JP2008509224A - 炎症状態を治療するためのオリーブ組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

ヒドロキシチロソールに富む組成物で炎症状態を治療する方法。ホモシステイン又はＣ反応性タンパク質などのバイオマーカーのレベルの減少として、改善をモニターする。組成物は、バイオマーカーのレベルの低下をもたらすのに十分な量及び期間で投与することができる。

Description

地中海地方の食事の主要な脂肪成分であるオリーブ油は、冠動脈性心疾患（Ｏｗｅｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、３６巻、１２３５〜１２４７頁、２０００年ｂ；Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、８７巻、３８９４〜３８９８頁、１９９０年；Ｍａｔｔｓｏｎ及びＧｒｕｎｄｙ、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ、２６巻、１９４〜２０２頁、１９８５年）、並びにある種の癌（ｄ’Ａｍｉｃｉｓ及びＦａｒｃｈｉ、「Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ ２」、Ｚａｐｐｉａら編集、６７〜７２頁、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９９年；Ｂｒａｇａら、Ｃａｎｃｅｒ、８２巻、４４８〜４５３頁、１９９８年；Ｍａｒｔｉｎ−Ｍｏｒｅｎｏら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、５８巻、７７４〜７８０頁、１９９４年）の発生率の低下と関連づけられていた。いくつかの研究機関は、オリーブ油のフェノール性のオレウロペイン及び他のファミリーメンバーを加水分解すると、化学的保護活性の強い小型のフェノール成分がもたらされることを報告している（Ｏｗｅｎら、Ｊ．Ｃａｎ．Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃ、１２５巻、Ｓ３１頁、２０００年ａ；Ｍａｎｎａら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、４７０巻、３４１〜３４４頁、２０００年）。特にオリーブ油のフェノール性のヒドロキシチロソールは、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）の酸化（Ｖｉｓｉｏｌｉ及びＧａｌｌｉ、Ｎｕｔｒ Ｒｅｖ、５６巻（５Ｐｔ１）１４２〜１４７頁、１９９８年）、血小板凝集（Ｐｅｔｒｏｎｉら、Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ、７８巻、１５１〜１６０頁、１９９５年）を防ぎ、５−及び１２−リポキシゲナーゼを阻害する（ｄｅ ｌａ Ｐｕｅｒｔａら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５７巻、４４５〜４４９頁、１９９９年；Ｋｏｈｙａｍａら、Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ、６１巻、３４７〜３５０頁、１９９７年）。ヒドロキシチロソールは、過酸化亜硝酸依存のＤＮＡ塩基修飾、及びチロシンのニトロ化に阻害作用を表すことも見出されており（Ｄｅｉａｎａら、Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ、２６巻、７６２〜７６９頁、１９９９年）、またヒトの様々な細胞システムで反応性酸素種により誘導される細胞毒性に対抗する（Ｍａｎｎａら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、４７０巻、３４１〜３４４頁、２０００年）。オリーブ油から得られたヒドロキシチロソール及びオレウロペインの、それぞれ単一の及びポリフェノールの使用は、皮膚の損傷の治療にさらに用いられてきた（Ｐｅｒｒｉｃｏｎｅ、米国特許第６４３７００４号）。バイオアベイラビリティーを評価する試験は、ヒドロキシチロソールは、経口摂取後、ヒトでは用量依存的に吸収されることを示している（Ｖｉｓｉｏｌｉら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ、４６８巻、１５９〜１６０頁、２０００年）。オリーブ由来のフェノール類は、また、炎症又は炎症に関連する状態の治療について記載されている（Ｃｒｅａ、米国特許公開第２００４／００３９０６６号Ａ１）。最後に、オリーブ油に富む食事、及び調理された野菜は、関節リウマチの危険を低下させることがある（Ｌｉｎｏｓら、Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ、７０巻（６）、１０７７〜１０８２頁、１９９９年）。

一態様では、ヒト対象における炎症状態を治療する方法を記載する。この方法は、（ｉ）ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップと、（ｉｉ）対象のホモシステインレベルの低下により対象における改善をモニターするステップと、（ｉｖ）少なくとも７．５％のホモシステインレベルにおける低下をもたらすのに十分な量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物の投与を継続するステップとを含む。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物のヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比は、約１０：１と約１００：１の間である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、純粋な、又は実質的に純粋なヒドロキシチロソールである。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与する。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約５．４から１０．８ｍｇの間の全ポリフェノールを送達するのに有効な投与量で投与する。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量で投与する。

改善をモニターするステップは、対象のバイオマーカーの血漿、血清、及び／又は唾液のレベルをモニターすることを含んでもよい。一実施形態では、バイオマーカーはホモシステインである。この実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のレベルに対して少なくとも約１２．５％のホモシステインの低下を達成するまで、ある投与量及び期間で投与することができる。炎症状態は、関節リウマチであってよく、この場合、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のレベルに対して少なくとも約１５％のホモシステインの低下を達成するまで投与する。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のレベルに対して少なくとも約２０％のホモシステインの低下を達成するまで投与する。さらに別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、ホモシステインレベルが正常又は実質的に正常になるまで投与する。

別の一実施形態では、炎症状態は血管疾患であり、治療前のレベルに対して少なくとも約２０％のホモシステインの低下を達成するまでヒドロキシチロソールに富む組成物を投与する。

別の一態様では、ホモシステインレベルの上昇に関連する炎症疾患の危険にあるヒトにおけるホモシステインの血漿レベルを低下させるための方法を記載する。この方法は、（ｉ）血漿ホモシステインレベルをホモシステインの正常範囲内に低下させるのに有効な量及び期間でヒドロキシチロソールに富む組成物をヒトに投与するステップを含む。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物のヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比は、約１０：１と約１００：１の間である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は純粋な、又は実質的に純粋なヒドロキシチロソールである。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与する。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量で投与する。

ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のホモシステインのレベルに対して少なくとも約７．５％のホモシステインの低下を達成するまである投与量及び期間で投与することができる。

さらに別の一態様では、血漿ホモシステインレベルの上昇を有する患者における心臓血管疾患の危険を低下させるための方法は、患者の血漿ホモシステインレベルをホモシステインの正常範囲内に低下させるのに有効な量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップを含む。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のホモシステインのレベルに対して少なくとも約７．５％のホモシステインの低下を達成するまで、ある投与量及び期間で投与する。

ヒドロキシチロソールに富む組成物では、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比が、約１０：１と約１００：１の間であることができる。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与する。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量で投与する。

さらに別の一態様では、血漿Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルの上昇を有する対象における心臓血管疾患の危険を低下させるための方法は、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、患者のＣＲＰレベルを正常範囲内に低下させるのに有効な投与量及び期間で対象に投与するステップを含む。

別の一態様は、炎症状態に関連する血漿ホモシステインレベルの上昇を有するヒト対象の集団から、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与することにより治療に最も大きな反応を示すであろう反応性の対象を同定する方法である。この方法には、（ｉ）反応性の対象における血漿ホモシステインレベルを実質的に低下させるのに有効な投与量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物を投与するステップと、（ｉｉ）対象のホモシステインレベルをモニターするステップと、（ｉｉｉ）対象のホモシステインレベルが正常範囲内に低下した場合に、対象を反応性の対象として同定するステップとを含む。

モニターするステップは、対象の血清、血漿、及び／又は唾液のホモシステインレベルをモニターすることを含むことができる。

さらなる一態様では、（ｉ）ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップと、（ｉｉ）対象のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルの低下により、対象における改善をモニターするステップと、（ｉｉｉ）少なくとも５０％のＣＲＰレベルの低下をもたらすのに十分な量及び期間で前記投与するステップを継続するステップとを含む、ヒト対象における炎症状態を治療する方法を記載する。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物のヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比は、約１０：１と約１００：１の間である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、純粋な、又は実質的に純粋なヒドロキシチロソールである。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与する。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約５．４から１０．８ｍｇの間の全ポリフェノールを送達するのに有効な投与量で投与する。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量で投与する。

改善をモニターするステップは、対象の血漿、血清、及び／又は唾液のＣＲＰレベルをモニターすることを含むことができる。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、治療前のレベルに対して少なくとも約７５％のＣＲＰの低下を達成するまで、ある投与量及び期間で投与することができる。

一実施形態では、状態は関節リウマチである。

本出願に引用するすべての出版物、特許、特許出願、又は他の参考文献は、個々の出版物、特許、特許出願、又は参考文献が、特に、且つ個々に、参照として組み入れられることを指摘するように、その全文が参照により本明細書に組み入れられる。

Ｉ．定義
別段の指摘がなければ、本明細書に用いられる用語はすべて、本発明の当業者にとっての意味と同じ意味を有する。記載されている特定の方法論、プロトコル、及び試薬は、変化することがあるので、本発明は、これらに限定されるものではないことを理解されたい。

用語「治療」は、患者、特にヒトにおける疾患若しくは状態の発症を阻害若しくは停止すること、疾患若しくは状態の後退をもたらすこと、又は、疾患若しくは状態に関連する症状を軽減することを意味する。用語「治療する」は、身体の状態の予防、或いは、一旦確立した発症した状態の改善及び／又は除去、或いはこのような状態の特徴的な症状の緩和を含む。

