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JP2002510490A - Ｌｙｓｔタンパク質複合体およびｌｙｓｔ相互作用タンパク質 - Google Patents

Ｌｙｓｔタンパク質複合体およびｌｙｓｔ相互作用タンパク質

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Publication number
JP2002510490A
JP2002510490A JP2000542454A JP2000542454A JP2002510490A JP 2002510490 A JP2002510490 A JP 2002510490A JP 2000542454 A JP2000542454 A JP 2000542454A JP 2000542454 A JP2000542454 A JP 2000542454A JP 2002510490 A JP2002510490 A JP 2002510490A
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JP
Japan
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lyst
protein
complex
seq
derivative
Prior art date
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Pending
Application number
JP2000542454A
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English (en)
Inventor
クリッシュナン ナンダバラン，
スティーブン キングスモア，
Original Assignee
キュラジェン コーポレイション
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by キュラジェン コーポレイション filed Critical キュラジェン コーポレイション
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質と、改変酵母ツーハイブリッドアッセイ系によってＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用すると同定されたタンパク質との複合体との複合体に関する。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用することが同定されたタンパク質は、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０である。従って、本発明は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０との複合体、それらの誘導体、フラグメントならびにアナログを提供する。本発明はまた、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０タンパク質をコードする核酸、またはそれらの誘導体、フラグメントならびにアナログを提供する。特定の疾患および障害（特に、アトピー性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患、癌、色素沈着障害、血小板機能不全およびウイルス感染）を処置ならびに／または予防することにおける有効性についてこの複合体もしくはタンパク質をスクリーニングする方法もまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、国立標準技術研究所により受給された認可番号７０ＮＡＮＢ５Ｈ１
０６６の下、合衆国の支援でなされた。合衆国政府は、本発明に特定の権利を有
する。
【０００２】 （発明の分野） 本発明は、他のタンパク質との複合体における、リソソーム関連ＬＹＳＴタン
パク質または新規相同体ＬＹＳＴ−２タンパク質に関する。特に、本発明は、１
４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１αキナーゼ、ＫＢ
０７、Ｅｆｓ、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβサブユニット（ＳＵ）、カルモ
ジュリン、トロポニン、イムポルチン（ｉｍｐｏｒｔｉｎ）β、Ｆｔｅ−ｌ、エ
ストロゲンレセプター関連タンパク質（ｈＥＲＲ１）、イモーゲン（ｉｍｏｇｅ
ｎ）３８、アトロフィン（ａｔｒｏｐｈｉｎ）−１、ＧＢＤＲ１、ＤＧＳ−Ｉ、
ノルビン（ｎｏｒｂｉｎ）（ＫＩＡＡ０６０７）、ＯＰＡ含有タンパク質、およ
びＭ４タンパク質、ならびに本明細書でさらに特徴付けられる１０の新規ＬＹＳ
Ｔ相互作用タンパク質（「ＬＩＰ−１」〜「ＬＩＰ−１０」）：を含むリストか
ら選択される１つ以上のタンパク質とのＬＹＳＴタンパク質の複合体に関する。
本発明はまた、１４−３−３タンパク質、ＸＡＰ−４、およびＨＢＦ−Ｇ２：を
含むリストから選択される１つ以上のタンパク質とのＬＹＳＴ−２タンパク質の
複合体に関する。本発明は、ＬＹＳＴ複合体およびＬＹＳＴ−２複合体に特異的
な抗体、および特にスクリーニング、診断、予後および治療におけるそれらの使
用を含む。本発明はさらに、新規ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ
１０の核酸、タンパク質およびそれらの誘導体、フラグメントおよびアナログ、
ならびに上記新規ＬＹＳＴ−２タンパク質およびＬＩＰタンパク質の新規なセッ
トに対して特異的な抗体に関する。
【０００３】 （発明の背景） （障害および疾患におけるＬＹＳＴの役割） リソソームのチェディアック−東症候群タンパク質ＬＹＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ
受託番号Ｕ６７６１５）は、マウスのリソソーム輸送レギュレーターベージュ（
ｂｅｉｇｅ）（ＢＧ）のヒト相同体である（Ｂａｒｂｏｓａら、１９９６、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３８２：２６２−２６５；Ｂａｒｂｏｓａら、１９９７、Ｈｕｍａｎ
Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ６：１０９１−１０９８）。両タンパク質は、リ
ソソームにとって、従って細胞機能にとって重要である。ＬＹＳＴとその他のタ
ンパク質との間の相互作用の同定は、リソソームおよびリソソーム関連障害およ
び疾患における機能不全または欠損症に関連するアトピー性障害の処置およびア
ッセイの開発に有用である。本発明に関連する障害および疾患の状態の例を以下
に分類する。
【０００４】 （チェディアック−東（ＣＨ）症候群） チェディアック−東症候群（ＣＨＳ）は、ヒトにおいて見出され、および「ベ
ージュ」（ｂｇ）マウス系統でモデル化された常染色体劣性免疫欠損疾患である
。病気に冒された個体は、巨大な、核周囲のリソソーム、および欠損顆粒球性の
、ナチュラルキラーおよび細胞傷害性Ｔ細胞機能を有する。この障害は、病気に
冒された個体が、感染または悪性により未熟で死亡するという点で致死的である
（Ｂａｅｔｚら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６１２２−６１３１
）。この障害は、栄養不足，好中球減少症をともなう重篤な免疫学的欠損、ナチ
ュラルキラー細胞の欠如、異常血小板機能（出血傾向）、ならびに末梢神経障害
および運動失調のような神経学的障害を有する色素低下症、重篤な免疫学的欠損
により特徴付けられる（Ｃｈｅｄｉａｋ、１９５２、Ｒｅｖ．Ｈｅｍａｔｏｌ
７：３６２−３６７；Ｈｉｇａｓｈｉ、１９５４、Ｔｏｃｈｏｋｕ Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．５９：３１５−３３２）。
【０００５】 リソソームへの、およびリソソームからの細胞内タンパク質輸送が、ＣＨＳ患
者では狂っている；巨大なベシクルがリソソームから生じ、そしてタンパク質が
細胞区画中に誤ソートされる。顆粒細胞（白血球、メラノサイト、巨核球および
小脳プルキンエ細胞）の分泌リソソームにおける機能的欠損は、ＣＨＳの多様な
臨床特徴を説明する、統一仮説を提供する（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、１９９６、Ｓ
ｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：１０９−１１５）。ナチュラルキラー細胞およ
び細胞傷害性Ｔ細胞による損傷した細胞溶解は、ＣＨＳの免疫欠損に寄与し、そ
しておそらく標的細胞結合に際する巨大な溶解性顆粒の怠惰なエキソサイトーシ
スの結果である（Ｂａｅｔｚら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：６１
２２−６１３１）。メラノサイトからのメラノソームチロシンヒドロキシラーゼ
（Ｗｉｎｄｈｏｒｓｔら、１９６８、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．５
０：９−１８）および血小板濃密顆粒成分（Ｎｏｖａｋら、１９８５、Ｂｌｏｏ
ｄ ６６：１１９６−１２０１）は、ＣＨＳでは誤ソートされ、それは、白皮症
、出血素質および神経変性疾患のような他の特徴を生じる。白皮症は、メラノソ
ームへの送達の代わりにエキソサイトーシスに起因するメラノサイトにおけるチ
ロシナーゼの欠損を反映する。損傷した血小板凝集および出血傾向は、巨核球お
よび血小板における濃密顆粒の不在に起因する。
【０００６】 タンパク質ソート欠損とともに、リソソーム、メラノソーム、血小板濃密顆粒
および細胞傷害性顆粒を含む巨大封入体および巨大細胞内ベシクルが、ＣＨＳ患
者で形成される（Ｐｅｒｏｕら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：
２９７９０−２９７９４、Ｊｏｎｅｓら、１９９２、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．６５：２１９−２２６；Ｂｕｒｋｈａｒｄｔら、１９
９３、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：１８４５−１８５６；Ｈｏｌｃｈｏｍｂｅ
ら、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ５：１３１−１４０）。同
様の異常がベージュ（ｂｇ）マウスで生じる（Ｌｕｔｚｎｅｒら、１９６６、Ｈ
ｅｒｅｄｉｔｙ ５８：２９９−３００）。リソソームおよび後期エンドソーム
へのならびにそれからのベシクル輸送は、ＣＨＳを有するヒトおよびベージュ変
異を保持するマウスの両方において、リソソームおよび顆粒酵素の異常な区画化
とともに欠損している。細胞内タンパク質輸送を調節する膜結合シグナル伝達複
合体の成分として、ベージュ／ＣＨＳタンパク質の役割が、細胞研究から推測さ
れている。表現型研究は、ＣＨＳにおける主要な欠陥が、出芽、ドッキング、ま
たはリソソームおよび標的膜の融合を調節するタンパク質における変異であるこ
とを示唆する。
【０００７】 マウスベージュ（ＢＧ）タンパク質およびヒトチェディアック−東症候群タン
パク質（ＬＹＳＴ）は、クローン化され、そして相同であることが示されている
（Ｂａｒｂｏｓａら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ ３８２：２６２−２６５；Ｂａ
ｒｂｏｓａら、１９９７、Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ６：１０９
１−１０９８）。このＬＹＳＴ遺伝子の１１，４０３ｂｐオープンリーディング
フレームは、４２９，１５３Ｄａの分子量を有する３，８０１アミノ酸のポリペ
プチドを予測する（Ｎａｇｌｅら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
１４：３０７−３１１）。上記の相同体は、ＢＥＡＣＨ（ベージュおよびＣＨ
Ｓ）と呼ばれる保存されたドメインを有する。ＬＹＳＴタンパク質は、らせん状
ドメインを形成することが予測されており（Ｂａｒｂｏｓａら、１９９６、Ｎａ
ｔｕｒｅ ３８２：２６２−２６５）、そして長桿を形成し易いＡＲＭ（Ｐｅｉ
ｆｅｒら、１９９４、Ｃｅｌｌ ７６：７８９−７９１）およびＨＥＡＴ（Ａｎ
ｄｒａｄｅ＆Ｂｏｒｋ、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．１１：１１５−
１１６）反復モチーフに最も緊密に似る一連の疎水性ヘリックスからなる。既知
のＨＥＡＴ反復モチーフ含有タンパク質の多くは、ベシクル輸送に関連している
。
【０００８】 ＬＹＳＴのＣ末端領域は、７つの連続する「ＷＤ」反復モチーフを含み（Ｓｏ
ｎｄｅｋら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ ３７９：３６９−３７４）、これは、７
つ羽根のプロペラ様二次構造に配置されるβシートを形成する。この領域は、ヘ
テロトリマーＧタンパク質のβサブユニットに類似し、そしてタンパク質−タン
パク質相互作用を媒介すると考えられている。ＬＹＳＴは、微小管重合を調節し
、そして細胞内シグナル伝達のリレーとして作用するコイルドコイルリンタンパ
ク質である、スタスミン（ｓｔａｔｈｍｉｎ）（オンコタンパク質１８）に類似
の配列領域を有する（Ｂａｒｂｏｓａら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ ３８２：２
６２−２６５）。
【０００９】 ＬＹＳＴ転写物は、胸腺、胎児胸腺、脾臓および脳で優勢である。ＬＹＳＴは
、脳組織、末梢血白血球および骨髄に豊富である。ヒトにおけるｍＲＮＡイソ形
態の発現分布は、ＣＨＳ患者（免疫欠損、血小板貯蔵プール欠損、神経学的症状
発現、白皮症）で観察された臨床特徴のパターンと一致する（Ｂａｒｂｏｓａら
、１９９７、Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ６：１０９１−１０９８
）。 要約すれば、ＬＹＳＴは、シグナル伝達、ベシクル輸送、酸性細胞内オル
ガネラの形成およびエキソサイトーシス、ならびにタンパク質輸送のような生理
学的プロセス；アトピー性疾患、自己免疫疾患、神経変性疾患のような変性障害
、腫瘍形成および腫瘍進行のような過剰増殖障害、眼・皮膚白皮症、色素低下症
、および血小板機能不全を含むがこれらに限定されない病理学的プロセスを含む
がこれらに限定されない多くの機能的活性において中心的に関与する。
【００１０】 （先行技術における欠陥） チェディアック−東症候群の処置および診断のためのいくつかの方法が、マウ
ス（ベージュ）およびヒト（ＬＹＳＴ）におけるＣＨ遺伝子の単離および特徴付
けの基礎を基に示唆されている（国際特許ＷＯ９７／２８２６２）。これらの最
近の研究に拘らず、ＬＹＳＴタンパク質が細胞内で別のタンパク質と相互作用す
るという思索のみがある。どのタンパク質がＬＹＳＴと実際に相互作用するかに
ついては何も知られていない。マウスでは、細胞質ベージュタンパク質が、次に
ベシクルおよびオルガネラの細胞内膜と相互作用する中間タンパク質と結合し得
ることが示唆されている。ＬＹＳＴ中のタンパク質相互作用ドメインには、タン
パク質−タンパク質相互作用モチーフであることが示されている「ＷＤ」反復が
存在することが示唆されている。
【００１１】 リソソーム輸送の理解に寄与することに加えて、ＬＹＳＴ相互作用タンパク質
の同定は、いくつかの理由のために医学的に重要である： （１）第１に、チェディアック−東症候群（ＣＨＳ）の改善された分子的理解は
、現在考慮されていない処置を示唆し得る。ＣＨＳを有する患者は、なお、代表
的には、幼年時代に死亡する。 （２）第２に、新たな治療標的が、肥満細胞脱顆粒、ならびに喘息およびじんま
疹のような疾患における結果として起こる障害の回復の制御のために同定され得
る。 （３）第３に、ＣＨＳマウスはループス腎炎から保護されるという観察（Ｃｌａ
ｒｋら、１９８２）は、ＬＹＳＴ経路が、自己免疫疾患における治療標的を代表
するということを示唆する。
【００１２】 改変された酵母ツーハイブリッド系を用いることにより、本発明は、かなり多
くのＬＹＳＴ相互作用性タンパク質を同定した。ＬＹＳＴとその他のタンパク質
との間の相互作用の同定は、喘息、鼻ポリープ、枯草熱鼻炎、およびじんま疹の
ようなアトピー性障害；ＣＨＳ、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、
炎症性腸疾患、真性糖尿病、および多発性硬化症のような自己免疫疾患；神経学
的障害および疾患；特定の形態の癌；色素沈着欠陥；および出血傾向のための処
置およびアッセイの開発に有用であり得る。
【００１３】 （シグナル伝達プロセスおよびタンパク質輸送） 以下のセクションは、本明細書では、ＬＹＳＴと相互作用するとして同定され
た、シグナル伝達プロセスおよびタンパク質輸送に関与する、以前に同定された
タンパク質を記載する。
【００１４】 （１４−３−３タンパク質） 本発明で同定されたＬＹＳＴ相互作用体は、ヒト１４−３−３タンパク質（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ５６４６８、Ｎｉｅｌｓｅｎ、１９９１、Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０８８：４２５−４２８）である。広範な範
囲の生物および組織が、高度に保存された１４−３−３タンパク質のファミリー
を含み、これは、シグナル伝達、エキソサイトーシスおよび細胞サイクル調節を
含む多くの多様な機能と関連している。１つのヒト１４−３−３タンパク質は、
約２８ｋＤａ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ５６４６８）の豊富な酸性脳タンパク
質である。このタンパク質は、チロシンおよびカルシウム／カルモジュリン依存
性プロテインキナーゼＩＩを活性化する。
【００１５】 １４−３−３タンパク質は、膜結合形態および細胞質形態として、ともに細胞
中に存在する（Ｍａｒｔｉｎら、１９９４、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６３：２
２５９−２２６５；Ｒｏｔｈら、１９９４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０１：３０
５−３１０）。これらは、いくつかの細胞タイプにおいて、カルシウム依存性エ
キソサイトーシスを刺激し、プライミングステージで、見かけ上、プロテインキ
ナーゼＣ（ＰＫＣ）により活性化され、そしてアクチン再体制化に関連する様式
で作用する（Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎら、１９９５、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．
１３０：１０６３−１０７０；Ｂｕｒｇｏｙｎｅら、１９９３、Ｊ．Ａｎａｔ．
１８３：３０９−３１４；ＲｏｔｈおよびＢｕｒｇｏｙｎｅ、１９９５、ＦＥＢ
Ｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３７４：７７−８１）。しかし、ＬＹＳＴタンパク質につ
いてと同様に、その正確なメカニズムは未知である。
【００１６】 １４−３−３タンパク質はまた、シグナル伝達で重要である：１４−３−３タ
ンパク質はＰＫＣを結合し、ＰＫＣによりリン酸化され、そしてＰＫＣ活性を阻
害する。ＣＨＳで記載されるＰＫＣ異常は、ＰＫＣに対する１４−３−３の影響
に似ている（Ｉｔｏら、１９８９、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．１６０：４３３−４４０；Ｓａｔｏら、１９９０、Ｊ．Ｌｅｕｋ
ｏｃｙ．Ｂｉｏｌ．４８：３７７−３８１）。１４−３−３タンパク質はまた、
セリン／トレオニンプロテインキナーゼＲａｆ−１に結合し、そしてＲａｆ−１
キナーゼ活性に必要である（１（Ｚｈａｎｇら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２７２：１３７１７−１３７２４；Ｍｉｃｈａｕｄら、１９９５、Ｍｏｌ
．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：３３９０−３３９７）。１４−３−３はまた、Ｂ
ｃｒのようなその他のキナーゼと相互作用し、そしてＲａｆおよびＢｃｒと三重
複合体を形成し得る（ＢｒａｓｅｌｍａｎおよびＭｃＣｏｒｍｉｃｋ、１９９５
、ＥＭＢＯ Ｊ．１４：４８３９−４８４８）。ＬＹＳＴの提案された作用と同
様に、１４−３−３は、シグナル伝達およびエキソサイトーシス経路の成分間の
相互作用を容易にする足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）タンパク質として機能するよう
である（Ａｉｔｋｅｎら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２
３：６０５−６１１）。
【００１７】 Ｒａｆ／ＭＥＣＫ／ＥＲＫ／ＭＡＰシグナル伝達経路および１４−３−３タン
パク質は、アポトーシスの開始に役割を演じていることが示唆されている。アポ
トーシスの調節の障害は、気管支喘息、ＡＩＤＳ、および新生物性疾患を含む、
自己免疫疾患およびアトピー性疾患の病因に重要な役割を演じ得る（Ｊａｇｉｅ
ｌｌｏ ＆ Ｋｒａｓｎｏｗｓｋａ、１９９７、Ｐｏｓｔｅｐｙ．Ｈｉｇ．Ｍｅ
ｄ．Ｄｏｓｗ．５１：３８５−３９８）。アポトーシスの誘導とシグナル伝達障
害との間には連鎖がある。
【００１８】 （ＨＳ１タンパク質） 高度に保存され、そして遍在して発現される真核生物１４−３−３ファミリー
タンパク質の別のメンバーは、１４−３−３βタンパク質とも呼ばれる、ヒトＨ
ｓ−１であり、これは、チロシンおよびトリプトファンヒドロキシラーゼのアク
チベーターである（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ５７３４６：Ｌｅｆｆｅｒｓら、
１９９３、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３１：９８２−９９８）。ＨＳ１タンパク
質は、１４−３−３タンパク質に８０％同一であり、プロテインキナーゼＣ阻害
タンパク質（ＫＣＩＰ）に関連し、そして約２８ｋＤａの豊富かつ遍在して発現
される酸性タンパク質である。ＨＳ１タンパク質は、精製されたシナプス膜中に
存在する。それは、シナプス膜で選択的に発現されるので、ＨＳ１タンパク質は
、エキソサイトーシスを調節することにより神経伝達に影響し得る（Ｍａｒｔｉ
ｎら、１９９４、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６３：２２５９−２２６
５）。ＨＳ１タンパク質はまた、哺乳動物および鳥類の脳でリン酸化形態で存在
する。このＨＳ１タンパク質は、有糸分裂誘発および分化のメディエーターであ
り、そしてレセプターおよび非レセプターチロシンキナーゼにより生成される発
生および増殖シグナルの伝達に関与する鍵となるタンパク質である、Ｒａｆ−１
と相互作用し、かつ活性化する（Ａｉｔｋｅｎら、１９９５、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７０：５７０６−５７０９；Ｆａｎｔｌら、１９９４、Ｎａｔｕｒｅ
３７１：６１２−６１４）。ＨＳ１タンパク質はまた、インスリンレセプター
基質−１と相互作用する（Ｋｏｓａｋｉら、１９９８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２７３：９４０−９４４）（イモーゲン３８、後述を参照のこと）。
【００１９】 （肝細胞成長因子で調節されるチロシンキナーゼ基質タンパク質（ＨＲＳ）） 肝細胞成長因子で調節されるチロシンキナーゼ基質「ＨＲＳ」タンパク質（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ受託番号Ｄ８４０６４、例えば、Ｌｕら、１９９８、Ｇｅｎｅ ２
１３：１２５−１３５を参照のこと）は、本発明において、ＬＹＳＴと相互作用
することが示された。ＬＹＳＴと相互作用するＨｒｓの領域（アミノ酸８４−７
７７）は、構造的に保存された推定のジンクフィンガードメインおよびＡＴＰａ
ｓｅ触媒部位を含む。Ｈｒｓは、細胞の細胞質中に局在化している。Ｈｒｓは、
ＡＴＰａｓｅであるラットＨｒｓ−２と８０％同一である。
【００２０】 重要なことは、Ｈｒｓは、ＬＹＳＴの作用のメカニズムをまた説明し得る２つ
の機能を有する。第１に、Ｈｒｓは、おそらくは、ＳＮＡＲＥタンパク質複合体
の成分である、ＳＮＡＰ−２５への結合を通じて、用量依存様式でエキソサイト
ーシスを阻害する（（Ｂｅａｎら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８２６−
８２９）．）。ＳＮＡＲＥ複合体は、シナプスベシクルドッキングにおいて良く
規定された役割を有するが、カルシウム依存性エキソサイトーシス膜融合反応に
おけるＳＮＡＰ２５関与に対する証拠もまたある（Ｂａｎｅｒｊｅｅら、１９９
６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２０２２７−２０２３０）。カルシウム
および亜鉛は、ＨｒｓのＳＮＡＰ２５への結合を阻害し、そしてエキソサイトー
シスを促進する（Ｂｅａｎら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８２６−８２
９）。
【００２１】 第２に、Ｈｒｓは、サイトカイン媒介細胞内シグナル伝達におけるリレーであ
る、ＳＴＡＭ（シグナル伝達アダプター分子）と相互作用する（Ａｓａｏら、１
９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３２７８５−３２７９１）。ＳＴＡ
Ｍへの結合において、ＨｒｓはＳＴＡＭ媒介シグナル伝達を抑制する。細胞のサ
イトカイン刺激は、ＳＴＡＭ媒介細胞増殖シグナル伝達およびＨｒｓのリン酸化
に至る。
【００２２】 （ＢＭＫ１αキナーゼ） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、ＢＭＫ１αキナーゼである（
ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ２９７２５）。有糸分裂活性化タンパク質（ＭＡＰ）
キナーゼＢＭＫ１は、ＥＧＦ誘導細胞増殖および細胞サイクルを通じる進行に必
要である別のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の一部分である。例えば、Ｌｅｅ
ら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１
３：７１５−７２４を参照のこと。酸化還元感受性キナーゼＢＭＫ１は、内皮細
胞における、剪断応力媒介遺伝子発現において重要な役割を演じる。
【００２３】 （ＫＢ０７） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、ＫＢ０７キナーゼである（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０６４６０６、直接提出）。この遺伝子は、ヒト樹状
細胞から単離された。そしてチロシンキナーゼに類似している。従って、ＫＢ０
７は、シグナル伝達経路で役割を演じるようである。
【００２４】 （ＥＦＳ） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、ヒトリンタンパク質シグナル
伝達タンパク質Ｅｆｓ（胎児Ｆｙｎ関連基質）である（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号
ＡＢ００１４６６；Ｉｓｈｉｎｏら、１９９７、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５：１７
４１−１７４５）。Ｅｆｓは、Ｓｒｃ相同３（ＳＨ３）ドメイン、Ｓｒｃ相同２
（ＳＨ２）ドメインに対する推定リガンドのクラスター、およびＳＨ３結合コン
センサスを有するプロリンリッチな配列を含む、細胞内シグナル伝達に重要な特
徴的領域を有する（Ｉｓｈｉｎｏら、１９９５、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １１：２３
３１−２３３８）。Ｅｆｓは、Ｔ細胞活性化、興奮−収縮カップリング、および
プログラム化された細胞死（アポトーシス）を含むシグナル伝達プロセスにおい
て役割を演ずる非レセプタープロテインチロシンキナーゼである、Ｆｙｎと関連
することが見いだされている（Ｍａｒｋｓ、１９９７、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏ
ｌ．２７２：Ｈ５９７−Ｈ６０５）。
【００２５】 （ＯＳ９前駆体） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、ＯＳ−９である（ＧｅｎＢａ
ｎｋ受託番号Ｕ４１６３５）。ＯＳ−９前駆体をコードする遺伝子は、ヒト癌で
頻繁に増幅される領域である、１２ｑ１３−１５染色体内に位置する。さらに、
この遺伝子は、ヒト組織において遍在して発現され、そして肉腫において、ＣＤ
Ｋ４遺伝子と頻繁に同時増幅されて、増幅される。例えば、Ｓｕら、１９９６、
Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．１５：２７０−２７５を参照のこと。従って、これ
は、細胞増殖制御に関与し得る。
【００２６】 （カゼインキナーゼＩＩβサブユニット） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、カゼインキナーゼＩＩβサブ
ユニット（カゼインキナーゼＩＩβＳＵ）である、遍在性セリン／トレオニンプ
ロテインキナーゼである（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｍ３０４４８、Ｊａｋｏｂｉ
ら、１９８９、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８３：２２７−２３３）。この
高度に保存された酵素は、核および細胞質中に存在し、そしてシグナル伝達およ
びベシクル輸送の調節の両方において役割を持つ別のＬＹＳＴ相互作用体である
。
【００２７】 カゼインキナーゼＩＩβＳＵは、触媒性αサブユニットを安定化し、そして基
質との相互作用を調整する調節サブユニットである（Ａｌｌｅｎｄｅ ＆ Ａｌ
ｌｅｎｄｅ、１９９５、ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：３１３−３２３）。いくつかのカ
ゼインキナーゼＩＩβＳＵ基質は、ベシクル輸送において重要であり、シナプト
タグミン、シンタキシン（ｔ−ＳＮＡＲＥ）、シナプトブレビン（ｖ−ＳＮＡＲ
Ｅ）、カルモジュリン、プロテインキナーゼＣ、ＵＮＣ１８およびクラスリンを
含む。（Ｄａｖｅｌｔｏｖら、１９９３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：６
８１６−６８２２；Ｎｉｅｌａｎｄｅｒら、１９９５、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ
．６５：１７１２−２０；Ｓａｃｋｓ ＆ Ｍａｚｕｓ、１９９４、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ ３４：２５１−２５９；Ｆｏｓｔｅｒら、１
９９８、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７：１１０８９−９６；Ｓｈｉｍａｎｚ
ｋｉら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１４５４８−５３）。
【００２８】 （カルモジュリン） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、エキソサイトーシスを含む、
多くのカルシウム依存性相互作用に基本的に関与している、低分子量細胞質タン
パク質である、カルモジュリンである（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｄ４５８８７）
。カルモジュリンの１２のカルボキシ末端アミノ酸は、本発明で開示されるよう
に、ＬＹＳＴのＮ末端と相互作用する。これらのカルボキシ末端アミノ酸は、カ
ルシウム結合部位およびαヘリックスの末端を形成する。
【００２９】 カルモジュリンは、膜融合で重要な役割を有している：それは、分泌顆粒のよ
うな細胞内オルガネラに結合し、そしてＣＨＳで異常である、血小板、マスト細
胞および白血球を含む、いくつかの細胞タイプにおける膜融合およびエキソサイ
トーシスに必要である（Ｓｈｅｎｇら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ ３７９：４５
４１−４５４）。特に、酸性オルガネラのＳＮＡＲＥ媒介ドッキングは、局所カ
ルシウム放出を刺激して、カルモジュリンをドッキングしたベシクルに強固に結
合させ、そして膜融合を促進させることが示されている（Ｐｅｔｅｒ ＆ Ｍａ
ｙｅｒ、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ ３９６：５７５−５８０；Ｓｃｈｅｋｍａｎ
、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ ３９６：５１４−５１５）。
【００３０】 さらに、カルモジュリンは、ＨｒｓとＳＮＡＰ２５の相互作用を阻害する（上
記を参照のこと）。Ｃａ２＋シグナルによるエキソサイトーシスは、ベシクルド
ッキング複合体のタンパク質である、ＳＮＡＰ２５によりブロックされる（Ｈｒ
ｓの背景、前述を参照のこと）。αＳＮＡＰ、１４−３−３タンパク質、および
カルモジュリンは、透過処理副腎クロム親和性細胞におけるエキソサイトーシス
の調節を行う（Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎら、１９９５、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ
．１３０：１０６３−１０７０）。すべての３つのタンパク質、αＳＮＡＰ、１
４−３−３タンパク質、およびカルモジュリンは、カテコールアミン分泌におい
てＣａ２＋依存性増加を導く。これら３つのタンパク質はまた、エキソサイトー
シスに対して別のステージ特異的な作用を有する。
【００３１】 （トロポニンＩ） 本発明で同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、筋繊維収縮に関与するタンパ
ク質である、トロポニンＩである（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ５４１６３）。ト
ロポニンＩは、骨格筋および心筋収縮のカルシウム調節に関与する細繊維結合ト
ロポニン−トロポミオシン複合体のサブユニットである。トロポニンＩを含む細
胞骨格タンパク質は、心筋症において中心的役割を演じている。心筋症は、病的
状態および未成熟死亡をもたらす、子供および成人における重症の心筋障害であ
る。
【００３２】 （イムポルチンβサブユニット） 本発明における別のＬＹＳＴ相互作用体（ｉｎｔｅｒａｃｔａｎｔ）を、イム
ポルチンβサブユニット（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｌ３８９５１、Ｇｏｒｌｉｃ
ｈら、１９９５Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．５：３８３−３９２）と同定した。６０ｋ
Ｄａ（α）および９０ｋＤａ（β）サブユニットからなる可溶性タンパク質であ
るイムポルチンは、細胞核への選択的なタンパク質輸送の最初の工程について必
須である。イムポルチンβおよびイムポルチンαの複合体は、核タンパク質輸送
のために必須である。イムポルチンαは、核局在化シグナル結合部位を提供し、
イムポルチンβは、孔への最初の結合（ｄｏｃｋｉｎｇ）の部位を提供する（Ｇ
ｏｒｌｉｃｈら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ ３７７：２４６−２４８）。イムポ
ルチンβは、核輸送に必要であるＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質であるＲｎａ１
ｐと相互作用する（Ｋｏｅｐｐ，１９９６、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３３：
１１６３−１１６７）。
【００３３】 ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）Ｒｅｖタンパク質核局在化シグナル
は、ヒトイムポルチンβへの特異的な結合を媒介する（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎおよ
びＰｅｒｃｉｐａｌｌｅ，１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７４：６９３−
７０７）。Ｒｅｖタンパク質は、スプライシングされていないＨＩＶ−１のプレ
ｍＲＮＡに結合し、そしてそのｍＲＮＡを核から輸送する。Ｒｅｖ自体は、核と
細胞質との間を「シャトル」し得る。この二方向の輸送は、２つの特異的なＲｅ
ｅ配列（核局在化シグナルおよび異なる核排出シグナル）によって媒介される。
Ｒｅｖおよびイムポルチンαは、（アルギニンリッチ配列を介して）イムポルチ
ンβの類似領域に結合する。従って、イムポルチンβサブユニットは、核タンパ
ク質移行複合体の必須成分である。
【００３４】 （ＦＴＥ−ｌ） 推定のｖ−ｆｏｓ形質転換エフェクター遺伝子であるｆｔｅ−ｌ遺伝子（Ｇｅ
ｎＢａｎｋ登録番号Ｍ８４７１１；Ｋｈｏ１およびＺａｒｂｌ、１９９２、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：２２００−２２０４）は、
リボソームタンパク質Ｓ３ａをコードすることが示されている。ｆｔｅ−ｌ ｍ
ＲＮＡの発現の上昇は、しばしば、細胞形質転換に関連する。結果として、リボ
ソームサブユニットの蓄積は、新生物形質転換および細胞増殖を調整する。細胞
形質転換における役割に加えて、ｆｔｅ−ｌは、酵母遺伝子（ＭＦＴ１）との相
同性のために、ミトコンドリアへのタンパク質移行に関与し得る。この遺伝子産
物は、タンパク質輸送に関与する。
【００３５】 （エストロゲンレセプター関連タンパク質（ｈＥＲＲａＩ） ヒトエストロゲンレセプター関連タンパク質（ｈＥＲＲａ１）は、本発明にお
いて、ＬＹＳＴ相互作用体の一つとして同定された。ｈＥＲＲａ１（ＧｅｎＢａ
ｎｋ登録番号Ｘ５１４１６、Ｙａｎｇら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２７１：５７９５−５８０４）は、器官形成および生後発生の間に特徴的なパタ
ーンで発現する転写因子のステロイド甲状腺ホルモンレセプタースーパーファミ
リーのオーファンメンバーである。ｈＥＲＲａ１は、骨発達および代謝において
役割を果たしている。そして、骨芽細胞骨肉種細胞株において発現していること
が見出された（Ｂｏｎｎｅｌｙｅら、１９９７、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
．１１：９０５−９１６）。ｈＥＲＲａ１は、ヒトエストロゲンレセプターと相
互作用する。
【００３６】 ステロイドホルモンレセプターは、ホルモン状態に拘らず、基本的に核に局在
する。そして、かなりの量の結合していないステロイドホルモンレセプターが、
例外的な場合に、標的細胞の細胞質に存在し得る（Ｙａｍａｓｈｉｔａ，１９９
８、Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１３：２５５−２７０）。エスト
ロゲンは、多数の核プロトオンコジーン（例えば、ｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｊｕｎ
のタンパク質ファミリーのメンバー）を一過的に誘発する。このプロトオンコジ
ーンは、エストロゲンレセプター系を通じて転写因子として働く。さらに、この
エストロゲンレセプター系は、新生児の期間の間に、外因性のエストロゲン処置
によって惹起される上皮の増殖応答および異常に関与するようである（Ｙａｍａ
ｓｈｉｔａ，１９９８、Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１３：２５５
−２７０）。
【００３７】 （イモーゲン３８） ヒトイモーゲン３８タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｚ６８７４７）は、
本発明において、ＬＹＳＴ相互作用体の一つとして同定された。そして、これは
、新規の３８ｋＤａの島ミトコンドリア自己抗原である（Ａｒｄｅｎら、１９９
６、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：５５１−５６１）。イモーゲン３８に
対して指向される細胞媒介性の自己免疫攻撃は、Ｉ型糖尿病に関連する。インス
リンは、細胞内小胞体プールから細胞膜へのグルコース輸送体の移行によって媒
介されるグルコース摂取を調整する。このプロセスは、神経内分泌細胞における
小胞体の調整された結合および融合に類似する（Ｃｈｅａｔｈａｍら、１９９６
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：１５１６９−１
５１７３）。
【００３８】 （ＸＡＰ−４） ＸＡＰ−４遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＬＹＳＴ−２相互作用
タンパク質であることが見出された。ＸＡＰ−４のｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登
録番号Ｘ７９３５３）は、ｒａｐＧＤＰ解離インヒビターをコードする。例えば
、Ｓｅｄｌａｃｅｋら、１９９４、Ｍａｍｍ．Ｇｅｎｏｍｅ ５：６３３−６３
９を参照のこと。従って、これは、ＧＤＰ−ＧＴＰ交換反応を調整するにおいて
役割を果たし得る。従って、これは、シグナル伝達プロセスに関与し得る。
【００３９】 （神経変性および発生障害に関与するタンパク質） 以下の節は、以前に同定されているタンパク質を記載する。これらは、本明細
書においてＬＹＳＴと相互作用すると同定された。ＬＹＳＴは、神経変性および
発生障害に関与する。
【００４０】 （アトロフィン−Ｉ） 本発明において同定された別のＬＹＳＴ相互作用体は、Ａｔｒｏｐｈｉｎ Ｉ
である（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ２３８５１、Ｍａｒｇｏｌｉｓら、１９９６
、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３６：２１９−２２６）
。アトロフィン−Ｉは、歯状核赤核淡蒼球ルイ体（ｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａ
ｎ）萎縮症（ＤＲＰＬＡ、スミス病）についての遺伝子のタンパク質産物である
。ＤＲＰＬＡは、稀な、進行性で、致命的な常染色体優性な神経障害であり、神
経変性、特に、小脳の歯状核において特徴付けられる。臨床的な症状は、ミオク
ローヌス癲癇、小脳運動失調、舞踏病アテトーシスおよび痴呆の種々の組合せを
含む。ＤＲＰＬＡは、グルタミンをコードするＣＡＧトリヌクレオチド反復の拡
張から生ずることが知られている（Ｍａｒｇｏｌｉｓら、１９９６、Ｂｒａｉｎ
Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３６：２１９−２２８）。
【００４１】 （ＧＢＤＲ１） 本発明において記載されるさらなるＬＹＳＴ相互作用体は、推定神経膠芽腫細
胞の分化関連タンパク質（ＧＢＤＲ１）である（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０
６８１９５、直接提出）。
【００４２】 （ディ・ジョージ症候群タンパク質（ＤＧＳ−Ｉ）） 本発明において記載されるさらなるＬＹＳＴ相互作用体は、ディ・ジョージ症
候群（ＤＧＳ）−Ｉタンパク質である（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｌ７７５６６；
Ｇｏｎｇら、１９９６、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：７８９−８００）。
ＤＧＳＩ遺伝子は、染色体の最低限のディ・ジョージ症候群重要領域内に配置さ
れ、そして４７６アミノ酸タンパク質をコードする（Ｇｏｎｇら、１９９７、Ｈ
ｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．６：２６７−２７０）。ディ・ジョージ症候群を有
する患者は、染色体領域２２ｑ１１．２の欠失を有する。臨床的な症候群は、心
疾患、胸腺発育不全または胸腺運動失調および低カルシウム血症を含む。
【００４３】 （ノルビン（ＫＩＡＡ０６０７遺伝子）） 本発明において記載される１つのＬＹＳＴ相互作用体は、ラットノルビン遺伝
子のヒトホモログである（ヒトＫＩＡＡ０６０７遺伝子についてＧｅｎＢａｎｋ
登録番号ＡＢ０１１１７９であり、そしてラットノルビンについてＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号ＡＢ００６４６１である；Ｓｈｉｎｏｚａｋｉら、１９９７、Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２４０：７６６−７７１）。ラ
ットノルビンは、脳に発現し、そしてニューロ２ａ細胞における神経突起の成長
を伴って、ラット海馬スライスにおいてテトラエチルアンモニウムの処置によっ
て誘発される。この神経突起成長に関連するノルビンタンパク質は、新しいシナ
プス形成のために、神経可塑性において役割を果たし得る。
【００４４】 （ＯＰＡ含有タンパク質） １つのＬＹＳＴ相互作用体は、ＯＰＡ含有タンパク質であると同定された（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０７１３０９、Ｐｈｉｌｂｅｒｔら、１９９８、Ｍｏ
ｌ．Ｐｓｙｃｈ．３：３０３−３０９）。このタンパク質には機能は割り当てら
れていない。
【００４５】 （Ｍ４タンパク質） １つのＬＹＳＴ相互作用体は、Ｍ４タンパク質と同一であることが見出された
（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｌ０３５３２、Ｄａｔａｒら、１９９３、Ｎｕｃｌ．
Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：４３９−４４６）。このＭ４タンパク質は、ＲＮＡ
結合タンパク質である。
【００４６】 （ヒト脳因子（ＨＢＦ）−Ｇ２） 本発明においてＬＹＳＴ−２と相互作用することが見出されたタンパク質は、
ヒト脳因子（ＨＢＦ）−Ｇ２と同定された（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ７８２０
２；Ｗｉｅｓｅら、１９９５、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １
２６２：１０５−１１２）。ＨＢＦ−Ｇ２は、フォークヘッド遺伝子ファミリー
のメンバーである。この発現は、発生中の終脳のニューロンに限定される。ＨＢ
Ｆ−Ｇ２は、胚の脳に強力に発現し、そして胚発生の間の細胞の運命の初期の発
生的決定に対して寄与し得る。
【００４７】 本明細書のこの節および任意の節における参考文献の引用は、そのような参考
文献が本発明の先行技術であると認めることと解釈されないことに注記すべきで
ある。
【００４８】 （発明の要旨） ヒトチェディアック−東症候群タンパク質ＬＹＳＴは、リソソーム輸送および
機能を調整するに重要な役割を果たす。本発明者らは、大きな新規ヒト遺伝子フ
ラグメントをクローニングした。本明細書で以後これを、ＬＹＳＴ−２と称する
。ＬＹＳＴ−２のＤＮＡコード領域および翻訳タンパク質配列は、ヒトＬＹＳＴ
と高度に相同である。ＬＹＳＴ−２タンパク質は、ＢＥＡＣＨドメインを含む。
本発明者らは、ＬＹＳＴ−２もまた、リソソーム調整に重要な役割を果たすこと
を示唆する。本発明は、本明細書において、ＬＹＳＴ−２の遺伝子またはタンパ
ク質、ならびにその誘導体、フラグメントおよびアナログを含む組成物を提供す
る。
【００４９】 本発明は、改変された酵母ツーハイブリッド系によってアッセイされるよう（
Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
８：９５７８−９５８１）に、特定のタンパク質がＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２
のタンパク質と結合し、そして複合体を形成するという本発明者らの発見に基づ
く。従って、本発明はまた、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２のタンパク質と、ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用（すなわち結合）するタンパク質とのタンパ
ク質複合体を含む組成物を提供する。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と結合するこ
とが示されているタンパク質は、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質という意味で「
ＬＹＳＴ−ＩＰ」と命名した。そして、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ
−ＩＰとの複合体は、「ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ」と本明細書において命名す
る。特に、本発明は、１４−３−３タンパク質と、ＨＳＩタンパク質と、Ｈｒｓ
と、ＢＭＫＩと、ＫＢ０７と、Ｅｆｓと、ＸＡＰ−４と、ＯＳ９と、カゼインキ
ナーゼＩＩβＳＵと、カルモジュリンと、トロポニンＩと、イムポルチンβと、
Ｆｔｅ−ｌと、エストロゲンレセプター関連タンパク質と、イモーゲン３８と、
アトロフィン１と、ノルビンと、ＨＢＦ−Ｇ２と、ＤＧＳ−Ｉと、ＧＢＤＲ−１
と、ＯＰＡ含有タンパク質と、およびＭ４タンパク質と、ＬＹＳＴまたはＬＹＳ
Ｔ−２との複合体、ならびにＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２との誘導体、フラグメ
ントおよびアナログとの複合体、ならびにそれらのＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−
２相互作用タンパク質のそれらの誘導体、アナログおよびフラグメントに関する
。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用する１０の遺伝子は本発明について新
規であり、そして本明細書において、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ１０と同定
されている。これらの１０の新規遺伝子は、これまでには記載されていない。そ
して、これらの遺伝子のｍＲＮＡの翻訳物は以前には規定されていない。それゆ
え、本発明はまた、ＬＩＰ１と、ＬＩＰ２と、ＬＩＰ３と、ＬＩＰ４と、ＬＩＰ
５と、ＬＩＰ６と、ＬＩＰ７と、ＬＩＰ８と、ＬＩＰ９とおよびＬＩＰ１０と、
ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の複合体、ならびにＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と
の誘導体、フラグメントおよびアナログとの複合体、ならびにこれらのＬＹＳＴ
またはＬＹＳＴ−２相互作用タンパク質の誘導体、アナログおよびフラグメント
に関する。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と少なくとも１つのＬＹＳＴ−ＩＰとの
複合体に特異的な抗体、およびＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体、フラグメ
ントまたはアナログと、少なくとも１つのＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体に特異的な
抗体。ここで、ＬＹＳＴタンパク質、ＬＹＳＴ−２タンパク質およびＬＹＳＴ−
ＩＰタンパク質のいずれか１つ以上は、その誘導体、アナログまたはフラグメン
トであり得る。
【００５０】 本発明は、さらに、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ１０（ヒト
ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ１０ならびに他の種のホモログ）
、ならびにそれらの誘導体、フラグメントおよびアナログのヌクレオチド配列お
よびアミノ酸配列に関する。上記のヌクレオチド配列にハイブリダイズし得るか
、または相補的である核酸（例えば、上記配列の逆相補体）もまた提供される。
（逆相補体は、その鎖と逆方向に走る相補的配列を有し、その結果、逆相補体は
、核酸鎖とのミスマッチなくしてハイブリダイズする核酸配列である）。
【００５１】 本発明はまた、機能的に活性である（すなわち、それらは、その野生型タンパ
ク質の１以上の公知の機能的活性を示し得る）ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
またはＬＩＰ１０のタンパク質誘導体およびアナログに関する。そのような機能
的活性としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：（ｉ）ＬＹＳＴに結
合し、そしてそれとの相互作用について競合する能力；（ｉｉ）抗原性、すなわ
ち、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩ
Ｐ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０と、各々のＬＩＰ特異的
抗体との結合について、それぞれ結合または競合する能力；および（ｉｉｉ）そ
れぞれ、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、
ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のタンパク質を結合
する抗体を生成する能力。
【００５２】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の産生方法、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ
１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のタンパク質の産生方法、ならびにその複合体およ
び／または個々のタンパク質の誘導体、フラグメントおよびアナログの産生方法
（例えば、組換え手段による）もまた、提供される。それらを含む薬学的組成物
もまた提供される。
【００５３】 本発明はさらに、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の活性を調整する（すなわ
ち、阻害または増強する）方法、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９また
はＬＩＰ１０のタンパク質を調整する方法を提供する。上記のＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体の個々のタンパク質成分は、細胞機能と関係付けられており、こ
れは、以下を含むが、それらに限定されない：（ｉ）シグナル伝達、小胞体輸送
、酸性、の細胞内オルガネラ形成およびエキソサイトーシス、タンパク質輸送、
色素調整、血小板機能、およびウイルス応答を含むがそれらに限定されない生理
的プロセス；（ｉｉ）アトピー疾患、自己免疫疾患、変性障害（神経変性障害を
含む）、過剰増殖障害（腫瘍形成および腫瘍進行を含む）、眼・皮膚白皮症、色
素欠乏、血小板機能不全およびウイルス感染を含むがそれらに限定されない病理
的プロセス。
【００５４】 従って、本発明はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体をスクリーニングす
るための方法、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ
４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のタ
ンパク質ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の誘導体およびアナログをス
クリーニングするための方法；ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のｍＲＮ
Ａをスクリーニングするための方法；ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
またはＬＩＰ１０のタンパク質を、細胞機能（特に、ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２お
よび／またはＬＹＳＴ−ＩＰが関連付けられている細胞機能）を変更させる能力
についてスクリーニングするための方法を提供する。
【００５５】 本発明はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（および、その複合体に関与
する個々のタンパク質をコードする核酸分子）、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ
１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のタンパク質およびコード核酸分子に基づいて、治
療的および予防的、ならびに診断的、予後的、ならびにスクリーニング方法なら
びに組成物に関する。本発明の治療的化合物は、以下を含むがそれらに限定され
ない：ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、およびその複合体の一方または両方が
、ＬＹＳＴ，ＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体またはアナロ
グである複合体。治療的化合物はまた、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９または
ＬＩＰ１０のタンパク質ならびにその誘導体、フラグメントまたはアナログ、そ
のタンパク質の抗体またはその抗体の誘導体、フラグメントもしくはアナログ、
ならびにそのタンパク質、誘導体、フラグメントおよびアナログをコードする核
酸を含む。治療的化合物はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体成分をコード
するヌクレオチド配列に対するアンチセンス核酸、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩ
Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０のアンチセンス核酸を含む。診断的、予後的およ
びスクリーニングのキットもまた提供される。
【００５６】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰの活性またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９また
はＬＩＰ１０のタンパク質の活性のモジュレーター（すなわち、アゴニスト、ア
ンタゴニスト、およびインヒビター）についてスクリーニングするための動物モ
デルおよび方法もまた、本発明において提供される。
【００５７】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成を阻害、または増大させる分子を同定
するための方法もまた、本発明において提供される。
【００５８】 （発明の詳細な説明） 本発明は、リソソーム輸送およびリソソーム機能の調節に重要な２つのタンパ
ク質、すなわち、ＬＹＳＴおよび本明細書において記載されＬＹＳＴ−２と称す
る新規のＬＹＳＴホモログに基づく。ＬＹＳＴ−２は、ＬＹＳＴと７４％のアミ
ノ酸類似性を有し、そしてそのタンパク質は、チェディアック−東病ＬＹＳＴタ
ンパク質およびマウスｂｅｉｇｅタンパク質において記載された保存されたＢＥ
ＡＣＨドメインを含む。従って、本発明の１つの実施態様は、ＬＹＳＴ−２遺伝
子またはＬＹＳＴ−２タンパク質［それぞれ、配列番号１および配列番号２（図
１）およびより完全な配列番号２４および配列番号２４（図１３）］、ならびに
その誘導体、フラグメントおよびアナログを含有する組成物を提供する。
【００５９】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体およびＬＩＰタンパク質） 本発明は、特定のタンパク質がＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質を結合
して、複合体を形成するという本発明者らの知見を指向する（そのＬＹＳＴまた
はＬＹＳＴ−２と相互作用するタンパク質は、本明細書においてＬＹＳＴ−相互
作用タンパク質について「ＬＹＳＴ−ＩＰ」と称する）。そのＬＹＳＴ−ＩＰは
、改善され、改変された形態の酵母ツーハイブリッド系を使用して同定された。
例えば、Ｃｈｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８：
９５７８〜９５８１、１９９１を参照のこと。この「ＬＹＳＴ−ＩＰ」１４−３
−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、Ｘ
ＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩ βＳＵ、カルモジュリン、トロポニ
ンＩ、イムポルチンβ（ｉｍｐｏｒｔｉｎ β）、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲＲａ１、イ
モーゲン−３８（ｉｍｏｇｅｎ ３８）、アトロフィン−１（ａｔｒｏｐｈｉｎ
−１）、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパ
ク質、Ｍ４タンパク質、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−１（ＬＩＰ−１、配列
番号３）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−２（ＬＩＰ−２、配列番号５）、Ｌ
ＹＳＴ−相互作用タンパク質−３（ＬＩＰ−３、配列番号７）、ＬＹＳＴ−相互
作用タンパク質−４（ＬＩＰ−４、配列番号９）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク
質−５（ＬＩＰ−５、配列番号１１）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−６（Ｌ
ＩＰ−６、配列番号１３）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−７（ＬＩＰ−７、
配列番号１５）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−８（ＬＩＰ−８、配列番号１
７）、ＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−９（ＬＩＰ−９、配列番号１９）、およ
びＬＹＳＴ−相互作用タンパク質−１０（ＬＩＰ−１０、配列番号２１）が、生
理的条件下において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と複合体を形成することが見
出された（ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体を、本明細
書において「ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ」複合体と示す）。より具体的には、上
記に列挙した１つ以上のタンパク質と複合体化したＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２
の組成物は、以前には記載されておらず、本発明にとって新規である。本発明に
よる、これらＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２
およびその結合パートナーの機能的活性の調整に関与する。そのような機能的活
性としては、問題の生物の、個々の細胞内で生じるか、または組織および器官に
わたって生じる、生理学的プロセスおよび病理学的プロセスが挙げられるが、こ
れらに限定されない。
【００６０】 肝細胞増殖因子によって調節されるチロシンキナーゼ基質であるＨｒｓは、Ｌ
ＹＳＴの６５８６〜７４４９フラグメントと相互作用することが見出された。こ
の配列は、胎児脳ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングより、１度単離された
。Ｈｒｓのクローンの５’末端は、アミノ酸８４に対応する。
【００６１】 ＬＹＳＴのＮ末端領域は、１４−３−３タンパク質と相互作用した。１４−３
−３タンパク質の２つの独立した単離物を代表する４つのコロニーを、胎児脳ｃ
ＤＮＡライブラリーの逆ツーハイブリッドスクリーニングにおいて同定した（表
１ｂを参照のこと）。別のＬＹＳＴフラグメント（ｂｐ４００９〜４８２１）は
、１４−３−３タンパク質の同一の領域と相互作用した。この相互作用は、胎児
脳ｃＤＮＡライブラリーの逆スクリーニングによって１度見出された（表１ｂを
参照のこと）。さらに、１４−３−３タンパク質の７つの独立した単離物を代表
する８つのコロニーが、胎児肝臓、胎児脳、および成人心臓ライブラリーの順方
向のツーハイブリッドスクリーニングにおいて同定された（表１ａを参照のこと
）。１４−３−３タンパク質のＬＹＳＴ−相互作用ドメイン（アミノ酸７７〜２
４５）は、２量体化ドメイン、膜結合ドメイン、またはＰＫＣ阻害ドメインを含
有しなかったが、カルシウム制御性エキソサイトーシスを促進するのに重要なア
ネキシン様ドメインを含有した。
【００６２】 １４−３−３タンパク質に加え、１４−３−３β（ＨＳ１タンパク質とも称す
る）と相互作用するＬＹＳＴ Ｎ末端は、１４−３−３タンパク質と８２％のア
ミノ酸同一性を有する。ＨＳ１相互作用を、胎児脳ライブラリーのスクリーニン
グにおいて２回同定した（表１ｂ）。ＨＳ１タンパク質のＬＹＳＴ−相互作用領
域（アミノ酸３１〜２４６）は、１４−３−３タンパク質のＬＹＳＴ−相互作用
領域と同一であった。ＬＹＳＴの１４−３−３相互作用ドメインのいずれも、近
年記載されたコンセンサス１４−３−３結合モチーフを含有しなかった（Ｙａｆ
ｆｅら、１９９７、Ｃｅｌｌ ９１：９６１〜７１）。興味深いことに、１４−
３−３タンパク質もまた、ＬＹＳＴ−２フラグメント７７４〜１４２４と相互作
用することが見出された（表１ｃ）。
【００６３】 ＬＹＳＴのＮ末端もまた、カルモジュリンのＣ末端１２アミノ酸と相互作用し
た（胎児脳ライブラリーのスクリーニングにおいて１度同定された相互作用）（
表１ｂ）。ＬＹＳＴ Ｎ末端は、ステロイドホルモンレセプターであるエストロ
ゲンレセプター関連タンパク質（ｈＥＲＲ１）のＣ末端半分ともまた相互作用し
た（胎児脳ライブラリーのスクリーニングにおいて３度検出された相互作用）（
表１ｂ）。
【００６４】 ＬＹＳＴのフラグメント２３４７〜３２１３が、胎児脳ライブラリーの逆スク
リーニングにおいて２つの異なる単離物を代表するとして３度検出された相互作
用において、ＢＭＫ１αキナーゼのＣ末端と相互作用することが見出された（表
１ｂ）。ＬＹＳＴフラグメント３１９０〜４０３２が、ケラチノサイトライブラ
リーの順方向のスクリーニングにおいて３度検出された相互作用において、ＯＳ
−９前駆体のＣ末端半分と相互作用することが見出された（表１ａ）。同一のＬ
ＹＳＴフラグメントは、ケラチノサイトライブラリーの順方向のスクリーニング
における２つの異なる単離物を代表する９つのコロニーにおいて検出されたよう
に、トロポニンＩのＮ末端部分と相互作用した（表１ａ）。ＬＹＳＴフラグメン
ト４８１９〜５７００が、胎児脳ライブラリーの順方向のスクリーニングにおい
て２度検出された相互作用において、ｆｏｓ形質転換因子遺伝子Ｆｔｅ−ｌと相
互作用することが見出された（表１ａ）。
【００６５】 ＬＹＳＴフラグメント６５８６〜７４４９が、１２のタンパク質と相互作用し
た：イムポルチンβサブユニット、イモーゲン−３８およびノルビンのＣ末端半
分；ＤＧＳ−Ｉ；および７つの新規遺伝子（ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ４、Ｌ
ＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８）（表１ｂを参照のこと）。ＬＹＳＴの
６５８６〜７４４９に加えて、ＬＩＰ６は、ＷＤ４０反復（ｂｐ１０５７６〜１
１６１１）を含有するＬＹＳＴドメインと相互作用した。ＬＩＰ６の２つの独立
した単離物は、ＷＤ４０反復との相互作用の中で同定された。順方向のスクリー
ニングにおいて、ＬＹＳＴフラグメント３１９０〜４０３２と相互作用したカゼ
インキナーゼＩＩ βサブユニットもまた、逆スクリーニングにおいてＬＹＳＴ
ＷＤ４０反復ドメインと相互作用した（表１ｂを参照のこと）。
【００６６】 ＬＹＳＴのＢＥＡＣＨドメイン（ｂｐ９５０２〜１０５９０）が、６つのタン
パク質と相互作用した：アトロフィン−１および胎児Ｆｙｎ−基質１（Ｅｆｓ１
）のアミノ末端３分の１、ＯＰＡ含有タンパク質のアミノ末端、ヘテロ核リボタ
ンパク質Ｍ４、ＬＩＰ３およびＬＩＰ９（表１ｂを参照のこと）。ＬＩＰ３はま
た、ＬＹＳＴ ９０３７〜９５８５と相互作用した。ＬＩＰ３は、ＢＥＡＣＨド
メインの一部を含有するＬＹＳＴドメイン９０３７〜９５８５とも、相互作用し
た。
【００６７】 ＢＥＡＣＨドメインの５’部分を含むＬＹＳＴフラグメント９０３７〜９５８
５が、心臓ライブラリーの順方向のスクリーニングにおける７つの同一のコロニ
ーにおいて検出されたように、ＬＩＰ１０（表１ａ）と；グリア芽細胞腫分化関
連タンパク質（ケラチノサイトライブラリーの４つの同一の単離物）と；および
ＫＢ０７（心臓ライブラリーの２つの異なるクローンを代表する５つの単離物）
（表１ａ）と相互作用することが見出された。
【００６８】 下記の表１および実施例３に記載されるように、本発明者らは、本発明におい
て同定される１０個の新規のＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質についての以下の相同性
を提案し、この相同性は公知の核酸およびアミノ酸データベースにおける、ＢＬ
ＡＳＴ２．０ソフトウェアプログラム（Ｎ．Ｃ．Ｂ．Ｉ．）相同性検索に基づく
：ＬＩＰ１（Ｔｃｐ−１０のホモログ）、ＬＩＰ２（Ｌ１７のホモログ）、ＬＩ
Ｐ３（Ｒｏａｚタンパク質のホモログ）、ＬＩＰ４（ｈｎＲＮＰ−ｅ２のホモロ
グ）、ＬＩＰ６（Ｎｓ２−３のホモログ）、ＬＩＰ７（ＴＣＰ１０Ａのホモログ
）、ＬＩＰ８（ＫＡＰ４Ｌのホモログ）、ＬＩＰ９（ｅｒｔ−１のホモログ）、
ＬＩＰ１０（ニワトリチロシンキナーゼのホモログ。ＬＩＰ５については、公知
の相同性は同定されなかった。
【００６９】 本発明は、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ−１、ＬＩＰ−２、ＬＩＰ−３、ＬＩＰ−４
、ＬＩＰ−５、ＬＩＰ−６、ＬＩＰ−７、ＬＩＰ−８、ＬＩＰ−９およびＬＩＰ
−１０遺伝子の新規のヌクレオチド配列、ならびにそのコードするアミノ酸配列
に関する。これらの遺伝子は、以前に記載されていなく、そしてその遺伝子のタ
ンパク質翻訳産物は、以前に定義されていない。本発明は、多くの異なる種（特
に脊椎動物、より特に哺乳動物）由来のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ−１、ＬＩＰ−２
、ＬＩＰ−３、ＬＩＰ−４、ＬＩＰ−５、ＬＩＰ−６、ＬＩＰ−７、ＬＩＰ−８
、ＬＩＰ−９またはＬＩＰ−１０タンパク質およびそのタンパク質をコードする
遺伝子を提供する。（ＬＩＰ−１、ＬＩＰ−２、ＬＩＰ−３、ＬＩＰ−４、ＬＩ
Ｐ−５、ＬＩＰ−６、ＬＩＰ−７、ＬＩＰ−８、ＬＩＰ−９およびＬＩＰ−１０
タンパク質またはそのタンパク質をコードする遺伝子を包含するＬＹＳＴ−ＩＰ
サブグループを、本明細書において１０個の「新規ＬＩＰ」遺伝子またはタンパ
ク質と称する。）好ましい実施態様において、１０個の新規ＬＩＰタンパク質お
よび遺伝子は、ヒト起源である。上記のタンパク質および誘導体の産生（例えば
、組換え方法による）もまた、本発明において提供される。本発明はさらに、機
能的に活性な（すなわち、全長（野生型）ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質に関連する
１つ以上の公知の機能的活性を提示し得る）ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質誘導体ま
たはアナログに関連する。機能的活性としては、免疫原性、抗原性、およびＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２との複合体を形成する能力が挙げられるが、これらに限
定されない。
【００７０】 本明細書において提供される誘導体、フラグメントおよびアナログは、少なく
とも６つの（連続する）核酸または少なくとも４つの（連続する）アミノ酸の配
列であって、核酸の場合には特異的なハイブリダイゼーションを可能にし、アミ
ノ酸配列の場合は、エピトープの特異的な認識をそれぞれ可能にするのに十分な
長さとして、定義される。フラグメントは、長くとも、野生型全長配列よりも、
１核酸少ないか、または１アミノ酸少ない。誘導体およびアナログは、全長誘導
体またはアナログが、下記に記載のように改変された核酸またはアミノ酸を含有
する場合、全長であり得る。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰ
の誘導体またはアナログとしては、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ
−ＩＰに対する実質的に相同である（種々の実施態様において、同一サイズのア
ミノ酸配列に対して、または当該分野において公知のコンピューターホモロジー
プログラムによってアラインメントが行われる場合の整列された配列と比較する
場合、少なくとも約３０％〜約９５％までの同一性（９０〜９５％の好ましい同
一性をともなう）、あるいはそのコード核酸が、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２
もしくはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする配列の相補鎖（例えば、逆向き相補鎖に対
して、ストリンジェント（好ましい実施態様）な、中程度にストリンジェントな
、もしくは低ストリンジェントな条件でハイブリダイズし得る）領域を含有する
分子を包含するが、これらに限定されない。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲ
ＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３、お
よび下記を参照のこと。
【００７１】 同様に、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰのフラグメントと
しては、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰに対する実質的に相
同である（種々の実施態様において、同一サイズのアミノ酸配列に対して、また
は当該分野において公知のコンピューターホモロジープログラムによってアライ
ンメントが行われる場合の整列された配列と比較する場合、少なくとも約３０％
〜約９５％までの同一性、あるいはそのコード核酸が、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳ
Ｔ−２もしくはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする配列の相補物（例えば、逆向き相補
鎖）に対して、ストリンジェント（好ましい実施態様）な、中程度にストリンジ
ェントな、もしくは低ストリンジェントな条件でハイブリダイズし得る）領域を
含有する分子を包含するが、これらに限定されない。本発明の好ましい実施態様
において、上記のフラグメントは、野生型、全長ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２ま
たはＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の少なくとも８０％、あるいはそれらタンパク質
をコードする核酸配列の少なくとも８０％を含有し、全体として９０％の核酸ま
たはアミノ酸配列同一性を有するヌクレオチドまたはアミノ酸配列を有する。
【００７２】 本発明により、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ
−２およびその結合パートナーの機能的活性の調整に関与する。そのような機能
的活性としては、（ｉ）シグナル伝達、小胞輸送、酸性細胞内オルガネラの形成
およびエキソサイトーシス、およびタンパク質輸送を含むがこれらに限定されな
い生理学的プロセス；ならびに（ｉｉ）アトピー性疾患、自己免疫疾患、神経変
性疾患を含む変性性障害、腫瘍形成および腫瘍進行を含む過剰増殖性障害、眼・
皮膚白皮症、過小色素沈着および血小板機能不全を含むがこれらに限定されない
病理学的プロセス、が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７３】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、ＬＹＳＴ−２タンパク質、または下記に同
定されるその１０個の新規のＬＩＰタンパク質、ならびにそのフラグメント、誘
導体およびアナログの構造的特長は、抗原性（示されたタンパク質またはタンパ
ク質複合体に特異的な抗体と結合する能力としてか、または示されたタンパク質
またはタンパク質複合体との結合について競合する能力として、本明細書におい
て定義される）および免疫原性（示されたタンパク質またはタンパク質複合体に
結合する抗体を生成する能力として、本明細書において定義される）の重要な決
定基を含有する。所望の免疫原性もしくは抗原性を有する、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ
−ＩＰ複合体の誘導体またはアナログは、イムノアッセイにおいて、免疫のため
、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性の阻害のためなどに使用され得る。目的
の性質（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体への関与）を保持するか、ま
たは増強するか、あるいは欠くかまたは阻害するＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合
体の誘導体またはアナログは、それぞれ、そのような性質およびその生理学的相
関物のインデューサーまたはインヒビターとして使用され得る。特定の実施態様
は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質のフラグメント、および／またはＬ
ＹＳＴ−ＩＰのフラグメントのＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に関連し、これ
らのフラグメントは、抗−ＬＹＳＴおよび／もしくは抗−ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体に
よって、またはそのようなフラグメントがＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に含
まれる場合にＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に特異的な抗体によって結合され
得る。
【００７４】 本発明は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用（例えば、結合）するタン
パク質をスクリーニング方法に関する。本発明はさらに、ＬＹＳＴまたはＬＹＳ
Ｔ−２の複合体、特に上記のＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の１つ以上とのＬＹＳＴ
またはＬＹＳＴ−２の複合体に関する。本発明はさらに、ＬＹＳＴまたはＬＹＳ
Ｔ−２の誘導体、アナログおよびフラグメントと、ＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体、ア
ナログおよびフラグメントとの複合体に関連する。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体と野生型ＬＹＳＴ−ＩＰ、野生型
ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と誘導体ＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいは誘導体ＬＹＳＴ
またはＬＹＳＴ−２と誘導体ＬＹＳＴ−ＩＰから構成され、ここでその誘導体は
野生型の機能を有する。好ましい実施態様において、このような複合体は、抗Ｌ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体抗体と結合する。特定の実施態様において、ヒト
ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質とヒトＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２との複合体が、提
供される。
【００７５】 本発明はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を産生および／または単離す
る方法を提供する。特定の実施態様において、本発明は、組換えＤＮＡ技術を使
用して、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の両方およびその結合パートナー（あるい
は複合体の一方または両方のメンバーのフラグメント、誘導体またはホモログ）
を発現する方法を提供し、ここでその結合パートナーの両方は１つの異種プロモ
ーターの制御下（すなわち、特定の複合体成分をコードする天然の遺伝子と、天
然には会合しないプロモーター）にあるか、または各々が別個の異種プロモータ
ーの制御下にあるかのいずれかである。
【００７６】 本発明は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質
を包含するタンパク質およびタンパク質複合体の群の１つ以上の成分の異常なレ
ベルと関連する疾患および障害の診断、予後およびスクリーニング方法を提供す
る。本発明はまた、そのような疾患および障害を処置または予防する方法を提供
し、その方法は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−ＩＰタンパ
ク質、あるいはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成または活性のモジュレータ
ー（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体または非複合体化ＬＹＳＴまたは
その結合パートナーまたはその結合パートナーのフラグメント−−好ましくは、
複合体形成に直接関与するＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰの部分を含有するフラ
グメントに結合する抗体）の投与を包含する。これらの方法はまた、結合親和性
を増加または減少するＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰの変異体の投与、ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成の低分子インヒビター／エンハンサーの投与、ある
いはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を安定化または中和のいずれかをする抗体
の投与を包含する。
【００７７】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体をアッセイする方法、またはＬＹＳＴ−ＩＰ
タンパク質の治療剤または診断剤としての活性についてのアッセイ方法、ならび
にＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質のモジュレ
ーター（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト）のスクリ
ーニング方法もまた提供される。例えば、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯ
ＬＯＧＹ、（Ａｂｅｌｓｏｎ編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９３を
参照のこと。
【００７８】 （組換え方法論） １つ以上のタンパク質の組換え発現のために、そのタンパク質をコードするヌ
クレオチド配列の全部または一部が、適切な発現ベクターに挿入され得る。必要
な転写および翻訳シグナルは、発現ベクターとともに提供され得るか、または天
然のプロモーターおよび／またはそれらの隣接する領域によって供給され得る。
【００７９】 ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質は、単独でまたは複
合体中のいずれかにおいて、タンパク質精製および組換えタンパク質発現の分野
において周知の方法によって得られ得る。１つ以上のタンパク質の組換え発現の
ために、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列の全部または一部を含有
する核酸が、適切な発現ベクター（すなわち、挿入されたタンパク質コード配列
の転写および翻訳のために必要なエレメントを含有するベクター）中に挿入され
得る。必要な転写および翻訳シグナルは、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２または任
意のＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の天然のプロモーターあるいはその隣接する領域によ
ってもまた提供され得る。
【００８０】 好ましい実施態様において、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体は、ＬＹＳＴま
たはＬＹＳＴ−２配列全体および同一細胞のＬＹＳＴ−ＩＰコード配列（同一の
プロモーターの制御下、または２つの別個のプロモーターの制御下のいずれかで
）の発現によって得られる。さらに別の実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹ
ＳＴ−２の誘導体、フラグメントまたはホモログ、および／あるいはＬＹＳＴ−
ＩＰの誘導体、フラグメントまたはホモログが、組換え的に発現される。好まし
くは、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の
誘導体、フラグメントまたはホモログは、結合アッセイ（例えば、改変された酵
母ツーハイブリッド系）によって同定される結合パートナーと複合体を形成し（
例えば、Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８８：９５７８〜９５８１）、そしてより好ましくは抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ
−ＩＰ複合体抗体に結合する複合体を形成する。
【００８１】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ、もしくはその誘導体、フラグメントまたはホモログをコードするヌク
レオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター、１つ以上の複製起点、なら
びに必要に応じて１つ以上の選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含
有するベクターが、使用される。好ましい実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬ
ＹＳＴ−２、およびＬＹＳＴ−ＩＰの両方をコードするヌクレオチド配列に作動
可能に連結されたプロモーター、１つ以上の複製起点、ならびに必要に応じて１
つ以上の選択マーカーを含有するベクターが使用される。
【００８２】 使用され得る発現ベクターまたは誘導体としては、ヒトおよび動物ウイルス（
例えば、ワクシニアウイルスまたはアデノウイルス）；バキュロウイルスのよう
な昆虫ウイルス；酵母ベクター；λファージのようなバクテリオファージ；ｐＢ
Ｒ３２２、ｐＵＣプラスミド誘導体、もしくはｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔベクター
（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）のようなプラスミド；およ
びコスミドベクターが挙げられるが、これらに限定されない。使用される方法と
しては、インビトロ組換えＤＮＡおよび合成技術、ならびにインビボ組換え（遺
伝子組換え）が挙げられ得る。任意の適切な転写および翻訳エレメントが使用さ
れ得、そして発現は、当該分野において公知の任意のプロモーターおよび／また
はエンハンサーによって調節され得る。使用され得るプロモーターの供給源とし
ては、ウイルス、哺乳動物、原核生物、および植物プロモーター、ならびに酵母
およびい他の真菌由来のプロモーターエレメントが挙げられ得るが、これらに限
定されない。転写制御領域は、組織特異的か、または偏在する発現を示し得る。
陽性クローンは、当該分野において公知の任意の方法によって同定され得る。例
えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬ
ＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３を参照のこと。
【００８３】 次に、同定および単離された核酸は、適切なクローニングベクター中に挿入さ
れ得る。当該分野において公知の大多数のベクター−宿主系が使用され得る。可
能なベクターとしては、プラスミドまたは改変ウイルスが挙げられるがこれらに
限定されない。しかし、このベクター系は、使用される宿主細胞に適合しなけれ
ばならない。そのようなベクターとしては、例えば、λ誘導体のようなバクテリ
オファージ、あるいはｐＢＲ３２２またはｐＵＣプラスミド誘導体もしくはｐＢ
ｌｕｅＳｃｒｉｐｔベクター（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ
）のようなプラスミドが挙げられるがこれらに限定されない。クローニングベク
ターへの挿入は、例えば、相補的粘着末端を有するクローニングベクター中への
ＤＮＡフラグメントの連結によって達成され得る。しかし、ＤＮＡを断片化する
ために使用される相補的な制限部位がクローニングベクター中に存在しない場合
、ＤＮＡ分子の末端は、適合性を確実にするために、酵素的に「磨かれ」得る。
あるいは、任意の所望の部位が、ＤＮＡ末端にヌクレオチド配列（リンカー）を
連結することにより、生成され得る；これらの連結されたリンカーは、制限エン
ドヌクレアーゼ認識配列をコードする特定の化学合成されたオリゴヌクレオチド
を含有し得る。代替的な方法において、切断されたベクターおよびＬＩＰ１、Ｌ
ＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩ
Ｐ９、またはＬＩＰ１０遺伝子は、ホモポリマー性のテール化によって改変され
得る。組換え分子は、形質転換、トランスフェクション、感染、エレクトロポー
レーションなどを介して宿主細胞中に導入され得、その結果その遺伝子配列の多
数のコピーが生成される。
【００８４】 使用され得るプロモーターとしては、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｒｎｏ
ｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ、１９８１、Ｎａｔｕｒｅ、２９０：３０４〜３１
０）；ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復を含有するプロモーター（Ｙａｍａ
ｍｏｔｏら、１９８０、Ｃｅｌｌ ２２：７８７〜７９７）；ヘルペスチミジン
キナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら、１９８１、Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１４４１〜１４４５）；メタロチオネイン遺伝子の
調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら、１９８２、Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９〜４２
）；βラクタマーゼプロモーターのような原核生物発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−
Ｋａｍａｒｏｆｆら、１９７８、Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
７５：３７２７〜３７３１）またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら、１
９８３、Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１〜２５、Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ １９８０、２４２、７９〜９４の「Ｕ
ｓｅｆｕｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｂａｃｔ
ｅｒｉａ」もまた参照のこと）；ノパリンシンセターゼプロモーター（Ｈｅｒｒ
ａｒ−Ｅｓｔｒｅｌｌａら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ、３０３、２０９〜２１３
）またはカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモーター（Ｇａｒｄ
ｅｒら、１９８１、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：２８７１）、お
よび光合成酵素リブロースビスリン酸カルボキシラーゼ（Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓ
ｔｒｅｌｌａら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１１５〜１２０）のプロモ
ーターを含有する植物発現ベクター；Ｇａｌ４プロモーター、アルコールデヒド
ロゲナーゼプロモーター、ホスホグリセロルキナーゼプロモーター、アルカリホ
スファターゼプロモーターのような酵母および他の真菌由来のプロモーターエレ
メント；ならびに組織特異性を示し、トランスジェニック動物において使用され
ている、以下の動物転写制御領域：膵臓腺房細胞において活性なエラスターゼＩ
遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔら、１９８４、Ｃｅｌｌ ３８：６３９〜６４６；
Ｏｒｎｉｔｚら、１９８６、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ
．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９〜４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ １９８
７、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５〜５１５）、膵臓β細胞において活性な
インスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１
５：１１５〜１２２）、リンパ系細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御
領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４、Ｃｅｌｌ ３８：６４７〜６５８；
Ａｄａｍｓら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３〜５３８、Ａｌｅｘａ
ｎｄｅｒら、１９８７、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．７：１４３６〜１４４４
）、精巣、胸部、リンパ球およびマスト細胞において活性なマウス乳腺癌ウイル
ス制御領域（Ｌｅｄｅｒら、１９８６、Ｃｅｌｌ ４５：４８５〜４９５）、肝
臓において活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｃｋｅｒｔら、１９８７、
Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８〜２７６）、肝臓において活性な
α−フェトプロテイン制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら、１９８５、Ｍｏｌ．Ｃｅ
ｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９〜１６４８；Ｈａｍｍｅｒら、１９８７、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２３５：５３〜５８）、肝臓において活性なα−１抗トリプシン遺伝
子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら、１９８７、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１
：１６１〜１７１）、骨髄性細胞において活性なβグロビン遺伝子制御領域（Ｍ
ｏｒｇａｍら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８〜３４０；Ｋｏｌｌｉ
ａｓら、１９８６、Ｃｅｌｌ ４６：８９〜９４）、脳の稀突起神経膠細胞にお
いて活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄら、１
９８７、Ｃｅｌｌ ４８：７０３〜７１２）、骨格筋において活性なミオシン軽
鎖２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ １９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：２８３〜２
８６）、ならびに視床下部の性腺刺激細胞において活性な性腺刺激ホルモン放出
ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら、１９８６、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：
１３７２〜１３７８）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐのコード配列またはその一部を、一緒にかまたは別々にのいずれかで含む発現
ベクターは、３つのｐＧＥＸベクター（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ発
現ベクター：ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ、１９８８、Ｇｅｎｅ ７：３１
−４０；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ．ＷＩ．）の１つのＥｃ
ｏＲＩ制限部位中に遺伝子配列をサブクローニングすることによって作製される
。これは、正しいリーディングフレーム中での産物の発現を可能にする。
【００８６】 目的の配列を含む発現ベクターは、３つの一般的なアプローチによって同定さ
れ得る：（ａ）核酸ハイブリダイゼーション、（ｂ）マーカー遺伝子機能の存在
または非存在、および（ｃ）挿入配列の発現。第１のアプローチにおいて、ＬＹ
ＳＴ、ＬＹＳＴ−２、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、Ｂ
ＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ
、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲＲａ１、
イモーゲン−３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、
ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もし
くはＬＩＰ１０、または他のＬＹＳＴ−ＩＰの配列は、挿入配列に対して相同な
配列および相補的な配列を含むプローブに対する核酸ハイブリダイゼーションに
よって検出され得る。第２のアプローチにおいて、組換えベクター／宿主系は、
ベクター中への目的の配列の挿入によって引き起こされる、特定のマーカー機能
（例えば、抗ＬＹＳＴ、抗ＬＹＳＴ−ＩＰ、または抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ
複合体抗体への結合、抗生物質に対する耐性、バキュロウイルス中での閉鎖体（
ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ）の形成など）の存在または非存在に基づいて、
同定および選択され得る。例えば、ＬＹＳＴ遺伝子もしくはＬＹＳＴ−２遺伝子
もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子、またはその一部が、ベクターのマーカー遺伝子
配列中に挿入された場合、ＬＹＳＴフラグメントまたはＬＹＳＴ−２フラグメン
トまたはＬＹＳＴ−ＩＰフラグメントを含む組換え体は、マーカー遺伝子機能の
非存在によって同定される。第３のアプローチにおいて、組換え発現ベクターは
、組換えベクターによって発現される、ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、１４−３−３
タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ
−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、
イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲａ１、イモーゲン−３８、アトロフィン
−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク
質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、Ｌ
ＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０、または他のＬＹ
ＳＴ−ＩＰの産物についてアッセイされることによって同定され得る。このよう
なアッセイは、例えば、インビトロアッセイ系において相互作用する種の物理的
または機能的な特性（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成、または
そのタンパク質についての特異的な抗体に対する免疫反応性）に基づき得る。
【００８７】 代替的な方法において、所望の遺伝子は、「ショットガン」アプローチにおい
て、適切なクローニングベクター中への挿入後、同定および単離され得る。例え
ば、サイズ分画による所望の遺伝子の富化は、クローニングベクターへの挿入前
に行われ得る。
【００８８】 一旦ＬＹＳＴタンパク質もしくはＬＹＳＴ−２タンパク質および／またはＬＹ
ＳＴ−ＩＰタンパク質、あるいはそのフラグメントもしくは誘導体を発現する組
換え細胞が同定されると、個々の遺伝子産物または複合体は、単離および分析さ
れ得る。このことは、タンパク質もしくは複合体の物理的および／または機能的
特性に基づくアッセイによって達成され得、このアッセイには、生成物の放射性
標識、続くゲル電気泳動による分析、イムノアッセイ、マーカー標識産物への架
橋などが含まれるがそれらに限定されない。
【００８９】 一旦組換えのＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タン
パク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイン
キナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ
−ｌ、ｈＥＲＲａ１、イモーゲン−３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ
−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、Ｌ
ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
Ｐ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０、または他のＬＹＳＴ−ＩＰ分子が同定さ
れ、そして複合体または個々のタンパク質が単離されると、当該分野で公知のい
くつかの方法が、これらを増殖させるために使用され得る。一旦適切な宿主系お
よび増殖条件が確立されると、組換え発現ベクターは、多量に増殖および増幅さ
れ得る。以前に記載されたように、使用され得る発現ベクターまたは誘導体は、
ヒトまたは動物ウイルス（例えば、ワクシニアウイルスまたはアデノウイルス）
；昆虫ウイルス（例えば、バキュロウイルス）；酵母ベクター；バクテリオファ
ージベクター（例えば、λファージ）；ならびにプラスミドおよびコスミドベク
ターを含むがそれらに限定されない。
【００９０】 さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または所望される特定の様式で
発現されるタンパク質を修飾するかもしくはプロセスする宿主細胞株が選択され
得る。特定のプロモーターからの発現は、特定のインデューサーの存在下で上昇
され得る；従って、遺伝子操作されたＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／ま
たはＬＹＳＴ−ＩＰの発現は制御され得る。さらに、異なる宿主細胞は、タンパ
ク質の翻訳プロセシングおよび翻訳修飾、ならびにタンパク質の翻訳後プロセシ
ングおよび翻訳後修飾のための特徴的かつ特定のメカニズム（例えば、グリコシ
ル化、リン酸化など）を有する。適切な細胞株または宿主系は、外来性タンパク
質の所望の修飾およびプロセシングが達成されることを確実にするために選択さ
れ得る。例えば、細菌系における発現は、グリコシル化されていないコアタンパ
ク質を産生するために使用され得るが、一方哺乳動物細胞における発現は、異種
哺乳動物タンパク質のネイティブなグリコシル化を確実にし得る。さらに、異な
るベクター／宿主発現系は、異なる程度までプロセシング反応をもたらし得る。
【００９１】 さらに、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＰ−ＩＰをコー
ドするヌクレオチド配列は、さらなるインビトロ改変を容易にするために、イン
ビトロまたはインビボで変異され得、翻訳配列、開始配列、および／もしくは終
結配列を作製ならびに／または破壊するか、あるいはコード領域中のバリエーシ
ョンを作製するか、および／もしくは新しい制限エンドヌクレアーゼ部位を形成
するか、またはあらかじめ存在している配列を破壊する。化学的変異誘発および
インビトロ部位特異的変異誘発（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１−６５５８）、ＴＡＢ（登録商標）リンカー
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用などを含むがそれらに限定されない、当該分野で
公知の変異誘発のための任意の技術が使用され得る。
【００９２】 種々の宿主ベクター系がタンパク質コード配列を発現するために利用され得る
。これらは、ウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイルスなど）で
感染された哺乳動物細胞系；ウイルス（例えば、バキュロウイルス）で感染され
た昆虫細胞系；酵母ベクターを含む酵母、またはバクテリオファージＤＮＡ、プ
ラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡで形質転換された細菌のような微生物
を含むがそれらに限定されない。ベクターの発現エレメントは、その強度および
特異性において変化する。利用される宿主ベクター系に依存して、多数の適切な
転写エレメントおよび翻訳エレメントのいずれか１つが使用され得る。
【００９３】 異なる宿主細胞は、タンパク質の翻訳プロセシングおよび翻訳修飾、ならびに
タンパク質の翻訳後プロセシングおよび翻訳後修飾のための特徴的かつ特定のメ
カニズム（例えば、グリコシル化、プレニル化、アセチル化、リン酸化）を有す
る。適切な細胞株または宿主系は、導入されたタンパク質の所望の修飾およびプ
ロセシングが達成されることを確実にするために選択され得る。利用される宿主
ベクター系に依存して、多数の適切な転写エレメントおよび翻訳エレメントのい
ずれか１つが使用され得る。例えば、前出を参照のこと。
【００９４】 ＬＹＳＴ配列もしくはＬＹＳＴ−２配列および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ配列の
操作は、タンパク質レベルでなされ得る（例えば、翻訳後に）。翻訳の間または
翻訳後に差示的に修飾される（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、
アミド化、プレニル化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパ
ク質分解的切断、抗体分子または他の細胞リガンドへの結合などによる）ＬＹＳ
ＴもしくはＬＹＳＴ−ＩＰフラグメント、その誘導体、またはそのアナログの複
合体の誘導体は、本発明の範囲に含まれる。多数の化学的修飾のいずれかは、臭
化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢ
Ｈ４、アセチル化、ホルミル化、酸化、還元、ツニカマイシンの存在下での代謝
的合成などによる特異的化学的切断；アセチル化；ホルミル化；酸化：還元；ま
たは代謝プロセスによる修飾を含むがそれらに限定されない公知の技術によって
実行され得る。
【００９５】 ヌクレオチドコード配列の縮重に起因して、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２また
はＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子のような実質的に同じアミノ酸配列をコードする他のＤ
ＮＡ配列は、本発明の実施において使用され得る。上記のヌクレオチド配列は、
その配列中の同じアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって変更さ
れ得、従って、サイレントな変化を生じる。その配列中のアミノ酸についての置
換コドンは、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択され得る。例
えば、非極性（疎水性）アミノ酸、極性中性アミノ酸、正に荷電した（塩基性）
アミノ酸、および負に荷電した（酸性）アミノ酸である。
【００９６】 同様に、本発明のＬＹＳＴ誘導体またはＬＹＳＴ−２誘導体およびＬＹＳＴ−
ＩＰ誘導体は、一次アミノ酸配列として、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬ
ＹＳＴ−ＩＰのアミノ酸配列のすべてまたは一部を含むこれらの誘導体を含むが
それらに限定されない。これらのアミノ酸配列は、機能的に等価なアミノ酸残基
が、配列中にサイレントな変化を生じる残基に置換されている、変化した配列を
含む。例えば、その配列中の１つ以上のアミノ酸残基は、機能的な等価物として
作用する、同様の極性である別のアミノ酸によって置換され得、サイレントな変
化を生じる。その配列中でのアミノ酸の置換は、そのアミノ酸が属するクラスの
他のメンバーから選択され得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸には、アラ
ニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプ
トファン、およびメチオニンが含まれる。極性中性アミノ酸には、グリシン、セ
リン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、およびグルタミンが
含まれる。正に荷電した（塩基性）アミノ酸には、アルギニン、リジン、および
ヒスチジンが含まれる。負に荷電した（酸性）アミノ酸には、アスパラギン酸お
よびグルタミン酸が含まれる。
【００９７】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹ
ＳＴ−ＩＰタンパク質配列は、修飾されて蛍光標識を含むか、または異種機能性
試薬を有する：このような異種機能性試薬は、このタンパク質を複合体の他のメ
ンバーに、または他のＬＹＳＴ−ＩＰに架橋するために使用され得、あるいは、
所望の場合、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰへの
置換または付加として導入される、非古典的なアミノ酸または化学的アミノ酸ア
ナログを含む。非古典的なアミノ酸は、アミノイソ酪酸 ３−アミノプロピオン
酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン
、シトルリン、システイン酸（ｃｙｓｔｅｉｃ ａｃｉｄ）、ｔ−ブチルグリシ
ン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、フルオ
ロアミノ酸、Ｃ−メチルアミノ酸、Ｎ−メチルアミノ酸、デザイナー（ｄｅｓｉ
ｇｎｅｒ）アミノ酸、および一般のアミノ酸アナログを含むが、これらに限定さ
れない。さらに、古典的なアミノ酸または非古典的なアミノ酸は、Ｄ（右旋性（
ｄｅｘｔｒｏｒｏｔａｒｙ））またはＬ（左旋性（ｌｅｖｏｒｏｔａｒｙ））で
あり得る。
【００９８】 さらに、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのアナ
ログならびに誘導体、あるいはＬＩＰ１タンパク質、ＬＩＰ２タンパク質、ＬＩ
Ｐ３タンパク質、ＬＩＰ４タンパク質、ＬＩＰ５タンパク質、ＬＩＰ６タンパク
質、ＬＩＰ７タンパク質、ＬＩＰ８タンパク質、ＬＩＰ９タンパク質、またはＬ
ＩＰ１０タンパク質のアナログおよび誘導体は、化学的に合成され得る。例えば
、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰの一部に対応す
るペプチド（これは、所望のドメインを含むか、またはインビトロで所望の活性
を媒介する（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成））は、ペプチドシ
ンセサイザーの使用によって合成され得る。さらに、所望の場合には、非古典的
なアミノ酸または化学的なアミノ酸アナログは、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２
および／またはＬＹＳＴ−ＩＰに置換または付加として導入され得る。非古典的
なアミノ酸には、一般的なアミノ酸のＤ−異性体、アミノイソ酪酸、４−アミノ
酪酸（４−Ａｂｕ）、２−アミノ酪酸（２−Ａｂｕ）、６−アミノヘキサン酸（
ｅ−Ａｈｘ）、２−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、３−アミノプロピオン酸、オル
ニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトル
リン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリ
シン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロアミノ酸、デザイナー
アミノ酸（例えば、β−メチルアミノ酸）、Ｃ−メチルアミノ酸、Ｎ−メチルア
ミノ酸、および一般のアミノ酸アナログが含まれるが、これらに限定されない。
さらに、古典的なアミノ酸または非古典的なアミノ酸は、Ｄ（右旋性（ｄｅｘｔ
ｒｏｒｏｔａｒｙ））またはＬ（左旋性（ｌｅｖｏｒｏｔａｒｙ））であり得る
。
【００９９】 ベクターへのＤＮＡフラグメントの挿入のための下記の方法のいずれかが、適
切な転写／翻訳制御シグナルおよびタンパク質コード配列からなるキメラ遺伝子
を含む発現ベクターを構築するために使用され得る。これらの方法は、インビト
ロ組換えＤＮＡ技術および合成技術ならびにインビボ組換え体（遺伝的組換え）
を含み得る。ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはそ
の誘導体、フラグメント、またはホモログをコードするヌクレオチド配列の発現
は、第２のヌクレオチド配列によって制御され得、その結果その遺伝子またはそ
の遺伝子フラグメントが、組換えＤＮＡ分子で形質転換された宿主において発現
される。例えば、タンパク質の発現は、当該分野で公知の任意のプロモーター／
エンハンサーによって制御され得る。特定の実施態様において、プロモーターは
、ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２についての遺伝子、またはＬＹＳＴ−ＩＰについての
遺伝子に対してネイティブではない。
【０１００】 任意の異種タンパク質コード配列に融合された、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−
２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはＬＩＰ−１、ＬＩＰ−２、ＬＩＰ−
３、ＬＩＰ−４、ＬＩＰ−５、ＬＩＰ−６、ＬＩＰ−７、ＬＩＰ−８、ＬＩＰ−
９、またはＬＩＰ−１０の一部を含むキメラ遺伝子が、構築され得る。特定の実
施態様は、少なくとも６アミノ酸のＬＹＳＴタンパク質および／もしくはＬＹＳ
Ｔ−ＩＰタンパク質のフラグメント、またはＬＩＰ−１タンパク質、ＬＩＰ−２
タンパク質、ＬＩＰ−３タンパク質、ＬＩＰ−４タンパク質、ＬＩＰ−５タンパ
ク質、ＬＩＰ−６タンパク質、ＬＩＰ−７タンパク質、ＬＩＰ−８タンパク質、
ＬＩＰ−９タンパク質、もしくはＬＩＰ−１０タンパク質のフラグメントを含む
キメラタンパク質に関する。ＤＮＡフラグメントは、当該分野で周知の組換え方
法論を用いて発現ベクター中でキメラ遺伝子を構築するために使用され得る。
【０１０１】 他の特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／または
ＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはそのフラグメント、ホモログ、または誘導体は、異な
るタンパク質の異種タンパク質配列にペプチド結合を介して連結されたタンパク
質、フラグメント、ホモログ、または誘導体を含む融合タンパク質産物またはキ
メラタンパク質産物として発現され得る。このようなキメラ産物は、当該分野で
公知の方法によって、適切なコーディングフレームにおいて所望のアミノ酸配列
をコードする適切なアミノ酸配列を互いに連結すること、および当該分野で一般
的に公知の方法によって適切な宿主においてキメラ産物を発現することにより作
製され得る。あるいは、このようなキメラ産物は、タンパク質合成技術によって
（例えばペプチドシンセサイザーの使用によって）作製され得る。
【０１０２】 天然の産物が変異体であることが疑われる場合、または新しい種から単離され
る場合、天然の供給源から単離されたＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳ
Ｔ−ＩＰのアミノ酸配列、ならびにインビトロで発現されたそれらのアミノ酸配
列は、ＤＮＡ配列の分析から決定され得るか、あるいは、代替的には、単離され
たタンパク質の直接的な配列決定によって決定され得る。このような分析は、手
動の配列決定によって、または自動化されたアミノ酸シークエンサーの使用を通
して行われ得る。
【０１０３】 ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質は、単独でまたは
複合体中においてのいずれかで、カラムクロマトグラフィー（例えば、イオン交
換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル排除クロマト
グラフィー、逆相高速クロマトグラフィー、高速タンパク質液体クロマトグラフ
ィーなど）、差示的遠心分離、差示的溶解度を含むがそれらに限定されない、当
該分野において公知の標準的な方法によって、またはタンパク質の精製のために
使用される任意の他の標準的な技術によって、単離および精製され得る。出発物
質は天然の供給源由来、または複合体もしくはタンパク質を発現する組換え宿主
細胞のいずれかであり得る。ＬＹＳＴタンパク質、ＬＹＳＴ−２タンパク質、Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰタンパク質、またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を含む組成物
は、少なくとも５％の均質性、５％〜９０％の均質性、または７０％〜１００％
の均質性まで精製され得る。あるいは、タンパク質またはその誘導体は、当該分
野で公知の標準的な化学的方法によって合成され得る（例えば、Ｈｕｎｋａｐｉ
ｌｌｅｒら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５−１１１を参照のこと）
。機能性特性は、当該分野で公知の任意の適切なアッセイを使用して評価され得
る。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｂｅｌｓｏｎ編
）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９３を参照のこと。
【０１０４】 あるいは、一旦ＬＹＳＴ−ＩＰまたはその誘導体が同定されると、そのタンパ
ク質のアミノ酸配列は、そのタンパク質がコードされるキメラ遺伝子のヌクレオ
チド配列から推定され得る。結果として、そのタンパク質またはそのタンパク質
の誘導体は、当該分野で公知の標準的な化学的方法によって合成され得る（例え
ば、Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５−１
１１を参照のこと）。
【０１０５】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＩＰ１タンパク質、ＬＩＰ２タン
パク質、ＬＩＰ３タンパク質、ＬＩＰ４タンパク質、ＬＩＰ５タンパク質、ＬＩ
Ｐ６タンパク質、ＬＩＰ７タンパク質、ＬＩＰ８タンパク質、ＬＩＰ９タンパク
質、もしくはＬＩＰ１０タンパク質はまた、親水性分析によって分析され得る（
ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ７８：３８２４−３８２８）。親水性プロフィールは、タンパク質の
疎水性および親水性領域を同定するために使用され得、そして実験的な操作（例
えば、結合実験、抗体の合成などにおいて）のための物質の設計における補助の
ためにそれらの方向を予測することを援助し得る。特定の構造を仮定する二次構
造分析（ＣｈｏｕおよびＦａｓｍａｎ、１９７４、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
１３：２２２−２２３）もまた、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／または
ＬＹＳＴ−ＩＰの領域を同定するためになされ得る。操作、翻訳、二次構造予測
、親水性および疎水性プロフィール、オープンリーディングフレーム予測および
プロット、ならびに配列相同性の決定は、当該分野で利用可能なコンピューター
ソフトウェアプログラムを使用して達成され得る。
【０１０６】 Ｘ線結晶学（Ｅｎｇｓｔｒｏｍ、１９７４、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏ
ｌ．１１：７−１３）、質量分析法およびガスクロマトグラフィー（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏ
ｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９７を参照のこと）、およびコンピューターモデ
リング（ＦｌｅｔｔｅｒｉｃｋおよびＺｏｌｌｅｒ編、１９８６、「Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ」
、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
）を含むがこれらに限定されない構造分析の他の方法もまた、利用され得る。
【０１０７】 （新規ＬＹＳＴ−ＩＰの同定および単離） 本発明は、ＬＹＳＴ−２タンパク質、ＬＩＰ１タンパク質、ＬＩＰ２タンパク
質、ＬＩＰ３タンパク質、ＬＩＰ４タンパク質、ＬＩＰ５タンパク質、ＬＩＰ６
タンパク質、ＬＩＰ７タンパク質、ＬＩＰ８タンパク質、ＬＩＰ９タンパク質、
ＬＩＰ１０タンパク質、ＬＩＰ１１タンパク質、ＬＩＰ１２タンパク質、または
ＬＩＰ１３タンパク質ならびにその誘導体、ホモログ、およびアナログに関し、
ここで上記の新規タンパク質のネイティブなタンパク質、フラグメント、誘導体
、またはアナログは、動物由来（例えば、マウス、ラット、ブタ、ウシ、イヌ、
サル、ヒト、ハエ、またはカエル）または植物由来であり得る。他の特定の実施
態様において、フラグメント、誘導体、またはアナログは、機能的に活性であり
、すなわち、野生型ＬＩＰ１タンパク質、野生型ＬＩＰ２タンパク質、野生型Ｌ
ＩＰ３タンパク質、野生型ＬＩＰ４タンパク質、野生型ＬＩＰ５タンパク質、野
生型ＬＩＰ６タンパク質、野生型ＬＩＰ７タンパク質、野生型ＬＩＰ８タンパク
質、野生型ＬＩＰ９タンパク質、または野生型ＬＩＰ１０タンパク質に関連する
１つ以上の機能的な活性（例えば、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２に結合する能
力、免疫原性、または抗原性）を示し得る。
【０１０８】 ヒトＬＹＳＴ、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ
１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カ
ルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲＲａ１、イモ
ーゲン−３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢ
ＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、およびＭ４タンパク質をコードするヌクレオチ
ド配列が公知である。上記の遺伝子のＧｅｎＢａｎｋ登録番号は、背景の節に列
挙されている。
【０１０９】 ヒト以外の種のホモログまたはパラログは、核酸ハイブリダイゼーションおよ
びクローニングのための当該分野で周知の方法（例えば、以下に記載されるよう
なものを参照のこと）を使用して、特定のヒト配列のすべてまたは一部をプロー
ブとして用いて、低ストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシー、または
高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって得られ得る。このよう
なハイブリダイゼーション条件および技術は、当該分野において周知である。本
明細書中で開示されるＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、およびＬＹＳＴ−ＩＰをコード
する核酸は、当該分野で公知の任意の方法によって、例えば、その配列の３’お
よび５’末端にハイブリダイズし得る合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によ
って、および／またはその遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドを使用する
ｃＤＮＡもしくはゲノムライブラリーからのクローニングによって得られ得る。
例えば、以下に記載されるような方法を参照のこと。
【０１１０】 クローニングされたＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子
配列は、当該分野で公知の多数のストラテジーのいずれかによって改変され得る
（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。その配列は、インビトロで、制限エンドヌクレ
アーゼを用いて適切な部位で切断され得、所望の場合、酵素的な操作によってさ
らに改変され、単離され、そして連結される。
【０１１１】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の誘導体は、機能的に等価な分
子を提供する置換、付加、または欠失によってそれらのそれぞれの配列を変化さ
せることによって作製され得る。ヌクレオチドコード配列の縮重に起因して、Ｌ
ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子と実質的に同じアミノ酸
配列をコードする他のＤＮＡ配列が、本発明の実施において使用され得る。上記
のヌクレオチド配列は、その配列内の同じアミノ酸残基をコードする異なるコド
ンの置換（従って、サイレントな変化を生じ得る）によって変更され得る。その
配列内でのアミノ酸についての置換コドンは、そのアミノ酸が属するクラスの他
のメンバーから選択され得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸、極性中性ア
ミノ酸、正に荷電した（塩基性）アミノ酸、および負に荷電した（酸性）アミノ
酸である。
【０１１２】 本発明のＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰ誘導体およびアナロ
グは、当該分野で公知の種々の方法によって産生され得る。それらの産生を生じ
る操作は、遺伝子またはタンパク質レベルで生じ得る。例えば、クローニングさ
れたＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子配列は、当該分野
で公知の多数のストラテジーのいずれかによって改変され得る（Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら、１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ）。その配列は、インビトロで制限ヌクレアーゼを用いて適切な部位
で切断され得、続いて必要な場合、さらなる酵素的改変を行い、単離され、そし
て連結される。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体また
はアナログをコードする遺伝子の産生において、その改変された遺伝子が、翻訳
停止シグナルによって中断されていないもともとの転写リーディングフレームを
保持することを確実にするように注意が払われるベきである。
【０１１３】 任意の異種タンパク質コード配列に融合された ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ− ２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、Ｌ
ＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１
０の一部を含むキメラ遺伝子が構築され得る。特定の実施態様は、少なくとも６
アミノ酸のＬＹＳＴおよび／またはＬＹＳＴ−ＩＰのフラグメント、あるいはＬ
ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
Ｐ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のフラグメントを含むキメラタンパク質に関
する。
【０１１４】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴタンパク質もしくはＬＹＳＴ−２タンパク
質およびＬＹＳＴ−ＩＰおよび／または必要に応じて異種機能性試薬（例えば、
２つのドメイン間のペプチドリンカー）の相互作用ドメインを含む融合タンパク
質が提供され、ここでこのような試薬はＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹ
ＳＴ−ＩＰ結合ドメインの相互作用を促進する。これらの融合タンパク質は、そ
の相互作用の安定性が望ましい場合に（分子内反応としての複合体の形成に起因
して）、例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に特異的な抗体の産生におい
て特に有用であり得る。
【０１１５】 特に、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、あるい はＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の誘導体は、機能的に等価な分子を提供
する置換、付加、または欠失によってそれらのそれぞれの配列を変化させること
によって作製され得る。ヌクレオチドコード配列の縮重に起因して、ＬＹＳＴま
たはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子と実質的に同じアミノ酸配列をコ
ードする他のＤＮＡ配列が、本発明の実施において使用され得る。これらは、そ
の配列内の同じアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換によって変更され
る（従って、サイレントな変化を生じる）ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、またはＬＹ
ＳＴ−ＩＰ遺伝子の全てまたは一部を含むヌクレオチド配列を含むがこれに限定
されない。
【０１１６】 本発明の特定の実施態様では、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳ
Ｔ−ＩＰの少なくとも６の（連続する）アミノ酸を含むＬＹＳＴもしくはＬＹＳ
Ｔ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰのフラグメントからなる、またはこのフラグメン
トを含む、タンパク質が提供される。他の実施態様では、このフラグメントは、
ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰの少なくとも約１０、２
０、３０、４０、または５０のアミノ酸からなる。特定の実施態様では、このよ
うなフラグメントは、約３５、１００、または２００アミノ酸以下の長さである
。ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、およびＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体またはアナロ
グは、種々の実施態様では、同一のサイズのアミノ酸配列にわたって、または当
該分野で公知のコンピューター相同性プログラムによってアラインメントを行っ
てアラインメントされる配列と比較した場合に、少なくとも約３０％、および９
９％までの範囲の同一性（好ましくは９０〜９５％の同一性）によって、ＬＹＳ
ＴもしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰに実質的に相同な領域を含む分
子を含むがこれらに限定されない。別の実施態様では、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ
−２、およびＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体またはアナログは、１つの化学的部分また
は側鎖基程度によってわずかに異なり得る。上記のように、コードする核酸配列
が、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする配列の
相補体（例えば、逆相補体（ｉｎｖｅｒｓｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ））にスト
リンジェントな条件、中程度にストリンジェントな条件、またはストリンジェン
トでない条件下でハイブリダイズし得る、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２、および
ＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体またはアナログもまた提供される。
【０１１７】 本発明の特定の実施態様では、このようなＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、
またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ
７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質は、組換えＤＮＡ技
術、化学合成方法、またはネイティブな供給源からの精製によって生成されたの
であろうと、一次アミノ酸配列として実質的にそのアミノ酸配列の全てまたは一
部を含むタンパク質、ならびにそれらのフラグメントならびに他のアナログおよ
び誘導体（それらに相同なタンパク質を含む）を含むがこれらに限定されない。
【０１１８】 天然の産物が変異体である疑いがあるか、または新たな種から単離される場合
、天然の供給源から単離された、ならびにインビトロで発現される、または合成
された発現ベクターからインビボもしくはインビトロで発現される、ＬＹＳＴも
しくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−ＩＰのアミノ酸配列は、ＤＮＡ配列の分
析から決定され得るか、あるいはこの単離されたタンパク質の直接的配列決定に
よって決定され得る。このような分析は、手動の配列決定によって、または自動
化アミノ酸配列決定機の使用を介して行われ得る。
【０１１９】 （新規ＬＩＰ遺伝子の同定および単離） 本発明は、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、
ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のタンパク質をコードするヌ
クレオチド配列に関連する。特定の実施態様では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬ
ＩＰ１０の核酸配列は、それぞれ、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５
、１７、１９、および２１の配列、またはそれらの一部、あるいは全体もしくは
一部分においてＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のタンパク質（例えば、そ
れぞれ、配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、および２
２のアミノ酸配列、またはそれらの一部を含むタンパク質）をコードするヌクレ
オチド配列を含む。本発明は、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、
ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ
１０の配列の少なくとも６個のヌクレオチド（すなわち、ハイブリダイズ可能な
部分）からなる精製された核酸を提供する。他の実施態様では、この核酸は、Ｌ
ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
Ｐ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の遺伝子配列の少なくとも約２５の（連続
する）ヌクレオチド、５０ヌクレオチド、１００ヌクレオチド、１５０ヌクレオ
チド、もしくは２００ヌクレオチド、または全長のＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくは
ＬＩＰ１０の遺伝子配列からなる。別の実施態様では、この核酸は、約３５、２
００、または５００のヌクレオチド長よりも小さい。核酸は、一本鎖または二本
鎖であり得る。
【０１２０】 本発明はまた、上記の配列にハイブリダイズ可能または相補的な核酸に関連し
、特に本発明は、上記の配列にハイブリダイズ可能な核酸に対する逆相補体を提
供する（すなわち、ある核酸鎖の逆相補体は、この鎖とは逆の配向で走る相補的
な配列を有し、その結果、逆相補体は、ほとんどまたは全くミスマッチせずに、
この核酸鎖にハイブリダイズする；従って、例えば、コード鎖が、コード鎖とハ
イブリダイズ可能な鎖との間でミスマッチなしで核酸にハイブリダイズ可能であ
る場合、ハイブリダイズ可能な鎖の逆相補体は、このコード鎖に同一である）。
特定の局面では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ
６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の遺伝子の少なくとも
約１０、２５、５０、１００、もしくは２００ヌクレオチドで、またはそのコー
ド領域全体で相補的な（特に、その逆相補体である）配列を含む核酸分子が提供
される。
【０１２１】 特定の実施態様では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、
ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の核酸配列（例
えば、それぞれ、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９およ
び２１の配列を有する）に、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタ
ンパク質誘導体（もしくは上記の相補体）をコードする核酸配列に、低ストリン
ジェンシーの条件下でハイブリダイズ可能な核酸が提供される。このような低ス
トリンジェンシーの条件を用いる、例としての、そして限定ではない手順は以下
の通りである（また、ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：６７８９−６７９２を参照のこ
と）：ＤＮＡを含むフィルターを、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＰＶＰ、０
．１％ Ｆｉｃｏｌｌ、１％ ＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌ変性サケ精子Ｄ
ＮＡを含む溶液中で４０℃にて６時間前処理する。ハイブリダイゼーションを、
以下の改変を有する同じ溶液中で行う：０．０２％ ＰＶＰ、０．０２％ Ｆｉ
ｃｏｌｌ、０．２％ ＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ、１０％（重量
／容量）デキストラン硫酸、および５〜２０×１０6ｃｐｍ ３２Ｐ標識プロー ブ。フィルターを、ハイブリダイゼーション混合物中で４０℃にて１８〜２０時
間インキュベートし、次いで２×ＳＳＣ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７
．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．１％ ＳＤＳを含む溶液中で５５℃にて
１．５時間洗浄する。洗浄溶液を、新鮮な溶液で置き換え、そして６０℃にてさ
らに１．５時間インキュベートする。フィルターをブロット乾燥し、そしてオー
トラジオグラフィーに曝露する。必要な場合、フィルターを、３度目に６５〜６
８℃にて洗浄し、そしてフィルムに再度曝露する。用いられ得る、低ストリンジ
ェンシーの他の条件は、（例えば、交叉種（ｃｒｏｓｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ）ハイ
ブリダイゼーションのために用いられるように）当該分野で周知である。例えば
、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ
ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏ
ｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ
ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｓ
ｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【０１２２】 別の特定の実施態様では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ
５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の核酸配列
（もしくは上記の相補体）に、またはこれらの誘導体をコードする核酸配列に、
高ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズ可能な核酸配列が提供される。
本発明の最も好ましい実施態様では、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーシ
ョン条件を利用することに留意すべきである。このような高ストリンジェンシー
の条件を用いる、例としての、そして限定ではない手順は以下の通りである：Ｄ
ＮＡを含むフィルターのプレハイブリダイゼーションを、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２％ ＰＶＰ、
０．０２％ Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ ＢＳＡ、および５００μｇ／ｍｌ変性
サケ精子ＤＮＡから構成される緩衝液中で６５℃にて８時間〜一晩行う。フィル
ターを、１００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡおよび５〜２０×１０6ｃｐｍの ３２Ｐ標識プローブを含むプレハイブリダイゼーション混合物中で６５℃にて４
８時間ハイブリダイズする。フィルターの洗浄を、２×ＳＳＣ、０．０１％ Ｐ
ＶＰ、０．０１％ Ｆｉｃｏｌｌ、および０．０１％ ＢＳＡを含む溶液中で３
７℃にて１時間行う。これに続いて、０．１×ＳＳＣ中で５０℃にて４５分間洗
浄し、その後オートラジオグラフィーを行う。用いられ得る、高ストリンジェン
シーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），
１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇ
ｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯ
Ｎ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
，ＮＹを参照のこと。
【０１２３】 別の特定の実施態様では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ
５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の核酸配列
に、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の誘導体（または上記の相補
体）をコードする核酸配列に、中程度のストリンジェンシーの条件下でハイブリ
ダイズ可能な核酸配列が提供される。例えば（しかし、これらに限定されない）
、このような中程度のストリンジェンシーの条件を用いる手順は以下の通りであ
る：ＤＮＡを含むフィルターを、６×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％
ＳＤＳ、および１００μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で５５℃にて
６時間前処理する。ハイブリダイゼーションを、５〜２０×１０6ｃｐｍ 32Ｐ 標識プローブを有する同じ溶液中で行う。フィルターを、ハイブリダイゼーショ
ン混合物中で５５℃にて１８〜２０時間インキュベートし、次いで１×ＳＳＣお
よび０．１％ ＳＤＳを含む溶液中で６０℃にて３０分間で２回洗浄する。フィ
ルターをブロット乾燥し、そしてオートラジオグラフィーに曝露する。用いられ
得る、中程度なストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。フィ
ルターの洗浄は、２×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳを含む溶液中で３７℃にて１時
間行われる。用いられ得る、中程度なストリンジェンシーの他の条件は、当該分
野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ
ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥ
ＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴ
ＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【０１２４】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質の誘導体およびアナログ
をコードする核酸分子（前出）、またはこれらに対するアンチセンス核酸（例え
ば、以下を参照のこと）がさらに提供される。容易に明らかなように、本明細書
中で用いられる「ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ
６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のタンパク質のフラグメ
