JP2010510233A

JP2010510233A - Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤としての大環状ペプチド

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Publication number: JP2010510233A
Application number: JP2009537356A
Authority: JP
Inventors: ワン・アラン・シャンドン; バーバラ・ジジェン・ジェン; スタンリー・ダンドレア; ニコラス・エイ・ミーンウェル; ポール・マイケル・スコーラ
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2006-11-16
Filing date: 2007-11-15
Publication date: 2010-04-02
Anticipated expiration: 2027-11-15
Also published as: EP2086980A1; EP2086980B1; NO20091845L; US20080145334A1; ATE492558T1; DE602007011488D1; JP5221552B2; WO2008064061A1; US7763584B2

Abstract

一般式（Ｉ）を有する大環状ペプチドが開示されている。この化合物を含む組成物、およびＨＣＶを阻害するためのこの化合物を使用するための方法もまた開示されている。

（Ｉ）

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２００６年１１月１６日に出願された米国特許仮出願第６０／８６６，１２５号の利益を主張する。

本開示は一般に、抗ウイルス性化合物を対象とし、さらに具体的にはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によりコードされる（本明細書において「セリンプロテアーゼ」とも称される）ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する化合物、このような化合物を含む組成物、およびＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する方法を対象とする。

ＨＣＶは、主要なヒト病原体であり、世界中で１億７千万人が感染していると推定され、これはヒト免疫不全ウイルス１型の感染数の概ね５倍である。これらのＨＣＶ感染者のかなりの割合が肝硬変および肝細胞癌を含めた重篤な進行性肝疾患を発症させる。

現在、最も有効なＨＣＶ治療は、α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを用い、これは患者の４０％において持続的効果をもたらしている。ペグ化α−インターフェロンは、単独療法としては未修飾α−インターフェロンより優れていることを、最近の臨床結果は示している。しかし、ペグ化α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを伴う試験的な治療計画をもってしても、患者の大部分は、ウイルス量が持続的に減少することがない。したがって、ＨＣＶ感染の治療のための有効な療法を開発する明確であり、まだ満たされていない必要性が存在する。

ＨＣＶは、プラス鎖ＲＮＡウイルスである。５’非翻訳領域における推定されるアミノ酸配列および広範な類似性の比較に基づいて、ＨＣＶは、フラビウイルス科ファミリーの独立した属として分類されてきた。フラビウイルス科ファミリーの全てのメンバーは、単一の中断されていないオープンリーディングフレームの翻訳を介して全て公知のウイルス特異的タンパク質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有するエンベロープに包まれたビリオンを有する。

ＨＣＶゲノムに亘ってヌクレオチドおよびコードされたアミノ酸配列内にかなりの多様性が見い出される。６つの主要な遺伝子型が特性決定され、５０を超える亜型が説明されてきた。ＨＣＶの主要な遺伝子型は世界的にその分布が異なっており、病原および治療における遺伝子型の影響の可能性についての多くの研究にも関わらず、ＨＣＶの遺伝的多様性の臨床的意義は依然として捕らえにくい。

一本鎖ＨＣＶＲＮＡゲノムは、約９５００ヌクレオチドの長さであり、約３０００個のアミノ酸の単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は、細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼによって複数の部位で切断され、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質を生成する。ＨＣＶの場合、成熟非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂ）の生成は、２種のウイルスプロテアーゼによってもたらされる。最初のものは、ＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し；第２のものは、ＮＳ３のＮ末端領域内に含有されるセリンプロテアーゼであり、ＮＳ３の下流、すなわち、ＮＳ３−ＮＳ４Ａ切断部位においてシスで、残りのＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位においてトランスでの両方における以降の切断の全てを仲介する。ＮＳ４Ａタンパク質は、複数の機能を果たしていると思われ、ＮＳ３プロテアーゼの補助因子として作用し、ＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在性をおそらく補助している。ＮＳ３タンパク質のＮＳ４Ａとの複合体形成は、効率的なポリタンパク質の進行、部位の全てにおけるタンパク分解切断の増強に本質的である。ＮＳ３タンパク質はまた、ヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に関与するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。

本開示は、例えば、ＮＳ４Ａプロテアーゼと組み合わせて、ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害することができるペプチド化合物を提供する。さらに、本開示は、患者への併用療法の投与について記載し、それによって、ＨＣＶＮＳ３プロテアーゼを阻害するのに効果的な本開示による化合物は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物と共に投与することができる。

第１の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物

（Ｉ）、
またはその医薬的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ¹は、アルコキシ、ヒドロキシ、および−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷から選択され；
Ｒ^2aおよびＲ^2bは、水素およびメチルから独立して選択され；
Ｒ³は、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；
Ｒ⁴は、−ＯＲ⁸であり；
Ｒ⁵は、水素、アルキル、およびシクロアルキルから選択され；
Ｒ⁶は、水素、アルキル、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、アリールオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、ハロアルコキシカルボニル、ハロアルキル、ハロアルキルカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、および（ＮＲ^aＲ^b）スルホニルから選択され；
Ｒ⁷は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、および−ＮＲ^aＲ^bから選択され；該シクロアルキルおよび該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲ^eＲ^f）カルボニルから独立して選択される１個、２個、または３個の基で適宜置換されており；Ｒ^aおよびＲ^bは、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから独立して選択され；Ｒ^eおよびＲ^fは、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロシクリルから独立して選択され；該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロシクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１個または２個の置換基で適宜置換されており；
Ｒ⁸は、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルカルボニル、ハロアルコキシアルキル、ハロアルキル、（ＮＲ^cＲ^d）カルボニル、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）₂から選択され；Ｒ^cおよびＲ^dは、水素、アルキル、およびアリールアルキルから独立して選択され；あるいはＲ^cおよびＲ^dは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＮＲ^x、およびＳから選択される１個のさらなるヘテロ原子を所望により含有する５員または６員の単環式ヘテロ環を形成し；Ｒ^xは、水素およびアルキルから選択され；Ｒ’は、水素およびアルキルから選択され；
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_m、およびＮＲ⁹（ｍは、０、１、または２である）から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を所望により含有するＣ_3~9飽和または不飽和鎖であり、Ｒ⁹は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルカルボニルから選択される。

第１の態様の第１の実施形態では、本開示は、Ｒ¹が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷である式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第１の態様の第２の実施形態では、本開示は、Ｒ⁷がシクロアルキルである式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第１の態様の第３の実施形態では、本開示は、Ｒ^2aおよびＲ^2bが水素である式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第１の態様の第４の実施形態では、本開示は、Ｑが０個のヘテロ原子を含有するＣ_5~7不飽和鎖である式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。第５の実施形態では、Ｑが０個のヘテロ原子を含有するＣ₆不飽和鎖である。

第２の態様では、本開示は、式（ＩＩ）の化合物

（ＩＩ）、
またはその医薬的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ¹は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷であり；
Ｒ^2aおよびＲ^2bは、水素であり；
Ｒ³は、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；
Ｒ⁴は、−ＯＲ⁸であり；
Ｒ⁵は、水素であり；
Ｒ⁶は、アルコキシカルボニルであり；
Ｒ⁷は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、および−ＮＲ^aＲ^bから選択され；Ｒ^aおよびＲ^bは、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから独立して選択され；
Ｒ⁸は、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルカルボニル、ハロアルコキシアルキル、ハロアルキル、（ＮＲ^cＲ^d）カルボニル、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）₂から選択され；Ｒ^cおよびＲ^dは、水素、アルキル、およびアリールアルキルから独立して選択され；あるいはＲ^cおよびＲ^dは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＮＲ^x、およびＳから選択される１個のさらなるヘテロ原子を所望により含有する５員または６員の単環式ヘテロ環を形成し；Ｒ^xは、水素およびアルキルから選択され；Ｒ’は、水素およびアルキルから選択され；
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_m、およびＮＲ⁹（ｍは、０、１、または２である）から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を所望により含有するＣ_3~9飽和または不飽和鎖であり、Ｒ⁹は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルカルボニルから選択される。

第２の態様の第１の実施形態では、本開示は、Ｒ⁷がシクロアルキルである式（ＩＩ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第２の態様の第２の実施形態では、本開示は、Ｑが０個のヘテロ原子を含有するＣ₆不飽和鎖である式（ＩＩ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第３の態様では、本開示は、

である化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。

第４の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体とを含む組成物を提供する。第４の態様の第１の実施形態では、この組成物は、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物をさらに含む。第４の態様の第２の実施形態では、さらなる化合物の少なくとも１つは、インターフェロンまたはリバビリンである。第４の態様の第３の実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球インターフェロンタウから選択される。

第４の態様の第４の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体と、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物とを含む組成物を提供し、さらなる化合物の少なくとも１つは、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を増強する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン５’−一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。

第４の態様の第５の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、医薬的に許容される担体と、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物とを含む組成物を提供し、さらなる化合物の少なくとも１つは、ＨＣＶ感染の治療のためのＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリ、ＨＣＶイグレス(HCV egress)、ＨＣＶＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害するのに効果的である。

第５の態様では、本開示は、患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む、患者においてＨＣＶ感染症を治療する方法を提供する。第５の態様の第１の実施形態では、この方法は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の前、後、または同時に、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物を投与する工程をさらに含む。第２の実施形態では、さらなる化合物の少なくとも１つは、インターフェロンまたはリバビリンである。第３の実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球インターフェロンタウから選択される。

第５の態様の第４の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の前、後、または同時に、患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物とを投与する工程を含む、患者においてＨＣＶ感染症を治療する方法を提供し、さらなる化合物の少なくとも１つは、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を増強する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン５’−一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。

第５の態様の第５の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の前、後、または同時に、患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物とを投与する工程を含む、患者においてＨＣＶ感染症を治療する方法を提供し、さらなる化合物の少なくとも１つは、ＨＣＶ感染の治療のためのＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリ、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害するのに効果的である。

第６の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、抗ＨＣＶ作用を有する１種、２種、３種、４種、または５種のさらなる化合物と、医薬的に許容される担体とを含む組成物を提供する。第６の態様の第１の実施形態では、この組成物は、抗ＨＣＶ作用を有する３種または４種のさらなる化合物を含む。第６の態様の第２の実施形態では、この組成物は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物を含む。

第７の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の前、後、または同時に、患者に治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩と、抗ＨＣＶ作用を有する１種、２種、３種、４種、または５種のさらなる化合物とを投与する工程を含む、患者においてＨＣＶ感染症を治療する方法を提供する。第７の態様の第１の実施形態では、この方法は、抗ＨＣＶ作用を有する３種または４種のさらなる化合物を投与する工程を含む。第７の態様の第２の実施形態では、この方法は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物を投与する工程を含む。

本開示の他の態様は、本明細書において開示されている実施形態の適切な組合せを含むことができる。

また他の態様および実施形態は、本明細書において提供する説明において見い出すことができる。

本明細書における本開示の説明は、化学結合の法則および原理と適合させて解釈するべきである。場合によっては、任意の所与の場所に置換基を配置するために水素原子を取り除くことが必要な場合がある。

本開示に包含される化合物は、医薬品として使用するために適切に安定的なものであることを理解すべきである。

本明細書において引用されている全ての特許、特許出願、および文献参照は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。不整合がある場合は、定義を含めた本開示を優先する。

本明細書において使用されているように、下記の用語は、示される意味を有する。

「アルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する２個から６個の炭素原子の直鎖または分岐鎖基を意味する。

「アルコキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているアルキル基を意味する。

「アルコキシアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアルコキシ基で置換されているアルキル基を意味する。

「アルコキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアルコキシ基を意味する。

「アルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個から６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素由来の基を意味する。

「アルキルアミノ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＮＨＲ（Ｒはアルキル基である）を意味する。

「アルキルアミノカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアルキルアミノ基を意味する。

「アルキルカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアルキル基を意味する。

「アルキルスルホニル」という用語は、本明細書で使用する場合、スルホニル基を介して親分子の部分に結合しているアルキル基を意味する。

「アミノ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＮＨ₂を意味する。

「アミノカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアミノ基を意味する。

「アリール」という用語は、本明細書で使用する場合、フェニル基、または環の１つもしくは両方がフェニル基である二環式縮合環系を意味する。二環式縮合環系は、４〜６員の芳香族または非芳香族炭素環に縮合されたフェニル基からなる。本開示のアリール基は、基中の任意の置換可能な炭素原子を介して親分子の部分に結合することができる。アリール基の代表例には、それだけに限らないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられる。本開示のアリール基は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、第２のアリール基、アリールアルキル、アリールオキシ、シアノ、シアノアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ニトロ、およびオキソから独立して選択される１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されている場合があり；該第２のアリール基、該アリールアルキルおよび該アリールオキシのアリール部分、該ヘテロシクリル、ならびに該ヘテロシクリルアルキルのヘテロシクリル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、およびオキソから独立して選択される１個、２個、３個、４個、または５個の置換基でさらに適宜置換されている場合がある。

「アリールアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアリール基で置換されているアルキル基を意味する。

「アリールカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアリール基を意味する。

「アリールオキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているアリール基を意味する。

「アリールオキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているアリールオキシ基を意味する。

「アリールスルホニル」という用語は、本明細書で使用する場合、スルホニル基を介して親分子の部分に結合しているアリール基を意味する。

「カルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、−Ｃ（Ｏ）−を意味する。

「シアノ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＣＮを意味する。

「シアノアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシアノ基で置換されているアルキル基を意味する。

「シクロアルケニル」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜１４個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する非芳香族で部分不飽和の単環式、二環式、または三環式環系を意味する。シクロアルケニル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロヘキセニル、オクタヒドロナフタレニル、およびノルボルニレニルが挙げられる。

「シクロアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、３〜１４個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する飽和単環式、二環式、または三環式炭化水素環系を意味する。シクロアルキル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロプロピル、シクロペンチル、ビシクロ［３．１．１］ヘプチル、およびアダマンチルが挙げられる。

「（シクロアルキル）アルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシクロアルキル基で置換されているアルキル基を意味する。

「シクロアルキルカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているシクロアルキル基を意味する。

「シクロアルキルオキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているシクロアルキル基を意味する。

「シクロアルキルオキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているシクロアルキルオキシ基を意味する。

「ジアルキルアミノ」という用語は、本明細書で使用する場合、各Ｒ基がアルキル基である−ＮＲ₂を意味する。２個のＲ基は、同一でも異なってもよい。

「ジアルキルアミノカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているジアルキルアミノ基を意味する。

「ジアルキルアミノカルボニルアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のジアルキルアミノカルボニル基で置換されているアルキル基を意味する。

「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、本明細書で使用する場合、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。

「ハロアルコキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているハロアルキル基を意味する。

「ハロアルコキシアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のハロアルコキシ基で置換されているアルキル基を意味する。

「ハロアルコキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているハロアルコキシ基を意味する。

「ハロアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子で置換されているアルキル基を意味する。

「ハロアルキルカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているハロアルキル基を意味する。

「ヘテロシクリル」という用語は、本明細書で使用する場合、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１個、２個、もしくは３個のヘテロ原子を含有する５員、６員、または７員環を意味する。５員環は、０から２個の二重結合を有し、６員および７員環は、０から３個の二重結合を有する。「ヘテロシクリル」という用語にはまた、ヘテロシクリル環が４〜７員、好ましくは４〜６員の芳香族もしくは非芳香族炭素環に縮合している二環式基、または他の単環式ヘテロシクリル基が含まれる。本開示のヘテロシクリル基は、基中の炭素原子または窒素原子を介して親分子の部分に結合している場合がある。ヘテロシクリル基の例には、それだけに限らないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。本開示のヘテロシクリル基は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、アリールオキシ、シアノ、シアノアルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、第２のヘテロシクリル基、ヘテロシクリルアルキル、ニトロ、およびオキソから独立して選択される１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されている場合があり；該アリール、該アリールアルキルおよび該アリールオキシのアリール部分、該第２のヘテロシクリル、ならびに該ヘテロシクリルアルキルのヘテロシクリル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、およびオキソから独立して選択される１個、２個、３個、４個、または５個の置換基でさらに適宜置換されている場合がある。

「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のヘテロシクリル基で置換されているアルキル基を意味する。

「ヘテロシクリルカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているヘテロシクリル基を意味する。

「ヘテロシクリルオキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子を介して親分子の部分に結合しているヘテロシクリル基を意味する。

「ヘテロシクリルオキシカルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合しているヘテロシクリルオキシ基を意味する。

「ヒドロキシ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＯＨを意味する。

「ニトロ」という用語は、本明細書で使用する場合、−ＮＯ₂を意味する。

「−ＮＲ^aＲ^b」という用語は、本明細書で使用する場合、窒素原子を介して親分子の部分に結合している２個の基であるＲ^aおよびＲ^bを意味する。Ｒ^aおよびＲ^bは、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから独立して選択される。

「（ＮＲ^aＲ^b）スルホニル」という用語は、本明細書で使用する場合、スルホニル基を介して親分子の部分に結合している−ＮＲ^aＲ^b基を意味する。

「−ＮＲ^eＲ^f」という用語は、本明細書で使用する場合、窒素原子を介して親分子の部分に結合している２個の基であるＲ^eおよびＲ^fを意味する。Ｒ^eおよびＲ^fは、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロシクリルから独立して選択され；該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロシクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１個または２個の置換基で適宜置換されている。

「（ＮＲ^eＲ^f）カルボニル」という用語は、本明細書で使用する場合、カルボニル基を介して親分子の部分に結合している−ＮＲ^eＲ^f基を意味する。

「オキソ」という用語は、本明細書で使用する場合、＝Ｏを意味する。

「スルホニル」という用語は、本明細書で使用する場合、ＳＯ₂を意味する。

本開示の化合物は、プロドラッグとして存在することができる。「プロドラッグ」という用語は、本明細書で使用する場合、血液中の加水分解によって親化合物にインビボで急速に変換される化合物を表す。本開示のプロドラッグには、親分子上のヒドロキシ基のエステル、親分子上のカルボキシ基のエステル、および親分子上のアミンのアミドが挙げられる。

本開示の化合物は、医薬的に許容される塩として存在することができる。「医薬的に許容される塩」という用語は、本明細書で使用する場合、妥当な医学的判断の範囲内において、妥当な便益／リスク比に見合った過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに患者の組織と接触して使用するのに適切であり、それらの使用目的のために効果的である、水溶性もしくは油溶性もしくは分散性の本開示の化合物の塩または双性イオン形態を表す。塩は、化合物の最終単離および精製の間に、または別々に適切な塩基官能基を適切な酸と反応させることによって調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩；ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。医薬的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例には、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸など）、ならびに有機酸（シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸など）が挙げられる。

塩基付加塩は、酸性基を、適切な塩基（金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩など）と、あるいはアンモニアまたは有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンと反応させることによって、化合物の最終単離および精製の間に調製することができる。医薬的に許容される塩のカチオンには、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびに無毒性の四級アミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。

本明細書で使用する場合、「抗ＨＣＶ作用」という用語は、化合物がＨＣＶウイルスの治療に効果的であることを意味する。

「本開示の化合物」という用語、および同等の表現は、式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容されるエナンチオマー、ジアステレオマー、および塩を包含することを意味する。同様に、中間体への言及は、文脈上許容される場合、それらの塩を包含することを意味する。

「患者」という用語は、ヒトおよび他の哺乳動物の両方を含む。

「医薬組成物」という用語は、投与方法および剤形の種類によって、少なくとも１種のさらなる医薬担体、すなわち、希釈剤、保存料、充填剤、流動性調整剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、香料剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および予製剤などの補助剤、賦形剤またはビヒクルと組み合わせた本開示の化合物を含む組成物を意味する。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999)において一覧表示された成分を使用することができる。

「医薬的に許容される」という言回しは本明細書において、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または妥当な危険性／受益性割合に比例した他の問題もしくは合併症を伴わずに、患者の組織と接触する使用に適した、正しい医療判断の範囲内である化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味するために用いられる。

「治療有効量」という用語は、有意義な患者利益、例えば、ウイルス量の持続的減少を示すのに十分なそれぞれの活性物質の総量を意味する。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、この用語はその成分単独を意味する。組合せに適用する場合は、この用語は、組合せであれ、連続的であれ、または同時投与であれ、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせた量を意味する。

「治療」および「治療する」という用語は、（ｉ）疾患、障害および／または状態にかかりやすい場合があるが、まだその診断を受けていない患者において、疾患、障害または状態が起こることを防止し；（ｉｉ）疾患、障害または状態を阻害、すなわち、その進行を止め；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）疾患、障害または状態を軽減、すなわち、疾患、障害および／または状態の退行をもたらすことを意味する。

本開示の化合物の命名に使用する場合、記号Ｐ１’、Ｐ１、Ｐ２^*、Ｐ３およびＰ４は、本明細書で使用する場合、天然ペプチド切断基質の結合に対する、結合しているプロテアーゼ阻害剤のアミノ酸残基の相対的位置を表示する。天然基質において、切断はＰ１とＰ１’との間で起こり、ここでノンプライム位置は、ペプチド天然切断部位のＣ末端から始まってＮ末端に向けて伸びているアミノ酸を表し；一方、プライム位置は、指定切断部位のＮ末端から始まり、Ｃ末端に向かって伸びる。例えば、Ｐ１’は、切断部位のＣ末端の右側末端から離れた第１の位置（すなわち、Ｎ末端第１位置）を示し；一方、Ｐ１はＣ末端切断部位の左側から番号付けを始め、Ｐ２はＣ末端からの第２の位置などである）。（Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264を参照されたい］。