「経口」は、口による投与、或いは胃内投与を含めた胃又は小腸内への直接投与を含む、あらゆる経路を意味する。

「オレウロペイン」は、セコイリドイドグルコシドオレウロペイン（図１の構造ＩＩ）を意味する。

「ヒドロキシチロソール」は、３，４−ジヒドロキシフェネチルアルコール（図１の構造ＶＩＩＩ）を意図する。

本明細書で用いる用語「有効量」は、炎症反応を受けやすい対象又は炎症反応に罹患している対象に投与した後、このような対象を予防又は治療するのに必要な物質の量を表す。この用語はさらに、バイオマーカーの血漿、血清、及び／又は唾液のレベルを変更するのに必要なヒドロキシチロソールに富む組成物の量を表す。有効化合物は、広い投与量範囲にわたり有効であることができる。実際に投与する化合物の量は、治療すべき状態、年齢、体重、及び個々の患者の反応、患者の症状の重症度、及び選択した投与経路を含めた、関連した状況を考慮して医師が決定することが理解されよう。

本明細書で用いる用語「実質的に精製した」は、その天然の環境から取り除き、単離し、又は分離した化合物又は化合物類を意味し、それらが天然に伴う他の化合物が、少なくとも６０％含まず、好ましくは７５％含まず、より好ましくは８５％含まず、さらにより好ましくは９０％含まず、なおより好ましくは９５％含まず、最も好ましくは９９％含まない。

略語：ＩＬ６：インターロイキン−６、ＩＬ８：インターロイキン−８、ＩＬ２：インターロイキン−２、ＩＬ１β：インターロイキン−１β、ＭＭＰ：マトリックスメタロプロテイナーゼ、ＴＩＭＰ：メタロプロテイナーゼの組織阻害剤、ＨＡ：ヒアルロナン、ＣＯＭＰ：軟骨オリゴマーマトリックス（ｏｌｉｇｏｍａｔｒｉｘ）タンパク質、ＣＲＰ：Ｃ反応性タンパク質、関節リウマチ：ＲＡ、骨関節炎：ＯＡ

ＩＩ．方法
Ａ．ヒドロキシチロソールに富む組成物
一態様では、本発明は、炎症状態を治療するためのバイオマーカーの血漿、血清、及び／又は唾液のレベルを変更するのに効果的な組成物を提供する。別の一態様では、本発明は、心臓血管疾患の危険を低下させるためのバイオマーカーのレベルを変更するのに有効な組成物を提供する。

ヒドロキシチロソールに富む組成物は、当業者には周知の方法により、合成し、抽出し、及び／又は精製することができる。好ましい一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、オリーブからの果汁水分から得る。

１．果汁水分からのヒドロキシチロソールに富む組成物の生成
オリーブパルプの水性分画から生成されたヒドロキシチロソールに富む組成物は、ポリフェノール類が高レベルである天然の抗酸化剤として記載されている（Ｑｕｉｌｅｓら、２００２年）。

従来、オリーブ油生成は、種を含むオリーブを破砕して濃厚なペーストを生成することを伴う。この手順の間中、破砕されたオリーブは水で絶えず洗浄され、この過程は「練和」（ｍａｌａｘａｔｉｏｎ）として知られている。次いで、ペーストを機械的に圧搾して油分を絞り出す。オリーブ油を提供する他に、圧搾によりペーストの水分も絞り出す。このような洗浄及び圧搾のステップにより、「果汁水分」と呼ばれるかなりの量の水が生じる。

オリーブの種も果肉も、水溶性のフェノール性化合物が豊富である。このような化合物は、これらの分配係数にしたがって練和の間中オリーブから抽出され、最終的に果汁水分中にある。これは、オリーブ果肉で生成されるオレウロペイン及びその誘導体などの様々なフェノール性化合物を、果汁水分中に豊富に見ることができる理由の説明となっている。同様に、オリーブの種で生成されるチロソール及びその誘導体などの数々のモノフェノール性の化合物も、果汁水分中に豊富に見ることができる。

オリーブの果汁水分からのヒドロキシチロソールに富む組成物は、酸を加えて果汁水分を安定化することにより調製することができ、この場合、発酵を防ぐというさらなる利点もある。このやり方で、果汁水分におけるオレウロペインの少なくとも一部分がヒドロキシチロソールに変換される（Ｃｒｅａ、米国特許第６４１６８０８号、及び関連の米国公開第２００３／０１０８６５１号）。

オリーブは、栽培者などの、従来の、及び／又は市販の供給源から得ることができる。好ましくは、果汁水分を、種を取り除いたオリーブから得る。オリーブにおける種はチロソールを含むが、チロソールは、果汁水分では一般的には望ましくない成分であり、さらに下記に記載するヒドロキシチロソールに富む組成物に関して記載する酸処理によって、認め得るほどに破壊することができない。種は、以下に記載するように手動で、又は自動化したやり方で果肉から分離することができる。種は、好ましくは、このような手段は種を破壊しないで隔離することができなければならず、そうでなければ果汁水分におけるチロソールの濃度をより高くすることがあり得る。別の一実施形態では、果汁水分を、種を取り除いていないオリーブから得る。

果汁水分を生成するために、オリーブからのオリーブ果肉を最初に圧搾して、オリーブ油、果汁水分、及び固体の副生成物を含む液相の混合物を得る。その後、果汁水分を、残りの液相混合物から分離し、回収する。果汁水分を得る例示の方法は、共同所有の米国特許出願第６１６５４７５号、及び第６１９７３０８号に記載されており、その両方とも、その全文が参照として本明細書に明確に組み入れられる。

商業生産の目的では、本発明の様々な態様を自動化することが望ましいことがある。この点に関しては、一実施形態が、各々がＦｉｎｃｈらに対し、その各々が本明細書に参照として明確に組み入れられる米国特許第４４５２７４４号、第４５２２１１９号、及び第４３７０２７４号に開示されている装置の使用を企図している。手短に述べると、Ｆｉｎｃｈらは、オリーブからオリーブ油を回収するための装置を教示している。最初に、オリーブからオリーブの種を分離するパルパーにオリーブを送って、種のないオリーブの食用部を得る。次いで、食用部を、油、水、及びより少ない割合のオリーブ果肉を含む液相を取り除くのに十分な抽出圧力に食用部をかける抽出スクリューによって食用部を取り込む。液相を容器中に回収し、次いで、果肉を液相から分離する浄化遠心機に送り、オリーブ油と果汁水分を含む混合物を得る。精製用遠心機を用いて、混合物から、果汁水分とわずかな割合の固体物質を分離することができる。

本発明を実践するのに用いることができるさらなるデバイスは、イタリア特許第１２７６５７６号、及び第１２７８０２５号に開示されており、その各々が参照として本明細書に明確に組み入れられる。上記のように、これらのデバイスを用いて、果肉を種から分離し、その後、破砕されたオリーブ果肉を油、水、及び固体残留物に処理加工することができる。

上記に記載したように、果汁水分は、水溶性のフェノール性化合物に富む。オリーブ果肉抽出物は、約６〜９％の全フェノール性化合物を含む。オリーブ油で検出されるフェノール性化合物、及びそれらの前駆物質の構造を、図１に示す。リグストロサイド（ｌｉｇｓｔｒｏｓｉｄｅ）（Ｉ）、オレウロペイングルコシド（ＩＩ）、リグストロサイドのアグリコン（ＩＩＩ）、オレウロペイングルコシドのアグリコン（ＩＶ）、カルボキシメチル基を欠くリグストロサイドアグリコンのジアルデヒド形態（Ｖ）、カルボキシメチル基を欠くオレウロペイングルコシドのアグリコンのジアルデヒド形態（ＶＩ）、チロソール（ＶＩＩ）、及びヒドロキシチロソール（ＶＩＩＩ）。ヒドロキシチロソールは、通常、オリーブ果肉固体抽出物に、約４０〜５０％の全フェノール性化合物を含む。組成物は、１つの、いくつかの、又はすべてのフェノール性組成物を、様々な割合で含むことができることが理解されよう。果汁水分組成物は、任意の組合せのフェノール性化合物を、望ましい量、及び／又は割合で含むように配合することができることが、さらに理解されよう。

好ましくは、果汁水分に含まれる少なくとも１部分のオレウロペインをヒドロキシチロソールに変換して、ヒドロキシチロソールに富む組成物を調製する。一実施形態では、共同所有の米国特許第６４１６８０８号、及び米国特許出願第２００３／０１０８６５１号に記載されているように、酸を加えることにより果汁水分のｐＨを低下させることができ、オレウロペインのヒドロキシチロソールへの酸加水分解を促進する条件下で果汁水分をインキュベートする。次いで、サンプルを分留又は抽出して、他の化合物からヒドロキシチロソールを分離することができる。

果汁水分に酸を加えて、好ましくはｐＨを１と５の間に調節し、より好ましくはｐＨを２と４の間に調節する。好ましくは、クエン酸を用いて果汁水分のｐＨを調節する。固体のクエン酸を加えることができ、果汁水分約１０００リットルにつき約１０から２０ｋｇの酸の量で絶えず撹拌する。得られた溶液のｐＨをモニターすることができ、さらなる酸の添加などによりｐＨを調節して望ましいｐＨを達成し維持することができる。

他の実施形態では、酸は、クエン酸以外の有機酸又は無機酸であることができる。例示的な酸には、硫酸、硝酸、塩酸、及びリン酸を含む鉱酸として知られている無機物質が含まれる。さらなる例示の酸は、カルボキシル酸、スルホン酸、及びフェノール（ベンジル）グループに属する有機化合物である。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールが、オレウロペイン及びヒドロキシチロソールの全組合せの約７５〜９０％を構成するまで、混合物をインキュベートする。別の一実施形態では、オリジナルの混合物における実質的にすべてのオレウロペインがヒドロキシチロソールに変換される。

