JP2004501086A - Novel flavone glycoside derivatives for use in cosmetics, pharmaceuticals and food - Google Patents

Abstract

で示されるフラボンまたはイソフラボン親物質であり、ここで、この（イソ）フラボン親物質は、１または多置換されており、そして／または、１または多還元（水素）されており、Ｚ（糖）は、Ｘ基にアセタール結合し、かつ、Ａ_２によってｎ回エステル置換されている単糖、二糖または多糖を表し、［Ａ_１−Ｃ（＝Ｏ）］は、フラボンまたはイソフラボン親物質におけるアシル基を表し、Ａ_１およびＡ_２は、互いに独立して、少なくとも４つの分離したおよび／または少なくとも２つの共役した二重結合を含むポリ不飽和Ｃ_{１５ − ２５}アルケニル基、またはエステル基と芳香環の間に１〜４個のメチレン基を含むアリール脂肪族基を表し、［Ｃ（＝Ｏ）Ａ_２］は、糖Ｚにおけるアシル基を表し、ｎは、０ではない整数（１、２、３、・・・）であり、ｍは、０を含む整数（１、２、３、・・・）であり、そしてＲ１、Ｒ２およびＲ３は、ヒドロキシル基または水素原子である。The present invention is represented by the general formula (I): [A ₁ -C (＝ O) O] _m- [XOZ]-[OC (＝ O) -A ₂ ] _n (I) Regarding flavone and isoflavone glycoside derivatives: wherein [XOZ] represents a flavone or isoflavone glycoside structure, and X is of the following formula (IIa) or (IIb):
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Wherein the (iso) flavone parent is mono- or polysubstituted and / or mono- or poly-reduced (hydrogen), Z (sugar) is an acetal bond to the X group, and monosaccharides that are n times ester substituted by a _2, represents a disaccharide or _{polysaccharide, [a 1 -C (= O} )] , the acyl in flavone or isoflavone parent substance It represents a group, a ₁ and a ₂ are, independently of one another, at least four separate and / or at least two conjugated double bonds containing polyunsaturated C _{15 - 25} alkenyl group or an ester group and an aromatic ring, Represents an aryl aliphatic group containing 1 to 4 methylene groups, [C (＝ O) A ₂ ] represents an acyl group in the sugar Z, and n is an integer other than 0 (1, 2, 3 ,...), M is an integer including 0 (1, 2, 3,...), And R1, R2 and R3 are a hydroxyl group or a hydrogen atom.

Description

【０００２】
（背景技術）
化粧品の分野において、活性物質の使用は、ますます重要になっている。化粧品において既に使用されている活性物質は、天然物質に限らない。既知の活性物質を最適化するため、および新規な活性物質を得るために、多くの探索研究が行われている。
【０００３】
最も広い意味において、活性物質は、比較的少量で存在するかまたは供給される、強い生理活性を現すことができる物質である。このような物質には、ホルモン、ビタミン、酵素、微量元素など、さらに医薬品（薬物）、飼料添加物、肥料および殺虫剤が含まれるであろう。また、多くの場合に相乗作用も観察される。
【０００４】
フラボンおよびイソフラボン／フラボノイドおよびイソフラボノイドまたはフラボングリコシドおよびイソフラボングリコシド
フラボンは、環の種々の位置にヒドロキシル基が存在していてもよく、またそれを欠いていてもよい２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンである。フラボンの１つの例はアピゲニンであり、その化学名は、２−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−４Ｈ−１−（５，７−ジヒドロキシベンゾピラン）−４−オンである（Ｒｏｅｍｐｐ、Ｃｈｅｍｉｅ−Ｌｅｘｉｋｏｎ、第９版、Ｖｏｌ．２、ｐ．１３７３／４を参照）。この例が示すように、追加ヒドロキシル基が、フェニル環および／またはベンゾピラン環に位置している。換言すると、本発明におけるフラボンは、２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンの水素化、酸化または置換生成物である（水素化は、炭素骨格の２，３−位において起こることができる；置換は、１またはそれ以上の水素原子のヒドロキシまたはメトキシ基による置換を意味する）。従って、この定義には、従来の意味で、フラバン、フラバン−３−オール（カテコール）、フラバン−３，４−ジオール（ロイコアントシアニジン）、フラボン、フラボノールおよびフラボノンが含まれる。アピゲニンに加えて、本発明のフラボンには、例えば、クリシン、ガランギン、フィセチン、ルテオリン、ショウノウ油、クエルセチン、モリン、ロビネチン、ゴシペチン、タキシフォリン、ミリセチン、ラムネチン、イソラムネチン、ナリンゲニン、エリオジクチオール、ヘスペレチン、リキリチゲニン、カテコールおよびエピカテコールが含まれる。
【０００５】
対照的に、本発明におけるイソフラボンは、３−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンの水素化、酸化または置換生成物である（水素化は、炭素骨格の２，３−位において起こることができる；置換は、１またはそれ以上の水素原子のヒドロキシまたはメトキシ基による置換を意味する）。本発明のイソフラボンには、例えば、ダイゼイン、ゲニステイン、プルネチン、ビオカニン、オロボール、サンタール、プラテン、イリゲニン、グリシテイン、ビオカニンＡおよびホルムオノネチンが含まれる。
【０００６】
フラボンおよびフラボングリコシド（フラボノイド）、例えばアスパラチン、オリエンチン（ルテキシン）、シスオリエンチン（ルトナレチン）、イソクエルセチン、ルチン、ナリンギンおよび上記したもの、ならびに、イソフラボンおよびイソフラボングリコシド（イソフラボノイド）は、酸素ラジカルのスカベンジャーおよび皮膚プロテアーゼの阻害剤であることが知られており、従って、これらは皮膚老化および傷跡形成に対して活性に逆作用することができる。その着色特性のゆえに、ある種のフラボン（例えばクエルセチン）は、食品着色剤として使用されている。同時に、酸素ラジカルを捕捉するこれらの能力は、これらを酸化防止剤として使用することをも可能にする。ある種のフラボノイドは、糖尿病のダメージ（血管ダメージ、灰色星状体）の形成に重要な役割を果たすアルドース レダクターゼの阻害剤である。他のフラボノイド（例えば、ヘスペリジンおよびルチン）は、治療学的に、より具体的には毛細管拡張活性剤として使用されている。
【０００７】
本発明に従って行う誘導体化は、サリシン誘導体の例を参考にして以前に示されているように、改善された効果およびより大きな生物利用性を達成する。
【０００８】
多くの天然のアルキルおよびフェノールグルコシドは、抗ウイルス活性、抗微生物活性、および、ある種の場合には抗炎症活性を示す。しかし、これらの極性に鑑みて、これらの生物利用性は劣っており、これらの選択性は低すぎる。例えば、サリシン（ヤナギ樹皮からのグリコシド系活性物質）は、誘導体化（エステル化）の後に、大きく改善された活性を示す非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＡ）である。最近、研究者は、新規なアリール脂肪族サリシンエステル、例えばフェニルアセトイルサリシンおよびフェニルブチロイルサリシンの合成に成功した。このエステル化は、サリシン中の第一ＯＨ基において（第１には糖において、次いでベンジル基において）、優先的に起こる。このアリール脂肪族基のゆえに、作用点への団塊輸送が改善され、作用の選択性が増加する。即ち、未修飾サリシンとは対照的に、これらの誘導体は優先的にプロスタグランジン シンターゼ２（副作用の危険が少ない）を阻害する（Ｒａｌｆ．Ｔ．Ｏｔｔｏ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｓｃｈｅ Ｈｅｒｓｔｅｌｌｕｎｇ ｕｎｄ Ｃｈａｒａｋｔｅｒｉｓｉｅｒｕｎｇ ｎｅｕｅｒ ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈ ａｋｔｉｖｅｒ Ｇｌｙｋｏｌｉｐｉｄｅ、Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ （１９９９） ＩＳＢＮ ３−８６１８６−２５８−１）。
【０００９】
ＰＵＦＡおよびＣＬＡ
栄養物質の分野において、ポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）および共役リノール酸（ＣＬＡ）は、必須脂肪酸の群に属し、動脈硬化の予防に使用したときに正の効果を示す。また、薬学的作用も重要である。即ち、これらは、抗炎症活性（プロスタグランジンおよびロイコトリエン合成の阻害）、さらに血栓崩壊および低血圧活性を現すことができる。
【００１０】
本発明によれば、ＰＵＦＡは、１６〜２６個の炭素原子を含むポリ不飽和脂肪酸であって、該脂肪酸が少なくとも４つの分離したおよび／または少なくとも２つの共役した二重結合を含む脂肪酸であると定義される。ＰＵＦＡの例は、天然に存在し、炭素原子９および１１、１０および１２または１１および１３に共役二重結合を有する、リノール酸（ｃｉｓ，ｃｉｓ，９，１２−オクタデカジエン酸）の異性体である１２のオクタデカジエン酸である。
【００１１】
リノール酸のこれら異性体（例えば、ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ，９，１１−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ，１０，１２−オクタデカジエン酸、ｃｉｓ，ｃｉｓ，９，１１−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ，９，１１−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ，９，１１−オクタデカジエン酸、ｃｉｓ，ｃｉｓ，１０，１２−オクタデカジエン酸、ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ，１０，１２−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ，１０，１２−オクタデカジエン酸）は、通常、リノール酸の化学的異性化によって製造することができる。これらの反応は、反応条件に依存して、組成が大きく異なるＣＬＡ混合物（例えば、Ｅｄｅｎｏｒ ＵＫＤ６０１０、Ｈｅｎｋｅｌ ＫＧａＡ）を専ら導く。これらの共役二重結合のゆえに、これら異性体オクタデカジエン酸は、共役リノール酸（ＣＬＡ）としても知られている。
【００１２】
例えば、炎症カスケードに関与している多数の薬理学的に活性な物質が、既に文献に記載されているが、より有効かつ低副作用の活性物質がなお必要とされている。また、皮膚に容易に吸収され、皮膚に迅速に浸透し、さらに医薬品または化粧品配合物に導入するのが容易な活性物質も必要とされている。
また、ヒト皮膚に影響を及ぼす老化過程を妨げうる活性物質の発見に特に興味が持たれている。
【００１３】
ヒト皮膚はヒト身体の最大の器官である。これは、極めて複雑な構造を持ち、多種多様の細胞種からなり、身体と周囲環境の間の界面を形成する。このことは、明らかに、皮膚の細胞が特に周囲環境の物理的および化学的な外性シグナルに暴露されることを説明する。これらの外性病毒の多くが皮膚の老化に寄与している。皮膚老化の肉眼で見える現象は、一方においては内性および年齢的な老化に基づき、他方においては、周囲環境ストレスによる外性老化に基づいている。周囲環境に反応する生皮膚細胞の能力は、時間と共に変化する。老化過程が起こり、老衰を導き、最終的に細胞死を導く。老化した皮膚の目に見える徴候は、内性および外性老化（例えば、日光による）の積算であると解すべきである（外性老化の結果は、長期にわたり皮膚に蓄積する）。
【００１４】
外性シグナルを細胞が受取り、これが遺伝子発現パターンの変化を導く（ある種の場合には、複雑なシグナル形質導入カスケードによる）。このようにして、各細胞は、その代謝の適合化を伴って、周囲環境からのシグナルに反応する。例えば、皮膚の細胞は、日光の高エネルギー放射に気づき、そのＲＮＡおよびタンパク質合成能力を逆にすることによって、それに反応する。ストレス刺激（例えば、日光）の後に、一部の分子の合成は増大する（例えば、コラゲナーゼＭＭＰ−１）が、他の分子は少ない量で産生される（例えば、コラーゲンα_１）。さらに、多くの合成過程において、有意の変化は起こらないであろう（例えば、ＴＩＭＰ−１）。日光または他のストレス因子によるコラゲナーゼ ＭＭＰ−１の誘導は、外性皮膚老化の過程の主原因であると考えられる。コラゲナーゼ ＭＭＰ−１は、皮膚結合組織の最も重要な構成成分であるコラーゲンを破壊し、こうして特に、皮膚弾性の低下および深いしわの形成を導く。若くかつ非ストレス下の皮膚においては、コラゲナーゼの活性は、天然の阻害剤であるＴＩＭＰ−１（マトリックスメタロプロテアーゼ−１の組織阻害剤）によって調節されている。ＭＭＰ−１とＴＩＭＰ−１の間には極めてデリケートなバランスが存在し、これが外因性ストレスによって危機的に乱される。ＭＭＰ−１の発現は、皮膚ストレス（例えば、日光への暴露など）によって強化される。対照的に、阻害剤ＴＩＭＰ−１の合成は、大きな影響を受けない。従って、皮膚に対する外因性ストレス（例えば、日光など）の作用は、コラーゲンの過剰分解を導く。この結果は、早すぎる皮膚の老化である。
【００１５】
皮膚のストレス誘導老化の作用を化粧品により処置する努力は、ＭＭＰ−１活性の低下またはコラーゲン合成の増加に向けられている。レチン酸またはレチノールの使用が、皮膚におけるＭＭＰ−１の合成を低下させるか、またはコラーゲンの合成を増加させると言われている。しかし、化粧品のためのレチン酸の使用は、催奇性のゆえに欧州では許されていない。細胞毒性作用、配合物における不十分な安定性、望ましくない副作用、あるいはさらに、問題のある天然の色が、このような活性物質（例えば、α−トコフェロール、没食子酸プロピルまたは種々の植物抽出物など）の化粧品使用を制限している。
【００１６】
従って、本発明が解決しようとする課題は、製造および使用が容易であり、副作用が少なく、かつ有効性が高い物質を提供することであった。
【００１７】
フラボンおよびイソフラボングリコシドは、例えば天然から既知である。対照的に、糖のヒドロキシル基の少なくとも１つが（不飽和）カルボン酸または脂肪酸でエステル化され、さらに、別のエステル基が別の不飽和脂肪酸とフラボンまたはイソフラボン成分のヒドロキシル基の１つの間に存在する、フラボンまたはイソフラボングリコシドのエステルは知られていない（植物、微生物もしくは動物細胞からのものまたは合成により製造されたもののいずれも）．
【００１８】
驚くべきことに、ある種のフラボンおよびイソフラボングリコシドエステルが、既知の個々の成分［脂肪酸または（イソ）フラボングリコシド］と比較して、改善された生物学的利用性、改善された効果および／または比較的広い作用スペクトルを有することを見い出した。これらの（イソ）フラボングリコシド誘導体において、フラボンまたはイソフラボンは、少なくとも１つのヒドロキシル基を介して少なくとも１つの糖にグリコシド結合している。糖は、ベンゾピラン環のＯＨ基を介して、または（イソ）フラボンのフェニル環のＯＨ基を介して、（イソ）フラボン残基に結合することができる。また、［Ａ_１−Ｃ（＝Ｏ）］基は、ベンゾピラン環のＯＨ基を介して、または（イソ）フラボン残基のフェニル環のＯＨ基を介して、（イソ）フラボンに結合することができる。好ましくは、糖は、そのベンゾピラン環を介して（イソ）フラボン残基に結合しており、一方、脂肪酸／カルボン酸は、そのベンゾピラン環またはそのフェニル環を介して（イソ）フラボン残基に結合している。
【００１９】
適当な糖は、単糖およびオリゴ糖であり、より具体的にはＤ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−アピオース、Ｌ−ラムノース、Ｌ−アラビノースおよびルチノースである。本発明の化合物中のフラボングリコシドの例は、ルチン、ヘスペリジンおよびナリンギンである。本発明の化合物中のイソフラボングリコシドの好ましい例は、ダイジンおよびゲニスチンである。
【００２０】
（発明の開示）
先に記載した課題は、本発明の化合物の提供により解決された。
本発明の化合物は、以下の一般式（Ｉ）で示されるフラボンおよびイソフラボングリコシド誘導体である：
【化５】

