ）、あるいは特
定の腫瘍の型に関連した血管新生）に関する状態の処置のために有用であること
を示す。さらに、この遺伝子の翻訳産物は、心臓血管系（例えば、心臓疾患、再
狭窄、アテローム性動脈硬化症、発作（ｓｔｏｋｅ）、アンギナ、血栓症および
創傷治癒）の状態および症状の処置および診断に有用である。血管に富んだ（ｖ
ａｓｃｕｌａｒ−ｒｉｃｈ）組織（例えば、胎盤）におけるこの遺伝子産物の発
現はまた、この遺伝子産物が、内皮細胞または血液循環内においてより一般的に
産生され得ることを示す。この例のように、この遺伝子産物は、血管機能（例え
ば、脈管形成）においてより全身性の役割をはたし得る。この遺伝子産物はまた
、血管系において産生され得、そして血液循環内の他の細胞（例えば、造血細胞
）に効果を有し得る。これは、造血細胞ならびに身体中の他の細胞の増殖、生存
、活性化および／または分化の促進に貢献し得る。タンパク質ならびにこのタン
パク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／ま
たは免疫治療の標的として有用性を示し得る。
【０２２３】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４３の１〜１７２５の任意の整数であり、ｂは１５〜１７３
９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４３に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４３に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４３の１〜１７２５の任意の整数であり、ｂは１５〜１７３
９の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４３に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【０２２４】 （遺伝子番号３４によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのタンパク質との相同性を共有
する。（＞ｓｑ｜Ｑ１１０７３｜ＹＴ４５）。特定の実施態様において、本発明
のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む： ＶＷＧＰＰＳＶＡＡＡＬＥＬＶＤＰＰＧＣＲＥＦＧＴＳＮＩＥＤＲＤＥＬＡＹＨ
ＩＳＩ（配列番号１６７）。
する。（＞ｓｑ｜Ｑ１１０７３｜ＹＴ４５）。特定の実施態様において、本発明
のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む： ＶＷＧＰＰＳＶＡＡＡＬＥＬＶＤＰＰＧＣＲＥＦＧＴＳＮＩＥＤＲＤＥＬＡＹＨ
ＩＳＩ（配列番号１６７）。
【０２２５】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明によって
包含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１４染色体上に位置
すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１４染色
体のための連鎖解析のマーカーとして有用である。骨髄細胞株Ｕ９３７細胞株に
対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から取り除いた上清は、ＧＡＳアッ
セイを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路
を介して骨髄細胞、またはより一般的に免疫細胞あるいは他の細胞または細胞型
を活性化するようである。γ活性化配列（ＧＡＳ）は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に
関与する多くの遺伝子の上流にみられるプロモーターエレメントである。このＪ
ａｋ−ＳＴＡＴ経路は大きく、細胞の分化および増殖に関与するシグナル伝達経
路である。従って、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化（ＧＡＳ要素の結合により反
映される）は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために用いら
れ得る。
包含される。開示されたｃＤＮＡをコードする遺伝子は、第１４染色体上に位置
すると考えられる。従って、本発明に関連するポリヌクレオチドは、第１４染色
体のための連鎖解析のマーカーとして有用である。骨髄細胞株Ｕ９３７細胞株に
対して試験した場合、この遺伝子を含む細胞から取り除いた上清は、ＧＡＳアッ
セイを活性化した。従って、この遺伝子は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路
を介して骨髄細胞、またはより一般的に免疫細胞あるいは他の細胞または細胞型
を活性化するようである。γ活性化配列（ＧＡＳ）は、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路に
関与する多くの遺伝子の上流にみられるプロモーターエレメントである。このＪ
ａｋ−ＳＴＡＴ経路は大きく、細胞の分化および増殖に関与するシグナル伝達経
路である。従って、Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化（ＧＡＳ要素の結合により反
映される）は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示すために用いら
れ得る。
【０２２６】 この遺伝子は、主に、肝臓および胎児肝臓、そしてより低い程度でアルツハイ
マー病由来の組織を含むいくつかの他の組織および器官において発現される。
マー病由来の組織を含むいくつかの他の組織および器官において発現される。
【０２２７】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに代謝性疾患、肝疾患および神経性疾患を含むがそれらに限
定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）
または細胞型（単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供
に有用である。上記組織または細胞、特に代謝系および神経系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組
織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば肝臓組織、脾臓組織、神経性組織、癌性組織ならびに創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、または髄液）、
または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに代謝性疾患、肝疾患および神経性疾患を含むがそれらに限
定されない疾患および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリ
ペプチドおよびこれらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）
または細胞型（単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供
に有用である。上記組織または細胞、特に代謝系および神経系の多くの障害に関
連して、標準の遺伝子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組
織または体液中の発現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルの
この遺伝子の発現が、このような障害を有する個体から採取された特定の組織も
しくは細胞型（例えば肝臓組織、脾臓組織、神経性組織、癌性組織ならびに創傷
組織）または体液（例えば、リンパ液、血清、血漿、尿、滑液、または髄液）、
または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２２８】 好ましいエピトープには配列番号８９において、Ｌｙｓ−２１〜Ｇｌｎ−３２
、Ａｓｐ−１１７〜Ｇｌｕ−１２４、Ｔｙｒ−１７９〜Ｇｌｙ−１８４、Ａｓｎ
−２１１〜Ｇｌｙ−２１７、Ｌｅｕ−２３９〜Ｌｙｓ−２６４残基として示され
る配列を含むエピトープを含む。
、Ａｓｐ−１１７〜Ｇｌｕ−１２４、Ｔｙｒ−１７９〜Ｇｌｙ−１８４、Ａｓｎ
−２１１〜Ｇｌｙ−２１７、Ｌｅｕ−２３９〜Ｌｙｓ−２６４残基として示され
る配列を含むエピトープを含む。
【０２２９】 胎児肝臓／脾臓およびアルツハイマーの組織における組織分布は、この遺伝子
のタンパク質産物が、代謝系および神経系疾患ならびに癌の診断および処置のた
めに有用であることを示す。胎児肝臓／脾臓におけるこの遺伝子産物の発現は、
増殖；生存；分化；および／または血液幹細胞を含む潜在的に全ての造血細胞系
統の活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、
抗原提示、あるいは癌の処置における有用性をまた示唆し得る他の過程（例えば
、追加免疫応答による）の調節に関与し得る。
のタンパク質産物が、代謝系および神経系疾患ならびに癌の診断および処置のた
めに有用であることを示す。胎児肝臓／脾臓におけるこの遺伝子産物の発現は、
増殖；生存；分化；および／または血液幹細胞を含む潜在的に全ての造血細胞系
統の活性化の調節における役割を示す。この遺伝子産物は、サイトカイン産生、
抗原提示、あるいは癌の処置における有用性をまた示唆し得る他の過程（例えば
、追加免疫応答による）の調節に関与し得る。
【０２３０】 この遺伝子は、リンパ球起源の細胞において発現されるが、この遺伝子または
タンパク質、ならびにタンパク質に対する抗体は、腫瘍マーカーおよび／または
上記に挙げられた組織に対する免疫治療標的として有用性を示し得る。従って、
これはまた、関節炎、ぜん息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢
性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫学的疾患
のための薬剤として用い得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の
血液系統の方向付けられた前駆体の増大ならびに種々の細胞型の分化および／ま
たは増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療標的として有用性を示し得る。
タンパク質、ならびにタンパク質に対する抗体は、腫瘍マーカーおよび／または
上記に挙げられた組織に対する免疫治療標的として有用性を示し得る。従って、
これはまた、関節炎、ぜん息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白血病、慢
性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫学的疾患
のための薬剤として用い得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞および種々の
血液系統の方向付けられた前駆体の増大ならびに種々の細胞型の分化および／ま
たは増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタンパク質
に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免
疫治療標的として有用性を示し得る。
【０２３１】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４４の１〜３０４７の任意の整数であり、ｂは１５〜３０６
１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４４に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４４に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４４の１〜３０４７の任意の整数であり、ｂは１５〜３０６
１の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４４に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【０２３２】 (遺伝子番号３５によりコードされるタンパク質の特徴) この遺伝子は、主に脳髄芽腫およびより低い程度で胎盤において発現される。
【０２３３】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに脳髄芽細胞腫を含むが、これらに限定されない、疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）または細胞型（単数
または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記
組織または細胞の多くの障害、特に神経系に関して、標準の遺伝子発現レベル（
すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対
して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障
害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、脳組織、癌
性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、
および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得
る。
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに脳髄芽細胞腫を含むが、これらに限定されない、疾患およ
び状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれ
らのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）または細胞型（単数
または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。上記
組織または細胞の多くの障害、特に神経系に関して、標準の遺伝子発現レベル（
すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発現レベル）に対
して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が、このような障
害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例えば、脳組織、癌
性組織および創傷組織）または体液（例えば、リンパ、血清、血漿、尿、滑液、
および髄液）または別の組織もしくは細胞サンプルの中で、慣用的に検出され得
る。
【０２３４】 好ましいエピトープとしては、配列番号９０において、Ｐｒｏ−５３〜Ｔｈｒ
−６５残基として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−６５残基として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０２３５】 脳髄芽腫におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産物が、脳髄芽腫
およびＣＮＳの他の障害ならびに発現が示されている場合の他の組織の癌の診断
および処置に有用であることを示す。タンパク質ならびにそのタンパク質に対す
る抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標
的としての有用性を示し得る。
およびＣＮＳの他の障害ならびに発現が示されている場合の他の組織の癌の診断
および処置に有用であることを示す。タンパク質ならびにそのタンパク質に対す
る抗体は、上記に列挙した組織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫療法標
的としての有用性を示し得る。
【０２３６】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４５の１〜９６０の任意の整数であり、ｂは１５〜９７４
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４５に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４５に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明からは、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（
ここで、ａは配列番号４５の１〜９６０の任意の整数であり、ｂは１５〜９７４
の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４５に示されるヌクレオチド
残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上の
ポリヌクレオチドが除外される。
【０２３７】 （遺伝子番号３６によってコードされるタンパク質の特徴） この遺伝子の翻訳産物は、マウス稀突起神経膠細胞特異的タンパク質および細
菌感染に対する宿主応答に重要であると考えられているクロストリジウム内毒素
レセプターと配列相同性を共有する。この遺伝子の翻訳産物はまた、接着結合で
配置されると考えられているが、このマウス遺伝子の機能がまだ推定されていな
いＭｕｓ筋の保存的クラウジン−１タンパク質と重要な相同性を共有する。特定
の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む： ＬＰＰＲＧＰＡＴＦＧＳＰＧＣＰＰＡＮＳＰＰＳＡＰＡＴＰＥＰＡＲＡＰＥＲＶ
（配列番号１６８）。 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含され
る。
菌感染に対する宿主応答に重要であると考えられているクロストリジウム内毒素
レセプターと配列相同性を共有する。この遺伝子の翻訳産物はまた、接着結合で
配置されると考えられているが、このマウス遺伝子の機能がまだ推定されていな
いＭｕｓ筋の保存的クラウジン−１タンパク質と重要な相同性を共有する。特定
の実施態様において、本発明のポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む： ＬＰＰＲＧＰＡＴＦＧＳＰＧＣＰＰＡＮＳＰＰＳＡＰＡＴＰＥＰＡＲＡＰＥＲＶ
（配列番号１６８）。 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含され
る。
【０２３８】 この遺伝子は、主に、胸腺間質細胞、心臓細胞、樹状細胞および結腸癌細胞に
おいて発現される。
おいて発現される。
【０２３９】 従って、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、生物学的サンプル
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに感染状態および新生物を含むがそれらに限定されない疾患
および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）または細胞型（
単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。
上記組織または細胞、免疫系および胃腸系の多くの障害に関連して、標準の遺伝
子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発
現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が
、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例え
ば、免疫組織、胃腸系組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リ
ンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サ
ンプルの中で、慣用的に検出され得る。
中に存在する組織（単数または複数）または細胞型（単数または複数）の示差的
同定のため、ならびに感染状態および新生物を含むがそれらに限定されない疾患
および状態の診断のための試薬として有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに対する抗体は、組織（単数または複数）または細胞型（
単数または複数）の示差的同定のための免疫学的プローブの提供に有用である。
上記組織または細胞、免疫系および胃腸系の多くの障害に関連して、標準の遺伝
子発現レベル（すなわち、障害を有さない個体由来の健常組織または体液中の発
現レベル）に対して有意により高いまたはより低いレベルのこの遺伝子の発現が
、このような障害を有する個体から採取された特定の組織もしくは細胞型（例え
ば、免疫組織、胃腸系組織、癌性組織および創傷組織）または体液（例えば、リ
ンパ液、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、または別の組織もしくは細胞サ
ンプルの中で、慣用的に検出され得る。
【０２４０】 好ましいエピトープとしては、配列番号９１において、Ａｌａ−５４〜Ａｌａ
−６４残基として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
−６４残基として示される配列を含むエピトープが挙げられる。
【０２４１】 免疫組織および胃腸組織におけるこの組織分布は、この遺伝子のタンパク質産
物が、免疫性疾患、感染性疾患および癌性疾患の研究および処置に有用であるこ
とを示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、あるいは癌の処置
において有用性がまた示唆され得る他の過程（例えば、追加免疫応答）の調節に
関与し得る。この遺伝子は、リンパ球起源の細胞において発現するので、遺伝子
またはタンパク質、およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組
織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として有用性を示し得る。
従って、これはまた、関節炎、ぜん息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白
血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫
学的疾患のための薬剤として用い得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞およ
び種々の血液系統の方向づけられた前駆体の増大ならびに種々の細胞型の分化お
よび／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタ
ンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／
または免疫治療標的として有用性を示し得る。
物が、免疫性疾患、感染性疾患および癌性疾患の研究および処置に有用であるこ
とを示す。この遺伝子産物は、サイトカイン生成、抗原提示、あるいは癌の処置
において有用性がまた示唆され得る他の過程（例えば、追加免疫応答）の調節に
関与し得る。この遺伝子は、リンパ球起源の細胞において発現するので、遺伝子
またはタンパク質、およびこのタンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組
織に対する腫瘍マーカーおよび／または免疫治療標的として有用性を示し得る。
従って、これはまた、関節炎、ぜん息、免疫不全疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、白
血病、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、敗血症、挫瘡、および乾癬を含む免疫
学的疾患のための薬剤として用い得る。さらに、この遺伝子産物は、幹細胞およ
び種々の血液系統の方向づけられた前駆体の増大ならびに種々の細胞型の分化お
よび／または増殖において商業的有用性を有し得る。タンパク質ならびにこのタ
ンパク質に対する抗体は、上記に挙げられた組織に対する腫瘍マーカーおよび／
または免疫治療標的として有用性を示し得る。
【０２４２】 多くのポリヌクレオチド配列（例えば、ＥＳＴ配列）は、公に利用可能であり
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４６の１〜１４３２の任意の整数であり、ｂは１５〜１４４
６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４６に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
、そして配列データベースを通してアクセス可能である。これらの配列のいくつ
かは、配列番号４６に関連し、そして本発明の着想の前に公に利用可能であった
かもしれない。好ましくは、このような関連するポリヌクレオチドは、本発明の
範囲から特に除外される。全ての関連配列を列挙することは煩わしい。従って、
好ましくは、本発明から、一般式ａ−ｂにより記載されるヌクレオチド配列（こ
こで、ａは配列番号４６の１〜１４３２の任意の整数であり、ｂは１５〜１４４
６の整数であり、ここでａおよびｂの両方は配列番号４６に示されるヌクレオチ
ド残基の位置に対応し、そしてここでｂはａ＋１４以上である）を含む１つ以上
のポリヌクレオチドが除外される。
【０２４３】
【表１】 表１は、上記の各「遺伝子番号」に対応する情報を要約する。「ヌクレオチド
配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「
ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連の
ＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列から構築され
た。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各ヌ
クレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最終
的な配列を得た。
配列番号Ｘ」として同定されるヌクレオチド配列は、表１において同定される「
ｃＤＮＡクローンＩＤ」から、およびいくつかの場合において、さらなる関連の
ＤＮＡクローンから得られる部分的に相同な（「重複する」）配列から構築され
た。重複する配列は、高い冗長性の単一の連続した配列に構築され（通常、各ヌ
クレオチド部位で３〜５個の重複する配列）、配列番号Ｘとして同定される最終
的な配列を得た。
【０２４４】 ｃＤＮＡクローンＩＤは、その日付に寄託され、そして「ＡＴＣＣ寄託番号Ｚ
および日付」において列挙される対応する寄託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、
ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
および日付」において列挙される対応する寄託番号が与えられた。寄託物のいく
つかは、同じ遺伝子に対応する複数の異なるクローンを含む。「ベクター」は、
ｃＤＮＡクローンＩＤにおいて含まれるベクターの型をいう。
【０２４５】 「総ヌクレオチド配列」は、「遺伝子番号」によって同定されるコンティグに
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたクローンは、これらの配列の全て
またはほとんどを含み得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５'ヌク レオチド」および「クローン配列の３'ヌクレオチド」として示されるヌクレオ チドの位置によって反映される。推定開始コドン（メチオニン）の配列番号Ｘの
ヌクレオチドの位置は、「開始コドンの５'ヌクレオチド」として同定される。 同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペ
プチドの第一のアミノ酸の５'ヌクレオチド」として同定される。
おけるヌクレオチドの総数をいう。寄託されたクローンは、これらの配列の全て
またはほとんどを含み得、この配列は、配列番号Ｘの「クローン配列の５'ヌク レオチド」および「クローン配列の３'ヌクレオチド」として示されるヌクレオ チドの位置によって反映される。推定開始コドン（メチオニン）の配列番号Ｘの
ヌクレオチドの位置は、「開始コドンの５'ヌクレオチド」として同定される。 同様に、推定シグナル配列の配列番号Ｘのヌクレオチドの位置は、「シグナルペ
プチドの第一のアミノ酸の５'ヌクレオチド」として同定される。
【０２４６】 翻訳されたアミノ酸配列は、メチオニンで始まり、「アミノ酸配列番号Ｙ」と
して同定されるが、他のリーディングフレームもまた、公知の分子生物学技術を
使用して容易に翻訳され得る。これらのオルタナティブオープンリーディングフ
レームによって生成されるポリペプチドは、本発明によって具体的に意図される
。
して同定されるが、他のリーディングフレームもまた、公知の分子生物学技術を
使用して容易に翻訳され得る。これらのオルタナティブオープンリーディングフ
レームによって生成されるポリペプチドは、本発明によって具体的に意図される
。
【０２４７】 推定シグナルペプチドの配列番号Ｙの第一および最後のアミノ酸の位置は、「
シグナルペプチドの第一のアミノ酸」および「シグナルペプチドの最後のアミノ
酸」として同定される。分泌部分の配列番号Ｙの推定される第一アミノ酸の位置
は、「分泌部分の推定される第一のアミノ酸」として同定される。最後には、オ
ープンリーディングフレームにおける最後のアミノ酸の配列番号Ｙのアミノ酸の
位置は、「ＯＲＦの最後のアミノ酸」として同定される。
シグナルペプチドの第一のアミノ酸」および「シグナルペプチドの最後のアミノ
酸」として同定される。分泌部分の配列番号Ｙの推定される第一アミノ酸の位置
は、「分泌部分の推定される第一のアミノ酸」として同定される。最後には、オ
ープンリーディングフレームにおける最後のアミノ酸の配列番号Ｙのアミノ酸の
位置は、「ＯＲＦの最後のアミノ酸」として同定される。
【０２４８】 配列番号Ｘおよび翻訳される配列番号Ｙは、十分に正確であり、そしてそうで
なければ、当該分野において周知でありかつ以下でさらに記載される種々の使用
に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配列ま
たは寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーシ
ョンプローブを設計するために有用である。これらのプローブはまた、生物学的
サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の種々の法医学
の方法、および診断の方法を可能にする。同様に、配列番号Ｙから同定されるポ
リぺプチドは、表１において同定されるｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製するために使用され得る。
なければ、当該分野において周知でありかつ以下でさらに記載される種々の使用
に適切である。例えば、配列番号Ｘは、配列番号Ｘにおいて含まれる核酸配列ま
たは寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡを検出する核酸ハイブリダイゼーシ
ョンプローブを設計するために有用である。これらのプローブはまた、生物学的
サンプル中の核酸分子にハイブリダイズし、それによって本発明の種々の法医学
の方法、および診断の方法を可能にする。同様に、配列番号Ｙから同定されるポ
リぺプチドは、表１において同定されるｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質に特異的に結合する抗体を作製するために使用され得る。
【０２４９】 それにもかかわらず、配列決定反応によって生成されるＤＮＡ配列は、配列決
定のエラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、また
は生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する
。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列の
リーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合にお
いて、作製されるＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０
００塩基を超えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠
失）を超えて同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミ
ノ酸配列とは異なる。
定のエラーを含み得る。エラーは、誤って同定されたヌクレオチドとして、また
は生成されたＤＮＡ配列におけるヌクレオチドの挿入または欠失として存在する
。誤って挿入されたか、または欠失されたヌクレオチドは、推定アミノ酸配列の
リーディングフレームにおいてフレームシフトを引き起こす。これらの場合にお
いて、作製されるＤＮＡ配列は、実際のＤＮＡ配列と９９．９％（例えば、１０
００塩基を超えるオープンリーディングフレームにおける１塩基の挿入または欠
失）を超えて同一であり得るにもかかわらず、推定アミノ酸配列は、実際のアミ
ノ酸配列とは異なる。
【０２５０】 従って、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列における正確さを必要とするこ
れらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定され、作製されたヌクレ
オチド配列および配列番号Ｙとして同定され、推定の翻訳されたアミノ酸配列の
みではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明のヒ
トｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。寄託されたクロ
ーンの各ヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたクローンの配列決
定によって容易に決定され得る。次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託
物から証明され得る。さらに、特定のクローンによってコードされるタンパク質
のアミノ酸配列はまた、ペプチド配列決定によって、または寄託されたヒトｃＤ
ＮＡを含む適切な宿主細胞中でタンパク質を発現し、このタンパク質を収集し、
そしてその配列を決定することによって、直接的に決定され得る。
れらの適用のために、本発明は、配列番号Ｘとして同定され、作製されたヌクレ
オチド配列および配列番号Ｙとして同定され、推定の翻訳されたアミノ酸配列の
みではなく、表１において記載されるような、ＡＴＣＣに寄託された本発明のヒ
トｃＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡのサンプルもまた提供する。寄託されたクロ
ーンの各ヌクレオチド配列は、公知の方法に従って寄託されたクローンの配列決
定によって容易に決定され得る。次いで、推定アミノ酸配列は、このような寄託
物から証明され得る。さらに、特定のクローンによってコードされるタンパク質
のアミノ酸配列はまた、ペプチド配列決定によって、または寄託されたヒトｃＤ
ＮＡを含む適切な宿主細胞中でタンパク質を発現し、このタンパク質を収集し、
そしてその配列を決定することによって、直接的に決定され得る。
【０２５１】 本発明はまた、配列番号Ｘ、配列番号Ｙ、または寄託されたクローンに対応す
る遺伝子に関する。対応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用
して、公知の方法に従って単離され得る。このような方法は、開示された配列か
らプローブまたはプライマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源
から対応する遺伝子を同定または増幅する工程を包含する。
る遺伝子に関する。対応する遺伝子は、本明細書中に開示される配列情報を使用
して、公知の方法に従って単離され得る。このような方法は、開示された配列か
らプローブまたはプライマーを調製する工程、およびゲノム物質の適切な供給源
から対応する遺伝子を同定または増幅する工程を包含する。
【０２５２】 本発明においてまた提供されるものは、種相同体である。種相同体は、本明細
書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして所
望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングすることによって単離お
よび同定され得る。
書中に提供される配列から適切なプローブまたはプライマーを作製し、そして所
望の相同体について適切な核酸供給源をスクリーニングすることによって単離お
よび同定され得る。
【０２５３】 本発明のポリぺプチドは、任意の適切な様式で調製され得る。このようなポリ
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換え的に生成さ
れたポリぺプチド、合成的に生成されたポリぺプチド、またはこれらの方法の組
合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺプチドを
調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
ぺプチドとしては、単離された天然に存在するポリぺプチド、組換え的に生成さ
れたポリぺプチド、合成的に生成されたポリぺプチド、またはこれらの方法の組
合せによって生成されたポリぺプチドが挙げられる。このようなポリぺプチドを
調製するための手段は、当該分野において十分に理解される。
【０２５４】 ポリぺプチドは、分泌タンパク質の形態（成熟形態を含む）であり得るか、ま
たはより大きいタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（以下
を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する配列
（例えば、複数のヒスチジン残基）、または組換え生成の間の安定性のためのさ
らなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利である。
たはより大きいタンパク質（例えば、融合タンパク質）の部分であり得る（以下
を参照のこと）。分泌配列またはリーダー配列、プロ配列、精製を補助する配列
（例えば、複数のヒスチジン残基）、または組換え生成の間の安定性のためのさ
らなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含むことは、しばしば有利である。
【０２５５】 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、単離された形態で提供され、そして好
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌されるポリぺプチドを含む）
の組換え的に生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、ＳｍｉｔｈおよびＪ
ｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の
方法によって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、当該分野に
おいて周知である方法における分泌タンパク質に対して惹起される本発明の抗体
を使用して、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
ましくは実質的に精製される。ポリぺプチド（分泌されるポリぺプチドを含む）
の組換え的に生成されたバージョン（ｖｅｒｓｉｏｎ）は、ＳｍｉｔｈおよびＪ
ｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８）に記載される１工程の
方法によって実質的に精製され得る。本発明のポリぺプチドはまた、当該分野に
おいて周知である方法における分泌タンパク質に対して惹起される本発明の抗体
を使用して、天然のまたは組換えの供給源から精製され得る。
【０２５６】 （シグナル配列） タンパク質が、シグナル配列、ならびにその配列についての切断点を有するか
否かを予測するための方法が、利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ，Ｖｉ
ｒｕｓ Ｒｅｓ． ３：２７１−２８６（１９８５）の方法は、短いＮ末端荷電
領域およびそれに続く完全な（切断されていない）タンパク質の非荷電領域から
の情報を使用する。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６）の方法は、切断部位の周辺の残基（
代表的に−１３〜＋２残基）からの情報を使用し、ここで、＋１は、分泌タンパ
ク質のアミノ末端を示す。これらの方法のそれぞれについての、公知の哺乳動物
分泌タンパク質の切断点を予測することの正確さは、７５〜８０％の範囲にある
（ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、２つの方法は、所定のタンパク質に
ついて、同じ推定切断点を必ずしも生成するとは限らない。
否かを予測するための方法が、利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ，Ｖｉ
ｒｕｓ Ｒｅｓ． ３：２７１−２８６（１９８５）の方法は、短いＮ末端荷電
領域およびそれに続く完全な（切断されていない）タンパク質の非荷電領域から
の情報を使用する。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．１４：４６８３−４６９０（１９８６）の方法は、切断部位の周辺の残基（
代表的に−１３〜＋２残基）からの情報を使用し、ここで、＋１は、分泌タンパ
ク質のアミノ末端を示す。これらの方法のそれぞれについての、公知の哺乳動物
分泌タンパク質の切断点を予測することの正確さは、７５〜８０％の範囲にある
（ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、２つの方法は、所定のタンパク質に
ついて、同じ推定切断点を必ずしも生成するとは限らない。
【０２５７】 本発明の場合において、分泌されるポリぺプチドの推定アミノ酸配列は、Ｓｉ
ｇｎａｌＰと呼ばれるコンピュータープログラム（Ｈｅｎｒｉｋ Ｎｉｅｌｓｅ
ｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１−６（１９９７））
によって分析された。このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてタンパク質の
細胞での位置を予測する。この位置のコンピューター予測の一部として、ＭｃＧ
ｅｏｃｈおよびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅの方法が援用される。このプログラムによ
って、本明細書中に記載される分泌タンパク質のアミノ酸配列の分析は、表１に
おいて示される結果を提供した。
ｇｎａｌＰと呼ばれるコンピュータープログラム（Ｈｅｎｒｉｋ Ｎｉｅｌｓｅ
ｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０：１−６（１９９７））
によって分析された。このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてタンパク質の
細胞での位置を予測する。この位置のコンピューター予測の一部として、ＭｃＧ
ｅｏｃｈおよびｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅの方法が援用される。このプログラムによ
って、本明細書中に記載される分泌タンパク質のアミノ酸配列の分析は、表１に
おいて示される結果を提供した。
【０２５８】 しかし、当業者に理解されるように、切断部位は、時折、生物に応じて変化し
、そして絶対的な確実性を伴っては予測され得ない。従って、本発明は、配列番
号Ｙにおいて示される配列を有する分泌されるポリぺプチドを提供し、これは推
定切断点の５残基（すなわち、＋または−５残基）内で始まるＮ末端を有する。
同様に、ある場合において、分泌タンパク質からのシグナル配列の切断は、必ず
しも均一ではなく、１つより多くの分泌される種を生じることもまた認識される
。これらのポリぺプチド、およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌク
レオチドは、本発明によって意図される。
、そして絶対的な確実性を伴っては予測され得ない。従って、本発明は、配列番
号Ｙにおいて示される配列を有する分泌されるポリぺプチドを提供し、これは推
定切断点の５残基（すなわち、＋または−５残基）内で始まるＮ末端を有する。
同様に、ある場合において、分泌タンパク質からのシグナル配列の切断は、必ず
しも均一ではなく、１つより多くの分泌される種を生じることもまた認識される
。これらのポリぺプチド、およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌク
レオチドは、本発明によって意図される。
【０２５９】 さらに、上述の分析によって同定されるシグナル配列は、天然に存在するシグ
ナル配列を必ずしも予測しないかもしれない。例えば、天然に存在するシグナル
配列は、推定シグナル配列からさらに上流にあり得る。しかし、推定シグナル配
列は、分泌タンパク質をＥＲに指向し得るようである。これらのポリぺプチド、
およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドは、本発明によっ
て意図される。
ナル配列を必ずしも予測しないかもしれない。例えば、天然に存在するシグナル
配列は、推定シグナル配列からさらに上流にあり得る。しかし、推定シグナル配
列は、分泌タンパク質をＥＲに指向し得るようである。これらのポリぺプチド、
およびこのようなポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドは、本発明によっ
て意図される。
【０２６０】 （ポリヌクレオチドおよびポリぺプチド改変体） 「改変体」とは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドとは異なるが
、それらの本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリぺプチドをいう
。一般に、改変体は、全体的に密接に類似し、そして、多くの領域において、本
発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドと同一である。
、それらの本質的な特性を保持するポリヌクレオチドまたはポリぺプチドをいう
。一般に、改変体は、全体的に密接に類似し、そして、多くの領域において、本
発明のポリヌクレオチドまたはポリぺプチドと同一である。
【０２６１】 本発明の参照ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」である
ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによって、ポリヌクレオチドのヌク
レオチド配列が、ポリヌクレオチド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレ
オチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除
いて、参照配列に対して同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオ
チド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレ
オチドを得るために、参照配列のヌクレオチドの５％までが、別のヌクレオチド
で欠失または置換され得るか、または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの
多数のヌクレオチドで参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配
列は、表１に示される配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、ま
たは本明細書中で記載されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドによって、ポリヌクレオチドのヌク
レオチド配列が、ポリヌクレオチド配列がポリぺプチドをコードする参照ヌクレ
オチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異を含み得ることを除
いて、参照配列に対して同一であることを意図する。換言すれば、参照ヌクレオ
チド配列に対して少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレ
オチドを得るために、参照配列のヌクレオチドの５％までが、別のヌクレオチド
で欠失または置換され得るか、または参照配列中の総ヌクレオチドの５％までの
多数のヌクレオチドで参照配列中に挿入され得る。問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配
列は、表１に示される配列全体、ＯＲＦ（オープンリーディングフレーム）、ま
たは本明細書中で記載されるように特定される任意のフラグメントであり得る。
【０２６２】 実際問題として、任意の特定の核酸分子またはポリぺプチドが、本発明のヌク
レオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、ま
たは９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログラムを使用して従
来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間の最も良
好な全体的な適合性（全体的な配列整列としてもまた参照される）を決定するた
めの好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ．
（１９９０）６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピ
ュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配
列および本配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵからＴに変
換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、同一性パー
セント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ配列のＦＡ
ＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎ
ｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊ
ｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕ
ｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚ
ｅ＝５００または本ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）である。
レオチド配列に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、ま
たは９９％同一であるか否かは、公知のコンピュータープログラムを使用して従
来的に決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間の最も良
好な全体的な適合性（全体的な配列整列としてもまた参照される）を決定するた
めの好ましい方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ．
（１９９０）６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピ
ュータープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせ配
列および本配列は、両方ともにＤＮＡ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵからＴに変
換することによって比較され得る。この全体的な配列整列の結果は、同一性パー
セント（％）で示される。同一性パーセントを算定するためにＤＮＡ配列のＦＡ
ＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎ
ｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊ
ｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕ
ｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚ
ｅ＝５００または本ヌクレオチド配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２６３】 本配列が、５’または３’欠失のために（内部欠失のためではなく）問い合わ
せ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。これ
は、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが本配列の５
’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断され
る本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い合わせ
配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない本配列の５’および３’で
ある問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌクレオチ
ドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定され
る。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特定のパラ
メーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最終的な同
一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明の目的に
使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問い合わせ
配列と一致／整列されいていない、本配列の５’および３’塩基の外側の塩基の
みが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される。
せ配列より短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない。これ
は、同一性パーセントを計算する場合に、ＦＡＳＴＤＢプログラムが本配列の５
’および３’切断を考慮しないからである。５’末端または３’末端で切断され
る本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パーセントは、問い合わせ
配列の総塩基のパーセントとして一致／整列されない本配列の５’および３’で
ある問い合わせ配列の塩基の数を計算することによって補正される。ヌクレオチ
ドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定され
る。次いで、このパーセントは、同一性パーセントから差し引かれ、特定のパラ
メーターを用いて上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算定され、最終的な同
一性パーセントのスコアに到達する。この補正されたスコアが、本発明の目的に
使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列によって示されるように、問い合わせ
配列と一致／整列されいていない、本配列の５’および３’塩基の外側の塩基の
みが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で算定される。
【０２６４】 例えば、９０塩基の本配列は、同一性パーセントを決定するために１００塩基
の問い合わせ配列に整列される。本配列、および従って、ＦＡＳＴＤＢ整列の５
’末端で生じる欠失は、５’末端で最初の１０塩基の一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端での塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の本配列は、１００塩基の問い合わせ配列と比較さ
れる。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせ配列と一致／
整列しない本配列の５’または３’に塩基がない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによ
って算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わせ配列
と一致／整列しない本配列の５’および３’の塩基のみが手動で補正される。他
の手動の補正は、本発明の目的ではなされない。
の問い合わせ配列に整列される。本配列、および従って、ＦＡＳＴＤＢ整列の５
’末端で生じる欠失は、５’末端で最初の１０塩基の一致／整列を示さない。１
０個の不対合塩基は、配列の１０％（一致していない５’および３’末端での塩
基の数／問い合わせ配列の塩基の総数）を表し、そのため１０％は、ＦＡＳＴＤ
Ｂプログラムによって算定される同一性パーセントのスコアから差し引かれる。
残りの９０塩基が完全に一致する場合は、最終的な同一性パーセントは９０％で
ある。別の例では、９０塩基の本配列は、１００塩基の問い合わせ配列と比較さ
れる。この場合、欠失は、内部欠失であり、その結果、問い合わせ配列と一致／
整列しない本配列の５’または３’に塩基がない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによ
って算定される同一性パーセントは手動で補正されない。再び、問い合わせ配列
と一致／整列しない本配列の５’および３’の塩基のみが手動で補正される。他
の手動の補正は、本発明の目的ではなされない。
【０２６５】 本発明の問い合わせアミノ酸配列に、例えば、少なくとも９５％「同一」であ
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、本ポリペプチドのアミノ酸配列は
、本ポリぺプチド配列が、問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸あた
り５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に同一で
あることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも９５
％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、本配列における
アミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））または
別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列の
アミノ末端もしくはカルボキシ末端部位で生じ得るか、またはそれらの末端部位
の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列内の１
つ以上の連続的なグループにおいてのいずれかで、散在される。
るアミノ酸配列を有するポリぺプチドにより、本ポリペプチドのアミノ酸配列は
、本ポリぺプチド配列が、問い合わせアミノ酸配列の各１００個のアミノ酸あた
り５つまでのアミノ酸の変更を含み得ることを除いて、問い合わせ配列に同一で
あることが意図される。換言すれば、問い合わせアミノ酸配列に少なくとも９５
％同一であるアミノ酸配列を有するポリぺプチドを得るために、本配列における
アミノ酸残基の５％までが、挿入、欠失、（消えない（ｉｎｄｅｌｓ））または
別のアミノ酸で置換され得る。参照配列のこれらの変化は、参照アミノ酸配列の
アミノ末端もしくはカルボキシ末端部位で生じ得るか、またはそれらの末端部位
の間のどこにでも生じ得、参照配列中の残基間で個々に、または参照配列内の１
つ以上の連続的なグループにおいてのいずれかで、散在される。
【０２６６】 実際問題として、任意の特定のポリぺプチドが、例えば、表１に示されるアミ
ノ酸配列に対して、または寄託されたＤＮＡクローンによってコードされるアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラムを使
用して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間での最良
の全体的な一致（全体的配列整列としても参照される）を決定するための好まし
い方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ． Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ． （１９
９０） ６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュー
タープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせおよび
本配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配列であ
るかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセントで示
される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａ
ｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏ
ｗ Ｓｉｚｅ ＝ 配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚ
ｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ＝ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または本
アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
ノ酸配列に対して、または寄託されたＤＮＡクローンによってコードされるアミ
ノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％同一であるか否かは、従来的に、公知のコンピュータープログラムを使
用して決定され得る。問い合わせ配列（本発明の配列）と本配列との間での最良
の全体的な一致（全体的配列整列としても参照される）を決定するための好まし
い方法は、Ｂｒｕｔｌａｇら（Ｃｏｍｐ． Ａｐｐ． Ｂｉｏｓｃｉ． （１９
９０） ６：２３７−２４５）のアルゴリズムに基づくＦＡＳＴＤＢコンピュー
タープログラムを使用して決定され得る。配列整列において、問い合わせおよび
本配列は、両方ともヌクレオチド配列であるかまたは両方ともアミノ酸配列であ
るかのいずれかである。上記の全体的配列整列の結果は、同一性パーセントで示
される。ＦＡＳＴＤＢアミノ酸整列に用いられる好ましいパラメーターは：Ｍａ
ｔｒｉｘ＝ＰＡＭ ０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ Ｐｅｎａｌｔ
ｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ
Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｗｉｎｄｏ
ｗ Ｓｉｚｅ ＝ 配列の長さ、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚ
ｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ＝ ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または本
アミノ酸配列の長さ（どちらかより短い方）である。
【０２６７】 本配列が、Ｎ末端またはＣ末端欠失により（内部の欠失のためではなく）問い
合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない
。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する場
合に、本配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末端お
よびＣ末端で切断される本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パー
セントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する本残基と一致
／整列しない本配列のＮ末端およびＣ末端側である問い合わせ配列の残基の数を
計算することによって補正される。残基が一致／整列されているか否かは、ＦＡ
ＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一
性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパ
ラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する
。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使用されるもので
ある。問い合わせ配列と一致／整列していない本配列のＮ末端およびＣ末端側の
残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で考慮される。す
なわち、本配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側の問い合わせ残基位置
のみである。
合わせ配列よりも短い場合、手動の補正が結果に対してなされなけらばならない
。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが、全体的な同一性パーセントを算定する場