２．精製
オレウロペインをヒドロキシチロソールに変換した後、インキュベートした果汁水分を、当技術分野で知られているあらゆる適切な方法により、精製し、又は分留することができる。分留の例示的な方法には、酢酸エチルなどの有機溶剤との分配、ゲルクロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含むクロマトグラフィー法、又は二酸化炭素などの超臨界の液体での液体抽出が含まれる。他の実施形態では、超臨界の液体は、メタン、エタン、プロパン、ブタン、イソブタン、エテン、プロペン、ヒドロフルオロカーボン、テトラフルオロメタン、クロロジフルオロメタン、一酸化二窒素、六フッ化イオウ、アンモニア、及び塩化メチルから選択される。２つ以上の超臨界の液体を組み合わせて使用できることが理解されよう。

超臨界の液体で抽出する前に、果汁水分は、溶液に添加した、マルトデキストラン及び／又はポリプロピレンのビーズなどの担体を有することができる。上記に記載したように、本発明にしたがって、さらなる精製方法も用いることができる。ヒドロキシチロソールのＨＰＬＣ単離は、Ｆｉｃａｒｒａら、Ｆａｒｍａｃｏ、４６巻、８０３〜８１５頁、１９９１年；Ｒｏｍａｎｉら、Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ、４７巻、９６４〜９６７頁、１９９９年；及びＴｓｉｍｉｄｏｕ、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ、４４巻、５３〜６０頁、１９９２年に記載されており、その各々が本明細書に参照として明確に組み入れられる。

別の一実施形態では、所望のポリフェノールの抽出又は精製の前又は後に、溶液を乾燥することができる。乾燥のステップにより、好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９８％の水分を果汁水分から除去する。

一実施形態では、果汁水分を上記に記載したように得、酸性化して、低分子量の単一のフェノール及びポリフェノール、特にヒドロキシチロソールに富む溶液を提供する。好ましい一実施形態では、果汁水分は、他の成分の存在なしに、選択的にヒドロキシチロソールを濃縮する。このようにして、主要なポリフェノール成分であるヒドロキシチロソールを、果汁水分に含まれているポリフェノールのファミリーの他のメンバー、不純物、懸濁した固体、タンニン、及び他の分子から、単離し、又は濃縮する。

さらに別の一実施形態では、組成物は、純粋な、又は実質的に純粋なヒドロキシチロソールからなる。

Ｂ．治療
さらに以下に記載するように、一態様では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、ヒト対象における炎症状態を治療する方法に有用であり、その結果、組成物の投与が、血漿、血清、及び／又は唾液の１つ又は複数のバイオマーカーのレベルにおける変化をもたらす。適切なバイオマーカーには、それだけには限定されない、サイトカイン、ＭＭＰ、Ｃ反応性タンパク質、及び／又はホモシステインが含まれる。バイオマーカーのレベルにおける変更は、マーカーに基づいて低下又は上昇であることができることが理解されよう。血漿、血清、及び／又は唾液のレベルの測定は、さらに実施例１に記載した通りに、及び／又は当技術分野では周知の方法によることができる。

一実施形態では、炎症状態は関節炎である。関節炎は、身体の骨関節の健康に影響を及ぼす一群の炎症状態である。米国では成人５人当たり１人が、何らかの形態の関節炎に罹患している（Ｖｉｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｔａｔ、１０巻（２２２）、２００４年）。最近の統計では、１８〜４４歳のヒトの７．９％（８５０万人）、４５〜６４歳のヒトの２８．８％（１８５０万人）、及び６５歳以上のヒトの４７．８％（１５７０万人）が、医師が診断した関節炎を報告していることが示されている（ＭＭＷＲ、５４巻（５）、１１９〜１２３巻、２００５年）。

関節炎疾患には、関節リウマチ（ＲＡ）、骨関節炎（ＯＡ）、若年性関節炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、及び狼瘡を含めて１００以上の型が存在する。関節炎疾患の原因は様々であり、関節リウマチ及び乾癬性関節炎などの自己免疫疾患、化膿性関節炎などの関節の炎症、より一般的な骨関節炎、即ち変形性関節疾患が含まれる。関節炎は、主に、高齢の個体に罹患する疾患であるが、１６歳未満の子供の約１０００人に１人が関節炎に罹患しているので、単なる成人の疾患ではない（ｗｗｗ．ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ｃａ）。多くの関節炎疾患における一般的な症状は、関節の炎症である。

最近１０年にわたり、オリーブ油に由来するポリフェノールの抗酸化特性に、多くの関心が寄せられている。ポリフェノールは、炎症性の障害、及びストレス関連障害に対する酸素フリーラジカルの有害な作用を低減するのに有益であるということを示唆する価値ある文献がある（Ｃａｒｌｕｃｃｉｏら、２００３年）。

１．関節リウマチ
関節リウマチ（ＲＡ）は、滑膜又は関節を裏打ちする組織が炎症を起こす自己免疫疾患であり、滑膜炎と呼ばれる。時が経つにつれて、この炎症は関節組織を破壊し、身体障害をもたらすことがある（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ）。関節リウマチは、最も重症で身体障害性の型の関節炎の１つであると、一般的に考えられている。関節リウマチには、男性よりも女性が罹患することが多い、というのは、関節リウマチの７０％は女性に生じ（ｗｗｗ．ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ｏｒｇ）、４０歳と６０歳の間に始まることが多い（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ）からである。

関節リウマチの原因は、未だ完全に理解されていない。関節リウマチを発症する遺伝的な素因が存在するようであるが、細菌感染、ウィルス感染、又は他の外来物質が免疫反応を引き起こす可能性がある。

異常な免疫反応が、関節を裏打ちする組織の炎症の進行、軟骨の破壊、並びに関節を支持している靭帯及び腱の弛みを引き起こす。炎症が進行すると、また、滑膜の、パンヌスと呼ばれる、厚く、異常な組織への成長を引き起こす。これらの過程は、関節、靭帯、及び腱を取り囲む、根底をなす骨である軟骨の破壊をもたらし、ついには関節の変形を引き起こすことがある。

関節リウマチを診断するために用いられる実験室の試験は、１つもない。その代わりに、関節リウマチは、通常、症状に基づいて、また同様の症状を引き起こすことがある他の疾患を除外することにより診断される（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ）。

２．骨関節炎
骨関節炎（ＯＡ）は、関節における軟骨の疾患である。骨関節炎は、通常軟骨により分離されている骨が相互にこすれあうまで、軟骨の進行性の破壊をおこす。これは、組織、及び根底をなす骨に損傷をもたらし、これが骨関節炎の苦痛のある関節の症状を引き起こす。

骨関節炎は、最も一般的な形態の関節炎であり、高齢の成人における疼痛及び身体障害の主な原因である。これには、指、股関節、膝、足、又は脊椎の関節が罹患することが最も多い。骨関節炎は、通常、関節リウマチなどの他のタイプの関節炎よりも、炎症を引き起こすことが少ない。

骨関節炎は、生成され得るよりも速い破壊を引き起こす、軟骨における化学的変化に起因する。ほとんどの場合では、この軟骨の破壊の原因は知られていない。いくつかの場合では、別の状態の結果として、２次性の骨関節炎が発症することがある（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ）。

骨関節炎には治療法がないが、多くの人は投薬及び生活様式の変化でその症状を管理することができる。少数の人では、摩耗した関節を置換し、又は融合するための外科手術を必要とするほど、骨関節炎が非常に重症になる。

関節リウマチ及び骨関節炎には、いくつかの共通の病理学的特徴がある。炎症は、両疾患で結果として起こる軟骨及び骨の損傷のきっかけとなるが、ＯＡの場合には、炎症は他の開始因子に２次的であると考えられている（Ｑｕｉｌｅｓら、２００２年、Ｃａｒｌｕｃｃｉｏら、２００３年、Ｌｅｅｎｅｎら、２００２年、Ｍａｎｎａら、１９９７年）。炎症は、その基質に細胞外マトリックスを構成するコラーゲン、プロテオグリカン、及び他の非コラーゲンタンパク質を含む多くの軟骨の構造タンパク質が含まれるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を含めた、多くのタンパク質分解性の酵素の過剰発現を誘発することは十分に支持されている（Ｋａｎｅｋｏら、２０００年、Ｓａｋｉｔｏら、１９９５年、Ｄｕｆｆ、１９９４年）。他の炎症化合物の中で、炎症誘発性のサイトカイン、特にＩＬ−１β及びＴＮＦ−αは、関節の軟骨細胞、滑膜細胞、及び線維芽細胞を刺激してＭＭＰの発現及び活性を上方制御するのに重要な役割を果たしていることを、多くの報告が示している。ＯＡ患者もＲＡ患者も、罹患している関節の滑液では、いくつかのＭＭＰ及び炎症誘発性のサイトカインのレベルが上昇している。ＭＭＰ及びサイトカインの血漿レベルの上昇は、ＲＡ罹患者で、またＯＡ患者でもある程度、報告されている。関節炎患者の血漿及び滑液におけるこれらの化合物の測定は、これらの疾患の診断及び予後診断で使用するための可能なバイオマーカーとして検討されている。

一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、関節炎の症状を治療し、又は改善するのに有用である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、関節炎に関連する炎症を低減するのに有用である。

理論によって拘泥されることはないが、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、（１）炎症誘発性サイトカインの阻害により、且つ抗炎症性のサイトカインの刺激により疼痛及び炎症を直接低減し、且つ／又は（２）ホルモンの変化により、特にコルチゾール及びプロラクチンの血漿レベルにおける変化を引き起こすことにより間接的に作用することにより、疾患活動性を低減するように作用することがあると仮定されている。

