JP2002534433A - プロトン付加または酸性化された核酸および使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 プロトン付加核酸が細菌増殖を阻害するという新規発見を報告し、細菌感染を処置または予防するための、ヒトを含む動物への投与用のヌクレアーゼ耐性および酸耐性プロトン付加／酸性化された核酸の調製法および治療使用を記載する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、一般に、修飾核酸の分野、より特定すると抗生物質として使用する
核酸に関する。

【０００２】 （発明の背景） 感染症に関与する病原性細菌は、かつて、ペニシリン、ストレプトマイシン、
テトラサイクリン、およびその他などの一連の抗生物質の使用により制御できる
と考えられていた。しかし、抗生物質の多用が１９５０年代に始まって以来、よ
り多くの細菌が進化して、１つ以上の抗生物質に耐性となってきた。多剤耐性株
は、特に病院において、次第に一般的なものとなっている。

【０００３】 現在、院内スタフィロコッカス感染は多剤耐性を示す。例えば、Ａｒｃｈｅｒ
ら、１９９４、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３
８：２２３１〜２２３７参照。現時点では、大半のスタフィロコッカス株の死滅
能を示す残りの抗生物質は、バンコマイシンである。しかし、バンコマイシンに
耐性なスタフィロコッカスおよびエンテロコッカスの両方の株がすでに単離され
、Ｚａｂｒａｎｓｋｙら、１９９５、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３３
（４）：７９１〜７９３により報告されている。さらに、エンテロコッカスから
スタフィロコッカスへの耐性の移行が、以前に、Ｗｏｏｄｆｏｒｄら、１９９５
、Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３５：１７９〜１８４によ
り記述されている。ストレプトコッカス・ニューモニエは、米国での罹患および
死亡の筆頭の原因である（Ｍ．Ｍ．Ｗ．Ｒ．、１９９６年２月１６日、第４５巻
、Ｎｏ．ＲＲ−１）。毎年、これらの細菌は３，０００症例の髄膜炎、５０，０
００症例の菌血症、５００，０００症例の肺炎、および７，０００，０００症例
の中耳炎を引き起こす。致死率は、抗生物質療法にも関わらず、菌血症で４０％
以上、髄膜炎で５５％以上である。過去に、ストレプトコッカス・ニューモニエ
は、一様に抗生物質に感受性であったが、抗生物質耐性株が出現し、いくつかの
地域社会では蔓延してきている。

【０００４】 さらに、抗生物質耐性は問題ではないが、特定の細菌が、従来の抗生物質を使
用した処置に依然として難治性である場合もある。これは、食中毒および火のよ
く通っていない肉による死亡の原因物質である、エシェリヒア・コリ０１５７：
Ｈ７の場合である。米国農務省は、毎日１０人が死亡し、さらに１４，０００人
がこの細菌により病気になると推定している。残念なことに、従来の抗生物質は
、この生物に対して完全に無効である。

【０００５】 病原性細菌の抗生物質による処置の歴史は、循環的である。細菌は、極めて適
合性のある生物であり、開発された各々の新規抗生物質について、耐性細菌株が
抗生物質の多用により生じる。従って、次世代の抗生物質耐性細菌を駆除するた
めに、新規抗生物質を製造する必要が常にある。伝統的な新規抗生物質の開発法
は減速しており、過去２年間に、僅か１つの新規抗生物質がＦＤＡにより認可さ
れたのみである。さらに、Ｋｒｉｓｔｉｎｓｓｏｎ（Ｍｉｃｒｏｂ．Ｄｒｕｇ
Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ １（２）：１２１（１９９５））によると、「耐性グラ
ム陽性菌に対する活性をもつ新規クラスの抗生物質の兆しは全く見えない」。

【０００６】 アンチセンス療法は、細胞での望まれない遺伝子発現を特異的に阻害する核酸
を使用する。アンチセンス核酸を使用して、ＲＮＡ、典型的にはメッセンジャー
ＲＮＡにハイブリッドし、ＲＮａｓｅＨを活性化、またはリボソームまたはタン
パク質の結合を物理的に遮断し、よってｍＲＮＡの翻訳を防ぐことにより、その
機能を阻害することができる。アンチセンス核酸はまた、触媒活性（リボザイム
）をもつＲＮＡを含み、これは、標的ＲＮＡ上の相補的配列に選択的に結合し、
切断反応を媒介することにより物理的に標的を破壊できる。

【０００７】 正しい位置でＤＮＡに結合するアンチセンス核酸はまた、ＤＮＡがＲＮＡに転
写されるのを防ぐことができる。これらのアンチセンス核酸は、二本鎖ＤＮＡに
結合し（三本鎖ＤＮＡを形成して）、よって遺伝子発現を阻害すると考えられて
いる。

【０００８】 核酸はまた、その作用形態が、ＤＮＡまたはＲＮＡ以外の分子、例えばタンパ
ク質との相互作用の結果である、アプタマーとしての使用を見出した。

【０００９】 核酸はまた、ＣＧモチーフの存在に応答して、免疫系を刺激することが示され
ている（Ｙａｍａｍｏｔｏら、１９９４、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ
ｅｌ．４：１１９〜１２２；Ｋｒｉｅｇら、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ ３７４：
５４６〜５４９）。この刺激の機序は明らかでないが、アンチセンス機序には関
与していないようである。

【００１０】 内部化核酸の運命は、核酸療法の成功に重要であることが実証されている（Ｂ
ｅｎｎｅｔｔ、１９９３、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖｅｌ．３：２３
５〜２４１）。核酸の迅速な細胞内での分解は、その使用の障害であり得る。天
然ホスホジエステル核酸の使用における主な問題の１つは、哺乳動物細胞または
血清含有培養培地中でのヌクレアーゼによるその迅速な分解である（Ｃｏｈｅｎ
、１９８９、オリゴデオキシヌクレオチド：遺伝子発現のアンチセンス阻害剤、
ボーカラトーン、ＦＬ、ＣＲＣプレス）。核酸の骨格の修飾は、様々な程度のヌ
クレアーゼ耐性を付与する多くの証拠がある。Ｈｏｋｅら、１９９１、Ｎｕｃｌ
．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１９：５７４３は、ホスホジエステル骨格核酸を、完全
に修飾したホスホロチオエート骨格核酸と、およびキメラホスホジエステルおよ
びホスホロチオエート骨格核酸と比較した。Ｈｏｋｅらは、ホスホロチオエート
核酸は、ホスホジエステルまたはキメラ骨格核酸よりも４５倍以下ゆっくりと分
解したことを実証した。

【００１１】 ヌクレアーゼ耐性骨格結合で末端キャップしたキメラ核酸は分解に耐性である
という報告がある（Ｃｏｈｅｎ、１９８９、オリゴデオキシヌクレオチド：遺伝
子発現のアンチセンス阻害剤、ボーカラトーン、ＦＬ、ＣＲＣプレス）。しかし
、Ｈｏｋｅらは、キャップした核酸は、細胞内エンドヌクレアーゼにより迅速に
分解し、よって核酸をヌクレアーゼ耐性修飾でキャップしても、細胞における核
酸の薬理活性を持続するのに十分ではないであろうことを教義する。最後に、Ｈ
ｏｋｅらは、核酸のキャッピングは、細胞培養液中のエキソヌクレアーゼからの
保護を提供し得るが、細胞内エンドヌクレアーゼの作用は、核酸が細胞に侵入し
た場合に、これらのキャップした核酸を分解するのに十分であると結論している
。

【００１２】 核酸の治療使用に対する別の制限は、そのバイオアベイラビリティーの低さで
ある。経口バイオアベイラビリティーは、腸における酸による分解、小腸におけ
る酵素的切断、小腸吸収の低さ、および肝初回通過効果により影響され得る（Ｈ
ｕｇｈｅｓら、１９９５、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
１２：８１７）。Ｃｒｏｏｋｅは、齧歯類における非常にわずかな（＜５％）核
酸のバイオアベイラビリティーを報告した（Ｓ．Ｃｒｏｏｋｅ、１９９７、アン
チセンス核酸およびアンチセンスＲＮＡ：新規薬理および治療剤、Ｂ．Ｗｅｉｓ
ｓ編、ＣＲＣプレス、ボーカラトーン、ＦＬ、１７項）。胃での胃液塩酸（ＨＣ
ｌ）の正常なｐＨは、１ないし２である（Ａ．Ｇｏｔｈ、１９７４、医療薬理学
：原理および概念、Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ Ｃｏｍｐａｎｙ、セントルイス、ＭＯ
）。核酸は、酸によるＤＮＡまたはＲＮＡ骨格の脱プリン化および切断に感受性
である。１０分間という短い時間、核酸を、室温でｐＨ１〜２に曝露すると、脱
プリン化が引き起こされる。

【００１３】 現在までに抗生物質として核酸を使用する唯一の努力は、特異的な細菌遺伝子
にハイブリッドし、その発現を阻害し、よって細菌増殖を阻害することに標的化
した、アンチセンス分子としてのその使用を含む。Ｌｕｐｓｋｉら、米国特許第
５，２９４，５３３号（’５３３特許）およびＰＣＴ国際公開第ＷＯ９６／２９
３９９号参照。この方法は効果的であり得るが、使用の範囲において限定され、
効果の強度およびアンチセンス分子の使用は、特定の標的化した生物または密接
に関連した生物に限定される。

【００１４】 従来の多くの抗生物質に耐性な細菌を含む、広範囲の細菌に対して効果的な新
規なクラスの広域抗生物質が必要である。さらに、処置した宿主に無毒性な広域
抗生物質が必要である。

【００１５】 （発明の要約） 本発明は、インビトロおよびインビボで、薬剤耐性および感受性細菌の両方に
対して効果的な抗生物質である、プロトン付加／酸性化された核酸を提供する。
これらの修飾核酸は、核酸分子の具体的な配列または長さに関係なく、殺細菌剤
および／または静細菌剤として効果的である。本発明の核酸は、プロトン付加／
酸性化され、ヌクレアーゼ耐性骨格、酸耐性骨格を有し、およびその好ましい実
施形態において、酸耐性骨格およびヌクレアーゼ耐性骨格の両方を有する。本発
明の核酸は、プロトン付加／酸性化されると、水に溶かした場合に、ｐＨ７以下
から約１まで、より好ましくはｐＨ４．５以下から約１まで、さらにより好まし
くはｐＨ２以下から約１までのｐＨを与える。

【００１６】 １つの実施形態において、本発明は、抗細菌剤としての、プロトン付加／酸性
化された核酸の治療使用を提供する。特に、本発明のプロトン付加／酸性化され
た核酸は、全ての細菌種に対して効果的な抗細菌剤であり、ヒトおよび他の動物
の細菌感染を処置または予防するために医薬的にまたは美容的に使用できる。好
ましい処置法は、細菌増殖を阻害または予防、細菌増殖の症状を軽減するに十分
な量、または、細菌感染の処置に効果的な量の、プロトン付加／酸性化された核
酸の動物への投与を含む。

【００１７】 別の実施形態において、本発明は、ウイルス感染、炎症疾患、癌、真菌感染等
を含む疾患の処置または予防のための核酸の治療使用を提供し、ここでの前記核
酸は、細菌感染を同時に予防または処置するためにさらにプロトン付加されてい
る。

【００１８】 本発明はさらに、動物、より好ましくはヒトを含む哺乳動物での細菌感染の処
置用の薬用組成物の調製のための、許容される医薬担体と共に、記載した抗細菌
核酸の使用を提供する。

【００１９】 本発明はさらに、許容される美容的担体と共に、局所的皮膚クリームでの記載
した抗細菌核酸の使用を提供する。かかる局所的皮膚クリームは、軟化剤、加湿
剤、芳香剤等の添加剤を含み得る。

【００２０】 本発明はさらに、記載した抗細菌核酸からなる消毒溶液を提供する。消毒剤は
、その無毒性から、皮膚上での使用に適し得るか、または院内器具などの表面の
消毒に使用し得る。

【００２１】 本発明はまた、病原性細菌に対する静細菌効果または殺細菌効果を付与するた
めの、核酸をプロトン付加／酸性化する数個の方法を提供する。得られたプロト
ン付加／酸性化された核酸は、細菌病原体により引き起こされた疾病に罹患した
、ヒトを含む動物の処置に使用できる。

【００２２】 本発明の目的は、臨床関連病原性細菌を含む、任意の細菌の増殖を阻害するた
めに、プロトン付加／酸性化された核酸を使用することである。

【００２３】 本発明の利点は、プロトン付加／酸性化された核酸の作用機序は、比較的非特
異的のようであり、これによりそれらは、臨床関連病原性細菌を含む任意の細菌
に対して効果的であることである。