合に、本配列のＮ末端切断およびＣ末端切断を考慮しないからである。Ｎ末端お
よびＣ末端で切断される本配列について、問い合わせ配列に対して、同一性パー
セントは、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして、対応する本残基と一致
／整列しない本配列のＮ末端およびＣ末端側である問い合わせ配列の残基の数を
計算することによって補正される。残基が一致／整列されているか否かは、ＦＡ
ＳＴＤＢ配列整列の結果によって決定される。次いで、このパーセントは、同一
性パーセントから差し引かれ、上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって特定のパ
ラメーターを使用して計算され、最終的な同一性パーセントのスコアに到達する
。この最終的な同一性パーセントのスコアは、本発明の目的で使用されるもので
ある。問い合わせ配列と一致／整列していない本配列のＮ末端およびＣ末端側の
残基のみが、同一性パーセントのスコアを手動で調整する目的で考慮される。す
なわち、本配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側の問い合わせ残基位置
のみである。
【０２６８】 例えば、９０アミノ酸残基の本配列は、同一性パーセントを決定するために１
００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が本配列のＮ末端で生じ、そして
それゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示さな
い。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およびＣ末端
での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳＴＤＢ
プログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差し引か
れる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセントは９０
％である。別の例において、９０残基の本配列が、１００残基の問い合わせ配列
と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わせ配列と
一致／整列しない本配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。この場合、
ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正されない。再
び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整列しない本
配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置のみが手動で補正される。他の手動の
補正は、本発明の目的のためにはなされない。
００残基の問い合わせ配列と整列される。欠失が本配列のＮ末端で生じ、そして
それゆえＦＡＳＴＤＢ整列は、Ｎ末端での最初の１０残基の一致／整列を示さな
い。１０個の不対合残基は、配列の１０％（一致していないＮ末端およびＣ末端
での残基の数／問い合わせ配列中の残基の総数）を表し、その結果ＦＡＳＴＤＢ
プログラムによって計算される同一性パーセントのスコアから１０％が差し引か
れる。残りの９０残基が完全に一致した場合、最終的な同一性パーセントは９０
％である。別の例において、９０残基の本配列が、１００残基の問い合わせ配列
と比較される。この場合、欠失は、内部欠失であり、そのため問い合わせ配列と
一致／整列しない本配列のＮ末端またはＣ末端の残基は存在しない。この場合、
ＦＡＳＴＤＢによって算定される同一性パーセントは、手動で補正されない。再
び、ＦＡＳＴＤＢ整列において示される、問い合わせ配列と一致／整列しない本
配列のＮ末端およびＣ末端の外の残基位置のみが手動で補正される。他の手動の
補正は、本発明の目的のためにはなされない。
【０２６９】 改変体は、コード領域、非コード領域、またはその両方における変化を含み得
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、
コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化しない変化を含むポリヌクレ
オチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって生
成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて５〜
１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加される改変体
もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、特定の宿
主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、Ｅ．ｃ
ｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化する））ために、生成さ
れ得る。
る。特に好ましいものは、サイレントな置換、付加、または欠失を生成するが、
コードされるポリぺプチドの特性または活性を変化しない変化を含むポリヌクレ
オチド改変体である。遺伝コードの縮重に起因するサイレントな置換によって生
成されるヌクレオチド改変体が、好ましい。さらに、任意の組合せにおいて５〜
１０、１〜５、もしくは１〜２アミノ酸が置換、欠失、または付加される改変体
もまた、好ましい。ポリヌクレオチド改変体は、種々の理由（例えば、特定の宿
主についてのコドン発現を至適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、Ｅ．ｃ
ｏｌｉのような細菌宿主によって好ましいコドンに変化する））ために、生成さ
れ得る。
【０２７０】 天然に存在する改変体は、「対立遺伝子改変体」と呼ばれ、そして生物の染色
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、ポ
リヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し得
る。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発技術によってまたは直接的
な合成によって生成され得る。
体上の所定の遺伝子座を占有する遺伝子のいくつかの代替の形態のうちの１つを
いう。（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編 Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子改変体は、ポ
リヌクレオチドレベルおよび／またはポリぺプチドレベルのいずれかで変化し得
る。あるいは、天然に存在しない改変体は、変異誘発技術によってまたは直接的
な合成によって生成され得る。
【０２７１】 タンパク質工学および組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、改変体は、
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化するために作製され得る。例えば
、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実質的な欠損を伴わずに、分泌タンパ
ク質のＮ末端またはＣ末端から欠失され得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６８：２９８４−２９８８（１９９３）の著者らは、３、８、または２７
個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後であってもヘパリン結合活性を有す
る改変体ＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンγは、このタ
ンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失した後、１０倍
までのより高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ ７：１９９−２１６（１９８８））。
本発明のポリぺプチドの特性を改善または変化するために作製され得る。例えば
、１つ以上のアミノ酸は、生物学的機能の実質的な欠損を伴わずに、分泌タンパ
ク質のＮ末端またはＣ末端から欠失され得る。Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．２６８：２９８４−２９８８（１９９３）の著者らは、３、８、または２７
個のアミノ末端のアミノ酸残基を欠失した後であってもヘパリン結合活性を有す
る改変体ＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンγは、このタ
ンパク質のカルボキシ末端から８〜１０個のアミノ酸残基を欠失した後、１０倍
までのより高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ ７：１９９−２１６（１９８８））。
【０２７２】 さらに、豊富な証拠は、改変体が、天然に存在するタンパク質の生物学的活性
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異
体を作製した。複数の変異が、全ての潜在的なアミノ酸の位置で試験された。こ
の研究者らは、「分子の大部分は、結合活性または生物学的活性のいずれかに対
してほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照の
こと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わず
か２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生
成した。
に類似する活性をしばしば保持することを実証する。例えば、Ｇａｙｌｅおよび
共同研究者ら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５−２２１１１（１
９９３））は、ヒトサイトカインＩＬ−１ａの広範囲にわたる変異分析を行った
。彼らは、ランダムな変異誘発を使用して、分子の全長にわたって改変体当たり
平均２．５アミノ酸の変化になる、３，５００個を超える個々のＩＬ−１ａ変異
体を作製した。複数の変異が、全ての潜在的なアミノ酸の位置で試験された。こ
の研究者らは、「分子の大部分は、結合活性または生物学的活性のいずれかに対
してほとんど影響を伴わないで変化され得る」ことを見出した。（要約を参照の
こと）。実際、試験された３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうち、わず
か２３個の独特なアミノ酸配列が、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を生
成した。
【０２７３】 さらに、ポリぺプチドのＮ末端またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失
が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じたとしても、他の生物学的
活性はなお保持され得る。例えば、分泌される形態を認識する抗体を誘導および
／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌される形態の残基の過半数未満が
、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持されるようである。タンパク質
のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺプチドが、このような免疫原
性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載される、およびそうでなければ当
該分野において公知の慣用の方法によって容易に決定され得る。
が、１つ以上の生物学的機能の改変または欠失を生じたとしても、他の生物学的
活性はなお保持され得る。例えば、分泌される形態を認識する抗体を誘導および
／または結合する、欠失改変体の能力は、分泌される形態の残基の過半数未満が
、Ｎ末端またはＣ末端から除去される場合に保持されるようである。タンパク質
のＮ末端またはＣ末端残基を欠損する特定のポリぺプチドが、このような免疫原
性活性を保持するか否かは、本明細書中に記載される、およびそうでなければ当
該分野において公知の慣用の方法によって容易に決定され得る。
【０２７４】 従って、本発明はさらに、実質的な生物学的活性を示すポリぺプチド改変体を
含む。このような改変体としては、活性に対する影響をほとんど有さないように
、当該分野において公知の一般的な法則に従って選択される、欠失、挿入、逆位
、反復、および置換が挙げられる。例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置
換を作製する方法に関する指針は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４７：１３０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは
変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究するための２つの主要なストラテジー
があることを指摘する。
含む。このような改変体としては、活性に対する影響をほとんど有さないように
、当該分野において公知の一般的な法則に従って選択される、欠失、挿入、逆位
、反復、および置換が挙げられる。例えば、表現型的にサイレントなアミノ酸置
換を作製する方法に関する指針は、Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４７：１３０６−１３１０（１９９０）において提供され、ここで、著者らは
変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究するための２つの主要なストラテジー
があることを指摘する。
【０２７５】 第１のストラテジーは、進化の過程の間の天然の選別によるアミノ酸置換の寛
容を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存されるアミノ酸
が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機能について重
要であるようである。対照的に、置換が天然の選別によって寛容されたアミノ酸
の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って
、アミノ酸置換を寛容する位置は改変され得るが、タンパク質の生物学的活性を
なおも維持する。
容を利用する。異なる種におけるアミノ酸配列を比較して、保存されるアミノ酸
が同定され得る。これらの保存されるアミノ酸は、タンパク質の機能について重
要であるようである。対照的に、置換が天然の選別によって寛容されたアミノ酸
の位置は、これらの位置がタンパク質の機能に重要ではないことを示す。従って
、アミノ酸置換を寛容する位置は改変され得るが、タンパク質の生物学的活性を
なおも維持する。
【０２７６】 第２のストラテジーは、タンパク質機能に重要な領域を同定するために、クロ
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中の各残基で１つずつのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。
ーン化された遺伝子の特定の位置でアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学を
使用する。例えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発（
分子中の各残基で１つずつのアラニン変異の導入）が、使用され得る。（Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８
５（１９８９））。次いで、得られた変異分子は生物学的活性について試験され
得る。
【０２７７】 著者らが言及するように、これらの２つのストラテジーは、タンパク質がアミ
ノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミ
ノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示
す。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、
非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。
さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡ
ｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；水酸基残基のＳｅｒおよびＴｈｒ
の置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよびＧｌ
ｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基のＰ
ｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡｌａ
、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。
ノ酸置換に驚くほど寛容であることを明らかにした。著者らはさらに、どのアミ
ノ酸変化が、タンパク質中の特定のアミノ酸位置で許容されるようであるかを示
す。例えば、最も埋もれている（タンパク質の三次構造内の）アミノ酸残基は、
非極性側鎖を必要とするが、表面側鎖の特徴は、一般にほとんど保存されない。
さらに、寛容される保存的なアミノ酸置換は、脂肪族または疎水性アミノ酸のＡ
ｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの置換；水酸基残基のＳｅｒおよびＴｈｒ
の置換；酸性残基のＡｓｐおよびＧｌｕの置換；アミド残基のＡｓｎおよびＧｌ
ｎの置換、塩基性残基のＬｙｓ、Ａｒｇ、およびＨｉｓの置換；芳香族残基のＰ
ｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐの置換、ならびに小さなサイズのアミノ酸のＡｌａ
、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、およびＧｌｙの置換を含む。
【０２７８】 保存的なアミノ酸置換以外に、本発明の改変体は、（ｉ）１つ以上の非保存的
なアミノ酸残基の置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによっ
てコードされるアミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、ま
たは（ｉｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ
）別の化合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加す
るための化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの
融合、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチ
ド、またはリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリ
ぺプチドへの融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示
から、当業者の範囲内であることが考えられる。
なアミノ酸残基の置換、ここでは置換されるアミノ酸残基は、遺伝コードによっ
てコードされるアミノ酸残基であってもよく、もしくはそうでなくてもよい、ま
たは（ｉｉ）置換基を有する１つ以上のアミノ酸残基での置換、または（ｉｉｉ
）別の化合物（例えば、ポリぺプチドの安定性および／もしくは可溶性を増加す
るための化合物（例えば、ポリエチレングリコール））との成熟ポリぺプチドの
融合、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチ
ド、またはリーダーもしくは分泌配列、または精製を容易にする配列）とのポリ
ぺプチドへの融合を含む。このような改変体ポリぺプチドは、本明細書中の教示
から、当業者の範囲内であることが考えられる。
【０２７９】 例えば、他の荷電されたアミノ酸または中性のアミノ酸を用いる荷電されたア
ミノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、
より少ない凝集性）を伴うタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝
集体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（
Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０
（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（
１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３
））。
ミノ酸のアミノ酸置換を含むポリぺプチド改変体は、改善された特性（例えば、
より少ない凝集性）を伴うタンパク質を生成し得る。薬学的処方物の凝集は、凝
集体の免疫原活性に起因して、活性を減少し、かつクリアランスを増加する。（
Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：３３１−３４０
（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ ３６：８３８−８４５（
１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０：３０７−３７７（１９９３
））。
【０２８０】 （ポリヌクレオチドおよびポリぺプチドフラグメント） 本発明において、「ポリヌクレオチドフラグメント」とは、寄託されたクロー
ンに含まれるか、または配列番号Ｘにおいて示される核酸配列を有する短いポリ
ヌクレオチドをいう。短いヌクレオチドフラグメントは、好ましくは、少なくと
も約１５ヌクレオチド、およびより好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、
なおより好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、およびさらにより好ましく
は少なくとも約４０ヌクレオチドの長さである。「少なくとも２０ヌクレオチド
の長さ」のフラグメントは、例えば、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配
列または配列番号Ｘにおいて示されるヌクレオチド配列からの２０個以上の連続
した塩基を含むことが意図される。これらのヌクレオチドフラグメントは、本明
細書中で考察されるように、診断プローブおよびプライマーとして有用である。
もちろん、より大きなフラグメント（例えば、５０、１５０、５００、６００、
２０００ヌクレオチド）が好ましい。
ンに含まれるか、または配列番号Ｘにおいて示される核酸配列を有する短いポリ
ヌクレオチドをいう。短いヌクレオチドフラグメントは、好ましくは、少なくと
も約１５ヌクレオチド、およびより好ましくは少なくとも約２０ヌクレオチド、
なおより好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、およびさらにより好ましく
は少なくとも約４０ヌクレオチドの長さである。「少なくとも２０ヌクレオチド
の長さ」のフラグメントは、例えば、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配
列または配列番号Ｘにおいて示されるヌクレオチド配列からの２０個以上の連続
した塩基を含むことが意図される。これらのヌクレオチドフラグメントは、本明
細書中で考察されるように、診断プローブおよびプライマーとして有用である。
もちろん、より大きなフラグメント（例えば、５０、１５０、５００、６００、
２０００ヌクレオチド）が好ましい。
【０２８１】 さらに、本発明のポリヌクレオチドフラグメントの代表的な例は、例えば、配
列番号Ｘまたは寄託されたクローンにおいて含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド番
号の約１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２
５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４
５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７
５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９
５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５
０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１
〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、
１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１
７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８
５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、および２００１〜
最後、からの配列を有するフラグメントを含む。この状況において、「約」は、
具体的に列挙される範囲、いずれかの末端もしくは両方の末端で、いくつか（５
、４、３、２、もしくは１個）のヌクレオチドだけより大きなまたはより小さな
範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性を有するポリ
ぺプチドをコードする。より好ましくは、これらのポリヌクレオチドは、本明細
書において考察されるようにプローブまたはプライマーとして使用され得る。
列番号Ｘまたは寄託されたクローンにおいて含まれるｃＤＮＡのヌクレオチド番
号の約１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、２０１〜２
５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１〜４５０、４
５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６５１〜７００、７０１〜７
５０、７５１〜８００、８００〜８５０、８５１〜９００、９０１〜９５０、９
５１〜１０００、１００１〜１０５０、１０５１〜１１００、１１０１〜１１５
０、１１５１〜１２００、１２０１〜１２５０、１２５１〜１３００、１３０１
〜１３５０、１３５１〜１４００、１４０１〜１４５０、１４５１〜１５００、
１５０１〜１５５０、１５５１〜１６００、１６０１〜１６５０、１６５１〜１
７００、１７０１〜１７５０、１７５１〜１８００、１８０１〜１８５０、１８
５１〜１９００、１９０１〜１９５０、１９５１〜２０００、および２００１〜
最後、からの配列を有するフラグメントを含む。この状況において、「約」は、
具体的に列挙される範囲、いずれかの末端もしくは両方の末端で、いくつか（５
、４、３、２、もしくは１個）のヌクレオチドだけより大きなまたはより小さな
範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性を有するポリ
ぺプチドをコードする。より好ましくは、これらのポリヌクレオチドは、本明細
書において考察されるようにプローブまたはプライマーとして使用され得る。
【０２８２】 本発明において、「ポリぺプチドフラグメント」とは、配列番号Ｙにおいて含
まれ、または寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡによってコードされる、短
いアミノ酸配列をいう。タンパク質フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓ
ｔａｎｄｉｎｇ）」であり得るか、またはフラグメントが部分または領域を形成
するより大きなポリぺプチド内に、最も好ましくは単一の連続した領域として、
含まれ得る。本発明のポリぺプチドフラグメントの代表的な例は、例えばコード
領域のアミノ酸番号の約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１
〜１００、１０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、または１６１〜
最後のフラグメントを含む。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、約２０、３
０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、
１４０、または１５０アミノ酸の長さであり得る。この状況において、「約」は
、具体的に列挙される範囲、いずれかの末端または両方の末端で、いくつかの（
５、４、３、２、または１個）アミノ酸長だけより大きなまたはより小さな範囲
を含む。
まれ、または寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡによってコードされる、短
いアミノ酸配列をいう。タンパク質フラグメントは、「自立構造（ｆｒｅｅ−ｓ
ｔａｎｄｉｎｇ）」であり得るか、またはフラグメントが部分または領域を形成
するより大きなポリぺプチド内に、最も好ましくは単一の連続した領域として、
含まれ得る。本発明のポリぺプチドフラグメントの代表的な例は、例えばコード
領域のアミノ酸番号の約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１
〜１００、１０２〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、または１６１〜
最後のフラグメントを含む。さらに、ポリぺプチドフラグメントは、約２０、３
０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、
１４０、または１５０アミノ酸の長さであり得る。この状況において、「約」は
、具体的に列挙される範囲、いずれかの末端または両方の末端で、いくつかの（
５、４、３、２、または１個）アミノ酸長だけより大きなまたはより小さな範囲
を含む。
【０２８３】 好ましいポリぺプチドフラグメントは、分泌タンパク質および成熟形態を含む
。さらに好ましいポリぺプチドフラグメントは、アミノ末端もしくはカルボキシ
末端、またはその両方から、連続した一連の欠失された残基を有する、分泌タン
パク質または成熟形態を含む。例えば、１〜６０個の範囲の任意の数のアミノ酸
は、分泌ポリペプチドまたは成熟形態のいずれかのアミノ末端から欠失され得る
。同様に、１〜３０個の範囲の任意数のアミノ酸は、分泌タンパク質または成熟
形態のカルボキシ末端から欠失され得る。さらに、上述のアミノ末端およびカル
ボキシ末端の欠失の任意の組み合わせが好ましい。同様に、これらのポリぺプチ
ドフラグメントをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、好ましい。
。さらに好ましいポリぺプチドフラグメントは、アミノ末端もしくはカルボキシ
末端、またはその両方から、連続した一連の欠失された残基を有する、分泌タン
パク質または成熟形態を含む。例えば、１〜６０個の範囲の任意の数のアミノ酸
は、分泌ポリペプチドまたは成熟形態のいずれかのアミノ末端から欠失され得る
。同様に、１〜３０個の範囲の任意数のアミノ酸は、分泌タンパク質または成熟
形態のカルボキシ末端から欠失され得る。さらに、上述のアミノ末端およびカル
ボキシ末端の欠失の任意の組み合わせが好ましい。同様に、これらのポリぺプチ
ドフラグメントをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、好ましい。
【０２８４】 構造ドメインまたは機能ドメイン（例えば、αヘリックスおよびαヘリックス
形成領域、βシートおよびβシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コ
イルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親
媒性領域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および抗原性指標の高い領
域を含むフラグメント）によって特徴付けられるポリぺプチドおよびポリヌクレ
オチドのフラグメントもまた、好ましい。保存されるドメイン内にある配列番号
Ｙのポリぺプチドフラグメントは、本発明によって具体的に意図される。さらに
、これらのドメインをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、意図さ
れる。
形成領域、βシートおよびβシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コ
イルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親
媒性領域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および抗原性指標の高い領
域を含むフラグメント）によって特徴付けられるポリぺプチドおよびポリヌクレ
オチドのフラグメントもまた、好ましい。保存されるドメイン内にある配列番号
Ｙのポリぺプチドフラグメントは、本発明によって具体的に意図される。さらに
、これらのドメインをコードするポリヌクレオチドフラグメントもまた、意図さ
れる。
【０２８５】 他の好ましいフラグメントは、生物学的に活性なフラグメントである。生物学
的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活性に類似の活性を示すが
、必ずしも同一である必要はないフラグメントである。フラグメントの生物学活
性は、改善された所望の活性、または減少された所望されない活性を含み得る。
的に活性なフラグメントは、本発明のポリぺプチドの活性に類似の活性を示すが
、必ずしも同一である必要はないフラグメントである。フラグメントの生物学活
性は、改善された所望の活性、または減少された所望されない活性を含み得る。
【０２８６】 （エピトープおよび抗体） 本発明において、「エピトープ」とは、動物において、特にヒトにおいて、抗
原性または免疫原性活性を有するポリぺプチドフラグメントをいう。本発明の好
ましい実施態様は、エピトープを含むポリぺプチドフラグメント、およびこのフ
ラグメントをコードするポリヌクレオチドに関する。抗体が結合し得るタンパク
質分子の領域は、「抗原性エピトープ」と定義される。対照的に、「免疫原性エ
ピトープ」は、抗体応答を誘発するタンパク質の一部と定義される。（例えば、
Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９
９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。
原性または免疫原性活性を有するポリぺプチドフラグメントをいう。本発明の好
ましい実施態様は、エピトープを含むポリぺプチドフラグメント、およびこのフ
ラグメントをコードするポリヌクレオチドに関する。抗体が結合し得るタンパク
質分子の領域は、「抗原性エピトープ」と定義される。対照的に、「免疫原性エ
ピトープ」は、抗体応答を誘発するタンパク質の一部と定義される。（例えば、
Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９
９８−４００２（１９８３）を参照のこと）。
【０２８７】 エピトープとして機能するフラグメントは任意の従来の手段によって産生され
得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ．Ｒ．Ａ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃ
ａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５ （１９８５）、米国特
許第４，６３１，２１１号でさらに記載される、を参照のこと）。
得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ．Ｒ．Ａ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃ
ａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５ （１９８５）、米国特
許第４，６３１，２１１号でさらに記載される、を参照のこと）。
【０２８８】 本発明において、抗原性エピトープは、好ましくは少なくとも７つ、より好ま
しくは少なくとも９つ、そして最も好ましくは約１５〜約３０アミノ酸の間の配
列を含む。抗原性エピトープは、エピトープに特異的に結合する抗体（モノクロ
ーナル抗体を含む）を惹起するために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃ
ｅｌｌ ３７：７６７−７７８ （１９８４）； Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ， Ｊ．
Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９： ６６０−６６６ （１９８３）を参照のこ
と）。
しくは少なくとも９つ、そして最も好ましくは約１５〜約３０アミノ酸の間の配
列を含む。抗原性エピトープは、エピトープに特異的に結合する抗体（モノクロ
ーナル抗体を含む）を惹起するために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃ
ｅｌｌ ３７：７６７−７７８ （１９８４）； Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ， Ｊ．
Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９： ６６０−６６６ （１９８３）を参照のこ
と）。
【０２８９】 同様に、免疫原性エピトープは、当該分野で周知の方法に従って抗体を誘導す
るために使用され得る（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら
、前出；Ｃｈｏｗ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，Ｆ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒ
ｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原
性エピトープは分泌タンパク質を含む。免疫原性エピトープは、動物系（例えば
、ウサギまたはマウス）にアルブミンのようなキャリアタンパク質とともに提示
され得るか、または免疫原性エピトープが十分に長い場合（少なくとも、約２５
アミノ酸）には、キャリアなしで提示され得る。しかし、わずか８〜１０アミノ
酸を含む免疫原性エピトープは、変性ポリペプチドにおいて（例えば、ウエスタ
ンブロッティングにおいて）、少なくとも線状エピトープに結合し得る抗体を惹
起するのに十分であることが示されている。
るために使用され得る（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら、前出；Ｗｉｌｓｏｎら
、前出；Ｃｈｏｗ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，Ｆ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒ
ｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照のこと）。好ましい免疫原
性エピトープは分泌タンパク質を含む。免疫原性エピトープは、動物系（例えば
、ウサギまたはマウス）にアルブミンのようなキャリアタンパク質とともに提示
され得るか、または免疫原性エピトープが十分に長い場合（少なくとも、約２５
アミノ酸）には、キャリアなしで提示され得る。しかし、わずか８〜１０アミノ
酸を含む免疫原性エピトープは、変性ポリペプチドにおいて（例えば、ウエスタ
ンブロッティングにおいて）、少なくとも線状エピトープに結合し得る抗体を惹
起するのに十分であることが示されている。
【０２９０】 本明細書中で使用される用語「抗体」（Ａｂ）または「モノクローナル抗体」
（Ｍａｂ）は、タンパク質に特異的に結合し得るインタクトな分子および抗体フ
ラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含むことを
意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクトな抗体のＦ
ｃフラグメントを欠損し、循環からより迅速に排除され、そしてインタクトな抗
体よりも少ない非特異的組織結合を有し得る。（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍ
ｅｄ． ２４：３１６−３２５（１９８３））。従って、これらのフラグメント
は、ＦＡＢの産物または他の免疫グロブリン発現ライブラリーと同様に好ましい
。さらに、本発明の抗体はキメラ抗体、単鎖抗体、およびヒト化抗体を含む。
（Ｍａｂ）は、タンパク質に特異的に結合し得るインタクトな分子および抗体フ
ラグメント（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含むことを
意味する。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、インタクトな抗体のＦ
ｃフラグメントを欠損し、循環からより迅速に排除され、そしてインタクトな抗
体よりも少ない非特異的組織結合を有し得る。（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍ
ｅｄ． ２４：３１６−３２５（１９８３））。従って、これらのフラグメント
は、ＦＡＢの産物または他の免疫グロブリン発現ライブラリーと同様に好ましい
。さらに、本発明の抗体はキメラ抗体、単鎖抗体、およびヒト化抗体を含む。
【０２９１】 （融合タンパク質） 本発明の任意のポリペプチドは、融合タンパク質を産生するために使用され得
る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパク質と融合される場合、抗
原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチドに対して惹起される抗体は
、ポリペプチドに結合することによって、第２のタンパク質を間接的に検出する
ために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質は、細胞位置を輸送シグナ
ルに基づいて標的化するので、本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦
融合されると標的化分子として使用され得る。
る。例えば、本発明のポリペプチドは、第２のタンパク質と融合される場合、抗
原性タグとして使用され得る。本発明のポリペプチドに対して惹起される抗体は
、ポリペプチドに結合することによって、第２のタンパク質を間接的に検出する
ために使用され得る。さらに、分泌されるタンパク質は、細胞位置を輸送シグナ
ルに基づいて標的化するので、本発明のポリペプチドは、他のタンパク質に一旦
融合されると標的化分子として使用され得る。
【０２９２】 本発明のポリペプチドと融合され得るドメインの例は、異種シグナル配列のみ
ならず、また他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要
はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
ならず、また他の異種機能性領域をも含む。融合は、必ずしも直接的である必要
はないが、リンカー配列を介して起こり得る。
【０２９３】 さらに、融合タンパク質はまた、本発明のポリペプチドの特徴を改良するため
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主
細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性および持続性を改良
するためにポリペプチドのＮ末端へ付加され得る。また、ペプチド部分は精製を
容易にするためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチ
ドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするための
ペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られる慣用の技術である。
に操作され得る。例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、宿主
細胞からの精製または続く取り扱いおよび貯蔵の間の安定性および持続性を改良
するためにポリペプチドのＮ末端へ付加され得る。また、ペプチド部分は精製を
容易にするためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチ
ドの最終調製の前に除去され得る。ポリペプチドの取り扱いを容易にするための
ペプチド部分の付加は、当該分野でよく知られる慣用の技術である。
【０２９４】 さらに、本発明のポリペプチド（フラグメント、そして特にエピトープを含む
）は、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの一部と組み合わせられ得、キ
メラポリぺプチドを生じる。これらの融合タンパク質は精製を容易にし、そして
インビボにおける増大した半減期を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポ
リペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖ま
たは軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している
（ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１
：８４−８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する
）を有する融合タンパク質もまた、単量体分泌タンパク質またはタンパク質フラ
グメント単独よりも、他の分子に結合しそして中和するのにさらに効率的であり
得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３９５８−
３９６４（１９９５））。
）は、免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの一部と組み合わせられ得、キ
メラポリぺプチドを生じる。これらの融合タンパク質は精製を容易にし、そして
インビボにおける増大した半減期を示す。１つの報告された例は、ヒトＣＤ４ポ
リペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物の免疫グロブリンの重鎖ま
たは軽鎖の定常領域の種々のドメインからなるキメラタンパク質を記載している
（ＥＰ Ａ ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１
：８４−８６（１９８８））。ジスルフィド連結二量体構造（ＩｇＧに起因する
）を有する融合タンパク質もまた、単量体分泌タンパク質またはタンパク質フラ
グメント単独よりも、他の分子に結合しそして中和するのにさらに効率的であり
得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：３９５８−
３９６４（１９９５））。
【０２９５】 同様に、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３（カナダ国対応特許第２０４５８６９
号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに免疫グロブリン分子の定常
領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク
質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改良さ
れた薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは
、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原として
使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の発
見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニス
トを同定するための高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分
と融合されてきた（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏ
ｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）
。
号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに免疫グロブリン分子の定常
領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク
質のＦｃ部分は、治療および診断において有益であり、従って、例えば、改良さ
れた薬物動態学的な特性を生じ得る（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２）。あるいは
、融合タンパク質が発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失させることが望ましい。例えば、融合タンパク質が免疫化のための抗原として
使用される場合、Ｆｃ部分は、治療および診断を妨害し得る。例えば、薬物の発
見において、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニス
トを同定するための高処理能力スクリーニングアッセイの目的のためにＦｃ部分
と融合されてきた（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏ
ｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２−５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと）
。
【０２９６】 さらに、本発明のポリペプチドはマーカー配列（例えば、融合されたポリペプ
チドの精製を容易にするペプチド）に融合され得る。好ましい実施態様において
、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐ
ＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，
Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、
これらの多くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１
９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の
良い精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タグ
は、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗｉ
ｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４））。
チドの精製を容易にするペプチド）に融合され得る。好ましい実施態様において
、マーカーアミノ酸配列は、とりわけヘキサ−ヒスチジンペプチド（例えば、ｐ
ＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，
Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ）であり、
これらの多くのマーカーアミノ酸配列が市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１
９８９）に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の都合の
良い精製を提供する。精製のために有用な別のペプチドタグである「ＨＡ」タグ
は、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する（Ｗｉ
ｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７（１９８４））。
【０２９７】 従って、任意のこれら上記の融合物は、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドを使用して操作され得る。
ペプチドを使用して操作され得る。
【０２９８】 （ベクター、宿主細胞、およびタンパク質産生） 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、宿主細胞、および
組換え技術によるポリペプチドの産生に関連する。例えば、ベクターは、ファー
ジベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベ
クターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製
欠損であり得る。後者の場合、一般的にウイルス増殖は、補完性（ｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉｎｇ）宿主細胞にのみ生じる。
組換え技術によるポリペプチドの産生に関連する。例えば、ベクターは、ファー
ジベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクター、またはレトロウイルスベ
クターであり得る。レトロウイルスベクターは、複製コンピテント、または複製
欠損であり得る。後者の場合、一般的にウイルス増殖は、補完性（ｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉｎｇ）宿主細胞にのみ生じる。
【０２９９】 ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために選択マーカーを含むベクター
に連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物のよ
うな沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクターがウイル
スである場合、ウィルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使用してイ
ンビトロでパッケージングされ、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
に連結され得る。一般に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物のよ
うな沈澱物、または荷電脂質との複合体において導入される。ベクターがウイル
スである場合、ウィルスベクターは、適切なパッケージング細胞株を使用してイ
ンビトロでパッケージングされ、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
【０３００】 ポリヌクレオチド挿入物は、適切なプロモーター（いくつか挙げれば、例えば
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によ
って発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、お
よび翻訳されるためのポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡ
Ａ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
、ファージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプ
ロモーター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プ
ロモーターおよびＳＶ４０後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲの
プロモーター）に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは
当業者に公知である。発現構築物はさらに、転写開始、転写終結のための部位、
および転写領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物によ
って発現される転写物のコード部分は、好ましくは、始めに翻訳開始コドン、お
よび翻訳されるためのポリペプチドの末端に適切に位置される終結コドン（ＵＡ
Ａ、ＵＧＡまたはＵＡＧ）を含む。
【０３０１】 示されるように、発現ベクターは、好ましくは少なくとも１つの選択マーカー
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他
の細菌において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシ
リン耐性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃ
ｏｌｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌｉａ Ｓ２
およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；ＣＨＯ細胞、ＣＯ
Ｓ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような動物細胞；なら
びに植物細胞を含むが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な
培養培地および条件は、当該分野で公知である。
を含む。このようなマーカーは、真核細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクター
ゼ、Ｇ４１８、またはネオマイシン耐性遺伝子、ならびにＥ．ｃｏｌｉおよび他
の細菌において培養するためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシ
リン耐性遺伝子を含む。適切な宿主の代表的な例は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃ
ｏｌｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ細胞）；酵母細胞のような真菌細胞；Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌｉａ Ｓ２
およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞のような昆虫細胞；ＣＨＯ細胞、ＣＯ
Ｓ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞のような動物細胞；なら
びに植物細胞を含むが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な
培養培地および条件は、当該分野で公知である。
【０３０２】 細菌における使用のための好ましいベクターの中には、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．から入手可能）；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２
３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの
中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳ
ＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。他の適切なベク
ターは当業者に容易に明らかである。
０およびｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．から入手可能）；ｐＢｌｕｅｓｃ
ｒｉｐｔベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．から入手可能）；およびｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２
３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．から入手可能）を含む。好ましい真核生物ベクターの
中には、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能）；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳ
ＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）がある。他の適切なベク
ターは当業者に容易に明らかである。
【０３０３】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組換
えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、または他の方法によっ
てもたらされ得る。このような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （１９８６）のような多く
の標準的研究室マニュアルに記載される。本発明のポリペプチドは、実際、組換
えベクターを欠損する宿主細胞によって発現され得ることが特に意図される。
【０３０４】 本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマ
トグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され得、そして
精製され得る。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）
が精製のために使用される。
【０３０５】 本発明のポリペプチド、および好ましくは分泌形態はまた、以下から回収され
得る：直接単離されるかまたは培養されるかにかかわらず、体液、組織および細
胞を含む天然の供給源から精製された産物；化学的合成手順の産物；ならびに、
例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を
含む、原核生物宿主または真核生物宿主から組換え技術によって産生された産物
。組換え産生手順に使用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリ
コシル化されてもまたはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明の
ポリペプチドもまた、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において
、最初の改変されたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コド
ンによってコードされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻
訳後の任意のタンパク質から高い効率で除去されることは当該分野において周知
である。ほとんどのタンパク質においてＮ末端メチオニンもまた、ほとんどの原
核生物において効果的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原
核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存
しており、非効率的である。
得る：直接単離されるかまたは培養されるかにかかわらず、体液、組織および細
胞を含む天然の供給源から精製された産物；化学的合成手順の産物；ならびに、
例えば、細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を
含む、原核生物宿主または真核生物宿主から組換え技術によって産生された産物
。組換え産生手順に使用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、グリ
コシル化されてもまたはグリコシル化されていなくてもよい。さらに、本発明の
ポリペプチドもまた、宿主媒介プロセスの結果として、いくつかの場合において
、最初の改変されたメチオニン残基を含み得る。従って、一般に、翻訳開始コド
ンによってコードされるＮ末端メチオニンが、すべての真核生物細胞における翻
訳後の任意のタンパク質から高い効率で除去されることは当該分野において周知
である。ほとんどのタンパク質においてＮ末端メチオニンもまた、ほとんどの原
核生物において効果的に除去されるが、いくつかのタンパク質について、この原
核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合するアミノ酸の性質に依存
しており、非効率的である。
【０３０６】 （ポリヌクレオチドの使用） 本明細書中で同定された各々のポリヌクレオチドは、試薬として多数の方法に
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
おいて使用され得る。以下の説明は例示的であるとみなされるべきであり、そし
て公知の技術を利用する。
【０３０７】 本発明のポリヌクレオチドは、染色体同定のために有用である。実際の配列デ
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。本発
明の各々のポリヌクレオチドは、染色体マーカーとして使用され得る。
ータ（反復多型性）に基づく染色体マーキング試薬は現在ほとんど利用可能では
ないため、新しい染色体マーカーを同定する必要性が存在するままである。本発
明の各々のポリヌクレオチドは、染色体マーカーとして使用され得る。
【０３０８】 簡単に言うと、配列は、配列番号Ｘで示される配列からＰＣＲプライマー（好
ましくは１５〜２５ｂｐ）を調製することによって染色体にマッピングされ得る