実施例１に表した結果から示されるように、バイオマーカーにおける低下により測定されるように、ヒドロキシチロソールに富む組成物は疾患活動性を低減するのに著しい効果があった。バイオマーカーのレベルは、本明細書に記載した方法、及び／又は当技術分野で周知の方法により、血漿、血清、及び／又は唾液から決定することができる。

一実施形態では、バイオマーカーはホモシステインである。好ましくは、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿ホモシステインレベルを、少なくとも７．５％、１２．５％、１５％、又は２０％低下させるのに有用である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿ホモシステインレベルを正常レベルに、又は正常レベル未満に低下させるのに有用である。

別の一実施形態では、バイオマーカーは、炎症のマーカーであるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。好ましくは、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿ＣＲＰレベルを少なくとも５０％低下させるのに有用である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿ＣＲＰレベルを少なくとも６３又は６５％低下させるのに有用である。別の一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿ＣＲＰレベルを正常レベルに、又は正常レベル未満に低下させるのに有用である。

しばしば、サプリメント又は治療の効果の最も強力なデータ、又は最も関連のある尺度は、ＨＡＱ（健康評価質問票）における変化により測定される。ＨＡＱは、関節リウマチ及び他の疾患における臨床試験の結果の尺度として頻繁に用いられる。ＨＡＱは、質問票により、日常生活の身体機能を行う際に患者が経験する困難の度合いを決定するものである。これには、着衣、摂食、起床、歩行、衛生、把握、及び伸びに対するデータが含まれている。これは最初の自己申告の機能の状態（身体障害）の尺度の１つであり、成功した加齢、骨関節炎に対する危険因子モデルの発症を予想するのに、また、関節リウマチ患者における死亡の危険性を調べるのに広く用いられている。

表４に見られるように、ヒドロキシチロソールに富む組成物を摂取する患者はすべて、日常の生活の活動において著しい改善を報告し、可動性における改善などを指摘した。このデータは、ＨＡＱスコアにおける改善によって指摘される日常生活の活動における変化を特に示している。表５及び６に見られるように、ヒドロキシチロソールに富む群とプラセボ群の間のＨＡＱスコアの差は、同じまま、悪くなった、又は改善を示した各群におけるパーセント値により比較した。これらの結果は、文献で確立されたように、医師が注目し、患者のライフスタイルにおける実質的な変化をもたらす量（＞０．２２）の改善を示している。ヒドロキシチロソールに富む群のヒトの５５％が生活の質の変化がよくなったと報告しているのに対し、プラセボ群では３８％であったことを、結果は指摘している。ヒドロキシチロソールに富む群の３７％が、＞０．２２の量において改善を示したが、プラセボ群では２９％だけしかこの変化を示さなかった。この分析は、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、関節炎の患者に有効であることを示している。

ＨＡＱスコアにおけるこれらの低下は、統計学的有意性（ｐ＜．０５）及び臨床的有意性、即ちＨＡＱスコアにおける＞．２０の変化を示すものである。ヒドロキシチロソールに富む組成物の投与量は１日当たり４カプセルが適量であり、試験自体は２カ月という期間で比較的短かったことを考慮すると、これらの変化は特に意義深い。

この結果は、ヒドロキシチロソールに富む治療群対プラセボ治療群における対象の自己評価における、統計学的に有意な改善（ｐ＝０．００８５）も示している。表５及び６に見られるように、ＨＡＱ応答における差は、疾患の診断（ＯＡ対ＲＡ）に強力に依存している。ＯＡ対象はＲＡ対象よりも、そのＨＡＱスコアにおいて３．１６倍の改善に性向を有していた（ｐ＝０．０４７）。ＯＡ患者は、疾患活動性において統計学的に有意な改善を示した。さらに、８週目までに、〜４０％の患者は少なくとも＞７５％の改善を報告し、〜９０％の患者は少なくとも＞２０％の改善を報告した。

ＨＡＱにおいて、．２２又はそれを超える絶対的変化は、臨床的に関連があると医師が注目する身体障害における変化を表すので、＞２０％のＨＡＱスコアの変化は注目に値する。ＲＡを有するさらなる患者は、機能状態における差として．２２又はそれを超える変化を認知する（Ｋｏｓｉｎｓｋｉら、２０００年）。

ヒドロキシチロソールに富む治療の対象でのＨＡＱスコアにおける改善は、ＲＡ対象よりもＯＡ対象で、より明らかだった。これは、ＲＡが、ＯＡとは対照的に自己免疫疾患であり、ＯＡは関節に局在化した疾患活動性（炎症）をもたらす関節の損傷の結果であることが多いという事実によることができる。ヒドロキシチロソール組成物が免疫機能の刺激物質である場合は、ＲＡ患者における疾患活動性は低減しないが、ヒドロキシチロソールに富む組成物は炎症及び疼痛を低減する作用を有することが可能である。この結果が示唆しているのは、炎症などに関連する関節にはより特異的な経路に関与する作用機序があることがあるということである。

気分プロフィール検査（ＰＯＭＳ）は、怒り、混乱、抑うつ、疲労、活気、及び緊張を測定することにより、個体の現在の感情の状態を決定するものである。対象は、６領域に関連する６０語の無作為のリストに対して自分の感情を０（まったくそうでない）から４（大変そうである）に評価するよう求められる。結果は、気分の状態を決定する各６領域におけるスコアに対して総計される。

図２に見られるように、全対象に対するＰＯＭＳの比較を行って、週ごとの対象の全体的な気分を評価した。下記に示すように、最初は全対象が、異常に高い障害スコア（約７）を有し、これは怒り及び緊張の測定値である。このスコアは、２週目に約３に低減され（定常状態）、研究の残りの間は０又は０未満であった。

最初の訪問の間の対象における高度な障害は、おそらく、新しい環境、並びに新しい場所に行き、新しい人々と新しい環境などで新しい研究に参加することの不確実さ及び不安によるものであった。これを制御するために、対象のデータを時間Ｖ２（治療１週間後）とＶ５（治療８週間後）との間で比べて、気分の変動に困惑しなかった対象における変化の尺度を得た。３つの従属変数に対する結果を、時間Ｖ２対時間Ｖ５の比較に基づいて計算した。これらの比較に対して対応のあるｔ検定を用いて、訪問２（１週間後）と訪問５（サプリメントの８週間後）との間の変化を評価した。対応のあるｔ検定を用いることにより、各個体を各自の対照として用いて、経時の変化を評価した。疾患の重傷度、薬物投与、ライフスタイル、社会的支援、食事、及び運動など、疾患活動性に影響を及ぼすことがある数々の変数を考慮すると、各自の対照として個体を用いることは、これらの変動の影響を制限する助けとなることができる。

２つの独立した尺度（ＨＡＱ及び医師の評価）により示されるように、時間をまたがる疾患活動性における著しい改善（対応のあるｔ検定により測定して）が、ヒドロキシチロソールに富む組成物を摂取した群に観察されたが、プラセボを摂取した群には観察されなかった。図３に見られるように、医師の疾患の評価は、プラセボを摂取した患者で約１８％だったのに比べて、有効成分を摂取した患者で少なくとも２５％低下した。

実施例１に示した結果は、ヒドロキシチロソールに富むものは、未だに同定されていないが、ある機序により、疼痛及び炎症を低減するように働き、骨関節炎及び関節リウマチの患者の可動性及び活動を増大するように働くことを示している。

図３は、２回目の訪問（Ｖ２）及び５回目の訪問（Ｖ５）における医師の疾患の評価に対するスコアを、プラセボ及びコントロール群における個体に対する平均＋／−標準誤差で示している。評価には、疼痛、運動、及び関節の腫脹、罹患した関節の数、及び関節炎の重症度などの因子の評価が含まれている。時間Ｖ２対時間Ｖ５における個々のスコアを比べる対応のあるｔ検定は、ヒドロキシチロソールに富む群のスコアで有意な低下（ｐ＜．０４９）を示すが、プラセボ群では有意な変化はなかったこと（スコアにおける約１８％の減少）を示している。ＯＡ患者もＲＡ患者も分析に含まれている。これは、医師の疾患活動性の評価により測定して、ヒドロキシチロソールに富む群では、時間２から時間５ではスコアに有意な低下があることを示しており、医師による測定でヒドロキシチロソールに富む組成物の疾患活動性を低減する効果を指摘している。結果は、疾患活動性における少なくとも１５％から３６％の低減を示しており、さらなる実施形態では疾患活動性に２３〜２５％の低減を示している。

図４に見られるように、日周期性のコルチゾールレベルのプロファイルは、Ｖ１（◆）及びＶ５（■）の間で類似していた。両プロファイルとも、目覚めから約３０分でコルチゾールが上昇し、起床から約９時間までにコルチゾールレベルが低下し、コルチゾールレベルは約０．５〜１μｇ／ｄｌで安定化したことを示している。

上記に記載したように、一実施形態ではバイオマーカーはホモシステインであり、この場合、炎症状態を治療する上での改善はモニターされ、ホモシステインレベルを低下させるのに有効である。ホモシステインは、タンパク質の形成に関与しない含硫アミノ酸である。それよりも、これは２つの異なる代謝経路、即ち、メチオニンの形成に関与する経路、及びシスタチオニン（ホモシステインとセリンとの縮合物）をシステインとａ−ケトブチレートとに変換する経路の有効成分である。

