JP2002518333A

JP2002518333A - 転写因子ＮＦ−κＢの阻害剤

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Publication number: JP2002518333A
Application number: JP2000554375A
Authority: JP
Inventors: ジェイムズ・エフ・キャラハン; マリー・シー・チャボット−フレッチャー
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1998-06-19
Filing date: 1999-06-18
Publication date: 2002-06-25
Also published as: BR9911151A; PL345577A1; ZA200007448B; EP1085872A4; HUP0102492A2; AR019871A1; AU4699699A; CA2335293A1; WO1999065495A1; CO5080752A1; IL140324A0; KR20010052990A; CN1306428A; CZ20004760A3; EP1085872A1; NO20006452D0; NO20006452L; TR200003779T2

Abstract

(57)【要約】本発明は転写因子ＮＦ−κＢのアミノインダノン阻害剤およびその医薬上許容される塩、水和物および溶媒和物、かかる化合物の医薬組成物、およびＮＦ−κＢの活性化が関与する疾患の治療法を提供する。さらに詳しくは、本発明は、炎症性障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患および喘息；皮膚病、例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎；自己免疫疾患；組織および器官拒絶反応；アルツハイマー病；発作；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；ホジキン病を含む、癌；およびある種のウイルス性感染、例えば、ＡＩＤＳ；骨関節炎；骨粗鬆症；および毛細血管拡張性運動失調を含む、ＮＦ−κＢの活性化に付随する種々の疾患の治療法であって、本発明の化合物をその治療を必要とする患者に投与することによる方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（技術分野）本発明は、一般に、アミノインダノンを用いる、転写因子ＮＦ−κＢの阻害方
法に関する。かかる化合物は、ＮＦ−κＢの活性化が関与する疾患の治療に特に
有用である。さらに詳しくは、これらの化合物はＩκＢリン酸化およびその後の
分解を阻害する。かかる化合物は、炎症性障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性
腸疾患および喘息；皮膚病、例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎；自己免疫疾
患；組織および器官拒絶反応；アルツハイマー病；発作；アテローム性動脈硬化
症；再狭窄；ホジキン病を含む、癌；およびある種のウイルス性感染、例えば、
ＡＩＤＳ；骨関節炎；骨粗鬆症；および毛細血管拡張性運動失調を含む、ＮＦ−
κＢの活性化に付随する種々の疾患の治療に有用である。

【０００２】（背景技術）急性および慢性の炎症性疾患ならびに癌に関与する伝達物質の科学的理解にお
ける最近の進歩は、効果的な療法を探し出すのに新しい方法をもたらした。伝統
的な解決方法は、特異的抗体、受容体アンタゴニストまたは酵素阻害剤を使用す
るなどの、直接標的の介入を包含する。種々の伝達物質の転写および翻訳に関与
する調節機構が解明されるという最近の進歩により、遺伝子転写のレベルに向け
られる治療法に関心が増大した。ＮＦ−κＢは、Ｒｅｌ／ＮＦ−κＢファミリーのポリペプチドを種々組み合わ
せてなる、密接に関連する二量体転写因子の複合体のファミリーに属する。この
ファミリーは、哺乳動物における５種の個々の遺伝子産物、ＲｅｌＡ（ｐ６５）
、ＮＦ−κＢ１（ｐ５０／ｐ１０５）、ＮＦ−κＢ２（ｐ４９／ｐ１００）、ｃ
−ＲｅｌおよびＲｅｌＢからなり、そのすべてが異種または同種二量体を形成す
ることができる。これらの蛋白は、ＤＮＡ結合ドメインおよび二量化ドメインを
含有する、極めて相同的な３００個のアミノ酸「Ｒｅｌ相同性ドメイン」を共有
する。その先端にある、Ｒｅｌ相同性ドメインのＣ−末端は、ＮＦ−κＢが細胞
質から核に移動するのに重要な核転座配列である。加えて、ｐ６５およびｃＲｅ
ｌは、そのＣ−末端に強力なトランス活性化ドメインを有する。

【０００３】ＮＦ−κＢの活性は、阻害剤ＩκＢファミリーの蛋白のメンバーとの相互作用
により調節される。この相互作用はＮＦ−κＢ蛋白にある核転座配列を効果的に
遮断し、その二量体が核に移動することを妨げる。多種の刺激が多数のシグナル
形質導入経路であると思われる経路を介してＮＦ−κＢを活性化する。細菌性産
物（ＬＰＳ）、ある種のウイルス（ＨＩＶ−１、ＨＴＬＶ−１）、炎症性サイト
カイン（ＴＮＦκ、ＩＬ−１）および環境性ストレスが含まれる。しかしながら
、ＩκＢのリン酸化、その後の分解がすべての刺激に共通していることは明らか
である。ＩκＢは、最近同定されたＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ−αおよびＩＫＫ−
β）により２つのＮ−末端セリンでリン酸化される。位置指定突然変異実験は、
蛋白は一旦リン酸化されると、ユビキチン−プロテアサム経路を介する分解のた
め衰える点で、これらのリン酸化がその後のＮＦ−κＢの活性化に臨界的である
ことを示している。ＩκＢのない、活性なＮＦ−κＢ複合体は、その複合体が選
択的に好ましい遺伝子特異的エンハンサー配列に結合する、核酸へ転座すること
ができる。多くのサイトカイン、細胞接着分子および急性期蛋白が、ＮＦ−κＢ
により制御される遺伝子に含まれる。

【０００４】ＮＦ−κＢが、サイトカイン、例えば、ＩＬ−６およびＩＬ−８、細胞接着分
子、例えば、ＩＣＡＭおよびＶＣＡＭ、誘導酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）を
含む、大多数のプロ炎症性伝達物質の発現の制御に重要な役割を果たすことがよ
く知られている。かかる伝達物質が炎症部位での白血球の補充に一の役割を果た
すことが知られており、ｉＮＯＳの場合には、ある種の炎症性疾患および自己免
疫疾患にて器官破壊をもたらす可能性がある。ＮＦ−κＢの炎症性障害における重要性が、ＮＦ−κＢの活性化が明らかにさ
れている、喘息を含む、呼吸器炎症の研究によりさらに強調されている。この活
性化はサイトカイン生成の増加およびこれらの疾患に特徴的な白血球浸潤の増加
の基礎となる可能性がある。加えて、ステロイドの吸入が気道過剰応答を減少さ
せ、喘息性気道における炎症性応答を抑制することが知られている。ＮＦ−κＢ
のグルココルチコイド阻害に関する最近の知見を考慮すれば、これらの効果はＮ
Ｆ−κＢの阻害を介して媒介されていると考えることができる。

【０００５】さらに、ＮＦ−κＢの炎症性障害における役割がリウマトイド滑膜の研究から
明らかとなっている。ＮＦ−κＢは、通常、不活性細胞質複合体として存在する
が、最近の免疫組織化学的研究はＮＦ−κＢが核中に存在し、リウマトイド滑膜
を含む細胞中で活性であることを示している。さらには、ＮＦ−κＢは、ＴＮＦ
−αによる刺激に応答してヒト滑膜細胞を活性化することも明らかにされた。こ
のような分布がこの組織の特徴であるサイトカインおよびエイコサノイド産生を
増加させる原因の機構である可能性がある。Roshak,A.K.ら、J.Biol.Chem.、２
７１、３１４９６−３１５０１（１９９６）を参照のこと。ＮＦ−κＢ／ＲｅｌおよびＩκＢ蛋白はまた、悪性形質転換にて重要な役割を
果たしているようである。過剰発現、遺伝子増幅、遺伝子再編成または転座の結
果として、ファミリーメンバーはインビボおよびインビトロにおける細胞形質転
換と関連している。加えて、これらの蛋白をコードする遺伝子の再編成および／
または増幅が特定のヒトリンパ性腫瘍の２０−２５％に認められる。加えて、ア
ポトーシスの制御におけるＮＦ−κＢの役割は、細胞増殖の調節における転写因
子の役割を強調することが報告されている。