。プライマーが、ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたが
らないように、プライマーは、コンピューター分析を使用して選択され得る。次
いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰ
ＣＲスクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含
むそれらのハイブリッドのみが、増幅したフラグメントを産生する。
ましくは１５〜２５ｂｐ）を調製することによって染色体にマッピングされ得る
。プライマーが、ゲノムＤＮＡ中の１つより多くの予測されたエキソンにまたが
らないように、プライマーは、コンピューター分析を使用して選択され得る。次
いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰ
ＣＲスクリーニングのために使用される。配列番号Ｘに対応するヒト遺伝子を含
むそれらのハイブリッドのみが、増幅したフラグメントを産生する。
【０３０９】 同様に、体細胞ハイブリッドは、特定の染色体に対してポリヌクレオチドをＰ
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの準局在化（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグメン
トのパネルで達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略は、インサ
イチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ ｆｌｏｗ
ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡ
ライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択を含む。
ＣＲマッピングする迅速な方法を提供する。単一のサーマルサイクラーを使用し
て１日あたり３つ以上のクローンが割り当てられ得る。さらに、ポリヌクレオチ
ドの準局在化（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、特定の染色体フラグメン
トのパネルで達成され得る。使用され得る他の遺伝子マッピング戦略は、インサ
イチュハイブリダイゼーション、標識フローソート（ｌａｂｅｌｅｄ ｆｌｏｗ
ｓｏｒｔｅｄ）染色体でのプレスクリーニング、および染色体特異的ｃＤＮＡ
ライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによる前選択を含む。
【０３１０】 ポリヌクレオチドの正確な染色体位置はまた、中期染色体スプレッド（ｓｐｒ
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して達
成され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ： ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこ
と。
ｅａｄ）の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用して達
成され得る。この技術は５００または６００塩基ほどの短さのポリヌクレオチド
を使用する；しかし２，０００〜４，０００ｂｐのポリヌクレオチドが好ましい
。この技術の総説に関しては、Ｖｅｒｍａら、「Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏ
ｍｅｓ： ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」，
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８８）を参照のこ
と。
【０３１１】 染色体マッピングについては、ポリヌクレオチドは、個々に（単一染色体また
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。好ましいポリヌクレ
オチドは、ｃＤＮＡの非コード領域に対応する。なぜなら、コード配列は、遺伝
子ファミリー内により保存される傾向があり、従って、染色体マッピングの間の
交叉ハイブリダイゼーションの機会が増加するからである。
はその染色体上の単一部位をマークするために）またはパネルで（複数部位およ
び／または複数染色体をマークするために）使用され得る。好ましいポリヌクレ
オチドは、ｃＤＮＡの非コード領域に対応する。なぜなら、コード配列は、遺伝
子ファミリー内により保存される傾向があり、従って、染色体マッピングの間の
交叉ハイブリダイゼーションの機会が増加するからである。
【０３１２】 一旦、ポリヌクレオチドが正確な染色体位置にマップされると、ポリヌクレオ
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ． ＭｃＫｕｓｉｃｋ， Ｍｅｎｄ
ｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉ
ｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを
通してオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマ
ッピング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染
色体領域に正確に配置されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
１つであり得る。
チドの物理的位置は、連鎖分析において使用され得る。連鎖分析は、染色体位置
と特定の疾患の提示との間の同時遺伝（ｃｏｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ）を確立す
る。（疾患マッピングデータは、例えば、Ｖ． ＭｃＫｕｓｉｃｋ， Ｍｅｎｄ
ｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉ
ｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを
通してオンラインで利用可能である）において見い出される）。１メガベースマ
ッピング解像度および２０ｋｂあたり１遺伝子と仮定すると、疾患と関連する染
色体領域に正確に配置されるｃＤＮＡは、５０〜５００の潜在的な原因遺伝子の
１つであり得る。
【０３１３】 従って、一旦、同時遺伝が確立されると、罹患個体と非罹患個体との間でのポ
リヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。まず、染色
体中の可視的構造改変（例えば、欠損または転位）は染色体スプレッドにおいて
、またはＰＣＲによって試験される。構造的改変が存在しない場合、点変異の存
在が確認される。何人かのまたは全ての罹患された個体で観察されたが、正常な
個体では観察されなかった変異は、変異が疾患を引き起こし得ることを示す。し
かし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝子の完全な
配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型性が同定さ
れる場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用され得る。
リヌクレオチドおよび対応する遺伝子における差異が試験され得る。まず、染色
体中の可視的構造改変（例えば、欠損または転位）は染色体スプレッドにおいて
、またはＰＣＲによって試験される。構造的改変が存在しない場合、点変異の存
在が確認される。何人かのまたは全ての罹患された個体で観察されたが、正常な
個体では観察されなかった変異は、変異が疾患を引き起こし得ることを示す。し
かし、いくつかの正常な個体由来のポリペプチドおよび対応する遺伝子の完全な
配列決定は、変異を多型性と区別するために要求される。新しい多型性が同定さ
れる場合、この多型ポリペプチドはさらなる連鎖分析のために使用され得る。
【０３１４】 さらに、非罹患個体と比較した罹患個体の遺伝子の増加または減少した発現が
、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの改変（改
変された発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
、本発明のポリヌクレオチドを使用して評価され得る。任意のこれらの改変（改
変された発現、染色体再配置、または変異）は、診断マーカーまたは予後マーカ
ーとして使用され得る。
【０３１５】 前記に加えて、ポリヌクレオチドは、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮ
ＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御するために使用され得る。両方の方
法は、ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。これらの技
術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長であり、そし
て転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１
：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３
６０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ自体（アンチセンス−Ｏｋａｎ
ｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘ
ｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相補的である。三重らせん形成は
、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写を遮断するが、アンチセンスＲＮＡハイブリ
ダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する。両方の技
術は、モデル系において効果的であり、そして本明細書に開示される情報は、疾
患を処置するための試みにおいて、アンチセンスまたは三重らせんポリヌクレオ
チドを設計するために使用され得る。
ＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御するために使用され得る。両方の方
法は、ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に依存する。これらの技
術に関して、好ましいポリヌクレオチドは通常、２０〜４０塩基長であり、そし
て転写に関与する遺伝子領域（三重らせん−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１
：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３
６０（１９９１）を参照のこと）またはｍＲＮＡ自体（アンチセンス−Ｏｋａｎ
ｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘ
ｙ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
ｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））のいずれかに相補的である。三重らせん形成は
、最適にはＤＮＡからのＲＮＡ転写を遮断するが、アンチセンスＲＮＡハイブリ
ダイゼーションは、ポリペプチドへのｍＲＮＡ分子の翻訳を阻止する。両方の技
術は、モデル系において効果的であり、そして本明細書に開示される情報は、疾
患を処置するための試みにおいて、アンチセンスまたは三重らせんポリヌクレオ
チドを設計するために使用され得る。
【０３１６】 本発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝子治療において有用である。遺伝子治
療の１つの目標は、遺伝子欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生
物へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは
、高度に正確な様式でこのような遺伝子欠損を標的とする手段を提供する。別の
目標は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入することであり、
それによって宿主細胞中に新しい形質を生成する。
療の１つの目標は、遺伝子欠損を修正する試みにおいて、欠損遺伝子を有する生
物へ正常遺伝子を挿入することである。本発明に開示されるポリヌクレオチドは
、高度に正確な様式でこのような遺伝子欠損を標的とする手段を提供する。別の
目標は、宿主ゲノム中には存在しなかった新しい遺伝子を挿入することであり、
それによって宿主細胞中に新しい形質を生成する。
【０３１７】 ポリヌクレオチドはまた、微小な生物学的サンプルから個体を同定するために
有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグメント長
の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノム
ＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固有なバン
ドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は、「認識
票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれた
りすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない
。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとし
て使用され得る。
有用である。例えば、米国軍は、その職員を同定するために制限フラグメント長
の多型性（ＲＦＬＰ）の使用を考慮している。この技術において、個体のゲノム
ＤＮＡは１つ以上の制限酵素で消化され、そして職員を同定するため固有なバン
ドを生じるためのサザンブロットについてプローブされる。この方法は、「認識
票（Ｄｏｇ ｔａｇ）」（これは、失われたり、交換されたり、または盗まれた
りすることにより、ポジティブな同定を困難にし得る）の現在の限界を受けない
。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰのためのさらなるＤＮＡマーカーとし
て使用され得る。
【０３１８】 本発明のポリヌクレオチドはまた、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰのための代替として使用
され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡ（これは、次いで配列
決定され得る）を増幅しそして単離するためにＰＣＲプライマーを調製するため
に使用され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有するので、この技術を
使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベースが個体について
確立されると、個体が生存していようとまたは死亡していようとにかかわらず、
個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプルから作製され得る。
基ごとのＤＮＡ配列を決定することによって、ＲＦＬＰのための代替として使用
され得る。これらの配列は、このような選択されたＤＮＡ（これは、次いで配列
決定され得る）を増幅しそして単離するためにＰＣＲプライマーを調製するため
に使用され得る。各個体が固有のセットのＤＮＡ配列を有するので、この技術を
使用して、個体が同定され得る。一旦、固有のＩＤデータベースが個体について
確立されると、個体が生存していようとまたは死亡していようとにかかわらず、
個体のポジティブ同定が、極めて小さな組織サンプルから作製され得る。
【０３１９】 法医学生物学もまた、本明細書に開示されるようなＤＮＡに基づく同定技術を
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液など）のような非常にわずかな生物学的サンプルから得られたＤ
ＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。ある先行技術において、ＤＱａク
ラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子座から増幅された遺伝子配列は、
個体を同定するための法医学生物学において使用される。（Ｅｒｌｉｃｈ， Ｈ
．， ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ． （
１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が増幅されると、これらは
１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子に
対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについてのバンドの同定するセ
ットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医学的目的のための多
型性マーカーとして使用され得る。
使用して利益を得る。組織（例えば、髪または皮膚）、または体液（例えば、血
液、唾液、精液など）のような非常にわずかな生物学的サンプルから得られたＤ
ＮＡ配列は、ＰＣＲを使用して増幅され得る。ある先行技術において、ＤＱａク
ラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子のような多型性遺伝子座から増幅された遺伝子配列は、
個体を同定するための法医学生物学において使用される。（Ｅｒｌｉｃｈ， Ｈ
．， ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ． （
１９９２））。一旦、これらの特異的多型性遺伝子座が増幅されると、これらは
１つ以上の制限酵素で消化される。これは、ＤＱａクラスＩＩ ＨＬＡ遺伝子に
対応するＤＮＡでプローブされたサザンブロットについてのバンドの同定するセ
ットを生じる。同様に、本発明のポリヌクレオチドは、法医学的目的のための多
型性マーカーとして使用され得る。
【０３２０】 また、特定の組織の供給源を同定し得る試薬についての必要性が存在する。例
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される特定の組織に特異
的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは、
種および／または器官型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これらの試
薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニングするために使用され得る。
えば、未知の起源の組織が提供される場合、法医学においてこのような必要性が
生じる。適切な試薬は、例えば、本発明の配列から調製される特定の組織に特異
的なＤＮＡプローブまたはプライマーを含み得る。このような試薬のパネルは、
種および／または器官型によって組織を同定し得る。同様の様式で、これらの試
薬は、夾雑物について組織培養物をスクリーニングするために使用され得る。
【０３２１】 少なくとも、本発明のポリヌクレオチドは、サザンゲルでの分子量マーカーと
して、特定の細胞型における特定のｍＲＮＡの存在に関する診断プローブとして
、新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスでの公知の配列を「差し引き」す
るためのプローブとして、「遺伝子チップ」または他の支持体に付着させるため
のオリゴマーを選択および作製するため、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体
を惹起させるため、および免疫応答を誘発する抗原として、使用され得る。
して、特定の細胞型における特定のｍＲＮＡの存在に関する診断プローブとして
、新規なポリヌクレオチドを発見するプロセスでの公知の配列を「差し引き」す
るためのプローブとして、「遺伝子チップ」または他の支持体に付着させるため
のオリゴマーを選択および作製するため、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ＤＮＡ抗体
を惹起させるため、および免疫応答を誘発する抗原として、使用され得る。
【０３２２】 （ポリペプチドの使用） 本明細書中に同定される各ポリペプチドは、多くの方法に使用され得る。以下
の説明は、例示としてみなされるべきであり、そして公知の技術を使用する。
の説明は、例示としてみなされるべきであり、そして公知の技術を使用する。
【０３２３】 本発明のポリペプチドは、抗体に基づいた技術を使用して生物学的サンプル中
のタンパク質レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、組織における
タンパク質発現は、古典的な免疫組織化学法を用いて研究され得る（Ｊａｌｋａ
ｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５
）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−
３０９６（１９８７））。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用である、抗
体に基づいた他の方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが含まれる。適切な抗体ア
ッセイの標識は、当該技術分野で公知であり、そして例えば、グルコースオキシ
ダーゼのような酵素標識、ならびにヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４
Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およ
びテクネチウム（９９ｍＴｃ）のような放射性同位体、ならびにフルオレセイン
およびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。
のタンパク質レベルをアッセイするために使用され得る。例えば、組織における
タンパク質発現は、古典的な免疫組織化学法を用いて研究され得る（Ｊａｌｋａ
ｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５（１９８５
）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−
３０９６（１９８７））。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用である、抗
体に基づいた他の方法には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびラ
ジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のような免疫アッセイが含まれる。適切な抗体ア
ッセイの標識は、当該技術分野で公知であり、そして例えば、グルコースオキシ
ダーゼのような酵素標識、ならびにヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４
Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およ
びテクネチウム（９９ｍＴｃ）のような放射性同位体、ならびにフルオレセイン
およびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンが挙げられる。
【０３２４】 生物学的サンプル中の分泌タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、タ
ンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質をインビボ
で画像化するための抗体の標識またはマーカーとしては、Ｘ線ラジオグラフィー
、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能なものが挙げられる。Ｘ線ラジオグラフィ
ーについては、適切な標識は、検出可能な放射線を発するが、被験体に対して明
白に有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位体を含む。ＮＭＲ
およびＥＳＲに適切なマーカーには、例えば重水素のような検出可能な特徴的な
スピンを有するものが含まれ、これは、関連したハイブリドーマのための栄養素
を標識することにより抗体に取り込まれ得る。
ンパク質はまた、画像化によりインビボで検出され得る。タンパク質をインビボ
で画像化するための抗体の標識またはマーカーとしては、Ｘ線ラジオグラフィー
、ＮＭＲまたはＥＳＲにより検出可能なものが挙げられる。Ｘ線ラジオグラフィ
ーについては、適切な標識は、検出可能な放射線を発するが、被験体に対して明
白に有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位体を含む。ＮＭＲ
およびＥＳＲに適切なマーカーには、例えば重水素のような検出可能な特徴的な
スピンを有するものが含まれ、これは、関連したハイブリドーマのための栄養素
を標識することにより抗体に取り込まれ得る。
【０３２５】 放射性同位体（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）、放射線不透過
性物質、または核磁気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像
化部分で標識された、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、哺乳動
物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される。被験体のサイズ
および用いられる画像化システムは、診断画像を生成するために必要な画像化部
分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分の場合には、
ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃの約５〜２０
ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フラグメントは
、特定のタンパク質を含む細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像
化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅ
ｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ
Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒ
ａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１３
章、Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２）に記載される。
性物質、または核磁気共鳴により検出可能な材料のような適切な検出可能な画像
化部分で標識された、タンパク質特異的抗体または抗体フラグメントは、哺乳動
物に（例えば、非経口的、皮下、または腹腔内に）導入される。被験体のサイズ
および用いられる画像化システムは、診断画像を生成するために必要な画像化部
分の量を決定することが当該分野で理解される。放射性同位体部分の場合には、
ヒト被験体について、注射される放射能の量は、通常、９９ｍＴｃの約５〜２０
ミリキュリーの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フラグメントは
、特定のタンパク質を含む細胞の位置に優先的に蓄積される。インビボ腫瘍画像
化は、Ｓ．Ｗ．Ｂｕｒｃｈｉｅｌら、「Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅ
ｔｉｃｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ
Ｔｈｅｉｒ Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ」（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｒ
ａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒの第１３
章、Ｓ．Ｗ．ＢｕｒｃｈｉｅｌおよびＢ．Ａ．Ｒｈｏｄｅｓ編、Ｍａｓｓｏｎ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．（１９８２）に記載される。
【０３２６】 従って、本発明は、障害の診断方法を提供し、この方法は、（ａ）個体の細胞
または体液中の本発明のポリペプチドの発現をアッセイする工程；（ｂ）この遺
伝子発現レベルを標準の遺伝子発現レベルと比較する工程を包含し、これによっ
て、標準的な発現レベルと比較して、アッセイされたポリペプチドの遺伝子発現
レベルの増加または減少が、障害の指標になる。
または体液中の本発明のポリペプチドの発現をアッセイする工程；（ｂ）この遺
伝子発現レベルを標準の遺伝子発現レベルと比較する工程を包含し、これによっ
て、標準的な発現レベルと比較して、アッセイされたポリペプチドの遺伝子発現
レベルの増加または減少が、障害の指標になる。
【０３２７】 さらに、本発明のポリペプチドを用いて疾患を処置し得る。例えば、患者は、
ポリペプチド（例えば、インスリン）の非存在またはレベルの減少を元に戻すこ
と、異なるポリペプチド（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ）の
非存在またはレベルの減少を補充すること、ポリペプチド（例えば、ガン遺伝子
）の活性を阻害すること、ポリペプチドの活性を（例えば、レセプターに結合す
ることによって）活性化すること、遊離リガンド（例えば、炎症を低減させる際
に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）と膜結合レセプターと競合させることに
よって膜結合レセプターの活性を減少させること、または所望の応答（例えば、
血管の増殖）をもたらすことに取り組む際に、本発明のポリペプチドが投与され
得る。
ポリペプチド（例えば、インスリン）の非存在またはレベルの減少を元に戻すこ
と、異なるポリペプチド（例えば、ヘモグロビンＢに対するヘモグロビンＳ）の
非存在またはレベルの減少を補充すること、ポリペプチド（例えば、ガン遺伝子
）の活性を阻害すること、ポリペプチドの活性を（例えば、レセプターに結合す
ることによって）活性化すること、遊離リガンド（例えば、炎症を低減させる際
に用いられる可溶性ＴＮＦレセプター）と膜結合レセプターと競合させることに
よって膜結合レセプターの活性を減少させること、または所望の応答（例えば、
血管の増殖）をもたらすことに取り組む際に、本発明のポリペプチドが投与され
得る。
【０３２８】 同様に、本発明のポリペプチドに指向される抗体もまた使用されて疾患を処置
し得る。例えば、本発明のポリペプチドに指向される抗体の投与によって、ポリ
ペプチドに結合して、そしてポリペプチドの過剰産生を低減し得る。同様に、抗
体の投与によって、例えば、膜に結合したポリペプチド（レセプター）へ結合す
ることにより、ポリペプチドを活性化し得る。
し得る。例えば、本発明のポリペプチドに指向される抗体の投与によって、ポリ
ペプチドに結合して、そしてポリペプチドの過剰産生を低減し得る。同様に、抗
体の投与によって、例えば、膜に結合したポリペプチド（レセプター）へ結合す
ることにより、ポリペプチドを活性化し得る。
【０３２９】 少なくとも本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され得
る。ポリペプチドを用いてもまた、抗体を惹起し得、次いで、この抗体を使用し
て、宿主細胞の形質転換を評価する方法として、組換え細胞からのタンパク質発
現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドを使用して、以下の生物学的活性
を試験し得る。
ＡＧＥゲルまたは分子ふるいゲル濾過カラムの分子量マーカーとして使用され得
る。ポリペプチドを用いてもまた、抗体を惹起し得、次いで、この抗体を使用し
て、宿主細胞の形質転換を評価する方法として、組換え細胞からのタンパク質発
現を測定する。さらに、本発明のポリペプチドを使用して、以下の生物学的活性
を試験し得る。
【０３３０】 （生物学的活性） 本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドをアッセイに用いて、１つ以上
の生物学的活性について試験し得る。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドが、特定のアッセイにおいて活性を示すならば、これらの分子は、生物学的
活性に関連した疾患に関与し得る可能性が高い。従って、このポリヌクレオチド
およびポリペプチドを用いて、関連する疾患を処置し得る。
の生物学的活性について試験し得る。これらのポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドが、特定のアッセイにおいて活性を示すならば、これらの分子は、生物学的
活性に関連した疾患に関与し得る可能性が高い。従って、このポリヌクレオチド
およびポリペプチドを用いて、関連する疾患を処置し得る。
【０３３１】 （免疫活性） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、免疫細胞の増殖、分化、ま
たは移動（走化性）の活性化もしくは阻害によって、免疫系の不全または障害を
処置するのに有用であり得る。免疫細胞は、造血と称されるプロセス、すなわち
、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小板、赤血球、好中球、およびマクロファー
ジ）およびリンパ系（ＢおよびＴリンパ球）細胞を産生するプロセスを介して発
生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性（例えば、ガ
ンまたはいくつかの自己免疫障害）、後天性（例えば、化学治療または毒素によ
る）、または感染性であり得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは、特定の免疫系疾患または障害のマーカーまたは検出因子として使用
され得る。
たは移動（走化性）の活性化もしくは阻害によって、免疫系の不全または障害を
処置するのに有用であり得る。免疫細胞は、造血と称されるプロセス、すなわち
、多能性幹細胞から骨髄性細胞（血小板、赤血球、好中球、およびマクロファー
ジ）およびリンパ系（ＢおよびＴリンパ球）細胞を産生するプロセスを介して発
生する。これらの免疫不全または障害の病因は、遺伝性、体細胞性（例えば、ガ
ンまたはいくつかの自己免疫障害）、後天性（例えば、化学治療または毒素によ
る）、または感染性であり得る。さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは、特定の免疫系疾患または障害のマーカーまたは検出因子として使用
され得る。
【０３３２】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、造血細胞の不全または障害
を処置または検出するに有用であり得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌク
レオチドを使用して、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連する障
害を処置するための取り組みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化およ
び増殖を増加させ得る。免疫学的な不全症候群の例には、以下が挙げられるがそ
れらに限定されない：血液タンパク質障害（例えば、無ガンマグロブリン血症、
低ガンマグロブリン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、デ
ィ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候
群、リンパ球減少、食細胞殺菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴ
ィスコット−オールドリッチ障害、貧血、血小板減少症、または血色素尿。
を処置または検出するに有用であり得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌク
レオチドを使用して、特定の（または多くの）型の造血細胞の減少に関連する障
害を処置するための取り組みにおいて、多能性幹細胞を含む造血細胞の分化およ
び増殖を増加させ得る。免疫学的な不全症候群の例には、以下が挙げられるがそ
れらに限定されない：血液タンパク質障害（例えば、無ガンマグロブリン血症、
低ガンマグロブリン血症）、毛細血管拡張性運動失調、分類不能型免疫不全、デ
ィ・ジョージ症候群、ＨＩＶ感染、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ感染、白血球接着不全症候
群、リンパ球減少、食細胞殺菌機能不全、重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）、ヴ
ィスコット−オールドリッチ障害、貧血、血小板減少症、または血色素尿。
【０３３３】 さらに、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、止血活性（出
血を停止する）または血栓崩壊活性（血餅の形成）を調節するために使用され得
る。例えば、止血または血栓崩壊活性を増加させることによって、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは、血液凝固障害（例えば、無フィブリノーゲ
ン血症、因子欠乏）、血液血小板障害（例えば、血小板減少症）、または外傷、
手術もしくは他の原因から生じる創傷を処置するために使用され得る。あるいは
、止血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る、本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドを用いて、凝固を阻害または溶解し得る。これらの分子は、心臓
発作（梗塞）、発作、または瘢痕の処置に重要であり得る。
血を停止する）または血栓崩壊活性（血餅の形成）を調節するために使用され得
る。例えば、止血または血栓崩壊活性を増加させることによって、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは、血液凝固障害（例えば、無フィブリノーゲ
ン血症、因子欠乏）、血液血小板障害（例えば、血小板減少症）、または外傷、
手術もしくは他の原因から生じる創傷を処置するために使用され得る。あるいは
、止血活性または血栓崩壊活性を減少させ得る、本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドを用いて、凝固を阻害または溶解し得る。これらの分子は、心臓
発作（梗塞）、発作、または瘢痕の処置に重要であり得る。
【０３３４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、自己免疫障害を処置ま
たは検出するのに有用であり得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって、
自己を外来物質として不適切に認識することからもたらされる。この不適切な認
識は、宿主組織の破壊を導く免疫応答を生じる。それゆえ、免疫応答、特にＴ細
胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌク
レオチドの投与は、自己免疫障害を予防するのに有効な治療であり得る。
たは検出するのに有用であり得る。多くの自己免疫障害は、免疫細胞によって、
自己を外来物質として不適切に認識することからもたらされる。この不適切な認
識は、宿主組織の破壊を導く免疫応答を生じる。それゆえ、免疫応答、特にＴ細
胞の増殖、分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌク
レオチドの投与は、自己免疫障害を予防するのに有効な治療であり得る。
【０３３５】 本発明によって処置または検出され得る自己免疫障害の例としては、以下が挙
げられるが、それらに限定されない：アディソン病、溶血性貧血、抗リン脂質症
候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、グッド
パスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力症、神経炎、眼炎
、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑、ライター病、スティッフ
マン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肺炎症
、ギヤンバレー症候群、インスリン依存性糖尿病、および自己免疫炎症性眼病。
げられるが、それらに限定されない：アディソン病、溶血性貧血、抗リン脂質症
候群、慢性関節リウマチ、皮膚炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、グッド
パスチャー症候群、グレーヴズ病、多発性硬化症、重症筋無力症、神経炎、眼炎
、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、多発性内分泌腺症、紫斑、ライター病、スティッフ
マン症候群、自己免疫性甲状腺炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性肺炎症
、ギヤンバレー症候群、インスリン依存性糖尿病、および自己免疫炎症性眼病。
【０３３６】 同様に、例えば、喘息（特にアレルギー性喘息）または他の呼吸問題のような
アレルギー性反応および状態はまた、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドにより処置され得る。さらに、これらの分子を用いてアナフィラキシー、抗
原性分子に対する過敏症、または血液型不適合性を処置し得る。
アレルギー性反応および状態はまた、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドにより処置され得る。さらに、これらの分子を用いてアナフィラキシー、抗
原性分子に対する過敏症、または血液型不適合性を処置し得る。
【０３３７】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはまた、器官拒絶または対宿主
性移植片病（ＧＶＨＤ）を処置および／または予防するために用いられ得る。器
官拒絶は、宿主免疫細胞が免疫応答を介して移植された組織を破壊することによ
り生じる。同様に、免疫応答はまた、ＧＶＨＤに関与しているが、この場合、外
来の移植された免疫細胞は宿主組織を破壊する。免疫応答、特にＴ細胞の増殖、
分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの
投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤを予防するのに有効な治療であり得る。
性移植片病（ＧＶＨＤ）を処置および／または予防するために用いられ得る。器
官拒絶は、宿主免疫細胞が免疫応答を介して移植された組織を破壊することによ
り生じる。同様に、免疫応答はまた、ＧＶＨＤに関与しているが、この場合、外
来の移植された免疫細胞は宿主組織を破壊する。免疫応答、特にＴ細胞の増殖、
分化、または走化性を阻害する本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの
投与は、器官拒絶またはＧＶＨＤを予防するのに有効な治療であり得る。
【０３３８】 同様に、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、炎症を調節す
るために用いられ得る。例えば、このポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、
炎症性応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子は、以
下を含む炎症状態（慢性および急性の両方の状態）を処置するために使用され得
る：感染に関連した炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎
症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血性再灌流傷害、内毒素死亡、関節炎、補体媒
介性超急性拒絶、腎炎、サイトカインまたはケモカイン誘導性肺傷害、炎症性腸
疾患、クローン病、またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過
剰産生からもたらされる状態。
るために用いられ得る。例えば、このポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、
炎症性応答に関与する細胞の増殖および分化を阻害し得る。これらの分子は、以
下を含む炎症状態（慢性および急性の両方の状態）を処置するために使用され得
る：感染に関連した炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症、または全身性炎
症応答症候群（ＳＩＲＳ））、虚血性再灌流傷害、内毒素死亡、関節炎、補体媒
介性超急性拒絶、腎炎、サイトカインまたはケモカイン誘導性肺傷害、炎症性腸
疾患、クローン病、またはサイトカイン（例えば、ＴＮＦまたはＩＬ−１）の過
剰産生からもたらされる状態。
【０３３９】 （過剰増殖性障害） ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、新生物を含む過剰増殖性障害を処置
または検出するために使用され得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドは、直接的相互作用または間接的相互作用を介して障害の増殖を阻害し得る
。あるいは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、過剰増殖性障害
を阻害し得る他の細胞を増殖させ得る。
または検出するために使用され得る。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドは、直接的相互作用または間接的相互作用を介して障害の増殖を阻害し得る
。あるいは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、過剰増殖性障害
を阻害し得る他の細胞を増殖させ得る。
【０３４０】 例えば、免疫応答を増加させることによって、特に過剰増殖性障害の抗原性の
質を上げることによって、またはＴ細胞の増殖、分化、もしくは遊走によって、
過剰増殖性障害は処置され得る。この免疫応答は、存在する免疫応答を増強させ
るかまたは新たな免疫応答を開始させるかのいずれかによって上昇し得る。ある
いは、免疫応答の減少はまた、化学療法剤のような、過剰増殖性障害を処置する
方法であり得る。
質を上げることによって、またはＴ細胞の増殖、分化、もしくは遊走によって、
過剰増殖性障害は処置され得る。この免疫応答は、存在する免疫応答を増強させ
るかまたは新たな免疫応答を開始させるかのいずれかによって上昇し得る。ある
いは、免疫応答の減少はまた、化学療法剤のような、過剰増殖性障害を処置する
方法であり得る。
【０３４１】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置されるかまたは検出
され得る過剰増殖性障害の例には、以下に見出される新生物が含まれるがこれら
に限定されない：腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副
腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、神
経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならびに
泌尿生殖器。
され得る過剰増殖性障害の例には、以下に見出される新生物が含まれるがこれら
に限定されない：腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副
腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭部および頸部、神
経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、ならびに
泌尿生殖器。
【０３４２】 同様に、他の過剰増殖性障害もまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペ
プチドにより処置または検出され得る。このような過剰増殖性障害の例には、以
下が挙げられるがこれらに限定されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ球増
殖性障害、パラプロテイン血症、紫斑病、サルコイドーシス、セザリー症候群、
ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および
任意のその他の過剰増殖性疾患、加えて上記に列挙した器官系に見出される新生
物。
プチドにより処置または検出され得る。このような過剰増殖性障害の例には、以
下が挙げられるがこれらに限定されない：高ガンマグロブリン血症、リンパ球増
殖性障害、パラプロテイン血症、紫斑病、サルコイドーシス、セザリー症候群、
ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ゴシェ病、組織球増殖症、および
任意のその他の過剰増殖性疾患、加えて上記に列挙した器官系に見出される新生
物。
【０３４３】 （感染性疾患） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、感染因子を処置または検出
するために用いられ得る。例えば、免疫応答を上昇させることによって、特にＢ
細胞および／またはＴ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性
疾患が処置され得る。免疫応答は、存在する免疫応答を増強させるか、または新
たな免疫応答を開始させるかのいずれかにより上昇され得る。あるいは、本発明
のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、必ずしも免疫応答を誘発するこ
となく、感染因子を直接阻害し得る。
するために用いられ得る。例えば、免疫応答を上昇させることによって、特にＢ
細胞および／またはＴ細胞の増殖および分化を増加させることによって、感染性
疾患が処置され得る。免疫応答は、存在する免疫応答を増強させるか、または新
たな免疫応答を開始させるかのいずれかにより上昇され得る。あるいは、本発明
のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、必ずしも免疫応答を誘発するこ
となく、感染因子を直接阻害し得る。
【０３４４】 ウイルスは、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置または
検出され得る疾患または症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルス
の例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮＡウイルス科が挙げられるがこれらに限
定されない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリ
ウイルス、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリチウイルス科、サルコウ
イルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、フラビウイルス科
、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメガロウ
イルス、単純ヘルペス、帯状ヘルペス）、モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａ
ｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、モルビリウイルス、ラブドウイ
ルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザ）、パポーバウイ
ルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例えば
、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロ
ウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガウ
イルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下を
含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎、
細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、脳炎、眼性感染症（例えば、結
膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性
、デルタ）、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリ
ンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、
感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、
およびウイルス血症。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、
任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。
検出され得る疾患または症状を引き起こし得る感染因子の一例である。ウイルス
の例としては、以下のＤＮＡおよびＲＮＡウイルス科が挙げられるがこれらに限
定されない：アルボウイルス、アデノウイルス科、アレナウイルス科、アルテリ
ウイルス、ビルナウイルス科、ブニヤウイルス科、カリチウイルス科、サルコウ
イルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科、フラビウイルス科
、ヘパドナウイルス科（肝炎）、ヘルペスウイルス科（例えば、サイトメガロウ
イルス、単純ヘルペス、帯状ヘルペス）、モノネガウイルス（Ｍｏｎｏｎｅｇａ
ｖｉｒｕｓ）（例えば、パラミクソウイルス科、モルビリウイルス、ラブドウイ
ルス科）、オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザ）、パポーバウイ
ルス科、パルボウイルス科、ピコルナウイルス科、ポックスウイルス科（例えば
、痘瘡またはワクシニア）、レオウイルス科（例えば、ロタウイルス）、レトロ
ウイルス科（ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、レンチウイルス）、およびトガウ
イルス科（例えば、ルビウイルス属）。これらの科内に入るウイルスは、以下を
含むがこれらに限定されない種々の疾患または症状を引き起こし得る：関節炎、
細気管支炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｌｉｔｉｓ）、脳炎、眼性感染症（例えば、結
膜炎、角膜炎）、慢性疲労症候群、肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型、慢性活動性
、デルタ）、髄膜炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳ）、肺炎、バーキットリ
ンパ腫、水痘、出血熱、麻疹、流行性耳下腺炎、パラインフルエンザ、狂犬病、
感冒、ポリオ、白血病、風疹、性感染症、皮膚病（例えば、カポージ、いぼ）、
およびウイルス血症。本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、
任意のこれらの症状または疾患が処置または検出され得る。
【０３４５】 同様に、疾患または症状を引き起こし得、かつ本発明のポリヌクレオチドまた
はポリペプチドによって処置または検出され得る、細菌性因子または真菌性因子
は、以下のグラム陰性およびグラム陽性の細菌科および真菌類を含むがこれらに
限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏ
ｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、
Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄ
ｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓ
ｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ
ｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐ
ｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏ
ｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感
染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｐａ
ｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａ
ｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、およびＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃａｌ。これらの細菌または真菌の科は、以下を含むがこれらに限定され
ない疾患または症状を引き起こし得る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、
結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染
症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道感染症（例えば、百
日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱
、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ラ
イ病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマ
チ熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔ
ｏｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置また
は検出し得る。
はポリペプチドによって処置または検出され得る、細菌性因子または真菌性因子
は、以下のグラム陰性およびグラム陽性の細菌科および真菌類を含むがこれらに
限定されない：Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ（例えば、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｎｏｒｃａｒｄｉａ）、Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ（例えば、Ａｎｔｈｒａｘ、Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏ
ｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ、
Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄ
ｏｍｙｃｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ、Ｄｅｒｍａｔｏｃｙｃｏｓ
ｅｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ
ｔｈｒｉｘ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ、Ｌｅｐ
ｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｔａｌｅｓ、
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ（例えば、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｏｎｏ
ｒｒｈｅａ、Ｍｅｎｉｇｏｃｏｃｃａｌ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａの感
染症（例えば、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｐａ
ｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａ
ｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ、およびＳｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃａｌ。これらの細菌または真菌の科は、以下を含むがこれらに限定され
ない疾患または症状を引き起こし得る：菌血症、心内膜炎、眼感染症（結膜炎、
結核、ブドウ膜炎）、歯肉炎、日和見感染症（例えば、ＡＩＤＳに関連した感染
症）、爪周囲炎、プロテーゼ関連感染症、ライター病、気道感染症（例えば、百
日咳または蓄膿症）、敗血症、ライム病、ネコ引っ掻き病、赤痢、パラチフス熱
、食中毒、腸チフス、肺炎、淋病、髄膜炎、クラミジア、梅毒、ジフテリア、ラ
イ病、パラ結核、結核、狼瘡、ボツリヌス中毒、壊疽、破傷風、膿痂疹、リウマ
チ熱、猩紅熱、性感染病、皮膚病（例えば、蜂巣炎、皮膚真菌症（ｄｅｒｍａｔ
ｏｃｙｃｏｓｅｓ））、毒血症、尿路感染症、創傷感染症。本発明のポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患を処置また
は検出し得る。
【０３４６】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドにより処置または検出
され得る疾患または症状を引き起こす寄生生物性因子としては以下のファミリー
が挙げられるがこれらに限定されない：アメーバ、バベシア、コクシジウム、ク
リプトスポリジウム、二核アメーバ、交疫、外部寄生生物、ジアルジア鞭毛虫、
蠕虫、リーシュマニア、タイレリア、トキソプラスマ、トリパノソーマ、および
トリコモナス。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の
疾患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（
例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例え
ば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ。本発明の
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患
を処置または検出し得る。
され得る疾患または症状を引き起こす寄生生物性因子としては以下のファミリー
が挙げられるがこれらに限定されない：アメーバ、バベシア、コクシジウム、ク
リプトスポリジウム、二核アメーバ、交疫、外部寄生生物、ジアルジア鞭毛虫、
蠕虫、リーシュマニア、タイレリア、トキソプラスマ、トリパノソーマ、および
トリコモナス。これらの寄生生物は、以下を含むがこれらに限定されない種々の
疾患または症状を引き起こし得る：疥癬、ツツガムシ病、眼性感染症、腸疾患（
例えば、赤痢、ジアルジア鞭毛虫症）、肝臓疾患、肺疾患、日和見感染症（例え
ば、ＡＩＤＳ関連）、マラリア、妊娠合併症、およびトキソプラスマ。本発明の
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いて、任意のこれらの症状または疾患
を処置または検出し得る。
【０３４７】 好ましくは、本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを用いる処置は、
患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者から細胞を取り出して、
本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして患者に操作した細胞を戻
す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る。さらに、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原として用いられて、感染
性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
患者に有効量のポリペプチドを投与するか、または患者から細胞を取り出して、
本発明のポリヌクレオチドをこの細胞に供給し、そして患者に操作した細胞を戻
す（エキソビボ治療）かのいずれかによるものであり得る。さらに、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドはワクチン中の抗原として用いられて、感染
性疾患に対する免疫応答を惹起し得る。
【０３４８】 （再生） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて、細胞を分化させ、増
殖させ、そして誘引して、組織の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５
９−８７（１９９７）を参照のこと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷
（創傷、熱傷、切開、または潰瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関
