JP2008074710A

JP2008074710A - New substance a-97065s

Info

Publication number: JP2008074710A
Application number: JP2006252237A
Authority: JP
Inventors: Yoko Fujita; 陽子藤田; Masaaki Kitsuka; 正明木塚; Akira Murakami; 亮村上
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 2006-09-19
Filing date: 2006-09-19
Publication date: 2008-04-03

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a compound having an excellent antibacterial activity without crossed resistance to a conventional type drug. <P>SOLUTION: The compound, etc., are represented by general formula (I) [wherein, X represents a hydroxy group or a phosphate group; R represents -(CH<SB>2</SB>)<SB>8</SB>CH(CH<SB>3</SB>)<SB>2</SB>or -(CH<SB>2</SB>)<SB>10</SB>CH(CH<SB>3</SB>)<SB>2</SB>when X is the hydroxy group; and R represents -(CH<SB>2</SB>)<SB>10</SB>CH(CH<SB>3</SB>)<SB>2</SB>when X is the phosphate group]. <P>COPYRIGHT: (C)2008,JPO&INPIT

Description

本発明は、優れたトランスロケースＩ阻害活性を有する新規化合物、該化合物を有効成分として含有する医薬（特に、抗菌剤）、該化合物の製造方法、及び該化合物を生産する新規微生物に関する。 The present invention relates to a novel compound having an excellent translocase I inhibitory activity, a pharmaceutical (particularly an antibacterial agent) containing the compound as an active ingredient, a method for producing the compound, and a novel microorganism producing the compound.

従来、細菌感染症の予防及び治療には各種ベータラクタム抗生物質、アミノ配糖体、マクロライド、グリコペプチド、キノロンなどが使われてきたが、最近これらの抗生物質に耐性を示す感染菌が増加しており、従来のタイプとは異なる抗生物質が渇望されている。 Conventionally, various beta-lactam antibiotics, aminoglycosides, macrolides, glycopeptides, quinolones, etc. have been used for the prevention and treatment of bacterial infections, but recently, the number of infectious bacteria resistant to these antibiotics has increased. And antibiotics different from the conventional type are craved.

細菌細胞壁構成成分である、ペプチドグリカン生合成に関与するトランスロケースＩは、細菌の生育には必須の酵素である。近年、トランスロケースＩ阻害活性に基づき、マイコバクテリウム属の細菌に対して抗菌活性を示す化合物として、リポシドマイシン（ｌｉｐｏｓｉｄｏｍｙｃｉｎ）類、カプラザマシン（ｃａｐｒａｚａｍｙｃｉｎ）類、ムラミノミシン（ｍｕｒａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）類等が報告されている（例えば、特許文献１、特許文献２、非特許文献１及び非特許文献２参照）。これらはいずれも類似した母核構造を有する化合物であるが、本発明の化合物であるＡ‐９７０６５類物質と同一の母核構造を有する化合物は未だ報告されていない。
国際公開第ＷＯ０１／１２６４３号パンフレット国際公開第ＷＯ２００４／０４６３６８号パンフレットジャーナルオブアンチビオチクス，１９８５年，第３８巻，ｐ．１６１７−１６２１（J．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，１９８５，３８，ｐ．１６１７−１６２１）アグリカルチュラルアンドバイオロジカルケミストリー，１９８９年，第５３巻，ｐ．１８１１−１８１５（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，１９８９，５３，ｐ．１８１１−１８１５） Translocase I involved in peptidoglycan biosynthesis, which is a component of the bacterial cell wall, is an essential enzyme for bacterial growth. In recent years, as compounds showing antibacterial activity against bacteria of the genus Mycobacterium based on translocase I inhibitory activity, liposidemycins, caprazamycins, muraminomycins, etc. Have been reported (for example, see Patent Document 1, Patent Document 2, Non-Patent Document 1, and Non-Patent Document 2). These are all compounds having a similar mother nucleus structure, but no compound having the same mother nucleus structure as that of the A-97065 substance as the compound of the present invention has been reported yet.
International Publication Number WO 01/12463 Pamphlet International Publication No. WO 2004/046368 Pamphlet Journal of Antibiotics, 1985, 38, p. 1617-1621 (J. Antibiotics, 1985, 38, p. 1617-1621) Agricultural and Biological Chemistry, 1989, Vol. 53, p. 1811-1815 (Agric. Biol. Chem, 1989, 53, p. 1811-1815)

本発明者らは、抗菌活性を有する新規化合物を見出すべく鋭意探索研究を行った結果、ストレプトマイセス属に属する微生物の培養物中に新規化合物を見出し、これらの化合物がトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性を有し、従来のタイプの薬剤とは交差耐性がなく、かつ、従来知られていた化合物と比べて優れた酵素阻害活性を有することを見出すと共に、該化合物を生産する新規微生物及び該微生物を用いた該化合物の製造方法を確立し、本発明を完成した。
As a result of earnest search research to find new compounds having antibacterial activity, the present inventors have found new compounds in the culture of microorganisms belonging to the genus Streptomyces, and these compounds have translocase I inhibitory activity. A novel microorganism that has antibacterial activity based on the above, has no cross-resistance with conventional types of drugs, has superior enzyme inhibitory activity as compared with conventionally known compounds, and produces the compound And the manufacturing method of this compound using this microorganism was established, and this invention was completed.

本発明は、下記（１）乃至（３）のいずれかで示される新規化合物に関する。
（１）下記、一般式(Ｉ)： The present invention relates to a novel compound represented by any one of (1) to (3) below.
(1) The following general formula (I):

（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｘが水酸基である場合、Ｒは−（ＣＨ_２）_８ＣＨ（ＣＨ_３）_２]又は −（ＣＨ_２）_１０ＣＨ（ＣＨ_３）_２を表し、Ｘがリン酸基である場合Ｒは−（ＣＨ_２）_１０ＣＨ（ＣＨ_３）_２を表す］
で表される化合物又はその塩。
（２）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ_４３Ｈ_６９Ｎ_５Ｏ_１８
４）分子量：９４３（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ＋Ｈ]^＋は次に示す通りである。
実測値：９４４．４６７１
計算値：９４４．４７１６
６）紫外部吸収スペクトル：
ジメチルスルホキシド中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６３ｎｍ（ε８３００)
７）旋光度：
ジメチルスルホキシド中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]_Ｄ ^２９：＋１．５°（ｃ０．４)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３８８，２９５４，２９２６，２８５５，１７３６，１６９９，１６３２，１４６６，１３９３，１２６９，１１２２，１０６８，１０１５ｃｍ^−１
９）^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７４（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０−１．２（１４Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），２．０−２．３（５Ｈ，ｍ），２．３３（３Ｈ，ｓ），２．５（２Ｈ，ｍ），２．９５（１Ｈ，ｍ），２．９７（３Ｈ，ｓ），３．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，３．７Ｈｚ），３．１２(１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．４），３．２９（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．６５（１Ｈ，ｄ，４．７Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄ，J＝８．７Ｈｚ），３．９３（１Ｈ，ｄｄ，５．４，７．４Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｍ)，４．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，７．４Ｈｚ），４．０７（２Ｈ，ｍ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，８．７Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｍ），５．１３（１Ｈ，ｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．１（ｑ），２３．１（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．６（ｔ），２８．７（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６（ｔ），３０．７（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３７．８（ｑ），３９．０（ｑ），４０．２（ｔ)，４０．４（ｔ)，４１．６（ｔ)，４１．６（ｔ），４１．８（ｔ）５８．２（ｔ)，５８．７（ｑ)，６４．１(ｄ)，６７．７（ｄ)，７０．７（ｄ)，７１．６（ｄ），７１．９（ｄ)，７３．７（ｄ)，７４．９（ｄ)，７９．２（ｄ)，８０．５（ｄ)，８４．９（ｄ)，８５．７（ｄ)，９２．８（ｄ)，１０２．３（ｄ)，１０９．１（ｄ)，１４３．４（ｄ)，１５２．０（ｓ)，１６６．３（ｓ)，１７１．０（ｓ)，１７２．８（ｓ)，１７３．０（ｓ)，１７３．８（ｓ)，１７６．４（ｓ）ｐｐｍ。
（３）下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩。
１）物質の性状：無色粉末状物質
２）溶解性：メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶、クロロホルムに不溶
３）分子式：Ｃ_４５Ｈ_７４Ｎ_５Ｏ_２１Ｐ
４）分子量：１０５１（ＦＡＢマススペクトル法により測定)
５）高分解能ＦＡＢマススペクトル法により測定した精密質量、[Ｍ−Ｈ]^―は次に示す通りである。
実測値：１０５０．４５５０
計算値：１０５０．４５３６
６）紫外部吸収スペクトル：
メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、次に示す極大吸収を示す：
２６２ｎｍ（ε７９００)
７）旋光度：
メタノール中で測定した旋光度は、以下に示す値を示す：
[α]_Ｄ ^２９：＋７．０°（ｃ０．８)
８）赤外吸収スペクトル：
臭化カリウム（ＫＢｒ）錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは以下に示す極大吸収を示す。
３３９７，２９２６，２８５４，１７３５，１７００，１４６６，１３８５，１２６８，１１２９，１０７４，９３８ｃｍ^−１
９）^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４．７８ｐｐｍ）を用いて測定した、^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
０．７９（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０９（２Ｈ，ｍ），１．２−１．３（１６Ｈ，ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．５５（２Ｈ，ｍ），２．１（２Ｈ，ｍ），２．２−２．３（３Ｈ，ｍ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．５５（２Ｈ，ｍ），３．０２（３Ｈ，ｓ），３．０（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），３．２（２Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ)，３．４０（１Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ)，３．９７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．９，６．６Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｍ)，４．１７（２Ｈ，ｍ)，４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．４Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｍ)，５．１４（１Ｈ，ｍ)，５．１５（１Ｈ，ｍ），５．４４（１Ｈ，ｍ)，５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ)，５．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ)，７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ）ｐｐｍ
１０）^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：
重メタノール中、内部標準に重メタノール（４９．０ｐｐｍ）を用いて測定した、^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは、以下に示すとおりである。
２０．２（ｑ），２３．１（ｑ），２６．３（ｔ），２８．５（ｔ），２８．９（ｄ），２９．２（ｄ），３０．４（ｔ），３０．６(ｔ)，３０．７（ｔ），３０．７（ｔ），３０．８（ｔ），３１．０（ｔ），３５．１（ｔ），３８．０（ｑ），３９．０（ｑ），４０．３（ｔ），４０．４（ｔ），４１．４（ｔ），４１．７（ｔ），４２．３（ｔ），５８．４（ｔ），５９．１（ｑ），６４．０(ｄ），６８．２（ｄ），７０．８（ｄ），７１．９（ｄ），７４．１（ｄ），７４．４（ｄ），７５．１（ｄ），７８．９（ｄ），７９．２（ｄ），８４．９（ｄ），８５．３（ｄ），９２．０（ｄ），１０２．７（ｄ），１０９．１（ｄ），１４３．０（ｄ），１５２．１（ｓ），１６６．３（ｓ），１７１．０（ｓ），１７３．０（ｓ），１７３．８（ｓ），１７７．１（ｓ）ｐｐｍ。 (I)
[Wherein, X represents a hydroxyl group or a phosphate group, and when X is a hydroxyl group, R represents — (CH ₂ ) ₈ CH (CH ₃ ) ₂ ] or — (CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ And when X is a phosphate group, R represents — (CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ ]
Or a salt thereof.
(2) A compound or salt thereof having the following physicochemical properties.
1) Material properties: colorless powdery material 2) Solubility: soluble in methanol, dimethyl sulfoxide, insoluble in chloroform 3) Molecular formula: C ₄₃ H ₆₉ N ₅ O ₁₈
4) Molecular weight: 943 (measured by FAB mass spectrum method)
5) The accurate mass [M + H] ⁺ measured by the high resolution FAB mass spectrum method is as follows.
Actual value: 944.4671
Calculated value: 944.4716
6) Ultraviolet absorption spectrum:
The ultraviolet absorption spectrum measured in dimethyl sulfoxide shows the following maximum absorption:
263 nm (ε8300)
7) Optical rotation:
The optical rotation measured in dimethyl sulfoxide shows the following values:
[α] _D ²⁹ : + 1.5 ° (c0.4)
8) Infrared absorption spectrum:
The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide (KBr) tablet method shows the maximum absorption shown below.
3388, 2954, 2926, 2855, 1736, 1699, 1632, 1466, 1393, 1269, 1122, 1068, 1015 cm ⁻¹
9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (4.78 ppm) as an internal standard is as follows.
0.74 (6H, d, J = 6.7 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.0-1.2 (14H, m), 1.37 (1H, m ), 1.49 (2H, m), 2.0-2.3 (5H, m), 2.33 (3H, s), 2.5 (2H, m), 2.95 (1H, m) 2.97 (3H, s), 3.02 (1H, dd, J = 2.0, 3.7 Hz), 3.12 (1H, dd, J = 3.7, 13.4), 3. 29 (1 H, m), 3.30 (3 H, s), 3.65 (1 H, d, 4.7 Hz), 3.78 (1 H, d, J = 8.7 Hz), 3.93 (1 H, dd, 5.4, 7.4 Hz), 3.97 (1 H, m), 4.05 (1 H, dd, J = 3.3, 7.4 Hz), 4.07 (2 H, m), 4. 18 (1H, d, J = 4.7 Hz), 4.27 (1H, dd, = 3.3, 8.7 Hz), 5.11 (1 H, m), 5.13 (1 H, s), 5.37 (1 H, m), 5.50 (1 H, d, J = 2.7 Hz) ), 5.59 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.68 (1H, d, J = 8.0 Hz) ppm
10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (49.0 ppm) as an internal standard is as shown below.
20.1 (q), 23.1 (q), 23.1 (q), 26.3 (t), 28.6 (t), 28.7 (d), 29.2 (d), 30 .4 (t), 30.6 (t), 30.7 (t), 31.0 (t), 35.1 (t), 37.8 (q), 39.0 (q), 40. 2 (t), 40.4 (t), 41.6 (t), 41.6 (t), 41.8 (t) 58.2 (t), 58.7 (q), 64.1 ( d), 67.7 (d), 70.7 (d), 71.6 (d), 71.9 (d), 73.7 (d), 74.9 (d), 79.2 (d ), 80.5 (d), 84.9 (d), 85.7 (d), 92.8 (d), 102.3 (d), 109.1 (d), 143.4 (d) , 152.0 (s), 166.3 (s), 171.0 (s), 172.8 (s), 173.0 (s), 173.8 (s), 176.4 ( ) Ppm.
(3) A compound or salt thereof having the following physicochemical properties.
1) Substance properties: colorless powdery substance 2) Solubility: soluble in methanol and dimethyl sulfoxide, insoluble in chloroform 3) Molecular formula: C ₄₅ H ₇₄ N ₅ O ₂₁ P
4) Molecular weight: 1051 (measured by FAB mass spectrum method)
5) The exact mass [M−H] ⁻ measured by the high resolution FAB mass spectrum method is as follows.
Actual value: 1050.4550
Calculated value: 1050.4536
6) Ultraviolet absorption spectrum:
The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol shows the following maximum absorption:
262 nm (ε7900)
7) Optical rotation:
The optical rotation measured in methanol shows the following values:
[α] _D ²⁹ : + 7.0 ° (c0.8)
8) Infrared absorption spectrum:
The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide (KBr) tablet method shows the maximum absorption shown below.
3397, 2926, 2854, 1735, 1700, 1466, 1385, 1268, 1129, 1074, 938 cm ⁻¹
9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (4.78 ppm) as an internal standard is as follows.
0.79 (6H, d, J = 6.6 Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.09 (2H, m), 1.2-1.3 (16H, m ), 1.43 (1H, m), 1.55 (2H, m), 2.1 (2H, m), 2.2-2.3 (3H, m), 2.38 (3H, s) 2.55 (2H, m), 3.02 (3H, s), 3.0 (1H, br.m), 3.2 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3. 40 (1H, m), 3.82 (1H, d, J = 4.4 Hz), 3.86 (1H, d, J = 8.4 Hz), 3.97 (1H, dd, J = 5.9) , 6.6 Hz), 4.11 (2H, m), 4.17 (2H, m), 4.30 (1 H, dd, J = 4.0, 8.4 Hz), 4.52 (1 H, m ), 5.14 (1H, m), 5.15 (1H, m), 5.44 (1H, m) ), 5.62 (1H, d, J = 3.3Hz), 5.76 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.72 (1H, d, J = 8.1Hz) ppm
10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (49.0 ppm) as an internal standard is as shown below.
20.2 (q), 23.1 (q), 26.3 (t), 28.5 (t), 28.9 (d), 29.2 (d), 30.4 (t), 30 .6 (t), 30.7 (t), 30.7 (t), 30.8 (t), 31.0 (t), 35.1 (t), 38.0 (q), 39. 0 (q), 40.3 (t), 40.4 (t), 41.4 (t), 41.7 (t), 42.3 (t), 58.4 (t), 59.1 (Q), 64.0 (d), 68.2 (d), 70.8 (d), 71.9 (d), 74.1 (d), 74.4 (d), 75.1 ( d), 78.9 (d), 79.2 (d), 84.9 (d), 85.3 (d), 92.0 (d), 102.7 (d), 109.1 (d) ), 143.0 (d), 152.1 (s), 166.3 (s), 171.0 (s), 173.0 (s), 73.8 (s), 177.1 (s) ppm.