不斉中心は、本開示の化合物において存在する。例えば、化合物は、式

のＰ１シクロプロピル要素を含むことができ、式中、Ｃ₁およびＣ₂はそれぞれ、シクロプロピル環の１位および２位における不斉炭素原子を表す。

本開示は、ＨＣＶプロテアーゼを阻害する能力を有する全ての立体化学的形態、またはその混合物を包含することを理解すべきである。

本開示の特定の化合物はまた、分離可能である場合がある異なる安定的な高次構造形態で存在することができる。非対称の単結合の周りの束縛回転に起因するねじれによる不斉は、例えば立体障害または環ひずみによって、異なる配座異性体の分離を可能にすることができる。本開示には、これらの化合物のそれぞれの配座異性体およびこれらの混合物が挙げられる。

本開示の特定の化合物は、双性イオン形態で存在する場合があり、本開示には、これらの化合物のそれぞれの双性イオン形態およびこれらの混合物が含まれる。

治療に使用するために、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容される塩を、原化学物質(raw chemical)として投与することが可能である場合、活性成分を医薬組成物として提示することが可能である。したがって、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩と、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩は、上記の通りである。担体（複数可）、希釈剤（複数可）、または賦形剤（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して有害ではないという意味で許容できるものでなければならない。本開示の他の態様によって、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合する工程を含む、医薬製剤を調製するための方法もまた提供する。

医薬製剤は、単位用量当たり所定の量の活性成分を含有する単位用量形態で存在することができる。１日当たり約０．０１〜約２５０ミリグラム／キログラム（「ｍｇ／ｋｇ」）体重、好ましくは１日当たり約０．０５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の本開示の化合物の投与量レベルが、ＨＣＶ媒介疾患の予防および治療のための単独療法において典型的である。典型的には、本開示の医薬組成物は、１日当たり約１〜約５回、あるいは持続注入として投与される。このような投与は、長期治療または救急治療として使用することができる。単一の剤形を得るため担体物質と合わせることのできる活性成分の量は、治療される状態、状態の重篤度、投与回数、投与経路、用いる化合物の排せつ率、治療期間、ならびに患者の年齢、性別、体重、および状態によって変化する。好ましい単位製剤は、本明細書において上記のように、活性成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な画分を含有する製剤である。一般に治療は、実質的に化合物の適量未満の少量の投与量で開始する。その後、この条件の下で最適な効果が得られるまで少しずつ投与量を増加させる。一般に化合物は、有害または害毒を及ぼす副作用をもたらさずに抗ウイルス的に効果的な結果を生じさせるであろう濃度レベルで投与することが最も望ましい。

本開示の組成物が、本開示の化合物と、１種または複数のさらなる治療剤または予防薬との組合せを含む場合、化合物およびさらなる薬剤の両方は通常、単独療法において通常投与される投与量の約１０〜１５０％、さらに好ましくは約１０〜８０％の投与量レベルで存在する。

医薬製剤は、任意の適切な経路による投与、例えば、経口（口腔または舌下を含めた）、直腸、経鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含めた）、経腟、あるいは非経口（皮下、皮内、筋内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、静脈内、または皮内注射もしくは注入を含めた）経路による投与に適合することができる。このような製剤は、薬学の技術分野において公知の任意の方法によって、例えば活性成分を担体（複数可）または賦形剤（複数可）と結合することによって調製することができる。

経口投与に適合された医薬製剤は、カプセル剤または錠剤；散剤または顆粒剤；水性もしくは非水性液体中の溶液剤または懸濁剤；食用の泡またはホイップ；あるいは水中油型液体乳剤または油中水型乳剤などの個別単位として提示することができる。

例えば、錠剤またはカプセル剤の形態における経口投与のために、活性薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの経口で無毒性の医薬的に許容される不活性担体と合わせることができる。散剤は、化合物を適切な微細なサイズに微粉砕し、食用炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトールなど）などの同様に微粉砕した医薬担体と混合することによって調製される。香味剤、保存剤、分散剤、および着色剤もまた存在することができる。

カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、ゼラチンの形成被覆に充填することによって作製される。コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体ポリエチレングリコールなどの流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に粉末混合物に加えることができる。カプセル剤を摂取する場合に薬物の有効性を向上させるために、寒天、炭酸カルシウム、または炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤をまた加えることができる。

さらに、所望であるかまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に組み込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβラクトースなど）、コーン甘味料、天然および合成のガム（アカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの剤形において使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、これらだけに限らないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラッギングし、滑沢剤および崩壊剤を加え、錠剤に圧入することによって製剤される。粉末混合物は、適切に粉砕した化合物を、上記のような希釈剤または基剤と、および所望により、結合剤（カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンなど）、溶解遅延剤（パラフィンなど）、再吸収促進剤（第四級塩など）および／または吸収剤（ベントナイト、カオリン、またはリン酸二カルシウムなど）と混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤（シロップ、デンプン糊、アラビアゴム粘液、またはセルロース系材料もしくは高分子材料の溶液など）で湿らせ、強制的にスクリーンを通過させるによって顆粒化することができる。顆粒化に代わるものとして、粉末混合物を錠剤成形機にかけることができ、その結果は、顆粒剤へと割れる不完全に形成されたスラグとなる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱油を添加することによって潤滑にされ、錠剤成形型に粘着することを防止することができる。次いで、潤滑混合物を錠剤に圧縮する。本開示の化合物はまた、易流動性の不活性担体と合わせ、顆粒化またはスラッギング工程を経ることなく直接錠剤に圧縮することができる。セラックのシーリングコートからなる透明または不透明な保護コーティング、糖または高分子材料のコーティング、およびワックスの光沢コーティングを提供することができる。これらのコーティングに染料を加えて、異なる単位用量を識別することができる。

溶液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などの経口流体は、一定量が所定の量の化合物を含有するように、投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を適切に香味付けした水溶液に溶解することによって調製することができ、一方エリキシル剤は、無毒性ビヒクルの使用によって調製される。可溶化剤および乳化剤（エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど）、保存剤、香味添加剤（ハッカ油または天然甘味料など）、またはサッカリンもしくは他の人工甘味料などもまた加えることができる。

適切な場合には、経口投与のための投与単位製剤は、マイクロカプセル化することができる。製剤はまた、例えば、粒子材料をポリマー、ワックス、または同種のものでコーティングするか、それらに包埋することによって、放出を延長または維持するように調製することができる。

式（Ｉ）の化合物、およびその医薬的に許容される塩はまた、小さな単膜小胞、大きな単膜小胞、および多重膜小胞などのリポソームデリバリーシステムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。

式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩はまた、化合物分子が結合する個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達することができる。化合物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーに結合することができる。このようなポリマーには、パリトイル残基(palitoyl residue)で置換されているポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。さらに、化合物は、薬物の制御放出を実現するのに有用な生分解性ポリマーの類（例えば、ポリ乳酸、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー）に結合することができる。

経皮的投与に適合された医薬製剤は、レシピエントの表皮と長時間密着し続けることを目的とする個別のパッチとして提示することができる。例えば、活性成分は、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)において概ね記載されているようにイオン泳動によってパッチから送達することができる。

局所投与に適合された医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、溶液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、または油剤として製剤することができる。

眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の治療のために、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリーム剤として施用される。軟膏剤中に配合される場合、活性成分は、パラフィン軟膏基剤または水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤と共にクリーム剤中に配合することができる。

眼への局所投与に適合された医薬製剤には、活性成分が適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁している点眼薬が挙げられる。

口内の局所投与に適合された医薬製剤には、ロゼンジ、香錠、および口内洗浄剤が挙げられる。

直腸投与に適合された医薬製剤は、坐薬としてまたは浣腸として提示することができる。

担体が固形物である経鼻投与に適合された医薬製剤には、鼻から吸い込む方法、すなわち、鼻の近くに保持した粉末容器から鼻腔を通した急速な吸入によって投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末が挙げられる。鼻用スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な製剤には、活性成分の水溶液または油溶液が挙げられる。

吸入による投与に適合された医薬製剤には、様々なタイプの定量加圧式エアロゾル、ネブライザー、または注入器によって生成することができる、微粒子の塵または霧が挙げられる。

膣投与に適合された医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提示することができる。

非経口投与に適合された医薬製剤には、抗酸化剤、バッファー、制菌剤、ならびに製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含む場合がある水性および非水性の無菌懸濁剤を含有してもよい、水性および非水性の滅菌注射液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアル中に存在してもよく、注射のため使用直前に、無菌の液体担体、例えば水の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から即時調合注射液および懸濁剤を調製することができる。

特に上述した成分に加えて、製剤には、問題の製剤のタイプを考慮して当技術分野で常用の他の薬剤を含むことができ、例えば経口投与に適した薬剤には、香味剤が含まれる場合があることを理解すべきである。

下記の表１では、本開示の化合物と共に投与することができる化合物のいくつかの実例を一覧表示する。本開示の化合物は、一緒にもしくは別々に、または化合物を組成物に合わせることによって、併用療法において他の抗ＨＣＶ作用化合物と共に投与することができる。

本開示の化合物はまた、実験用試薬として使用することができる。化合物は、ＨＣＶ疾患の機構の知識をさらに向上させるための、ウイルス複製アッセイの設計、動物アッセイ系の確認および構造生物学研究のための研究道具の提供において有益な場合がある。さらに、本開示の化合物は、例えば拮抗阻害によって、他の抗ウイルス性化合物の結合部位の確立または決定において有用である。

本開示の化合物はまた、物質のウイルス汚染を処理または予防し、したがって実験室、またはこのような物質（例えば、血液、組織、手術器具および手術着、実験器具および実験着、ならびに採血もしくは輸血の装置および材料）と接触する医療関係者もしくは患者のウイルス感染の危険性を減少させるために使用することができる。

本開示は、合成過程によって、あるいは人体もしくは動物体（インビボ）内で生じる過程またはインビトロで生じる過程を含めた代謝過程によって調製される場合、式（Ｉ）を有する化合物を包含することを意図する。

本明細書において開示されている化合物を識別するために一般に使用される化学物質の略語には、Ｂｎ：ベンジル；Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル｛Ｍｅ３ＣＯＣ（Ｏ）｝；ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン；ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール；ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン；ＣＨ₂Ｃｌ₂＝ＤＣＭ：塩化メチレン；ＴＢＭＥ：ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル；ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート；ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート；ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；４−ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＣＣ：１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＤＰＰＡ：ジフェニルホスホリルアジド；Ｅｔ：エチル；ＥｔＯＨ：エタノール；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；Ｅｔ₂Ｏ：ジエチルエーテル；グラブス触媒：ビス（トリシクロヘキシルホスフィン）ベンジリデンルテニウム（ＩＶ）ジクロリド；第２世代グラブス触媒：トリシクロヘキシルホスフィン［１，３−ビス（２，４，６−トリメチルフェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］［ベンジリデン］ルテニウム（ＩＶ）ジクロリド；ＨＡＴＵ：［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；ＨＢＴＵ：［Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；ＨＯＢＴ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＨＯＡＴ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール；ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；ＭＳ：質量分析法；Ｍｅ：メチル；ＭｅＯＨ：メタノール；ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン；ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジン；Ｐｒ：プロピル；ＰＰＡ：ポリリン酸；ＴＢＡＦ：テトラ−ｎ−ブチルフッ化アンモニウム；１，２−ＤＣＥまたはＤＣＥ：１，２−ジクロロエタン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ：テトラヒドロフランが挙げられる。

本開示の化合物の合成に有用な出発物質は当業者には公知であり、容易に製造することができ、または市販されている。

以下に記載する下記の方法は、例示の目的のために提供するものであり、特許請求の範囲を制限することを意図しない。従来の保護基を使用して官能基を保護し、次いで保護基を除去して本開示の化合物を提供するようにこのような化合物を調製することが必要である場合があることが理解されるであろう。本開示による保護基の使用に関する詳細は、当業者には公知である。

スキーム１に示されるように、ジペプチド１などの本発明の中間体は、式（Ｉ）の化合物の調製のために使用することができる。この方法の第１の工程において、１のＢｏｃ保護された窒素は、エーテルなどの溶媒中のＨＣｌなどの酸を使用して脱保護され、対応する遊離アミン２を提供する。アミン２は引き続き、ジクロロメタンなどの溶媒中でＨＡＴＵなどのカップリング剤を使用してアミノ酸３にカップリングして、トリペプチド中間体４を提供することができる。場合によっては、３などの中間体は市販であり、あるいはこのような化合物は、当技術分野において公知の方法によってラセミまたはキラル様式で容易に調製することができることに留意すべきである。式（Ｉ）の化合物の構造における重要な転換は、一般構造体４の中間体が一般構造体５の中間体に変換される大環状化方法である。引用した一般例において、中間体４の５への変換は、分子内オレフィンメタセシス反応によって影響される場合がある。このクラスの反応は、当技術分野で十分に確立されており、したがっていくつかのオレフィンメタセシス触媒が開発されており、市販されている。例えば、ジエン４の大環状分子５への変換は、ジクロロメタンまたはジクロロエタンなどの溶媒中で、４を十分な量の第１世代グラブスオレフィンメタセシス触媒で処理することによって影響される場合がある。４の５への変換についてのいくつかの例において、この環化過程がもたらされるために、反応混合物を加熱することが必要な場合がある。次いで、２つの工程方法によって中間体５を７などの式（Ｉ）の化合物に変換する。この方法の第１の工程において、中間体５のエステル官能基は、対応するカルボン酸６に加水分解される。この転換は、５をＴＨＦ、メタノールおよび水の混合物中で水酸化リチウムなどの塩基で処理するけん化反応によって達成することができる。このように得られた酸６は、示されているようにスルホンアミド誘導体との単純なカップリング反応によって、式（Ｉ）の化合物に変換されることができる。例えば、塩化メチレンなどの溶媒中で６などのカルボン酸をＣＤＩで処理することによって、インサイチューで反応性中間体が生成し、これをスルホンアミドで処理する場合、式（Ｉ）の化合物である７が提供されることは当技術分野で十分に確立している。

上記の最終のカップリング工程において、すなわち６の７への変換において、Ｒ⁸ＳＯ₂ＮＨ₂実体がスルファミド誘導体、例えばＲ_aＲ_bＮＳＯ₂ＮＨ₂である場合、代わりのカップリング手順を使用することができる。それにおいては、スルファミド中間体１（スキーム２）は、ＴＨＦなどの溶媒中でリチウムビスヘキサメチルジシランなどの塩基を使用して最初に脱プロトン化される。次いで、スルファミドアニオン２のこのように得られたＴＨＦ溶液を、活性化カルボン酸を含有する上記の反応混合物に加える。次いで、この反応混合物を数時間撹拌し、不可欠なアシルスルファミド７を得る。

式（Ｉ）の化合物はまた、本明細書に記載するような式Ｉの他の化合物に変換することができる。このような方法の例をスキーム３に示し、そこにおいてはＰ４位においてＢｏｃ基を有する式Ｉの化合物（１）を、式Ｉの化合物（３）（前記化合物はＰ４位において尿素基を有する）に変換する。１の３への変換は、２つの工程方法で行うことができ、その最初は、１を塩化メチレンなどの溶媒中でＴＦＡなどの酸で処理することによる１のアミン２への変換である。このように得られたアミンＴＦＡ塩を、１当量の塩基の存在下、イソシアネートで処理し、式Ｉの化合物（３）（Ｐ３部分は尿素でキャッピングされている）を提供することができる。前述のように、中間体２は、式Ｉの化合物（Ｐ３基はアミドまたはカルバメートでキャッピングされている）の調製のための出発物質として使用することができることを当業者であれば理解するであろう。式Ｉの前記化合物の構築は、アミンからの前記Ｐ４官能基の形成のための標準状態を使用して達成することができる。

Ｐ２中間体および式（Ｉ）の化合物を作製するための非限定的な手順を、下記のスキームにおいて示す。前記中間体、反応条件および具体例において示す方法は、他の置換パターンを有する化合物に広く適用することができる。例えば、スキームＩＶの式（Ｉ）の化合物において見い出されるＰ２成分の合成は、明確な合成経路に従って調製することができる。そこにおいては、市販のＮ−Ｂｏｃ−４−オキソ−Ｌ−プロリンを、グリニャール試薬（あるいは、アルキルまたはアリールリチウム種、あるいは、アルキルまたはアリール亜鉛種）などの有機金属剤で処理し、プロリンのＣ４位がＲ³置換基および遊離の第三級ヒドロキシ基を有する中間体（２）を提供する。次いで、中間体２のアルコール官能基を官能化して、所望のＲ₈官能基を提供することができる。この工程において、中間体２のアルコールは、一連の当技術分野で十分に確立した反応に関与することができる。例えば、２のアルコールは、アシル化され、エステル、カルバメートまたはカルボネートを提供することができ；アルキル化され、エーテルを提供することができ、ホスホン化され、ホスフェートを提供することができる。スキームＩＶの中間体２の中間体３への変換のために、示されているように２のカルボン酸基を最初に保護することが必要な場合がある。

アルコールの官能化のための化学反応は、ＲｉｃｈａｒｄＬａｒｏｃｋによるComprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations. Second Additionなどのこのテーマについての標準的なテキストに記載されている。このテキストは、ＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓによって出版されている。そこにおいては、当業者がスキームＩＶの中間体２の中間体３への変換のために容易に用いることができる特定の参照文献および概説が強調されている。例えばアルコールからのエーテルの形成のための条件および適切な参照文献は、Ｌａｒｏｃｋのテキストの８８３〜９２９ページに見い出すことができる。さらに具体的には、８９０〜８９４ページに引用されている条件および参照文献は、本発明の実施の構築のために最も適切である。アルコールを対応するエステル誘導体へ変換するための同様の条件は、Ｌａｒｏｃｈのテキストの１９５２〜１９５５ページに見い出すことができる。さらに、Journal of Organic Chemsitry 2001, volume 66, page 8926およびそこに引用されている適切な参照文献に記載されている化学反応は、本発明の実施の構築のために有用である。

プロリン誘導体１のケトン部分（スキームＶＩ）への有機金属剤の添加は、当技術分野で十分に確立していることに留意すべきである。例えば、Ｈｒｕｂｙおよび共同研究者（J. Org. Chem. 2001, 66, 3593）は、臭化フェニルマグネシウムのスキームＩＶの一般構造１の中間体への添加について記載している。これらの知見は、ｔｅｒｔ−ブチルエステル基をＣ２カルボキシル部分の保護基として用いる場合、所望の１，２付加生成物（スキームＶＩの２）の最適収率が得られるという証拠を提供する。さらに、この著作物は、この付加反応の立体化学的な結果についてＸ線結晶構造解析の形態で明らかな証拠を提供した。具体的には、ケトン１への上記のグリニャール添加の結果として、Ｃ４ヒドロキシル基およびＣ２カルボキシル基が５員環の周りでシンの相対的配向をとる単一の生成物を得た。この構造決定から、Ｒ₃Ｍの１のケトンへの付加における面選択性は、スキームＶＩの構造１においてαであると推定された。すなわち、有機金属は、選択的に１中のカルボニルのｒｅ面（底面）に添加され、示された立体化学を有する相当する第三級アルコール（２）を提供する。

Ｈｒｕｂｙの上記の著作物は、特定のグリニャール試薬の１の誘導体への添加を記載している（スキームＶＩ）。しかし、種々のグリニャール試薬のプロリン１への添加は、本開示に包含される。グリニャール試薬を含めた有機金属剤のケトンへの添加について記載した文献は、多数あり、Comprehensive Organic Functional Group Transformations. Volume 2: Synthesis: Carbon with one heteroatom attached by a single bond. Editor in Chief Alan. R. Katritzky, et al.1995. Chapter 2.02, page 37など当技術分野で総括して要約されている。このクラスの反応はまた、Comprehensive Organic Synthesis. Editor in Chief Barry M Trost, Volume 1: Additions to C-X pi-bonds (part 1). 1991に記載されている。

当技術分野の最近の研究は、ケトンへの付加反応におけるグリニャール試薬のさらなる最適化のための条件を提供し、これらの著作物は、本開示において有用である場合がある。例えばＩｓｈｉｈａｒａおよび共同研究者（Org. Lett. 2005, Vol. 7, No. 4, 573）は最近、マグネシウムアート錯体の形成および有用性について記載した。マグネシウムアート錯体であるＲ₃ＭｇＬｉは、グリニャール試薬およびアルキルリチウムに由来する。Ｉｓｈｉｈａｒａによって記載されているように、これらの錯体は、ケトンに対する反応において１，２付加生成物の優れた収率を実現する。別の研究において、Ｋｎｏｃｈｅｌおよび共同研究者（Angew. Chem Int. Ed. 2006, 45, 497）は、有機マグネシウム試薬と併せたＬｎＣｌ₃などの可溶性ランタニド塩の使用を記載している。これらのランタニド塩が存在することによって、カルボニル化合物への１，２付加反応の効率の改善をもたらす。これらの著作物、およびそこにおいて引用されている参照文献は、カルボニル化合物への単純な付加におけるグリニャール反応の最適化に関して現況技術を確立し、本開示における重要な情報源として役立つ。

一連の有機金属反応剤は、ケトンへの付加反応に関与することにも留意すべきである。この著作物において含まれるのは、１，２様式でカルボニル部分に添加されることが周知である、アリールリチウム、アルキルリチウムおよびヘテロアリールリチウム試薬などの試薬である。例えば、Ｄｏｎｄｏｎｉおよび共同研究者による最近の研究（J. Org. Chem. 2005, 70, 9257）において、ＢｕＬｉを使用してベンゾチアゾールをリチウム化し、このように得られたＣ２−リチウム種を、１，２様式でラクトンに加える。類推によると、リチウム化ベンゾチアゾールは、１，２様式でスキームＶＩのケトン１に添加され、２ａなどの中間体を提供することが予想される。

