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JP2004141153A - リボソーム不活性化タンパク質を含む物質およびそれらを調製ならびに使用する方法 - Google Patents

リボソーム不活性化タンパク質を含む物質およびそれらを調製ならびに使用する方法 Download PDF

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JP2004141153A JP2003334432A JP2003334432A JP2004141153A JP 2004141153 A JP2004141153 A JP 2004141153A JP 2003334432 A JP2003334432 A JP 2003334432A JP 2003334432 A JP2003334432 A JP 2003334432A JP 2004141153 A JP2004141153 A JP 2004141153A
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Shau-Ping Lei
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Abstract

【課題】　本発明は、目標分子とジスルフィド結合を形成できるシステインを有するタイプＩリボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰｓ）およびＲＩＰｓの類似体、およびそれらをコードするポリヌクレオチドを提供すること。ならびにこのポリヌクレオチドを含むベクターおよびこのベクターで形質転換した宿主細胞を提供すること。
【解決手段】　タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５０位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端に至る前記類似体のアミノ酸配列にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体が提供される
【選択図】　なし

Description

　本願出願は、放棄された１９９１年１１月４日に出願された米国特許出願第07/787,567号の一部継続出願である。係属している１９９２年７月１９日に出願された米国特許出願第07/901,707号の一部継続出願である。
（背景）
　本発明は、一般には、細胞毒性治療剤の組成物として有用な物質に関する。より具体的には、本発明は、リボソーム不活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチド、目標分子への接合のために特異的に修飾されたリボゾーム不活性化タンパク質の類似体をコードするポリヌクレオチド、および目標分子コードするポリヌクレオチドへのリボソーム不活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドの遺伝子融合に関する。
Figure 2004141153
Figure 2004141153
Figure 2004141153
　本発明において以下が提供される：
１．天然配列ゲロニンをコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
２．ゲロニンをコードする挿入体を有するベクターを含む宿主細胞であって、宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６８７２１として寄託されている宿主細胞。
３．天然配列大麦リボソーム非活性化タンパク質をコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
４．モモルディンＩＩをコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
５．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
６．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
７．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
８．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
９．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
１０．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
１１．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
１２．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードする融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
１３．前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントである第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
１４．前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントである第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
１５．前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントである第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
１６．前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントである第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
１７．前記抗体の部分が、Ｆａｂ断片のカッパ鎖である第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
１８．前記抗体の部分が、Ｆａｂ断片のカッパ鎖である第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
１９．前記抗体の部分が、Ｆｄ鎖あるいはＦａｂ断片である第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
２０．前記抗体の部分が、Ｆｄ鎖あるいはＦａｂ断片である第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
２１．前記抗体の部分が、一本鎖抗体である第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
２２．前記抗体の部分が、一本鎖抗体である第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
２３．前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体である第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
２４．前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体である第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
２５．前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体のＦａｂ断片のＦｄ鎖である第１０項に記載のポリヌクレオチド。
２６．第２５項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
２７．第２６項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
２８．ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９１０２として寄託されている宿主細胞である、第２７項に記載の宿主細胞。
２９．前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｋ６５抗体のカッパ鎖である第１０項に記載のポリヌクレオチド。
３０．第２９項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
３１．第３０項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
３２．ＡＴＣＣ受託Ｎｏ，６９１０３として寄託されている宿主細胞である、第３１項に記載の宿主細胞。
３３．前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体のＦｄ鎖である第１０項に記載のポリヌクレオチド。
３４．第３３項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
３５．第３４項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
３６．ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９１０４として寄託されている宿主細胞である、第３５項に記載の宿主細胞。
３７．前記抗体の部分が、一本鎖抗体である第５項もしくは第７項に記載の融合タンパク質。
３８．前記抗体の部分が、一本鎖抗体である第６項もしくは第８項に記載の融合タンパク質。
３９．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
４０．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向をコードするアミノ酸配列、およびゲロニンをコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
４１．ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
４２．抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向をコードするアミノ酸配列、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
４３．リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含むタンパク質を精製する方法であって、前記方法が、下記工程、すなわち；
　陰イオン交換カラムに、リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含んだタンパク質の溶液を通し、
　前記溶液を通過した後に、前記タンパク質をプロテインＧカラムに適用し、および
　前記プロテインＧカラムから前記タンパク質を溶出する、