また、本発明は、下記の（４）及び（５）に記載の製造方法に関する。
（４）ストレプトマイセス属に属する、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より該化合物を採取することを特徴とする、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
（５）該生産菌がストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭＢＰ−１０６２９）である、（４）に記載の製造方法。 Moreover, this invention relates to the manufacturing method as described in following (4) and (5).
(4) The bacterium producing the compound according to any one of (1) to (3) belonging to the genus Streptomyces is cultured, and the compound is collected from the culture, (1 The manufacturing method of the compound of any one of (3) thru | or (3).
(5) The production method according to (4), wherein the producing bacterium is Streptomyces sp. SANK60704 (FERM BP-10629).

また、本発明は（６）及び（７）に記載の微生物に関する。
（６）ストレプトマイセス属に属し、（１）乃至（３）のいずれか１項に記載の化合物を生産することを特徴とする微生物。
（７）ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４（ＦＥＲＭＢＰ−１０６２９）。 Moreover, this invention relates to the microorganisms as described in (6) and (7).
(6) A microorganism belonging to the genus Streptomyces and producing the compound according to any one of (1) to (3).
(7) Streptomyces sp. SANK60704 (FERM BP-10629).

また本発明は、下記（８）及び（９）に記載の脱リン酸化化合物の製造方法に関する。
（８）一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を脱リン酸化反応に供することを特徴とする、一般式（Ｉ）においてＸがリン酸基である（１）に記載の化合物又はその塩を出発物質として一般式（Ｉ）においてＸが水酸基であり、Ｒが出発物質と同一である（１）に記載の化合物又はその塩を製造する方法。
（９）脱リン酸化酵素を用いることを特徴とする（８）に記載の製造方法
更に本発明は、下記（１０）及び（１１）に記載の医薬に関する。
（１０）請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
（１１）抗菌剤である、請求項１０に記載の医薬。 Moreover, this invention relates to the manufacturing method of the dephosphorylated compound as described in following (8) and (9).
(8) In the general formula (I), X is a phosphate group, wherein the compound or salt thereof according to (1), wherein X is a phosphate group, is subjected to a dephosphorylation reaction. A method for producing the compound or salt thereof according to (1), wherein X is a hydroxyl group and R is the same as the starting material, using the compound or salt thereof according to (1) as a starting material .
(9) The production method according to (8), wherein a dephosphorylating enzyme is used. The present invention further relates to a medicament according to (10) and (11) below.
(10) A pharmaceutical comprising the compound according to any one of claims 1 to 3 or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
(11) The medicament according to claim 10, which is an antibacterial agent.

本発明において、一般式（Ｉ） In the present invention, the general formula (I)

（Ｉ）
［式中、Ｘは水酸基又はリン酸基を表し、Ｒは炭化水素鎖を表す］により表わされる構造からなる化合物を「Ａ−９７０６５類物質」とよぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘが水酸基である化合物をＡ−９７０６５Ａ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ａ物質において、Ｒが−（ＣＨ_２）_８ＣＨ（ＣＨ_３）_２である化合物又は上記（ｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＡ１物質と呼び、Ｒが−（ＣＨ_２）_１０ＣＨ（ＣＨ_３）_２である化合物をＡ２物質と呼ぶ。
本発明のＡ−９７０６５類物質において、上記一般式（Ｉ）中Ｘがリン酸基である化合物をＡ−９７０６５Ｂ物質と呼ぶ。また、Ａ−９７０６５Ｂ物質において、Ｒが−（ＣＨ_２）_１０ＣＨ（ＣＨ_３）_２である化合物又は上記（ｉｉ）に記載の物理化学的性状を有する化合物をＢ２物質と呼ぶ。 (I)
A compound having a structure represented by the formula [wherein X represents a hydroxyl group or a phosphate group, and R represents a hydrocarbon chain] is referred to as “substance A-97065”.
In the substance A-97065 of the present invention, a compound in which X in the general formula (I) is a hydroxyl group is referred to as an A-97065A substance. Further, in the A-97065A substance, a compound in which R is — (CH ₂ ) ₈ CH (CH ₃ ) ₂ or a compound having the physicochemical properties described in (i) above is referred to as A1 substance, and R is — ( A compound that is CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ is referred to as A2 substance.
In the substance A-97065 of the present invention, a compound in which X in the general formula (I) is a phosphate group is referred to as substance A-97065B. In the A-97065B substance, a compound in which R is — (CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ or a compound having the physicochemical properties described in (ii) above is referred to as a B2 substance.

本発明の化合物は、いくつかの不斉炭素原子を有するため、種々の光学異性体が存在する。一般式（Ｉ）において、これらの異性体はすべて単一の式で示されているが、本発明はラセミ化合物を含むこれらの異性体、及びこれらの異性体の混合物をもすべて含む。これらの異性体は、立体特異的合成法により、若しくは光学活性化合物を原料化合物とした合成により、製造することができ、又は、異性体の混合物として製造した後、所望の異性体をクロマトグラフィー等を用いて常法により単離することにより製造することもできる。 Since the compound of the present invention has several asymmetric carbon atoms, various optical isomers exist. In the general formula (I), all of these isomers are represented by a single formula, but the present invention includes all of these isomers including racemic compounds and mixtures of these isomers. These isomers can be produced by a stereospecific synthesis method, or by synthesis using an optically active compound as a raw material compound, or after being produced as a mixture of isomers, the desired isomer is chromatographed, etc. It can also manufacture by isolating by a conventional method using.

本発明の化合物は、カルボキシル基、アミノ基等を有するため、酸又は塩基を用いて当業者に周知の方法により塩にすることができる。本発明はこれらの塩も包含する。本発明の化合物の塩を医薬として使用する場合、医学的に使用され、薬理学的に許容されるものであれば特に限定されない。また、本発明の化合物の塩を医薬以外の用途に用いる場合、例えば中間体として用いる場合には、該用途に用いることのできるものであれば特に限定されない。
そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩；酢酸塩、臭化物塩、塩化物塩、塩酸塩、臭酸塩、ヨウ化物塩、硫酸塩、リン酸塩、ニリン酸塩のような無機塩；及びクエン酸塩、マレイン酸塩、パモ酸塩、酒石酸塩のような有機酸塩等を挙げることができる。好適には、薬理学的に許容される塩であり、より好適には、ナトリウム塩、カリウム塩、塩酸塩、アンモニウム塩、パモ酸塩である。 Since the compound of the present invention has a carboxyl group, an amino group, etc., it can be converted into a salt by a method well known to those skilled in the art using an acid or a base. The present invention also includes these salts. When the salt of the compound of the present invention is used as a medicine, it is not particularly limited as long as it is medically used and pharmacologically acceptable. Moreover, when using the salt of the compound of this invention for uses other than a pharmaceutical, for example, when using as an intermediate body, if it can be used for this use, it will not specifically limit.
Examples of such salts include alkali metal salts such as sodium salt, potassium salt and lithium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt; aluminum salt, iron salt, zinc salt and copper Metal salts such as salts, nickel salts and cobalt salts; inorganic salts such as ammonium salts; t-octylamine salts, dibenzylamine salts, morpholine salts, glucosamine salts, phenylglycine alkyl ester salts, ethylenediamine salts, N-methylglu Camin salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N, N'-dibenzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, diethanolamine salt, N-benzyl-phenethylamine salt, piperazine salt, tetramethylammonium salt , Tris (hydroxy Organic amine salts such as methyl) aminomethane salt; amino acid salts such as glycine salt, lysine salt, arginine salt, ornithine salt, asparagine salt; acetate salt, bromide salt, chloride salt, hydrochloride salt, odorous salt, iodine salt And inorganic salts such as chloride salts, sulfate salts, phosphate salts, and diphosphate salts; and organic acid salts such as citrate salts, maleate salts, pamoate salts, and tartrate salts. Preferred are pharmacologically acceptable salts, and more preferred are sodium salt, potassium salt, hydrochloride, ammonium salt, and pamoate.

また、本発明の化合物及びその塩は、大気中に放置したり、水又は有機溶媒と混和することによって水又は溶媒と結合し、水和物又は溶媒和物を形成する場合があるが、これらの水和物及び溶媒和物も「薬理上許容される塩」として本発明に含まれる。
本発明のＡ−９７０６５類物質のうちＡ１物質、Ｂ２物質等多くのものはは、ストレプトマイセス属に属する菌株を培養することにより、その培養液中から得ることができる。本発明の化合物の製造法において用いられるストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株としては、例えばストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４株を挙げることができる。ＳＡＮＫ６０７０４株は沖縄県で採集された土壌から分離できる。ＳＡＮＫ６０７０４株の菌学的特徴は、次のとおりである。 In addition, the compound of the present invention and a salt thereof may be left in the air or mixed with water or an organic solvent to combine with water or a solvent to form a hydrate or a solvate. Hydrates and solvates of are also included in the present invention as “pharmacologically acceptable salts”.
Among the A-97065 substances of the present invention, many substances such as substances A1 and B2 can be obtained from the culture solution by culturing a strain belonging to the genus Streptomyces. Examples of the strain belonging to the genus Streptomyces used in the method for producing the compound of the present invention include Streptomyces sp. SANK 60704 strain. SANK 60704 can be isolated from soil collected in Okinawa Prefecture. The mycological characteristics of SANK 60704 strain are as follows.