図６に見られるように、ホモシステインレベルは、訪問１から訪問５までの値の比較より分かるように、ヒドロキシチロソールに富む組成物を摂取した群における関節リウマチ患者で有意に低下した（ｐ＜．０１５）。これらの試験では、ホモシステインレベルは、ヒドロキシチロソールに富む組成物で治療したＲＡ患者対プラセボで治療したＲＡ患者において有意に低下した。図に見られるように、ＲＡ患者におけるホモシステインレベルはヒドロキシチロソールに富む治療群では約７．５％から２０％に低下し、具体的には１２．５％及び１５％であった。一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物は、血漿及び／又は唾液のレベルを正常範囲内に低下させるのに有効である。正常範囲は変化することがあるが、１リットル当たり４〜１７マイクロモル（μｍｏｌ／ｌ）が、正常範囲内であると一般的に考えられている（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ）

ホモシステインの血漿レベルの上昇は血管疾患と関連しており、ホモシステインは様々な心臓血管疾患及び脳血管疾患の独立した危険因子として記載されている。さらに、血中のホモシステインレベルの上昇は、血管におけるプラークの増強を促進することがあり、これはアテローム性動脈硬化、及びそれに続く冠状動脈疾患の危険性を増大させる。ホモシステインレベルが上昇すると、血管の裏打ちを損傷することもあり、これは凝血の形成をもたらすことがあり、これらは、今度は、脳卒中、心臓発作（心筋梗塞）、及び肺塞栓症の危険性を増大することがある。また、ホモシステインレベルが上昇すると、脚の深部の静脈における凝血の形成を促進することがある（深部静脈血栓症、即ちＤＶＴと呼ばれる）。（ｗｗｗ．ｗｅｂｍｄ．ｃｏｍ．）。ホモシステインは、次にＮＯを消費して過酸化亜硝酸を形成するスーパーオキシドラジカルを生成する、そのスルフヒドリル基の自己酸化に関与する、血管に対する酸化ストレス作用を有すると考えられている。したがって、血漿のホモシステインレベルを低下させると、ホモシステインレベルの上昇に関連する心臓血管疾患の危険性を低減させる。

別の一実施形態では、バイオマーカーはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。ＣＲＰは、ＣＲＰレベルが全身性の炎症で上昇する場合の急性期の反応物のクラスのメンバーである。ＣＲＰ値の測定及び記録は、疾患の進行又は治療の有効性を決定するのに用いられており、ＣＲＰは炎症のマーカーと考えられている。ＣＲＰは心臓疾患で役割を担っていること、及びＣＲＰのレベルは心臓血管の危険性とともに上昇することがさらに最近見出されている（Ａｂｂａｔｅら、Ｓｅｍｉｎ Ｖａｓｃ Ｍｅｄ、２００３年）。ＣＲＰレベルの上昇は、心臓発作の危険性を３倍増大させることと関連していたことも、さらに示されている（医師の健康調査臨床試験（（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｔｕｄｙ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ））。ＣＲＰのベースレベルの上昇した患者は、高血圧及び心臓血管疾患の危険性が上昇している。心臓血管の健康に関連するＣＲＰレベルは、「高感度」ＣＲＰ（ｈｓ−ＣＲＰ）血液試験で一般的に測定する。これは、低レベルのＣＲＰをより優れた正確さで測定するようにデザインされている自動化された血液試験であり、これにより医師は心臓血管の危険性を評価することができる。低リスクの範囲は、＜１ｍｇ／Ｌであると一般的に考えられている（ｗｗｗ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｃｏｍ）。ＣＲＰの正常値は検査室によって異なるが、一般的には血中に検出可能なＣＲＰがほとんどないか、又はまったく存在しないことである（ｈｓ−ＣＲＰ試験で、０．６ｍｇ／ｄＬ未満）（ｗｗｗ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）。ｈｓ−ＣＲＰ試験で測定したＣＲＰレベルが１．０と３．０ｍｇ／Ｌの間であれば、心臓血管の危険性の平均的な範囲であるとみなされる。レベルが３．０ｍｇ／Ｌを超えると（ｈｓ−ＣＲＰにより）、患者の心臓血管の危険性は高いと考えられる（ｗｗｗ．ａｍｅｒｉｃａｎｈｅａｒｔ．ｃｏｍ）。血清ＣＲＰの正常レベルは、一般のＣＲＰ血液試験により測定して、１０ｍｇ／Ｌ未満である。ほとんどの感染症及び炎症では、ＣＲＰ血液試験により測定して１００ｍｇ／Ｌを超えるＣＲＰレベルとなる。したがって、血漿ＣＲＰレベルを低下させれば、ＣＲＰレベルの上昇に関連する心臓血管疾患の危険性を低下させる。

実施例１に記載するように、ＣＲＰレベルは、ヒドロキシチロソールに富む組成物で治療したＲＡ患者対プラセボで治療したＲＡ患者で著しく低下した。図５に見られるように、ＲＡ患者におけるＣＲＰレベルは、ヒドロキシチロソールに富む治療群で約５０％から６３％に低下した。対象のＯＡ及びＲＡサブグループを分析すると、ＣＲＰレベルにおける著しい差は、ヒドロキシチロソールに富む組成物に起因することが指摘される。ＣＲＰレベルは、最初ＲＡ患者、並びにその診療記録及びその疾患歴に基づいて大きな心臓血管疾患の兆候のある個体で、最も高かった。

炎症誘発性のサイトカイン及び抗炎症性のサイトカイン、並びにメタロプロテイナーゼにおける変化を、可能なバイオマーカーとして、また、ヒドロキシチロソールに富む組成物の作用機序を同定するために、さらに試験した。表８及び９に見られるように、これらのマーカーを、試験参加者のサブグループで測定した。データを検討し、ＨＡＱで最も著しい変化を示した対象の群を選択した。これらを試験における「反応者」と決定し、これらの対象からのサンプルを用いて、ヒドロキシチロソールに富む組成物の作用の尺度として炎症誘発性のマーカー及び抗炎症マーカーを探索した。

サイトカインを評価して、炎症誘発性のサイトカインと抗炎症サイトカインとのバランスの変化を決定した。サイトカインは以下にさらに記載するように、ＥＬＩＳＡ又はＬＵＭＩＮＥＸシステムを用いて測定した。血漿におけるサイトカインの値は比較的低かったが、ＲＡ患者では、その根底にある自己免疫疾患を反映してより高かった。時間２を時間５と比べて、ＡＮＯＶＡを使用して、また対応のあるｔ検定分析により決定すると、サイトカインにおける有意な変化は存在しなかった（表９）。しかし、サイトカインにおける変化の検出は、血漿におけるレベルが低いこと、及びアッセイの感度の限界により妨げられることがある。

軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質（ＣＯＭＰ）は、文献では炎症の疾患活動性と関連することが示されているので、ＣＯＭＰの血漿レベルの変化を評価した。ＣＯＭＰは、プラセボでもヒドロキシチロソールに富む群でもいくぶん低下したが、どちらの群でも著しく低下しなかった。

ヒドロキシチロソールに富む組成物の可能な作用機序を決定するために、ＨＡの血漿レベルを測定したが、表７に見られるように、時間２から５に著しい効果又は変化があったことは指摘されなかった。

マトリックスメタロプロテイナーゼ即ちＭＭＰは、その潜在の、前酵素の形態で細胞から分泌され、様々なマトリックスタンパク質の分解に関与する、Ｃａ^２＋によって活性化される亜鉛結合性タンパク質である。ＭＭＰは、ＲＡの病原性に関連づけられている。ＲＡ患者の滑液及び血清の両方で、ＭＭＰ３及びＭＭＰ１のレベルの上昇が見出されている。実施例１に記載するように、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９の血漿レベルをＥＬＩＳＡにより評価し、図７に結果を示す。

プラセボ治療群ではＭＭＰ２レベルでもＭＭＰ３レベルでも、ヒドロキシチロソールに富む治療患者には観察されなかった上昇があった。さらに、プラセボ治療群では、ＯＡ患者でもＲＡ患者でも、時間２から時間５にＭＭＰ１の上昇があった。ヒドロキシチロソールに富む治療群では、ＯＡ患者でＭＭＰ１の低下が、ＲＡ患者ではわずかな上昇があった。

ＭＭＰ９では、観察されたレベルはアッセイの感度に近かったこと、及びＥＬＩＳＡアッセイは酵素の前酵素型と活性型を区別しないことを留意すべきであり、したがって、これらの結果から、患者は活性型をより多く摂取したのかより少なく摂取したのか、したがってより病原性のある状態にあるかを決定することはできない。

活性型にのみ結合するＭＭＰの特異的阻害剤である、メタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）レベルも、評価した。ＲＡ患者の滑液及び血清でＴＩＭＰ−１レベルが上昇することは、文献に記載されている（Ｇｉａｎｎｅｌｌｉら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、２００４年、２２巻（３）、３３５〜３３８頁）。しかし、記載されているように、ＴＩＭＰの活性型ＭＭＰ酵素に対する比率は、病原性の予測に決定的であると思われる。

ＴＩＭＰ−１レベルは、プラセボ治療群ではわずかな低下が観察され、又はまったく変化がなかったが、ヒドロキシチロソールに富む治療群では、ＯＡ患者でもＲＡ患者でもわずかな上昇が観察された（図８）。