【０００６】数種のＮＦ−κＢ阻害剤が、C.Wahlら、J.Clin.Invest. １０１（５）、１１
６３−１１７４（１９９８）、R.W.Sullivanら、J.Med.Chem. ４１、４１３−４
１９（１９９８）、J.W.Pierceら、J.Biol.Chem. ２７２、２１０９６−２１１
０３（１９９７）に記載されている。海洋の天然産物である、ヒメニアルジシンは、ＮＦ−κＢを阻害することが知
られている。Roshak,A.ら、JPET、２８３、９５５−９６１（１９９７）。Breto
n,J.JおよびChabot-Fletcher,M.C.、JPET、２８２、４５９−４６６（１９９７
）。アミノインダノンは既知化合物である。アミノインダノンの一般的製造が、G.
Maury、E.M.Wu、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９６８、３３、１９００−１９
０７に記載された。３−ブロモ中間体の合成が、B.D.Pearson、R.P.Ayer.、N.H.
Cromwell、J.Org.Chem. １９６２、２７、３０３８−３０４４に記載された。２
−ベンザルインダノンの合成が、A.Hassner、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９
５８、８０、８９３−９００に記載された。本発明者らは、アミノインダノンを用いて転写因子ＮＦ−κＢの活性化を阻害
する新規方法を見出した。

【０００７】（発明の開示）本発明の目的は、転写因子ＮＦ−κＢの活性を改変することにより、治療的に
修飾することのできる疾患の治療法を提供することである。したがって、第１の態様において、本発明は、式Ｉで示される化合物および医
薬上許容される担体、希釈体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。さらに別の態様において、本発明は、ＮＦ−κＢを阻害することにより病状が
治療的に修飾され得る疾患の治療法を提供する。特定の態様において、本発明は、炎症性障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性
腸疾患および喘息；皮膚病、例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎；自己免疫疾
患；組織および器官拒絶反応；アルツハイマー病；発作；アテローム性動脈硬化
症；再狭窄；癌、例えば、ホジキン病；およびある種のウイルス性感染、例えば
、ＡＩＤＳ；骨関節炎；骨粗鬆症；および毛細血管拡張性運動失調を含む、ＮＦ
−κＢの活性化に付随する種々の疾患の治療方法を提供する。

【０００８】（発明を実施するための最良の形態）本発明は、ＮＦ−κＢ活性化に付随する疾患の治療法であって、その治療を必
要とする動物、詳細には哺乳動物に、最も詳しくはヒトに、式Ｉ：

【化４】［式中：Ｒ₁はアリールであり；Ｒ₂はＨ、Ｃ_1-6アルキルおよびアリールからなる群より選択され；Ｒ₃はＣ_1-6アルキルおよびＣ_3-8シクロアルキルからなる群より選択され；お
よびＲ₂およびＲ₃は、一緒に結合して、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択さ
れる５−７個の原子を有する複素環式環を形成してもよい］で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩、水和物または溶媒和物を投
与することを特徴とする方法を提供する。

【０００９】本発明は、特に、炎症性障害、特に慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患および喘
息；皮膚病、例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎；自己免疫疾患；組織および
器官拒絶反応；アルツハイマー病；発作；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；癌
、例えば、ホジキン病；およびある種のウイルス性感染、例えば、ＡＩＤＳ；骨
関節炎；骨粗鬆症；および毛細血管拡張性運動失調の治療方法を提供する。

【００１０】以下の群より選択される式Ｉの化合物：３−[(Ｎ−ブチル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−[(Ｎ−シクロヘキシル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−モルホリニル−２−ベンザルインダノン；および３−ピペリジニル−２−ベンザルインダノンが、本発明の方法で使用するのに最も好ましい。

【００１１】定義本発明は、該発明の化合物のあらゆる水和物、溶媒和物、複合体およびプロド
ラッグの使用を包含する。プロドラッグは、インビボにて式Ｉで示される活性な
親薬物を放出する共有結合を有する化合物である。本発明の化合物にてキラル中
心または別の形態の異性体中心がある場合、かかる異性体の形態はすべて、エナ
ンチオマーおよびジアステレオマーを含め、本発明に含めることを意図とするも
のである。キラル中心を含有する化合物は、ラセミ混合物、エナンチオマーに富
む混合物として用いることができ、あるいはラセミ混合物は周知技法を用いて分
離することができ、個々のエナンチオマーを単独で用いてもよい。化合物が不飽
和の炭素−炭素二重結合を有する場合には、シス（Ｚ）およびトランス（Ｅ）異
性体は共に本発明の範囲内にある。化合物が互変異性体の形態、例えば、ケト−
エノール互変異性体にて存在しうる場合には、それは均衡に、または１の形態に
て優勢的に存在するいずれであっても、各互変異性体は本発明の範囲内に含まれ
るものである。

【００１２】式Ｉまたはその下位式中のいずれか１つの発生する置換基の意義は、特記しな
い限り、その意義において、または他に発生する他の置換基の意義において独立
したものである。本明細書で用いる「Ｃ_1-6アルキル」は、置換されているかまたはされていな
い、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチルお
よびｔ−ブチル、ペンチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルおよび
ヘキシルならびにその簡単な脂肪族異性体を含むことを意図するものである。い
ずれのＣ_1-6アルキル基も、１または２個のハロゲン、ＳＲ'、ＯＲ'、Ｎ(Ｒ')₂
、Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒ')₂、カルバミルまたはＣ_1-4アルキルで独立して置換されていて
もよい。ここで、Ｒ'はＲ_1-6アルキルである。本明細書で用いる「Ｃ_3-8シクロアルキル」は、置換されているかまたはされ
ていない、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、
シクロヘプチルおよびシクロオクチルならびにその簡単な脂肪族異性体を含むこ
とを意図するものである。いずれのＣ_3-8シクロアルキル基も、１または２個の
ハロゲン、ＳＲ'、ＯＲ'、Ｎ(Ｒ')₂、Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒ')₂、カルバミルまたはＣ_1-4
アルキルで独立して置換されていてもよい。ここで、Ｒ'はＲ_1-6アルキルである
。

【００１３】「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを意図するものである。「Ａｒ」または「アリール」は、１またはそれ以上の、Ｐｈ−Ｃ_0-6アルキル
、Ｈｅｔ−Ｃ_0-6アルキル、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｐｈ−Ｃ_0-6アル
コキシ、Ｈｅｔ−Ｃ_0-6アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯ₂Ｒ'またはハロゲンで置
換されていてもよい、フェニルまたはナフチルを含むことを意図する。Ｃ₀アル
キルはその部分にアルキル基がないことを意味する。かくして、Ａｒ−Ｃ₀アル
キルはＡｒと同じである。２個のＣ１−６アルキル基は、一緒になって、Ａｒ環
に縮合した、飽和または不飽和の５−７員環を形成してもよい。Ｐｈは１または
それ以上のＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ'またはハロゲンで
置換されていてもよい。

【００１４】本明細書中に使用する場合の「Ｈｅｔ」または「複素環」は、飽和または不飽
和のいずれであってもよく、炭素原子ならびにＮ、ＯおよびＳからなる群より選
択される１ないし３個のヘテロ原子からなる、安定した５−ないし７−員の単環
式環を意味し、ここで窒素および硫黄ヘテロ原子は酸化されていてもよく、窒素
ヘテロ原子四級化されていてもよく、上記したいずれかの複素環式環がベンゼン
環に縮合しているいずれの二環基も含むものである。複素環式環は、安定した構
造形成をもたらす、いずれのヘテロ原子または炭素原子で結合していてもよく、
Ｐｈ−Ｃ_0-6アルキル、Ｈｅｔ−Ｃ_0-6アルキル、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキ
シ、Ｐｈ−Ｃ_0-6アルコキシ、Ｈｅｔ−Ｃ_0-6アルコキシ、ＯＨまたはＣＮからな
る群より選択される１または２個の基で置換されていてもよい。２個のＣ_1-6ア
ルキル基が一緒になってＨｅｔ環に縮合した、飽和または不飽和の５−７員環を
形成してもよい。Ｐｈは１またはそれ以上のＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、
ＯＨ、ＣＯ₂Ｒ'またはハロゲンで置換されていてもよい。かかる複素環として、
例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピ
ペリジニル、２−オキソピロロジニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、ピ
ロリル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミ
ダゾリル、ピリジル、ピラジニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサ
ゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、チアゾリジニル、チアゾリニル、チ
アゾリル、キヌクリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズ
イミダゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾオキサゾリル、フリル、ピラニル、テト
ラヒドロフラン、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンゾオキサゾリル、チア
モルホリニル、スルホキシド、チアモルホリニルスルホンおよびオキサジアゾリ
ル環が挙げられる。