オキサゾールおよびチアゾールおよびイミダゾールなどのヘテロ環由来の有機金属反応剤はまた、ケトン１への１，２付加反応に関与できることを当業者であれば理解するであろう。これらのヘテロ環系のそれぞれのために用いられる固有の条件を定義する多数の文献があり、当業者はこの情報を容易に利用できる。例えば、ケトンへの付加反応におけるベンゾオキサゾールまたはオキサゾール由来の有機金属反応剤の使用は、マグネシウム酸リチウムの使用を必要とする。Ｂａｙｈおよび共同研究者によるこの最近の研究の詳細は、J. Org. Chem., 2005, 70, 5190に記載されている。スキームＶＩのケトン１へのベンゾオキサゾールの添加によって、２ｂなどの中間体へのアクセスを可能にする。

ヘテロ環由来の広範囲の有機金属反応剤を使用したケトンへの添加については、重要な文献の前例がある。例えば、Ｂｅｈｉｎｄａおよび共同研究者の著作物（Tet. Lett. 42, 2001, 647）は、リチウム化ベンズイミダゾールの形成および単純なラクトンへのその添加について記載している。類推によると、スキームＶＩのケトン１への付加反応におけるこのリチウム化ベンズイミダゾールの使用は、２ｃなどの中間体へのアクセスを可能にする。さらに、Ｋａｗａｓａｋｉおよび共同研究者による最近の研究（Bioorganic and Medicinal Chem. Lett. 13, 2003, 87）は、一連のリチウム化ヘテロ芳香族化合物の形成および活性化アミドへのそれらの付加反応について記載している。類推によると、スキームＶＩのケトン１への付加反応におけるこれらのリチウム化ヘテロ芳香族中間体の使用は、中間体２ｄ〜２ｋへのアクセスを可能にする。

ケトン１への１，２付加反応においてビアリール、またはヘテロアリール−アリール系由来の有機金属を使用することはまた、本開示に対して適切である。このクラスの有機金属反応剤のケトン１への添加は、２ｌおよび２ｍなどの中間体へのアクセスを可能にする。本発明の例示において、スキームＶＩのケトン１への付加反応において続いて使用するためのビアリール、またはヘテロ−アリール有機金属を合成することが必要である場合があることに留意すべきである。当業者であれば、このタイプの有機金属およびその前駆体の調製について記載している重要な文献を理解するであろう。例えば、Ｃｈｉｎｃｈｉｌｌａおよび共同研究者による最近の概説（Chem. Rev. 2004, 104, 2667）は、金属化ヘテロ環の調製およびそれらの利用について記載している。ビアリールまたはヘテロアリール−アリール系の調製のための基本的な化学反応は、鈴木様カップリング反応を用いる場合が多い。ＧｒｅｇｏｒｙＦｕによって発表された文献は、このようなカップリング反応における現況技術について記載し、これらの参照文献のサブセットは以下の通りである。JACS 2004, 126, 1340; JACS, 2002, 124, 13662; Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, No.11, 1945; Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, No.20, 3910; JACS 2002, 122, 4020; JACS 2001, 123, 10099; Org. Lett. 2001, Vol. 3, No. 26, 4295; Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, No.24, 3387。この著作物に加えて、この領域における重要な概説は、ＲｏｓｓｉによるSynthesis 2004, No.15, 2419など容易に利用可能である。

（実施例）
本開示を、これからその範囲を限定することを意図しない特定の実施形態に関連して説明する。一方、本開示は、全ての代替形態、修正形態、および同等形態を特許請求の範囲内に含むことができるものとして包含する。したがって、特定の実施形態を含む下記の実施例は、本開示の１つの実施を例示し、実施例は特定の実施形態を例示する目的のためであり、その手順および概念的側面の最も有用で理解しやすい説明と考えられているものを提供するために提示することが理解される。

特に断りのない限り、溶液割合は重量対容量の関係を表し、溶液比は容量対容量の関係を表す。核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ３００、４００または５００ＭＨｚ分光計で記録した；化学シフト（δ）は百万分率で報告する。フラッシュクロマトグラフィーを、スティルのフラッシュクロマトグラフィー技術によってシリカゲル（ＳｉＯ₂）上で行った（J. Org. Chem. 1978, 43, 2923）。
実施例１

スルファミドの調製

ＴＨＦ中の水（１当量）を、冷たい（−２０℃）撹拌したイソシアン酸クロロスルホニル（１当量）のＴＨＦ溶液に加えることによって中間体の塩化スルファモイルを調製し、このように得られた溶液を０℃に温めた。この溶液に、無水Ｅｔ₃Ｎ（１当量）、続いて不可欠な第二級アミン（１当量）を加えた。反応混合物を室温に加熱し、次いで濾過し、濾液をロータリーエバポレーターにかけ、所望のスルファミドを得た。次いで、前記スルファミドをカルボン酸に結合し、所望のアシルスルファミドを得た。
実施例２

アシルスルファミド中間体の調製のための特定の手順

（１Ｒ、２Ｓ）１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ビニル−シクロプロパンカルボン酸（２１７ｍｇ、１．１９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、ＣＤＩ（２９０ｍｇ、１．７９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４５分間加熱還流した。別の丸底フラスコ内で、ＬｉＨＭＤＳ（ヘキサン中の１．０Ｍ溶液、２．４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ−エチルメチルスルファミド（３３０ｍｇ、２．３８８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。２種の反応混合物を一緒に加え、室温で２時間撹拌した。水を加え、反応物をクエンチし、反応液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させた。溶媒の蒸発によって、粗生成物を得て、これを分取ＨＰＬＣによって精製し、所望のＮ−アシルスルファミドを得た。次いで、Ｎ−アシルスルファミドを、ジオキサン（２ｍＬ）中の４ＮのＨＣｌ溶液に溶解し、室温で４時間撹拌した。溶液の蒸発によって茶色がかった油状物をＨＣｌ塩として得た。（１１２ｍｇ、３３％収率）。¹H NMR (400Mz, CD₃OD) δ 1.16 (t, J=7.21 Hz, 3 H), 1.68 (dd, J=10.03, 7.83 Hz, 1 H), 2.15 (m, 1 H), 2.37 (m, 1 H), 2.89 (s, 3 H), 3.30 (m, 2 H), 5.31 (d, J=10.27 Hz, 1 H), 5.42 (d, J=17.12 Hz, 3 H), 5.68 (m, 1 H). LC-MS (保持時間: 0.883分), MS m/z 270 (M+Na⁺).
実施例３

ラセミの（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩の調製（方法Ａおよび方法Ｂ）

指定した化合物を、下記の方法ＡおよびＢのそれぞれによってラセミに作製した。

方法Ａ
グリシンエチルエステルのＮ−ベンジルイミンの調製

グリシンエチルエステル塩酸塩（３０３．８ｇ、２．１６モル）を、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１．６Ｌ）中で懸濁した。ベンズアルデヒド（２３１ｇ、２．１６モル）および無水硫酸ナトリウム（１５４．６ｇ、１．０９モル）を加え、氷水浴を使用して混合物を０℃に冷却した。トリエチルアミン（４５５ｍＬ、３．２６モル）を、３０分に亘り１滴ずつ加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。次いで、氷水（１Ｌ）を加えることによって反応物をクエンチし、有機層を分離した。水相をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（０．５Ｌ）で抽出し、合わせた有機相を飽和水性ＮａＨＣＯ₃（１Ｌ）およびブライン（１Ｌ）の混合物で洗浄した。溶液をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、減圧濃縮し、３９２．４ｇのＮ−ベンジルイミン生成物を濃厚な黄色の油状物として得て、それを次の工程で直接使用した。¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 1.32 (t, J=7.1 Hz, 3H), 4.24 (q, J=7.1 Hz, 2H), 4.41 (d, J=1.1 Hz, 2H), 7.39-7.47 (m, 3H), 7.78-7.81 (m, 2H), 8.31 (s, 1H).

ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの調製

リチウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４．０６ｇ、１．０５モル）の乾燥トルエン（１．２Ｌ）懸濁液に、グリシンエチルエステルのＮ−ベンジルイミン（１００．４ｇ、０．５２６モル）およびｔｒａｎｓ−１，４−ジブロモ−２−ブテン（１０７．０ｇ、０．５００モル）の乾燥トルエン（０．６Ｌ）中の混合物を６０分に亘り１滴ずつ加えた。添加完了後、水（１Ｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ、１Ｌ）を加えることによって深紅の混合物をクエンチした。水相を分離し、ＴＢＭＥ（１Ｌ）で再び抽出した。有機相を合わせ、１ＮのＨＣｌ（１Ｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。有機相を分離し、水（０．８Ｌ）で抽出した。次いで、水相を合わせ、塩（７００ｇ）で飽和させ、ＴＢＭＥ（１Ｌ）を加え、混合物を０℃に冷却した。次いで、撹拌した混合物を、１０ＮのＮａＯＨを１滴ずつ加えることによってｐＨ１４に塩基性化し、有機層を分離し、水相をＴＢＭＥ（２×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、１Ｌの容量まで濃縮させた。遊離アミンのこの溶液に、ＢＯＣ₂Ｏまたは二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３１．０ｇ、０．６モル）を加え、混合物を室温で４日間撹拌した。さらなる二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５０ｇ、０．２３モル）を反応物に加え、混合物を３時間還流し、次いで一晩かけて室温まで冷却させた。反応混合物をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、減圧濃縮し、８０ｇの粗生成物を得た。この残渣を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製（２．５ＫｇのＳｉＯ₂、１％〜２％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂で溶出）し、５７ｇ（５３％）のラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを黄色の油状物として得たが、それは冷蔵庫内に置いている間に凝固した。¹H NMR (CDCl₃, 300 MHz) δ 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3H), 1.46 (s, 9H), 1.43-1.49 (m, 1H), 1.76-1.82 (br m, 1H), 2.14 (q, J=8.6 Hz, 1H), 4.18 (q, J=7.2 Hz, 2H), 5.12 (dd J=10.3, 1.7 Hz, 1H), 5.25 (br s, 1H), 5.29 (dd, J=17.6, 1.7 Hz, 1H), 5.77 (ddd, J=17.6, 10.3, 8.9 Hz, 1H); MS m/z 254.16 (M-1).

ラセミの（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩の調製

Ｎ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（９．３９ｇ、３６．８ｍｍｏｌ）を、４ＮのＨＣｌ／ジオキサン（９０ｍｌ、３６０ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩を定量的収率（７ｇ、１００％）で得た。¹H NMR (メタノール-d₄) δ 1.32 (t, J=7.1, 3H), 1.72 (dd, J=10.2, 6.6 Hz, 1H), 1.81 (dd, J=8.3, 6.6 Hz, 1H), 2.38 (q, J=8.3 Hz, 1H), 4.26-4.34 (m, 2H), 5.24 (dd, 10.3, 1.3 Hz, 1H) 5.40 (d, J=17.2, 1H), 5.69-5.81 (m, 1H).

方法Ｂ
ラセミのＮ−Ｂｏｃ−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩の調製

カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１．５５ｇ、１０２．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５０ｍＬ）溶液に、−７８℃でＴＨＦ（１１２ｍＬ）中の市販のグリシンエチルエステルのＮ，Ｎ−ジベンジルイミン（２５．０ｇ、９３．５３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に温め、４０分間撹拌し、次いで−７８℃に再冷却した。この溶液に、ｔｒａｎｓ−１，４−ジブロモ−２−ブテン（２０．０ｇ、９３．５０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で１時間撹拌し、−７８℃に再冷却した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１．５５ｇ、１０２．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を直ちに０℃に温め、減圧濃縮する前にさらに１時間撹拌した。粗生成物を、Ｅｔ₂Ｏ（５３０ｍＬ）に溶解し、１Ｎの水性ＨＣｌ溶液（１０６ｍＬ、１０６ｍｍｏｌ）を加え、このように得られた二相性混合物を室温で３．５時間撹拌した。層を分離し、水層をＥｔ₂Ｏ（２×）で洗浄し、飽和水性ＮａＨＣＯ₃溶液で塩基性化した。所望のアミンを、Ｅｔ₂Ｏ（３×）で抽出し、合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、遊離アミンを得た。この物質を、ジオキサン（１００ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）中の４ＮのＨＣｌ溶液で処理し、濃縮し、少量で未同定の芳香族不純物（８％）の存在以外は手順Ａから得た物質と同一の、（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩を茶色の半固形物（５．３ｇ、３４％収率）として得た。
実施例４

Ｎ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの分割

分割Ａ
３９℃に保持し、３００ｒｐｍで撹拌し、１２リットルのジャケット付き反応器内に収容したリン酸ナトリウムバッファーの水溶液（０．１Ｍ、４．２５リットル（「Ｌ」）、ｐＨ８）に、５１１グラムのＡｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ（約４２５ｍＬ）（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）を加えた。混合物の温度が３９℃に到達したときに、水中の５０％ＮａＯＨを加えることによってｐＨを８．０に調節した。次いで、ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（８５ｇ）のＤＭＳＯ（８５０ｍＬ）溶液を、４０分に亘って加えた。次いで、反応温度を４０℃に２４．５時間保持し、その間に混合物のｐＨを、水中の５０％ＮａＯＨを使用して１．５時間および１９．５時間時点で８．０に調節した。２４．５時間後、エステルのエナンチオ過剰率を９７．２％であると決定し、反応物を室温（２６℃）に冷却し、一晩撹拌し（１６時間）、その後エステルのエナンチオ過剰率は１００％であると決定した。次いで、反応混合物のｐＨを、５０％ＮａＯＨで８．５に調節し、このように得られた混合物を、ＭＴＢＥ（２×２Ｌ）で抽出した。次いで、合わせたＭＴＢＥ抽出物を５％ＮａＨＣＯ₃（３×１００ｍＬ）、水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、真空中で蒸発させ、鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを淡黄色の固形物（４２．５５ｇ；純度：９７％＠２１０ナノモル（「ｎＭ」）、酸は含有せず；１００％鏡像体過剰率（「ｅｅ」））として得た。

次いで、抽出工程からの水層を、５０％Ｈ₂ＳＯ₄でｐＨ２まで酸性化し、ＭＴＢＥ（２×２Ｌ）で抽出した。ＭＴＢＥ抽出物を水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、蒸発させ、酸を淡黄色固形物（４２．７４ｇ；純度：９９％＠２１０ｎＭ、エステルを含有せず）として得た。

分割Ｂ
２４ウェルプレート（容量：１０ｍｌ／ウェル）のウェル中の１００ミリモル（「ｍＭ」）のＨｅｐｓ・Ｎａバッファー（ｐＨ８．５）（０．５ｍＬ）に、０．１ｍＬのＳａｖｉｎａｓｅ１６．０Ｌ（バチルス・クラウシイからのプロテアーゼ）（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）およびラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）溶液を加えた。プレートを密封し、２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートした。１８時間後、エステルのエナンチオ過剰率は、下記のように４４．３％であると決定した。０．１ｍＬの反応混合物を取り出し、１ｍＬエタノールとよく混合し；遠心分離後、１０マイクロリットル（「μｌ」）の上清をキラルＨＰＬＣで分析した。残りの反応混合物に、０．１ｍＬのＤＭＳＯを加え、プレートをさらに３日間２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートし、その後４ｍＬのエタノールをウェルに加えた。遠心分離後、１０μｌの上清をキラルＨＰＬＣで分析し、エステルのエナンチオ過剰率を１００％であると決定した。

分割Ｃ
２４ウェルプレート（容量：１０ｍＬ／ウェル）のウェル中の１００ｍＭのＨｅｐｓ・Ｎａバッファー（ｐＨ８．５）０．５ｍｌに、０．１ｍｌのＥｓｐｅｒａｓｅ８．０Ｌ（バチルス・ハロデュランスからのプロテアーゼ）（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）およびラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１０ｍｇ）のＤＭＳＯ（０．１ｍＬ）溶液を加えた。プレートを密封し、２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートした。１８時間後、エステルのエナンチオ過剰率は、下記のように３９．６％であると決定した。０．１ｍＬの反応混合物を取り出し、１ｍＬのエタノールとよく混合し；遠心分離後、１０μｌの上清を、キラルＨＰＬＣで分析した。残りの反応混合物に、０．１ｍＬのＤＭＳＯを加え、プレートをさらに３日間２５０ｒｐｍで４０℃にてインキュベートし、その後４ｍＬのエタノールをウェルに加えた。遠心分離後、１０μｌの上清をキラルＨＰＬＣで分析し、エステルのエナンチオ過剰率は１００％であると決定した。

試料分析を下記の方法によって行った。
１）試料の調製：約０．５ｍｌの反応混合物を、１０容量のＥｔＯＨとよく混合した。遠心分離後、１０μｌの上清をＨＰＬＣカラムに注入した。
２）変換の決定：
カラム：ＹＭＣＯＤＳＡ、４．６×５０ミリメートル（「ｍｍ」）、Ｓ−５μｍ
溶媒：Ａ、水中の１ｍＭのＨＣｌ；Ｂ、ＭｅＣＮ
グラジエント：１分間、３０％Ｂ；０．５分間、３０％〜４５％Ｂ；１．５分間、４５％Ｂ；０．５分間、４５％〜３０％Ｂ
流量：２ｍｌ／分
ＵＶ検出：２１０ｎＭ
保持時間：酸、１．２分；エステル、２．８分。
３）エステルについてのエナンチオ過剰率の決定：
カラム：ＣＨＩＲＡＣＥＬＯＤ−ＲＨ、４．６×１５０ｍｍ、Ｓ−５μｍ
移動相：水中のＭｅＣＮ／５０ｍＭのＨＣｌＯ₄（６７／３３）
流量：０．７５ｍｌ／分
ＵＶ検出：２１０ｎＭ
保持時間：
（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸、５．２分；
ラセミの（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル、１８．５分および２０．０分；
（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル、１８．５分。

分割Ｄ
０．３Ｍのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８）５Ｌを、２０リットルのジャケット付き反応器中で３８℃に保持し、１３０ｒｐｍで撹拌した。４リットルのＡｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）および１リットルの脱イオン水を反応器に加えた。混合物の温度が３８℃に近づいたとき、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを７．８に調節した。ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（５００グラム）のＤＭＳＯ（５リットル）溶液を、添加漏斗によって１時間に亘り反応器に加えた。次いで、反応温度を４８℃に調節した。２１時間後、エステルのエナンチオ過剰率は９９．３％に達した。加熱を２４時間で止め、反応物を室温（約２５℃）にゆっくりと冷却し、一晩撹拌した。１０ＮのＮａＯＨで反応混合物のｐＨを８．５に調節し、混合物をＭＴＢＥ（２×４Ｌ）で抽出した。合わせたＭＴＢＥ抽出物を、５％ＮａＨＣＯ₃（３×４００ｍｌ）および水（３×４００ｍｌ）で洗浄し、蒸発させ、鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを淡黄色の結晶（２５９ｇ；純度：９６．９％＠２１０ｎＭ、酸を含有せず；１００％ｅｅ）として得た。

分割Ｅ
１０Ｌの０．１Ｍのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ８）を、２０リットルジャケット付き反応器中で４０℃に保持し、３６０ｒｐｍで撹拌した。１．５リットルのＡｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）を反応器に加えた。混合物の温度が３８℃に近づいたときに、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを８．０に調節した。ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（２００グラム）のＤＭＳＯ（２リットル）溶液を、添加漏斗によって１時間に亘り反応器に加えた。次いで、反応温度を４０℃に調節した。３時間後、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを８．０に調節した。２１時間後、反応物を２５℃に冷却した。１０ＮのＮａＯＨで反応混合物のｐＨを８．５に調節し、混合物をＭＴＢＥ（２×５Ｌ）抽出した。合わせたＭＴＢＥ抽出物を５％ＮａＨＣＯ₃（３×５００ｍｌ）および水（３×２００ｍｌ）で洗浄し、蒸発させて、１１０グラムの黄色の油状物を得た。油状物は、一般的な吸引装置で室温にて固化し、鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを無色の長いロッド結晶（１０１ｇ；純度：９７．９％＠２１０ｎＭ、酸を含有せず；１００％ｅｅ）として得た。

結晶構造である鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを、単結晶分析（Ｘ線ＮＢ＃：５２７９５−０９３、参照コード：６３４５９２Ｎ１）によって特性決定した。公知のキラル中心またはより重い原子（複数可）がないために、絶対配置は確立されない。結晶軸に沿った鎖状構造が、アミド基とカルボニル酸素原子との間の分子間の水素結合（Ｎ…Ｏ３．１５９Å）を介して形成される。

Ｎ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの構造：

結晶データ: 実験:
化学式:C13H21N1O4 結晶化
晶系:斜方晶結晶源:MTBE
空間群:P2₁2₁2₁ 結晶の説明:無色のロッド
a=5.2902(1)Å、α=90° 結晶サイズ(mm):0.12×0.26×0.30
b=13.8946(2)Å、β=90° データ収集
c=19.9768(3)Å、γ=90° 温度(K):293
V=1468.40(4)Å³ θ_max(°):65.2(Cu Kα)
Z=4、d_x=1.155gcm^-3 測定反射数:7518
格子定数についての反射数:6817 独立反射数:2390(R_int=0.0776)
格子定数(°)についてのθ範囲:2.2〜65.2 測定反射数(I≧2σ:2284
吸収係数(mm^-1):0.700 吸収補正(T_min-T_max):0.688〜1.000

分割Ｆ
０．２Ｍのホウ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ９）５Ｌを、２０リットルジャケット付き反応器中で４５℃に保持し、４００ｒｐｍで撹拌した。３リットルの脱イオン水および４リットルのＳａｖｉｎａｓｅ１６Ｌ、タイプＥＸ（ＮｏｖｏｚｙｍｅｓＮｏｒｔｈＡｍｅｒｉｃａＩｎｃ．）を、反応器に加えた。混合物の温度が４５℃に近づいたときに、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを８．５に調節した。ラセミのＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／（１Ｓ，２Ｒ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（２００グラム）のＤＭＳＯ（２リットル）溶液を、添加漏斗によって４０分間に亘り反応器に加えた。次いで、反応温度を４８℃に調節した。２時間後、１０ＮのＮａＯＨでｐＨをｐＨ９．０に調節した。１８時間で、エステルのエナンチオ過剰率は７２％に達し、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを９．０に調節した。２４時間で、温度を３５℃に下げた。４２時間で、温度を４８℃に上げ、１０ＮのＮａＯＨでｐＨを９．０に調節した。４８時間で加熱を止め、反応物を室温（約２５℃）にゆっくりと冷却し、一晩撹拌した。６６時間で、反応混合物のｐＨは８．６であった。混合物をＭＴＢＥ（２×４Ｌ）で抽出した。合わせたＭＴＢＥ抽出物を、５％ＮａＨＣＯ₃（６×３００ｍｌ）および水（３×３００ｍｌ）で洗浄し、蒸発させ、鏡像異性的に純粋なＮ−Ｂｏｃ−（１Ｒ，２Ｓ）／−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを淡黄色の結晶（１０１Ａｇ；純度：９５．９％＠２１０ｎＭ、酸を含有せず；９８．６％ｅｅ）として得た。
実施例５

工程１：エチル１（Ｒ）−アミノ−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩の調製

エチル１（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（８．５ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）を、４ＮのＨＣｌ／ジオキサン（Ａｌｄｒｉｃｈ）２００ｍＬと共にＮ₂雰囲気下にて室温で３時間撹拌した。温度を４０℃未満に保ちながら溶媒を減圧下で除去した。これによって、６．５７ｇ（約１００％）のエチル１（Ｒ）−アミノ−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩を淡褐色の固形物として得た。¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.31 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 1.69-1.82 (m, 2 H), 2.38 (q, J=8.8 Hz, 1 H), 4.29 (q, J=7.0 Hz, 2 H), 5.22 (d, J=10.3 Hz, 1 H), 5.40 (d, J=17.2 Hz, 1 H), 5.69-5.81 (m, 1 H). MS m/z 156 (M++1).