節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を
含む手術、線維症、再灌流傷害、または全身性サイトカイン損傷により損傷を受
けた組織を修復、置換、または保護し得る。
殖させ、そして誘引して、組織の再生を導き得る（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：５
９−８７（１９９７）を参照のこと）。組織の再生を用いて、先天性欠損、外傷
（創傷、熱傷、切開、または潰瘍）、加齢、疾患（例えば、骨粗鬆症、変形性関
節炎（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、歯周病、肝不全）、美容形成手術を
含む手術、線維症、再灌流傷害、または全身性サイトカイン損傷により損傷を受
けた組織を修復、置換、または保護し得る。
【０３４９】 本発明を用いて再生し得る組織としては、以下が挙げられる：器官（例えば、
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
脈管（脈管内皮を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱、および靭帯
）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減されて生じる。再
生はまた、新脈管形成を含み得る。
膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮）、筋肉（平滑筋、骨格筋、または心筋）、
脈管（脈管内皮を含む）、神経、造血、および骨格（骨、軟骨、腱、および靭帯
）の組織。好ましくは、再生は、瘢痕なく、または瘢痕が低減されて生じる。再
生はまた、新脈管形成を含み得る。
【０３５０】 さらに、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、治癒するのが困難
な組織の再生を増加し得る。例えば、腱／靭帯再生を増大させることによって、
損傷後の回復時間が早まる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはま
た、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。処置され得る特定の疾
患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯欠損を含む。非治癒創
傷の組織再生のさらなる例は、褥瘡性潰瘍、脈管不全、外科的創傷、および外傷
性創傷に関連する潰瘍を含む。
な組織の再生を増加し得る。例えば、腱／靭帯再生を増大させることによって、
損傷後の回復時間が早まる。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドはま
た、損傷を回避する試みにおいて予防的に使用され得る。処置され得る特定の疾
患は、腱炎、手根管症候群、および他の腱欠損または靭帯欠損を含む。非治癒創
傷の組織再生のさらなる例は、褥瘡性潰瘍、脈管不全、外科的創傷、および外傷
性創傷に関連する潰瘍を含む。
【０３５１】 同様に、神経および脳組織はまた、神経細胞を増殖および分化させるために本
発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用することによって再生され得
る。本方法を用いて処置され得る疾患は、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患
、神経障害、または機械的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳
血管疾患、および発作（ｓｔｏｋｅ））を含む。詳細には、末梢神経傷害と関連
する疾患、末梢神経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）
、局在神経障害、および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキン
ソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候
群）はすべて、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて処置され
得る。
発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを使用することによって再生され得
る。本方法を用いて処置され得る疾患は、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患
、神経障害、または機械的および外傷性障害（例えば、脊髄障害、頭部外傷、脳
血管疾患、および発作（ｓｔｏｋｅ））を含む。詳細には、末梢神経傷害と関連
する疾患、末梢神経障害（例えば、化学療法または他の医学的療法から生じる）
、局在神経障害、および中枢神経系疾患（例えば、アルツハイマー病、パーキン
ソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候
群）はすべて、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを用いて処置され
得る。
【０３５２】 （走化性） 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性活性を有し得る。走
化性分子は、細胞（例えば、単球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好
酸球、上皮細胞、および／または内皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、
炎症、感染、または過剰増殖の部位）に誘引または移動させる。次いで、移動し
た細胞は、特定の外傷または異常性を撃退および／または治癒し得る。
化性分子は、細胞（例えば、単球、線維芽細胞、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好
酸球、上皮細胞、および／または内皮細胞）を、身体中の特定の部位（例えば、
炎症、感染、または過剰増殖の部位）に誘引または移動させる。次いで、移動し
た細胞は、特定の外傷または異常性を撃退および／または治癒し得る。
【０３５３】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、特定の細胞の走化性活性を
増大し得る。次いで、これらの走化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標
的化した細胞の数を増加させることによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、ま
たは任意の免疫系障害を処置し得る。例えば、走化性分子を使用して、免疫細胞
を傷害を受けた位置に誘引することによって、組織に対する創傷および他の外傷
を処置し得る。本発明の走化性分子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷
を処置するために使用され得る。
増大し得る。次いで、これらの走化性分子を使用して、身体中の特定の位置に標
的化した細胞の数を増加させることによって、炎症、感染、過剰増殖性障害、ま
たは任意の免疫系障害を処置し得る。例えば、走化性分子を使用して、免疫細胞
を傷害を受けた位置に誘引することによって、組織に対する創傷および他の外傷
を処置し得る。本発明の走化性分子はまた、線維芽細胞を誘引し得、これは創傷
を処置するために使用され得る。
【０３５４】 本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが走化性活性を阻害し得ること
もまた意図される。これらの分子はまた、障害を処置するために使用され得る。
従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性のインヒビタ
ーとして使用され得る。
もまた意図される。これらの分子はまた、障害を処置するために使用され得る。
従って、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、走化性のインヒビタ
ーとして使用され得る。
【０３５５】 （結合活性） 本発明のポリペプチドは、ポリペプチドに結合する分子、またはポリペプチド
が結合する分子をスクリーニングするために使用され得る。ポリペプチドと分子
との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を活性化（アゴニスト）、
増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。そのような分子の例は、
抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば、レセプター）、または低分子
を含む。
が結合する分子をスクリーニングするために使用され得る。ポリペプチドと分子
との結合は、結合したポリペプチドまたは分子の活性を活性化（アゴニスト）、
増大、阻害（アンタゴニスト）、または減少させ得る。そのような分子の例は、
抗体、オリゴヌクレオチド、タンパク質（例えば、レセプター）、または低分子
を含む。
【０３５６】 好ましくは、分子は、ポリペプチドの天然のリガンド（例えば、リガンドのフ
ラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは機能的模
倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）： 第５章（１９９１）を参照のこ
と）。同様に、分子は、ポリペプチドが結合する天然のレセプター、または少な
くともポリペプチドによって結合され得るレセプターのフラグメント（例えば、
活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても、分子は、公知の技術
を用いて合理的に設計され得る。
ラグメント）、または天然の基質、リガンド、構造的模倣物、もしくは機能的模
倣物に密接に関連する（Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １（２）： 第５章（１９９１）を参照のこ
と）。同様に、分子は、ポリペプチドが結合する天然のレセプター、または少な
くともポリペプチドによって結合され得るレセプターのフラグメント（例えば、
活性部位）に密接に関連し得る。いずれの場合においても、分子は、公知の技術
を用いて合理的に設計され得る。
【０３５７】 好ましくは、これらの分子についてのスクリーニングは、ポリペプチドを、分
泌タンパク質としてまたは細胞膜上でのいずれかで発現する適切な細胞を産生す
る工程を包含する。好ましい細胞は、哺乳動物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、
またはＥ． ｃｏｌｉ由来の細胞を含む。次いで、ポリペプチドを発現する細胞
（または、発現されたポリペプチドを含む細胞膜）は、好ましくは、ポリペプチ
ドまたは分子のいずれかの結合、刺激、または活性の阻害を観察するための分子
を潜在的に含む試験化合物と接触される。
泌タンパク質としてまたは細胞膜上でのいずれかで発現する適切な細胞を産生す
る工程を包含する。好ましい細胞は、哺乳動物、酵母、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、
またはＥ． ｃｏｌｉ由来の細胞を含む。次いで、ポリペプチドを発現する細胞
（または、発現されたポリペプチドを含む細胞膜）は、好ましくは、ポリペプチ
ドまたは分子のいずれかの結合、刺激、または活性の阻害を観察するための分子
を潜在的に含む試験化合物と接触される。
【０３５８】 アッセイは、ポリペプチドへの候補化合物の結合を簡単に試験し得、ここで結
合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイにおい
て検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がポリペプチドへの結合によっ
て生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
合は、標識によって、または標識された競合物との競合に関するアッセイにおい
て検出される。さらに、アッセイは、候補化合物がポリペプチドへの結合によっ
て生成されるシグナルを生じるか否かを試験し得る。
【０３５９】 あるいは、アッセイは、細胞を含まない調製物、固体支持体に固定されたポリ
ペプチド／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され
得る。アッセイはまた、ポリペプチドを含む溶液を候補化合物と混合する工程、
ポリペプチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分
子の活性または結合を、標準と比較する工程を簡単に包含し得る。
ペプチド／分子、化学ライブラリー、または天然産物の混合物を用いて実施され
得る。アッセイはまた、ポリペプチドを含む溶液を候補化合物と混合する工程、
ポリペプチド／分子の活性または結合を測定する工程、およびポリペプチド／分
子の活性または結合を、標準と比較する工程を簡単に包含し得る。
【０３６０】 好ましくは、ＥＬＩＳＡアッセイは、モノクローナル抗体またはポリクローナ
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的な結合のいずれか、またはポリペプチドとの基質についての競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
ル抗体を用いて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるポリペプチド
のレベルまたは活性を測定し得る。抗体は、ポリペプチドへの直接的もしくは間
接的な結合のいずれか、またはポリペプチドとの基質についての競合によって、
ポリペプチドのレベルまたは活性を測定し得る。
【０３６１】 これらの上記のアッセイのすべては、診断マーカーまたは予後マーカーとして
使用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分
子を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者におけ
る特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、ア
ッセイは、適切に操作された細胞または組織からのポリペプチドの産生を阻害ま
たは増強し得る因子を発見し得る。
使用され得る。これらのアッセイを用いて発見される分子は、ポリペプチド／分
子を活性化または阻害することによって、疾患を処置するか、または患者におけ
る特定の結果（例えば、血管増殖）をもたらすために使用され得る。さらに、ア
ッセイは、適切に操作された細胞または組織からのポリペプチドの産生を阻害ま
たは増強し得る因子を発見し得る。
【０３６２】 従って、本発明は、以下の工程を含む本発明のポリペプチドに結合する化合物
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
を同定する方法を包含する：（ａ）候補結合化合物を本発明のポリペプチドとと
もにインキュベートする工程；および（ｂ）結合が生じたか否かを決定する工程
。さらに、本発明は、以下の工程を含むアゴニスト／アンタゴニストを同定する
方法を包含する：（ａ）候補化合物を本発明のポリペプチドとともにインキュベ
ートする工程、（ｂ）生物学的活性をアッセイする工程、および（ｂ）ポリペプ
チドの生物学的活性が改変されているか否かを決定する工程。
【０３６３】 （他の活性） 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、先に議論されるように
造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化または増殖を増加または減少し得る。
造血系統に加えて、胚性幹細胞の分化または増殖を増加または減少し得る。
【０３６４】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、哺乳動物の特徴（例え
ば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組織の割合、色素沈着、大きさ、
および形（例えば、美容外科）、を調整するために使用され得る。同様に、本発
明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、異化作用、同化作用、プロセシン
グ、利用、およびエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調整するた
めに使用され得る。
ば、身長、体重、毛の色、眼の色、皮膚、脂肪組織の割合、色素沈着、大きさ、
および形（例えば、美容外科）、を調整するために使用され得る。同様に、本発
明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、異化作用、同化作用、プロセシン
グ、利用、およびエネルギーの貯蔵に影響を及ぼす哺乳動物の代謝を調整するた
めに使用され得る。
【０３６５】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、バイオリズム、カリカディ
ック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑うつ性障害を含む）、暴力の傾
向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アクチビンまたはインヒビン様活性
によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベル、食欲、性欲、記憶、ストレ
ス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによって、哺乳動物の精神状態また
は身体状態を変更するために使用され得る。
ック（ｃａｒｉｃａｄｉｃ）リズム、うつ病（抑うつ性障害を含む）、暴力の傾
向、痛みへの耐性、生殖能力（好ましくは、アクチビンまたはインヒビン様活性
によって）、ホルモンレベルもしくは内分泌レベル、食欲、性欲、記憶、ストレ
ス、または他の認知の質に影響を及ぼすことによって、哺乳動物の精神状態また
は身体状態を変更するために使用され得る。
【０３６６】 本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドはまた、例えば、貯蔵能力、脂
肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、補因子、または
他の栄養成分を増加または減少させるような食品添加物または保存剤として使用
され得る。
肪含有量、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、補因子、または
他の栄養成分を増加または減少させるような食品添加物または保存剤として使用
され得る。
【０３６７】 （他の好ましい実施態様） 本願発明の他の好ましい実施態様は、配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少な
くとも約５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む、単離された核酸分子を含み、ここで、Ｘは表１に規定さ
れるような任意の整数である。
くとも約５０の連続したヌクレオチドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を含む、単離された核酸分子を含み、ここで、Ｘは表１に規定さ
れるような任意の整数である。
【０３６８】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼクローン配列の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、
そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置
の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい
。
ような、ほぼクローン配列の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、
そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置
の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい
。
【０３６９】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼ開始コドンの５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そ
してほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の
範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい。
ような、ほぼ開始コドンの５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで始まり、そ
してほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチドで終わる位置の
範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核酸分子もまた好ましい。
【０３７０】 上記連続したヌクレオチドの配列が、表１中の配列番号Ｘについて規定される
ような、ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌ
クレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌク
レオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核
酸分子も同様に好ましい。
ような、ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌ
クレオチドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌク
レオチドで終わる位置の範囲で、配列番号Ｘのヌクレオチド配列に含まれる、核
酸分子も同様に好ましい。
【０３７１】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約１５０の連続したヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子もまた好ましい。
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子もまた好ましい。
【０３７２】 配列番号Ｘのヌクレオチド配列中の少なくとも約５００の連続したヌクレオチ
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子はさらに好ましい。
ドの配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された
核酸分子はさらに好ましい。
【０３７３】 さらに好ましい実施態様は、表１中の配列番号Ｘについて規定されるような、
ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチ
ドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチド
で終わる配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオ
チド配列を含む核酸分子である。
ほぼシグナルペプチドの第１のアミノ酸の５’ヌクレオチドの位置のヌクレオチ
ドで始まり、そしてほぼクローン配列の３’ヌクレオチドの位置のヌクレオチド
で終わる配列番号Ｘのヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオ
チド配列を含む核酸分子である。
【０３７４】 さらに好ましい実施態様は、配列番号Ｘの完全なヌクレオチド配列に、少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３７５】 ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で核酸分子にハイブリダイ
ズする単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記のハイブリダイズする核
酸分子は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、Ａ残基のみま
たはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズし
ない。
ズする単離された核酸分子もまた好ましく、ここで上記のハイブリダイズする核
酸分子は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、Ａ残基のみま
たはＴ残基のみからなるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズし
ない。
【０３７６】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローン
を含むＤＮＡ分子を含む物質の組成物もまた好ましく、このＤＮＡ分子は、アメ
リカンタイプカルチャーコレクションに寄託された物質中に含まれ、そして上記
のｃＤＮＡクローンＩＤについて表１中に示される所定のＡＴＣＣ受託番号を与
えられている。
を含むＤＮＡ分子を含む物質の組成物もまた好ましく、このＤＮＡ分子は、アメ
リカンタイプカルチャーコレクションに寄託された物質中に含まれ、そして上記
のｃＤＮＡクローンＩＤについて表１中に示される所定のＡＴＣＣ受託番号を与
えられている。
【０３７７】 表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定されるヒトｃＤＮＡクローンのヌ
クレオチド配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、
このＤＮＡ分子は表１において示されるＡＴＣＣ受託番号を付与された寄託物中
に含まれる。
クレオチド配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも
９５％同一であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子もまた好ましく、
このＤＮＡ分子は表１において示されるＡＴＣＣ受託番号を付与された寄託物中
に含まれる。
【０３７８】 上記の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列が、上記ヒトｃＤＮＡク
ローンによってコードされる完全なオープンリーディングフレームの配列のヌク
レオチド配列中に含まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
ローンによってコードされる完全なオープンリーディングフレームの配列のヌク
レオチド配列中に含まれる、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３７９】 上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列中の少なく
とも１５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
とも１５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレ
オチド配列を含む、単離された核酸分子もまた好ましい。
【０３８０】 さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
ヌクレオチド配列中の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
ヌクレオチド配列中の少なくとも５００の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子である。
【０３８１】 さらに好ましい実施態様は、上記ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
完全なヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子である。
完全なヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子である。
【０３８２】 さらに好ましい実施態様は、以下からなる群から選択される配列中の少なくと
も５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である
：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１において規定される
ような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定さ
れ、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌク
レオチド配列；上記の方法は、上記の群から選択される配列と、上記のサンプル
中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する工程、および上
記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記の選択された配列に対して少なくと
も９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
も５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチ
ド配列を含む核酸分子を、生物学的サンプルにおいて検出するための方法である
：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１において規定される
ような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定さ
れ、そして表１において上記ｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番
号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌク
レオチド配列；上記の方法は、上記の群から選択される配列と、上記のサンプル
中の少なくとも１つの核酸分子のヌクレオチド配列とを比較する工程、および上
記サンプル中の上記核酸分子の配列が、上記の選択された配列に対して少なくと
も９５％同一であるか否かを決定する工程を包含する。
【０３８３】 上記の配列を比較する工程が、上記サンプル中の核酸分子と、上記群から選択
された上記配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度を決
定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、上記の配列を比較す
る工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、上記
群から選択された上記配列とを比較する工程によって実施される、上記方法もま
た好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
された上記配列を含む核酸分子との間の核酸ハイブリダイゼーションの程度を決
定する工程を包含する、上記方法もまた好ましい。同様に、上記の配列を比較す
る工程が、上記サンプル中の核酸分子から決定されるヌクレオチド配列と、上記
群から選択された上記配列とを比較する工程によって実施される、上記方法もま
た好ましい。核酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３８４】 さらに好ましい実施態様は、生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同
定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中
の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含むこのサンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工
程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１におい
て規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤに
よって同定され、そして表１においてこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡ
ＴＣＣ受託番号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコー
ドされるヌクレオチド配列。
定するための方法であって、この方法は、以下からなる群から選択される配列中
の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である
ヌクレオチド配列を含むこのサンプル中の核酸分子を（もしあれば）検出する工
程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列であって、ここでＸは表１におい
て規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤに
よって同定され、そして表１においてこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡ
ＴＣＣ受託番号を有する寄託物中に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコー
ドされるヌクレオチド配列。
【０３８５】 生物学的サンプルの種、組織、または細胞型を同定するための方法は、少なく
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、この群
から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一である。
とも２つのヌクレオチド配列のパネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検
出する工程を包含し得、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、この群
から選択される配列中の少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なく
とも９５％同一である。
【０３８６】 表１において同定される分泌タンパク質をコードする遺伝子の異常な構造また
は発現と関連する病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好
ましく、この方法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の
連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を
含む、核酸分子を、（もしあれば）この被験体から得られる生物学的サンプルに
おいて検出する工程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表
１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示され
るＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコ
ードされるヌクレオチド配列。
は発現と関連する病理学的状態を、被験体において診断するための方法もまた好
ましく、この方法は、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも５０の
連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を
含む、核酸分子を、（もしあれば）この被験体から得られる生物学的サンプルに
おいて検出する工程を包含する：配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表
１において規定されるような任意の整数である；および表１中のｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示され
るＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコ
ードされるヌクレオチド配列。
【０３８７】 病理学的状態を診断するための方法は、少なくとも２つのヌクレオチド配列の
パネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで
、このパネル中の少なくとも１つの配列は、この群から選択される配列中の少な
くとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
パネル中のヌクレオチド配列を含む核酸分子を検出する工程を包含し得、ここで
、このパネル中の少なくとも１つの配列は、この群から選択される配列中の少な
くとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である。
【０３８８】 この核酸分子のヌクレオチド配列が、少なくとも２つのヌクレオチド配列のパ
ネルを含む、単離された核酸分子を含む物質の組成物もまた好ましく、ここでこ
のパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列中の
少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である：
配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表１において規定されるような任意
の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして
表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託
物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列。核
酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
ネルを含む、単離された核酸分子を含む物質の組成物もまた好ましく、ここでこ
のパネル中の少なくとも１つの配列は、以下からなる群から選択される配列中の
少なくとも５０の連続したヌクレオチドの配列に少なくとも９５％同一である：
配列番号Ｘのヌクレオチド配列、ここでＸは表１において規定されるような任意
の整数である；および表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして
表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託
物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるヌクレオチド配列。核
酸分子は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含み得る。
【０３８９】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に
、少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた
好ましく、ここでＹは、表１において規定されるような任意の整数である。
、少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた
好ましく、ここでＹは、表１において規定されるような任意の整数である。
【０３９０】 この連続したアミノ酸の配列が、表１中の配列番号Ｙについて示されるような
、ほぼ分泌部分の第１のアミノ酸の位置の残基で始まり、そしてほぼオープンリ
ーディングフレームの最後のアミノ酸の残基で終わる位置の範囲で、配列番号Ｙ
のアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
、ほぼ分泌部分の第１のアミノ酸の位置の残基で始まり、そしてほぼオープンリ
ーディングフレームの最後のアミノ酸の残基で終わる位置の範囲で、配列番号Ｙ
のアミノ酸配列中に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３９１】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に
少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好
ましい。
少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた好
ましい。
【０３９２】 配列番号Ｙのアミノ酸配列中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列
に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさら
に好ましい。
に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさら
に好ましい。
【０３９３】 配列番号Ｙの完全なアミノ酸配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含
む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３９４】 表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃＤＮ
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃ
ＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全なアミノ酸配列にお
いて、少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一のア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
Ａクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃ
ＤＮＡクローンによってコードされる分泌タンパク質の完全なアミノ酸配列にお
いて、少なくとも約１０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９０％同一のア
ミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドはさらに好ましい。
【０３９５】 この連続したアミノ酸の配列が、表１中のｃＤＮＡクローンＩＤによって同定
され、そして表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号
を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タン
パク質の分泌部分のアミノ酸配列に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
され、そして表１中のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号
を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる分泌タン
パク質の分泌部分のアミノ酸配列に含まれる、ポリペプチドもまた好ましい。
【０３９６】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃ
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、
ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配
列中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一であ
るアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、
ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配
列中の少なくとも約３０の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一であ
るアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３９７】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃ
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、
ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配
列中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一で
あるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、
ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配
列中の少なくとも約１００の連続したアミノ酸の配列に少なくとも９５％同一で
あるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドもまた、好ましい。
【０３９８】 表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１中のこのｃ
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒ
トｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列
に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドも
また、好ましい。
ＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれるヒ
トｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分泌部分のアミノ酸配列
に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドも
また、好ましい。
【０３９９】 以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して
特異的に結合する単離された抗体は、さらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配
列（ここで、Ｙは表１で規定されるような任意の整数である）；および表１にお
けるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクロー
ンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡ
クローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列。
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドに対して
特異的に結合する単離された抗体は、さらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配
列（ここで、Ｙは表１で規定されるような任意の整数である）；および表１にお
けるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクロー
ンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡ
クローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４００】 以下からなる群から選択される配列中の、少なくとも１０の連続したアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生物
学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配
列（ここで、Ｙは表１で規定されるような任意の整数である）；および表１にお
けるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクロー
ンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡ
クローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列；この方法は、こ
のサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列をこの
群から選択される配列と比較する工程およびこのサンプル中におけるこのポリペ
プチド分子の配列が、少なくとも１０の連続したアミノ酸のこの配列と少なくと
も９０％同一であるかどうかを決定する工程を含む。
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドを、生物
学的サンプルにおいて検出する方法はさらに好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配
列（ここで、Ｙは表１で規定されるような任意の整数である）；および表１にお
けるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクロー
ンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡ
クローンによってコードされるタンパク質の完全アミノ酸配列；この方法は、こ
のサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列をこの
群から選択される配列と比較する工程およびこのサンプル中におけるこのポリペ
プチド分子の配列が、少なくとも１０の連続したアミノ酸のこの配列と少なくと
も９０％同一であるかどうかを決定する工程を含む。
【０４０１】 このサンプル中における少なくとも１つのポリペプチド分子のアミノ酸配列を
、この群から選択される配列と比較するこの工程は、このサンプル中のポリペプ
チドの、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも１０の連続したアミ
ノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特
異的に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定する工程を含む、上記の
方法もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定さ
れるような任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによ
って同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受
託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタ
ンパク質の完全アミノ酸配列。
、この群から選択される配列と比較するこの工程は、このサンプル中のポリペプ
チドの、以下からなる群から選択される配列中の少なくとも１０の連続したアミ
ノ酸の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと特
異的に結合する抗体に対する特異的な結合の程度を決定する工程を含む、上記の
方法もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定さ
れるような任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによ
って同定され、そして表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受
託番号を有する寄託物に含まれるヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタ
ンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０２】 配列を比較する工程が、このサンプル中のポリペプチド分子から決定されたア
ミノ酸配列を、この群から選択されるこの配列と比較することによって行われる
、上記の方法もまた好ましい。
ミノ酸配列を、この群から選択されるこの配列と比較することによって行われる
、上記の方法もまた好ましい。
【０４０３】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する方法もまた好ましく、こ
こでこの方法は、このサンプル中のポリペプチド分子（このポリペプチドは、も
し存在するならば、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０
の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む）
を検出する工程を含む：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定さ
れる任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同
定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有
する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる、分泌タン
パク質の完全アミノ酸配列。
こでこの方法は、このサンプル中のポリペプチド分子（このポリペプチドは、も
し存在するならば、以下からなる群から選択される配列における少なくとも１０
の連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む）
を検出する工程を含む：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に規定さ
れる任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同
定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有
する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる、分泌タン
パク質の完全アミノ酸配列。
【０４０４】 生物学的サンプルの種、組織または細胞型を同定する上記の方法もまた好まし
く、ここでこの方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ
酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少
なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列における少なくとも１０の
連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
く、ここでこの方法は、少なくとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ
酸配列を含むポリペプチド分子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少
なくとも１つの配列は、上記の群から選択された配列における少なくとも１０の
連続的なアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一である。
【０４０５】 被験体において、表１において同定された分泌タンパク質をコードする遺伝子
の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい。
ここで、この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少な
くとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分
子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下
からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配
列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表
１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤ
によって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受
託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
の異常な構造または発現に関連する病的状態を診断する方法もまた、好ましい。
ここで、この方法は、この被験体から得られた生物学的サンプルにおいて、少な
くとも２つのアミノ酸配列のパネルにおけるアミノ酸配列を含むポリペプチド分
子を検出する工程を含み、ここでこのパネル中の少なくとも１つの配列は、以下
からなる群から選択される配列における少なくとも１０の連続的なアミノ酸の配
列と少なくとも９０％同一である：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表
１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤ
によって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受
託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされる
分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０６】 これらの方法のいずれかにおいて、このポリペプチド分子を検出する工程は、
抗体を使用することを包含する。
抗体を使用することを包含する。
【０４０７】 以下からなる群から選択された配列中の、少なくとも１０の連続的なアミノ酸
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、
Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴ
ＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコード
される分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
の配列に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列に、少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、
Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴ
ＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコード
される分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４０８】 ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、原核生物宿主でのこのポリペ
プチドの発現について最適化されている、単離された核酸分子もまた、好ましい
。
プチドの発現について最適化されている、単離された核酸分子もまた、好ましい
。
【０４０９】 また、このポリペプチドが以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、
Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴ
ＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコード
される分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
、単離された核酸分子もまた、好ましい：配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、
Ｙは表１に規定される任意の整数である）；および表１におけるｃＤＮＡクロー
ンＩＤによって同定されかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴ
ＣＣ受託番号を有する寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコード
される分泌タンパク質の完全アミノ酸配列。
【０４１０】 上記の単離された核酸分子のいずれかをベクター中に挿入する工程を含む、組
換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換え
ベクターもまた、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換
え宿主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細
胞もまた、好ましい。
換えベクターの作製方法はさらに好ましい。この方法によって生成された組換え
ベクターもまた、好ましい。宿主細胞中にベクターを導入する工程を含む、組換
え宿主細胞を作製する方法、ならびにこの方法によって生成された組換え宿主細
胞もまた、好ましい。
【０４１１】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、このポリペプチドが発現さ
れるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチ
ドを回収する工程を包含する、方法もまた、好ましい。単離されたポリペプチド
を作製するこの方法もまた好ましく、ここでこの組換え宿主細胞は真核細胞であ
り、そしてこのポリペプチドは、以下からなる群から選択されたアミノ酸配列を
含む、ヒト分泌タンパク質の分泌部分である：配列番号Ｙの分泌部分の第１のア
ミノ酸の位置の残基で始まる、配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に
記載される整数であり、そして配列番号Ｙの分泌部分の第１のアミノ酸の位置は
表１に規定される）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定さ
れかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する
寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分
泌部分のアミノ酸配列。この方法によって生成された単離されたポリペプチドも
また、好ましい。
れるような条件下でこの組換え宿主細胞を培養する工程、およびこのポリペプチ
ドを回収する工程を包含する、方法もまた、好ましい。単離されたポリペプチド
を作製するこの方法もまた好ましく、ここでこの組換え宿主細胞は真核細胞であ
り、そしてこのポリペプチドは、以下からなる群から選択されたアミノ酸配列を
含む、ヒト分泌タンパク質の分泌部分である：配列番号Ｙの分泌部分の第１のア
ミノ酸の位置の残基で始まる、配列番号Ｙのアミノ酸配列（ここで、Ｙは表１に
記載される整数であり、そして配列番号Ｙの分泌部分の第１のアミノ酸の位置は
表１に規定される）；および表１におけるｃＤＮＡクローンＩＤによって同定さ
れかつ表１のこのｃＤＮＡクローンについて示されるＡＴＣＣ受託番号を有する
寄託物に含まれる、ヒトｃＤＮＡクローンによってコードされるタンパク質の分
泌部分のアミノ酸配列。この方法によって生成された単離されたポリペプチドも
また、好ましい。
【０４１２】 増加したレベルの分泌タンパク質活性を必要とする個体を処置する方法もまた
、好ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタ
ンパク質の活性のレベルを増加させるのに有効な本願発明の単離されたポリペプ
チド、ポリヌクレオチド、または抗体の量を含む薬学的組成物を投与する工程を
包含する。
、好ましい。ここで、この方法は、このような個体に、この個体においてこのタ
ンパク質の活性のレベルを増加させるのに有効な本願発明の単離されたポリペプ
チド、ポリヌクレオチド、または抗体の量を含む薬学的組成物を投与する工程を
包含する。
【０４１３】 概して、本発明を記載してきたが、本発明は、例示の目的のために提供され、
そして限定を意図しない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解
される。
そして限定を意図しない、以下の実施例を参照することによってより容易に理解
される。
【０４１４】 （実施例） （実施例１：選択されたｃＤＮＡクローンの寄託されたサンプルからの単離） 引用されるＡＴＣＣ寄託物中の各ｃＤＮＡクローンは、プラスミドベクター中
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを同定する。多くの場合において、ライブラリーを構
築するために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクタ
ーである。すぐ下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各フ
ァージベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクロ
ーンがベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に同定され
る場合、対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
に含まれる。表１は、各クローンが単離されたｃＤＮＡライブラリーを構築する
ために用いられたベクターを同定する。多くの場合において、ライブラリーを構
築するために使用されたベクターは、プラスミドが切り出されたファージベクタ
ーである。すぐ下の表は、ｃＤＮＡライブラリーを構築する際に使用される各フ
ァージベクターについて関連するプラスミドを相関づける。例えば、特定のクロ
ーンがベクター「Ｌａｍｂｄａ Ｚａｐ」中に単離されていると表１に同定され
る場合、対応する寄託クローンは、「ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ」である。
【０４１５】
【表２】 ベクターＬａｍｂｄａ Ｚａｐ（米国特許第５，１２８，２５６号および同第