【００２４】 本発明の別の利点は、プロトン付加／酸性化された核酸は、修飾核酸で処置し
た対象（被検者）に無毒性であることである。

【００２５】 さらなる利点は、プロトン付加／酸性化された核酸の抗細菌効力は、長さ依存
的でも配列依存的でもないことである。

【００２６】 本発明の特徴は、プロトン付加／酸性化された核酸が、細菌性病原体により引
き起こされる様々な病気の処置に効果的であることである。

【００２７】 本発明のこれらおよび他の目的、利点および特徴は、以下により完全に記載し
た核酸およびその使用の詳細を読めば、当業者には明らかとなろう。

【００２８】 （好ましい実施形態の詳細な説明） 本発明は、記載した特定の方法論、プロトコル、細胞系、動物種または属、作
成物および試薬に限定されず、勿論、変化し得ることを理解されたい。また、本
明細書に使用した用語は、特定の実施形態を説明する目的ためだけのものであり
、本発明の範囲を限定するとは捉えず、これは添付の特許請求の範囲によっての
み限定されることを理解されたい。

【００２９】 本明細書および添付の特許請求の範囲で使用したような、単数形の「ａ」、「
ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容から明らかに他を示す場合以外、複数の対象
を含むことに注意しなければならない。従って、例えば、「細菌」への言及は、
複数の細菌種を含み、「オリゴヌクレオチド」は、複数のオリゴヌクレオチドお
よび当業者には公知のその等価体を含み得る、等である。

【００３０】 特記しない限り、本明細書に使用した全ての専門用語および科学用語は、本発
明が属する分野の普通程度の技術的理解力を有する者には一般に理解されるのと
同じ意味を有する。本明細書に記載したものと類似または等価な任意の方法、装
置および物質を、本発明の実施または試験に使用できるが、好ましい方法、装置
および物質をここでは記載する。

【００３１】 本明細書に記載した全ての刊行物は、例えば、今回記載した発明と関連して使
用し得る、刊行物に記載された、細胞系、作成物および方法論を説明および開示
する目的のために、本明細書に参考として取込む。上記および文書全体を通じて
議論した刊行物は、単に本出願の提出日より前に開示されたために提供される。
本明細書のどの記載事項も、発明者は、前の発明により、かかる開示の日付を早
める権利がないという承認とは捉えない。

【００３２】 （定義） 本明細書では同義語として使用した「核酸」および「核酸分子」なる語は、ヌ
クレオチド、すなわち、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドまたは両
方からなる分子を意味する。この語は、リボヌクレオチドおよびデオキシリボヌ
クレオチドのモノマーおよびポリマーを含み、リボヌクレオチドおよび／または
デオキシリボヌクレオチドは、ポリマーの場合、５’から３’結合を介して共に
接続している。しかし、結合は、例えば、５’から２’結合を含む核酸を含む、
核酸合成分野で既知の任意の結合を含み得る。核酸分子に使用されるヌクレオチ
ドは、天然であっても、または、天然塩基対と塩基対形成関係を形成できる、合
成的に製造した類似体でもよい。塩基対形成関係を形成できる非天然塩基の例は
、アザおよびデアザピリミジン類似体、アザおよびデアザプリン類似体、および
他のヘテロ環塩基類似体（プリンまたはピリミジン環の炭素および窒素原子の１
つ以上が、ヘテロ原子、例えば酸素、硫黄、セレン、リン等により置換されてい
る）を含むがこれに限定されない。

【００３３】 本明細書に使用した「オリゴヌクレオチド」なる語は、約２〜約１００のヌク
レオチド、より好ましくは２〜８０のヌクレオチド、さらにより好ましくは約４
〜約３５のヌクレオチドを含む核酸分子を意味する。

【００３４】 本明細書に使用した「モノマー」なる語は、１つのヌクレオチドを含んでなる
核酸分子およびその誘導体を意味する。

【００３５】 本明細書に使用した「修飾オリゴヌクレオチド」、「修飾モノマー」および「
修飾核酸分子」は、核酸塩基、糖部分、ヌクレオシド間リン酸結合の全てまたは
いずれかの天然分子構造の分子レベルでの１つ以上の化学的修飾を有する核酸、
並びに、これらの部位に、ジアミン、コレステリルまたは他の親油性基、または
修飾の組合せなどの追加の置換基を有する分子を意味する。ヌクレオシド間リン
酸結合は、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、シロ
キサン、カーボネート、カルボキシメチルエステル、アセトアミデード、カルバ
メート、チオエーテル、架橋ホスホルアミデート、架橋メチレンホスホネート、
ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホロジチオエート、架橋ホスホ
ロチオエート、および／またはスルホンヌクレオチド間結合、または３’−３’
、２’−５’、または５’−５’結合、および（混合骨格修飾オリゴヌクレオチ
ドを産生する）かかる類似の結合の組合せであり得る。修飾は、内部（単一また
は反復）またはオリゴヌクレオチド分子の末端（群）であり得、アミノ基と末端
リボース、デオキシリボースの間に様々な数の炭素残基を有する、コレステリル
、ジアミン化合物などの、ヌクレオシド間リン酸結合の分子への付加、および、
反対の鎖または会合した酵素または他のタンパク質を切断または架橋するリン酸
修飾を含み得る。リボース−ジアルデヒドなどの求電子性基は、かかるタンパク
質のリシル残基のεアミノ基と共有結合的に連結できる。オリゴマーに繋がった
ｎ−エチルマレイミドなどの求核性基は、ｍＲＮＡの５’末端または別の求電子
性部位に共有結合的に付着できる。修飾オリゴヌクレオチドなる語はまた、２’
−置換リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドモノマーなどの糖部分
への修飾を含むオリゴヌクレオチドを含み、そのいずれも５’から３’結合を介
して共に接続している。修飾オリゴヌクレオチドはまた、配列の標的特異性が維
持されている、ＰＮＡまたはモルホリノ修飾骨格からなり得る。

【００３６】 本明細書に使用した「核酸骨格」なる語は、分子中のヌクレオチドを連結して
いる化学部分の構造を意味する。これは、ヌクレオチドを化学的に連結している
いずれかおよび全ての手段から形成された構造を含み得る。本明細書に使用した
修飾骨格は、ヌクレオチド間の化学結合への修飾、並びに、糖構造への修飾など
の、安定性および親和性を増強するために使用し得る他の修飾を含む。例えば、
デオキシリボースのα−アノマーを使用し得、ここでの塩基は、天然β−アノマ
ーに関して反転している。好ましい実施形態において、糖基の２’−ＯＨを、２
’−Ｏ−アルキルまたは２’−Ｏ−アルキル−ｎ（Ｏ−アルキル）に変化させ得
、これは、親和性に影響を及ぼすことなく分解に対する耐性を与える。

【００３７】 本明細書に同義語として使用した「酸性化」および「プロトン付加／酸性化」
なる語は、プロトン（すなわち陽性水素イオン）が、核酸上のプロトン受容部位
に加えられるプロセスを意味する。プロトン受容部位は、核酸の塩基構造上のア
ミン基およびホスホジエステル結合のリン酸を含む。ｐＨが低下すると、プロト
ン付加されるこれらの受容部位の数は増加し、より高度にプロトン付加／酸性化
された核酸が得られる。

【００３８】 「プロトン付加／酸性化された核酸」なる語は、１ｍｌあたり約１６のＡ₂₆₀
の濃度で水に溶かした場合に、生理学的ｐＨより低い、すなわち、約ｐＨ７より
低いｐＨを有する核酸を意味する。修飾核酸、ヌクレアーゼ耐性核酸、およびア
ンチセンス核酸は、この定義に包含されると意味する。一般に、核酸は、核酸上
の反応部位にプロトンを加えることによりプロトン付加／酸性化されるが、核酸
のｐＨを減少させる他の修飾も使用でき、この語により包含されると捉えられる
。

【００３９】 本明細書に使用した「末端遮断」なる語は、例えばヌクレアーゼ作用による、
選択したヌクレオチドの分解を防ぐ、分子レベルでの化学的修飾を含む核酸を意
味する。この化学的修飾は、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドのコード
領域などの、核酸の必要不可欠な部分を保護するように位置する。末端遮断は、
３’末端遮断または５’末端遮断であり得る。例えば、核酸の必要不可欠な配列
が３’にある場合、３’末端遮断は、分子のまさに３’の部位であり得るか、ま
たは、３’末端の内部であり得る。

【００４０】 「実質的にヌクレアーゼに耐性」なる語は、天然または非修飾核酸に比べて、
ヌクレアーゼによる分解に耐性である核酸を意味する。本発明の修飾核酸は、そ
の非修飾対応物よりも、ヌクレアーゼによる分解に対して、少なくとも１．２５
倍耐性であり、その非修飾対応物よりも、より好ましくは少なくとも２倍耐性で
、さらにより好ましくは少なくとも５倍耐性であり、最も好ましくは少なくとも
１０倍耐性である。このような実質的にヌクレアーゼに耐性な核酸は、ホスホロ
チオエート、メチルホスホネート、エチルホスホトリエステル、２’−Ｏ−メチ
ルホスホロチオエート、２’−Ｏ−メチル−ｐ−エトキシリボヌクレオチド、２
’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−ｎ（Ｏ−アルキル）、２’−フルオロ
、２’−デオキシ−エリトロペントフラノシル、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオ
シド、メチルカルバメート、メチルカーボネート、反転塩基（例えば反転Ｔ’ｓ
）、またはこれらの骨格のキメラ型を含むがこれに限定されない。

【００４１】 本明細書に使用した「実質的に酸に耐性」なる語は、非修飾核酸に比べて、酸
による分解に耐性である核酸を意味する。典型的には、核酸の相対的な酸耐性は
、耐性核酸の分解比率を、非修飾対応物（すなわち、「正常な」骨格、塩基、お
よびホスホジエステル結合をもつ対応する核酸）の分解比率と比較することによ
り測定する。酸耐性である核酸は、その非修飾対応物よりも、好ましくは、酸に
よる分解に対して少なくとも１．５倍耐性、少なくとも２倍耐性、さらにより好
ましくは少なくとも５倍耐性、そして最も好ましくは少なくとも１０倍耐性であ
る。

【００４２】 本明細書に使用した「ＬＤ₅₀」なる語は、全ての処置した実験動物で、５０％
致死率をもたらす活性物質の用量である。これは通常、経口、非経口等の観血的
投与を対象とするが、活性物質の局所適用などの、より観血的ではない投与法を
使用した毒性にも適用し得る。

【００４３】 本明細書に使用した「アルキル」なる語は、メチル、エチル、プロピル、ｔｅ
ｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル等の、１〜６炭素原子を含む、分枝または非分枝飽
和炭化水素鎖を意味する。

【００４４】 「処置」、「処置している」なる語は、一般に、所望の薬理および／または生
理効果を得ることを意味するために本明細書で使用する。効果は、疾患またはそ
の症状を完全にまたは部分的に予防する点で予防的であり得、および／または、
疾患および／または疾患に起因する副作用の完全または部分的な治癒の点で治療
的であり得る。本明細書に使用した「処置」なる語は、哺乳動物、特にヒトの疾
患の任意の処置を網羅し、 （ａ）疾患の素因があり得るが、疾患を有するとはまだ診断されていない対象（
被検者）において、細菌症が起こることを予防すること、 （ｂ）細菌症を阻害、すなわち、その発達を停止すること、または （ｃ）細菌症を軽減、すなわち、疾患の減退および／または寛解を引き起こすこ
とを含む。本発明は、任意の感染性細菌に罹患した患者の処置に関する。

【００４５】 （発明の総論） 本発明は、任意の配列および任意の長さのプロトン付加／酸性化された核酸が
、インビトロおよびインビボで、薬剤耐性および抗生物質感受性細菌の両方に対
して効果的な、新規なクラスの抗生物質を示すという発見に基づく。特に、本発
明のプロトン付加／酸性化された核酸は、全ての細菌種に対して効果的な抗細菌
剤であり、ヒトおよび動物の細菌感染の処置または予防に使用できる。従って、
本発明は、プロトン付加ヌクレアーゼ耐性核酸、および、細菌の死滅または細菌
増殖の阻害に効果的なそれらの産生法を含む。特に、本発明は、殊に、病原性細
菌に対する核酸の抗細菌作用を促進するプロトン付加のプロセスに関する。

【００４６】 さらに、他の疾患または疾病の処置に今回治療使用する核酸、例えば、特定の
遺伝子に標的化したアンチセンス核酸もプロトン付加／酸性化でき、よってかか
る核酸に、さらなる抗細菌活性の治療効果を付与する。従って、本発明はまた、
細菌感染を同時に処置または予防するためにさらにプロトン付加された、ウイル
ス感染、癌、真菌感染等に関与する疾患の処置または予防のための核酸の使用を
含む。