工程２：エチル１（Ｒ）−［１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートの調製

塩化メチレン（４００ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｌ−４−ヒドロキシプロリン（Ｎ−Ｂｏｃ（２Ｓ，４Ｒ）−ヒドロキシプロリン）（１０ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）の撹拌したスラリーを、Ｎ−メチルモルホリン（９．３ｍＬ、８４．７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１９．５ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）、およびエチル１（Ｒ）−アミノ−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩（９．１ｇ、４７．５ｍｍｏｌ）で順次処理した。金色の均一溶液を室温でＮ₂下１８時間撹拌し、次いで減圧濃縮し、茶色の油状物を得た。これを、酢酸エチルおよび飽和水性ＮａＨＣＯ₃に分配した。有機相を、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、１５ｇ（９４％）のエチル１（Ｒ）−［１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートをオフホワイトの固形物として得た。ＬＣ−ＭＳ（ＸｔｅｒｒａＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：３分。保持時間：１分。流量：５ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．０９分）。MS m/z 369 (M++1).

工程３：エチル１（Ｒ）−［４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩の調製

エチル１（Ｒ）−［１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（５．０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の撹拌したスラリーを、４ＮのＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）で３時間処理した。反応混合物を減圧濃縮し、４．５ｇ（９７％）のエチル１（Ｒ）−［４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩を白色の固形物として得た。¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.26 (t, J=7.14 Hz, 3 H), 1.46 (dd, J=9.70, 5.31 Hz, 1 H), 1.80 (dd, J=8.23, 5.31 Hz, 1 H), 2.00 - 2.15 (m, 1 H), 2.18 - 2.30 (m, 1 H), 2.45 (dd, J=13.36, 7.50 Hz, 1 H), 3.36 - 3.48 (m, 1 H), 4.11 - 4.24 (m, 2 H), 4.44 (dd, J=10.25, 7.68 Hz, 1 H), 4.58 - 4.65 (m, 1 H), 4.84 - 4.94 (m, 1 H), 5.17 (d, J=1.83 Hz, 1 H), 5.27 - 5.42 (m, 1 H), 5.67 - 5.89 (m, 1 H).
実施例６

シクロプロピルスルホンアミドの調製、方法ＡおよびＢ
方法Ａ：

０℃に冷却した１００ｍＬのＴＨＦの溶液に、飽和に達するまでアンモニアガスを泡立てた。この溶液に、塩化シクロプロピルスルホニル（５ｇ（２８．４５ｍｍｏｌ））（ＡｒｒａｙＢｉｏｐｈａｒｍａから購入）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を加え、溶液を一晩室温に温め、さらに１日撹拌した。１〜２ｍＬの溶媒が残るまで混合物を濃縮し、ＳｉＯ₂のプラグ３０ｇに加え（３０％〜６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出）、３．４５ｇ（１００％）のシクロプロピルスルホンアミドを白色の固形物として得た。¹H NMR (メタノール-d₄) δ 0.94-1.07 (m, 4H), 2.52-2.60 (m, 1H); ¹³C NMR (メタノール-d₄) δ 5.92, 33.01.

方法Ｂ：
工程１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（３−クロロ）プロピルスルホンアミドの調製

ｔｅｒｔ−ブチルアミン（３．０モル、３１５．３ｍＬ）を、ＴＨＦ（２．５Ｌ）に溶解した。溶液を−２０℃に冷却した。塩化３−クロロプロパンスルホニル（１．５モル、１８２．４ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温まで温め、２４時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（２．０Ｌ）に溶解した。このように得られた溶液を、１ＮのＨＣｌ（１．０Ｌ）、水（１．０Ｌ）、ブライン（１．０Ｌ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥させた。それを濾過し、減圧濃縮し、僅かに黄色の固形物を得て、それをヘキサンから結晶化させることによって、生成物を白色の固形物（３１６．０ｇ、９９％）として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 1.38 (s, 9H), 2.30-2.27 (m, 2H), 3.22 (t, J = 7.35 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.35 (b, 1H).

工程２：シクロプロパンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（３−クロロ）プロピルスルホンアミド（２．１４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、８．０ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。反応混合物を１時間に亘り室温まで温めた。揮発性物質を真空中で除去した。残渣をＥｔＯＡＣおよび水に分配した（２００ｍＬ、２００ｍＬ）。分離した有機相を、ブラインで洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。残渣をヘキサンから再結晶させ、所望の生成物を白色の固形物（１．０ｇ、５６％）として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 0.98-1.00 (m, 2H), 1.18-1.19 (m, 2H), 1.39 (s, 9H), 2.48-2.51 (m, 1H), 4.19 (b, 1H).

工程３：シクロプロピルスルホンアミドの調製

シクロプロパンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（１１０．０ｇ、０．６２モル）のＴＦＡ（５００ｍＬ）溶液を、室温で１６時間撹拌した。揮発物を真空中で除去した。残渣をＥｔＯＡＣ／ヘキサン（６０ｍＬ／２４０ｍＬ）から再結晶させ、所望の生成物を白色の固形物（６８．５ｇ、９１％）として得た。
¹H NMR (DMSO-d₆) δ 0.84-0.88 (m, 2H), 0.95-0.98 (m, 2H), 2.41-2.58 (m, 1H), 6.56 (b, 2H).
実施例７

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−メチル）シクロプロピルスルホンアミドの調製

工程１ａＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−（３−クロロ）プロピルスルホンアミドの調製

上記の通りである。

工程１ｂＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−メチル）シクロプロピルスルホンアミドの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（３−クロロ）プロピルスルホンアミド（４．３ｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、−７８℃に冷却した。この溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１７．６ｍＬ、４４ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）をゆっくりと加えた。乾燥氷浴を取り除き、反応混合物を室温へと１．５時間に亘り温めた。次いで、この混合物を−７８℃に冷却し、ｎ−ＢｕＬｉ（２０ｍｍｏｌ、８ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ）の溶液を加えた。反応混合物を室温に温め、２時間に亘って−７８℃に再び冷却し、ヨウ化メチル（５．６８ｇ、４０ｍｍｏｌ）のニート溶液を加えた。反応混合物を一晩室温に温め、飽和ＮＨ₄Ｃｌ（１００ｍＬ）で室温にてクエンチした。それをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機相を、ブラインで洗浄し（１００ｍＬ）、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、黄色の油状物を得て、それをヘキサンから結晶化させることによって、生成物を僅かに黄色の固形物（３．１ｇ、８１％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.79 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.52 (m, 2H), 1.62 (s, 3H), 4.10 (bs, 1H).

工程１ｃ：１−メチルシクロプロピルスルホンアミドの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−メチル）シクロプロピルスルホンアミド（１．９１ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＦＡ（３０ｍＬ）に溶解し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、黄色の油状物を得て、それをＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：４、４０ｍＬ）から結晶化させて、実施例３、１−メチルシクロプロピルスルホンアミドを白色の固形物（１．２５ｇ、９６％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.84 (m, 2H), 1.41 (m, 2H), 1.58 (s, 3H), 4.65 (bs, 2H). 元素分析: C₄H₉NO₂Sの計算値: C, 35.54; H, 6.71; N, 10.36. 実測値: C, 35.67; H, 6.80; N, 10.40.
実施例９

１−プロピルシクロプロピルスルホンアミドの調製

工程１ｂ：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−ベンジル）シクロプロピル−スルホンアミドの調製

この方法の第２の工程においてヨウ化メチルの代わりにハロゲン化プロピルを利用した以外は、１−メチルシクロプロピルスルホンアミドの調製について説明した方法を使用して、この化合物を調製した。
実施例１０

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−アリル）シクロプロピルスルホンアミドの調製

この化合物、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−アリル）シクロプロピルスルホンアミドを、１．２５当量の臭化アリルを求電子試薬として使用する以外は、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−メチル）シクロプロピルスルホンアミドの合成において説明した手順によって９７％収率で得た。化合物を、精製をせずに次の反応に直接入れた。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.83 (m, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.37 (m, 2H), 2.64 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.25 (bs, 1H), 5.07-5.10 (m, 2H), 6.70-6.85 (m, 1H).

１−アリルシクロプロピルスルホンアミドの調製

この化合物、１−アリルシクロプロピルスルホンアミドを、１−メチルシクロプロピルスルホンアミドの合成において説明した手順によって、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−（１−アリル）シクロプロピルスルホンアミドから４０％収率で得た。ＣＨ₂Ｃｌ₂中の２％ＭｅＯＨを溶離液として使用してＳｉＯ₂上でカラムクロマトグラフィーによって化合物を精製した。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.88 (m, 2 H), 1.37 (m, 2 H), 2.66 (d, J=7.0 Hz, 2 H), 4.80 (s, 2 H), 5.16 (m, 2 H), 5.82 (m, 1 H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 11.2, 35.6, 40.7, 119.0, 133.6.
実施例１５

シクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製、Ｃ１−置換シクロプロピルスルホンアミドの調製における重要中間体

工程１：３−クロロプロピルスルホンアミドの調製

塩化３−クロロプロパンスルホニル（５５ｇ、３１０．７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却したＮＨ₄ＯＨ（２００ｍＬ）の溶液に３０分間に亘り１滴ずつ加えた。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌し、水層をジクロロメタン（４×５００ｍＬ）で複数回分配した。合わせたジクロロメタン層を、１ＮのＨＣｌ（１５０ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮した。ヘキサン中の最小量のジクロロメタンから粗固形物を再結晶させ、３−クロロプロピルスルホンアミドを白色の固形物（４５．３ｇ、９３％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 2.34 (m, 2H), 3.32 (t, J=7.3 Hz, 2H), 3.70 (t, J=6.2 Hz, 2H), 4.83 (s, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 27.10, 42.63, 52.57.

工程２：３−クロロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製

３−クロロプロピルスルホンアミド（３０．２ｇ、１９１．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３０．２ｍＬ、２１７．０ｍｍｏｌ）、および４−ＤＭＡＰ（２．４０ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）の０℃に冷却したジクロロメタン（３５０ｍＬ）溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４７．２ｇ、２１６．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５０ｍＬ）溶液を３０分間に亘りゆっくりと一滴ずつ加えた。反応混合物を室温に温め、さらに３時間撹拌し、１ＮのＨＣｌ（３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で分配し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、粗生成物を得た。この物質をヘキサン中の５％ジクロロメタン７０ｍＬで粉砕し、３−クロロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートをオフホワイトの固形物（４７．２ｇ、９６％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.51 (s, 9H), 2.33 (m, 2H), 3.60 (t, J=7.3 Hz, 2H), 3.68 (t, J=6.21 Hz, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 26.50, 27.95, 42.37, 50.40, 84.76, 149.53.

工程３：シクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製

ｎ−ブチルリチウム（７４．７ｍＬ、１１９．５ｍｍｏｌ、ヘキサン中１．６Ｍ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（１０５ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下で−７８℃に冷却した。この溶液に、３−クロロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（１４ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０５ｍＬ）溶液を２０〜３０分間に亘り一滴ずつ加えた。乾燥氷浴を取り除き、反応混合物を室温に２時間に亘って温めた。反応混合物を、氷酢酸（３．４ｍＬ）でクエンチし、減圧濃縮し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）に分配した。有機相をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、減圧濃縮し、シクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートを蝋様のオフホワイトの固形物（１２．０８ｇ、１００％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.10 (m, 2H), 1.34 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 2.88 (m, 1H), 7.43 (s, 1H). ¹³C NMR (CDCl₃) δ 6.21, 28.00, 31.13, 84.07, 149.82.
実施例１６

１−メトキシ−メチルシクロプロピル−スルホンアミドの調製

工程１：１−メトキシメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製

−７８℃に冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解したシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（１．０ｇ、４．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルリチウム（６．４ｍＬ、１０．２ｍｍｏｌ、ヘキサン中１．６Ｍ）を加え、反応混合物を１時間撹拌した。この溶液に、クロロメチルメチルエーテル（０．４０ｍＬ、５．２４ｍｍｏｌ）のニート溶液を加え、混合物をゆっくりと室温に一晩温めた。１ＮのＨＣｌ水溶液を使用して溶液ｐＨを３に調節し、次いで酢酸エチル（４×５０ｍＬの部分）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、濃縮し、１−メトキシメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートを蝋様の固形物（１．２０ｇ、１００％）として得て、これをさらに精製せずに次の反応に直接入れた。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.03 (m, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.66 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.68 (s, 2H), 7.54 (s, 1H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 11.37, 28.29, 40.38, 58.94, 73.43, 83.61, 149.57.

工程２：１−メトキシメチルシクロプロピルスルホンアミドの調製

１−メトキシメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメート（１．１４ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）の溶液を、５０％ＴＦＡ／ジクロロメタン（３０ｍＬ）の溶液に溶解し、室温で１６時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残渣を８０ｇのＳｉＯ₂上でクロマトグラフ（０％〜６０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出）にかけ、１−メトキシメチルシクロプロピルスルホンアミドを白色の固形物（０．５５ｇ、２つの工程に亘り全７７％）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.95 (m, 2H), 1.44 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 3.65 (s, 2H), 4.85 (s, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 11.17, 40.87, 59.23, 74.80; LRMS m/z 183 (M⁺+NH₄).
実施例１７

１−シクロプロピルメチルシクロプロピルスルホンアミドの調製

工程１：１−シクロプロピルメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製

１−シクロプロピルメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートを、１．１０当量の臭化シクロプロピルメチルを求電子試薬として使用した以外は、１−メトキシメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの合成において説明した手順によって、９２％収率で得た。化合物を、精製をせずに次の反応に直接入れた。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.10 (m, 2H), 0.51 (m, 2H), 0.67 (m, 1H), 1.10 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.62 (m, 2H), 1.87 (d, J=7.0 Hz, 2H).

工程２：１−シクロプロピルメチルシクロプロピルスルホンアミドの調製

この化合物を、１−メトキシメチルシクロプロピルスルホンアミドの合成について説明した手順によって、１−シクロプロピルメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートから６５％収率で得た。溶離液としてヘキサン中の０％〜６０％酢酸エチルを使用してＳｉＯ₂上でカラムクロマトグラフィーによって化合物を精製した。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.15 (m, 2H), 0.51 (m, 2H), 1.01 (m, 2H), 1.34 (m, 3H), 1.86 (d, J=7.0 Hz, 2H), 4.83 (s, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 4.65, 7.74, 11.26, 35.62, 41.21; LRMS m/z 193 (M⁺+NH₄).
実施例１９

１−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）カルバモイルシクロプロパンスルホンアミドの調製

工程１：１−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）カルバモイルシクロプロパンスルホンアミドｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの調製

この化合物を、１．２０当量の３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イソシアネートを求電子試薬として使用した以外は、１−メトキシメチルシクロプロピルスルホニルアミンｔｅｒｔ−ブチルカルバメートの合成で説明した手順によって、未精製物として１００％収率で得た。化合物を、精製をせずに次の反応に直接入れた。

工程２：１−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）カルバモイルシクロプロパンスルホンアミドの調製

３０ｍＬ（１２０ｍｍｏｌ）の４ＮのＨＣｌ／ジオキサンを使用し、一晩撹拌し、濃縮し、Ｂｉｏｔａｇｅ４０Ｍカラム（０％〜５％メタノール／ジクロロメタンで溶出）上でクロマトグラフィーすることによって、この化合物を、１．６２ｇ（４．５２ｍｍｏｌ）の１−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）カルバモイルシクロ−プロパンスルホンアミドｔｅｒｔ−ブチルカルバメートから５０％収率（５８０ｍｇ）で得た。¹H NMR (メタノール-d₄) δ 1.57 (m, 2H), 1.61 (m 2H), 2.15 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 4.84 (s, 3H); ¹³C NMR (メタノール-d₄) δ 9.65, 10.94, 15.01, 46.11, 114.82, 159.45, 165.55, 168.15; LRMS m/z 260 (M⁺+H).
実施例２０

臭化シクロブチルからのシクロブチルスルホンアミドの調製

臭化シクロブチル５．０ｇ（３７．０ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却した無水ジエチルエーテル（Ｅｔ₂Ｏ）（３０ｍＬ）溶液に、ペンタン中の１．７Ｍのｔｅｒｔ−ブチルリチウム４４ｍＬ（７４．８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を−３５℃に１．５時間に亘りゆっくりと温めた。この混合物を、新たに蒸留した塩化スルフリル５．０ｇ（３７．０ｍｍｏｌ）の−４０℃に冷却したヘキサン（１００ｍＬ）溶液にゆっくりとカニューレで入れ、０℃に１時間に亘って温め、真空中で注意深く濃縮した。この混合物をＥｔ₂Ｏで再溶解し、いくらかの氷水で１度洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、注意深く濃縮した。この混合物を２０ｍＬのＴＨＦに再溶解し、ＴＨＦ中の飽和ＮＨ₃（５００ｍＬ）に１滴ずつ加え、一晩撹拌した。混合物を黄色の粗固形物となるまで減圧濃縮し、１〜２滴のＭｅＯＨでヘキサン中の最小量のＣＨ₂Ｃｌ₂から再結晶させ、１．９０ｇ（３８％）のシクロブチルスルホンアミドを白色の固形物として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.95-2.06 (m, 2H), 2.30-2.54 (m, 4H), 3.86 (p, J=8 Hz, 1H), 4.75 (brs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 16.43, 23.93, 56.29. HRMS m/z (M-H)^- C₄H₈NSO₂の計算値: 134.0276, 実測値 134.0282.
実施例２１

シクロペンチルスルホンアミドの調製

２Ｍのシクロペンチル−塩化マグネシウム１８．５ｍＬ（３７．０ｍｍｏｌ）のエーテル溶液を、新たに蒸留した塩化スルフリル（Ａｌｄｒｉｃｈから入手）３．０ｍＬ（３７．０ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却したヘキサン（１００ｍＬ）溶液に１滴ずつ加えた。混合物を０℃に１時間に亘り温め、次いで真空中で注意深く濃縮した。この混合物をＥｔ₂Ｏ（２００ｍＬ）に再溶解し、いくらかの氷水（２００ｍＬ）で１度洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、注意深く濃縮した。この混合物を３５ｍＬのＴＨＦに再溶解し、ＴＨＦ中の５００ｍＬの飽和ＮＨ₃に１滴ずつ加え、一晩撹拌した。混合物を黄色の粗固形物へと減圧濃縮し、溶離液として７０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを使用して残渣を５０ｇのシリカゲルで濾過し、次いで溶液を濃縮した。残渣を、１〜２滴のＭｅＯＨでヘキサン中の最小量のＣＨ₂Ｃｌ₂から再結晶させ、２．４９ｇ（４１％）のシクロペンチルスルホンアミドを白色の固形物として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.58-1.72 (m, 2H), 1.74-1.88 (m, 2H), 1.94-2.14 (m, 4H), 3.48-3.59 (m, 1H), 4.80 (bs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 25.90, 28.33, 63.54; MS m/e 148 (M-H)^-.
実施例２２