１．形態学的特徴
ＳＡＮＫ６０７０４株は、ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ）〕規定の寒天培地上２８℃、１４日間培養後、顕微鏡下観察では、基生菌糸は良好に伸長、分岐し、白乃至茶味灰を示すが、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属菌株様の菌糸断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は単純分岐である。気菌糸の先端に１０乃至５０個又はそれ以上の胞子連鎖を形成し、胞子連鎖の形態は螺旋状を示す。走査型電子顕微鏡による観察では、胞子の表面構造は平滑(smooth)状を示す。胞子は楕円形で、その大きさは0.4乃至0.7 μm、×0.8乃至1.2 μmである。また、気菌糸の車軸分岐、菌核や胞子のうなどの特殊器官は観察されない。 1. Morphological characteristics The SANK 60704 strain was cultured on an agar medium defined by ISP (International Streptomyces Project) at 28 ° C. for 14 days. It branches and shows white to brownish ash, but no mycelial breakage or zigzag elongation similar to the Nocardia genus strain is observed. Air hyphae are simply branched. 10 to 50 or more spore chains are formed at the tip of the aerial hyphae, and the form of the spore chain is spiral. When observed with a scanning electron microscope, the surface structure of the spore shows a smooth shape. The spores are elliptical and have a size of 0.4 to 0.7 μm and × 0.8 to 1.2 μm. In addition, special organs such as axle branches of the aerial hyphae, mycorrhiza and spores are not observed.

２．各種培養基上の諸性質
各種培養基上で２８℃、１４日培養後の性状は表１に示したとおりである。色調の表示はマンセル方式による日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバーをあらわす。
［表１］
培地の種類項目^*1 ＳＡＮＫ６０７０４株の性状
イーストエキスＧ：非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 7/6)
麦芽エキス寒天ＡＭ：豊富に形成、ビロード状、明茶味灰(10YR 7/1)
(ISP 2) Ｒ：黄味茶(10YR 7/6)
ＳＰ：黄味茶(10YR 5/6)
オートミール寒天Ｇ：良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
(ISP 3) ＡＭ：余り良くない、ビロード状、白
Ｒ：薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ：産生せず
澱粉・無機塩寒天Ｇ：非常に良好、隆起状、黄味茶(2.5Y 7/4)
(ISP 4) ＡＭ：非常に良好、ビロード状、茶味灰(2.5Y 5/1)
Ｒ：黄味茶(2.5Y 7/4)
ＳＰ：産生せず
グリセリン・Ｇ：非常に良好、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/4)
アスパラギン寒天ＡＭ：非常に良好、茶味灰(2.5Y 6/2)
(ISP 5) Ｒ：薄黄味茶(2.5Y 8/4)
ＳＰ：産生せず
ペプトン・Ｇ：余り良くない、隆起状、薄黄味茶(2.5Y 8/6)
イースト・鉄寒天ＡＭ：余り良くない、白
(ISP 6) Ｒ：薄黄味茶(2.5Y 8/6)
ＳＰ：産生せず
チロシン寒天Ｇ：非常に良好、隆起状、黄味茶(10YR 5/6)
(ISP 7) ＡＭ：非常に良好、ビロード状、黄味茶(10YR 5/4)
Ｒ：黄味茶(10YR 5/6)
ＳＰ：灰味赤茶(2.5YR 5/6)
シュークロース・Ｇ：余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
硝酸塩寒天ＡＭ：余り良くない、ビロード状、茶味灰(2.5Y 4/2)
Ｒ：薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ：産生せず
グルコース・Ｇ：余り良くない、隆起状、薄黄橙(2.5Y 9/2)
アスパラギン寒天ＡＭ：余り良くない、白
Ｒ：薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ：産生せず
栄養寒天Ｇ：余り良くない、平坦、黄味茶(2.5Y 8/2)
(Difco) ＡＭ：形成せず
Ｒ：黄味茶(2.5Y 8/2)
ＳＰ：産生せず
ポテトエキス・Ｇ：余り良くない、平坦、薄黄味橙(2.5Y 9/2)
人参エキス寒天ＡＭ：余り良くない、ビロード状、明茶味灰(2.5Y 7/1)
Ｒ：薄黄味橙(2.5Y 9/2)
ＳＰ：産生せず
水寒天Ｇ：良くない、平坦、白
ＡＭ：良くない、ビロード状、白
Ｒ：白
ＳＰ：産生せず
＊１Ｇ：生育、ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素
＊２性状の欄の（）内はマンセル方式による色調表示。 2. Properties on various culture media Table 1 shows the properties after 14 days of culture on various culture media. The color display indicates the color chip number of the “Standard Color Chart” of the Japan Color Research Institute version using the Munsell method.
[Table 1]
Type of medium Item ^{* 1} SANK 60704 strain yeast extract G: Very good, raised, yellowish tea (10YR 7/6)
Malt extract agar AM ： Abundantly formed, velvety, light brown ash (10YR 7/1)
(ISP 2) R: Yellow tea (10YR 7/6)
SP: Yellowish tea (10YR 5/6)
Oatmeal agar G: Good, raised, light yellowish tea (2.5Y 8/4)
(ISP 3) AM: Not good, velvety, white
R: Light yellowish tea (2.5Y 8/4)
SP: Non-produced starch / mineral salt agar G: Very good, raised, yellowish tea (2.5Y 7/4)
(ISP 4) AM: Very good, velvety, brownish ash (2.5Y 5/1)
R: Yellow tea (2.5Y 7/4)
SP: Not produced Glycerin G: Very good, raised, light yellowish tea (2.5Y 8/4)
Asparagine Agar AM: Very good, tea taste ash (2.5Y 6/2)
(ISP 5) R: Light yellowish tea (2.5Y 8/4)
SP: not produced peptone G: not good, raised, light yellowish tea (2.5Y 8/6)
Yeast / Agar AM: Not good, white
(ISP 6) R: Light yellowish tea (2.5Y 8/6)
SP: Tyrosine agar not produced G: Very good, raised, yellowish tea (10YR 5/6)
(ISP 7) AM: Very good, velvety, yellowish tea (10YR 5/4)
R: Yellow tea (10YR 5/6)
SP: Ashish red tea (2.5YR 5/6)
Sucrose G: Not good, raised, light yellow orange (2.5Y 9/2)
Nitrate agar AM: Not good, velvety, brownish ash (2.5Y 4/2)
R: Light yellowish orange (2.5Y 9/2)
SP: not producing glucose G: not very good, raised, light yellow-orange (2.5Y 9/2)
Asparagine Agar AM: Not good, white
R: Light yellowish orange (2.5Y 9/2)
SP: not produced Nutrient agar G: not so good, flat, yellowish tea (2.5Y 8/2)
(Difco) AM: Not formed
R: Yellow tea (2.5Y 8/2)
SP: not producing potato extract ・ G: not so good, flat, light yellowish orange (2.5Y 9/2)
Carrot Extract Agar AM ： Not so good, velvety, light brown ash (2.5Y 7/1)
R: Light yellowish orange (2.5Y 9/2)
SP: Not produced Water agar G: Not good, flat, white
AM: Not good, velvety, white
R: White
SP: not produced * 1 G: growth, AM: aerial hyphae, R: reverse side, SP: soluble pigment * 2 The color brackets in the parentheses in the property column indicate the color tone by the Munsell method.

３．生理学的性質
２８℃で培養後、２乃至２１日間に観察したＳＡＮＫ６０７０４株の生理学的性質は表２に示したとおりである。
［表２］
澱粉の水解陽性
ゼラチンの液化陽性
硝酸塩の還元陰性
ミルクのペプトン化陽性
ミルクの凝固陽性
メラニン様色素の生産性（培地１）^＊陰性
（培地２）^＊陰性
（培地３）^＊陰性
基質分解性カゼイン陰性
チロシン陽性
キサンチン陰性
生育温度範囲（培地４）^＊１０〜３７℃
生育適正温度（培地４）２４〜３４℃
食塩耐性７％
＊）培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス(ISP 1)
培地２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天(ISP 6)
培地３；チロシン寒天(ISP 7)
培地４；イーストエキス・麦芽エキス寒天(ISP 2)
また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地(ISP ９)を使用して、２８℃、１４日間培養後に観察したＳＡＮＫ６０７０４株の炭素源の資化性は表３に示すとおりである。
［表３］
Ｄ−グルコース＋：Ｄ−フルクトース＋
Ｌ−アラビノース − ：Ｌ−ラムノース −
Ｄ−キシロース＋：シュクロース＋
イノシトール＋：ラフィノース＋
Ｄ−マンニトール ± ：対照 −
＋：利用する、±：弱く利用する、−：利用しない。 3. Physiological properties Physiological properties of SANK 60704 strain observed from 2 to 21 days after culturing at 28 ° C are as shown in Table 2.
[Table 2]
Starch hydrolysis positive Gelatin liquefaction Positive Nitrate reduction negative Milk peptone positive Milk coagulation positive Melanin-like pigment productivity (medium 1) ^* Negative
(Medium 2) ^* Negative
(Medium 3) ^* Negative Substrate degradability Casein Negative
Tyrosine positive
Xanthine negative Growth temperature range (medium 4) ^* 10-37 ° C
Proper growth temperature (medium 4) 24-34 ° C
Salt tolerance 7%
*) Medium 1; Tryptone yeast extract broth (ISP 1)
Medium 2; peptone, yeast extract, iron agar (ISP 6)
Medium 3; Tyrosine Agar (ISP 7)
Medium 4; yeast extract / malt extract agar (ISP 2)
Table 3 shows the assimilation properties of the carbon source of the SANK 60704 strain observed after culturing at 28 ° C. for 14 days using a Prideham Gotley agar medium (ISP 9).
[Table 3]
D-glucose +: D-fructose +
L-arabinose −: L-rhamnose −
D-xylose +: sucrose +
Inositol +: Raffinose +
D-mannitol ±: control −
+: Use, ±: Use weakly,-: Do not use.

４．菌体成分について
ＳＡＮＫ６０７０４株の化学分類学的性状は「放線菌の分類と同定(ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＭａｎｕａｌｏｆＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ) （日本放線菌学会編、日本学会事務センター、49-82頁(2001) ）」に従い検討した。その結果、細胞壁からＬＬ−ジアミノピメリン酸が検出され、全細胞中の糖成分として特徴的なパターンは認められなかった。主要メナキノン分子種としてMK-9(H₆)， MK-9(H₈)が検出された。 4). About fungal components The chemical taxonomic characteristics of SANK 60704 strain are examined according to "Classification and Identification of Actinomycetes (Identification Manual of Actinomycetes) (Edited by the Society for Actinomycetes, Japan Society for Business Administration, 49-82 (2001))" did. As a result, LL-diaminopimelic acid was detected from the cell wall, and a characteristic pattern as a sugar component in all cells was not recognized. MK-9 (H ₆ ) and MK-9 (H ₈ ) were detected as the main menaquinone molecular species.

５．１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
ＳＡＮＫ６０７０４株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ：配列番号１）を解読しデータベース検索を行った結果、公知の菌株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の中にＳＡＮＫ６０７０４株と一致するものは見出されなかったが、その配列相同性からＳＡＮＫ６０７０４株はストレプトマイセス属のクラスターに含まれると判断された。１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列（１４８８ｂｐ）においてＳＡＮＫ６０７０４株と最も高い相同性を示した公知の菌株としては、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス・サブエスピー．・グレボサス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓｓｕｂｓｐ．ｇｌｅｂｏｓｕｓ） (ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＢ１８４４７９)、ストレプトマイセス・プラテンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｌａｔｅｎｓｉｓ） (ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＢ０４５８８２)、ストレプトマイセス・リバニ・サブエスピー．・ルファス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｂａｎｉｓｕｂｓｐ．ｒｕｆｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＪ７８１３５１)、及び、ストレプトマイセス・カニフェラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｎｉｆｅｒｕｓ (ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＡＢ１８４６４０)が挙げられ、いずれもＳＡＮＫ６０７０４株と１６ＳｒＲＮＡ遺伝子塩基配列において９９％以上の相同性を示した。 5. Analysis of 16S rRNA gene The base sequence of 16S rRNA gene (1488 bp: SEQ ID NO: 1) of SANK 60704 strain was analyzed, and as a result of database search, it was found that SANK 60704 strain was included in the 16S rRNA gene base sequence of known strains. Although no match was found, it was determined from the sequence homology that the SANK 60704 strain was included in the cluster of the genus Streptomyces. Examples of known strains having the highest homology with the SANK 60704 strain in the base sequence (1488 bp) of the 16S rRNA gene include Streptomyces hygroscopicus subsp.・ Grebosus (Streptomyces platensis) (GenBank accession No. AB184479), Streptomyces platensis (GenBank accession 04, GenBank accession 04) Rufus (Streptomyces libani subsp. Rufus (GenBank accession No. AJ781351)) and Streptomyces caniferus (S60, Gen. % Homology.