【００４７】 プロトン付加／酸性化は、抗細菌剤として機能する能力を核酸に付与するため
に使用できる。核酸の酸性化は、プロトン（すなわち陽性水素イオン）を核酸上
の反応部位に加えるプロセスである。プロトン付加される反応部位の数が増加す
るにつれて、ｐＨは低下し、核酸の細菌阻害活性は増加する。従って、本発明の
核酸は、プロトン付加／酸性化されると、水に溶かした場合に、ｐＨ７以下〜約
ｐＨ１まで、または好ましい実施形態において、ｐＨ６〜約１またはｐＨ５〜約
１までのｐＨを与える。他の好ましい実施形態において、溶解した核酸は、ｐＨ
４．５〜約１、または、好ましい実施形態において、４．０〜１のｐＨ、または
、より好ましい実施形態において、３．０〜約１のｐＨ、または、別のより好ま
しい実施形態において、２．０〜約１のｐＨを有する。

【００４８】 好ましい実施形態において、本発明の組成物および方法のプロトン付加／酸性
化された核酸は、実質的にヌクレアーゼに耐性、実質的に酸に耐性、および好ま
しくは、実質的にヌクレアーゼに耐性および実質的に酸に耐性の両方である。こ
の実施形態は、ホスホロチオエート結合、２’−Ｏ−メチル−ホスホジエステル
、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−ｎ（Ｏ−アルキル）、２’−フル
オロ、２’−デオキシ−エリトロペントフラノシル、ｐ−イソプロピル核酸、ホ
スホルアミデート、キメラ結合、および任意の他の骨格修飾により完全に誘導体
化された核酸を含む。この実施形態はまた、核酸を、実質的に内因性ヌクレアー
ゼ活性に耐性にする他の修飾を含む。核酸をヌクレアーゼに耐性にする方法は、
核酸を含むプリンまたはピリミジン塩基の共有結合的修飾を含むがこれに限定さ
れない。例えば、修飾塩基を含む核酸が実質的にヌクレアーゼに耐性となるよう
に、塩基を、メチル化、ヒドロキシメチル化、または別様に置換（例えばグルコ
シル化）し得る。

【００４９】 最も好ましい実施形態において、プロトン付加／酸性化された核酸は、酸分解
、エキソヌクレアーゼ消化、およびエンドヌクレアーゼ消化に対して実質的に耐
性である骨格を有する。

【００５０】 典型的には、核酸の相対的なヌクレアーゼ耐性は、耐性核酸の消化比率を、そ
の非修飾対応物（すなわち、「正常な」骨格、塩基、およびホスホジエステル結
合をもつ対応する核酸）の消化比率と比較することにより測定できる。消化比率
は、定性ＨＰＬＣを使用して、全長核酸の消失を評価することにより、または任
意の他の適切な方法により（例えば、染色、オートラジオグラフィー、蛍光等を
使用してシークエンスゲル上の産物を可視化、または光学密度のシフトを測定す
ることにより）決定し得る。分解は、一般に、時間の関数として測定する。

【００５１】 非修飾核酸と修飾核酸の比較は、無傷修飾核酸の比率を、無傷非修飾核酸の比
率に割当てることにより実施できる。例えば、１５分間ヌクレアーゼに曝露した
後、非修飾核酸の２５％が無傷であり（すなわち７５％分解）、修飾核酸の５０
％が無傷である場合（すなわち５０％分解）、修飾核酸は、非修飾核酸よりもヌ
クレアーゼによる分解に対して２倍（５０％を２５％で割る）耐性であると言わ
れる。一般に、実質的にヌクレアーゼに耐性な核酸は、１５分間ヌクレアーゼに
曝露した後に、ヌクレアーゼによる分解に対して、対応する配列を有する非修飾
核酸よりも、少なくとも約１．２５倍耐性、典型的には少なくとも約１．５倍耐
性、好ましくは約１．７５倍耐性、そしてより好ましくは少なくとも約１０倍耐
性である。

【００５２】 酸分解比率は、定性ＨＰＬＣを使用して、全長核酸の消失を評価することによ
り、または任意の他の適切な方法により（例えば、染色、オートラジオグラフィ
ー、蛍光等を使用してシークエンスゲル上の産物を可視化、または光学密度のシ
フトを測定することにより）決定し得る。分解は、一般に、時間の関数として測
定する。

【００５３】 非修飾核酸と修飾核酸の比較は、無傷修飾核酸の比率を、無傷非修飾核酸の比
率に割当てることにより実施できる。例えば、３０分間低いｐＨ環境に曝露した
後、非修飾核酸の２５％が無傷であり（すなわち７５％分解）、修飾核酸の５０
％が無傷である場合（すなわち５０％分解）、修飾核酸は、非修飾核酸よりもヌ
クレアーゼによる分解に対して２倍（５０％を２５％で割る）耐性であると言わ
れる。一般に、実質的に「酸に耐性な」核酸は、３０分間３７℃で約１．５〜約
４．５のｐＨに曝露した後に、酸による分解に対して、対応する配列を有する非
修飾核酸よりも、少なくとも約１．２５倍耐性、典型的には少なくとも約１．５
倍耐性、好ましくは約１．７５倍耐性、そしてより好ましくは少なくとも約１０
倍耐性である。

【００５４】 今回記載した精製核酸は、単独で治療剤として使用しても、追加の抗細菌剤と
複合させてもよい。例えば、記載したヌクレアーゼ耐性抗細菌核酸は、従来の抗
生物質または細菌遺伝子発現を阻害する他の化学基に連結させ得る。別に、精製
核酸は、他の疾病および／または症状の軽減に設計された薬剤、例えば鬱血除去
薬、抗ヒスタミン剤、抗吐気剤、鎮静剤、疼痛軽減剤等と共に治療組成物に含め
てもよい。さらに、抗細菌核酸は、例えば、核酸のインビボ安定性をさらに増強
する、またはその薬理特性を別様に増強する（例えば、インビボ半減期を増加、
毒性を減少、バイオアベイラビリティーを促進等）、様々な十分に確立された化
合物または構造と複合させ得る。

【００５５】 本発明の核酸の配列は、修飾核酸の抗細菌効果が配列に依存的ではないので変
化し得る。例えば、細菌感染の処置に指向した核酸は、細菌増殖に必要な既知の
細菌遺伝子に相補的であり得る。別の例では、本発明の核酸は、感染の処置また
は予防を引き起こす、細菌のゲノムのどの配列とも実質的な配列相同性を有さな
くてもよい。さらに別の例では、他の治療標的、例えばウイルス、癌細胞、真菌
感染に指向した核酸もまた、その基本的な治療機能に加えて、抗細菌剤として同
時に機能するように、本発明に従ってプロトン付加／酸性化し得る。

【００５６】 本発明の核酸の殺細菌および／または静細菌活性は、当業者に利用可能な任意
の数の方法を使用して測定し得る。かかる方法の一例は、抗生物質による細菌感
染の処置におけるインビボ効力を予測すると認められる、ＭＩＣ（最小阻害濃度
）の使用による、抗細菌活性の測定である。本発明の核酸は、膜を透過するよう
に細菌を前処理しなくても、および核酸をＰＥＧ修飾しなくても、この試験で抗
細菌活性を示す。

【００５７】 一連の化学的変化を有する核酸のプロトン付加／酸性化を、本発明で使用し得
るが、本発明の好ましい実施形態は、水に溶かした場合に、３〜１のｐＨを有す
る、５’−ブタノール−２’−Ｏ−アルキルＲＮＡ−ブタノール−３’または２
’−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキルの化学構造を有するプロトン付加／酸性化され
た核酸である。本発明の特に好ましい実施形態は、水に溶かした場合に、３〜１
のｐＨを有する、５’−ブタノール−２’−Ｏ−メチルＲＮＡ−ブタノール−３
’の化学骨格構造をもつプロトン付加／酸性化された核酸である。

【００５８】 核酸合成 核酸は、商業的に購入したＤＮＡ合成器で、＜１μＭから＞１ｍＭの規模で、
標準的なホスホルアミジト化学および当分野で公知の方法、例えば、Ｓｔｅｃら
、１９８４、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７〜６０８９、Ｓｔ
ｅｃら、１９８５、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５０（２０）：３９０８〜３９１３
、Ｓｔｅｃら、１９８５、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．３２６：２６３〜２８０、
ＬａＰｌａｎｃｈｅら、１９８６、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４（２２）：
９０８１〜９０９３、およびＦａｓｍａｎ、１９８９、生化学および分子生物学
の実践的なハンドブック、１９８９、ＣＲＣプレス、ボーカラトーン、フロリダ
（本明細書に参考として取込む）に記載の方法を使用して合成できる。

【００５９】 核酸は、当分野で公知の任意の方法により精製できる。好ましい実施形態にお
いて、核酸は、市販で入手可能な逆相またはイオン交換媒体、例えばウォーター
ズプロテインパック、ファルマシアのソースＱ等でクロマトグラフィーにより精
製する。ピーク画分を合わせ、サンプルを脱塩し、ポリ（スチレン−ジビニルベ
ンゼン）をベースとした媒体、ハミルトンのＰＲＰ１またはＰＲＰ３、またはポ
リマーＬａｂ’ｓＰＬＲＰレジンで、逆相クロマトグラフィーにより濃縮できる
。別に、エタノール沈降、ダイアフィルトレーション、またはゲルろ過、次いで
凍結乾燥またはＳａｖａｎｔ’ｓ Ｓｐｅｅｄ Ｖａｃなどの市販で入手可能な
装置での真空下での溶媒蒸発を使用し得る。所望により、少量の核酸を、ポリア
クリルアミドゲルを使用して電気泳動により精製し得る。

【００６０】 凍結乾燥または乾燥させた核酸の調製物を、発熱性物質非含有無菌生理食塩水
（すなわち０．８５％食塩水）、無菌シグマ水に溶かし、０．４５μのゲルマン
フィルター（または無菌の０．２μの発熱性物質非含有フィルター）を通してろ
過する。記載した核酸は、ホスホルアミデート、ホスホロチオエート、アルキル
ホスホネート、２’−Ｏ−メチル、２’−修飾ＲＮＡ、モルホリノ基、リン酸エ
ステル、プロピン基、または上記の基または他の結合（またはその類似体）の任
意の組合せのキメラを含むがこれに限定されない、任意の多種多様な化学基また
は結合で部分的にまたは完全に置換し得る。

【００６１】 様々な標準的方法を使用して、今回記載した抗細菌核酸を精製できる。簡潔に
は、本発明の抗細菌核酸は、クロマトグラフィーにより、市販で入手可能な逆相
媒体（例えば、ＲＡＩＮＩＮインストルメンツ社、ＤＹＮＡＭＡＸ（登録商標）
−３００Ａ、Ｐｕｒｅ−ＤＮＡ逆相カラム、１９８９、またはその現在のアップ
デート版の説明書参照、本明細書に参考として取込む）またはイオン交換媒体、
例えばウォーターズプロテインパックまたはファルマシアのソースＱで精製でき
る（一般に、ＷａｒｒｅｎおよびＶｅｌｌａ、１９９４、「高速液体クロマトグ
ラフィーによる合成核酸の分析および精製」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２６巻；核酸コンジュゲートのプロトコル、Ｓ
．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａプレス社、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ；Ａｈａｒｏ
ｎら、１９９３、Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．６９８：２９３〜３０１；およびＭｉｌｌｉ
ｐｏｒｅ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、１９９２、アンチセンスＤ
ＮＡ：合成、精製および分析）。ピーク画分を合わせ、サンプルを濃縮し、アル
コール（エタノール、ブタノール、イソプロパノール、およびその異性体および
混合物等）沈降、逆相クロマトグラフィー、ダイアフィルトレーション、または
ゲルろ過により脱塩できる。

【００６２】 核酸は、所望の核酸の合成中に産生される、とりわけ、不完全な核酸産物を実
質的に含まないように単離した場合に、純粋と考える。好ましくは、精製核酸は
また、オリゴヌクレオチドの抗細菌活性を妨害または別様にマスクし得る汚染物
質を実質的に含まない。開示された方法の１つによる、または当業者に既知の任
意の他の方法による酸性化後の、精製核酸は、とりわけ、過剰のプロトン付加／
酸性化試薬を実質的に含まないように単離したプロトン付加／酸性化された核酸
である。一般に、核酸が標的細胞に結合するか、またはそれに侵入して、目的の
生理活性を調節できる場合、核酸をより有用でなくする汚染物質は実質的に含ま
れていないとする。