シクロヘキシルスルホンアミドの調製

２Ｍの塩化シクロヘキシルマグネシウム（ＴＣＩＡｍｅｒｉｃａｓ）１８．５ｍＬ（３７．０ｍｍｏｌ）のエーテル溶液を、新たに蒸留した塩化スルフリル３．０ｍＬ（３７．０ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却したヘキサン（１００ｍＬ）溶液に１滴ずつ加えた。混合物を０℃に１時間に亘って温め、次いで真空中で注意深く濃縮した。この混合物をＥｔ₂Ｏ（２００ｍＬ）に再溶解し、いくらかの氷水（２００ｍＬ）で１度洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、注意深く濃縮した。この混合物を３５ｍＬのＴＨＦに再溶解し、ＴＨＦ中の５００ｍＬの飽和ＮＨ₃に１滴ずつ加え、一晩撹拌した。混合物を、黄色の粗固形物へと減圧濃縮し、７０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサンを溶離液として使用して残渣を５０ｇのシリカゲルで濾過し、濃縮した。残渣を、１〜２滴のＭｅＯＨでヘキサン中の最小量のＣＨ₂Ｃｌ₂から再結晶させ、１．６６ｇ（３０％）のシクロヘキシル−スルホンアミドを白色の固形物として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.11-1.37 (m, 3H), 1.43-1.56 (m, 2H), 1.67-1.76 (m, 1H), 1.86-1.96 (m, 2H), 2.18-2.28 (m, 2H), 2.91 (tt, J=12, 3.5 Hz, 1H), 4.70 (bs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 25.04, 25.04, 26.56, 62.74; MS m/e 162 (M-1)^-.
実施例２３

ネオペンチルスルホンアミドの調製

シクロヘキシルスルホンアミドの調製のための手順に従って、ジエチルエーテル中の０．７５Ｍの塩化ネオペンチルマグネシウム（Ａｌｆａ）４９ｍＬ（３７ｍｍｏｌ）を、１．５２ｇ（２７％）のネオペンチルスルホンアミドに白色の固形物として変換した。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.17 (s, 9H), 3.12 (s, 2H), 4.74 (brs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 29.46, 31.51, 67.38; MS m/e 150 (M-1)^-.
実施例２４

シクロブチルカルビニルスルホンアミドの調製

臭化シクロブチルカルビニル（Ａｌｄｒｉｃｈ）１２．３ｇ（８３ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム１３．７ｇ（９１ｍｍｏｌ）のアセトン（１５０ｍＬ）溶液を、一晩還流し、次いで室温に冷却した。無機固形物を濾過し、アセトンおよびヨウ化シクロプロピルカルビニル（８．４１ｇ、４６％）を、周囲温度および１５０ｔｏｒｒ、８０℃でそれぞれ蒸留した。

ヨウ化シクロブチルカルビニル４．０ｇ（２１．９８ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却した無水ジエチルエーテル（ジエチルエーテル）（３０ｍＬ）溶液を、１．３Ｍのｓｅｃ−ブチルリチウム１７ｍＬ（２１．９８ｍｍｏｌ）のシクロヘキサン溶液にカニューレで入れ、溶液を５分間撹拌した。この混合物に、新たに蒸留した塩化スルフリル３．０ｇ（２１．９８ｍｍｏｌ）の−７８℃に冷却したヘキサン（１１０ｍＬ）溶液をカニューレで入れ、混合物を室温に１時間に亘り温め、次いで注意深く減圧濃縮した。この混合物をジエチルエーテルに再溶解し、いくらかの氷水で１度洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、注意深く濃縮した。この混合物を３０ｍＬのＴＨＦに再溶解し、ＴＨＦ中の５００ｍＬの飽和ＮＨ₃に１滴ずつ加え、一晩撹拌した。混合物を黄色の粗固形物へと減圧濃縮し、１〜２滴のメタノールでヘキサン中の最小量のジクロロメタンから再結晶させ、１．３９ｇ（４２％）のシクロブチルカルビニルスルホンアミドを白色の固形物として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.81-2.03 (m, 4H), 2.14-2.28 (m, 2H), 2.81-2.92 (m, 1H), 3.22 (d, J=7 Hz, 2H), 4.74 (brs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 19.10, 28.21, 30.64, 60.93; MS m/e 148 (M-1)^-.
実施例２５

シクロプロピルカルビニルスルホンアミドの調製

シクロブチルカルビニルスルホンアミドの調製のために用いた手順を使用して、臭化シクロプロピルカルビニル（Ａｌｄｒｉｃｈ）からシクロプロピルカルビニルスルホンアミドを調製した（JACS 1981, p.442-445をまた参照されたい）。¹H NMR (CDCl₃) δ 0.39-0.44 (m, 2H), 0.67-0.76 (m, 2H), 1.13-1.27 (m, 1H), 3.03 (d, J=7.3 Hz, 2H), 4.74 (brs, 2H); ¹³C NMR (CDCl₃) δ 4.33, 5.61, 59.93; MS m/e 134 (M-1).
実施例２６

２−チオフェンスルホンアミドの調製

Justus Liebigs Ann. Chem., 501, 1933, p.174-182の方法を使用して、２−チオフェンスルホニルクロリド（Ａｌｄｒｉｃｈから購入）から調製した。
実施例２７

４−ブロモベンゼンスルホンアミドの調製

市販の４−ブロモスルホニルクロリドをＴＨＦ中の飽和アンモニアで処理することによって、４−ブロモフェニルスルホンアミドを調製した。
実施例２８

シクロプロパンスルホン酸（１−（Ｒ）−アミノ−２−（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボニル）アミドＨＣｌ塩の調製

工程１：１（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸の調製

１（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（３．２８ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）およびメタノール（７ｍＬ）溶液に、水（１４ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１．２７ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）の懸濁液を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、１ＮのＮａＯＨ（１５ｍＬ）および水（２０ｍＬ）でクエンチした。このように得られた混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で洗浄し、有機相を０．５ＮのＮａＯＨ２０ｍＬで抽出した。合わせた水相を１ＮのＨＣｌでｐＨ４まで酸性化し、酢酸エチル（３×４０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、濃縮して、表題化合物を白色の固形物（２．６２ｇ、８７％）として得た。¹H NMR: (DMSO-d₆) δ 1.22-1.26 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.50-1.52 (m, 1H), 2.05 (q, J=9 Hz, 1H), 5.04 (d, J=10 Hz, 1H), 5.22 (d, J=17 Hz, 1H), 5.64-5.71 (m, 1H), 7.18, 7.53 (s, NH (回転異性体), 12.4 (br s, 1H) ); MS m/z 228 (M++H).

工程２：シクロプロパンスルホン酸（１−（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボニル）−アミドの調製

工程１の生成物（２．６２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（２．４３ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を、窒素下で５０分間加熱還流した。溶液を室温に冷却し、カニューレによってシクロプロピルスルホンアミド（１．８２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に移した。このように得られた溶液に、ＤＢＵ（２．４０ｍＬ、１６．１ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を２０時間続けた。混合物を、１ＮのＨＣｌでｐＨ１までクエンチし、ＴＨＦを減圧濃縮した。懸濁液を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、濃縮した。ヘキサン−酢酸エチル（１：１）からの再結晶による精製によって、表題化合物（２．４ｇ）を白色の固形物として得た。母液をＢｉｏｔａｇｅ４０Ｓカラム（ジクロロメタン中の９％アセトンで溶出）によって精製し、表題化合物の第２のバッチ（１．１ｇ）を得た。両方のバッチを合わせた（総収率９２％）。¹H NMR (DMSO-d₆) δ 0.96-1.10 (m, 4H), 1.22 (dd, J=5.5, 9.5 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.70 (t, J=5.5 Hz, 1H), 2.19-2.24 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 5.08 (d, J=10 Hz, 1H), 5.23 (d, J=17 Hz, 1H), 5.45 (m, 1H), 6.85, 7.22 (s, NH (回転異性体); MS m/z 331 (M⁺+H).

工程３：シクロプロパンスルホン酸（１−（Ｒ）−アミノ−２−（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボニル）アミドＨＣｌ塩の調製

工程２の生成物（３．５ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３５ｍＬ）およびＴＦＡ（３２ｍＬ）溶液を、室温で１．５時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去し、残渣をジエチルエーテル（２０ｍＬ）中の１ＮのＨＣｌ中に懸濁させ、減圧濃縮した。この手順を一度繰り返した。このように得られた混合物をペンタンから粉砕し、濾過し、表題化合物を吸湿性のオフホワイトの固形物（２．６０ｇ、９２％）として得た。¹H NMR: (DMSO-d₆) δ 1.01-1.15 (m, 4H), 1.69-1.73 (m, 1H), 1.99-2.02 (m, 1H), 2.38 (q, J=9 Hz, 1H), 2.92-2.97 (m, 1H), 5.20 (d, J=11 Hz, 1H), 5.33 (d, J=17 Hz, 1H), 5.52-5.59 (m, 1H), 9.17 (br s, 3H); MS m/z 231 (M⁺+H).
実施例２９

（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸、実施例２９の調製

工程１：１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルの調製

２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノネン酸（ＲＳＰＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓから購入）（３．５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液を、４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル塩酸塩（２．１５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４．２５ｍＬ、３８．６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５．３７ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）で順次処理した。反応混合物を室温でＮ₂下３日間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびｐＨ４のバッファー（重フタル酸）に分配した。有機相を飽和水性ＮａＨＣＯ₃で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン〜１００％酢酸エチル）によって、４．７ｇ（約１００％）の１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルを無色の油状物として得た。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 1.33-1.50(m, 8 H), 1.46 (s, 9 H), 1.57 (m, 1 H), 1.72 (m, 1 H) 2.08 (m, 2 H), 2.28 (m, 1 H), 3.72 (s, 3 H,) 3.75-3.87 (m, 2 H), 4.36 (m, 1 H), 4.51 (bs, 1 H), 4.57 (t, J=8.2 Hz, 1 H), 4.95 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 5.01 (m, 1 H), 5.83 (m, 1 H); MS m/z 399 (M⁺+1).

工程２：１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステルの調製

１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（４．７ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（８０ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）、および水（４０ｍＬ）に溶解した。粉末水酸化リチウム（５．６ｇ、２３３ｍｍｏｌ）を加えた。淡黄色のスラリーを室温でＮ₂下１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣をエーテルおよび水に分配した。エーテル相を廃棄し、ｐＨが４となるまで水相を１ＮのＨＣｌで処理した。この酸性溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、４．３６ｇ（９６％）の１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノネノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸を白色の固形物として得た。次いで、この酸を１５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩（２．６１ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２．５ｍＬ、２２．６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５．２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温でＮ₂下１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびｐＨ４のバッファー（重フタル酸）に分配した。有機相を飽和水性ＮａＨＣＯ₃で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（６０％〜８０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、６．０ｇ（９８％）の１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステルを白色の固形物として得た。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 1.25 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.33-1.80 (m, 10 H), 1.46 (s, 9 H), 2.09 (m, 3 H), 2.25 (m, 2 H), 3.76 (m, 2 H), 4.14 (m, 2 H), 4.27 (dd, J=8.5, 5.2 Hz, 1 H), 4.50 (m, 2 H), 4.94 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 5.01 (dd, J=17.1, 1.8 Hz, 1 H), 5.11 (dd, J=10.4, 1.8 Hz, 1 H), 5.30 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 5.80 (m, 2 H), 8.57 (s, 1 H); MS m/z 522 (M⁺+1).

工程３：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルの調製

１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパン−カルボン酸エチルエステル（８００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２Ｌ）溶液を、０．５時間Ｎ₂でフラッシュした。次いで、トリシクロヘキシルホスフィン［１，３−ビス（２，４，６−トリメチル−フェニル）−４，５−ジヒドロイミダゾール−２−イリデン］［ベンジリデン］−ルテニウム（ＩＶ）ジクロリド（Ｓｔｒｅｍ）（６４ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＮ₂でさらに１０分間フラッシュした。淡いオレンジ色の均一溶液を２時間還流し、濃いオレンジ色の溶液を得た。反応混合物を室温に冷却し、減圧濃縮し、オレンジ色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル）によって、４６０ｍｇ（６１％）の（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］−ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルを灰色の固形物として得た。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 1.19 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.42 (s, 9 H), 1.22-1.8 (m, 8 H), 1.87 (m, 2 H), 2.03-2.22 (m, 4 H), 2.63 (m, 1 H), 3.65 (m, 1 H), 4.09 (m, 3 H), 4.45 (m, 1 H), 4.56 (s, 1 H), 4.82 (m, 1 H), 5.23 (m, 1 H), 5.51 (s, 1 H), 7.16 (s, 1 H); MS m/z 494 (M⁺+1).

工程４：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］−ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸

（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］−ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステル（４９３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（２ｍＬ）溶液に、粉末水酸化リチウム（４８０ｍｇ、２０ｍｍｏｌ）を加え、淡黄色のスラリーを室温でＮ₂下１６時間撹拌した。次いで、混合物を減圧濃縮し、残渣をエーテルおよび水に分配した。エーテル相を廃棄し、ｐＨ４まで水相を１ＮのＨＣｌで処理した。この酸性溶液を、ＥｔＯＡｃで３度抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、４６０ｍｇ（９８％）の実施例１８、（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−ｃｉｓ−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］−ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸を灰色の固形物として得た。¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ ppm 1.26 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.35-1.52 (m, 15 H), 1.57-1.68 (m, 3 H), 1.79 (m, 1 H), 2.04 (m, 1 H), 2.16-2.41 (m, 3 H), 3.80 (dd, J=10.7, 4.3 Hz, 1 H), 3.88 (m, 1 H), 4.38 (dd, J=8.9, 3.1 Hz, 1 H), 4.55 (m, 2 H), 5.39 (t, J=9.8 Hz, 1 H), 5.58 (m, 1 H); MS m/z 466 (M⁺+1).
実施例３０

（４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製

工程１：１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの調製

ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１．５ｇ、２．８７ｍｍｏｌ）の混合物に、イミダゾール（０．２５ｇ、３．６７ｍｍｏｌ）および塩化ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル（５１６ｍｇ、３．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２日間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を、水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧濃縮し、粗固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０％酢酸エチルで溶出）による精製によって、１．４３ｇ（７８％）の１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルを白色の固形物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 0.10 (s,6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.22 (m, 3 H), 1.31-1.48 (m, 16 H), 1.50-1.75 (m, 3 H), 2.06 (m, 3 H), 2.11-2.33 (m, 2 H), 3.70 (m, 2 H), 4.03-4.19 (m, 2 H), 4.21 (m, 1 H), 4.45 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.59 (m, 1 H), 4.91 (d, J=9.15 Hz, 1 H), 4.98 (d, J=17.20 Hz, 1 H), 5.08 (dd, J=10.25, 1.83 Hz, 1 H), 5.27 (dd, J=17.38, 1.65 Hz, 1 H), 5.65-5.87 (m, 2 H); MS m/z 636 (M++1).

工程２：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸、エチルエステルの調製

１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１．６３ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（６４０ｍＬ）溶液に、２１５ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）のトリシクロヘキシルホスフィン［１，３−ビス（２，４，６−トリ［ベンジリデン］ルテニウム（ＩＶ）ジクロリドを加えた。混合物を１５分間加熱還流した。残渣を減圧濃縮し、次いで３０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。試料をさらに脱色するために、粗生成物を、ヘキサン中の５０％エーテルで溶出するクロマトグラフに再びかけ、１．５ｇ（９６％）の１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルを白色の固形物として得た。¹H NMR (500 MHz, CD₃Cl) δ 0.06 (s, 3 H), 0.07 (s, 3 H), 0.86 (s, 9 H), 1.18-1.24 (m, 6 H), 1.34-1.64 (m, 14 H), 1.86-1.96 (m, 3 H), 2.02-2.09 (m, 1 H), 2.11-2.17 (m, 1 H), 2.19-2.28 (m, 1 H), 2.57-2.63 (m, 1 H), 3.50-3.54 (m, 1 H), 3.71 (dd, J=10.22, 6.26 Hz, 1 H), 4.06-4.17 (m, 2 H), 4.52-4.58 (m, 2 H), 4.75 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.21 (t, J=9.92 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 5.45-5.50 (m, 1 H), 6.94 (s,1 H); MS m/z 608 (M++1).

工程３：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸の調製

１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステル（１．５ｇ、２．４７ｍｍｏＬ）の混合したＴＨＦ（４ｍＬ）メタノール（１ｍＬ）、および水（２ｍＬ）の溶媒系溶液に、粉末水酸化リチウム一水和物（１．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加えた。淡黄色のスラリーを室温でＮ₂下４時間撹拌した。次いで、混合物を減圧濃縮し、残渣をエーテルおよび水に分配した。エーテル相を廃棄し、ｐＨ４に到達するまで水相を１ＮのＨＣｌで処理した。この酸性溶液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、１．２ｇ（８４％）の１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸をオフホワイトの固形物として得た。¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) 0.12 (s, 6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.23-1.64 (m, 17 H), 1.70-1.87 (m, 1 H), 1.90-2.49 (m, 6 H), 3.70-3.80 (m,1 H), 3.83-3.90 (m, 1 H), 4.28-4.36 (m, 1 H), 4.47-4.55 (m, 1 H), 4.65 (s, 1 H), 5.30-5.39 (m, 1 H), 5.53-5.62 (m, 1 H); MS m/z 580 (M⁺+1).

工程４：［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製

１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（５００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬのＴＨＦに溶解し、ＣＤＩ（１８０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）で処理した。（オーブンで乾燥させたガラス器具を使用し、乾燥Ｎ２雰囲気を維持することによって湿気を除くように注意した）。反応混合物を２時間還流させた後、室温に冷却し、シクロプロピルスルホンアミド（１３５ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１７０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）で順次処理した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、ＴＨＦをロータリーエバポレーションによって除去した。残渣を酢酸エチルおよびｐＨ４のバッファーに分配した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。次いで、それをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の３３％酢酸エチルで溶出）で精製し、３００ｍｇ（５１％）の［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色の固形物として得た。¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1H 0.07 (s, 3 H), 0.08 (s, 3 H), 0.85 (s, 9 H), 0.87-1.49 (m, 21 H), 1.73-1.95 (m, 3 H), 2.08-2.16 (m, 1 H), 2.25-2.36 (m, 2 H), 2.42-2.56 (m, 1 H), 2.85-2.93 (m, 1 H), 3.65-3.74(dd, J=10.61, 3.66 Hz, 1 H), 3.89 (d, J=10.25 Hz, 1 H), 4.34 (m, J=9.70, 9.70 Hz, 1 H), 4.43 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.57 (s, 1 H), 4.94-5.01 (m, 1 H), 5.10 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.66-5.75 (m, 1 H), 6.55 (s, 1 H), 10.13 (s, 1 H); MS m/z 683 (M⁺+1).

工程５：実施例１９、（４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの調製

ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の混合物に、フッ化テトラブチルアンモニウム（１５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで、ＴＨＦをロータリーエバポレーションによって除去した。残渣を酢酸エチルおよび水に分配した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。次いで、それをヘキサンで粉砕することによって精製し、２００ｍｇ（７３％）の（４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、実施例１９を白色の固形物として得た。¹H NMR (500 MHz, CD₃Cl) δ 1.87-1.64 (m, 21 H), 1.70-1.98 (m, 3 H), 2.15-2.56 (m, 5 H), 2.85-2.94 (m, 1 H), 3.71 (d, J=13.91 Hz, 1 H), 4.10-4.26 (m, 2 H), 4.51 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.62 (s, 1 H), 4.98 (m, 1 H), 5.06 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.64-5.71 (m, 1 H), 6.72 (s, 1 H), 10.24 (s, 1 H); MS m/z 569 (M⁺+1).

下記の大環状アルコール中間体を、実施例２９および３０に記載されている手順を用いて調製した。

下記の大環状アルコール中間体は、実施例２９および３０に記載されている手順を用いて調製することができた。

実施例３１

実施例３１、２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−ペント−４−エニルスルファニルプロピオン酸の調製

工程１：Ｎ−Ｂｏｃ−システインメチルエステル（３．３６ｇ、０．０１４モル）のメタノール（１６６ｍＬ）溶液に、室温でトリエチルアミン（１０．８ｍＬ）および１−ブロモペンタ−４−エン（３．１９ｇ、２１ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、このように得られた溶液を室温で一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧濃縮し、このように得られた残りの混合物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン、酢酸エチルのグラジエント）を使用して精製し、１．７６ｇ（４１％）の所望のチオエーテルを得た。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 1.43 (s, 9H), 1.64 (m, 2H), 2.11 (m, 2H), 2.51 (m, 2H), 2.95 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.51 (m, 1H), 4.95-5.03 (m, 2H), 5.34 (m, 1H), 5.80 (1H, m); MS m/z 304(M⁺+1).

工程２：工程１（９．５１ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）のチオエーテル生成物を、水（２００ｍＬ）およびＴＨＦ（２００ｍＬ）中の１ＭのＬｉＯＨの混合物に加え、このように得られた混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、１Ｎの塩酸を使用して反応混合物を酸性化し、このように得られた混合物を、酢酸エチルで数回抽出した。抽出物を合わせ、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧濃縮し、所望の酸、実施例２０を得て、それを次の反応のように使用した。
実施例３２

実施例３２、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリンの調製

工程１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリン、メチルエステルの調製

Ｌ−ペニシラミン７．１２ｇ（４８ｍｍｏｌ、１．０当量）の１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）および水（２５ｍＬ）溶液に、室温で９．６０ｍＬ（９６ｍｍｏｌ、２．０当量）の水酸化ナトリウム水溶液１０Ｎを加え、続いて数分に亘り１２．００ｍＬ（１０１ｍｍｏｌ、２．１当量）の５−ブロモ−１−ペンテンを１滴ずつ加えた。このように得られた混合物を室温で６８時間撹拌した。この時点で１２．５０ｇ（５７ｍｍｏｌ、１．２当量）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを加え、混合物を室温でさらに６時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、残渣を水に溶解した。水性混合物をジエチルエーテルで洗浄し、１Ｎの塩酸を用いてｐＨ３に調節し、次いで酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。

粗生成物（１２．２０ｇ）を、１２０ｍＬの無水ジメチルスルホキシドに溶解した。この溶液に、１０．５０ｇ（７６ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよび４．７０ｍＬ（７６ｍｍｏｌ）のヨードメタンを加え、このように得られた混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を、水（２×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出：２〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、８．５４ｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリン、メチルエステルを無色の油状物として得た。NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 5.76 (tのdのd, 1 H, J = 17.2, 10.3, 6.6 Hz), 5.35 (br d, 1 H, J = 9.0 Hz), 5.05-4.94 (m, 2 H), 4.27 (br d, 1 H, J = 9.0 Hz), 3.73 (s, 3 H), 2.52 (m, 2 H), 2.13 (quart., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.61 (quint., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.43 (s, 9 H), 1.35 (s, 3 H), 1.33 (s, 3 H).