｛式中、［Ｘ−Ｏ−Ｚ］は、フラボンまたはイソフラボングリコシド構造を表し、
Ｘは、以下の式（ＩＩａ）または（ＩＩｂ）：
【化６】

で示されるフラボンまたはイソフラボン親物質であり、ここで、この（イソ）フラボン親物質は、１回または多数回置換されており、そして／または、１回または多数回還元（水素化）されており、
Ｚ（糖）は、Ｘにアセタール結合し、かつ、Ａ_２によってｎ回エステル様式置換されている単糖、二糖または多糖を表し、
［Ａ_１−Ｃ（＝Ｏ）］は、フラボンまたはイソフラボン親物質におけるアシル基であり、
Ａ_１およびＡ_２は、互いに独立して、少なくとも４つの分離したおよび／または少なくとも２つの共役した二重結合を含むポリ不飽和Ｃ_{１５ − ２５}アルケニル基、またはエステル基と芳香環の間に１〜４個のメチレン基を含むアリール脂肪族基を表し、
［Ｃ（＝Ｏ）Ａ_２］は、糖Ｚにおけるアシル基であり、
ｎは、０ではない整数（１、２、３、・・・）であり、
ｍは、０を含む整数（１、２、３、・・・）であり、そして
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、ヒドロキシル基または水素原子である｝。
【００２１】
（発明を実施するための最良の形態）
好ましい糖Ｚは、通常は単糖である。以下の単糖が特に好ましい：ラムノース、トレオース、エリトロース、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、アロース、アルトロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロースおよびフルクトース。これら糖の天然の立体異性体が好ましい形態である。他の好ましい糖は、上記の単糖からなる二糖である。ここでも、これら糖の天然の立体異性体が好ましい形態である。
【００２２】
好ましい態様において、（イソ）フラボン親物質は、糖の第一アルコール基（例えば、グルコースのＣ_６のＯＨ）を介して糖に結合している。別の好ましい態様において、Ｚ−Ｏ−Ｘは、以下の式（ＩＩＩ）で示されるナリンギン骨格である：
【化７】