上記の知見に基づき、「ＩＳＰ（インターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ））基準」、ワックスマン（Ｓ． Å．Ｗａｋｓｍａｎ）著、「ジ・アクチノミセテス（ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）・第２巻」、ブキャナンとギボンズ（Ｒ．Ｅ．ＢｕｃｈａｎａｎａｎｄＮ．Ｅ．Ｇｉｂｂｏｎｓ）編、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版」（１９７４年）、「バージーズ・マニュアル（’Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第４巻」（１９８９年）、及びストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属放線菌に関する最近の文献によって本菌株の同定を行い、本菌株が放線菌の中でもストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると判断された。そこで、本菌株をストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．）ＳＡＮＫ６０７０４株と命名した。種レベルの同定については、バージーズ・マニュアル（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第４巻（１９８９年）でストレプトマイセス・リディカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｙｄｉｃｕｓ）と呼称された分類群に所属すると考えるのが妥当である。なお、本菌株は２００６年６月２８日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番１号中央第６）に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭＢＰ−１０６２９を付与された。 Based on the above findings, “ISP (International Streptomyces Project) Standard”, by Waxman, “The Actinomycetes Volume 2”, “Bergey's Manual of Determinative Bacteriology Eighth Edition” (1974), “Bergies Manual ('Berges Manual” Manual of Systematic Bacteriology, Volume 4 ”(1989), and Streptomyces ( The present strain was identified by recent literature on Streptomyces genus actinomycetes, and it was determined that the strain belongs to the genus Streptomyces among actinomycetes. Therefore, this strain was named Streptomyces sp. SANK 60704 strain. For species level identification, it is considered that the species belongs to a taxon named Streptomyces lydicus in Bergey's Manual of Systematic Bacterial Volume 4 (1989). is there. The strain was internationally deposited on June 28, 2006 at the Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Tokuba 1-1 1-1, Tsukuba City, Ibaraki, Japan) with the deposit number FERM BP -10629.

周知のとおり、放線菌は自然界において、又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発明のＳＡＮＫ６０７０４株もこの点は同じである。また、これらの変異株の中には、遺伝学的方法、例えば組み換え、形質導入、形質転換等により得られたものも包含される。これら、ＳＡＮＫ６０７０４株及びその変異株並びに菌学的性状によりそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳＡＮＫ６０７０４株に包含されるものである。本発明のＳＡＮＫ６０７０４株として、好適には前記菌株のうちＡ−９７０６５類物質を産生するストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株であり、より好適には、それらのうち更に１６ＳｒＲＮＡの塩基配列が、配列番号１に記載の塩基配列と同一である菌株であり、更により好適には受託番号ＦＥＲＭＢＰ−１０６２９として国際寄託されているＳＡＮＫ６０７０４株である。
また、本発明は、ストレプトマイセス属に属し、Ａ−９７０６５類物質を生産する全ての菌株を包含する。 As is well known, actinomycetes are susceptible to mutation in nature or by artificial manipulation (for example, ultraviolet irradiation, radiation irradiation, chemical treatment, etc.), and this is the same for the SANK 60704 strain of the present invention. These mutant strains also include those obtained by genetic methods such as recombination, transduction, transformation and the like. These SANK 60704 strains and mutants thereof, and strains that are not clearly distinguished from them by mycological properties are all included in the SANK 60704 strain. The SANK 60704 strain of the present invention is preferably a strain belonging to the genus Streptomyces that produces a substance A-97065 among the above strains, and more preferably a base sequence of 16S rRNA among them. Is a strain having the same nucleotide sequence as shown in SEQ ID NO: 1, and more preferably, the strain SANK 60704, which is deposited internationally under the deposit number FERM BP-10629.
Moreover, this invention includes all the strains which belong to Streptomyces genus and produce A-97065 type substance.

本発明のＡ−９７０６５類物質の生産菌を培養するに際し使用される培地としては、炭素源、窒素源、無機イオン及び有機栄養源等より選択されたものを適宜含有する培地であれば、合成又は天然培地のいずれも使用することができる。 The medium used for culturing the bacterium that produces the A-97065 substance of the present invention is a medium that appropriately contains a medium selected from carbon sources, nitrogen sources, inorganic ions, organic nutrient sources, and the like. Alternatively, any natural medium can be used.

該栄養源としては、従来真菌類や放線菌類の菌株の培養に利用されている公知の、微生物が資化できる炭素源、窒素源及び無機塩が使用できる。 As the nutrient source, known carbon sources, nitrogen sources and inorganic salts that can be assimilated by microorganisms, which have been conventionally used for culturing fungal and actinomycetes strains, can be used.

具体的には、炭素源としてグルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトール、グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆粉、綿実油、水飴、糖蜜、大豆油、クエン酸、酒石酸などを単一に、あるいは併用して使用できる。一般的には、上記炭素源を培地量の１乃至１０重量％で使用することができるが、この範囲に限定されない。
また、窒素源としては、蛋白質又はその水解物を含有する物質、あるいは含窒素無機塩類を用いることができる。好適な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、スキムミルク、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、生イースト、乾燥イースト、イーストエキス、マルトエキス、ジャガイモ、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等を使用することができる。該窒素源は、単一で又は併用して、好ましくは培地量の０．２乃至６重量％の範囲で使用する。
さらに栄養無機塩としては、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを含む、通常の塩類を使用することができる。また、カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の微量の金属も使用することができる。
なお、液体培養に際しては、消泡剤としてシリコン油、植物油、界面活性剤等を使用することができる。 Specifically, glucose, fructose, maltose, sucrose, mannitol, glycerol, dextrin, oats, rye, corn starch, potato, corn flour, soybean flour, cottonseed oil, starch syrup, molasses, soybean oil, citric acid , Tartaric acid or the like can be used alone or in combination. In general, the carbon source can be used in an amount of 1 to 10% by weight of the medium amount, but is not limited to this range.
Further, as the nitrogen source, a substance containing a protein or a hydrolyzate thereof, or a nitrogen-containing inorganic salt can be used. Suitable nitrogen sources include, for example, soy flour, bran, peanut flour, cottonseed flour, skim milk, casein hydrolyzate, pharmamine, fish meal, corn steep liquor, peptone, meat extract, fresh yeast, dry yeast, yeast extract, Malt extract, potato, ammonium sulfate, ammonium nitrate, sodium nitrate and the like can be used. The nitrogen sources are used alone or in combination, and are preferably used in the range of 0.2 to 6% by weight of the medium amount.
Further, as the nutrient inorganic salt, ordinary salts containing ions such as sodium, ammonium, calcium, phosphate, sulfate, chloride, carbonate and the like can be used. Moreover, trace metals, such as potassium, calcium, cobalt, manganese, iron, and magnesium, can also be used.
In liquid culture, silicone oil, vegetable oil, surfactant, etc. can be used as an antifoaming agent.

ＳＡＮＫ６０７０４株を培養してＡ−９７０６５類物質を生産するための培地のｐＨは、好適には５．０乃至８．０である。
ＳＡＮＫ６０７０４株の生育温度は１２乃至３８℃であるが、Ａ−９７０６５類物質を生産させるためには、該菌株を１８乃至３６℃で培養することが好ましく、より好適には、２０乃至３２℃で培養するのが好ましい。
Ａ−９７０６５類物質は、ＳＡＮＫ６０７０４株を好気的に培養することにより得られるが、そのような培養法としては、通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養法、振とう培養法、通気攪拌培養法等を用いることができる。 The pH of the medium for culturing the SANK60704 strain to produce the A-97065 substance is preferably 5.0 to 8.0.
The growth temperature of the SANK60704 strain is 12 to 38 ° C. In order to produce A-97065 substances, the strain is preferably cultured at 18 to 36 ° C, and more preferably at 20 to 32 ° C. It is preferable to culture.
The substance A-97065 can be obtained by aerobically cultivating the SANK60704 strain. Examples of such a culture method include commonly used aerobic culture methods such as a solid culture method, a shaking culture method, and aeration. A stirring culture method or the like can be used.

小規模の培養においては、２０乃至３２℃で数日間振とう培養を行うのが好適である。培養は、バッフル（水流調節壁）のついた、あるいはついていない三角フラスコ中で、１又は２段階の種の発育工程により開始する。
種発育段階の培地には、炭素源及び窒素源を併用することができる。種培養は、２０乃至３２℃の定温インキュベーター中で、８日間振とうするか、又は充分に成長するまで振とうすることにより行う。成長した種は、第二の種培地、又は、生産培地に接種する。
中間の発育工程を用いる場合には、種培養と同様の方法で行うことができる。中間の発育工程により得られた種は、その一部を生産培地に接種する。 In small-scale culture, it is preferable to perform shaking culture at 20 to 32 ° C. for several days. Cultivation begins with a one or two stage seed development process in an Erlenmeyer flask with or without a baffle.
A carbon source and a nitrogen source can be used in combination in the medium at the seed development stage. The seed culture is performed in a constant temperature incubator at 20 to 32 ° C. by shaking for 8 days or until it grows sufficiently. The grown seed is inoculated into a second seed medium or production medium.
When an intermediate growth process is used, it can be performed by the same method as seed culture. A part of the seed obtained by the intermediate development process is inoculated into the production medium.

生産のための培養は、種を接種した生産培養用フラスコを一定の温度で数日間振とう培養することにより行うことができる。
生産のための培養を大量培養で行う場合には、攪拌機、通気装置が付いたジャーファーメンターあるいはタンクで培養するのが好ましい。そのためには、まず栄養培地を１２１乃至１３０℃まで加熱して滅菌し、その後冷却させておく。次いで、該滅菌済培地に前述の方法によって予め成長させておいた種を接種する。その後の培養は２０乃至３２℃で通気攪拌して行う。この方法は、多量の化合物を得るのに適している。 Culture for production can be performed by shaking and culturing a production culture flask inoculated with seeds at a certain temperature for several days.
When the culture for production is carried out in a large-scale culture, it is preferable to perform the culture in a jar fermenter or tank equipped with a stirrer and an aeration device. For this purpose, the nutrient medium is first sterilized by heating to 121 to 130 ° C. and then cooled. The sterilized medium is then inoculated with seeds previously grown by the method described above. Subsequent cultivation is performed at 20 to 32 ° C. with aeration and agitation. This method is suitable for obtaining large amounts of compounds.

培養終了後、フラスコ内の培養物を遠心分離又はろ過するか、又は培養物全体を用いて抽出、精製することにより、目的の化合物を得ることができる。
培養の経過に伴って生産されるＡ−９７０６５類物質の量は、培養液の一部を採取して該化合物群を抽出し、トランスロケースＩ阻害活性を測定することにより該化合物群を総活性量として確認するか、又は、高速液体クロマトグラフィーを実施し、該化合物群を各々測定することによりモニターすることができる。Ａ−９７０６５類物質の生産量は、通常３乃至１５日で最高値に達する。 After completion of the culture, the target compound can be obtained by centrifuging or filtering the culture in the flask, or extracting and purifying the whole culture.
The amount of the A-97065 substance produced with the progress of the culture is determined by collecting a part of the culture solution, extracting the compound group, and measuring the translocase I inhibitory activity. It can be confirmed as an active amount, or can be monitored by carrying out high performance liquid chromatography and measuring each of the compound groups. The production of A-97065 class substances usually reaches its maximum value in 3 to 15 days.

培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体内、又はその双方に存在するＡ−９７０６５類物質は、培養終了液の全て、あるいは菌体、その他の固形部分を、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作又は遠心分離によって分別し、得られたろ液又は上清及び菌体中から、トランスロケースＩ阻害活性又は高速液体クロマトグラフィーを指標にして、その物理化学的性状を利用し抽出精製することができる。 After completion of the culture, A-97065 substances existing in the liquid part and / or in the fungus body, or both, use the whole culture liquid or the fungus body and other solid parts as diatomaceous earth as a filter aid. Separation by filtration or centrifugation, and extraction and purification from the obtained filtrate or supernatant and bacterial cells using translocase I inhibitory activity or high performance liquid chromatography as an index and using their physicochemical properties Can do.

ろ液又は上清中に存在するＡ−９７０６５類物質は、中性ｐＨ条件下で、水と混和しない有機溶剤、例えば、酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレン、ブタノール等の単独又は、それらの組み合わせにより抽出精製することができる。あるいは、吸着剤として、例えば、活性炭又は吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（登録商標、ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５０、セパビーズＳＰ−２０７（登録商標、三菱化学社製）等を使用して抽出精製することもできる。吸着剤を使用して抽出精製する場合、目的化合物を含む液を吸着剤の層を通過させ、不純物を吸着剤に吸着させることにより取り除くか、又は、目的化合物を吸着させて不純物を洗い流した後、メタノール水、アセトン水、ブタノ−ル水等を用いて目的化合物を溶出させることにより、目的化合物を抽出精製することができる。 A-97065 substances present in the filtrate or supernatant may be organic solvents that are not miscible with water under neutral pH conditions, such as ethyl acetate, chloroform, ethylene chloride, methylene chloride, butanol alone or in combination. It can be extracted and purified by a combination of Alternatively, as an adsorbent, for example, activated carbon or amberlite XAD-2 or XAD-4 (registered trademark, manufactured by Rohm and Haas) which is an adsorption resin, Diaion HP-10, HP-20, or CHP Extraction and purification can also be performed using -20P, HP-50, Sepabeads SP-207 (registered trademark, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and the like. When extracting and purifying using an adsorbent, remove the liquid containing the target compound by passing it through the adsorbent layer and adsorbing the impurity to the adsorbent, or washing the impurity by adsorbing the target compound The target compound can be extracted and purified by eluting the target compound with methanol water, acetone water, butanol water or the like.