工程２：実施例３２、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリンの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリン、メチルエステル８．５２ｇ（２５．７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液に、室温で１．１０ｇ（２６．２ｍｍｏｌ）の水酸化リチウム一水和物の水（５０ｍＬ）溶液を加えた。このように得られた混合物を室温で６５時間撹拌した。次いで、反応混合物に２８ｍＬの１．００Ｎの塩酸を加えた。混合物をジエチルエーテルで希釈し、水（３×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮し、８．１０ｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−（４−ペンテニルチオ）−Ｌ−バリンを無色の油状物として得た。NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 5.75 (tのdのd, 1 H, J = 17.2, 10.3, 6.6 Hz), 5.40 (br s, 1 H), 5.05-4.94 (m, 2 H), 4.28 (br s, 1 H), 2.56 (m, 2 H), 2.13 (quart., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.63 (quint., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.44 (s, 9 H), 1.39 (s, 3 H), 1.37 (s, 3 H).
実施例３３

実施例３３、５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタン酸の調製

工程１：イソプロピルピロリジン−５−オン−２（Ｓ）−カルボキシレートの調製

Ｌ−ピログルタミン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ、２５．０ｇ、１９５ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３．７１ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）の溶液を、ディーンスタークトラップの変形を使用してイソプロパノール（４０ｍＬ）中窒素下で６時間還流した（４Å分子ふるいを充填したＳｏｘｈｌｅｔ抽出器を通して凝縮物へと戻った）。室温に冷却した後に、反応物をエーテルで希釈し、飽和水性炭酸水素ナトリウム、次いで飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させ、無色のシロップを得た。それは固化によって結晶化した。結晶性残渣をヘキサン中で粉砕することによって、３１．９ｇ（９６％）のイソプロピルピロリジン−５−オン−２（Ｓ）−カルボキシレートを白色のプリズムとして得た。¹H NMR (300 MHz, クロロホルム-D) δ 6.35 (br s, 1 H), 5.04 (sept. 1 H, J = 6.2 Hz), 4.18 (dd, 1 H, J = 8.4, 5.3 Hz), 2.51-2.28 (m, 3 H), 2.27-2.12 (m, 1 H), 1.24 (d, 6 H, J = 6.2 Hz). LCMS m/z 172 (M+H)+.

工程２：イソプロピル１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ピロリジン−５−オン−２（Ｓ）−カルボキシレートの調製

イソプロピルピロリジン−５−オン−２（Ｓ）−カルボキシレート（工程２６Ａの生成物、３１．９ｇ、１８８ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（４８．６ｇ、２２５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．３０ｇ、８．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３００ｍＬ）溶液を、室温でＮ₂下３０分間撹拌した。反応物を約１００ｍＬまで蒸発させ、エーテルで希釈し、１ＮのＨＣｌ、次いで飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させ、イソプロピル１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−５−オン−２（Ｓ）カルボキシレートを淡黄色の油状物５０．１ｇ（９９％）として得た。¹H NMR (300 MHz, クロロホルム-D) δ 5.06 (sept. 1 H, J = 6.2 Hz), 4.53 (dd, 1 H, J = 9.5, 2.9 Hz), 2.66-2.40 (m, 2H), 2.36-2.22 (m, 1 H), 2.03-1.93 (m, 1 H), 1.47 (s, 9 H), 1.26 (d, 3 H, J = 6.2 Hz), 1.24 (d, 3 H, J = 6.2 Hz). LCMS m/z 272 (M+H)⁺.

工程３：イソプロピル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−ヒドロキシペンタノエートの調製

イソプロピル１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−５−オン−２（Ｓ）−カルボキシレート（工程２６Ｂの生成物、４９．５ｇ、１８３ｍｍｏｌ）のメタノール（３００ｍＬ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（１０．０ｇ、２６３ｍｍｏｌ）を約１ｇずつ１．５時間に亘り加えた。反応物を窒素下でさらに１０分撹拌した。それを水で希釈し、エーテルで抽出し、合わせた有機フラクションを飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させて、淡黄色の油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、３１．８ｇ（６４％）のイソプロピル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−ヒドロキシペンタノエートを無色のシロップとして得た。¹H NMR (300 MHz, クロロホルム-D) δ 5.16 (br d, 1 H, J = 7.3 Hz), 5.03 (sept., 1 H, J = 6.2 Hz), 4.28 (br d, 1 H, J = 6.2 Hz), 3.67 (br dd, J = 10.2, 5.5 Hz), 1.94-1.79 (m, 2 H), 1.76-1.67 (m, 1 H), 1.66-1.56 (m, 2 H), 1.43 (s, 9 H), 1.25 (d, 3 H, J = 6.2 Hz), 1.23 (d, 3 H, J = 6.2 Hz). LCMS m/z 276 (M+H)⁺.

工程４：イソプロピル−５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタノエートの調製

ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のイソプロピル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−ヒドロキシペンタノエート（工程２６Ｃの生成物、１７．６ｇ、６３．９ｍｍｏｌ）、炭酸アリルメチル（２４．０ｍｌ、２１３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃（１．６２ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）およびＢＩＮＡＰ（４．４２ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）の脱気した混合物を、窒素下で３時間還流した。室温に冷却した後に、反応物をエーテルで希釈し、セライトで濾過し、蒸発させ、濃褐色のシロップを得た。残渣のフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％エーテル／ヘキサン）によって、イソプロピル５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタノエートを粘性の無色の油状物１６．３ｇ（８１％）として得た。¹H NMR (300 MHz, クロロホルム-D) δ 5.88 (ddt, 1 H, 17.4, 10.4, 5.5), 5.28 (m, 1 H), 5.22-5.11 (m, 1 H), 5.02 (sept., 1 H, J = 6.2 Hz), 4.21 (br t, 1 H, J = 6.7 Hz), 3.94 (dt, 2 H, J = 5.9, 1.5 Hz), 3.42 (t, 2 H, J = 5.9 Hz), 1.90-1.82 (m, 1 H), 1.75-1.57 (m, 3 H), 1.42 (s, 9 H), 1.21 (d, 3 H, J = 6.2 Hz), 1.19 (d, 3 H, J = 6.2 Hz). LCMS m/z 316 (M+H)⁺.

工程５：実施例３３、５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタン酸の調製

ＴＨＦ／水（１００ｍＬ／２０ｍＬ）中のイソプロピル５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタノエート（工程２６Ｄの生成物、１６．１ｇ、５１．１ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム水和物（４．１９ｇ、１０２ｍｍｏｌ）の混合物を、室温にて窒素下で１６時間撹拌した。反応物を水で希釈し、エーテルで洗浄し、水性画分のｐＨを約４に調節し、エーテルで抽出し、合わせた有機フラクションを飽和ＮａＣｌで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）、蒸発させて、５−アリルオキシ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ペンタン酸を淡黄色のシロップとして得た。¹H NMR (300 MHz, クロロホルム-D) δ 5.89 (ddt, 1 H, J = 17.4, 10.4, 5.5), 5.25 (dd, 1 H, J = 17.4, 1.6 Hz), 5.17 (dd, 1 H, J = 10.4, 1.6 Hz), 4.30 (br d, 1 H, J = 6.2), 3.96 (dt, 2 H, J = 5.9, 1.5 Hz), 3.46 (t, 2 H, J = 5.9 Hz), 1.96-1.86 (m, 1 H), 1.85-1.77 (m, 1 H), 1.75-1.64 (m, 2 H), 1.43 (s, 9 H). LCMS m/z 274 (M+H)⁺.
実施例３４

実施例３４の調製のための一般手順

Ｎ−トリチル保護されたスレオニンのＤＭＦ溶液を−１５Ｃに冷却した水素化ナトリウムのＤＭＦ溶液に加えることによって、実施例２３を調製した。反応混合物を−１５Ｃで３０分間撹拌し、その後５−ブロモ−１−ペンテンを加え、このように得られた混合物を−５Ｃに温めた。反応混合物を−５Ｃで３日間保持し、その後、反応物を１ＮのＨＣｌ水溶液を加えることによってクエンチし、上記のような標準的抽出手順を使用して後処理した。標準的クロマトグラフィー手順によって、実施例２３を純粋な形態で得た。
実施例３５

実施例３５、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリンの調製

工程１：Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリン、メチルエステルの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−セリン１０．２６ｇ（５０ｍｍｏｌ、１．０当量）の無水ジメチルスルホキシド（５００ｍＬ）溶液に、室温で鉱油中の６０％水素化ナトリウム２．００ｇ（５０ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。この混合物を、ガス発生が止まるまで室温で０．５時間撹拌した。このように得られた溶液に、６．００ｍＬ（５０ｍｍｏｌ、１．０当量）の５−ブロモ−１−ペンテン、次いで直ちに鉱油中のさらなる６０％水素化ナトリウム２．００ｇ（５０ｍｍｏｌ、１．０当量）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を、２０００ｍＬの水で希釈し、１．００Ｎの塩酸５０ｍＬを加えることによってｐＨ３〜４に調節し、酢酸エチルで抽出した。有機相を水（２×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残りの鉱油を除去するために、このように得られた物質を、水酸化ナトリウムの希薄水溶液に溶解した。この水溶液をヘキサンで洗浄し、次いで塩酸を用いてｐＨ４に調節し、酢酸エチルで抽出した。抽出物を水（２×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。

粗生成物（７．７０ｇ）を、１００ｍＬの無水ジメチルスルホキシドに溶解した。この溶液に、７．８０ｇ（５６ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムおよび３．５０ｍＬ（５６ｍｍｏｌ）のヨードメタンを加え、このように得られた混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を水（２×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶出：２〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、６．７０ｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリン、メチルエステルを無色の油状物として得た。NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 5.78 (tのdのd, 1 H, J = 17.2, 10.2, 6.6 Hz), 5.34 (br d, 1 H, J = 8.0 Hz), 5.03-4.92 (m, 2 H), 4.40 (m, 1 H), 3.81 (dのd, 1 H, J = 9.5, 2.9 Hz), 3.74 (s, 3 H), 3.61 (dのd, 1 H, J = 9.5, 3.5 Hz), 3.42 (m, 2 H), 2.06 (quart., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.61 (quint., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.44 (s, 9 H).

工程２：実施例３５、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリンの調製

Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリン、メチルエステル６．６５ｇ（２３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）溶液に、室温で水酸化リチウム一水和物１．９５ｇ（４６ｍｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）溶液を加えた。このように得られた混合物を室温で４０時間撹拌した。次いで、反応混合物に１．００Ｎの塩酸４６ｍＬを加えた。混合物を、酢酸エチルで希釈し、水（３×）およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮し、６．３０ｇのＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｏ−（４−ペンテニル）−Ｌ−セリンを無色の油状物として得た。NMR (300 MHz, CDCl₃): δ 5.77 (tのdのd, 1 H, J = 17.2, 10.2, 6.6 Hz), 5.37 (br d, 1 H, J = 8.0 Hz), 5.03-4.92 (m, 2 H), 4.42 (m, 1 H), 3.87 (dのd, 1 H, J = 9.5, 2.6 Hz), 3.63 (dのd, 1 H, J = 9.5, 4.0 Hz), 3.45 (t, 2 H, J = 6.6 Hz), 2.07 (quart., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.64 (quint., 2 H, J = 7.3 Hz), 1.44 (s, 9 H).
実施例３６

実施例３６、（Ｓ）−４−アリルオキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酪酸の調製

ＤＭＦ中の水素化ナトリウム（９１３ｍｇ、２２．８ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃でＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−ホモセリン（２ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、次いで臭化アリル（１．３８ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温まで温め、２時間撹拌した。次いで、それを減圧濃縮した。残渣を水で希釈し、ヘキサンおよびエーテルで順次洗浄した。有機層を廃棄し、１ＮのＨＣｌで水層を注意深くｐＨ３に調節した。この酸性水溶液を酢酸エチルで抽出した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、２．２ｇ（９３％）の（Ｓ）−４−アリルオキシ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酪酸を無色の油状物として得た。¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.42 (s, 9 H), 1.80-1.90 (m, 1 H), 2.04-2.16 (m, 1 H), 3.50-3.54 (m, 2 H), 3.97 (d, J=4.39 Hz, 2 H), 4.23 (dd, J=8.78, 4.39 Hz, 1 H), 5.15 (d, J=10.25 Hz, 1 H), 5.26 (dd, J=17.38, 1.65 Hz, 1 H), 5.84-5.97 (m, 1 H).
実施例３７

実施例３７、（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパン酸の調製

工程１：メチル３−アミノ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノエートの調製

５０ｍＬの塩化メチレン中のｉ（Ｂｏｃ−ＤＡＰ−ＯＨ）（３．０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）の混合物に、５ｍＬのメタノールを加えた。この溶液に、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（エーテル中２Ｍ、７．９ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。固形物の全てが溶解し、溶液が淡黄色となるまで、混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、それを濃縮し、３．２ｇ（９９％）のメチル３−アミノ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノエートｉｉを無色の油状物として得た。¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz) δ 1.46 (s, 9 H), 2.82-3.00 (m, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 4.14 (brs, 1 H).

メチル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロフェニルスルホンアミド）プロパノエートｉｉｉの調製：

ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のメチル３−アミノ−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパノエートｉｉ（１．６ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（１．６４ｍＬ、９．４ｍｍｏｌ）および２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（１．６２ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、それを濃縮し、酢酸エチルに溶解し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。次いでそれを濾過し、濃縮し、２．９ｇ（９８％）のメチル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロフェニルスルホンアミド）プロパノエートｉｉｉを黄色の泡として得た。¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz) δ 1.41 (s, 9 H), 3.36-3.51 (m, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 4.22 (m, 1 H), 7.80-7.90 (m, 3 H), 8.07-8.10 (m, 1 H).

メチル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノエートｉｖの調製：

３ｍＬのＤＭＦ中のメチル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロフェニルスルホンアミド）プロパノエートｉｉｉ（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の混合物に、炭酸カリウム（１０２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、室温で２０分間撹拌し、その後５−ブロモ−１−ペンテン（６５μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２日間撹拌した。次いで、それを濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の２５％酢酸エチルで溶出）によって精製し、７５ｍｇ（４３％）のメチル２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノエートｉｖを黄色の固形物として得た。¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz) δ 1.42 (s, 9 H), 1.54-1.64 (m, 2 H), 1.97 (q, J=7.20 Hz, 2 H), 3.37 (m, 2 H), 3.57-3.80 (m, 2 H), 3.72 (s, 3 H), 4.42 (dd, J=8.60, 5.31 Hz, 1 H), 4.91-5.01 (m, 2 H), 5.69-5.79 (m, 1 H), 7.75-7.85 (m, 3 H), 8.04 (m, 1 H); MS m/z 372 (M⁺+1-Boc).

実施例３７、２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパン酸ｖの調製：

（Ｓ）−メチル２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）−プロパノエートｉｖ（５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を、混合溶媒系：ＴＨＦ（４ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（２ｍＬ）に溶解した。粉末水酸化リチウム（２５０ｍｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を加えた。淡黄色のスラリーを室温で１５時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣をエーテルおよび水に分配した。エーテル相を廃棄し、ｐＨが４となるまで水相を１ＮのＨＣｌで処理した。この酸性溶液を酢酸エチルで４度抽出した。合わせた酢酸エチル抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、４３０ｍｇ（８９％）の２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパン酸（実施例２６）を黄色の油状物として得た。¹H NMR (CD₃OD, 300 MHz) δ 1.38 (s, 9 H), 1.51-1.60 (m, 2 H), 1.89-1.98 (m, 2 H), 3.28-3.32 (m, 2 H), 3.59-3.64 (dd, J=14.95, 9.46 Hz, 1 H), 3.71-3.74 (m, 1 H), 4.33 (dd, J=9.61, 4.43 Hz, 1 H), 4.87-4.94 (m, 2 H), 5.63-5.72 (m, 1 H), 7.71-7.77 (m, 3 H), 8.01 (dd, J=7.48, 1.37 Hz, 1 H); MS m/z 358 (M⁺+1-Boc).
実施例８６

（１Ｓ、４Ｒ、６Ｓ、１４Ｓ、１８Ｒ）−［７−ｃｉｓ−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸、ｔｅｒｔ−ブチルエステル（実施例８６）の調製

工程１：Ｎ−（ペント−４−エニル）シクロプロパンアミンの合成。
添加漏斗を使用して、５−ブロモペンテン（１５．７５ｇ、１０６ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液を、シクロプロピルアミン（２０．６ｇ、３６１ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍＬ）溶液に５分間に亘って加えた。この溶液を室温で７２時間撹拌し、その時点で１時間還流した。メタノールおよび過剰なシクロプロピルアミンを蒸留によって除去した。残渣である生成物の臭化水素酸塩をエーテルおよび４ＮのＮａＯＨに分配した。水相をエーテル（２×）で洗浄した。合わせたエーテル抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過、濃縮し、８ｇ（６０％）のＮ−（ペント−４−エニル）シクロプロパンアミンを黄色の油状物として得た。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 0.31 - 0.36 (m, 2 H) 0.40 - 0.46 (m, 2 H) 1.53 - 1.63 (m, 2 H) 1.87 (brs, 1 H) 2.05 - 2.10 (m, 2 H) 2.10 - 2.14 (m, 1 H) 2.69 (t, J=7.32 Hz, 2 H) 4.91 - 5.07 (m, 2 H) 5.72 - 5.88 (m, 1 H).

工程２：２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパン酸の合成

２０ｍＬのアセトニトリル中のＮ−（ペント−４−エニル）シクロプロパンアミン（６６８ｍｇ、５．３０ｍｍｏｌ）を、４０ｍＬのアセトニトリル中のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−セリン−β−ラクトン（１．０ｇ、５．３０ｍｍｏｌ）のスラリーに加えた。混合物をＮ₂下室温で５日間撹拌し、次いで減圧濃縮し、約１．７ｇの粗２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパン酸を黄色の油状物として得た。この材料を精製せずに工程３において使用した。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０マイクロモル（「μｍ」）Ｃ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：３分。保持時間：１分。流量：４ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎｍ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。（保持時間：２．５０分）。MS m/z 313 (M⁺+1).

工程３：エチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートの合成。

２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパン酸（１．４７ｇ、４．７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を、エチル１（Ｒ）−［４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド）−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート塩酸塩（実施例５で調製）（１．４４ｇ、４．７１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（１．８０ｍＬ、１６．３４ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（２．１４ｇ、５．５３ｍｍｏｌ）で順次処理した。反応混合物を室温でＮ₂下３時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を水に溶解し、ｐＨ＝５となるまで１ＮのＨＣｌを加えた。この水溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。有機相を、飽和水性ＮａＨＣＯ₃で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ヘキサン〜１００％酢酸エチル）によって、１．５５ｇ（５８％）のエチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートを白色の泡として得た。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ−ＬｕｎａＳ１０ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：２分。保持時間：１分。流量：４ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎｍ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：１．３８分）。MS m/z 564 (M⁺+1).

工程４：エチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートの合成

１０ｍＬのＤＭＦ中のエチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（１．５５ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）の混合物に、イミダゾール（０．４７ｇ、６．８８ｍｍｏｌ）および塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（８２６ｍｇ、５．５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し、減圧濃縮し、酢酸エチルおよび水に分配した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧濃縮し、オフホワイトの固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（塩化メチレン、次いで酢酸エチルで溶出）によって、エチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレートを白色の固形物（１．７５ｇ、９４％）として得た。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０μｍＣ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：２分。保持時間：１分。流量：５ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．５１分）。MS m/z 677 (M⁺+1).

工程５：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルの合成

エチル１（Ｒ）−［１−［２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［Ｎ−シクロプロピル−Ｎ−（ペント−４−エニル）アミノ］プロパノイル］−４（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ピロリジン−２（Ｓ）−カルボキサミド］−２（Ｓ）−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（１．４５ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１Ｌ）溶液に、１８１ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）の第２世代グラブス触媒［（１，３−ビス−（２，４，６−トリメチルフェニル）−２−イミダゾリジニリデン）ジクロロ（フェニルメチレン）−（トリシクロヘキシルホスフィン）ルテニウム］を加えた。混合物を、１時間加熱還流した。触媒の第２の画分（５０ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。残渣を減圧濃縮し、次いで５０％エーテル／ヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、０．８４ｇ（６２％）の（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルを白色の固形物として得た。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０μｍＣ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：２分。保持時間：１分。流量：５ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．４３分）。MS m/z 649 (M⁺+1).

工程６：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸の合成

（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステル（０．８４ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）、メタノール（１５ｍＬ）、および水（４ｍＬ）に、粉末水酸化リチウム水和物（０．３１ｇ、１２．９０ｍｍｏｌ）を加えた。生成した淡黄色のスラリーを室温でＮ₂下一晩撹拌した。次いで、混合物を減圧濃縮し、ヘキサン／エーテル（１：１）および水に分配した。有機相を廃棄し、水相を１ＮのＨＣｌでｐＨ５まで処理した。この酸性溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、０．４９５ｇ（６１％）の（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸をオフホワイトの固形物として得た。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０μｍＣ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：２分。保持時間：１分。流量：５ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．３６分）。MS m/z 621 (M⁺+1).