【００２３】
一般式（Ｉ）における他の好ましいフラボン／フラボノイド（ＸまたはＸ−Ｏ−Ｚ）は、アスパラチン、オリエンチン（ルテキシン）、シスオリエンチン（ルトナレチン）、イソクエルセチン、ナリンギン、ルチン、ショウノウ油およびクエルセチンである。
【００２４】
一般式（Ｉ）で示される好ましい化合物は、特に、Ｘ−Ｏ−Ｚが式（ＩＩＩ）で示されるナリンギンであり、Ａ_２が、以下の酸：即ち、ｐ−クロロフェニル酢酸、ヒドロケイ皮酸、ステアリン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、オレイン酸、クマル酸、カプリン酸、ケイ皮酸、４−フェニル酪酸、４−ヒドロキシフェニル酢酸、５−フェニル吉草酸またはＥｄｅｎｏｒ ＵＫＤ６０１０およびＵＫＤ７５０５として市販されている混合物のアシル基を表す化合物である。Ｅｄｅｎｏｒ ＵＫＤ６０１０およびＵＫＤ７５０５、ｐ−クロロフェニル酢酸およびヒドロケイ皮酸が特に好ましい酸である。上記したナリンギンと脂肪酸の全ての組合わせに対して、ｎ＝１またはｎ＝２であり、同時に、ｍ＝０であるのが特に好ましい。ｎ＝１（およびｍ＝０）であるときには、Ａ_２の好ましい位置は、式（ＩＩＩ）における糖の第一ＯＨ基である。しかし、糖の全ての第二ＯＨ基も、エステル化のための好ましい態様を表す。ｎ＝２（およびｍ＝０）であるときには、好ましくは、１つのエステル化は糖の第一ＯＨ基において起こり、第２のエステル化は糖の第二ＯＨ基の１つにおいて、より具体的には、同じ６員環の２つの第二ＯＨ基の１つにおいて、または、第２の６員環の３つの第二ＯＨ基の１つにおいて起こる。
【００２５】
一般式（Ｉ）で示される他の好ましい化合物は、Ｘ−Ｏ−Ｚがナリンギンであり；Ａ_２が、以下の酸：ｐ−クロロフェニル酢酸、ヒドロケイ皮酸、ステアリン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、オレイン酸、クマル酸、カプリン酸、ケイ皮酸、４−フェニル酪酸、４−ヒドロキシフェニル酢酸、５−フェニル吉草酸またはＥｄｅｎｏｒ ＵＫＤ６０１０およびＵＫＤ７５０５として市販されている混合物のアシル基を表し；ｎ＝１またはｎ＝２であり、同時に、ｍ＝１である化合物である。ｎおよびｍの両方が１であるときには、Ａ_２の好ましい位置は、糖の第一ＯＨ基であり、Ａ_１の好ましい位置は、ベンゾピラン環の５−ＯＨ基またはフェニル環の４’−ヒドロキシ基のどちらかである。しかし、ｍ＝０であるときのように、Ａ_２は、糖の全ての第二ＯＨ基を介してエステル化することもできる。ｎ＝２であり、同時にｍ＝１であるときには、Ａ_２の１つのエステル化は糖の第一ＯＨ基において起こり、第２のエステル化は糖の第二ＯＨ基の１つにおいて、より具体的には、同じ６員環の２つの第二ＯＨ基の１つにおいて、または、第２の６員環の３つの第二ＯＨ基の１つにおいて起こり、Ａ_１のエステル化はベンゾピラン環またはフェニル環を介して起こる。
【００２６】
驚くべきことに、一般式（Ｉ）で示される化合物を、穏やかなリパーゼ触媒のエステル化によって得ることができることを見い出した。
【００２７】
従って、本発明は、本発明の式（Ｉ）の化合物の製造方法にも関する。本発明の方法は、アセタール（糖およびフラボン／イソフラボン親物質に由来する）を、触媒として１またはそれ以上の酵素の存在下に、ポリ不飽和脂肪酸（少なくとも４つの分離した二重結合または少なくとも２つの共役した二重結合を含む）、例えば共役リノール酸（オクタデカジエン酸）で、アリール脂肪族カルボン酸で、これらカルボン酸のエステルで、または、活性化脂肪酸誘導体で、エステル化またはエステル交換することを特徴とする。糖の第一ＯＨ基におけるエステル化が好ましいが、糖の第二アルコール基もエステル化することができる。
【００２８】
上記の酸およびヒドロキシル含有アセタール成分のエステル化のための適当な酵素触媒には、ヒドロラーゼ、特にリパーゼ（エステルヒドロラーゼ）、例えばＣａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ（以前はＣａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕｓおよびＭｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉからのリパーゼが含まれる。
【００２９】
好ましいリパーゼは、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａからのリパーゼ（イソ酵素Ｂ）であるが、これには２つの理由がある。第１には、これが、不飽和脂肪酸によるアセタールのエステル化において特に高い選択性を示すことである（これらは、その通常の基質には含まれないが）。第２には、これが、重要なリパーゼの構造的特徴、即ち、活性中心における可動性のペプチド鎖（いわゆる蓋）を欠いているので、どのような界面活性化（リパーゼの群中のヒドロラーゼの分類のための重要な特徴）を示さないことである。
【００３０】
通常の化学合成法による本発明の化合物の製造においては、糖および／またはフラボン／イソフラボン親物質のいくつかの遊離ヒドロキシル基の存在により、モノ不飽和およびポリ不飽和生成物の混合物が生成するのが普通であるので、ある種の化合物を選択的に合成しようとするときには、保護基を導入および除去しなければならない。
【００３１】
しかし、選択的エステル化は、本発明の物質の生物学的利用性および適合性にとって重要である。化学合成は、不十分な位置選択性により、雑な生成物の混合物を導く。従って、本明細書中で説明した酵素による（実施例を参照）、穏やかかつ位置選択的な合成が有利である。本発明によれば、位置特異的とは、ポリオールのあるＯＨ基だけがエステル化されることを意味する。従って、位置選択的とは、ポリオールのあるＯＨ基が排他的ではなく優先的にエステル化されることを意味する。
【００３２】
本発明の式（Ｉ）の化合物が、本発明の方法によって製造されたときには、通常は、所望の化合物を精製するために、別の工程を続けなければならない。即ち、本発明が解決しようとする別の課題は、式（Ｉ）で示される化合物の精製方法を提供することであった。この方法は、標的化合物を未反応の脂肪酸から選択的に分離しうる、有機溶媒を用いる水ベースの２相抽出法であることを特徴とする。この有機溶媒は、好ましくは、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ＴＨＦ、ジエチルエーテルである。別法によれば、少量の酢酸および／または水と共に酢酸エチル／メタノールまたはジクロロメタン／メタノール混合物を好ましくは用いるシリカゲルクロマトグラフィー法によって精製を行うこともでき、これを、有機溶媒を用いる水ベースの２相抽出法に加えて、行うこともできる。
【００３３】
本発明の式（Ｉ）で示されるフラボン／イソフラボングリコシドは、良好な生物学的利用性および活性を有しているので、これらを、化粧品および医薬品調製物において、および／または食品添加物として使用することができ、これら生成物の品質を大きく改善するという結果を伴う。
【００３４】
本発明の式（Ｉ）で示される化合物は、皮膚プロテアーゼに対する阻害作用（抗−老化、抗−しわ形成）、酸化防止能力、皮膚美白化作用および転写阻害作用を有している。特に驚くべきことは、これら化合物の皮膚美白化作用（チロシナーゼ阻害による）、特に、Ｚ−Ｏ−Ｘがナリンギンであり、その第一ＯＨ基がフェニルプロピオン酸、ヒドロキシフェニル酢酸またはｐ−クロロフェニル酢酸でエステル化されている本発明の化合物の良好な皮膚美白化作用である。
【００３５】
また、本発明の式（Ｉ）で示される化合物、特に、Ｚ−Ｏ−Ｘがナリンギンであり、その第一ＯＨ基がフェニルプロピオン酸、ヒドロキシフェニル酢酸またはｐ−クロロフェニル酢酸でエステル化されている化合物は、ＭＭＰ−１、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１の日光誘導の発現に化粧品的に望ましい方法で影響を与えることができ、従って、皮膚におけるコラーゲン損失に対抗することができることをも見い出した。従って、これら化合物は、皮膚を化粧品処置して皮膚の日光誘導老化を防止するためおよび／またはその結果を軽減するために極めて適している。
【００３６】
コラーゲンの生成は、ＭＭＰおよびＴＩＭＰの発現の程度によって特に影響を受ける。日光に暴露した皮膚細胞のうっ血の過程に関与している因子を分析するために、以下の方法が可能である：
【表１】

【００３７】
ｍＲＮＡの産生が、タンパク質の合成における最初の、従って最も重要な工程である。従って、ｍＲＮＡ産生に効果を有する活性成分は、自動的に、タンパク質の量および酵素活性に効果を有する。その後の工程において、ｍＲＮＡ産生への効果の結果を、皮膚モデルそれ自体におけるタンパク質コラーゲンの検出によって測定することができる。
【００３８】
本発明に従って、本発明のナリンギン誘導体が、ＭＭＰの発現を低下させ、ＴＩＭＰの発現を増大させ、Ｃｏｌα_１の発現を増大させ、そしてコラーゲンの生成を増大させうることを示すことができた。
【００３９】
「光老化した」皮膚において、ＭＭＰ−１は主に線維芽細胞によって産生されるが、ストレスに対する皮膚の反応は、個々の隔離された皮膚細胞の反応と考えることはできない。その代わりに、各細胞は、複雑な伝達ネットワークに結び付けられている。このネットワークは、直に隣接する細胞の間の、また、互いにさらに離れて位置する局在化した細胞（例えば、表皮および真皮の細胞など）の間の情報交換の原因を為している。シグナル分子［例えば、インターロイキン、成長因子（例えば、ＫＧＦ、ＥＧＦおよびＦＧＦ）など］が、皮膚細胞の間の伝達機構に関与している。このため、活性物質の作用の分析を、皮膚および表皮区画からなる皮膚モデルにおいて行った。
【００４０】
また、本発明の化合物は、皮膚の光老化に対して、通常の活性物質よりも光毒性が相当に低いことが見い出された。
【００４１】
さらに、本発明の化合物は、親油性のベース配合物に導入するのが特に容易であり、また、安定なエマルジョンとして容易に配合することができる。
【００４２】
従って、本発明の式（Ｉ）で示される化合物は、化粧品および／または医薬品調製物および／または食品または動物飼料の製造に使用される。本発明の化合物は、純粋物質の形態で、または種々起源の植物抽出物の混合物として存在し、また使用することができる。
【００４３】
（イソ）フラボンおよびそのグリコシドは、調製物／添加物において、植物から得られる物質の混合物（より具体的には、植物抽出物）の構成成分として使用するのが好ましい。このような植物に基づく混合物は、既知のようにして、例えば、柑橘類果実（ミカン科）またはアカシア族などの植物からの圧搾または抽出によって得ることができる。
【００４４】
従って、本発明は、さらに、化粧品および／または医薬品調製物の製造のための式（Ｉ）で示される化合物の使用；食品調製物および動物飼料における食品補足物または添加物としての該化合物の使用；ならびに、式（Ｉ）で示される化合物を含有する化粧品および医薬品調製物および食品／食品調製物および動物飼料に関する。
【００４５】
本発明の化合物（Ｉ）を用いて得られる化粧品調製物、例えばヘアシャンプー、ヘアローション、発泡浴剤、シャワー浴剤、クリーム、ジェル、ローション、アルコール水／アルコール溶液、エマルジョン、ワックス／脂肪化合物、スティック調製物、粉剤または軟膏は、さらに、穏やかな界面活性剤、油成分、乳化剤、超脂肪化剤、真珠光沢化ワックス、稠度因子、増粘剤、ポリマー、シリコーン化合物、油脂、ワックス、安定剤、生物起源の薬剤、脱臭剤、ふけ防止剤、皮膜形成剤、膨潤剤、ＵＶ保護因子、酸化防止剤、ヒドロトロープ剤、防腐剤、虫忌避剤、自己褐変剤、可溶化剤、芳香油、染料、微生物抑制剤などを、助剤および添加剤として含有することができる。
【００４６】
化粧品（または医薬品）調製物における本発明の化合物の使用量は、調製物の全重量を基準に、通常は０．０１〜５重量％の範囲内であり、好ましくは０．１〜１重量％の範囲内である。
【００４７】
医薬品または化粧品調製物を製造するために、本発明の一般式（Ｉ）で示される化合物（所望により、他の活性物質と組合わせる）を、通常のガレノス調製物、例えば錠剤、糖衣錠、カプセル、粉剤、懸濁剤、滴下剤、アンプル、液剤または座剤中に、１またはそれ以上の通常の不活性担体および／または希釈剤、例えばコーンスターチ、ラクトース、コーンシュガー、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースまたは油脂含有物質、例えば硬油脂またはこれらの適当な混合物と共に導入することができる。
【００４８】
薬学的応用において対応する効果を得るために必要な１日用量は、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、より具体的には０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００４９】
本発明の式（Ｉ）で示される化合物を用いて得られる食品補足物および添加物（例えば、スポーツドリンク）は、通常は１〜５リットル／日の液体摂取に対して、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇ体重のこれら化合物用量を導く量で、式（Ｉ）の化合物を含有するのが適している。食品工業における式（Ｉ）の化合物の使用の１つの例は、着色剤および／または調味料としてのこれら化合物の使用である。
【００５０】
（実施例）
実施例１：６−Ｏ−ｃｉｓ−９，ｔｒａｎｓ−１１−オクタデカジエノイルナリンギンの製造
Ｄ−（−）−ナリンギン（２ｇ）、ＣＬＡ（Ｅｄｅｎｏｒ ＵＫＤ６０１０）（５ｇ）、モレキュラーシーブ（１２ｇ）、ｔ−ブタノール（１５ｍｌ）およびＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来の固定化リパーゼＢ（１０ｇ）を、２５０ｍｌのエルレンマイヤーフラスコ中、６０℃で撹拌しながら（磁気撹拌器、１００ｒｐｍ）、４０時間インキュベートした。この反応を、薄層クロマトグラフィー［蛍光指示薬を含むシリカゲルＫＧ６０プレート；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ；可視化：ＵＶ検出および酢酸／硫酸／アニスアルデヒド（１００：２：１ ｖ／ｖ／ｖ）浸漬試薬を含む］でモニターした。生成物をｎ−ヘキサン（２０ｍｌ）で抽出し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲルＦ６０；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ）で精製した。Ｒ_ｆ値：０．４７（酢酸エチル／メタノール １０：１）。
【００５１】
実施例２：６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステルの製造
ナリンギン（５．８ｇ）、３−フェニルプロピオン酸（１．５ｇ）、モレキュラーシーブ（３．７ｇ）、ｔ−ブタノール（１５ｍｌ）およびＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来の固定化リパーゼＢ（１１ｇ）を、２５０ｍｌのフラスコ中、６０℃／１００ｒｐｍで２４時間インキュベートした。この反応を、薄層クロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｆ_２５４；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ；ＵＶ検出により可視化）でモニターした。反応終了時に、ナリンギンに基づく変換率は２０％であった。生成物をｎ−ヘキサン（２０ｍｌ）で抽出し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲルＦ６０；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ）で精製した。Ｒ_ｆ値：０．１６（酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ）。収量：０．８５ｇ。
このカラムクロマトグラフィー分離は最適化しなかった。純粋な生成物を含む分画の他に、未反応のナリンギンを含む混合分画が得られた。所望の生成物だけを含むカラムクロマトグラフィーからの分画だけを、表示した収量の測定に用いた。
【００５２】
実施例３：６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステルの製造
ナリンギン（５．８ｇ）、ｐ−クロロフェニル酢酸（１．７ｇ）、モレキュラーシーブ（３．８ｇ）、ｔ−ブタノール（１５ｍｌ）およびＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ由来の固定化リパーゼＢ（１１ｇ）を、２５０ｍｌのフラスコ中、６０℃／１００ｒｐｍで２４時間インキュベートした。この反応を、薄層クロマトグラフィー（シリカゲル６０Ｆ_２５４；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ；ＵＶ検出により可視化）でモニターした。反応終了時に、ナリンギンに基づく変換率は２０％であった。生成物をｎ−ヘキサン（２０ｍｌ）で抽出し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲルＦ６０；移動溶媒：酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ）で精製した。Ｒ_ｆ値：０．２０（酢酸エチル／メタノール １０：１ ｖ／ｖ）。収量：０．５０ｇ。
このカラムクロマトグラフィー分離は最適化しなかった。純粋な生成物を含む分画の他に、未反応のナリンギンを含む混合分画が得られた。所望の生成物だけを含むカラムクロマトグラフィーからの分画だけを、表示した収量の測定に用いた。
【００５３】
実施例４：他のナリンギン誘導体の製造
ナリンギン誘導体を、実施例１と同様に製造した（Ｎｏｖｏｚｙｍ ＳＰ４３５との６５℃で４８時間の反応、撹拌速度 １２００ｒｐｍ）。この反応を薄層クロマトグラフィーでモニターし、変換率（使用したナリンギンに基づく）を測定した。
【表２】