菌体内に存在するＡ−９７０６５類物質は、５０乃至９０％の含水アセトン又は含水メタノールにより抽出し、濃縮操作により有機溶剤を除去した後、上記と同様に抽出精製操作を行うことにより得ることができる。例えば、培養終了後に適当量（好ましくは終濃度５０％）の、アセトン又はメタノールを添加することにより目的の化合物を抽出することができる。抽出終了後、珪藻土をろ過助剤とするろ過操作を行ない、得られた抽出液をろ液と同様な抽出精製操作を行うことにより目的の化合物を抽出精製することができる。 A-97065 substances present in the microbial cells can be obtained by extraction with 50 to 90% aqueous acetone or aqueous methanol, removing the organic solvent by concentration, and then performing extraction and purification in the same manner as described above. it can. For example, the target compound can be extracted by adding an appropriate amount (preferably a final concentration of 50%) of acetone or methanol after the end of the culture. After completion of the extraction, the target compound can be extracted and purified by performing a filtration operation using diatomaceous earth as a filter aid and performing the same extraction and purification operation as that of the filtrate.

上記の方法により抽出精製されたＡ−９７０６５類物質を含む溶液は、シリカゲル、セファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス社製）、フロリジル、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等により更に精製することができる。
以上の分離、精製の手段を単独又は適宜組み合わせ、場合によっては反復して用いることにより、本発明のＡ−９７０６５類物質を分離精製することができる。 The solution containing the substance A-97065 extracted and purified by the above method is distributed using a carrier such as silica gel, Sephadex LH-20 (Amersham Biosciences), Florisil, Cosmosil (Nacalai Tesque). Column chromatography; adsorption column chromatography using a carrier such as Diaion CHP-20P (Mitsubishi Chemical); Sephadex G-10 (Amersham Bioscience), Toyopearl HW40F (Tosoh) Gel filtration chromatography: Dowex 50 (Dow Chemical) Dowex 1 (Dow Chemical), Diaion PK216 (Mitsubishi Chemical), Diaion PA316 (Mitsubishi Chemical), CM Sephadex C- 25 (Amersham Biosciences) , DEAE Sephadex A-25 (Amersham Biosciences) ion exchange chromatography using a; can be further purified by normal layer, high performance liquid chromatography using a reversed phase column.
The A-97065 class substances of the present invention can be separated and purified by using the above separation and purification means alone or in combination as appropriate, and repeatedly in some cases.

本発明のＡ−９７０６５Ｂ物質は、周知の方法により加水分解及び脱リン酸化されることで、対応する炭化水素鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換されうる。反応の方法としては、脱リン酸化に用いられる方法であれば特に限定されず、化学的反応、酵素的反応、微生物変換反応等をあげることができる。脱リン酸化は、例えば、溶媒中でＡ−９７０６５Ｂ物質に脱リン酸化酵素を作用させることにより達成される。
使用される溶媒としては、酵素反応に使用できる溶媒であれば特に限定は無く、溶媒中に有機溶媒を含んでいても良く、有機溶媒のみからなる溶媒であっても良い。本反応に用いる溶媒として、具体的には、水；メタノール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類；アセトン、等を挙げることができ、これらの溶媒の２種類以上の混合物であっても良いが、好適には、水である。
脱リン酸化酵素としては、酸性フォスファターゼ、塩基性フォスファターゼの他、ヌクレアーゼ、ヌクレオチダーゼを挙げることができ、好適には酸性フォスファターゼ又は塩基性フォスファターゼであり、より好適には酸性フォスファターゼであり、更により好適にはジャガイモ由来の酸性フォスファターゼである。 The A-97065B substance of the present invention can be converted to an A-97065A substance having a corresponding hydrocarbon chain by hydrolysis and dephosphorylation by a known method. The reaction method is not particularly limited as long as it is a method used for dephosphorylation, and examples thereof include chemical reactions, enzymatic reactions, and microbial conversion reactions. Dephosphorylation is achieved, for example, by allowing a dephosphorylating enzyme to act on the A-97065B substance in a solvent.
The solvent to be used is not particularly limited as long as it is a solvent that can be used for the enzyme reaction, and the solvent may contain an organic solvent, or may be a solvent composed only of an organic solvent. Specific examples of the solvent used in this reaction include water; alcohols such as methanol, ethanol, and isopropanol; acetone, and the like. A mixture of two or more of these solvents may be used. There is water.
Examples of dephosphorylation enzymes include acid phosphatase and basic phosphatase, as well as nuclease and nucleotidase, preferably acid phosphatase or basic phosphatase, more preferably acid phosphatase, and even more preferable. Is an acid phosphatase derived from potato.

前記の脱リン酸化処理に用いるＡ−９７０６５Ｂ物質を含むサンプルは、Ａ−９７０６５Ａ物質を含んでいてもよく、また、Ａ−９７０６５Ａ物質を除いた分離されたＡ−９７０６５Ｂ物質であっても良い。また、前記サンプル中には複数種類のＡ−９７０６５Ｂ物質が含まれていても良い。
得られた脱リン酸化体は、前記と同様に公知の分離手法（例えば、コスモシル（ナカライテスク社製）のような担体を用いた分配カラムクロマトグラフィー；ダイヤイオンＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化学社製）のような担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー；セファデックスＧ−１０（アマシャムバイオサイエンス社製）、トヨパールＨＷ４０Ｆ（トーソー社製）などを用いたゲルろ過クロマトグラフィー；ダウエックス５０（ダウケミカル社製）ダウエックス１（ダウケミカル社製）、ダイヤイオンＰＫ２１６（三菱化学社製）、ダイヤイオンＰＡ３１６（三菱化学社製）、ＣＭセファデックスＣ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）、ＤＥＡＥセファデックスＡ−２５（アマシャムバイオサイエンス社製）などを用いたイオン交換クロマトグラフィー；順層、逆層カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等）を用いる（必要に応じて複数組み合わせても良い）ことにより精製することができる。以上、Ａ−９７０６５類物質の製造法の代表的な方法を説明したが、製造方法はこれらに限定されず、既に当業者に知られているこれら以外の製造方法を用いることもできる。 The sample containing the A-97065B substance used for the dephosphorylation treatment may contain the A-97065A substance, or may be a separated A-97065B substance excluding the A-97065A substance. The sample may contain a plurality of types of A-97065B substances.
The obtained dephosphorylated product was obtained in the same manner as described above using a known separation method (for example, distribution column chromatography using a carrier such as Cosmosil (Nacalai Tesque); Diaion CHP-20P (Mitsubishi Chemical) Column chromatography using a carrier such as: Sephadex G-10 (manufactured by Amersham Biosciences), gel filtration chromatography using Toyopearl HW40F (manufactured by Tosoh Corporation), etc .; Dowex 50 (manufactured by Dow Chemical Company) Dowex 1 (Dow Chemical), Diaion PK216 (Mitsubishi Chemical), Diaion PA316 (Mitsubishi Chemical), CM Sephadex C-25 (Amersham Bioscience), DEAE Sephadex A-25 Ion exchange using (Amersham Bioscience) etc. Can be purified by sequentially layer, using a high performance liquid chromatography) using a reverse phase column (or a combination of a plurality, if necessary); chromatography. As mentioned above, although the typical method of the manufacturing method of A-97065 type substance was demonstrated, a manufacturing method is not limited to these, The manufacturing method other than these already known to those skilled in the art can also be used.

本発明は、さらに、一般式（Ｉ）のＲが所望の脂肪酸側鎖であるＡ−９７０６５類物質の製造方法に関する。
上記したようなＡ−９７０６５類物質生産菌の培養において、通常用いられる培地に所望の脂肪酸を添加することにより（「脂肪酸添加培養」という）、一般式（Ｉ）においてＲが前記脂肪酸に対応した炭化水素鎖であるＡ−９７０６５類物質の生産量を特異的に増加させることが出来る。用いる脂肪酸は主鎖の炭素数が３以上のものであれば特に限定されず、直鎖脂肪酸、分枝鎖脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸等を用いることができるが、好適には分枝状飽和脂肪酸である。分枝状飽和脂肪酸の鎖長は炭素数３以上であれば特に限定されないが、好適には炭素数７乃至１５であり、より好適には炭素数９乃至１３である。 The present invention further relates to a method for producing a substance A-97065, wherein R in the general formula (I) is a desired fatty acid side chain.
In the culture of A-97065 substance-producing bacteria as described above, by adding a desired fatty acid to a commonly used medium (referred to as “fatty acid-added culture”), R in the general formula (I) corresponds to the fatty acid. It is possible to specifically increase the production amount of the substance A-97065 which is a hydrocarbon chain. The fatty acid to be used is not particularly limited as long as the main chain has 3 or more carbon atoms, and straight chain fatty acid, branched chain fatty acid, saturated fatty acid, unsaturated fatty acid and the like can be used, but preferably branched. It is a saturated fatty acid. The chain length of the branched saturated fatty acid is not particularly limited as long as it has 3 or more carbon atoms, but preferably has 7 to 15 carbon atoms, and more preferably has 9 to 13 carbon atoms.

例えば、下記一般式（ＩＩ）で表わされる脂肪酸を用いた場合、生産量が増加するＡ−９７０６５類物質は、一般式（Ｉ）において、Ｒ＝Ｒ１として表わされる。 For example, when a fatty acid represented by the following general formula (II) is used, an A-97065 substance whose production amount increases is represented as R = R1 in the general formula (I).

このようにして、Ａ−９７０６５生産菌の脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質は、他のＡ−９７０６５類物質と同様、前記の方法を用いて単離、精製される。このようにして製造される、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５類物質も本発明のＡ−９７０６５類物質に含まれる。 Thus, the A-97065 substance having a desired fatty acid side chain produced by the fatty acid-added culture of the A-97065-producing bacterium is isolated using the above-mentioned method in the same manner as other A-97065 substances. Purified. The A-97065 class substance having the desired fatty acid side chain thus produced is also included in the A-97065 class substance of the present invention.

また、本発明は、所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質を特異的に製造する方法に関する。脂肪酸添加培養により生産される所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ｂ物質は、前述の通り脱リン酸化反応に供することにより、対応する脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質に変換することが出来る。このような手法により所望の脂肪酸側鎖を有するＡ−９７０６５Ａ物質の製造量を特異的に向上させることが可能である。 The present invention also relates to a method for specifically producing A-97065A substance having a desired fatty acid side chain. The A-97065B substance having the desired fatty acid side chain produced by the fatty acid-added culture can be converted to the A-97065A substance having the corresponding fatty acid side chain by subjecting it to the dephosphorylation reaction as described above. By such a technique, it is possible to specifically improve the production amount of the A-97065A substance having a desired fatty acid side chain.

以上のごとくして得られる本発明の化合物の、一般グラム陽性細菌及びグラム陰性細菌に対する最少生育阻止濃度（ＭＩＣ）は、普通寒天培地（栄研化学社製）や、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）等を用いた、当業者周知の寒天平板希釈法によって測定することができる。 The minimum inhibitory concentration (MIC) of the compound of the present invention obtained as described above with respect to general gram-positive bacteria and gram-negative bacteria can be determined using a normal agar medium (manufactured by Eiken Chemical Co., Ltd.), Muller-Hinton agar (Mueller- It can be measured by an agar plate dilution method well known to those skilled in the art using a Hintonagar medium (BBL) or the like.

また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎ^ε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎ^ε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）の反応を用いて測定することができる。また、本発明の化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、当業者周知の方法により測定することもできる。 The enzyme inhibitory activity against translocates Case I of a compound of the present invention, enzyme and UDP-N-acetyl -L- alanyl-gamma-D-glutamyl -m- Jiaminopimeriru ^- (N ε - dansyl)-D- Alanyl-D-alanine (UDP-N-acetylmuramyl-L-Ala-γ-D-Glu-m-DAP- (N ^ε- dansyl) -D-Ala-D-Ala) and undecaprenyl phosphate It can measure using reaction of these. The enzyme inhibitory activity against translocase I of the compounds of the present invention can also be measured by methods well known to those skilled in the art.