上記のマーカーは、一般的に生物マーカーの血漿レベルに関して記載したが、血清及び／又は唾液のレベルも適宜用いることができることが理解されよう。

別の一態様では、炎症又は心臓血管の状態に関連するバイオマーカーのレベルの上昇を有するヒト対象の集団から同定する方法が企図されている。この方法では、反応性のある対象は、ヒドロキシチロソールに富む組成物の投与による治療に最も大きな反応を示す対象とみなされる。好ましい一実施形態では、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与する。組成物を、対象におけるバイオマーカーのレベルを実質的に低下させるのに効果的な投与量及び期間で投与する。バイオマーカーのレベルを、当技術分野では周知の方法によりモニターし、バイオマーカーのレベルが低下した場合に、対象は反応性であると同定する。一実施形態では、バイオマーカーの投与により、バイオマーカーのレベルは正常範囲内に低下する。この方法は、適宜バイオマーカーのレベルの上昇をもたらすことにより、反応性の対象を同定するのに用いることができることが理解されよう。好ましい一実施形態では、バイオマーカーは、ホモシステイン及び／又はＣＲＰから選択される。

ＩＶ．投与
送達の経路には、それだけには限定されない、経口及び非経口の経路（静脈内、皮下、腹腔内、及び筋肉内）を含めた、様々な全身性の経路が含まれる。これらの経路による投与は、組成物を適切な投与量形態に配合することにより実現される。非限定的な例には、丸剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、シロップ剤、滴剤などが含まれる。このような投与量形態の調製は、当業者には慣例である。好ましい一実施形態では、組成物を経口投与する。

組成物は、実質的に純粋な形態（オリーブ果肉固体又は抽出物）で、又は薬学的に許容できる担体とともに投与することができる。一実施形態では、組成物を有効成分として担体中に溶解又は懸濁し、従来的に行っている通りに配合する。担体は、有効成分に対してビヒクル、担体、又は媒体として働く、固体の形態でも、半固体でも、又は液体の材料でもよい。或いは、担体は、経口投与を促進するためのカプセル又は他の容器の形態であることもできる。したがって、本発明にしたがって投与するための経口投与量形態には、錠剤、丸剤、粉末剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、及び硬又は軟ゼラチンカプセル剤が含まれる。担体は、当業者が使用する、様々な標準の生理学的に許容できる担体の任意のものであることができる。適切な生理学的に許容できる担体の選択は、選択する投与の様式に応じて変化することが理解されよう。

ヒドロキシチロソールに富む組成物は、様々な重量比のフェノール性化合物を含むようにさらに配合することができることが理解されよう。一実施形態では、組成物を、様々な重量比のヒドロキシチロソール対オレウロペインを含むように配合する。好ましい一実施形態では、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比は、４：１と２００：１の間であり、より好ましくは約１０：１と約１００：１の間である。ヒドロキシチロソール対オレウロペインの好ましい比は、約１０：１と約１００：１とを含む。

別の一実施形態では、組成物は精製したヒドロキシチロソールを含む。さらに別の一実施形態では、組成物は、精製したヒドロキシチロソールを薬学的に許容できる担体と組み合わせて含む。さらなる一実施形態では、組成物は、他の治療の組成物及び方法と組み合わせて投与する精製したヒドロキシチロソールを含む。

本発明で投与するための組成物は、当技術分野では知られている、他の一般的な薬学的に許容できる賦形剤と配合することができる。さらに、本発明の組成物は、対象に投与した後、有効成分の急速な、持効の、又は遅延の放出をもたらすように配合することができる。持効の、又は遅延の放出は、フィルム又はマイクロカプセルなどの造形品の形態の半透性のポリマーマトリックスを含む、あらゆる周知の方法を用いて実現することができる。

本発明にしたがって用いるための非経口の製剤を、当技術分野における標準の技術を用いて調製する。本明細書で用いる用語非経口には、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射、又は注入の技術が含まれる。

一実施形態では、組成物を規則的な間隔で、例えば、毎日、１日２回、又は１日３回投与することができる。別の一実施形態では、組成物をある期間にわたって、例えば、１から１２カ月、又はそれを超えて投与する。組成物の投与は、無期限に継続することができることが理解されよう。さらに別の一実施形態では、炎症状態の改善を示すバイオマーカーにおける変化をもたらすのに十分な期間、組成物を投与する。一例として、組成物を１から２カ月、又はそれを超えて投与することができる。さらなる一例として、ヒドロキシチロソールに富む組成物を、血漿ホモシステインレベルを少なくとも７．５％若しくはそれを超えて血漿ホモシステインレベルを低下させるのに十分な期間、及び／又は血漿ＣＲＰレベルを少なくとも５０％低下させるのに十分な期間、投与することができる。別の一実施形態では、バイオマーカーのレベルを正常に低下させ、又は上昇させる期間、組成物を投与する。

組成物の投与量は、組成物に用いる化合物に応じて変化することが理解されよう。組成物の経口投与に好ましい投与量には、（ｉ）毎日、すべての単一のフェノール及びポリフェノールを約５〜２２ｍｇで、特定の実施形態では、５、５．４、１０、１０．８、１６、１６．２、２１．６、若しくは２２ｍｇが企図され、及び／又は（ｉｉ）毎日、ヒドロキシチロソールを約２．５〜５ｍｇ又は２．５〜１０ｍｇで、特定の実施形態では、２．５、５、７．５、及び１０ｍｇが企図される。

投与量は、患者の年齢、健康、性別、大きさ、及び体重、投与経路、並びに化合物の有効性などの因子にしたがって変化する。必要に応じて、より多い量の化合物も、より少ない量の化合物も投与することができる。

他の構成成分又は有効成分を、治療の化合物と組み合わせて投与することができることが理解されよう。他の治療方法を、治療化合物の投与と組み合わせて用いることができることがさらに理解されよう。

以下の実施例は、ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップ、及びバイオマーカーのレベルの低下により対象における改善をモニターするステップを含む、ヒト対象における炎症状態を治療する方法を説明するものである。組成物を、バイオマーカーのレベルの低下をもたらすのに十分な量及び期間で投与した。実施例は、例示を意図しているが、本発明の範囲を決して制限するものではない。

Ａ．材料と方法
治療組成物の調製
表１のように、有効成分を含むカプセルを、オリーブからの果汁水分から得た組成物で配合した。

表１：カプセル製剤

各カプセルには、オリーブ果肉抽出物（固体）９０ｍｇ、全ポリフェノール５．４ｍｇ、及びヒドロキシチロソール〜２．５ｍｇが含まれていた。

血液サンプリング：
血液を採取し、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離して血漿を分離し、血漿を多数のアリコートに取り、−５０℃で貯蔵した。血漿サンプルを、製造元により推薦される（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘに対する、ＭＭＰ及びサイトカインの測定プロトコル）１０℃、３０００ｒｐｍで１５分間さらに遠心分離した。血漿サンプルを、微小遠心分離管に分取し、アッセイするまで−８０℃で貯蔵した。サンプルは、測定するアリコートに分配して、サンプルの正確な測定を妨げることがある凍結解凍の複数のサイクルを避け、したがって測定に用いるサンプルの解凍は１回だけであった。

サンプルで、以下のバイオマーカーを測定した。

１．マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）及びサイトカイン
多分析物プロファイリングキット（Ｍｕｌｔｉａｎａｌｙｔｅ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｋｉｔｓ）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ ＭＮ ａｎｄ Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カリフォルニア州、Ｃａｍｅｒｉｌｌｏ）をＬｕｍｉｎｅｘ １００分析器と組み合わせて用いて、ＭＭＰ（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９、及びＭＭＰ−１３）並びにサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、及びＧＭ−ＣＳＦ）の血漿レベルを測定した。手短に述べると、この技術は、カラーコードしたビーズ上にプレコーティングした、分析物に特異的な抗体を用いる。これらの微粒子を、スタンダード及びサンプルを含むウェルに加えた。インキュベート期間及び数回の洗浄の後、分析物に特異的なビオチン化した抗体をウェルに加えた。微粒子を再度洗浄し、その後ストレプトアビジン−フィコエリトリン複合体を加えた。微粒子を洗浄し、バッファーに再懸濁し、Ｌｕｍｉｎｅｘ １００分析器で分析した。分析器は２つのレーザーを使用している。第１のレーザーは、どの分析物を測定するかを決定し、第２のレーザーは蛍光シグナルの強度を決定するが、これは微粒子に結合している分析物の量に直接比例する。

ＭＭＰアッセイは、プロの、成熟型の、及びＴＩＭＰ−１と複合しているＭＭＰを認識する。ＭＭＰの最小検出可能投与量の平均は、以下の通りである：ＭＭＰ−１：４．４ｐｇ／ｍｌ、ＭＭＰ−２：２５．４ｐｇ／ｍｌ、ＭＭＰ−３：１．３ｐｇ／ｍｌ、ＭＭＰ−９：７．４ｐｇ／ｍｌ、及びＭＭＰ−１３：１５９ｐｇ／ｍｌ。全ＭＭＰに対するアッセイ内アッセイの変動係数（ＣＶ）の平均は＜１０％であり、アッセイ間アッセイのＣＶは＜１５％であった。サイトカインの最小検出可能投与量の平均は以下の通りである：ＩＬ−１β：０．２７ｐｇ／ｍｌ、ＩＬ−６：０．３６ｐｇ／ｍｌ、ＩＬ−８：３ｐｇ／ｍｌ、ＴＮＦ−α：０．４７ｐｇ／ｍｌ、ＧＭ−ＣＳＦ：１５ｐｇ／ｍｌ、及びＩＬ−１７：０．３９ｐｇ／ｍｌ。Ｒ＆Ｄキットに対するアッセイ内アッセイのＣＶの平均は＜１０％であり、Ｂｉｏ Ｓｏｕｒｃｅ Ｋｉｔに対してアッセイ間アッセイ及びアッセイ内アッセイのＣＶの平均は、それぞれ＜１０％及び＜１５％であった。