【００６３】 特定の実施形態において、本発明の核酸は、以下の１つ以上からなる。部分的
または完全に置換されたホスホロチオエート、ホスホネート、リン酸エステル、
ホスホロアミデート、２’−修飾ＲＮＡ、３’−修飾ＲＮＡ、ペプチド核酸、プ
ロピンまたはその類似体。核酸は、ホスホジエステル結合、ホスホトリエステル
結合、ホスホルアミデート結合、シロキサン結合、カーボネート結合、カルボキ
シメチルエステル結合、アセトアミド結合、カルバメート結合、チオエーテル結
合、架橋ホスホルアミデート結合、架橋メチレンホスホネート結合、ホスホロチ
オエート結合、メチルホスホネート結合、ホスホロジチオエート結合、モルホリ
ノ、架橋ホスホロチオエート結合、スルホンヌクレオチド間結合、３’−３’結
合、５’−２’結合、５’−５’結合、２’−デオキシ−エリトロペントフラノ
シル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキル
−ｎ（Ｏ−アルキル）ホスホジエステル、モルホリノ結合、ｐ−エトキシオリゴ
ヌクレオチド、ＰＮＡ結合、ｐ−イソプロピルオリゴヌクレオチド、またはホス
ホルアミデートを含むがこれに限定されない、化学部分により完全にまたは部分
的に誘導体化され得る。

【００６４】 プロトン付加／酸性化された核酸 上記の合成および精製段階後に、またはその最中に、プロトン付加／酸性化形
の記載の核酸は、精製、または部分精製、または粗核酸を、低ｐＨ環境すなわち
酸性環境におくことにより作成できる。精製または粗核酸は、リン酸、硝酸、塩
酸、酢酸等を含むがこれに限定されない、酸でプロトン付加／酸性化できる。例
えば、酸を、溶液中で核酸と合わせても、別に、核酸を酸性溶液中に溶かしても
よい。過剰の酸はクロマトグラフィーにより、またはいくつかの場合には核酸を
乾燥させることにより除去し得る。

【００６５】 当業者には既知のプロトン付加核酸を調製する他の手順も、等しく本発明の範
囲内と考えられる。一旦、本発明の核酸がプロトン付加されると、例えば過剰の
酸などの任意の望まれない成分から分離し得る。当業者は、望まれない成分から
オリゴヌクレオチドを分離する多くの方法を知っている。例えば、オリゴヌクレ
オチド溶液を、プロトン付加後に、クロマトグラフィーにかけ得る。好ましい実
施形態において、オリゴヌクレオチド溶液を、プロトン付加後に、ポリ（スチレ
ン−ジビニルベンゼン）をベースとしたレジン（例えばハミルトンＰＲＰ−１ｐ
ｒ３およびポリマーＬａｂ’ｓＰＬＲＰ）にかける。

【００６６】 プロトン付加／酸性化された核酸は、直接使用できるか、または好ましい実施
形態において、さらに処理して、任意の過剰の酸および塩を、沈降、逆相クロマ
トグラフィー、ダイアフィルトレーション、またはゲルろ過により除去できる。
プロトン付加／酸性化オリゴは、沈降、凍結乾燥、溶媒蒸発等により濃縮できる
。水または食塩水に懸濁すると、本発明の酸性化された核酸調製物は、典型的に
は、プロトン付加／酸性化のレベルに応じて（これは、どれだけの酸を酸性化プ
ロセスに使用するかにより決定できる）、１〜４．５のｐＨを示す。別に、核酸
を、水素イオンを装填したカチオン交換カラムを通過させることによりプロトン
付加できる。

【００６７】 酸およびヌクレアーゼに耐性な核酸 一般に、ｐＨ２〜１近くの核酸調製物は、ｐＨ４．５でまたはその近くでの核
酸よりも良好な抗細菌活性を示す。多くのオリゴ骨格はｐＨ２では安定ではなく
、脱プリン化を受けるが、多くの骨格は４〜５のｐＨで比較的安定である。２’
−Ｏ−アルキル、３’−Ｏ−アルキル、および２’−Ｏ−アルキル−ｎ（Ｏ−ア
ルキル）核酸は、２〜１の望ましいｐＨで安定であることが発見された。

【００６８】 １つの実施形態において、本発明は、実質的にヌクレアーゼに耐性な核酸を使
用する。これは、ホスホロチオエート結合、２’−Ｏ−メチルホスホジエステル
、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルキル−ｎ（Ｏ−アルキル）、２’−フル
オロ、２’−デオキシ−エリトロペントフラノシル、ｐ−エトキシ、モルホリノ
核酸、ｐ−イソプロピル核酸、ホスホルアミデート、キメラ結合、および任意の
他の骨格修飾、並びに、核酸を実質的に内因性ヌクレアーゼ活性に対して耐性と
する他の修飾により、完全に誘導体化された核酸を含む。核酸をヌクレアーゼ耐
性にするさらなる方法は、核酸を含むプリンまたはピリミジン塩基を共有結合的
に修飾することを含むがこれに限定されない。例えば、修飾塩基を含む核酸が実
質的にヌクレアーゼに耐性となるように、塩基を、メチル化、ヒドロキシメチル
化、または別様に置換（例えばグリコシル化）し得る。

【００６９】 ２’−Ｏ−アルキル置換核酸および類似の修飾を有する分子は、顕著な酸安定
性およびエンドヌクレアーゼ耐性を示すが、それらは３’エキソヌクレアーゼに
感受性である。２’−Ｏ−アルキル置換核酸のエキソヌクレアーゼ耐性を増強す
るために、リボ核酸配列の５’および３’末端を、好ましくは、エキソヌクレア
ーゼ遮断官能基に付着する。例えば、１つ以上のホスホロチオエートヌクレオチ
ドを、オリゴリボヌクレオチドのどちらかの末端に配置できる。さらに、１つ以
上の反転塩基を、オリゴリボヌクレオチドのどちらかの末端に配置できるか、ま
たは１つ以上のアルキル、例えばブタノール−置換ヌクレオチドまたは化学基を
、オリゴリボヌクレオチドの１つ以上の末端に配置できる。酵素耐性ブタノール
は、好ましくは、Ｃ４スペーサーとも称される、構造ＯＨ−ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂（４−ヒドロキシブチル）を有する。従って、本発明の好ましい実施形態は
、以下の構造： Ａ−Ｂ−Ｃ ［式中、「Ｂ」は、約１〜約７８塩基長の、２’−Ｏ−アルキルまたは２’−Ｏ
−アルキル−Ｏ−アルキルオリゴリボヌクレオチドであり、そして、「Ａ」およ
び「Ｃ」は、それぞれ５’および３’末端遮断基（例えば、１つ以上のホスホロ
チオエートヌクレオチド（しかし典型的には６以下）、反転塩基結合、またはア
ルキル、アルケニル、またはアルキニル基または置換ヌクレオシド）である］ を有する抗細菌核酸を含むプロトン付加／酸性化された核酸である。遮断基の一
部リストは、反転塩基、ジデオキシヌクレオチド、メチルホスフェート、アルキ
ル基、アリール基、コルジセピン、シトシンアラバノシド、ホスホロチオエート
結合を有する２’−または３’−Ｏ−メチル塩基、３’−Ｏ−メチル塩基、フル
オレセイン、コレステロール、ビオチン、アクリジン、ローダミン、ソラレン、
およびグリセリルを含む。

【００７０】 抗細菌核酸の治療使用 疾患の治療処置に使用する場合、適切な抗細菌プロトン付加／酸性化された核
酸、またはその混合物の用量は、数個の十分に確立された方法のいずれかにより
決定し得る。例えば、動物試験を一般に使用して、１ｋｇの体重あたりの、生物
活性剤の最大耐用用量、すなわちＭＴＤを決定する。一般に、試験した動物種の
少なくとも１つは哺乳動物である。当業者は、定期的に効果的な用量を推定し、
ヒトを含む他の種への毒性を回避する。さらに、治療用量はまた、感染の重度、
宿主の体格または種などの因子に応じて変化し得る。

【００７１】 今回記載した抗細菌核酸の治療使用を考える場合、抗細菌核酸は、好ましくは
、医薬的に許容される担体中で、経口、鼻腔内、直腸、局所、腹腔内、静脈内、
筋肉内、皮下、頭蓋内、皮下、経皮、気管内法または類似の方法を介して投与す
る。

【００７２】 典型的であって、必ずしもではないが、ある抗細菌核酸の好ましい製剤は、あ
る感染性生物が最初に侵入するであろう、またはある感染性生物がコロニーを形
成または集中すると予測される、宿主の場所に依存する。例えば、局所感染は、
好ましくは、局所適用用に設計された製剤により処置または予防される。例えば
、好ましい実施形態において、酸性化された核酸は、局所投与用の、水、エタノ
ール、およびプロピレングリコール基剤で製剤化する。別に、標的病原体が、胃
腸管にコロニーを形成する場合、酸安定性プロトン付加／酸性化された核酸の調
製物は、経口投与により提供され得る。さらに、肺感染は、非経口的に、および
吸入療法または鼻腔内投与により肺に適切な製剤化形の抗細菌核酸を直接適用す
ることの両方により処置し得る。

【００７３】 適切に製剤化した核酸を非経口投与する場合、核酸は、腎臓、肝臓、脾臓、リ
ンパ腺、副腎、大動脈、膵臓、骨髄、心臓、および唾液腺に比較的高いレベルで
蓄積できる。核酸はまた、骨格筋、膀胱、胃、食道、十二指腸、脂肪、および気
管に、より低い程度で蓄積する傾向がある。さらに低い濃度が、典型的には、大
脳皮質、脳幹、小脳、脊髄、軟骨、皮膚、甲状腺、および前立腺に見られる（一
般に、Ｃｒｏｏｋｅ、１９９３、アンチセンス研究および適用、ＣＲＣプレス、
ボーカラトーン、ＦＬ参照）。興味深いことに、病原性細菌はまた、多くの上記
器官にも蓄積する傾向がある。結果として、今回記載した抗細菌核酸は、特定の
標的器官および組織の細菌感染を標的化するのに使用できる。

【００７４】 好ましくは、本発明の核酸を使用して処置し得る動物宿主は、無脊椎動物、脊
椎動物、トリ、哺乳動物、例えばブタ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、およ
び特にヒトを含むがこれに限定されない。今回記載したプロトン付加／酸性化抗
細菌核酸はまた、実験培養液での細菌汚染の駆除、消費品（食物または飲料調製
物）、または産業プロセスに効果的であると考えられる。

【００７５】 細菌感染は特に、免疫無防備状態の個体、例えば後天性免疫不全疾患症候群（
エイズ）に罹患した患者、ＨＩＶ感染個体、化学療法または放射線療法を受けて
いる患者等において特に問題となる合併症であり、今回記載した発明の追加の実
施形態は、免疫無防備状態の患者の処置のための、今回記載した抗細菌核酸の使
用である。

【００７６】 今回記載した発明の別の実施形態は、ウイルス、癌、真菌または他の標的を有
する治療核酸の使用であり、ここでの核酸は、さらに、プロトン付加／酸性化さ
れ、よってそれは抗細菌核酸として作用できる。オリゴは、その主な標的を伝え
続けるが、さらに、次いでそれは抗細菌剤としても機能する。

【００７７】 本発明の方法が効果的である細菌生物の例は、グラム陽性細菌、グラム陰性細
菌、抗酸菌、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ピオゲネ
ス、ストレプトコッカス・ニューモニエおよびエシェリヒア・コリを含む。本発
明の方法は、以下の属のメンバーを含む、全ての細菌生物による感染に対して効
果的である：エロコッカス属、リステリア属、ストレプトミセス属、クラミジア
属、アクチノマズラ属、ラクトバシラス属、ユウバクテリウム属、アラクニア属
、ミコバクテリウム属、ペプトストレプトコッカス属、スタフィロコッカス属、
コリネバクテリウム属、エリジペロトリックス属、デルマトフィルス属、ロード
コックス属、リボドバクテリウム属、シュードモナス属、ストレプトコッカス属
、バチラス属、ペプトコッカス属、ニューモコッカス属、ミクロコッカス属、ナ
イセリア属、クレブシエラ属、クルシア属、ノカルジア属、ノカルジオプシス属
、セラチア属、ロシア属、エシェリヒア属、プロピオニバクテリウム属、アクチ
ノミセス属、ヘリコバクター属、エンテロコッカス属、シゲラ属、ビブリオ属、
クロストリジウム属、サルモネラ属、エルシニア属、およびヘモフィルス属。 医薬品組成体及びデリバリー