【００１５】製法本発明の方法に用いる化合物は、以下のスキーム１に示される方法で都合よく
調製することができる。アミノインダノン類似体の一般的製造が、G.Maury、E.M.Wu、N.H.Cromwell、J
.Org.Chem. １９６８、３３、１９００−１９０７に記載された。３−ブロモ中
間体の合成が、B.D.Pearson、R.P.Ayer.、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９６２
、２７、３０３８−３０４４に記載された。２−ベンザルインダノンの合成が、
A.Hassner、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９５８、８０、８９３−９００に記
載された。

【００１６】一般的調製：一般的調製をスキーム１に示す。インダノンを塩基中のベンジルアルデヒドと
反応させて２−ベンザルインダノンを得る。２−ベンザルインダノンをＣＣｌ₄
中のＮＢＳを用いて臭素化し、３−ブロモ−２−ベンザルインダノンを得る。３
−ブロモ−２−ベンザルインダノンをベンゼン中アルキル第一または第二アミン
と反応させて３−アルキルアミノ−２−ベンザルインダノンを得る。

【００１７】

【化５】

【００１８】上記したスキーム１に示す式Ｉの化合物の調製法に関して、当業者であれば、
式Ｉの化合物を製造するのに必要な新規なあらゆる中間体を本発明が包含するこ
とを認識するであろう。本明細書で用いる出発物質は市販のものであるか、または当業者に周知の慣用
的方法により製造され、それは、COMPEＮDIUM OF ORGAＮIC SYＮTHETIC METHODS
、Vol.I-VI（Wiley-Interscience出版）などの標準的な参考文献に見ることがで
きる。式Ｉの化合物の酸付加塩は、適当な溶媒中、標準的な方法にて、親化合物と、
過剰量の酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、
トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸とから調製す
る。ある種の化合物は許容できる内部塩または両性イオンを形成する。カチオン
性塩は、親化合物を過剰量のアルカリ性試薬、例えば、適当なカチオンを含有す
る、ヒドロキシド、カルボナートまたはアルコキシド、あるいは適当な有機アミ
ンと反応させることで製造することができる。Ｌｉ⁺、Ｎａ⁺、Ｋ⁺、Ｃａ⁺⁺、Ｍ
ｇ⁺⁺およびＮＨ₄ ⁺などのカチオンが医薬上許容される塩中に存在するカチオンの
具体例である。ハライド、スルホナート、ホスファート、アルカノエート（例え
ば、アセタートおよびトリフルオロアセタート）、ベンゾアートおよびスルホナ
ート（例えば、メシラート）が、例えば、医薬上許容される塩中に存在するアニ
オンである。

【００１９】本発明は、式Ｉの化合物と、医薬上許容される担体、希釈体または賦形剤とを
含む医薬組成物を提供する。したがって、式Ｉの化合物は、医薬の製造に用いる
ことができる。上記したように製造される式Ｉの化合物の医薬組成物は、非経口
投与用の溶液としてまたは凍結乾燥した粉末として処方することができる。粉末
は使用前に適当な希釈液または他の医薬上許容される担体を添加することで復元
することができる。液体処方は緩衝化等張水溶液であってもよい。適当な希釈液
の一例が等張生理食塩水、標準水中５％デキストロースあるいは緩衝化酢酸ナト
リウムまたはアンモニウム溶液である。かかる処方は、非経口投与に特に適して
いるが、また経口投与に用いることもでき、吸入用の計量吸入器または噴霧器に
含めることもできる。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース
、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはク
エン酸ナトリウムなどの賦形剤を添加することが望ましい。

【００２０】また、これらの化合物を、経口投与用に、カプセル処理、錠剤化またはエマル
ジョンもしくはシロップに調製してもよい。医薬上許容される固体または液体担
体を加えて組成物を強化または安定化してもよく、あるいは組成物の調製を容易
にすることもできる。固体担体は、澱粉、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物
、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、ア
カシア、寒天またはゼラチンを包含する。液体担体は、シロップ、落花生油、オ
リーブ油、セイラインおよび水を包含する。担体はまた、徐放性材料、例えば、
一ステアリン酸グリセリルまたは二ステアリン酸グリセリルを単独でまたはロウ
と一緒のものを包含する。固体担体の量は変化するが、好ましくは、投与単位当
たり約２０ｍｇと約１ｇの間にある。医薬調製物は、錠剤形では、必要ならば、
粉砕、混合、造粒および圧縮を含む、またはハードゼラチンカプセル形では、粉
砕、混合および充填を含む、製薬における慣用的技法に従って製造する。液体担
体を用いる場合、調製物はシロップ、エリキシル、エマルジョンあるいは水性ま
たは非水性懸濁液の形態である。かかる液体処方は、直接経口投与してもよく、
あるいはソフトゼラチンカプセルに充填してもよい。

【００２１】経直腸投与の場合、式Ｉの化合物はまた、カカオ脂、グリセリン、ゼラチンま
たはポリエチレングリコールなどの賦形剤と混合し、坐剤に成型してもよい。本発明の方法は、式Ｉの化合物を局所投与することを包含する。局所投与とは
、本発明の化合物の、表皮への、口腔への外部塗布、およびかかる化合物の、耳
、目および鼻への滴下を含む、化合物が有意に血流に入らない、非全身性投与を
意味する。全身性投与とは、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内投与を意味する
。局所投与して治療または予防効果を得るのに必要な式Ｉの化合物（以下、有効
成分という）の量は、もちろん、選択した化合物、治療すべき症状の特性および
重篤度、ならびに治療対象の動物に応じて変化するが、最終的には顧問医の考え
次第である。

【００２２】原料化学物質として有効成分を単独で投与することもできるが、医薬組成物と
して投与することが好ましい。局所投与用の有効成分が処方の０.０１ないし５.
０重量％を有していてもよい。獣医学的またはヒト医薬使用の両方において、本発明の局所処方は、有効成分
を１またはそれ以上の許容される担体と一緒に含んでおり、所望により他の医薬
成分を含んでいてもよい。担体は処方の他の成分と適合するという意味で「許容
しうる」ものでなければならず、その受容者を害するものであってはならない。局所投与に適する処方は、治療を必要とする部位に皮膚を介して浸透させるの
に適する液体または半液体製剤、例えば、リニメント、ローション、クリーム、
軟膏またはペースト、および目、耳または鼻に投与するのに適する滴剤を包含す
る。

【００２３】本発明の滴剤は、滅菌水性または油性溶液もしくは懸濁液を包含し、有効成分
を殺菌および／または殺真菌剤および／または他の適当な保存剤、好ましくは界
面活性剤を含む、の適当な水溶液に溶かすことで調製することができる。得られ
た溶液を濾過により清浄し、適当な容器に移し、それを密封してオートクレーブ
または９０−１００℃に半時間維持することで滅菌処理してもよい。別法として
、溶液を濾過滅菌し、無菌技法で容器に移してもよい。滴剤中に配合するのに適
当な殺菌剤および殺真菌剤として、硝酸または酢酸フェニル水銀（０.００２％
）、塩化ベンズアルコニウム（０.０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０.０
１％）が挙げられる。油性溶液を調製するのに適当な溶媒は、グリセロール、希
釈アルコールおよびプロピレングリコールが挙げられる。本発明のローションは、皮膚または眼に投与するのに適するものを包含する。
眼用ローションは、所望により殺菌剤を含有していてもよい滅菌水性溶液を含み
、滴剤を調製する方法と類似する方法により調製することができる。皮膚塗布用
ローションまたはリニメントはまた、乾燥を促進し、皮膚を冷却する薬剤、例え
ば、アルコールまたはアセトン、および／またはグリセロールなどの保湿剤ある
いはヒマシ油またはアラキス油などの油を含んでいてもよい。