【００５４】
実施例５：チロシナーゼ活性の阻害
チロシナーゼは、メラニンの合成における重要な工程を生理学的に触媒する（Ｌ−ドーパからＬ−ドーパキノンに、これがチロシナーゼによりさらに環化および再反応して、ドーパクロミウムに）。従って、チロシナーゼの阻害は皮膚美白化作用を導くことができる。
【００５５】
菌類チロシナーゼ（Ｓｉｇｍａ）の活性を、種々濃度の本発明の活性物質の存在下に、Ｌ−ドーパからドーパクロミウムへの酵素反応により測定した。ドーパクロミウム（赤−茶色）の吸収最大値は、λ＝４７５ｎｍのところにある。単位時間（ｔ）あたりのドーパクロミウムの吸収（Ａ）における直線的増加が、チロシナーゼ活性の尺度である（ΔＡ／Δｔ）。活性物質の不存在下でのチロシナーゼの活性（ΔＡ_１／Δｔ_１）を、参照（１００％）として用いた。同様の条件下で、残留チロシナーゼ活性を、活性物質の存在下に測定した（ΔＡ_２／Δｔ_２）。各測定を平行して２回行った。この方法の結果の変動は、約±１０％である。
【００５６】
使用した化学物質：
Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−ドーパ） （Ｓｉｇｍａ）
ＫＨ_２ＰＯ_４ （Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）
チロシナーゼ、５０，０００単位 （Ｓｉｇｍａ）
ＫＯＨ
【００５７】
必要な溶液：
２回蒸留水中の５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液（１Ｍ ＫＯＨ水溶液でｐＨ６．５に調整）
２回蒸留水中の２．５ｍＭ Ｌ−ドーパ
冷ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液（ｐＨ６．５）中の３４０Ｕ／ｍｌ チロシナーゼ保存溶液
試験する活性物質の保存溶液（２回蒸留水またはエタノール中）においては、活性物質の濃度は、「結果」中の「試験系中の活性物質濃度」の欄に表示した濃度よりも１０倍高かった。
【００５８】
反応カクテル：
１０ｍｌ ＫＨ_２ＰＯ_４緩衝液
１０ｍｌ Ｌ−ドーパ
９ｍｌ ２回蒸留水
チロシナーゼ保存溶液と同様、反応カクテルを、試験開始の直前に調製した。チロシナーゼ保存溶液は、冷蔵庫に入れておかなければならない。Ｌ−ドーパ溶液は、酸素の不存在下にきつく密閉した容器中、暗所に保存すべきである。その色が灰色に変わったときには（大気中酸素による酸化）、溶液を新たに調製しなければならない。
【００５９】
試験系 （ 試料容量 １ｍｌ ） および反応方法：
３３μｌ チロシナーゼ保存溶液
１００μｌ 活性物質保存溶液
反応カクテルを１０００μｌまで
活性物質の不存在下でのチロシナーゼの活性を、参照（１００％）として用いた。全ての試料を、測定の開始前にＶｉｂｒｏｆｉｘ中で十分に混合した。ｐＨ値をモニターし、必要ならｐＨ６．５に調整した。測定は、Ｋｏｎｔｒｏｎ Ｕｖｉｋｏｎ ８６０光度計を用いて行った。ドーパクロミウムの吸収を、吸収最大値λ＝４７５ｎｍにおいて２５℃で５分間にわたり検出した。測定時間は２０〜３０秒であった。
【００６０】
結果：
【表３】

【００６１】
実施例６：光毒性
ヒト皮膚の皮膚線維芽細胞を、増加濃度のレチノール（表４）、６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステル（表５）および６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステル（表６）と共に培養した。物質の光毒性をＭＴＴ試験によって測定した。光毒性を試験するために、処理した細胞を、１０Ｊ ＵＶ−Ａ／ｃｍ^２の用量に対応する疑似日光に暴露した。未処理細胞の生命力を１００％とし、全ての他の値を該値に関連させた。
【００６２】
細胞の暴露は日光模擬装置を用いて行った。その放射スペクトルから、ＵＶ−Ａ成分を定量のために測定した。この実験設計の利点は、日光の全スペクトルを使用しているので日常の状況の模擬に優れている点にある。対照的に、多くの他の研究室は、純粋なＵＶ−Ａおよび／またはＵＶ−Ｂランプを使用している。
【００６３】
【表４】

【００６４】
【表５】

【００６５】
【表６】

【００６６】
これらの結果は、レチノールと比較して、６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステルおよび６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステルは、比較的高い濃度においてのみ毒性作用を示すことを示している。レチノールは、極めて低い濃度で毒性である。１０の数乗での生命力の低下は、レチノールの強い光毒性を証明するものである。
【００６７】
実施例７：ＭＭＰ−１−、ＴＩＭＰ−およびＣｏｌα_１−ｍＲＮＡの光誘導発現に及ぼす作用
ＭＭＰ−１、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１の光誘導発現に及ぼす６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステル（表７）および６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステル（表８）の作用を、光毒性以下の濃度で測定した。このために、ｍＲＮＡ量を、ＭＭＰ１、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１について定量した。皮膚モデルを試験物質で１２時間処理し、次いで、１０Ｊ ＵＶ−Ａ／ｃｍ^２の用量に対応する疑似日光に暴露した。活性物質の存在下にさらに４８時間の後に、細胞ＲＮＡを調製し、特異的な遺伝子プローブを用いてノーザンブロットにより分析した。実験に使用したＲＮＡの量をモニターするために、ノーザンブロットを、１８Ｓ−特異的な遺伝子プローブを用いて行った。シグナル強度を定量するために、オートラジオグラムを濃度法によって評価し、ＭＭＰ１、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１のシグナルの値を、１８Ｓシグナルの関係値に関連付けた。表中の数字は、正規化後のノーザンブロットシグナルの濃度法定量を表す。未処理細胞のＭＭＰ１、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１の光誘導発現を１００％とし、全ての他の値を該値に関連させた。
【００６８】
【表７】