工程を含む、リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含むタンパク質を精製する方法。
４４．前記適用工程に先行して、陰イオン交換カラムからの流出物を陽イオン交換カラムに導入し、および
　前記タンパク質を効率的に溶出するために、陽イオン交換カラムを溶離剤に曝す、
　工程をさらに含む、第４４項に記載の方法。
４５．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体。
４６．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである第４５項に記載の類似体。
４７．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある第４６項に記載の類似体。
４８．第４７項に記載の類似体をコードするベクターを含む宿主細胞であって、前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９００８として寄託されている宿主細胞。
４９．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の６０位にある第４６項に記載の類似体。
５０．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、単一システインを含む第４５項に記載の類似体。
５１．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである第５０項に記載の類似体。
５２．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある第５１項に記載の類似体。
５３．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の４４位にある第５１項に記載の類似体。
５４．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の５０位にある第５１項に記載の類似体。
５５．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある第５１項に記載の類似体。
５６．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、コードするポリヌクレオチド。
５７．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、コードするポリヌクレオチドを適切な宿主細胞にて発現する工程を含む、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を製造する方法。
５８．システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子を結合した、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含む、細胞に毒性を呈する薬剤。
５９．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持しているタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子に結合する工程を含む細胞に毒性を呈する薬剤の製造方法。
６０．システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子を結合した、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含む細胞毒性治療剤であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持しているタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含んだ細胞に毒性を呈する、ことを特徴とする細胞毒性治療剤。
６１．４４位および５０位の前記天然ゲロニンシステイン残基が、アラニン残基と置換される第４６項に記載の類似体。
６２．ジスルフィド結合を利用するための前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある第６１項に記載の類似体．
６３．前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１０３位にある第４６項に記載の類似体。
６４．前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１４６位にある第４６項に記載の類似体。
６５．前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１８４位にある第４６項に記載の類似体。
６６．前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の２１５位にある第４６項に記載の類似体。
６７．前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ６９１０１として寄託されている第５４項に記載の類似体をコードするベクターを含む宿主細胞。
　さらに本発明においては、以下が提供される：
１．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体。
２．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである項目１に記載の類似体。
３．前記システインが、前記類似体の２４４位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目２に記載の類似体。
４．前記システインが、前記類似体の２４７位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目３に記載の類似体。
５．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４４位にある項目３に記載の類似体。
６．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある項目４に記載の類似体。
７．４４位および５０位での天然ゲロニンシステイン残基が、アラニン残基と置換されている項目２に記載の類似体。
８．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４８位にある項目４に記載の類似体。
９．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目１に記載の類似体。
１０．前記システインが、前記類似体の２５６位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目９に記載の類似体。
１１．前記システインが、前記類似体の２６０位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目１０に記載の類似体。
１２．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２５６位にある項目１０に記載の類似体。
１３．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７０位にある項目１１に記載の類似体。
１４．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７７位にある項目１１に記載の類似体。
１５．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、モモルディンＩＩである項目１に記載の類似体。
１６．前記類似体のアミノ酸配列での前記システインの前記位置が、配列番号：１の２５９位にあるアミノ酸の位置に対応する項目１に記載の類似体。
１７．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである項目１６に記載の類似体。
１８．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目１６に記載の類似体。
１９．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、モモルディンＩＩである項目１６に記載の類似体。
２０．前記類似体のアミノ酸配列での前記システインの前記位置が、配列番号：１の２５９位に対応する項目１に記載の類似体。
２１．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目２０に記載の類似体。
２２．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、モモルディンＩＩである項目２０に記載の類似体。
２３．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体をコードするポリヌクレオチド。
２４．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである項目２３に記載のポリヌクレオチド。
２５．前記システインが、前記類似体の２４４位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目２４に記載のポリヌクレオチド。
２６．前記システインが、前記類似体の２４７位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目２５に記載のポリヌクレオチド。
２７．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４４位にある項目２５に記載のポリヌクレオチド。
２８．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある項目２６に記載のポリヌクレオチド。
２９．４４位および５０位での天然ゲロニンシステイン残基が、アラニン残基と置換されている項目２４に記載のポリヌクレオチド。
３０．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４８位にある項目２６に記載のポリヌクレオチド。
３１．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目２３に記載のポリヌクレオチド。
３２．前記システインが、前記類似体の２５６位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目３１に記載のポリヌクレオチド。
３３．前記システインが、前記類似体の２６０位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目３２に記載のポリヌクレオチド。
３４．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２５６位にある項目３２に記載のポリヌクレオチド。
３５．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７０位にある項目３３に記載のポリヌクレオチド。