【００２４】本発明のクリーム、軟膏またはペーストは、外服用の有効成分の半固体処方で
ある。その処方は、細分化形態または粉末形その物の、あるいは水性または非水
性流体の溶液もしくは懸濁液の有効成分を、適当な機械を用いて、グリース状ま
たは非グリース状の基材と混合することで製造できる。その基材は、炭化水素、
例えば、ハード、ソフトまたは流動パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属石鹸
；ゴム糊；扁桃油、トウモロコシ油、アラキス油、ヒマシ油またはオリーブ油；
羊毛脂もしくはその誘導体、またはプロピレングリコールもしくはマクロゴール
などのアルコールを含む脂肪酸、例えばステアリン酸またはオレイン酸を含んで
いてもよい。処方は、適当な界面活性剤、例えば、ソルビタンエステルまたはそ
のポリオキシエチレン誘導体などのアニオン性、カチオン性または非イオン性界
面活性剤が配合されていてもよい。天然ガム、セルロース誘導体などの懸濁化剤
または珪質性シリカなどの有機材料、およびラノリンなどの他の成分を含めるこ
ともできる。

【００２５】本発明の有用性式Ｉの化合物はＮＦ−κＢの阻害剤として有用である。本発明は、該化合物の
医薬組成物および処方を含め、該化合物の有用な組成物および処方を提供する。本発明はまた、ＮＦ−κＢ活性化に付随する疾患の治療法であって、その治療
を必要とする、動物、特に哺乳動物、さらにはヒトに、式Ｉの化合物を投与する
ことを特徴とする方法を提供する。特に、本発明は炎症性障害、特に慢性関節リ
ウマチ、炎症性腸疾患および喘息；皮膚病、例えば、乾癬およびアトピー性皮膚
炎；自己免疫疾患；組織および器官拒絶反応；アルツハイマー病；発作；アテロ
ーム性動脈硬化症；再狭窄；ホジキン病を含む、癌；およびある種のウイルス性
感染、例えば、ＡＩＤＳ；骨関節炎；骨粗鬆症；および毛細血管拡張性運動失調
を治療するための方法を提供する。

【００２６】急性治療の場合、式Ｉの化合物の非経口投与が好ましい。化合物の水中または
生理食塩水中５％デキストロースの静脈内注入液、あるいは適当な賦形剤を含む
、同様の処方が最も効果的であるが、筋肉内ボーラス注射もまた有用である。典
型的には、非経口的投与量は、血漿中の薬物濃度を、ＮＦ−κＢの活性化を阻害
するのに効果的な濃度に維持するのに、約０.０１ないし約５０ｍｇ／ｋｇ；好
ましくは０.１と２０ｍｇ／ｋｇの間にある。該化合物を一日の用量が約０.４な
いし約８０ｍｇ／ｋｇ／日となるようなレベルで１日に１ないし４回投与する。
治療上効果的である本発明の化合物の正確な投与量、および該化合物を最適に投
与する経路は、薬物の血中濃度を、治療効果を得るのに必要な濃度と比較するこ
とで、当業者であれば容易に決定される。

【００２７】式Ｉの化合物はまた、薬物の濃度が、ＮＦ−κＢを阻害するのに、あるいは本
明細書に開示される他の治療効果を得るのに、十分であるように、経口経路によ
り患者に投与することもできる。典型的には、該化合物を含有する医薬組成物は
、患者の症状と矛盾しないように、約０.１ないし約５０ｍｇ／ｋｇの経口用量
で投与する。式Ｉの化合物はまた、薬物濃度がＮＦ−κＢを阻害または本明細書に開示の他
の治療効果を得るのに十分であるように、局所的に患者に投与してもよい。典型
的には、該化合物を含有する医薬組成物を約０.０１と約５％ｗ／ｗの間の局所
処方にて投与する。本発明の化合物を本明細書の記載に従って投与した場合、許容できない毒物学
的作用があるとは考えられない。本明細書に記載の化合物の、ＮＦ−κＢの活性化を阻害する能力は、ＮＦ−κ
Ｂ作動レポーター遺伝子活性を阻害するその能力で明らかにされる（表１を参照
のこと）。このＮＦ−κＢ阻害剤の疾患の治療における有用性は、種々の疾患の
原因がＮＦ−κＢの活性化にあることを前提とする。

【００２８】ＮＦ−κＢ作動レポーター遺伝子活性の阻害

【化６】

【００２９】

【表１】

【００３０】ＮＦ−κＢは、ＩＬ−６およびＩＬ−８などのサイトカイン（Mukaidaら、１
９９０；LibermanおよびBaltimore、１９９０；Matsusakaら、１９９３）、ＩＣ
ＡＭおよびＶＣＡＭなどの細胞接着分子（Maruiら、１９９３；Kawaiら、１９９
５；LedeburおよびParks、１９９５）および誘導酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ
）（Xieら、１９９４；Adcockら、１９９４）を含む、多数のプロ炎症性伝達物
質の発現調節にて重要な役割を果たす。（すべての引用文献をこのセクションの
終わりに示す）。かかる伝達物質は炎症部位に白血球を補充する役割を果たすこ
とが知られており、ｉＮＯＳの場合には、炎症性および自己免疫疾患にて器官の
破壊をもたらす可能性がある（McCartney-Francisら、１９９３；Kleemannら、
１９９３）。重要なことは、本明細書に記載の化合物はＩＬ−８合成および酸化
窒素、ｉＮＯＳ活性の生成物の生成を阻害することである（表２を参照のこと）
。

【００３１】

【表２】

【００３２】ＮＦ−κＢが炎症性障害にて重要な役割を果たしていることについての証拠が
喘息患者を研究することで得られる。軽いアトピー性喘息患者より採取した気管
支生検は、正常な非アトピー性対照からの生検と比較して、活性化したＮＦ−κ
Ｂ、ＮＦ−κＢ全体およびＮＦ−κＢ調節サイトカイン、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ
およびＴＮＦαで着色する粘膜下組織にある細胞の数が有意に増加することを示
す（Wilsonら、１９９８）。さらには、ＮＦ−κＢ免疫反応性を発現する脈管の
割合が、生検試料の上皮におけるＩＬ−８免疫反応性と同様に増加する（Wilson
ら、１９９８）。これらの化合物により測定されるように、ＮＦ−κＢの阻害を
通してのＩＬ−８生成の阻害それ自体も呼吸器炎症にて有益であると考えられる
。

【００３３】最近の研究は、ＮＦ−κＢがまた炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病理発生にて重要
な役割を果たしている可能性があると示唆している。活性化したＮＦ−κＢはク
ーロン病および潰瘍性結腸患者のコロニー生検試料に認められる（Arditeら、１
９９８；Roglerら、１９９８；Schreiberら、１９９８）。活性化は炎症粘膜に
認められるが、炎症していない粘膜では認められず（Arditeら、１９９８；Rogl
erら、１９９８）、同じ部位でのＩＬ−８ｍＲＮＡ発現の増加と関連している（
Arditeら、１９９８）。その上、コルチコステロイド処理は腸管内ＮＦ−κＢの
活性化を徹底的に阻害し、コロニー炎症を減少させる（Arditeら、１９９８；Sc
hreiberら、１９９８）。また、ＮＦ−κＢの阻害を通してのＩＬ−８生成の阻
害は、これらの化合物により測定されるように、炎症性腸疾患に利益があると考
えられる。胃腸炎症の動物実験は、ＮＦ−κＢがコロニー炎症の重要な調整剤であること
をさらに支持するものである。ＮＦ−κＢ活性の増加が、活性化複合体の主成分
であるｐ６５を用いて、マウスにて２,４,６−トリニトロベンゼンスルホン酸（
ＴＮＢＳ）誘発した結腸炎の基底膜にあるマクロファージにて観察される（Ｎeu
rathら、１９９６；ＮeurathおよびPettersson、１９９７）。ｐ６５アンチセン
スの局所投与により、毒性の兆候のない処理動物にて確立された結腸炎の兆候が
なくなる（Ｎeurathら、１９９６；ＮeurathおよびPettersson、１９９７）。そ
のように、ＮＦ−κＢの小型分子阻害剤はＩＢＤの治療に有用であると考えられ
る。