【００６９】
【表８】

【００７０】
疑似日光への皮膚モデルの暴露は、ＭＭＰ１−ｍＲＮＡ合成の強い誘導を導き、一方、コラーゲンの合成は下方調節された。ＴＩＭＰの産生は、ほとんど影響を受けずに残存した。表７は、５０ｐｐｍの６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステルが、ＭＭＰ−１の日光誘導発現を極めて効率的に減少させることを示す。ＴＩＭＰの発現は、わずかな影響しか受けず、Ｃｏｌα_１の発現は、暴露した未処理試料に対して大きく増加した。１００ｐｐｍの６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステルによる細胞の処理は、ＭＭＰ−１の日光誘導発現を未暴露の未処理試料のレベルまで減少させた（表８）。対照的に、ＴＩＭＰの発現は約３５％増加した。Ｃｏｌα_１の発現は、未暴露の未処理培養物のレベルまで増加した。
【００７１】
５０および１００ｐｐｍの試験ナリンギン誘導体で処理した後の、暴露線維芽細胞の培養物中のＭＭＰ、ＴＩＭＰおよびＣｏｌα_１の発現の％変化を、暴露した未処理培養物と比較して、表９に示す。
【表９】

【００７２】
表９に示した濃度は、両ナリンギン誘導体について、ＭＭＰ発現の明らかな阻害を導き、Ｃｏｌα_１産生の増加を導く。６−Ｏ−ナリンギン−（３−フェニルプロピオン酸）−エステルは、ＴＩＭＰ産生を相当に増加させ、一方、６−Ｏ−ナリンギン−（ｐ−Ｃｌ−フェニル酢酸）−エステルは、わずかな効果しか有していなかった。
【００７３】
実施例８：コラーゲン産生に及ぼす作用
タンパク質レベルでのコラーゲン産生の増加を証明するため、線維芽細胞を、３次元培養系において試験物質で５日間処理した。第６日目に、生成したコラーゲンの量を、非コラーゲンタンパク質と比較して、滴定したタンパク質の導入によって測定した。表１０は、タンパク質全体中のコラーゲン成分の増加率（％）を示すものである（未処理培養物に対して処理線維芽細胞培養物から測定する）。
【表１０】

[0001]
(Technical field)
The present invention relates to novel and biologically active flavone and isoflavone glycoside derivatives represented by the following general formula (I) of aliphatic and arylaliphatic carboxylic acids, a process for producing the same, cosmetics containing these compounds and And / or the use of these compounds as excipients in pharmaceutical preparations and human nutrition and animal feed:
Embedded image

[0002]
(Background technology)
In the cosmetics field, the use of active substances has become increasingly important. Active substances already used in cosmetics are not limited to natural substances. Many exploratory studies have been carried out to optimize known active substances and to obtain new active substances.
[0003]
In the broadest sense, an active substance is a substance capable of exhibiting strong bioactivity, present or supplied in relatively small amounts. Such substances would include hormones, vitamins, enzymes, trace elements, etc., as well as pharmaceuticals (drugs), feed additives, fertilizers and pesticides. In addition, synergism is often observed.
[0004]
Flavones and isoflavones / flavonoids and isoflavonoids or flavone glycosides and isoflavone glycosides
Flavones are 2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-ones which may have hydroxyl groups at various positions in the ring and may lack them. One example of a flavone is apigenin, whose chemical name is 2- (p-hydroxyphenyl) -4H-1- (5,7-dihydroxybenzopyran) -4-one (Roempp, Chemie-Lexikon, 9th Edition, Vol. 2, p. 1373/4). As this example shows, additional hydroxyl groups are located on the phenyl and / or benzopyran rings. In other words, the flavone in the present invention is the hydrogenation, oxidation or substitution product of 2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one (hydrogenation can occur at the 2,3-position of the carbon skeleton. Substitution can mean the replacement of one or more hydrogen atoms by a hydroxy or methoxy group). Thus, this definition includes flavan, flavan-3-ol (catechol), flavan-3,4-diol (leucoanthocyanidin), flavone, flavonol and flavonone in the conventional sense. In addition to apigenin, the flavone of the present invention includes, for example, chrysin, galangin, fisetin, luteolin, camphor oil, quercetin, morin, robinetin, gossypetin, taxifolin, myricetin, ramnetin, isorhamnetin, naringenin, eriodictyol, hesperetin, liquiritinin Catechol and epicatechol.
[0005]
In contrast, isoflavones in the present invention are the hydrogenation, oxidation or substitution products of 3-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one (hydrogenation occurs at the 2,3-position of the carbon skeleton. Substitution means the replacement of one or more hydrogen atoms by a hydroxy or methoxy group). The isoflavones of the present invention include, for example, daidzein, genistein, prunetin, biochanin, oloball, santhal, platen, irigenin, glycitein, biochanin A, and formonenetin.
[0006]
Flavones and flavone glycosides (flavonoids), such as asparatine, orientin (lutexin), cis orientin (rutonaletin), isoquercetin, rutin, naringin and those mentioned above, and isoflavones and isoflavone glycosides (isoflavonoids) It is known to be an inhibitor of scavengers and skin proteases, and they can therefore have an adverse effect on skin aging and scarring. Due to their coloring properties, certain flavones (eg, quercetin) have been used as food coloring agents. At the same time, their ability to scavenge oxygen radicals also allows them to be used as antioxidants. Certain flavonoids are inhibitors of aldose reductase that play an important role in the formation of diabetes damage (vascular damage, gray asters). Other flavonoids, such as hesperidin and rutin, have been used therapeutically, and more specifically, as capillary dilation actives.
[0007]
Derivatization performed in accordance with the present invention achieves improved efficacy and greater bioavailability, as previously shown with reference to the examples of salicin derivatives.
[0008]
Many natural alkyl and phenol glucosides exhibit antiviral, antimicrobial, and in some cases, anti-inflammatory activities. However, given their polarity, their bioavailability is poor and their selectivity is too low. For example, salicin, a glycosidic active from willow bark, is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAIA) that shows greatly improved activity after derivatization (esterification). Recently, researchers have successfully synthesized novel arylaliphatic salicin esters, such as phenylacetoylsalicin and phenylbutyroylsalicin. This esterification occurs preferentially at the primary OH groups in salicin (first at the sugar and then at the benzyl group). Due to this arylaliphatic group, nodule transport to the point of action is improved and the selectivity of action is increased. That is, in contrast to unmodified salicin, these derivatives preferentially inhibit prostaglandin synthase 2 (less risk of side effects) (Ralf. T. Otto, Biotechnologische Herstellung und Charakterisierung neuker Pharmatiche stigelti sti ti ger ti ti s ti s ti s s s s s s) (1999) ISBN 3-86186-258-1).
[0009]
PUFA and CLA
In the field of nutritional substances, polyunsaturated fatty acids (PUFA) and conjugated linoleic acid (CLA) belong to the group of essential fatty acids and show a positive effect when used for preventing arteriosclerosis. Pharmaceutical action is also important. That is, they can exhibit anti-inflammatory activity (inhibition of prostaglandin and leukotriene synthesis), as well as thrombolytic and hypotensive activity.
[0010]
According to the invention, a PUFA is a polyunsaturated fatty acid comprising 16 to 26 carbon atoms, said fatty acid comprising at least 4 separate and / or at least 2 conjugated double bonds. Is defined as Examples of PUFAs are naturally occurring isomers of linoleic acid (cis, cis, 9,12-octadecadienoic acid) having conjugated double bonds at carbon atoms 9 and 11, 10 and 12 or 11 and 13 12 octadecadienoic acid.
[0011]
These isomers of linoleic acid (eg, cis, trans, 9,11-octadecadienoic acid, trans, cis, 10,12-octadecadienoic acid, cis, cis, 9,11-octadecadienoic acid, trans, cis, 9,11-octadecadienoic acid, trans, trans, 9,11-octadecadienoic acid, cis, cis, 10,12-octadecadienoic acid, cis, trans, 10,12-octadecadienoic acid, trans, trans, 10,12-octadecadienoic acid) can usually be produced by chemical isomerization of linoleic acid. These reactions lead exclusively to CLA mixtures with very different compositions, depending on the reaction conditions (eg Edenor UKD6010, Henkel KGaA). Because of these conjugated double bonds, these isomers octadecadienoic acid are also known as conjugated linoleic acid (CLA).
[0012]
For example, although a number of pharmacologically active substances involved in the inflammatory cascade have already been described in the literature, there is still a need for more effective and less side-effect active substances. There is also a need for actives that are easily absorbed by the skin, rapidly penetrate the skin, and are easy to introduce into pharmaceutical or cosmetic formulations.
Also of particular interest is the discovery of actives that can interfere with the aging process affecting human skin.
[0013]
Human skin is the largest organ of the human body. It has a very complex structure, is composed of a wide variety of cell types, and forms the interface between the body and the surrounding environment. This clearly explains that skin cells are exposed to external physical and chemical signals, especially in the surrounding environment. Many of these extrinsic toxins contribute to skin aging. The macroscopic phenomenon of skin aging is based, on the one hand, on internal and age-related aging and, on the other, external aging due to ambient environmental stress. The ability of raw skin cells to respond to the surrounding environment changes over time. The aging process takes place, leading to senescence and ultimately to cell death. The visible signs of aging skin should be understood to be the sum of intrinsic and external aging (eg, due to sunlight) (the consequences of external aging accumulate on the skin over time).
[0014]
The cell receives an extrinsic signal, which leads to a change in the pattern of gene expression (in some cases, through a complex signal transduction cascade). In this way, each cell responds to signals from the surrounding environment with its metabolic adaptation. For example, skin cells notice the high-energy radiation of sunlight and respond to it by reversing its ability to synthesize RNA and protein. Following stress stimuli (eg, sunlight), the synthesis of some molecules increases (eg, collagenase MMP-1), while other molecules are produced in small amounts (eg, collagen α).₁). Further, in many synthetic processes, no significant changes will occur (eg, TIMP-1). Induction of collagenase MMP-1 by sunlight or other stress factors is thought to be a major cause of the process of external skin aging. Collagenase MMP-1 destroys collagen, the most important component of skin connective tissue, and thus leads, inter alia, to reduced skin elasticity and the formation of deep wrinkles. In young and unstressed skin, collagenase activity is regulated by the natural inhibitor TIMP-1, a tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1. There is a very delicate balance between MMP-1 and TIMP-1, which is critically disturbed by exogenous stress. MMP-1 expression is enhanced by skin stress (eg, exposure to sunlight). In contrast, the synthesis of the inhibitor TIMP-1 is not significantly affected. Thus, the effects of exogenous stress on the skin (eg, sunlight) lead to excessive degradation of collagen. The result is premature skin aging.
[0015]
Efforts to treat the effects of stress-induced aging of the skin with cosmetics have been directed to reducing MMP-1 activity or increasing collagen synthesis. The use of retinoic acid or retinol is said to reduce MMP-1 synthesis in the skin or increase collagen synthesis. However, the use of retinoic acid for cosmetics is not allowed in Europe due to its teratogenic nature. Cytotoxic effects, insufficient stability in the formulation, undesired side effects, or even problematic natural colors may cause such active substances (such as α-tocopherol, propyl gallate or various plant extracts, etc.). ) The use of cosmetics is restricted.
[0016]
Therefore, the problem to be solved by the present invention was to provide a substance which is easy to manufacture and use, has few side effects, and is highly effective.
[0017]
Flavones and isoflavone glycosides are, for example, known from nature. In contrast, at least one of the hydroxyl groups of the sugar is esterified with a (unsaturated) carboxylic acid or fatty acid, and another ester group is added between another unsaturated fatty acid and one of the hydroxyl groups of the flavone or isoflavone component. The esters of the flavone or isoflavone glycosides present are not known (either from plant, microbial or animal cells or produced synthetically).
[0018]
Surprisingly, certain flavone and isoflavone glycoside esters have improved bioavailability, improved efficacy and / or improved properties compared to the known individual components [fatty acids or (iso) flavone glycosides]. It has been found to have a relatively broad spectrum of action. In these (iso) flavone glycoside derivatives, the flavone or isoflavone is glycosidically linked to at least one sugar via at least one hydroxyl group. The sugar can be linked to the (iso) flavone residue via the OH group of the benzopyran ring or via the OH group of the phenyl ring of the (iso) flavone. Also, [A₁The —C (＝ O)] group can be attached to the (iso) flavone via the OH group on the benzopyran ring or via the OH group on the phenyl ring of the (iso) flavone residue. Preferably, the sugar is linked to the (iso) flavone residue via its benzopyran ring, while the fatty acid / carboxylic acid is linked to the (iso) flavone residue via its benzopyran ring or its phenyl ring. are doing.
[0019]
Suitable sugars are monosaccharides and oligosaccharides, more particularly D-glucose, D-galactose, D-xylose, D-apiose, L-rhamnose, L-arabinose and rutinose. Examples of flavone glycosides in the compounds of the present invention are rutin, hesperidin and naringin. Preferred examples of isoflavone glycosides in the compounds of the present invention are daidzin and genistin.
[0020]
(Disclosure of the Invention)
The problems described above have been solved by providing the compounds of the present invention.
The compounds of the present invention are flavone and isoflavone glycoside derivatives of the following general formula (I):
Embedded image