【００７８】 本記載のプロトン付加／酸性化型抗細菌核酸は各種生理学的キャリアー分子と
共に製剤化されるだろう。本記載の抗細菌核酸は、それらの標的細胞への浸入能
力を増強する分子とも複合体化するだろう。この様な分子の例は細菌増殖にとっ
て重要な炭水化物、ポリアミン、アミノ酸、ペプチド、脂質及びその他生体分子
を含むが、それに限定されるものではない。例えば、抗細菌核酸は脂質、陽イオ
ン脂質、又は陰イオン性脂質（プロトン付加／酸性化された核酸に関し好適であ
ろう）と組み合わされてもよい。生じた核酸／脂質乳剤、又はリポソーム性の懸
濁液は、とりわけ核酸のインビボ半減期を効果的に延ばすだろう。プロトン付加
／酸性化された核酸との利用に適した好適陰イオン性脂質の例は、カルジオリピ
ン、ジミリステオール、ジパルミトイル、又はジオレオイルホスファチジルコリ
ンあるいはホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレオイルホヅファチジ
ルコリン又はホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、リソホスファチ
ジン酸、ホフファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール及びコレステロー
ルの陰イオン型が含まれるが、これに限定されない。陽イオン性、陰イオン性及
び／又は中性脂質組成体、又はリポゾームの利用は、参照されここに取り込まれ
ている国際公開番号第ＷＯ９０／１４０７４号、第ＷＯ９１／１６０２４号、Ｗ
Ｏ９１／１７４２４号及び米国特許第４，８９７，３５５号に一般的に記載され
ている。脂質連関構造内に抗細菌核酸を組み込むことにより、プロトン付加／酸
性化抗細菌核酸は核酸／脂質複合体内に好適な標的作用物質（即ち、特異的抗体
又は受容体）を取り込み、特定の細菌細胞型に導かれるだろう。

【００７９】 混合体中の発明の核酸を医薬品キャリアーと共に含む医薬品組成体は、通常の
製薬調剤技術に従い調製することができる。キャリアーは、例えば静脈内、経口
、局所、エアゾール（局所又は肺への供給）、座薬、腸管外、又は脊髄注射等の
投与方法に関し望ましい製剤の形状に合わせた各種形状をとるだろう。

【００８０】 経口投与形状にある組成体の調製では、通常の医薬品媒体、例えば経口液体製
剤（例えば懸濁剤、エリキシル剤及び液剤）の場合では水、グリコール、油、ア
ルコール、芳香剤、保存剤、着色剤等が利用され、経口固形製剤（例えば粉末剤
、カプセル剤及び錠剤）の場合には、澱粉、糖、希釈剤、顆粒剤、光沢剤、結合
剤、崩壊剤等が利用されるだろう。これらを投与する場合、その中に固体医薬品
キャリアーが明瞭に使用されている錠剤及びカプセルが最も有益な投与単位形状
である。必要に応じ、錠剤は通常の技術によって糖コーティング及び腸溶性コー
ティングが施されるだろう。抗細菌核酸の経口投与形状は、細菌感染による（例
えばヘリコバクターピロリ感染等）胃腸管の細菌感染及び潰瘍の治療に有用であ
る。

【００８１】 注射による非腸管的応用に関しては、製剤は水溶性の、又は適当な塩溶液に可
溶化された医薬品として受け入れ可能な形状にある抗細菌核酸の水性液を含むだ
ろう。適当な液体キャリアー、懸濁剤、等張性調製剤、保存剤等を利用し注射懸
濁液も調製されるだろう。非腸管的に投与できる組成体の調製に適した、及び被
験者への投与に必要な調製に関する実際の方法は当業者にとって既知、または明
瞭であり、そしてより詳細には例えば参照されここに取り込まれているＲａｎｉ
ｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５版、マ
ック出版社、イーストン、ペンシルバニア州（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）（１９８０）に記載されている。ここ
に記載の核酸は、抗細菌核酸に関し確立された最大耐性投与量（ＭＴＤ）以下の
濃度で非腸管的に投与しなければならない。

【００８２】 局所投与の場合、キャリアーはそのクリーム、ドレッシング、ゲル、ローショ
ン、軟膏又は液剤であろう製剤に応じ広範な各種形状を取るだろう。

【００８３】 エアゾールは、核酸をエチルアルコールの様な噴射剤、又は噴射剤と水の相に
溶解、又は懸濁することで調製できる。局所又はエアゾール形状の医薬品組成体
は一般に使用する具体的形状に応じて約０．０１重量％（核酸の）ないし約４０
重量％、好ましくは約０．０２重量％ないし約１０重量％、そしてより好ましく
は約０．０５重量％ないし約５重量％含まれる。

【００８４】 懸濁剤は核酸をカカオ脂、カカオバター、グリセリン、ゼラチン、又はポリオ
キシエチレングリコールの様な脂質賦形剤と混合することで調製される。

【００８５】 ここに記載の抗細菌核酸は通常の抗生物質の投与に用いられる何れかの手段に
より体に投与される。動物内の細菌に生物活性化合物を供給することに関しては
、各種のデリバリーシステムが良く知られている。これらシステムには、静脈内
又は筋肉内、あるいは気管内注射、鼻内噴霧、吸入用エアゾール、経口又は座薬
投与が含まれるが、これに限定されない。具体的なデリバリーシステムは細菌の
部位に依存しており、細菌の位置を特定し、適当なデリバリーシステムを選択す
ることは当業者に良く知られている。

【００８６】 発明の核酸は、それらがいずれの投与形状に於いても極めて非毒性であるとい
う利点を有する。例えば発明のオリゴヌクレオチド溶液の非腸管的に投与はマウ
スに於いて１０ｍｇ／マウスでも非毒性であり、そのＬＤ₅₀が４００ｍｇ／ｋｇ
より小さいことが示されている。

【００８７】 抗細菌核酸の化粧品への利用 発明のプロトン付加／酸性化された核酸はローション、クリーム、局所水の様
な化粧品に利用されるだろう。発明の核酸は、ローション中での様に抗菌剤とし
ても、そして化粧品中の細菌の増殖の防止及び／又は遅らせるための防腐剤とし
ても利用されるだろう。即ち、核酸は既知化粧品と共に利用でき、得られた製剤
の組成体はプロトン付加された核酸の活性を保持するのに十分た程度に低ｐＨ、
例えば７．０以下である。核酸は抗菌効果を持つのに十分な程度の量、好ましく
は０．２５重量％ないし１０重量％、より好ましくは０．５重量％ないし５．０
重量％の量存在している。

【００８８】 発明の化粧品組成体は、グリコール酸又はアルファヒドロキシ酸、ビタミンＡ
パルチミン酸塩（レチニルパルチミン酸エステル）及びビタミンＥ酢酸塩（トコ
フェリル酢酸エステル）の様なそれ自体活性である成分を幾種類か含むだろう。
これらのバッチは約０．５重量％ないし約５重量％の量存在するのが好ましい。
更に、ＰＡＢＡの様なＵＶ吸収又は阻止物質も利用してもよいだろう。

【００８９】 更に湿潤作用を獲得し、組成体の粘調度を改良するためのその他化合物も加え
られるだろう。この様な化合物の例には、セルチルエステルワックス、ステアリ
ルアルコール、セチルアルコール、グリセリン、メチルパラベン、プロピルパラ
ベン、クオテリニウム−１５、湿潤剤、揮発性メチルシロキサン液、及びポリジ
オールガノシロキサン−ポリオキシアルキレンが含まれるが、これに限定される
ものではない。例えば共に参照され取り込まれている米国特許第５，１５３，２
３０号及び第４，４２１，７６９号を参照せよ。組成体が更に洗浄作用を持つこ
とが望まれる場合には、ラルリル硫酸ナトリウム又はカルボン酸の金属塩の様な
化学物質が加えられるだろう。

【００９０】 発明の核酸は広い細菌スペクトラムに対し良好な作用を持つこと、皮膚に対す
る刺激が低いこと、そして化学的に安定していることから、特に局部用抗アクネ
組成体中に有用であろう。油をベースとした組成体はアクネの状態を悪化させる
ことから、この様な組成体は好ましくは水性である。

【００９１】 この場合には各種非揮発性の皮膚軟化剤が有用であり、その非限定的な例はそ
の全てが参照され、ここに取り込まれているＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ、２巻、
機能材料（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、北米版（Ｎｏｒｔｈ
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｅｄｉｔｉｏｎ）、（１９９２）、ｐｐ。１３７−１６８
、及びその全てが参照され、ここに取り込まれている、ｐｐ５７２−５７５に皮
膚コンディショニング剤を、そしてｐ５８０に皮膚保護剤を掲載しているＣＴＦ
Ａ化粧品成分ハンドブック（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ）、第２版（１９９２）に掲載されている。

【００９２】 ここでは特に有用なものの非揮発性の皮膚軟化剤材料の中で、シリコン、炭化
水素、エステル、及びそれらの混合物が好ましい。

【００９３】 非揮発性皮膚軟化剤の例にはポリアルキルシロキサン、環式ポリアルキルシロ
キサン及びポリアルキルアリールシロキサンを含む。ここで有用なポリアルキル
シロキサンは、例えば２５℃にて約０．５ないし約１００，０００センチストー
クの粘度を有するポリアルキルシロキサンを含む。この様なポリアルキルシリコ
キサンは、所望分子量を得る様に選択された、式中のＲがアルキル基（好ましく
はＲはメチル又はエチル、より好ましくはメチルである）であり、ｘは０から約
５００までの整数である一般式Ｒ₃ＳｉＯ［Ｒ₂ＳｉＯ］_xＳｉＲ₃に相当する。市
販のポリアリルシリコキサンはジメチコンとしても知られ、非限定例としてジェ
ネラルエレクトリック社（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ
）のＶｉｃａｓｉｌ（登録商標）及びダウコーニング社（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ Ｃｏｍｐａｎｙ）の販売するダウコーニング（登録商標）２００シリーズが
あるポリジメチルシリコキサンが含まれる。ここでの皮膚軟化剤として有用なポ
リジメチルシロキサンの具体例には、０．６５センチストークの粘度と１００℃
より高い沸点を持つダウコーニング２００液及び１０センチストークの粘度と２
００℃より高い沸点を持つダウコーニング２２５液、及び５０、３５０並びに１
２，５００センチストークの粘度をそれぞれ持ち、沸点が２００℃より高いダウ
コーニング２００液が含まれる。ここで有用な環式ポリアルキルシリコキサンは
、式中のＲがアルキル基（好ましくはＲはメチル又はエチル、より好ましくはメ
チルである）でありｎが約３ないし約８までの整数であり、好ましくはｎは約３
ないし約７までの性Ｓｕｎであり、最も好ましくはｎは約４ないし約６までの整
数である一般化学式［ＳｉＲ₂Ｏ］_nに相当するものを含む。Ｒがメチルの場合、
これら材料は一般にはシクロメチコンと呼ばれる。市販のシクロメチコンには、
粘度２．５センチストーク、沸点が１７２℃であり、原則的にはシクロメチコン
テトラマー（即ちｎ＝４）を含むダウコーニング２４４液、粘度２．５センチス
トーク、沸点１７８℃であり、原則的にはシクロメチコンペンタマー（即ちｎ＝
５）を含むダウコーニング３４４液、粘度が４．２センチストークであり、沸点
が２０５℃であり、原則的にはシクロメチコンテトラマー及びペンタマー（即ち
ｎ＝４及び５）の混合体を含むダウコーニング２４５液、及び粘度が４．５セン
チストークであり、沸点が２１７℃であり、原則的にはシクロメチコンテトラマ
ー、ペンタマー及び壁サマー（即ちｎ＝４、５及び６）の混合体を含むダウコー
ニング３４５液を含む。同様に有用なものは、式中のｘが約１ないし約５００ま
での整数であり、ｙは約１ないし約５００までの整数である一般化学式［（ＣＨ ₂ ）₃ＳｉＯ_1/6］_x［ＳｉＯ₂］_yのトリメチルシリコキシケイ酸塩である。市販の
トリメチルシリコキシケイ酸塩は、ジメチコンとの混合体の形でダウコーニング ^R ５９３液として販売されている。ここで同様に有用なものは、ヒドロキシ末端
型ジメチルシリコンであるジメチコノールである。これら物質は式中のＲがアル
キル基（好ましくはＲはメチル又はエチル、より好ましくはメチルである）であ
り、ｘは０ないし約５００までの整数である、所望分子量を得られる様に選択さ
れた一般化学式Ｒ₃ＳｉＯ［Ｒ₂ＳｉＯ］_xＳｉＲ₂ＯＨ及びＨＯＲ₂ＳｉＯ［Ｒ₂Ｓ
ｉＯ］_xＳｉＲ₂ＯＨにより表すことができる。市販のジメチコノールは典型的に
はジメチコン又はシクロメチコン（例えばダウコーニング１４０１、１４０２及
び１４０３液）の混合体として販売されている。ここで更に有用なものは２５℃
において約１５ないし約６５センチストロークまでの粘度を持つポリメチルフェ
ニルシロキサンによるポリアルキルアリールシロキサンである。これら材料は例
えばＳＦ１０７５メチルフェニル液（ジェネラルエレクトリック社より販売）及
び５６６化粧品等級トリメチコン液（ダウコーニング社より販売）として入手で
きる。