本発明の化合物はトランスロケースＩ酵素阻害活性を示す。トランスロケースＩは、細菌細胞壁の構成成分であるペプチドグリカンの生合成に関与する酵素であり、該酵素を阻害すると細菌が細胞壁を維持することが出来なくなると考えられている。すなわち、トランスロケースＩ阻害作用を有する本発明の化合物は抗菌活性を有する。また、このようなトランスロケースＩ阻害活性に基づく抗菌活性は、従来の抗菌剤とは異なるメカニズムであり、従来品に対する耐性菌に対しても有効な抗菌活性を発揮する。 The compounds of the present invention exhibit translocase I enzyme inhibitory activity. Translocase I is an enzyme involved in the biosynthesis of peptidoglycan, which is a constituent of bacterial cell walls, and it is believed that inhibition of the enzyme prevents bacteria from maintaining the cell wall. That is, the compound of the present invention having a translocase I inhibitory activity has antibacterial activity. In addition, the antibacterial activity based on such translocase I inhibitory activity is a mechanism different from that of conventional antibacterial agents, and also exhibits effective antibacterial activity against resistant bacteria against conventional products.

本発明は、Ａ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物に関する。前記医薬組成物は、好適にはトランスロケースＩ阻害剤であり、より好適には抗菌剤である。このような医薬組成物は、細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症の予防剤又は治療剤として有用である。また、このような医薬組成物の製造のためのＡ−９７０６５類物質の使用も本発明に含まれるものである。また、患者にＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを含む細菌感染症、特に耐性菌を含む細菌感染症、の治療方法も本発明に含まれる。 The present invention relates to a pharmaceutical composition containing an A-97065 substance or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient. The pharmaceutical composition is preferably a translocase I inhibitor, more preferably an antibacterial agent. Such a pharmaceutical composition is useful as a prophylactic or therapeutic agent for bacterial infections, particularly bacterial infections including resistant bacteria. In addition, the use of substances A-97065 for the production of such pharmaceutical compositions is also included in the present invention. Further, the present invention also includes a method for treating a bacterial infection comprising administering an effective amount of the A-97065 substance or a pharmacologically acceptable salt thereof to a patient, particularly a bacterial infection including a resistant bacterium. .

本発明のＡ−９７０６５類物質又はその薬理学的に許容される塩は、その投与される形態に応じて種々の形態で製剤化することができる。その製剤の形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、乳剤、丸剤、散剤、シロップ剤（液剤）等による経口投与、又は注射剤（静脈内、筋肉内、皮下又は腹腔内投与）、点滴剤、坐剤（直腸投与）等による非経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製剤技術分野において通常使用し得る補助剤を用いて製剤化することができる。 The substance A-97065 of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof can be formulated in various forms depending on the administration form. As the form of the preparation, for example, oral administration by tablet, capsule, granule, emulsion, pill, powder, syrup (solution), etc., or injection (intravenous, intramuscular, subcutaneous or intraperitoneal administration) And parenteral administration such as drops, suppositories (rectal administration) and the like. These various preparations are usually used in the pharmaceutical preparation technical field such as excipients, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agents, solubilizers, suspension agents, coating agents, etc. as main ingredients in accordance with conventional methods. It can be formulated with the resulting adjuvant.

錠剤として使用する場合、担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等を使用することができる。また、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。 When used as a tablet, carriers include, for example, lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid, etc .; water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose Liquid, starch liquid, gelatin solution, binders such as carboxymethylcellulose, shellac, methylcellulose, potassium phosphate, polyvinylpyrrolidone; dry starch, sodium alginate, agar powder, laminaran powder, sodium bicarbonate, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid Disintegrating agents such as ester, sodium lauryl sulfate, monoglyceride stearate, starch, lactose; disintegration inhibitors such as sucrose, stearin, cocoa butter, hydrogenated oil; absorption promoters such as quaternary ammonium salts and sodium lauryl sulfate; Glycerin, humectants, such as starch; starch, lactose, kaolin, bentonite, adsorbent such as colloidal silicic acid; purified talc, stearates, boric acid powder, it is possible to use lubricants such as polyethylene glycol. Moreover, it can be set as the tablet which gave the normal coating as needed, for example, a sugar-coated tablet, a gelatin-encapsulated tablet, an enteric-coated tablet, a film-coated tablet, a double tablet, and a multilayer tablet.

丸剤として使用する場合、担体として、例えば、グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン寒天等の崩壊剤等を使用することができる。
坐剤として使用する場合、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセリド等を挙げることができる。
注射剤として使用する場合、液剤、乳剤又は懸濁剤として使用することができる。これらの液剤、乳剤又は懸濁剤は、殺菌され、血液と等張であることが好ましい。これら液剤、乳剤又は懸濁剤の製造に用いる溶液は、医療用の希釈剤として使用できるものであれば特に限定はなく、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース又はグリセリンを製剤中に含んでいてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を含んでいてもよい。 When used as a pill, as a carrier, for example, excipients such as glucose, lactose, cocoa butter, starch, hydrogenated vegetable oil, kaolin, talc; binders such as gum arabic powder, tragacanth powder, gelatin, ethanol; laminaran agar Disintegrants such as can be used.
When used as a suppository, a carrier conventionally known in this field can be widely used as a carrier, and examples thereof include polyethylene glycol, cocoa butter, higher alcohol, esters of higher alcohol, gelatin, semi-synthetic glyceride and the like.
When used as an injection, it can be used as a solution, emulsion or suspension. These solutions, emulsions or suspensions are preferably sterilized and isotonic with blood. The solution used for the production of these solutions, emulsions or suspensions is not particularly limited as long as it can be used as a diluent for medical use. For example, water, ethanol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isoforms are used. Examples include stearyl alcohol and polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters. In this case, the preparation may contain a sufficient amount of sodium chloride, glucose, or glycerin to prepare an isotonic solution, and it also contains ordinary solubilizing agents, buffers, soothing agents, etc. You may go out.

また、上記の製剤には、必要に応じて、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等を含めることもでき、更に、他の医薬品を含めることもできる。 Moreover, a coloring agent, a preservative, a fragrance | flavor, a flavoring agent, a sweetening agent, etc. can also be included in said formulation as needed, and also other pharmaceuticals can be included.

上記製剤に含まれる有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通常、全組成物中１乃至７０重量％、好ましくは１乃至３０重量％含む。 The amount of the active ingredient compound contained in the preparation is not particularly limited and is appropriately selected within a wide range, but is usually 1 to 70% by weight, preferably 1 to 30% by weight, based on the total composition.

使用量としては、症状、年齢、体重、投与方法及び剤形等によって異なるが、通常は成人に対して１日あたり、上限として40 mg/kg（好ましくは2 mg/kg）であり、下限として0.002 mg/kg（好ましくは0.02 mg/kg、さらに好ましくは0.2 mg/kg）を症状に応じて、一日１回又は数回に分けて投与することができる。 The amount used varies depending on symptoms, age, body weight, administration method, dosage form, etc., but is usually 40 mg / kg (preferably 2 mg / kg) as an upper limit per day for adults. 0.002 mg / kg (preferably 0.02 mg / kg, more preferably 0.2 mg / kg) can be administered once or several times a day according to symptoms.

このように医薬用途に用いられるＡ−９７０６５類物質としては、本発明に含まれるものなら全て用いることが出来るが、好適にはＡ１物質である。 Thus, as A-97065 substance used for a pharmaceutical use, if it is contained in this invention, all can be used, However, A1 substance is suitable.

上記の通り、本発明の化合物群はグラム陽性菌を含む各種細菌感染症の予防薬又は治療薬として有用である。 As described above, the compound group of the present invention is useful as a prophylactic or therapeutic agent for various bacterial infections including Gram-positive bacteria.

以下に実施例をあげて、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

（実施例１）ストレプトマイセス・エスピー．ＳＡＮＫ６０７０４株の培養
１）一次培養
斜面培地上に生育させたＳＡＮＫ６０７０４株に、滅菌水を添加し、白金耳を用いて菌糸をかきとった。この菌糸懸濁液をホモジナイズし均一化したものを、表４に記載する組成の前培養培地１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容の三角フラスコに無菌的に接種し、次いで該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、３日間振とう培養して、一次前培養液を得た。
［表４］前培養培地
―――――――――――――――――――――――
グルコース２０ｇ
可溶性デンプン１０ｇ
カツオエキス１ｇ
大豆粉２．５ｇ
ＮａＣｌ２ｇ
Ｋ_２ＨＰＯ_４５０ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水１０００ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。 (Example 1) Streptomyces sp. Cultivation of SANK 60704 strain 1) Primary culture Sterilized water was added to the SANK 60704 strain grown on the slant medium, and the mycelium was scraped off using a platinum loop. This mycelial suspension is homogenized and homogenized and aseptically inoculated into a 500 ml Erlenmeyer flask containing 100 ml of the preculture medium having the composition described in Table 4, and the flask is then placed in a rotary shaker. By shaking culture at 28 ° C. and 210 rpm for 3 days, a primary preculture was obtained.
[Table 4] Preculture medium ―――――――――――――――――――――――
Glucose 20 g
Soluble starch 10 g
Skipjack extract 1 g
Soy flour 2.5g
NaCl 2 g
K ₂ HPO ₄ 50 mg
―――――――――――――――――――――――
1000 ml of tap water
PH 6.7 before sterilization
Sterilization: Sterilized at 121 ° C. for 30 minutes.

２）二次培養
滅菌済みの上記表４の組成の前培養培地３００ｍｌが入った２Ｌ容の三角フラスコ２本に、前記一次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、該フラスコをロータリー振とう機中で２８℃、２１０ｒｐｍにて、１日間振とう培養して、二次前培養液を得た。 2) Secondary culture 2% Erlenmeyer flasks containing 300 ml of the preculture medium having the composition shown in Table 4 above were inoculated with 1% (V / V) of the primary preculture solution. A secondary preculture was obtained by shaking culture at 28 ° C. and 210 rpm in a rotary shaker for 1 day.

３）本培養
滅菌済みの下記表５の組成の本培養培地２０Ｌが入った３０Ｌ容タンク培養機２基に、前記二次前培養液を１％（Ｖ／Ｖ）植菌し、温度２８℃、通気量１ｖｖｍ、回転数１００乃至２００ｒｐｍ、溶存酸素量５．０ｐｐｍで８日間培養し、培養終了液を得た。
[表５]本培養培地
―――――――――――――――――――――――
シュークロース５０ｇ
カツオエキス３０ｇ
ＮａＣｌ２ｇ
Ｋ_２ＨＰＯ_４５０ｍｇ
消泡剤（ＣＢ４４２）１０ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
水道水１０００ｍｌ
滅菌前のｐＨ６．７
滅菌：１２１℃にて３０分間滅菌した。 3) Main culture 1% (V / V) of the secondary preculture solution was inoculated into two 30 L tank culture machines containing 20 L of the main culture medium having the composition shown in Table 5 below, and the temperature was 28 ° C. Incubation was performed for 8 days at an aeration rate of 1 vvm, a rotational speed of 100 to 200 rpm, and a dissolved oxygen content of 5.0 ppm to obtain a culture end solution.
[Table 5] Main culture medium ―――――――――――――――――――――――
Sucrose 50 g
Skipjack extract 30 g
NaCl 2 g
K ₂ HPO ₄ 50 mg
Antifoam (CB442) 10 mg
―――――――――――――――――――――――
1000 ml of tap water
PH 6.7 before sterilization
Sterilization: Sterilized at 121 ° C. for 30 minutes.

（実施例２）Ａ１物質及びＢ２物質の単離
以下の精製においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ａ１物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）［＊］
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：７．６分
ｉｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：１．０ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：５．９分。
［＊］「０．３％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）」は、次のように調製した。すなわち、リン酸によりｐＨ３．０に調節した３％トリエチルアミン水溶液とアセトニトリルと水を、トリエチルアミンの終濃度が０．３％、アセトニトリルの終濃度が４５％となるように混合した。本明細書の実施例において、濃度及び／又はｐＨの異なるトリエチルアミン・アセトニトリル水についても、同様の手法により調製した。 (Example 2) Isolation of substance A1 and substance B2 In the following purification, the active fraction was monitored by the following high performance liquid chromatography (HPLC).
i) A1 substance Column: Unison (manufactured by Intact Corporation) UK-C18: 4.6φ × 75 mm
Solvent: 0.3% triethylamine / 45% acetonitrile water (pH 3.0) [*]
Flow rate: 1.0 ml / min Detection: UV absorption 260 nm
Retention time: 7.6 minutes ii) B2 substance Column: Unison (manufactured by Intact Corporation) UK-C18: 4.6 φ × 75 mm
Solvent: 0.3% triethylamine, 50% acetonitrile water (pH 3.0)
Flow rate: 1.0 ml / min Detection: UV absorption 260 nm
Retention time: 5.9 minutes.
[*] “0.3% triethylamine / 45% acetonitrile water (pH 3.0)” was prepared as follows. That is, a 3% triethylamine aqueous solution adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid, acetonitrile and water were mixed so that the final concentration of triethylamine was 0.3% and the final concentration of acetonitrile was 45%. In the examples of the present specification, triethylamine / acetonitrile water having different concentrations and / or pH was prepared in the same manner.