［In the formula, [XOZ] represents a flavone or isoflavone glycoside structure,
X represents the following formula (IIa) or (IIb):
Embedded image

Wherein the (iso) flavone parent material has been substituted one or more times and / or has been reduced (hydrogenated) one or more times. ,
Z (sugar) is an acetal bond to X, and A₂Represents a monosaccharide, disaccharide or polysaccharide substituted n times in an ester manner by
[A₁—C (＝ O)] is an acyl group in a flavone or isoflavone parent substance;
A₁And A₂Are independently of each other a polyunsaturated C containing at least four separate and / or at least two conjugated double bonds_{Fifteen − 25}Represents an alkenyl group or an aryl aliphatic group containing 1 to 4 methylene groups between an ester group and an aromatic ring,
[C (= O) A₂Is an acyl group in the sugar Z,
n is an integer other than 0 (1, 2, 3, ...);
m is an integer including 0 (1, 2, 3,...);
R1, R2 and R3 are a hydroxyl group or a hydrogen atom.
[0021]
(Best Mode for Carrying Out the Invention)
Preferred sugars Z are usually monosaccharides. The following monosaccharides are particularly preferred: rhamnose, threose, erythrose, arabinose, lyxose, ribose, xylose, allose, altrose, galactose, glucose, growth, idose, mannose, talose and fructose. The natural stereoisomers of these sugars are the preferred form. Other preferred sugars are disaccharides consisting of the above-mentioned monosaccharides. Again, the natural stereoisomers of these sugars are the preferred form.
[0022]
In a preferred embodiment, the (iso) flavone parent is the primary alcohol group of the sugar (eg, the C₆OH) to the sugar. In another preferred embodiment, ZOX is a naringin skeleton represented by the following formula (III):
Embedded image

[0023]
Other preferred flavones / flavonoids (X or X-O-Z) in general formula (I) are aspalatin, orientin (lutexin), cis orientin (rutonaletin), isoquercetin, naringin, rutin, camphor oil and quercetin. is there.
[0024]
Preferred compounds of the general formula (I) are, in particular, naringin wherein XOZ is of the formula (III);₂Has the following acids: p-chlorophenylacetic acid, hydrocinnamic acid, stearic acid, 12-hydroxystearic acid, palmitic acid, lauric acid, oleic acid, coumaric acid, capric acid, cinnamic acid, 4-phenylbutyric acid, 4-Hydroxyphenylacetic acid, 5-phenylvaleric acid or a compound representing the acyl group of a mixture commercially available as Edenor UKD6010 and UKD7505. Edenor UKD6010 and UKD7505, p-chlorophenylacetic acid and hydrocinnamic acid are particularly preferred acids. For all combinations of naringin and fatty acids mentioned above, it is particularly preferred that n = 1 or n = 2 and at the same time m = 0. When n = 1 (and m = 0), A₂Is a primary OH group of the sugar in formula (III). However, all secondary OH groups of the sugar also represent a preferred embodiment for esterification. When n = 2 (and m = 0), preferably one esterification occurs at the first OH group of the sugar and a second esterification occurs at one of the second OH groups of the sugar, more specifically. Occurs at one of the two second OH groups on the same six-membered ring, or at one of the three second OH groups on the second six-membered ring.
[0025]
Other preferred compounds of general formula (I) are those wherein XOZ is naringin;₂But the following acids: p-chlorophenylacetic acid, hydrocinnamic acid, stearic acid, 12-hydroxystearic acid, palmitic acid, lauric acid, oleic acid, coumaric acid, capric acid, cinnamic acid, 4-phenylbutyric acid, 4-phenylbutyric acid Represents an acyl group of hydroxyphenylacetic acid, 5-phenylvaleric acid or a mixture commercially available as Edenor UKD6010 and UKD7505; compounds where n = 1 or n = 2 and at the same time m = 1. When both n and m are 1, A₂Is a primary OH group of the sugar,₁Is preferably either a 5-OH group on the benzopyran ring or a 4'-hydroxy group on the phenyl ring. However, as when m = 0, A₂Can also be esterified via all secondary OH groups of the sugar. When n = 2 and at the same time m = 1, A₂Esterification occurs at the primary OH group of the sugar, and a second esterification occurs at one of the secondary OH groups of the sugar, more specifically, of the two secondary OH groups of the same six-membered ring. Occurs at one or at one of the three secondary OH groups of the second six-membered ring,₁Esterification occurs via a benzopyran or phenyl ring.
[0026]
It has surprisingly been found that compounds of general formula (I) can be obtained by mild lipase-catalyzed esterification.
[0027]
Accordingly, the present invention also relates to a process for preparing a compound of formula (I) according to the present invention. The process of the present invention comprises the steps of converting an acetal (derived from a sugar and a flavone / isoflavone parent) into a polyunsaturated fatty acid (at least 4 separate double bonds or at least 2 Esterified or transesterified with a conjugated linoleic acid (octadecadienoic acid), with an arylaliphatic carboxylic acid, with an ester of these carboxylic acids, or with an activated fatty acid derivative. It is characterized by the following. Esterification at the primary OH group of the sugar is preferred, but secondary alcohol groups of the sugar can also be esterified.
[0028]
Suitable enzymatic catalysts for the esterification of the acid and hydroxyl-containing acetal components described above include hydrolases, especially lipases (ester hydrolases), such as Candida rugosa (formerly Candida cylindracea), Candida antarctica, Geotrichum gandigil, Geotrichum gandigil, Geotrichum gandigil lipases from Roqueforti, Rhizopus arrhizus and Mucor miehei.
[0029]
A preferred lipase is the lipase from Candida antarctica (isoenzyme B) for two reasons. First, it exhibits a particularly high selectivity in the esterification of acetal with unsaturated fatty acids (although these are not included in their normal substrates). Secondly, because it lacks a key lipase structural feature, namely a mobile peptide chain at the active center (the so-called lid), any surface activation (classification of hydrolases within the lipase family) is required. Important feature for the purpose).
[0030]
In the preparation of the compounds of the present invention by conventional chemical synthesis methods, the presence of some free hydroxyl groups of the sugar and / or flavone / isoflavone parent material results in the formation of a mixture of mono- and polyunsaturated products. Are common, protecting groups must be introduced and removed when attempting to selectively synthesize certain compounds.
[0031]
However, selective esterification is important for the bioavailability and compatibility of the materials of the present invention. Chemical synthesis leads to a mixture of crude products due to poor regioselectivity. Therefore, a gentle and regioselective synthesis with the enzymes described herein (see Examples) is advantageous. According to the invention, regiospecific means that only certain OH groups of the polyol are esterified. Thus, regioselective means that certain OH groups of the polyol are esterified preferentially rather than exclusively.
[0032]
When a compound of formula (I) of the present invention has been prepared by a method of the present invention, usually another step must be followed to purify the desired compound. That is, another object of the present invention was to provide a method for purifying the compound represented by the formula (I). This method is characterized by a water-based two-phase extraction method using an organic solvent, which can selectively separate a target compound from unreacted fatty acids. This organic solvent is preferably n-hexane, cyclohexane, THF, diethyl ether. Alternatively, purification can be carried out by silica gel chromatography, preferably using an ethyl acetate / methanol or dichloromethane / methanol mixture with a small amount of acetic acid and / or water, which is converted to a water-based 2 In addition to the phase extraction method, it can also be performed.
[0033]
The flavone / isoflavone glycosides of the formula (I) according to the invention have good bioavailability and activity, so that they can be used in cosmetic and pharmaceutical preparations and / or as food additives. And with the consequence of greatly improving the quality of these products.
[0034]
The compound represented by the formula (I) of the present invention has an inhibitory action on skin protease (anti-aging, anti-wrinkle formation), antioxidant ability, skin whitening action and transcription inhibitory action. Particularly surprising is the skin lightening effect of these compounds (due to tyrosinase inhibition), in particular, where ZOX is naringin and the primary OH group is phenylpropionic acid, hydroxyphenylacetic acid or p-chlorophenylacetic acid. A good skin lightening effect of the esterified compounds of the invention.
[0035]
Further, the compound represented by the formula (I) of the present invention, particularly, ZOX is naringin, and its primary OH group is esterified with phenylpropionic acid, hydroxyphenylacetic acid or p-chlorophenylacetic acid. Compounds include MMP-1, TIMP and Colα₁It has also been found that it is possible to influence the onset of sun light induction in a cosmetically desirable way and thus to counteract collagen loss in the skin. Therefore, these compounds are very suitable for cosmetically treating the skin to prevent sun-induced aging of the skin and / or to reduce the consequences.
[0036]
Collagen production is particularly affected by the degree of expression of MMPs and TIMPs. To analyze the factors involved in the process of congestion of sun-exposed skin cells, the following methods are possible:
[Table 1]