ントまたは一部をコードする核酸」は、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ
４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の
タンパクの記載されたフラグメントまたは記載された一部分のみをコードする核
酸を言及し、連続配列としての、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、Ｌ
ＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の他の連
続する部分を言及しないと解釈されるべきである。
【０１２５】 ヌクレオチド配列においては、潜在的なオープンリーディングフレームが、公
共に利用可能なＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴプログラムＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒを用いて
同定され得る。全ての公知のタンパク質翻訳産物は、少なくとも６０アミノ酸以
上である（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９９２，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，第２版，Ｗ．Ｈ
．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）ので、６０アミノ酸以
上のタンパク質を潜在的にコードするＯＲＦのみを考慮する。開始メチオニンコ
ドン（ＡＴＧ）および翻訳停止コドン（ＴＧＡ、ＴＡＡ、またはＴＡＧ）が同定
されるならば、このタンパク質の境界が定義される。他の潜在的タンパク質は、
このヌクレオチド配列の５’末端に及ぶ、任意のオープンリーディングフレーム
を含み、この場合、このオープンリーディングフレームは、より長いタンパク質
のＣ末端またはコア部分を予測する。同様に、ヌクレオチド配列の３’末端に及
ぶ任意のオープンリーディングフレームは、より長いタンパク質のＮ末端部分を
予測する。この方法論を用いて、相互作用体ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、Ｌ
ＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１
０をコードするオープンリーディングフレームを同定した。
【０１２６】 当該分野で利用可能な任意の方法を用いて、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、
ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ
１０のタンパク質をコードする全長の（すなわち、コード領域全体を包含する）
ｃＤＮＡクローンを入手し得る。詳細には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を
用いて、ｃＤＮＡライブラリーからインシリコ（ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ）で配列を
増幅し得る。同定された配列の３’末端および５’末端で配列にハイブリダイズ
するオリゴヌクレオチドプライマーをプライマーとして用いて、適切な供給源由
来の核酸サンプル（ｃＤＮＡまたはＤＮＡ）（例えば、改変された酵母ツーハイ
ブリッドアッセイ融合集団についての最初のｃＤＮＡライブラリーが、誘導され
たサンプル、または例えば、これらのゲノムＤＮＡ）から、好ましくはｃＤＮＡ
ライブラリーからＰＣＲによって配列を増幅し得る。
【０１２７】 ＰＣＲを、例えば、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓサーマルサイクラ
ーおよびＴａｑポリメラーゼを使用することにより行い得る。増幅されるＤＮＡ
は、任意の真核生物種由来のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ配列を含み得る。この
ＰＣＲ反応において用いるためのいくつかの異なる縮重プライマーを合成するた
めに選択し得る。公知のヌクレオチド配列と単離される核酸ホモログとの間のよ
り大きいかまたはより小さな程度のヌクレオチド配列類似性を考慮に入れること
により、核酸ホモログを増幅するため（例えば、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩ
Ｐ１０の配列をヒト以外の種から入手するため、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、また
はＬＩＰ１０に相同性を有するヒト配列を入手するために）のＰＣＲ反応を開始
する際に用いられるハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーを変化さ
せることもまた可能である。
【０１２８】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の配列の全てまたは一部を含む核酸の首
尾よい増幅後、このセグメントは、分子的にクローニングおよび配列決定され得
、そして完全なｃＤＮＡクローンまたはゲノムクローンを単離するためのプロー
ブとして利用され得る。次いで、これは、以下に記載されるように、遺伝子の完
全なヌクレオチド配列の決定、その発現の分析、および機能分析のためのそのタ
ンパク質産物の生成を可能にする。この様式では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬ
ＩＰ１０の遺伝子全体のヌクレオチド配列、ならびにＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、または
ＬＩＰ１０のタンパク質またはアナログをコードするさらなる遺伝子が同定され
得る。
【０１２９】 任意の真核生物細胞は、潜在的に、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の遺
伝子の分子クローニングのための核酸供給源として役立ち得る。この核酸は、脊
椎動物（ヒトおよび他の霊長類供給源、ブタ、ウシ、ネコ、トリ、ウマ、イヌ、
ならびにさらなる哺乳動物供給源を含む）、および昆虫、植物などから単離され
得る。このＤＮＡは、クローニングされたＤＮＡ（例えば、ＤＮＡ「ライブラリ
ー」）から当該分野で公知の標準的手順によって、化学合成によって、ｃＤＮＡ
クローニングによって、もしくは所望の細胞から精製されたゲノムＤＮＡまたは
それらのフラグメントのクローニングによって、入手され得る（例えば、Ｓａｍ
ｂｒｏｏｋら，１９８９，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ ＬＡＢＯ
ＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＧｌｏｖｅｒ（編），１９８５，ＤＮＡ ＣＬＯＮ
ＩＮＧ：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ，ＭＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｌ
ｔｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕ．Ｋ．第Ｉ巻、第ＩＩ巻を参照のこと）。ゲノムＤＮ
Ａに由来するクローンは、コード領域に加えて調節性および介在性のＤＮＡ領域
を含み得る：ｃＤＮＡに由来するクローンは、エキソン配列のみを含む。供給源
が何であろうと、この遺伝子は、この遺伝子の増殖のために適切なベクター中に
分子的にクローニングされるべきである。
【０１３０】 ゲノムＤＮＡからの遺伝子の分子クローニングでは、ＤＮＡフラグメントが生
成され、それらのいくつかは所望の遺伝子をコードする。ＤＮＡは、種々の制限
酵素を用いて特定の部位で切断され得る。あるいは、ＤＮＡを断片化するために
、マンガンの存在下でＤＮａｓｅを用い得るか、またはこのＤＮＡは、例えば、
超音波処理によって物理的に剪断され得る。次いで、直鎖状ＤＮＡフラグメント
は、標準的技術（アガロースおよび／またはポリアクリルアミドゲル電気泳動、
ならびにカラムクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない）によってサ
イズに従って分離され得る。
【０１３１】 一旦ＤＮＡフラグメントが生成されると、所望の遺伝子を含む特定のＤＮＡフ
ラグメントの同定は、多数の方法において達成され得る。例えば、（任意の種の
）ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の遺伝子の一部（例えば、上記の通り
に入手されるＰＣＲ増幅産物、または公知のヌクレオチド配列の一部の配列を有
するオリゴヌクレオチド）もしくはその特定のＲＮＡ、またはそれらのフラグメ
ントが精製および標識され得、そして生成されたＤＮＡフラグメントが、標識プ
ローブへの核酸ハイブリダイゼーション（ＢｅｎｔｏｎおよびＤａｖｉｓ，１９
７７，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９６：１８０−１８２；ＧｒｕｎｓｔｅｉｎおよびＨ
ｏｇｎｅｓｓ，１９７５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ
．７２：３９６１−３９６４）によってスクリーニングされ得る。このプローブ
に対する実質的相同性を有するＤＮＡフラグメントは、ハイブリダイズする。制
限酵素消化、および利用可能であるならば公知の制限マップによって予測される
フラグメントサイズとのフラグメントサイズの比較によって、またはＤＮＡ配列
分析およびＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の公知のヌクレオチド配列の
比較によって、適切なフラグメントを同定することもまた可能である。さらなる
選択は、遺伝子の特性に基づいて行なわれ得る。あるいは、遺伝子の存在は、そ
の発現産物の物理的、化学的、または免疫学的な特性に基づくアッセイによって
検出され得る。ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０について公知のような、例
えば、類似もしくは同一の電気泳動移動、等電点電気泳動挙動、タンパク質消化
マップ、または抗原性特性、もしくはＬＹＳＴに結合する能力を有するタンパク
質を生成する、例えば、ｃＤＮＡクローン、または適切なｍＲＮＡをハイブリッ
ド選択するＤＮＡクローンが選択され得る。抗ＬＩＰ１抗体、抗ＬＩＰ２抗体、
抗ＬＩＰ３抗体、抗ＬＩＰ４抗体、抗ＬＩＰ５抗体、抗ＬＩＰ６抗体、抗ＬＩＰ
７抗体、抗ＬＩＰ８抗体、抗ＬＩＰ９抗体、または抗ＬＩＰ１０抗体が利用可能
な場合、このタンパク質は、推定のＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０合成ク
ローンへの標識抗体の結合によって、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）
型手順において同定され得る。
【０１３２】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のｃＤＮＡを単離することの代替法は、
遺伝子配列自体を公知の配列から化学的に合成することを含むがこれらに限定さ
れない。他の方法が可能であり、そして本発明の範囲内にある。次いで、同定お
よび単離された核酸は、適切なクローニングベクターに挿入され得る。
【０１３３】 特定の実施態様では、単離されたＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の遺伝
子、ｃＤＮＡ、または合成されたＤＮＡ配列を取り込む組換えＤＮＡ分子での宿
主細胞の形質転換は、多コピーのこの遺伝子の生成を可能にする。従って、この
遺伝子は、形質転換体を増殖させ、この形質転換体から組換えＤＮＡ分子を単離
し、そして必要な場合には、挿入された遺伝子を単離された組換えＤＮＡから回
収することにより、大量に入手され得る。
【０１３４】 本発明によって提供される、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩ
Ｐ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の核酸配列
は、上記のように、それぞれのネイティブなタンパク質において見出される実質
的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、機能的に等価なアミノ酸
を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列、およびＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしく
はＬＩＰ１０の他の誘導体もしくはアナログをコードする配列を含む。
【０１３５】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩ
Ｐ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ
９、およびＬＩＰ１０のタンパク質に対する抗体） 本発明によれば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはそれらのフラグメ
ント、誘導体、もしくはホモログ、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２
、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、
もしくはＬＩＰ１０のタンパク質、またはそれらのフラグメント、ホモログ、お
よび誘導体を、免疫原として用い、このような免疫原に免疫特異的に結合する抗
体を生成し得る。上記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメ
ラ抗体、および単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、ならびにＦａｂ発現ライブラリ
ーを含むがこれらに限定されない。特定の実施態様では、ヒトＬＹＳＴまたはＬ
ＹＳＴ−２とヒトＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体に対する抗体が生成される。別の実
施態様では、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２のフラグメントとＬＹＳＴ−ＩＰのフ
ラグメントから形成された複合体（ここで、このフラグメントは、この複合体の
他のメンバーと相互作用するタンパク質ドメインを含む）は、抗体生成のための
免疫原として用いられる。別の特定の実施態様では、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしく
はＬＩＰ１０のタンパク質、またはそれらのフラグメント、誘導体、もしくはホ
モログが免疫原として用いられる。
【０１３６】 当該分野で公知の種々の手順は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に対するポ
リクローナル抗体、またはそれらの誘導体もしくはアナログに対するポリクロー
ナル抗体、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタ
ンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、もしくはアナログに対するポ
リクローナル抗体の生成のために用いられ得る。
【０１３７】 抗体の産生のために、種々の宿主動物は、ネイティブなＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、Ｌ
ＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパ
ク質、または合成バージョン、または前述の誘導体（例えば、架橋ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰでの注射により免疫され得る。このような宿主動物は、ウサギ、マ
ウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない。種々のアジュバントは、宿主
種に依存して、免疫学的応答を増大させるために使用され得る。フロイント（完
全および不完全）、鉱物ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、表面活性物質（
例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オ
イルエマルジョン、ジニトロフェノール、および潜在的に有用なヒトアジュバン
ト（例えば、カルメット−ゲラン杆菌（ＢＣＧ）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）を含むが、これらに限定されない。
【０１３８】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に対する、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９もしくはＬＩＰ１０タンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、
もしくはアナログに対するモノクローナル抗体の調製のために、培養物中の連続
した細胞株による抗体分子の産生のために提供される任意の技術が使用され得る
。このような技術は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎによりもともと開発
されたハイブリドーマ技術（１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７
）、トリオーマ技術（Ｒｏｓｅｎら、１９７７、Ｃｅｌｌ １１：１３９−１４
７）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２）、およびヒトモノクローナル抗体を産生す
るためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５、Ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａ
ｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．７７〜９６頁）を含むが、これらに限定されない。
本発明のさらなる実施態様では、モノクローナル抗体は、無菌動物において産生
され得る（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９０／０２５４５号を参照のこと）。本発明に
従って、ヒト抗体が使用され得、そしてこれは、ヒトハイブリドーマを使用する
こと（Ｃｏｌｅら、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８０：２０２６−２０３０）により、またはヒトＢ細胞をＥＢＶウイルスでイ
ンビトロで形質転換すること（Ｃｏｌｅら、１９８５、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ
ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ
．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．７７〜９６頁）により得られ得る。実際、本発明に従って
、適切な生物学的活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ
−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タン
パク質に特異的なマウス抗体分子由来の遺伝子をスプライシングすることによる
、キメラ抗体の産生のために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５；
Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔ
ａｋｅｄａら、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４）が使用され
得る：このような抗体は、本発明の範囲内である。
【０１３９】 本発明に従って、単鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４，９
４６，７７８号）は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体特異的単鎖抗体、および
ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質特異的単鎖抗
体を産生するように適合化され得る。本発明のさらなる実施態様は、ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、または個々のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしく
はＬＩＰ１０タンパク質、誘導体、もしくはアナログに対する所望の特異性を有
するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ容易な同定を可能にするため
に、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築について記載される技術（Ｈｕｓｅら、１９
８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１）を利用する。非ヒト抗体
は、公知の方法によってヒト化され得る（例えば、米国特許第５，２２５，５３
９号を参照のこと）。
【０１４０】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
、もしくはＬＩＰ１０タンパク質のイディオタイプを含む抗体フラグメントは、
当該分野で公知の技術によって生成され得る。例えば、このようなフラグメント
は、以下を含むが、これらに限定されない：抗体分子のペプシン消化により産生
され得るＦ（ａｂ）2フラグメント；Ｆ（ａｂ）2フラグメントのジスルフィド架
橋を還元することにより生成され得るＦａｂ’フラグメント；パパインおよび還
元剤で抗体分子を処理することにより生成され得るＦａｂフラグメント；および
Ｆｖフラグメント。
【０１４１】 抗体の産生において、所望の抗体についてのスクリーニングは、当該分野で公
知の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ））によって達成さ
れ得る。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、Ｌ
ＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩ
Ｐ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質の特定のドメインに特異的な抗体を選択す
るために、このようなドメインを含む、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、また
はＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ
６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質のフラグメ
ントに結合する産物について、生成されたハイブリドーマをアッセイし得る。Ｌ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に特異的に結合するが、ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の
個々のタンパク質に特異的に結合しない抗体の選択について、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体へのポジティブな結合、および個々のＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−
ＩＰタンパク質への結合の欠如に基づいて選択し得る。
【０１４２】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のドメインに特異的な抗体もまた、ＬＹＳＴ
−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ
７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質の特異的ドメインに対
する抗体と同様に、提供される。
【０１４３】 前記の抗体は、本発明のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−
２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質の局在および／または定
量に関連する技術分野において公知の方法（例えば、これらのタンパク質を画像
化するための方法、適切な生理学的サンプルにおいてそれらのレベルを測定する
ための方法、診断方法など）において使用され得る。
【０１４４】 本発明の別の実施態様では、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体抗体およびそ
れらのフラグメント、または抗ＬＹＳＴ−２、抗ＬＩＰ１、抗ＬＩＰ２、抗ＬＩ
Ｐ３、抗ＬＩＰ４、抗ＬＩＰ５、抗ＬＩＰ６、抗ＬＩＰ７、抗ＬＩＰ８、または
抗ＬＩＰ９、もしくは抗ＬＩＰ１０抗体またはそれらのフラグメント（結合ドメ
インを含む）は、下記のような治療薬である。
【０１４５】 （診断、予後、およびスクリーニング） ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体は、シグナル伝達、小胞体輸送、酸性細胞内
小器官の形成および細胞分泌、およびタンパク質輸送を含む生理学的プロセスを
含むが、これらに限定されない正常な生理学的プロセス；ならびに、アトピー性
疾患（ａｔｏｐｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫疾患、変性障害（神経変性
障害を含む）、過増殖性障害（腫瘍形成および腫瘍進行を含む）、眼・皮膚白皮
症、色素不足（ｈｙｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）、および血小板機能不全を
含むが、これらに限定されない病理学的プロセスのマーカーであり得、従って、
診断有用性を有し得る。さらに、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質の上昇もしくは欠
損を有する特定の患者群を規定することにより、新規の疾患の分類に至り得、診
断能を促進する。
【０１４６】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のレベル、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
−２と複合体を形成することが示されている個々のタンパク質のレベル、または
ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質のレベルを検
出すること；あるいはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の成分をコードするｍＲ
ＮＡのレベル、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、もしくはＬＩＰ９タンパク質をコ
ードするｍＲＮＡのレベルを検出することが、疾患状態の経過を追跡すること、
治療応答を追跡することなどのために診断において使用され得る。
【０１４７】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体およびＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の個
々の成分、およびそれらの誘導体、アナログおよび部分配列；ＬＹＳＴもしくは
ＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０核酸（およびそれらに相補的な配列）；抗ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体抗体、およびＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を形成し
得る個々の成分に対する抗体；ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もし
くはＬＩＰ１０に特異的な抗体が、診断において有用性を有する。このような分
子は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の異常レベル、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
、もしくはＬＩＰ１０タンパク質の異常なレベルにより特徴付けられる、種々の
状態、疾患、および障害、ならびにそれらの処置を検出、予後、診断、またはモ
ニタリングするためにアッセイ（例えば、免疫アッセイ）において使用され得る
。
【０１４８】 特に、このような免疫アッセイは、免疫特異的結合が生じ得るような条件下で
、患者由来のサンプルを、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体抗体、またはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０に特異的な抗体と接触させる
工程、およびこのような抗体により生じる任意の免疫特異的結合の量を検出また
は測定する工程を包含する方法により実施される。特定の局面では、抗体のこの
ような結合（例えば、組織切片における）は、異常なＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ
複合体形成、または異常なＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩ
Ｐ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１
０タンパク質局在、または異常な（例えば、高い、低い、または無）レベルのＬ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、または異常なレベルのＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１
、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、
ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質を検出するために使用され得る。特定
の実施態様では、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に対する抗体は、ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の存在について患者組織もしくは血清サンプルをアッセイ
するために使用され得る。ここで、異常なレベルのＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体は、疾患状態の指標である。別の実施態様では、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０に対する抗体が、上記タンパク質の存在について患
者の組織または血清サンプルをアッセイするために使用され得る。ここで、異常
なレベルのＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５
、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０は、疾患状態
の指標である。「異常なレベル」とは、存在することが以前に見出されたレベル
に対して、または身体の別の部分もしくは障害を有さない被験体のいずれかに由
来する類似のサンプルにおける標準のレベルに対して増大したもしくは減少した
レベルを意味する。使用され得る免疫アッセイは、下記に記載される。
【０１４９】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の成分をコードする核酸、およびＬＹＳＴ−
２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質をコードする核酸、なら
びに関連のヌクレオチド配列および部分配列（相補的配列を含む）はまた、ハイ
ブリダイゼーションアッセイにおいて使用され得る。ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰヌクレオチド配列、もしくはそれらの部分配
列（およそ、少なくとも６ヌクレオチドを含む）は、ハイブリダイゼーションプ
ローブとして使用され得る。ハイブリダイゼーションアッセイは、上述のように
、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の成分、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、Ｌ
ＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩ
Ｐ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質をコードするｍＲＮＡの異常レベルと関連
した状態、障害、もしくは疾患状態を検出、予後、診断、もしくはモニタリング
するために使用され得る。特に、このようなハイブリダイゼーションアッセイは
、核酸を含有するサンプルを、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−
ＩＰ ＤＮＡもしくはＲＮＡにハイブリダイズし得る核酸プローブと、ハイブリ
ダイゼーションが生じ得るような条件下で接触させる工程、および任意の得られ
たハイブリダイゼーションを検出もしくは測定する工程を包含する方法により、
実施される。ハイブリダイゼーション条件については、上記を参照のこと。好ま
しい局面では、ハイブリダイゼーションアッセイは、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−２複
合体の両メンバーの発現を同時に測定するために、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−
２に、およびＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２の結合パートナーにハイブリダイズ
し得る核酸プローブを用いて実施される。別の好ましい実施態様では、ＬＹＳＴ
−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ
７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０をコードするｍＲＮＡの発現が測
定される。
【０１５０】 特定の実施態様では、異常なレベルのＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を包含
するか、またはこれにより特徴付けられる疾患および障害が診断され得るか、ま
たはそれらの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはこのような障害
を発症する素因が検出され得、これらは、異常なレベルのＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体、または非複合体ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、および／またはＬ
ＹＳＴ−ＩＰタンパク質もしくは核酸もしくは機能的活性（相互作用パートナー
への結合を含むが、それに限定されない）を検出すること、あるいはＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体および／またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、および／
またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２に結合するタンパク質の発現もしくは活性
の増大もしくは減少を引き起こす、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２における変異
、および／または、ＬＹＳＴ−ＩＰ ＲＮＡ、ＤＮＡ、もしくはタンパク質にお
ける変異（例えば、転座、短縮化、野生型ＬＹＳＴおよび／またはＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐに対するヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる。
このような疾患および障害は、以下、後のサブセクションに記載されるものを包
含するが、これらに限定されない。
【０１５１】 例のために、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＹ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＹ−Ｉ
Ｐ複合体の個々の成分のレベルは、免疫アッセイによって検出され得る；ＬＹＳ
Ｔおよび／またはＬＹＳＴ−ＩＰ ｍＲＮＡのレベルは、ハイブリダイゼーショ
ンアッセイ（例えば、ノーザンブロット、ドットブロット）によって検出され得
る；ＬＹＳＴの結合もしくはＬＹＳＴ−ＩＰへの結合は、当該分野で一般に公知
の結合アッセイによって測定され得る；ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／
またはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする遺伝子における転座および点変異は、サザン
ブロッティング、ＲＦＬＰ分析、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／または
ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の少なくともほとんどに及ぶフラグメントを好ましくは生
成するプライマーを使用するＰＣＲ、患者から得られたＬＹＳＴもしくはＬＹＳ
Ｔ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡの配列決
定などによって検出され得る。
【０１５２】 当該分野で周知のアッセイ（例えば、上記のアッセイ（例えば、核酸ハイブリ
ダイゼーションアッセイ、活性アッセイ）および下記のアッセイ（例えば免疫ア
ッセイ）など）は、１つ以上の特定のＬＹＳＴ：ＬＹＳＹ−ＩＰ複合体が、特定
の疾患もしくは障害に罹患したか、またはこのような疾患もしくは障害を発症す
る素因を有する患者由来のサンプルにおいて、このような疾患もしくは障害を有
さない被験体由来のサンプルにおけるレベルと比較して、増大したもしくは減少
したいずれかのレベルで存在するか、または存在しないかどうかを決定するため
に使用され得る。
【０１５３】 さらに、これらのアッセイは、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＹ−ＩＰ複合体のＬＹＳＴ：
ＬＹＳＹ−ＩＰ複合体の非複合体化成分（すなわち、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
−２）および／または目的の複合体中の特定のＬＹＳＴ−ＩＰに対する割合は、
特定の疾患もしくは障害に罹患したか、またはこのような疾患もしくは障害を発
症する素因を有する患者由来のサンプルにおいて、このような疾患もしくは障害
を有さない被験体由来のサンプルにおける割合と比較して、増大もしくは減少さ
れる。
【０１５４】 １つ以上の特定のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のレベルが、特定の疾患も
しくは障害に罹患したか、またはこのような疾患もしくは障害を発症する素因を
有する患者において変化していると決定された場合には、特定の疾患もしくは障
害、または疾患もしくは障害の素因は、診断され得、それについて規定された予
後を有し得、スクリーニングされ得、またはモニタリングされ得る。これらは、
１つ以上のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質複合体、１つ以上の特定のＬＹ
ＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ、またはＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の機能的活性のレベルの変化を検出することによる。
【０１５５】 従って、本発明の特定の実施態様では、１つ以上のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ
複合体のレベル増大を包含する疾患および障害が、診断され得るか、またはそれ
らの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはそのような障害を発症す
る素因が検出され得る。これらは、１つ以上のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
、この複合体の両メンバーをコードするｍＲＮＡ、もしくは複合体機能的活性の
レベルの増大を検出することによるか、またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
形成を安定化もしくは増大させる、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ
−ＩＰにおける変異（例えば、核酸における転座、遺伝子もしくはタンパク質に
おける短縮化、野生型ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰに対す
るヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる。
【０１５６】 従って、本発明の別の特定の実施態様では、１つ以上のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体のレベル減少を包含する疾患および障害が、診断され得るか、または
それらの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはそのような障害を発
症する素因が検出され得る。これらは、１つ以上のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体、１つ以上の複合体のメンバーをコードするｍＲＮＡ、もしくは複合体機能
的活性のレベルの減少を検出することによるか、またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐ複合体形成を阻害もしくは減少させる、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２もしく
はＬＹＳＴ−ＩＰにおける変異（例えば、核酸における転座、遺伝子もしくはタ
ンパク質における短縮化、野生型ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−
ＩＰに対するヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる
。
【０１５７】 なお別の特定の実施態様では、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬ
ＩＰ１０タンパク質の異常な発現を包含する疾患および障害が、診断されるか、
またはそれらの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはそのような障
害を発症する素因が検出され得る。これらは、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
、もしくはＬＩＰ１０タンパク質、またはｍＲＮＡ、または機能的活性の異常な
レベルを検出することによるか、または上記ＬＹＳＴ−２もしくは上記新規ＬＩ
Ｐタンパク質の発現もしくは活性の異常を引き起こす、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１
、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、
ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質もしくはｍＲＮＡもしくはＤＮＡに
おける変異（例えば、核酸における転座、遺伝子もしくはタンパク質における短
縮化、野生型ＬＹＳＴ−２または野生型新規ＬＩＰ遺伝子もしくはタンパク質に
対するヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる。この
ような疾患および障害は、以下に記載されるものを包含するが、これらに限定さ
れない。例のために、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の
ｍＲＮＡもしくはタンパク質のレベル、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２結合活性
、または転座もしくは点変異の存在は、上記のように決定され得る。
【０１５８】 当該分野で周知のアッセイ（例えば、上記のアッセイ（例えば、免疫アッセイ
、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ、活性アッセイなど））は、ＬＹＳＴ−
２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０が、特定の疾患もしくは障害に罹患
したか、またはこのような疾患もしくは障害を発症する素因を有する患者由来の
サンプルにおいて、このような疾患もしくは障害を有さない被験体由来のサンプ
ルにおけるレベルと比較して、増大したもしくは減少したいずれかのレベルで存
在するか、または存在しないかどうかを決定するために使用され得る。
【０１５９】 上記ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、Ｌ
ＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のレベルが、特定
の疾患もしくは障害に罹患したか、またはこのような疾患もしくは障害を発症す
る素因を有する患者において変化していると決定される場合には、特定の疾患も
しくは障害、または疾患もしくは障害に関する素因は、診断され得、それについ
て規定された予後を有し得、スクリーニングされ得、またはモニタリングされ得
る。これらは、上記ＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰのタンパク質、ｍＲＮＡ
、または機能的活性（例えば、ＬＹＳＴへの結合）の変化したレベルを検出する
ことによる。
【０１６０】 従って、本発明の特定の実施態様では、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、も
しくはＬＩＰ１０タンパク質のレベル増大を包含する疾患および障害が、診断さ
れ得るか、またはそれらの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはそ
のような障害を発症する素因が検出され得る。これらは、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ
１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質、コードする核酸、もしくは機能的
活性のレベルの増大を検出することによるか、または上記ＬＹＳＴ−２もしくは
新規ＬＩＰ安定性もしくは機能的活性を増強する、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、Ｌ
ＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩ
Ｐ９、もしくはＬＩＰ１０における変異（例えば、核酸における転座、遺伝子も
しくはタンパク質における短縮化、野生型ＬＹＳＴ−２または新規ＬＩＰに対す
るヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる。
【０１６１】 従って、本発明の別の特定の実施態様では、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
、もしくはＬＩＰ１０のレベル減少を包含する疾患および障害が、診断され得る
か、またはそれらの疑わしい存在がスクリーニングされ得るか、またはそのよう
な障害を発症する素因が検出され得る。これらは、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくは
ＬＩＰ１０タンパク質、核酸、もしくは機能的活性のレベルの減少を検出するこ
とによるか、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０機能
的活性を不安定化もしくは減少させる、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もし
くはＬＩＰ１０における変異（例えば、核酸における転座、遺伝子もしくはタン
パク質における短縮化、野生型ＬＹＳＴ−２または新規ＬＩＰに対するヌクレオ
チドもしくはアミノ酸配列の変更）を検出することによる。
【０１６２】 検出技術（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に対する抗体、またはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質に対する抗体を包
含する技術）の使用は、これら複合体またはタンパク質を発現する特定の細胞を
検出する方法を提供する。このようなアッセイを使用して、１つ以上の特定のＬ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、または上記個々のＬＹＳＴ−２または新規ＬＩ
Ｐタンパク質が発現される特定の細胞型が規定され得、そしてこの複合体または
タンパク質の存在は、細胞生存度と相関し得る。
【０１６３】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２
、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、
もしくはＬＩＰ１０タンパク質を、特定のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体また
は上記個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規ＬＩＰタンパク質、またはそれらの誘導
体を発現する細胞培養物モデルにおいて、獲得のためにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐ複合体、または上記個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規ＬＩＰタンパク質を特徴
付けるかまたは調製する目的で、検出する方法もまた、具体化される。この実施
態様は、原核生物（例えば、細菌、これに限定されない）（ＤａｖｅｙおよびＫ
ｅｌｌ、１９９６、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．６０：６４１−６９６）、真
核生物（哺乳動物種（例えば、ヒト）を包含する）由来の初代培養物および組織
標本（Ｓｔｅｅｌｅら、１９９６、Ｃｌｉｎ． Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ
３９：８０１−８１３）、および連続細胞培養物（ＯｒｆａｏおよびＲｕｉｚ
−Ａｒｇｕｅｌｌｅｓ、１９９６、Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：５−９）
の細胞選別を包含する。このような単離はまた、上述した診断の方法として使用
され得る。
【０１６４】 １つ以上の容器中に、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体抗体、もしくはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０に特異的な抗体、および必要
に応じて、この抗体に対する標識化された結合パートナーを含む、診断使用のた
めのキットもまた、提供される。あるいは、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
抗体、もしくはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩ
Ｐ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０に特異的
な抗体は、検出可能なマーカー（例えば、化学発光、酵素、蛍光、もしくは放射
性部分）で標識化され得る。１つ以上の容器中に、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−
２および／またはｌＹＳＴ−ＩＰ ｍＲＮＡにハイブリダイズし得る核酸プロー
ブを含むキットもまた、提供される。特定の実施態様では、キットは、１つ以上
の容器中に、ＬＹＳＴおよび／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、あるいはＬＹＳＴ−２、
ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、Ｌ
ＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０核酸配列の少なくとも一部分の、適切な
反応条件下での増幅を感作［例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（例えば、Ｉｎｎｉ
ｓら、１９９０、ＰＣＲ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
、Ｉｎｃ．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＥＰ ３２０，３
０８を参照のこと）、Ｑβレプリカーゼの使用、サイクリックプローブ反応、ま
たは当該分野で公知の他の方法による］し得る一対のプライマー（例えば、それ
ぞれ、約６〜４０ヌクレオチドのサイズ範囲にある）を含み得る。キットは、容
器中に、必要に応じて、所定の量の精製されたＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ、または上記の
個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰタンパク質、あるいはそれらのコード
する核酸分子を、例えば、標準もしくはコントロールとして使用するために、さ
らに含み得る。
【０１６５】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体およびＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２
、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、またはＬＩ
Ｐ９、またはＬＩＰ１０の治療用の使用） 本発明は、治療用化合物（本明細書中で「治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）
」と呼ばれる）の投与による、種々の疾患および障害の処置または予防を提供す
る。このような「治療剤」としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない
：前述（例えば、本明細書上記の通り）のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、Ｌ
ＹＳＴならびに個々のＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質およびアナログおよび誘導体（
フラグメントを含む）；それらに対する抗体（本明細書上記に記載される通り）
；ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＹＳＴ−ＩＰ、ならびにそれらの
アナログもしくは誘導体（例えば、本明細書上記に記載される通り）をコードす
る核酸；ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰアンチセン
ス核酸、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体およびＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ
１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０モジュレーター（すなわち、インヒビター、アゴ
ニストおよびアンタゴニスト）。
【０１６６】 上記で概説されるように、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２は、シグナル伝達、小
胞形態、酸性細胞内小器官の形成およびエキソサイトーシス、ならびに細胞内小
器官の機能に必要なタンパク質の分別を含むがこれらに限定されない生理学的プ
ロセスに主に関与する。同様に、ＬＹＳＴは、アトピー性疾患（気管支ぜん息を
含む）、重症免疫不全（顆粒球、リンパ球およびナチュラルキラー細胞の機能の
欠損を伴う）、眼・皮膚白皮症、低色素沈着（ｈｙｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏ
ｎ）、血小板機能異常症（出血体質）、神経変性（例えば、末梢神経障害および
運動失調）、ならびに癌を含むがこれらに限定されない病理学的状態において、
強力に関与する。同様に、ＬＹＳＴは、自己免疫障害（全身性エリテマトーデス
、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患を含む）を含むがこれらに限定されない病理
学的状態からの保護において強力に関与する。
【０１６７】 同様に、本発明に記載される公知のＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２相互作用体の
ほとんどは、カルシウム依存性エキソサイトーシスを含む、シグナル伝達および
分泌プロセスに関与する。上記の背景の節を参照のこと。これは、特に１４−３
−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、Ｘ
ＡＰ−４、ＯＳ９、ＨＲＳ、カルモジュリン、トロポニンＩ、Ｆｒｅ−１、カゼ
インキナーゼＩＩサブユニットβ、およびノルビンに関連する。シグナル伝達障
害と、アポトーシスの誘導との間に関連が存在し、これは、ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ
−２、および特に相互作用体１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｅｆ
ｓ（Ｆｙｎ関連基質）、ＨＲＳ、カルモジュリン、カゼインキナーゼＩＩサブユ
ニットβ、およびノルビンに関連し得る。
【０１６８】 自己免疫疾患および炎症において役割を有する、本発明において見出されるＬ
ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２相互作用体は、特に、エストロゲンレセプター関連タ
ンパク質、１４−３−３タンパク質、およびイモーゲン−３８である。このエス
トロゲン関連タンパク質は、ヒトの関節炎の滑膜において発現され、そしてエス
トロゲンは、種々の疾患において局所的な炎症を調整する。１４−３−３タンパ
ク質は、自己免疫疾患において、例えば、インスリンレセプター基質１と相互作
用することによって役割を果たす。イモーゲン−３８は、ミトコンドリアの自己
抗原であり、これは、糖尿病における自己免疫攻撃の標的である。
【０１６９】 さらに、本明細書中に同定されるように、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２ならび
にその結合パートナーのほとんど（例えば、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タ
ンパク質、Ｈｒｓ、カルモジュリン、Ｅｆｓ、イムポルチンβ、アトロフィン−
１、ＨＢＦ−Ｇ２、およびＤＧＳ−Ｉ）は、神経変性の障害において、有意に関
与する。上記の背景の節を参照のこと。１４−３−３は、アルツハイマー病の神
経細線維もつれにおいて、およびクロイツフェルト−ヤーコプ病を患う患者の脳
脊髄液において存在する。ＡＴＰアーゼＨｒｓは、カルシウムに調節された分泌
に関与する。カルモジュリンは、神経伝達物質の放出に関与し、そして神経内分
泌細胞においてエキソサイトーシスを活性化させる。リンタンパク質Ｅｆｓは、
チロシンキナーゼＦｙｎに関連し、これは、多くのシグナル伝達プロセス（ニュ
ーロン細胞におけるプロセスを含む）に関与する。イムポルチンβは、核タンパ
ク質のトランスフェクションに関与する核タンパク質である。アトロフィン−Ｉ
は、室頂核脳幹淡蒼球ルイ体萎縮症（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒａｌ ｐａｌｌｉ
ｄｏｌｕｙｓｉａｎ ａｔｒｏｐｈｙ）（ＤＲＰＬＡ、スミス（Ｓｍｉｔｈ）病
）に関与する遺伝子のタンパク質産物であり、そしてニューロン組織において偏
在的に発現される。ＬＹＳＴ−２相互作用体ＨＢＦ−Ｇ３は、胎児組織において
発現される脳の因子であり、そして発生および胚形成に関与するようである。Ｄ
ＧＳ−Ｉは、ディ・ジョージ症候群、発生欠損（これは、胸腺および上皮小体の
発育不全または形成不全、顔面異形症ならびに円錐動脈幹（ｃｏｎｏｔｒｕｎｃ
ａｌ）心臓奇形によって特徴付けられる）に関連するタンパク質である。
【０１７０】 細胞周期の進行、細胞分化、および転写制御の障害（癌ならびに腫瘍形成およ
び腫瘍の進行を含む）は、ＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、および特に相互作用体１４
−３−３タンパク質、ＨＳＩタンパク質、およびエストロゲンレセプター関連タ
ンパク質に関与し得る。チェディアック−東病の患者は、腫瘍増殖速度の増大お
よびより高い転移頻度を有する。日本人の大きなコホートにおいて、非ホジキン
リンパ腫は、ＣＨＳ患者のうちの３分の１を超えて発症した（Ｈａｙａｋａｗａ
ら、１９８６、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７７：７４〜７９）。腫瘍
形成に対するＬＹＳＴタンパク質の効果は、癌におけるナチュラルキラー細胞の
関与に起因し得る。ノルビンは、ニューロ−２ａ（ｎｅｕｒｏ−２ａ）細胞にお
ける神経線維成長（ｎｅｕｒｉｔｅ−ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）に付随し得、そして
新しいシナプスの形成において役割を果たし得る。従って、これは、神経変性の
障害に関与し得る。イムポルチンβサブユニットは、ＨＩＶ−１（ＡＩＤＳ）を
含む、ウイルス感染に対する細胞性応答に関与する。
【０１７１】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０の遺伝子によってコードされる新規なＬ
ＹＳＴ相互作用体のほとんどはまた、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２ならびに上記
に記載された相互作用体の関与する機能に関連し得る。
【０１７２】 ２つの相互作用体（ＬＩＰ１およびＬＩＰ７）は、ヒトＴ複合体タンパク質（
Ｔｃｐ）−１０に相同性を有し、そしてまた細胞骨格タンパク質および小胞タン
パク質に相同性を有する。マウスにおいて、Ｔｃｐ−１０遺伝子は、精子形成の
間に雄生殖細胞でもっぱら発現される。Ｔｃｐ−１０は、独特なノナペプチド反
復を有する保存されたＣ末端領域、および種々のサイトゾルポリペプチドのコイ
ルドコイル領域にさらなる類似を示す領域内に一対のロイシンジッパーを含む保
存されたＮ末端領域を有する（Ｉｓｌａｍら、Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ
．２：２０７５〜２０７９）。
【０１７３】 少なくとも２つの相互作用体（ＬＩＰ２およびＬＩＰ９）は、核機能を有し得
る。ＬＩＰ２は、リボソームタンパク質Ｌ１７に相同である。ＬＩＰ９は、Ｘｅ
ｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ ｅｌａｖ型リボ核タンパク質Ｅｔｒ−１（神経組織
において見出される推定ＲＮＡ結合タンパク質）に相同であり、従って、ＬＩＰ
９は、神経変性疾患に関与し得る。
【０１７４】 別の相互作用体（ＬＩＰ３）は、神経変性の障害に関与し得る。ＬＩＰ３は、
ラットＯ／Ｅ関連ジンクフィンガータンパク質（Ｒｏａｚ）に対する相同体であ
り、これは、嗅覚ニューロン特異的な遺伝子発現の時間的および空間的パターン
の調節において役割を果たす。Ｒｏａｚタンパク質は、嗅覚因子Ｏ／Ｅ−１とそ
の転写活性の調整との間の相互作用によって機能する。Ｒｏａｚ ｍＲＮＡは、
脳、目、嗅上皮、脾臓、および心臓において見出され、そして嗅上皮のニューロ
ン前駆体および未成熟感覚ニューロンからなる基底層において発現されたが、成
熟レセプター細胞においては発現されなかった（ＴｓａｉおよびＲｅｅｄ、１９
９７、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７：４１５９〜４１６９）。
【０１７５】 ＬＩＰ８は、ラットノルビン遺伝子のヒト相同体である。ラットノルビンは、
脳において発現され、そしてニューロ−２ａ細胞において神経線維成長（ｎｅｕ
ｒｉｔｅ−ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）に付随する、ラット海馬のテトラエチルアンモ
ニウムの処理によって誘導される。神経線維成長関連ノルビンタンパク質は、新
しいシナプスの形成に起因する神経形成性において役割を果たし得る。
【０１７６】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰまたはＬＹＳＴのレベルの変化に伴う疾患および
障害の処置） 広範囲の細胞疾患は、細胞内シグナル伝達によって影響される。小胞の輸送お
よびタンパク質の輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐ複合体活性を調整（すなわち、阻害、拮抗、増強または促進）する治療剤の投
与によって処置または予防され得る。これらの障害の全ては、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体活性を調整（すなわち、阻害、拮抗、増強または促進）する治療
剤の投与によって処置または予防され得る。これらの障害の全ては、ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を調整する（すなわち、阻害、拮抗、増強または促進
する）か、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０活性を
調整する、治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０１７７】 異常なレベルのＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のレベルもしくは活性、また
は異常なレベルのＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、Ｌ
ＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０に関連
する障害または疾患は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成もしくは活性、ま
たはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩ
Ｐ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０活性を調整する治療
剤の投与によって処置され得る。特定の実施態様において、ＬＹＳＴの活性また
はレベルは、ＬＹＳＴ−ＩＰの投与によって調整される。別の特定の実施態様に
おいて、ＬＹＳＴ−ＩＰの活性またはレベルは、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の
投与によって調整される。
【０１７８】 発現不足のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳ
Ｔ−２または特定のＬＹＳＴ−ＩＰに関連する疾患および障害は、ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰ複合体または機能を促進（すなわち、増加または供給）する治療剤
の投与によって処置または予防される。このような治療剤の例としては、以下が
挙げられるがこれらに限定されない：ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体および機
能的に活性な（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を形成するために活性
な）それらの誘導体、アナログおよびフラグメント、非複合体化ＬＹＳＴまたは
ＬＹＳＴ−２タンパク質およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質、およびそれらの誘導
体、アナログ、およびフラグメント、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
のメンバー、またはそれらの機能的に活性な誘導体もしくはフラグメントをコー
ドする核酸（例えば、遺伝子治療における使用のために）。特定の実施態様にお
いて、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を増加および／または安定化させる
ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体、ホモログ
またはフラグメントが、存在する。他のアゴニストの例は、インビトロアッセイ
または動物モデルを使用して同定され得、この例は本明細書中に記載される。
【０１７９】 （複合体形成の変化または活性の変化） ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰのレベルまたは活性の増加（疾患または障害に罹患
していない被験体と比較して）、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もし
くはＬＩＰ１０のレベルまたは活性の増加によって特徴付けられる疾患および障
害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成または活性、あるいはＬＹＳＴ−
２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のレベルまたは活性に拮抗（すなわ
ち、これらを減少または阻害する）する治療剤を用いて処置され得る。使用され
得る治療剤としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＬＹＳＴもし
くはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰ、またはそれらのアナログ、誘導体もし
くはフラグメント；抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ複合体抗体（例えば、ＬＹＳＴ：１４
−３−３タンパク質、ＬＹＳＴ：ＨＳＩタンパク質、ＬＹＳＴ：Ｈｒｓ、ＬＹＳ
Ｔ：ＢＭＫ１、ＬＹＳＴ：ＫＢ０７、ＬＹＳＴ：Ｅｆｓ、ＬＹＳＴ：ＯＳ９、Ｌ
ＹＳＴ：カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、ＬＹＳＴ：カルモジュリン、ＬＹＳＴ：
トロポニンＩ、ＬＹＳＴ：イムポルチンβ、ＬＹＳＴ：Ｆｔｅ−ｌ、ＬＹＳＴ：
エストロゲンレセプター関連タンパク質、ＬＹＳＴ：イモーゲン−３８、ＬＹＳ
Ｔ：アトロフィン−１、ＬＹＳＴ：ノルビン、ＬＹＳＴ：ＧＢＤＲ１、ＬＹＳＴ
：ＯＰＡ含有タンパク質、ＬＹＳＴ：Ｍ４タンパク質、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ１、Ｌ
ＹＳＴ：ＬＩＰ２、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ３、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ４、ＬＹＳＴ：ＬＩ
Ｐ５、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ６、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ７、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ８、ＬＹＳ
Ｔ：ＬＩＰ９、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ１０、ＬＹＳＴ−２：ＨＢＦ−Ｇ２、ＬＹＳＴ
−２：１４−３−３、ＬＹＳＴ−２：ＸＡＰ−４複合体各々に特異的な抗体）、
ならびにＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、
ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０、それらの結合
領域を含むそれらのフラグメントおよび誘導体各々に特異的な抗体；ＬＹＳＴも
しくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする核酸；ＬＹＳＴもしくは
ＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰアンチセンス核酸の同時投与またはＬＹＳＴ−２
もしくは個々の新規なＬＩＰアンチセンス核酸の同時投与、あるいはＬＹＳＴも
しくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰ核酸の同時投与、あるいは個々のＬＹＳＴ
−２もしくは新規なＬＩＰ核酸の同時投与（これらは、相同組換えによる「ノッ
クアウト」内因性ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ機
能に使用される機能不全である（例えば、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰコード
配列のコード配列への異種（非ＬＹＳＴまたは非ＬＹＳＴおよび/または非ＬＹ ＳＴ−ＩＰ）挿入に起因する）））。（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２２８〜１２９２を参照のこと）。
【０１８０】 本発明の特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／ま
たはＬＹＳＴ−ＩＰ配列が異なる遺伝子配列（に対して５’側および３’側の両
方である）に隣接するＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−
ＩＰ遺伝子の一部を含む核酸は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／または
ＬＹＳＴ−ＩＰアンタゴニストとして、あるいは相同組換えによってＬＹＳＴも
しくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ不活化を促進するために使用
される（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２〜８９３５、Ｚｉｊｌｓｔｒａら
、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８もまた参照のこと）。さら
に、第２のＬＹＳＴ−ＩＰよりもＬＹＳＴに対してより大きな親和性を有する第
１のＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の変異体または誘導体は、ＬＹＳＴ結合について
第２のＬＹＳＴタンパク質と競合させるために投与され得る。それによって、第
２のＬＹＳＴ−ＩＰとのＬＹＳＴ複合体のレベルを減少させ得る。ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩ
Ｐ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１
０の機能を阻害する他の治療剤は、例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ結合を阻
害するそれらの能力に基づくかまたは上記のような、公知の簡便なインビトロア
ッセイの使用によって同定され得る。
【０１８１】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の機能または活性
、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５
、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の活性に拮抗
する治療剤は、以下において、治療的に投与される（予防的に投与されることを
含む）：（１）ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ
１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質のレベルの増加（正常または所望さ
れるレベルに対して）を伴う疾患または障害において（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹ
ＳＴ−ＩＰ複合体または上記個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規ＬＩＰタンパク質
が過剰活性または過剰発現されている患者において）；（２）上記ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰ複合体、または上記個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規ＬＩＰタンパ
ク質のレベルの非存在または減少（正常または所望されるレベルに対して）を伴
う疾患または障害において（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（または
複合体を形成するために必要な個々の成分）、あるいは上記個々のＬＹＳＴ−２
もしくは新規ＬＩＰタンパク質が欠失し（遺伝的に欠損し）、生物学的に不活性
または活性不足、または発現不足である患者において）；（３）インビトロ（ま
たはインビボ）アッセイ（上記を参照のこと）が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体または個々のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、Ｌ
ＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のアン
タゴニストの投与の有用性を示す疾患または障害において；あるいは（４）イン
ビトロ（またはインビボ）アッセイ（上記を参照のこと）が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ
４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０
のアゴニストの投与の有用性を示す疾患または障害において。
【０１８２】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のレベル、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質レベルの増加、減少、または非存在は
、例えば、タンパク質および／またはＲＮＡを定量することによって、患者の組
織サンプル（例えば、生検組織由来）を入手することによって、ならびに発現し
たＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のＲＮＡまたはタンパク質レベル、構造およ
び／または活性（またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の２つの成分をコード
するｍＲＮＡの同時発現）、あるいは上記個々のＬＹＳＴ−２または新規ＬＩＰ
タンパク質またはｍＲＮＡレベルについてインビトロでアッセイすることによっ
て、容易に検出され得る。従って、当該分野で標準的な多くの方法が使用され得
る。この方法としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、
ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩ
Ｐ１０のタンパク質を検出および／または可視化するためのイムノアッセイ（例
えば、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴ ＭＥＴＨＯＤＯＬＯＧＩＥＳ 前出、および上
記のアッセイの節を参照のこと）ならびに／あるいはＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−
ＩＰ、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規ＬＩＰ ｍＲＮＡの同時発現を検
出するためのハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンブロットアッ
セイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）。
【０１８３】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の発現の減少） より特定の実施態様は、タンパク質部分を発現するｍＲＮＡを標的化すること
による、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の発現（すなわち、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体２つの成分の発現および／またはこの複合体の形成）を減少させ
る方法、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩ
Ｐ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の発現を
減少させる方法を含む。ＲＮＡ治療剤は、現在、３つのクラス（アンチセンス種
、リボザイム、またはＲＮＡアプタマーに分類されている（Ｇｏｏｄら、１９９
７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：４５〜５４）。
【０１８４】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、もっとも広範に使用されている。限定と
してではなく例示として、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を減少させるた
めのアンチセンスオリゴヌクレオチド方法論が、以下に提示される。リボザイム
治療は、特定のタンパク質の発現を減少または除去するために、特定のＲＮＡを
切断、結合、または他の方法で不活化する酵素能力を有する小ＲＮＡ分子の投与
、誘導発現などを含む（ＧｒａｓｓｉおよびＭａｒｉｎｉ、１９９６、Ａｎｎａ
ｌ．ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２８；４９９〜５１０、Ｇｉｂｓｏｎ、１９９６
、Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖｉｅｗｓ １５：２８
７〜２９９）。現在のところ、ヘアピンおよびハンマーヘッドＲＮＡリボザイム
の設計は、特定のｍＲＮＡ（例えば、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２をコードする
ｍＲＮＡ）を特異的に標的化するために必要である。ＲＮＡアプタマーは、タン
パク質に特異的なＲＮＡリガンドであり（例えば、ＴａｔおよびＲｅｖ ＲＮＡ
）（Ｇｏｏｄら、１９９７、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：４５〜５４）、こ
れは、それらの翻訳を特異的に阻害し得る。ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２また
はＬＹＳＴ−ＩＰに特異的なアプタマーは、当該分野で周知の多くの方法（例え
ば、上記の５．７．１節に記載されるタンパク質−タンパク質相互作用アッセイ
を含むがこれに限定されない）によって同定され得る。
【０１８５】 別の実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の活性またはレベルは、
ＬＹＳＴ−ＩＰ、またはＬＹＳＴ−ＩＰをコードする核酸、またはＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐに免疫特異的に結合する抗体、またはこれらの結合ドメインを含む抗体のフラ
グメントもしくは誘導体の投与によって減少される。さらに、ＬＹＳＴ−ＩＰの
レベルまたは活性は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰの核
酸、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２に免疫特異的に結合する抗体、または
これらの結合ドメインを含む抗体のフラグメントもしくは誘導体の投与によって
減少され得る。
【０１８６】 本発明の別の局面において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２または特定のＬＹ
ＳＴ−ＩＰ（例えば、上記を参照のこと）のレベル増加に関連する疾患または障
害は、この複合体形成が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成によってＬＹＳ
ＴもしくはＬＹＳＴ−２または特定のＬＹＳＴ−ＩＰを、減少または不活化する
ように作用する場合に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を増加させる治療
剤の投与によって処置または予防され得る。このような疾患または障害は、ＬＹ
ＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の１つのメンバー（ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合
体の他のメンバーに対する親和性が増加されたＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰのメン
バーの変異体を含む）の投与（複合体形成の増加を生じるための）、ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を安定化させる抗体または他の分子の投与などによって処
置または予防され得る。
【０１８７】 （ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰのレベルの増加） 特定の実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の活性またはレベルは
、ＬＹＳＴ−ＩＰ、またはその誘導体もしくはアナログ、ＬＹＳＴ−ＩＰをコー
ドする核酸、あるいはＬＹＳＴ−ＩＰを免疫特異的に結合する抗体、またはその
結合ドメインを含む抗体のフラグメントもしくはアナログの投与によって増加さ
れる。別の特定の実施態様において、ＬＹＳＴ−ＩＰの活性またはレベルは、Ｌ
ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２、またはその誘導体もしくはアナログ、ＬＹＳＴまた
はＬＹＳＴ−２をコードする核酸、あるいはＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２を免疫
特異的に結合する抗体、またはその結合ドメインを含む抗体のフラグメントもし
くはアナログの投与によって増加される。
【０１８８】 （治療剤の起源） 一般に、患者の種起源または種反応性と同じ種である種起源または種反応性（
抗体の場合において）の生成物の投与が、好ましい。従って、好まし実施態様に
おいて、ヒトＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もし
くはＬＩＰ１０のタンパク質、またはそれらの誘導体もしくはアナログ、ヒトＬ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のメンバーをコードする核酸、あるいはヒトＬＹ
ＳＴ−２、ヒトＬＩＰ１、ヒトＬＩＰ２、ヒトＬＩＰ３、ヒトＬＩＰ４、ヒトＬ
ＩＰ５、ヒトＬＩＰ６、ヒトＬＩＰ７、ヒトＬＩＰ８およびヒトＬＩＰ９および
ヒトＬＩＰ１０、またはそれらの誘導体もしくはアナログ、あるいはヒトＬＹＳ
Ｔ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタ
ンパク質、またはそれらの誘導体各々に対する抗体が、ヒト患者へ治療的または
予防的に投与される。
【０１８９】 （治療剤の効果の決定） 好ましくは、適切なインビトロまたはインビボアッセイが、特定の治療剤の効
果、およびその投与が罹患した組織の処置について必要性を示すか否かを決定す
るために利用される。種々の特定の実施態様において、インビトロアッセイは、
患者の障害に関与する典型的細胞または細胞型を用いて実施されて、治療剤がこ
のような細胞型に対して所望の効果を有するか否かを決定し得る。
【０１９０】 治療における使用のための組成物は、ヒトで試験する前に、以下を含むがこれ
らに限定されない適切な動物モデル系において試験され得る：ラット、マウス、
ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなど。ヒトへの投与の前に、インビボ試験のため
に、当該分野で公知な任意の動物系が使用され得る。本発明に従って使用され得
る治療剤のさらなる説明および供給源は、本明細書に見出される。
【０１９１】 （アトピー性障害） ＬＹＳＴは、アトピー性障害に関与している、アトピーは、高い免疫グロブリ
ンＥ（ＩｇＥ）応答性として規定される（Ｋａｗａｋａｍｉら、１９９７、Ｒｅ
ｓｐｉｒｏｌｏｇｖ ２：７〜１５）。なぜなら、高い血清ＩｇＥ濃度がアトピ
ー性障害を患う個体において見出されるからである。ＩｇＥは、アレルギー性疾
患の病状の媒介において主要な役割を果たす。ＩｇＥアレルギー性疾患において
、マスト細胞およびＴリンパ球の両方が、重要な役割を果たす。マスト細胞が、
即時型アレルギー応答に関与しているのに対し、Ｔリンパ球は、続く遅延型（ｌ
ａｔｅ ｐｈａｓｅ）応答および慢性の炎症を媒介する。感作（すなわち、アレ
ルゲンと細胞表面との遭遇の後に生じる即時型および遅延型反応）を媒介する細
胞性機構ならびに炎症細胞からのメディエーター放出を生じるシグナル伝達事象
が、議論されている。アトピー性障害の原因として仮定されている１つの機構は
、ＬＹＳＴタンパク質と顆粒細胞（マスト細胞）上のＩｇＥレセプターとの相互
作用である。この相互作用は、これらの好塩基性顆粒球の脱顆粒および続いてヒ
スタミン放出を生じる。細胞内Ｃａ２＋貯蔵を空にした後、好塩基球は、脱顆粒
および広範囲なヒスタミン放出を誘導する刺激に対して非常に感受性になる（Ｋ
ｎｏｌ、１９９６、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．Ｓｕｐｐｌ．２２：１２６Ｓ〜
１３１Ｓ）。ＬＹＳＴとＩｇＥレセプターとの相互作用は、免疫学的障害（例え
ば、気管支ぜん息、鼻ポリープ、枯草熱（アレルギー性）鼻炎、じんま疹、アト
ピー性皮膚炎、食物アレルギー、非遺伝性血管水腫、全身アナフィラキシー、お
よびアレルギー性結膜炎）の１つの原因であり得る。これらの全てのアトピー性
障害は、陽性の家族歴に関連し、そして集団の２０〜３０％が、この状態につい
て強力な遺伝性素因を有する（Ｃａｓｏｌａｒｏら、１９９６、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ
ｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７９６〜８０３）。アトピー性皮膚炎は、幼い子供
のもっとも一般的な慢性皮膚疾患であり、そして喘息およびアレルギーにしばし
ば関連する（Ｂｏｇｕｎｉｅｗｉｃｚ、１９９７、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｅｄ
ｉａｔｒ．９：５７７〜５８１）。
【０１９２】 本発明の治療剤（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐ活性を調整する（すなわち、補充する）治療剤）は、アトピー性疾患または障
害を処置または予防する際に有効であり得る。本発明の治療剤（特にＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰのレベルまたは活性を調節する治療剤）は、そのようなアトピー
性疾患および障害を処置または予防する際の有効性について、当該分野において
公知の任意の方法によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては、ア
トピー性疾患または障害の動物モデルを使用するインビボアッセイ、または下記
のようなインビトロアッセイが挙げられる。潜在的に有効な治療剤は、好塩基性
顆粒球の異常な脱顆粒を低減させることによって作用し得る。
【０１９３】 従って、一旦、アトピー性疾患または障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合
体活性の調整による処置に感受性であることが示されると、そのアトピー性疾患
または障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整する（ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ機能を補充することを含む
）治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０１９４】 （自己免疫障害） ＬＹＳＴは、自己免疫障害と関連付けられている。ＬＹＳＴ変異を有するマウ
ス（ベージュマウス）は、全身性エリマトーデスに罹患した場合に、腎不全を発
症しない。ＬＹＳＴ変異は、自己免疫疾患の結果として、終末器損傷の発症から
保護するように思われる（Ｃｌａｒｋら、１９８２、ＮＫ ＣＥＬＬＳ ＡＮＤ
ＯＴＨＥＲ ＮＡＴＵＲＡＬ ＥＦＦＥＣＴＯＲ ＣＥＬＬＳ，Ｈｅｂｅｒｍ
ａｎ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、第３０１〜３０６頁）。ＬＹＳＴタ
ンパク質は、関節炎（Ｂａｒｔｈｏｌｄ、１９９５、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ
．１７２：７７８−７８４）、全身性狼瘡、全身性自己免疫疾患、炎症性腸疾患
ＩＢＤ、クローン病、潰瘍性大腸炎、器官特異的自己免疫疾患（甲状腺障害を含
む）、真性糖尿病、および多発性硬化症を含むが、これらに限定されない自己免
疫疾患に対して細胞を保護する。ＬＹＳＴ相互作用体であるイモーゲン３８は、
真性糖尿病における自己免疫攻撃についての標的であることが公知である。従っ
て、本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を模倣し、調
整する（すなわち、補充する）治療剤）は、自己免疫疾患または障害を処置また
は予防する際に有効であり得る。本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰのレベルまたは活性を調整する治療剤）は、そのような自己免疫疾患および
障害を処置または予防する際の有効性について、当該分野において公知の任意の
方法によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては、下記の細胞培養
モデルを使用するインビトロアッセイ、または自己免疫疾患または障害の動物モ
デルを使用するインビボアッセイ（これもまた、下記される）が挙げられる。潜
在的に有効な治療剤は、例えば、限定のつもりはないが、動物モデルにおいてコ
ントロールと比較して、自己免疫応答を低減させる。
【０１９５】 処置または予防され得る自己免疫障害としては、Ｉｓｓｌｅｂａｃｈｅｒら、
１９９７（ＨＡＲＲＩＳＯＮ’Ｓ ＰＲＩＮＣＩＰＡＬＳ ＯＦ ＩＮＴＥＲＮ
ＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第１３版、ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ、第１５４３−１５５９頁、本明細書中で参考として援用される）に列挙され
る自己免疫障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９６】 従って、一旦、自己免疫疾患または障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
活性の調整による処置に感受性であることが示されると、その自己免疫疾患また
は障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体を補充することを含む）か、またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体機能を調整する治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０１９７】 （神経変性障害） ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２、ならびにＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２の特定の
結合パートナー（アトロフィン−Ｉ、ＤＧＳ−Ｉ、１４−３−３タンパク質、Ｈ
Ｓ１タンパク質、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２）は、神経変性疾患と関連付けられて
いる。チェディアック−東症候群は、末梢神経障害および運動失調のような神経
性障害によって特徴付けられる。ベージュマウスは、小脳のプルキンエ細胞の完
全な喪失を付随する進行性の神経性障害を示す（ＭｕｒｐｈｙおよびＲｏｔｈｓ
、１９７８、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ．Ａｎｎ．Ｒｅｐ．４９：１０８−１０９
）。小脳および海馬の細胞構築的異常が、ベージュ変異体において見出されてい
る（Ｇｕｏら、１９９２、Ｔｏｋａｉ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１７：
５３−６１）。ＬＹＳＴ相互作用体であるアトロフィン−Ｉは、神経変性疾患で
ある歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒａｌｐａｌｌｉｄ
ｏｌｕｙｓｉａｎ ａｔｒｏｐｈｙ）（ＤＲＰＬＡ、スミス疾患）と関連付けら
れている。ＤＧＳ−Ｉは、発育疾患であるディ・ジョージ症候群と関連付けられ
る。ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２の両方と相互作用する１４−３−３タンパク質
は、アルツハイマー病の神経細線維もつれに存在し、そしてクロイツフェルト−
ヤーコプ病を有する患者の脳脊髄液に存在する。さらに、ＬＹＳＴ−２相互作用
体であるＨＢＦ−Ｇ３は、胎児組織において発現されるヒト脳因子である。ＬＩ
Ｐ３（ラットＲｏａｚタンパク質に対するホモログ）は、ニューロン特異的な遺
伝子発現の調節において役割を有し得る。さらに、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴの特
定の結合パートナー（例えば、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、カ
ルモジュリン、カゼインキナーゼサブユニットＩＩ、Ｈｒｓ、Ｅｆｓ、エストロ
ゲンレセプター関連タンパク質、ノルビンＬＩＰ１（Ｔｃｐ−１０ホモログ）、
ＬＩＰ７（Ｔｃｐ−１０ホモログ）、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６（Ｎｓ２−３プロテア
ーゼホモログ）、ＬＩＰ４（ｈｎＲＮＰ−Ｅ２ホモログ）、およびＬＩＰ８（Ｋ
ＡＰ４Ｌ））は、エキソサイソーシス、脱顆粒、および小胞タンパク質輸送へと
導くシグナル伝達と関連付けられている。欠損している場合に、これらのメカニ
ズムは、神経変性疾患へと導き得る。
【０１９８】 従って、本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＩＰ、ならびにＬＹＳＴまたはＬ
ＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰの複合体を調整する（すなわち、補充する）治
療剤であるが、これらに限定されない）は、神経変性疾患を処置または予防する
際に有効であり得る。神経変性障害に関与するＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
を調整する本発明の治療剤は、そのような神経変性疾患および障害を処置または
予防する際の有効性について、当該分野において公知の任意の方法によってアッ
セイされ得る。そのようなアッセイとしては、調節された細胞分泌、タンパク質
輸送、および／または折り畳み、またはアポトーシスの阻害についてのインビト
ロアッセイ、あるいは神経変性疾患または障害および／または発生疾患または障
害の動物モデルを使用するインビボアッセイ、あるいは、下記のアッセイのいず
れかが挙げられる。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定するつもりはないが
、培養物において調節された細胞成熟を促進し、かつ細胞性アポトーシスを防止
するか、または動物モデルにおいてコントロールと比較して神経変性を低減する
。
【０１９９】 そのような疾患としては、加齢に関与するすべての変性障害（特に、変形性関
節症および神経変性障害）が挙げられる。処置または予防され得る神経変性障害
としては、Ｉｓｓｌｅｂａｃｈｅｒら、１９９７（ＨＡＲＲＩＳＯＮ’Ｓ ＰＲ
ＩＮＣＩＰＡＬＳ ＯＦ ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第１３版、Ｍ
ｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、本明細書中で参考として援用される
）に列挙される神経変性障害が挙げられるが、これに限定されない。
【０２００】 一旦、神経変性疾患または障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性の調
整による処置に感受性であることが示されると、その神経変性疾患または障害は
、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ
複合体を補充することを含む）治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０２０１】 （腫瘍形成） （悪性腫瘍） ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の成分（すなわち、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ
−２、エストロゲンレセプター関連タンパク質、カゼインキナーゼＩＩ β Ｓ
Ｕ、１４−３−３タンパク質、ＦｔｅＩ、ＢＭＫ１、ＨＳ１タンパク質、トロポ
ニン）は、細胞増殖の調節と関連付けられている。エストロゲンレセプター関連
タンパク質は、いくつかの癌（乳癌、前立腺癌、膵臓癌、骨芽細胞骨肉種、胃癌
、咽頭癌、乳頭状甲状腺癌（ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｒｃｉ
ｎｏｍａ）、頭蓋内腫瘍、結腸直腸癌、および結腸癌を含む）において発現され
ることが見出されている。１４−３−３タンパク質は、肺癌細胞だけでなく、他
の癌（結腸直腸腺癌、リンパ芽球腫、唾液腺腫瘍を含む）においても見出されて
いる。チェディアック−東患者は、腫瘍増殖速度の増大およびより高い転移頻度
を有し、ならびに非ホジキンリンパ腫が、１／３を超えるＣＨＳ患者において生
じる（Ｈａｙａｋａｗａら、１９８６、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７
７：７４−７９）。これは、ナチュラルキラー細胞の癌への関与に起因し得る。
【０２０２】 従って、本発明の治療剤は、細胞過剰増殖または細胞増殖制御の喪失に関与す
る疾患または障害（特に、癌、悪性腫瘍、および腫瘍）を、処置または予防する
際に有用であり得る。本発明の治療剤は、悪性腫瘍および関連障害を処置または
予防する際の有効性について、当該分野において公知の任意の方法によってアッ
セイされ得る。そのようなアッセイとしては、形質転換細胞、もしくは患者の腫
瘍由来の細胞を使用するインビトロアッセイ、または癌もしくは悪性腫瘍の動物
モデルを使用するインビボアッセイ、あるいは下記のアッセイのいずれかが挙げ
られる。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定するつもりはないが、培養物に
おいて腫瘍または形質転換細胞の増殖を阻害するか、または例えば下記のように
、動物モデルにおいてコントロールと比較して、腫瘍の後退を引き起こす。特定
の実施態様において、悪性腫瘍変化もしくは異常増殖性（ｄｙｓｐｒｏｌｉｆｅ
ｒａｔｉｖｅ）変化（例えば、化生および形成異常）、あるいは過剰増殖障害が
、膀胱、乳房、結腸、肺、前立腺、膵臓、または子宮において処置または予防さ
れる。
【０２０３】 そのような癌および悪性腫瘍としては、Ｆｉｓｈｍａｎら、１９８５、ＭＥＤ
ＩＣＩＮＥ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．Ｐｈｉｌａｄｅｌ
ｐｈｉａ（そのような障害の概説（本明細書中で参考として援用される））に列
挙される癌および悪性腫瘍が挙げられるが、これに限定されない。
【０２０４】 従って、一旦、悪性腫瘍または癌が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を
調整する（すなわち、阻害する、アンタゴナイズする、増強する、またはアゴナ
イズする）ことによる処置、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくは
ＬＩＰ１０の活性を調整することによる処置に感受性であることが示されると、
その癌または悪性腫瘍は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成および機能を
調整するか、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の機
能を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体および個々のＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体の結合パートナーを補充することを含む）治療剤の投与によって
、処置または予防され得る。
【０２０５】 （前悪性状態） 癌または悪性腫瘍を処置する際に有効である本発明の治療剤（例えば、上記の
ような）はまた、前悪性状態を処置するため、および新形成状態または悪性状態
への進行を予防するために投与され得る。そのような予防的使用または治療的使
用は、前述した新形成または癌への進行が公知であるかまたは疑われる状態、特
に、過形成、化生、またはとりわけ形成異常からなる非新形成性細胞増殖が引き
起こされる場合に必要とされる（そのような異常増殖状態の概説については、Ｒ
ｏｂｂｉｎｓおよびＡｎｇｅｌｌ、１９７６、ＢＡＳＩＣ ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ
、第２版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、第
６８−７９頁を参照のこと）。過形成とは、構造または機能に有意な変化を伴う
ことのない、組織または器官内における細胞数の増大に関与する制御された細胞
増殖の形態である。しかし１つの例として、子宮内膜の過形成はしばしば、子宮
内膜癌に先行する。化生とは、成体細胞の１つの型または完全に分化した細胞が
成体細胞の別の型と置換する、制御された細胞増殖の形態である。化生は、上皮
組織細胞または結合組織細胞において生じ得る。異型化生は、いくぶん無秩序な
化生性上皮を含む。形成異常は、しばしば癌の徴候であり、そして主に上皮にお
いて見出される；これは、非新形成性細胞増殖の最も無秩序な形態（個々の細胞
の均一性、および細胞の構築的指向性における喪失を含む）である。形成異常細
胞はしばしば、異常に大きく濃く染色される核を有し、そして多形態性を示す。
形成異常は、慢性刺激または炎症が存在する箇所で特徴的に生じ、そして頸、呼
吸経路、皮膚、口腔、および胆嚢において、しばしば見出される。
【０２０６】 過形成、異形成（ｍｅｔａｐｌａｓｍ）、または形成異常として特徴付けられ
る異常な細胞増殖の存在とは代替的にか、またはそれに加えて、インビボで示さ
れるかまたは患者由来の細胞サンプルによってインビトロで示される、形質転換
表現型または悪性表現型の１つ以上の特徴の存在は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ
複合体活性を調整するか、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬ
ＩＰ１０の活性を調整する本発明の治療剤の予防的／治療的投与の所望性を示し
得る。そのような形質転換表現型の特徴としては、形態学的変化、弛緩した下層
付着、接触阻害の喪失、足場依存性の喪失、プロテアーゼの放出、糖輸送の増大
、血清要求度の衰退、胎児抗原の発現、２５０ｋＤａの細胞表面タンパク質の消
失などが挙げられる（形質転換表現型、または悪性表現型と関連する特徴につい
ては、また同上第８４−９０頁を参照のこと）。
【０２０７】 特定の実施態様において、白斑症、上皮の良性と思われる過形成または形成異
常の病変、またはボーエン病、上皮内癌は、予防的介入の所望性について指標的
な新生物発生前の病変である。別の実施態様において、線維性嚢胞疾患（嚢胞性
増殖症、乳房形成異常、特に腺疾患（良性上皮過形成））は、予防的介入の所望
性についての指標である。別の特定の実施態様において、本発明の治療剤は、乳
房、結腸、肺、膵臓、前立腺、もしくは子宮の癌、または黒色腫もしくは肉腫の
進行を防止するために、ヒト患者に投与される。
【０２０８】 他の実施態様において、１つ以上の以下の悪性腫瘍についての素因を示す患者
が、有効量の治療剤の投与によって処置される：悪性腫瘍と関連する染色体転座
（例えば、慢性骨髄性白血病についてのフィラデルフィア染色体、濾胞性リンパ
腫についてのｔ（１４；１８）など）、家族性ポリープ症またはガードナー症候
群（結腸癌の徴候であり得る）、良性単一クローン性高ガンマグロブリン血症（
多発性骨髄腫の徴候であり得る）、およびメンデル（遺伝的）遺伝形質パターン
を示す癌または前癌疾患（例えば、遺伝性外骨種、多発性内分泌腺腫症、アミロ
イド生成および褐色細胞腫を有する髄様甲状腺癌、フォン・レックリングハウゼ
ンの神経線維腫症、網膜芽細胞腫、皮膚黒色腫、眼内黒色腫、色素性乾皮症、色
素性乾皮症、毛細血管拡張性運動失調、チェディアック−東症候群、白皮症、フ
ァンコーニ再生不良性貧血、およびブルーム症候群を有する患者との第一血族（
ｆｉｒｓｔ ｄｅｇｒｅｅ ｋｉｎｓｈｉｐ）；ＲｏｂｂｉｎｓおよびＡｎｇｅ
ｌｌ、１９７６、ＢＡＳＩＣ ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ、第２版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎ
ｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、第１１２−１１３頁など（本明
細書中で参考として援用される）を参照のこと）。
【０２０９】 （過剰増殖障害および異常増殖障害） 本発明の別の実施態様において、治療剤は、過剰増殖障害または良性異常増殖
障害を処置または予防するために投与される。本発明の治療剤は、過剰増殖疾患
または障害を処置または予防する際の有効性について、当該分野において公知の
任意の方法によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては、インビト
ロ細胞増殖アッセイ、過剰増殖疾患もしくは障害の動物モデルを使用するインビ
トロまたはインビボアッセイ、あるいは下記のアッセイのいずれかが挙げられる
。潜在的に有効な治療剤としては、培養物において細胞増殖を低減させる治療剤
、または動物モデルにおいてコントロールと比較して、成長もしくは細胞増殖を
阻害する治療剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１０】 従って、一旦、過剰増殖障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性の調整
、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、
ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質活
性の調整による処置に感受性であることが示されると、その過剰増殖疾患または
障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整するか、またはＬＹＳＴ−
２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０の活性を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹ
ＳＴ−ＩＰ複合体および／またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の個々の結合
パートナーを補充することを含む）治療剤の投与によって、処置または予防され
得る。
【０２１１】 特定の実施態様は、肝臓の肝硬変（瘢痕が、正常な肝臓の再生プロセスを冒し
た状態）の処置または予防、ケロイド（過形成性瘢痕）形成（瘢痕プロセスが正
常な再生を妨害する、皮膚の傷跡）、乾癬（皮膚の過剰な増殖、および適切な細
胞発生運命の決定における遅延によって特徴付けられる、一般的な皮膚状態）、
良性腫瘍、線維性嚢胞状態、および組織肥大（例えば、前立腺肥大）の処置に関
する。
【０２１２】 （色素沈着障害） ＬＹＳＴは、色素沈着障害（例えば、眼・皮膚白皮症および色素欠乏症（ｈｙ
ｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ））と強く関連付けられる。白皮症は、眼および
しばしば皮膚の低減した色素沈着によって特徴付けられる、大きな群の遺伝的障
害を内包する。遺伝的に基づく症候群（例えば、チェディアック−東症候群（Ｃ
ＨＳ））は、白皮症（ここでは、色素性メラノソーム、ならびに他の細胞型の特
殊化された細胞小器官の合成が損なわれる）と表現型的に類似する。眼・皮膚白
皮症は、皮膚、毛髪、および眼におけるメラニン色素の先天的な低減または欠損
によって特徴付けられる。毛髪および皮膚における低減は色の変化を生じるが、
これらの組織の発生または機能には全く変化はない。しかし、眼におけるメラニ
ン色素の欠損は、異常な発生および機能を導く。
【０２１３】 本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を調整する（す
なわち、補充する）治療剤）は、色素沈着疾患または障害を処置または予防する
際に有効であり得る。本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
のレベルまたは活性を調整する治療剤）は、そのような色素沈着疾患および障害
を処置または予防する際の有効性について、当該分野において公知の任意の方法
によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては、広範に使用される細
胞培養モデルを用いるインビトロアッセイ、および色素沈着疾患または障害の動
物モデルを使用するインビボアッセイが挙げられる（概説として、ＭｃＧｅｏｃ
ｈら、１９８６、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６７：８１３−８２５を参照のこと
）。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定するつもりはないが、動物モデルに
おいてコントロールと比較して、色素沈着疾患または障害を低減させる。
【０２１４】 従って、一旦、色素沈着疾患または障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
活性の調整による処置に感受性であることが示されると、その色素沈着疾患また
は障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体、あるいはＬＹＳＴ−２または１０個の新規のＬＩＰ遺伝子もし
くはタンパク質のうちの少なくとも１つを補充することを含む）治療剤の投与に
よって、処置または予防され得る。
【０２１５】 （血小板機能異常症） ＬＹＳＴは、チェディアック−東症候群における出血傾向の増大を導き得る血
小板異常と強く関連付けられる。血小板の高密度体（ｄｅｎｓｅ ｂｏｄｙ）、
白血球および線維芽細胞のリソソーム、好中球のアズール顆粒、およびメラノサ
イトのメラノソームは、ＣＨＳ患者において一般的に大きなサイズであり、そし
て不規則な形態である。このことは、貯蔵細胞小器官の形成（ｓｔｏｒａｇｅ
ｏｒｇａｎｅｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）における一般的な経路が、これらの患者に
おいて冒されていることを示す。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性の調整に
よって処置され得る血小板機能異常症は、以下の２つの総括的クラスのものであ
る：（１）血小板貯蔵プールの欠乏（例えば、ヘルマンスキー−パドラック症候
群、チェディアック−東症候群、灰色血小板症候群（ｇｒａｙ ｐｌａｔｅｌｅ
ｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）または血小板減少症と関連する疾患；および（２）血小
板増加症または凝固傾向の増大と関連する疾患（例えば、心筋梗塞、深在静脈血
栓症（ｄｅｅｐ ｖｅｎｏｕｓ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、心臓血管偶発症候（
ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｃｃｉｄｅｎｔ）、一過性脳虚血発作）。Ｃ
ＨＳにおける血小板貯蔵プールの欠乏は、出血時間の延長および低密度顆粒含量
と関連する（Ｎｏｖａｋら、１９８４、Ｂｌｏｏｄ ６３：５３６−５４４）。
【０２１６】 本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を調整する（す
なわち、補充する）治療剤）は、血小板機能異常症の疾患または障害を処置また
は予防する際に有効であり得る。本発明の治療剤（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体のレベルまたは活性を調整する治療剤）は、そのような血小板機能異
常症の疾患および障害を処置または予防する際の有効性について、当該分野にお
いて公知の任意の方法によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては
、広範に使用される細胞培養モデルを用いるインビトロアッセイ、および血小板
機能異常症の疾患または障害の動物モデルを使用するインビボアッセイが挙げら
れる（概説として、ＭｃＧｅｏｃｈら、１９８６、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６
７：８１３−８２５を参照のこと）。潜在的に有効な治療剤は、例えば、限定す
るつもりはないが、動物モデルにおいてコントロールと比較して、血小板機能異
常症の疾患または障害を低減させる。
【０２１７】 従って、一旦、血小板機能異常症の疾患または障害が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体活性の調整による処置に感受性であることが示されると、その血小板
機能異常症の疾患または障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整す
る（ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を補充することを含む）治療剤の投与によ
って、処置または予防され得る。
【０２１８】 （ウイルス感染） ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ相互作用体であるイムポルチンβサブユニットは、ウ
イルス感染機構（ＡＩＤＳウイルスである、ＨＩＶ−１についての感染機構を含
む）と，強く関連付けられる。莫大な数のヒト疾患が、毒性ウイルス感染および
日和見ウイルス感染から生じる（例えば、Ｂｅｌｓｈｅ（編）、１９８４、ＴＥ
ＸＴＢＯＯＫ ＯＦ ＨＵＭＡＮ ＶＩＲＯＬＯＧＹ，ＰＳＧ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ，Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＭＡを参照のこと）。広範な組織（気道、ＣＮＳ
、皮膚、尿生殖路、眼および耳、免疫系、胃腸管、および筋骨格系を含む）のウ
イルス性疾患は、あらゆる年齢の莫大な数のヒトに罹患する（Ｗｙｎｇａａｒｄ
ｅｎおよびＳｍｉｔｈ、１９８８、ＣＥＣＩＬ ＴＥＸＴＢＯＯＫ ＯＦ ＭＥ
ＤＩＣＩＮＥ、第１８版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅ
ｌｐｈｉａ、第１７５０−１７５３頁の表３２８−２を参照のこと）。
【０２１９】 特定の実施態様においては、例えば、本明細書中に記載のウイルス性疾患また
は障害を含むがそれらに限定されない疾患および障害において、本発明の治療剤
（特に、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（特に、ＬＹＳＴ：イムポルチンβサ
ブユニット複合体）の活性を調整する（すなわち、補充する）治療剤）は、ウイ
ルス性疾患または障害を処置または予防する際に有効であり得る。本発明の治療
剤（特に、ＬＹＳＴ：イムポルチンβサブユニット複合体のレベルまたは活性を
調整する治療剤）は、そのようなウイルス性疾患および障害を処置または予防す
る際の有効性について、当該分野において公知の任意の方法によってアッセイさ
れ得る。そのようなアッセイとしては、広範に使用される細胞培養モデルを用い
るインビトロアッセイ、およびウイルス性疾患または障害の動物モデルを使用す
るインビボアッセイが挙げられる（概説として、ＭｃＧｅｏｃｈら、１９８６、
Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６７：８１３−８２５を参照のこと）。潜在的に有効
な治療剤は、例えば、限定するつもりはないが、動物モデルにおいてコントロー
ルと比較して、ウイルス応答を低減させる。
【０２２０】 従って、一旦、ウイルス性疾患または障害が、イムポルチンβサブユニット複
合体活性の調整による処置に感受性であることが示されると、そのウイルス性疾
患または障害は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（特に、ＬＹＳＴ：イムポル
チンβサブユニット複合体）形成を調整する（ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
（特に、ＬＹＳＴ：イムポルチンβサブユニット複合体）を補充することを含む
）治療剤の投与によって、処置または予防され得る。
【０２２１】 （遺伝子治療） 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／もしくはＬ
ＹＳＴ−ＩＰ、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰタンパク質、ま
たはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸分子を投与し、遺伝子治療に
よって、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を調整するか、またはＬＹＳＴ−２、
ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、Ｌ
ＩＰ８、ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０の機能を調整する。より特定の実施態様に
おいて、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰのいずれかもしく
は両方、またはその機能的誘導体をコードする少なくとも１つの核酸は、遺伝子
治療のために投与される。遺伝子治療とは、被験体への核酸分子の投与によって
実施される治療をいう。本発明のこの実施態様において、この核酸分子は、ＬＹ
ＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を調整することによって、またはＬＹＳＴ−２、Ｌ
ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
Ｐ８、ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０の機能を調整することによって、治療的効果
を媒介するそのコードタンパク質を生成する。当該分野において利用可能な遺伝
子治療のための任意の方法が、本発明によって使用され得る。例示的な方法を以
下に記載する。
【０２２２】 遺伝子治療の方法の一般的な概説について、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３
、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８〜５０５；ＷｕおよびＷ
ｕ、１９９１、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７〜９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ
、１９９３、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５
７３〜５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６：９２６〜
９３２；ＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９３、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１〜２１７；ならびにＭａｙ、１９９３、ＴＩＢＴＥ
ＣＨ １１：１５５〜２１５を参照のこと。使用され得る組換えＤＮＡ技術のた
めの当該分野において周知の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）１９９３、ＣＵＲ
ＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、
Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９
０、ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ、Ａ ＬＡＢ
ＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹに記載さ
れる。
【０２２３】 好ましい局面において、治療剤は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／も
しくはＬＹＳＴ−ＩＰの核酸、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９もしくは
ＬＩＰ１０の核酸を含み、これらの核酸は、適切な宿主において、ＬＹＳＴまた
はＬＹＳＴ−ＩＰのタンパク質を発現するか、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１
、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、
ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０のタンパク質、またはそのフラグメントもしくはキ
メラタンパク質を発現する発現ベクターの一部である。詳細には、このような核
酸は、ＬＹＳＴおよび／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰのコード領域に作動可能に連結
されているか、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０のコ
ード領域に作動可能に連結されているプロモーターを有し、このプロモーターは
、誘導性または構成性であり、そして必要に応じて組織特異的である。例えば、
上記で議論される、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴ ＭＥＴＨＯＤＯＬＯＧＩＥＳを参
照のこと。別の特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および
／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰのコード配列、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新
規なＬＩＰのコード配列、および任意の他の所望の配列が、ゲノム中の所望の領
域で相同組換えを促進し、従ってＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−ＩＰの核酸の染色体
内発現を提供する領域と隣接している核酸分子（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈ
ｉｅｓ，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８
９３２〜８９３５、Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４
３５〜４３８）が使用される。
【０２２４】 この核酸の患者への送達は、直接的（この場合、患者を、核酸または核酸を有
するベクターに直接的に曝露する）、または間接的（この場合、最初に細胞をイ
ンビトロでこの核酸で形質転換し、次いで、この細胞を患者に移植する）のいず
れであってもよい。これらの２つのアプローチは、それぞれ、インビボ遺伝子治
療およびエキソビボ遺伝子治療として知られている。
【０２２５】 特定の実施態様において、この核酸は、インビボで直接的に投与され、ここで
この核酸が発現されて、コード産物を生じる。このことは、当該分野において公
知の多くの方法のうちのいずれかによって、例えば、核酸を適切な核酸発現ベク
ターの部分として構築し、そしてその核酸が細胞内になるようにその核酸を投与
することによって、例えば、欠損性または弱毒化したレトロウイルスベクターま
たは他のウイルスベクター（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）を
用いる感染によって、またはネイキッドＤＮＡの直接的注入によって、またはマ
イクロパーティクルボンバードメント（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ
，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用によって、または脂質もしくは細胞表面レセプターまた
はトランスフェクト剤でのコート、またはリポソーム、マイクロパーティクル、
もしくはマイクロカプセル中へのカプセル化によって、または核に侵入すること
が公知であるペプチドに連結して核酸を投与することによって、またはレセプタ
ー媒介エンドサイトーシスを受けやすいリガンドに結合して核酸を投与すること
によって（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
２：４４２９〜４４３２を参照のこと、これを使用して、このレセプターを特異
的に発現する細胞型を標的化し得る）などによって達成され得る。別の実施態様
において、核酸−リガンド複合体（ここで、このリガンドは、エンドソームを破
壊し、その核酸のリソソーム分解を妨げる融合原性（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）ウイ
ルスペプチドを含む）が形成され得る。なお別の実施態様において、この核酸は
、特定のレセプターを標的化することによって、細胞特異的な取り込みおよび発
現についてインビボで標的化され得る（例えば、国際特許公開ＷＯ９２／０６１
８０、ＷＯ９２／２２６３５、ＷＯ９２／２０３１６、ＷＯ９３／１４１８８、
およびＷＯ９３／２０２２１を参照のこと）。あるいは、この核酸は、相同組換
えによって、細胞内に導入され、そして発現のための宿主細胞ＤＮＡに組み込ま
れ得る（ＫｏｌｌｅｒおよびＳｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８９３２〜８９３５、Ｚｉｊｌｓｔｒａら
、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８）。
【０２２６】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／もしくはＬ
ＹＳＴ−ＩＰをコードする核酸配列、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規な
ＬＩＰをコードする核酸配列を含むウイルスベクターを使用する。例えば、レト
ロウイルスベクターが使用され得る（Ｍｉｌｌｅｒら、１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅ
ｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１〜５９９を参照のこと）。これらのレトロウイル
スベクターは、ウイルスゲノムのパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組込
みに必要ではないレトロウイルス配列を欠失させるように改変されている。遺伝
子治療において使用されるＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／もしくはＬＹ
ＳＴ−ＩＰ（好ましくは、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−ＩＰの両方）をコードする
核酸配列、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰをコードする核酸配
列は、患者への遺伝子送達を容易にするベクターにクローニングされる。遺伝子
治療におけるレトロウイルスベクターおよびレトロウイルスベクターの使用に関
するより多くの詳細は、Ｂｏｅｓｅｎら、１９９４、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６
：２９１〜３０２、Ｃｌｏｗｅｓら、１９９４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．
９３：６４４〜６５１、Ｋｉｅｍら、１９９４、Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７〜
１４７３、Ｓａｌｍｏｎｓら、１９９３、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐ
ｙ ４：１２９〜１４１、およびＧｒｏｓｓｍａｎら、１９９３、Ｃｕｒｒ．Ｏ
ｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０〜１１４を参照のこと。
【０２２７】 アデノウイルスは、遺伝子治療において使用され得る他のウイルスベクターで
ある。アデノウイルスは、特に、気道上皮に遺伝子を送達するための魅力的なビ
ヒクルである。アデノウイルスは、気道上皮に自然に感染し、ここでアデノウイ
ルスは軽度の疾患を引き起こす。アデノウイルスに基づく送達系のための他の標
的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞および筋肉である。アデノウイルスは、非分
裂細胞に感染し得るという利点を有する。ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ
、１９９３、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎ
ｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９〜５０３は、アデノウイルスに基づく
遺伝子治療の概説を提示する。Ｂｏｕｔら、１９９４、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３〜１０は、アカゲザルの気道上皮に遺伝子を移入するた
めのアデノウイルスベクターの使用を示した。遺伝子治療におけるアデノウイル
スの使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５
２：４３１〜４３４、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、１９９２、Ｃｅｌｌ ６８：１４
３〜１５５、およびＭａｓｔｒａｎｇｅｌｉら、１９９３、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ．９１：２２５〜２３４において見出され得る。アデノ随伴ウイルス（
ＡＡＶ）もまた、遺伝子治療における使用のために提唱されている（Ｗａｌｓｈ
ら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９
〜３００）。
【０２２８】 遺伝子治療への別のアプローチは、エレクトロポレーション、リポフェクショ
ン、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションまたはウイルス感染のような方
法によって、組織培養物中の細胞に遺伝子を移入させることを含む。通常には、
移入方法は、細胞への選択マーカーの移入を含む。次いで、この細胞を選択下に
置き、移入される遺伝子を取り込み、そして発現している細胞を単離する。次い
で、これらの細胞を、当該分野において利用可能な種々の手段によって患者に送
達する。
【０２２９】 この実施態様において、この核酸を、得られる組換え細胞のインビボ投与の前
に細胞に導入する。そのような導入は、以下を含むがそれらに限定されない、当
該分野において公知の任意の方法によって実施され得る：トランスフェクション
、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、その核酸配列を含むウ
イルスベクターまたはバクテリオファージベクターでの感染、細胞融合、染色体
媒介遺伝子移入、微小核細胞媒介遺伝子移入、スフェロプラスト融合など。細胞
への外来遺伝子の導入のための多くの技術が当該分野において公知であり（例え
ば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．
２１７：５９９〜６１８、Ｃｏｈｅｎら、１９９３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ
．２１７：６１８〜６４４、Ｃｌｉｎｅ、１９８５、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ
．２９：６９〜９２）、そしてレシピエント細胞の必要な発生機能および生理機
能が破壊されないという条件で本発明に従って使用され得る。この技術は、その
核酸がその細胞によって発現可能であり、そしてその細胞の子孫によって遺伝可
能かつ発現可能であるような、核酸の細胞への安定な移入を提供するはずである
。
【０２３０】 得られた組換え細胞は、当該分野において公知の種々の方法によって患者に送
達され得る。好ましい実施態様において、上皮細胞が注射、例えば皮下注射され
る。別の実施態様において、組換え皮膚細胞が、皮膚移植片として患者に適用さ
れ得る。組換え血球（例えば、造血幹細胞または前駆細胞）は、好ましくは静脈
内投与される。組換え分泌細胞（例えば、ドパミンを発現するように改変された
細胞）は、当該分野において公知の種々の方法によって、カプセル化および宿主
内に移植され得る。使用が意図される細胞の量は、所望の効果、患者の状態など
に依存し、そして当業者によって決定され得る。
【０２３１】 核酸が遺伝子治療の目的のために導入され得る細胞は、任意の所望の利用可能
な細胞型を含み、そして以下を含むがそれらに限定されない：上皮細胞、内皮細
胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞、肝細胞、有核血球、種々の幹細胞
または前駆細胞、特に胚性心筋細胞、肝臓幹細胞（国際特許公開ＷＯ９４／０８
５９８）、神経幹細胞（ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２、Ｃ
ｅｌｌ ７１：９７３〜９８５）、造血幹細胞または前駆細胞（例えば、骨髄、
臍帯血、末梢血、胎児肝臓などから得られる細胞）。好ましい実施態様において
、遺伝子治療のために使用される細胞は、患者の自己由来である。
【０２３２】 上皮幹細胞（ＥＳＣ）またはケラチノサイトは、皮膚または腸管壁から、公知
の手順（Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ、１９８０、Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１：
２２９）によって入手され得る。患者またはドナーの皮膚または腸管壁から得ら
れるＥＳＣまたはケラチノサイトは、組織培養物中で増殖され得る（Ｒｈｅｉｎ
ｗａｌｄ、１９８０、Ｍｅｔｈ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．２１α：２２９；Ｐｉｔｔ
ｅｌｋｏｗおよびＳｃｏｔｔ、１９８６、Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃ．
６１：７７１）。ＥＳＣがドナーによって提供される場合、対宿主性移植片反応
の抑制のための方法（例えば、免疫抑制を緩和するための照射、薬物または抗体
の投与）もまた使用され得る。
【０２３３】 造血幹細胞（ＨＳＣ）に関して、ＨＳＣの単離、増殖、およびインビトロでの
維持を提供する任意の技術が、本発明のこの実施態様において使用され得る。こ
れを達成し得る技術は、（ａ）将来の宿主すなわちドナーから単離した骨髄細胞
由来のＨＳＣ培養物の単離および樹立、または（ｂ）予め樹立された長期のＨＳ
Ｃ培養物（これは、同種異系または異種であり得る）の使用を含む。非自己由来
ＨＳＣは、好ましくは将来の宿主／患者の移植免疫反応を抑制する方法と組み合
わせて使用される。本発明の特定の実施態様において、ヒト骨髄細胞は、針吸引
によって後腸骨稜（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｉｌｉａｃ ｃｒｅｓｔ）から入手さ
れ得る（例えば、Ｋｏｄｏら、１９８４、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７３：
１３７７〜１３８４を参照のこと）。本発明の好ましい実施態様において、ＨＳ
Ｃは、高度に富化されるか、または実質的に純粋な形態にされ得る。この富化は
、長期培養の前、その間、またはその後に達成され得、そして当該分野において
公知の任意の技術によってなされ得る。骨髄細胞の長期培養物は、例えば、改変
されたＤｅｘｔｅｒ細胞培養技術（Ｄｅｘｔｅｒら、１９７７、Ｊ．ＣｅｌｌＰ
ｈｙｓｉｏｌ．９１：３３５）、またはＷｉｔｌｏｃｋ−Ｗｉｔｔｅ培養技術（
ＷｉｔｌｏｃｋおよびＷｉｔｔｅ、１９８２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９：３６０８〜３６１２）を用いることによって、樹立およ
び維持され得る。
【０２３４】 特定の実施態様において、遺伝子治療のために導入される核酸は、その核酸の
発現が、転写の適切な誘導因子の存在または非存在を制御することによって制御
可能であるように、コード領域に作動可能に連結された誘導性プロモーターを含
む。さらなる方法が、例えば、上記のようなＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およ
び／またはＬＹＳＴ−ＩＰのタンパク質、またはその機能的誘導体をコードする
核酸分子を送達する使用に適合され得る。
【０２３５】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の発現の抑制のため、またはＬＹＳＴ−２
もしくは新規なＬＩＰのタンパク質発現の抑制のためのアンチセンスオリゴヌク
レオチドの使用） 特定の実施態様において、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の機能、または個
々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰのタンパク質の機能が、ＬＹＳＴもしく
はＬＹＳＴ−２および／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ（好ましくは、ＬＹＳＴおよび
ＬＹＳＴ−ＩＰの両方）についてのアンチセンス核酸、またはＬＹＳＴ−２、Ｌ
ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
Ｐ８、ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０についての個々のアンチセンス核酸の使用に
よって阻害される。本発明は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／もしくは
ＬＹＳＴ−ＩＰをコードする遺伝子もしくはｃＤＮＡ、あるいはＬＹＳＴ−２、
ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、Ｌ
ＩＰ８、ＬＩＰ９もしくはＬＩＰ１０、またはその部分をコードする遺伝子もし
くはｃＤＮＡに対してアンチセンスである、少なくとも６のヌクレオチドの核酸
の治療的使用または予防的使用を提供する。本発明で使用されるＬＹＳＴまたは
ＬＹＳＴ−ＩＰの「アンチセンス」核酸は、幾分かの配列相補性によってＬＹＳ
ＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰ核酸（好ましくは、ｍＲＮＡ）の部分にハイブリダイズ
し得る核酸をいう。このアンチセンス核酸は、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−ＩＰの
ｍＲＮＡのコード領域および／または非コード領域に対して相補的であり得る。
そのようなアンチセンス核酸は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成もしく
は活性、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰのタンパク質の機能も
しくは活性を阻害する治療剤としての有用性を有し、そして前記のような障害の
処置または予防において使用され得る。
【０２３６】 本発明のアンチセンス核酸は、二本鎖または一本鎖のＲＮＡもしくはＤＮＡま
たはその改変体もしくは誘導体であるオリゴヌクレオチドであり得、これは、細
胞に直接的に投与され得るか、または外因性の導入された配列の転写によって細
胞内で産生され得る。
【０２３７】 別の実施態様において、本発明は、ＬＹＳＴおよび／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ
のヌクレオチド配列、または個々のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ
３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９もしくはＬ
ＩＰ１０のヌクレオチド配列の原核生物細胞または真核生物細胞における発現を
阻害するための方法に関し、この方法は、上述のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合
体発現の減少において記載されるような、本発明のＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−
２およびＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセンス核酸、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９もしくはＬＩＰ１０のアンチセンス核酸、またはその誘導体を含む組成物
の有効量を細胞に提供する工程を包含する。
【０２３８】 このＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセン
ス核酸は、少なくとも６のヌクレオチドであり、そして好ましくはオリゴヌクレ