１）混合粗粉末の抽出
実施例１で得られた培養終了液（３０Ｌ）にアセトンを３０Ｌ添加した後、セライト５４５（１．５ｋｇ）をろ過助剤として添加し、フィルタープレスろ過した。得られたろ液及び洗液を合併し（５４Ｌ）、７５％硫酸を用いてｐＨを３に調節した後、食塩６３２ｇを添加し、２０Ｌ、１５Ｌ及び１７Ｌの酢酸エチルで３回抽出を行った。得られた溶媒層（８３Ｌ）に、ｐＨを７に調節した０．２Ｍリン酸バッファー (１．６Ｌ)を添加した後、１０Ｌまで減圧濃縮した。次いで、得られた溶液に対し、１．６Ｌ及び０．５Ｌの前記０．２Ｍリン酸バッファーで２回逆抽出を行った。続いて得られた逆抽出液（８Ｌ）を濃縮した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ‐２０カラム（３Ｌ容）に付し、カラムを１０ｍＭギ酸アンモニウム水、水、及び４０％アセトン水で洗浄の後、６０％アセトン水（１１Ｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。この溶出液を減圧濃縮、凍結乾燥して粗粉末（１１．１ｇ）を得た。
1) Extraction of mixed coarse powder After 30 L of acetone was added to the culture end liquid (30 L) obtained in Example 1, Celite 545 (1.5 kg) was added as a filter aid, followed by filter press filtration. The obtained filtrate and washing solution were combined (54 L), the pH was adjusted to 3 with 75% sulfuric acid, 632 g of sodium chloride was added, and extraction was performed 3 times with 20 L, 15 L, and 17 L of ethyl acetate. To the obtained solvent layer (83 L), 0.2 M phosphate buffer (1.6 L) adjusted to pH 7 was added, followed by concentration under reduced pressure to 10 L. Next, the obtained solution was back-extracted twice with 1.6 L and 0.5 L of the 0.2 M phosphate buffer. Subsequently, the obtained back extract (8 L) was concentrated and then applied to a Diaion HP-20 column (3 L) equilibrated with water, and the column was washed with 10 mM ammonium formate water, water, and 40% acetone water. After washing, desalting was performed by eluting the active substance with 60% aqueous acetone (11 L). This eluate was concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain a crude powder (11.1 g).

この粗粉末のうち１０ｇを、ｐＨを６．８に調節した５０ｍＭリン酸バッファー（１２０ｍｌ）に溶解し、同一のリン酸バッファーで平衡化したコスモシルカラム（１Ｌ容：ナカライテスク社製）に付した。カラムを同溶媒１．５Ｌで洗浄の後、ｐＨ６．８に調整した５００ｍＭリン酸バッファーとアセトニトリルと水を混合して得られた５０ｍＭリン酸・３０％アセトニトリル水（２．５Ｌ）、続いて前記リン酸・アセトリトリル水と同様に調製した５０ｍＭリン酸・３５％アセトニトリル水（４．５Ｌ）で活性物質の溶出を行った。溶出液は１５ｍｌ毎に分画・回収した。得られたフラクション１３５から１７０を合わせてＢ２物質を含有する粗精製画分１（３７５ｍｌ）、フラクション１９１から２６０を合わせてＡ１物質を含有する粗精製画分２（１Ｌ）を、それぞれ得た。 10 g of this coarse powder was dissolved in a 50 mM phosphate buffer (120 ml) adjusted to pH 6.8 and applied to a cosmosyl column (1 L volume: manufactured by Nacalai Tesque) equilibrated with the same phosphate buffer. did. After washing the column with 1.5 L of the same solvent, 50 mM phosphate / 30% acetonitrile water (2.5 L) obtained by mixing 500 mM phosphate buffer adjusted to pH 6.8 with acetonitrile and water, followed by the above The active substance was eluted with 50 mM phosphoric acid / 35% acetonitrile water (4.5 L) prepared in the same manner as phosphoric acid / acetitolyl water. The eluate was fractionated and collected every 15 ml. Fractions 135 to 170 thus obtained were combined to obtain roughly purified fraction 1 (375 ml) containing B2 substance, and fractions 191 to 260 were combined to obtain roughly purified fraction 2 (1 L) containing A1 substance.

２）Ａ１物質の単離
上記の粗精製画分２を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末９６１．６ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち２００ｍｇをジメチルスルホキシド（８ｍｌ）に溶解し、１５０μｌを０．５％トリエチルアミン・４５％アセトニトリル水（ｐＨ３．３）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ、資生堂（株）製）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２９．２分に溶出される画分を分取した。この操作を５３回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ａ１物質（７８．９ｍｇ）を無色粉末として得た。 2) Isolation of substance A1 The above-mentioned roughly purified fraction 2 was concentrated under reduced pressure, and the resulting concentrated solution was applied to a Diaion HP-20 column (50 ml volume) equilibrated with water. The column was washed with water (250 ml) and then desalted by eluting the active substance with 90% acetone water (250 ml). The obtained eluate was concentrated under reduced pressure and lyophilized to obtain 961.6 mg of a crude purified powder. 200 mg of this crude purified powder was dissolved in dimethyl sulfoxide (8 ml), and 150 μl was equilibrated with 0.5% triethylamine / 45% acetonitrile water (pH 3.3) (Capsule pack (CAPCELL PAK) C18UG120, 20φ). X250 mm, manufactured by Shiseido Co., Ltd.) The column was developed at a flow rate of 10.0 ml / min, the ultraviolet absorption at 260 nm of the target substance was detected, and the fraction eluted at a retention time of 29.2 minutes was fractionated. This operation was performed 53 times. The obtained fractions having the same retention time were combined, adjusted to pH 7, and then concentrated under reduced pressure and applied to a Diaion HP-20 column (10 ml) equilibrated with water. The column was washed with water (50 ml) and then desalted by eluting the active substance with 70% acetone water (50 ml). The obtained eluate was concentrated under reduced pressure and lyophilized to obtain substance A1 (78.9 mg) as a colorless powder.

３）Ｂ２物質の単離
上記の粗精製画分１を減圧濃縮し、得られた濃縮液を水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（５０ｍｌ容）に付した。カラムを水（２５０ｍｌ) で洗浄した後、９０％アセトン水（２５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、粗精製粉末６８４．３ｍｇを得た。この粗精製粉末のうち６５０ｍｇをジメチルスルホキシドと５％トリエチルアミン水溶液（リン酸によりｐＨ３．３に調節）を９：１で混合した溶液（１１ｍｌ）に溶解し、このうち１００μｌを０．５％トリエチルアミンを含有する５１．３％アセトニトリル水（リン酸によりｐＨ３．３に調節）で平衡化したＨＰＬＣカラム（カプセルパック（ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ）Ｃ１８ＵＧ１２０、２０φ×２５０ｍｍ）に供与した。カラムを流速１０．０ｍｌ／分で展開し、目的物質の２６０ｎｍでの紫外部吸収を検出して、保持時間２６．５分に溶出される画分を分取した。この操作を１１０回に分けて行った。得られた同一保持時間の画分をあわせ、ｐＨを７に調節した後、減圧濃縮し、ｐＨを３に再調節した後、水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０カラム（１０ｍｌ）に付した。カラムを水（５０ｍｌ) で洗浄した後、７０％アセトン水（５０ｍｌ）で活性物質を溶出することにより脱塩を行った。得られた溶出液を減圧濃縮後、凍結乾燥し、Ｂ２物質（１４６．６ｍｇ）を無色粉末として得た。 3) Isolation of substance B2 The crudely purified fraction 1 was concentrated under reduced pressure, and the resulting concentrate was applied to a Diaion HP-20 column (50 ml volume) equilibrated with water. The column was washed with water (250 ml) and then desalted by eluting the active substance with 90% acetone water (250 ml). The obtained eluate was concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain 684.3 mg of a crudely purified powder. Of this roughly purified powder, 650 mg was dissolved in a solution (11 ml) in which dimethyl sulfoxide and a 5% triethylamine aqueous solution (adjusted to pH 3.3 with phosphoric acid) were mixed at a ratio of 9: 1, 100 μl of which was dissolved in 0.5% triethylamine. It was applied to an HPLC column (CAPCELL PAK C18UG120, 20φ × 250 mm) equilibrated with 51.3% acetonitrile water (adjusted to pH 3.3 with phosphoric acid). The column was developed at a flow rate of 10.0 ml / min, the ultraviolet absorption at 260 nm of the target substance was detected, and the fraction eluted at a retention time of 26.5 minutes was collected. This operation was performed 110 times. The obtained fractions with the same retention time were combined, adjusted to pH 7, concentrated under reduced pressure, readjusted to pH 3, and applied to a Diaion HP-20 column (10 ml) equilibrated with water. . The column was washed with water (50 ml) and then desalted by eluting the active substance with 70% acetone water (50 ml). The obtained eluate was concentrated under reduced pressure and lyophilized to obtain substance B2 (146.6 mg) as a colorless powder.

（実施例３）Ｂ２物質からＡ２物質への変換
以下の反応においては、活性画分を以下の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）でモニターした。
ｉ）Ｂ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：６．２分
ｉｉ）Ａ２物質
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ（インタクト株式会社製）ＵＫ−Ｃ１８：４．６φ×７５ｍｍ
溶媒：０．３％トリエチルアミン・５０％アセトニトリル水（ｐＨ３．０）
流速：０．７ｍｌ／分
検出：紫外部吸収２６０ｎｍ
保持時間：７．３分。 (Example 3) Conversion from substance B2 to substance A2 In the following reaction, the active fraction was monitored by the following high performance liquid chromatography (HPLC).
i) B2 substance Column: Unison (manufactured by Intact Corporation) UK-C18: 4.6φ × 75 mm
Solvent: 0.3% triethylamine, 50% acetonitrile water (pH 3.0)
Flow rate: 0.7 ml / min Detection: UV absorption 260 nm
Retention time: 6.2 minutes ii) A2 substance Column: Unison (manufactured by Intact Corporation) UK-C18: 4.6 φ × 75 mm
Solvent: 0.3% triethylamine, 50% acetonitrile water (pH 3.0)
Flow rate: 0.7 ml / min Detection: UV absorption 260 nm
Retention time: 7.3 minutes.

実施例２で得られたＢ２物質（５５ｍｇ）をメタノールとジメチルスルホキシドと水を４：３：１の割合で混合した溶液（０．８ｍｌ）に溶解し、基質溶液とした。この基質溶液２０μｌにｐＨを５に調節した０．１Ｍの酢酸−酢酸ナトリウムバッファーを１００μｌ、水７０μｌを順次添加した後、酵素溶液（ジャガイモ由来酸性フォスファターゼ（ＥＣ３．１．３．２：和光純薬（株）社製）１２．５ｍｇを上記０．１Ｍ酢酸−酢酸ナトリウムバッファー５０μｌに溶解し調製）を１０μｌ添加し反応を開始させた。、３７℃で３０分インキュベーションした後、この混合溶液に２００μｌのアセトニトリルを添加することにより、反応を終了させた。この終了液を７５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し残存酵素を沈殿させ、上澄に存在するＡ２物質を得た。 The substance B2 (55 mg) obtained in Example 2 was dissolved in a solution (0.8 ml) in which methanol, dimethyl sulfoxide and water were mixed at a ratio of 4: 3: 1 to obtain a substrate solution. 100 μl of 0.1 M acetic acid-sodium acetate buffer adjusted to pH 5 and 70 μl of water were sequentially added to 20 μl of this substrate solution, and then an enzyme solution (potato-derived acid phosphatase (EC 3.1.3.2: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). 12.5 mg (manufactured by Co., Ltd.) was dissolved in 50 μl of the 0.1M acetic acid-sodium acetate buffer, and 10 μl was added to initiate the reaction. After 30 minutes of incubation at 37 ° C., the reaction was terminated by adding 200 μl of acetonitrile to the mixed solution. This finished solution was centrifuged at 7500 rpm for 10 minutes to precipitate the remaining enzyme, and A2 substance present in the supernatant was obtained.