２．ＴＩＭＰ−１
メタロプロテアーゼの組織阻害剤−１（ＴＩＭＰ−１）の血漿レベルを、標準のサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、製造元の示すプロトコルを用いて測定した。このアッセイは、天然のＴＩＭＰ−１も、リコンビナントのＴＩＭＰ−１も認識する。最小検出可能投与量は、８０ｐｇ／ｍｌであり、アッセイ間アッセイ及びアッセイ内アッセイのＣＶは、両方とも＜１０％であった。

３．ヒアルロナン
血漿中のヒアルロナン（ＨＡ）を、比色法のシグナルがサンプル中のＨＡの濃度に逆比例する競合的ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｅｃｈｅｌｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、ユタ州、Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ）を用いて測定した。アッセイは、完全なＨＡ及びＨＡフラグメントを認識する。アッセイ間アッセイの変動係数は＜１５％であった。最小検出可能投与量は、提供されなかった。

４．軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質
血漿中の軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質（ＣＯＭＰ）を、２つのモノクローナル抗体がＣＯＭＰ分子上の２つの抗原決定基に対して向けられているＥＬＩＳＡキット（ＡｎａＭａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ、スウェーデン、Ｕｐｐｓａｌａ）を用いて測定した。アッセイは、完全なＣＯＭＰもＣＯＭＰフラグメントも認識する。最小検出限界は＜０．１Ｕ／Ｌであり、アッセイ内アッセイ及びアッセイ間アッセイのＣＶは、両方とも１０％未満であった。

５．Ｃ反応性タンパク質
Ｃ反応性タンパク質の血漿中レベルを、高感度ＥＬＩＳＡアッセイ（ＭＰ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、ニューヨーク州、Ｏｒａｎｇｅｂｕｒｇ）を用いて測定した。サンプルをすべて１：５００に希釈することにより、製造元のプロトコルを調節した。アッセイの検出可能な範囲は、約０．０１ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌである。アッセイ内アッセイ及びアッセイ間アッセイのＣＶは、両方とも、それぞれ＜１５％及び＜１０％であった。

６．ＩＬ２Ｒ
血漿サンプル中のＩＩ−２受容体拮抗物質のレベルを、標準のサンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて検出した。以下のプロトコルは、製造元が示したものであった。アッセイの最小検出可能投与量は＜１０ｐｇ／ｍｌである。アッセイ間アッセイのＣＶは＜１０％であった。

（実施例１）
日常的な薬剤療法が安定している活動性のＲＡ又はＯＡと診断された５５〜７５歳の患者１００名が、二重盲式の無作為化したコントロール試験に参加した。以下にさらに記載する、疾患活動性、疼痛、炎症、血液マーカー、サイトカイン、及び他のタンパク質の測定を、ベースライン時（時間０）、試験開始後１週目（Ｖ２）、２週目（Ｖ３）、４週目（Ｖ４）、及び８週目（Ｖ５）に、患者で測定した。

１５名の対象が、最終の訪問の前に試験から落伍した。全８５名の対象が、全５回の訪問を完了した。

全５回の訪問を完了した８５名の参加者のうち、４４名の患者（ＲＡと診断された１３名、ＯＡと診断された３１名）に、不活性な内容物のプラセボカプセルを投与した。さらに、４１名の患者（ＲＡと診断された１３名、ＯＡと診断された２８名）に、有効（ヒドロキシチロソールに富む）成分を含むカプセルを投与した。患者には２カ月間、有効成分又はプラセボのいずれかの２カプセルを、１日当たり２回投与した。全般的に、参加者は、プラセボにもヒドロキシチロソールに富む組成物にも耐用性が良好だった。

急性作用を調べるために、ベースライン時（時間０）、１週目、及び２週目に測定を得、より慢性の作用を調べるために、４週目及び８週目に測定を得た。炎症マーカー、サイトカイン、血液化学、脂質、グルコース、沈降速度、ヘモグロビン、及びホモシステインレベルについて、血液サンプルを測定した。ＩＬ６、ＩＬ８、ＴＮＦ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＭＭＰ１、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、ＴＩＭＰ１、ＨＡ、及びＣＯＭＰについて特定のレベルを評価した。

さらに、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）スキャンを用いて身体組成を評価し、唾液のサンプリングから日周期性のコルチゾールレベルを、ベースライン時（時間０）及び試験の終了時（８週目）に記録した。

０週目と８週目とに代謝の血液パネルを記録して、安全を評価するために肝機能及び腎機能におけるあらゆる変化を評価した。

表２：患者の記述

試験で患者に投与された薬物療法の概要を、以下の表３に詳しく述べる。用いた薬物投与及びサプリメントはすべて、試験の間にわたってモニターした。グループ分けした薬物療法では、プラセボ群と有効成分群との間には薬物療法に実際の差はなかったが、患者間で、その薬物療法の量及びタイプに明らかな差があったことをデータは指摘している。

表３：薬物療法の概要

参加者が、カプセル摂取を中断しなければならなくなる有害事象が３つあった。プラセボ群及び有効成分群の各々で１名の患者にアレルギー反応があった。いずれの場合もサプリメントを中止し、対象は試験から脱落した。また、プラセボ群では１名の患者が、突然で痛みを伴う発赤の疾患活動性のため脱落した。

Ａ．疾患の評価
圧痛のある腫脹した関節の数、疾患活動性の患者の評点、疾患活動性の医師の評点を含めた、疾患に関連する炎症の程度を評価するようにデザインされた標準の質問票を、医師が施した。生活の質の変化を、健康評価質問票（ＨＡＱ）により測定し、結果を以下の表４に示した。ＯＡ患者及びＲＡ患者に対する別々の結果を、それぞれ表５及び６に示す。気分の変化の程度は、気分プロフィール検査（ＰＯＭＳ）質問票により評価した。障害スコアを、時間の関数としてプロットし、結果を図２に表した。最初は、全対象とも、異常に高い障害スコア（約７）であり、これは怒り及び緊張の測定値である。障害スコアは、３回目の訪問（２週目）までに定常状態レベルに落ち着いた（約−２から０）。

表４：ＨＡＱ生活の質の変化

表５：ＯＡ患者に対するＨＡＱの結果

表６：ＲＡ患者に対するＨＡＱの結果

さらに、医師の疾患の評価を、文献における周知の測定に基づいて確立した。評価は、１）運動時の圧痛及び疼痛、並びに関節の腫脹に対して各関節を０〜３の疼痛に格付けすること、２）重症度を示すための水平線を用いた関節炎の重症度の医師の評価、並びに３）患者の自身の疾患の評価及び関節数を医師が用いて図３に表した疾患の全体の評価を提供することからなった。

Ｂ．バイオマーカー
ＭＭＰ、サイトカイン、ＴＩＭＰ、ヒアルロナン、ＣＯＭＰ、ＣＲＰ、及びＩＬ２Ｒを含むバイオマーカーを、血漿のアリコートから測定し、結果を以下の表７に示した。ＯＡ及びＲＡの患者におけるＣＲＰの血漿レベルを、それぞれ表８及び９に表す。ＯＡ及びＲＡの患者におけるホモシステインの血漿レベルを、それぞれ表１０及び１１に表す。

表７：バイオマーカーの血漿レベル

表８：ＯＡ患者に対する血漿ＣＲＰレベル（ｍｇ／Ｌ）

表９：ＲＡ患者に対する血漿ＣＲＰレベル（ｍｇ／Ｌ）

表１０：ＯＡ患者に対する血漿ホモシステインレベル（μＭ／Ｌ）

表１１：ＲＡ患者に対する血漿ホモシステインレベル（μＭ／Ｌ）

Ｃ．血液化学
血液中の脂質（全脂質、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、及び総コレステロール／ＨＤＬ）、沈降速度、血中グルコース、ホモシステイン、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、及び赤血球沈降速度（ＥＳＲ）を、採血２４時間以内に、Ｓｏｎｏｒａ Ｑｗｅｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより分析し、ＯＡ及びＲＡの患者の結果をそれぞれ表１２及び表１３に表した。

表１２：ＯＡ患者に対する血液化学統計

表１３：ＲＡ患者に対する血液化学統計

Ｄ．ＤＥＸＡスキャン身体組成及び人体測定
二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＥＸＡ）を用いて、体脂肪パーセント及び体脂肪分布を含む身体組成を測定した。骨密度も測定したが、この短期間では骨密度における変化は予想されなかった。全骨密度はｇ／ｃｍ^２で、また表１４に見られるように年齢にマッチさせた標準のパーセント値として報告した。

表１４：骨密度（ｇ／ｃｍ^２）

Ｅ．日周期性の唾液中コルチゾール
日周期性の唾液中コルチゾールを、８つの時間点で、遠心分離管の内側の小型のコットンスワブからなる、唾液サンプリング装置であるＳａｌｉｖｅｔｔｅｓ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｉｎｃ．、ドイツ、Ｒｏｍｍｅｌｓｄｏｒｆ）で測定した。サンプリング時間は、患者の覚醒時間と同時にした。１回目のサンプルは、覚醒時即座に採取し、次の４５分にわたり１５分間隔で３サンプルを採取した。最後の４サンプルは、やはり覚醒と同時にして３時間間隔で採取した。対象は、擦過及び血管漏出を避けるために、最初の４サンプルの間は歯を磨かず、又は何も経口摂取をせず、また、残りのサンプリング期間に対して３０分以内の摂食は控えた。患者は、サンプリングの日は運動、又は力を尽くすことはしなかった（Ｅｄｗａｒｄｓら、２００１年）。サンプルが検査室に返却されたら、Ｓａｌｉｖｅｔｔｅｓを、４℃、３０００ｒｐｍで、３０分間遠心分離し、唾液サンプルを微小遠心管に移し、分析時まで−８０℃で貯蔵した。唾液のコルチゾールを、市販のキット（ＩＣＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、カリフォルニア州、Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ）から、コーティングチューブＲＩＡを用いて分析した。結果を図４に示す。