オチド（６〜約２００のオリゴヌクレオチドの範囲に及ぶ）である。特定の局面
において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なく
とも約１５ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、または少なくとも
約２００ヌクレオチドである。このオリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖
の、ＤＮＡもしくはＲＮＡまたはそのキメラ混合物もしくは誘導体もしくは改変
型であり得る。このオリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、またはホスフェ
ートバックボーンで改変され得る。このオリゴヌクレオチドは、ペプチドのよう
な他の付属基、または以下を促進する薬剤を含み得る：細胞膜を横切る輸送（例
えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６、Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１
９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２、ＰＣ
Ｔ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、血液脳関門を横切る輸送（例
えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）、ハイブリダイゼー
ション誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｓ ６：９５８〜９７６を参照のこと）、または他の薬剤でのインターカレーシ
ョン（例えば、Ｚｏｎ、１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を
参照のこと）。
【０２３９】 本発明の好ましい局面において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／または
ＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセンスオリゴヌクレオチドが、好ましくは一本鎖ＤＮＡ
として提供される。このオリゴヌクレオチドは、当該分野において一般的に公知
の成分を用いて、その構造上の任意の位置で改変され得る。
【０２４０】 このＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセン
スオリゴヌクレオチドは、以下を含むがそれらに限定されない基から選択される
少なくとも１つの改変された塩基部分を含み得る：５−フルオロウラシル、５−
ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、
キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウ
ラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキ
シメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキュ
ーオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１
−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチ
ルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−
メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル
−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン、５Ｎ−メトキシカルボ
キシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペン
テニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂ
ｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プセイドウラシン、キューオシン、２−チオシトシン、
５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メ
チルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキ
シ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２
−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプ
リン。
【０２４１】 特定の実施態様において、このオリゴヌクレオチドは、以下を含むがそれらに
限定されない基から選択される少なくとも１つの改変された糖部分を含む：アラ
ビノース、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソース。別の
実施態様において、このオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される
少なくとも１つの改変されたホスフェートバックボーンを含む：ホスホロチオエ
ート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミドチオエート、ホスホロアミデート
、ホスホロジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、
もしくはホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）、またはそのアナログ。な
お別の実施態様において、このオリゴヌクレオチドは、２−アノマー性オリゴヌ
クレオチドである。アノマー性オリゴヌクレオチドは、相補的ＲＮＡとの特異的
な二本鎖ハイブリッド（ここで、鎖は、通常のβ−ユニットとは対照的に、互い
に平行に走っている）を形成する（Ｇａｕｔｉｅｒら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａ
ｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６６２５〜６６４１）。
【０２４２】 本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野において公知の標準的な方法によっ
て、例えば、自動化ＤＮＡ合成機（例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、Ａｐｐｌｉｅ
ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどから市販される合成機）の使用によって合成され
得る。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎら、１
９８８、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９の方法によって合成さ
れ得、メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御された孔ガラスポリマー
支持体（Ｓａｒｉｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
．Ｓ．Ａ． ８５：７４４８〜７４５１）の使用によって調製され得る、等々。
【０２４３】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹ
ＳＴ−ＩＰアンチセンスオリゴヌクレオチドは、触媒性ＲＮＡ、すなわちリボザ
イム（例えば、ＰＣＴ国際公開 ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４日
公開、Ｓａｒｖｅｒら、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１２２２−１２２
５を参照のこと）を含む。別の実施態様において、このオリゴヌクレオチドは、
２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：６１３１−６１４８）、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡア
ナログ（Ｉｎｏｕｅら、１９８７、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３
０）である。なお別の実施態様において、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例
えば、ペプチド、ハイブリダイゼーションで誘発される（ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔ
ｉｏｎ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ）架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーションで誘発
される切断剤など）と結合体化され得る。
【０２４４】 代替的な実施態様において、本発明のＬＹＳＴおよび／またはＬＹＳＴ−ＩＰ
アンチセンス核酸は、外因性配列からの転写によって細胞内で生成される。例え
ば、ベクターは、細胞に取り込まれるようにインビボに導入され得、その細胞内
でそのベクターまたはその一部分が転写されて、本発明のアンチセンス核酸（Ｒ
ＮＡ）が生成される。そのようなベクターは、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２お
よび／またはＬＹＳＴ−ＩＰ（好ましくは、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、お
よびＬＹＳＴ−ＩＰアンチセンス核酸の両方）アンチセンス核酸、あるいは個々
のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ
６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のアンチセンス核酸をコ
ードする配列を含む。そのようなベクターは、転写されて所望のアンチセンスＲ
ＮＡを生成し得るかぎり、エピソームで維持され得るか、または染色体に組み込
まれ得る。そのようなベクターは、当該分野において標準的な組換えＤＮＡ技術
の方法によって構築され得る。ベクターは、哺乳動物細胞において複製および発
現し得ることが当該分野において公知のプラスミド、ウイルス、または他のベク
ターであり得る。ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ
アンチセンスＲＮＡをコードする配列の発現は、哺乳動物細胞、好ましくはヒト
細胞において作用することが当該分野において公知の、任意のプロモーターによ
る発現であり得る。そのようなプロモーターは、誘導的または構成的であり得る
。前出の「組換え技術」の節の説明を参照のこと。
【０２４５】 本発明のアンチセンス核酸は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ
−ＩＰ遺伝子、好ましくはヒトのＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ
−ＩＰ遺伝子のＲＮＡ転写物の少なくとも一部分に対して相補的な配列を含む。
しかし、完全な相補性は、好ましくはあるが必要とはされない。「ＲＮＡの少な
くとも一部分に対して相補的な」配列とは、本明細書中において言及される場合
、そのＲＮＡとハイブリダイズし得て、安定な二重鎖を形成するのに十分な相補
性を有する配列をいう；二本鎖ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−
ＩＰアンチセンス核酸の場合、従って、その二重鎖ＤＮＡのうちの一本鎖が試験
され得るか、または三重鎖核酸の形成がアッセイされ得る。ハイブリダイズする
能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両方に依存する。一般的
には、ハイブリダイズする核酸が長いほど、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２また
はＬＹＳＴ−ＩＰ ＲＮＡとの、より多くの塩基ミスマッチを含み得、そしてな
お安定な二重鎖（または、場合に応じては、三重鎖）を形成し得る。当業者は、
標準的手順の使用によって、耐え得るミスマッチの程度を確認して、ハイブリダ
イズ複合体の融点を決定し得る。
【０２４６】 好ましい実施態様において、一本鎖ＤＮＡアンチセンスＬＹＳＴおよびＬＹＳ
Ｔ−ＩＰオリゴヌクレオチド、もしくはその同一物に対する一本鎖ＤＮＡアンチ
センス、または個々のＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、Ｌ
ＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０のアンチセンスオリ
ゴヌクレオチド、もしくはその同一物に対する一本鎖ＤＮＡアンチセンスが使用
される。
【０２４７】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのｍＲＮＡ、ま
たは個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規のＬＩＰ ＲＮＡを発現するかまたは過剰
発現する細胞型は、当該分野において公知の種々の方法によって同定され得る。
そのような方法としては、「組換え方法論」の節（前出）、または下記の種々の
「アッセイ」の節において詳述される方法が挙げられるが、これらに限定されな
い。好ましい局面においては、患者由来の一次組織が、処置前のＬＹＳＴもしく
はＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰの発現について、例えば、免疫細
胞学かまたはインサイチュハイブリダイゼーションによってアッセイされ得る。
【０２４８】 本発明の薬学的組成物（下記を参照のこと）（薬学的に受容可能なキャリア中
に、有効量のＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰアン
チセンス核酸を含有する）は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、ＬＹＳＴおよ
び／またはＬＹＳＴ−ＩＰのｍＲＮＡ、あるいはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬ
ＩＰ１０のｍＲＮＡまたはタンパク質を発現するかあるいは過剰発現する型の疾
患または障害を有する患者に投与され得る。
【０２４９】 特定の障害または状態の処置において有効なＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２お
よび／またはＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセンス核酸の量は、その障害または状態の
性質に依存し、そして標準的な臨床的技術によって決定され得る。可能であるな
らば、ヒトにおける試験および使用の前に、インビトロにて、次いで有用な動物
モデル系においてこのアンチセンスの細胞傷害性を決定することが所望される。
【０２５０】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐのアンチセンス核酸を含む薬学的組成物は、リポソーム、微粒子、またはマイ
クロカプセルを介して投与される。本発明の種々の実施態様において、ＬＹＳＴ
もしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセンス核酸の持続
的放出を達成するために、そのような組成物を使用することが有用であり得る。
特定の実施態様において、特定の識別可能な中枢神経系細胞型へと抗体を介して
標的化されたリポソームを利用することが所望され得る（Ｌｅｏｎｅｔｔｉら、
１９９０.Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２４４ ８−２４５１、Ｒｅｎｎｅｉｓｅｎら、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
６５：１６３３７−１６３４２）。
【０２５１】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、およびＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩ
Ｐ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ
９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質の機能的アッセイ） ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の機能的活性、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、も
しくはＬＩＰ１０のタンパク質、ならびにそれらの誘導体、フラグメント、およ
びアナログの機能的活性を、当該分野において公知の種々の方法によってアッセ
イし得る。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性、またはＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、も
しくはＬＩＰ１０の活性の潜在的モジュレーター（例えば、インヒビター、アゴ
ニスト、およびアンタゴニスト）（例えば、ＬＹＳＴ−２または個々の新規のＬ
ＩＰに特異的な抗体、およびＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴ−
ＩＰのアンチセンス核酸）は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成および／ま
たは活性を調整するその能力について、およびＬＹＳＴ−２もしくは個々の新規
のＬＩＰ活性を調整するその能力についてアッセイされ得る。
【０２５２】 （イムノアッセイ） 使用され得るイムノアッセイとしては、競合アッセイ系および非競合アッセイ
系が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、１つの実施態様において、
野生型ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩ
Ｐ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ
９、もしくはＬＩＰ１０のタンパク質と結合するかまたは競合する能力について
、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体、またはＬＹＳＴ−２もしくは１０個の新規
のＬＩＰタンパク質のうちのいずれか１つに対して特異的な抗体への結合につい
てアッセイされる場合、当該分野において公知の種々のイムノアッセイが使用さ
れ得る。このアッセイとしては、以下のような技術を用いる競合アッセイおよび
非競合アッセイが挙げられるが、これらに限定されない；放射イムノアッセイ、
酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、「サンドウィッチ」イムノア
ッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセ
イ、インサイチュ免疫組織化学アッセイ（例えば、コロイド金、酵素または放射
性標識を使用する）、ウェスタンブロット、免疫沈降アッセイ、沈降反応、凝集
アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ
、免疫蛍光検査アッセイ、プロテインＡイムノアッセイ、免疫電気泳動など。１
つの実施態様において、抗体結合は、一次抗体上の標識を検出することによって
アッセイされる。別の実施態様において、この一次抗体は、この一次抗体への二
次抗体または試薬の結合を検出することによってアッセイされる。さらなる実施
態様においては、この二次抗体が標識される。イムノアッセイにおいて結合を検
出するために、多くの手段が当該分野において公知であり、そしてそれらは本発
明の範囲内である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣ
ＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、Ｒ．Ｃｏｉｃｏ（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９８を参照のこと。
【０２５３】 （結合アッセイ） ＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体（例えば、フラグメント）およびアナログは、当該分
野で公知の任意の方法、例えば、以下に記載される改変酵母ツーハイブリッドア
ッセイシステム、複合体におけるＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２に結合する抗体を
用いる免疫沈降、続く免疫沈降したタンパク質のサイズ分画による分析（例えば
、変性または非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動）、ウェスタン分析、非変
性ゲル電気泳動などにより、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２への結合についてアッ
セイされ得る。
【０２５４】 （遺伝子発現についてのアッセイ） ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子（内因性
遺伝子およびこれらの遺伝子を含む組換えＤＮＡから発現される遺伝子の両方）
の発現を、以下を含むがそれらに限定されない当該分野で公知の技術を使用して
検出し得る：種々の細胞型での、サザンハイブリダイゼーション、ノーザンハイ
ブリダイゼーション、制限エンドヌクレアーゼマッピング、ＤＮＡ配列分析、ポ
リメラーゼ連鎖反応増幅（ＰＣＲ）、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２また
はＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子に特異的なプローブを用いるＲＮａｓｅ保護（ｐｒｏｔ
ｅｃｔｉｏｎ）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯ
ＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙおよ
びＳｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９７；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｍ
ＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ、Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ
、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐ
ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。当該分野で一般に公知のＰＣＲ以外
の増幅方法を使用し得る。
【０２５５】 １つの実施態様において、サザンハイブリダイゼーションを使用して、生理学
的状態または病理学的状態に対するＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ
−ＩＰの遺伝子変異の遺伝的連鎖を検出し得る。種々の発生段階、または種々の
疾患段階の患者からの種々の細胞型は、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／
またはＬＹＳＴ−ＩＰのそれらの発現（特に、同時にかつ同じ細胞内でのＬＹＳ
ＴもしくはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰの発現）、あるいはＬＹ
ＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０タンパク質の発現について特徴
づけされ得る。ノ−ザンまたはサザンブロット分析についてのハイブリダイゼー
ション条件のストリンジェンシーを操作して、以下に記載するような使用される
特定のプローブに対して所望の関連性の程度を有する核酸の検出を確実にし得る
。これらの方法および当該分野で一般的に公知の他の方法に対する改変を使用し
得る。
【０２５６】 （生物学的活性についてのアッセイ） 本発明の１つの実施態様は、以下からなる群から選択されるタンパク質と、Ｌ
ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体またはアナログとを接触させる工程、ならび
にＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体またはアナログとＬＹＳＴ−ＩＰタンパ
ク質との間の複合体の形成を検出する工程を包含する、生物学的活性についてＬ
ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体またはアナログをスクリーニングするための
方法を提供する：１４−３−３タンパク質、ＨＳＩタンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ
１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カ
ルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲＲａ１、イモ
ーゲン３８、アトロフィン−１（ａｔｒｏｐｈｉｎ−１）、ノルビン、ＨＢＦ−
Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０。ここで、この複合体の形成の検出は、ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２の上記誘導体またはアナログが、生物学的（例えば、結
合）活性を有することを示す。さらに、本発明の別の実施態様は、以下からなる
群から選択されるタンパク質の誘導体またはアナログを生物学的活性についてス
クリーニングするための、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と上記タンパク質の上記
誘導体またはアナログとを接触させる工程、および上記タンパク質の上記誘導体
またはアナログとＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２との間の複合体の形成を検出する
工程を包含する方法に関する：１４−３−３タンパク質、ＨＳＩタンパク質、Ｈ
ｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩ
ＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲ
Ｒａ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ
−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ
２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９
、もしくはＬＩＰ１０。ここで、上記複合体の形成の検出は、上記タンパク質の
上記誘導体またはアナログが、生物学的活性を有することを示す。
【０２５７】 （タンパク質の活性を調整する方法） 本発明はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に関与し得るタンパク質の活
性を調整する方法であって、そのタンパク質またはその誘導体もしくはアナログ
の結合パートナーの投与による方法を提供する。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２、
およびそれらの誘導体およびアナログを、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパ
ク質、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質をコードする核酸、また
はＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質に免疫特異的に結合する抗体、また
はその結合ドメインを含む上記抗体のフラグメントまたは誘導体を、ＬＹＳＴ−
ＩＰ遺伝子を発現する動物に投与すること、またはそれを発現する細胞と接触さ
せること、ならびにＬＹＳＴ−ＩＰのレベルまたは活性における変化を測定する
ことにより、ＬＹＳＴ−ＩＰの活性またはレベルを調整する能力についてアッセ
イされ得る。ここで、ＬＹＳＴ−ＩＰのレベルまたは活性における変化は、ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２が、ＬＹＳＴ−ＩＰのレベルまたは活性を調整し得るこ
とを示す。あるいは、ＬＹＳＴ−ＩＰを、ＬＹＳＴ−ＩＰ、またはＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐをコードする核酸、またはＬＹＳＴ−ＩＰに免疫特異的に結合する抗体、また
はその結合ドメインを含む上記抗体のフラグメントもしくは誘導体を、ＬＹＳＴ
もしくはＬＹＳＴ−２遺伝子を発現する動物に投与することにより、またはそれ
を発現する細胞と接触させることにより、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の活性ま
たはレベルを調整する能力についてアッセイし得る。ここで、ＬＹＳＴまたはＬ
ＹＳＴ−２のレベルまたは活性における変化は、ＬＹＳＴ−ＩＰが、ＬＹＳＴま
たはＬＹＳＴ−２のレベルまたは活性を調整し得ることを示す。
【０２５８】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２
、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、
もしくはＬＩＰ１０タンパク質、またはその誘導体、アナログもしくはフラグメ
ントはまた、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴの結合パートナー（すなわち、特定のＬＹ
ＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に関与するＬＹＳＴ−ＩＰ）の活性の調整（すなわ
ち、増加または減少）における活性についてスクリーニングされ得る。特定のＬ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体は、特定の疾患または組織型と関連し得る。特定
の疾患または障害における異なるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の関連性を、この背
景の節に示す。
【０２５９】 （アトピー性障害の処置のためのアッセイ） ＬＹＳＴタンパク質は、喘息およびアレルギー性疾患を含むアトピー性障害（
前出）に関係している。従って、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体ならびにその
誘導体、アナログおよびフラグメント、ＬＹＳＴ遺伝子をコードする核酸、抗Ｌ
ＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体およびアンチセンス核酸、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹ
ＳＴ−ＩＰ複合体の他の調節因子を、インビトロおよびインビボアッセイにおい
てアトピー性障害の処置または予防における活性について試験し得る。
【０２６０】 一つの実施態様において、本発明の治療剤は、インビトロでの治療剤とのアト
ピー性反応の指標を表す培養細胞との接触、およびそのように接触させていない
細胞中の指標のレベルと、治療剤と接触させた細胞中の指標のレベルとの比較に
より、アトピー性障害を予防または処置する活性についてアッセイされ得る。こ
こで、上記の接触させた細胞中のより低いレベルは、治療剤が、アトピー性障害
を処置または予防する活性を有することを示す。このようなアッセイに使用され
得る細胞モデルは、以下を含むがそれらに限定されない：アトピー性疾患の血清
ＩｇＥ促進アレルゲン提示のためのＥＢＶ−Ｂ細胞のモデル（ｖａｎ ｄｅｒ
Ｈｅｉｊｄｅｎら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：３６４３−３６５
０）、ヒトの鼻の上皮細胞膜のアレルギー性鼻炎のインビトロ細胞培養モデル（
Ｖａｒｓａｎｏら、１９９６、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ １０６：５９９−６
０４）。
【０２６１】 別の実施態様において、本発明の治療剤を、アトピー性反応を示す試験動物、
またはアトピー性反応を示さず、そして続いてアトピー性反応を誘発する薬剤で
チャレンジされる試験動物に上記治療剤を投与すること：そして上記治療剤を投
与した後のアトピー性反応の変化を測定することによりアトピー性疾患を処置ま
たは予防する活性についてアッセイし得る。ここで、上記アトピー性反応の減少
または上記アトピー性反応の予防は、治療剤が、アトピー性疾患の処置または予
防に活性を有することを示す。
【０２６２】 アトピー性障害の多くの動物モデルが当該分野において公知である。これらの
モデルは、天然のヒトアトピー性疾患を正確に模倣する。特定のモデルの例は、
以下を含むがそれらに限定されない：アトピー性喘息のマウスモデル（ここで、
抗インターロイキン−４は、ＩｇＥ産生を阻害する（Ｚｈｏｕら、１９９７、Ｊ
．Ａｓｔｈｍａ ３４：１９５−２０１））；抗アレルギー／抗喘息薬物を使用
する喘息の霊長類モデル（Ｔｕｒｎｅｒら、１９９６、Ｉｎｆｌａｍｍ．ＲＥＳ
．４５：２３９−２４５）；アレルゲン誘導気道炎症および上皮変化のマウスモ
デル（Ｂｌｙｔｈら、１９９６、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．１４：４２５−４３８）；モルモットでのスギ花粉を使用する実験的
アレルギー性鼻炎のモデル（Ｎａｂｅら、１９９７、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ．１９９７ ７５：２４３−２５１）；じんま疹の動物モデルとしてのト
リメリチック無水物感受性マウス（Ｌａｕｅｒｍａら、１９９７、Ｊ．Ａｐｐｌ
．Ｔｏｘｉｃｏｌ．１７：３５７−３６０）；非免疫学的接触じんま疹発生剤（
ｎｏｎ−ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｃｏｎｔａｃｔ ｕｒｔｉｃａｎｔｓ）を試
験するためのモデルとしてのモルモット耳（Ｎｇ、１９９８、Ａｎｎ．Ａｃａｄ
．Ｍｅｄ．Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ １７：５６３−５６８）；アトピー性皮膚炎の
病原性を研究するためのパッチ試験反応（Ｂｒｕｉｊｎｚｅｅｌら、１９９３、
Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ２３：９７−１０９）；全身性アナフィラ
キシーまたは局部的アナフィラキシーのマウスモデル（Ｓｈｉｎら、１９９７、
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．３６：１４１−１４６）；結膜のアレルギー性反
応のモルモットモデル（Ｍｅｉｊｅｒら、１９９６、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉ
ｎｓ １９９６、５２：４３１−４４６）；およびアレルギー性結膜炎のマウス
モデル（Ｍｅｒａｙｏ−Ｌｌｏｖｅｓら、１９９６、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９７：１１２９−１１４０）。
【０２６３】 （自己免疫疾患の処置についてのアッセイ） ＬＹＳＴおよび特に結合パートナー、イモーゲン３８は、自己免疫疾患に関連
している。従って、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、特にＬＹＳＴ：イモーゲ
ン３８複合体ならびにその誘導体、アナログおよびフラグメント、ＬＹＳＴおよ
びイモーゲン３８遺伝子をコードする核酸、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰおよび
特に抗ＬＹＳＴ：イモーゲン３８抗体およびアンチセンス核酸、ならびにＬＹＳ
Ｔ：ＬＹＳＴ−ＩＰおよび特にＬＹＳＴ：イモーゲン３８複合体活性の他の調節
因子を、インビボおよびインビトロアッセイにおいて自己免疫疾患を処置または
予防する活性について試験し得る。
【０２６４】 一つの実施態様において、本発明の治療剤を、インビトロで治療剤と自己免疫
反応（例えば、ケモカイン分泌）の指標を示す培養細胞とを接触させ、そして治
療剤と接触させた細胞での上記指標のレベルをそのように接触させていない細胞
の上記指標のレベルと比較することにより、自己免疫疾患を処置または予防する
活性についてアッセイし得る。ここで、上記接触させた細胞のより低いレベルは
、治療剤が、自己免疫疾患を処置または予防する活性を有することを示す。この
ようなアッセイに使用し得る細胞モデルは、以下を含むがそれらに限定されない
：炎症を媒介するケモカインを分泌する白血球および他の滑膜細胞（Ｋｕｎｋｅ
ｌら、１９９６、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．５９：６−１２）、多発性硬化
症の動物モデル由来の脳脊髄液細胞（Ｎｏｒｇａら、１９９５、Ｉｎｆｌａｍｍ
．Ｒｅｓ．４４：５２９−５３４）、ギヤン−バレー疾患のモデルである実験的
自己免疫神経炎のマクロファージ（Ｂａｉら、１９９７、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍ
ｕｎｏｌ．７６：１７７−１８４）、単球におけるＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌの発現
（Ｌａｍａｎら、１９９６、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５９−
１０８）、ｌｐｒマウス由来のリンパ球培養物（Ｎａｇａｔａ、１９９６、Ｐｒ
ｏｇ．Ｍｏｌ．Ｓｕｂｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１６：８７−１０３）および突発性
マウス自己免疫性甲状腺炎（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｍｕｒｉｎｅ ａｕｔｏ
ｉｍｍｕｎｅ ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）の培養甲状腺細胞（ｔｈｙｒｏｃｙｔ
ｅ）（Ｇｒｅｅｎら、１９９６、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３７：２８２
３−２８３２）。
【０２６５】 別の実施態様において、本発明の治療剤を、自己免疫反応を示す試験動物、ま
たは自己免疫反応を示さず、続いて自己免疫反応を誘発する薬剤でチャレンジさ
れる試験動物に上記治療剤を投与すること；そして上記治療剤を投与した後の自
己免疫反応の変化を測定することにより、自己免疫疾患を処置または予防する活
性についてアッセイし得る。ここで、上記自己免疫反応の減少または上記自己免
疫反応の妨害は、治療剤が、自己免疫疾患の処置または予防において活性を有す
ることを示す。
【０２６６】 自己免疫疾患の多くの動物モデルが当該分野において公知である。喘息、全身
性エリテマトーデス、糖尿病などのモデルを含むこれらのモデルは、天然のヒト
自己免疫疾患を正確に模倣し（Ｆａｒｉｎｅ、９７、Ｔｏｘｉｃｏｌ．１１９：
２９−３５）、そして以下を含むがそれらに限定されない：多発性硬化症の実験
的アレルギー性脳脊髄炎（Ｂｒａｂｂら、１９９７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５
９：４９７−５０７）、サイログロブリン（ｔｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）誘導
実験的甲状腺炎、複数の器官に局在する自己免疫疾患（例えば、腎臓を覆った条
件下でのラットの胸腺移植を受けたＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの甲状腺炎
および胃炎）（ＴａｇｕｃｈｉおよびＴａｋａｈａｓｈｉ、１９９６、Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ ８９：１３−１９）、インスリン依存性糖尿病のような、ウイル
ス誘導自己免疫疾患（Ｏｌｄｓｔｏｎｅおよびｖｏｎ Ｈｅｒａｔｈ、１９９６
ＡＰＭＩＳ．１０４：６８９−９７．概要）、実験的自己免疫脳脊髄炎（Ｅｎ
ｃｉｎａｓら、１９９６、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．ｒｅｓ．４５：６５５−６６
９）、実験的自己免疫迷路炎（Ｇｌｏｄｄｅｃｋら、１９９４、Ｃｌｉｎ．Ｅｘ
ｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９７：１３３−１３７）、フロイントアジュバント誘導慢
性関節リウマチ（Ｚａｈｉｒｉら、１９６９、Ｃａｎ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．Ｊ
．１０１：２５９−２７８）、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、対
宿主性移植片疾患および糖尿病を発症した近交系マウス系統（Ｈｕｍｐｈｒｅｙ
ｓ−Ｂｅｈｅｒ、１９９６、Ａｄｖ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．１０：７３−７５）、
および自己免疫性肝炎（Ｍｅｙｅｒ ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｅｎｆｅｌｄｅおよび
Ｄｉｅｎｅｓ、１９９６、Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．４２９：１−１２）。
【０２６７】 （神経変性障害の処置のためのアッセイ） ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２、ならびにＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２結合パー
トナー（例えば、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、アトロフィン−
Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＨＢＦ−Ｇ２、およびＤＧＳ−Ｉ）は、脳組織において見いだ
された（２．５．５．１および５．５．８節もまた参照のこと）。ＬＹＳＴ相互
作用因子ＬＩＰ３（ｒｏａｚホモログ）およびノルビンもまた、脳組織に局在す
るようである。チェディアック−東症候群に冒された個体は、他の症状の中でも
とりわけ末梢神経障害および失調のような神経学的な障害を有する。アトロフィ
ン−Ｉの場合、タンパク質の発現は、神経変性性疾患である歯状核赤核淡蒼球ル
イ体萎縮症（ｄｅｎｔａｔｏｒｕｂｒａｌ ｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａｎ ａ
ｔｒｏｐｈｙ）（ＤＲＰＬＡ、Ｓｍｉｔｈ’ｓ疾患）と遺伝的に連鎖している。
１４−３−３タンパク質は、アルツハイマー疾患の神経細線維もつれおよびクロ
イツフェルト−ヤーコプ病患者の脳脊髄液の両方に存在する。ＨＢＦ−Ｇ２は、
発生中の終脳のニューロンにおいて発現され、そしてＤＧＳ−Ｉ遺伝子は、ディ
・ジョージ症候群に関与する。ラットノルビンに対するヒトホモログは、神経形
成性に関与しているようである。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（特に、ＬＹ
ＳＴ：１４−３−３、ＬＹＳＴ：ＨＳ１タンパク質、ＬＹＳＴ：アトロフィン−
Ｉ、ＬＹＳＴ：ＤＧＳ−Ｉ、ＬＹＳＴ：ＬＩＰ３、ＬＹＳＴ：ノルビン、ＬＹＳ
Ｔ−２：ＨＢＦ−Ｇ２、ＬＹＳＴ−２：１４−３−３複合体）、その誘導体、ア
ナログおよびフラグメント、ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子をコードする
核酸、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体活性の他の調節因子を、インビトロおよびインビボアッセイで神経変性性疾
患を処置または予防する活性について試験し得る。
【０２６８】 １つの実施態様において、本発明の治療剤を、インビトロで治療剤とβ−Ａ４
ペプチドの過剰発現のような神経変性疾患の指標を示す培養細胞との接触、およ
び治療剤と接触させた細胞での上記指標のレベルとそのように接触させなかった
細胞での上記指標のレベルを比較することにより、神経変性疾患を処置または予
防する活性についてアッセイし得る。ここで、上記接触させた細胞でのより低い
レベルは、治療剤が神経変性疾患を処置または予防する活性を有することを示す
。神経変性疾患の細胞培養モデルの特定の例は、以下を含むがそれらに限定され
ない：罹患した個体および罹患していない個体からの培養ラット内皮細胞（Ｍａ
ｎｅｉｒｏら、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．１９：５−１２）、Ｐ１９マウス胎生期癌細胞（Ｈｕｎｇら、
１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９４３９−
９４４３）、およびマイネルト基底核由来のコリン作動性ニューロンの解離した
細胞培養物（Ｎａｋａｊｉｍａら、１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：６３２５−６３２９）。
【０２６９】 別の実施態様において、本発明の治療剤を、神経変性疾患（例えば、β−ＡＰ
Ｐを発現するトランスジェニック動物における認知欠損症の早期発生）の症状を
示す試験動物、または神経変性疾患の症状の発症にかかりやすくされた試験動物
への治療剤の投与；および上記治療剤の投与後の神経変性疾患の上記症状におけ
る変化を測定することにより神経変性疾患を処置または予防する活性についてア
ッセイし得る。ここで、神経変性疾患の症状の重篤度の軽減または神経変性疾患
の症状の予防は、治療剤が神経変性疾患を処置または予防する活性を有すること
を示す。このような試験動物は、神経変性疾患についての当該分野で公知の多く
の動物モデルのいずれか１つであり得る。アルツハイマー病および２１トリソミ
ーの精神遅滞についてのこれらのモデルは、天然のヒト神経変性疾患を正確に模
倣する（Ｃａｍｐｂｅｌｌら、１９９７、Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２：
１２５−１２９；Ｓｃｈｕｌｔｚら、１９９７、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．１７４：１９３−１９７；Ｏｒｏｎら、１９９７、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ．Ｔ
ｒａｎｓｍ．増刊、４９：７７−８４）。特定のモデルの例は、以下を含むがそ
れらに限定されない：部分１６トリソミーマウス（Ｈｏｌｔｚｍａｎら、１９９
６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１３３３３−１３
３３８）、両側基底核大型細胞損傷（ｂｉｌａｔｅｒａｌ ｎｕｃｌｅｕｓ ｂ
ａｓａｌｉｓ ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ−ｌｅｓｉｏｎｅｄ）ラット（
Ｐｏｐｏｖｉｃら、１９９６、Ｉｎｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８６：２８１−２９
９）、年老いたラット（Ｍｕｉｒ、１９９７、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｂｅｈａｖ．５６：６８７−６９６）、アルツハイマー病のＰＤＡＰＰト
ランスジェニックマウスモデル（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、１９９７、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１５５０−１５５５）、お
よび実験的自己免疫性痴呆（Ｏｒｏｎら、１９９７、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ．Ｔｒａ
ｎｓｍ．増刊、４９：７７−８４）。
【０２７０】 （腫瘍形成の処置のためのアッセイ） ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２ならびにＬＹＳＴの同定された結合パートナーの
いくつか（例えば、１４−３−３タンパク質、ＨＳ−１タンパク質、エストロゲ
ン−レセプター関連タンパク質、Ｆｔｅ１、ＢＭＫＩおよびカゼインキナーゼＩ
Ｉ ＳＵ）は、細胞増殖の制御において役割を有し、従って、細胞形質転換およ
び腫瘍形成において役割を有する。従って、本発明の方法は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体、タンパク質およびそれらのフラグメント、誘導体およびアナロ
グを、インビボおよびインビトロで細胞増殖、細胞形質転換および／または腫瘍
形成を変化させる活性についてのスクリーニングを提供する。
【０２７１】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体またはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、も
しくはＬＩＰ１０タンパク質、それらの誘導体、フラグメントおよびアナログを
、細胞増殖を測定するための当該分野で周知の方法を使用してインビトロで、培
養細胞における細胞増殖を変化（すなわち、増加または減少）させる活性につい
てアッセイし得る。細胞培養モデルの特定の例は、以下を含むがそれらに限定さ
れない：肺癌、原発性ラット肺腫瘍細胞（Ｓｗａｆｆｏｒｄら、１９９７、Ｍｏ
ｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７：１３６６−１３７４）および巨大細胞の未分化
癌細胞株（Ｍａｂｒｙら、１９９１、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ、３：５３−５
８）、結腸癌の結腸直腸細胞株（ＰａｒｋおよびＧａｚｄａｒ、１９９６、Ｊ．
Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．増刊、２４：１３１−１４１）、乳癌の複数の樹立
細胞株（Ｈａｍｂｌｙら、１９９７、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔ
ｒｅａｔ．４３：２４７−２５８；Ｇｉｅｒｔｈｙら、１９９７、Ｃｈｅｍｏｓ
ｐｈｅｒｅ ３４：１４９５−１５０５；ＰｒａｓａｄおよびＣｈｕｒｃｈ、１
９９７、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３２：１
４−１９）、前立腺癌のよく特徴付けられた多くの細胞モデル（Ｗｅｂｂｅｒら
、１９９６、Ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｐａｒｔ １、２９：３８６−３９４；Ｐａｒ
ｔ ２、３０：５８−６４およびＰａｒｔ ３、３０：１３６−１４２；Ｂｏｕ
ｌｉｋａｓ、１９９７、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：１４７１−１５
０５）、尿生殖器癌についての連続ヒト膀胱癌細胞株（Ｒｉｂｅｒｉｏら、１９
９７、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｂｉｏｌ．７２：１１−２０）、移行上皮癌
の器官培養物（Ｂｏｏｔｈら、１９９７、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．７６：８４３
−８５７）、およびラット進行モデル（Ｖｅｔら、１９９７、Ｂｉｏｃｈｉｍ，
Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １３６０：３９−４４）ならびに白血病およびリン
パ腫の樹立細胞株（Ｄｒｅｘｌｅｒ、１９９４、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：９１
９−９２７、Ｔｏｈｙａｍａ、１９９７、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．６５：
３０９−３１７）。
【０２７２】 例えば、限定のつもりはないが、細胞増殖は以下によってアッセイされ得る： 3 Ｈチミジンの取り込みを測定することにより、直接の細胞計数により、既知の 遺伝子（例えば、プロトオンコジーン（例えば、ｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｍｙｃ）
）の転写活性の変化を検出することにより、細胞周期マーカーの変化を検出する
ことによってなど。従って、本発明の１つの実施態様は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体、または個々のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩ
Ｐ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、もしくはＬＩＰ１
０タンパク質、ならびにそれらのフラグメント、誘導体、およびアナログを、イ
ンビトロでの細胞の増殖を変化させる（すなわち、増加させるまたは減少させる
）際の活性についてスクリーニングする方法を提供する。この方法は、ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰタン
パク質、あるいはこれらの誘導体、アナログ、またはフラグメントに細胞を接触
させる工程、そのように接触させられた細胞の増殖を測定する工程、その増殖を
、そのように接触させていない細胞の増殖と比較する工程を包含し、ここでこの
接触されている細胞における増殖レベルの変化は、本発明の複合体またはタンパ
ク質が細胞増殖を変化させる活性を有することを示す。
【０２７３】 これらＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質、それらの誘導体、フラグメントまたは
アナログはまた、インビトロでの細胞の形質転換（または悪性表現型への進行）
を誘導または阻害する際の活性についてスクリーニングされ得る。本発明の複合
体およびタンパク質は、（ｉ）正常な表現型を有する細胞（細胞の形質転換につ
いてアッセイするために）または（ｉｉ）形質転換された細胞表現型を有する細
胞（細胞の形質転換の阻害についてアッセイするために）のいずれかを、本発明
の複合体またはタンパク質と接触させること、ならびにこのような細胞を、形質
転換された表現型と関連する特徴（すなわち、インビボでの腫瘍形成能力に関連
するインビトロでの特徴のセット）の獲得もしくは喪失について試験することに
よってスクリーニングされ得る。このような特徴としては以下が挙げられるが、
これらに限定されない：軟寒天中でのコロニー形成、より丸い細胞形態、よりゆ
るやかな下層付着、接触阻害の喪失、足場依存性の喪失、プロテアーゼ（例えば
、プラスミノーゲンアクチベーター）の放出、増加した糖輸送、減少した血清必
要量、胎児抗原の発現、２５０ｋＤ表面タンパク質の消失など（Ｌｕｒｉａら、
１９７８、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、４３６〜４４６頁を参照のこと）。
【０２７４】 これらＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、あるいはＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、
ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
ＩＰ９、もしくはＬＩＰ１０タンパク質、それらの誘導体、フラグメントまたは
アナログはまた、非ヒト試験動物においてインビボでの腫瘍形成を促進または阻
害する活性についてスクリーニングされ得る。過剰増殖障害（腫瘍形成および転
移伝播を含む）の非常に多くの動物モデルが、当該分野で公知である（Ｈａｒｒ
ｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐａｌｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉ
ｎｅ、第１３版、Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ、１８１４頁の第３１７章「Ｐｒｉｎｃｉｐａｌｓ ｏｆ Ｎｅｏ
ｐｌａｓｉａ」表３１７−１、およびＬｏｖｅｊｏｙら、１９９７、Ｊ．Ｐａｔ
ｈｏｌ．１８１：１３０〜１３５を参照のこと）。特定の例としては、以下が挙
げられる：肺癌について、ラットへの腫瘍小節の移植（Ｗａｎｇら、１９９７、
Ａｎｎ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｕｒｇ．６４：２１６〜２１９）またはＮＫ細胞が枯
渇したＳＣＩＤマウスにおける肺癌転移の確立（ＹｏｎｏおよびＳｏｎｅ、１９
９７、Ｇａｎ Ｔｏ Ｋａｇａｋｕ Ｒｙｏｈｏ ２４：４８９〜４９４）；結
腸癌について、ヌードマウスへのヒト結腸癌細胞の結腸癌移植（Ｇｕｔｍａｎお
よびＦｉｄｌｅｒ、１９９５、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｓｕｒｇ．１９：２２６〜２３
４）、ヒト潰瘍性結腸炎の白毛シシザル（ｃｏｔｔｏｎ ｔｏｐ ｔａｍａｒｉ
ｎ）モデル（Ｗａｒｒｅｎ、１９９６、Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
Ｔｈｅｒ．１０増補１２：４５〜４７）および腺腫瘍ポリポーシス腫瘍サプレッ
サーの変異を有するマウスモデル（Ｐｏｌａｋｉｓ、１９９７、Ｂｉｏｃｈｉｍ
．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３３２：Ｆ１２７〜Ｆ１４７）；乳癌について
、乳癌のトランスジェニックモデル（ＤａｎｋｏｒｔおよびＭｕｌｌｅｒ、１９
９６、Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｓ．８３：７１〜８８；Ａｍｕｎｄａｄ
ｉｔｔｉｒら、１９９６、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．
３９：１１９〜１３５）およびラットにおける腫瘍の化学的誘導（Ｒｕｓｓｏお
よびＲｕｓｓｏ、１９９６、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ
．３９：７〜２０）；前立腺癌について、化学的誘導型およびトランスジェニッ
クげっ歯類モデル、ならびにヒト異種移植モデル（Ｒｏｙａｉら、１９９６、Ｓ
ｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：３５〜４０）；尿生殖器の癌について、ラットお
よびマウスにおける誘導型膀胱新生物（Ｏｙａｓｕ、１９９５、Ｆｏｏｄ Ｃｈ
ｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ ３３：７４７〜７５５）およびヌードラットへのヒト移
行上皮癌の異種移植（Ｊａｒｒｅｔｔら、１９９５、Ｊ．Ｅｎｄｏｕｒｏｌ．９
：１〜７）；ならびに造血癌について、動物における移植された同種異系骨髄（
Ａｐｐｅｌｂａｕｍ、１９９７、Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１（増補４）：Ｓ１５〜
Ｓ１７）。さらに、多くの型の癌に適用可能な一般的動物モデルが記載されてお
り、それらには以下が挙げられるが、これらに限定されない：ｐ５３欠損マウス
モデル（Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ、１９９６、Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ
．７：２６９〜２７８）、Ｍｉｎマウス（Ｓｈｏｅｍａｋｅｒら、１９９７、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１３３２：Ｆ２５〜Ｆ４８）、およ
びラットにおける腫瘍に対する免疫応答（Ｆｒｅｙ、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ
．１２：１７３〜１８８）。
【０２７５】 例えば、本発明の複合体およびタンパク質は、非ヒト試験動物（好ましくは、
１つの型の腫瘍を発症しやすい試験動物）に投与され得、そしてこの非ヒト試験
動物は、続いて本発明の複合体またはタンパク質を投与されていないコントロー
ルと比較した腫瘍形成の発生率の増加について試験される。あるいは、本発明の
複合体およびタンパク質は、腫瘍を有する非ヒト試験動物（例えば、悪性細胞、
新生物細胞もしくは形質転換細胞の導入により、または発癌物質の投与により、
腫瘍が誘導されている動物）に投与され得、そして続いて本発明の複合体または
タンパク質を投与されていないコントロールと比較した腫瘍後退について、試験
動物の腫瘍を試験する。
【０２７６】 （色素沈着障害の処置についてのアッセイ） ＬＹＳＴタンパク質は、色素沈着障害（前出を参照のこと）（眼・皮膚白皮症
および色素減少症（ｈｙｐｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を含む）に関係してい
る。従って、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体ならびにその誘導体、アナログ、
およびフラグメント、ＬＹＳＴ遺伝子をコードする核酸またはＬＹＳＴ−２遺伝
子をコードする核酸、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体または核酸、ならびにこ
のＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の他のモジュレーターは、インビトロアッセ
イおよびインビボアッセイにおいて、色素沈着障害を処置または予防する際の活
性について試験され得る。
【０２７７】 １つの実施態様において、本発明の治療剤は、色素沈着障害を処置または予防
する際の活性についてアッセイされ得る。それは以下：色素沈着反応の指標を示
す培養細胞をインビトロでこの治療剤と接触させる工程、およびそのように接触
させられた細胞中の指標のレベルを、そのように接触させられていない細胞中の
指標のそのレベルと比較する工程によってであり、ここで、この接触させられた
細胞中の方が低いレベルであることは、この治療剤が色素沈着障害を処置または
予防する際に活性を有することを示す。このようなアッセイに使用され得る細胞
モデルは、以下を含むがこれらに限定されない：培養された白斑メラノサイトお
よびケラチノサイトを使用するインビトロ研究（Ｂｅｓｓｏｕら、１９９７、Ｂ
ｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３７：８９０〜８９７）；ヌル遺伝子型ｐ（ｃｐ
）／ｐ（２５Ｈ）のマウス由来の、不朽化した、重篤な色素減少メラノサイトお
よびメラニン芽細胞の系統（Ｓｖｉｄｅｒｓｋａｙａら、１９９７、Ｊ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０８：３０〜３４）；ならびにメラノサイト移動
を研究するためのヒト皮膚の器官型培養（Ｌｅ Ｐｏｏｌｅら、１９９４、Ｐｉ
ｇｍｅｎｔ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．７：３３〜４３）。
【０２７８】 別の実施態様において、本発明の治療剤は、色素沈着疾患を処置または予防す
る際の活性についてアッセイされ得る。それは、以下：色素沈着反応を示す試験
動物にこの治療剤を投与する工程、または色素沈着反応を示さず後に色素沈着反
応を誘発する薬剤でチャレンジされるその試験動物にこの治療剤を投与する工程
；ならびにこの治療剤の投与後に、色素沈着反応における変化を測定する工程に
よってであり、ここで、この色素沈着反応における減少またはこの色素沈着反応
の予防は、この治療剤が色素沈着疾患を処置または予防する際に活性を有するこ
とを示す。
【０２７９】 色素沈着障害の多数の動物モデルが、当該分野で公知である。これらのモデル
は、天然のヒト色素沈着疾患を正確に模倣している。特定のモデルの例としては
、以下が挙げられるが、これらに限定されない：鳥類由来のメラノサイトの自然
発生的自己免疫喪失（白斑）を発症するｓｍｙｔｈ系統（ＳＬ）ニワトリ（Ｅｒ
ｆら、１９９７、Ｖｅｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５８：
３３５〜３４３）；ならびにマウス白耳（ｐａｌｅ ｅａｒ）（ｅｐ）変異（Ｇ
ａｒｄｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：
９２３８〜９２４３）。
【０２８０】 （血小板機能異常症の処置のためのアッセイ） ＬＹＳタンパク質は、血小板機能異常症（前出を参照のこと）に関係する。従
って、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、ならびにそれらの誘導体、アナログ、
およびフラグメント、ＬＹＳＴ遺伝子をコードする核酸、抗ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ
−ＩＰ抗体または核酸、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰの他のモジュレータ
ーは、インビトロアッセイおよびインビボアッセイにおいて、血小板機能異常症
を処置または予防する際の活性について試験され得る。
【０２８１】 １つの実施態様において、本発明の治療剤は、血小板機能異常症を処置または
予防する際の活性について試験され得る。それは、以下：血小板反応の指標を示
す培養細胞をインビトロでこの治療剤と接触させる工程、ならびにこのように接
触させた細胞中の指標のレベルを、このように接触されていない細胞中の指標の
そのレベルと比較する工程によってであり、ここで、接触されている細胞におい
てより低いレベルであることは、この治療剤が血小板機能異常症を処置または予
防する際に活性を有することを示す。
【０２８２】 別の実施態様において、本発明の治療剤は、血小板機能異常症を処置または予
防する際の活性についてアッセイされ得る。それは、以下：血小板反応を示す試
験動物にこの治療剤を投与する工程、または血小板反応を示さず、その後血小板
反応を誘発する薬剤でチャレンジされるその試験動物にこの治療剤を投与する工
程；ならびにこの治療剤の投与後に、血小板反応における変化を測定する工程に
よってであり、ここで、この血小板反応における減少またはこの血小板反応の予
防は、この治療剤が血小板機能異常症を処置または予防する際に活性を有するこ
とを示す。
【０２８３】 血小板機能異常症の多数の動物モデルが当該分野で公知である。これらの動物
モデルは、天然のヒト血小板機能異常症を正確に模倣している。特定モデルの例
としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ラットモデルにおける
皮膚出血時間試験（ＭａｃＤｏｎａｌｄら、１９９４、Ｔｈｒｏｍｂ；Ｒｅｓ．
７６：５３５〜５４０）、ラット実験モデルにおける出血時間と血小板抑制薬剤
の抗血栓効果との相関関係（Ｓｕｅｈｉｒｏら、１９９４、Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．Ｃｈｅｍ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８３：１５７〜１６３）な
ど。
【０２８４】 （ウイルス感染の処置に関するアッセイ） ＬＹＳＴ相互作用体であるイムポルチンβサブユニットタンパク質は、ウイル
ス感染機構（ＡＩＤＳウイルス（ＨＩＶ−１）に関するウイルス感染機構を含む
）に強く関係している。ＨＩＶ−１ Ｒｅｖタンパク質の核局在化シグナルは、
ヒトイムポルチンβへの特異的結合を媒介する。莫大な数のヒトの疾患が、溶菌
性ウイルス感染および日和見ウイルス感染に由来する（Ｂｅｌｓｈｅ編、１９８
４、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、ＰＳＧ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ、Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＭＡを参照のこと）。広範な組織（気道
、ＣＮＳ，皮膚、尿生殖器管、眼、耳、免疫系、胃腸管、筋骨格系を含む）の疾
患は、莫大な数の、全ての年齢のヒトに影響を与える（Ｗｙｎｇａａｒｄｅｎお
よびＳｍｉｔｈ、１９８８、Ｃｅｃｉｌ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎｅ、第１８版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈ
ｉａ、１７５０〜１７５３頁、表３２８−２を参照のこと）。従って、ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（特にＬＹＳＴ：イムポルチンβ複合体）ならびにそれ
らの誘導体、アナログ、およびフラグメント、ＬＹＳＴ遺伝子を含む核酸または
ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子を含む核酸（特にイムポルチンβ遺伝子を含む核酸）；抗
ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ抗体または核酸（特に抗ＬＹＳＴ：イムポルチンβ抗
体または核酸）、ならびにＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性の他のモジュレ
ーターは、インビトロアッセイおよびインビボアッセイにおいて、ウイルス感染
を処置または予防する際の活性について試験され得る。
【０２８５】 １つの実施態様において、本発明の治療剤は、ウイルス疾患を処置または予防
する際の活性についてアッセイされ得る。それは、以下：ウイルス反応（例えば
、封入体の形成）の指標を示す培養細胞をインビトロでこの治療剤と接触させる
工程、ならびにこの治療剤と接触させた細胞中のこの指標のレベルを、このよう
に接触されていない細胞中のこの指標のそのレベルと比較する工程によってであ
り、ここで、接触されている細胞においてより低いレベルであることは、この治
療剤がウイルス疾患を処置または予防する際に活性を有することを示す。このよ
うなアッセイに使用され得る細胞モデルとしては、以下が挙げられるが、これら
に限定されない：Ｔリンパ球のウイルス感染（Ｓｅｌｉｎら、１９９６、Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：２４８９〜２４９９）；脱分化した肝細胞癌細胞のＢ型
肝炎感染（Ｒａｎｅｙら、１９９７、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：１０５８〜１０７
１）；培養された唾液腺上皮細胞のウイルス感染（Ｃｌａｒｋら、１９９４、Ａ
ｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ １８：７〜１４）；ＣＤ４＋リンパ球細胞系列の同調
ＨＩＶ−１感染（Ｗａｉｎｂｅｒｇら、１９９７、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３３：
３６４〜３７３）；呼吸上皮細胞のウイルス感染（Ｓｔａｒｋら、１９９６、Ｈ
ｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１６６９〜１６８１）；ならびにＮＩＨ−
３Ｔ３細胞の両栄養性レトロウイルス感染（Ｍｏｒｇａｎら、１９９５、Ｊ．Ｖ
ｉｒｏｌ．６９：６９９４〜７０００）。
【０２８６】 別の実施態様において、本発明の治療剤は、ウイルス疾患を処置または予防す
る際の活性についてアッセイされ得る。それは、以下：ウイルス疾患の症状（例
えば、ウイルス誘導型喘息の動物モデルにおける特徴的呼吸症状）を示す試験動
物にこの治療剤を投与する工程、またはウイルス反応を示さず、その後ウイルス
感染を誘発する薬剤でチャレンジされるその試験動物にこの治療剤を投与する工
程；ならびにこの治療剤の投与後に、ウイルス反応における変化を測定する工程
によってであり、ここで、このウイルス反応における減少またはこのウイルス反
応の予防は、この治療剤がウイルス疾患を処置または予防する際に活性を有する
ことを示す。このようなアッセイに使用され得る動物モデルとしては以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：モルモットにおける呼吸ウイルス感染（Ｋｕ
ｄｌａｃｚおよびＫｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ、１９９５、Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ
．４４：１０５〜１１０）；マウスのインフルエンザウイルス感染（Ｄｏｂｂｓ
ら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１８７０〜１８７７）；コヒツジ
におけるＲＳ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｉｔｉａｌ）ウイルス感染（
Ｍａｓｏｔら、１９９６、Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｍｅｄ．４
３：２３３〜２４３）；マウスにおける好中球ウイルス感染（Ｂａｒｎａら、１
９９６、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３３：３３１〜３４３）；ハムスターにおける麻
疹感染（Ｆｕｋｕｄａら、１９９４、Ａｃｔａ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ．Ｓｕ
ｐｐｌ（Ｓｔｏｃｋｈ．）５１４：１１１〜１１６）；マウスにおける脳心筋炎
感染（Ｈｉｒａｓａｗａら、１９９７、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：４０２４〜４０
３１）；ならびにマウスにおけるサイトメガロウイルス感染（Ｏｒａｎｇｅおよ