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ． １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．
Ａ．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １
７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏ
ｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市
販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオ
マイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（こ
れもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得る。ｐ
ＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４つの形態である。ＳおよびＫと
は、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「Ｋ」とは、Ｋｐｎ
Ｉのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端での最初の部位である
）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリンカーの配向をいう
。「＋」または「−」とは 、ある方向においてｆ１ ｏｒｉから開始される一
本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方においてアンチセンスで
あるようなｆ１複製起点「ｏｒｉ」の配向をいう。
５，２８６，６３６号）、Ｕｎｉ−Ｚａｐ ＸＲ（米国特許第５，１２８，２５
６号および同第５，２８６，６３６号）、Ｚａｐ Ｅｘｐｒｅｓｓ（米国特許第
５，１２８，２５６号および同第５，２８６，６３６号）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉ
ｐｔ（ｐＢＳ）（Ｓｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ． １６：７５８３−７６００（１９８８）；Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．
Ａ．およびＳｈｏｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １
７：９４９４（１９８９））ならびにｐＢＫ（Ａｌｔｉｎｇ−Ｍｅｅｓ，Ｍ．Ａ
．ら、Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ５：５８−６１（１９９２））は、Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、１１０１１ Ｎ．Ｔｏ
ｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒｏａｄ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，９２０３７から市
販されている。ｐＢＳは、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてｐＢＫはネオ
マイシン耐性遺伝子を含む。両方とも、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（こ
れもまた、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能である）に形質転換され得る。ｐ
ＢＳは、ＳＫ＋、ＳＫ−、ＫＳ＋およびＫＳの４つの形態である。ＳおよびＫと
は、ポリリンカー領域（「Ｓ」とはＳａｃＩであり、そして「Ｋ」とは、Ｋｐｎ
Ｉのことであり、これらは、それぞれのリンカーの各末端での最初の部位である
）に隣接するＴ７およびＴ３プライマー配列に対するポリリンカーの配向をいう
。「＋」または「−」とは 、ある方向においてｆ１ ｏｒｉから開始される一
本鎖レスキューがセンス鎖ＤＮＡを生成し、そして他方においてアンチセンスで
あるようなｆ１複製起点「ｏｒｉ」の配向をいう。
【０４１６】 ベクターｐＳｐｏｒｔ１、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ ２．０およびｐＣＭＶＳｐｏ
ｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全ての
Ｓｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株Ｄ
Ｈ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能であ
る）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ
１５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎ
ｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、ア
ンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質
転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２
００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本
発明のポリヌクレオチドは、表１における特定のクローンについて同定されたフ
ァージベクター配列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列
を含まない。
ｒｔ３．０をＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ
６００９、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２０８９７から入手した。全ての
Ｓｐｏｒｔベクターはアンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株Ｄ
Ｈ１０Ｂ（これもまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能であ
る）に形質転換され得る。（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｆｏｃｕｓ
１５：５９（１９９３）を参照のこと）。ベクターｌａｆｍｉｄ ＢＡ（Ｂｅｎ
ｔｏ Ｓｏａｒｅｓ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＮＹ）は、ア
ンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃｏｌｉ株ＸＬ−１ Ｂｌｕｅに形質
転換され得る。ベクターｐＣＲ（登録商標）２．１（これはＩｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ、１６００ Ｆａｒａｄａｙ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ ９２
００８から入手可能である）は、アンピシリン耐性遺伝子を含み、そしてＥ．ｃ
ｏｌｉ株ＤＨ１０Ｂ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能である
）に形質転換され得る（例えば、Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｍ．、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．１６：９６７７−９６８６（１９８８）およびＭｅａｄ，Ｄ．ら、Ｂｉ
ｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：（１９９１）を参照のこと）。好ましくは、本
発明のポリヌクレオチドは、表１における特定のクローンについて同定されたフ
ァージベクター配列、ならびに上記に示された対応するプラスミドベクター配列
を含まない。
【０４１７】 表１に引用される、任意の所定のｃＤＮＡクローンについてＡＴＣＣ受託番号
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に同定さ
れる各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表
１に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個
のプラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を
含む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃ
ＤＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含
み得る。
を与えられたサンプルにおける寄託された物質はまた、１つ以上のさらなるプラ
スミド（これは各々、その所定のクローンとは異なるｃＤＮＡクローンを含む）
を含み得る。従って、同じＡＴＣＣ受託番号を共有する寄託物は、表１に同定さ
れる各ｃＤＮＡクローンのためのプラスミドを少なくとも含む。代表的には、表
１に引用される各ＡＴＣＣ寄託物のサンプルは、ほぼ等量（重量で）の約５０個
のプラスミドＤＮＡ（これは各々、異なるｃＤＮＡクローンを含む）の混合物を
含む；しかし、このような寄託サンプルは、５０個よりも多いかまたは少ないｃ
ＤＮＡクローン（約５００個までのｃＤＮＡクローン）のためのプラスミドを含
み得る。
【０４１８】 表１における特定のクローンについて引用されるプラスミドＤＮＡの寄託サン
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
プルからそのクローンを単離するために２つのアプローチが使用され得る。第一
に、プラスミドを、配列番号Ｘに対応するポリヌクレオチドプローブを使用して
、クローンをスクリーニングすることによって直接単離する。
【０４１９】 特に、３０〜４０ヌクレオチドを有する特定のポリヌクレオチドを、報告され
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製す
る。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混
合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術
または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を
用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択
薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転換
体（コロニー）の密度でプレートする。これらのプレートを、細菌コロニースク
リーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、
（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従っ
て、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
ている配列に従って、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成装置
を使用して合成する。オリゴヌクレオチドを、例えば、32Ｐ−γ−ＡＴＰで、Ｔ
４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて標識し、そして慣用の方法に従って精製す
る。（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏ
ｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ、ＮＹ（１９８２））。プラスミド混
合物を、当業者に公知の技術（例えば、ベクター供給者によって提供される技術
または上記で引用された関連の刊行物もしくは特許において提供される技術）を
用いて、上記のような適切な宿主（例えば、ＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ））に形質転換する。形質転換体を１．５％寒天プレート（適切な選択
薬剤、例えば、アンピシリンを含む）に、１プレートあたり約１５０の形質転換
体（コロニー）の密度でプレートする。これらのプレートを、細菌コロニースク
リーニングについての慣用の方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、
（１９８９）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１．９３〜１．１０４頁）または当業者に公知の他の技術に従っ
て、ナイロンメンブレンを使用してスクリーニングする。
【０４２０】 あるいは、配列番号Ｘの両端（すなわち、表１に規定されるクローンの５’Ｎ
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅
する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃ
ＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。好適な反応混合物
は、１．５〜５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２ ０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマ
ーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ
（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１
分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを
用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想
される分子量を有するＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を
、ＤＮＡ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって選択された配
列であることを確認する。
Ｔおよび３’ＮＴによって囲まれる配列番号Ｘの領域内）に由来する、１７〜２
０ヌクレオチドの２つのプライマーを合成し、そしてこれらを使用して、寄託さ
れたｃＤＮＡプラスミドをテンプレートとして使用して、所望のｃＤＮＡを増幅
する。ポリメラーゼ連鎖反応を、慣用の条件下で、例えば、０．５μｇの上記ｃ
ＤＮＡテンプレートとの反応混合物の２５μｌ中で実施する。好適な反応混合物
は、１．５〜５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％（ｗ／ｖ）ゼラチン、それぞれ２ ０μＭのｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、２５ｐｍｏｌの各プライマ
ーおよび０．２５ユニットのＴａｑポリメラーゼである。３５サイクルのＰＣＲ
（９４℃での変性を１分間；５５℃でのアニールを１分間；７２℃での伸長を１
分間）を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ自動化サーマルサイクラーを
用いて実施する。増幅産物をアガロースゲル電気泳動により分析し、そして予想
される分子量を有するＤＮＡバンドを切り出し、そして精製する。ＰＣＲ産物を
、ＤＮＡ産物をサブクローニングおよび配列決定することによって選択された配
列であることを確認する。
【０４２１】 寄託されたクローンに存在しないかもしれない遺伝子の５’非コード部分また
は３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これら
の方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異
的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３
’「ＲＡＣＥ」プロトコールと類似するかまたは同一のプロトコール。例えば、
５’ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成する
ために利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
は３’非コード部分の同定のために、いくつかの方法が利用可能である。これら
の方法は、以下を含むがこれらに限定されない：フィルタープローブ探索、特異
的プローブを使用するクローン富化、および当該分野で周知である５’および３
’「ＲＡＣＥ」プロトコールと類似するかまたは同一のプロトコール。例えば、
５’ＲＡＣＥに類似する方法は、所望の全長転写物の５’末端の欠失を生成する
ために利用可能である（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２１（７）：１６８３−１６８４（１９９３））。
【０４２２】 簡潔には、特定のＲＮＡオリゴヌクレオチドを、全長遺伝子ＲＮＡ転写物をお
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
そらく含むＲＮＡの集団の５’末端に連結する。連結されたＲＮＡオリゴヌクレ
オチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子の公知の配列に特異的なプライ
マーを含むプライマーセットを使用して、所望の全長遺伝子の５’部分をＰＣＲ
増幅する。次いで、この増幅した産物を配列決定し得、そしてこれを使用して全
長遺伝子を生成し得る。
【０４２３】 この上記の方法は、所望の供給源から単離された総ＲＮＡを用いて開始するが
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。こ
の反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連
結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
、ポリＡ＋ＲＮＡをも使用し得る。次いで、ＲＮＡ調製物を、必要ならばホスフ
ァターゼで処理して、後のＲＮＡリガーゼ工程を妨害し得る分解または損傷ＲＮ
Ａの５’リン酸基を排除し得る。次いで、ホスファターゼを不活化するべきであ
り、そしてＲＮＡをメッセンジャーＲＮＡの５’末端に存在するキャップ構造を
除去するために、タバコ酸ピロホスファターゼを用いて処理するべきである。こ
の反応は、次いでＴ４ ＲＮＡリガーゼを用いてＲＮＡオリゴヌクレオチドに連
結され得る、キャップ切断ＲＮＡの５’末端に５’リン酸基を残す。
【０４２４】 この改変型ＲＮＡ調製物を、遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドを用いる、第
一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を、
連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子
の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のた
めのテンプレートとして使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そし
て分析して５’末端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。
一鎖ｃＤＮＡ合成のためのテンプレートとして使用する。第一鎖合成反応物を、
連結されたＲＮＡオリゴヌクレオチドに特異的なプライマーおよび目的の遺伝子
の公知の配列に特異的なプライマーを用いる、所望の５’末端のＰＣＲ増幅のた
めのテンプレートとして使用する。次いで、得られた生成物を配列決定し、そし
て分析して５’末端配列が所望の遺伝子に属することを確認する。
【０４２５】 （実施例２：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離） ヒトゲノムＰ１ライブラリー（Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
を、実施例１に記載される方法に従って、配列番号Ｘに対応するｃＤＮＡ配列に
ついて選択されたプライマーを用いるＰＣＲによってスクリーニングする（Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋもまた参照のこと）。
【０４２６】 （実施例３：ポリペプチドの組織分布） 本発明のポリヌクレオチドのｍＲＮＡ発現の組織分布を、とりわけ、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコールを
用いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮ
Ａプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅ
ｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に
従って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１０
０TMカラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用
して、製造者のプロトコール番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、
精製した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験
する。
ｒｏｏｋらによって記載されるノーザンブロット分析についてのプロトコールを
用いて決定する。例えば、実施例１に記載される方法によって生成されるｃＤＮ
Ａプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅ
ｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、製造者の指示に
従って、Ｐ32で標識する。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１０
０TMカラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）を使用
して、製造者のプロトコール番号ＰＴ１２００−１に従って精製する。次いで、
精製した標識プローブを使用して、種々のヒト組織をｍＲＮＡ発現について試験
する。
【０４２７】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコール番号
ＰＴ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーション
および洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露
し、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
（ＭＴＮ）ブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリ
ダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて、製造者のプロトコール番号
ＰＴ１１９０−１に従って、標識プローブで試験する。ハイブリダイゼーション
および洗浄後、ブロットをマウントして、そして−７０℃で一晩フィルムに曝露
し、そしてフィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０４２８】 （実施例４：ポリヌクレオチドの染色体マッピング） オリゴヌクレオチドプライマーのセットを、配列番号Ｘの５’末端の配列に従
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
って設計する。このプライマーは、好ましくは約１００ヌクレオチドにわたる。
次いで、このプライマーセットを、以下のセットの条件下でポリメラーゼ連鎖反
応に使用する：９５℃で３０秒；５６℃で１分；７０℃で１分。このサイクルを
３２回反復し、次いで１回、７０℃で５分間のサイクルを行う。個々の染色体ま
たは染色体フラグメントを含む体細胞ハイブリッドパネル（Ｂｉｏｓ，Ｉｎｃ）
に加えて、ヒト、マウス、およびハムスターのＤＮＡを鋳型として使用する。反
応物を、８％ポリアクリルアミドゲルまたは３．５％アガロースゲルのいずれか
で分析する。染色体マッピングを、特定の体細胞ハイブリッドにおける約１００
ｂｐのＰＣＲフラグメントの存在によって決定する。
【０４２９】 （実施例５：ポリペプチドの細菌性発現） 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、実施例１に概説する
ように、ＤＮＡ配列の５’末端および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオ
チドプライマーを使用して増幅して挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入
物を増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクロー
ニングするために、好ましくはプライマーの５’末端にＢａｍＨＩおよびＸｂａ
Ｉのような制限部位を含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩは、
細菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔ
ｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、抗生物質耐
性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能なプロモータ ー／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−ヒスチジン
タグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする。
ように、ＤＮＡ配列の５’末端および３’末端に対応するＰＣＲオリゴヌクレオ
チドプライマーを使用して増幅して挿入フラグメントを合成する。ｃＤＮＡ挿入
物を増幅するために使用されるプライマーは、発現ベクターに増幅産物をクロー
ニングするために、好ましくはプライマーの５’末端にＢａｍＨＩおよびＸｂａ
Ｉのような制限部位を含むべきである。例えば、ＢａｍＨＩおよびＸｂａＩは、
細菌性発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔ
ｈ，ＣＡ）の制限酵素部位に対応する。このプラスミドベクターは、抗生物質耐
性（Ａｍｐr）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧで調節可能なプロモータ ー／オペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、６−ヒスチジン
タグ（６−Ｈｉｓ）、および制限酵素クローニング部位をコードする。
【０４３０】 ｐＱＥ−９ベクターをＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化し、そして、増幅され
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
しながらｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで連結混合物を、ｌａｃＩリプレ
ッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲＥ Ｐ４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉ
ｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、ＬＢプレート上で生育
できるそれらの能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コ
ロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認す
る。
たフラグメントを細菌性ＲＢＳにおいて開始されるリーディングフレームを維持
しながらｐＱＥ−９ベクターに連結する。次いで連結混合物を、ｌａｃＩリプレ
ッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎr）を与えるプラスミドｐＲＥ Ｐ４の多重コピーを含む、Ｅ．ｃｏｌｉ株Ｍ１５／ｒｅｐ４（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉ
ｎｃ．）を形質転換するために使用する。形質転換体を、ＬＢプレート上で生育
できるそれらの能力によって同定し、そしてアンピシリン／カナマイシン耐性コ
ロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、そして制限分析によって確認す
る。
【０４３１】 所望の構築物を含むクローンを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種す
るために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の光学密度６００（Ｏ．Ｄ．60 0 ）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクト ピラノシド）を最終濃度１ ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリ
プレッサーの不活化によりＰ／Ｏの明確化（ｃｌｅａｒｉｎｇ）を誘導し、遺伝
子発現の増加を導く。
２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）
増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を、１：１００〜１：２５０の比で大量培養に接種す
るために使用する。細胞を、０．４〜０．６の間の光学密度６００（Ｏ．Ｄ．60 0 ）まで増殖させる。次いで、ＩＰＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクト ピラノシド）を最終濃度１ ｍＭになるように加える。ＩＰＴＧは、ｌａｃＩリ
プレッサーの不活化によりＰ／Ｏの明確化（ｃｌｅａｒｉｎｇ）を誘導し、遺伝
子発現の増加を導く。
【０４３２】 細胞を、さらに３〜４時間増殖させる。次いで、細胞を遠心分離（６０００×
ｇで２０分間）によって回収する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６
ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化する。
細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、ニッ
ケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムにロー
ドする（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、前出より入手可能）。６×Ｈｉｓタグを有す
るタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１工程
手順で精製され得る（詳細には、ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ （１９９
５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、前出を参照のこと）。
ｇで２０分間）によって回収する。細胞ペレットを、カオトロピック剤である６
ＭグアニジンＨＣｌ中に、４℃で３〜４時間攪拌することによって可溶化する。
細胞細片を遠心分離によって取り除き、そしてポリペプチドを含む上清を、ニッ
ケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニティー樹脂カラムにロー
ドする（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、前出より入手可能）。６×Ｈｉｓタグを有す
るタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂に高い親和性で結合し、そして単純な１工程
手順で精製され得る（詳細には、ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｔ （１９９
５）ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、前出を参照のこと）。
【０４３３】 手短に言えば、上清を、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８のカラムにロードし
、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し、次い
で１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、最後にポリペプチドを
、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。
、カラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ８で洗浄し、次い
で１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ６で洗浄し、最後にポリペプチドを
、６Ｍグアニジン−ＨＣｌ、ｐＨ５で溶出する。
【０４３４】 次いで、精製したタンパク質を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または５
０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対し
て透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラム
に固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りであ
る：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ ｍＭ ＮａＣｌ、２０％ グリ
セロール、２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の
直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである
。再生後、タンパク質を２５０ ｍＭ イミダゾールの添加によって溶出させる
。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム ｐＨ ６の緩衝
液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製
したタンパク質を、４℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。
０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６の緩衝液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対し
て透析することにより再生させる。あるいは、タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラム
に固定化している間に、首尾よく再折畳みされ得る。推奨条件は以下の通りであ
る：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ ｍＭ ＮａＣｌ、２０％ グリ
セロール、２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ ７．４中の６Ｍ〜１Ｍ尿素の
直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の時間をかけて行うべきである
。再生後、タンパク質を２５０ ｍＭ イミダゾールの添加によって溶出させる
。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム ｐＨ ６の緩衝
液および２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終の透析工程によって除去する。精製
したタンパク質を、４℃で保存するか、または−８０℃で冷凍する。
【０４３５】 上記の発現ベクターに加えて、本発明はさらに、本発明のポリヌクレオチドに
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マー
カーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ． ｃｏｌ
ｉ複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレータ
ー配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレ
ッサー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオ
ペレーター配列を合成的に作製する。
作動可能に連結されたファージオペレーターおよびプロモーターエレメントを含
み、ｐＨＥ４ａと呼ばれる発現ベクターを含む（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４５
、１９９８年２月２５日に寄託。）。このベクターは以下を含む：１）選択マー
カーとしてのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、２）Ｅ． ｃｏｌ
ｉ複製起点、３）Ｔ５ファージプロモーター配列、４）２つのｌａｃオペレータ
ー配列、５）シャイン−ダルガーノ配列、および６）ラクトースオペロンリプレ
ッサー遺伝子（ｌａｑＩｑ）。複製起点（ｏｒｉＣ）は、ｐＵＣ１９（ＬＴＩ，
Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）に由来する。プロモーター配列およびオ
ペレーター配列を合成的に作製する。
【０４３６】 ＤＮＡを、ＮｄｅＩおよびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、ＸｈｏＩ、またはＡｓｐ７
１８によってベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大
きなフラグメント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩
基対であるべきである）を単離することによって、ｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮ
Ａ挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、Ｘｈｏ
Ｉ、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプ
ライマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。
ＰＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物およ
びベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
１８によってベクターを制限処理し、制限生成物をゲルで泳動し、そしてより大
きなフラグメント（スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）フラグメントは約３１０塩
基対であるべきである）を単離することによって、ｐＨＥａに挿入し得る。ＤＮ
Ａ挿入物を、ＮｄｅＩ（５’プライマー）およびＸｂａＩ、ＢａｍＨＩ、Ｘｈｏ
Ｉ、またはＡｓｐ７１８（３’プライマー）に対する制限部位を有するＰＣＲプ
ライマーを使用して、実施例１に記載のＰＣＲプロトコールに従って生成する。
ＰＣＲ挿入物を、ゲル精製し、そして適合する酵素で制限処理する。挿入物およ
びベクターを標準的なプロトコールに従って連結する。
【０４３７】 操作されたベクターは、上記のプロトコールにおいて、細菌系でタンパク質を
発現させるために容易に置換され得る。
発現させるために容易に置換され得る。
【０４３８】 （実施例６：封入体由来のポリペプチドの精製） 以下の別の方法は、ポリペプチドが封入体の形態で存在する場合に、Ｅ． ｃ
ｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定さ
れない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
ｏｌｉ中で発現されたポリペプチドを精製するために使用され得る。他に指定さ
れない場合には、以下のすべての工程は４〜１０℃で行われる。
【０４３９】 Ｅ． ｃｏｌｉ発酵の生産期の完了後、細胞培養物を４〜１０℃に冷却し、そ
して１５，０００ ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ
）によって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想
される収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの
適切な量（重量による）を、１００ ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤＴＡ、
ｐＨ ７．４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して
均質な懸濁液に分散させる。
して１５，０００ ｒｐｍの連続遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ Ｓｅｐａｔｅｃｈ
）によって細胞を採集する。細胞ペーストの単位重量あたりのタンパク質の予想
される収量および必要とされる精製タンパク質の量に基づいて、細胞ペーストの
適切な量（重量による）を、１００ ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤＴＡ、
ｐＨ ７．４を含む緩衝溶液に懸濁させる。細胞を、高剪断ミキサーを使用して
均質な懸濁液に分散させる。
【０４４０】 次いで、細胞をマイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｃｏｒｐ． またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，
Ｉｎｃ．）に２回、４０００〜６０００ ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解
させる。次いでホモジネートを、最終濃度０．５ Ｍ ＮａＣｌになるようにＮ
ａＣｌ溶液と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られた
ペレットを、０．５ Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、ｐＨ ７．４を使用して再度洗浄する。
Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｃｏｒｐ． またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，
Ｉｎｃ．）に２回、４０００〜６０００ ｐｓｉで溶液を通すことによって溶解
させる。次いでホモジネートを、最終濃度０．５ Ｍ ＮａＣｌになるようにＮ
ａＣｌ溶液と混合し、続いて７０００×ｇで１５分間遠心分離を行う。得られた
ペレットを、０．５ Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、ｐＨ ７．４を使用して再度洗浄する。
【０４４１】 得られた洗浄した封入体を、１．５ Ｍ 塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）で２
〜４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄
し、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧ
ｕＨＣｌ抽出を可能にする。
〜４時間可溶化する。７０００×ｇで１５分間の遠心分離の後、ペレットを廃棄
し、そしてポリペプチドを含む上清を４℃で一晩インキュベートしてさらなるＧ
ｕＨＣｌ抽出を可能にする。
【０４４２】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続き、Ｇｕ
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ ｍＭ ナトリウム、ｐ
Ｈ ４．５、１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、２ ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩
衝液とを、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳
みした希釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで
４℃で保つ。
ＨＣｌ可溶化タンパク質を、ＧｕＨＣｌ抽出物と、５０ ｍＭ ナトリウム、ｐ
Ｈ ４．５、１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、２ ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩
衝液とを、激しい攪拌で迅速に混合することによって、再折畳みさせる。再折畳
みした希釈タンパク質溶液を、さらなる精製工程の前の１２時間、混合しないで
４℃で保つ。
【０４４３】 再折畳みされたポリペプチド溶液を清澄にするために、あらかじめ準備した４
０ ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する０
．１６μｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔ
ｒｏｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒ
ｏｓ ＨＳ−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロー
ドする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で洗浄し、そして
同じ緩衝液中の２５０ ｍＭ 、５００ ｍＭ、１０００ ｍＭ、および１５０
０ ｍＭ ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０ ｎｍにおけ
る吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
ってさらに分析する。
０ ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で平衡化した、適切な表面積を有する０
．１６μｍメンブレンフィルターを備える接触濾過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔ
ｒｏｎ）を使用する。濾過したサンプルを、カチオン交換樹脂（例えば、Ｐｏｒ
ｏｓ ＨＳ−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上にロー
ドする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ ６．０で洗浄し、そして
同じ緩衝液中の２５０ ｍＭ 、５００ ｍＭ、１０００ ｍＭ、および１５０
０ ｍＭ ＮａＣｌで、段階的な様式で溶出する。溶出液の２８０ ｎｍにおけ
る吸光度を継続的にモニターする。画分を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
ってさらに分析する。
【０４４４】 次いでポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量の水と混合する。次
いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ
−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（
Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交
換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．０、２００ ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラム
を１０カラム容量の直線的勾配（０．２ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナト
リウム、ｐＨ ６．０から１．０ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．５の範囲）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ280モニ タリング下で収集する。次いで、（例えば、１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって
判明した）ポリペプチドを含む画分をプールする。
いで希釈されたサンプルを、あらかじめ準備した強アニオン（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ
−５０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱アニオン（
Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０， Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）交
換樹脂の直列カラムのセットにロードする。カラムを４０ ｍＭ 酢酸ナトリウ
ム、ｐＨ ６．０で平衡化する。両方のカラムを、４０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．０、２００ ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いでＣＭ−２０カラム
を１０カラム容量の直線的勾配（０．２ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナト
リウム、ｐＨ ６．０から１．０ Ｍ ＮａＣｌ、５０ ｍＭ 酢酸ナトリウム
、ｐＨ ６．５の範囲）を用いて溶出させる。画分を、溶出液の定常Ａ280モニ タリング下で収集する。次いで、（例えば、１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって
判明した）ポリペプチドを含む画分をプールする。
【０４４５】 得られたポリペプチドは、上記の再折畳みおよび精製工程の後で９５％より高
い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
から観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ
混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ ｎｇ／ｍｌ未満である。
い純度を示すべきである。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合、いかな
る主たる混在バンドも、クマシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
から観察されないはずである。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ
混在について試験され得、そして代表的には、ＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイに従
って、０．１ ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０４４６】 （実施例７：バキュロウイルス発現系におけるポリペプチドのクローニングお
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体ウイルス
（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘｂ
ａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス４
０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために
使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にある
弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ． ｃｏｌｉ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを
含む。挿入された遺伝子は両方の側で、クローン化したポリヌクレオチドを発現
する生存可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相
同組換えのためのウイルス配列と隣接する。
よび発現） この実施例では、ポリペプチドを発現するために、プラスミドシャトルベクタ
ーｐＡ２を使用してポリヌクレオチドをバキュロウイルスに挿入する。この発現
ベクターは、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多核体ウイルス
（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーター、続いてＢａｍＨＩ、Ｘｂ
ａＩ、およびＡｓｐ７１８のような便利な制限部位を含む。シミアンウイルス４
０（「ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために
使用する。組換えウイルスの容易な選択のために、プラスミドは、同方向にある
弱いＤｒｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下でＥ． ｃｏｌｉ由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子、続いてポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルを
含む。挿入された遺伝子は両方の側で、クローン化したポリヌクレオチドを発現
する生存可能なウイルスを生成する、野生型ウイルスＤＮＡとの細胞媒介性の相
同組換えのためのウイルス配列と隣接する。
【０４４７】 他の多くのバキュロウイルスベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌など（必要とされる場合、シグナルペプチドおよびインフレームなＡＵ
Ｇを含む）のために適切に配置されたシグナルを提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９ （１９８９） に記載される。
、およびｐＡｃＩＭ１）は、当業者が容易に理解するように、構築物が転写、翻
訳、分泌など（必要とされる場合、シグナルペプチドおよびインフレームなＡＵ
Ｇを含む）のために適切に配置されたシグナルを提供する限りにおいて、上記の
ベクターの代わりに使用され得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏ
ｗら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９ （１９８９） に記載される。
【０４４８】 具体的には、寄託されたクローンに含まれるｃＤＮＡ配列（これは、表１に示
されるＡＵＧ開始コドンおよび天然に付随するリーダー配列を含む）を、実施例
１に記載されるＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナ
ル配列を使用して分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグ
ナルペプチドを必要としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら（「Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅ
ｄｕｒｅｓ」、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ． １５５５ （１９８７））
に記載される標準的な方法を用いて改変して、バキュロウイルスリーダー配列を
含ませ得る（ｐＡ２ ＧＰ）。
されるＡＵＧ開始コドンおよび天然に付随するリーダー配列を含む）を、実施例
１に記載されるＰＣＲプロトコルを使用して増幅させる。天然に存在するシグナ
ル配列を使用して分泌タンパク質を産生する場合、ｐＡ２ベクターは第２のシグ
ナルペプチドを必要としない。あるいは、ベクターは、Ｓｕｍｍｅｒｓら（「Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅ
ｄｕｒｅｓ」、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ａｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ． １５５５ （１９８７））
に記載される標準的な方法を用いて改変して、バキュロウイルスリーダー配列を
含ませ得る（ｐＡ２ ＧＰ）。
【０４４９】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ）を使用して、１％アガロース
ゲルから単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再び
１％アガロースゲルで精製する。
１０１ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ）を使用して、１％アガロース
ゲルから単離する。次いでフラグメントを適切な制限酵素で消化し、そして再び
１％アガロースゲルで精製する。
【０４５０】 プラスミドを対応する制限酵素で消化し、そして必要に応じて、当該分野で公
知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る。
次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎ
ｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離
する。
知の慣用の手順を用いて、仔ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化し得る。
次いでＤＮＡを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎ
ｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ）を使用して、１％アガロースゲルから単離
する。
【０４５１】 フラグメントおよび脱リン酸化したプラスミドを、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼを用
いて互いに連結する。Ｅ． ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ
， Ｃａ）細胞のような他の適切なＥ． ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転
換し、そして培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニ
ー由来のＤＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析すること
により同定する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によっ
て確認する。
いて互いに連結する。Ｅ． ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ（
Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ
， Ｃａ）細胞のような他の適切なＥ． ｃｏｌｉ宿主を、連結混合液で形質転
換し、そして培養プレート上に拡げる。プラスミドを含む細菌を、個々のコロニ
ー由来のＤＮＡを消化し、そして消化産物をゲル電気泳動によって分析すること
により同定する。クローニングしたフラグメントの配列をＤＮＡ配列決定によっ
て確認する。
【０４５２】 このポリヌクレオチドを含む５μｇのプラスミドを、 Ｆｅｌｇｎｅｒら、Ｐ
ｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４：７４１３−７４
１７ （１９８７） によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．
０μｇの市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂ
ａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ」， Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ， ＣＡ）とともに同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏ
ｌｄTMウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース
培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ， ＭＤ）を含む、マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合
する。その後、１０ μｌのリポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え
、混合し、そして室温で１５分間インキュベートする。次いで、トランスフェク
ション混合液を、無血清グレース培地１ ｍｌを加えた３５ ｍｍ組織培養プレ
ートに播種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加え
る。次いでプレートを２７℃で５時間インキュベートする。次いで、トランスフ
ェクション溶液をプレートから除去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１
ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
ｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８４：７４１３−７４
１７ （１９８７） によって記載されたリポフェクション法を使用して、１．
０μｇの市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂ
ａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ」， Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ， ＣＡ）とともに同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏ
ｌｄTMウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドを、５０μｌの無血清グレース
培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ， ＭＤ）を含む、マイクロタイタープレートの滅菌したウェル中で混合
する。その後、１０ μｌのリポフェクチンおよび９０μｌグレース培地を加え
、混合し、そして室温で１５分間インキュベートする。次いで、トランスフェク
ション混合液を、無血清グレース培地１ ｍｌを加えた３５ ｍｍ組織培養プレ
ートに播種したＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加え
る。次いでプレートを２７℃で５時間インキュベートする。次いで、トランスフ
ェクション溶液をプレートから除去し、そして１０％ウシ胎仔血清を補充した１
ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。次いで培養を２７℃で４日間継続する。
【０４５３】 ４日後上清を収集し、ＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ、前出によって記載さ
れたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むアガロー
スゲルを、ｇａｌが発現しているクローン（青色に着色したプラークを生ずる）
の容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークア
ッセイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．
， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ９−１０頁によって記載される、昆虫細胞培
養およびバキュロウイルス学のための使用者ガイドの中に見出され得る）。適切
なインキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例
えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒
天を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、
そして組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ ｍｍディッシュに播種し
たＳｆ９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの
上清を採集し、次いで４℃に貯蔵する。
れたようにプラークアッセイを行う。「Ｂｌｕｅ Ｇａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ）を含むアガロー