Ｆ．唾液中コルチゾールのプロトコル
唾液中コルチゾールのサンプルを、２つの時間点：ａ）第１回の（即ち、ベースライン時の）訪問後であるが、プラセボ又はサプリメントのいずれかの治療を開始する前、及びｂ）最終の訪問の１から２週間前、サプリメント又はプラセボのいずれかを１〜２カ月継続後に対象から回収した。表１５に略述したように、唾液サンプルを、各サンプリング日の９つの時間点で回収した。

各時間点で、対象は、適当なサンプル番号（１〜９）をラベリングしたＳａｌｉｖｅｔｔｅサンプリング装置（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｌｔｄ．）からのコットンスワブを口腔内に配置し、１〜１．５分間穏やかに咀嚼した。最初の４回の「覚醒」サンプル（表１、サンプル１〜４）の間中、対象は、サンプルへの微小血管の漏出を避けるためにサンプリングの４５分間は、歯を磨かず、朝食を食べず、コーヒーを飲まず、うがいなどをしなかった。残りのサンプルを、３時間間隔で回収し、対象に摂食３０分以内は回収を避けるように指示した。検査室では、サンプルを遠心分離し、唾液を回収し、コルチゾールをアッセイするまで−８０℃で貯蔵した。

表１５：コルチゾール測定のための唾液回収のサンプリング時間

唾液サンプルを解凍し、ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（カリフォルニア州、Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ）からのＩｍｍｕＣｈｅｍ Ｃｏａｔｅｄ Ｔｕｂｅ Ｃｏｒｔｉｓｏｌアッセイを用いて遊離のコルチゾールをアッセイした。唾液の手順を、サンプルを５℃で２４時間インキュベートし、その後吸引及び計測することをわずかに変更して行うことを、製造元は示唆し、結果を表１６に示した。

血漿中プロラクチンを、Ｉｍｍｕｃｈｅｍ Ｃｏａｔｅｄ Ｔｕｂｅキット（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、カリフォルニア州、Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ）を用いて測定し、結果を表１６に示した。行った手順は、製造元が示唆したものであった。

表１６：コルチゾール及びプロラクチンのレベル

前述から、本発明の様々な態様及び特徴がどのように対応するかを見ることができる。当業者であれば、前述の記載から、本発明の広範な教示を様々な形態で実行することができることを、理解することができる。本明細書に記載した実施形態及びサブグループを、方法及び組成物で組み合わせることができることが理解されよう。したがって、本発明を、特定の実施形態及びその実施例に関して記載してきたが、本発明の真の範囲は、そのように制限されるものではない。添付の特許請求の範囲で定義するように、本発明の範囲から逸脱しないで、様々な変更及び修正を行うことができる。

本発明を、特定の実施形態に関して記載してきたが、本発明から逸脱しないで様々な変更及び修正を行うことができることは、当業者であれば明らかであろう。

オリーブオイルで検出されるフェノール性化合物及びそれらの前駆物質の構造を示す図である。リグストロサイド（Ｉ）、オレウロペイングルコシド（ＩＩ）、リグストロサイドのアグリコン（ＩＩＩ）、オレウロペイングルコシドのアグリコン（ＩＶ）、カルボキシメチル基を欠くリグストロサイドアグリコンのジアルデヒド形態（Ｖ）、カルボキシメチル基を欠くオレウロペイングルコシドのアグリコンのジアルデヒド形態（ＶＩ）、チロソール（ＶＩＩ）、ヒドロキシチロソール（ＶＩＩＩ） ＰＯＭＳ障害指数を示すグラフである。 Ｖ２及びＶ５における、プラセボ及び有効成分に対する医師の疾患の評価を示す図である。 Ｖ１及びＶ５における、全患者の日周期性のコルチゾールレベルを、経時のコルチゾールのμｇ／ｄｌで示すグラフである。 Ｖ１又はＶ５における、プラセボ又はヒドロキシチロソールに富む組成物を投与したＯＡ及びＲＡの患者に対するＣＲＰレベルをｍｇ／Ｌで示す図である。 Ｖ１又はＶ５における、プラセボ又はヒドロキシチロソールに富む組成物を投与したＯＡ及びＲＡの患者に対するホモシステインレベルをμＭ／Ｌで示す図である。 プラセボ又はヒドロキシチロソールに富む組成物を投与した患者に対する、Ｖ２及びＶ５からのＭＭＰ２、ＭＭＰ３、又はＭＭＰ９の血漿中の平均値をｎｇ／ｍｌ±ＳＥで示す図である。 プラセボ又はヒドロキシチロソールに富む組成物を投与したＯＡ及びＲＡの患者に対する、Ｖ２及びＶ５からのＴＩＭＰの血漿中の平均値をｎｇ／ｍｌ±ＳＥで示す図である。

Claims (26)

1. ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップと、
   対象のホモシステインレベルの低下により、対象における改善をモニターするステップと、
   少なくとも７．５％のホモシステインレベルにおける低下をもたらすのに十分な量及び期間で前記投与を継続するステップと
   を含む、ヒト対象における炎症状態を治療する方法。
2. 前記ヒドロキシチロソールに富む組成物の、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比が約１０：１と約１００：１の間である、請求項１に記載の方法。
3. 前記投与するステップが、１日約５．４から１０．８ｍｇの間の全ポリフェノールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項２に記載の方法。
4. 前記投与するステップが、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項２に記載の方法。
5. 前記モニターするステップが、対象の血漿又は唾液のホモシステインレベルをモニターすることを含む、請求項１に記載の方法。
6. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約１２．５％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、請求項１に記載の方法。
7. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約１５％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、関節リウマチの治療に使用するための、請求項１に記載の方法。
8. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約２０％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、関節リウマチの治療に使用するための、請求項７に記載の方法。
9. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約２０％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、血管疾患の炎症状態の治療に使用するための、請求項１に記載の方法。
10. 血漿ホモシステインレベルをホモシステインの正常範囲内に低下させるのに有効な量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップ
    を含む、ホモシステインレベルの上昇に関連する炎症疾患の危険のある対象におけるホモシステインの血漿レベルを低下させるための方法。
11. 前記ヒドロキシチロソールに富む組成物の、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比が約１０：１と約１００：１の間である、請求項１０に記載の方法。
12. 前記投与するステップが、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項１１に記載の方法。
13. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約７．５％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、請求項１０に記載の方法。
14. 患者の血漿ホモシステインをホモシステインの正常範囲内に低下させるのに有効な投与量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップ
    を含む、血漿ホモシステインレベルの上昇を有する患者における心臓血管疾患の危険を低下させるための方法。
15. 前記ヒドロキシチロソールに富む組成物の、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比が約１０：１と約１００：１の間である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記投与するステップが、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項１４に記載の方法。
17. 前記投与するステップを、治療前のレベルに対して少なくとも約７．５％のホモシステインの低下を達成するまで継続する、請求項１４に記載の方法。
18. 患者のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルを正常範囲内に低下させるのに有効な投与量及び期間で、ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップ
    を含む、血漿ＣＲＰレベルの上昇を有する対象における心臓血管疾患の危険を低下させるための方法。
19. ヒドロキシチロソールに富む組成物を、反応性の対象における血漿ホモシステインレベルを実質的に低下させるのに有効な投与量及び期間で投与するステップと、
    対象のホモシステインレベルをモニターするステップと、
    対象のホモシステインレベルが正常範囲内に低下した場合に、対象を反応性の対象として同定するステップと
    を含む、炎症状態に関連する血漿ホモシステインレベルの上昇を有するヒト対象の集団から、ヒドロキシチロソールに富む組成物を経口投与することにより治療に最も大きな反応を示すであろう反応性の対象を同定する方法。
20. 前記モニターするステップが、対象の血漿又は唾液のホモシステインレベルをモニターすることを含む、請求項１９に記載の方法。
21. ヒドロキシチロソールに富む組成物を対象に投与するステップと、
    対象のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルの低下により、対象における改善をモニターするステップと、
    少なくとも５０％のＣＲＰレベルの低下をもたらすのに十分な量及び期間で前記投与するステップを継続するステップと
    を含む、ヒト対象における炎症状態を治療する方法。
22. 前記ヒドロキシチロソールに富む組成物の、ヒドロキシチロソール対オレウロペインの重量比が約１０：１と約１００：１の間である、請求項２１に記載の方法。
23. 前記投与するステップが、１日約５．４から１０．８ｍｇの間の全ポリフェノールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項２２に記載の方法。
24. 前記投与するステップが、１日約２．５から５ｍｇの間のヒドロキシチロソールを送達するのに有効な投与量の経口投与を含む、請求項２２に記載の方法。
25. ＣＲＰレベルの前記低下が治療前のレベルに対して少なくとも約７５％である、請求項２２に記載の方法。
26. 前記炎症状態が関節リウマチである、請求項２２に記載の方法。

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