（試験例１）抗菌活性の測定（抗グラム陽性菌活性）
本発明のＡ１物質の黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）ＦＤＡ２０９ＰＪＣ−１株（以降Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株と略記)に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定は、以下の方法で行った。検体水溶液を１０００μｇ／ｍｌの濃度より２倍希釈し、１４段階（１０００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、６２．５μｇ／ｍｌ、３１．３μｇ／ｍｌ、１５．６μｇ／ｍｌ、７．８μｇ／ｍｌ、３．９μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、０．２４μｇ／ｍｌ、０．１２μｇ／ｍｌ）の希釈液を調製した。各希釈液を丸型シャーレ（９０φ×２０ｍｍ、テルモ社製）に１ｍｌずつ分注後、ミュラー−ヒントン寒天（Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎａｇａｒ）培地（ＢＢＬ社製）を９ｍｌ加えて混合し、平板とした。被検菌Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株をトリプトソイブイヨン（ＴＳＢ）培地（栄研化学社製）にて３７℃、一夜前培養した。試験当日、得られた菌液を、ＴＳＢを用いて１００倍に希釈し、その１白金耳を平板培地に画線塗沫した。この画線塗沫した平板培地を３７℃、１８時間培養した後、ＭＩＣを判定した。
［表６］抗菌活性（抗グラム陽性菌活性）
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試験化合物ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
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被検菌Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ
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Ａ１物質６．２５
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以上の結果から、Ａ１物質は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ２０９Ｐ株に対して抗菌活性を有することが示された。 (Test Example 1) Measurement of antibacterial activity (antigram-positive bacteria activity)
The minimum inhibitory concentration (MIC) of Staphylococcus aureus FDA209P JC-1 strain (hereinafter abbreviated as S. aureus 209P strain) of substance A1 of the present invention was measured by the following method. The sample aqueous solution was diluted 2 times from the concentration of 1000 μg / ml, and 14 levels (1000 μg / ml, 500 μg / ml, 250 μg / ml, 125 μg / ml, 62.5 μg / ml, 31.3 μg / ml, 15.6 μg / ml) 7.8 μg / ml, 3.9 μg / ml, 2 μg / ml, 1 μg / ml, 0.5 μg / ml, 0.24 μg / ml, 0.12 μg / ml). Each dilution was dispensed into a round petri dish (90φ × 20 mm, Terumo) in an amount of 1 ml, and 9 ml of Mueller-Hinton agar medium (BBL) was added and mixed to obtain a flat plate. Test bacteria The aureus 209P strain was pre-cultured overnight at 37 ° C. in tryptic soy bouillon (TSB) medium (Eiken Chemical Co., Ltd.). On the day of the test, the obtained bacterial solution was diluted 100 times with TSB, and one platinum loop was smeared on a flat plate medium. After this streaked plate medium was cultured at 37 ° C. for 18 hours, MIC was determined.
[Table 6] Antibacterial activity (anti-gram positive bacteria activity)
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Test compound MIC (μg / ml)
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Test bacteria aureus 209P
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A1 substance 6.25
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From the above results, the A1 substance It was shown to have antibacterial activity against aureus 209P strain.

（試験例２）トランスロケースＩ酵素阻害活性の測定
本発明の各化合物のトランスロケースＩに対する酵素阻害活性は、酵素とＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎ^ε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニン（ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−Ａｌａ−γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍ−ＤＡＰ−（Ｎ^ε−ｄａｎｓｙｌ）−Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ）及びウンデカプレニルリン酸（ｕｎｄｅｃａｐｒｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ)の反応を用いて測定した。
すなわち、トランスロケースＩをコードしたプラスミドを有する大腸菌、Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐＴＡ５株を培養して得られる菌体を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）中にて超音波破砕した後、粗抽出液を超遠心し、得られた沈殿を界面活性化剤で可溶化した溶液を酵素源として使用した。ＵＤＰ−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−γ−Ｄ−グルタミル−ｍ−ジアミノピメリル−（Ｎ^ε−ダンシル）−Ｄ−アラニル−Ｄ−アラニンとウンデカプレニルリン酸を酵素液とともにインキュベートした後、酵素反応により増加した蛍光度を、励起波長３５５ｎｍ、検出波長５３８ｎｍの条件で定量して酵素活性とし、５０％酵素阻害濃度（ＩＣ_５０）は、同時に添加した阻害剤の濃度と阻害率から計算して求めた。
[表７]トランスロケースＩ阻害活性
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試験化合物ＩＣ_５０値（μｇ／ｍｌ）
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Ａ１物質０．００２４
Ｂ２物質０．１０
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Ａ１物質及びＢ２物質は、トランスロケースＩに対し阻害活性を示した。 Test Example 2 Measurement of Translocase I Enzyme Inhibitory Activity The enzyme inhibitory activity of each compound of the present invention against translocase I was determined by the enzyme and UDP-N-acetyl-L-alanyl-γ-D-glutamyl-m-. Jiaminopimeriru ^- (N ε - dansyl)-D-alanyl-D-alanine (UDP-N-acetylmuramyl-L -Ala-γ-D-Glu-m-DAP- (N ε -dansyl) -D-Ala- D-Ala) and undecaprenyl phosphate reaction.
That is, E. coli having a plasmid encoding translocase I, E. coli. The cells obtained by culturing the E. coli / pTA5 strain were sonicated in Tris-HCl buffer (pH 8.0), and then the crude extract was ultracentrifuged. The resulting precipitate was treated with a surfactant. The solubilized solution was used as the enzyme source. After incubating UDP-N-acetyl-L-alanyl-γ-D-glutamyl-m-diaminopimeryl- (N ^ε -dansyl) -D-alanyl-D-alanine and undecaprenyl phosphate with the enzyme solution, The fluorescence increased by the enzyme reaction is quantified under the conditions of excitation wavelength 355 nm and detection wavelength 538 nm to obtain enzyme activity. The 50% enzyme inhibitory concentration (IC ₅₀ ) is calculated from the concentration and inhibition rate of the inhibitor added simultaneously. Asked.
[Table 7] Translocase I inhibitory activity ―――――――――――――――――――――――――――――――
Test compound IC ₅₀ value (μg / ml)
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A1 substance 0.0024
B2 substance 0.10
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A1 substance and B2 substance showed inhibitory activity against transrocase I.

（製剤例）カプセル剤
Ａ１物質１００ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
トウモロコシ澱粉１４８．８ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム１．２ｍｇ
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全量３５０ｍｇ
上記処方の粉末を混合し、６０メッシュのふるいに通した後、この粉末をゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。 (Formulation example) Capsule A1 substance 100mg
Lactose 100mg
Corn starch 148.8mg
Magnesium stearate 1.2mg
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Total amount 350mg
After mixing the powder of the said formulation and letting it pass through a 60-mesh sieve, this powder is put into a gelatin capsule to make a capsule.

Claims

The following general formula (I):
(I)
[Wherein, X represents a hydroxyl group or a phosphate group, and when X is a hydroxyl group, R represents — (CH ₂ ) ₈ CH (CH ₃ ) ₂ ] or — (CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ And when X is a phosphate group, R represents — (CH ₂ ) ₁₀ CH (CH ₃ ) ₂ ]
Or a salt thereof.

A compound or salt thereof having the following physicochemical properties.
1) Material properties: colorless powdery material 2) Solubility: soluble in methanol, dimethyl sulfoxide, insoluble in chloroform 3) Molecular formula: C ₄₃ H ₆₉ N ₅ O ₁₈
4) Molecular weight: 943 (measured by FAB mass spectrum method)
5) The accurate mass [M + H] ⁺ measured by the high resolution FAB mass spectrum method is as follows.
Actual value: 944.4671
Calculated value: 944.4716
6) Ultraviolet absorption spectrum:
The ultraviolet absorption spectrum measured in dimethyl sulfoxide shows the following maximum absorption:
263 nm (ε8300)
7) Optical rotation:
The optical rotation measured in dimethyl sulfoxide shows the following values:
[α] _D ²⁹ : + 1.5 ° (c0.4)
8) Infrared absorption spectrum:
The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide (KBr) tablet method shows the maximum absorption shown below.
3388, 2954, 2926, 2855, 1736, 1699, 1632, 1466, 1393, 1269, 1122, 1068, 1015 cm ⁻¹
9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (4.78 ppm) as an internal standard is as follows.
0.74 (6H, d, J = 6.7 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.0-1.2 (14H, m), 1.37 (1H, m ), 1.49 (2H, m), 2.0-2.3 (5H, m), 2.33 (3H, s), 2.5 (2H, m), 2.95 (1H, m) 2.97 (3H, s), 3.02 (1H, dd, J = 2.0, 3.7 Hz), 3.12 (1H, dd, J = 3.7, 13.4), 3. 29 (1 H, m), 3.30 (3 H, s), 3.65 (1 H, d, 4.7 Hz), 3.78 (1 H, d, J = 8.7 Hz), 3.93 (1 H, dd, 5.4, 7.4 Hz), 3.97 (1 H, m), 4.05 (1 H, dd, J = 3.3, 7.4 Hz), 4.07 (2 H, m), 4. 18 (1H, d, J = 4.7 Hz), 4.27 (1H, dd, = 3.3, 8.7 Hz), 5.11 (1 H, m), 5.13 (1 H, s), 5.37 (1 H, m), 5.50 (1 H, d, J = 2.7 Hz) ), 5.59 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.68 (1H, d, J = 8.0 Hz) ppm
10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (49.0 ppm) as an internal standard is as shown below.
20.1 (q), 23.1 (q), 23.1 (q), 26.3 (t), 28.6 (t), 28.7 (d), 29.2 (d), 30 .4 (t), 30.6 (t), 30.7 (t), 31.0 (t), 35.1 (t), 37.8 (q), 39.0 (q), 40. 2 (t), 40.4 (t), 41.6 (t), 41.6 (t), 41.8 (t) 58.2 (t), 58.7 (q), 64.1 ( d), 67.7 (d), 70.7 (d), 71.6 (d), 71.9 (d), 73.7 (d), 74.9 (d), 79.2 (d ), 80.5 (d), 84.9 (d), 85.7 (d), 92.8 (d), 102.3 (d), 109.1 (d), 143.4 (d) , 152.0 (s), 166.3 (s), 171.0 (s), 172.8 (s), 173.0 (s), 173.8 (s), 176.4 ( ) Ppm

A compound or salt thereof having the following physicochemical properties.
1) Substance properties: colorless powdery substance 2) Solubility: soluble in methanol and dimethyl sulfoxide, insoluble in chloroform 3) Molecular formula: C ₄₅ H ₇₄ N ₅ O ₂₁ P
4) Molecular weight: 1051 (measured by FAB mass spectrum method)
5) The exact mass [M−H] ⁻ measured by the high resolution FAB mass spectrum method is as follows.
Actual value: 1050.4550
Calculated value: 1050.4536
6) Ultraviolet absorption spectrum:
The ultraviolet absorption spectrum measured in methanol shows the following maximum absorption:
262 nm (ε7900)
7) Optical rotation:
The optical rotation measured in methanol shows the following values:
[α] _D ²⁹ : + 7.0 ° (c0.8)
8) Infrared absorption spectrum:
The infrared absorption spectrum measured by the potassium bromide (KBr) tablet method shows the maximum absorption shown below.
3397, 2926, 2854, 1735, 1700, 1466, 1385, 1268, 1129, 1074, 938 cm ⁻¹
9) ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹ H-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (4.78 ppm) as an internal standard is as follows.
0.79 (6H, d, J = 6.6 Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.6 Hz), 1.09 (2H, m), 1.2-1.3 (16H, m ), 1.43 (1H, m), 1.55 (2H, m), 2.1 (2H, m), 2.2-2.3 (3H, m), 2.38 (3H, s) 2.55 (2H, m), 3.02 (3H, s), 3.0 (1H, br.m), 3.2 (2H, m), 3.36 (3H, s), 3. 40 (1H, m), 3.82 (1H, d, J = 4.4 Hz), 3.86 (1H, d, J = 8.4 Hz), 3.97 (1H, dd, J = 5.9) , 6.6 Hz), 4.11 (2H, m), 4.17 (2H, m), 4.30 (1 H, dd, J = 4.0, 8.4 Hz), 4.52 (1 H, m ), 5.14 (1H, m), 5.15 (1H, m), 5.44 (1H, m) ), 5.62 (1H, d, J = 3.3Hz), 5.76 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.72 (1H, d, J = 8.1Hz) ppm
10) ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum:
The ¹³ C-nuclear magnetic resonance spectrum measured in deuterated methanol using deuterated methanol (49.0 ppm) as an internal standard is as shown below.
20.2 (q), 23.1 (q), 26.3 (t), 28.5 (t), 28.9 (d), 29.2 (d), 30.4 (t), 30 .6 (t), 30.7 (t), 30.7 (t), 30.8 (t), 31.0 (t), 35.1 (t), 38.0 (q), 39. 0 (q), 40.3 (t), 40.4 (t), 41.4 (t), 41.7 (t), 42.3 (t), 58.4 (t), 59.1 (Q), 64.0 (d), 68.2 (d), 70.8 (d), 71.9 (d), 74.1 (d), 74.4 (d), 75.1 ( d), 78.9 (d), 79.2 (d), 84.9 (d), 85.3 (d), 92.0 (d), 102.7 (d), 109.1 (d) ), 143.0 (d), 152.1 (s), 166.3 (s), 171.0 (s), 173.0 (s), 73.8 (s), 177.1 (s) ppm

Culturing the bacterium producing the compound according to any one of claims 1 to 3 belonging to the genus Streptomyces, and collecting the compound according to any one of claims 1 to 3 from the culture. The method for producing a compound according to any one of claims 1 to 3, wherein:

The production method according to claim 4, wherein the producing bacterium is Streptomyces sp. SANK60704 (FERM BP-10629).

A microorganism belonging to the genus Streptomyces and producing the compound according to any one of claims 1 to 3.

Streptomyces sp. SANK60704 (FERM BP-10629).

In the general formula (I), X is a phosphate group. The compound according to claim 1 or a salt thereof is subjected to a dephosphorylation reaction. In the general formula (I), X is a phosphate group. A method for producing a compound or a salt thereof according to claim 1, wherein X is a hydroxyl group and R is the same as the starting material in the general formula (I) using the compound or the salt thereof according to Item 1 as a starting material.

The method according to claim 8, wherein a phosphatase is used.

The pharmaceutical which contains the compound of any one of Claims 1 thru | or 3, or its pharmacologically acceptable salt as an active ingredient.

The medicament according to claim 10, which is an antibacterial agent.