工程７：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−［７−シス−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの合成

（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−７−シス−１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザトリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（４９０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのＴＨＦに溶解し、ＣＤＩ（１７９ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）で処理した。（オーブンで乾燥させたガラス器具を使用し、乾燥Ｎ₂雰囲気を維持することによって、湿気を避けるように注意した。）反応混合物を２時間還流させた後、室温に冷却し、シクロプロピルスルホンアミド（１３４ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１６８ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）で順次処理した。室温で一晩撹拌した後、ＴＨＦをロータリーエバポレーションによって除去した。残渣を水に溶解し、１ＮのＨＣｌをｐＨ＝５まで加えた。この水溶液を、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせたＥｔＯＡｃ抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。塩化メチレン中の３％メタノールで溶出するフラッシュカラムによる精製によって、３００ｍｇ（５３％）の（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−［７−シス−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色の固形物として得た。ＬＣ−ＭＳ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０μｍＣ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：２分。保持時間：１分。流量：５ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．４０分）。MS m/z 724 (M⁺+1).

工程８：（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−［７−シス−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（実施例８６）の合成

１５ｍＬのＴＨＦ中の化合物（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−［７−シス−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の混合物に、フッ化テトラブチルアンモニウム（１２９ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した。ＴＨＦをロータリーエバポレーションによって除去し、残渣を酢酸エチルおよび水に分配した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧濃縮し、粗生成物を得た。ヘキサンで粉砕することによる精製によって、２００ｍｇ（９４％）の（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−［７−シス−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１２−シクロプロピル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１２，１６−トリアザ−トリシクロ［１４．３．０．０^4,6］ノナデカ−７−エン−１４−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色の固形物として得た。ＬＣ−ＭＳ（保持時間：２．３２分）、MS m/z 610 (M⁺+1).（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ１０μｍＣ１８ＨＰＬＣカラム：３．０×５０ｍｍ長。グラジエント：１００％溶媒Ａ／０％溶媒Ｂ〜０％溶媒Ａ／１００％溶媒Ｂ。グラジエント時間：３分。保持時間：１分。流量：４ｍＬ／分。検出波長：２２０ｎＭ。溶媒Ａ：１０％ＭｅＯＨ／９０％Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：１０％Ｈ₂Ｏ／９０％ＭｅＯＨ／０．１％ＴＦＡ。）（保持時間：２．３２分）。MS m/z 610 (M⁺+1).
実施例８７

ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメート、化合物１の調製

工程１
メチルスルホキシド（２３．９０ｍｌ、３３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液に、−７８℃で塩化オキサリル（ＤＣＭ中２Ｍ、８４ｍｌ、１６８ｍｍｏｌ）を１滴ずつ加えた。形成した溶液をこの温度で３０分間撹拌した。（２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル２−メチル４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（２１．３８ｇ、７７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍｌ）溶液を、−７８℃で１滴ずつ加えた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６６．７ｍｌ、３８３ｍｍｏｌ）を１滴ずつ加える前に、形成したスラリーを−７８℃で２時間撹拌した。最終溶液を室温で３時間撹拌した。混合物を冷やした１ＭのＨＣｌ、５％クエン酸、次いでブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣の淡褐色の油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、４：１、３：１、次いで２：１のヘキサン−ＥｔＯＡｃで溶出させ、（Ｓ）−１−ベンジル２−メチル４−オキソピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１４．８ｇ、７０％収率）を淡褐色の粘性油状物として得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 2.58-2.63 (m, 1 H), 2.90-2.99 (m, 1 H), 3.62, 3.77 (s, 3 H, 回転異性体), 3.95-4.02 (m, 2 H), 4.82-4.89 (m, 1 H), 5.11-5.24 (m, 2 H), 7.32-7.39 (m, 5 H).

工程２
（Ｓ）−１−ベンジル２−メチル４−オキソピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１４．０ｇ、５０．５ｍｍｏｌ）のトルエン（５００ｍＬ）溶液に、０℃でビフェニル−４−イル臭化マグネシウム（１５２ｍＬ、ＴＨＦ中０．５Ｍ、７５．７５ｍｍｏｌ）を１滴ずつ加えた。形成した淡黄色の溶液をこの温度で１時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌでクエンチし、有機層を分離した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。シリカゲルプラグを通すことによって残渣を精製し、４：１、３：１、次いで２：１、最後に３：２のヘキサン−ＥｔＯＡｃで溶出させ、１１．７０ｇの白色の固形物を得て、これをＥｔＯＡｃ−ヘキサン（５０ｍｌ−１５０ｍｌ）から再結晶させて、７．８ｇの（２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル２−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレートを微細針状晶として得た。母液を濃縮し、フラッシュカラムによって精製し、４：１、３：１、次いで２：１、最後に３：２のヘキサン−ＥｔＯＡｃで溶出させ、さらに２．４１ｇの所望の生成物を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 2.39-2.45 (m, 1 H), 2.70-2.75 (m, 1 H), 3.66, 3.86 (s, 3 H, 回転異性体), 3.80-3.90 (m, 1 H), 4.00-4.07 (m, 1 H), 4.62 (dd, J_1,2 = 9.5, 28 Hz, 1 H), 5.09-5.15 (m, 1 H), 5.21-5.25 (m, 1 H), 7.31-7.38 (m, 6 H), 7.42-7.45 (m, 2 H), 7.54-7.59 (m, 6 H);
LC-MS (保持時間: 2.77分, 方法B), MS m/z 414 (M⁺- H₂O), 370 (M⁺- H₂O - CO₂).

工程３
（２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル２−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（８．０８ｇ、１８．７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（０．５２０ｇ、２０．６０ｍｍｏｌ）を加えた。形成した淡褐色の溶液をこの温度で３０分間撹拌した。硫酸ジメチル（１．９４９ｍｌ、２０．６０ｍｍｏｌ）を、０℃で１滴ずつ加えた。最終溶液を室温で２時間撹拌した。５％クエン酸でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。残渣をフラッシュカラムシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、４：１、３：１、次いで２：１のヘキサン−ＥｔＯＡｃで溶出させ、１．４５ｇの所望の生成物を得て、それをＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中で再結晶させて、１．２０ｇ（１４．３８％収率）の白色の固形物を得た。フラッシュカラム精製の間に４．５０ｇの出発物質もまた回収した。
¹H NMR (CDCl₃) δ 2.51-2.56 (m, 1 H), 2.85-2.89 (m, 1 H), 2.95, 2.97 (s, 3 H, 回転異性体), 3.67, 3.80 (s, 3 H, 回転異性体), 3.69-3.86 (m, 1 H), 4.02-4.08 (m, 1 H), 4.62 (dd, J_1,2 = 9.5, 28 Hz, 1 H), 5.09-5.17 (m, 1 H), 5.20-5.29 (m, 1 H), 7.29-7.46 (m, 10 H), 7.57-7.60 (m, 4 H);
LC-MS (保持時間: 2.92分, 方法B), MS m/z 446 (M⁺ +H), 414 (M⁺- MeOH), 370 (M⁺- MeOH - CO₂).

工程４
（２Ｓ，４Ｒ）−１−ベンジル２−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−４−メトキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（１．２９ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３０ｍｌ）溶液を含有する冷やしたＰａｒｒ振盪容器に、炭素（１０％、湿った）上のパラジウム（０．３０８ｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）を加えた。容器を、水素下２５ｐｓｉの圧力で５時間Ｐａｒｒ振盪装置上に置いた。セライトでクエンチした。濾過し、蒸発させ、０．８１１ｇ（９１％）の所望の生成物をオフホワイトの粉末として得た。この物質を、さらに精製せずに次のカップリング反応に使用した。
LC-MS (保持時間: 1.92分, 方法B), MS m/z 312 (M⁺ +H), 280 (M⁺- MeOH).

工程１：（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレートの調製

（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．４８２ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エン酸（１４４ｍｇ、０．５３０ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（２６０ｍｇ、０．７２３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍｌ）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２５２ｍｌ、１．４４５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温に温め、１８時間撹拌した。次いで、それをＤＣＭで希釈し、５％クエン酸、およびブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、減圧濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレート（１４０ｍｇ、５１．５％収率）を白色の泡として得た。
¹H NMR (CD₃OD) δ 1.31-1.57 (m, 15 H), 1.62-1.65 (m, 1 H), 1.78-1.82 (m, 1 H), 2.11-2.13 (m, 2 H), 2.66-2.69 (m, 1 H), 2.84-2.89 (m, 1 H), 3.00 (s, 3 H), 3.76 (s, 3 H), 4.16 (s, 2 H), 4.30-4.35 (m, 1 H), 4.79-4.81 (m, 1 H), 4.95 (d, J = 12 Hz, 1 H), 5.03 (d, J = 18.5 Hz, 1 H), 5.83-5.87(m, 1 H), 7.32-7.39 (m, 1 H), 7.45-7.56 (m, 4 H), 7.64-7.71 (m, 4 H); LC-MS (保持時間: 3.20分, 方法B), MS m/z 565 (M⁺ +H).

工程２：（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸の調製

（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレート（１６６ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液に、予め作られた水酸化リチウム一水和物（３７ｍｇ、０．８８２ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）溶液を加えた。この濁った溶液を室温で１８時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を水に溶解し、１ＮのＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。この水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を５％クエン酸およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、１４８ｍｇ（９１％）の（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸を白色の固形物として得た。さらなる精製は行わなかった。
LC-MS (保持時間: 3.14分, 方法B), MS m/z 551 (M⁺ +H).

工程３：（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレートの調製

ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸（６８．２ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ）、エチル１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレート、ＨＣｌ（２６．１ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５６．５ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．０７６ｍＬ、０．４３３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、希釈したＨＣｌ、次いで飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、および水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、１２０ｍｇの粗生成物を黄色の油状物として得た。４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するＢｉｏｔａｇｅによる精製によって、６７ｍｇ（７９％）の（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレートを白色の固形物として得た。LC-MS: MS m/z 688 (M+1).

工程４：（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレートの調製

ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ノン−８−エノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（６０ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（１４．８１ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の混合物を、４時間還流させた。この時点で、さらなる０．２当量のグラブスＩＩ（１４．８１ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を加え、混合物をさらに４時間還流させた。反応混合物を減圧濃縮し、粗生成物を、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するＢｉｏｔａｇｅによって精製し、５６ｍｇ（９７％）の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレートを淡褐色の固形物として得た。LC-MS: MS m/z 628 (M+1-MeOH).
¹H NMR (300 MHz, d4-MeOH) δ ppm 1.19 - 1.57 (m, 19 H), 1.75 (d, J=8.78 Hz, 3 H), 1.81 - 1.96 (m, 1 H), 2.15 - 2.34 (m, 3 H), 2.60 - 2.82 (m, 2 H), 3.09 (s, 3 H), 4.07 - 4.24 (m, 3 H), 4.39 - 4.54 (m, 2 H), 4.78 - 4.86 (m, 1 H), 5.25 - 5.38 (m, 1 H), 5.54 - 5.69 (m, 1 H), 7.36 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 7.46 (t, J=7.50 Hz, 1 H), 7.58 - 7.72 (m, 6 H).

工程５：（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸の調製

テトラヒドロフラン（２ｍＬ）／水（０．５ｍＬ）／ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレート（５６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ一水和物（４０．７ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１８時間撹拌した。次いでそれを減圧濃縮し、エーテルで洗浄した。１ＮのＨＣｌを使用し水相をｐＨ＝４に調節し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＥｔＯＡ抽出物をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、５２ｍｇ（９７％）の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸をオフホワイトの固形物として得た。
LC-MS: MS m/z 654(M+1+Na).
¹H NMR (500 MHz, d4-MeOH) δ ppm 1.25 - 1.64 (m, 15 H), 1.66 - 1.84 (m, 3 H), 1.88 - 2.03 (m, 1 H), 2.10 - 2.43 (m, 3 H), 2.58 - 2.86 (m, 2 H), 3.09 (s, 3 H), 4.06 - 4.27 (m, 1 H), 4.33 - 4.57 (m, 2 H), 4.77 - 4.86 (m, 1 H), 5.29 - 5.45 (m, 1 H), 5.52 - 5.72 (m, 1 H), 7.37 (t, J=7.48 Hz, 1 H), 7.47 (t, J=7.63 Hz, 2 H), 7.53 - 7.84 (m, 6 H).

工程６：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメートの調製

テトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸（５０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（７５５ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ）の混合物を、１時間加熱還流した。次いで、それを室温に冷却し、次いでシクロプロパンスルホンアミド（１１．５１ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）を加え、次いでＤＢＵ（０．０４２ｍＬ、０．２７７ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いで減圧濃縮し、粗生成物を淡色の油状物として得た。分取ＨＰＬＣによる精製によって、１５ｍｇ（２６％）のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメートを白色の固形物として得た。
LC-MS: MS m/z 757(M+1+Na).
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 0.86 - 0.97 (m, 1 H), 0.99 - 1.09 (m, 1 H), 1.08 - 1.74 (m, 19 H), 1.80 (dd, J=7.78, 5.95 Hz, 1 H), 1.87 - 2.00 (m, 1 H), 2.01 - 2.17 (m, 1 H), 2.34 - 2.44 (m, J=8.24 Hz, 2 H), 2.63 - 2.77 (m, 2 H), 2.90 - 3.01 (m, 1 H), 3.14 (s, 3 H), 4.05 (d, J=10.38 Hz, 1 H), 4.35 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 4.40 - 4.51 (m, 1 H), 4.76 (d, J=9.77 Hz, 1 H), 5.14 (t, J=9.46 Hz, 1 H), 5.61 - 5.77 (m, 1 H), 7.37 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 7.46 (t, J=7.63 Hz, 2 H), 7.55 - 7.66 (m, 6 H).
実施例８８

化合物２の調製
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメート、化合物２の調製

工程１：（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレートの調製

ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２８７ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパン酸（１４５ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（０．１７６ｍＬ、１．０１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１３１ｍｇ、０．３４５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１８時間撹拌した。次いで、それを減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、希釈したＨＣｌ、続いて飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液および水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、２５０ｍｇの粗生成物を茶色の油状物として得た。６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するＢｉｏｔａｇｅによる精製によって、１８８ｍｇ（８７％）の（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレートをオフホワイトの泡として得た。
LC-MS: MS m/z 751 (M+1).
¹H NMR (500 MHz, MeOD) δ ppm 1.28 - 1.52 (m, 9 H), 1.51 - 1.74 (m, 2 H), 1.90 - 2.07 (m, 2 H), 2.58 - 2.71 (m, 1 H), 2.78 - 2.91 (m, 1 H), 2.95, 3.01 (s, 3 H, 回転異性体) 3.39 - 3.54 (m, 2 H), 3.56-3.68 (m, 2 H), 3.77 - 3.80 (m, 4 H), 4.00 - 4.17 (m, 1 H), 4.34 (d, J=11.29 Hz, 1 H), 4.74 - 4.81 (m, 1 H), 4.91 - 5.06 (m, 2 H), 5.66 - 5.85 (m, 1 H), 7.37 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 7.44 - 7.54 (m, 4 H), 7.61 - 7.73 (m, 4 H), 7.75 - 7.90 (m, 3 H), 8.06 - 8.17 (m, 1 H).

工程２：（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸の調製

テトラヒドロフラン（２ｍＬ）／ＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）／水（１ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−メチル４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキシレート（１８５ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ一水和物（１１８ｍｇ、４．９３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１８時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧濃縮し、５ｍＬの水で希釈した。次いでそれをエーテルで洗浄した。１ＮのＨＣｌを使用して水相をｐＨ＝４に調節した。次いで、それをＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、１６０ｍｇ（８７％）の（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸を白色の固形物として得た。
LC-MS: MS m/z 737 (M+1).
¹H NMR (500 MHz, d4-MeOH) δ ppm 1.29 - 1.73 (m, 11 H), 1.90 - 2.12 (m, 2 H), 2.67 (dd, J=13.12, 9.46 Hz, 1 H), 2.88 (d, J=13.43 Hz, 1 H), 3.04 (s, 3 H), 3.40 - 3.55 (m, 2 H), 3.56 - 3.71 (m, 2 H), 3.80 (dd, J=15.41, 3.81 Hz, 1 H), 4.06 (d, J=10.99 Hz, 1 H), 4.26 - 4.38 (m, 1 H), 4.70 - 4.81 (m, 1 H), 4.95 - 5.06 (m, 2 H), 5.59 - 5.90 (m, 1 H), 7.37 (t, J=7.48 Hz, 1 H), 7.42 - 7.58 (m, 4 H), 7.62 - 7.75 (m, 4 H), 7.76 - 7.92 (m, 3 H), 8.01 - 8.21 (m, 1 H).

工程３：（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレートの調製

ＤＣＭ（３ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボン酸（１６０ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）、エチル１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレート、ＨＣｌ塩（４９．９ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（９９ｍｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．１３３ｍＬ、０．７６０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１８時間撹拌した。次いで、それを減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、希釈したＨＣｌ、次いで飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液および水で洗浄した。次いで、有機相をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、１８０ｍｇの粗生成物を黄色の油状物として得た。４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するＢｉｏｔａｇｅによる精製によって、１００ｍｇ（５３％）の（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレートを白色の固形物として得た。
LC-MS: MS m/z 874 (M+1).
¹H NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1.14 (t, J=7.14 Hz, 3 H), 1.18 - 1.42 (m, 12 H), 1.60 - 1.69 (m, 2 H), 1.83 - 1.96 (m, 2 H), 2.11 (q, J=8.17 Hz, 1 H), 2.51 - 2.61 (m, 2 H), 2.96 (s, 3 H), 3.33 - 3.41 (m, 2 H), 3.43 - 3.65 (m, J=9.51 Hz, 2 H), 3.81 - 3.91 (m, 1 H), 3.98 - 4.10 (m, J=6.83, 6.83, 6.83 Hz, 3 H), 4.58 - 4.72 (m, J=9.33, 4.21 Hz, 1 H), 4.86 - 5.01 (m, 2 H), 5.09 (d, J=13.17 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=17.20 Hz, 1 H), 5.50 - 5.81 (m, 2 H), 7.07 (d, J=9.15 Hz, 1 H), 7.34 - 7.41 (m, 1 H), 7.47 (t, J=7.32 Hz, 4 H), 7.61 - 7.74 (m, 4 H), 7.77 - 7.93 (m, 2 H), 7.94 - 8.08 (m, 2 H), 8.43 (s, 1 H).

工程４：（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレートの調製

ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ）−エチル１−（（２Ｓ，４Ｒ）−４−（ビフェニル−４−イル）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（２−ニトロ−Ｎ−（ペント−４−エニル）フェニルスルホンアミド）プロパノイル）−４−メトキシピロリジン−２−カルボキサミド）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシレート（９５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（１８．４６ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の混合物を、４時間還流させた。次いで、反応混合物を減圧濃縮した。残渣を、６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するＢｉｏｔａｇｅで精製し、６５ｍｇ（７１％）の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレートをオフホワイトの固形物として単離した。
LC-MS: MS m/z 868(M+1+Na).
¹H NMR (500 MHz, d4-MeOH) δ ppm 1.37 - 1.53 (m, 13 H), 1.57 - 1.71 (m, 1 H), 1.74 (dd, J=9.77, 5.19 Hz, 1 H), 1.76 - 1.87 (m, 1 H), 1.98 - 2.05 (m, 1 H), 2.09 - 2.22 (m, J=10.99 Hz, 1 H), 2.38 (q, J=9.46 Hz, 1 H), 2.53 - 2.73 (m, 2 H), 3.07 - 3.14 (m, 3 H), 3.35 - 3.46 (m, 2 H), 3.50 - 3.59 (m, 1 H), 3.62 - 3.74 (m, 1 H), 3.99 (d, J=10.99 Hz, 1 H), 4.14 - 4.21 (m, 2 H), 4.26 (t, J=7.63 Hz, 1 H), 4.46 (d, J=10.38 Hz, 1 H), 4.82 - 4.86 (m, 1 H), 5.59 (t, J=10.38 Hz, 1 H), 5.63 - 5.72 (m, 1 H), 7.37 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 7.47 (t, J=7.63 Hz, 2 H), 7.53 - 7.58 (m, 2 H), 7.59 - 7.72 (m, 4 H), 7.78 - 7.92 (m, 3 H), 8.08 - 8.10 (m, 1 H).

工程５：（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸の調製

テトラヒドロフラン（２ｍＬ）／水（０．５ｍＬ）／ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−エチル２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボキシレート（６０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＨ一水和物（３４．０ｍｇ、１．４１９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１８時間撹拌した。次いで、それを減圧濃縮し、水およびエーテルに分配した。１ＮのＨＣｌを使用して水相をｐＨ＝４に調節し、ＥｔＯＡｃで抽出した。次いで、有機相をＭｇＳＯ₄上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、５２ｍｇの粗生成物をオフホワイトの固形物として単離した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、１５ｍｇの（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸を白色の固形物として得た。
LC-MS: MS m/z 818(M+1+Na). ¹H NMR (500 MHz, d4-MeOH) δ ppm 1.29 - 1.71 (m, 11 H), 1.72 - 1.96 (m, 2 H), 2.09 - 2.27 (m, 2 H), 2.30 - 2.46 (m, 1 H), 2.80 - 2.90 (m, 1 H), 3.03 (s, 3 H), 3.06 - 3.13 (m, 1 H), 3.45 - 3.62 (m, 2 H), 3.72 (dd, J=14.95, 3.66 Hz, 1 H), 3.78 (d, J=12.21 Hz, 1 H), 4.04 (d, J=12.51 Hz, 1 H), 4.08 - 4.18 (m, 1 H), 4.53 (dd, J=11.44, 3.51 Hz, 1 H), 4.98 - 5.03 (m, 1 H), 5.60 - 5.80 (m, 2 H), 7.37 (t, J=7.32 Hz, 1 H), 7.43 - 7.58 (m, 4 H), 7.62 - 7.73 (m, 4 H), 7.76 - 7.90 (m, 3 H), 8.07 - 8.16 (m, 1 H).