３６．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７７位にある項目３３に記載のポリヌクレオチド。
３７．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、モモルディンＩＩである項目２３に記載のポリヌクレオチド。
３８．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体をコードするベクター。
３９．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体をコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡベクターを含む宿主細胞。
４０．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである項目３９に記載の宿主細胞。
４１．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある項目４０に記載の宿主細胞。
４２．前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９００９として寄託されたタイプの細胞である項目４１に記載の宿主細胞。
４３．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目３９に記載の宿主細胞。
４４．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７７位にある項目４３に記載の宿主細胞。
４５．前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６８７２２として寄託されたタイプの細胞である項目４４に記載の宿主細胞。
４６．細胞に毒性を呈する薬剤であって、システインを介して前記細胞に特異的に結合する分子にジスルフィド結合によって連結されたタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含み、前記システインが、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて位置しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中に位置する、細胞に毒性を呈する薬剤。
４７．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである項目４６に記載の薬剤。
４８．前記システインが、前記類似体の２４７位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目４７に記載の薬剤。
４９．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある項目４８に記載の薬剤。
５０．４４位および５０位での天然ゲロニンシステイン残基が、アラニン残基と置換されている項目４７に記載の薬剤。
５１．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４８位にある項目４８に記載の薬剤。
５２．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、大麦リボソーム不活性化タンパク質である項目４６に記載の薬剤。
５３．前記システインが、前記類似体の２６０位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目５２に記載の薬剤。
５４．前記システインが、前記類似体の２７０位からカルボキシ末端位置の前記類似体内の位置にある項目５３に記載の薬剤。
５５．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２５６位にある項目４６に記載の薬剤。
５６．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７０位にある項目５４に記載の薬剤。
５７．前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２７７位にある項目５４に記載の薬剤。
５８．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、モモルディンＩＩである項目４６に記載の薬剤。
５９．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、抗体に結合している項目４７に記載の薬剤。
６０．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、Ｈ６５抗体に結合している項目５９に記載の薬剤。
６１．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、抗体断片に結合している項目４７に記載の薬剤。
６２．前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、キメラおよびヒト型化抗体断片からなるグループから選択された抗体断片に結合している項目６１に記載の薬剤。
６３．前記抗体断片が、Ｆａｂ抗体断片、Ｆａｂ’抗体断片、およびＦ（ａｂ’）２抗体断片からなるグループから選択される項目６１に記載の薬剤。
６４．前記抗体断片が、Ｆａｂ抗体断片、Ｆａｂ’抗体断片、およびＦ（ａｂ’）２抗体断片からなるグループから選択される項目６２に記載の薬剤。
６５．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインに置換した、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主細胞にて発現する工程を含む、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体の製造方法。
６６．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインに置換した、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主細胞にて発現する工程を含む、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体の製造方法による生成物。
６７．タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にてシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、システインを介して細胞に特異的に結合する分子に結合する工程を含む細胞に毒性を呈する薬剤の製造方法。
６８．システインを介して細胞に特異的に結合する分子を結合したタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含む細胞毒性治療剤であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記システインが、配列番号：１の２５１位に対応する位置から前記類似体のカルボキシ末端位置に至る前記類似体のアミノ酸配列中の位置にて位置する、細胞毒性治療剤。
６９．ジスルフィド結合を利用するための前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある項目７に記載の類似体。
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 （配列表）
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Claims (67)

  1. 　天然配列ゲロニンをコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
  2. 　ゲロニンをコードする挿入体を有するベクターを含む宿主細胞であって、宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６８７２１として寄託されている宿主細胞。
  3. 　天然配列大麦リボソーム非活性化タンパク質をコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
  4. 　モモルディンＩＩをコードする精製および単離したポリヌクレオチド。
  5. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
  6. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  7. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
  8. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  9. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
  10. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  11. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードするアミノ酸の配列を含む融合タンパク質。
  12. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードする融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
  13. 　前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントである請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  14. 　前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントである請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  15. 　前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントである請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  16. 　前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントである請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  17. 　前記抗体の部分が、Ｆａｂ断片のカッパ鎖である請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  18. 　前記抗体の部分が、Ｆａｂ断片のカッパ鎖である請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  19. 　前記抗体の部分が、Ｆｄ鎖あるいはＦａｂ断片である請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  20. 　前記抗体の部分が、Ｆｄ鎖あるいはＦａｂ断片である請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  21. 　前記抗体の部分が、一本鎖抗体である請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  22. 　前記抗体の部分が、一本鎖抗体である請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  23. 　前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体である請求の範囲第９項もしくは第１１項に記載の融合タンパク質。