[0037]
The production of mRNA is the first and thus the most important step in protein synthesis. Thus, active ingredients that have an effect on mRNA production automatically have an effect on the amount of protein and enzymatic activity. In a subsequent step, the result of the effect on mRNA production can be measured by detecting protein collagen in the skin model itself.
[0038]
According to the present invention, the naringin derivative of the present invention reduces the expression of MMP, increases the expression of TIMP,₁Could be increased and collagen production could be increased.
[0039]
In "photoaged" skin, MMP-1 is produced mainly by fibroblasts, but the response of the skin to stress cannot be considered as the response of individual isolated skin cells. Instead, each cell is tied to a complex transmission network. This network is responsible for the exchange of information between immediately adjacent cells and between localized cells located further away from each other (eg, cells of the epidermis and dermis). Signal molecules, such as interleukins, growth factors such as KGF, EGF, and FGF, are involved in the mechanism of transmission between skin cells. For this purpose, the analysis of the effect of the active substance was performed on a skin model consisting of skin and epidermal compartment.
[0040]
It has also been found that the compounds according to the invention are considerably less phototoxic than conventional active substances against photoaging of the skin.
[0041]
In addition, the compounds of the present invention are particularly easy to introduce into lipophilic base formulations and can be easily formulated as stable emulsions.
[0042]
The compounds of the formula (I) according to the invention are therefore used for the preparation of cosmetic and / or pharmaceutical preparations and / or food or animal feed. The compounds according to the invention can be present and used in pure substance form or as a mixture of plant extracts of various origins.
[0043]
(Iso) flavones and their glycosides are preferably used in preparations / additives as constituents of mixtures of substances obtained from plants (more specifically plant extracts). Such plant-based mixtures can be obtained in a known manner, for example, by pressing or extracting from plants such as citrus fruits (Rutaceae) or Acacias.
[0044]
The invention therefore furthermore relates to the use of a compound of formula (I) for the manufacture of a cosmetic and / or pharmaceutical preparation; the use of said compound as a food supplement or additive in food preparations and animal feeds And cosmetic and pharmaceutical preparations and food / food preparations and animal feeds containing the compounds of formula (I).
[0045]
Cosmetic preparations obtained using the compounds (I) according to the invention, such as hair shampoos, hair lotions, foaming baths, shower baths, creams, gels, lotions, alcoholic water / alcohol solutions, emulsions, wax / fatty compounds, Stick preparations, powders or ointments may also be used as mild surfactants, oil ingredients, emulsifiers, superfatting agents, pearlizing waxes, consistency factors, thickeners, polymers, silicone compounds, fats, waxes, stabilizers , Agents of biological origin, deodorants, anti-dandruff agents, film-forming agents, swelling agents, UV protection factors, antioxidants, hydrotropes, preservatives, insect repellents, self-browning agents, solubilizers, aromatic oils, Dyes, microbial inhibitors and the like can be included as auxiliaries and additives.
[0046]
The amount of the compounds of the invention used in cosmetic (or pharmaceutical) preparations is usually in the range from 0.01 to 5% by weight, preferably from 0.1 to 1% by weight, based on the total weight of the preparation. Is within the range.
[0047]
For the preparation of pharmaceutical or cosmetic preparations, the compounds of the general formula (I) according to the invention, optionally in combination with other active substances, can be combined with customary galenic preparations, for example tablets, dragees, capsules, One or more conventional inert carriers and / or diluents, such as corn starch, lactose, corn sugar, microcrystalline cellulose, magnesium stearate, in powders, suspensions, drops, ampoules, solutions or suppositories; Incorporation with polyvinylpyrrolidone, citric acid, tartaric acid, water, water / ethanol, water / glycerol, water / sorbitol, water / polyethylene glycol, propylene glycol, carboxymethylcellulose or fat-containing substances, such as hard fats or suitable mixtures thereof. Can be.
[0048]
The daily dose required to achieve the corresponding effect in pharmaceutical applications is preferably between 0.1 and 10 mg / kg body weight, more particularly between 0.5 and 2 mg / kg body weight.
[0049]
The food supplements and additives (eg sports drinks) obtained using the compounds of the formula (I) according to the invention are usually 0.1 to 10 mg per 1 to 5 liters / day of liquid intake. It is suitable to contain a compound of formula (I) in an amount which leads to a dose of these compounds of from 0.5 to 5 mg / kg of body weight, preferably 0.5 to 5 mg / kg of body weight. One example of the use of the compounds of formula (I) in the food industry is the use of these compounds as colorants and / or seasonings.
[0050]
(Example)
Example 1: Production of 6-O-cis-9, trans-11-octadecadienoylnaringin
D-(-)-naringin (2 g), CLA (Edenor UKD6010) (5 g), molecular sieve (12 g), t-butanol (15 ml) and immobilized lipase B from Candida antarctica (10 g) were added to 250 ml of Erlen. Incubate for 40 hours in a Meyer flask at 60 ° C. with stirring (magnetic stirrer, 100 rpm). The reaction was performed using thin layer chromatography [silica gel KG60 plate with fluorescent indicator; mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v; visualization: UV detection and acetic acid / sulfuric acid / anisaldehyde (100: 2: 1 v / v). v / v) with immersion reagent]. The product was extracted with n-hexane (20 ml) and purified by column chromatography (silica gel F60; mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v). R_fValue: 0.47 (ethyl acetate / methanol 10: 1).
[0051]
Example 2: Preparation of 6-O-Naringin- (3-phenylpropionic acid) -ester
Naringin (5.8 g), 3-phenylpropionic acid (1.5 g), molecular sieves (3.7 g), t-butanol (15 ml) and immobilized lipase B from Candida antarctica (11 g) were placed in a 250 ml flask. , 60 ° C./100 rpm for 24 hours. This reaction was performed by thin layer chromatography (silica gel 60F).₂₅₄Mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v; visualized by UV detection). At the end of the reaction, the conversion based on naringin was 20%. The product was extracted with n-hexane (20 ml) and purified by column chromatography (silica gel F60; mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v). R_fValue: 0.16 (ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v). Yield: 0.85 g.
This column chromatography separation was not optimized. In addition to the fraction containing the pure product, a mixed fraction containing unreacted naringin was obtained. Only fractions from column chromatography containing only the desired product were used to determine the indicated yield.
[0052]
Example 3: Preparation of 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester
Naringin (5.8 g), p-chlorophenylacetic acid (1.7 g), molecular sieve (3.8 g), t-butanol (15 ml) and immobilized lipase B from Candida antarctica (11 g) were placed in a 250 ml flask. Incubated for 24 hours at 60 ° C./100 rpm. This reaction was performed by thin layer chromatography (silica gel 60F).₂₅₄Mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v; visualized by UV detection). At the end of the reaction, the conversion based on naringin was 20%. The product was extracted with n-hexane (20 ml) and purified by column chromatography (silica gel F60; mobile solvent: ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v). R_fValue: 0.20 (ethyl acetate / methanol 10: 1 v / v). Yield: 0.50 g.
This column chromatography separation was not optimized. In addition to the fraction containing the pure product, a mixed fraction containing unreacted naringin was obtained. Only fractions from column chromatography containing only the desired product were used to determine the indicated yield.
[0053]
Example 4: Production of other naringin derivatives
The naringin derivative was prepared as in Example 1 (reaction with Novozym SP435 at 65 ° C. for 48 hours, stirring speed 1200 rpm). The reaction was monitored by thin layer chromatography and the conversion (based on the naringin used) was determined.
[Table 2]

[0054]
Example 5: Inhibition of tyrosinase activity
Tyrosinase physiologically catalyzes an important step in the synthesis of melanin (from L-dopa to L-dopaquinone, which is further cyclized and re-reacted by tyrosinase to dopachromium). Therefore, inhibition of tyrosinase can lead to skin whitening action.
[0055]
The activity of fungal tyrosinase (Sigma) was measured by the enzymatic reaction of L-dopa to dopachromium in the presence of various concentrations of the active substance of the invention. The absorption maximum of dopachromium (red-brown) is at λ = 475 nm. The linear increase in dopachromium absorption (A) per unit time (t) is a measure of tyrosinase activity (ΔA / Δt). Tyrosinase activity in the absence of active substance (ΔA₁/ Δt₁) Was used as reference (100%). Under similar conditions, the residual tyrosinase activity was measured in the presence of the active substance (ΔA₂/ Δt₂). Each measurement was performed twice in parallel. The variability of the results of this method is about ± 10%.
[0056]
Chemical substances used:
L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-dopa) (Sigma)
KH₂PO₄ (JT Baker)
Tyrosinase, 50,000 units (Sigma)
KOH
[0057]
Required solution:
50 mM KH in double distilled water₂PO₄Buffer solution (adjusted to pH 6.5 with 1M KOH aqueous solution)
2.5 mM L-dopa in double distilled water
Cold KH₂PO₄340 U / ml tyrosinase stock solution in buffer (pH 6.5)
In the stock solution of the active substance to be tested (in double distilled water or ethanol), the concentration of the active substance is 10 times higher than the concentration indicated in the column "Active substance concentration in test system" in "Results". Was.
[0058]
Reaction cocktail:
10ml KH₂PO₄Buffer
10ml L-Dopa
9ml double distilled water
As with the tyrosinase stock solution, the reaction cocktail was prepared just before the start of the test. The tyrosinase stock solution must be kept in the refrigerator. The L-dopa solution should be stored in a tightly closed container in the absence of oxygen, in the dark. When the color turns gray (oxidation by atmospheric oxygen), a fresh solution must be prepared.
[0059]
Test system ( Sample volume 1ml ) And reaction method:
33 μl tyrosinase stock solution
100 μl active substance storage solution
Reaction cocktail up to 1000 μl
The activity of tyrosinase in the absence of active substance was used as reference (100%). All samples were mixed well in Vibrofix before the start of the measurement. The pH value was monitored and, if necessary, adjusted to pH 6.5. The measurement was performed using a Kontron Uvikon 860 photometer. The absorption of dopachromium was detected at 25 ° C. for 5 minutes at an absorption maximum λ = 475 nm. The measurement time was 20 to 30 seconds.
[0060]
result:
[Table 3]