【００９４】 ここに有用な炭化水素には、約１０ないし約３０個の炭素原子、より好ましく
は約１２ないし約２４個の炭素原子、及び最も好ましくは約１６ないし約２２個
の炭素原子を有する直鎖型及び分岐型炭化水素を含む。これら炭化水素の非限定
例にはドデカン、スクアラン、クレステロール、５水素化ポリイソブチレン、ド
コサン（即ちＣ₂₂炭化水素）、ヘキサデカン、イソヘキサデカン（Ｐｅｒｍｅｔ
ｈｙｌ^R１０１としてプレスパース社、サウスプレインスフィールド、ニュージ
ャージー州（Ｐｒｅｓｐｅｒｓｅ、Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｓｆｉｅｌｄ、Ｎ．
Ｊ．）として市販されている）が含まれている。その他ここに有用な炭化水素物
質にはパラフィン及びＵＳＰライト軽油（例えばウイチコ社、メルローズパーク
、イリノイ州（Ｗｉｔｃｏ Ｃｏｒｐ．，Ｍｅｌｒｏｓｅ Ｐａｒｋ，Ｉｌｌ．
）の入手可能Ｋｌｅａｒｏｌ（登録商標）、及びＵＳＰ重油（例えばウイチコ社
製Ｋｅａｒｏｌ（登録商標）、メルローズパーク、イリノイ州）が含まれる。

【００９５】 更に非揮発性皮膚軟化剤として有用なものは、アルコール及びポリオール（即
ち２又はそれ以上のヒドロキシ基を有するアルコール）でエステル化された１官
能基型及び２官能基型脂肪酸のエステルである。広い範囲のエステルがここでは
有用であり、長鎖型脂肪酸の長鎖型エステルが好ましい（即ちＣ１０−４０脂肪
アルコールでエステル化されたＣ１０−４０脂肪酸）。ここで有用なエステルの
非限定例には、ジイソプロピル、アジパート、イソプロピルミリスチン酸エステ
ル、イソプロポリマルミチン酸エステル、ミリスチルプロピオン酸エステル、エ
チレングリコールジステアリン酸エステル、２−エチルベキシルパルミチンサン
エステル、イソデシルネオペンタン酸エステルＣ_12-15アルコール安息香酸、ジ
−２−エチルへキシルマレイン酸エステル、セチルパルミチンサンエステル、ミ
リスチルミリステリン酸エステル、ステアリルステアリン酸エステル、セチルス
テアリン酸エステル、ベヘニルベヘン酸エステル及びその混合体を含む。

【００９６】 消毒剤への抗細菌核酸の利用 発明の核酸は消毒剤としての利用、特に生物静力学又は好ましくは殺菌特性を
有する液体消毒製剤としての利用も見いだされるだろう。消毒液は少なくとも発
明の核酸を十分量含み、更に生物静力学的及び／又は殺菌特性を持つその他活性
成分も含むだろう。例えば、消毒薬は発明の核酸を、例えばジメチルベンジルド
デシル塩化アンモニウム、ジメチルベンジル塩化デシルアンモニウム、ジメチル
ベンジルデシル臭化アンモニウム、ジメチルベンジルオクチル塩化アンモニウム
及びココスアルキルジメチルベンジル塩化アンモニウムの様な４級アンモニウム
化合物の好適濃度と共に含むだろう。

【００９７】 その他の例では、オリゴヘキサメチルブグアニド塩やビスビグアンジドの様な
好適抗菌性ビグアニンジン化合物が利用できる。例えば参照されここに取り込ま
れている米国特許第５，０３０，６５９号を参照せよ。更なる殺菌性成分にはア
ルデヒド、フェノール誘導体及びハロゲンフェニル誘導体が含まれる。例えば参
照されここに取り込まれている米国特許第５，７６７，０５４号を参照せよ。当
業者により認識される様に、この様な活性を持つその他化合物も発明の核酸と結
びつけて利用されるだろう。

【００９８】 所望の活性成分に加え、発明の殺菌剤は所望される製剤の利用に依存し、その
他典型的な成分を含むだろう。具体的には、殺菌液のｐＨを７未満に維持するた
めには酸性化剤が利用されるだろう。核酸及び／又はその他活性成分に関しては
好適溶媒が用いられるが、好ましくは水又は水混合有機溶媒であろう。この様な
液体は加圧された空気又は当分野既知のその他噴射剤を用い容易に噴霧できるだ
ろう。

【００９９】 発明のこれら製剤は特に病院、動物病院、歯科及び診療所等の医療関連環境に
於ける表面殺菌に好適である。外科用具の滅菌への発明の液体の利用は特に好ま
しい。これら製剤は学校、公共交通、レストラン、ホテル及びランドリーの様な
公共空間にも有用である。消毒剤は家庭に於いては、トイレ、浴室及び台所の殺
菌剤としても利用されるだろう。

【０１００】 発明のプロトン付加／酸性化された核酸は皮膚用消毒液にも利用されるだろう
。この様な組成体は、局所利用に好適な賦形剤中に存在する溶液中に発明の核酸
を含む。消毒剤は速乾性であり、核酸はエタノールベース中にあることが望まし
いだろう。この様な液は、アルコールが皮膚を過度に乾燥させる傾向があること
から、好ましくは皮膚に適した皮膚軟化剤も含むだろう。好適皮膚軟化剤の例は
、ポリエチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、プロピレングリコール
、ブチレングリコール、エリスリトール、ジプロピレングリコール及びソルビト
ールの様な多価アルコールを含むが、これに限定されない。皮膚軟化剤の量は０
．１−１３重量／重量％の範囲であり、より好ましくは０．２−１．５重量／重
量％の範囲であろう。皮膚軟化剤含有量が０．１重量％より少ない場合には、そ
れはそれほど効果的ではなく、また３．０％を越えると液は過度に粘着性になる
だろう。

【０１０１】 皮膚用消毒剤は特に医療処置又は廃棄物管理後の手の消毒に有用である。消毒
剤は手術現場でも、医療スタッフ及び患者の手術域の消毒の両方に有用であろう
。

【０１０２】 実施例 以下の実施例は本発明の作製及び利用に関する完全な開示と記述を当業者に提
供することを目的とするものであり、発明に関するその範囲を限定することを意
図しない。使用する数値（例えば量、温度、濃度等）に関し正確性を保証するこ
とに努めているが、幾つかの実験的誤差及び変動は許されるべきであろう。特に
記さない限り、割合は重量に対する割合であり、分子量は平均分子量であり、温
度は摂氏温度であり、圧力はで、又はほぼ大気圧である。

【０１０３】 実施例１：核酸の合成 核酸は市販のＤＮＡ合成装置に市販のフォスフォルアミダイトを用い、例えば
参照されここに取り込まれているＳｔｅｃら、１９８４、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ，
．Ｓｏｃ．１０６：６０７７−６０８９、Ｓｔｅｃら、１９８５、Ｊ．Ｏｒｇ．
Ｃｈｅｍ．５０（２０）；３９０８−３９１３、Ｓｔｅｃら、１９８５、Ｊ．Ｃ
ｈｒｏｍａｔｏｇ．３２６−２６３−２８０、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、１９８６
、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１４（２２）：９０８１−９０９３及びＦａｓｍ
ａｎ、１９８９、Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ、に開示されている様な標準的な当分野良く
知られているホスホールアミダイト化学及び方法を用い、＜１ｕＭないし＞１ｍ
Ｍのスケールで合成された。

【０１０４】 核酸はホスホールアミダイト製造メーカーのプロトコールに従い脱保護された
。非精製核酸は真空下に乾燥するか、又は沈殿してから乾燥した。核酸のナトリ
ウム塩は市販のＤＮＡ−Ｍａｔｅ（バルコシガン社（Ｂａｒｋｏｓｉｇａｎ Ｉ
ｎｃ．））試薬、又は例えばＤｏｗｅｘ（デュポン（Ｄｕｐｏｎｔ））の様な市
販の交換樹脂の様な通常の技術を用い、あるいはナトリウム塩を添加した後にに
、沈殿、透析濾過又はゲル濾過等を行うことにより調製されるか、又は精製工程
に取り込まれた。

【０１０５】 実施例２：核酸の精製 各種標準法を用い、本記載の抗細菌核酸を精製／産生した。簡単に述べると、
抗細菌核酸は市販の逆相（例えば参照されここに取り込まれているレイニンイン
スツルメント社（ＲＡＩＮＩＮ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｔｎｔ Ｃｏ．，Ｉｎｃ），
ＤＹＮＡＭＡＸ（登録商標）−３００Ａ、Ｐｕｒｅ−ＤＮＡ逆相カラム、１９８
９の操作マニュアル、又はその現行改訂版を参照せよ）又はＷａｔｅｒ’ｓ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｐａｋ又はＰｈａｒｍａｃｉａ’ｓ Ｓｏｕｒｃｅ Ｑの様なイ
オン交換媒体（一般には、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ、ｖｏｌ．２６；Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編集、Ｈｕｒｎａｎａ Ｐｒ
ｅｓｓ、Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、の中のＷａｒｒｅｎとＶｅｌｌａ、１
９９４、「高性能液体クロマトグラフィーによる合成核酸の分析と精製（Ａｎａ
ｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｂｙ Ｈｉｇｈ−Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉ
ｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ」；Ａｈａｒｏｎら、１９９３、Ｊ．
Ｃｈｒｏｍ．６９８：２９３−３０１；及びＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｔｅｃｈｎｉ
ｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、１９９２、アンチセンスＤＮＡ：合成、精製及び分
析（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉ
ｓ）を用いたクロマトグラフィーにより精製された。ピーク分画を合わせ、サン
プルを濃縮し、アルコール（エタノール、ブタノール、イソプロパノール及びイ
ソマー、並びにその混合体等）沈殿により脱塩し、逆相クロマトグラフィー、透
析濾過又はゲル濾過した。

【０１０６】 実施例３：核酸のプロトン付加／酸性化 続いて、又は上記工程中に、精製、部分精製又は粗精製された核酸を低ｐＨ（
例えば酸性）環境に曝すことで記載の核酸をプロトン付加／酸性化することがで
きる。精製又は粗核酸はリン酸、硝酸、塩酸及び酢酸を含む酸によりプロトン付
加／酸性化される。

【０１０７】 強陰イオン交換（ＳＡＸ）−精製オリゴヌクレオチド（約２−２５Ａ₂₆₀／ｍ
ｌ）のプール分画をＰＲＰ（ハミルトン社（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏ．））カラ
ムにポンプで送る。続いて直ぐに過剰の希釈酸（例えば２５ｍＭのＨＣｌ）を溶
出液が酸性になるまで送る。次にカラムを溶出液の伝導度及びｐＨがバックグラ
ンドのレベルに戻るまで精製水（塩または緩衝液ではない）にて洗浄した。次に
オリゴヌクレオチドを市販の真空エバポレーターで乾燥させた。あるいは、オリ
ゴヌクレオチドを希釈酸中に懸濁し、上記同様にＰＲＰ又は同等のカラムのクロ
マトグラフィーにかけるか、又は溶媒として水を用いる分子篩カラム（例えばＢ
ｉｏＲａｄ ＢｉｏｇｅＰ２又はＰ４）のクロマトグラフィーにかけた。あるい
は、所望の核酸をアルカリ塩溶液（例えば０．４ＭのＮａＣｌ及びｐＨ１２，２
５ｍＭのＮａＯＨ）に溶解し、ＰＲＰカラムにかけ、酸で洗浄した後水で洗浄し
、続いて上記同様にして溶出した。あるいは、核酸はＨ＋形状にある陽イオン交
換カラムを用いたクロマトグラフィーにかけ、上記同様に採取し、乾燥させた。

【０１０８】 核酸は酸、例えばＨＣｌ（０．１Ｎ）を溶液のｐＨが１ないし３になるまで核
酸溶液に直接加える（約３００Ａ₂₆₀／ｍｌ）ことでも酸性化される。酸性化さ
れた核酸は次にＢｉｏＲａｄ ＢｉｏｇｅｌＰ２又はＰ４カラムの様な酸安定型
分子篩カラムにかけることができる。

【０１０９】 細菌実験で利用される凍結乾燥または乾燥沈殿体は発熱物質を含まない、滅菌
された生理食塩水（即ち、０．８５％食塩）、滅菌シグマ（Ｓｉｇｍａ）水に溶
解されるか、そして０．４５ミクロンゲルマンフィルターで濾過される（又は動
物実験前に０．２ミクロン無発熱物質フィルターにかける）。

【０１１０】 水または生理食塩水中に懸濁する場合、核酸沈殿体は酸性化の工程に用いられ
た酸の量により決定されるプロトン付加／酸性化のレベルに応じ、典型的には１
ないし４．５の間のｐＨを示した。