工程６：化合物２：ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメートの調製
テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−１４ａ−カルボン酸（１３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（３．６１ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の混合物を、１時間還流した。次いで、それを室温に冷却し、シクロプロパンスルホンアミド（２．７０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）、続いてＤＢＵ（８．３９μＬ、０．０５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌し、次いでそれを減圧濃縮し、淡黄色の油状物を得た。この油状物に、５ｍＬの水を加え、１ＮのＨＣｌを使用してｐＨ＝４に調節した。白色の沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄し、１５ｍｇの粗生成物を白色の固形物として得た。２％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂で溶出するフラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、８ｍｇのｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，６Ｓ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ，Ｚ）−２−（ビフェニル−４−イル）−１４ａ−（シクロプロピルスルホニルカルバモイル）−２−メトキシ−８−（２−ニトロフェニルスルホニル）−５，１６−ジオキソ−１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ−ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｎ］ピロロ［２，１−ｃ］［１，４，８］トリアザシクロペンタデシン−６−イルカルバメートを白色の固形物として得た。LC-MS: MS m/z 889(M+1-MeOH).（この生成物は、同等部分のＰ１メチルエステル副生成物で汚染されていた。）

生物学的研究
ＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体酵素アッセイおよび細胞ベースのＨＣＶレプリコンアッセイを本開示において用い、下記のように調製し、実施し、確認した。

組換えＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生
ＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶＮＳ３プロテアーゼ複合体を、下記で説明するように産生した。これらの精製した組換えタンパク質を、均一系アッセイ（下記を参照されたい）において使用するために産生し、ＨＣＶＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。

ＨＣＶ感染患者からの血清を、サンフランシスコ病院のＴ．Ｗｒｉｇｈｔ医師から得た。ＨＣＶゲノム（ＢＭＳ株）の設計された完全長ｃＤＮＡ（相補デオキシリボ核酸）鋳型を、血清ＲＮＡ（リボ核酸）の逆転写−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって得たＤＮＡフラグメントから、他の遺伝子型１ａ株の間の相同性に基づいて選択したプライマーを使用して作製した。全ゲノム配列の決定から、Ｓｉｍｍｏｎｄｓらの分類によって、ＨＣＶ分離株に対して遺伝子型１ａを割り当てた（P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap and H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)を参照されたい）。非構造領域ＮＳ２−５Ｂのアミノ酸配列は、ＨＣＶ遺伝子型１ａ（Ｈ７７）に＞９７％同一であり、遺伝子型１ｂ（Ｊ４Ｌ６Ｓ）に８７％同一であることが示された。感染性クローンＨ７７（１ａ遺伝子型）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１ｂ遺伝子型）は、Ｒ．Ｐｕｒｃｅｌｌ（ＮＩＨ）から得たが、配列はＧｅｎｂａｎｋにおいて公開されている（ＡＡＢ６７０３６、Yanagi,M., Purcell,R.H., Emerson,S.U. and Bukh,J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16),8738-8743 (1997); AF054247を参照されたい、Yanagi,M., St Claire,M., Shapiro,M., Emerson,S.U., Purcell,R.H. and Bukh,J, Virology 244 (1), 161-172. (1998)を参照されたい）。

Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株を組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生のために使用した。これらの株について組換えＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体（アミノ酸１０２７〜１７１１）をコードするＤＮＡを、Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されているように操作した（Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17):5620-32, (1999)を参照されたい）。手短に言えば、３個のリシンの可溶化尾部を、ＮＳ４Ａコード領域の３’末端に添加した。ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ切断部位のＰ１位中のシステイン（アミノ酸１７１１）をグリシンに変更し、リシンタグのタンパク質分解的切断を防止した。さらに、システインからセリンへの変異をアミノ酸位置１４５４でＰＣＲによって導入し、ＮＳ３ヘリカーゼドメインにおける自己分解による切断を防止した。Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されたプロトコルに修正を加えて、変異ＤＮＡフラグメントをｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）中でクローン化し、ＮＳ３／４Ａ複合体を大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で発現させた（Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)を参照されたい）。手短に言えば、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体発現を、０．５ミリモル（ｍＭ）のイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって２０℃で２２時間（ｈ）誘導した。典型的な発酵（１リットル（Ｌ））によって、約１０グラム（ｇ）の湿細胞ペーストを得た。２５ｍＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、５００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１マイクログラム／ミリリットル（「μｇ／ｍＬ」）のリゾチーム、５ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ₂）、１μｇ／ｍｌのＤｎａｓｅＩ、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）、プロテアーゼ阻害剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）非含有）（Ｒｏｃｈｅ）からなる溶解バッファー（１０ｍＬ／ｇ）中で細胞を再懸濁させ、ホモジナイズし、４℃で２０分（分）間インキュベートした。ホモジネートを超音波処理し、４℃にて２３５０００ｇで１時間（ｈ）超遠心分離することによって清澄にした。イミダゾールを１５ｍＭの最終濃度まで上清に加え、ｐＨを８．０に調節した。粗タンパク質抽出物を、バッファーＢ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、２０％グリセロール、５００ｍＭのＮａＣｌ、０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１５ｍＭのイミダゾール、５ｍＭのβＭＥ）で予め平衡化させたニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）カラムに添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。カラムを１５カラム容量のバッファーＣ（０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００以外はバッファーＢと同一）で洗浄した。タンパク質を５カラム容量のバッファーＤ（２００ｍＭのイミダゾール以外はバッファーＣと同一）で溶出した。

ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、バッファーＤ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、１０ｍＭβＭＥ）で予め平衡化した脱塩カラムＳｕｐｅｒｄｅｘ−Ｓ２００に添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、約０．５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。ＢＭＳ、Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法によって９０％超であると判断した。酵素は、アッセイバッファーにおいて使用する前に、−８０℃で貯蔵し、氷上で解凍し、希釈した。

ＨＣＶＮＳ３／４Ａタンパク質分解活性をモニターするためのＦＲＥＴペプチドアッセイ
このインビトロアッセイの目的は、本開示の化合物による上記のようなＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶＮＳ３プロテアーゼ複合体の阻害を測定することであった。このアッセイは、ＨＣＶＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。

ＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ活性をモニターするために、ＮＳ３／４Ａペプチド基質を使用した。基質は、Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996)においてＴａｌｉａｎｉらによって記載されたＲＥＴＳ１であった（共鳴エネルギー移動デプシペプチド基質；ＡｎａＳｐｅｃ、Ｉｎｃ．カタログ＃２２９９１）（ＦＲＥＴペプチド）。このペプチドの配列は、切断部位においてアミド結合ではなくエステル結合が存在すること以外は、ＨＣＶＮＳ３プロテアーゼについてのＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ天然切断部位に大まかに基づいている。ペプチドはまた、ペプチドの一端近くに蛍光供与体ＥＤＡＮＳを、および他端の近くに容体ＤＡＢＣＹＬを含有する。ペプチドの蛍光は、供与体と受容体との間の分子間の共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）によってクエンチされるが、ＮＳ３プロテアーゼがペプチドを切断するにつれ、生成物がＲＥＴ消光から放出され、供与体の蛍光が明らかになる。

ペプチド基質を、本開示の化合物の非存在下、または存在下で、３種の組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の１種と共にインキュベートした。ＣｙｔｏｆｌｕｏｒＳｅｒｉｅｓ４０００を使用して蛍光性反応生成物の形成をリアルタイムでモニターすることによって化合物の阻害作用を決定した。

試薬は下記の通りであった。ＨＥＰＥＳおよびグリセロール（Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ）は、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから入手した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、Ｓｉｇｍａから入手した。β−メルカプトエタノールはＢｉｏＲａｄから入手した。

アッセイバッファー：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；０．１５ＭのＮａＣｌ；０．１％Ｔｒｉｔｏｎ；１５％グリセロール；１０ｍＭのβＭＥ。基質：２μＭの最終濃度（−２０℃で貯蔵したＤＭＳＯ中の２ｍＭのストック溶液から）。ＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ１ａ（１ｂ）型、２〜３ｎＭの最終濃度（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１０ｍＭβＭＥ中の５μＭのストック溶液から）。アッセイ限界に近づいた作用強度を有する化合物については、アッセイバッファーに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）を加え、プロテアーゼの最終濃度を３００ｐＭに下げることによって、アッセイをより感応性にした。

アッセイを、Ｆａｌｃｏｎの９６−ウェルのポリスチレンブラックプレート中で行った。各ウェルは、アッセイバッファー中のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体２５μｌ、１０％ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中の本開示の化合物５０μｌ、およびアッセイバッファー中の基質２５μｌを含有した。対照（化合物を含有せず）もまた、同一のアッセイプレート上で調製した。基質の添加によって酵素反応が開始する前に、酵素複合体を化合物または対照溶液と１分間混合した。アッセイプレートをＣｙｔｏｆｌｕｏｒＳｅｒｉｅｓ４０００（ＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して直ちに読み取った。２５℃にて３４０ｎｍでの発光および４９０ｎｍでの励起を読み取るように装置を設定した。反応は一般に約１５分間続いた。

下記の式で阻害率を計算した。
１００−［（δＦ_inh／δＦ_con）×１００］

式中、δＦは曲線の線形範囲に亘る蛍光の変化である。非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、式ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））を使用してＥｘｃｅｌＸＬｆｉｔソフトウェアの使用によって５０％有効濃度（ＩＣ₅₀）を計算した。

特異性アッセイ
ＨＣＶＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の阻害における本開示の化合物のインビトロ選択性を示すために、他のセリンまたはシステインプロテアーゼと比較した、特異性アッセイを行った。

本開示の化合物の、種々のセリンプロテアーゼに対する特異性を決定した。ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）、ブタ膵エラスターゼ（ＰＰＥ）およびヒト膵臓キモトリプシンおよび１種のシステインプロテアーゼであるヒト肝臓カテプシンＢ。全ての場合において、セリンプロテアーゼアッセイをある程度修正して、従前（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ００／０９５４３号）に記載されているように、それぞれの酵素に特異的な蛍光分析のアミノ−メチル−クマリン（ＡＭＣ）基質を使用した９６ウェルプレートフォーマットプロトコルを使用した。全ての酵素はＳｉｇｍａ、ＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、一方基質はＢａｃｈｅｍ、ＳｉｇｍａおよびＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。

化合物濃度は、それらの作用強度によって１００〜０．４μＭで変化した。１０分間プレインキュベートした酵素−阻害剤に室温で基質を加え、ｃｙｔｏｆｌｕｏｒで測定して１５％変換まで加水分解することによって、酵素アッセイをそれぞれ開始した。

各アッセイについての最終条件は下記の通りであった。
５０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）（ｐＨ８）、０、５Ｍの硫酸ナトリウム（Ｎａ₂ＳＯ₄）、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのＬＬＶＹ−ＡＭＣおよび１ｎＭのキモトリプシン。

５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのｓｕｃｃ−ＡＡＰＶ−ＡＭＣおよび２０ｎＭのＨＮＥまたは８ｎＭのＰＰＥ；
１００ｍＭのＮａＯＡＣ（酢酸ナトリウム）（ｐＨ５．５）、３％ＤＭＳＯ、１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）、５ｎＭのカテプシンＢ（酵素ストックは使用前に２０ｍＭのＴＣＥＰを含有するバッファー中で活性化させた）、およびＨ₂Ｏで希釈した２μＭのＺ−ＦＲ−ＡＭＣ。

阻害率は、式を使用して計算した。
［１−（（ＵＶ_inh−ＵＶ_blank）／（ＵＶ_ctl−ＵＶ_blank））］×１００

非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、ＥｘｃｅｌＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して５０％有効濃度（ＩＣ₅₀）を計算した。

ＨＣＶレプリコンの産生
ＨＣＶレプリコン全細胞系を、Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999)によって記載されているように確立した。この系によって、本発明者らは、ＨＣＶＲＮＡ複製に対する本発明者らのＨＣＶプロテアーゼ化合物の効果を評価することができた。手短に言えば、Ｌｏｈｍａｎｎの論文に記載されているＨＣＶ株１ｂ配列（登録番号：ＡＪ２３８７９９）を使用して、ＨＣＶｃＤＮＡをＯｐｅｒｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）によって合成し、次いで完全長レプリコンをプラスミドｐＧｅｍ９ｚｆ（＋）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中で標準的な分子生物学技術を使用して構築した。レプリコンは、（ｉ）キャプシドタンパク質の最初の１２個のアミノ酸に融合したＨＣＶ５’ＵＴＲ、（ｉｉ）ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ネオ）、（ｉｉｉ）脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からのＩＲＥＳ、および（ｉｖ）ＨＣＶＮＳ３からＮＳ５Ｂ遺伝子およびＨＣＶ３’ＵＴＲからなる。メーカーの説明書に従ってＴ７ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ転写キット（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、プラスミドＤＮＡをＳｃａＩで直線化し、ＲＮＡ転写物をインビトロで合成した。ｃＤＮＡのインビトロ転写物を、ヒト肝臓癌細胞系ＨＵＨ−７にトランスフェクトした。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現している細胞についての選択を、選択マーカーであるネオマイシン（Ｇ４１８）の存在下で行った。このように得られた細胞系を、プラス鎖およびマイナス鎖ＲＮＡ生成、ならびにタンパク質生成について経時で性質決定した。

ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイ
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイを、ＨＣＶウイルス複製に対する本開示において記載されている化合物の阻害作用をモニターするために開発した。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現しているＨＵＨ−７細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｓｉｇｍａ）および１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で増殖させた。細胞を、前夜に９６−ウェル組織培養無菌プレート中に（１．５×１０⁴細胞／ウェル）で播種した。化合物および化合物を含有しない対照を、希釈プレート中で４％ＦＣＳ、１：１００ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）、１：１００Ｌ−グルタミンおよび５％ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭ中で調製した（アッセイにおいて０．５％のＤＭＳＯ最終濃度）。化合物／ＤＭＳＯ混合物を細胞に添加し、３７℃で４日間インキュベートした。４日後、ＣＣ₅₀読取りのためにアラマーブルー（ＴｒｅｋＤｉａｇｎｏｔｓｔｉｃＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して最初に細胞毒性について細胞を評価した。細胞をインキュベートしている培地に１０分の１容量のアラマーブルーを加えることによって、化合物の毒性（ＣＣ₅₀）を決定した。４ｈ後、ＣｙｔｏｆｌｕｏｒＳｅｒｉｅｓ４０００（ＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各ウェルからの蛍光シグナルを、５３０ｎｍでの励起波長および５８０ｎｍでの発光波長で読み取った。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で完全にすすいだ（３度、１５０μｌ）。ＨＣＶプロテアーゼ基質、蒸溜水で１倍に希釈した５×細胞ルシフェラーゼ細胞培養溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ１５３Ａ）、１５０ｍＭの最終濃度まで加えたＮａＣｌ、１００％ＤＭＳＯ中の２ｍＭのストックから１０μＭの最終濃度まで希釈したＦＲＥＴペプチド基質（上記の酵素アッセイについて説明した通り）を含有する２５μｌの溶解アッセイ試薬で細胞を溶解した。次いで、プレートを、３４０ｎｍ励起／４９０ｎｍ発光、２１サイクルの自動モード、運動モードでのプレート読取りに設定してあるＣｙｔｏｆｌｕｏｒ４０００装置中に置いた。ＩＣ₅₀決定について記載したように、ＥＣ₅₀決定を行った。

ＨＣＶレプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイ
二次的アッセイとして、レプリコンＦＲＥＴアッセイからのＥＣ₅₀決定を、レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて確認した。レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイの利用は、Ｋｒｉｅｇｅｒらによって最初に記載された（Krieger N, Lohmann V, and Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001)）。本発明者らのＦＲＥＴアッセイについて記載したレプリコンコンストラクトを、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ遺伝子のヒト化形態およびルシフェラーゼ遺伝子の３’末端に直接融合しているリンカー配列をコードするｃＤＮＡを挿入することによって改変した。この挿入物は、ネオマイシンマーカー遺伝子の直接上流のコア中に位置するＡｓｃ１制限部位を使用して、レプリコンコンストラクトに導入された。１１７９位での適応的変異（セリンからイソロイシン）もまた導入した（Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974）。このＨＣＶレプリコンコンストラクトを恒常的に発現している安定的な細胞系を上記のように産生した。ルシフェラーゼレポーターアッセイを、下記のように修正してＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイのために説明したように設定した。３７℃／５％ＣＯ₂のインキュベーター中で４日間後、ＰｒｏｍｅｇａＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性について細胞を分析した。培地（１００μｌ）を、細胞を含有する各ウェルから除去した。残りの５０μｌの培地に、５０μｌのＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を加え、プレートを室温で１０ｍｉｎ〜２ｈ揺動させた。次いで、Ｄｕａｌ−ＧｌｏＳｔｏｐ＆Ｇｌｏ試薬（５０μｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温でさらに１０ｍｉｎ〜２ｈ再び揺動させた。発光プログラムを使用してＰａｃｋａｒｄＴｏｐＣｏｕｎｔＮＸＴ上でプレートを読み取った。

阻害率を下記の式を使用して計算した。
％対照＝実験ウェル（＋化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＤＭＳＯ対照ウェル（−化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル

ＸＬｆｉｔを使用して値をグラフ化し、分析し、ＥＣ₅₀値を得た。

表２に示される特許例番号および特許化合物番号を使用することによって、化合物の構造を本明細書において見い出すことができることに留意されたい。

当業者であれば、本開示は上記の実施例に限定されず、その本質的な特性から逸脱することなく他の特定の形態で具体化することができることは明らかであろう。したがって、実施例はあらゆる点で例示的なものであり、限定するものではないと考えられ、参照は上記の実施例に対してではなくむしろ添付の特許請求に対してなされ、特許請求の範囲に相当する意義および範囲内である全ての変更は、したがってその中に包含されることを意図することが望ましい。

Claims

式（Ｉ）：

（Ｉ）
［式中、
Ｒ¹は、アルコキシ、ヒドロキシ、および−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷から選択され；
Ｒ^2aおよびＲ^2bは独立して、水素およびメチルから選択され；
Ｒ³は、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；
Ｒ⁴は、−ＯＲ⁸であり；
Ｒ⁵は、水素、アルキル、およびシクロアルキルから選択され；
Ｒ⁶は、水素、アルキル、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、アリールオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、ハロアルコキシカルボニル、ハロアルキル、ハロアルキルカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、および（ＮＲ^aＲ^b）スルホニルから選択され；
Ｒ⁷は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、および−ＮＲ^aＲ^bから選択され；該シクロアルキルおよび該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲ^eＲ^f）カルボニルから独立して選択される１個、２個、または３個の基で適宜置換されており；Ｒ^aおよびＲ^bは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；Ｒ^eおよびＲ^fは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロシクリルから選択され；該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロシクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１個または２個の置換基で適宜置換されており；
Ｒ⁸は、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルカルボニル、ハロアルコキシアルキル、ハロアルキル、（ＮＲ^cＲ^d）カルボニル、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）₂から選択され；Ｒ^cおよびＲ^dは独立して、水素、アルキル、およびアリールアルキルから選択され；あるいはＲ^cおよびＲ^dは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＮＲ^x、およびＳから選択される１個のさらなるヘテロ原子を含有してもよい５員または６員の単環式ヘテロ環を形成し；Ｒ^xは、水素およびアルキルから選択され；Ｒ’は、水素およびアルキルから選択され；並びに
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_m、およびＮＲ⁹（ｍは、０、１、または２である）から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有してもよいＣ_3~9飽和または不飽和鎖であり、Ｒ⁹は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルカルボニルから選択される］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ¹が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷である、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ⁷がシクロアルキルである、請求項２に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ^2aおよびＲ^2bが水素である、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
Ｑが０個のヘテロ原子を含有するＣ₆不飽和鎖である、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
式（ＩＩ）：

（ＩＩ）
［式中、
Ｒ¹は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁷であり；
Ｒ^2aおよびＲ^2bは、水素であり；
Ｒ³は、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；
Ｒ⁴は、−ＯＲ⁸であり；
Ｒ⁵は、水素であり；
Ｒ⁶は、アルコキシカルボニルであり；
Ｒ⁷は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルカルボニル、および−ＮＲ^aＲ^bから選択され；Ｒ^aおよびＲ^bは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、およびヘテロシクリルアルキルから選択され；
Ｒ⁸は、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルカルボニル、ハロアルコキシアルキル、ハロアルキル、（ＮＲ^cＲ^d）カルボニル、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）₂から選択され；Ｒ^cおよびＲ^dは独立して、水素、アルキル、およびアリールアルキルから選択され；あるいはＲ^cおよびＲ^dは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＮＲ^x、およびＳから選択される１個のさらなるヘテロ原子を含有してもよい５員または６員の単環式ヘテロ環を形成し；Ｒ^xは、水素およびアルキルから選択され；Ｒ’は、水素およびアルキルから選択され；並びに
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_m、およびＮＲ⁹（ｍは、０、１、または２である）から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有してもよいＣ_3~9飽和または不飽和鎖であり、Ｒ⁹は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロシクリルカルボニルから選択される］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
Ｒ⁷が、シクロアルキルであり；並びに
Ｑが、０個のヘテロ原子を含有するＣ₆不飽和鎖である、請求項６に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
である化合物、またはその医薬的に許容される塩。
請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物。
抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
さらなる化合物の少なくとも１つが、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１０に記載の組成物。
さらなる化合物の少なくとも１つが、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を増強する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン５’−一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１０に記載の組成物。
請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩の治療上の有効量を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染の治療方法。
請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩の前、後、または同時に、抗ＨＣＶ作用を有する少なくとも１種のさらなる化合物を投与することをさらに特徴とする、請求項１３に記載の方法。
さらなる化合物の少なくとも１つが、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１４に記載の方法。