【００３４】さらに、ＮＦ−κＢの炎症性障害における役割がリウマトイド滑膜の研究から
明らかとなっている。ＮＦ−κＢは、通常、不活性細胞質複合体として存在する
が、最近の免疫組織化学的研究はＮＦ−κＢが核中に存在し、ヒトリウマトイド
滑膜を含む細胞中で活性であり（Handelら、１９９５；Marokら、１９９６；Sio
udら、１９９８）、疾患の動物実験にて活性である（Tsaoら、１９９７）と指摘
している。着色はＡ型滑膜および血管内皮細胞と関連する（Marokら、１９９６
）。その上さらに、ＮＦ−κＢの構造的活性化が培養滑膜にて認められ（Roshak
ら、１９９６；Miyazawaら、１９９８）およびＩＬ−１βまたはＴＮＦαで刺激
した滑膜細胞培養物（Roshakら、１９９６；Fujisawaら、１９９６；Roshakら、
１９９７）。このように、ＮＦ−κＢの活性化はサイトカイン生成の増加および
滑膜の炎症に特徴的な白血球浸潤の原因である可能性がある。これらの化合物が
ＮＦ−κＢを阻害し、それによりこれらの細胞によるエイコサノイドの生成を阻
害する能力は、慢性関節リウマチに効果的であると考えられる（表２を参照のこ
と）。

【００３５】 Mukaida N、MaheY、Matsushima K（１９９０）；J Biol Chem ２６５：２１１
２８-２１１３３：プロ炎症性サイトカインによるインターロイキン−８遺伝子
の活性化における核因子−κＢとシス調節エンハンサー結合蛋白様因子の協同的
相互作用。 Liberman TA、Baltimore D（１９９０）；Mol Cell Biol １０：２３２７-２
３３４：ＮＦ−κＢ転写因子を通じてのインターロイキン−６遺伝子発現の活性
化。 Matsusaka T、Fujikawa K、Nishio Y，Mukaida N，Matsushima K，Kishimoto
T，Akira S（１９９３）；Proc Natl Acad Sci USA ９０：１０１９３-１０１９
７：転写因子ＮＦ−ＩＬ６およびＮＦ−κＢが共同的に炎症性サイトカイン、イ
ンターロイキン６およびインターロイキン８の転写を活性化する。 Marui N、Offerman MK、Swerlick R、Kunsch C、Rosen CA、Ahmad M、Alexand
er RW、Medford RM（１９９３）；J Clin Invest ９２：１８６６-１８７４：血
管細胞接着性分子−１（ＶＣＡＭ−１）遺伝子転写および発現はヒト血管内皮細
胞の酸化防止剤感受的機構を介して制御される。

【００３６】 Kawai M、Nishikomori R、Jung E-Y、Tai G、Yamanak C、Mayumi M、Heike T
（１９９５）J Immunol １５４：２３３３-２３４１：ピロリジンジチオカルバ
メートはヒト繊維芽細胞におけるサイトカインが誘発する細胞内接着性分子−１
の生合成を阻害する。 Ledebur HC、Parks TP（１９９５）；J Biol Chem ２７０：９３３-９４３：
ヒト内皮細胞における炎症性サイトカインによる細胞内分子−１遺伝子の転写調
節。 Xie Q、Kashiwabara Y、Nathan C（１９９４）；J Biol Chem ２６９：４７０
５-４７０８：転写因子ＮＦ−κＢ／Ｒｅｌの酸化窒素シンターゼの誘発におけ
る役割 Adcock IM、Brown CR、Kwon O、Barnes PJ（１９９４）；Biochem Biophys Re
s Commun １９９：１５１８-１５２４：酸化的ストレスがヒト上皮細胞における
ＮＦ−κＢＤＮＡ結合および誘導ＮＯＳｍＲＮＡを誘発する。 McCartney-Francis N、Allen JB、Mizel DE、Albina JE、Xie Q、Nathan CF、
Wahl SM（１９９３）；J Exp Med １７８：７４９-７５４：酸化窒素シンターゼ
阻害剤を用いる関節炎の抑制。

【００３７】 Kleemann R、Rothe H、Kolb-Bachofen V、Xie Q、Nathan C、Martin S、Kolb
H（１９９３）；FEBS Lett ３２８：９-１２：糖尿病前症のＢＢラットの膵臓中
の誘導酸化窒素シンターゼの転写および翻訳。 Wilson SJ、Wallin A、Sandstrom T、Howarth PH、Holgate ST（１９９８）；
J Allergy Clin Immunol １０１：６１６：軽度の喘息患者および正常な対照に
おけるＮＦ−κＢおよび関連する接着性分子の発現。 Ardite E、Panes J、Miranda M、Salas A、Elizalde JI、Sans M、Arce Y、Bo
rdas JM、Fernandez-Checa JC、Pique JM（１９９８）；Br J Pharmacol １２４
：４３１-４３３：炎症性腸疾患の患者における核因子κＢの活性化に対するス
テロイド治療の効果。 Rogler G、Brand K、Vogl D、Page S、Hofmeister R、Andus T、Knuechel R、
Baeuerle PA、Scholmerich J、Gross V（１９９８）；Gastroenterol １１５：
３５７-３６９：核因子κＢはマクロファージおよび炎症化腸管粘膜の上皮細胞
で活性化される。

【００３８】 Schreiber S、Nikolaus S、Hampe J（１９９８）；Gut ４２：４７７-４８４
：炎症性腸疾患における核因子κＢの活性化。 Neurath MF、Pettersson S、Meyer zum Buschenfelde K-H、Strober W（１９
９６）；Nature Med ２：９９８-１００４：アンチセンスホスホロチオエートオ
リゴヌクレオチドをＮＦ−κＢのｐ６５サブユニットに局所投与することで、マ
ウスにて実験的に確立された結腸炎が排除される。 Neurath MF、Pettersson S（１９９７）；Immunobiol １９８：９１-９８：慢
性的腸炎症の病理発生におけるＮＦ−κＢｐ６５の優勢的役割。 Handel ML、McMorrow LB、Gravallese EM（１９９５）；Arthritis Rheumatis
m ３８：１７６２-１７７０：リウマトイド滑膜における核因子−κＢ；ｐ５０
およびｐ６５の局在化。 Marok R、Winyard PG、Coumbe A、Kus ML、Gaffney K、Blades S、Mapp PI、M
orris CJ、Blake DR、Kaltschmidt C、Baeuerle PA（１９９６）；Arthritis Rh
eumatism ３９：５８３-５９１：ヒト炎症性滑膜組織における転写因子核因子−
κＢの活性化。

【００３９】 Sioud M、Mellbye O、Forre O（１９９８）；Clin ExpRheumatol １６：１２
５-１３４：ＲＡおよび多関節ＪＲＡの滑膜中のＮＦ−κＢ６５サブユニット、
Ｆａｓ抗原、ＦａｓリガンドおよびＢｃｌ−２関連蛋白の分析。 Tsao PW、Suzuki T、Totsuka R、Murata T、Takagi T、Ohmachi Y、Fujimura
H、Takata I（１９９７）；Clin Immunol Immunopathol ８３：１７３-１７８：
デキサメタゾンの、アジュバント関節炎における活性化されたＮＦ−κＢの発現
に対する効果。 Roshak AK、Jackson JR、McGough K、Chabot-Fletcher M、Mochan E、Marshal
l L（１９９６）；J Biol Chem ２７１：３１４９６-３１５０１：別個のＮＦκ
Ｂ蛋白を工夫することでインターロイキン−１β−誘導ヒトリウマトイド滑膜繊
維芽細胞のプロスタグランジンＥ２形成が変化する。 Miyazawa K、Mori A、Yamamoto K、Okudaira H（１９９８）；Am J Pathol １
５２：７９３-８０３：リウマトイド滑膜細胞によるヒトインターロイキン−６
遺伝子の構造的転写；ＮＦ−κＢおよびＣＢＦ１の自発的活性化。 Fujisawa K、Aono H、Hasunuma T、Yamamoto K、Mita S、Nishiola K（１９９
６）：Arthritis Rheumatism ３９：１９７-２０３：腫瘍壊死因子αに応答する
ヒト滑膜細胞中の転写因子ＮＦ−κＢの活性化。 Roshak AK、Jackson JR、Chabot-Fletcher M、Marshall L（１９９７）；J Ph
armacol Exp Therapeut ２８３：９５５-９６１：海洋性天然物であるヒメニア
ルジシンによるＮＦκＢ介在インターロイキン−１β−刺激プロスタグランジン
Ｅ２形成の阻害。