  24. 　前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体である請求の範囲第１０項もしくは第１２項に記載のポリヌクレオチド。
  25. 　前記ペプチドセグメントが、シガ様毒素のセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体のＦａｂ断片のＦｄ鎖である請求の範囲第１０項に記載のポリヌクレオチド。
  26. 　請求の範囲第２５項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  27. 　請求の範囲第２６項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
  28. 　ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９１０２として寄託されている宿主細胞である、請求の範囲第２７項に記載の宿主細胞。
  29. 　前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｋ６５抗体のカッパ鎖である請求の範囲第１０項に記載のポリヌクレオチド。
  30. 　請求の範囲第２９項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  31. 　請求の範囲第３０項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
  32. 　ＡＴＣＣ受託Ｎｏ，６９１０３として寄託されている宿主細胞である、請求の範囲第３１項に記載の宿主細胞。
  33. 　前記ペプチドセグメントが、ウサギ筋肉アルドラーゼのセグメントであり、さらに、前記抗体の部分が、Ｈ６５抗体のＦｄ鎖である請求の範囲第１０項に記載のポリヌクレオチド。
  34. 　請求の範囲第３３項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  35. 　請求の範囲第３４項に記載のベクターで形質転換あるいは形質変換した宿主細胞。
  36. 　ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９１０４として寄託されている宿主細胞である、請求の範囲第３５項に記載の宿主細胞。
  37. 　前記抗体の部分が、一本鎖抗体である請求の範囲第５項もしくは第７項に記載の融合タンパク質。
  38. 　前記抗体の部分が、一本鎖抗体である請求の範囲第６項もしくは第８項に記載の融合タンパク質。
  39. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
  40. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向をコードするアミノ酸配列、およびゲロニンをコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
  41. 　ゲロニンのアミノからカルボキシ方向、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、および抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分をコードするアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
  42. 　抗原に特異的に結合する能力のある抗体部分のアミノからカルボキシ方向をコードするアミノ酸配列、エンドペプチダーゼ開裂部位を有するペプチドセグメント、およびゲロニンをコードするポリヌクレオチドを、適切な宿主にて発現する工程を含む融合タンパク質の製造方法。
  43. 　リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含むタンパク質を精製する方法であって、前記方法が、下記工程、すなわち；
    　陰イオン交換カラムに、リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含んだタンパク質の溶液を通し、
    　前記溶液を通過した後に、前記タンパク質をプロテインＧカラムに適用し、および
    　前記プロテインＧカラムから前記タンパク質を溶出する、
    工程を含む、リボソーム不活性化タンパク質と抗体の部分を含むタンパク質を精製する方法。
  44. 　前記適用工程に先行して、陰イオン交換カラムからの流出物を陽イオン交換カラムに導入し、および
    　前記タンパク質を効率的に溶出するために、陽イオン交換カラムを溶離剤に曝す、
    　工程をさらに含む、請求の範囲第４４項に記載の方法。
  45. 　タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体。
  46. 　前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである請求の範囲第４５項に記載の類似体。
  47. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  48. 　請求の範囲第４７項に記載の類似体をコードするベクターを含む宿主細胞であって、前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ受託Ｎｏ．６９００８として寄託されている宿主細胞。
  49. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の６０位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  50. 　前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、単一システインを含む請求の範囲第４５項に記載の類似体。
  51. 　前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質が、ゲロニンである請求の範囲第５０項に記載の類似体。
  52. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある請求の範囲第５１項に記載の類似体。
  53. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の４４位にある請求の範囲第５１項に記載の類似体。
  54. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の５０位にある請求の範囲第５１項に記載の類似体。
  55. 　前記システインが、前記類似体のアミノ酸配列の２４７位にある請求の範囲第５１項に記載の類似体。
  56. 　タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、コードするポリヌクレオチド。
  57. 　タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、コードするポリヌクレオチドを適切な宿主細胞にて発現する工程を含む、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を製造する方法。
  58. 　システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子を結合した、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持している、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含む、細胞に毒性を呈する薬剤。
  59. 　タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持しているタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を、システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子に結合する工程を含む細胞に毒性を呈する薬剤の製造方法。
  60. 　システインを介したジスルフィド結合によって、細胞に特異的に結合する分子を結合した、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含む細胞毒性治療剤であって、前記類似体が、タイプＩリボソーム不活性化タンパク質での分子間ジスルフィド結合のために自然には存在しない位置、および自然配座でのリシンＡ鎖表面での位置に対応するアミノ酸位置にて、分子間ジスルフィド結合のために使用できるシステインを有しており、そして、前記類似体が、前記タイプＩリボソーム不活性化タンパク質のリボソーム不活性化活性を保持しているタイプＩリボソーム不活性化タンパク質の類似体を含んだ細胞に毒性を呈する、ことを特徴とする細胞毒性治療剤。
  61. 　４４位および５０位の前記天然ゲロニンシステイン残基が、アラニン残基と置換される請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  62. 　ジスルフィド結合を利用するための前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１０位にある請求の範囲第６１項に記載の類似体．
  63. 　前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１０３位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  64. 　前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１４６位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  65. 　前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の１８４位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  66. 　前記システイン残基が、前記類似体のアミノ酸配列の２１５位にある請求の範囲第４６項に記載の類似体。
  67. 　前記宿主細胞が、ＡＴＣＣ６９１０１として寄託されている請求の範囲第５４項に記載の類似体をコードするベクターを含む宿主細胞。
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