びＢｉｒｏｎ、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：１１３８〜１１４２）
。
【０２８７】 （ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、Ｌ
ＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７，ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、また
はＬＩＰ１０タンパク質の、アンタゴニストおよびアゴニストについてのスクリ
ーニング） ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、または個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬ
ＩＰタンパク質、ならびにそれらの誘導体、フラグメントおよびアナログ、なら
びにＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２、ＬＹＳＴ−ＩＰ、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３
、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７，ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩ
Ｐ１０、ならびにそれらの誘導体、フラグメント、およびアナログ、をコードす
る核酸は、上記の核酸、タンパク質、または誘導体に結合する化合物についてス
クリーニングするために使用され得、従って、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体
のアゴニストまたはアンタゴニスト、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規な
ＬＩＰタンパク質機能のアンタゴニストまたはアゴニストとしての潜在的用途を
有している。従って、本発明は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、およびＬＹ
ＳＴ、ＬＹＳＴ−２、ＬＹＳＴ−ＩＰ、核酸、タンパク質または誘導体と、特異
的に結合する分子を検出するためのアッセイを提供する。
【０２８８】 例えば、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ核酸の両
方とも発現する組換え細胞、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬＩＰ核
酸を発現する組換え細胞は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に結合または干渉
する分子、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬＩＰ機能に干渉する分子
をスクリーニングするためのアッセイにおいて使用される、複合体またはタンパ
ク質を組換えにより産生するために使用され得る。好ましい実施態様において、
優れた安定性を有しなおＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体を形成する能力を保持
するペプチドアナログ（例えば、結合アッセイ緩衝液中でのタンパク質分解性分
解に耐性であるように、または酸化分解に耐性であるように改変された、ＬＹＳ
ＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰ）は、モジュレーターについてス
クリーニングするために使用される。これらのモジュレーターは、例えば、タン
パク質分解性切断部位でのアミノ酸の置換（例えば、タンパク質分解感受性部位
での化学的に誘導体化されたアミノ酸の使用）により生成された分子であり、お
よび酸化に供されたアミノ酸残基（すなわち、メチオニンおよびシステイン）の
置換により生成された分子である。
【０２８９】 分子（例えば、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体または個々のＬＹＳＴ−２も
しくは新規なＬＩＰタンパク質の、推定結合パートナー）が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体と、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬＩＰタンパク質
、またはそれらのフラグメントと、結合を実施し得る条件下で接触され、次いで
、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規
なＬＩＰタンパク質に特異的に結合する分子が同定される。同様の方法が、ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２および／またはＬＹＳＴ−ＩＰ核酸または誘導体に結合
する分子についてスクリーニングするために使用され得る。
【０２９０】 本発明の特定の局面は、ＬＹＳＴ；ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成または解離ま
たは分解を、阻害または促進する分子を、例えば、以下に記載の改変型酵母ツー
ハイブリッドアッセイを使用するインヒビターのスクリーニングについて記載さ
れた方法を用いて、同定することに関する。
【０２９１】 本発明の１つの実施態様において、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２もしくはＬ
ＹＳＴ−ＩＰ、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２の複合体および上記のタン
パク質の活性を調整する分子が、同定される。それは、以下：１つ以上の候補分
子を、上記タンパク質の存在下でＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と接触させる工程
；ならびにＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と上記タンパク質との間で形成される複
合体の量を測定する工程によってであり、ここで、候補分子の非存在下で形成さ
れる量と比較して形成される複合体の量が増加または減少することは、それらの
分子がＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２もしくは上記タンパク質、またはＬＹＳＴ
もしくはＬＹＳＴ−２と上記タンパク質との複合体の活性を調整することを示す
。好ましい実施態様において、モジュレーターは、候補分子を、ＬＹＳＴまたは
ＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰの両方をネイティブＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ
−２プロモーターあるいはネイティブＬＹＳＴ−ＩＰプロモーターでないプロモ
ーターから発現するトランスジェニック非ヒト動物に投与する工程によって同定
され、ここでより好ましくは、この候補分子は、トランスジェニック非ヒト動物
において組換えによってもまた発現される。あるいは、このようなモジュレータ
ーを同定する方法は、好ましくは、精製ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２、精製ＬＹ
ＳＴ−ＩＰ、および精製候補分子を用いて、インビトロで実行され得る。
【０２９２】 前述の方法を実行するために使用され得る方法は、当該分野で周知である。ス
クリーニングされる薬剤は、限定された数の特定の化合物の混合物として、ある
いは化合物ライブラリー、ペプチドライブラリーなどとして提供され得る。スク
リーニングされる薬剤はまた、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を調整し得
るか、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬＩＰ活性を調整し得る、全て
の形態の抗血清、アンチセンス核酸なども含み得る。
【０２９３】 例示として、種々のライブラリー（例えば、ランダムまたはコンビナトリアル
な、ペプチドまたは非ペプチドライブラリー）が、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
合体に、あるいは個々のＬＹＳＴ−２または新規なＬＩＰタンパク質に、特異的
に結合する分子についてスクリーニングされ得る。使用され得る多くのライブラ
リーが当該分野で公知であり、例えば、化学的に合成されたライブラリー、組換
えライブラリー（例えば、ファージディスプレイライブラリー）、ならびにイン
ビトロ翻訳に基づくライブラリーである。
【０２９４】 化学的に合成されたライブラリーの例は以下に記載される：Ｆｏｄｏｒら、１
９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７〜７７３；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、１９
９１、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８４〜８６；Ｌａｍら、１９９１、Ｎａｔｕｒｅ
３５４：８２〜８４；Ｍｅｄｙｎｓｋｉ、１９９４、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ １２：７０９〜７１０；Ｇａｌｌｏｐら、１９９４、Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉ
ｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７（９）；１２３３〜１２５１；Ｏｈｌｍｅｙ
ｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１
０９２２〜１０９２６；Ｅｒｂら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１１４２２〜１１４２６；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、１９９
２、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２；Ｊａｙａｗｉｃｋｒｅｍｅら
、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１６１４
〜１６１８；Ｓａｌｍｏｎら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ９０：１１７０８〜１１７１２、ならびにＢｒｅｎｎｅｒおよびＬ
ｅｒｎｅｒ、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９
：５３８１〜５３８３。ファージディスプレイライブラリーの例は以下に記載さ
れる：ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ １９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８
６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎら、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４
０６；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７１
１〜７１８；Ｌｅｎｓｔｒａ、１９９２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５
２：１４９〜１５７；ならびにＫａｙら、１９９３、Ｇｅｎｅ １２８：５９〜
６５。インビトロ翻訳に基づくライブラリーとしては、以下が挙げられるが、こ
れらに限定されない：国際特許公開ＷＯ ９１／０５０５８；およびＭａｔｔｈ
ｅａｋｉｓら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９
１：９０２２〜９０２６に記載されるインビトロ翻訳に基づくライブラリー。非
ペプチドライブラリーの例示としては、ベンゾジアゼピンライブラリー（例えば
、Ｂｕｎｉｎら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
９１：４７０８〜４７１２を参照のこと）が利用に適合され得る。ペプトイドラ
イブラリー（Ｓｉｍｏｎら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８９：９３６７〜９３７１）もまた使用され得る。使用され得るライ
ブラリーの別の例（ペプチド中のアミド官能基がぺルメチル化（ｐｅｒｍｅｔｈ
ｙｌａｔｅ）されて化学的に変換されたコンビナトリアルライブラリーが生成さ
れる）が、Ｏｓｔｒｅｓｈら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ９１：１１１３８〜１１１４２に記載される。
【０２９５】 これらのライブラリーをスクリーニングすることは、周知の種々の方法のいず
れかによって達成され得る。例えば、ペプチドライブラリーのスクリーニングを
開示する以下の参考文献を参照のこと：Ｐａｒｍｌｅｙら、１９８９、Ａｄｖ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５１：２１５〜２１８；Ｓｃｏｔｔら、１９９０
、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０；Ｆｏｗｌｋｅｓら、１９９２、Ｂ
ｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４２２〜４２７；Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇら、１
９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５３９３〜５
３９７；Ｙｕら、１９９４、Ｃｅｌｌ ７６：９３３〜９４５；Ｓｔａｕｄｔら
、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：５７７〜５８０；Ｂｏｃｋら、１９９２
、Ｎａｔｕｒｅ ３５５：５６４〜５６６；Ｔｕｅｒｋら、１９９２、Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６９８８〜６９９２；Ｅｌｌｉ
ｎｇｔｏｎら、１９９２、Ｎａｔｕｒｅ ３５５：８５０〜８５２；米国特許第
５，０９６，８１５号；米国特許第５，２２３，４０９号；米国特許第５，１９
８，３４６号；ならびにＲｅｂａｒら、１９９３、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３；６
７１〜６７３。
【０２９６】 特定の実施態様において、スクリーニングは、それらのライブラリーのメンバ
ーを、固相固定化された、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体と、あるいはＬＹＳ
Ｔ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩ
Ｐ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、またはＬＩＰ１０タンパク質（あるいは、コードす
る核酸分子または誘導体）と接触させること、ならびにそのタンパク質（または
核酸または誘導体）に結合するそれらのライブラリーのメンバーを収集すること
によって、実行され得る。このようなスクリーニング方法（「パニング」技術と
名付けられている）の例が、ＰａｒｍｌｅｙおよびＳｍｉｔｈ、１９８８、Ｇｅ
ｎｅ ７３：３０５〜３１８；Ｆｏｗｌｋｅｓら、１９９２、ＢｉｏＴｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ １３：４２２〜４２７；国際特許公開第ＷＯ ９４／１８３１８号
；ならびに本明細書中上記に引用された参考文献中に、例示として記載されてい
る。
【０２９７】 特定の実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２あるいはＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐのフラグメントおよび／またはアナログ（特にペプチド模倣物）は、ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成の競合的インヒビターまたは非競合的インヒビター
としての活性についてスクリーニングされ、それによってＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体活性を阻害する。好ましい実施態様において、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−
ＩＰ複合体、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規のＬＩＰタンパク質へ結合
する分子は、以下に記載され、かつ以下の実施例において例示される改変酵母ツ
ーハイブリットシステムを用いることによってスクリーニングされ得る。
【０２９８】 １つの実施態様において、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体活性を調節する（
すなわち、阻害するか、アンタゴナイズするか、またはアゴナイズする）薬剤は
、結合阻害アッセイの用いるためにスクリーニングされ得、ここで薬剤は、水性
条件下、またはＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成が、試験されるべき薬剤
の非存在下で生じる生理学的な結合条件下でＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の
形成を阻害するそれらの能力についてスクリーニングされる。ＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体形成に干渉する薬剤は、複合体形成のアンタゴニストとして同定
される。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を排除する薬剤は、複合体形成の
インヒビターとして同定される。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成を増強
する薬剤は、複合体形成のアゴニストとして同定される。
【０２９９】 スクリーニングの方法は、放射性リガンド（例えば、125Ｉまたは3Ｈ）、磁性
リガンド（例えば、フォトビオチンアセテートに共有的に付着された常磁性ビー
ズ）、蛍光リガンド（例えば、フルオレセインまたはローダミン）、あるいは酵
素リガンド（例えば、ルシフェラーゼまたはβガラクトシダーゼ）を用いて複合
体タンパク質を標識することに関与し得る。次いで、溶液中で結合する反応物は
、以下を含むがこれらに制限されない当該分野で公知の多くの技術の１つによっ
て単離され得る：非標識結合パートナー（または標識された部分に用いた識別可
能なマーカーを用いて標識された結合パートナー）に対する抗血清を用いる標識
された部分の共免疫沈降（ｃｏ−ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）、
免疫アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およ
び密度勾配遠心分離。好ましい実施態様において、１つの結合パートナーは、市
販のフィルターによって保持されない小フラグメントまたはペプチド模倣物であ
る。結合の際に、次いで標識された種は、フィルターを通過し得ず、これによっ
て複合体形成の単純なアッセイを提供する。
【０３００】 当該分野で一般に知られている方法を用いて、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合
体の少なくとも１つのメンバーを標識する。適切な標識化としては、以下が挙げ
られるが、これらに限定されない：放射性標識化アミノ酸（例えば、3Ｈ−ロイ シンまたは35Ｓ−メチオニン）の取り込みによる放射性標識化、クロラミンＴ法
、ボルトン−ハンター（Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ）試薬などを用いる125Ｉ または131Ｉでの翻訳後のヨウ素化による放射性標識化、キナーゼおよび無機放 射性標識化亜リン酸を用いる32Ｐでの標識化、フォトビオチンアセテートおよび
太陽灯曝露などを用いるビオチン標識化。ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体のメ
ンバーの１つが、固定化される場合（例えば、以下に記載されるように）、遊離
種が標識される。相互作用種のいずれもが、固定化されない場合、各々は、区別
可能なマーカーを用いて標識され得、その結果両方の部分の単離は、続いてより
正確な定量を提供し得、そして異種複合体の形成と同種複合体の形成とを区別し
得る。１つの改変化相互作用体へ結合するアクセサリータンパク質を利用して、
検出の感度を改善する方法、複合体の安定性を増大をする方法などが、提供され
る。
【０３０１】 代表的な結合条件とは、例えば、限定するつもりはないが、１０〜２５０ｍＭ
ＮａＣｌ、５〜５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ５〜８）、および０．５％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００または相互作用の特異性を改善する他の界面活性剤の
塩水溶液中である。金属キレート剤および／または二価カチオンは、結合を改良
するためおよび／またはタンパク質分解を減少させるために添加され得る。反応
温度は、４、１０、１５、２２、２５、３７、または４２℃の周辺の範囲にあり
得、そしてインキュベーション時間は、代表的には少なくとも１５秒であるが、
より長い時間が、結合平衡を生じさせるのに好ましい。特定のＬＹＳＴ：ＬＹＳ
Ｔ−ＩＰ複合体を、慣用的なタンパク質結合アッセイを用いてアッセイして、再
現性のある結合のために最適な結合条件を決定し得る。
【０３０２】 複合体形成の物理的パラメーターは、使用した標識に特異的なアッセイ方法（
例えば、放射性の検出については液体シンチレーション分光法、酵素標識化につ
いては酵素活性の測定など）を用いる複合体形成の定量によって分析され得る。
次いで、この反応の結果は、スキャッチャード分析、ヒル（Ｈｉｌｌ）分析、お
よび当該分野において一般的に知られている他の方法を利用して分析される（例
えば、ＰＲＯＴＥＩＮＳ，ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＰＲＩＮＣＩＰＬＥ，第２版（１９９３）Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒ
ｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【０３０３】 結合アッセイに対する第２の一般的なアプローチにおいて、結合種の１つは、
フィルター上、マイクロタイタープレートウェル中、試験管中、クロマトグラフ
ィーマトリックスに対してなどに、共有的かまたは非共有的かのいずれかで固定
化される。タンパク質は、当該分野で周知の任意の方法（例えば、限定はしない
が、ＫａｄｏｎａｇａおよびＴｊｉａｎ（１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：５８８９−５８９３，１９８６）の方法、すなわ
ち、ＣＮＢｒ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂのような臭化シアン誘導体化基質への
結合を用いて共有的に固定化され得る。必要とされる場合、スペーサーの使用は
、基質による立体傷害を減少し得る。基質へのタンパク質の非共有的な付着は、
荷電表面へのタンパク質の付着、特異的な抗体の結合、第３の関連のない相互作
用タンパク質への結合を含むが、これらに限定されない。
【０３０４】 １つの実施態様において、固定化ＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２を用いて、ＬＹ
ＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体形成を調整するその能力について試験されるべき化
合物の存在下および非存在下で、放射性標識化ＬＹＳＴ−ＩＰとの結合について
アッセイする。結合パートナーは、水溶性条件下か、または生理学的条件（例え
ば、本来の相互作用が検出される条件）下で結合され得る。反対に、別の実施態
様において、ＬＹＳＴ−ＩＰは、結合条件下で、標識化ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ
−２タンパク質あるいはそれらの誘導体と固定化されかつ接触される。
【０３０５】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（またはそれらの誘導体）の１つのメンバー
と、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体（任意の手段（例えば、前記のような手段
）によって標識される）の他のメンバーとの結合に競合するための薬剤（細胞抽
出物またはライブラリープールを含む）のアッセイは、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−Ｉ
Ｐ複合体形成の競合相手についてスクリーニングするために提供される。
【０３０６】 特定の実施態様において、他のタンパク質成分に対する試薬の非特異的結合か
、またはプラスチック、固定化マトリックスなどに対する試薬の吸収性の損失を
阻害するためのブロッキング剤は、アッセイ混合物に含まれる。ブロッキング剤
としては、以下が挙げらるが、これらに限定されない：ウシ血清アルブミン、β
カゼイン、脱脂粉乳、デンハルト（Ｄｅｎｈａｒｄｔ）試薬、フィコール（Ｆｉ
ｃｏｌｌ）、ポリビニルピロリジン、非イオン性界面活性剤（ＮＰ４０、Ｔｒｉ
ｔｏｎ Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０など）、イオン性界面活
性剤（例えば、ＳＤＳ、ＬＤＳなど）、ポリエチレングリコールなど。適切なブ
ロッキング剤濃縮物は、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の形成を可能にするた
めに利用される。
【０３０７】 結合が行われた後、非結合である標識化タンパク質は、上清と共に取り除かれ
、そして任意の結合を用いて固定化されたタンパク質である標識化タンパク質は
、広範に洗浄される。次いで、結合した標識の量は、標識を検出するために当該
分野で公知の標準的方法を用いて定量される。
【０３０８】 （タンパク質間相互作用についてのアッセイ） 本発明の１つの局面は、（ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２ペプチドへ結合するた
めの）ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２相互作用タンパク質のフラグメント、誘導体
およびアナログを、アッセイならびにスクリーニングする方法を提供する。ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２と相互作用するＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体、アナログおよ
びフラグメントは、酵母ツーハイブリットアッセイシステムの手段によって同定
され得る（ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２
４５−２４６ならびに米国特許第５，２８３，１７３号）。この相互作用は、酵
母においてスクリーニングされるので、このシステムにおいて検出されたタンパ
ク質分子間相互作用は、哺乳動物細胞における条件を模倣する生理学的条件下で
生じる（Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ，Ｓｃｉ，Ｕ
ＳＡ ８８：９５７８−９５８１）。
【０３０９】 改良された酵母ツーハイブリットシステムによる相互作用タンパク質の同定は
、レポーター遺伝子の発現の検出に基づき、その転写物は、二つのタンパク質（
各々が２分の１の転写レギュレーターへ融合される）の相互作用による転写レギ
ュレーターの再構築に依存する。「ベイト（ｂａｉｔ）」タンパク質（ＬＹＳＴ
またはＬＹＳＴ−２または誘導体またはアナログ）および「プレイ（ｐｒｅｙ）
」タンパク質（ベイトと相互作用する能力について試験されるタンパク質）は、
それぞれＤＮＡ結合ドメインに対する融合タンパク質または転写調節ドメインに
対する融合タンパク質としてか、あるいはその逆として発現される。種々の特定
の実施態様において、プレイは、約２５から約１００，０００、約１００から約
１００，０００、約５０，０００から約１００，０００、あるいは約１００，０
００から約５００，０００の範囲の複雑性を有する。例えば、プレイ集団は、Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰの変異体（例えば、部位特異的変異誘発または核酸配列における変
異を作製する別の方法によって生成される）をコードする１つ以上の核酸であり
得る。好ましくは、プレイ集団は、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡもしくはゲノムＤ
ＮＡまたは合成的に生成されるＤＮＡ）によりコードされるタンパク質である。
例えば、この集団は、哺乳動物ＲＮＡ由来のｃＤＮＡの集団の特徴付けされてい
ないサンプル由来のｃＤＮＡ配列を含むキメラ遺伝子から発現され得る。
【０３１０】 特定の実施態様において、無作為のペプチドを発現する組換え生物学的ライブ
ラリーは、プレイ核酸の供給源として用いられ得る。
【０３１１】 別の実施態様において、本発明は、本明細書中で同定されるタンパク相互作用
体のインヒビターまたはエンハンサーについてのスクリーニング法を提供する。
手短に言えば、タンパク質間相互作用アッセイは、それが１つ以上の候補分子の
存在下でなされることを除いては、本明細書中に記載されるように実行され得る
。１つ以上の候補分子が存在しない場合に、その存在に対するレポーター遺伝子
活性の増加または減少は、候補分子が相互作用対に影響を有することを示唆する
。好ましい方法において、相互作用の阻害は、例えば、相互作用が、ＵＲＡ３遺
伝子を活性化して、化学的５−フルオロオロット酸を含む培地中で酵母を死に至
らす場合について選択される（すなわち、相互作用の阻害が、生存するために細
胞に必要である）（Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，１９８３，Ｍｅｔｈ，Ｅｎｚｙｍｏｌ
，１０１：１６７−１８０）。このような相互作用のインヒビターの同定はまた
、例えば、この方法に限定しないが、前記のような競合的阻害アッセイを用いる
ことで達成され得る。
【０３１２】 一般に、ベイト集団およびプレイ集団のタンパク質は、予め選択された配列に
近接する各々のタンパク質を含む、融合（キメラ）タンパク質として（好ましく
は、キメラコード配列の組換え発現によって）提供される。１つの集団について
、予め選択された配列は、ＤＮＡ結合ドメインである。ＤＮＡ結合ドメインは、
それがプロモーター中のＤＮＡ配列を特異的に認識する限り、任意のＤＮＡ結合
ドメインであり得る。例えば、ＤＮＡ結合ドメインは、転写活性因子または転写
インヒビターのドメインであり得る。他の集団について、予め選択された配列は
、転写因子の活性ドメインまたはインヒビタードメインである。調節ドメイン単
独（タンパク質配列に対する融合物としてではなく）およびＤＮＡ結合ドメイン
単独（タンパク質配列に対する融合物としてではなく）は、好ましくは、（アッ
セイにおける擬陽性を避けるために）検出可能に相互作用しない。このアッセイ
システムは、転写活性因子（または転写活性インヒビター）のＤＮＡ結合ドメイ
ンについての結合部位を含むプロモーターへ作動可能に連結したレポーター遺伝
子をさらに含む。したがって、本発明の方法の存在下で、プレイ融合タンパク質
へのＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２融合タンパク質の結合は、レポーター遺伝子の
発現を活性化（または阻害）する、転写活性因子（または転写活性インヒビター
）の再構築を導く。レポーター遺伝子の転写の活性化（または阻害）は、細胞内
（例えば、原核生物細胞または真核生物細胞）、好ましくは細胞培養物において
生じる。
【０３１３】 レポーター遺伝子核酸配列へ作動可能に連結されるプロモーターは、ネイティ
ブのまたは非ネイティブのプロモーターのヌクレオチド配列であり得、そして融
合タンパク質のＤＮＡ結合ドメイン部分によって認識されるＤＮＡ結合部位は、
（プロモーターが、通常このような結合部位を含む場合に）プロモーターに対し
てネイティブであり得るか、またはプロモーターに対して非ネイティブであり得
る。従って、例えば、適切なＤＮＡ結合部位の１つ以上のタンデムコピー（例え
ば、４または５コピー）は、所望のプロモーター中のＴＡＴＡボックスの上流（
例えば、約−１００位から約−４００位の領域中）に導入され得る。好ましい局
面において、１７塩基対のＵＡＳ（ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合部位）の４または５の
タンデムコピーは、所望のプロモーター中のＴＡＴＡボックスの上流に導入され
る。このプロモーターは、選択可能なマーカーまたは検出可能なマーカーに関す
る所望のコード配列の上流にある。好ましい実施態様において、ＧＡＬ１−１０
プロモーターは、所望のヌクレオチド配列へ作動可能に融合される：ＧＡＬ１−
１０プロモーターは、すでにＧＡＬ４に関する５つの結合部位を含む。
【０３１４】 あるいは、所望の遺伝子の転写活性結合部位は、欠失され得、そしてＧＡＬ４
結合部位で置換され得る（Ｂａｒｔｅｌら、１９９３、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ １４：９２０−９２４，Ｃｈａｓｍａｎら、１９８９、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ
．Ｂｉｏｌ．９：４７４６−４７４９）。レポーター遺伝子は、好ましくは、検
出可能なマーカーまたは選択可能なマーカーをコードする配列を含み、この配列
の発現は、転写活性因子によって調節されて、その結果このマーカーは、特定の
相互作用の存在に対する応答において、細胞中で作動されるか、または止められ
るかのいずれかである。好ましくは、このアッセイは、転写活性因子のバックグ
ラウンドレベルの非存在下（例えば、変異体であるか、または転写活性因子を欠
く他の物である細胞において）で実行される。１つの実施態様において、１つ以
上のレポーター遺伝子を用いて、転写活性化（例えば、検出可能なマーカーをコ
ードする１つのレポーター遺伝子または異なる選択マーカーをコードする１つ以
上のレポーター遺伝子）を検出する。検出可能なマーカーは、検出可能なシグナ
ルを与え得る任意の分子（例えば、蛍光タンパク質、あるいは容易に可視化され
得るタンパク質または特定の抗体によって認識されるタンパク質）であり得る。
選択可能なマーカーは、選択可能なマーカーを発現しない細胞の増殖を支持しな
い条件下で増殖する能力を与える任意のタンパク質分子であり得、例えば、選択
マーカーは、必須の栄養素を提供する酵素であり、そして相互作用アッセイを生
じる細胞は酵素を欠き、そして選択培地はこのような栄養素を欠如する。レポー
ター遺伝子は、ＤＮＡ結合タンパク質の結合部位を天然に含むネイティブのプロ
モーターの制御下か、あるいは異種プロモーターまたは合成プロモーターの制御
下のいずれかに置かれ得る。
【０３１５】 このアッセイにおいて使用される活性化ドメインおよびＤＮＡ結合ドメインは
、広範な種々の転写活性因子が、分離可能な結合活性化ドメインおよび転写活性
ドメインを有する限り、これらの転写活性因子タンパク質に由来し得る。例えば
、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＧＡＬ４タンパク質（Ｍａら、１９８７、Ｃｅｌ
ｌ ４８：８４７−８５３）、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＧＣＮ４タンパク質
（ＨｏｐｅおよびＳｔｒｕｈｌ，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８８５−８９４）
、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＡＲＤ１タンパク質（Ｔｈｕｋｒａｌら、１９８
９，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２３６０−２３６９）、およびヒトエス
トロゲンレセプター（Ｋｕｍａｒら、１９８７，Ｃｅｌｌ ５１：９４１−９５
１）は、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインを有する。融合タ
ンパク質に用いられるＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、同一の転写
活性因子に由来する必要がない。特定の実施態様において、ＧＡＬ４またはＬｅ
ｘＡ ＤＮＡ結合ドメインが用いられる。別の実施態様において、ＧＡＬ４また
は単純ヘルペスウイルスＶＰ１６（Ｔｒｉｅｚｅｎｂｅｒｇら、１９８８，Ｇｅ
ｎｅｓ Ｄｅｖ．２：７３０−７４２）活性化ドメインが用いられる。特定の実
施態様において、ＧＡＬ４のアミノ酸１〜１４７（Ｍａら、１９８７，Ｃｅｌｌ
４８：８４７−８５３；Ｐｔａｓｈｎｅら、１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４６
：３２９−３３１）は、ＤＮＡ結合ドメインであり、そしてＶＰ１６のアミノ酸
４１１〜４５５（Ｔｒｉｅｚｅｎｂｅｒｇら、１９８８，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．
２：７３０−７４２；Ｃｒｅｓｓら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：８７
−９０）は、活性化ドメインを含む。
【０３１６】 好ましい実施態様において、酵母転写因子ＧＡＬ４は、タンパク質間相互作用
によって再構築され、そして宿主株は、ＧＡＬ４に関する変異体である。別の実
施態様において、ＤＮＡ結合ドメインは、Ａｃｅ１Ｎであり、および／または活
性化ドメインは、それぞれ、Ａｃｅ１、Ａｃｅ１タンパク質のＤＮＡ結合ドメイ
ンおよび活性化ドメインである。Ａｃｅ１は、二価の銅の存在下でＣＵＰ１オペ
ロンからの転写物を活性化する酵母タンパク質である。ＣＵＰ１は、銅をキレー
トするメタロチオネインをコードし、そしてＣＵＰ１タンパク質の発現は、銅の
存在下での増殖を可能にし、これはさもなければ宿主細胞に対して毒性である。
レポーター遺伝子はまた、再構築されたＡｃｅ１Ｎ転写活性因子の結合の際に酵
素βガラクトシダーゼ（慣用的な色素産生アッセイによって検出される）を発現
するＣＵＰ１−ｌａｃＺ融合物であり得る（Ｃｈａｕｄｈｕｒｉら、１９９５，
ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３５７：２２１−２２６を参照のこと）。別の特定
の実施態様において、ヒトエストロゲンレセプターのＤＮＡ結合ドメインが、用
いられ、このドメインは１つまたは３つのエストロゲン応答エレメントによって
駆動されるレポーター遺伝子を有する（Ｌｅ Ｄｏｕａｒｉｎら、１９９５，Ｎ
ｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２３：８７６−８７８）。
【０３１７】 ＤＮＡ結合ドメインおよび転写活性因子／インヒビタードメインはそれぞれ、
好ましくは、融合タンパク質が発現されるべきである細胞において機能的な、核
局在化シグナル（Ｙｌｉｋｏｍｉら、１９９２，ＥＭＢＯ Ｊ．１１：３６８１
−３６９４，ＤｉｎｇｗａｌｌおよびＬａｓｋｅｙ，１９９１，ＴＩＢＳ １６
：４７９−４８１を参照のこと）を有する。
【０３１８】 コードされたタンパク質の容易な単離のために、融合構築物は、アフィニティ
ー精製のために、グルタチオンＳトランスフェラーゼまたはマルトース結合タン
パク質あるいは利用可能な抗体のエピトープのような、アフィニティータグをコ
ードする配列をさらに含み得る（例えば、それぞれ、グルタチオン、マルトース
、またはエピトープに特異的な特定の抗体へ結合する）（Ａｌｌｅｎら、１９９
５、ＴＩＢＳ ２０：５１１−５１６）。別の実施態様において、融合構築物は
、細菌細胞中の融合タンパク質の組換え産生のための細菌プロモーター配列をさ
らに含む。
【０３１９】 相互作用アッセイが生じる宿主細胞は、哺乳動物（例えば、サル、マウス、ラ
ット、ヒト、ウシ）細胞、ニワトリ細胞、細菌細胞、または昆虫細胞を含むが、
これらに限定されない、レポーター遺伝子の転写が生じそして検出され得る任意
の細胞（原核生物または真核生物）であり得、そして好ましくは、酵母細胞であ
る。結合ドメイン融合タンパク質、転写活性化ドメイン融合タンパク質、および
レポーター遺伝子産物をコードしそして発現し得る発現構築物は、発現構築物を
含む細胞の接合によってか、または細胞融合、形質転換、エレクトロポレーショ
ン、マイクロインジェクションなどによって、宿主細胞中へ提供される。アッセ
イが哺乳動物細胞（例えば、ハムスター細胞）において行われる特定の実施態様
において、ＤＮＡ結合ドメインは、ＧＡＬ４ ＤＮＡ結合ドメインであり、活性
化ドメインは、単純ヘルペスウイルスＶＰ１６の転写活性化ドメインであり、そ
してレポーター遺伝子は、いくつかのＧＡＬ４ ＤＮＡ結合部位によって駆動さ
れるアデノウイルスＥ１Ｂ遺伝子由来の最小のプロモーターエレメントへ作動可
能に連結される所望のコード配列を含む（Ｆｅａｒｏｎら、１９９２，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７９５８−７９６２を参照のこ
と）。用いられる宿主細胞は、ＤＮＡ結合ドメイン融合集団によって認識される
のと同一のＤＮＡ部位へ結合する内在性の転写因子を発現させるべきではない。
また、好ましくは、宿主細胞は、変異体であるか、またはそうでなければ、アッ
セイにおいて用いられるレポーター遺伝子の内在性の機能的な形態を欠失してい
る。
【０３２０】 酵母における２つの融合タンパク質集団の発現のための種々のベクターおよび
宿主株は、公知であり、そして用いられ得る（例えば、米国特許第５，１４６８
，６１４号；Ｂａｒｔｅｌら、１９９３，ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＩＮＴＥＲＡＣＴ
ＩＯＮＳ ＩＮ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ， Ｈａｒｔｌｅｙ，（編），Ｐｒａ
ｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ Ｓｅｒｉｅｓ ｘｖｉｉｉ，ＩＲＬ Ｐｒｅ
ｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，ＮＹ，１５３−１７９頁；ＦｉｅｌｄｓおよびＳｔｅｒｎｇｌａｎｚ，１
９９４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １０：２８６−２９２を参照
のこと）。限定はしないが例示の目的で、用いられ得る酵母株またはそれから作
製された誘導株は、以下の実施例に記載されるように、Ｎ１０５、Ｎ１０６、Ｎ
１０５１、Ｎ１０６１、およびＹＵＬＨである。本発明のアッセイに用いられ得
る他の例示的な株はまた、以下を含むが、これらに限定されない： Ｙ１９０：ＭＡＴａ、ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ｌｙｓ２−８０１
、ａｄｅ２−１０１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ４α、
ｇａｌ８０α、ｃｙｈr２、ＬＹＳ２：：ＧＡＬUAS−ＨＩＳ３TATAＨＩＳ３、Ｕ
ＲＡ３：：ＧＡＬｌUAS−ＧＡＬｌTATA−ｌａｃＺ；Ｈａｒｐｅｒら、１９９３ ，Ｃｅｌｌ ７５：８０５−８１６を参照のこと，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ，ＣＡから入手可能、Ｙ１９０は、ＧＡＬ４結合部位によって駆動さ
れるＨＩＳ３およびｌａｃＺレポーター遺伝子を含む。
【０３２１】 ＣＧ−１９４５：ＭＡＴａ，ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ｌｙｓ２−
８０１、ａｄｅ２−１０１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ
４−５４２、ｇａｌ８０−５３８、ｃｙｈr２、ＬＹＳ２：：ＧＡＬｌUAS−ＨＩ
Ｓ３TATAＨＩＳ３、ＵＲＡ３：：ＧＡＬｌUAS1−mers(x3)−ＹＣｌTATA−ｌａｃ
Ｚ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡから入手可能、ＣＧ−１９４
５は、ＧＡＬ４結合部位によって駆動されるＨＩＳ３およびｌａｃＺレポーター
遺伝子を含む。
【０３２２】 Ｙ１８７：ＭＡＴ−α，ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ａｄｅ２−１０
１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ４α、ｇａｌ８０α、Ｕ
ＲＡ３：：ＧＡＬｌUAS−ＧＡＬｌTATA−ｌａｃＺ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌ ｏ Ａｌｔｏ，ＣＡから入手可能、Ｙ１８７は、ＧＡＬ４結合部位によって駆動
されるｌａｃＺレポーター遺伝子を含む。
【０３２３】 ＳＦＹ５２６：ＭＡＴａ，ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ｌｙｓ２−８
０１、ａｄｅ２−１０１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ４
−５４２、ｇａｌ８０−５３８、ｃａｎr、ＵＲＡ３：：ＧＡＬｌ−ｌａｃＺ、 Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡから入手可能、ＳＹＦ５２６は、
ＧＡＬ４結合部位によって駆動されるＨＩＳ３およびｌａｃＺレポーター遺伝子
を含む。
【０３２４】 ＨＦ７ｃ：ＭＡＴａ，ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ｌｙｓ２−８０１
、ａｄｅ２−１０１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ４−５
４２、ｇａｌ８０−５３８、ＬＹＳ２：：ＧＡＬｌ−ＨＩＳ３、ＵＲＡ３：：Ｇ
ＡＬｌUAS1−MERS(x3)−ＣＹＣｌ−ｌａｃＺ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａ
ｌｔｏ，ＣＡから入手可能、ＨＦ７ｃは、ＧＡＬ４結合部位によって駆動される
ＨＩＳ３およびｌａｃＺレポーター遺伝子を含む。
【０３２５】 ＹＲＧ−２：ＭＡＴａ，ｕｒａ３−５２、ｈｉｓ３−２００、ｌｙｓ２−８０
１、ａｄｅ２−１０１、ｔｒｐｌ−９０１、ｌｅｕ２−３，１１２、ｇａｌ４−
５４２、ｇａｌ８０−５３８、ＬＹＳ２：：ＧＡＬｌUAS−ＧＡＬ１TATAＨＩＳ ３、ＵＲＡ３：：ＧＡＬｌUAS1−mers(x3)−ＣＹＣｌ−ｌａｃＺ、Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡから入手可能、ＹＲＧ−２は、ＧＡＬ４結合
部位によって駆動されるＨＩＳ３およびｌａｃＺレポーター遺伝子を含む。
【０３２６】 当該分野で一般的に公知であり、かつ入手可能な多くの他の株が、用いられ得
る。
【０３２７】 内在性レポーター遺伝子活性を未だ欠失していない場合、レポーター遺伝子に
おける細胞変異体を、公知の方法によって選択し得るか、または細胞を、レポー
ター遺伝子を導入する前に公知の遺伝子破壊法によって、標的レポーター遺伝子
において変異させ得る（Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，１９８３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ
ｏｌ．１０１：２０２−２１１）。
【０３２８】 特定の実施態様において、異なる融合タンパク質集団をコードするプラスミド
は、同時形質転換によって、１つ以上のレポーター遺伝子を含む単一の宿主細胞
（例えば、単相酵母細胞）へと同時に導入されて、タンパク質間相互作用につい
てアッセイを行い得る。あるいは、好ましくは、２つの融合タンパク質集団は、
接合（例えば、酵母細胞に関して）によってか、または細胞融合（例えば、哺乳
動物細胞について）によってかのいずれかで単一の細胞へと導入される。接合型
アッセイにおいて、結合ドメイン融合発現構築物（好ましくは、プラスミド）お
よび活性化（または、インヒビター）ドメイン融合発現構築物（好ましくは、プ
ラスミド）を用いて形質転換された反対の接合型の単相酵母細胞の結合体はそれ
ぞれ、同一の複相の細胞へ両方の構築物を送達する。酵母株の接合型は、ＨＯ遺
伝子を用いる形質転換によって操作され得る（ＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚおよびＪｅ
ｎｓｅｎ，１９９１，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９４：１３２−１４６）。
【０３２９】 好ましい実施態様において、酵母相互作用接合アッセイは、２つの異なる型の
宿主細胞、酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの株型ａお
よびαを使用して実施される。好ましくは、宿主細胞は少なくとも２つのレポー
ター遺伝子を含み、それらの各々は、ＤＮＡ結合ドメインについての１以上の結
合部位（例えば、転写活性化因子の）を有する。活性化因子ドメインおよびＤＮ
Ａ結合ドメインは、２つのそれぞれのタンパク質集団から形成されたキメラタン
パク質の各々の部分である。宿主細胞の１つの株（例えば、ａ株）は、転写活性
化因子（例えば、ＧＡＬ４）のＤＮＡ結合ドメインとヌクレオチド配列のライブ
ラリーとの融合体を含む。この宿主細胞のセットにおいて発現されるハイブリッ
ドタンパク質は、レポーター遺伝子構築物中のプロモーターまたはエンハンサー
領域におけるＤＮＡ結合部位を認識し得る。酵母宿主細胞の第二のセット（例え
ば、α株）は、転写活性化因子の活性化ドメインに融合された、ＤＮＡ配列のラ
イブラリーの融合体をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３３０】 好ましい実施態様において、融合タンパク質構築物は、プラスミドのセットと
して宿主細胞内に導入される。これらのプラスミドは、好ましくは、宿主酵母細
胞において自律的複製が可能であり、そして好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて
もまた増殖される。プラスミドは、ＤＮＡ結合ドメイン融合遺伝子または活性化
ドメイン融合遺伝子の転写を指向するプロモーター、および転写終結シグナルを
含む。好ましくは、プラスミドはまた、選択マーカー遺伝子を含み、これはプラ
スミドを含む細胞の選択を可能にする。プラスミドは、単一コピーまたは複数の
コピーであり得る。酵母動原体を有する単一コピーの酵母プラスミドもまた、活
性化ドメイン融合体およびＤＮＡ結合ドメイン融合体の発現に使用され得る（Ｅ
ｌｌｅｄｇｅら、１９８８、Ｇｅｎｅ ７０：３０３−３１２）。
【０３３１】 別の実施態様において、融合構築物は、相同組換えを介して酵母染色体内に直
接的に導入される。これらの目的のための相同組換えは、酵母の栄養増殖に必須
でない酵母配列（例えば、ＭＥＲ２、ＭＥＲ１、ＺＩＰＩ、ＲＥＣ１０２、また
はＭＥＩ４遺伝子）を介して媒介される。
【０３３２】 バクテリオファージベクターもまた、ＤＮＡ結合ドメインおよび／または活性
化ドメイン融合タンパク質を発現するために使用され得る。ライブラリーは一般
に、プラスミドベクターからよりもバクテリオファージベクターから、より速く
かつより容易に調製され得る。
【０３３３】 特定の実施態様において、本発明は、１以上のタンパク質−タンパク質相互作
用を検出する方法を提供する。この方法は、以下の工程を包含する；（ａ）ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２あるいはそれらの誘導体またはアナログを、第一の接合
型の酵母細胞であり、かつＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２配列とＤＮＡ結合ドメイ
ンとを含む第一の融合タンパク質を含む酵母細胞の第一の集団において、組換え
発現する工程であって、ここで、上記の酵母細胞の第一の集団は、上記ＤＮＡ結
合ドメインにより認識される１以上のＤＮＡ結合部位により駆動されるプロモー
ターに作動可能に連結された第一のヌクレオチド配列を含み、その結果、第二の
融合タンパク質（この第二の融合タンパク質は転写活性化因子ドメインを含む）
との上記第一の融合タンパク質の相互作用が、上記第一のヌクレオチド配列の転
写の増加を生じる、工程；（ｂ）上記の第一の集団において酵母細胞を排除する
ようにネガティブ選択する工程であって、ここで、上記の第一のヌクレオチド配
列の転写の増加が上記の第二の融合タンパク質の非存在下で生じている、工程；
（ｃ）上記の第一の接合型と異なる第二の接合型の酵母細胞の第二の集団におい
て、多量の上記の第二の融合タンパク質を組換え発現する工程であって、各第二
の融合タンパク質は、ＬＹＳＴ−ＩＰのフラグメント、誘導体またはアナログの
配列、および転写活性化因子の活性化ドメインを含み、ここで、転写活性化ドメ
インは、各上記の第二の融合タンパク質において同じである、工程；（ｄ）上記
の酵母細胞の第一の集団を上記の酵母細胞の第二の集団と接合し、二倍体酵母細
胞の第三の集団を形成する工程であって、ここで、上記の二倍体酵母細胞の第三
の集団は、上記のＤＮＡ結合ドメインにより認識されるＤＮＡ結合部位により駆
動されたプロモーターに作動可能に連結された第二のヌクレオチド配列を含み、
その結果、第二の融合タンパク質との上記第一の融合タンパク質の相互作用が、
上記第二のヌクレオチド配列の転写の増加を生じ、ここで、第一ヌクレオチド配
列および第二のヌクレオチド配列は、同じかまたは異なり得る、工程；および（
ｅ）上記の第一のヌクレオチド配列および／または第二のヌクレオチド配列の増
加した上記転写を検出し、それにより、第一の融合タンパク質と第二の融合タン
パク質との間の相互作用を検出する工程。
【０３３４】 好ましい実施態様において、ベイト（餌）ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２配列と
キメラ遺伝子のプレイ（捕獲）ライブラリーとが、固体培地上で２つの酵母株を
約６〜８時間接合することによって、合わせられる。やや好ましくない実施態様
においては、その接合は液体培地中で実施される。生じた二倍体は、両方の種の
キメラ遺伝子、すなわちＤＮＡ結合ドメイン融合体および活性化ドメイン融合体
を含む。
【０３３５】 好ましいレポーター遺伝子としては、ＧＡＬ−４ ＤＮＡ結合ドメイン認識エ
レメントに作動可能に連結されたＵＲＡ３、ＨＩＳ３および／またはｌａｃＺ遺
伝子（例えば、ＲｏｓｅおよびＢｏｔｓｔｅｉｎ、１９８３、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ
ｙｍｏｌ．１０１：１６７−１８０を参照のこと）が挙げられる。他のレポータ
ー遺伝子は、グリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（Ｃｕｂｉｔｔら、１９９５．
Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２０：４４８−４５５）、ルシフェラ
ーゼ、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＡＤＥ２、ＴＲＰ１、ＣＡＮ１、ＣＹＨ２、ＧＵＳ
、ＣＵＰ１またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）
についての機能的コード配列を含むが、これらに限定されない。ＬＥＵ２、ＬＹ
Ｓ２、ＡＤＥ２およびＴＲＰ１の発現は、特定の規定された培地中での増殖によ
り検出され；ＧＵＳおよびＣＡＴは、周知の酵素アッセイによりモニターし得；
そしてＣＡＮ１およびＣＹＨ２は、カナバニン（ｃａｎａｖａｎｉｎｅ）および
シクロヘキシミドの存在下での選択により検出される。ＧＦＰに関しては、その
タンパク質の自然蛍光が検出される。
【０３３６】 特定の実施態様においては、レポーター遺伝子の転写は、連結した複製アッセ
イにより検出される。例えば、Ｖａｓａｖａｄａら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０６８６−１０６９０に記載される
ように、ＳＶ４０ラージＴ抗原の発現は、ＧＡＬ４結合部位に応答性のＥ１Ｂプ
ロモーターの制御下にある。ＳＶ４０の複製起点を含むプラスミドの複製は、Ｇ
ＡＬ４タンパク質の再構築およびタンパク質−タンパク質相互作用を示す。ある
いは、ポリオーマウイルスレプリコンを使用し得る（Ｖａｓａｖａｄａら、１９
９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０６８６−１
０６９０） 別の実施態様において、タンパク質をコードするレポーター遺伝子の発現を、
イムノアッセイ（すなわち、このようなタンパク質に対する抗体の免疫特異的結
合を検出することによるものであり、抗体は標識され得るか、あるいは抗体を、
その抗体に対する標識化した結合パートナーとインキュベートして検出シグナル
を生じ得る）によって検出し得る。ＡｌａｍおよびＣｏｏｋ（１９９０、Ａｎａ
ｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８８：２４５−２５４）は、検出可能なマーカー遺伝子
の制限されない例を開示し、これは再構成された転写活性化因子に応答性の転写
調節領域に作動可能に連結され得、従ってレポーター遺伝子として使用され得る
。
【０３３７】 ＵＲＡ３またはＨＩＳ３のようなレポーター遺伝子の活性化は、それぞれウラ
シルまたはヒスチジンの非存在下での細胞の増殖を可能にし、それゆえ選択マー
カーとして機能する。従って、接合後、タンパク質−タンパク質相互作用を示す
細胞を、ウラシルまたはヒスチジンのような栄養成分を欠損した培地（それぞれ
、−ＵＲＡ（マイナスＵＲＡ）培地および−ＨＩＳ（マイナスＨＩＳ）培地とい
う）における増殖能力により選択する。−ＨＩＳの培地は、好ましくは、３−ア
ミノ−１，２，４−トリアゾール（３−ＡＴ）（これはＨＩＳ３遺伝子産物の競
合的インヒビターである）を含み、従って選択においてより高いレベルの転写を
必要とする（Ｄｕｒｆｅｅら、１９９３、Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．７：５５５−５
６９を参照のこと）。同様に、６−アザウラシル（これは、ＵＲＡ３遺伝子産物
のインヒビターである）が、−ＵＲＡ培地中に含まれ得る（Ｌｅ Ｄｏｕａｒｉ
ｎら、１９９５、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２３：８７６−８７８）。Ｕ
ＲＡ３遺伝子活性はまた、その遺伝子産物である、オロチジン−５１−モノリン
酸デカルボキシラーゼの活性を測定することにより、検出および／または測定さ
れ得る（Ｐｉｅｒｒａｔら、１９９２、Ｇｅｎｅ １１９：２３７−２４５、Ｗ
ｏｌｃｏｔｔら、１９６６、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２
２：５３２−５３４）。本発明の他の実施態様において、ＧＦＰまたはｌａｃＺ
のようなレポーター遺伝子の活性を、これらのレポーター遺伝子の活性化から生
じる検出シグナル（例えば、それぞれ、蛍光または色素生産）を測定することに
よりモニターする。例えば、ｌａｃＺの転写は、コードされる酵素である、β−
ガラクトシダーゼの色素生産性基質（例えば、Ｘ−ｇａｌ（５−ブロモ−４−ク
ロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド））の存在下でのインキュベーシ
ョンによりモニターされ得る。ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２配列産物とライブラ
リーの接合からこの様式により単離される全ての相互作用タンパク質のプールを
、「ＬＹＳＴ相互作用集団」と同定する。
【０３３８】 本発明の好ましい実施態様において、転写活性化因子ドメイン融合タンパク質
の非存在下でのＤＮＡ結合ドメイン融合タンパク質による転写活性化から生じる
偽陽性は、活性化ドメイン融合体集団への曝露前の、ＤＮＡ結合融合体集団を含
む宿主細胞内でのこのような活性化についてのネガティブ選択により防止または
減少される。例として、このような細胞がレポーター遺伝子としてＵＲＡ３を含
む場合、５−フルオロオロチン酸（５−ＦＯＡ、これはＵＲＡ＋の細胞を殺傷す
る（Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，１９８３，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０１：１６
７−１８０）の存在下で細胞をインキュベートすることによって、ネガティブ選
択を行う。それゆえ、ＤＮＡ結合ドメイン融合体は、それ自体で転写を活性化す
る場合、５−ＦＯＡの代謝は、細胞死、および自己活性化ＤＮＡ結合ドメインハ
イブリッドの除去を導く。
【０３３９】 レポーター遺伝子としての選択マーカーの使用、およびレポーター遺伝子転写
の非存在下で宿主細胞に対して毒性であるか、または増殖阻害である薬剤の、細
胞培地中の存在を含む、ネガティブ選択が好ましい。なぜなら、それは、他の方
法よりも高速の処理を可能にするからである。明らかなように、ネガティブ選択
はまた、ＤＮＡ結合ドメイン融合体集団との相互作用の前に活性化ドメイン融合
体集団に対して、同様の方法で、単独またはＤＮＡ結合融合体集団のネガティブ
選択に加えて行い得る。
【０３４０】 ネガティブ選択はまた、公知の方法（例えば、Ｂａｒｔｅｌら、１９９３、Ｂ
ｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０−９２４）により、回収されたＬＹＳ
Ｔ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体に対して行われ得るが、上記のような（相互作用アッ
セイ前の）プレネガティブ選択が、好ましい。例えば、活性化ドメイン（検出さ
れた相互作用複合体の２分の１）に融合されたタンパク質（ペプチドまたはポリ
ペプチド）をコードする各プラスミドを、単独で、またはＤＮＡ結合ドメインの
みをコードするプラスミド、検出された相互作用タンパク質に融合されたＤＮＡ
結合ドメイン、あるいは転写に影響を及ぼさないか、もしくはタンパク質−タン
パク質相互作用に関与するタンパク質に融合されたＤＮＡ結合ドメインとともに
かのいずれかで、元のスクリーニング株内に戻し形質転換し得る。検出される相
互作用タンパク質へのＤＮＡ結合ドメイン融合体をコードするもの以外の任意の
プラスミドで検出された、ポジティブな相互作用は、偽陽性とみなされ、スクリ
ーニングから排除される。
【０３４１】 好ましい実施態様において、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２プラスミド集団を、
第一の接合型（ａまたはα）の酵母株中に形質転換し、そして第二のプラスミド
集団（ＤＮＡ配列のライブラリーを含む）を、異なる接合型の酵母株中に形質転
換する。両株は、好ましくは、ＵＲＡ３およびＨＩＳ３についての変異体であり
、レポーター遺伝子としてＨＩＳ３、必要に応じてｌａｃＺを含む。酵母細胞の
第一のセットを、ＬＹＳＴプラスミドについてポジティブに選択し、そして選択
マーカー（例えば、トリプトファン）を欠き、そして５−ＦＯＡを含む培地中で
のインキュベーションによって、偽陽性についてネガティブに選択する。第二の
接合型の酵母細胞を、第二のプラスミド集団で形質転換し、融合タンパク質のラ
イブラリーを含むプラスミドの存在についてポジティブに選択する。選択された
細胞をプールする。両群のプールされた細胞を共に混合し、そして接合を固相上
で生じさせる。次いで、生じた二倍体細胞を選択培地に移して、各々のプラスミ
ドの存在およびレポーター遺伝子の活性化について選択する。
【０３４２】 本発明の好ましい実施態様において、相互作用集団が得られた後に、対の相互
作用タンパク質をコードするＤＮＡ配列を、ＤＮＡ結合ドメインハイブリッドま
たは活性化ドメインハイブリッドのいずれかが、それぞれ別の反応において増幅
される方法により単離する。好ましくは、増幅を、ＤＮＡ結合ドメインハイブリ
ッドまたは活性化ドメインハイブリッドのいずれかに特異的なオリゴヌクレオチ
ドプライマーの対を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国
特許第４，６８３，２０２号；同第４，６８３，１９５号；および同第４，８８
９，８１８号；Ｉｎｎｉｓら、１９９０、ＰＣＲ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ，Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により行う。
このＰＣＲ反応はまた、相互作用タンパク質複合体を発現するプールされた細胞
、好ましくは相互作用体のプールされたアレイに対して行い得る。当該分野で公
知の他の増幅方法もまた使用され得、これらは、リガーゼ連鎖反応（欧州特許第
３２０，３０８号を参照のこと）、Ｑβレプリカーゼの使用、またはＫｒｉｃｋ
ａら、１９９５、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＢＩＮＧ，ＢＬＯＴＴＩＮＧ，Ａ
ＮＤ ＳＥＱＵＥＮＣＩＮＧ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，Ｃｈａｐｔｅｒ １に列挙される方法を含むが、これらに限定されない。
【０３４３】 ＤＮＡ結合ドメインハイブリッドタンパク質および活性化ドメインハイブリッ
ドタンパク質をコードするプラスミドもまた、当該分野で周知の方法のいずれか
により、単離そしてクローニングされ得る。例えば、限定目的ではないが、シャ
トル（例えば、酵母からＥ．ｃｏｌｉ）ベクターを使用して融合タンパク質を発
現する場合、遺伝子を、酵母ＤＮＡをＥ．ｃｏｌｉ内に形質転換し、そしてＥ．
ｃｏｌｉからそのプラスミドを回収することにより回収し得る（例えば、Ｈｏｆ
ｆｍａｎら、１９８７、Ｇｅｎｅ ５７：２６７−２７２を参照のこと）。ある
いは、酵母ベクターを単離し得、融合タンパク質をコードする挿入体を細菌細胞
ベクター（Ｅ．ｃｏｌｉ中でのプラスミドの増殖のための）内にサブクローニン
グし得る。
【０３４４】 （薬学的組成物および治療的／予防的投与） 本発明は、被験体に、有効量の本発明の治療剤を投与することによる、処置（
および予防）の方法を提供する。好ましい局面において、治療剤は実質的に精製
されている。被験体は好ましくは動物（ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イ
ヌなどを含むがこれらに限定されない）であり、そして好ましくは哺乳動物であ
り、そして最も好ましくはヒトである。特定の実施態様において、非ヒト哺乳動
物が被験体である。
【０３４５】 治療剤が核酸を含む場合に使用され得る処方物および投与方法は、上記に記載
され；さらなる適切な処方物および投与経路が、本明細書中の以下に記載される
ものから選択され得る。
【０３４６】 種々の送達系が公知であり、本発明の治療剤を投与するために使用され得る。
例えば、リポソーム中のカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、治療剤を発現
し得る組換え細胞、レセプター媒介エンドサイトシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ
、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこ
と）、レトロウイルスベクターまたは他のベクターの一部としての治療剤核酸の
構築など。導入方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬
膜外、および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。それらの化合物は
、任意の便宜的経路により（例えば、注入またはボーラス注射、上皮または皮膚
粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介する吸収によっ
て）投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と共に投与され得る。投与は
全身性または局所的であり得る。さらに、本発明の薬学的組成物を、脳室内注射
および髄腔内注射を含む、任意の適切な経路によって中枢神経系内に導入するこ
とが望ましくあり得る；脳室内注射は、脳室内カテーテル（例えば、Ｏｍｍａｙ
ａリザーバのようなリザーバに接続された）によって促進され得る。肺投与もま
た、例えば、吸入器または噴霧器、およびエアロゾル剤を含む処方物の使用によ
り使用され得る。
【０３４７】 特定の実施態様において、本発明の薬学的組成物を処置が必要な領域に局所的
に投与することが望ましくあり得る；これは、例えば、手術中の局部注入、例え
ば、手術後の創傷包帯と組み合わせた、局所適用、注射による、カテーテルによ
る、坐薬による、または移植片による（これらに限定されない）によって達成さ
れ得、上記移植片は、膜（例えば、唾液状（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜）または繊
維を含む、多孔性材料、非多孔性材料またはゼラチン状材料の移植片である。１
つの実施態様において、投与は、悪性腫瘍または新生物組織もしくは前新生物組
織の部位（または元の部位）への直接注射により得る。
【０３４８】 別の実施態様において、治療剤は、小胞、特にリポソーム中で送達され得る（
Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３、Ｔｒ
ｅａｔら、１９８９、：ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ ＩＮ ＴＨＥ ＴＨＥＲＡＰＹ
ＯＦ ＩＮＦＥＮＣＴＩＯＵＳ ＤＩＳＥＡＳＥ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ，Ｌｏ
ｐｅｚ−ＢｅｒｅｓｔｅｉｎおよびＦｉｄｌｅｒ（編）、Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ、３５３−３６５頁、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書、３１７−
３２７頁を参照のこと（一般的に同書を参照のこと））。
【０３４９】 さらに別の実施態様において、治療剤は、徐放系で送達され得る。１つの実施
態様において、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、前出、Ｓｅｆｔｏｎ，１
９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１．Ｂ
ｕｃｈｗａｌｄら、１９８０．Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７．Ｓａｕｄｅｋら
、１９８９、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）。別の
実施態様において、ポリマー性材料が使用され得る（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓ
ｅ（編）１９７９、「ＭＥＤＩＣＡＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＯＦ ＣＯ
ＮＴＲＯＬＬＥＤ ＲＥＬＥＡＳＥ」、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔ
ｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ；ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ（編）、１９８４、ＣＯＮ
ＴＲＯＬＬＥＤ ＤＲＵＧ ＢＩＯＡＶＡＩＬＡＢＩＬＩＴＹ，ＤＲＵＧ ＰＲ
ＯＤＵＣＴ ＤＥＳＩＧＮ ＡＮＤ ＰＥＲＦＯＲＭＡＮＣＥ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ：ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏ
ｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照のこ
と。Ｌｅｖｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９
、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１．Ｈｏｗａｒｄら、１９８９、Ｊ．Ｎｅ
ｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５もまた参照のこと）。なお別の実施態様において
、徐放系は、治療標的（すなわち、脳）に近接して配置され得、従って、全身用
量の一部のみが必要である（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ＭＥＤＩＣＡ
Ｌ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＯＦ ＣＯＮＴＲＯＬＥＤ ＲＥＬＥＡＳＥ、
前出、第２巻、１１５−１３８頁を参照のこと）。他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ
、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３により概説に議論さ
れる。
【０３５０】 治療剤が、タンパク質治療剤をコードする核酸である特定の実施態様において
、その核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、その核酸が
細胞内性になるようにその核酸を投与することにより（例えば、レトロウイルス
ベクターの使用（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）によって、ま
たは直接注入によって、または微粒子ボンバートメント（例えば、遺伝子銃、Ｂ
ｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の使用によって、または脂質もしくは細胞表
面レセプターもしくはトランスフェクト剤でのコーティングによって、または核
に進入することが公知であるホメボックス様ペプチドと連結してその核酸を投与
すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８を参照のこと）によって、など）
、そのコードタンパク質の発現を促進するようにインビボで投与され得る。ある
いは、核酸治療剤は、細胞内に導入され得、発現のために相同組換えによって宿
主細胞ＤＮＡ内に組込まれ得る。
【０３５１】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。このような組成物は、治療有効量の
治療剤、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。特定の実施態様において、
用語「薬学的に受容可能」とは、連邦政府または州政府の管理機関によって承認
されること、または米国薬局方または動物（および、より詳細には、ヒト）にお
ける使用について他の一般的に認められている薬局方に列挙されていることを意
味する。用語「キャリア」とは、治療剤がそれによって投与される、希釈剤、ア
ジュバント、賦形剤、またはビヒクルをいう。このような薬学的キャリアは、水
および油（石油、動物、植物、または合成起源のオイル（例えば、ピーナッツ油
、ダイズ油、鉱油、ゴマ油など）を含む）のような滅菌液体であり得る。薬学的
組成物が静脈内投与される場合、水が好ましいキャリアである。生理食塩水溶液
ならびに水性ブドウ糖溶液および水性グリセロール溶液もまた、液体キャリアと
して、特に注射溶液に使用され得る。適切な薬学的賦形剤としては、デンプン、
グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、コムギ、チョー
ク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タ
ルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコー
ル、水、エタノールなどが挙げられる。所望の場合、組成物はまた、少量の湿潤
剤または乳化剤、あるいはｐＨ緩衝剤を含み得る。これらの組成物は、溶液、懸
濁液、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、持続放出処方物などの形態を取り得
る。組成物は、伝統的な結合剤およびキャリア（例えば、トリグリセリド）を用
いて、坐剤として処方され得る。経口処方物は、薬学的等級のマンニトール、ラ
クトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セル
ロース、炭酸マグネシウムなどのような標準的キャリアを含み得る。適切な薬学
的キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ．によるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ Ｐ
ＨＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳに記載される。このような組成物
は、患者への適切な投与のための形態を提供するように、適切な量のキャリアと
共に、適切な治療有効量の治療剤（好ましくは、精製形態である）を含む。処方
物は、投与様式に適すべきである。
【０３５２】 好ましい実施態様において、組成物は、慣用的な手順に従って、ヒトへの静脈
内投与に適用される薬学的組成物として処方される。代表的に、静脈内投与のた
めの組成物は、滅菌等張性水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はま
た、可溶化剤、および注入部位で痛みを緩和するリグノカインのような局所麻酔
剤を含み得る。一般的に、その成分は、例えば、活性剤の量を示す密閉された容
器（例えば、アンプルまたはサチェ）中に凍結乾燥粉末または無水濃縮物として
、別々に供給されるか、または単位投薬形態でともに混合されて供給されるかの
いずれかである。組成物が注入によって投与されるべき場合、それは滅菌薬学的
等級の水または生理食塩水を含む注入ボトルで調剤され得る。組成物が注射によ
り投与される場合、その成分が投与前に混合され得るように、注射のための滅菌
水または滅菌生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０３５３】 本発明の治療剤は、中性形態または塩形態として処方され得る。薬学的に受容
可能な塩としては、遊離アミノ基と形成される塩（例えば、塩酸、リン酸、酢酸
、シュウ酸、酒石酸などから誘導される塩）、および遊離カルボキシル基と形成
される塩（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カ
ルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチル
アミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどから誘導される塩）を含む。
【０３５４】 特定の障害または状態の処置に効果的である、本発明の治療剤の量は、その障
害または状態の性質に依存し、そして標準的な臨床技術により決定され得る。さ
らに、必要に応じて、インビトロアッセイを使用して、最適な投薬範囲の同定を
補助し得る。処方に使用されるべき正確な用量はまた、投与経路および疾患また
は障害の重篤度に依存し、医師の判断および各々の患者の状況に従って決定され
るべきである。しかし、静脈投与に適切な投薬量の範囲は、一般に、体重１ｋｇ
あたり約２０〜５００マイクログラムの活性化合物である。鼻内投与に適切な投
薬量の範囲は、一般に、約０．０１ｐｇ／ｋｇ体重〜約１ｍｇ／ｋｇ体重である
。効果的な用量は、インビトロ試験系または動物モデル試験系に由来する用量応
答曲線から推定され得る。
【０３５５】 坐剤は一般的に、約０．５重量％〜約１０重量％の範囲で活性成分を含む；経
口処方物は、好ましくは、約１０％〜約９５％の活性成分を含む。
【０３５６】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分を充填した１つ以上の
容器を含む、薬学的パックまたはキットを提供する。必要に応じて、このような
容器と付随するのは、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制
する行政機関によって指示される形式での通知であり得、この通知は、ヒトへの
投与のための製造、使用または販売の行政機関による認可を反映する。
【０３５７】 （動物モデル） 本発明はまた、動物モデルを提供する。１つの実施態様において、ＬＹＳＴ：
ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体、および個々のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬ
ＩＰ１０タンパク質に関与する疾患および障害についての動物モデルが提供され
る。これらとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：喘息を含むア
トピー性障害、自己免疫障害、神経変性障害を含む変性障害、腫瘍形成および腫
瘍拡散を含む細胞増殖性障害、ウイルス感染によって引き起こされる障害、色素
沈着障害を含む障害、ならびに血小板機能不全によって引き起こされる障害。こ
のような動物は、相同組換え、あるいはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／
もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子間、または染色体における個々のＬＹＳＴ−２も
しくは新規なＬＩＰ遺伝子間、ならびに外因性ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２お
よび／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子、または生物学的に不活にされているかも
しくは欠失されている個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規なＬＩＰ遺伝子の挿入変
異誘発（好ましくは、異種配列（例えば抗生物質耐性遺伝子）の挿入による）を
促進することによって最初に産生され得る。好ましい局面において、相同組換え
は、胚由来幹（ＥＳ）細胞を、挿入的に不活化されたＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
−２および／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子、または個々のＬＹＳＴ−２もしは
新規なＬＩＰ遺伝子を含むベクターで形質転換することにより行われ、その結果
、この相同組換えが起き、それに続いて、ＥＳ細胞の胚盤胞への注入およびこの
胚盤胞の育成母（ｆｏｓｔｅｒ ｍｏｔｈｅｒ）への移植が行われ、続いてキメ
ラ動物（「ノックアウト動物」）が誕生し、この動物においては、ＬＹＳＴもし
くはＬＹＳＴ−２および／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子、または個々のＬＹＳ
Ｔ−２もしくは新規なＬＩＰ遺伝子は、不活化されているかまたは欠失している
（Ｃａｐｅｃｃｈｉ，１９８９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８−１２９２
を参照のこと）。このキメラ動物を交配して、さらなるノックアウト動物を産生
し得る。このような動物は、マウス、ハムスター、ヒツジ、ブタ、ウシなどであ
り得、好ましくは非ヒト哺乳動物である。特定の実施態様において、ノックアウ
トマウスが産生される。
【０３５８】 このようなノックアウト動物は、癌および良性肥大を含む細胞増殖性障害、細
胞アポトーシスおよび細胞分化に関与する種々の障害、自己免疫疾患などを含む
がこれらに限定されない疾患または障害を発症するかまたは発症する素因を有す
ることが予測され、従ってこのようなノックアウト動物をこのような疾患、ウイ
ルス疾患および障害の動物モデルとして使用して、例えば、細胞増殖疾患、自己
免疫疾患、ウイルス疾患および他の疾患を阻害する能力について分子（例えば、
潜在的な治療剤）をスクリーニングし得るか、またはその能力についてその分子
を試験し得る。
【０３５９】 本発明の異なる実施態様において、機能的ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およ
び／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子を、例えば、タンパク質を過剰発現するかま
たは複合体もしくはタンパク質を通常は発現しない組織においてそれらを発現す
るかのいずれかである異種プロモーター（すなわち、ネイティブなＬＹＳＴもし
くはＬＹＳＴ−２もしくはＬＹＳＴ−ＩＰプロモーターではないプロモーター）
の制御下でＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２および／もしくはＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝
子を導入することによって取り込みそして発現する（または過剰発現もしくは誤
発現（ｍｉｓｅｘｐｒｅｓｓ）する）トランスジェニック動物は、ＬＹＳＴ：Ｌ
ＹＳＴ−ＩＰ複合体のレベルの上昇、または個々のＬＹＳＴ−２もしくは新規な
ＬＩＰタンパク質のレベルの上昇によって特徴付けられる疾患および障害の動物
モデルとしての用途を有し得る。このような動物を使用して、上記の疾患および
障害を処置または予防する能力について分子をスクリーニングし得るか、または
その能力について分子を試験し得る。
【０３６０】 １つの実施態様において、本発明は、組換え非ヒト動物を提供し、この組換え
非ヒト動物においては、内因性ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２遺伝子および内因
性ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の両方は、上記の動物もしくはその祖先の相同組換えも
しくは挿入変異誘発によって欠失もしくは不活化されている。別の実施態様にお
いて、本発明は、ＬＹＳＴ遺伝子もしくはＬＹＳＴ−２遺伝子およびＬＹＳＴ−
ＩＰ遺伝子の両方を含む組換え非ヒト動物を提供し、この組換え非ヒト動物にお
いてはＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２遺伝子は、ネイティブなＬＹＳＴまたはＬＹ
ＳＴ−２遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下にあり、そしてＬＹ
ＳＴ−ＩＰ遺伝子はネイティブなＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子プロモーターではないプ
ロモーターの制御下にある。特定の実施態様において、本発明は、導入遺伝子を
含む組換え非ヒト動物を提供し、この導入遺伝子は、少なくとも６アミノ酸のＬ
ＹＳＴ−ＩＰのフラグメントへの共有結合を介して融合された少なくとも６アミ
ノ酸のＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２のフラグメントを含むキメラタンパク質をコ
ードする核酸配列を含む。
【０３６１】 本発明はまた、組換え非ヒト動物を提供し、この組換え非ヒト動物においては
、内因性のＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５
、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９またはＬＩＰ１０の遺伝子がこの動
物もしくはその祖先の相同組換えもしくは挿入変異誘発により欠失もしくは不活
化されている。
【０３６２】 （特定の実施例） （実施例１：ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の同定） 改変され改良された酵母ツーハイブリッド系を使用して、タンパク質相互作用
を同定した。酵母は真核生物であり、それゆえこの型の系で検出される任意の分
子内タンパク質相互作用は、生理学的条件下で生じるタンパク質相互作用を実証
する（Ｃｈｉｅｎら、１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８８：９５７８−９５８１）。２つのハイブリッドタンパク質をコードする
発現ベクターを構築した。「順方向（ｆｏｒｗａｒｄ）」スクリーニングについ
て、１つのハイブリッドは、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の一部に融合された酵
母転写アクチベーターＧａｌ４のＤＮＡ結合ドメインからなっていた。他のハイ
ブリッドは、哺乳動物ｃＤＮＡライブラリーによってコードされる「プレイ（ｐ
ｒｅｙ）」タンパク質配列に融合されたＧａｌ４アクチベータードメインからな
っていた。「逆方向（ｒｅｖｅｒｓｅ）」スクリーニングにおいて、ＬＹＳＴの
部分を、Ｇａｌ４アクチベータードメインに融合し、そして哺乳動物ｃＤＮＡラ
イブラリーのプレイタンパク質配列をＤＮＡ結合ドメインに融合したが、このア
ッセイをその他の点では同一に行った。次いで、このベクターの各々を、当該分
野で公知の方法（Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８８：９５７８−９５８１）を使用して、酵母の相補（ａおよび
α）接合型に挿入した。接合を行って、両方のベクター構築物を同じ酵母細胞内
で発現させ、従って、相互作用を生じさせた。ベイト（ｂａｉｔ）ドメインとプ
レイドメインとの間の相互作用は、Ｇａｌ４のシス結合エレメントを含むレポー
ター遺伝子の転写活性化を導いた。インジケータータンパク質βガラクトシダー
ゼをコードするレポーター遺伝子、ならびにウラシルおよびヒスチジン栄養要求
性についての代謝マーカーは、接合に使用される酵母株の一方または他方におい
て特定の様式で含まれた。この方法において、酵母を、首尾良い接合、両方の融
合構築物の発現、およびＬＹＳＴ、ＬＹＳＴ−２またはＬＹＳＴ−ＩＰの発現に
ついて選択した。相互作用するタンパク質を含んでいる酵母クローンを拾い、そ
してマイクロタイタープレートの個々のウェルで増殖させた。次いで、ＬＹＳＴ
−ＩＰ配列を含むプラスミドを単離し、そして特徴づけた。
【０３６３】 （酵母ツーハイブリッド系スクリーニングに使用されるヒトｃＤＮＡライブラ
リー） プレイｃＤＮＡを、１×１０7の独立した単離体の胎児脳ｃＤＮＡライブラリ ー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ＃ＨＬ４０２９ＡＨ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から
得た。このライブラリーを、Ｘｈｏ１−ｄｔ１５で開始された胎児脳ｍＲＮＡ（
５つの雄／雌１９〜２２週胎児由来）から合成した。このｍＲＮＡは、ｐＡＤ−
ＧＡＬ４（ロイシン生合成を欠損する酵母における選択のためのＬＥＵ２遺伝子
を含む酵母Ｇａｌ４活性化ドメインクローニングベクター）またはｐＢＤ−ＧＡ
Ｌ４（トリプトファン生合成を欠損する酵母の選択のためのＴＲＰ１遺伝子を含
む酵母Ｇａｌ４ ＤＮＡ結合ドメインクローニングベクター）のいずれかに方向
性を持ってクローニング（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｃｌｏｎｅ）した。
【０３６４】 ｐＡＤ−ＧＡＬ４ベクターｐＡＣＴ２におけるヒト成体心臓、成体ケラチノサ
イト、胎児肝臓および胎児腎臓プラスミドｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ ＃ＨＬ４０４２ＡＨ、ＨＬ４０３０ＡＨ、ＨＬ４０２９ＡＨ、ＨＬ４００
８ＡＢ）を増幅し、そしてプラスミドを精製した。Ｎ１０６ｒ酵母細胞を、２０
０μｇのプラスミドＤＮＡで形質転換し、そして１０7の酵母形質転換体をスク リーニングに使用した。
【０３６５】 （順方向および逆方向スクリーニング） ４つの順方向スクリーニングを使用して、ベイトタンパク質のアレイに対する
プレイｃＤＮＡ産物の相互作用を試験した。このタンパク質の１つは、ヌクレオ
チド１９０〜１０５６のＬＹＳＴヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ
６７６１５）によってコードされた（表１もまた参照のこと）。ベイトフラグメ
ント１９０〜１０５６を、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３６６】
【化１】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＢＴ９ＢＳ（Ｙａｎｇら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．２３：１１５２−１１５６）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部
位との間にクローニングした。第２のベイトは、ヌクレオチド３１９０〜４０３
２のＬＹＳＴヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６７６１５）によっ
てコードされ、そして全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３６７】
【化２】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＢＴ９ＢＳ（Ｙａｎｇら、１９９５）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏ
ＲＩ制限部位との間にクローニングした。第３のベイトは、ヌクレオチド６５８
６〜７４４９のＬＹＳＴヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６７６１
５）によってコードされ、そして全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマ
ー：
【０３６８】
【化３】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。第４のベイトは、ヌ
クレオチド９０３７〜９５８５のＬＹＳＴヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登
録番号Ｕ６７６１５）によってコードされ、そして全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから
、以下のプライマー：
【０３６９】
【化４】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＢＴ９ＢＳ（Ｙａｎｇら、１９９５）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏ
ＲＩ制限部位との間にクローニングした。
【０３７０】 ７つの逆方向スクリーニングを使用して、ベイトタンパク質のアレイに対する
プレイｃＤＮＡ産物の相互作用を試験した。このベイトは、ＬＹＳＴタンパク質
（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６７６１５）の異なる部分をコードする、ヌクレオ
チド１９０〜１０５６、７７４〜１４２４、４００９〜４８２１、６５８６〜７
４４９、９０３７〜９５８５、９５０２〜１０５９０（ＢＥＡＣＨドメイン）、
１０５７６〜１１６１１（ＷＤ−４０ドメイン）のＬＹＳＴヌクレオチド配列（
ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６７６１５）によってコードされた。ベイトフラグメ
ント１９０〜１０５６を、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７１】
【化５】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢａｍＨＩ制限部位とＸｈｏＩ制
限部位との間にクローニングした。ベイトフラグメント７７４〜１４２４を、全
長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７２】
【化６】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ
制限部位との間にクローニングした。ベイトフラグメント４００９〜４８２１を
、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７３】
【化７】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ
制限部位との間にクローニングした。ベイトフラグメント６５８６〜７４４９を
、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７４】
【化８】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）のＢａ
ｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部位との間にクローニングした。ベイトフラグ
メント９０３７〜９５８５を、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー
：
【０３７５】
【化９】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ
制限部位との間にクローニングした。ベイトフラグメント９５０２〜１０５９０
を、全長ＬＹＳＴ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７６】
【化１０】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨのＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部位との間にクロ
ーニングした。ベイトフラグメント１０５７６〜１１６１１を、全長ＬＹＳＴ
ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７７】
【化１１】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＧＨのＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部位との間にクロ
ーニングした。
【０３７８】 １つの逆方向スクリーニングを使用して、ＬＹＳＴ−２ベイトタンパク質（図
１、配列番号２）に対するプレイｃＤＮＡ産物の相互作用を試験した。このベイ
トは、ヌクレオチド３〜７９４のＬＹＳＴ−２ヌクレオチド配列（図１、配列番
号１）によってコードされた。ベイトフラグメント３〜７９４を、全長ＬＹＳＴ
−２ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３７９】
【化１２】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。ベイトフラグメント
７７４〜１４２４を、全長ＬＹＳＴ−２ ｃＤＮＡから、以下のプライマー：
【０３８０】
【化１３】 を使用するＰＣＲにより、標準的な技術によって増幅した。増幅したフラグメン
トを、ｐＧＡＤ−ＷＭのＢａｍＨＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部位との間にクロ
ーニングした。このベイト配列を、核酸配列決定によって確認して、ＰＣＲ増幅
がＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２配列の正確なコピーを再生したことを確認した。
この試験は、予期したように、ベイト配列がヒトＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２と
同一である相互作用ドメインをコードしたことを決定した。
【０３８１】 順方向スクリーニングにおいて、導入されたベイトをコードする核酸を、酢酸
リチウム／ポリエチレングリコール形質転換（Ｉｔｏら、１９８３、Ｊ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３−１６８）によって、酵母株ＹＵＬＨ（接合型ａ
、ｕｒａ３、ｈｉｓ３、ｌｙｓ２、Ａｄｅ２、ｔｒｐ１、ｌｅｕ２、ｇａｌ４、
ｇａｌ８０、ＧＡＬ１−ＵＲＡ３、ＧＡＬ１−ｌａｃＺ）に発現させ、一方、プ
レイ配列を、形質転換によって、酵母株Ｎ１０６ｒ（接合型α、ｕｒａ３、ｈｉ
ｓ３、ａｄｅ２、ｔｒｐ１、ｌｅｕ２、ｇａｌ４、ｇａｌ８０、ｃｙｈr、Ｌｙ ｓ２：：ＧＡＬ１UAS−ＨＩＳ３TATA−ＨＩＳ３、ｕｒａ３：：ＧＡＬ１UAS−Ｇ
ＡＬTATA−ｌａｃＺ）に導入した。逆方向スクリーニングのために、ｐＡＤ−Ｇ
ａｌ４プラスミド中のＬＹＳＴベイトをＮ１０６ｒに形質転換し、一方、ｐＢＤ
−Ｇａｌ４プラスミドに融合したプレイｃＤＮＡライブラリーをＹＵＬＨに形質
転換した。次いで、２つの形質転換した集団を、当該分野で標準的な方法（Ｓｈ
ｅｒｍａｎら編、１９９１、ＧＥＴＴＩＮＧ ＳＴＡＲＴＥＤ ＷＩＴＨ ＹＥ
ＡＳＴ，第１９４巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を使
用して接合させた。簡単に述べると、細胞を、適切なプラスミドの存在について
選択した培地で中期〜後期の対数増殖期まで増殖させた。次いで、２つの接合株
（αおよびａ）を、ＹＡＰＤ培地（Ｓｈｅｒｍａｎら編、１９９１、ＧＥＴＴＩ
ＮＧ ＳＴＡＲＴＥＤ ＷＩＴＨ ＹＥＡＳＴ，第１９４巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）で希釈し、ニトロセルロース膜でろ過し、そ
して３０℃にて６〜８時間インキュベートした。次いで、この細胞を所望の二倍
体（すなわち、βガラクトシダーゼ、ウラシル栄養要求性およびヒスチジン栄養
要求性についてのレポーター遺伝子、ならびにベイトおよびプレイをコードする
ベクターの発現を保有する酵母）について選択性培地に移した。この接合産物を
、アデニンおよびリジン（首尾良い接合について選択するため）、ロイシンおよ
びトリプトファン（ベイトプラスミドおよびプレイプラスミドの両方によってコ
ードされる遺伝子の発現について選択するため）、ならびにウラシルおよびヒス
チジン（タンパク質相互作用について選択するため）を欠く、ＳＣ（完全合成）
培地（Ｋａｉｓｅｒ，ＭｉｃｈａｅｌｉｓおよびＭｉｔｃｈｅｌｌ編、１９９４
、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＹＥＡＳＴ ＧＥＮＥＴＩＣＳ，１９９４編、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，２０９頁）にプレートした。この培地は、この培地を、ＳＣ選択培
地について本明細書中で、ＳＣＳ培地と称する。
【０３８２】 選択したクローンを、βガラクトシダーゼの発現について試験して、ＬＹＳＴ
：ＬＹＳＴ−ＩＰ相互作用の形成を確認した。フィルターリフト（ｆｉｌｔｅｒ
−ｌｉｆｔ）βガラクトシダーゼアッセイを、ＢｒｅｅｄｅｎおよびＮａｓｍｙ
ｔｈ、１９８５、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏ
ｌ．５０：６４３−６５０のプロトコルからの改変として行った。コロニーをＳ
ＣＳプレートにパッチし、一晩増殖させ、そしてＷｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１フィ
ルターにレプリカプレートした。次いでこのフィルターを、βガラクトシダーゼ
活性についてアッセイした。ポジティブであったコロニーは可視青に変わり、従
ってＬＹＳＴ：標的タンパク質相互作用を示した。
【０３８３】 タンパク質相互作用についてポジティブなコロニー中の細胞は、ＤＮＡ結合プ
ラスミドおよび活性化ドメインプラスミドの混合物を含んでいた。これらの細胞
を、９６ウェルプレートの個々のウェルにおいて単一単離体として再度増殖させ
た。各単離体の１０マイクロリットルを溶解し、活性化ドメインプラスミドにつ
いてのｐＡＤ−ＧＡＬ４またはｐＧＡＤ−ＧＨ、およびｐＢＤ−ＧＡＬ４または
ｐＧＢＴ９ＢＳプラスミド内のインサートを、各ベクターの隣接配列に特異的な
プライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応によって増幅させ、そして各インサ
ートの約３００アミノ末端塩基を、ＡＢＩ ３７７シークエネーター（ｓｅｑｕ
ｅｎａｔｏｒ）を用いて決定した。
【０３８４】 公知の配列に対する比較を、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉ ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通じて公に利用可能である
「ＢＬＡＳＴ」ソフトウェアプログラムを用いて行った。ＬＹＳＴの対応する相
互作用ドメインを含む全てのＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−２相互作用タンパク質、
相互作用タンパク質の名前、使用したライブラリー、相互作用の開始部位、なら
びに単離体あたりのヒットの数の要約を表１に示す。ＬＹＳＴ−２および新規な
ＬＩＰ言及相互作用タンパク質の決定した核酸配列および対応するアミノ酸配列
を、それぞれ図１〜１１に示す。
【０３８５】
【表１】 （実施例２：ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ相互作用の特異性の検証） ベイト（ｂａｉｔ）：プレイ（ｐｒｅｙ）相互作用の特異性の検査のために、
２つの一般的な試験をまず実行した。第１の例では、全てのＬＹＳＴ相互作用性
プレイの結合ドメインの融合物をコードする個々のプラスミドを発現するＹＵＬ
Ｈ酵母細胞を作製した。形質転換された一倍体酵母細胞を、ＳＣＳプレート上に
プレートし、一晩増殖させ、そして増殖について試験した。増殖しなかった細胞
は、自己活性化偽陽性ではないＬＹＳＴ相互作用性タンパク質を含んだ。試験し
た全てのタンパク質について増殖は見出されず、このことにより、それらが「自
己活性化」タンパク質ではなかったこと、すなわち、これらのタンパク質は、機
能的活性化複合体のために第２のタンパク質ドメインとの相互作用を必要とする
ことを確認した。
【０３８６】 さらなるプレイ自己活性化検査として、事前に（ｐｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
）ＬＹＳＴ相互作用結合ドメインまたは活性化ドメイン融合タンパク質プレイで
形質転換された、ＹＵＬＨおよびＮ１０６ｒ一倍体酵母を、ＳＣＳ培地上で増殖
させ、そしてフィルターリフトβガラクトシダーゼアッセイを、選択した一倍体
コロニーに対して実行した。青色に変わらなかったコロニーは、非自己活性化プ
レイを含まなかった。プレイ自己活性化に対する両方の試験を通過したコロニー
のみを追跡した。相互作用の特異性および再現性を、マトリクス接合（ｍａｔｒ
ｉｘ ｍａｔｉｎｇ）検査で評価した。ベイト（順方向のスクリーニング）また
はプレイ（逆方向のスクリーニング）との結合ドメインの融合物を、Ｎ１０６ｒ
酵母中に再び形質転換して、そして３０℃でＹＰＡＤ培地中で増殖させた。マト
リクス接合試験を、個々のＹＰＡＤプレートの表面上にベイト含有一倍体酵母を
蒔き、次いでプレイ含有一倍体を１２×８のマトリクスに重ね合わせ、そして３
０℃でプレートを一晩インキュベートすることによって実行した。各プレートは
、陽性コントロール（公知のタンパク質相互作用の対）および陰性コントロール
を含んだ。得られた二倍体コロニーを、ＳＣＳプレート（活性化ドメインプラス
ミドおよび結合ドメインプラスミド、二倍体、およびタンパク質相互作用につい
て選択するため）およびＳＣ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐプレート（フィルターリフトβガ
ラクトシダーゼアッセイに使用された）の両方にレプリカプレートを作製（ｒｅ
ｐｌｉｃａ ｐｌａｔｅ）した。ＳＣＳ上で増殖するＬａｃＺ＋二倍体からのベ
イトおよびプレイを配列決定した。所定のベイト−プレイ対の同一性が、最初の
スクリーニングにおいて得られたものと適合した場合、この相互作用は、酵母ツ
ーハイブリッド法により確認されたとみなされる。
【０３８７】 （実施例３：ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０をコードする配列の分析） （ＥＳＴをコードする配列のアセンブリおよび同一性検索についての一般的手
順） ヒトＥＳＴアセンブリを、公に利用可能なＥＳＴアセンブリデータベース（例
えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｎ．Ｃ．Ｂ．Ｉ）Ｂｌａｓｔ２．０ソフトウェアプ
ログラム（Ｇｉｓｈ １９９４〜１９９７：Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ
．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０）を使用することによって実行し
た。整列が、ＥＳＴ配列の５’伸長または３’伸長を生じた場合、それらの末端
の少なくとも３０個のヌクレオチド配列に対して核酸レベルで９５％以上の同一
性で整列した配列を利用する。一旦、この第１のアセンブリが終了すると、この
伸長した配列を、Ｂｌａｓｔ比較に再度供して、加えられた伸長に対する新しい
相同性を検出した。アセンブルした配列の伸長を可能にする新しい関連する配列
をもはや検出しなくなるまで、この配列を両方向に伸長した。
【０３８８】 アセンブルしたＥＳＴ配列を、データベース類似性検索（Ｇｉｓｈ １９９４
〜１９９７；ＧｉｓｈおよびＳｔａｔｅｓ １９９３、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３
：２６６〜２７２）によるタンパク質コード領域の同定のためのＢｌａｓｔＸ２
．０ソフトウェアプログラムを使用して、さらなる検索に供した。このＢｌａｓ
ｔＸプログラムの使用は、６つのリーディングフレーム全てにおいてＤＮＡ配列
を翻訳させ、そしてタンパク質データベース中のタンパク質配列と翻訳されたタ
ンパク質配列とを比較する。問合せ配列中の１つのリーディングフレーム全体の
等価物がタンパク質をコードし、そして有意な整列がコーディングリーディング
フレームのみを含むという仮定の下で、この統計学的有意差を評価する。高いス
コア付けのセグメント対を生じる配列を示す。
【０３８９】 さらに、標準的遺伝コードを使用する（アセンブルした）ＤＮＡ配列の６個の
リーディングフレーム全てにおけるＤＮＡ配列を翻訳する著作権を有するソフト
ウェアを使用して、この配列をオープンリーディングフレームについて分析した
。相互作用するＥＳＴを、指向的にクローン化したライブラリーから得、それに
よってアセンブルしたＥＳＴの翻訳の方向を、５’から３’として区別し、そし
てオープンリーディングフレームもまた区別する。得られた翻訳において、正し
いフレーム内で見出された可能性のあるオープンリーディングフレーム（「ＯＲ
Ｆ」）を分析した。開始コドン後の５０個のアミノ酸を超えるオープンリーディ
ングフレームまたは５’末端にコードされた開始メチオニンを有さないＯＲＦを
、可能性のあるタンパク質産物であると決定して、そしてＢＬＡＳＴＰ２．０ソ
フトウェアプログラム（Ｇｉｓｈ １９９４〜１９９７；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、
１９９０、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０）を使用してタ
ンパク質データベース中の配列と比較した。既知のタンパク質配列と同一性およ
び類似性を有するタンパク質配列を示す。
【０３９０】 さらなるタンパク質配列分析を、適切なオープンリーディングフレームを選択
した後に実行した。このタンパク質配列を、ＢＬＯＣＫＳおよびＰＲＯＤＯＭモ
チーフデータベース（Ｂａｉｒｏｃｈ、１９９２、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：２０１３〜２０１８；ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅ
ｎｉｋｏｆｆ １９９１、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １
９〜２３：６５６５〜６５１２；ＮａｋａｉおよびＫａｎｅｈｉｓａ １９９２
、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １４：８９７〜９１；ＷａｌｌａｃｅおよびＨｅｎｉｋｏ
ｆｆ １９９２、Ｃａｂｉｏｓ ８：２４９〜２５４）に存在する、以前に特徴
付けられたタンパク質ドメインに対して比較した。ＢＬＩＭＰＳソフトウェアプ
ログラムは、ＢＬＯＣＫＳのエントリーに対する適合性を見出した。このＢＬＯ
ＣＫＳ分析は、タンパク質中に見出された類似する配列ドメインを整列して、そ
して対応するタンパク質ファミリーを明らかにする。ＢＬＡＳＴＰは、ＰＲＯＤ
ＯＭデータベースにおけるエントリーに対する適合性を見出した。このＰＲＯＤ
ＯＭ分析は、高い同一性および類似性を有するタンパク質ドメインを構成する整
列を示す。
【０３９１】 （ＥＳＴ分析） （ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ｅ７（ＬＩＰ１）） ＬＹＳＴ（ドメイン６５８６〜７４４９）と相互作用する４つの配列（ｃｇ５
０１３６．ｅ７、４９３ヌクレオチド；ｃｇ５０１３６．ａ２、４４７ヌクレオ
チド；ｃｇ５０１３６．ｅ６、４４３ヌクレオチド；およびｃｇ５０１３６．ｆ
６、３９２ヌクレオチド）（９９％同一）を同定した。これらの４つの配列は、
ヒトＥＳＴ ＡＡ３３２９１６（１９６ｂｐ）を含む５０１ｂｐとして、コンテ
ィグ（ここでコンティグは、一連のアセンブルした重複ＤＮＡクローンにより同
定可能な配列の連続する領域として同定される）において重複し、このコンティ
グのヌクレオチド２６６〜４６１は、ＡＡ３３２９１６のヌクレオチド１〜１９
６に対して９９％同一であった。このコンティグ（２８２〜５０１ｂｐ）の３’
末端は、２つのＥＳＴと重複した：ヒトＥＳＴ ＡＡ４５２３４６（４５５ヌク
レオチド）のヌクレオチド１〜１２８に対して９８％同一、ヌクレオチド３３９
〜４５５に対して９０％、そしてヌクレオチド２３４〜４５５に対して７１％、
ならびにヒトＥＳＴ ＡＡ４４７２２６（４５２ｂｐ）に対して９７％同一（両
方ともヒトＳｏａｒｅｓ総胎児（８〜９週）ライブラリー（Ｈｉｌｌｉｅｒら、
１９９７）から最初に得られた）。これらのＥＳＴは、さらに伸長され得ない７
３６ｂｐコンティグ、ＥＳＴ ｃｇ５０１７５．ｅ７＋を形成する最初の配列と
重複した。ＥＳＴ ｃｇ５０１７５．ｅ７＋は、マウスＴ複合タンパク質Ｔｃｐ
−１０ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ７３５０６）に対して６６％のヌクレオチ
ド同一性を示した。
【０３９２】 オープンリーディングフレームを、ヌクレオチド３〜５９３で翻訳し得る。得
られた１９７個のアミノ酸は、ＬＩＰ−１と表記された新規なタンパク質のＣ末
端またはコア領域に対応する。ＬＩＰ−１のアミノ酸１１〜１９４は、マウスＴ
ｃｐ−１０タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５８１７０）のＣ末端領域（
アミノ酸２５４〜４３６）に対して６１％の同一性および７８％の類似性を示す
。ＬＩＰ−１はまた、ヒトｔｃｐ１０ａタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ
０３３９９）に対して６６％の同一性を示す（ＬＩＰ−１のヌクレオチド８９〜
１９４およびＵ０３３９９のヌクレオチド２８６〜３９０）。従って、ＬＩＰ−
１は、マウスＴｃｐ−１０タンパク質およびヒトＴｃｐ−１０タンパク質に相同
性を有する新規なタンパク質を示す。興味深いことに、別のＬＹＳＴ相互作用物
であるＬＩＰ−７（この章の後を参照のこと）は、Ｔｃｐ−１０のアミノ末端領
域に相同性を示す。ＬＩＰ−１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図２に
示す。
【０３９３】 （ＬＩＰ−２（ｃｇ５０１３６．ａ４） ３つの配列（ｃｇ５０１３６．ａ４〜４４６ｂｐ、ｃｇ５０１３６．ｄ６〜４
４３ｂｐ、ｃｇ５０１７５．ｃ９〜３８０）（９９％同一）は、ＬＹＳＴ（６５
８６〜７４４９）と相互作用した。これらの３つの配列は重複し、４６４ｂｐの
配列を形成した。この配列のヌクレオチド１〜４５４は、ヒトのアセンブリｈｓ
６７９３＿０，８４２ｂｐ（ＣｕｒａＧｅｎ，独自のｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ）
の３８９〜８４２ヌクレオチドと９６％同一であった。このアセンブリは、ＥＳ
Ｔ ＡＩ１４１７００からのヌクレオチド１〜６９８（ヒトアセンブリｈｓ６７
９３＿０におけるヌクレオチド１１２〜７８１に対応する）、ＥＳＴ Ｗ６７７
２５由来のヌクレオチド１〜６３４（ヒトアセンブリｈｓ６７９３＿０における
２２〜６７５ヌクレオチドに対応する）、およびＥＳＴ ＡＡ２０３５３３由来
のヌクレオチド１〜６０４（ヒトアセンブリｈｓ６７９３＿０におけるヌクレオ
チド９８〜６９２に対応する）を含む多数の公開されたＥＳＴを含む。プレイ（
ｐｒｅｙ）配列およびヒトアセンブリｈｓ６７９３＿０の重複は、データベース
検索によりさらに伸長され得ない８５０コンティグを作成し、そしてこれをさら
なる分析のために用いた。このコンティグは、ＢｌａｓｔＮにより、公知の機能
のいかなる遺伝子とも有意な類似性を示さなかった。
【０３９４】 オープンリーディングフレームを、コンティグの１〜５５１ヌクレオチドから
翻訳し得た。得られた１８４アミノ酸は、ＬＩＰ−２と呼ばれる新規のタンパク
質のＣ末端またはコア領域に対応する。ＬＩＰ−２のアミノ酸２４〜１３３は、
細菌のリボソームタンパク質Ｌ１７のアミノ酸２〜１１７と４０％の同一性およ
び５６％の類似性を示す（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号題Ｍ２６４１４号）。従って
、ＬＩＰ−２は、リボソームタンパク質Ｌ１７との類似性を有する新規なヒトタ
ンパク質を示す。ＬＩＰ−２のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を、図３に
示す。
【０３９５】 （ＬＩＰ３（ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ｃ１０）） ＬＹＳＴ（９０３７〜９５８５および９５０２〜１０５９０）と相互作用する
２つの同一配列（ｃｇ５０１３６．ｃ１０およびｃｇ５０１３６．ｇ１０）は、
公開されたＥＳＴと有意な同一性を示した。１４１１ヌクレオチドの伸長された
発現配列を、ヒト胎児肺ＥＳＴ Ｗ４０３５４のヌクレオチド１〜４４７（Ｈｉ
ｌｌｉｅｒら、１９９５、Ｔｈｅ Ｗａｓｈ Ｕ−Ｍｅｒｃｋ ＥＳＴ Ｐｒｏ
ｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）、ヒト内皮細胞ＥＳＴ ＡＡ４４６８
３７由来のヌクレオチド１〜３８２（Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９７、Ｗａｓｈ
Ｕ−Ｍｅｒｃｋ ＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃｔ、１９９７、未公開）（延長配列にお
けるヌクレオチド３２８〜８７８に対応する）、ｃｇ５０１３６．ｃ１０からの
ヌクレオチド１〜４３５（伸長配列におけるヌクレオチド３４５〜７８１に対応
する）、ヒト多発性硬化症ライブラリーからのＥＳＴ Ｎ４９０５３由来ヌクレ
オチド１〜４２２（Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９５、Ｔｈｅ Ｗａｓｈ Ｕ−Ｍｅ
ｒｃｋ ＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）（伸長配列に
おけるヌクレオチド７７９〜１２０１に対応する）および、ヒト脳ライブラリー
からのＥＳＴ ＡＩ０９７６５４由来のヌクレオチド１〜５０４（ヌクレオチド
９００〜１４１０に対応する）からアセンブルした。ＬＹＳＴと相互作用するフ
ラグメントはヌクレオチド３４５で開始する。１４１０ヌクレオチドの伸長配列
を、引き続く分析のために用いた。伸長した発現した配列のヌクレオチド２１３
〜５９９は、Ｚｎフィンガータンパク質Ｒｏａｚ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ９
２５６４）と関連するラットＯｌｆ−１／ＥＢＦのヌクレオチド３５８９〜３９
７５との７４％同一性を示した。
【０３９６】 オープンリーディングフレームを、ヌクレオチド１〜５９４から翻訳し得た。
これらの１９８アミノ酸は、ＬＩＰ−３と名付けられた新規なタンパク質のコア
またはＣ末端領域を示す。ＬＩＰ−３のアミノ酸２６〜１９７は、ラットのＺｎ
フィンガータンパク質Ｒｏａｚのアミノ酸１０２３〜１１８５と７２％同一性お
よび８３％類似性を示す。いくつかの種の異なるジンクフィンガータンパク質に
対して、より弱い相同性（４０〜５０％）が見られた。興味深いことに、ＬＹＳ
Ｔと関連し得る他のタンパク質（例えば、プロテインキナーゼＣおよびＨｒｓ）
には保存されたジンクフィンガードメインが存在する。従って、ＬＩＰ−３は、
Ｚｎフィンガータンパク質Ｒｏａｚと関連するラットＯｌｆ−１／ＥＢＦに対し
て相同性を有する新規のヒトタンパク質を示す。ＬＩＰ−３のヌクレオチドおよ
びアミノ酸配列を図４に示す。
【０３９７】 （ＬＩＰ４（ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ａ７）） ＬＹＳＴ（６５８６〜７４４９）と相互作用する、同定された１つのプレイ配
列（ｃｇ５０１３６．ａ７＋，２４３ヌクレオチド）は、ＥＳＴのヌクレオチド
６３で開始するヒトＥＳＴ Ｗ２２５４１に９７％同一であった。８０９ヌクレ
オチドのこのＥＳＴは、最初にヒト網膜ライブラリー（Ｍａｃｋｅら、１９９６
、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）から得た。ＥＳＴ Ｗ２２５４１は、ｃｇ５０
１３６．ａ７を含み、そして、ＥＳＴ ＡＡ００９４５３（５０５ヌクレオチド
）、ＡＡ４８２０６０（４５７ヌクレオチド）、ＡＩ１９３５１７（３１４ヌク
レオチド）およびＡＡ２５２７６８（４８５ヌクレオチド）を用いて９２１ヌク
レオチド配列まで伸長し得た。このアセンブリのヌクレオチド６２７〜３９７は
、ヒトｈｎＲＮＰ−Ｅ１ ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ７８１３７）の
ヌクレオチド８４３〜１０７０に６８％同一であった。
【０３９８】 オープンリーディングフレームを、全ての６つのフレームにおいてこの配列か
ら翻訳し得た。最長のＯＲＦを、フレーム＋２、ヌクレオチド７１〜８９８（２
７６アミノ酸）において翻訳し得た。記載されたタンパク質翻訳は「ＡＴＧ」開
始メチオニンコドンで開始しないので、本発明者らは、示されるようにヌクレオ
チド残基７１〜８９８でコードされるタンパク質配列がＣ−末端タンパク質フラ
グメントを示す（ここでＮ末端タンパク質配列は図に示されない）と推測する。
このＯＲＦをまた、ＢｌａｓｔＸを用いて公知のタンパク質に最も類似性を有す
るように同定した。この２７６アミノ酸タンパク質の７７〜１６５アミノ酸は、
ヒトＨＮＲＮＰ−Ｅ２タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ７８１３６）に６
２％同一そして、７３％類似であった。ＬＩＰ−４は、ヒトリボ核タンパク質と
類似性を有する新規なタンパク質を示す。ＬＩＰ−４のヌクレオチドおよびアミ
ノ酸配列を図５に示す。
【０３９９】 （ＬＩＰ−５（ＥＳＴ ｃｇ５０１７５．ｃ７）） ＬＹＳＴと相互作用する同定された１つのプレイ配列（ｃｇ５０１７５．ｃ７
，４５０ヌクレオチド）は、公知の多数のＥＳＴと高度に相同性である［４８０
ヌクレオチドであり、そしてＳｔｒａｔｇｅｎｅ感覚上皮（＃９３７２３１）ラ
イブラリーから最初に得られたヒトｃＤＮＡクローンＡＡ１７３３７２に９８％
同一（Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９７、Ｗａｓｈ Ｕ−ＮＣＩ ヒト ＥＳＴ Ｐ
ｒｏｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）、５２１ヌクレオチドであり、そ
して胎児脳ライブラリーから最初に得られたＥＳＴ Ｈ１９０４５に９６％同一
（Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９５、Ｗａｓｈ Ｕ−ＮＣＩ ＥＳＴ ヒト Ｐｒｏ
ｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）、４１０ヌクレオチドであり、そして
胎児脳ライブラリーから最初に得られたＥＳＴ Ｒ４９７０９に９７％同一（Ｈ
ｉｌｌｉｅｒら、１９９５、Ｗａｓｈ Ｕ−ＮＣＩ ヒト ＥＳＴ Ｐｒｏｊｅ
ｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）、３１１ヌクレオチドであり、そして胎児
心臓ライブラリーから最初に得られたＥＳＴ ＡＡ０９２３２２に９７％同一、
３８１ヌクレオチドであり、そしてヒト心臓ライブラリーから最初に得られたＥ
ＳＴ Ｚ３６９９５に９７％同一、ならびに、２４２ヌクレオチドであり、そし
てヒト血液細胞ライブラリーから最初に得られたＥＳＴ Ｚ６０６６１に９７％
同一］。これらのＥＳＴは８３７のヌクレオチド配列にアセンブルし、そしてこ
の配列は、データベース検索によりさらに延長され得ず、そして引き続く分析に
用いられた。この配列のヌクレオチド５８５〜２５７は、必須の核小体タンパク
質についてのＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＮＯＰ７７遺伝子のヌクレオチド１３
３３〜１６６２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ７６２４５）に６０％同一であった
。
【０４００】 Ｋｏｚａｋコンセンサス配列を有する、メチオニンコドンで開始するオープン
リーディングフレームは、ヌクレオチド３１〜６９６から翻訳され得、このこと
はこのオープンリーディングフレームがこの遺伝子の完全コード配列を示すこと
を示す。このコード配列は、ＬＩＰ−５と名付けられた２２１アミノ酸タンパク
質に対応する。ＬＩＰ−５のアミノ酸２７〜１５７は、Ｃ．Ｅｌｅｇａｎｓ、８
８５ａａの遺伝子Ｔ２３Ｇ１１．７（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｚ８１１３０）の
アミノ酸３１５〜４６１に３５％同一であり、そして６１％類似である。タンパ
ク質のソーティングおよびシグナルペプチド予想プログラムは、このタンパク質
にシグナルペプチドが存在しないことを示す。ＢＬＯＣＫＳタンパク質ドメイン
分析を用いれば、ＬＩＰ−５は、ホスホリラーゼピリドキサール−ホスフェート
付着部位を含有する可能性が高い（強度−１６８２、スコア−１０６７）。ＬＩ
Ｐ−５は、新規なヒトタンパク質を示す。ＬＩＰ−５のヌクレオチド配列および
アミノ酸配列を、図６に示す。
【０４０１】 （ＬＩＰ−６（ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ｆ９）） ４つの同定された配列（ｃｇ５０１３６．ｇ５−３６０ヌクレオチド、ｃｇ５
０１３６．ｇ５−３０４ヌクレオチド、ｃｇ５０１３６．ｆ９−４８６ヌクレオ
チド、およびｃｇ５０１３８．ｆ２−１６０ｂｐ）は、ＬＹＳＴと相互作用する
（２つは１０５７６〜１１６１１と相互作用することが同定され、そして２つは
６５８６〜７４４９と相互作用することが同定された）。これらの４つの配列は
、最長配列ｃｇ５０１３６．ｆ９に同一であるコンティグを形成した。ｃｇ５０
１３６．ｆ９のヌクレオチド１６６〜４８６は、ＥＳＴ ＡＡ４６０１３１（５
８８ヌクレオチド；Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９７、Ｗａｓｈ Ｕ−ＮＣＩ ヒト
ＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）のヌクレオチド１〜３
２０に９９％同一であった。この配列を、ヒト全胎児（９週齢）のｃＤＮＡライ
ブラリーから得た。
【０４０２】 より長い配列をｃｇ５０１３６．ｆ９のヌクレオチド１〜４８６およびＡＡ４
６０１３１のヌクレオチド３２１〜５８８からアセンブルした。７５４ヌクレオ
チドの伸長配列を引き続く分析に用いた。伸長した配列は、いくつかのウイルス
非構造タンパク質と類似性を示した：ヌクレオチド２〜４８８は、ボーダー病ウ
イルス株（ペスチウイルス３型）の非構造タンパク質Ｎｓ２−３（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号Ｕ４３６０３）のヌクレオチド１７０〜６５３と８３％同一性を示し
、そしてヌクレオチド４３〜４０６は、ウシウイルス性下痢性ウイルスのタンパ
ク質であるｐ５４、ｐ８０およびｐ１２５（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｚ５４３３
１）のヌクレオチド１７〜３７８と９０％同一性を示した。
【０４０３】 オープンリーディングフレームを、ヌクレオチド２〜５８３から翻訳し得た（
１９４アミノ酸）。Ｋｏｚａｋコンセンサス開始メチオニンを有するオープンリ
ーディングフレームを、ヌクレオチド１１〜５８３から翻訳し得た（１９１アミ
ノ酸）。これらの１９１アミノ酸は、ＬＩＰ−６と呼ばれる新規なタンパク質を
示す。ＬＩＰ−６のアミノ酸３〜１４１は、このウイルス（ペスチウイルス３型
）の非構造タンパク質Ｎｓ２−３（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４３６０３）のア
ミノ酸６４〜１９８と９２％同一性、および９３％類似性を示す。アミノ酸２８
〜１３２は、ウシウイルス性下痢性ウイルスの非構造タンパク質ｐ１２５（Ｇｅ
ｎＢａｎｋ登録番号Ｚ５４３３１）のアミノ酸２２〜１２６と９７％相同である
。公知のタンパク質ファミリーとの類似性について検索するＢＬＯＣＫＳ分析は
、１４−３−３タンパク質に対してある程度の類似性を示した（アミノ酸１５〜
６５：同一性は大文字で示す）：（Ｎ−末）ＥｆｌＳＫｌＱＤｄＬＫｅａｍｎｔ
ｍｍＣＳＲｃＱＧｋｈＲｒＦｅｍｄｒＥｐｋｓａＲＹｃＡＥｃｎｒｌｈｐＡＥ（
Ｃ−末）［配列番号４５］。従って、ＬＩＰ−６は、ウイルス非構造タンパク質
と類似性を有する新規なヒトタンパク質を示す。ＬＩＰ−６のヌクレオチド配列
およびアミノ酸配列を図７に示す。
【０４０４】 （ＬＩＰ−７（ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ａ５）） ２つの同定された配列［ｃｇ５０１３６ａ５（４４５塩基）およびｃｇ５０１
３６ｃ４（４５１塩基）］は、ＬＹＳＴ（６５８６〜７４４９）と相互作用する
。ＥＳＴ ａａ６２７０９８（ＮＣＩ＿ＣＧＡＰ＿Ｂｒ２ Ｈｓ ｃＤＮＡ４９
９ｂｐ）との整列、ｃｇ５０１３６．ａ５．ｂのヌクレオチド４４９〜１５５は
、ａａ６２７０９８のヌクレオチド２０４〜４９８と整列する（２９５ｂｐにわ
たって９２％同一）。整列は６５３ｂｐのコンティグを作成した。他の公開され
た配列のいずれに対しても有意な同一性は同定され得なかった。ヌクレオチド６
２７〜２２７は、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｈｏｍｉｎｉｓ ｖａａ（ｐ５０／付
着因子）遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＪ００１６５３）のヌクレオチド３
４２〜７３８に６２％同一であった。
【０４０５】 オープンリーディングフレームをヌクレオチド２〜５８６から翻訳し得た。こ
れらの１９５アミノ酸は、ＬＩＰ−７と呼ばれる新規なアミノ酸のＣ末端または
コア領域に対応する。ＬＩＰ−７のアミノ酸５９〜１３９は、ヒトＴ複合体タン
パク質１０Ａ（ＴＣＰ１０Ａ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕｏ３３９９）のアミ
ノ酸１６２〜４０４に対して３０％同一性、および５９％類似性を示した。ＬＩ
Ｐ−７のアミノ酸１０〜１４９は、ヒト毛硝子質（ＴＲＨＹ）遺伝子（ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号Ｌ０９１９０）のアミノ酸４０３９〜４４６１に対して２９％同
一性、および５４％類似性を示した。ＬＩＰ−７のアミノ酸６〜１８６は、ヒト
ニューロンのキネシン重鎖（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ０６６９８）のアミノ酸
２３８７〜２８９０に対して２８％同一性、および５１％類似性を示した。
【０４０６】 他の相同性（約５０％）をいくつかの細胞骨格タンパク質（例えば、ミオシン
Ｉアイソフォーム、キネシン前駆体、サイトケラチン、カルデスモン、ＮＵＦ１
、トロポミオシン、神経フィラメントタンパク質、キネシン様タンパク質ＫＩＦ
１、ミオシン様タンパク質ＭＬＰ１、トロポニンＴ）に対して、そして小胞輸送
に関するタンパク質（細胞内タンパク質輸送タンパク質、核融合タンパク質Ｂｉ
ｋ１、シナプトネマ複合体タンパク質）に対して見出した。ＢＬＯＣＫＳ分析は
、シナプス後タンパク質、ガス小胞タンパク質、クラステリン（ｃｌｕｓｔｅｒ
ｉｎ）タンパク質、クラスリン軽鎖タンパク質、トロポミオシンタンパク質およ
び中間フィラメントタンパク質に対する相同性を示した。従って、ＬＩＰ−７は
、Ｔｃｐ−１０のアミノ末端領域と相同性を有する、そして細胞骨格タンパク質
および小胞輸送タンパク質に対して相同性を有する新規なタンパク質を示す。Ｌ
ＹＳＴ相互作用体ＬＩＰ−１が、Ｔｃｐ−１０のＣ末端領域に対して類似性を示
すことは興味深い。ＬＩＰ−７のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図８に
示す。
【０４０７】 （ＬＩＰ−８（ＥＳＴ ｃｇ５０１３６．ｄ２）） ＬＹＳＴ（６５８６〜７４４９）と相互作用する２つの同定された配列（ｃｇ
５０１３６ｃ６およびｃｇ５０１３６ｄ２）は、公開された配列と有意な相同性
を示さなかった。ｃｇ５０１３６ｄ２＋と名付けられた３８６ヌクレオチドの相
互作用する配列をさらなる分析に用いた。ｃｇ５０１３６ｄ２＋のヌクレオチド
２７〜２４４は、細胞性癌遺伝子ｃ−ｆｅｓ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５２１
９２）のヒトＲＮＡのヌクレオチド１１１５〜１３３５に６９％相同であった。
【０４０８】 オープンリーディングフレームをヌクレオチド３〜３５９から翻訳し得た。こ
れらの１１９アミノ酸は、ＬＩＰ−８と呼ばれる新規なタンパク質のＣ末端また
はコア領域に対応する。公知のタンパク質に対しては弱い相同性しかみられなか
った。最強のＢｌａｓｔスコア（ＢＬＡＳＴＰを用いて６３％同一性および６３
％類似性）をＬＩＰ−８のアミノ酸３６〜５６とＯｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕ
ｎｉｃｕｌｕｓ（ウサギ）システイン富化髪ケラチン関連タンパク質（ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号Ｘ８００３５）のアミノ酸８１〜１０２との間で見出した。ＬＩ
Ｐ−８は新規なタンパク質を示す。ＬＩＰ−８のヌクレオチド配列およびアミノ
酸配列を図９に示す。
【０４０９】 （ＬＩＰ−９（ＥＳＴ ｃｇ５０１７５．ｃ１１）） ＬＹＳＴ（９５０２〜１０５９０）と相互作用する同定された１つの配列（ｃ
ｇ５０１７５ｃ１１、３２４ヌクレオチド）は、公開された発現配列と有意な同
一性を示した。ｃｇ５０１７５．ｃ１１のヌクレオチド２〜３２４は、ヒト成人
脳ｃＤＮＡライブラリーから得られた、発現された配列Ｈ５１３４７（４２８ヌ
クレオチド；Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９５、Ｗａｓｈ Ｕ−ＮＣＩ ヒトＥＳＴ
Ｐｒｏｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへ直接提出）のヌクレオチド７３〜３９４と
９６％同一であり、そしてｃｇ５０１７５．ｃ１１のヌクレオチド３４２〜４３
は、ヒト全胎児ｃＤＮＡライブラリーから得られた、発現された配列ＡＡ６２８
５６０（４６８ヌクレオチド；Ｈｉｌｌｉｅｒら、１９９７、Ｗａｓｈ Ｕ−Ｎ
ＣＩ ヒトＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃｔ、ＧｅｎＢａｎｋへ直接提出）のヌクレオチ
ド１８８〜４６８と９８％同一であった。これらの２つのＥＳＴは、ＥＳＴ Ａ
Ａ０４１６３４（９４９ヌクレオチド）およびＨ２００８２（３２２ヌクレオチ
ド）をさらに用いて伸長され得た４１８ヌクレオチド配列にアセンブルし、１２
３７のヌクレオチド配列を作成した。ヌクレオチド１０１８〜２７４は、ヒトＣ
ＡＧＨ４ ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ８０７４６）と７３％同一であ
り、そしてヌクレオチド１０８８〜５２８は、Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓの
ｅｌａｖ型リボ核タンパク質ｅｔｒ−１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１６８００
）のヌクレオチド５２３〜１０８５に６９％同一性を示した。
【０４１０】 オープンリーディングフレームを、６つのフレームのすべてにおいてこの配列
から翻訳し得る。最長ＯＲＦをフレーム３、ヌクレオチド７８〜７１６（２１３
アミノ酸）において翻訳し得た。
【０４１１】 このＯＲＦをまた、ＢｌａｓｔＸを用いて公知のタンパク質に対して最も類似
性を有するように同定した。アミノ酸７〜１８６は、Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖ
ｉｓ ｅｌａｖ型リボ核タンパク質ｅｔｒ−１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１６
８００）のアミノ酸５９〜２４８に対して６１％同一性および７５％類似性を示
し、そしてヒトｅｔｒ−３タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ６９５４６）
に対して４４％同一性そして６１％類似性を示した。ＬＩＰ−９は、リボ核タン
パク質に対して類似性を有する新規なヒトタンパク質を示す。ＬＩＰ−９のヌク
レオチドおよびアミノ酸配列を図１０に示す。
【０４１２】 （ＬＩＰ−１０（ＥＳＴ ｃｇ１５２１０６．ｆｌ１）） ＬＹＳＴ（９０３７〜９５８５）と相互作用する、７つの配列（ｃｇ１５２０
８２＿ｄ３．２７３ヌクレオチド：ｃｇ１５２１０６＿ｆｌ１．３９２ヌクレオ
チド：ｃｇ１５２１０６＿ｆ９．３６０ヌクレオチド：ｃｇ１５２１０６＿ｇ１
，２４７ヌクレオチド：ｃｇ１５２１０６＿ｇ２．３６９ヌクレオチド：ｃｇ１
５２１０６＿ｇ４，３５１ヌクレオチド：およびｃｇ１５２１０６＿ｇ５、３２
１ヌクレオチド）、（９９％同一性）を、同定した。これらの７つの配列は、３
９２ｂｐのコンティグに重複した。このコンティグは、乳児脳ライブラリー（Ｈ
ｉｌｌｉｅｒら、１９９５、ＷａｓｈＵ−ＮＣＩヒトＥＳＴ Ｐｒｏｊｅｃｔ、
ＧｅｎＢａｎｋへの直接提出）から最初に得たＥＳＴ Ｒ１７２６１（３７３ｂ
ｐ）を含んだ；コンティグのヌクレオチド１８〜３６５は、ＥＳＴ Ｒ１７２６
１のヌクレオチド１〜３４８に対して９１％同一であった。このコンティグ ｃ
ｇ１５２１０６＿ｆｌｌ＋をさらに伸長することはできなかった。コンティグｃ
ｇ１５２１０６＿ｆｌｌ＋は、ネコグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒ
ドロゲナーゼｍＲＮＡ、部分的ｃｄｓ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０５４６０
８）に対して、６０％のヌクレオチド同一性、および６０％ヌクレオチド類似性
を示した。
【０４１３】 オープンリーディングフレームを＋１フレームのヌクレオチド１〜３９０（１
３０アミノ酸）において翻訳し得た。記載したタンパク質翻訳は「ＡＴＧ」開始
メチオニンコドンで開始しないので、本発明者らは、示されるようにヌクレオチ
ド残基７８〜７１６でコードされるタンパク質配列がＣ−末端タンパク質フラグ
メントを示す（ここでＮ末端タンパク質配列は図に示されない）ことを推測する
。タンパク質配列類似性を検索するため、ＢｌａｓｔＸを用いたこのＯＲＦにつ
いての最適適合は、トリからのチロシンキナーゼＶＥＧＦＲ−３（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号ＡＦ０４１７９５）に対してであった。コンティグｃｇ１５２１０６
＿ｆｌｌ＋のアミノ酸１〜３３は、ニワトリチロシンキナーゼＶＥＧＦＲ−３の
アミノ酸３３〜６４に対して４０％同一性、そして６５％同一性であった。ＬＩ
Ｐ−１０のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を図１１に示す。
【０４１４】 本発明は、本明細書において記載される特定の実施態様による範囲内に制限さ
れるべきでない。実際、本明細書において記載される改変に加えて本発明の種々
の改変は、前記の説明および添付の図から当業者にとっては明白となる。このよ
うな改変は、前記の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【０４１５】 種々の刊行物が本明細書において引用される。この開示はその全体において参
考として援用される。
【０４１６】 （等価物） 本発明の特定の実施態様の前記の詳細な説明から、リソソームタンパク質ＬＹ
ＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびその相互作用するタンパク質のための使用の組成
物および使用方法が記載されたことが明白であるはずである。特定の実施態様が
本明細書において詳細に開示されているが、これは例示のための例としてなされ
ており、そして前記の特許請求の範囲に関して、限定されることは意図されない
。特に、種々の代用品、変更および改変が、請求項に規定される本発明の精神お
よび範囲から逸脱することなく本発明に対してなされ得ることが本発明者によっ
て意図される。例えば、フラグメント長または組み換え方法の選択は、本明細書
において記載される実施態様の知識を有する当業者について慣用的な問題である
と考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、ＬＹＳＴ−２の新規ヌクレオチド配列（配列番号１）および推定アミ
ノ酸配列（配列番号２）の図である。コード配列は、塩基３にて開始（矢印で示
す）し、そして塩基７９４で終わるコード配列、および塩基７７４で開始し（矢
印で示す）、そして塩基１４２４にて終わるコード配列を、上記の実施例におい
て記載するアッセイにおいて「ベイト（ｂａｉｔ）」として使用した。
【図２】 図２は、ＬＩＰ−Ｉのヌクレオチド配列（全長５０３ヌクレオチド、配列番号
３）およびアミノ酸配列（配列番号４）の図である。ＬＩＰ−１は、ＴＣＰ１０
Ａホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同定され
るプレイ（ｐｒｅｙ）配列は、ヌクレオチド１およびヌクレオチド５にて開始す
る（矢印で示す）。公知の配列は、開始コドンを含まない。従って、アミノ酸１
位のＩｌｅ残基を、ボールドで示す。これは、その配列が、アミノ末端の方向に
伸長するに違いないことを示す。その配列は、終止コドンを有しない。８５位で
のアミノ酸（１位Ｉｌｅ残基からの番号付け）は、ＡＡＣ（Ａｓｎ）、ＡＣＣ（
Ｔｈｒ）、ＡＧＣ（Ｓｅｒ）またはＡＴＣ（Ｉｌｅ）によってコードされ得る。
【図３】 図３は、ＬＩＰ−２のヌクレオチド配列（全長４９５ヌクレオチド、ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号ＡＡ０１０７９９）（配列番号５）およびアミノ酸配列（配列番
号６）の図である。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同定され
るプレイ配列は、塩基１、１０および２１にて開始する。
【図４】 図４は、ＬＩＰ−３のヌクレオチド配列（１１９８ヌクレオチド、配列番号７
）およびアミノ酸配列（配列番号８）の図である。ＬＩＰ−３は、ＲＯＡＺのホ
モログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同定されるプ
レイ配列は、塩基３４５にて開始する。
【図５】 図５は、ＬＩＰ−４のヌクレオチド配列（全長５２４ヌクレオチド、配列番号
９）およびアミノ酸配列（配列番号１０）の図である。ＬＩＰ−４は、ｈｎＲＮ
Ｐ−Ｅ２のホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて
同定されるプレイ配列は、塩基２にて開始する。示されるタンパク質翻訳は、「
ＡＴＧ」の開始メチオニンコドンで始まらないので、本発明者らは、示されるヌ
クレオチド残基７１〜８９８によってコードされるタンパク質配列は、Ｃ末端タ
ンパク質フラグメントを表すと推定する。ここで、Ｎ末端タンパク質配列は、図
には示されていない。
【図６】 図６は、ＬＩＰ−５のヌクレオチド配列（全長５１７ヌクレオチド、配列番号
１１）およびアミノ酸配列（配列番号１２）の図である。上記の実施例において
記載されるアッセイにおいて同定されるプレイ配列は、塩基４８にて開始する。
【図７】 図７は、ＬＩＰ−６のヌクレオチド配列（全長７５３ヌクレオチド、配列番号
１３）およびアミノ酸配列（配列番号１４）の図である。ＬＩＰ−６は、ｎｓ２
−３のホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同定
されるプレイ配列は、塩基１にて開始する。
【図８】 図８は、ＬＩＰ−７のヌクレオチド配列（全長４５１ヌクレオチド、配列番号
１５）およびアミノ酸配列（配列番号１６）の図である。ＬＩＰ−７は、ＴＣＰ
１０Ａのホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同
定されるプレイ配列は、塩基１に（矢印で示す）て開始する。
【図９】 図９は、ＬＩＰ−８のヌクレオチド配列（全長４０２ヌクレオチド、配列番号
１７）およびアミノ酸配列（配列番号１８）の図である。ＬＩＰ−８は、ＫＡＰ
４Ｌのホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同定
されるプレイ配列は、塩基１（矢印で示す）にて開始する。
【図１０】 図１０は、ＬＩＰ−９のヌクレオチド配列（全長５５４ヌクレオチド、配列番
号１９）およびアミノ酸配列（配列番号２０）の図である。ＬＩＰ−９は、ｅｔ
ｒ−１のホモログである。上記の実施例において記載されるアッセイにおいて同
定されるプレイ配列は、塩基１３８（矢印で示す）にて開始する。示されるタン
パク質翻訳は、「ＡＴＧ」の開始メチオニンコドンで始まらないので、本発明者
らは、示されるヌクレオチド残基７８〜７１６によってコードされるタンパク質
配列は、Ｃ末端タンパク質フラグメントを表すと推定する。ここで、Ｎ末端タン
パク質配列は、図には示されていない。
【図１１】 図１１は、ＬＩＰ−１０のヌクレオチド配列（全長３７３ヌクレオチド、配列
番号２１）およびアミノ酸配列（配列番号２２）の図である。ＬＩＰ−１０は、
ニワトリチロシンキナーゼのホモログである。上記の実施例において記載される
アッセイにおいて同定されるプレイ配列は、塩基１にて開始する。
【図１２】 図１２は、ＬＹＳＴ相互作用の特異性を示す。酵母ツーハイブリッド系アッセ
イの結果の行列が示される。ベイトタンパク質であるＬＹＳＴおよびＬＹＳＴ−
２を用いたアッセイの結果がカラムの上に示される。ＬＹＳＴを、２つのスクリ
ーニング（前向き（ＬＹＳＴ ＦＯＲ）および反対向き（ＬＹＳＴ ＲＥＶ）ス
クリーニング）において使用した。プレイタンパク質である、１４−３−３タン
パク質、ＨＳＩタンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫＩ、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４
、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イム
ポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ＥＲＲａ１、イモーゲン３８、アトロフィン１、ノル
ビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ−１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４
タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、
ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ１０、ＣＤＫ２、網膜芽腫、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）、ＲＧＬ−２およびベクターコントロールを、カラムの左に示す。
示されたベイトタンパク質とプレイタンパク質との間の正の相互作用を、特定の