【００４０】生物学的検定本発明の化合物を数種の生物学的検定のうちの一つで試験し、所定の薬理学的
効果を得るのに必要な化合物の濃度を測定することができる。ＮＦ−κＢ活性の検定は、Breton,J.JおよびChabot-Fletcher,M.C.、JPET、２
8２、４５９-４６６（１９９７）に記載されるような、細胞ベースのルシフェラ
ーゼレポーター検定を用いて行う。簡単に言えば、ＮＦ−κＢレポータープラス
ミド（後記参照）で不変的にトランスフェクトされたＵ９３７ヒト組織球リンパ
腫細胞系を、２５０μｇ／ｍｌのゲネチシン（Geneticin）（Ｇ４１８サルフェ
ート、Life Technologies、グランド・アイランド、ＮＹ）を添加した上記培地
で培養する。ルシフェラーゼレポーター検定をトランスフェクトされたＵ９３７
クローンで行う。これらクローンを３００ｘｇで５分間、２回遠心分離に付し、
１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０中、１ｘ１０⁶個の細胞／ｍｌの密度に懸
濁させる。アリコート１ｍｌを２４−ウェルプレートのウェルに加える。化合物
またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）担体（１μｌ）を適当なウェルに加え
、そのプレートを３７℃、５％ＣＯ₂で３０分間インキュベートする。刺激物質
を加え（５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦκ、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳまたは０.１μＭ
のＰＭＡ）、試料を３７℃、５％ＣＯ₂で５時間インキュベートし、１.９ｍｌの
ポリプロピレン製試験管に移し、２００ｘｇで５分間遠心分離に付す。その細胞
ペレットをＣａ²⁺およびＭｇ²⁺不含の１ｍｌＰＢＳで２回洗浄し、上記と同様
に遠心分離に付す。得られた細胞ペレットを５０μｌの１ｘ溶菌緩衝液（Promeg
a Corporation、マジソン、ＷＩ）に溶解させ、攪拌し、室温で１５分間インキ
ュベートする。２０μｌのアリコートの各溶菌液を不透明な白色９６−ウェルプ
レート（Wallac Inc.、ゲチスバーグ、ＭＤ）に移し、MicroLumat ＬＢ９６Ｐ
ルミノメーター（ＥＧ＆Ｇ Berthold、Bad Wilbad、ドイツ）にてルシフェラー
ゼ生成について検定する。ルミノメーターは１００μｌのルシフェラーゼ検定試
薬（Promega Corporation、マジソン、ＷＩ）を各ウェルに分配し、総和光出力
を２０秒間にわたって記録する。光出力を相対的光単位（ＲＬＵ）で測定する。

【００４１】ＮＦ−κＢ活性をまた電気泳動移動度シフト検定（ＥＭＳＡ）にて測定し、核
中のＮＦ−κＢ蛋白の存在を評価することもできる。目的の細胞を１ｘ１０⁶／
ｍｌの密度にまで培養する。遠心分離により細胞を収穫し、Ｃａ²⁺およびＭｇ²⁺ 不含のＰＢＳで洗浄し、Ｃａ²⁺およびＭｇ²⁺を含むＰＢＳに１ｘ１０⁷細胞／ｍ
ｌで懸濁させる。化合物のＮＦ−κＢの活性化に対する効果を測定するために、
細胞懸濁液を種々の濃度の薬物またはビヒクル（ＤＭＳＯ、０.１％）を用いて
３７℃で３０分間処理し、さらに１５分間ＴＮＦα（５.０ｎｇ／ｍｌ）で刺激
する。細胞および核抽出物を以下のように調製する。要約すれば、インキュベー
ション期間の終わりに、細胞（１ｘ１０⁷細胞）をＣａ²⁺およびＭｇ²⁺不含のＰ
ＢＳ中で２回洗浄する。得られた細胞ペレットを２０μｌの緩衝液Ａ（１０ｍＭ
Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７.９）、１０ｍＭＫＣｌ、１.５ｍＭＭｇＣｌ₂、０.５ｍ
Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ）および０.１％ＮＰ−４０）に懸濁させ、氷上
で１０分間インキュベートする。４℃、３５０ｒｐｍで１０分間遠心させて核を
ペレット状にする。得られた上澄を細胞性抽出物として集め、核ペレットを１５
μｌの緩衝液Ｃ（２０ｍＭＨｅｐｅｓ（ｐＨ７.９）、０.４２ＭＮａＣｌ、１
.５ｍＭＭｇＣｌ₂、２５％グリセロール、０.２ｍＭＥＤＴＡ、０.５ｍＭＤ
ＴＴおよび０.５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ））に再
び懸濁させる。懸濁液を４℃で２０分間緩やかに混合し、ついで４℃で１０分間
１４０００ｒｐｍで微遠心分離に付す。上澄を集め、緩衝液Ｄ（２０ｍＭＨｅ
ｐｅｓ（ｐＨ７.９）、５０ｍＭＫＣｌ、２０％グリセロール、０.２ｍＭＥＤ
ＴＡ、０.５ｍＭＤＴＴおよび０.５ｍＭＰＭＳＦ）を用いて６０μｌに希釈す
る。試料をすべて分析するまで−８０℃で貯蔵する。ブラッドフォード法（Brad
ford、１９７６）に従い、バイオラッド（BioRad）試薬を用いて抽出物中の蛋白
濃度を測定する。

【００４２】化合物の転写因子活性に対する効果を、上記した処理細胞から由来の核抽出物
を用い、電気泳動移動度シフト検定（ＥＭＳＡ）にて評価する。二重鎖のＮＦ−
κＢコンセンサスオリゴヌクレオチド（５'−ＡＧＴＴＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＴ
ＣＣＣＡＧＧＣ−３'）をＴ₄ポリヌクレオチドキナーゼおよび［ｇ−³²Ｐ］ＡＴ
Ｐで標識する。その合した混合物（２５μｌ）は１０ｍＭＨｅｐｅｓ−ＮａＯ
Ｈ（ｐＨ７.９）、４ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.９）、６０ｍＭＫＣｌ、
１ｍＭＥＤＴＡ、１ｍＭジチオスレイトール、１０％グリセロール、０.３ｍｇ
／ｍｌのウシ血清アルブミンおよび１μｇのポリ(ｄＩ−ｄＣ)・ポリ(ｄＩ−ｄ
Ｃ)を含有する。その合した混合物（１０μｇの核抽出蛋白）を、標識していな
い競合物質の存在下または不存在下、０.５ｎｇの³²Ｐ−標識したオリゴヌクレ
オチド（５００００−１０００００ｃｐｍ）と一緒に室温で２０分間インキュベ
ートし、その後でその混合物を１ｘＴｒｉｓボレート／ＥＤＴＡ中に調製した４
％ポリアクリルアミドゲル上に負荷し、２００Ｖで２時間電気泳動に付す。電気
泳動に付した後、ゲルを乾燥させ、フィルムに暴露してその結合反応を検出する
。