【０１１１】 実施例４：細菌増殖試験 限定栄養増殖試験 限定栄養増殖試験では、細胞をプレートから剥がし取り、ＰＢＳに懸濁して最
終濃度１０⁵ＣＦＵ／ｍｌ及び最終容積１ｍｌを得た。ミューラーヒントンブロ
スを加えた（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＣＣ＃１３３０１に関しては４０μｌ、Ｐ．
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＡＣＣ＃１０１４５に関しては２０μｌ）。水１００μｌ
又は核酸１００μｌ（３２Ａ₂₆₀単位、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ホ
スホジエステル結合、５’及び３’逆転Ｔ末端ブロック、配列ＣＧＣＣＡＴＴＧ
Ｇ、配列番号１）を加え、チューブを振盪せずに３５℃で約２４時間インキュベ
ーションした。Ａ₆₂₅を測定し、コントロール（対照）の％として％阻害を計算
した。結果を下表に示す。

【０１１２】

【表１】

【０１１３】 定常増殖試験 核酸の抗細菌活性に及ぼすｐＨの作用を研究するために、定常増殖試験も実施
した。細胞をプレートから剥がし取り、ＰＢＳ１ｍｌ中にＳ．ａｕｒｅｕｓが最
終濃度１０⁷ＣＦＵ／ｍｌになるように生理食塩水中に希釈した。水１００μｌ
又は核酸１００μｌ（３２Ａ₂₆₀単位、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ホ
スホジエステル結合、５’及び３’逆転Ｔ末端ブロック、配列ＣＧＣＣＡＴＴＧ
Ｇ、配列番号１）を加え、チューブを振盪せずに３５℃で約２４時間インキュベ
ーションした。一部を直接、又は希釈した後にプレートに播き、３７℃にてイン
キュベーションし、２４時間後にコロニー数を測定した。結果を下表に示す。

【０１１４】

【表２】

【０１１５】 これらの結果より、ヌクレオチドのｐＨを低下するとその殺菌及び静菌作用が
付与されると結論した。次に、配列同一性と長さの効果について調べた。

【０１１６】 実施例５：抗細菌活性に及ぼす配列の作用 まず定常増殖アッセイを行い、配列長の作用について調べた。細胞をプレート
から剥がし取り、ＰＢＳ１ｍｌ中にＳｔｒｅｐ．ｍｕｔａｎｔｓが最終濃度１０ ⁷ ＣＦＵ／ｍｌになるように生理食塩水中に希釈した。水５０μｌ又は核酸５０
μｌ（１６Ａ₂₆₀単位）を加え、チューブを振盪せずに３５℃で約２４時間イン
キュベーションした。使用した各核酸は５’及び３’に逆転Ｔ末端ブロッキング
を結合した２’−Ｏ−メチル置換リボヌクレオチドホスホジエステルより構成さ
れた。配列は：１１４．６−ＣＧＣＣＡＴ（配列番号２）；１１４．１２−ＡＣ
ＧＣＧＣＣＡＴＴＧＧ（配列番号３）；１１４．２１−ＧＧＡＡＣＧＣＧＣＣＡ
ＴＴＧＧＴＡＴＡＴＣ（配列番号４）であった。各核酸に関する下表記載の長さ
は５’及び３’末端の逆転Ｔｓを含む。一部を直接、又は希釈した後にプレート
に播き、３７℃にてインキュベーションし、２４時間後にコロニー数を測定した
。結果を下表に示す。

【０１１７】

【表３】

【０１１８】 次に、限界栄養増殖アッセイを実施し、ヌクレオチドホモポリマー（ＡＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡＡ、配列番号５；ＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵＵ、配列番号６；ＧＧ
ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ、配列番号７；ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣ、配列番号８）
の効果について調べた。使用した各ホモポリマーは、３’及び５’に逆転Ｔ末端
ブロッキングを結合した、２’−Ｏ−メチル置換リボヌクレオチドホスホジエス
テルより構成された。細胞をプレートから剥がし取り、最終濃度１０⁵ＣＦＵ／
ｍｌになるようにＰＢＳ１ｍｌ中に懸濁した。ミューラーヒントンブロスを加え
た（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＣＣ＃１３３０１に関しては４０μｌ、Ｐ．ａｅｒｕ
ｇｉｎｏｓａＡＣＣ＃１０１４５に関しては２０μｌ）。水１００μｌ又はｐＨ
１．５の核酸１００μｌ（３２Ａ₂₆₀単位）を加え、チューブを振盪せずに３５
℃で約２４時間インキュベーションした。Ａ₆₂₅を測定し、コントロールの％と
して％阻害を計算した。結果を下表に示す。

【０１１９】

【表４】

【０１２０】 次に、限定栄養増殖アッセイを実施し、モノマー、ダイマー及びトリマーの作
用について調べた。使用した各核酸は、ブタノールでブロッキングされた３’及
び５’末端が連結された、２’−Ｏ−メチル置換リボヌクレオチドホスホジエス
テルより構成された。１１４．１２と命名された核酸はＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡ
Ｔ、配列番号９の配列を有する。細胞をプレートから剥がし取り、最終濃度１０ ⁵ ＣＦＵ／ｍｌになるようにＰＢＳ１ｍｌ中に懸濁した。ミューラーヒントンブ
ロスを加えた（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ＡＣＣ＃１３３０１に関しては４０μｌ、Ｅ
．ｃｏｌｉＡＣＣ＃３５２１８に関しては２０μｌ）。水２５μｌ又はｐＨ１．
５の核酸２５μｌ（８Ａ₂₆₀単位）を加え、チューブを振盪せずに３５℃で約２
４時間インキュベーションした。Ａ₆₂₅を測定し、コントロールの％として％阻
害を計算した。一部を直接、又は希釈後にプレートに播き、３７℃にてインキュ
ベーションし、２４時間後にコロニー数を測定しＣＦＵを決定した。結果を下表
に示す。

【０１２１】

【表５】

【０１２２】 定常相アッセイを実施し、モノマー、ダイマー及びトリマーの作用について調
べた。用いた各核酸は、ブタノールでブロッキングされた３’及び５’末端が連
結された２’−Ｏ−メチル置換リボヌクレオチドホスホジエステルより構成され
た。１１４．１２と命名された核酸はＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡＴ、配列番号９の
配列を有する。細胞をプレートから剥がし取り、１ｍｌのＰＢＳ中のＡ₆₂₅がＳ
．ａｕｒｅｕｓに関しては０．０８、Ｅ．ｃｏｌｉに関しては０．１２及びＫ．
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに関しては０．１になる様に生理食塩水中に懸濁した。水
２５μｌ又は核酸２５μｌ（８Ａ₂₆₀単位）を加え、チューブを振盪せずに３５
℃で約２４時間インキュベーションした。一部を直接、又は希釈後にプレートに
播き、３７℃にてインキュベーションし、２４時間後にコロニー数を測定しＣＦ
Ｕを決定した。結果を下表に示す。

【０１２３】

【表６】

【０１２４】 結論として、これら結果はプロトン付加／酸性化された核酸の抗細菌作用物質
として機能する能力が配列同一性には依存していないことを示している。更に、
ホモポリマー及びモノマー同様に短い核酸も有用である。これら結果は、配列は
オリゴヌクレオチドの活性にある役割を果たしているが、アンチセンスには依存
しない、従って配列に依存しない別の抗細菌作用のメカニズムが存在することを
示している。

【０１２５】 実施例６：インビボアッセイ 抗細菌剤として本発明の作用を決定するためのインビボ研究の例を幾つか提供
する。以下の実験は局所皮膚、及び外耳上皮、及び敗血症に関する全身治療の例
に焦点をあてている。

【０１２６】 局所皮膚細菌感染での効果 フルンケルと呼ばれる皮膚のオデキがプロトン付加／酸性化された核酸により
治療された。フルンケルは典型的には毛嚢内に起因する局所性の発熱性感染であ
る。フルンケルは皮膚の円形の、柔らかな膿の溜まった領域であり、圧が加わる
と破裂する白色の頂部を発生する。フルンケルは毛嚢内最深部に感染することが
多い。フルンケルは通常１０−２５日で治癒するだろう。治療しない場合、フル
ンケルは治癒する前に通常排膿する。これは２週間目に起こることが最も多い。
フルンケルが深部障害の場合、フルンケルを開き排膿させる小さな手術に加え、
細菌を除くための全身性抗生物質治療が必要である。要約すると、フルンケルは
細菌の深部皮膚感染による痛みを伴う皮膚の膨潤であるが、治療なしに１０日以
内に治癒することは殆ど無い。

【０１２７】 ブドウ球菌フルンケルの治療に於けるプロトン付加／酸性化された核酸 プロトン付加／酸化核酸は、３６歳の健康な男性被験者の背にあった１．５ｃ
ｍのフルンケルの治療に効果を示した。８時間以内にプロトン付加／酸性化され
た核酸は迅速かつ劇的にフルンケルの痛みと／膨潤の両方を開放した。

【０１２８】 プロトン付加／酸性化された核酸（ｐＨ１．５、配列ＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡ
Ｔ、配列番号９）を用い、１．５ｃｍのフルンケルが出現した１日後にそれを治
療した。核酸は５’及び３’末端に逆転Ｔでブロックされた末端を結合した２’
−Ｏ−メチル置換型リボヌクレオチドより構成された。具体的には１００μｌの
プロトン付加／酸性化された核酸を水（１８．９ｍモル）に溶解し、２−３ｍＭ
のプステルを持つ隆起した赤い腫脹であり、且つ患者に痛みを与えていた１．５
ｃｍのフルンケルを処理した。処置８時間後、フルンケルは自然に排膿し、その
大きさを約０．５ｃｍと明瞭に縮小し、同時に腫脹及び発赤も減少した。被験者
の痛みは大きく緩和された。この時点で５０μｌのプロトン付加／酸性化された
核酸の２回目の適用を行った。

【０１２９】 最初の処置から１６時間後、腫脹、痛み又は炎症は見られなかった。元のフル
ンケル域には＜０．５ｃｍの小さなピンク色の領域が残っていた。感染治療開始
２４時間後に最後のプロトン付加／酸性化された核酸の適用を行い、治癒のプロ
セスの加速を持続させた。フルンケルの瘢痕は、３回目の適用後１日以内に治癒
した。

【０１３０】 結論すると、プロトン付加／酸性化された核酸はブドウ球菌フルンケルの迅速
治療及び輸送媒体として水が利用に極めて有効であることが示された。プロトン
付加／酸性化された核酸は特にフルンケルの痛み及び腫脹の迅速な解消に有用で
あった。

【０１３１】 耳感染局所治療での効果 プロトン付加／酸性化された核酸Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏ
ｓａ菌によるチンチラの外耳上皮感染に極めて有効であった。プロトン付加／酸
性化された核酸治療を継続的に受けた全チンチラ感染例は、治療開始４日後には
完全に治癒した。

【０１３２】 チンチラの耳はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ菌により感染
させられた。具体的には、チンチラの耳の上皮層を長時間耳を水にさらし、これ
を浸軟化させた。これは、チンチラの耳管内の皮膚を裏打ちする上皮層にＰｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ感染に関する受け入れ環境を作る上で役立つ。綿栓を洗浄した
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの懸濁液で飽和させ、それをチ
ンチラの耳管内に挿入した。綿栓は４８時間後に取り除いた。

【０１３３】 チンチラの治療は、耳鏡検査により耳に「レベル３」と判定された感染３日後
に開始した。チンチラには２日間４００μｌのｐＨ１．５のプロトン付加／酸性
化された核酸配列、ＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡＴ、配列番号９の水溶液（２．８ｍ
モル）又は同一配列の４００μｌのプロトン付加／酸性化された核酸（２ｍモル
）の賦形剤液（水／エタノール／プロピレングリコール）を与えた。核酸は５’
及び３’の両端にブタノールでブロックされた末端を連結された２’−Ｏ−メチ
ル弛緩型リボヌクレオチドである。チンチラは毎日耳感染の重症度の程度を基に
治療有効性について調べられた。

【０１３４】 プロトン付加／酸性化された核酸治療の結果は、治療を受けた全てのチンチラ
の耳が、耳鏡検査による決定では耳感染の重症度を明確に軽減することを示した
。明瞭な改善はプロトン付加／酸性化された核酸治療３回目以後に観察できた。
チンチラは更に４ないし５日間治療を受けた。未治療のコントロールのチンチラ
はこの時間枠のなかでは改善を示さなかった。これに対し、持続的にプロトン付
加／酸性化された核酸治療を受けた感染耳では、全例が感染７日目（即ち、プロ
トン付加／酸性化された核酸による治療開始から４日目）までに完治した。

【０１３５】 更に、２種類の輸送媒体、水又は賦形剤混合液（水／エタノール／プロピレン
グリコール）に溶解されたプロトン付加／酸性化された核酸には治癒の進行に若
干差が認められた。耳鏡検査によれば、耳感染の治療では賦形剤混合液中のプロ
トン付加／酸性化された核酸の方が若干より効果的であった。

【０１３６】 結論すると、プロトン付加／酸性化された核酸は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによるチンチラの外耳感染の治療に有効であることが示さ
れた。この菌は天然には抗生物質耐性菌であることから、有益である。