スゲルを、ｇａｌが発現しているクローン（青色に着色したプラークを生ずる）
の容易な同定および単離を可能にするために使用する。（この型の「プラークア
ッセイ」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．
， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ９−１０頁によって記載される、昆虫細胞培
養およびバキュロウイルス学のための使用者ガイドの中に見出され得る）。適切
なインキュベーションの後、青色に着色したプラークをマイクロピペッター（例
えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）のチップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒
天を、２００μｌのグレース培地を含む微小遠心分離チューブ中で再懸濁させ、
そして組換えバキュロウイルスを含む懸濁液を、３５ ｍｍディッシュに播種し
たＳｆ９細胞に感染させるために使用する。４日後、これらの培養ディッシュの
上清を採集し、次いで４℃に貯蔵する。
【０４５４】 ポリペプチドの発現を確認するために、１０％熱非働化ＦＢＳを補充したグレ
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。放射性標識
したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオニ
ンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤから入手可能）に置き
換える。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−シス
テイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間イ
ンキュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質および
細胞内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オート
ラジオグラフィーによって分析する。
ース培地中でＳｆ９細胞を増殖させる。細胞を、約２の感染多重度（「ＭＯＩ」
）でポリヌクレオチドを含む組換えバキュロウイルスで感染させる。放射性標識
したタンパク質を所望する場合には、６時間後に培地を除去し、そしてメチオニ
ンおよびシステインを含まないＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤから入手可能）に置き
換える。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−シス
テイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時間イ
ンキュベートし、次いで遠心分離によって採集する。上清中のタンパク質および
細胞内タンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識した場合）オート
ラジオグラフィーによって分析する。
【０４５５】 精製タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列の微量配列決定法を使用して、産
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
生されたタンパク質のアミノ末端配列を決定し得る。
【０４５６】 （実施例８：哺乳動物細胞におけるポリペプチドの発現） 本発明のポリペプチドを、哺乳動物細胞中で発現させ得る。代表的な哺乳動物
発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介するプロモーターエレメント、タ
ンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要な
シグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、および
、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列を
含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レ
トロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴ
Ｒ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成
される。しかし、細胞内エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もま
た、使用され得る。
発現ベクターは、ｍＲＮＡの転写の開始を媒介するプロモーターエレメント、タ
ンパク質コード配列、および転写の終結および転写物のポリアデニル化に必要な
シグナルを含む。さらなるエレメントは、エンハンサー、コザック配列、および
、ＲＮＡスプライシングのドナーおよびアクセプター部位に隣接する介在配列を
含む。非常に効率的な転写は、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レ
トロウイルス（例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶＩ）由来の長末端反復（ＬＴ
Ｒ）、およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成
される。しかし、細胞内エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もま
た、使用され得る。
【０４５７】 本発明を実施する際の使用に適切な発現ベクターは、例えば、ｐＳＶＬおよび
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳ
Ｖｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６
）、ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、な
らびにｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動
物宿主細胞は、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細
胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ ７
細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイ
ニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
ｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）、ｐＲＳ
Ｖｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６
）、ｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）、ｐＣＭＶＳｐｏｒｔ２．０、な
らびにｐＣＭＶＳｐｏｒｔ３．０のようなベクターを含む。使用され得る哺乳動
物宿主細胞は、ヒトＨｅｌａ細胞、２９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細
胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ１２７細胞、Ｃｏｓ １細胞、Ｃｏｓ ７
細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイ
ニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を含む。
【０４５８】 あるいは、ポリペプチドは、染色体に組み込まれたポリヌクレオチドを含む、
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
安定な細胞株中で発現され得る。ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハイグロマ
イシンのような選択可能なマーカーを用いる同時トランスフェクションは、トラ
ンスフェクトされた細胞の同定および単離を可能にする。
【０４５９】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、大量のコードされたタンパク質を発現
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。
（例えば、Ａｌｔ， Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５３：１
３５７−１３７０ （１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ， Ｊ．Ｌ．およびＭａ， Ｃ
．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ、１０９７：１０７
−１４３ （１９９０）：Ｐａｇｅ， Ｍ．Ｊ．およびＳｙｎｄｅｎｈａｍ，
Ｍ．Ａ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８ （１９９１）を参照
のこと）。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）であ
る（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２２７：２７７−２７９ （１９
９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６
９−１７５ （１９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選
択培地中で増殖させ、そしてもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これら
の細胞株は、染色体に組み込まれた、増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハ
ムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生のためにしばし
ば使用される。
するために増幅され得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸還元酵素）マーカーは、目的
の遺伝子の数百または数千さえものコピーを有する細胞株の開発に有用である。
（例えば、Ａｌｔ， Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２５３：１
３５７−１３７０ （１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ， Ｊ．Ｌ．およびＭａ， Ｃ
．、Ｂｉｏｃｈｅｍ． ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ、１０９７：１０７
−１４３ （１９９０）：Ｐａｇｅ， Ｍ．Ｊ．およびＳｙｎｄｅｎｈａｍ，
Ｍ．Ａ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８ （１９９１）を参照
のこと）。別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）であ
る（Ｍｕｒｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２２７：２７７−２７９ （１９
９１）；Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６
９−１７５ （１９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選
択培地中で増殖させ、そしてもっとも高い耐性を有する細胞を選択する。これら
の細胞株は、染色体に組み込まれた、増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハ
ムスター卵巣（ＣＨＯ）およびＮＳＯ細胞は、タンパク質の産生のためにしばし
ば使用される。
【０４６０】 プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１４６）の誘導体であ
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ４３８−４４７
（１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハ
ンサー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０ （１９８５））
のフラグメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の
制限酵素切断部位を有するマルチプルクローニングサイトは、目的の遺伝子のク
ローニングを容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロイ
ンシュリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初
期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
る、発現ベクターｐＣ４（ＡＴＣＣ受託番号２０９６４６）およびｐＣ６（ＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６４７）は、ラウス肉腫ウイルス（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ４３８−４４７
（１９８５年３月））の強力なプロモーター（ＬＴＲ）、およびＣＭＶエンハ
ンサー（Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０ （１９８５））
のフラグメントを含む。例えば、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８の
制限酵素切断部位を有するマルチプルクローニングサイトは、目的の遺伝子のク
ローニングを容易にする。ベクターはまた、３’イントロン、ラットプレプロイ
ンシュリン遺伝子のポリアデニル化および終結シグナル、ならびに、ＳＶ４０初
期プロモーターの制御下にあるマウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。
【０４６１】 具体的には、例えば、プラスミドｐＣ６は、適切な制限酵素によって消化され
、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ）を使用して脱リン酸化する。次いで、ベクターを１％アガロースゲル
から単離する。
、次いで当該分野で公知の手順に従って、仔ウシ腸ホスファターゼ（ｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ）を使用して脱リン酸化する。次いで、ベクターを１％アガロースゲル
から単離する。
【０４６２】 本発明のポリヌクレオチドは、実施例１に概説するプロトコルに従って増幅さ
れる。天然に存在するシグナル配列が、分泌タンパク質を産生するために使用さ
れる場合、ベクターは、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天
然に存在するシグナル配列が使用されない場合には、ベクターは異種シグナル配
列を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
れる。天然に存在するシグナル配列が、分泌タンパク質を産生するために使用さ
れる場合、ベクターは、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天
然に存在するシグナル配列が使用されない場合には、ベクターは異種シグナル配
列を含むように改変され得る（例えば、ＷＯ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０４６３】 増幅フラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」、ＢＩＯ １０
１ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲル
から単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再び
１％アガロースゲル上で精製する。
１ Ｉｎｃ．， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａ．）を使用して１％アガロースゲル
から単離する。次いで、フラグメントを、適切な制限酵素で消化し、そして再び
１％アガロースゲル上で精製する。
【０４６４】 次いで、増幅フラグメントを同じ制限酵素で消化し、そして１％アガロースゲ
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ． ｃｏｌｉ ＨＢ１０１ま
たはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入され
たフラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
ルで精製する。次いで、単離されたフラグメントおよび脱リン酸化したベクター
を、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、Ｅ． ｃｏｌｉ ＨＢ１０１ま
たはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞を形質転換し、そしてプラスミドｐＣ６に挿入され
たフラグメントを含む細菌を、例えば、制限酵素分析を用いて同定する。
【０４６５】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠損するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクト
する（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵
素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し
、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／
ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプ
レート（Ｇｒｅｉｎｅｒ， Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後
、単一のクローンをトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（
５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６
ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサ
ートの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μ
Ｍ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに
移す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるま
で繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエ
スタンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
スフェクションに使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ６を、リポフェクチン
を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎｅｏとともに同時トランスフェクト
する（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカーであるところの、Ｇ４１８を含む抗生物質の群に対する耐性を付与する酵
素をコードするＴｎ５由来のｎｅｏ遺伝子を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４
１８を補充したαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し
、そして１０、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／
ｍｌのＧ４１８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプ
レート（Ｇｒｅｉｎｅｒ， Ｇｅｒｍａｎｙ）中に播種する。約１０〜１４日後
、単一のクローンをトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（
５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を使用して、６
ウェルのペトリ皿または１０ｍｌのフラスコに播種する。次いで、メトトレキサ
ートの最高濃度で増殖するクローンを、さらに高い濃度（１μＭ、２μＭ、５μ
Ｍ、１０ｍＭ、２０ｍＭ）のメトトレキサートを含む新たな６ウェルプレートに
移す。同じ手順を、１００〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるま
で繰り返す。所望の遺伝子産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエ
スタンブロットによって、または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０４６６】 （実施例９：タンパク質融合物） 本発明のポリぺプチドは、好ましくは、他のタンパク質に融合される。これら
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７もまた参照のこと；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３３１：８４−８６ （１９８８）） 。同様に、ＩｇＧ−１、Ｉｇ
Ｇ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発
明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下局
在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマーまたはホモダイマーは、融合
タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合タンパク質はまた、１つより
多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に、融合タンパク質は、非融合
タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性および／または安定性を増大さ
せ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリぺプチドのＩｇＧ分子への融
合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に記載されるプロトコルを改変
することによって作製され得る。
の融合タンパク質は、種々の適用について使用され得る。例えば、本発明のポリ
ぺプチドの、Ｈｉｓタグ、ＨＡタグ、プロテインＡ、ＩｇＧドメイン、およびマ
ルトース結合タンパク質への融合は、精製を容易にする（実施例５を参照のこと
；ＥＰ Ａ ３９４，８２７もまた参照のこと；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３３１：８４−８６ （１９８８）） 。同様に、ＩｇＧ−１、Ｉｇ
Ｇ−３、およびアルブミンへの融合は、インビボでの半減期を増大させる。本発
明のポリぺプチドに融合した核局在化シグナルは、タンパク質を特定の細胞下局
在に標的化し得る。一方、共有結合ヘテロダイマーまたはホモダイマーは、融合
タンパク質の活性を増大または減少させ得る。融合タンパク質はまた、１つより
多い機能を有するキメラ分子を作製し得る。最後に、融合タンパク質は、非融合
タンパク質と比較して、融合タンパク質の可溶性および／または安定性を増大さ
せ得る。上記の融合タンパク質の全ての型は、ポリぺプチドのＩｇＧ分子への融
合を概説する以下のプロトコル、または実施例５に記載されるプロトコルを改変
することによって作製され得る。
【０４６７】 簡単には、ＩｇＧ分子のヒトＦｃ部分は、以下に記載の配列の５’および３’
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位を有するべきである。
末端にわたるプライマーを使用してＰＣＲ増幅され得る。これらのプライマーは
また、発現ベクター（好ましくは、哺乳動物発現ベクター）へのクローニングを
容易にする都合の良い制限酵素部位を有するべきである。
【０４６８】 例えば、ｐＣ４（受託番号第２０９６４６号）が使用される場合、ヒトＦｃ部
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限され、ベクターを線状化し、そして実施例１に記
載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、この
ＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクローン
化され、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意すること。
分は、ＢａｍＨＩクローニング部位に連結され得る。３’ＢａｍＨＩ部位が破壊
されるべきであることに注意のこと。次に、ヒトＦｃ部分を含有するベクターが
、ＢａｍＨＩによって再び制限され、ベクターを線状化し、そして実施例１に記
載するＰＣＲプロトコルによって単離された本発明のポリヌクレオチドが、この
ＢａｍＨＩ部位に連結される。ポリヌクレオチドは、終止コドンなしにクローン
化され、そうでなければ、融合タンパク質は産生されないことに注意すること。
【０４６９】 天然に存在するシグナル配列が分泌タンパク質を産生するために使用される場
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
合、ｐＣ４は、第二のシグナルペプチドを必要としない。あるいは、天然に存在
するシグナル配列が使用されない場合、ベクターは、異種シグナル配列を含むよ
うに改変され得る（例えば、ＷＯ ９６／３４８９１を参照のこと）。
【０４７０】
【化８】 （実施例１０：ポリぺプチドからの抗体の産生） 本発明の抗体は、種々の方法によって調製され得る。（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ， 第２章を参照のこと。）例えば、本発明のポリぺプチドを発
現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導するために動物に投
与される。好ましい方法において、分泌タンパク質の調製物が調製され、そして
精製されて、天然の夾雑物を実質的に含まないようにする。次いで、このような
調製物は、動物に導入されて、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を生成
する。
ｏｔｏｃｏｌｓ， 第２章を参照のこと。）例えば、本発明のポリぺプチドを発
現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導するために動物に投
与される。好ましい方法において、分泌タンパク質の調製物が調製され、そして
精製されて、天然の夾雑物を実質的に含まないようにする。次いで、このような
調製物は、動物に導入されて、より大きな比活性のポリクローナル抗血清を生成
する。
【０４７１】 最も好ましい方法において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体（または、
そのタンパク質結合フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体は、
ハイブリドーマ技術を使用して調製され得る（Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ． ６：５１１（１９７６）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ． ６：２９２（１９７６）； Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一
般に、このような手順は、動物（好ましくは、マウス）をポリぺプチドで免疫化
すること、またはより好ましくは、分泌ポリぺプチド発現細胞での免疫化を含む
。このような細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養され得る；しかし
、１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌ
の非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／
ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地において細
胞を培養することが好ましい。
そのタンパク質結合フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体は、
ハイブリドーマ技術を使用して調製され得る（Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ
２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ． ６：５１１（１９７６）；Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ． Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ． ６：２９２（１９７６）； Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら：Ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎ．Ｙ．、５６３−６８１頁（１９８１））。一
般に、このような手順は、動物（好ましくは、マウス）をポリぺプチドで免疫化
すること、またはより好ましくは、分泌ポリぺプチド発現細胞での免疫化を含む
。このような細胞は、任意の適切な組織培養培地において培養され得る；しかし
、１０％ウシ胎仔血清（約５６℃で非働化した）を補充し、そして約１０ｇ／ｌ
の非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００μｇ／
ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地において細
胞を培養することが好ましい。
【０４７２】 このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして適切なミエローマ細胞株と融合
される。任意の適切なミエローマ細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しか
し、ＡＴＣＣから入手可能な親ミエローマ細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好
ましい。融合後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に
維持し、次いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２
５−２３２ （１９８１））に記載されるように限界希釈によってクローニング
する。このような選択によって得られるハイブリドーマ細胞は、次いでポリぺプ
チドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。
される。任意の適切なミエローマ細胞株は、本発明に従って用いられ得る；しか
し、ＡＴＣＣから入手可能な親ミエローマ細胞株（ＳＰ２Ｏ）を用いることが好
ましい。融合後、得られるハイブリドーマ細胞を、ＨＡＴ培地において選択的に
維持し、次いでＷａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２
５−２３２ （１９８１））に記載されるように限界希釈によってクローニング
する。このような選択によって得られるハイブリドーマ細胞は、次いでポリぺプ
チドに結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにアッセイされる。
【０４７３】 あるいは、ポリぺプチドに結合し得るさらなる抗体を、抗イディオタイプ抗体
を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗体それ
自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得ることが可能である
という事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体が使用されて
、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾細胞を
使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、ハイブリドーマ細胞は、タ
ンパク質特異的抗体に結合する能力がポリぺプチドによってブロックされ得る抗
体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングされる。このような抗体
は、タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そして動物を
免疫してさらなるタンパク質特異的抗体の形成を誘導するために使用され得る。
を使用して２段階工程の手順において生成し得る。このような方法は、抗体それ
自体が抗原であり、それゆえ第二の抗体に結合する抗体を得ることが可能である
という事実を利用する。この方法に従って、タンパク質特異的抗体が使用されて
、動物（好ましくは、マウス）を免疫する。次いで、このような動物の脾細胞を
使用して、ハイブリドーマ細胞を産生する。そして、ハイブリドーマ細胞は、タ
ンパク質特異的抗体に結合する能力がポリぺプチドによってブロックされ得る抗
体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングされる。このような抗体
は、タンパク質特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そして動物を
免疫してさらなるタンパク質特異的抗体の形成を誘導するために使用され得る。
【０４７４】 ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに本発明の抗体の他のフラグメントは、本
明細書中で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。このような
フラグメントは、代表的には、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）
またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するため）のような酵素を
使用して、タンパク質分解性切断によって産生される。あるいは、分泌タンパク
質結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術の適用により、または合成化学により
産生され得る。
明細書中で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。このような
フラグメントは、代表的には、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）
またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するため）のような酵素を
使用して、タンパク質分解性切断によって産生される。あるいは、分泌タンパク
質結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術の適用により、または合成化学により
産生され得る。
【０４７５】 ヒトにおける抗体のインビボ使用のために、「ヒト化」キメラモノクローナル
抗体を使用することが好ましくあり得る。このような抗体は、上記のモノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝的構築物を使用すること
によって産生され得る。キメラ抗体を産生するための方法は当該分野で公知であ
る。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９： １２
０２ （１９８５）； Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４ （
１９８６）； Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉ
ｇｕｃｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４
；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ
８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３ （１
９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）
を参照のこと）。
抗体を使用することが好ましくあり得る。このような抗体は、上記のモノクロー
ナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝的構築物を使用すること
によって産生され得る。キメラ抗体を産生するための方法は当該分野で公知であ
る。（総説については、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９： １２
０２ （１９８５）； Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４ （
１９８６）； Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉ
ｇｕｃｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、ＥＰ １７３４９４
；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、ＷＯ
８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６４３ （１
９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２６８（１９８５）
を参照のこと）。
【０４７６】 （実施例１１：高処理能力スクリーニングアッセイのための分泌タンパク質の
産生） 以下のプロトコルは、試験されるべきポリぺプチドを含有する上清を産生する
。次いで、この上清は、実施例１３〜２０に記載されるスクリーニングアッセイ
において使用され得る。
産生） 以下のプロトコルは、試験されるべきポリぺプチドを含有する上清を産生する
。次いで、この上清は、実施例１３〜２０に記載されるスクリーニングアッセイ
において使用され得る。
【０４７７】 第一に、ポリ−Ｄ−リジン（６４４ ５８７ Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎ
ｎｈｅｉｍ）ストック溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウム
もマグネシウムも含まない１７−５１６Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で１
：２０に希釈して、作業溶液５０μｇ／ｍｌにする。２００μｌのこの溶液を、
各ウェル（２４ウェルプレート）に添加し、室温で２０分間インキュベートする
。溶液を各ウェルにわたって分配させることを確実にする（注：１２チャンネル
ピペッターは、１つおきのチャンネルにチップをつけて使用され得る）。ポリ−
Ｄ−リジン溶液を吸引除去し、そして１ｍｌ ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水
）でリンスする。ＰＢＳは、細胞をプレートする直前までウェル中に残すべきで
あり、そしてプレートは２週間前までに予めポリリジンでコーティングし得る。
ｎｈｅｉｍ）ストック溶液（ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍｌ）を、ＰＢＳ（カルシウム
もマグネシウムも含まない１７−５１６Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で１
：２０に希釈して、作業溶液５０μｇ／ｍｌにする。２００μｌのこの溶液を、
各ウェル（２４ウェルプレート）に添加し、室温で２０分間インキュベートする
。溶液を各ウェルにわたって分配させることを確実にする（注：１２チャンネル
ピペッターは、１つおきのチャンネルにチップをつけて使用され得る）。ポリ−
Ｄ−リジン溶液を吸引除去し、そして１ｍｌ ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水
）でリンスする。ＰＢＳは、細胞をプレートする直前までウェル中に残すべきで
あり、そしてプレートは２週間前までに予めポリリジンでコーティングし得る。
【０４７８】 ２９３Ｔ細胞（Ｐ＋２０を過ぎて細胞を保有しない）を、２×１０5細胞／ウ ェルで、０．５ｍｌのＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地）（４．
５Ｇ／ＬのグルコースおよびＬ−グルタミン（１２−６０４Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔ
ｔａｋｅｒ）を含む）／１０％熱非働化ＦＢＳ（１４−５０３Ｆ Ｂｉｏｗｈｉ
ｔｔａｋｅｒ）／１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐ（１７−６０２Ｅ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａ
ｋｅｒ）中にプレートする。細胞を一晩増殖させる。
５Ｇ／ＬのグルコースおよびＬ−グルタミン（１２−６０４Ｆ Ｂｉｏｗｈｉｔ
ｔａｋｅｒ）を含む）／１０％熱非働化ＦＢＳ（１４−５０３Ｆ Ｂｉｏｗｈｉ
ｔｔａｋｅｒ）／１×Ｐｅｎｓｔｒｅｐ（１７−６０２Ｅ Ｂｉｏｗｈｉｔｔａ
ｋｅｒ）中にプレートする。細胞を一晩増殖させる。
【０４７９】 翌日、滅菌溶液容器（ｂａｓｉｎ）中で、３００μｌリポフェクトアミン（１
８３２４−０１２ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）および５ｍｌ Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ（
３１９８５０７０ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）／９６ウェルプレートを、一緒に混合
する。小容量のマルチチャンネルピペッターを用いて、実施例８または９に記載
する方法によって産生されたポリヌクレオチド挿入物を含有する約２μｇの発現
ベクターを、適切に標識された９６ウェルの丸底プレート中にアリコートする。
マルチチャンネルピペッターを用いて、５０μｌのリポフェクトアミン／Ｏｐｔ
ｉｍｅｍ Ｉ混合物を各ウェルに添加する。ピペットで緩やかに吸い上げたり下
げたりして混合する。室温で１５〜４５分間インキュベートする。約２０分後、
マルチチャンネルピペッターを使用して１５０μｌのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉを各ウ
ェルに添加する。コントロールとして、挿入物を欠失するベクターＤＮＡの１つ
のプレートは、トランスフェクションの各セットでトランスフェクトされるべき
である。
８３２４−０１２ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）および５ｍｌ Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ（
３１９８５０７０ Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）／９６ウェルプレートを、一緒に混合
する。小容量のマルチチャンネルピペッターを用いて、実施例８または９に記載
する方法によって産生されたポリヌクレオチド挿入物を含有する約２μｇの発現
ベクターを、適切に標識された９６ウェルの丸底プレート中にアリコートする。
マルチチャンネルピペッターを用いて、５０μｌのリポフェクトアミン／Ｏｐｔ
ｉｍｅｍ Ｉ混合物を各ウェルに添加する。ピペットで緩やかに吸い上げたり下
げたりして混合する。室温で１５〜４５分間インキュベートする。約２０分後、
マルチチャンネルピペッターを使用して１５０μｌのＯｐｔｉｍｅｍ Ｉを各ウ
ェルに添加する。コントロールとして、挿入物を欠失するベクターＤＮＡの１つ
のプレートは、トランスフェクションの各セットでトランスフェクトされるべき
である。
【０４８０】 好ましくは、トランスフェクションは、以下の作業をタッグチームを組んで（
ｔａｇ−ｔｅａｍｉｎｇ）行うべきである。タッグチームを組むことによって、
時間に関する労力は半減され、そして細胞にはＰＢＳ上であまり多くの時間を過
ごさせない。まず、Ａさんは、培地を細胞の４つの２４ウェルプレートから吸引
除去し、次いでＢさんが０．５〜１ｍｌのＰＢＳで各ウェルをリンスする。次い
で、Ａさんは、ＰＢＳリンスを吸引除去し、そしてＢさんは、チャンネル１つお
きにチップのついた１２チャンネルピペッターを使用して、２００μｌのＤＮＡ
／リポフェクトアミン／Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ複合体を、まず奇数のウェルに、次
いで偶数のウェルにと、２４ウェルプレート上の各列に添加する。３７℃で６時
間インキュベートする。
ｔａｇ−ｔｅａｍｉｎｇ）行うべきである。タッグチームを組むことによって、
時間に関する労力は半減され、そして細胞にはＰＢＳ上であまり多くの時間を過
ごさせない。まず、Ａさんは、培地を細胞の４つの２４ウェルプレートから吸引
除去し、次いでＢさんが０．５〜１ｍｌのＰＢＳで各ウェルをリンスする。次い
で、Ａさんは、ＰＢＳリンスを吸引除去し、そしてＢさんは、チャンネル１つお
きにチップのついた１２チャンネルピペッターを使用して、２００μｌのＤＮＡ
／リポフェクトアミン／Ｏｐｔｉｍｅｍ Ｉ複合体を、まず奇数のウェルに、次
いで偶数のウェルにと、２４ウェルプレート上の各列に添加する。３７℃で６時
間インキュベートする。
【０４８１】 細胞をインキュベートする間に、１×ペンストレップ（ｐｅｎｓｔｒｅｐ）を
有するＤＭＥＭ中の１％ＢＳＡか、または２ｍＭグルタミンおよび１×ペンスト
レップを含むＣＨＯ−５培地（１１６．６ｍｇ／ＬのＣａＣｌ2（無水物）；０ ．００１３０ｍｇ／Ｌ ＣｕＳＯ4−５Ｈ2Ｏ；０．０５０ｍｇ／ＬのＦｅ（ＮＯ 3 ）3−９Ｈ2Ｏ；０．４１７ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；３１１．８０ｍｇ ／ＬのＫＣｌ；２８．６４ｍｇ／ＬのＭｇＣｌ2；４８．８４ｍｇ／ＬのＭｇＳ Ｏ4；６９９５．５０ｍｇ／ＬのＮａＣｌ；２４００．０ｍｇ／ＬのＮａＨＣＯ3 ；６２．５０ｍｇ／ＬのＮａＨ2ＰＯ4−Ｈ2Ｏ；７１．０２ｍｇ／ＬのＮａ2ＨＰ
Ｏ4；０．４３２０ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；０．００２ｍｇ／Ｌのアラ キドン酸；１．０２２ｍｇ／Ｌのコレステロール；０．０７０ｍｇ／ＬのＤＬ−
α−トコフェロール−アセテート；０．０５２０ｍｇ／Ｌのリノール酸；０．０
１０ｍｇ／Ｌのリノレン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのミリスチン酸；０．０１０ｍ
ｇ／Ｌのオレイン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミトレイン酸（ｐａｌｍｉｔｒ
ｉｃ ａｃｉｄ）；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミチン酸；１００ｍｇ／ＬのＰｌ
ｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８；０．０１０ｍｇ／Ｌのステアリン酸；２．２０ｍｇ／
ＬのＴｗｅｅｎ８０；４５５１ｍｇ／ＬのＤ−グルコース；１３０．８５ｍｇ／
ｍｌのＬ−アラニン；１４７．５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アルギニン−ＨＣｌ；７．
５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン−Ｈ2Ｏ；６．６５ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパ ラギン酸；２９．５６ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；３１．２ ９ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ；７．３５ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン
酸；３６５．０ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン；１８．７５ｍｇ／ｍｌのグリシン
；５２．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン−ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；１０６．９７ｍｇ ／ｍｌのＬ−イソロイシン；１１１．４５ｍｇ／ｍｌのＬ−ロイシン；１６３．
７５ｍｇ／ｍｌのＬ−リジンＨＣｌ；３２．３４ｍｇ／ｍｌのＬ−メチオニン；
６８．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−フェニルアラニン；４０．０ｍｇ／ｍｌのＬ−プロ
リン；２６．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−セリン；１０１．０５ｍｇ／ｍｌのＬ−トレ
オニン；１９．２２ｍｇ／ｍｌのＬ−トリプトファン；９１．７９ｍｇ／ｍｌの
Ｌ−チロシン（Ｔｒｙｒｏｓｉｎｅ）−２Ｎａ−２Ｈ2Ｏ；９９．６５ｍｇ／Ｌ のＬ−バリン；０．００３５ｍｇ／Ｌのビオチン；３．２４ｍｇ／ＬのＤ−Ｃａ
パントテン酸；１１．７８ｍｇ／Ｌの塩化コリン；４．６５ｍｇ／Ｌの葉酸；１
５．６０ｍｇ／Ｌのｉ−イノシトール；３．０２ｍｇ／Ｌのナイアシンアミド；
３．００ｍｇ／ＬのピリドキサールＨＣｌ；０．０３１ｍｇ／Ｌのピリドキシン
ＨＣｌ；０．３１９ｍｇ／Ｌのリボフラビン；３．１７ｍｇ／ＬのチアミンＨＣ
ｌ；０．３６５ｍｇ／Ｌのチミジン；および０．６８０ｍｇ／ＬのビタミンＢ12 ；２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤；２．３９ｍｇ／ＬのＮａヒポキサンチン；０．
１０５ｍｇ／Ｌのリポ酸；０．０８１ｍｇ／Ｌのプトレシンナトリウム−２ＨＣ
ｌ；５５．０ｍｇ／Ｌのピルビン酸ナトリウム；０．００６７ｍｇ／Ｌの亜セレ
ン酸ナトリウム；２０μＭのエタノールアミン；０．１２２ｍｇ／Ｌのクエン酸
第二鉄；４１．７０ｍｇ／Ｌのリノール酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロデ
キストリン；３３．３３ｍｇ／Ｌのオレイン酸と複合体化したメチル−Ｂ−シク
ロデキストリン；ならびに１０ｍｇ／Ｌのレチナールと複合体化したメチル−Ｂ
−シクロデキストリン）のいずれかの適切な培地を調製する。（１０％ＢＳＡス
トック溶液のために、１Ｌ ＤＭＥＭ中にＢＳＡ（８１−０６８−３ Ｂａｙｅ
ｒ） １００ｇを溶解する）。培地を濾過し、そして５０μｌを内毒素アッセイ
のために１５ｍｌポリスチレンコニカル中に収集する。
有するＤＭＥＭ中の１％ＢＳＡか、または２ｍＭグルタミンおよび１×ペンスト
レップを含むＣＨＯ−５培地（１１６．６ｍｇ／ＬのＣａＣｌ2（無水物）；０ ．００１３０ｍｇ／Ｌ ＣｕＳＯ4−５Ｈ2Ｏ；０．０５０ｍｇ／ＬのＦｅ（ＮＯ 3 ）3−９Ｈ2Ｏ；０．４１７ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；３１１．８０ｍｇ ／ＬのＫＣｌ；２８．６４ｍｇ／ＬのＭｇＣｌ2；４８．８４ｍｇ／ＬのＭｇＳ Ｏ4；６９９５．５０ｍｇ／ＬのＮａＣｌ；２４００．０ｍｇ／ＬのＮａＨＣＯ3 ；６２．５０ｍｇ／ＬのＮａＨ2ＰＯ4−Ｈ2Ｏ；７１．０２ｍｇ／ＬのＮａ2ＨＰ
Ｏ4；０．４３２０ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ4−７Ｈ2Ｏ；０．００２ｍｇ／Ｌのアラ キドン酸；１．０２２ｍｇ／Ｌのコレステロール；０．０７０ｍｇ／ＬのＤＬ−
α−トコフェロール−アセテート；０．０５２０ｍｇ／Ｌのリノール酸；０．０
１０ｍｇ／Ｌのリノレン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのミリスチン酸；０．０１０ｍ
ｇ／Ｌのオレイン酸；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミトレイン酸（ｐａｌｍｉｔｒ
ｉｃ ａｃｉｄ）；０．０１０ｍｇ／Ｌのパルミチン酸；１００ｍｇ／ＬのＰｌ
ｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８；０．０１０ｍｇ／Ｌのステアリン酸；２．２０ｍｇ／
ＬのＴｗｅｅｎ８０；４５５１ｍｇ／ＬのＤ−グルコース；１３０．８５ｍｇ／
ｍｌのＬ−アラニン；１４７．５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アルギニン−ＨＣｌ；７．
５０ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパラギン−Ｈ2Ｏ；６．６５ｍｇ／ｍｌのＬ−アスパ ラギン酸；２９．５６ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；３１．２ ９ｍｇ／ｍｌのＬ−シスチン−２ＨＣｌ；７．３５ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン
酸；３６５．０ｍｇ／ｍｌのＬ−グルタミン；１８．７５ｍｇ／ｍｌのグリシン
；５２．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン−ＨＣｌ−Ｈ2Ｏ；１０６．９７ｍｇ ／ｍｌのＬ−イソロイシン；１１１．４５ｍｇ／ｍｌのＬ−ロイシン；１６３．
７５ｍｇ／ｍｌのＬ−リジンＨＣｌ；３２．３４ｍｇ／ｍｌのＬ−メチオニン；
６８．４８ｍｇ／ｍｌのＬ−フェニルアラニン；４０．０ｍｇ／ｍｌのＬ−プロ
リン；２６．２５ｍｇ／ｍｌのＬ−セリン；１０１．０５ｍｇ／ｍｌのＬ−トレ
オニン；１９．２２ｍｇ／ｍｌのＬ−トリプトファン；９１．７９ｍｇ／ｍｌの
Ｌ−チロシン（Ｔｒｙｒｏｓｉｎｅ）−２Ｎａ−２Ｈ2Ｏ；９９．６５ｍｇ／Ｌ のＬ−バリン；０．００３５ｍｇ／Ｌのビオチン；３．２４ｍｇ／ＬのＤ−Ｃａ
パントテン酸；１１．７８ｍｇ／Ｌの塩化コリン；４．６５ｍｇ／Ｌの葉酸；１
５．６０ｍｇ／Ｌのｉ−イノシトール；３．０２ｍｇ／Ｌのナイアシンアミド；
３．００ｍｇ／ＬのピリドキサールＨＣｌ；０．０３１ｍｇ／Ｌのピリドキシン
ＨＣｌ；０．３１９ｍｇ／Ｌのリボフラビン；３．１７ｍｇ／ＬのチアミンＨＣ
ｌ；０．３６５ｍｇ／Ｌのチミジン；および０．６８０ｍｇ／ＬのビタミンＢ12 ；２５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤；２．３９ｍｇ／ＬのＮａヒポキサンチン；０．
１０５ｍｇ／Ｌのリポ酸；０．０８１ｍｇ／Ｌのプトレシンナトリウム−２ＨＣ
ｌ；５５．０ｍｇ／Ｌのピルビン酸ナトリウム；０．００６７ｍｇ／Ｌの亜セレ
ン酸ナトリウム；２０μＭのエタノールアミン；０．１２２ｍｇ／Ｌのクエン酸
第二鉄；４１．７０ｍｇ／Ｌのリノール酸と複合体化したメチル−Ｂ−シクロデ
キストリン；３３．３３ｍｇ／Ｌのオレイン酸と複合体化したメチル−Ｂ−シク
ロデキストリン；ならびに１０ｍｇ／Ｌのレチナールと複合体化したメチル−Ｂ
−シクロデキストリン）のいずれかの適切な培地を調製する。（１０％ＢＳＡス
トック溶液のために、１Ｌ ＤＭＥＭ中にＢＳＡ（８１−０６８−３ Ｂａｙｅ
ｒ） １００ｇを溶解する）。培地を濾過し、そして５０μｌを内毒素アッセイ
のために１５ｍｌポリスチレンコニカル中に収集する。
【０４８２】 トランスフェクション反応を、好ましくはタッグチームを組んでインキュベー
ション時間の終わりに終結させる。Ａさんは、トランスフェクション培地を吸引
除去し、その間Ｂさんは、１．５ｍｌの適切な培地を各ウェルに添加する。使用
された培地に依存して４５または７２時間、３７℃でインキュベートする：１％
ＢＳＡは４５時間、またはＣＨＯ−５は７２時間。
ション時間の終わりに終結させる。Ａさんは、トランスフェクション培地を吸引
除去し、その間Ｂさんは、１．５ｍｌの適切な培地を各ウェルに添加する。使用
された培地に依存して４５または７２時間、３７℃でインキュベートする：１％
ＢＳＡは４５時間、またはＣＨＯ−５は７２時間。
【０４８３】 ４日目に、３００μｌのマルチチャンネルピペッターを使用して、６００μｌ
を１ｍｌの深底ウェルプレート１枚にアリコートし、そして残りの上清を２ｍｌ
の深底ウェルにアリコートする。次いで、各ウェルからの上清を実施例１３〜２
０に記載するアッセイにおいて使用し得る。
を１ｍｌの深底ウェルプレート１枚にアリコートし、そして残りの上清を２ｍｌ
の深底ウェルにアリコートする。次いで、各ウェルからの上清を実施例１３〜２
０に記載するアッセイにおいて使用し得る。
【０４８４】 活性が、上清を使用して以下に記載する任意のアッセイにおいて得られる場合
、この活性は、ポリぺプチドから直接に（例えば、分泌タンパク質として）か、
またはこのポリぺプチドによって誘導される他のタンパク質の発現（これは、次
いで上清中に分泌される）のいずれかに由来することが特に理解される。従って
、本発明はさらに、特定のアッセイにおける活性によって特徴づけられる上清中
のタンパク質を同定する方法を提供する。
、この活性は、ポリぺプチドから直接に（例えば、分泌タンパク質として）か、
またはこのポリぺプチドによって誘導される他のタンパク質の発現（これは、次
いで上清中に分泌される）のいずれかに由来することが特に理解される。従って
、本発明はさらに、特定のアッセイにおける活性によって特徴づけられる上清中
のタンパク質を同定する方法を提供する。
【０４８５】 （実施例１２：ＧＡＳレポーター構築物の構築） 細胞の分化および増殖に関与する１つのシグナル伝達経路は、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路と呼ばれる。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化タンパク質は、多くの遺伝子
のプロモーターに位置する、γ活性化部位「ＧＡＳ」エレメントまたはインター
フェロン感受性応答エレメント（「ＩＳＲＥ」）に結合する。これらのエレメン
トに対するタンパク質の結合は、関連する遺伝子の発現を変化させる。
Ｔ経路と呼ばれる。Ｊａｋ−ＳＴＡＴ経路の活性化タンパク質は、多くの遺伝子
のプロモーターに位置する、γ活性化部位「ＧＡＳ」エレメントまたはインター
フェロン感受性応答エレメント（「ＩＳＲＥ」）に結合する。これらのエレメン
トに対するタンパク質の結合は、関連する遺伝子の発現を変化させる。
【０４８６】 ＧＡＳおよびＩＳＲＥエレメントは、転写のシグナルトランスデューサーおよ
びアクチベーター、すなわち「ＳＴＡＴ」と呼ばれる転写因子のクラスによって
認識される。ＳＴＡＴファミリーには６つのメンバーが存在する。Ｓｔａｔ１お
よびＳｔａｔ３は、Ｓｔａｔ２と同様に（ＩＦＮαに対する応答が広範であるよ
うに）、多くの細胞型において存在する。Ｓｔａｔ４は、より限定されており、
そして多くの細胞型には存在しないが、ＩＬ−１２での処理後のＴヘルパークラ
スＩ細胞に見出されている。Ｓｔａｔ５は、元々は乳房成長因子と呼ばれたが、
骨髄細胞を含む他の細胞においてより高い濃度で見出されている。それは、多く
のサイトカインによって組織培養細胞において活性化され得る。
びアクチベーター、すなわち「ＳＴＡＴ」と呼ばれる転写因子のクラスによって
認識される。ＳＴＡＴファミリーには６つのメンバーが存在する。Ｓｔａｔ１お
よびＳｔａｔ３は、Ｓｔａｔ２と同様に（ＩＦＮαに対する応答が広範であるよ
うに）、多くの細胞型において存在する。Ｓｔａｔ４は、より限定されており、
そして多くの細胞型には存在しないが、ＩＬ−１２での処理後のＴヘルパークラ
スＩ細胞に見出されている。Ｓｔａｔ５は、元々は乳房成長因子と呼ばれたが、
骨髄細胞を含む他の細胞においてより高い濃度で見出されている。それは、多く
のサイトカインによって組織培養細胞において活性化され得る。
【０４８７】 ＳＴＡＴは活性化されて、Ｊａｎｕｓ Ｋｉｎａｓｅ（「Ｊａｋ」）ファミリ
ーとして知られる１セットのキナーゼによるチロシンリン酸化に際して細胞質か
ら核へ移動する。Ｊａｋは、可溶性のチロシンキナーゼの独特のファミリーを表
わし、そしてＴｙｋ２、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、およびＪａｋ３を含む。これらの
キナーゼは、有意な配列類似性を示し、そして一般には休止細胞において触媒的
に不活性である。
ーとして知られる１セットのキナーゼによるチロシンリン酸化に際して細胞質か
ら核へ移動する。Ｊａｋは、可溶性のチロシンキナーゼの独特のファミリーを表
わし、そしてＴｙｋ２、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、およびＪａｋ３を含む。これらの
キナーゼは、有意な配列類似性を示し、そして一般には休止細胞において触媒的
に不活性である。
【０４８８】 Ｊａｋは、以下の表によって要約されるように広範なレセプターによって活性
化される。（ＳｃｈｉｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６４：６２１−５１（１９９５）による総説から改変。）Ｊ
ａｋを活性化し得るサイトカインレセプターファミリーは、２つの群に分けられ
る：（ａ）クラス１は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、
ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、Ｅｐｏ、ＰＲＬ、ＧＨ、Ｇ−
ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、およびトロンボポエチンについての
レセプターを含み；そして（ｂ）クラス２は、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、および
ＩＬ−１０を含む。クラス１レセプターは、保存されたシステインモチーフ（４
つの保存されたシステインおよび１つのトリプトファンのセット）、およびＷＳ
ＸＷＳモチーフ（Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘｘｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（配列番号２）をコ
ードする膜近接領域）を共有する。
化される。（ＳｃｈｉｄｌｅｒおよびＤａｒｎｅｌｌ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６４：６２１−５１（１９９５）による総説から改変。）Ｊ
ａｋを活性化し得るサイトカインレセプターファミリーは、２つの群に分けられ
る：（ａ）クラス１は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、
ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、Ｅｐｏ、ＰＲＬ、ＧＨ、Ｇ−
ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、およびトロンボポエチンについての
レセプターを含み；そして（ｂ）クラス２は、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、および
ＩＬ−１０を含む。クラス１レセプターは、保存されたシステインモチーフ（４
つの保存されたシステインおよび１つのトリプトファンのセット）、およびＷＳ
ＸＷＳモチーフ（Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｘｘｘ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ（配列番号２）をコ
ードする膜近接領域）を共有する。
【０４８９】 従って、リガンドのレセプターへの結合の際に、Ｊａｋは活性化され、これは
次いでＳＴＡＴを活性化し、これは、次いで移動し、そしてＧＡＳエレメントに
結合する。この全プロセスは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に包含される
。
次いでＳＴＡＴを活性化し、これは、次いで移動し、そしてＧＡＳエレメントに
結合する。この全プロセスは、Ｊａｋ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路に包含される
。
【０４９０】 それゆえ、ＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントの結合によって反映されるＪａｋ
−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示す
ために使用され得る。例えば、増殖因子およびサイトカインは、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路を活性化することが知られている。（以下の表を参照のこと）。従って、
レポーター分子に連結したＧＡＳエレメントを使用することにより、Ｊａｋ−Ｓ
ＴＡＴ経路のアクチベーターが同定され得る。
−ＳＴＡＴ経路の活性化は、細胞の増殖および分化に関与するタンパク質を示す
ために使用され得る。例えば、増殖因子およびサイトカインは、Ｊａｋ−ＳＴＡ
Ｔ経路を活性化することが知られている。（以下の表を参照のこと）。従って、
レポーター分子に連結したＧＡＳエレメントを使用することにより、Ｊａｋ−Ｓ
ＴＡＴ経路のアクチベーターが同定され得る。
【０４９１】
【表３】 実施例１３〜１４に記載される生物学的アッセイにおいて使用されるプロモー