【００４３】化合物のＩκＢのリン酸化に対する効果はウェスタンブロットにてモニターす
ることができる。細胞性抽出物を１０％ゲル（BioRad、ハーキュレス、ＣＡ）の
ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲルの電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ）に付し、蛋白をニトロセルロースシート（Hybond^TM−ECL、Amersham Corp.
、アーリントン・ハイト、ＩＬ）に移す。ＩκＢαまたはＩκＢβに拮抗するポ
リクローナルウサギ抗体を、つづいてペルオキシダーゼ接合ロバ抗ウサギ第二抗
体（Amersham Corp.、アーリントン・ハイト、ＩＬ）を用いてイムノブロットを
行う。エンハンスド・ケミルミネッセンス（ＥＣＬ）検定システム（Amersham C
orp.、アーリントン・ハイト、ＩＬ）を用いて免疫反応性バンドを検出する。

【００４４】ヒト滑膜繊維芽細胞（ＲＳＦ）によるエイコサノイド生成に対する効果をヒト
ＲＳＦの一次培養物を用いて評価する。これらはリウマトイドに罹患の成体患者
から得た滑膜を酵素消化に付すことで得られる。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）
、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン
（GIBCO、グランド・アイランド、ＮＹ）含有のアール（Earl's）最小必須培地
（ＥＭＥＭ）中、３７℃および５％ＣＯ₂で細胞を培養する。さらに均一な１型
繊維芽細胞集団を得るために、細胞を４から９回の継代に使用する。ある研究で
は、繊維芽細胞を５ｘ１０⁴細胞／ｍｌで１６ｍｍ（直径）の２４ウェルプレー
ト（Costar、ケンブリッジ、ＭＡ）に置く。細胞を所定の時間最適量のＩＬ−Ｉ
β（１ｎｇ／ｍｌ；Roshakら、１９９６ａ）（Genzyme、ケンブリッジ、ＭＡ）
に曝す。ＤＭＳＯビヒクル中１％薬物をＩＬ−１を添加する１５分前に細胞培養
物に加える。Cayman Chemical Co.（アナーバー、ＭＩ）より購入した酵素イム
ノアッセイ（ＥＩＡ）キットを用いて、培養期間の終わりに集めた無細胞培地中
のプロスタグランジンＥ２濃度を直接測定する。試料または標準希釈体を実験培
地を用いて製造する。

【００４５】マウスにおけるホルボールエステル誘発の耳炎症実験を用いてインビボでの抗
炎症性活性を評価する。ホルボールミリスタートアセタート（ＰＭＡ）（アセト
ン２０μｌ中に４μｇ）を雄のＢａｌｂ／ｃマウス（一群６匹）（Charles Rive
r Breeding Laboratories、ウィルミントン、ＭＡ）の左耳の内外表面に塗布す
る。４時間後、２５μｌのアセトンに溶かした化合物を同じ耳に塗布する。２０
時間経過した後、両方の耳の厚みをダイヤル式マイクロメーター（Mitutoyo、日
本）を用いて測定し、第２の局所用量の化合物を塗布する。２４時間後、耳の厚
み測定を行い、処理と未処理の耳の間の厚みの変化としてデータを表す。ついで
、炎症状態にある左耳を取り、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性について
評価し、炎症性細胞浸潤を測定するまで−７０℃で貯蔵する。

【００４６】炎症化耳細胞にあるミエロペルオキシダーゼ活性の測定を介して炎症性細胞浸
潤を評価する。部分的に解凍した耳の組織をミンチ状にし、ついでテシュマイザ
ーホモジナイザー（Tissumizer homogenizer）（Tekmar Co.、シンシナチ、ＯＨ
）を用いて０.５％ＨＴＡＢ含有の５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）中でホモジ
ナイズする。その組織ホモジナートを凍結−解凍のサイクルに３回付し、つづい
て簡単に音波処理（１０秒）に付す。そのホモジナート中のＭＰＯ活性を以下の
ように測定する。ｏ−ジアニシジン（０.１６７ｍｇ／ｍｌ、Sigma Chemical、
セントルイス、ＭＯ）と過酸化水素（０.０００５％）のＭＰＯ依存性反応から
得られる着色生成物の出現を分光光学的に４６０ｎｍで測定する。Beckman ＤＵ
−７分光光度計および速度分析機器（Beckman Instruments,Inc.、ソマーセット
、ＮＪ）を用いて、上澄のＭＰＯ活性を動力学的に定量する（３分間にわたって
吸光度の変化を測定し、１５秒間隔でサンプリングする）。ＭＰＯ活性の一単位
を、２５℃で１分当たりにペルオキシド１マイクロモルが分解する速度と定義す
る。

【００４７】炎症介在の軟骨破壊に対する効果をインビトロでの軟骨外移植体システムで測
定する。この実験においては、ウシ関節軟骨外移植体を４日／９６時間ｒＨｕＩ
Ｌ−１αと共にまたは無しでインキュベートし、試験化合物の存在下または不在
下で軟骨破壊を刺激する。酸化窒素検定のために上澄を取り出す。グレイス反応
を用いて酸化窒素を測定し、５３０ｎｍで分光光学的に読み取る。この反応は酸
化窒素の安定した最終生成物であるニトライト（ＮＯ₂）を測定するものである
。

【００４８】一般的操作核磁気共鳴スペクトルを、Bruler製のBruker ＡＭ２５０、Bruker ＡＲＸ３
００またはBruker ＡＣ４００スペクトロメーターを用い、各々、２５０、３０
０または４００ＭＨｚのいずれかで記録する。ＣＤＣｌ３は重水素化クロロホル
ムであり、ＤＭＳＯ−ｄ₆がヘキサ重水素化ジメチルスルホキシドであり、ＣＤ₃ ＯＤはテトラ重水素化メタノールである。化学シフトは内部標準のテトラメチル
シランからの百万分の値でダウンフィールドした数値（ｄ）で報告する。ＮＭＲ
データの略号は以下のとおりである：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ
＝四重線、ｍ＝多重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ａｐｐ
＝見かけ、ｂｒ＝幅広い。Ｊはヘルツで測定したＮＭＲカップリング定数を示す
。連続波の赤外線吸収（ＩＲ）スペクトルはPerkin−Elmer６８３赤外線スペク
トロメーターで記録したものであり、フーリエ変換赤外線（ＦＴＩＲ）スペクト
ルをNicolet Impact ４００Ｄ赤外線スペクトロメーターを用いて記録した。Ｉ
ＲおよびＦＴＩＲスペクトルは透過方式で記録されており、バンド位置は波長逆
数（ｃｍ^-1）で報告されている。質量スペクトルは、高速原子衝撃（ＦＡＢ）ま
たは電子噴射（ＥＳ）イオン化法を用いる、ＶＧ７０ＦＥ、ＰＥＳｙｘＡＰＩ
ＩＩＩまたはＶＧＺＡＢＨＦ装置で測定した。元素分析はPerkin−Elmer ２４
０Ｃ元素分析装置を用いて得た。融点はThomas−Hoover融点装置で測定し、未較
正のままである。温度はすべて摂氏で報告する。

【００４９】薄層クロマトグラフィーには、Analtech Silica Gel GFおよびE.Merck Silica
Gel 60 F-254薄層プレートを使用した。フラッシュおよび重力クロマトグラフ
ィーは共にE.Merck Kieselgel 60（230−400メッシュ）シリカゲルを用いて実施
した。指示のある、特定の材料は、Aldrich Chemical Co.、ミルウォーキー、ウィス
コンシン州より購入した。

【００５０】（実施例）以下の合成例において、温度は摂氏（℃）である。特記しない限り、出発物質
はすべて市販品である。当業者であれば、さらに工夫することなく、上記した方
法を用いて、本発明を最大限利用することができると考えられる。これらの実施
例は本発明の例示であって、本発明の範囲を限定するものではない。上記した特
許請求の範囲は本発明者等に保留される事項に言及するものである。