【０１３７】 イヌのＳｔｒｅｐ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ皮膚感染の治療に於ける効果 １３５ポンド、２歳の雌ニューファンウンドランド犬の腹部に持続的に創傷を
作り、Ｓｔｒｅｐ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ感染を起こさせた。この領域は膨潤し、炎
症を起こし、接触に対し痛みを発した。Ｎｅｏｓｐｏｒｉｎ（登録商標）（ワー
ナーランバート社（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ、Ｃｏ）による３日間の治療
は失敗し、何らの改善ももたらさなかった。１２時間の間隔を開け２回、５’及
び３’両端にブタノールでブロックされた末端、ｐＨ１．５がホスホジエステル
結合されている、ＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡＴ（配列番号９）を持つ２’−Ｏ−メ
チル弛緩型リボヌクレオチドを直接創傷部に作用させたところ、完全に感染、膨
潤、炎症及び接触に対する感受性が解消された。

【０１３８】 感染の局所Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ火傷モデルに於けるプロトン付加／酸性化
された核酸の効果 プロトン付加／酸性化された核酸は、免疫−易感染性マウスでの局所皮膚感染
の治療に効果を示した。マウスは皮膚に火傷を進行させ免疫系を阻害するために
シクロホスファミド（２００ｍｇ／ｋｇ、腹膜内投与）で処置された。３日後、
火傷が誘導され、続いて１０⁹ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉ
ｎｏｓａが火傷部に局所適用され、感染を起こさせた。治療は感染４時間及び８
時間眼に行われた。実験に使用された核酸は、ｐＨ１．５に於いて、配列ＡＣＧ
ＣＧＣＣＡＴＴＡＴ、配列番号９を持つ、５’及び３’の両端にブタノールがホ
スホジエステル結合され、ブロックされている末端を持つ２’−Ｏ−メチル弛緩
型リボヌクレオチドである。治療を受けた動物は１００％生存し、全身性のＰｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染は認められなかったが、一方コントロールの動物では９
０％が全身感染を起こし、死亡した。プロトン付加／酸性化された核酸は局所感
染を治癒できた。更に、核酸の局所適用は局所Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染の致
死的な全身性の感染への進行を防ぐこともできた。

【０１３９】 感染の全身性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ火傷モデルに於けるプロトン付加／酸性
化された核酸の効果 マウスを皮膚火傷誘導後１０⁶又は１０⁷ＣＦＵのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａでＳ．Ｃ．（皮下）処理した。感染２時間後、酸性化された
核酸による治療を開始した。投与量の４０％はＩ．Ｖ．（静脈内）投与し、残り
はＳ．Ｃ投与された。実験に使用された核酸は、ｐＨ１．５に於いて、配列ＡＣ
ＧＣＧＣＣＡＴＴＡＴ、配列番号９を持つ、５’及び３’の両端にブタノールが
ホスホジエステル結合され、ブロックされている末端を持つ２’−Ｏ−メチル弛
緩型リボヌクレオチドである。操作は６時間後に繰り返された。２日目及び３日
目に、追加の皮下注射が１日２回行われた。４５匹のコントロール動物は全例死
亡したが、４０匹の処置マウスは全例生存し、健康であった。これら処置、健康
マウスを屠殺し、敗血症について調べた。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌は脾臓、肝
臓又は血液中には検出されなかった。

【０１４０】 結論として、プロトン付加／酸性化された核酸は未治療で放置すると致死的に
なる全身性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染の治療に１００％有効であった。

【０１４１】 実施例７：プロトン付加／酸性化された核酸の毒性 ４５匹の動物（マウス、オス／Ｃ５７Ｂａｌｂ／ｃ）にプロトン付加／酸性化
された核酸治療を皮下、腹腔内注射又は局所適用した。マウスを無作為に選び、
試験開始時は約６ないし８週齢であった（２５−３０グラム体重）。マウスを１
箱に５匹づつ飼育し、環境管理された部屋の中で自由に食物と水を摂らせ維持し
た。

【０１４２】 マウス（１グループ５匹）には毎日、１４日間、配列ＡＣＧＣＧＣＣＡＴＴＡ
Ｔ、配列番号９のｐＨ１．５のプロトン付加／酸性化された核酸又は水が注射さ
れた。核酸は５’及び３’の両端にブタノールがホスホジエステル結合され、ブ
ロックされている末端を持つ２’−Ｏ−メチル弛緩型リボヌクレオチドである。
治療は腹腔内投与、皮下投与又は局所投与により実施された。

【０１４３】 処理期間中、いずれのマウスについても生存及び毒性徴候を毎日観察した。検
死は最終注射２４時間後に実施された。検死では全体腔及び臓器について完全な
調査が実施された。選択した臓器は固定され、組織検査用に染色された。所見の
要約は以下の通りである。

【０１４４】 死亡率及び臨床所見 試験期間中、いずれのマウスも完全に活動的であり、最高用量１００ｍｇ／ｋ
ｇにおいてさえ試験期間中異常行動の臨床徴候は認められなかった。

【０１４５】 臨床化学 試験した臨床化学パラメータの中では、肝臓酵素（アルカリホスファターゼ、
ＡＬＴ、ＡＳＴ）及び総ビルルビン値に異常は認められなかった。平均血清アル
カリホスファターゼ、ＡＬＴ及びＡＳＬ値は、賦形剤コントロール値と有意差を
示さず、毒性の証拠は無いことが示された。間接及び直接ビルルビン値は、これ
ら賦形剤処理コントロールと差を示さず、腎臓又は肝臓異常がないことが示され
た。

【０１４６】 全体検死 試験期間中、注射部位については、最高用量の核酸の場合でもそれに伴う局所
炎症反応を示す全体的証拠はないことが観察により判明した。いずれの臓器につ
いても、肥大又は壊死を示す視覚的徴候は無かった。具体的には、１４連続日１
００ｍｇ／ｋｇ／日を投与した場合でも、コントロール動物に比べ脾臓、肝臓、
又は腎臓に肥大は認められなかった。

【０１４７】 組織学 各種組織のスライドは、コントロールと処置動物との間に差が無いことを示し
た。要約すると、主要結果は次の通りである： （１）処置群対コントロール群での酵素レベルに大きな増加は無かった。 （２）オリゴにて処置された動物の何れについても、大きな異常の徴候は無かっ
た。 （３）いずれの動物も健康を維持し、試験期間中機敏であった。 （４）いずれの投与経路（腹腔内、皮下、局所）も同様の結果をもたらした。

【０１４８】 結果は、プロトン付加／酸性化された核酸は、１００ｍｇ／ｋｇの日投与量、
１４日間に於いてさえ、そしてその投与経路に関係なく無毒であることを示した
。

【０１４９】 本発明をその特異的実施態様を参照しながら記載したが、本発明の真の精神と
範囲から逸脱することなく各種変更が可能であり、そして等価物により置き換え
ることができることを、当業者は理解すべきである。更に、多くの改変を行うこ
とで特定の状態、材料、物質組成、工程、工程段階又は複数段階、を本発明の目
的、精神及び範囲に適合させることができるだろう。これら改変の全てはここに
添付されたクレームの範囲内のものである。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/12 Ａ６１Ｋ 47/12 ４Ｃ０８６ Ａ６１Ｐ 31/02 Ａ６１Ｐ 31/02 31/04 31/04 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/68 Ｚ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 アロウ，エイミー アメリカ合衆国メイン州04217，ベセル， バードヒル・ロード 184 (72)発明者 ガットン，スティーヴン・エル アメリカ合衆国オレゴン州97035−8130， レイク・オスウィーゴ，サウスウェスト・ ピルキントン・ロード 18990 (72)発明者 トンプソン，テリー アメリカ合衆国オレゴン州97068，ウェス ト・リン，サウスウェスト・エック・ロー ド 2222 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA01 CA11 CA20 HA20 4B063 QA06 QA13 QA18 QQ42 QQ52 QR75 QS24 QX01 4C057 AA17 BB04 DD02 MM01 4C076 AA12 BB31 CC34 DD41 FF11 4C083 AD21 CC01 CC02 DD23 DD27 EE13 4C086 AA01 AA03 EA16 MA01 MA02 MA04 MA05 MA09 MA17 MA63 NA05 NA14 ZA90 ZB35

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 天然ヌクレオチドポリマーの核酸骨格構造から修飾された核
   酸骨格構造を有するヌクレオチドポリマーと、前記ポリマー上の反応部位に導入
   された１つ以上の外来性プロトンとを含んでなる修飾核酸であって、前記核酸は
   ３７℃で約１〜約１０のｐＨで少なくとも１時間のｐＨ安定性を特徴とし、前記
   核酸は実質的に抗細菌活性を示す修飾核酸。
2. 【請求項２】 天然ヌクレオチドモノマーの構造から修飾された構造を有す
   るヌクレオチドモノマーと、前記モノマー上の反応部位に導入された１つ以上の
   外来性プロトンとを含んでなる修飾核酸であって、前記核酸は０．０１〜７．０
   のｐＨで少なくとも１時間のｐＨ安定性を特徴とし、前記核酸は実質的に抗細菌
   活性を示す修飾核酸。
3. 【請求項３】 前記ポリマーの少なくとも一端またはその付近に遮断化学修
   飾をさらに含んでなり、前記核酸は同じ数のヌクレオチドを有する天然ポリマー
   のヌクレアーゼ耐性の少なくとも２倍のヌクレアーゼ耐性を有する請求項１また
   は２の核酸。
4. 【請求項４】 前記分子は約２〜約１００ヌクレオチドを含んでなる請求項
   １の核酸。
5. 【請求項５】 核酸分子はｐＨ０．５〜７．０を有する請求項１、２または
   ３の核酸分子。
6. 【請求項６】 骨格構造は、ホスホジエステル結合、ホスホトリエステル結
   合、ホスホルアミデート結合、シロキサン結合、カーボネート結合、カルボキシ
   メチルエステル結合、アセトアミド結合、カルバメート結合、チオエーテル結合
   、架橋ホスホルアミデート結合、架橋メチレンホスホネート結合、ホスホロチオ
   エート結合、メチルホスホネート結合、ホスホロジチオエート結合、モルホリノ
   、架橋ホスホロチオエート結合、スルホンヌクレオチド間結合、３’−３’結合
   、５’−２’結合、５’−５’結合、２’−デオキシ−エリトロペントフラノシ
   ル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキル−
   ｎ（Ｏ−アルキル）ヌクレオチド、モルホリノ結合、ｐ−エトキシオリゴヌクレ
   オチド、ＰＮＡ結合、ｐ−イソプロピルオリゴヌクレオチド、またはホスホルア
   ミデートからなる群の１つ以上を含む請求項１、２または３の核酸。
7. 【請求項７】 核酸は、病原体に相補的な配列を有する請求項１または３の
   核酸。
8. 【請求項８】 医薬的に許容される担体と、治療有効量の実質的に酸に耐性
   なプロトン付加核酸とを含む医薬組成物。
9. 【請求項９】 特定の微生物に細胞毒性である修飾核酸を産生する方法であ
   って、 ａ）微生物株からヌクレオチド配列を単離する工程と、 ｂ）単離した配列を複製する工程と、 ｃ）複製した配列を修飾して、単離ヌクレオチド配列と比べて、ヌクレアーゼ
   消化に対するより高い耐性およびｐＨ可変性に対するより高い耐性を与る工程と
   、 ｄ）修飾配列を、ヌクレオチド配列を単離した微生物株と接触させる工程と、 ｅ）微生物の生存度に対する修飾ヌクレオチド配列の効果を決定する工程とを
   含んでなる方法。
10. 【請求項１０】 複数の異なるヌクレオチド配列に対して工程ａ）からｅ）
    を実施し、そして、微生物の生存度に対して最大の効果を有する修飾ヌクレオチ
    ド配列を同定することをさらに含んでなる請求項９の方法。
11. 【請求項１１】 請求項９または１０の方法により得られる修飾オリゴヌク
    レオチド配列。
12. 【請求項１２】 天然ヌクレオチドポリマーの核酸骨格構造から修飾された
    核酸骨格構造を有するヌクレオチドモノマーまたはヌクレオチドポリマーと、ポ
    リマー上の反応部位（群）に導入された１つ以上の外来性プロトンと、美容的に
    適切な担体とを含んでなる局所的皮膚組成物。
13. 【請求項１３】 天然ヌクレオチドポリマーの核酸骨格構造から修飾された
    核酸骨格構造を有するヌクレオチドモノマーまたはヌクレオチドポリマーと、ポ
    リマー上の反応部位（群）に導入された１つ以上の外来性プロトンと、担体とを
    含んでなる消毒溶液。
14. 【請求項１４】 カルボン酸の金属塩をさらに含む、請求項１３の溶液。
15. 【請求項１５】 請求項１３の組成物のコーティングを有する表面。