ターエレメントを含む合成ＧＡＳを構築するために、ＰＣＲに基づいたストラテ
ジーを用いてＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーター配列を産生する。５’プライマーは
、ＩＲＦ１プロモーターにおいて見出され、そして一定の範囲のサイトカインで
の誘導の際にＳＴＡＴに結合することが以前に証明されたＧＡＳ結合部位の４つ
の直列のコピーを含むが（Ｒｏｔｈｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １： ４５７
−４６８ （１９９４））、他のＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントを代わりに使
用し得る。５’プライマーはまた、ＳＶ４０初期プロモーター配列に対して相補
的な１８ｂｐの配列も含み、そしてＸｈｏＩ部位に隣接する。５’プライマーの
配列は以下である：
ターエレメントを含む合成ＧＡＳを構築するために、ＰＣＲに基づいたストラテ
ジーを用いてＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーター配列を産生する。５’プライマーは
、ＩＲＦ１プロモーターにおいて見出され、そして一定の範囲のサイトカインで
の誘導の際にＳＴＡＴに結合することが以前に証明されたＧＡＳ結合部位の４つ
の直列のコピーを含むが（Ｒｏｔｈｍａｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １： ４５７
−４６８ （１９９４））、他のＧＡＳまたはＩＳＲＥエレメントを代わりに使
用し得る。５’プライマーはまた、ＳＶ４０初期プロモーター配列に対して相補
的な１８ｂｐの配列も含み、そしてＸｈｏＩ部位に隣接する。５’プライマーの
配列は以下である：
【０４９２】
【化９】 下流プライマーはＳＶ４０プロモーターに対して相補的であり、Ｈｉｎｄ Ｉ
ＩＩ部位に隣接する：５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴ
ＡＧＧＣ：３’（配列番号４）。
ＩＩ部位に隣接する：５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴ
ＡＧＧＣ：３’（配列番号４）。
【０４９３】 ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したＢ−ｇａｌ：プロモータープラ
スミド中に存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを用いて実施する。得
られたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩ／Ｈｉｎｄ ＩＩＩを用いて消化し、そし
てＢＬＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。正方向およ
び逆方向のプライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むこと
を確認する：
スミド中に存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを用いて実施する。得
られたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩ／Ｈｉｎｄ ＩＩＩを用いて消化し、そし
てＢＬＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。正方向およ
び逆方向のプライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むこと
を確認する：
【０４９４】
【化１０】 次に、ＳＶ４０プロモーターに結合したこのＧＡＳプロモーターエレメントを
用いて、ＧＡＳ：ＳＥＡＰ２レポーター構築物を操作する。ここで、レポーター
分子は、分泌アルカリホスファターゼ、すなわち「ＳＥＡＰ」である。しかし、
明らかに、この実施例または他の実施例のいずれにおいても、任意のレポーター
分子が、ＳＥＡＰの代わりとなり得る。ＳＥＡＰの代わりに使用され得る周知の
レポーター分子としては、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（
ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、
グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、または抗体により検出可能な任意のタンパ
ク質が挙げられる。
用いて、ＧＡＳ：ＳＥＡＰ２レポーター構築物を操作する。ここで、レポーター
分子は、分泌アルカリホスファターゼ、すなわち「ＳＥＡＰ」である。しかし、
明らかに、この実施例または他の実施例のいずれにおいても、任意のレポーター
分子が、ＳＥＡＰの代わりとなり得る。ＳＥＡＰの代わりに使用され得る周知の
レポーター分子としては、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（
ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、
グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、または抗体により検出可能な任意のタンパ
ク質が挙げられる。
【０４９５】 合成ＧＡＳ−ＳＶ４０プロモーターエレメントと確認された上記の配列を、Ｇ
ＡＳ−ＳＥＡＰベクターを作製するために、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩを用
いて、ＳＶ４０プロモーターを、増幅したＧＡＳ：ＳＶ４０プロモーターエレメ
ントで効率的に置換し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐＳＥＡＰ−プロモータ
ーベクターにサブクローニングする。しかし、このベクターはネオマイシン耐性
遺伝子を含まず、それゆえ、哺乳動物の発現系には好ましくない。
ＡＳ−ＳＥＡＰベクターを作製するために、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩを用
いて、ＳＶ４０プロモーターを、増幅したＧＡＳ：ＳＶ４０プロモーターエレメ
ントで効率的に置換し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐＳＥＡＰ−プロモータ
ーベクターにサブクローニングする。しかし、このベクターはネオマイシン耐性
遺伝子を含まず、それゆえ、哺乳動物の発現系には好ましくない。
【０４９６】 従って、ＧＡＳ−ＳＥＡＰレポーターを発現する哺乳動物の安定な細胞株を作
製するために、ＧＡＳ−ＳＥＡＰカセットを、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを用いて
ＧＡＳ−ＳＥＡＰベクターから取り出し、そしてＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベク
ターを作製するために、マルチクローニング部位におけるこれらの制限部位を用
いて、ネオマイシン耐性遺伝子を含むバックボーンベクター（例えば、ｐＧＦＰ
−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ））に挿入する。一旦、このベクターを哺乳動物細胞に
トランスフェクトすれば、次いで、このベクターは、実施例１３〜１４に記載さ
れるようにＧＡＳ結合についてのレポーター分子として使用され得る。
製するために、ＧＡＳ−ＳＥＡＰカセットを、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを用いて
ＧＡＳ−ＳＥＡＰベクターから取り出し、そしてＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベク
ターを作製するために、マルチクローニング部位におけるこれらの制限部位を用
いて、ネオマイシン耐性遺伝子を含むバックボーンベクター（例えば、ｐＧＦＰ
−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ））に挿入する。一旦、このベクターを哺乳動物細胞に
トランスフェクトすれば、次いで、このベクターは、実施例１３〜１４に記載さ
れるようにＧＡＳ結合についてのレポーター分子として使用され得る。
【０４９７】 他の構築物を、上記の記載を使用し、そしてＧＡＳを異なるプロモーター配列
で置換して、作製し得る。例えば、ＮＦＫ−ＢおよびＥＧＲプロモーター配列を
含むレポーター分子の構築を、実施例１５および１６に記載する。しかし、多く
の他のプロモーターをこれらの実施例に記載のプロトコルを使用して置換し得る
。例えば、ＳＲＥ、ＩＬ−２、ＮＦＡＴ、またはオステオカルシンのプロモータ
ーを単独で、または組み合わせて（例えば、ＧＡＳ／ＮＦ−ＫＢ／ＥＧＲ、ＧＡ
Ｓ／ＮＦ−ＫＢ、Ｉｌ−２／ＮＦＡＴ、またはＮＦ−ＫＢ／ＧＡＳ）置換し得る
。同様に、他の細胞株（例えば、ＨＥＬＡ（上皮細胞）、ＨＵＶＥＣ（内皮細胞
）、Ｒｅｈ（Ｂ細胞）、Ｓａｏｓ−２（骨芽細胞）、ＨＵＶＡＣ（大動脈細胞）
、または心筋細胞）を、レポーター構築物の活性を試験するために使用し得る。
で置換して、作製し得る。例えば、ＮＦＫ−ＢおよびＥＧＲプロモーター配列を
含むレポーター分子の構築を、実施例１５および１６に記載する。しかし、多く
の他のプロモーターをこれらの実施例に記載のプロトコルを使用して置換し得る
。例えば、ＳＲＥ、ＩＬ−２、ＮＦＡＴ、またはオステオカルシンのプロモータ
ーを単独で、または組み合わせて（例えば、ＧＡＳ／ＮＦ−ＫＢ／ＥＧＲ、ＧＡ
Ｓ／ＮＦ−ＫＢ、Ｉｌ−２／ＮＦＡＴ、またはＮＦ−ＫＢ／ＧＡＳ）置換し得る
。同様に、他の細胞株（例えば、ＨＥＬＡ（上皮細胞）、ＨＵＶＥＣ（内皮細胞
）、Ｒｅｈ（Ｂ細胞）、Ｓａｏｓ−２（骨芽細胞）、ＨＵＶＡＣ（大動脈細胞）
、または心筋細胞）を、レポーター構築物の活性を試験するために使用し得る。
【０４９８】 （実施例１３：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ） 以下のプロトコルを、例えば、Ｔ細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およ
びサイトカインのような因子を同定することによりＴ細胞の活性を評価するため
に使用する。Ｔ細胞の活性を実施例１２で作製したＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構
築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊａｋｓ−
ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化する能力を示す。このアッセイに使用した
Ｔ細胞は、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＴＩＢ−１５２）であるが
、Ｍｏｌｔ−３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５５２）およびＭｏｌｔ−４
細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８２）細胞もまた使用し得る。
びサイトカインのような因子を同定することによりＴ細胞の活性を評価するため
に使用する。Ｔ細胞の活性を実施例１２で作製したＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構
築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊａｋｓ−
ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化する能力を示す。このアッセイに使用した
Ｔ細胞は、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＴＩＢ−１５２）であるが
、Ｍｏｌｔ−３細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５５２）およびＭｏｌｔ−４
細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−１５８２）細胞もまた使用し得る。
【０４９９】 Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞は、リンパ芽球性ＣＤ４＋ Ｔｈ１ヘルパー細胞である
。安定な細胞株を作製するために、およそ２００万のＪｕｒｋａｔ細胞をＤＭＲ
ＩＥ−Ｃ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＧＡＳ−ＳＥＡＰ
／ｎｅｏベクターでトランスフェクト（以下に記載のトランスフェクション手順
）する。トランスフェクトした細胞を、およそ２０，０００細胞／ウェルの密度
で播種し、そして１ｍｇ／ｍｌのジェネティシン（ｇｅｎｔｉｃｉｎ）に対して
耐性であるトランスフェクト体を選択する。耐性コロニーを増殖させ、次いで、
漸増する濃度のインターフェロンγに対するそれらの応答について試験する。選
択したクローンの用量応答を示す。
。安定な細胞株を作製するために、およそ２００万のＪｕｒｋａｔ細胞をＤＭＲ
ＩＥ−Ｃ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、ＧＡＳ−ＳＥＡＰ
／ｎｅｏベクターでトランスフェクト（以下に記載のトランスフェクション手順
）する。トランスフェクトした細胞を、およそ２０，０００細胞／ウェルの密度
で播種し、そして１ｍｇ／ｍｌのジェネティシン（ｇｅｎｔｉｃｉｎ）に対して
耐性であるトランスフェクト体を選択する。耐性コロニーを増殖させ、次いで、
漸増する濃度のインターフェロンγに対するそれらの応答について試験する。選
択したクローンの用量応答を示す。
【０５００】 詳細には、以下のプロトコルにより、２００μｌの細胞を含む７５のウェルに
ついて十分な細胞を得る。従って、複数の９６ウェルプレートについて十分な細
胞を産生するために、スケールアップするか、または複数で実施するかのいずれ
かである。Ｊｕｒｋａｔ細胞をＲＰＭＩ＋１０％血清および１％のＰｅｎ−Ｓｔ
ｒｅｐ中で維持する。Ｔ２５フラスコ中で２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１０μｇのプラスミドＤＮＡとを組み合わ
せる。５０μｌのＤＭＲＩＥ−Ｃを含む２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭを添加し
、そして、室温で１５〜４５分間インキュベートする。
ついて十分な細胞を得る。従って、複数の９６ウェルプレートについて十分な細
胞を産生するために、スケールアップするか、または複数で実施するかのいずれ
かである。Ｊｕｒｋａｔ細胞をＲＰＭＩ＋１０％血清および１％のＰｅｎ−Ｓｔ
ｒｅｐ中で維持する。Ｔ２５フラスコ中で２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と１０μｇのプラスミドＤＮＡとを組み合わ
せる。５０μｌのＤＭＲＩＥ−Ｃを含む２．５ｍｌのＯＰＴＩ−ＭＥＭを添加し
、そして、室温で１５〜４５分間インキュベートする。
【０５０１】 インキュベート時間の間、細胞濃度をカウントし、必要な細胞数（トランスフ
ェクションあたり１０7個）をスピンダウンし、そして最終濃度が１０7細胞／ｍ
ｌとなるようにＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で再懸濁する。次いで、１ｍｌのＯＰＴＩ−
ＭＥＭ中の１×１０7個の細胞をＴ２５フラスコに加え、そして３７℃で６時間 インキュベートする。インキュベーションの後、１０ｍｌのＲＰＭＩ＋１５％の
血清を添加する。
ェクションあたり１０7個）をスピンダウンし、そして最終濃度が１０7細胞／ｍ
ｌとなるようにＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で再懸濁する。次いで、１ｍｌのＯＰＴＩ−
ＭＥＭ中の１×１０7個の細胞をＴ２５フラスコに加え、そして３７℃で６時間 インキュベートする。インキュベーションの後、１０ｍｌのＲＰＭＩ＋１５％の
血清を添加する。
【０５０２】 Ｊｕｒｋａｔ：ＧＡＳ−ＳＥＡＰ安定レポーター株をＲＰＭＩ＋１０％ 血清
、１ｍｇ／ｍｌジェネティシン、および１％のＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ中で維持する
。これらの細胞を実施例１１に記載されるプロトコルにより産生されるようなポ
リペプチドを含む上清で処理する。
、１ｍｇ／ｍｌジェネティシン、および１％のＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ中で維持する
。これらの細胞を実施例１１に記載されるプロトコルにより産生されるようなポ
リペプチドを含む上清で処理する。
【０５０３】 上清での処理日に細胞を洗浄すべきであり、そして１ｍｌあたり５００，００
０個の密度となるように新鮮なＲＰＭＩ＋１０％血清中に再懸濁するべきである
。必要な細胞の正確な数は、スクリーニングされる上清の数に依存する。１枚の
９６ウェルプレートについて、およそ１０００万個の細胞（１０枚のプレートに
ついて１億個の細胞）を必要とする。
０個の密度となるように新鮮なＲＰＭＩ＋１０％血清中に再懸濁するべきである
。必要な細胞の正確な数は、スクリーニングされる上清の数に依存する。１枚の
９６ウェルプレートについて、およそ１０００万個の細胞（１０枚のプレートに
ついて１億個の細胞）を必要とする。
【０５０４】 細胞を、１２チャンネルのピペットを用いて９６ウェルのディッシュに分与す
るために、三角のリザーバーボートに細胞を移す。２００μｌの細胞を、１２チ
ャンネルのピペットを用いて、それぞれのウェルに移す（従って、ウェル当たり
１００，０００個の細胞を添加する）。
るために、三角のリザーバーボートに細胞を移す。２００μｌの細胞を、１２チ
ャンネルのピペットを用いて、それぞれのウェルに移す（従って、ウェル当たり
１００，０００個の細胞を添加する）。
【０５０５】 全てのプレートに播種した後、５０μｌの上清を、１２チャンネルピペットを
用いて、上清を含む９６ウェルプレートから各ウェルに直接的に移す。さらに、
外来性のインターフェロンγの用量（０．１、１．０、１０ｎｇ）を、ウェルＨ
９、ウェルＨ１０、およびウェルＨ１１に添加し、アッセイについてのさらなる
陽性コントロールとして供する。
用いて、上清を含む９６ウェルプレートから各ウェルに直接的に移す。さらに、
外来性のインターフェロンγの用量（０．１、１．０、１０ｎｇ）を、ウェルＨ
９、ウェルＨ１０、およびウェルＨ１１に添加し、アッセイについてのさらなる
陽性コントロールとして供する。
【０５０６】 上清で処理したＪｕｒｋａｔ細胞を含む９６ウェルディッシュをインキュベー
ターに４８時間置く（注：この時間は４８〜７２時間の間で変更可能である）。
次いで、各ウェルから３５μｌのサンプルを１２チャンネルのピペットを用いて
、不透明な９６ウェルプレートに移す。不透明なプレートを（セロファンのカバ
ーを用いて）覆うべきであり、そして実施例１７に従うＳＥＡＰアッセイを行う
まで、−２０℃で保存する。残存する処理した細胞を含むプレートを４℃に置き
、そして、所望するならば、特定のウェル上でのアッセイを繰り返すための物質
の供給源として供する。
ターに４８時間置く（注：この時間は４８〜７２時間の間で変更可能である）。
次いで、各ウェルから３５μｌのサンプルを１２チャンネルのピペットを用いて
、不透明な９６ウェルプレートに移す。不透明なプレートを（セロファンのカバ
ーを用いて）覆うべきであり、そして実施例１７に従うＳＥＡＰアッセイを行う
まで、−２０℃で保存する。残存する処理した細胞を含むプレートを４℃に置き
、そして、所望するならば、特定のウェル上でのアッセイを繰り返すための物質
の供給源として供する。
【０５０７】 陽性コントロールとして、１００ユニット／ｍｌのインターフェロンγを使用
し得、これは、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を活性化することが公知である。代表的に
は、３０倍を超える誘導が、陽性コントロールのウェルにおいて観察される。
し得、これは、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を活性化することが公知である。代表的に
は、３０倍を超える誘導が、陽性コントロールのウェルにおいて観察される。
【０５０８】 上記のプロトコルが、一過性にトランスフェクトした細胞および安定にトラン
スフェクトした細胞の両方の生成に用いられ得ることは当業者にとって明らかで
ある。
スフェクトした細胞の両方の生成に用いられ得ることは当業者にとって明らかで
ある。
【０５０９】 （実施例１４：骨髄性の活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ） 以下のプロトコルを、骨髄性細胞を増殖または分化させ得る増殖因子およびサ
イトカインのような因子を同定することにより骨髄性の活性を評価するために使
用する。骨髄性細胞の活性を実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／
Ｎｅｏ構築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊ
ａｋｓ−ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化させる能力を示す。このアッセイ
に使用した骨髄性細胞は、Ｕ９３７、前単球（ｐｒｅ−ｍｏｎｏｃｙｔｅ）細胞
株であるが、ＴＦ−１、ＨＬ６０、またはＫＧ１も使用し得る。
イトカインのような因子を同定することにより骨髄性の活性を評価するために使
用する。骨髄性細胞の活性を実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／
Ｎｅｏ構築物を用いて評価する。従って、ＳＥＡＰ活性を増加させる因子は、Ｊ
ａｋｓ−ＳＴＡＴＳシグナル伝達経路を活性化させる能力を示す。このアッセイ
に使用した骨髄性細胞は、Ｕ９３７、前単球（ｐｒｅ−ｍｏｎｏｃｙｔｅ）細胞
株であるが、ＴＦ−１、ＨＬ６０、またはＫＧ１も使用し得る。
【０５１０】 Ｕ９３７細胞を、実施例１２において産生されたＧＡＳ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構
築物で、一過性にトランスフェクトするために、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ法（
Ｋｈａｒｂａｎｄａら、１９９４，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｉｏｎ， ５： ２５９−２６５）を用いる。最初に、２×１０ｅ 7 個のＵ９３７細胞を回収し、そしてＰＢＳで洗浄する。Ｕ９３７細胞を、通常 、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン
を補充した１０％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ １６４０培
地中で増殖させる。
築物で、一過性にトランスフェクトするために、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ法（
Ｋｈａｒｂａｎｄａら、１９９４，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒ
ｅｎｔｉａｔｉｏｎ， ５： ２５９−２６５）を用いる。最初に、２×１０ｅ 7 個のＵ９３７細胞を回収し、そしてＰＢＳで洗浄する。Ｕ９３７細胞を、通常 、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン
を補充した１０％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ １６４０培
地中で増殖させる。
【０５１１】 次に、０．５ｍｇ／ｍｌ ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔｒａｎ、８μｇのＧＡＳ−ＳＥ
ＡＰ２プラスミドＤＮＡ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、３７５μＭ
Ｎａ2ＨＰＯ4・７Ｈ2Ｏ、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、および６７５μＭ ＣａＣｌ2 を含む１ｍｌの２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．４）緩衝液に細胞を懸
濁する。３７℃で４５分間インキュベートする。
ＡＰ２プラスミドＤＮＡ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、３７５μＭ
Ｎａ2ＨＰＯ4・７Ｈ2Ｏ、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、および６７５μＭ ＣａＣｌ2 を含む１ｍｌの２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７．４）緩衝液に細胞を懸
濁する。３７℃で４５分間インキュベートする。
【０５１２】 １０％ ＦＢＳを含むＲＰＭＩ １６４０培地で細胞を洗浄し、次いで、１０
ｍｌの完全培地に再懸濁し、そして３７℃で３６時間インキュベートする。
ｍｌの完全培地に再懸濁し、そして３７℃で３６時間インキュベートする。
【０５１３】 ＧＡＳ−ＳＥＡＰ／Ｕ９３７安定細胞を、４００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細
胞を増殖させることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を使用して、慣用的に
増殖させるが、１〜２ヶ月毎に細胞を二継代の間、４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８
中で再増殖させるべきである。
胞を増殖させることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を使用して、慣用的に
増殖させるが、１〜２ヶ月毎に細胞を二継代の間、４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８
中で再増殖させるべきである。
【０５１４】 これらの細胞を１×１０8個の細胞を回収すること（これは１０枚の９６ウェ ルプレートアッセイのために十分である）により試験し、そしてＰＢＳで洗浄す
る。上記の２００ｍｌの増殖培地中に、５×１０5細胞／ｍｌの最終密度で細胞 を懸濁する。９６ウェルプレートにおいてウェルあたり２００μｌの細胞をプレ
ートする（すなわち、１×１０5細胞／ウェル）。
る。上記の２００ｍｌの増殖培地中に、５×１０5細胞／ｍｌの最終密度で細胞 を懸濁する。９６ウェルプレートにおいてウェルあたり２００μｌの細胞をプレ
ートする（すなわち、１×１０5細胞／ウェル）。
【０５１５】 実施例１１に記載されるプロトコルにより調製された上清を５０μｌ添加する
。３７℃で４８〜７２時間インキュベートする。陽性コントロールとして、１０
０単位／ｍｌのインターフェロンγを使用し得、これはＵ９３７細胞を活性化さ
せることが公知である。代表的には、３０倍を超える誘導が、陽性コントロール
ウェルにおいて観察される。ＳＥＡＰは、実施例１７に記載のプロトコルに従っ
て上清をアッセイする。
。３７℃で４８〜７２時間インキュベートする。陽性コントロールとして、１０
０単位／ｍｌのインターフェロンγを使用し得、これはＵ９３７細胞を活性化さ
せることが公知である。代表的には、３０倍を超える誘導が、陽性コントロール
ウェルにおいて観察される。ＳＥＡＰは、実施例１７に記載のプロトコルに従っ
て上清をアッセイする。
【０５１６】 （実施例１５：ニューロン活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ
） 細胞が分化および増殖を経る場合、一群の遺伝子が多くの異なるシグナル伝達
経路を介して活性化される。これらの遺伝子の１つであるＥＧＲ１（初期増殖応
答遺伝子１）は、活性化時に種々の組織および細胞型において誘導される。ＥＧ
Ｒ１のプロモーターはこのような誘導を担う。レポーター分子に結合したＥＧＲ
１プロモーターを使用して、細胞の活性化を評価し得る。
） 細胞が分化および増殖を経る場合、一群の遺伝子が多くの異なるシグナル伝達
経路を介して活性化される。これらの遺伝子の１つであるＥＧＲ１（初期増殖応
答遺伝子１）は、活性化時に種々の組織および細胞型において誘導される。ＥＧ
Ｒ１のプロモーターはこのような誘導を担う。レポーター分子に結合したＥＧＲ
１プロモーターを使用して、細胞の活性化を評価し得る。
【０５１７】 詳細には、以下のプロトコルをＰＣ１２細胞株におけるニューロン活性を評価
するために使用する。ＰＣ１２細胞（ラット褐色細胞腫（ｐｈｅｎｏｃｈｒｏｍ
ｏｃｙｔｏｍａ ｃｅｌｌ））は、多くのマイトジェン（例えば、ＴＰＡ（テト
ラデカノイルホルボールアセテート）、ＮＧＦ（神経成長因子）、およびＥＧＦ
（上皮増殖因子））での活性化により増殖および／または分化することが公知で
ある。この処理の間にＥＧＲ１遺伝子発現を活性化する。従って、ＳＥＡＰレポ
ーターに結合したＥＧＲプロモーターを含む構築物でＰＣ１２細胞を安定にトラ
ンスフェクトすることにより、ＰＣ１２細胞の活性化を評価し得る。
するために使用する。ＰＣ１２細胞（ラット褐色細胞腫（ｐｈｅｎｏｃｈｒｏｍ
ｏｃｙｔｏｍａ ｃｅｌｌ））は、多くのマイトジェン（例えば、ＴＰＡ（テト
ラデカノイルホルボールアセテート）、ＮＧＦ（神経成長因子）、およびＥＧＦ
（上皮増殖因子））での活性化により増殖および／または分化することが公知で
ある。この処理の間にＥＧＲ１遺伝子発現を活性化する。従って、ＳＥＡＰレポ
ーターに結合したＥＧＲプロモーターを含む構築物でＰＣ１２細胞を安定にトラ
ンスフェクトすることにより、ＰＣ１２細胞の活性化を評価し得る。
【０５１８】 ＥＧＲ／ＳＥＡＰレポーター構築物を以下のプロトコルにより組み立て得る。
ＥＧＲ−１プロモーター配列（−６３３〜＋１）（Ｓａｋａｍｏｔｏ Ｋら、Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ ６： ８６７−８７１（１９９１））を以下のプライマーを用
いて、ヒトゲノムＤＮＡからＰＣＲ増幅し得る：
ＥＧＲ−１プロモーター配列（−６３３〜＋１）（Ｓａｋａｍｏｔｏ Ｋら、Ｏ
ｎｃｏｇｅｎｅ ６： ８６７−８７１（１９９１））を以下のプライマーを用
いて、ヒトゲノムＤＮＡからＰＣＲ増幅し得る：
【０５１９】
【化１１】 次いで、実施例１２において作製したＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを使
用して、ＥＧＲ１増幅産物をこのベクターに挿入し得る。制限酵素ＸｈｏＩ／Ｈ
ｉｎｄＩＩＩを使用してＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを線状化し、ＧＡＳ
／ＳＶ４０スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）を取り除く。これらと同じ酵素を用
いて、ＥＧＲ１増幅産物を制限処理する。ベクターとＥＧＲ１プロモーターとを
連結する。
用して、ＥＧＲ１増幅産物をこのベクターに挿入し得る。制限酵素ＸｈｏＩ／Ｈ
ｉｎｄＩＩＩを使用してＧＡＳ：ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを線状化し、ＧＡＳ
／ＳＶ４０スタッファー（ｓｔｕｆｆｅｒ）を取り除く。これらと同じ酵素を用
いて、ＥＧＲ１増幅産物を制限処理する。ベクターとＥＧＲ１プロモーターとを
連結する。
【０５２０】 細胞培養のための９６ウェルプレートを調製するために、コーティング溶液（
コラーゲンＩ型（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ． カタログ番号０
８−１１５）の３０％エタノール（滅菌濾過）での１：３０希釈）を１つの１０
ｃｍプレートあたり２ｍｌ、または９６ウェルプレートのウェルあたり５０ｍｌ
添加し、そして２時間風乾させる。
コラーゲンＩ型（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ． カタログ番号０
８−１１５）の３０％エタノール（滅菌濾過）での１：３０希釈）を１つの１０
ｃｍプレートあたり２ｍｌ、または９６ウェルプレートのウェルあたり５０ｍｌ
添加し、そして２時間風乾させる。
【０５２１】 ＰＣ１２細胞を、予めコートした１０ｃｍ組織培養ディッシュ上で、ペニシリ
ン（１００単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充
した、１０％ウマ血清（ＪＲＨ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ、カタログ番号１２４
４９−７８Ｐ）、５％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４
０培地（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で慣用的に増殖させる。１つから４つ
への分割を３〜４日毎に行う。細胞を掻き取ることによりプレートから取り出し
、そして１５回より多く上下にピペッティングして再懸濁する。
ン（１００単位／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補充
した、１０％ウマ血清（ＪＲＨ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ、カタログ番号１２４
４９−７８Ｐ）、５％熱非働化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４
０培地（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ）中で慣用的に増殖させる。１つから４つ
への分割を３〜４日毎に行う。細胞を掻き取ることによりプレートから取り出し
、そして１５回より多く上下にピペッティングして再懸濁する。
【０５２２】 ＥＧＲ／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏ構築物を、実施例１１に記載のＬｉｐｏｆｅｃｔａ
ｍｉｎｅプロトコルを使用して、ＰＣ１２にトランスフェクトする。ＥＧＲ−Ｓ
ＥＡＰ／ＰＣ１２安定細胞を、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細胞を増殖させ
ることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を慣用的増殖のために使用するが、
１〜２ヶ月毎に、細胞を２継代の間、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で再増殖さ
せるべきである。
ｍｉｎｅプロトコルを使用して、ＰＣ１２にトランスフェクトする。ＥＧＲ−Ｓ
ＥＡＰ／ＰＣ１２安定細胞を、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で細胞を増殖させ
ることにより得る。Ｇ４１８を含まない培地を慣用的増殖のために使用するが、
１〜２ヶ月毎に、細胞を２継代の間、３００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で再増殖さ
せるべきである。
【０５２３】 ニューロン活性をアッセイするために、およそ７０〜８０％コンフルエントで
ある細胞を有する１０ｃｍプレートを、古い培地を除去することによりスクリー
ニングする。細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を用いて１回洗浄する。
次いで、細胞を低血清培地（抗生物質とともに１％ウマ血清および０．５％ Ｆ
ＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０）中で一晩、飢餓させる。
ある細胞を有する１０ｃｍプレートを、古い培地を除去することによりスクリー
ニングする。細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）を用いて１回洗浄する。
次いで、細胞を低血清培地（抗生物質とともに１％ウマ血清および０．５％ Ｆ
ＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０）中で一晩、飢餓させる。
【０５２４】 翌朝、培地を除去し、そしてＰＢＳで細胞を洗浄する。プレートから細胞を掻
き取り、細胞を２ｍｌの低血清培地中でよく懸濁する。細胞数をカウントし、そ
してより低血清の培地に添加し、５×１０5細胞／ｍｌの最終細胞密度に到達さ せる。
き取り、細胞を２ｍｌの低血清培地中でよく懸濁する。細胞数をカウントし、そ
してより低血清の培地に添加し、５×１０5細胞／ｍｌの最終細胞密度に到達さ せる。
【０５２５】 ２００μｌの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルに添加する（１×１
０5細胞／ウェルに等しい）。実施例１１により産生された５０μｌの上清を、 ３７℃で４８〜７２時間加える。陽性コントロールとして、ＥＧＲを介してＰＣ
１２細胞を活性化することが公知の成長因子（例えば、５０ｎｇ／μｌの神経成
長因子（ＮＧＦ））を使用し得る。代表的には、５０倍を超えるＳＥＡＰ誘導が
陽性コントロールウェルにおいて見られる。ＳＥＡＰアッセイは実施例１７に従
って、上清をアッセイする。
０5細胞／ウェルに等しい）。実施例１１により産生された５０μｌの上清を、 ３７℃で４８〜７２時間加える。陽性コントロールとして、ＥＧＲを介してＰＣ
１２細胞を活性化することが公知の成長因子（例えば、５０ｎｇ／μｌの神経成
長因子（ＮＧＦ））を使用し得る。代表的には、５０倍を超えるＳＥＡＰ誘導が
陽性コントロールウェルにおいて見られる。ＳＥＡＰアッセイは実施例１７に従
って、上清をアッセイする。
【０５２６】 （実施例１６：Ｔ細胞の活性についての高処理能力スクリーニングアッセイ） ＮＦ−κＢ（核因子κＢ）は、広範な種々の薬剤（炎症性サイトカインである
ＩＬ−１およびＴＮＦ、ＣＤ３０およびＣＤ４０、リンホトキシン−αおよびリ
ンホトキシン−βを含む）により、ＬＰＳまたはトロンビンへの曝露により、な
らびに特定のウイルス遺伝子産物の発現により活性化される転写因子である。転
写因子として、ＮＦ−κＢは免疫細胞の活性化に関与する遺伝子の発現、アポト
ーシスの制御（ＮＦ−κＢは、アポトーシスから細胞を保護すると思われる）、
Ｂ細胞およびＴ細胞の発生、抗ウイルス応答および抗菌応答、ならびに複数のス
トレス応答を調節する。
ＩＬ−１およびＴＮＦ、ＣＤ３０およびＣＤ４０、リンホトキシン−αおよびリ
ンホトキシン−βを含む）により、ＬＰＳまたはトロンビンへの曝露により、な
らびに特定のウイルス遺伝子産物の発現により活性化される転写因子である。転
写因子として、ＮＦ−κＢは免疫細胞の活性化に関与する遺伝子の発現、アポト
ーシスの制御（ＮＦ−κＢは、アポトーシスから細胞を保護すると思われる）、
Ｂ細胞およびＴ細胞の発生、抗ウイルス応答および抗菌応答、ならびに複数のス
トレス応答を調節する。
【０５２７】 刺激されない条件において、ＮＦ−κＢは、Ｉ−κＢ（インヒビターκＢ）を
有する細胞質に保持される。しかし、刺激の際に、Ｉ−κＢはリン酸化され、そ
して分解（ｄｅｇｒａｄｅｄ）され、ＮＦ−κＢの核への往復（ｓｈｕｔｔｌｅ
）を引き起こし、これにより標的遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢにより
活性化される標的遺伝子としては、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＡ
Ｍ−１およびクラス１ＭＨＣが挙げられる。
有する細胞質に保持される。しかし、刺激の際に、Ｉ−κＢはリン酸化され、そ
して分解（ｄｅｇｒａｄｅｄ）され、ＮＦ−κＢの核への往復（ｓｈｕｔｔｌｅ
）を引き起こし、これにより標的遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢにより
活性化される標的遺伝子としては、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＡ
Ｍ−１およびクラス１ＭＨＣが挙げられる。
【０５２８】 その中心的な役割および一定の範囲の刺激に応答する能力に起因して、ＮＦ−
κＢプロモーターエレメントを利用するレポーター構築物を、実施例１１におい
て産生された上清をスクリーニングするために使用する。ＮＦ−κＢのアクチベ
ーターまたはインヒビターは、疾患の処置に有用である。例えば、ＮＦ−κＢの
インヒビターを、急性または慢性的なＮＦ−κＢの活性化に関連するこれらの疾
患（例えば、慢性関節リウマチ）を処置するために使用し得る。
κＢプロモーターエレメントを利用するレポーター構築物を、実施例１１におい
て産生された上清をスクリーニングするために使用する。ＮＦ−κＢのアクチベ
ーターまたはインヒビターは、疾患の処置に有用である。例えば、ＮＦ−κＢの
インヒビターを、急性または慢性的なＮＦ−κＢの活性化に関連するこれらの疾
患（例えば、慢性関節リウマチ）を処置するために使用し得る。
【０５２９】 ＮＦ−κＢプロモーターエレメントを含むベクターを構築するために、ＰＣＲ
に基づいたストラテジーを用いる。上流のプライマーは、ＮＦ−κＢ結合部位（
ＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣ）（配列番号８）の４つの直列のコピー、ＳＶ４０初
期プロモーター配列の５’末端に対して相補的な１８ｂｐの配列を含み、そして
ＸｈｏＩ部位に隣接する：
に基づいたストラテジーを用いる。上流のプライマーは、ＮＦ−κＢ結合部位（
ＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＣ）（配列番号８）の４つの直列のコピー、ＳＶ４０初
期プロモーター配列の５’末端に対して相補的な１８ｂｐの配列を含み、そして
ＸｈｏＩ部位に隣接する：
【０５３０】
【化１２】 下流プライマーは、ＳＶ４０プロモーターの３’末端に対して相補的であり、
そしてＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接する： ５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列
番号４）。
そしてＨｉｎｄＩＩＩ部位に隣接する： ５’：ＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＡＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣ：３’（配列
番号４）。
【０５３１】 ＰＣＲ増幅を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手したｐβ−ｇａｌ：プロモータープ
ラスミドに存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを使用して行う。得ら
れたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＢＬ
ＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。Ｔ７およびＴ３プ
ライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むことを確認する：
ラスミドに存在するＳＶ４０プロモーターのテンプレートを使用して行う。得ら
れたＰＣＲフラグメントをＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、そしてＢＬ
ＳＫ２−（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）にサブクローニングする。Ｔ７およびＴ３プ
ライマーを用いる配列決定により、挿入物が以下の配列を含むことを確認する：
【０５３２】
【化１３】 次に、ＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを使用して、ｐＳＥＡＰ２−プロモータ
ープラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に存在するＳＶ４０最小プロモーターエレメ
ントをこのＮＦ−κＢ／ＳＶ４０フラグメントと置換する。しかし、このベクタ
ーはネオマイシン耐性遺伝子を含まず、そしてそれゆえ哺乳動物の発現系には好
ましくない。
ープラスミド（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に存在するＳＶ４０最小プロモーターエレメ
ントをこのＮＦ−κＢ／ＳＶ４０フラグメントと置換する。しかし、このベクタ
ーはネオマイシン耐性遺伝子を含まず、そしてそれゆえ哺乳動物の発現系には好
ましくない。
【０５３３】 安定な哺乳動物細胞株を作製するために、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカ
セットを制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを使用して上記のＮＦ−κＢ／ＳＥＡ
Ｐベクターから取り出し、そしてネオマイシン耐性を含むベクターに挿入する。
詳細には、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩでｐＧＦＰ−１を制限した後に、ＮＦ−κＢ
／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカセットをｐＧＦＰ−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に挿入し、
ＧＦＰ遺伝子を置換した。
セットを制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩを使用して上記のＮＦ−κＢ／ＳＥＡ
Ｐベクターから取り出し、そしてネオマイシン耐性を含むベクターに挿入する。
詳細には、ＳａｌＩおよびＮｏｔＩでｐＧＦＰ−１を制限した後に、ＮＦ−κＢ
／ＳＶ４０／ＳＥＡＰカセットをｐＧＦＰ−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に挿入し、
ＧＦＰ遺伝子を置換した。
【０５３４】 一旦、ＮＦ−κＢ／ＳＶ４０／ＳＥＡＰ／Ｎｅｏベクターを作製した後は、実
施例１３に記載のプロトコルに従って、安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を作製し、
そして維持する。同様に、これらの安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を含む上清をア
ッセイするための方法がまた、実施例１３に記載される。陽性コントロールとし
て、外因性のＴＮＦα（０．１、１、１０ｎｇ）をウェルＨ９、Ｈ１０、および
Ｈ１１に添加し、代表的には、５〜１０倍の活性化が観察される。
施例１３に記載のプロトコルに従って、安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を作製し、
そして維持する。同様に、これらの安定なＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を含む上清をア
ッセイするための方法がまた、実施例１３に記載される。陽性コントロールとし
て、外因性のＴＮＦα（０．１、１、１０ｎｇ）をウェルＨ９、Ｈ１０、および
Ｈ１１に添加し、代表的には、５〜１０倍の活性化が観察される。
【０５３５】 （実施例１７：ＳＥＡＰ活性についてのアッセイ） 実施例１３〜１６に記載されるアッセイのためのレポーター分子として、ＳＥ
ＡＰ活性を、以下の一般的な手順に従ってＴｒｏｐｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉ
ｇｈｔ Ｋｉｔ（カタログ番号ＢＰ−４００）を用いてアッセイする。Ｔｒｏｐ
ｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉｇｈｔ Ｋｉｔは、以下で使用される希釈緩衝液、
アッセイ緩衝液、および反応緩衝液を供給する。
ＡＰ活性を、以下の一般的な手順に従ってＴｒｏｐｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉ
ｇｈｔ Ｋｉｔ（カタログ番号ＢＰ−４００）を用いてアッセイする。Ｔｒｏｐ
ｉｘ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｌｉｇｈｔ Ｋｉｔは、以下で使用される希釈緩衝液、
アッセイ緩衝液、および反応緩衝液を供給する。
【０５３６】 ディスペンサーに２．５×希釈緩衝液を満たし、そして１５μｌの２．５×希
釈緩衝液を３５μｌの上清を含むオプティプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）に分
与する。プラスチックシーラーでプレートをシールし、そして６５℃で３０分間
インキュベートする。一様でない加温を避けるためにオプティプレートを離して
おく。
釈緩衝液を３５μｌの上清を含むオプティプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）に分
与する。プラスチックシーラーでプレートをシールし、そして６５℃で３０分間
インキュベートする。一様でない加温を避けるためにオプティプレートを離して
おく。
【０５３７】 サンプルを室温まで１５分間冷却する。ディスペンサーを空にし、そしてアッ
セイ緩衝液を満たす。５０μｌのアッセイ緩衝液を添加し、そして室温で５分間
インキュベートする。ディスペンサーを空にし、そして反応緩衝液を満たす（以
下の表を参照のこと）。５０μｌの反応緩衝液を添加し、そして室温で２０分間
インキュベートする。化学発光シグナルの強度は時間依存的であり、そしてルミ
ノメーターで５つのプレートを読み取るために約１０分間を費やすので、１回に
５つのプレートを処理し、１０分後に２つ目のセットを開始するべきである。
セイ緩衝液を満たす。５０μｌのアッセイ緩衝液を添加し、そして室温で５分間
インキュベートする。ディスペンサーを空にし、そして反応緩衝液を満たす（以
下の表を参照のこと）。５０μｌの反応緩衝液を添加し、そして室温で２０分間
インキュベートする。化学発光シグナルの強度は時間依存的であり、そしてルミ
ノメーターで５つのプレートを読み取るために約１０分間を費やすので、１回に
５つのプレートを処理し、１０分後に２つ目のセットを開始するべきである。
【０５３８】 ルミノメーターで相対的光単位（ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔ）を読み取る。ブラン
クとしてＨ１２をセットし、そして結果を印字する。化学発光の増加は、レポー
ター活性を示す。
クとしてＨ１２をセットし、そして結果を印字する。化学発光の増加は、レポー
ター活性を示す。
【０５３９】
【表４】 （実施例１８：低分子の濃度および膜透過性における変化を同定する高処理能
力スクリーニングアッセイ） レセプターへのリガンドの結合は、カルシウム、カリウム、ナトリウムのよう
な低分子およびｐＨの細胞内レベルを変化させ、さらに膜電位を変化させること
は公知である。これらの変化を特定細胞のレセプターに結合する上清の同定を行
うアッセイで測定し得る。以下のプロトコルは、カルシウムについてのアッセイ
を記載するが、このプロトコルは、カリウム、ナトリウム、ｐＨ、膜電位、また
は蛍光プローブにより検出可能な任意の他の低分子における変化を検出するよう
に容易に改変し得る。
力スクリーニングアッセイ） レセプターへのリガンドの結合は、カルシウム、カリウム、ナトリウムのよう
な低分子およびｐＨの細胞内レベルを変化させ、さらに膜電位を変化させること
は公知である。これらの変化を特定細胞のレセプターに結合する上清の同定を行
うアッセイで測定し得る。以下のプロトコルは、カルシウムについてのアッセイ
を記載するが、このプロトコルは、カリウム、ナトリウム、ｐＨ、膜電位、また
は蛍光プローブにより検出可能な任意の他の低分子における変化を検出するよう
に容易に改変し得る。
【０５４０】 以下のアッセイは、蛍光測定画像化プレートリーダー（「ＦＬＩＰＲ」）を使
用して低分子と結合する蛍光分子（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）におけ
る変化を測定する。明らかに、低分子を検出する任意の蛍光分子を本明細書で用
いるカルシウム蛍光分子、ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，
Ｉｎｃ．；カタログ番号Ｆ−１４２０２）の代わりに使用し得る。
用して低分子と結合する蛍光分子（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）におけ
る変化を測定する。明らかに、低分子を検出する任意の蛍光分子を本明細書で用
いるカルシウム蛍光分子、ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，
Ｉｎｃ．；カタログ番号Ｆ−１４２０２）の代わりに使用し得る。
【０５４１】 接着細胞については、細胞を１０，０００〜２０，０００細胞／ウェルで、底
が透明なＣｏ−ｓｔａｒ黒色９６ウェルプレートに播種する。プレートをＣＯ2 インキュベーター内で２０時間インキュベートする。接着細胞をＢｉｏｔｅｋ洗
浄器内で２００μｌのＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で二回洗浄し、最後の洗浄後、緩衝液１００μｌを残す。
が透明なＣｏ−ｓｔａｒ黒色９６ウェルプレートに播種する。プレートをＣＯ2 インキュベーター内で２０時間インキュベートする。接着細胞をＢｉｏｔｅｋ洗
浄器内で２００μｌのＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）で二回洗浄し、最後の洗浄後、緩衝液１００μｌを残す。
【０５４２】 １ｍｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４のストック溶液を１０％プルロン酸（ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ ａｃｉｄ）ＤＭＳＯで作製する。細胞にｆｌｕｏ−４を負荷するため、
１２μｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４（５０μｌ）を各ウェルに添加する。このプレー
トをＣＯ2インキュベーター中、３７℃で６０分間インキュベートする。プレー トをＢｉｏｔｅｋ洗浄器で、ＨＢＳＳにより４回洗浄し、緩衝液１００μｌを残
す。
ｎｉｃ ａｃｉｄ）ＤＭＳＯで作製する。細胞にｆｌｕｏ−４を負荷するため、
１２μｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４（５０μｌ）を各ウェルに添加する。このプレー
トをＣＯ2インキュベーター中、３７℃で６０分間インキュベートする。プレー トをＢｉｏｔｅｋ洗浄器で、ＨＢＳＳにより４回洗浄し、緩衝液１００μｌを残
す。
【０５４３】 非接着細胞については、細胞を培養培地からスピンダウンする。細胞を、５０
ｍｌのコニカルチューブ内でＨＢＳＳを用いて２〜５×１０6細胞／ｍｌに再懸 濁する。細胞懸濁液１ｍｌあたり、１ｍｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４の１０％プルロ
ン酸ＤＭＳＯ溶液４μｌを加える。次に、チューブを３７℃の水浴中に３０〜６
０分間置く。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、１×１０6細胞／ｍｌに再懸濁し、 そしてマイクロプレートに１００μｌ／ウェルずつ分配する。プレートを１００
０ｒｐｍで５分間遠心分離する。次に、プレートをＤｅｎｌｅｙ ＣｅｌｌＷａ
ｓｈ中で２００μｌで一回洗浄した後、吸引工程により最終容量を１００μｌに
する。
ｍｌのコニカルチューブ内でＨＢＳＳを用いて２〜５×１０6細胞／ｍｌに再懸 濁する。細胞懸濁液１ｍｌあたり、１ｍｇ／ｍｌ ｆｌｕｏ−４の１０％プルロ
ン酸ＤＭＳＯ溶液４μｌを加える。次に、チューブを３７℃の水浴中に３０〜６
０分間置く。細胞をＨＢＳＳで二回洗浄し、１×１０6細胞／ｍｌに再懸濁し、 そしてマイクロプレートに１００μｌ／ウェルずつ分配する。プレートを１００
０ｒｐｍで５分間遠心分離する。次に、プレートをＤｅｎｌｅｙ ＣｅｌｌＷａ
ｓｈ中で２００μｌで一回洗浄した後、吸引工程により最終容量を１００μｌに
する。
【０５４４】 非細胞ベースのアッセイについては、各ウェルは、ｆｌｕｏ−４のような蛍光
分子を含有する。上清をウェルに添加し、そして蛍光変化を検出する。
分子を含有する。上清をウェルに添加し、そして蛍光変化を検出する。
【０５４５】 細胞内カルシウムの蛍光を測定するため、ＦＬＩＰＲを以下のパラメーターに
ついて設定する：（１）システムゲインは、３００〜８００ｍＷであり；（２）
曝露時間は、０．４秒間であり；（３）カメラＦ／ストップは、Ｆ／２であり；
（４）励起は４８８ｎｍであり；（５）発光は５３０ｎｍであり；そして（６）
サンプル添加は５０μｌである。５３０ｎｍにおける発光の増加は、細胞内Ｃａ ++ 濃度の増加を生じる、細胞外シグナリング事象を示す。 （実施例１９：チロシンキナーゼ活性を同定する高処理能力スクリーニングアッ
セイ） プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、多様な群の膜貫通キナーゼおよび
細胞質キナーゼを表す。レセプタープロテインチロシンキナーゼ（ＲＰＴＫ）群
内に、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＨＧＦおよびインスリンレセプター
サブファミリーを含む、一定の範囲の有糸分裂促進性（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ）お
よび代謝性成長因子のレセプターがある。さらに、対応するリガンドが未知であ
る大きなＲＰＴＫファミリーがある。ＲＰＴＫのリガンドは、主として分泌され
る低分子量タンパク質を含むが、膜結合型および細胞外マトリックスタンパク質
も含む。
ついて設定する：（１）システムゲインは、３００〜８００ｍＷであり；（２）
曝露時間は、０．４秒間であり；（３）カメラＦ／ストップは、Ｆ／２であり；
（４）励起は４８８ｎｍであり；（５）発光は５３０ｎｍであり；そして（６）
サンプル添加は５０μｌである。５３０ｎｍにおける発光の増加は、細胞内Ｃａ ++ 濃度の増加を生じる、細胞外シグナリング事象を示す。 （実施例１９：チロシンキナーゼ活性を同定する高処理能力スクリーニングアッ
セイ） プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、多様な群の膜貫通キナーゼおよび
細胞質キナーゼを表す。レセプタープロテインチロシンキナーゼ（ＲＰＴＫ）群
内に、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＨＧＦおよびインスリンレセプター
サブファミリーを含む、一定の範囲の有糸分裂促進性（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ）お
よび代謝性成長因子のレセプターがある。さらに、対応するリガンドが未知であ
る大きなＲＰＴＫファミリーがある。ＲＰＴＫのリガンドは、主として分泌され
る低分子量タンパク質を含むが、膜結合型および細胞外マトリックスタンパク質
も含む。
【０５４６】 リガンドによるＲＰＴＫの活性化は、リガンド媒介レセプター二量体化に関与
し、レセプターサブユニットのトランスリン酸化および細胞質チロシンキナーゼ
の活性化が起こる。細胞質チロシンキナーゼとしては、ｓｒｃファミリー（例え
ば、ｓｒｃ、ｙｅｓ、ｌｃｋ、ｌｙｎ、ｆｙｎ）のレセプター関連チロシンキナ
ーゼ、ならびにＪａｋファミリーのような非レセプター結合型および細胞質ゾル
プロテインチロシンキナーゼが挙げられる。これらのメンバーは、サイトカイン
スーパーファミリー（例えば、インターロイキン、インターフェロン、ＧＭ−Ｃ
ＳＦおよびレプチン）のレセプターによって誘発されるシグナル伝達を媒介する
。
し、レセプターサブユニットのトランスリン酸化および細胞質チロシンキナーゼ
の活性化が起こる。細胞質チロシンキナーゼとしては、ｓｒｃファミリー（例え
ば、ｓｒｃ、ｙｅｓ、ｌｃｋ、ｌｙｎ、ｆｙｎ）のレセプター関連チロシンキナ
ーゼ、ならびにＪａｋファミリーのような非レセプター結合型および細胞質ゾル
プロテインチロシンキナーゼが挙げられる。これらのメンバーは、サイトカイン
スーパーファミリー（例えば、インターロイキン、インターフェロン、ＧＭ−Ｃ
ＳＦおよびレプチン）のレセプターによって誘発されるシグナル伝達を媒介する
。
【０５４７】 チロシンキナーゼ活性を刺激し得る公知の因子は広範であるため、チロシンキ
ナーゼシグナル伝達経路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質の同定は興味
深い。従って、以下のプロトコルを設計して、チロシンキナーゼシグナル伝達経
路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質を同定する。
ナーゼシグナル伝達経路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質の同定は興味
深い。従って、以下のプロトコルを設計して、チロシンキナーゼシグナル伝達経
路を活性化し得る新規なヒト分泌タンパク質を同定する。
【０５４８】 標的細胞（例えば、初代ケラチノサイト）を約２５，０００細胞／ウェルの密
度で、Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ（Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）から購入した９６
ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅに播種す
る。プレートを１００％エタノールで３０分間、二回リンスして滅菌し、水でリ
ンスした後、一晩乾燥させる。幾つかのプレートを、１００ｍｌの細胞培養グレ
ードＩ型コラーゲン（５０ｍｇ／ｍｌ）、ゼラチン（２％）またはポリリジン（
５０ｍｇ／ｍｌ）（これらは全て、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入し得る）で、またはＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から購入した１０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ、あるいは仔
ウシ血清で２時間コートし、ＰＢＳでリンスした後、４℃で貯蔵する。増殖培地
に５，０００細胞／ウェルを播種し、製造業者のＡｌａｍａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）が記載するように、ａｌａ
ｍａｒＢｌｕｅを使用して４８時間後に細胞数を間接定量することにより、これ
らのプレート上の細胞増殖をアッセイする。Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）のＦａｌｃｏｎプレートカバー＃３０７１を使用し、
Ｌｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅを覆う。Ｆａｌ
ｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩ細胞培養プレートもまた、いくつかの増殖
実験において使用し得る。
度で、Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ（Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）から購入した９６
ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅに播種す
る。プレートを１００％エタノールで３０分間、二回リンスして滅菌し、水でリ
ンスした後、一晩乾燥させる。幾つかのプレートを、１００ｍｌの細胞培養グレ
ードＩ型コラーゲン（５０ｍｇ／ｍｌ）、ゼラチン（２％）またはポリリジン（
５０ｍｇ／ｍｌ）（これらは全て、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入し得る）で、またはＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏ
ｎ（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）から購入した１０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ、あるいは仔
ウシ血清で２時間コートし、ＰＢＳでリンスした後、４℃で貯蔵する。増殖培地
に５，０００細胞／ウェルを播種し、製造業者のＡｌａｍａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ，ＣＡ）が記載するように、ａｌａ
ｍａｒＢｌｕｅを使用して４８時間後に細胞数を間接定量することにより、これ
らのプレート上の細胞増殖をアッセイする。Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）のＦａｌｃｏｎプレートカバー＃３０７１を使用し、
Ｌｏｐｒｏｄｙｎｅ Ｓｉｌｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎ Ｐｌａｔｅを覆う。Ｆａｌ
ｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩ細胞培養プレートもまた、いくつかの増殖
実験において使用し得る。
【０５４９】 抽出物を調製するため、Ａ４３１細胞をＬｏｐｒｏｄｙｎｅプレートのナイロ
ン膜上に播種し（２０，０００／２００ｍｌ／ウェル）、そして完全培地内で一
晩培養する。細胞を無血清基本培地中で２４時間インキュベートして静止させる
。ＥＧＦ（６０ｎｇ／ｍｌ）または実施例１１で生成した上清５０μｌで５〜２
０分間処理した後、培地を除去し、１００ｍｌの抽出緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．５，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，０
．１％ＳＤＳ，２ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4，２ｍＭ Ｎａ4Ｐ2Ｏ7およびＢｏｅｈｅｒ ｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から入手し
たプロテアーゼインヒビターの混合物（＃１８３６１７０））を各ウェルに添加
し、そしてプレートを回転振盪器上、４℃で５分間振盪する。次に、プレートを
真空トランスファーマニホールド（ｖａｃｕｕｍ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍａｎｉ
ｆｏｌｄ）に設置し、そしてハウスバキュームを使用して抽出物を各ウェルの底
の０．４５ｍｍ膜で濾過する。抽出物をバキュームマニホールドの底の９６ウェ
ル捕獲／アッセイプレートに集め、そして直ちに氷上に置く。遠心分離により明