【００５１】実施例１３−[(Ｎ−ブチル)アミノ]−２−ベンザルインダノンの長製ａ）２−ベンザルインダノン A.Hassner、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９５８、８０、８９３−９００の
操作に従って、ベンズアルデヒド（６.０５ｍＬ、５３.６ミリモル）を、０℃の
インダノン（Aldrich、７.０８ｇ、５３.６ミリモル）のエタノールおよびＫＯ
Ｈ（６００ｍｇ、１０.６ミリモル）中溶液に加え、反応物を冷凍庫中に一夜放
置した。反応混合物を濾過し、５０％水性ＥｔＯＨで洗浄し、ついで熱エタノー
ルから再結晶し、２−ベンザルインダノン（５.８４ｇ）を得た。¹ＨＮＭＲ（
３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ ７.９３（ｄ,１Ｈ,Ｊ＝７.７）、７.７５−７.３
５（ｍ,８Ｈ）、４.０８（ｓ,２Ｈ）。

【００５２】ｂ）３−ブロモ−２−ベンザルインダノン B.D.Pearson、R.P.Ayer、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９６２、２７、３０
３８−３０４４の操作に従って、ＣＣｌ₄（１５ｍＬ）中の実施例１（ａ）の化
合物（１.０ｇ、４.５５ミリモル）をＮＢＳ（８１０ｍｇ、４.５５ミリモル）
および過酸化ベンゾイル（５０ｍｇ）と反応させ、その混合物を加熱ランプを用
いて還流温度で１時間加熱した。反応物を冷却し、濾過し、濾液を蒸発させて３
−ブロモ−２−ベンザルインダノンを得、それをさらに精製することなく使用し
た。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃）δ ８.１−７.２（ｍ,１０Ｈ）、
６.４０（ｓ,２Ｈ）。

【００５３】ｃ）３−[(Ｎ−ブロモ)アミノ]−２−ベンザルインダノン G.Maury、E.M.Wu、N.H.Cromwell、J.Org.Chem. １９６８、３３、１９００−
１９０７の操作に従って、ベンゼン中の実施例１（ｂ）の化合物をｎ−ブチルア
ミン（３００μＬ、３.０４ミリモル）と反応させ、その溶液を室温で２４時間
攪拌した。反応物を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲ
ル、ヘキサン中１０％酢酸エチル）に付して精製し、３−[(Ｎ−ブロモ)アミノ]
−２−ベンザルインダノン（３５３ｍｇ）を得た。遊離塩基のエーテル中部分を
１ＮＨＣｌと反応させて固体としてその塩酸塩を得た。ＥＳＭＳ（Ｍ＋Ｈ）⁺
ｍ／ｅ２９２；¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δδ８.２（ｄ,１Ｈ,
Ｊ＝７.０Ｈｚ）、８.０３（ｓ,１Ｈ）、７.９８（ｄ,１Ｈ,Ｊ＝６Ｈｚ）、７.
８４（ｔ,１Ｈ,Ｊ＝６Ｈｚ）、７.８５−７.５０（ｍ,７Ｈ）、６.７（ｂｒｓ,
１Ｈ）、２.４８（ｂｒｓ,１Ｈ）、２.２８（ｂｒｓ,１Ｈ）、１.６−１.３（ｍ
,２Ｈ）、０.９５−０.８（ｍ,２Ｈ）、０.６５（ｔ,３Ｈ,Ｊ＝６.５Ｈｚ）。

【００５４】上記した明細書および実施例は本発明の化合物の製法および使用法を十分に開
示するものである。しかし、本発明は上記した特定の具体例に限定されるもので
はなく、上記した特許請求の範囲内にあるそのすべての修飾を包含するものであ
る。本明細書中に引用されている雑誌、特許および他の刊行物などの種々の引用
文献は現状を構成するものであり、それらは、たとえ、本願が十分に開示されて
いるとしても、出典を明示することにより本明細書の一部とするものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/02 Ａ６１Ｐ 9/02 9/10 9/10 １０１１０１ 11/06 11/06 17/00 17/00 17/04 17/04 17/06 17/06 19/02 19/02 25/28 25/28 29/00 29/00 １０１１０１ 31/18 31/18 35/00 35/00 37/06 37/06 // Ｃ０７Ｄ 295/10 Ｃ０７Ｄ 295/10 Ｚ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者マリー・シー・チャボット−フレッチャーアメリカ合衆国19460ペンシルベニア州フェニックスビル、ゲイ・ストリート902番Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 BC21 BC73 MA01 MA03 NA14 ZA16 ZA36 ZA45 ZA89 ZA96 ZA97 ZB02 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC02 ZC55 4C206 AA01 AA02 CB21 FA29 MA01 MA03 NA14 ZA16 ZA36 ZA45 ZA89 ZA96 ZA97 ZB02 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC02 ZC55

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ：【化１】［式中：Ｒ₁はアリールであり；Ｒ₂はＨ、Ｃ_1-6アルキルおよびアリールからなる群より選択され；Ｒ₃はＣ_1-6アルキルおよびＣ_3-8シクロアルキルからなる群より選択され；お
よびＲ₂およびＲ₃は、一緒に結合して、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択さ
れる５−７個の原子を有する複素環式環を形成してもよい］で示される化合物および医薬上許容される担体、希釈体または賦形剤を含むこと
を特徴とする医薬組成物。
【請求項２】Ｒ₂がＨである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】Ｒ₃がブチルおよびシクロへキシルからなる群より選択され
る、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】Ｒ₂およびＲ₃が、一緒に結合して、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳから
なる群より選択される５−７個の原子を有する複素環式環を形成する、請求項１
記載の医薬組成物。
【請求項５】Ｒ₃がモルホリニルおよびピペリジニルからなる群より選択
される、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】化合物が：３−[(Ｎ−ブチル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−[(Ｎ−シクロヘキシル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−モルホリニル−２−ベンザルインダノン；および３−ピペリジニル−２−ベンザルインダノンからなる群より選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】ＮＦ−κＢの阻害方法であって、その阻害を必要とする患者
に、有効量の式：【化２】［式中：Ｒ₁はアリールであり；Ｒ₂はＨ、Ｃ_1-6アルキルおよびアリールからなる群より選択され；Ｒ₃はＣ_1-6アルキルおよびＣ_3-8シクロアルキルからなる群より選択され；お
よびＲ₂およびＲ₃は、一緒に結合して、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択さ
れる５−７個の原子を有する複素環式環を形成してもよい］で示される化合物を投与することを特徴とする方法。
【請求項８】化合物が：３−[(Ｎ−ブチル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−[(Ｎ−シクロヘキシル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−モルホリニル−２−ベンザルインダノン；および３−ピペリジニル−２−ベンザルインダノンからなる群より選択される、請求項７記載の方法。
【請求項９】ＮＦ−κＢの過剰な活性化により特徴付けられる疾患の治療
方法であって、その治療を必要とする患者に、有効量の式：【化３】［式中：Ｒ₁はアリールであり；Ｒ₂はＨ、Ｃ_1-6アルキルおよびアリールからなる群より選択され；Ｒ₃はＣ_1-6アルキルおよびＣ_3-8シクロアルキルからなる群より選択され；お
よびＲ₂およびＲ₃は、一緒に結合して、Ｃ、Ｎ、ＯおよびＳからなる群より選択さ
れる５−７個の原子を有する複素環式環を形成してもよい］で示される化合物、またはその医薬上許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を
投与することを特徴とする方法。
【請求項１０】化合物が：３−[(Ｎ−ブチル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−[(Ｎ−シクロヘキシル)アミノ]−２−ベンザルインダノン；３−モルホリニル−２−ベンザルインダノン；および３−ピペリジニル−２−ベンザルインダノンからなる群より選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】疾患が炎症性障害である、請求項９または１０記載の方法
。
【請求項１２】疾患が慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患および喘息からな
る群より選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】疾患が皮膚病である請求項９または１０記載の方法。
【請求項１４】疾患が乾癬およびアトピー性皮膚炎からなる群より選択さ
れる、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】疾患が自己免疫疾患；組織および器官拒絶反応；アルツハ
イマー病；発作；アテローム性動脈硬化症；再狭窄；骨関節炎；骨粗鬆症；およ
び毛細血管拡張性運動失調である、請求項９または１０記載の方法。
【請求項１６】疾患が癌である請求項９または１０記載の方法。
【請求項１７】癌がホジキン疾患である請求項１６記載の方法。
【請求項１８】疾患がＡＩＤＳである請求項９または１０記載の方法。