[0061]
Example 6: Phototoxicity
Human skin dermal fibroblasts were incubated with increasing concentrations of retinol (Table 4), 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester (Table 5) and 6-O-naringin- (3-phenylpropion). (Acid) -ester (Table 6). The phototoxicity of the substance was determined by the MTT test. To test for phototoxicity, treated cells were treated with 10 J UV-A / cm²Exposure to simulated sunlight corresponding to the dose of Untreated cells had a vitality of 100% and all other values were related to that value.
[0062]
The cells were exposed using a sun simulator. From the emission spectrum, the UV-A component was measured for quantification. The advantage of this experimental design is that it uses the full spectrum of sunlight and is therefore excellent for simulating everyday situations. In contrast, many other laboratories use pure UV-A and / or UV-B lamps.
[0063]
[Table 4]

[0064]
[Table 5]

[0065]
[Table 6]

[0066]
These results show that, compared to retinol, 6-O-naringin- (3-phenylpropionic acid) -ester and 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester were present at relatively high concentrations. Only shows toxic effects. Retinol is toxic at very low concentrations. The loss of vitality by a power of ten demonstrates strong phototoxicity of retinol.
[0067]
Example 7: MMP-1-, TIMP- and Colα₁-Effect of mRNA on light-induced expression
MMP-1, TIMP and Colα₁The effect of 6-O-naringin- (3-phenylpropionic acid) -ester (Table 7) and 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester (Table 8) on the light-induced expression of Measured at concentrations below phototoxicity. To this end, the mRNA levels were determined using MMP1, TIMP and Colα.₁Was quantified. The skin model was treated with the test substance for 12 hours, then 10 J UV-A / cm²Exposure to simulated sunlight corresponding to the dose of After an additional 48 hours in the presence of the active substance, cellular RNA was prepared and analyzed by Northern blot using specific gene probes. Northern blots were performed with 18S-specific gene probes to monitor the amount of RNA used in the experiments. To quantify the signal intensity, the autoradiogram was evaluated by the concentration method, and MMP1, TIMP and Colα₁Signal values were related to the 18S signal related values. The numbers in the table represent the densitometric quantification of the Northern blot signal after normalization. MMP1, TIMP and Colα of untreated cells₁Was taken as 100% and all other values were related to that value.
[0068]
[Table 7]

[0069]
[Table 8]

[0070]
Exposure of the skin model to simulated sunlight led to a strong induction of MMP1-mRNA synthesis, while collagen synthesis was down-regulated. TIMP production remained largely unaffected. Table 7 shows that 50 ppm of 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester very efficiently reduces sunlight-induced expression of MMP-1. TIMP expression is only slightly affected, and Colα₁Expression was greatly increased relative to exposed untreated samples. Treatment of cells with 100 ppm of 6-O-naringine- (3-phenylpropionic acid) -ester reduced sunlight-induced expression of MMP-1 to the level of unexposed untreated samples (Table 8). In contrast, TIMP expression increased by about 35%. Colα₁Expression increased to the level of unexposed, untreated cultures.
[0071]
MMP, TIMP and Colα in cultures of exposed fibroblasts after treatment with 50 and 100 ppm of the test naringin derivative₁Are shown in Table 9 in comparison to exposed untreated cultures.
[Table 9]

[0072]
The concentrations shown in Table 9 led to a clear inhibition of MMP expression for both naringin derivatives, with Colα₁Leads to increased production. 6-O-naringin- (3-phenylpropionic acid) -ester significantly increased TIMP production, while 6-O-naringin- (p-Cl-phenylacetic acid) -ester had little effect. I didn't.
[0073]
Example 8: Effect on collagen production
To demonstrate increased collagen production at the protein level, fibroblasts were treated with test substances for 5 days in a three-dimensional culture system. On day 6, the amount of collagen produced was measured by the introduction of titrated protein compared to non-collagenous protein. Table 10 shows the percentage increase (%) of the collagen component in the total protein (measured from untreated cultures versus treated fibroblast cultures).
[Table 10]

Claims (17)

Flavones and isoflavone glycoside derivatives represented by the following general formula (I):

［In the formula, [XOZ] represents a flavone or isoflavone glycoside structure,
X represents the following formula (IIa) or (IIb):

Wherein the (iso) flavone parent material has been substituted one or more times and / or has been reduced (hydrogenated) once or multiple times. ,
Z (sugar) represents a monosaccharide, disaccharide or polysaccharide which is acetal-linked to X and which is ester-substituted n times by A ₂
[A ₁ -C (＝ O)] is an acyl group in a flavone or isoflavone parent substance,
A ₁ and A ₂ are independently of each other, at least four separate and / or at least two conjugated double bonds containing polyunsaturated C _{15 -} between ₂₅ alkenyl group or an ester group and an aromatic ring, 1 Represents an aryl aliphatic group containing ~ 4 methylene groups,
[C (＝ O) A ₂ ] is an acyl group in the sugar Z,
n is an integer other than 0 (1, 2, 3, ...);
m is an integer including 0 (1, 2, 3,...), and R1, R2 and R3 are a hydroxyl group or a hydrogen atom. Z is a monosaccharide, more specifically rhamnose, threose, erythrose, arabinose, lyxose, ribose, xylose, allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose, mannose, in the form of a natural stereoisomer, 2. The derivative according to claim 1, characterized in that it is talose and fructose or a disaccharide, more specifically a disaccharide consisting of the above monosaccharide. (I) The parent substance of the (iso) flavone glycoside X-O-Z in the general formula (I) is aspalatin, orientin (lutexin), cis orientin (rutonaletin), isoquercetin, naringin or rutin. Item 3. The derivative according to Item 1 or 2. The (iso) flavone glycoside parent substance XOZ is represented by the formula (III):

The derivative according to any one of claims 1 to 3, wherein the derivative is naringin. X—O—Z is naringin of formula (III);
A ₂ is the following acids: p-chlorophenyl acetic acid, hydrocinnamic acid, stearic acid, 12-hydroxystearic acid, palmitic acid, lauric acid, oleic acid, coumaric acid, capric acid, cinnamic acid, 4-phenylbutyric acid, Represents an acyl group of 4-hydroxyphenylacetic acid, 5-phenylvaleric acid or any of the mixtures marketed as Edenor UKD6010 and UKD7505;
n is 1 or 2, while m is 0;
The derivative according to any one of claims 1 to 4, characterized in that: n is 1, m is 0, derivative according to claim 5, characterized in that A ₂ is attached to the primary OH group of the sugar in the formula (III). X—O—Z is naringin of formula (III);
A ₂ is the following acids: p-chlorophenyl acetic acid, hydrocinnamic acid, stearic acid, 12-hydroxystearic acid, palmitic acid, lauric acid, oleic acid, coumaric acid, capric acid, cinnamic acid, 4-phenylbutyric acid, Represents an acyl group of 4-hydroxyphenylacetic acid, 5-phenylvaleric acid or any of the mixtures marketed as Edenor UKD6010 and UKD7505;
n is 1 or 2, while m is 1;
The derivative according to any one of claims 1 to 4, characterized in that: n and m are 1, A ₂ is bonded to the primary OH group of the sugar in formula (III), and A ₁ is either a 5-OH group of a benzopyran ring or a 4′-hydroxy group of a phenyl ring. The derivative according to claim 7, wherein the derivative is bonded to crab. n is 2, m is 1, one A ₂ is attached to the first OH group of the sugar in formula (III), and the second A ₂ is one of the second OH groups of the sugar More specifically, attached to one of the two secondary OH groups of the same six-membered ring or to one of the three secondary OH groups of the second six-membered ring; ₁ derivative according to claim 8, characterized in that attached to either 5-OH group or the phenyl ring hydroxy group of the benzopyran ring. 10. The method for producing a derivative represented by the formula (I) according to any one of claims 1 to 9, wherein the parent substance of the sugar and the (iso) flavone is a pure substance. Or as an admixture of plant extracts of various origins] by converting at least four separate double bonds or at least two conjugates in the presence of one or more enzymes as catalysts Or transesterification with a polyunsaturated fatty acid containing a modified double bond, with an arylaliphatic carboxylic acid, with an ester of these carboxylic acids, or with an activated fatty acid derivative. The method according to claim 10, wherein the polyunsaturated fatty acid is conjugated linoleic acid (octadecadienoic acid). The method according to claim 10 or 11, wherein the enzyme is one or more hydrolases. Hydrolase, Candida rugosa (formerly Candida cylindracea), Candida antarctica, Geotrichum candidum, Aspergillus niger, Penicillium roqueforti, lipase from Rhizopus arrhizus and Mucor miehe, and more specifically is a lipase (isoenzyme B) from Candida antarctica The method of claim 12, wherein: The esterification reaction is followed by a step for purifying the compound of formula (I), which is a water-based two-phase extraction method using an organic solvent such as n-hexane, cyclohexane, THF or diethyl ether, or 14. A process according to any of claims 10 to 13, characterized in that it is either a silica gel chromatography method, preferably using an ethyl acetate / methanol or dichloromethane / methanol mixture with small amounts of acetic acid and / or water. A cosmetic or pharmaceutical composition or a food or animal feed composition comprising at least one of the derivatives according to claim 1. Use of a derivative according to any of claims 1 to 9 for the cosmetic treatment of sun-induced aging of human skin. Use of the derivative according to any of claims 1 to 9 for cosmetic lightening of human skin.