澄化した抽出物を得るため、界面活性剤で５分間可溶化した後、各ウェルの含有
物を取り出し、４℃、１６，０００×ｇで１５分間遠心分離する。
ン膜上に播種し（２０，０００／２００ｍｌ／ウェル）、そして完全培地内で一
晩培養する。細胞を無血清基本培地中で２４時間インキュベートして静止させる
。ＥＧＦ（６０ｎｇ／ｍｌ）または実施例１１で生成した上清５０μｌで５〜２
０分間処理した後、培地を除去し、１００ｍｌの抽出緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ ｐＨ７．５，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，０
．１％ＳＤＳ，２ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4，２ｍＭ Ｎａ4Ｐ2Ｏ7およびＢｏｅｈｅｒ ｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から入手し
たプロテアーゼインヒビターの混合物（＃１８３６１７０））を各ウェルに添加
し、そしてプレートを回転振盪器上、４℃で５分間振盪する。次に、プレートを
真空トランスファーマニホールド（ｖａｃｕｕｍ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍａｎｉ
ｆｏｌｄ）に設置し、そしてハウスバキュームを使用して抽出物を各ウェルの底
の０．４５ｍｍ膜で濾過する。抽出物をバキュームマニホールドの底の９６ウェ
ル捕獲／アッセイプレートに集め、そして直ちに氷上に置く。遠心分離により明
澄化した抽出物を得るため、界面活性剤で５分間可溶化した後、各ウェルの含有
物を取り出し、４℃、１６，０００×ｇで１５分間遠心分離する。
【０５５０】 濾過抽出物をチロシンキナーゼ活性のレベルについて試験する。チロシンキナ
ーゼ活性を検出する多数の方法が公知であるが、本明細書においては方法の一つ
を記載する。
ーゼ活性を検出する多数の方法が公知であるが、本明細書においては方法の一つ
を記載する。
【０５５１】 一般的に、特定の基質（ビオチン化ペプチド）上のチロシン残基をリン酸化す
る能力を決定することにより、上清のチロシンキナーゼ活性を評価する。この目
的に使用し得るビオチン化ペプチドとしては、ＰＳＫ１（細胞分裂キナーゼｃｄ
ｃ２−ｐ３４のアミノ酸６〜２０に相当）およびＰＳＫ２（ガストリンのアミノ
酸１〜１７に相当）が挙げられる。両ペプチドは、一連のチロシンキナーゼの基
質であり、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能である。
る能力を決定することにより、上清のチロシンキナーゼ活性を評価する。この目
的に使用し得るビオチン化ペプチドとしては、ＰＳＫ１（細胞分裂キナーゼｃｄ
ｃ２−ｐ３４のアミノ酸６〜２０に相当）およびＰＳＫ２（ガストリンのアミノ
酸１〜１７に相当）が挙げられる。両ペプチドは、一連のチロシンキナーゼの基
質であり、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍから入手可能である。
【０５５２】 以下の成分を順に添加することにより、チロシンキナーゼ反応を設定する。ま
ず、５μＭビオチン化ペプチド１０μｌを添加した後、順に、ＡＴＰ／Ｍｇ2+（
５ｍＭ ＡＴＰ／５０ｍＭ ＭｇＣｌ2）１０μｌ、５×アッセイ緩衝液（４０ ｍＭ塩酸イミダゾール、ｐＨ７．３、４０ｍＭ β−グリセロリン酸塩、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＭｇＣｌ2、５ｍＭ ＭｎＣｌ2、０．５ｍｇ／ｍｌ
ＢＳＡ）１０μｌ、バナジン酸ナトリウム（１ｍＭ）５μｌ、最後に水５μｌを
加える。成分を穏やかに混合し、反応混合物を３０℃で２分間プレインキュベー
トする。コントロール酵素または濾過上清１０μｌを加えて反応を開始させる。
ず、５μＭビオチン化ペプチド１０μｌを添加した後、順に、ＡＴＰ／Ｍｇ2+（
５ｍＭ ＡＴＰ／５０ｍＭ ＭｇＣｌ2）１０μｌ、５×アッセイ緩衝液（４０ ｍＭ塩酸イミダゾール、ｐＨ７．３、４０ｍＭ β−グリセロリン酸塩、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１００ｍＭ ＭｇＣｌ2、５ｍＭ ＭｎＣｌ2、０．５ｍｇ／ｍｌ
ＢＳＡ）１０μｌ、バナジン酸ナトリウム（１ｍＭ）５μｌ、最後に水５μｌを
加える。成分を穏やかに混合し、反応混合物を３０℃で２分間プレインキュベー
トする。コントロール酵素または濾過上清１０μｌを加えて反応を開始させる。
【０５５３】 次に、１２０ｍＭ ＥＤＴＡ１０μｌを添加して反応物を氷上に置くことによ
り、チロシンキナーゼアッセイ反応を停止させる。
り、チロシンキナーゼアッセイ反応を停止させる。
【０５５４】 反応混合物の５０μｌのアリコートをマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）モ
ジュールに移し、３７℃で２０分間インキュベートすることにより、チロシンキ
ナーゼ活性を測定する。これにより、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖａ
ｄｉｎ）コーティング９６ウェルプレートをビオチン化ペプチドと会合させる。
ＭＴＰモジュールを３００μｌ／ウェルのＰＢＳで４回洗浄する。次に、西洋ワ
サビペルオキシダーゼに結合体化した抗ホスホチロシン（ｐｈｏｓｐｏｔｙｒｏ
ｓｉｎｅ）抗体（抗Ｐ−Ｔｙｒ−ＰＯＤ（０．５ｕ／ｍｌ））７５μｌを、各ウ
ェルに添加した後、３７℃で１時間インキュベートする。ウェルを上記のように
洗浄する。
ジュールに移し、３７℃で２０分間インキュベートすることにより、チロシンキ
ナーゼ活性を測定する。これにより、ストレプトアビジン（ｓｔｒｅｐｔａｖａ
ｄｉｎ）コーティング９６ウェルプレートをビオチン化ペプチドと会合させる。
ＭＴＰモジュールを３００μｌ／ウェルのＰＢＳで４回洗浄する。次に、西洋ワ
サビペルオキシダーゼに結合体化した抗ホスホチロシン（ｐｈｏｓｐｏｔｙｒｏ
ｓｉｎｅ）抗体（抗Ｐ−Ｔｙｒ−ＰＯＤ（０．５ｕ／ｍｌ））７５μｌを、各ウ
ェルに添加した後、３７℃で１時間インキュベートする。ウェルを上記のように
洗浄する。
【０５５５】 次に、ペルオキシダーゼ基質溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ
）１００μｌを加え、室温で少なくとも５分間（最長３０分間）インキュベート
する。ＥＬＩＳＡリーダーを使用して、４０５ｎｍにおけるサンプルの吸光度を
測定する。結合したペルオキシダーゼ活性のレベルをＥＬＩＳＡリーダーを使用
して定量し、これは、チロシンキナーゼ活性のレベルを反映する。
）１００μｌを加え、室温で少なくとも５分間（最長３０分間）インキュベート
する。ＥＬＩＳＡリーダーを使用して、４０５ｎｍにおけるサンプルの吸光度を
測定する。結合したペルオキシダーゼ活性のレベルをＥＬＩＳＡリーダーを使用
して定量し、これは、チロシンキナーゼ活性のレベルを反映する。
【０５５６】 （実施例２０：リン酸化活性を同定する高処理能力スクリーニングアッセイ） 実施例１９に記載のプロテインチロシンキナーゼ活性アッセイの可能性のある
代替物および／または補完物（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）として、主要な細胞内シ
グナル伝達中間体の活性化（リン酸化）を検出するアッセイもまた使用し得る。
例えば、下記のように、一つの特定のアッセイは、Ｅｒｋ−１およびＥｒｋ−２
キナーゼのチロシンリン酸化を検出し得る。しかし、Ｒａｆ、ＪＮＫ、ｐ３８Ｍ
ＡＰ、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）、ＭＥＫキナーゼ、Ｓｒｃ、筋肉特異
的キナーゼ（ＭｕＳＫ）、ＩＲＡＫ、ＴｅｃおよびＪａｎｕｓのような他の分子
、ならびに他の任意のホスホセリン、ホスホチロシンまたはホスホスレオニン分
子のリン酸化を、以下のアッセイにおいてこれらの分子でＥｒｋ−１またはＥｒ
ｋ−２を置き換えることにより検出し得る。
代替物および／または補完物（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）として、主要な細胞内シ
グナル伝達中間体の活性化（リン酸化）を検出するアッセイもまた使用し得る。
例えば、下記のように、一つの特定のアッセイは、Ｅｒｋ−１およびＥｒｋ−２
キナーゼのチロシンリン酸化を検出し得る。しかし、Ｒａｆ、ＪＮＫ、ｐ３８Ｍ
ＡＰ、Ｍａｐキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）、ＭＥＫキナーゼ、Ｓｒｃ、筋肉特異
的キナーゼ（ＭｕＳＫ）、ＩＲＡＫ、ＴｅｃおよびＪａｎｕｓのような他の分子
、ならびに他の任意のホスホセリン、ホスホチロシンまたはホスホスレオニン分
子のリン酸化を、以下のアッセイにおいてこれらの分子でＥｒｋ−１またはＥｒ
ｋ−２を置き換えることにより検出し得る。
【０５５７】 詳細には、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートのウェルをプロテインＧ（１μｇ／
ｍｌ）０．１ｍｌにより室温（ＲＴ）で２時間コーティングしてアッセイプレー
トを作製する。次に、プレートをＰＢＳでリンスし、３％ＢＳＡ／ＰＢＳにより
ＲＴで１時間ブロックする。次に、プロテインＧプレートをＥｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２に対する二つの市販のモノクローナル抗体（１００ｎｇ／ウェル）（Ｓ
ａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で処理（ＲＴで１時間）す
る。（他の分子を検出するために、上記の任意の分子を検出するモノクローナル
抗体と交換することにより、この工程を容易に改変し得る）。ＰＢＳで３〜５回
リンスした後、使用時まで、プレートを４℃で貯蔵する。
ｍｌ）０．１ｍｌにより室温（ＲＴ）で２時間コーティングしてアッセイプレー
トを作製する。次に、プレートをＰＢＳでリンスし、３％ＢＳＡ／ＰＢＳにより
ＲＴで１時間ブロックする。次に、プロテインＧプレートをＥｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２に対する二つの市販のモノクローナル抗体（１００ｎｇ／ウェル）（Ｓ
ａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で処理（ＲＴで１時間）す
る。（他の分子を検出するために、上記の任意の分子を検出するモノクローナル
抗体と交換することにより、この工程を容易に改変し得る）。ＰＢＳで３〜５回
リンスした後、使用時まで、プレートを４℃で貯蔵する。
【０５５８】 Ａ４３１細胞を２０，０００／ウェルで９６ウェルＬｏｐｒｏｄｙｎｅフィル
タープレートに播種し、増殖培地中で一晩培養する。次に、細胞を基本培地（Ｄ
ＭＥＭ）中で４８時間飢餓させた後、ＥＧＦ（６ｎｇ／ウェル）または実施例１
１で得た上清５０μｌで５〜２０分間処理する。次に、細胞を可溶化し、抽出物
を濾過して直接アッセイプレート内へ入れる。
タープレートに播種し、増殖培地中で一晩培養する。次に、細胞を基本培地（Ｄ
ＭＥＭ）中で４８時間飢餓させた後、ＥＧＦ（６ｎｇ／ウェル）または実施例１
１で得た上清５０μｌで５〜２０分間処理する。次に、細胞を可溶化し、抽出物
を濾過して直接アッセイプレート内へ入れる。
【０５５９】 抽出物を用いてＲＴで１時間インキュベートした後、ウェルを再度リンスする
。陽性コントロールとして、市販のＭＡＰキナーゼ調製物（１０ｎｇ／ウェル）
をＡ４３１抽出物の代わりに使用する。次に、プレートを、Ｅｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２キナーゼのリン酸化エピトープを特異的に認識する市販のポリクローナ
ル（ウサギ）抗体（１μｇ／ｍｌ）で処理する（ＲＴで１時間）。この抗体を標
準的な手順によりビオチン化する。次に、結合ポリクローナル抗体をユーロピウ
ムストレプトアビジンおよびユーロピウム蛍光増強剤とＷａｌｌａｃ ＤＥＬＦ
ＩＡ装置内で連続的にインキュベートする（時間分解性蛍光）ことによって定量
する。バックグラウンドを超える蛍光シグナルの増加は、リン酸化を示す。
。陽性コントロールとして、市販のＭＡＰキナーゼ調製物（１０ｎｇ／ウェル）
をＡ４３１抽出物の代わりに使用する。次に、プレートを、Ｅｒｋ−１およびＥ
ｒｋ−２キナーゼのリン酸化エピトープを特異的に認識する市販のポリクローナ
ル（ウサギ）抗体（１μｇ／ｍｌ）で処理する（ＲＴで１時間）。この抗体を標
準的な手順によりビオチン化する。次に、結合ポリクローナル抗体をユーロピウ
ムストレプトアビジンおよびユーロピウム蛍光増強剤とＷａｌｌａｃ ＤＥＬＦ
ＩＡ装置内で連続的にインキュベートする（時間分解性蛍光）ことによって定量
する。バックグラウンドを超える蛍光シグナルの増加は、リン酸化を示す。
【０５６０】 （実施例２１：ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における変化の決定方法） 目的の表現型（例えば、疾患）を提示する家族全員または個々の患者から単離
されたＲＮＡを単離する。次に、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分
野で公知のプロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。
次に、このｃＤＮＡを、配列番号Ｘにおける目的の領域を取り囲むプライマーを
用いるＰＣＲのテンプレートとして使用する。示唆されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄ
ｒａｎｓｋｙ，Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：７０６（１９９１）に記載の
緩衝溶液を使用し、９５℃で３０秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；およ
び７０℃で６０〜１２０秒間の３５サイクルからなる。
されたＲＮＡを単離する。次に、ｃＤＮＡをこれらのＲＮＡサンプルから当該分
野で公知のプロトコルを使用して生成する（Ｓａｍｂｒｏｏｋを参照のこと）。
次に、このｃＤＮＡを、配列番号Ｘにおける目的の領域を取り囲むプライマーを
用いるＰＣＲのテンプレートとして使用する。示唆されるＰＣＲ条件は、Ｓｉｄ
ｒａｎｓｋｙ，Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：７０６（１９９１）に記載の
緩衝溶液を使用し、９５℃で３０秒間；５２〜５８℃で６０〜１２０秒間；およ
び７０℃で６０〜１２０秒間の３５サイクルからなる。
【０５６１】 次に、ＰＣＲ産物を、ＳｅｑｕｉＴｈｅｒｍ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｅｐｉ
ｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、５’末端にＴ４ポリヌクレ
オチドキナーゼで標識したプライマーを使用して配列決定する。選択したエキソ
ンのイントロン−エキソン境界もまた決定し、ゲノムＰＣＲ産物を分析してその
結果を確認する。次に、疑わしい変異を有するＰＣＲ産物のクローン化および配
列決定を行い、直接配列決定の結果を確認する。
ｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用い、５’末端にＴ４ポリヌクレ
オチドキナーゼで標識したプライマーを使用して配列決定する。選択したエキソ
ンのイントロン−エキソン境界もまた決定し、ゲノムＰＣＲ産物を分析してその
結果を確認する。次に、疑わしい変異を有するＰＣＲ産物のクローン化および配
列決定を行い、直接配列決定の結果を確認する。
【０５６２】 ＰＣＲ産物を、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｔ．Ａ．およびＧｒａｈａｍ，Ｍ．Ｗ．，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９：１１５６（１９９１）に記
載のようにＴテールベクターにクローン化し、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）で配列決定する。罹患個体を、非罹
患個体には存在しない変異により同定する。
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９：１１５６（１９９１）に記
載のようにＴテールベクターにクローン化し、Ｔ７ポリメラーゼ（Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）で配列決定する。罹患個体を、非罹
患個体には存在しない変異により同定する。
【０５６３】 ゲノム再配置もまた、ポリヌクレオチドに対応する遺伝子における改変を決定
する方法として観察する。実施例２に従って単離したゲノムクローンを、ジゴキ
シゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈ
ｅｉｍ）を用いてニックトランスレーションし、そしてＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｇ．
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３５：７３−９９（１９９１）に記
載のようにＦＩＳＨを行う。対応するゲノムの遺伝子座への特異的ハイブリダイ
ゼーションのために、大過剰のヒトｃｏｔ−１ ＤＮＡを用いて標識プローブと
のハイブリダイゼーションを行う。
する方法として観察する。実施例２に従って単離したゲノムクローンを、ジゴキ
シゲニンデオキシ−ウリジン５’−三リン酸（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈ
ｅｉｍ）を用いてニックトランスレーションし、そしてＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｇ．
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３５：７３−９９（１９９１）に記
載のようにＦＩＳＨを行う。対応するゲノムの遺伝子座への特異的ハイブリダイ
ゼーションのために、大過剰のヒトｃｏｔ−１ ＤＮＡを用いて標識プローブと
のハイブリダイゼーションを行う。
【０５６４】 染色体を、４，６−ジアミノ−２−フェニリドールおよびヨウ化プロピジウム
で対比染色し、ＣおよびＲバンドの組み合わせを生成する。正確なマッピングの
ための整列イメージを、三重バンドフィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（Ｐ
ｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）および可変励起波長フィルター
（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃｖ．ら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．，
８：７５（１９９１））とを組み合わせて用いて得る。ＩＳｅｅ Ｇｒａｐｈｉ
ｃａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）を使用して、イメージ収集、分析および染色
体部分長測定を行う。プローブがハイブリダイズしたゲノム領域の染色体変化を
、挿入、欠失および転座として同定する。これらの変化を関連疾患の診断マーカ
ーとして使用する。
で対比染色し、ＣおよびＲバンドの組み合わせを生成する。正確なマッピングの
ための整列イメージを、三重バンドフィルターセット（Ｃｈｒｏｍａ Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）と冷却電荷結合素子カメラ（Ｐ
ｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）および可変励起波長フィルター
（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃｖ．ら、Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．，
８：７５（１９９１））とを組み合わせて用いて得る。ＩＳｅｅ Ｇｒａｐｈｉ
ｃａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｓｙｓｔｅｍ （Ｉｎｏｖｉｓｉｏｎ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）を使用して、イメージ収集、分析および染色
体部分長測定を行う。プローブがハイブリダイズしたゲノム領域の染色体変化を
、挿入、欠失および転座として同定する。これらの変化を関連疾患の診断マーカ
ーとして使用する。
【０５６５】 （実施例２２：生物学的サンプル中のポリペプチドの異常レベルを検出する方
法） 本発明のポリペプチドは生物学的サンプル中で検出され得、そしてポリペプチ
ドレベルの上昇または低下が検出されるなら、このポリペプチドは、特定表現型
のマーカーである。検出方法は数多くあり、そしてそれ故、当業者は以下のアッ
セイをそれらの特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。
法） 本発明のポリペプチドは生物学的サンプル中で検出され得、そしてポリペプチ
ドレベルの上昇または低下が検出されるなら、このポリペプチドは、特定表現型
のマーカーである。検出方法は数多くあり、そしてそれ故、当業者は以下のアッ
セイをそれらの特定の必要性に適合するように改変し得ることが理解される。
【０５６６】 例えば、抗体サンドイッチＥＬＩＳＡを使用し、サンプル中、好ましくは、生
物学的サンプル中のポリペプチドを検出する。マイクロタイタープレートのウェ
ルを、特異的抗体を最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌで用いてコーティングする
。この抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであって、実施
例１０に記載の方法により産生される。ウェルに対するポリペプチドの非特異的
結合が減少するように、このウェルをブロックする。
物学的サンプル中のポリペプチドを検出する。マイクロタイタープレートのウェ
ルを、特異的抗体を最終濃度０．２〜１０μｇ／ｍｌで用いてコーティングする
。この抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれかであって、実施
例１０に記載の方法により産生される。ウェルに対するポリペプチドの非特異的
結合が減少するように、このウェルをブロックする。
【０５６７】 次に、コーティングしたウェルを、ポリペプチド含有サンプルを用いてＲＴで
２時間を超えてインキュベートする。好ましくは、サンプルの系列希釈を使用し
て結果を確認すべきである。次に、プレートを脱イオン水または蒸留水で三回洗
浄し、非結合ポリペプチドを除去する。
２時間を超えてインキュベートする。好ましくは、サンプルの系列希釈を使用し
て結果を確認すべきである。次に、プレートを脱イオン水または蒸留水で三回洗
浄し、非結合ポリペプチドを除去する。
【０５６８】 次に、特異的抗体−アルカリホスファターゼ結合体５０μｌを２５〜４００ｎ
ｇの濃度で加え、室温で２時間インキュベートする。プレートを再び脱イオン水
または蒸留水で三回洗浄し、未結合の結合体を除去する。
ｇの濃度で加え、室温で２時間インキュベートする。プレートを再び脱イオン水
または蒸留水で三回洗浄し、未結合の結合体を除去する。
【０５６９】 ４−メチルウンベリフェリルリン酸（ＭＵＰ）またはｐ−ニトロフェニルリン
酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキ
ュベートする。反応物をマイクロタイタープレートリーダーにより測定する。コ
ントロールサンプルの系列希釈を使用して標準曲線を作成し、そしてＸ軸（対数
スケール）にポリペプチド濃度を、そしてＹ軸（直線スケール）に蛍光または吸
光度をプロットする。標準曲線を用いてサンプル中のポリペプチド濃度を補間す
る。
酸（ＮＰＰ）基質溶液７５μｌを各ウェルに添加し、そして室温で１時間インキ
ュベートする。反応物をマイクロタイタープレートリーダーにより測定する。コ
ントロールサンプルの系列希釈を使用して標準曲線を作成し、そしてＸ軸（対数
スケール）にポリペプチド濃度を、そしてＹ軸（直線スケール）に蛍光または吸
光度をプロットする。標準曲線を用いてサンプル中のポリペプチド濃度を補間す
る。
【０５７０】 （実施例２３：ポリペプチドの処方） 分泌ポリペプチド組成物を、個々の患者の臨床状態（特に、分泌ポリペプチド
単独処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の
因子を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ）を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とす
る「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
単独処置の副作用）、送達部位、投与方法、投与計画および当業者に公知の他の
因子を考慮に入れ、医療実施基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃ
ｅ）を遵守する方式で処方および投薬する。従って、本明細書において目的とす
る「有効量」は、このような考慮を行って決定される。
【０５７１】 一般的提案として、用量当り、非経口的に投与される分泌ポリペプチドの合計
薬学的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲
にあるが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、こ
のホルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、最も好
ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と１ｍｇ／ｋｇ／日との間であ
る。連続投与する場合、代表的には、分泌ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
薬学的有効量は、患者体重の、約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲
にあるが、上記のようにこれは治療的裁量に委ねられる。さらに好ましくは、こ
のホルモンについて、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、最も好
ましくはヒトに対して約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日と１ｍｇ／ｋｇ／日との間であ
る。連続投与する場合、代表的には、分泌ポリペプチドを約１μｇ／ｋｇ／時間
〜約５０μｇ／ｋｇ／時間の投薬速度で１日に１〜４回の注射かまたは連続皮下
注入（例えばミニポンプを用いる）のいずれかにより投与する。静脈内用バッグ
溶液もまた使用し得る。変化を観察するために必要な処置期間および応答が生じ
る処置後の間隔は、所望の効果に応じて変化するようである。
【０５７２】 本発明の分泌タンパク質を含む薬学的組成物を、経口的、直腸内、非経口的、
槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏
、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔
スプレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体
、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をい
う。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内
、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、膣内、腹腔内、局所的（粉剤、軟膏
、ゲル、点滴剤、または経皮パッチによるなど）、口内あるいは経口または鼻腔
スプレーとして投与する。「薬学的に受容可能なキャリア」とは、非毒性の固体
、半固体または液体の充填剤、希釈剤、被包材または任意の型の製剤補助剤をい
う。本明細書で用いる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内
、皮下および関節内の注射および注入を含む投与の様式をいう。
【０５７３】 分泌ポリペプチドはまた、徐放性システムにより適切に投与される。徐放性組
成物の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の
半透過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリ
ラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタ
ミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ， Ｕ
．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（
２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅ
ｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＲ．Ｌａ
ｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレン
ビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロ
キシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソー
ムに封入されたポリペプチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソー
ムは、それ自体が公知である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；
Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３
６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２
；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６
４１；日本国特許出願第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５
号および第４，５４４，５４５号ならびにＥＰ１０２，３２４。通常、リポソー
ムは、小さな（約２００〜８００Å）ユニラメラ型であり、そこでは、脂質含有
量は、約３０モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポ
リペプチド治療のために調整される。
成物の適切な例は、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの成形品の形態の
半透過性ポリマーマトリックスを包含する。徐放性マトリックスとしては、ポリ
ラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ５８，４８１）、Ｌ−グルタ
ミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ， Ｕ
．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（
２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅ
ｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＲ．Ｌａ
ｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、エチレン
ビニルアセテート（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら）またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロ
キシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。徐放性組成物はまた、リポソー
ムに封入されたポリペプチドを包含する。分泌ポリペプチドを含有するリポソー
ムは、それ自体が公知である方法により調製される：ＤＥ３，２１８，１２１；
Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３
６８８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ５２，３２２
；ＥＰ３６，６７６；ＥＰ８８，０４６；ＥＰ１４３，９４９；ＥＰ１４２，６
４１；日本国特許出願第８３−１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５
号および第４，５４４，５４５号ならびにＥＰ１０２，３２４。通常、リポソー
ムは、小さな（約２００〜８００Å）ユニラメラ型であり、そこでは、脂質含有
量は、約３０モル％コレステロールよりも多く、選択された割合が、最適分泌ポ
リペプチド治療のために調整される。
【０５７４】 非経口投与のために、１つの実施態様において、一般に、分泌ポリペプチドは
、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる投
薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と適
合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で混
合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、お
よびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まない
。
、それを所望の程度の純度で、薬学的に受容可能なキャリア、すなわち用いる投
薬量および濃度でレシピエントに対して毒性がなく、かつ処方物の他の成分と適
合するものと、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液または乳濁液）で混
合することにより処方される。例えば、この処方物は、好ましくは、酸化剤、お
よびポリペプチドに対して有害であることが知られている他の化合物を含まない
。
【０５７５】 一般に、ポリペプチドを液体キャリアまたは微細分割固体キャリアあるいはそ
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、
生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア
、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このようなキャ
リアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロー
ス溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性ビヒク
ルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
の両方と均一および緊密に接触させて処方物を調製する。次に、必要であれば、
生成物を所望の処方物に成形する。好ましくは、キャリアは、非経口的キャリア
、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。このようなキャ
リアビヒクルの例としては、水、生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロー
ス溶液が挙げられる。不揮発性油およびオレイン酸エチルのような非水性ビヒク
ルもまた、リポソームと同様に本明細書において有用である。
【０５７６】 キャリアは、等張性および化学安定性を高める物質のような微量の添加剤を適
切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対
して毒性がなく、このような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩
、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビン酸のよう
な抗酸化剤；低分子量（約１０残基より少ない）ポリペプチド（例えば、ポリア
ルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリ
ンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシ
ン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セルロ
ースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖
類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトール
またはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；およ
び／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン性界
面活性剤が挙げられる。
切に含有する。このような物質は、用いる投薬量および濃度でレシピエントに対
して毒性がなく、このような物質としては、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩
、酢酸および他の有機酸またはその塩類のような緩衝剤；アスコルビン酸のよう
な抗酸化剤；低分子量（約１０残基より少ない）ポリペプチド（例えば、ポリア
ルギニンまたはトリペプチド）；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリ
ンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシ
ン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸；セルロ
ースまたはその誘導体、ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンを含む、単糖
類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトール
またはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような対イオン；およ
び／またはポリソルベート、ポロキサマーもしくはＰＥＧのような非イオン性界
面活性剤が挙げられる。
【０５７７】 分泌ポリペプチドは、代表的には約０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好
ましくは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル
中に処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用すること
により、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
ましくは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜８のｐＨで、このようなビヒクル
中に処方される。前記の特定の賦形剤、キャリアまたは安定化剤を使用すること
により、ポリペプチド塩が形成されることが理解される。
【０５７８】 治療的投与に用いられるべき任意のポリペプチドは無菌状態であり得る。滅菌
濾過膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容
易に達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを
有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バ
ッグまたはバイアルに配置される。
濾過膜（例えば０．２ミクロンメンブレン）で濾過することにより無菌状態は容
易に達成される。一般に、治療用ポリペプチド組成物は、滅菌アクセスポートを
有する容器、例えば、皮下用注射針で穿刺可能なストッパー付の静脈内用溶液バ
ッグまたはバイアルに配置される。
【０５７９】 ポリペプチドは、通常、単位用量または複数用量容器、例えば、密封アンプル
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
またはバイアルに、水溶液または再構成するための凍結乾燥処方物として貯蔵さ
れる。凍結乾燥処方物の例として、１０ｍｌのバイアルに、滅菌濾過した１％（
ｗ／ｖ）ポリペプチド水溶液５ｍｌを充填し、そして得られる混合物を凍結乾燥
する。凍結乾燥したポリペプチドを注射用静菌水を用いて再構成して注入溶液を
調製する。
【０５８０】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を満たした一つ以上の
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
容器を備える薬学的パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品
の製造、使用または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が、このような
容器に付属し得、この通知は、ヒトへの投与に対する製造、使用または販売に関
する政府機関による承認を表す。さらに、本発明のポリペプチドを他の治療用化
合物と組み合わせて使用し得る。
【０５８１】 （実施例２４：ポリペプチドのレベル低下を処置する方法） 個体における分泌タンパク質の標準または正常発現レベルの低下により引き起
こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態で投与すること
により処置し得ることが理解される。従って、本発明はまた、ポリペプチドのレ
ベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方法は、このような個体に
、このような個体でポリペプチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを
含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
こされる状態は、本発明のポリペプチドを、好ましくは分泌形態で投与すること
により処置し得ることが理解される。従って、本発明はまた、ポリペプチドのレ
ベルの増加が必要な個体の処置方法を提供する。この方法は、このような個体に
、このような個体でポリペプチドの活性レベルを増加させる量のポリペプチドを
含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【０５８２】 例えば、ポリペプチドのレベルが低下した患者は、ポリペプチドを、１日用量
０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、ポリペプチドは
分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、実施例２
３に提供されている。
０．１〜１００μｇ／ｋｇで６日続けて服用する。好ましくは、ポリペプチドは
分泌形態である。投与および処方物に基づく投薬計画の正確な詳細は、実施例２
３に提供されている。
【０５８３】 （実施例２５：ポリペプチドのレベル上昇を処置する方法） アンチセンス技術を使用して本発明のポリペプチドの産生を阻害する。この技
術は、ガンのような様々な病因に起因するポリペプチド、好ましくは分泌形態の
ポリペプチドのレべルを低下させる方法の１つの例である。
術は、ガンのような様々な病因に起因するポリペプチド、好ましくは分泌形態の
ポリペプチドのレべルを低下させる方法の１つの例である。
【０５８４】 例えば、ポリペプチドのレベルが異常に上昇したと診断された患者に、アンチ
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性があれば
、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポリヌクレオチド
処方物は、実施例２３に提供されている。
センスポリヌクレオチドを、０．５、１．０、１．５、２．０および３．０ｍｇ
／ｋｇ／日で静脈内に２１日間投与する。この処置に対して十分な耐性があれば
、７日間の休薬期間後に、この処置を繰り返す。アンチセンスポリヌクレオチド
処方物は、実施例２３に提供されている。
【０５８５】 （実施例２６：遺伝子治療を使用する処置方法） 遺伝子治療の１つの方法は、ポリペプチドを発現し得る線維芽細胞を患者に移
植する方法である。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる
。得られた組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。小塊の組織を組織
培養フラスコの湿潤表面に置き、ほぼ１０片を各フラスコに置く。このフラスコ
を倒置し、しっかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラ
スコを反転させ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮培地
（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａ
ｍのＦ１２培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベー
トする。
植する方法である。一般に、線維芽細胞は、皮膚生検により被験者から得られる
。得られた組織を組織培養培地中に配置し、小片に分割する。小塊の組織を組織
培養フラスコの湿潤表面に置き、ほぼ１０片を各フラスコに置く。このフラスコ
を倒置し、しっかりと閉めた後、室温で一晩放置する。室温で２４時間後、フラ
スコを反転させ、組織塊をフラスコの底に固定させたままにし、そして新鮮培地
（例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＨａ
ｍのＦ１２培地）を添加する。次に、フラスコを３７℃で約１週間インキュベー
トする。
【０５８６】 この時点で、新鮮培地を添加し、次いで数日ごとに取り換える。さらに二週間
培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さらに大
きなフラスコにスケールアップする。
培養した後に単層の線維芽細胞が出現する。単層をトリプシン処理し、さらに大
きなフラスコにスケールアップする。
【０５８７】 Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルスの長末端反復が隣接するｐＭＶ−７（Ｋｉ
ｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理
する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して
精製する。
ｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，Ｐ．Ｔ．ら、ＤＮＡ，７：２１９−２５（１９８８））を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した後、仔ウシ腸ホスファターゼで処理
する。線状ベクターをアガロースゲルで分画し、そしてガラスビーズを使用して
精製する。
【０５８８】 本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡを、実施例１に記載のそれぞれ５
’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好ま
しくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨｉ
ｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線状骨格お
よび増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡリ
ガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメントを連結す
るのに適した条件下で維持する。次に、連結混合物を使用し、細菌ＨＢ１０１を
形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含む寒天上にプレーティングし、
ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有することを確認する。
’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを使用して増幅し得る。好ま
しくは、５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、そして３’プライマーはＨｉ
ｎｄＩＩＩ部位を含む。等量の、Ｍｏｌｏｎｅｙマウス肉腫ウイルス線状骨格お
よび増幅したＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを、Ｔ４ ＤＮＡリ
ガーゼの存在下で一緒に加える。得られた混合物を二つのフラグメントを連結す
るのに適した条件下で維持する。次に、連結混合物を使用し、細菌ＨＢ１０１を
形質転換する。次に、それを、カナマイシンを含む寒天上にプレーティングし、
ベクターが正確に挿入された目的の遺伝子を有することを確認する。
【０５８９】 アンフォトロピックｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、
１０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌ
ｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中の組織培養でコンフルエントな
密度まで増殖させる。次に、遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、パッケ
ージング細胞にベクターを形質導入する。このとき、パッケージング細胞は遺伝
子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞をプロデ
ューサー細胞という）。
１０％仔ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＤｕｌ
ｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅｓ培地（ＤＭＥＭ）中の組織培養でコンフルエントな
密度まで増殖させる。次に、遺伝子を含むＭＳＶベクターを培地に加え、パッケ
ージング細胞にベクターを形質導入する。このとき、パッケージング細胞は遺伝
子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（ここで、パッケージング細胞をプロデ
ューサー細胞という）。
【０５９０】 形質導入されたプロデューサー細胞に新鮮培地を添加し、次いで培地を１０ｃ
ｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地をミリポアーフィルターを通して濾過し、はがれたプ
ロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感染させる
。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そしてプロデ
ューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そして新鮮
培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽細胞が
感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈｉｓの
ような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することが必要であ
る。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、線維芽細胞を分析し、タンパク
質が産生されているか否かを決定する。
ｍプレートのコンフルエントなプロデューサー細胞から採取する。感染性ウイル
ス粒子を含む使用済み培地をミリポアーフィルターを通して濾過し、はがれたプ
ロデューサー細胞を除去した後、この培地を使用して、線維芽細胞を感染させる
。線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから培地を除去し、そしてプロデ
ューサー細胞からの培地で速やかに置き換える。この培地を除去し、そして新鮮
培地と置き換える。ウイルスの力価が高ければ、実質的にすべての線維芽細胞が
感染され、選択は必要ではない。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈｉｓの
ような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することが必要であ
る。一旦、線維芽細胞が効率的に感染したなら、線維芽細胞を分析し、タンパク
質が産生されているか否かを決定する。
【０５９１】 次に、操作された線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス３マイクロキ
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで宿主に移植する。
ャリアビーズ上でコンフルエントに増殖させた後のいずれかで宿主に移植する。
【０５９２】 本発明は、前記の説明および実施例で詳細に記載した通り以外にも、実施し得
ることは明らかである。本発明の数多くの改変および変更は、上記の教示を考慮
すれば可能であり、そしてそれ故、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
ることは明らかである。本発明の数多くの改変および変更は、上記の教示を考慮
すれば可能であり、そしてそれ故、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
【０５９３】 発明の背景、詳細な説明および実施例において引用した各文献（特許、特許出
願、雑誌論文、抄録、実験室マニュアル、書籍または他の開示を含む）の全開示
は、本明細書中に参考として援用される。さらに、同封して提出した配列表のハ
ードコピーおよび対応するコンピューター読み出し可能な形態の両方は、本明細
書中にそれらの全体が参考として援用される。
願、雑誌論文、抄録、実験室マニュアル、書籍または他の開示を含む）の全開示
は、本明細書中に参考として援用される。さらに、同封して提出した配列表のハ
ードコピーおよび対応するコンピューター読み出し可能な形態の両方は、本明細
書中にそれらの全体が参考として援用される。
【０５９４】
【表５】
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 7/00 Ａ６１Ｐ 5/00 11/06 7/00 19/02 11/06 29/00 １０１ 19/02 31/18 29/00 １０１ 35/00 31/18 35/02 35/00 37/00 35/02 Ｃ０７Ｋ 14/435 37/00 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/435 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 15/00 ＺＮＡＡ 1/21 Ａ６１Ｋ 37/02 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (31)優先権主張番号 ６０／０７０，６９２ (32)優先日 平成10年１月７日(1998．1．7) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０７０，７０４ (32)優先日 平成10年１月７日(1998．1．7) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 9410 Ｋｅｙ Ｗｅｓｔ Ａｖｅｎｕｅ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， Ｍａｒｙｌａｎ ｄ 20850， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅ ｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 ソペット， ダニエル アール． アメリカ合衆国 バージニア 22020， センタービル， スティルフィールド プ レイス 15050 (72)発明者 エブナー， レインハード アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザーズバーグ， シェルバーン テ ラス ナンバー316 9906 (72)発明者 ラフリュー， デイビッド ダブリュー． アメリカ合衆国 ディストリクト オブ コロンビア 20015， ワシントン， エ ヌ．ダブリュー．， ケサダ ストリート 3142 (72)発明者 ニ， ジャン アメリカ合衆国 メリーランド 20853， ロックビル， マナーフィールド ロー ド 5502 (72)発明者 ブリュワー， ローリー エイ． アメリカ合衆国 ミネソタ 55119−4321， セント ポール， ファン ダイク ス トリート 410， アパートメント 115 (72)発明者 オルセン， ヘンリック エス． アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザーズバーグ， ケンドリック プ レイス ナンバー24 182 (72)発明者 デュアン， ロザンヌ ディー． アメリカ合衆国 メリーランド 20817， ベセスダ， ノースフィールド ロード 5515 (72)発明者 ローゼン， クレイグ エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20882， レイトンズビル， ローリング ヒル ロード 22400
Claims (23)
- 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号Ｘのポリヌクレオチドフラグメント、または配列番号Ｘにハイ
ブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列のポリヌクレオチ
ドフラグメント； （ｂ）配列番号Ｙのポリペプチドフラグメント、または配列番号Ｘにハイブリ
ダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされる
ポリペプチドフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号Ｙのポリペプチドドメイン、または配列番号Ｘにハイブリダイ
ズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリ
ペプチドドメインをコードする、ポリヌクレオチド； （ｄ）配列番号Ｙのポリペプチドエピトープ、または配列番号Ｘにハイブリダ
イズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポ
リペプチドエピトープをコードする、ポリヌクレオチド； （ｅ）生物学的活性を有する、配列番号Ｙのポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含
まれるｃＤＮＡ配列； （ｆ）配列番号Ｘの改変体であるポリヌクレオチド； （ｇ）配列番号Ｘの対立遺伝子改変体であるポリヌクレオチド； （ｈ）配列番号Ｙの種相同体をコードするポリヌクレオチド； （ｉ）（ａ）〜（ｈ）において特定されるポリヌクレオチドのいずれか１つに
ストリンジェント条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであって、こ
こで、該ポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみのヌクレオチド配列
を有する核酸分子に、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしない、ポリヌ
クレオチド、 からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有
するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。 - 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、分泌タンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｙとして同
定される配列、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号Ｚに
含まれるｃＤＮＡ配列によってコードされるポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドフラグメントが、配列番号Ｘの全体の
ヌクレオチド配列、または配列番号Ｘにハイブリダイズし得るＡＴＣＣ寄託番号
Ｚに含まれるｃＤＮＡ配列を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項５】 前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかか
らの連続するヌクレオチド欠失を含む、請求項２に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項６】前記ヌクレオチド配列が、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかから
の連続するヌクレオチド欠失を含む、請求項３に記載の単離された核酸分子。 - 【請求項７】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、組換えベクタ
ー。 - 【請求項８】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、組換え宿主細
胞を作製する方法。 - 【請求項９】 請求項８に記載の方法によって産生される、組換え宿主細胞
。 - 【請求項１０】 ベクター配列を含む、請求項９に記載の組換え宿主細胞。
- 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の
、ポリペプチドフラグメント； （ｂ）生物学的活性を有する、配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含ま
れるコードされた配列の、ポリペプチドフラグメント； （ｃ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の
、ポリペプチドドメイン； （ｄ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の
、ポリペプチドエピトープ； （ｅ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の
、分泌形態； （ｆ）配列番号Ｙ、またはＡＴＣＣ寄託番号Ｚに含まれるコードされた配列の
、全長タンパク質； （ｇ）配列番号Ｙの改変体； （ｈ）配列番号Ｙの対立遺伝子改変体；または （ｉ）配列番号Ｙの種相同体、 からなる群から選択される配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、
単離されたポリペプチド。 - 【請求項１２】 前記分泌形態または前記全長タンパク質が、Ｃ末端または
Ｎ末端のいずれかからの連続するアミノ酸欠失を含む、請求項１１に記載の単離
されたポリペプチド。 - 【請求項１３】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドに特異的に結
合する、単離された抗体。 - 【請求項１４】 請求項１１に記載の単離されたポリペプチドを発現する、
組換え宿主細胞。 - 【請求項１５】 単離されたポリペプチドを作製する方法であって、 （ａ）該ポリペプチドが発現されるような条件下で、請求項１４に記載の組換
え宿主細胞を培養する工程；および （ｂ）該ポリペプチドを回収する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項１６】 請求項１５に記載の方法によって産生される、ポリペプチ
ド。 - 【請求項１７】 医学的状態を予防、処置、または緩和する方法であって、
請求項１１に記載のポリペプチドまたは請求項１に記載のポリヌクレオチドの治
療有効量を、哺乳動物被験体に投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項１８】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
る感受性を診断する方法であって、 （ａ）請求項１に記載のポリヌクレオチドにおいて変異の存在または非存在を
決定する工程；および （ｂ）該変異の存在または非存在に基づいて病理学的状態、または病理学的状
態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項１９】 被験体において病理学的状態、または病理学的状態に対す
る感受性を診断する方法であって、 （ａ）生物学的サンプルにおいて請求項１１に記載のポリペプチドの発現の存
在または量を決定する工程、および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて病理学的状態、または
病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２０】 請求項１１に記載のポリペプチドに対する結合パートナー
を同定する方法であって、 （ａ）請求項１１に記載のポリペプチドを結合パートナーと接触させる工程；
および （ｂ）該結合パートナーが該ポリペプチドの活性をもたらすかどうかを決定す
る工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２１】 配列番号ＹのｃＤＮＡ配列に対応する、遺伝子。
- 【請求項２２】 生物学的アッセイにおいて活性を同定する方法であって、
ここで該方法が、以下： （ａ）細胞において配列番号Ｘを発現させる工程； （ｂ）その上清を単離する工程； （ｃ）生物学的アッセイにおいて活性を検出する工程；および （ｄ）該活性を有する該上清においてタンパク質を同定する工程、 を包含する、方法。 - 【請求項２３】 請求項２０に記載の方法によって産生される、産物。
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