ベイトタンパク質とプレイタンパク質との間の交差を形成するボックス中で「＋
」で示し、相互作用の欠如を、「−」にて示す。Ｎ．Ｄ．はこの試験において決
定されていないことを示す。
【図１３】 図１３は、ＬＹＳＴ２の正しいヌクレオチド配列（配列番号２３）および推定
アミノ酸配列（配列番号２４）の図である。塩基３で開始し（矢印で示す）そし
て塩基７９４で終わるコード配列および塩基７７４で開示した（矢印で示す）そ
して塩基１４２４で終わるコード配列を、上記の実施例に記載されるアッセイに
おいて「ベイト」として使用した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 35/00 31/12 37/02 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/02 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 19/00 16/18 Ｃ１２Ｎ 1/15 19/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/68 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ

Claims (88)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ＬＹＳＴタンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との精製さ
    れた複合体であって、ここで該ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質は、１４−３−３タン
    パク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＯＳ９、カ
    ゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、
    Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲａ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、Ｈ
    ＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質
    、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、
    ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群より選択される、精製された
    複合体。
  2. 【請求項２】 ＬＹＳＴ−２タンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との精
    製された複合体であって、ここで該ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質がＸＡＰ４、ＨＢ
    Ｆ−Ｇ２、および１４−３−３タンパク質からなる群より選択される、精製され
    た複合体。
  3. 【請求項３】 前記タンパク質がヒトタンパク質である、請求項１または２
    に記載の精製された複合体。
  4. 【請求項４】 ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体とＬＹＳＴ−ＩＰタン
    パク質との複合体、ＬＹＳＴタンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体との複合体、
    およびＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２の誘導体とＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体との複合
    体からなる群より選択される精製された複合体であって；ここで該ＬＹＳＴまた
    はＬＹＳＴ−２タンパク質の誘導体は、野生型ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との複
    合体を形成し得、そして該ＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体は、野生型ＬＹＳＴまたはＬ
    ＹＳＴ−２タンパク質と複合体を形成し得；そしてここで、該ＬＹＳＴ−ＩＰは
    、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、
    Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、
    トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲａ１、イモーゲン３８、
    アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ
    含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、
    ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からな
    る群より選択される、精製された複合体。
  5. 【請求項５】 前記ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質の誘導体およ
    び／または前記ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質が蛍光標識されている、請求項４に記
    載の精製された複合体。
  6. 【請求項６】 少なくとも６アミノ酸からなるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質の
    フラグメントに、共有結合を介して融合された少なくとも６アミノ酸からなるＬ
    ＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質のフラグメントを含むキメラタンパク質。
  7. 【請求項７】 前記ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質のフラグメント
    が前記ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質を結合し得るフラグメントであり、そしてここ
    で、該ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質のフラグメントが、該ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ
    −２タンパク質を結合し得るフラグメントである、請求項６に記載のキメラタン
    パク質。
  8. 【請求項８】 前記ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質のフラグメント
    とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質のフラグメントとが、ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複
    合体を形成する、請求項７に記載のキメラタンパク質。
  9. 【請求項９】 請求項１もしくは２に記載の複合体を免疫特異的に結合する
    抗体、またはそれらの結合ドメインを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体
    。
  10. 【請求項１０】 ＬＹＳＴ：ＬＹＳＴ−ＩＰ複合体の一部ではない、ＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質も、ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質も免疫特異的
    に結合しない、請求項９に記載の抗体。
  11. 【請求項１１】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質をコードするヌ
    クレオチド配列、および以下からなる群：１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タン
    パク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイン
    キナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ
    −ｌ、ｈＥＲＲａ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−
    Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
    Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
    ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群より選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタン
    パク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸またはそれらの組
    み合わせ。
  12. 【請求項１２】 核酸ベクターである、請求項１１に記載の単離された核酸
    またはその組み合わせ。
  13. 【請求項１３】 前記ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質コード配列お
    よび前記ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質コード配列がプロモーターに作動可能に連結
    されている、請求項１２に記載の単離された核酸またはその組み合わせ。
  14. 【請求項１４】 請求項８に記載のキメラタンパク質をコードするヌクレオ
    チド配列を含む、単離された核酸。
  15. 【請求項１５】 組み換えられている請求項１１に記載の核酸を含む、細胞
    。
  16. 【請求項１６】 組み換えられている請求項１３に記載の核酸を含む、細胞
    。
  17. 【請求項１７】 組み換えられている請求項１４に記載の核酸を含む、組み
    換え細胞。
  18. 【請求項１８】 ＬＹＳＴ−２、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
    、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、およびＬＩＰ９からなる群より選
    択される、精製されたタンパク質。
  19. 【請求項１９】 ヒトタンパク質である、請求項１８に記載のタンパク質。
  20. 【請求項２０】 配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列
    番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番
    号２０、配列番号２２、および配列番号２４からなる群より選択されるアミノ酸
    配列を含む、請求項１９に記載のタンパク質。
  21. 【請求項２１】 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列
    番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号
    １９、配列番号２１および配列番号２３からなる群より選択されるヌクレオチド
    配列の一部からなるヌクレオチド配列を有するＤＮＡの逆相補物にハイブリダイ
    ズし得る核酸によってコードされた精製されたタンパク質。
  22. 【請求項２２】 ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２を結合し得る、請求項１８に
    記載のタンパク質の精製された誘導体またはアナログ。
  23. 【請求項２３】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、Ｌ
    ＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、およびＬＩＰ９からなる群より選択されたタンパ
    ク質に対する抗体によって結合され得る、請求項２２に記載の誘導体またはアナ
    ログ。
  24. 【請求項２４】 前記タンパク質の少なくとも６アミノ酸部分を含む、請求
    項１８に記載のタンパク質の精製されたフラグメント。
  25. 【請求項２５】 請求項１８に記載のタンパク質と少なくとも６０％の同一
    性を有するアミノ酸配列を含む精製されたタンパク質であって、ここで、該同一
    性パーセントが、請求項１８に記載のタンパク質と同一のサイズのアミノ酸配列
    に対して決定される、精製されたタンパク質。
  26. 【請求項２６】 請求項１８に記載のタンパク質のフラグメントを含むキメ
    ラタンパク質であって、該フラグメントが、第２のタンパク質のアミノ酸配列に
    共有結合を介して融合された、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩ
    Ｐ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、およびＬＩＰ９の少なくとも６アミノ酸
    からなり、ここで該第２のタンパク質は、請求項１８に記載のタンパク質ではな
    い、キメラタンパク質。
  27. 【請求項２７】 請求項１８に記載のタンパク質を免疫特異的に結合する抗
    体、またはそれらの結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体。
  28. 【請求項２８】 請求項１８に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド
    配列を含む単離された核酸。
  29. 【請求項２９】 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列
    番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号
    １９、配列番号２１、および配列番号２３のヌクレオチド配列を含む、単離され
    た核酸。
  30. 【請求項３０】 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列
    番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号
    １９、配列番号２１、および配列番号２３のヌクレオチド配列の一部からなるヌ
    クレオチド配列を有するＤＮＡの逆相補物にハイブリダイズし得る単離された核
    酸。
  31. 【請求項３１】 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列
    番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号
    １９、配列番号２１、および配列番号２３のヌクレオチド配列の一部を含む単離
    された核酸であって、該核酸が、少なくとも１０のヌクレオチド配列を含む、単
    離された核酸。
  32. 【請求項３２】 組み換えられている、請求項２８に記載の核酸を含む、細
    胞。
  33. 【請求項３３】 請求項１または２に記載の複合体の治療的または予防的に
    有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  34. 【請求項３４】 前記タンパク質がヒトタンパク質である、請求項３３に記
    載の薬学的組成物。
  35. 【請求項３５】 請求項４に記載の複合体の治療的または予防的に有効な量
    、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  36. 【請求項３６】 請求項６に記載のキメラタンパク質の治療的または予防的
    に有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  37. 【請求項３７】 請求項７に記載のキメラタンパク質の治療的または予防的
    に有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  38. 【請求項３８】 請求項９に記載の抗体またはその結合ドメインを含む該抗
    体のフラグメントもしくは誘導体の治療的または予防的に有効な量、および薬学
    的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  39. 【請求項３９】 請求項１０に記載の抗体またはその結合ドメインを含む該
    抗体のフラグメントもしくは誘導体の治療的または予防的に有効な量、および薬
    学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  40. 【請求項４０】 請求項１１に記載の核酸またはその組み合わせの治療的ま
    たは予防的に有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成
    物。
  41. 【請求項４１】 請求項１４に記載の単離された核酸の治療的または予防的
    に有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  42. 【請求項４２】 請求項１５に記載の組み換え細胞の治療的または予防的に
    有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  43. 【請求項４３】 請求項１６に記載のタンパク質の治療的または予防的に有
    効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  44. 【請求項４４】 前記タンパク質が、配列番号２、配列番号４、配列番号６
    、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配
    列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、および配列番号２４に記載されるア
    ミノ酸配列を含む、請求項４２に記載の薬学的組成物。
  45. 【請求項４５】 請求項２７に記載の抗体またはその結合ドメインを含む該
    抗体のフラグメントもしくは誘導体の治療的または予防的に有効な量、および薬
    学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
  46. 【請求項４６】 請求項１８に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド
    配列を含む核酸の治療的または予防的に有効な量、および薬学的に受容可能なキ
    ャリアを含む、薬学的組成物。
  47. 【請求項４７】 請求項２８に記載の組み換え核酸を含む細胞の治療的また
    は予防的に有効な量、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物
    。
  48. 【請求項４８】 ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰ
    タンパク質との複合体を生成する方法であって、該方法は、請求項１１に記載の
    核酸を含む組み換え細胞を増殖して、その結果、コードされたＬＹＳＴまたはＬ
    ＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質が発現され、互いに結合する工程、
    および該ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２タンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質と
    の発現された複合体を回収する工程、を包含する、方法。
  49. 【請求項４９】 ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、Ｌ
    ＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、およびＬＩＰ９からなる群より選択されるタンパ
    ク質を生成する方法であって、該方法は、該タンパク質をコードする組み換え核
    酸を含む細胞を増殖して、その結果、コードされたタンパク質が発現される工程
    、および該発現されたタンパク質を回収する工程を包含する、方法。
  50. 【請求項５０】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２タンパク質とＬＹＳＴ−Ｉ
    Ｐタンパク質との複合体の異常なレベルによって特徴づけられる、被験体におけ
    る疾患もしくは障害の発症の存在またはそれについての素因を診断またはスクリ
    ーニングする方法であって、ここで、該ＬＹＳＴ−ＩＰは、１４−３−３タンパ
    ク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、
    ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポ
    ルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノル
    ビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タ
    ンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、Ｌ
    ＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群より選択され、該方
    法が、該複合体、該ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク
    質をコードするＲＮＡ、または該被験体に由来するサンプル中の該複合体の機能
    的活性のレベルを測定する工程を包含し、ここで、該疾患もしくは障害、または
    該疾患または障害の発症についての素因を有さない類似のサンプル中に見出され
    る、該複合体、該ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質
    をコードするＲＮＡ、または該複合体の機能的活性のレベルと比較した、該サン
    プル中の該複合体、該ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰをコー
    ドするＲＮＡ、または該複合体の機能的活性のレベルの増加または減少が、該疾
    患もしくは障害の存在または該疾患もしくは障害の発症についての素因を示す、
    方法。
  51. 【請求項５１】 被験体におけるＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
    、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、およびＬＩＰ９タンパク質もしく
    はＲＮＡからなる群より選択されるタンパク質もしくはＲＮＡの異常なレベルに
    よって特徴づけられる、疾患もしくは障害の発症の存在またはそれについての素
    因を診断あるいはスクリーニングする方法であって、該方法は、該被験体に由来
    するサンプル中の該タンパク質、該ＲＮＡまたは該タンパク質の機能的活性のレ
    ベルを測定する工程を包含し、ここで、該疾患もしくは障害、または該疾患また
    は障害の発症についての素因を有さない類似のサンプル中に見出される、該タン
    パク質、該ＲＮＡまたは該機能的活性のレベルと比較した、該サンプル中の該タ
    ンパク質、該ＲＮＡまたは該機能的活性のレベルの増加または減少が、該疾患も
    しくは障害の存在または該疾患もしくは障害の発症についての素因を示す、方法
    。
  52. 【請求項５２】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合
    体、該複合体に対する抗体、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２のＲＮＡおよび該Ｌ
    ＹＳＴ−ＩＰのＲＮＡにハイブリダイズし得る核酸プローブ、あるいはＬＹＳＴ
    もしくはＬＹＳＴ−２の遺伝子または該ＬＹＳＴ−ＩＰの遺伝子の少なくとも一
    部の増幅をプライムし得る一対の核酸プライマーからなる群より選択される物質
    を含む、１つ以上の容器を含むキットであって、ここで、該ＬＹＳＴ−ＩＰは、
    １４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅ
    ｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、ト
    ロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アト
    ロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有
    タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩ
    Ｐ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群
    より選択される、キット。
  53. 【請求項５３】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合
    体の異常なレベルと関連する、被験体における疾患または障害を処置または予防
    する方法であって、ここで該ＬＹＳＴ−ＩＰは、１４−３−３タンパク質、ＨＳ
    １タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カ
    ゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、
    Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢ
    Ｆ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、
    ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、Ｌ
    ＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群より選択され、該方法は、該複
    合体の機能を調整する分子の治療的に有効な量を、このような処置または予防が
    所望される被験体に投与する工程を包含する、方法。
  54. 【請求項５４】 前記疾患または障害は、前記複合体の低下したレベルと関
    連し、そして前記分子は、野生型複合体より、より安定か、またはより活性であ
    るＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体の機能を促進し、
    かつＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体；ＬＹＳＴもし
    くはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合体の誘導体またはアナログ；ＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質をコードする核酸；および
    野生型複合体より、より安定か、またはより活性である複合体を形成するＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰの誘導体またはアナログをコードする
    核酸からなる群より選択される、請求項５３に記載の方法。
  55. 【請求項５５】 前記疾患または障害が、前記複合体の増加したレベルに関
    連し、そして前記分子が該複合体の機能を阻害し、かつ該複合体に対する抗体ま
    たはその結合領域を含むそのフラグメントもしくは誘導体；ＬＹＳＴもしくはＬ
    ＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰのアンチセンス核酸；ならびに異種ヌクレオチ
    ド配列がＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の少なくと
    も一部分の生物学的活性を不活化するように、該異種配列が挿入されたＬＹＳＴ
    もしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の少なくとも一部分を含む核
    酸からなる群より選択され、ここで、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹ
    ＳＴ−ＩＰ遺伝子の一部分が、ゲノムのＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬ
    ＹＳＴ−ＩＰ遺伝子との相同組換えを促進するように該異種配列と隣接する、請
    求項５３に記載の方法。
  56. 【請求項５６】 被験体におけるＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４
    、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９およびＬＩＰ１０からな
    る群より選択されるＬＹＳＴ−ＩＰの異常なレベルに関連する、疾患もしくは障
    害を処置または予防する方法であって、該方法は、該ＬＹＳＴ−ＩＰの機能を調
    整する分子の治療的に有効な量を、このような処置または予防が所望される被験
    体に投与する工程を包含する、方法。
  57. 【請求項５７】 前記疾患または障害が、ＬＹＳＴ−ＩＰの低減したレベル
    に関連し、そして前記分子がＬＹＳＴ−ＩＰの機能を促進し、かつＬＹＳＴ−Ｉ
    Ｐタンパク質、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２を結合する際に活性なＬＹＳＴ−
    ＩＰの誘導体またはアナログ、該ＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質をコードする核酸、
    およびＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２を結合する際に活性なＬＹＳＴ−ＩＰの誘
    導体またはアナログをコードする核酸からなる群より選択される、請求項５６に
    記載の方法。
  58. 【請求項５８】 前記疾患または障害が、ＬＹＳＴ−ＩＰの増加したレベル
    に関連し、そして前記分子がＬＹＳＴ−ＩＰの機能を阻害し、かつ抗ＬＹＳＴ−
    ＩＰ抗体またはその結合領域を含むフラグメントもしくは誘導体、ＬＹＳＴ−Ｉ
    Ｐアンチセンス核酸、および異種ヌクレオチド配列が該ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の
    少なくとも一部分の生物学的活性を不活化するように、該異種配列が挿入された
    ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の少なくとも一部分を含む核酸からなる群より選択され、
    ここで、該ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の一部分は、ゲノムのＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子と
    の相同組換えを促進するように、該異種配列と隣接する、請求項５６に記載の方
    法。
  59. 【請求項５９】 アトピー性障害を処置あるいは予防することにおける活性
    のための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１
    タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼ
    インキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆ
    ｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ
    −Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、Ｌ
    ＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩ
    Ｐ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群より選択されるＬＹＳＴ−ＩＰと
    の精製された複合体、または該複合体の誘導体、もしくは該複合体の活性のモジ
    ュレーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、該複合体、誘導体も
    しくはモジュレーターと、インビトロでアトピー性障害の指標を示す培養された
    細胞とを接触させる工程；および該複合体、該誘導体、もしくは該モジュレータ
    ーと接触された該細胞における該指標のレベルと、それを接触されていない細胞
    における該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触された細胞
    におけるより低いレベルは、該複合体、該誘導体もしくは該モジュレーターがア
    トピー性障害を処置あるいは予防することにおける活性を有することを示す、方
    法。
  60. 【請求項６０】 自己免疫障害を処置あるいは予防することにおける活性の
    ための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タ
    ンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイ
    ンキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔ
    ｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−
    Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
    Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
    ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの
    精製された複合体、または該複合体の誘導体、もしくは該複合体の活性のモジュ
    レーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、該複合体、誘導体もし
    くは該モジュレーターと、インビトロで自己免疫障害の指標を示す培養された細
    胞とを接触させる工程；および該複合体、該誘導体、もしくは該モジュレーター
    と接触された該細胞における該指標のレベルと、それを接触されていない細胞に
    おける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触された細胞に
    おけるより低いレベルは、複合体、誘導体またはモジュレーターが自己免疫障害
    を処置あるいは予防することにおける活性を有することを示す、方法。
  61. 【請求項６１】 神経変性障害を処置あるいは予防することにおける活性の
    ための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タ
    ンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイ
    ンキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔ
    ｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−
    Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
    Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
    ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの
    精製された複合体、または該複合体の誘導体、もしくは該複合体の活性のモジュ
    レーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、該複合体、誘導体もし
    くはモジュレーターと、インビトロで神経変性障害の指標を示す培養された細胞
    とを接触させる工程；および該複合体、該誘導体、もしくは該モジュレーターと
    接触された該細胞における該指標のレベルと、それを接触されていない細胞にお
    ける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触された細胞にお
    けるより低いレベルは、該複合体、誘導体もしくはモジュレーターが神経変性障
    害を処置あるいは予防することにおける活性を有することを示す、方法。
  62. 【請求項６２】 抗癌活性のための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１
    ４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆ
    ｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロ
    ポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロ
    フィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タ
    ンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ
    ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群か
    ら選択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの精製された複合体、または該複合体の誘導体、
    もしくは該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、
    該方法は、悪性障害に由来し、そしてそれと関連する特徴を示す細胞株の細胞の
    生存または増殖を測定する工程であって、該細胞が該複合体、該複合体の誘導体
    もしくはモジュレーターと接触されている工程；および該複合体、誘導体もしく
    はモジュレーターと接触された細胞における該生存または増殖と、それを接触さ
    れていない細胞の該生存または増殖とを比較する工程を包含し、ここで、該接触
    された細胞におけるより低いレベルが該複合体、誘導体もしくはモジュレーター
    が抗腫瘍活性を有することを示す、方法。
  63. 【請求項６３】 抗癌活性のための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１
    ４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆ
    ｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロ
    ポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロ
    フィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タ
    ンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ
    ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群か
    ら選択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの精製された複合体、または該複合体の誘導体、
    もしくは該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、
    該方法は、該複合体、誘導体もしくはモジュレーターを、腫瘍を有するか、また
    は腫瘍を有さずかつ引き続いて腫瘍細胞もしくは腫瘍形成性因子でチャレンジさ
    れる試験動物に投与する工程；および該試験動物における腫瘍増殖または腫瘍後
    退を測定する工程を包含し、ここで、それを投与されていない試験動物と比較し
    て、該複合体、誘導体もしくはモジュレーターを投与された試験動物における、
    腫瘍増殖の低減または増加した腫瘍後退もしくは腫瘍増殖の予防が、該複合体、
    誘導体もしくはモジュレーターが抗癌活性を有することを示す、方法。
  64. 【請求項６４】 色素沈着障害を処置あるいは予防することにおける活性の
    ための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タ
    ンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイ
    ンキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔ
    ｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−
    Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
    Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
    ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの
    精製された複合体、または該複合体の誘導体、もしくは該複合体の活性のモジュ
    レーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、該複合体、誘導体もし
    くはモジュレーターと、インビトロで色素沈着反応の指標を示す培養された細胞
    とを接触させる工程；および該複合体、該誘導体、もしくは該モジュレーターと
    接触された該細胞における該指標のレベルと、それを接触されていない細胞にお
    ける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触された細胞にお
    けるより低いレベルは、該複合体、誘導体もしくはモジュレーターが色素沈着障
    害または色素沈着障害関連疾患を処置あるいは予防することにおける活性を有す
    ることを示す、方法。
  65. 【請求項６５】 出血傾向を含む血小板機能不全を処置あるいは予防するこ
    とにおける活性のための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タン
    パク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４
    、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イム
    ポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノ
    ルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４
    タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、
    ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬ
    ＹＳＴ−ＩＰとの精製された複合体、または該複合体の誘導体、もしくは該複合
    体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、該複
    合体、誘導体もしくはモジュレーターを、血小板機能不全を示すか、または血小
    板機能不全を示さずかつ引き続いて血小板機能不全を誘発する因子でチャレンジ
    される試験動物に投与する工程；および該複合体、誘導体もしくはモジュレータ
    ーを投与した後に該血小板機能不全の変化を測定する工程を包含し、ここで該血
    小板機能不全の低減または該血小板機能不全の予防は、該複合体、誘導体もしく
    はモジュレーターが血小板機能不全もしくは血小板機能不全関連疾患を処置ある
    いは予防することにおける活性を有することを示す、方法。
  66. 【請求項６６】 ウイルス感染およびウイルス感染関連疾患を処置あるいは
    予防することにおける活性のための、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−
    ３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、
    ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニ
    ンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィ
    ン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパ
    ク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、
    ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選
    択されるＬＹＳＴ−ＩＰとの精製された複合体、または該複合体の誘導体、もし
    くは該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、該方
    法は、該複合体、誘導体もしくはモジュレーターを、ウイルス感染の徴候を示す
    か、またはウイルス感染の徴候を発生しやすい試験動物に投与する工程；および
    該複合体、誘導体もしくはモジュレーターを投与した後に該ウイルス感染の徴候
    の変化を測定する工程を包含し、ここで該ウイルス感染の徴候の重篤度の低減ま
    たは該ウイルス感染の徴候の予防は、該複合体、誘導体もしくはモジュレーター
    がウイルス感染を処置あるいは予防することにおける活性を有することを示す、
    方法。
  67. 【請求項６７】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ−ＩＰとの複合
    体の形成を直接的にまたは間接的に調整する分子をスクリーニングする方法であ
    って、ここで該ＬＹＳＴ−ＩＰが、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質
    、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナー
    ゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、
    ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、Ｄ
    ＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、Ｌ
    ＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩ
    Ｐ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択され、該方法は、該複合体の形成を
    助ける条件下で、該分子の存在下で、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とＬＹＳＴ
    −ＩＰタンパク質から形成された該複合体のレベルを測定する工程；および該複
    合体のレベルと、該分子の非存在下で形成された該複合体のレベルとを比較する
    工程を包含し、ここで該分子の存在下における該複合体のより低いもしくはより
    高いレベルは、該分子が該複合体の形成を調整することを示す、方法。
  68. 【請求項６８】 組み換え非ヒト動物であって、ここで、内因性ＬＹＳＴも
    しくはＬＹＳＴ−２遺伝子と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈ
    ｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩ
    ＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥ
    ＲＲａ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧ
    Ｓ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩ
    Ｐ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ
    ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択される内因性ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の
    両方が、該動物あるいはその子孫の相同組換えもしくは挿入変異により欠失され
    たか、またはそれにより不活化された、組み換え非ヒト動物。
  69. 【請求項６９】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２遺伝子と、１４−３−３タ
    ンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−
    ４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イ
    ムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、
    ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ
    ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６
    、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択される
    ＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子の両方を含む組み換え非ヒト動物であって、ここで、該Ｌ
    ＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２遺伝子が、天然のＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２遺
    伝子のプロモーターではないプロモーターの制御下にあり、そして該ＬＹＳＴ−
    ＩＰ遺伝子が天然のＬＹＳＴ−ＩＰ遺伝子のプロモーターではないプロモーター
    の制御下にある、組み換え非ヒト動物。
  70. 【請求項７０】 請求項８に記載のキメラタンパク質をコードする核酸配列
    を含むトランスジーンを含む、組み換え非ヒト動物。
  71. 【請求項７１】 配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３
    ５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５
    、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５３のヌクレオチド配
    列を含むトランスジーンを含む、組み換え非ヒト動物。
  72. 【請求項７２】 １４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、Ｂ
    ＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ
    、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、
    イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、Ｇ
    ＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
    Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、および
    ＬＩＰ１０からなる群から選択されるタンパク質、該タンパク質を核酸コードす
    る核酸、あるいは該タンパク質を免疫特異的に結合する抗体またはその結合ドメ
    インを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体を、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
    −２遺伝子を発現する細胞と接触させるか、あるいはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
    −２遺伝子を発現する動物に投与することによって、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
    −２の活性またはレベルを調整する方法。
  73. 【請求項７３】 １４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、Ｂ
    ＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ
    、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、
    イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、Ｇ
    ＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
    Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、および
    ＬＩＰ１０からなる群から選択されるタンパク質の活性またはレベルを調整する
    方法であって、該方法は、ＬＹＳＴ、もしくはＬＹＳＴ−２、またはＬＹＳＴも
    しくはＬＹＳＴ−２をコードする核酸、またはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２を
    免疫特異的に結合する抗体またはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメント
    もしくは誘導体を、該タンパク質をコードする遺伝子を発現する細胞と接触させ
    るか、あるいは該タンパク質をコードする遺伝子を発現する動物に投与すること
    によって、該タンパク質の活性またはレベルを調整する方法。
  74. 【請求項７４】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク
    質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、Ｏ
    Ｓ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポル
    チンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビ
    ン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タン
    パク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩ
    Ｐ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるタンパ
    ク質との複合体の活性またはレベルを調整する方法であって、該方法は、該複合
    体の形成を調整する分子を、細胞と接触させるか、あるいは該複合体を発現しか
    つ形成する動物に投与することによって、該複合体の活性またはレベルを調整す
    る方法。
  75. 【請求項７５】 ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２、または１４−３−３タン
    パク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４
    、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イム
    ポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノ
    ルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４
    タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、
    ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるタ
    ンパク質、あるいはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と該タンパク質との複合体の
    活性を調整する分子を同定する方法であって、該方法は、該タンパク質の存在下
    で１つ以上の候補分子と、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とを接触させる工程；
    およびＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と該タンパク質との間で形成する複合体の
    量を測定する工程を包含し、ここで、該候補分子の非存在下で形成する量と比較
    して、形成する複合体の量の増加または減少は、該分子がＬＹＳＴもしくはＬＹ
    ＳＴ−２または該タンパク質あるいはＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と該タンパ
    ク質との複合体の活性を調整することを示す、方法。
  76. 【請求項７６】 前記接触工程が、前記候補分子を請求項６８に記載の組み
    換え非ヒト動物に投与することによって行われる、請求項７４に記載の方法。
  77. 【請求項７７】 前記接触工程がインビトロで行われ、そしてＬＹＳＴもし
    くはＬＹＳＴ−２、前記タンパク質および前記候補分子が精製されている、請求
    項７５に記載の方法。
  78. 【請求項７８】 生物学的活性についてのＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２の
    誘導体またはアナログをスクリーニングする方法であって、該方法は、該ＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２の誘導体またはアナログと、１４−３−３タンパク質、
    ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９
    、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチン
    β、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、
    ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク
    質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７
    、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるタンパク質
    とを接触させる工程；ならびに該ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２の誘導体または
    アナログと該タンパク質との間の複合体の形成を検出する工程を包含し；ここで
    、該複合体の形成を検出することは、該ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２の誘導体
    またはアナログが生物学的活性を有することを示す、方法。
  79. 【請求項７９】 生物学的活性についての、１４−３−３タンパク質、ＨＳ
    １タンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カ
    ゼインキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、
    Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢ
    Ｆ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、
    ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、Ｌ
    ＩＰ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるタンパク質の誘
    導体またはアナログをスクリーニングする方法であって、該方法は、該タンパク
    質の誘導体またはアナログと、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２とを接触させる工
    程；および該タンパク質の誘導体またはアナログと、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ
    −２との間の複合体の形成を検出する工程であって；ここで、該複合体の形成を
    検出することは、該タンパク質の誘導体またはアナログが生物学的活性を有する
    ことを示す、方法。
  80. 【請求項８０】 疾患または障害の処置を施された被験体におけるＬＹＳＴ
    もしくはＬＹＳＴ−２タンパク質とＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との複合体の異常
    なレベルによって特徴づけられる該疾患または障害の処置の有効性をモニタリン
    グする方法であって、該方法は、該複合体、該ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２お
    よびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質をコードするＲＮＡ、または該被験体に由来する
    サンプル中の該複合体の機能的活性のレベルを測定する工程を包含し、ここで、
    該サンプルは、該処置が施された後に該被験体から採取され、そして（ａ）該処
    置を施す前の該被験体から採取されたサンプル中の該レベルまたは（ｂ）該疾患
    または障害の前処置段階と関連する標準的なレベルと比較され、ここで、該複合
    体、該ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質をコード
    するＲＮＡ、または該処置が施される前に採取された該サンプル中の該複合体の
    機能的活性のレベルの変化または標準的レベルと比較して、該複合体、該ＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２およびＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質をコードするＲＮＡ、
    または該処置が施された後に採取された該サンプル中の該複合体の機能的活性の
    レベルの変化または変化の欠如は、該施しが該疾患または障害を処置するために
    有効であるか否かを示す、方法。
  81. 【請求項８１】 被験体におけるアトピー性障害を処置または予防する方法
    であって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験体に、ＬＹＳ
    ＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒ
    ｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩ
    βＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲ
    Ｒ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−
    Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２
    、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、
    およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との複合
    体の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わせの治療的に
    有効な量を投与する工程を包含する、方法。
  82. 【請求項８２】 被験体における自己免疫疾患を処置または予防する方法で
    あって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験体に、ＬＹＳＴ
    もしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ
    、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβ
    ＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ
    １、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ
    、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
    ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、お
    よびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との複合体
    の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わせの治療的に有
    効な量を投与する工程を包含する、方法。
  83. 【請求項８３】 被験体における神経変性疾患を処置または予防する方法で
    あって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験体に、ＬＹＳＴ
    もしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ
    、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβ
    ＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ
    １、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ
    、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、
    ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、お
    よびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質との複合体
    の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わせの治療的に有
    効な量を投与する工程を包含する、方法。
  84. 【請求項８４】 被験体における癌または過剰増殖性障害を処置または予防
    する方法であって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験体に
    、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク
    質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナ
    ーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ
    、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、
    ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、
    ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、Ｌ
    ＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパク質
    との複合体の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わせの
    治療的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。
  85. 【請求項８５】 被験体における色素沈着障害または関連疾患を処置または
    予防する方法であって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験
    体に、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タン
    パク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイン
    キナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ
    −ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ
    ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ
    １、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
    、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパ
    ク質との複合体の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わ
    せの治療的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。
  86. 【請求項８６】 被験体における血小板機能不全または関連疾患を処置また
    は予防する方法であって、該方法は、このような処置または予防が所望される被
    験体に、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タ
    ンパク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイ
    ンキナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔ
    ｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−
    Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩ
    Ｐ１、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ
    ８、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタン
    パク質との複合体の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合
    わせの治療的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。
  87. 【請求項８７】 被験体におけるウイルス感染または関連疾患を処置または
    予防する方法であって、該方法は、このような処置または予防が所望される被験
    体に、ＬＹＳＴもしくはＬＹＳＴ−２と、１４−３−３タンパク質、ＨＳ１タン
    パク質、Ｈｒｓ、ＢＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼイン
    キナーゼＩＩβＳＵ、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ
    −ｌ、ｈＥＲＲ１、イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ
    ２、ＤＧＳ−Ｉ、ＧＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ
    １、ＬＩＰ２、ＬＩＰ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８
    、ＬＩＰ９、およびＬＩＰ１０からなる群から選択されるＬＹＳＴ−ＩＰタンパ
    ク質との複合体の機能を調整する分子、または前述の任意の１つ以上の組み合わ
    せの治療的に有効な量を投与する工程を包含する、方法。
  88. 【請求項８８】 １４−３−３タンパク質、ＨＳ１タンパク質、Ｈｒｓ、Ｂ
    ＭＫ１、ＫＢ０７、Ｅｆｓ、ＸＡＰ−４、ＯＳ９、カゼインキナーゼＩＩβＳＵ
    、カルモジュリン、トロポニンＩ、イムポルチンβ、Ｆｔｅ−ｌ、ｈＥＲＲ１、
    イモーゲン３８、アトロフィン−１、ノルビン、ＨＢＦ−Ｇ２、ＤＧＳ−Ｉ、Ｇ
    ＢＤＲ１、ＯＰＡ含有タンパク質、Ｍ４タンパク質、ＬＩＰ１、ＬＩＰ２、ＬＩ
    Ｐ３、ＬＩＰ４、ＬＩＰ５、ＬＩＰ６、ＬＩＰ７、ＬＩＰ８、ＬＩＰ９、および
    ＬＩＰ１０からなる群から選択され、ＬＹＳＴまたはＬＹＳＴ−２を結合するタ
    ンパク質の精製されたフラグメント。
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